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Dissertations / Theses on the topic 'Phosphatidylinositol 3-Kinases'
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Valet, Colin. "Rôles de la PI3 kinase de classe II alpha et de la PI3K de classe III, vps34, dans la production et les fonctions plaquettaires." Thesis, Toulouse 3, 2017. http://www.theses.fr/2017TOU30032.
Full textAbstract:
Les mégacaryocytes sont des cellules de la moelle osseuse qui par un processus complexe et encore mal caractérisé, mégacaryopoïèse/thrombopoïèse, donnent naissance, in fine, aux plaquettes sanguines. La différenciation mégacaryocytaire nécessite un intense remodelage nucléaire et cytoplasmique, guidé à la fois par des facteurs intrinsèques mais aussi par des facteurs extrinsèques tel que le microenvironnement médullaire. Les plaquettes sanguines sont des acteurs essentiels du maintien de l'intégrité vasculaire. Elles sont les premiers éléments cellulaires à intervenir dans l'arrêt du saignement lors d'une blessure vasculaire par la formation d'un thrombus via des mécanismes d'adhésion, de sécrétion et d'agrégation, trois étapes majeures de l'hémostase physiologique. Dans un premier temps, mes travaux de thèse visent à déterminer le rôle inconnu de l'isoforme alpha des PI3Ks de classe II (PI3KC2a), de la PI3K de classe III (Vps34) et de leur produit, le phosphatidylinositol 3 monophosphate (PI3P), dans la production et les fonctions plaquettaires. Grâce à un modèle murin présentant une inactivation partielle de la PI3KC2a, j'ai mis en évidence son rôle clé dans la génération d'un pool basal de PI3P dans les plaquettes. L'inactivation de la PI3KC2a affecte la composition du cortex sous-membranaire plaquettaire induisant une morphologie plaquettaire anormale, une accumulation de plaquettes à deux corps appelées " barbell-shaped proplatelets ", un défaut de formation du thrombus ex vivo et un retard d'occlusion de la carotide après lésion in vivo. Ainsi, la PI3KC2a joue un rôle majeur dans le maintien de l'intégrité du squelette membranaire contrôlant la structure et la dynamique membranaire, processus critique à la production de plaquettes fonctionnelles. D'autre part, la délétion de Vps34 spécifiquement dans la lignée mégacaryocyte/plaquette se traduit par une microthrombopénie modérée associée à une migration anormale des mégacaryocytes liées à un défaut de trafic vésiculaire et une diminution du taux de PI3P. De façon intéressante, Vps34 joue aussi un rôle dans l'activation plaquettaire en régulant la production de PI3P sous stimulation, la croissance du thrombus ex vivo et les capacités thrombotiques in vivo. Le rôle de Vps34 dans la plaquette indépendamment de son rôle dans le mégacaryocyte a été confirmé via l'utilisation de nouveaux inhibiteurs spécifiques de Vps34, SAR405 et INH1, ex vivo. Vps34 est donc critique dans la régulation de la production plaquettaire par les mégacaryocytes ainsi que dans l'activation plaquettaire. Dans un deuxième temps, je me suis intéressé à l'impact du microenvironnement médullaire sur la mégacaryopoïèse, et plus spécifiquement sur la communication entre adipocytes médullaires et progéniteurs hématopoïétiques lors de leur différenciation en mégacaryocytes. Grace à un système de coculture in vitro, j'ai montré que les adipocytes améliorent la différenciation mégacaryocytaire via un transfert direct de lipides, dans un but non-énergétique. Dans un contexte d'obésité, nous observons, in vivo, associée à une adiposité médullaire augmentée une maturation mégacaryocytaire exacerbée, une production et une demi-vie plaquettaire défectueuses ayant pour conséquence une macrothrombopénie. Ainsi, le microenvironnement médullaire et plus particulièrement l'adipocyte impacte directement sur la mégacaryopoïèse et la production plaquettaire. En conclusion, ces travaux de thèse contribuent à caractériser les mécanismes de production et de fonction plaquettaire régulés par des facteurs intrinsèques tels que le PI3KC2a et Vps34, ainsi que par des facteurs extrinsèques tels que l'adipocyte médullaireMegakaryopoiesis is a highly specialised and complex process occurring in the bone marrow, by which megakaryocytes give rise to de novo circulating blood platelets. Megakaryocyte differentiation implies cytoplasmic and nuclear rearrangements regulated by intrinsic as well as extrinsic factors such as bone marrow microenvironment. Platelets play a critical role in preventing blood loss after vascular injury by orchestrating clot formation through mechanisms of adhesion, secretion and aggregation. These mechanisms are the three major steps of physiological haemostasis leading to the maintenance of vascular integrity. Firstly, my thesis work focused on characterizing the role of class II PI3K alpha isoform (PI3KC2a), class III PI3K (Vps34) and their common product the phosphatidylinositol 3 monophosphate (PI3P) in platelet production and function. Using a unique mouse model partially inactivated for PI3KC2a, I highlighted its key role in the production of a basal PI3P housekeeping pool in platelets. PI3KC2a partial inactivation affects platelet membrane skeleton composition leading to an abnormal platelet morphology, an enrichment of platelet with two cell bodies recently called "barbell-shaped proplatelets", an ex vivo defective thrombus formation and an in vivo delayed carotid occlusion following injury. Thus, PI3KC2a plays a major role in membrane structure and dynamics by maintaining membrane skeleton integrity, which is crucial for functional platelet production. On the other hand, Vps34 specific deletion in megakaryocyte/platelet lineage induced mild microthombopenia correlated to an abnormal megakaryocyte migration linked to an affected PI3P production as well as vesicular trafficking in megakaryocytes. In platelets, Vps34 plays a role in their activation by regulating PI3P production under stimulation, ex vivo thrombus growth and in vivo thrombotic capacity. Vps34 role in platelet independently from its role in megakaryocyte was confirmed using two recently developed inhibitors, SAR405 and INH1, which reproduced ex vivo thrombus growth defects. Therefore, Vps34 is critical for platelet production by megakaryocyte as well as platelet activation. Secondly, I studied the impact of bone marrow microenvironment on megakaryopoiesis and more specifically the crosstalk between medullar adipocytes and hematopoietic progenitors differentiating towards the megakaryocyte lineage. Using an in vitro coculture assay, I demonstrated that adipocytes enhanced megakaryocyte differentiation through a direct lipid transfer, in a non-energetic aim. In the context of obesity, increased marrow adipocity is associated to enhanced megakaryocyte differentiation and defective platelet production and lifespan leading to macrothrombopenia. Thus, bone marrow microenvironment through adipocytes impact directly on megakaryopoiesis and platelet production. Altogether my thesis work contributes to better understand platelet production and function, mechanisms regulated by intrinsic factors such as PI3KC2a and Vps34 as well as extrinsic factors like medullar adipocytes
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Riojas, Ramon Alberto. "Characterization of PDK1 regulation and function in the insulin-stimulated PI3-kinase pathway : a dissertation /." San Antonio : UTHSC, 2007. http://proquest.umi.com/pqdweb?did=1372010131&sid=1&Fmt=2&clientId=70986&RQT=309&VName=PQD.
Full text
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Cox, Sian Sarah Eileen. "Characterisation of putative phosphatidylinositol-3 kinases in the parasitic protozoan giardia instestinalis." Thesis, Royal Holloway, University of London, 2008. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.498208.
Full text
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Fos, Camille. "Etude de la signalisation P 13-kinase induite par le récepteur de costimulation ICOS au cours de l'activation lymphocytaire T." Aix-Marseille 2, 2008. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2008AIX22012.pdf.
Full textAbstract:
Il est maintenant communément admis qu’une activation lymphocytaire T efficace requiert deux signaux indépendants. Le premier, qui détermine la spécificité de la réponse immunitaire, est délivré au travers de l’interaction du récepteur à l’antigène sur la cellule T (TcR) avec le complexe CMH-peptide antigénique à la surface des cellules présentatrices d’antigène. Un signal additionnel (ou signal 2) aussi appelé costimulateur, est critique pour la régulation de l’activation lymphocytaire T. La signalisation induite par le couple ICOS/ICOS-L fournit à la cellule un second signal positif qui contribue à l’activation des lymphocytes T. La signalisation induite par l’engagement du récepteur ICOS est actuellement peu référencée dans la littérature et ne semble engager que la voie PI3-kinase. Les résultats obtenus in vitro, nous ont montré que l’engagement du récepteur ICOS par son ligand induit le recrutement de p50α au sein de sa partie intracellulaire via son motif consensus motif YxxM. L’engagement du récepteur ICOS augmente également le recrutement intracellulaire de p85α, déjà présent au sein du récepteur à l’état basal. De manière assez surprenante, nous avons constaté que la stimulation du récepteur ICOS semble renforcer la signalisation PI3K induite sous CD28 selon un mécanisme encore inconnu et a mit en évidence un "crosstalk" entre les deux molécules. Nous avons pu montré pour la première fois que le récepteur de costimulation ICOS se localise à la synapse immunologique, zone de la membrane où le récepteur semble influencer le recrutement de p50α. Enfin, dans notre système de stimulation de lymphocytes T primaires, ICOS est capable d’activer la voie de signalisation PI3K beaucoup plus fortement que CD28 comme en témoigne les niveaux élevés de phosphorylation de la sérine/thréonine kinase Akt après engagement de ce récepteurInducible costimulator (ICOS) ligation in concert with TcR stimulation results in strong phosphoinositide 3-kinase (PI3K) activation in T lymphocytes. The ICOS cytoplasmic tail contains an YMFM motif that binds the p85α subunit of class IA PI3K, similar to the YMNM motif of CD28, suggesting a redundant function of the two receptors in PI3K signaling. However, ICOS costimulation shows greater PI3K activity than CD28 in T cells. We show in this report that ICOS expression in activated T cells triggers the participation of p50, one of the regulatory subunits of class IA PI3Ks. Using different T-APC cell conjugate systems, we report that p50α accumulates at the immunological synapse in activated but not in resting T cells. Our results demonstrate that ICOS membrane expression is involved in this process and that p50α plasma membrane accumulation requires a functional YMFM SH2-binding motif in ICOS. We also show that ICOS triggering with its ligand, ICOSL, induces the recruitment of p50α at the synapse of T cell/APC conjugates. In association with the p110 catalytic subunit, p50 is known to carry a stronger lipid kinase activity compared to p85α. Accordingly, we observed that ICOS engagement results in a stronger activation of PI3K. Together, these findings provide evidence that p50α is likely a determining factor in ICOS mediated PI3K activity in T cells. These results also suggest that a differential recruitment and activity of class IA PI3K subunits represents a novel mechanism in the control of PI3K signaling by costimulatory molecules
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Pomerance, Martine. "Etapes précoces de la transmission du signal des facteurs de croissance : phosphatidylinositol-3 kinase et protéines serine/threonine kinases." Paris 11, 1994. http://www.theses.fr/1994PA11T008.
Full text
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Bardet, Valérie. "Anomalies de la signalisation dans les leucémies aiguës myéloïdes." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077070.
Full textAbstract:
Les leucémies aiguës myéloïdes (LAM) sont des maladies clonales qui atteignent des progéniteurs de la lignée myéloïde. Elles résultent de la coexistence d'au moins deux anomalies : un blocage de la différenciation et une prolifération cellulaire anormale. Des activations anormales de voies de signalisation, en particulier des voies PI3K/Akt/mTOR, Ras/MAPK et JAK/STAT ont été mises en évidence dans ces hémopathies. Nous nous sommes intéressés dans ce travail à l'étude des anomalies de la voie PI3K/Akt. Nous avons retrouvé une activation constitutive de cette voie de signalisation dans 50% des échantillons de cellules blastiques prélevés au diagnostic chez les patients atteints de LAM de novo. Nous avons également mis en évidence le rôle prédominant de l'isoforme delta de la sous unité catalytique p110 de la PI3K dans cette activation anormale. L'abolition de cette activité catalytique par un inhibiteur spécifique, I'IC87114, nous a permis de démontrer que la voie PI3K/Akt contrôle chez nos patients la prolifération cellulaire mais pas la survie. Ce composé, qui n'est pas toxique et n'a pas d'effet sur la prolifération des progéniteurs normaux, ou un de ses analogues, pourrait avoir un intérêt thérapeutique en association aux chimiothérapies conventionnelles. Des mutations activatrices de la sous unité p110 alpha étant décrites dans certaines tumeurs solides, nous avons recherché si l'activation constitutive anormale de la voie PI3K était causée par des mutations activatrices de p110 delta. Il ne semble pas que cette hypothèse soit à privilégier car les 42 patients testés ne présentent pas de mutation de p110 delta dans leurs blastes. Ces activations anormales ne sont pas non plus corrélées aux anomalies génétiques décrites dans les LAM comme la présence d'un récepteur Flt3 ou c-kit muté ou les mutations des protéines de la famille ras. Il est possible que l'activation anormale de la PI3K observée chez nos patients soit en relation avec des mécanismes d'auto ou de paracrinie de facteurs de croissance. Nous testons actuellement l'implication du système IGF-1/IGF-1R dans cette signalisation anormale. Nos travaux nous ont également permis de montrer grâce à des techniques de cytométrie en flux multi couleurs que lorsqu'une activation anormale de la voie PI3K est détectée dans la population blastique, cette activation est déjà détectable dans la fraction de cellules blastiques les plus immatures de phénotype CD34+ CD38-/low CD123+ qui contient les cellules souches leucémiques. Ces résultats laissent suggérer que l'utilisation en thérapeutique d'inhibiteurs de voies de signalisation en association à la chimiothérapie conventionnelle a un rationnel dans les LAM qui sont des maladies dont le pronostic est actuellement médiocre en raison de la fréquence élevée des rechutesAcute myeloid leukemia (AML) is an aggressive malignancy resulting from a blockade of differentiation and abnormal proliferation of myeloid progenitor. Abnormal activation of several signal transduction pathways such as PI3K/Akt/mTOR, Ras/MAPK and JAK/STAT has been reported in AML. In this work, we focused on the role of PI3K/Akt signaling abnormalities in the biology of AML. We identified an abnormal and constitutive activation of thé PI3K pathway in half of the blast cell'samples from patients with de novo AML at diagnosis. We pointed out the major role of the delta isoform of the p110 catalytic unit of PI3K. Using a specific inhibitor, IC87114, we were able to demonstrate that the PI3K pathway controls in our patients cell proliferation but not survival. This compound which has no toxicity or inhibitory effect on proliferation of normal progenitors, could therefore be of therapeutic interest associated with conventional chemotherapy. As activating mutations of another catalytic isoform, pHOalpha, were described in various solid tumors, we asked whether the abnormal activation of p110delta can be related with such mutations in p110delta. No mutation could be evidenced in the 42 patients tested, so it is unlikely that one activating mutation could be responsible for this abnormal activation. Moreover, we did not find any association with the genetic abnormalities frequently found in AML like mutated Flt3 or kit receptor or ras mutations. The PI3K activation present in our patients can possibly be due to auto or paracrine growth factor stimulation. We are currently evaluating the role of the IGF-1/1GF-1R System in this abnormal signaling. Using multicolor flow cytometry, we were able to identify in the positive samples, an immature blast cell population with the CD34+ CD38-/low CD123+ among the whole leukemic bulk that already harbored PI3K activation. These results suggest that targeted therapies could be of interest in AML whose prognosis remains poor
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Mujalli, Abdulrahman. "Phosphoinositides in blood platelet : mapping of molecular species and evidence for a new localization and role of PI3P." Thesis, Toulouse 3, 2018. http://www.theses.fr/2018TOU30110.
Full textAbstract:
Les phosphoinositides (PIs) sont des phospholipides membranaires qui jouent un rôle crucial dans le contrôle de l'organisation spatio-temporelle de nombreuses voies de signalisation intracellulaire, du réarrangement du cytosquelette d'actine et du trafic de vésicules. Dans la plaquette, le métabolisme des PIs est particulièrement actif et génère, par le jeu de kinases, phosphatases et phospholipases spécifiques, des seconds messagers indispensables à l'activation plaquettaire, notamment le phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate (PIP3). La première partie de la thèse concerne l'étude des différentes espèces moléculaires (composition en acides gras) des 4 grandes classes de PIs (PI, PIP, PIP2 et PIP3) dans les plaquettes humaines et de souris au repos ou lors de leur activation. Cette analyse, jamais réalisée précédemment, a été possible grâce à une technique de spectrométrie de masse (LC-MS), basée sur la méthylation avec le TMS-diazomethane des groupements phosphates des PIs. Cette étude montre une augmentation rapide et transitoire de 2 espèces moléculaires majoritaires de PIP3 lors d'une stimulation plaquettaire avec une réactivité différente des plaquettes humaines et de souris en réponse aux agonistes plaquettaires (thrombine et CRP). En utilisant des modèles murins présentant une inactivation des PI3-kinases (PI3K) dans la lignée mégacaryocytaire et des inhibiteurs spécifiques de PI3K, j'ai montré que l'isoforme PI3Kß (p110ß) de classe I est très majoritairement responsable de la production des diverses espèces moléculaires de PI(3,4,5)P3 en réponse à la thrombine ou au CRP alors que la PI3Ka (p110a) est faiblement impliquée. Les résultats montrent également une grande variété d'espèces moléculaires de PI et seulement 2 espèces moléculaires prédominantes pour les PIP, PIP2 et PIP3, aussi bien chez l'homme que chez la souris malgré des régimes alimentaires très différents. Nous montrons des différences importantes dans le métabolisme des espèces moléculaires de PI, PIP et PIP2 dans les plaquettes humaines et de souris lors de la stimulation. Dans cette étude, nous avons identifié pour la première fois des espèces moléculaires minoritaire de PIP2 mais qui augmentent de façon importante lors de la stimulation plaquettaire. Ce travail permet de dresser la première cartographie des différentes espèces moléculaires de PIs présents dans les plaquettes humaines et de souris et les modifications induites par leur activation. La deuxième partie de la thèse montre pour la première fois une localisation atypique du phosphatidylinositol 3- monophosphate (PI3P), dans le feuillet externe de la membrane plasmique plaquettaire. Je démontre que ce lipide minoritaire (environ 10% de PIP), connu pour être intracellulaire et impliqué dans le trafic vésiculaire, est également présent à la surface des plaquettes au repos. Aucun autre PI n'a pu être détecté dans le feuillet externe de la membrane plasmique plaquettaire. Ce résultat a été obtenu en utilisant différentes sondes fluorescentes se liant spécifiquement au PI3P et leurs contrôles mutées. Nous montrons que le traitement des plaquettes avec des enzymes métabolisant spécifiquement le PI3P (MTM1 et ABH) réduit significativement ce pool de PI3P. Les plaquettes de souris déficientes en PI3K de classe II et III présentent une diminution du PI3P de surface. De manière intéressante, ce pool externe de PI3P permet l'endocytose des protéines circulantes liant le PI3P, in vitro, ex vivo et in vivo. Les sondes PI3P spécifiques internalisées dans la plaquette sont stockées dans les granules a puis sécrétées lors de l'activation plaquettaire. Cette étude montre que le PI3P se comporte comme un récepteur permettant l'endocytose de protéines plasmatiques spécifiquesPhosphoinositides (PIs) are membrane phospholipids that play a crucial role in controlling the spatiotemporal organization of many intracellular signaling pathways, actin cytoskeleton rearrangement, and vesicle trafficking. In platelet, the metabolism of PIs is highly active and generates, by the interplay of specific kinases, phosphatases and phospholipases, second messengers essential for platelet activation, in particular phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate (PIP3). The first part of the thesis concerns the study of the different molecular species (fatty-acyl composition) of 4 PIs classes (PI, PIP, PIP2 and PIP3) in resting and stimulated human and mouse platelets. This analysis, never realized previously, was possible thanks to a mass spectrometry (LC-MS) technique, based on methylation of PIs phosphates groups with TMS- diazomethane. This study shows a rapid and transient increase in the 2 major molecular species of PIP3 during platelet stimulation with a different reactivity of human and mice platelets according to the used agonists (thrombin and CRP). Using mice models with selective deletion of PI3-kinases (PI3K) in the megakaryocyte lineage and specific PI3K inhibitor, I showed that the class I PI3Kß (p110ß) is the major isoform responsible for the production of the various molecular species of PIP3 in response to thrombin or CRP whereas class I PI3Ka (p110a) is weakly involved. The results also show a large variety of molecular species of PI while only 2 predominant molecular species for PIP, PIP2 and PIP3, both in humans and mice platelets despite very different diet. We show a significant difference in terms of PI, PIP and PIP2 molecular species metabolism in human and mice platelets during stimulation. In this study, we identified for the first time the presence of low-abundance molecular species of PIP2 but which increase significantly during platelet stimulation. This work constitutes the first comprehensive analysis of PIs molecular species and the changes in their actual mass during platelet stimulation. The second part of the thesis shows for the first time an atypical localization of phosphatidylinositol 3-monophosphate (PI3P), in the outer leaflet of the platelet plasma membrane. I demonstrate that this minor lipid (about 10% of PIP), known to be intracellular and involved in vesicular trafficking, is also present at the surface of resting platelet. No other PIs could be detected in the outer leaflet of the platelet plasma membrane. This result was obtained using fluorescent probes binding specifically to PI3P and their mutated controls. Treatment of platelets with PI3P specific metabolizing enzymes (MTM1 and ABH) significantly reduced this particular pool of PI3P. Class II and III PI3K deficient mouse platelets showed a decrease in surface PI3P. Interestingly, this external pool of PI3P was able to mediate endocytosis of circulating PI3P- binding proteins, in vitro, ex vivo and in vivo. Internalized specific PI3P probes were stored into platelets a-granules and could then be secreted during platelets activation. This study shows that PI3P acts as a receptor allowing endocytosis of specific plasma proteins
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Gobin, Bérengère. "Approches thérapeutiques des ostéosarcomes par ciblage des activités kinases." Nantes, 2013. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=38b2d404-a1cc-40e0-b8c7-038cf56a7994.
Full textAbstract:
L'ostéosarcome est la plus fréquente des tumeurs osseuses primitives malignes et est caractérisé par la production de tissu ostéoide tumoral avec ou sans lésions ostéolytiques. Malgré des avancées en termes de chimiothérapie et de chirurgie, le taux de survie des patients reste inchangé depuis plusieurs années. L'absence de réponse aux drogues et l'établissement de résistance montre l'urgence d'explorer de nouvelles voies thérapeutiques. Durant la dernière décade, les avancées biologiques et technologiques ont permis l'émergence de nouvelles thérapies ciblées. Ces drogues inhibitrices sont regroupées en 2 familles majeures (anticorps monoclonaux et petites molécules inhibitrices des activités tyrosine kinase) et ciblent spécifiquement un acteur clé du développement tumoral, et montrent de plus en plus un intérêt majeur dans le ciblage du microenvironnement tumoral. Dans ce contexte, nous nous sommes intéressés aux petites molécules inhibitrices des activités tyrosine kinase: l'imatinib mésylate, inhibiteur des plusieurs récepteurs tyrosine kinase, le NVP-BEZ235, inhibiteur de PI3K et de mTOR, et le BYL719, inhibiteur de la sous-unité p110a de l'enzyme PI3K. Nos résultats ont révélé un effet anti-tumoral direct de ces inhibiteurs in vitro ainsi que in vivo dans plusieurs modèles précliniques d'ostéosarcome. De plus, des études histomorphométriques ont montré l'implication de ces inhibiteurs dans le ciblage de l'angiogenèse tumorale. Nous avons également pu mettre en évidence un impact de ces molécules sur la physiologie osseuse. L'ensemble des résultats de ce travail permet donc de mettre en avant l'intérêt thérapeutique des thérapies ciblées dans l'ostéosarcomeOsteosarcoma is the most common type of primary malignant bone tumor, characterized by osteoid production with or without osteolytic lesions. Despite recent improvements in chemotherapy and surgery, the survival rate remains unchanged for several years. Due to the lack of response to drugs and establishment of resistance there is an important need to explore new therapeutic approaches. During the last decade, biological and technological advances enabled the emergence of targeted therapies. These inhibitors are divided into 2 families (monoclonal antibodies and small molecule inhibitors of tyrosine kinase activities) and specifically target a key player in tumor development and show an increasing interest in targeting the tumor microenvironment. In this context, we are interested in small molecule inhibitors of tyrosine kinase activities: imatinib mesylate, an inhibitor of several tyrosine kinase receptors, NVP-BEZ235, an inhibitor of both PI3K and mTOR, and BYL719, a specific inhibitor of p110a subunit of PI3K enzyme. Our results showed direct in vitro and in vivo anti-tumoral effects of these inhibitors in several preclinical models of osteosarcoma. In addition, histomorphometric studies have shown the involvement of these inhibitors in targeting tumor angiogenesis. We were also able to demonstrate an impact of these drugs on bone biology. Taken together, these results highlight the therapeutic benefit of targeted therapy in osteosarcoma
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Chen, Xi. "The role of PI3K and ERK/MAPK signal transduction cascades in long-term memory formation /." Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2004. http://hdl.handle.net/1773/6248.
Full text
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Rojnuckarin, Ponlapat. "Mitogen-activated protein kinase pathways in megakaryocyte development /." Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2001. http://hdl.handle.net/1773/9200.
Full text
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Dufour, Cécilie. "Contrôle de l'apoptose des ostéoblastes : implication de la PI3K in vitro et in vivo." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077232.
Full textAbstract:
L'apoptose des cellules osseuses joue un rôle important dans la régulation de l'ostéogénèse. Cependant un dérèglement de l'apoptose contribue à différentes pathologies osseuses. L'objectif de notre travail est de caractériser le rôle de la voie PI3K/Akt dans l'apoptose des ostéoblastes en utilisant un modèle d'ostéoblastes mutés sur le FGFR-2 et un modèle d'hypokinésie chez le rat. Dans un premier travail, nous montrons que l'activation constitutive du FGFR-2 entraîne l'apoptose des cellules ostéoblastiques et que ceci est dû en partie par la dégradation de la PI3K par le protéasome. Nous avons établi un lien entre l'ubiquitine ligase c-Cbl et la PI3K, mettant à jour un des systèmes de régulation de celle-ci. Nous confirmons que la voie de survie PI3K/Akt est la voie principalement impliquée dans la survie des ostéoblastes et qu'elle est également un régulateur de l'apoptose dans ces cellules. Enfin, nous localisons cet événement dans les domaines particuliers de la membrane plasmique que sont les microdomaines lipidiques ou rafts. Dans un second travail, nous montrons que l'apoptose des ostéoblastes induite par réduction des contraintes mécaniques chez le rat est médiée par les intégrines a5(31 et que la voie de survie PI3K se trouve atténuée lors de la perte d'adhésion de ces intégrines à leur substrat. Nous montrons aussi que la voie de survie PI3K protège de l'apoptose en maintenant les taux de protéines anti-apoptotiques Bcl-2. La PI3K, molécule interagissant avec la signalisation FGF/FGFR et avec les intégrines, apparaît comme une molécule clé de la signalisation de survie des ostéoblastesBone cells apoptosis plays an important role in osteoblastogenesis regulation. When apoptosis is disturb, this leads to several bone pathologies. The aims of the study is to identify a role for PI3K signaling first in cell apoptosis induced by FGFR2 activation in human osteoblast and then in skeletal unloading induced by tail suspension in rats. First, we show that FGFR2 activation leads to decrease PI3K protein levels, resulting in attenuation of PI3K and Akt signaling in osteoblasts due to increased Cbl-PI3K molecular interaction. This results in increased PI3K ubiquitination and proteasome degradation. FGFR2 activation increases FGFR2-Cbl interact in raft micro-domains. These results reveal a novel role for PI3K/Akt attenuation in the control of osteoblast survival by FGFR2 signaling. Then, we show that skeletal unloading induces rapid osteoblast apoptosis which is associated with downregulation of a5(31 integrin expression and subséquent alteration of PI3K-Bcl-2 survival pathway in rat bone. PI3K, which interact with FGF/FGFR signaling and with integrins, appears to be a key molecule implies in osteoblast survival
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Tamburini-Bonnefoy, Jérôme. "Régulation des voies de signalisation P13K/Akt et mTOR dans les leucémies aiguës myéloïdes : implications physiopathologiques et thérapeutiques." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077179.
Full textAbstract:
Nous avons montré qu'une activation constitutive de la voie PBK/Akt est détectée dans 50% des _ leucémies aiguës myéloïdes (LAM), due le plus souvent à une autocrinie IGF-1/IGF-1R. Néanmoins, l'inhibition spécifique de la PI3K ou de l'IGFlR n'est que cytostatique dans les LAM. L'inhibition spécifique de mTORCl par la rapamycine induit une sur-stimulation de la voie PI3K/Akt dépendante l'IGFl. Ce mécanisme limite l'activité anti-leucémique de la rapamycine dans les LAM. Nous avons ensuite montré que mTORCl ne contrôle pas la traduction dans les LAM. La rapamycine ne réprime donc pas la synthèse de protéines oncogéniques expliquant ses effets limités dans les LAM. Ce mécanisme dépend de la kinase Pim-2, qui contrôle la phosphorylation du régulateur traductionnel 4E-BP1, suggérant l'intérêt potentiel d'inhibiteurs de Pim-2 dans les LAM. De plus, l'inhibition du complexe d'initiation de la traduction par le 4EGI-1 induit l'apoptose des blastes de LAM sans toxicité sur les cellules hématopoïétiques normales, désignant l'inhibition de la traduction comme une nouvelle perspective thérapeutiques dans les LAM. Nous avons ensuite montré que mTOR contrôle 4E-BP1 et ainsi la traduction dans les LAM, indépendamment des complexes mTORCl et mTORC2. Nous avons activé le répresseur physiologique de mTOR, la voie LKB1/AMPK, par la metformine, ce qui se traduit par des effets anti-leucémiques marqués dans les LAM. Ce travail a donc contribué à décrire la dérégulation oncogénique de la traduction comme étant une cible intéressante pour le développement de thérapeutiques — ciblées, par diverses approches basées sur une meilleure compréhension de la physiopathologie des LAMIn acute myeloid leukemia (AML), aberrant activation of signal transduction pathways enhances the survival of leukemic cells. We showed that 50% of primary AML samples had a constitutive activation of -PI3K/Akt generally due to an autocrine IGF-1/IGF-1R loop. However, specific PI3K and ÏGF-1R inhibitors'only showed limited anti-leukemic activity. The specific inhibition of mTORCl by rapamycm induced an IGF 1-dependent overactivation of PI3K that limited thé anti-leukemic potential of rapamycm. This emphasized the potential benefit of dual PI3K and mTORCl inhibitors in AML. Surprismgly, the mRNA translation process was not controlled by mTORCl in AML, and rapamycm failed to reduce the expression of oncogenic proteins. The Pim-2 kinase was involved in this mechamsm suggesting a potential benefit for Pim-2 inhibitors in the future. We showed that directly targeting the translation initiating complex by the 4EGI-1 compound decreased AML cell survival while sparing normal hematopoiesis, suggesting other therapeutic perspectives in AML therapy. We also showed that mTOR controlled by complex phosphorylation events the translation regulator 4E-BP1 m AML, independently of mTORCl and mTORC2 Finally, we activated the LKB1/AMPK pathway using metformin, which represents a physiological repressor of mTOR activity. This molecule markedly impaired the translation of oncogenic mRNA and repressed the growth of AML cells. The present work therefore contributed to emphasize the oncogenic deregulation of mRNA translation as a valuable target m AML that could be inhibited using different physiologic-based approaches
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Nemeth, Joseph. "Design and synthesis of chemical probes for the protein kinase B PH domain." Thesis, St Andrews, 2008. http://hdl.handle.net/10023/572.
Full text
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Fortin, Carl. "Régulation de la production de chimiokines induite par des stimuli inflammatoires chez les neutrophiles humains rôle des phosphatidylinositol 3 kinases (PI3Ks), des MAP kinase interacting kinases (MNKs), et de l'interleukine (IL)-18." Thèse, Université de Sherbrooke, 2010. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4316.
Full textAbstract:
Les neutrophiles produisent plusieurs médiateurs peptidiques contribuant à l'inflammation lors de la réponse immunitaire contre les agents infectieux. Ces médiateurs sont encodés par des gènes dont la transcription est strictement régulée. Alors que ces facteurs de transcription sont bien connus, les voies de signalisation causant l'activation transcriptionnelle, ainsi que l'initiation de la traduction des chimiokines, sont moins bien caractérisées chez les neutrophiles humains. En conséquence, nous avons caractérisé le rôle de la PI3K dans cette réponse. L'inhibition de la PI3K par le LY294002 a considérablement réduit la sécrétion de chimiokines. La nucléofection de dominant-négatifs des sous-unités de la PI3K dans la lignée cellulaire PLB-985 différenciée en neutrophiles a confirmé ces résultats. D'autre part, le LY294002 a drastiquement inhibé l'expression génique de certaines chimiokines sans influencer l'activation des facteurs de transcription. Ceci a aussi été confirmé par la double nucléofection des dominants-négatifs et de promoteurs couplés à la luciférase. Ainsi, la PI3K affecte sélectivement la transcription de certaines chimiokines et module la traduction puisque le LY294002 inhibe la phosphorylation de protéines impliquées dans l'initiation de la traduction. Puisque les mécanismes contrôlant l'initiation de la traduction sont à peu près inconnus chez les neutrophiles, nous avons donc étudié la contribution de MNK I. Le CGP57380, un inhibiteur de MNK I, a fortement réduit la sécrétion de chimiokines. Ces données ont été confirmées par la nucléofection d'un dominant-négatif de MNK I dans la lignée cellulaire PLB-985 différenciée en neutrophiles. De plus, le CGP57380 n'influence pas l'expression génique des chimiokines. L'utilisation d'une coiffe synthétique mimant celle des ARNms nous a permis de déterminer que MNK I n'y est pas recrutée. Par contre, le CGP57380 diminue la phosphorylation de protéines impliquées dans le contrôle de l'initiation de la traduction. Nos résultats montrent que MNK I participe au contrôle de la traduction des chimiokines. Pour terminer, nous avons étudié la contribution de l'IL- 18 à la production de chimiokines. Nous avons tout d'abord détecté l'expression de l'IL- 18 en ARNm et au niveau protéique. De plus, bien que l'ARNm de l'IL- 18 soit inductible en réponse à plusieurs stimuli inflammatoires, seul le LPS peut induire sa sécrétion. Les neutrophiles sécrètent de façon constitutive l'IL-18 BP, l'inhibiteur naturel de l'IL-18, bien que cette sécrétion ne soit pas modulable. L'IL- 18 sécrété en réponse au LPS agit de façon autocrine sur les neutrophiles. En effet, le blocage de l'IL- 18 réduit considérablement l'expression et la sécrétion des chimiokines. En accord avec ces données, l'ajout d'IL-18 exogène induit l'expression et la sécrétion de plusieurs chimiokines en activant une signalisation intracellulaire semblable aux autres stimuli inflammatoires déjà étudiés. Dans leur ensemble, nos résultats dévoilent de nouvelles interactions entre l'IL-18 et les neutrophiles. En conclusion, les travaux présentés dans cette thèse ont montré que les stimuli inflammatoires utilisent en partie la voie de la PI3K au niveau de la transcription; et, au niveau de la traduction, les kinases MNK I et PI3K pour induire la production de chimiokines par les neutrophiles humains. Ces molécules de signalisation pourraient donc représenter des cibles prometteuses pour des interventions thérapeutiques visant à abaisser la production de chimiokines dans des pathologies chroniques dans lesquelles les neutrophiles et leurs produits jouent un rôle prédominant.
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Rajurkar, Mihir S. "GLI-IKBKE Requirement In KRAS-Induced Pancreatic Tumorigenesis: A Dissertation." eScholarship@UMMS, 2014. https://escholarship.umassmed.edu/gsbs_diss/753.
Full textAbstract:
Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC), one of the most aggressive human malignancies, is thought to be initiated by KRAS activation. Here, we find that transcriptional activation mediated by the GLI family of transcription factors, although dispensable for pancreatic development, is required for KRAS induced pancreatic transformation. Inhibition of GLI using a dominant-negative repressor (Gli3T) inhibits formation of precursor Pancreatic Intraepithelial Neoplasia (PanIN) lesions in mice, and significantly extends survival in a mouse model of PDAC. Further, ectopic activation of the GLI1/2 transcription factors in mouse pancreas accelerates KRAS driven tumor formation and reduces survival, underscoring the importance of GLI transcription factors in pancreatic tumorigenesis. Interestingly, we find that although canonical GLI activity is regulated by the Hedgehog ligands, in the context of PDAC, GLI transcription factors initiate a unique ligand-independent transcriptional program downstream of KRAS, that involves regulation of the RAS, PI3K/AKT, and NF-кB pathways.
We identify I-kappa-B kinase epsilon (IKBKE) as a PDAC specific target of GLI, that can also regulate GLI transcriptional activity via positive feedback mechanism involving regulation of GLI subcellular localization. Using human PDAC cells, and an in vivo model of pancreatic neoplasia, we establish IKBKE as a novel regulator pf pancreatic tumorigenesis that acts as an effector of KRAS/GLI, and mediates pancreatic transformation. We show that genetic knockout of Ikbke leads to a dramatic inhibition of initiation and progression of pancreatic intraepithelial viii neoplasia (PanIN) lesions in mice carrying pancreas specific activation of oncogenic Kras. Furthermore, we find that although IKBKE is a known NF-кB activator, it only modestly regulates NF-кB activity in PDAC. Instead, we find that IKBKE strongly promotes AKT phosphorylation in PDAC in vitro and in vivo, and that IKBKE mediates reactivation of AKT post-inhibition of mTOR. We also show that while mTOR inhibition alone does not significantly affect pancreatic tumorigenesis, combined inhibition of IKBKE and mTOR has a synergistic effect leading to significant decrease tumorigenicity of PDAC cells.
Together, our findings identify GLI/IKBKE signaling as an important oncogenic effector pathway of KRAS in PDAC that regulates tumorigenicity, cell proliferation, and apoptosis via regulation of AKT and NF-кB signaling. We provide proof of concept for therapeutic targeting of GLI/IKBKE in PDAC, and support the evaluation of IKBKE as a therapeutic target in treatment of pancreatic cancer, and IKBKE inhibition as a strategy to improve efficacy of mTOR inhibitors in the clinic.
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Rajurkar, Mihir S. "GLI-IKBKE Requirement In KRAS-Induced Pancreatic Tumorigenesis: A Dissertation." eScholarship@UMMS, 2011. http://escholarship.umassmed.edu/gsbs_diss/753.
Full textAbstract:
Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC), one of the most aggressive human malignancies, is thought to be initiated by KRAS activation. Here, we find that transcriptional activation mediated by the GLI family of transcription factors, although dispensable for pancreatic development, is required for KRAS induced pancreatic transformation. Inhibition of GLI using a dominant-negative repressor (Gli3T) inhibits formation of precursor Pancreatic Intraepithelial Neoplasia (PanIN) lesions in mice, and significantly extends survival in a mouse model of PDAC. Further, ectopic activation of the GLI1/2 transcription factors in mouse pancreas accelerates KRAS driven tumor formation and reduces survival, underscoring the importance of GLI transcription factors in pancreatic tumorigenesis. Interestingly, we find that although canonical GLI activity is regulated by the Hedgehog ligands, in the context of PDAC, GLI transcription factors initiate a unique ligand-independent transcriptional program downstream of KRAS, that involves regulation of the RAS, PI3K/AKT, and NF-кB pathways.
We identify I-kappa-B kinase epsilon (IKBKE) as a PDAC specific target of GLI, that can also regulate GLI transcriptional activity via positive feedback mechanism involving regulation of GLI subcellular localization. Using human PDAC cells, and an in vivo model of pancreatic neoplasia, we establish IKBKE as a novel regulator pf pancreatic tumorigenesis that acts as an effector of KRAS/GLI, and mediates pancreatic transformation. We show that genetic knockout of Ikbke leads to a dramatic inhibition of initiation and progression of pancreatic intraepithelial viii neoplasia (PanIN) lesions in mice carrying pancreas specific activation of oncogenic Kras. Furthermore, we find that although IKBKE is a known NF-кB activator, it only modestly regulates NF-кB activity in PDAC. Instead, we find that IKBKE strongly promotes AKT phosphorylation in PDAC in vitro and in vivo, and that IKBKE mediates reactivation of AKT post-inhibition of mTOR. We also show that while mTOR inhibition alone does not significantly affect pancreatic tumorigenesis, combined inhibition of IKBKE and mTOR has a synergistic effect leading to significant decrease tumorigenicity of PDAC cells.
Together, our findings identify GLI/IKBKE signaling as an important oncogenic effector pathway of KRAS in PDAC that regulates tumorigenicity, cell proliferation, and apoptosis via regulation of AKT and NF-кB signaling. We provide proof of concept for therapeutic targeting of GLI/IKBKE in PDAC, and support the evaluation of IKBKE as a therapeutic target in treatment of pancreatic cancer, and IKBKE inhibition as a strategy to improve efficacy of mTOR inhibitors in the clinic.
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Villedieu, Marie. "Etude de l'implication des voies de signalisation dans la chimiorésistance des cancers de l'ovaire et développement de stratégies chimio-sensibilisatrices." Caen, 2005. http://www.theses.fr/2005CAEN4063.
Full text
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Linassier, Claude. "Signalisation cellulaire par les enzymes de la famille des phosphatidylinositol 3-kinases : caractérisation d'un enzyme de classe III et recherche d'une application en cancérogenèse." Paris 11, 1998. http://www.theses.fr/1998PA11T062.
Full textAbstract:
Les phosphatidylinositol 3-kinases (Pl 3-kinases) sont des enzymes capables d'assurer la transduction du signal par phosphorylation en position 3 de l'anneau inositol de la molécule de phosphatidylinositol. Selon la spécificité du substrat (Ptdlns, Ptdlns(4)P, Ptdlns(4,5)P2) et la structure de l'enzyme, on distingue trois grandes classes de PI 3-kinases. Le métabolite essentiel des PI 3-kinases de classe 1 est le Ptdlns(3,4,5)P3. Ces enzymes sont notamment impliqués dans la régulation de la prolifération, de la survie cellulaire et du cytosquelette. Caractérisés par un domaine C2 et par une affinité dominante pour le Ptdlns(4)P2, les enzymes de classe II sont ont une fonction mal définie. Vps34 est le premier membre de classe III identifié chez la levure pour son rôle dans la régulation du tri des vacuoles cytoplasmiques. Dans ce travail, nous caractérisons PI3K_59F, une PI 3-kinase de drosophile homologue de Vps34. PI3K_59F code pour une protéine de 108 kDa présentant 56,5% d'identité (72% d'homologie) avec une PI 3-kinase de classe III humaine et 37,2% d'identité (59,5% d'homologie) avec Vps34. Elle possède les trois régions d'homologie HR1 (domaine catalytique), HR2 (PIK domain) et HR3 retrouvées dans d'autres PI 3-kinases. Elle est active in vitro avec une spécificité de substrat pour le Ptdins. PI3K_59F est actif à la fois en présence de Mg2+ et de Mn2+. Son activité est inhibée par le détergent non ionique (Nonidet P40) et par la wortmannin avec une IC5O de 10 nM. Ces données établissent que les PI-3 kinases de classe III sont conservées lors de la phylogenèse et joue probablement un rôle fonctionnel esentiel. Afin d'examiner l'implication des PI 3-kinases dans la cancérogenèse, nous avons recherch l'existence de remaniements de p110α dans deux modèles de tumeurs humaines par Southem Blot. Le premier modèle est celui de leucémies aiguës lymphoblastiques et myéloblastiques prélevées au diagnostic de la maladie et congelées. Le second modèle utilise des cellules en lignée continue de tumeurs mammaires humaines. Aucun réarrangement du gène p110α n'a pu être détecté dans chacun des deux modèles tumoraux en utilisant cette technique.
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Poser, Steven Walter. "Coincident signaling of cAMP with phosphatidylinositol 3' kinase and mitogen activated protein kinase signal transduction cascades : a role in regulating gene exression during development and synaptic plasticity /." Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2001. http://hdl.handle.net/1773/10633.
Full text
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Fabre, Stéphanie. "Implication de la voie P13-kinase/Akt/FOXO1dans le contrôle de la prolifération et de l'écotaxie des lymphocytes T." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077080.
Full textAbstract:
La formation d'une synapse immunologique (SI) entre un lymphocyte T (LT) et une cellule présentant l'antigène induit l'activation prolongée des PI3-kinases (PI3K), essentiellement de la classe IA, dont la sous-unité régulatrice p85alpha est recrutée à la zone de contact. Ces enzymes catalysent la formation de D3-phosphoinositides (3-PI) qui diffusent dans l'ensemble de la membrane plasmique. Ce phénomène très dynamique est en permanence équilibré par une dégradation des 3-PI, notamment par la phosphatase PTEN. L'activité de celle-ci est essentielle pour prévenir l'activation constitutive des voies de signalisation dépendantes des 3-PI dans les LT au repos, mais ne semble pas intrinsèquement régulée lors de l'activation T. Toutefois, la stimulation antigénique induit des modifications de sa localisation subcellulaire, ce qui pourrait influencer cet équilibre. Un rôle de PTEN dans la formation de la SI est aussi suggéré. L'activation de la PI3K dans les LT déclenche en aval d'Akt l'exclusion nucléaire du facteur de transcription FOXO1, un acteur majeur de la quiescence cellulaire. Ceci permet la prolifération des LT en réponse à l'antigène. Il apparaît aussi que FOXO1 régule dans ces cellules des cibles impliquées dans le contrôle du trafic des LT entre le sang et les organes lymphoïdes secondaires, comme la L-Sélectine et les récepteurs à la sphingosine-1 -phosphate, ainsi que le facteur transcriptionnel KLF2, autre régulateur de la quiescence et de la circulation des LT. La PI3K initie donc un réseau de voies de signalisation et de régulations transcriptionnelles affectant à la fois l'expansion clonale et l'écotaxie des LT, deux paramètres majeurs de la réponse immuneThe formation of an immunological synapse (IS) between a T-cell and an antigen-presenting cell induces a strong production of D3-phosphoinositides (3-PI) mediated quite exclusively by the sustained recruitment of class IA phosphoinositide-3-kinases (PI3K) at the contact zone. 3-PI rapidly overflow the whole T-cell membrane and regulate the localization and the activation of a wide range of proteins including the kinase Akt. This synthesis is a highly dynamic process, permanently balanced by 3-PI hydrolysis, largely catalysed by the 3-phosphatase PTEN. PTEN activity is essential to prevent the constitutive activation of the 3-PI dependent signaling pathways in resting T cells, but does not seem to be intrinsically regulated after T-cell stimulation. Nonetheless, antigenic stimulation triggers changes in the subcellular distribution of PTEN, which could affect this equilibrium. A role of PTEN in the IS formation is also suggested. I showed that PI3K activation triggers the Akt-dependent nuclear exclusion of the transcription factor FOXO1, one important regulator of T-cell quiescence, thereby allowing the initiation of antigen-induced T-cell proliferation. Additionally, it appears that FOXO1 also regulates specific target genes involved in the control of T lymphocytes circulation within the secondary lymphoid organs, like L-Selectin and sphingosin-1-phosphate receptors. FOXO1 also controls the transcription factor KLF2, another regulator of T-cell quiescence and trafficking. Thus, PI3K seems to initiate a network of signaling pathways and transcriptional regulations controlling both clonal expansion and T-cell homing. Two essential parameters of the immune response
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Leleu, Xavier Pierre. "Etude de la voie PI3K/AKT dans les dysglobulinémie malignes : impact thérapeutique." Lille 2, 2007. http://www.theses.fr/2007LIL2S035.
Full textAbstract:
Le Myélome Multiple (MM) et la Maladie de Waldenström (MW) sont deux hémopathies lymphoïdes malignes caractérisées par l'envahissement de la moelle osseuse hématopoïétique par les cellules tumorales. Bien que la MW soit rare, le MM reste une des hémopathies les plus fréquentes, avec une incidence proche de 3 cas / 105 habitants. La médiane de survie dans le MM ne dépasse pas 5 ans et se situe aux alentours de 5 à 7 pour la MW. La voie PI3Kinase est une voie essentielle de survie, de croissance, régulant le cycle cellulaire et l'apoptose, de même que les phénomènes de migration et d'invasion des cellules tumorales. Cette voie de signalisation est constitutivement activée dans ces deux hémopathies et son inhibition entraine un effet cytotoxique sur les cellules tumorales et une induction de la mort cellulaire. Nous résumons dans ce travail l'état des connaissances sur cette voie dans les dysglobulinémies malignes et étudions son impact thérapeutique dans le MM et la MW.
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Logan, Marisa Kay. "Activation of signal transduction pathways by monocyte chemotactic proteins-1, -2, -3 and -4 in the THP-1 monocytic cell line : regulation of CCR2 signalling cascades by phosphatidylinositol-3-kinases." Thesis, University of Bath, 2002. https://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.760816.
Full text
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Chapuis, Nicolas. "Dérégulation des voies de signalisation P13K/Akt et mTOR dans les Leucémies Aigües Myéloïdes." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077010.
Full textAbstract:
Les leucémies aiguës myéloïdes (LAM) constituent un groupe hétérogène de pathologies acquises caractérisées par une prolifération clonale de cellules hématopoïétiques immatures. De nombreuses voies de signalisation sont activées dans les cellules blastiques et la compréhension des mécanismes d'activation et de régulation de ces voies est essentielle en vue du développement de thérapeutiques d'inhibition ciblées. Dans ce contexte, je me suis intéressé aux voies de signalisation PBK/Akt et mTOR qui sont constitutivement activées dans respectivement 50% et 100% des cas. J'ai tout d'abord montré que la dérégulation de la voie PBK/Akt est principalement due à une production autocrine d'IGF-1. J'ai ensuite observé que l'inhibition spécifique de la signalisation mTORCl par la rapamycine induit une sur-stimulation de la voie PBK/Akt dépendante du système IGF-1/IGF-1R. J'ai également démontré que l'inhibition concomitante des voies PBK et mTOR par le NVP-BEZ235 induit un effet anti-leucémique puissant in vitro dans les LAM. Enfin, je me suis intéressé aux mécanismes de régulation des FT FOXO connus pour leurs propriétés de suppresseurs de tumeurs. J'ai observé dans les blastes une inactivation constante du FT FOXO3a due à l'activation constitutive de la kinase IicB. La réactivation des fonctions anti-oncogéniques de FOXO3a via l'inhibition de la kinase LcB pourrait donc constituer une stratégie thérapeutique intéressante dans les LAM. Ce travail montre donc que la compréhension des mécanismes de régulation des voies de signalisation PBK/Akt/mTOR dans les LAM est essentielle pour permettre le développement de nouvelles thérapeutiques dans cette pathologieAcute myeloid leukemia (AML) is a clonal hematopoietic stem cell disorder, characterized by uncontrolled proliferation/survival of immature myeloid progenitors, blocked in their differentiation. Aberrant activation of multiple signalling pathways is frequently found in AML cells. However, a better understanding of the mechanisms leading to constitutive activation of these pathways is required to develop new targeted therapies in this disease. In this work, I investigated the implication in AML cells of both PBK/Akt and mTOR signalling pathways which are constitutively activated in respectively 50% and 100% of cases. I first demonstrated that the PBK/Akt deregulation is mostly due to an IGF1 autocrine production. I then observed that the specific inhibition of mTORCl with rapamycin induces an overactivation of PBK/Akt signalling du to the IGF-1 autocrine loop. I also demonstrated that concomitant inhibition of both PBK/Akt and mTORCl signalling pathways with compounds such as NVP-BEZ235, a dual PBK/mTOR inhibitor induce a promising anti-leukemic effect in vitro and could be use in clinical trials. Finally, I investigated the implication of FOXO proteins, which possess tumours suppressive functions. Interestingly, I observed that FOXO3a is constantly inactivated in AML cells, due to the constitutive activation of the IkB kinase. Réactivation of FOXO3a activity through IkB inactivation represents therefore another therapeutic strategy for AML. Altogether, this work clearly suggests that a better understanding of mechanisms leading to the deregulation o both PBK/Akt and mTOR pathways and their connexions is required to develop new targeted therapies in this disease
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Gayral, Stéphanie. "Prolifération et différenciation des cellules musculaires lisses aortiques : implication des messagers phospholipidiques nucléaires." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077071.
Full textAbstract:
La prolifération et la différenciation des cellules musculaires lisses vasculaires (CML) sont impliquées dans le développement de l'athérosclérose et de la resténose post-angioplastie. Des études récentes montrent un métabolisme lipidique intranucléaire autonome impliqué dans ces deux processus cellulaires. Toutefois, peu de travaux ont concerné le métabolisme nucléaire du phosphatidylinositol-3,4,5-/ràphosphate (PI(3,4,5)P3) et des phosphatidylcholines (PC). Nous nous intéressons donc plus particulièrement aux voies de signalisation impliquant ces deux métabolismes dans des noyaux purifiés de CML. Nous avons pu identifier pour la première fois la présence intranucléaire des 3- et 5-phosphatases actives, PTEN et SHIP-2, dans les CML. D'autre part, nous avons montré que seule la phospholipase Dl (PLDl) est exprimée dans le noyau des CML, alors que la PLDl et la PLD2 sont présentes dans les CML. Les agonistes des récepteurs couplés aux protéines G, comme l'acide lysophosphatidique (LPA) induisent une augmentation de l'activité PLDl, alors que les agonistes des récepteurs à activité tyrosine kinase n'ont pas d'effet significatif. Nous avons précisé que l'activation de la PLDl nucléaire par le LPA implique une voie PI3K/PKCζ, et la translocation de la PKCζ, ainsi que l'activation nucléaire de RhoA. Nos résultats indiquent aussi une régulation de la PLDl intranucléaire au cours de la modulation phénotypique des CML. Ainsi, la caractérisation des enzymes associées au métabolisme endogène du PI(3,4,5)P3 et des PC dans le noyau des CML pourrait aboutir à l'identification de nouvelles cibles thérapeutiques dans le traitement de pathologies fibroprolifératives de la paroi artérielleVascular smooth muscle cells (VSMC) proliferation and migration are hallmarks of atherosclerosis development and postangioplasty restenosis. Recent studies highlight the existence of an autonomous nuclear lipid metabolism related to cellular proliferation and differentiation. However, the importance of nuclear phosphatidylinositol-3,4,5-Jn'sphosphate (PI(3,4,5)P3) and phosphatidylcholine (PC) metabolism is poorly understood. Therefore, we are interested in nuclear phosphatase and phospholipase identification which hydrolyse PI(3,4,5)P3 and PC respectively, in second messengers implicated in proliferative and differentiative signal pathways. For the first time, we identified active intranuclear 3- and 5-phosphatases PTEN (Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten) and SHIP-2 (SH2 containing-inositol 5-phosphatase) in membrane-free nuclei isolated from pig aorta VSMC. On the other hand, we demonstrated that only PLDl is expressed in VSMC nuclei, while PLDl and PLD2 are present in VSMCs. Moreover, specific G-protein coupled receptor agonists, like lysophosphatidic acid (LPA) induced an increase of intranuclear PLD activity, whereas tyrosine kinase receptor agonists have no significant effect. We also showed that LPA-induced nuclear PLDl activation implied PI3K/PKCζ pathway activation and PKCζ. Nuclear translocation as well as nuclear RhoA activation. Interestingly, we also demonstrated that PLDl is regulated during phenotypic modulation of VSMC. Thus, the characterization of an endogenous PI(3,4,5)P3 and PC metabolism inside VSMC nucleus, and their associated enzymes, provides new perspectives in the control of vascular fibroproliferative disorders
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Fındık, Volkan. "Simulations atomistiques de la réaction d’acétylation d’amines et de l’inhibition covalente de l’enzyme Phosphoinositide 3-kinase (PI3K)." Electronic Thesis or Diss., Université de Lorraine, 2022. http://www.theses.fr/2022LORR0266.
Full textAbstract:
Les inhibiteurs covalents ciblés (TCI) sont très prometteurs pour la recherche de nouveaux médicaments. Ils offrent un certain nombre d’avantages par rapport aux inhibiteurs réversibles traditionnels, comme un temps de séjour prolongé, une puissance accrue et la possibilité d’apporter des modifications pour une conception efficace. Les inhibiteurs de kinases sont les exemples les plus courants d’ITC. Les enzymes phosphoinositide 3-kinase (PI3K) sont des cibles médicamenteuses importantes en oncologie car elles sont impliquées dans la voie de signalisation de nombreuses fonctions cellulaires telles que le contrôle de la croissance, le métabolisme et l’initiation de la traduction. Les résidus lysine (Lys) ont suscité un intérêt croissant comme alternative pour l’inhibition covalente ciblée. Récemment, les premiers inhibiteurs sélectifs et irréversibles avec des groupes esters comme tête électrophile ciblant le résidu Lys779 et inactivant de manière covalente l’enzyme PI3Kδ ont été rapportés. L’objectif principal de cette thèse est d’élucider le mécanisme de l’inhibition covalente de PI3Kδ par ces inhibiteurs ester afin d’aider à la conception future de nouveaux inhibiteurs avec des activités supérieures. Avant les études mécanistiques sur l’enzyme, nous avons d’abord effectué des calculs ab initio et DFT sur la réaction modèle entre la méthylamine et les acétates de méthyle, phényle et p-NO2 phényle en solution aqueuse. Les mêmes systèmes modèles ont ensuite été étudiés par l’approche de dynamique moléculaire QM/MM "à double niveau". Pour l’option "bas niveau", les simulations QM/MM ont été conduites au niveau PM3/TIP3P, et elles ont permis d’obtenir l’échantillonnage du système dans le cadre de la technique « umbrella sampling ». Les structures obtenues ont ensuite été utilisées pour obtenir des corrections perturbatives à l’énergie libre avec une région QM de "haut niveau" décrite par la méthode M06-2X/6-311+G(d,p). Les résultats montrent que la première étape implique la formation d’un intermédiaire tétraédrique zwittérionique. Ensuite, pour des esters suffisamment électrophiles, tels que le dérivé p-NO2, la réaction se déroule par dissociation du zwittérion sous forme de paire d’ions, suivie d’un transfert de protons conduisant à la formation des produits attendus. Nous avons utilisé des outils théoriques similaires pour étudier les mécanismes d’inhibition dans le cas de l’enzyme. Tout d’abord, un modèle de site actif de l’enzyme a été construit par des simulations classiques de dynamique moléculaire. Ensuite, l’approche ONIOM QM:QM au niveau M06-2X/6-31+G(d,p):PM6 a été appliquée pour obtenir les mécanismes de réaction envisageables dans ce site actif. Ces calculs nous ont permis d’affiner les mécanismes de réaction dans l’environnement enzymatique qui confirment globalement les étapes obtenues à partir du petit système modèle. Nous avons finalement utilisé ces informations pour aborder une étude QM/MM dynamique sur l’enzyme en utilisant le même protocole "double niveau" établi pour le petit système modèle, ce qui nous a permis d’obtenir le profil d’énergie libre du mécanisme d’inhibition de PI3Kδ pour le dérivé p-NO2 de l’inhibiteur ester. La barrière calculée est en bon accord avec les données cinétiques expérimentales disponibles, ce qui valide l’approche théorique proposée et les mécanismes obtenus. Grâce à l’élucidation du mécanisme d’inhibition de composés précédemment testés expérimentalement, notre étude ouvre la voie à la découverte de nouveaux inhibiteurs à activité améliorée à l’aide des outils de la chimie théoriqueTargeted Covalent Inhibitors (TCIs) hold great promise for search of new drugs. They offer a number of potential advantages over traditional reversible inhibitors, such as extended residence time, increased potency, and the ability to make modifications for effective design. Kinase inhibitors are the most common examples of TCIs. Phosphoinositide 3-kinase (PI3K) enzymes are important drug targets in oncology as they are involved in the signaling pathway for many cellular functions such as growth control, metabolism and translation initiation. Lysine (Lys) residues have gained increasing interest as an alternative for targeted covalent inhibition. Recently, the first selective and irreversible inhibitors with ester groups as electrophilic head targeting the Lys779 residue and covalently inactivating the PI3Kδ enzyme were reported. The main objective of this thesis is to elucidate the mechanism of the covalent inhibition of PI3Kδ by these ester inhibitors in order to assist future design of new inhibitors with superior activities. Prior to the mechanistic studies on the enzyme, initially, we performed ab initio and DFT calculations on the model reaction between methylamine and methyl, phenyl and p-NO2 phenyl acetates in aqueous solution. The same model systems were then studied by the "dual-level" QM/MM molecular dynamics approach. For the “low-level” option, PM3/TIP3P umbrella sampling QM/MM simulations were applied for the sampling. The obtained structures were then used to obtain perturbative corrections to the free energy with a “high-level” QM region at the M06-2X/6-311+G(d,p) level. The results show that thefirst step involves the formation of the zwitterionic tetrahedral intermediate. Then, for sufficiently electrophilic esters, such as the p-NO2 derivative, the reaction proceeds by dissociation of the zwitterion as an ion pair, followed by proton transfer leading to the formation of the expected products. We, then, employed similar computational tools to shed light on the mechanistic aspects of the enzyme. First, an active site model of the enzyme was built through classical molecular dynamics simulations. Then, ONIOM QM:QM approach at the M06-2X/6 -31+G(d,p):PM6 level was applied to get possible reaction mechanisms in this active site. These calculations guided us to refine the reaction mechanisms in enzyme environment which globally confirm the steps obtained from the small model system. We finally used this information to approach a dynamic QM/MM study on the enzyme using the same“dual-level” protocol established for the small model system, which allowed us to obtain the free energy profile of the inhibition mechanism of PI3Kδ for p-NO2 derivative of the ester inhibitor. The calculated barrier is in good agreement with the available experimental kinetic data, which validates the proposed theoretical approach and the obtained mechanisms. Through the elucidation of the inhibition mechanism of previously experimentally tested compounds, our study paves the way for the discovery of new inhibitors with improved activity with the help of theoretical chemistry tools
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Park, Sophie. "Activation des voies PI3K/AKT et mTOR dans les LAM : thérapeutiques ciblées et Implication des facteurs de transcription FOXO dans la leucémogenèse." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077107.
Full textAbstract:
Les leucémies aiguës myéloïdes (LAM) sont des maladies clonales qui atteignent des progéniteurs de la lignée myéloïde. Des activations anormales des voies de signalisation, en particulier des voies PI3K/AKT et mTORd, ont été mises en évidence dans ces hémopathies. La première partie de mon travail montre dans les blastes primaires, les effets biochimiques et fonctionnels anti-leucémiques d'un inhibiteur chimique, le Pl-103, inhibiteur à la fois des PI3K de classe la et de mTORCI. II inhibe la prolifération des blastes leucémiques et leur potentiel clonogénique et induit une apoptose mitochondriale dans le compartiment des cellules leucémiques immatures contenant les cellules souches leucémiques. La deuxième partie de mon travail consiste à déterminer le rôle des facteurs de transcription de la famille FOXO dans la biologie des LAM. J'ai montré dans les blastes primaires et dans une lignée leucémique humaine avec I'IC87114, inhibiteur spécifique de l'isoforme p110δ de PI3K, que l'inhibition de la voie PI3K seule ne permet pas de relocaliser les FOXO dans le noyau et que d'autres voies de signalisation sont impliquées dans ce contrôle. J'ai montré dans une 2e partie qu'une inhibition spécifique de l'activité IKK dans les blastes grâce à un inhibiteur de MEMO pourrait jouer un rôle anti-leucémique en inhibant l'activité NF-KB et en activant la fonctionnalité des facteurs de transcription de la famille FOXO en les relocalisant,dans le noyau. Ces résultats suggèrent que la compréhension des mécanismes d'activation des voies de signalisation dans les blastes primaires et de leur connexion, permettront de définir des stratégies d'inhibition ciblées, dans le traitement des LAMThe PI3K/AKT and mTORCI signaling pathways are frequently activated in AML. MTORd inhibition with RAD001 induces PI3K/AKT activation and both pathways are activated independently, providing a rationale for dual inhibition of both pathways. Pl-103 is a new potent PI3K/AKT and mTOR inhibitor. In blast cells, Pl-103 inhibits leukemic proliferation, the clonogenicity of leukemic progenitors and induces mitochondrial apoptosis, especially in the compartment containing the leukemic stem cells (LSC). Pl-103 has additive pro-apoptotic effects with etoposide in blast cells and in immature leukemic cells. Interestingly, Pl-103 does not induce apoptosis in normal CD34+ cells and has moderate effects on their clonogenic and proliferative properties. FOXO transcription factors have a key role in the control of cell survival. Intracellular localization of FOXO is regulated in part by phosphorylation by différent kinases, especially AKT. I have shown that the specific inhibition of PI3K activity in AML with IC87114, an inhibitor of the p110δ isoform, does not induce apoptosis, does not relocalize FOXOSa in the nucleus and does not induce FasL and Bim target genes expression. Moreover, my data supports the fact that the IKK complex is frequently activated in AML and probably represents the main kinase that controls the localization of FOXOSa in AML, even in AML samples with constitutive PI3K activation. Finally, these results do suggest that the specific targeting of the IKK activity in AML may induce apoptosis by inhibiting NF-KB translocation and by inducing FOXOSa localization in the nucleus
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Adiko, Assi Aimé Cézaire. "Le rôle de la PI3Kinase gamma dans la fonction des cellules dendritiques." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCC307.
Full textAbstract:
Les cellules dendritiques (DCs) ont un rôle majeur dans le système immunitaire, étant à la frontière entre l’immunité innée et l’immunité adaptative. Grâce aux récepteurs de l’immunité innée comme les Toll-like Récepteurs, les DCs déclenchent une réponse inflammatoire et via la présentation de l’antigène par les complexes majeurs d’histocompatibilité (CMH) de classe I et II, elles activent les cellules T naïfs. Nous avons mis en évidence plusieurs mécanismes par lesquels les DCs activent les cellules T CD8+ et contrôlent les réponses inflammatoires déclenchées par les TLRs endosomaux. Nos résultalts montrent que le complexe p84/p110 de la PI3Kγ contrôle la présentation des complexes immuns en facilitant la production des espèces réactives d’oxygène dans les DCs de type 2 et les DCs dérivées de monocytes. Nous avons également décrit le rôle d’une population endosomale particulière, les endosomes de stockage dans le control de l’amplitude des rections inflammatoires déclenchées par le TLR9 et des facteurs qui régulent la dynamique des endosomes de stockage dans les DCs de type inflammatoire. L’ensemble des résultats de ces travaux aide à la compréhension des mécanismes qui permettent à la DC d’être la meilleure cellule présentatrice d’antigène et à l’amélioration des stratégies de vaccination ou d’immunothérapie anti-tumoraleDendritic cells (DCs) have a major role in the immune system, being on the borderline between innate and adaptive immunity. Via their innate immune receptors, such as Toll-like receptors, they trigger an inflammatory response and via the antigen presentation by the class I and II major histocompatibility complexes (MHC), they activate the naive T cells. During my PhD, we have highlighted first several mechanisms by which DCs activate CD8 + T cells. Next, we described new mechanisms by which DCs control the inflammatory responses triggered by endosomal TLRs. We have shown that the p110 / p84 complex of PI3Kγ controls the presentation of immune complexes by facilitating the production of reactive oxygen species in type 2 conventional DCs and in monocyte-derived DCs. In parallel, we described the role of storage endosomes, a particular endosomal population, in the control of TLR9-driven inflammatory response. Finally, we contributed to the identification of the factors that regulate the dynamics of endosomes of storage in inflammatory DCs. All these results will help understanding the mechanisms that allow DC to be the best antigen presenting cell and to improve vaccination strategies or anti-tumor immunotherapy
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Valls, Jimena Paola Hochmann. "Análise do impacto das proteínas E6/E7 de diferentes variantes moleculares de HPV-16 sobre as vias de transdução de sinal mediadas por MAPK." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-21092016-084921/.
Full textAbstract:
A infecção persistente por HPV-16 está fortemente associada ao risco de desenvolvimento de neoplasias do colo do útero, vagina, vulva, pênis, canal anal e orofaringe. O estudo detalhado da variabilidade nucleotídica intra-típica de HPV-16 resultou em importantes achados no que concerne à filogenia e evolução viral, e à história natural das infecções. Variantes Asiático-Americanas (AA) e E-350G de HPV-16 foram associadas com maior risco de persistência da infecção viral e desenvolvimento de câncer de colo de útero quando comparadas à variante Européia protótipo (E-P ou E-350T), embora esta ainda apresente alto risco quando comparada aos outros tipos virais. Mais recentemente, diferenças funcionais entre as proteínas E6/E7 das distintas variantes moleculares de HPV- 16 estão sendo descritas, a fim de explicar as diferenças nas associações epidemiológicas observadas. Dados do nosso grupo apontaram para a transcrição aumentada do gene MEK2 especificamente em queratinócitos humanos primários (PHKs) transduzidos com E6/E7 da variante E-350G. Pelo exposto, objetivou-se: (1) Analisar os níveis de ativação de proteínas efetoras das vias de transdução de sinal mediadas por MAPK e PI3K/AKT em queratinócitos imortalizados por E6/E7 de três variantes moleculares de HPV-16 (AA, E-P, E-350G); (2) Analisar os efeitos das proteínas E6/E7 dessas variantes sob as vias de MAPK quanto à indução de fatores de transcrição; (3) Analisar o potencial transformante de PHKs imortalizados pelas diferentes variantes, e em cooperação com a proteína celular c-MYC; (4) Analisar o potencial de migração e invasão em PHKs imortalizados pelas diferentes variantes de HPV-16, e em cooperação com a proteína celular c-MYC. Neste estudo observou-se que a variante AA de HPV-16 induziu a maior ativação das vias de sinalização estudadas (MAPK, e PI3K/AKT). Ademais, PHKs imortalizados por esta variante apresentaram maior capacidade de migração, de invasão através de uma matriz de colágeno, além de maior potencial transformante. Adicionalmente, as células imortalizadas pela variante AA apresentaram maior expressão da proteína mesenquimal vimentina e diminuição dos níveis da proteína epitelial E-caderina, sugerindo ativação parcial de Transição Epitélio Mesênquima (EMT) nestes queratinócitos. Ademais, quando o oncogene c-MYC foi co-transduzido nas diferentes linhagens infectadas por E6/E7 de HPV-16, foi observado que em PHKs imortalizados pela variante AA também houve maior ativação da via de MAPK-ERK, maior migração, e um potencial transformante semelhante, em relação às células co-transduzidas pela variante E-350G e c-MYC. Em conjunto, estes dados sugerem que a variante AA de HPV-16 possui vantagem seletiva sob as outras variantes em promover transformação celular, migração e invasão, e isto poderia explicar, ao menos em parte, a maior prevalência desta variante no câncer cervical. Os resultados gerados neste estudo são de extrema relevância para avaliar o impacto da variabilidade intra-típica de HPV-16 sobre o potencial oncogênico observado em estudos epidemiológicosPersistent infection with HPV-16 is strongly associated with risk of developing neoplasia in the uterine cervix, vagina, vulva, penis, anal canal and oropharynx. The detailed study of HPV-16 intra-typical nucleotide variability resulted in important findings regarding phylogeny and viral evolution, and the natural history of infections. Asian-American (AA) and E-350G variants of HPV-16 were associated with increased risk of persistent viral infection and development of cervical cancer compared to the European prototype (E-P or E-350T), although this variant still presents higher risk when compared to other viral types. More recently, functional differences between the E6/E7 proteins of distinct molecular variants of HPV-16 are being described, in order to explain the differences in the epidemiological associations observed. Data from our group pointed to increased transcription of the MEK2 gene specifically in primary human keratinocytes (PHKs) transducing E6/E7 of the E-350G variant. Consequently, the aims of this study were: 1) To examine the activation levels of effector proteins of the signal transduction pathways mediated by MAPK and PI3K/AKT in PHKs immortalized by E6/E7 of three different molecular variants of HPV-16 (AA, E-P, E-350G); (2) To analyze the effects of E6/E7 of different molecular variants of HPV-16 upon MAPK pathways concerning the induction of transcription factors; (3) To analyze the transforming potential of PHKs immortalized by different molecular variants of HPV-16, and in cooperation with the cellular protein c- MYC; (4) To analyze the potential of migration and invasion in PHKs immortalized by different molecular variants of HPV-16, and in cooperation with the cellular protein c- MYC. In this study we observed that the AA variant of HPV-16 induced higher activation of both signaling pathways studied (MAPK, and PI3K/AKT). Furthermore, this variant presented increased migration capacity, higher invasion through a collagen matrix, and greater transforming potential. Moreover, cells immortalized by the AA variant showed higher expression of the mesenchymal protein vimentin and a decrease of the epithelial protein E-cadherin, suggesting partial activation of Epithelial Mesenchymal Transition (EMT). In addition, when the c-MYC oncogene was co-transduced in the different cells lines infected with HPV-16 E6/E7, we observed that in PHKs immortalized by the AA variant there was also an enhanced activation of the MAPK-ERK pathway, a higher ability to migrate, and similar transformation potential in comparison with cells co-transduced with the E-350G variant and c-MYC. Taken together, this data suggest that the AA molecular variant of the HPV-16 has a selective advantage over the other variants to promote cell transformation, migration and invasion, and this could partly explain the higher prevalence of this variant in cervical cancer. The results generated in this study are very important to assess the impact of intra-typical variability of HPV-16 on the oncogenic potential observed in epidemiological studies
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Foukas, Lazaros. "Defining the physiological role of phosphatidylinositol 3-kinase protein kinase activity." Thesis, University College London (University of London), 2003. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.397223.
Full text
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Sun, Tong. "Glycogen Synthase Kinase 3 Influences Cell Motility and Chemotaxis by Regulating Phosphatidylinositol 3 Kinase Localization in Dictyostelium discoideum." FIU Digital Commons, 2013. http://digitalcommons.fiu.edu/etd/807.
Full textAbstract:
Glycogen Synthase Kinase 3 (GSK3), a serine/threonine kinase initially characterized in the context of glycogen metabolism, has been repeatedly realized as a multitasking protein that can regulate numerous cellular events in both metazoa and protozoa. I recently found GSK3 plays a role in regulating chemotaxis, a guided cell movement in response to an external chemical gradient, in one of the best studied model systems for chemotaxis - Dictyostelium discoideum.
It was initially found that comparing to wild type cells, gsk3- cells showed aberrant chemotaxis with a significant decrease in both speed and chemotactic indices. In Dictyostelium, phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate (PIP3) signaling is one of the best characterized pathways that regulate chemotaxis. Molecular analysis uncovered that gsk3- cells suffer from high basal level of PIP3, the product of PI3K. Upon chemoattractant cAMP stimulation, wild type cells displayed a transient increase in the level of PIP3. In contrast, gsk3- cells exhibited neither significant increase nor adaptation. On the other hand, no aberrant dynamic of phosphatase and tensin homolog (PTEN), which antagonizes PI3K function, was observed. Upon membrane localization of PI3K, PI3K become activated by Ras, which will in turn further facilitate membrane localization of PI3K in an F-Actin dependent manner. The gsk3- cells treated with F-Actin inhibitor Latrunculin-A showed no significant difference in the PIP3 level.
I also showed GSK3 affected the phosphorylation level of the localization domain of PI3K1 (PI3K1-LD). PI3K1-LD proteins from gsk3- cells displayed less phosphorylation on serine residues compared to that from wild type cells. When the potential GSK3 phosphorylation sites of PI3K1-LD were substituted with aspartic acids (Phosphomimetic substitution), its membrane localization was suppressed in gsk3- cells. When these serine residues of PI3K1-LD were substituted with alanine, aberrantly high level of membrane localization of the PI3K1-LD was monitored in wild type cells. Wild type, phosphomimetic, and alanine substitution of PI3K1-LD fused with GFP proteins also displayed identical localization behavior as suggested by the cell fraction studies. Lastly, I identified that all three potential GSK3 phosphorylation sites on PI3K1-LD could be phosphorylated in vitro by GSK3.
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Siragusa, Mauro. "Role of Phosphatidylinositol 3-Kinasey in Angiogenesis and Vasculogenesis." Thesis, University of Bristol, 2010. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.520205.
Full text
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Marquette, Amélie. "Signalisation et oncogenèse dans le mélanome." Thesis, Paris Est, 2009. http://www.theses.fr/2009PEST0079.
Full textAbstract:
Le mélanome, la tumeur cutanée la plus agressive, est devenu un problème majeur de santé publique dans de nombreux pays. Diagnostiqué précocement, il peut être traité par excision chirurgicale, mais le pronostic pour les mélanomes plus avancés est très mauvais car cette tumeur est résistante à toutes les thérapies utilisées à ce jour. Dans le but de développer de nouvelles thérapies pour traiter cette tumeur, nous étudions les voies de signalisation qui jouent un rôle prépondérant dans la prolifération, la survie et la différenciation des mélanocytes et des mélanomes. Il s’agit de la voie des MAPK, la voie PI3K et la voie de l’AMP cyclique (AMPc). Nous avons tout d’abord démontré que certaines phosphodiestérases (PDE ; les inhibiteurs physiologiques de la voie de l’AMPc) sont surexprimées dans les lignées de mélanomes et inhibent ainsi la différenciation de ces cellules. La surexpression des PDEs est nécessaire à la transformation des mélanocytes par l’oncogène Ras alors que la réactivation de la voie de l’AMPc dans les lignées de mélanome inhibe leur prolifération. Ces données suggèrent qu’une stratégie thérapeutique qui aurait pour objectif de stimuler la différenciation des mélanomes en réactivant la voie de l’AMPc pourrait permettre d’inhiber leur prolifération. Nous avons par ailleurs montré que la protéine kinase B-Raf, qui est fréquemment mutée dans les mélanomes, était cependant inactivée dans les mélanomes contenant une mutation de Ras. Nous avons démontré que cette inhibition était due à une régulation négative de B-Raf par son substrat Erk. En effet, Erk phosphoryle B-Raf sur sa partie amino-terminale pour empêcher son interaction avec Ras. Ce mécanisme de régulation négative de B-Raf force ces lignées de mélanomes à utiliser l’isoforme C-Raf. Ce travail a des conséquences sur le traitement du mélanome. En effet, si B-Raf n’est pas utilisé pour l’activation de la voie des MAPK dans les mélanomes mutés N-Ras, les inhibiteurs de B-Raf en développement clinique seront inefficaces dans ces cancers. Nous avons par ailleurs démontré qu‘un inhibiteur des kinases B-Raf et C-Raf, en développement clinique (Sorafenib), induisait l’activation de ces kinases par hétérodimérisation en régulant leur phosphorylation. Ces résultats mettent en évidence de nouveaux mécanismes de régulation des proto-oncogènes B-Raf et C-Raf qui pourraient jouer un rôle important dans la résistance des mélanomes aux inhibiteurs de Raf qui sont actuellement en développement cliniqueMelanoma, the most aggressive skin tumor, has become a major public health problem in many countries. Diagnosed early, it can be treated by surgical excision, but the prognosis for advanced melanoma is very poor because the tumor is resistant to all therapies used today. In order to develop new therapies to treat this tumor, we study the signaling pathways that play a major role in the proliferation, survival and differentiation of melanocytes and melanoma. These are the MAPK, PI3K pathway and the cyclic AMP (cAMP). We first demonstrated that some phosphodiesterases (PDEs; physiological inhibitors of cAMP pathway) are overexpressed in melanoma lines and thus inhibit the differentiation of these cells. Overexpression of PDEs is necessary for melanocyte transformation by oncogenic Ras when the reactivation of the cAMP pathway in melanoma lines inhibits their proliferation. These data suggest a therapeutic strategy that would aim to stimulate the differentiation of melanoma by reactivating the cAMP pathway could help to inhibit their proliferation. We have also shown that the protein kinase B-Raf, which is frequently mutated in melanoma, however, was inactivated in melanomas containing a mutation of Ras. We demonstrated that this inhibition was due to a downregulation of B-Raf by Erk substrate. Indeed, Erk phosphorylates B-Raf on its amino-terminal to prevent its interaction with Ras. This negative regulatory mechanism of B-Raf melanoma is forcing these lines to use isoform C-Raf. This work has implications for the treatment of melanoma. Indeed, if B-Raf is not used for the activation of MAPK in N-Ras mutated melanoma, the B-Raf inhibitors in clinical development will be ineffective in these cancers. We also demonstrated that a kinase inhibitor of B-Raf and C-Raf, which is in clinical development (Sorafenib), induces the activation of these kinases by heterodimerization in regulating their phosphorylation. These results reveal new mechanisms of regulation of proto-oncogene B-Raf and C-Raf, which could play an important role in the resistance of melanoma to Raf inhibitors, which are currently in clinical development
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Scheid, Michael. "Phosphatidylinositol 3-OH kinase, an important element in survival signalling." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1999. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk1/tape7/PQDD_0024/NQ38976.pdf.
Full text
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Ma, Kewei. "Investigation of the phosphatidylinositol 3-kinase pathway in B cells." Thesis, University of British Columbia, 2009. http://hdl.handle.net/2429/3818.
Full textAbstract:
There is hardly a cellular process that is not regulated in some way by phosphoinositides, which makes biochemical and physiological studies of these lipids extremely important. PI 3-kinases are key regulators of phosphoinositide metabolism and have been shown to affect a large variety of cellular responses. The key products of PI 3-kinases that have functional activity in higher eukaryotic cells are PI(3,4,5)P₃ and PI(3,4)P₂. PI(3,4,5)P₃ is universally accepted as one of the most important second messengers in signal transduction. However, our knowledge of the functions of PI(3,4)P₂ as a lipid second messenger is much less precise. In this dissertation, work was undertaken to elucidate the regulation of PI(3,4,5)P₃ and PI(3,4)P₂ production and downstream signaling in B cells. Cells with membrane targeted exogenous SHIP were utilized to manipulate phosphoinositide levels. The relationship of PI(3,4,5)P₃ and PI(3,4)P₂ levels to downstream PKB phosphorylation and activation was studied. PI(3,4,5)P₃ and PI(3,4)P₂ levels were found to closely correlate with PKB phosphorylation levels at Thr308 and Ser473, respectively. In addition, PI(3,4)P₂ levels determine the PKB activity in the cytosol; while PI(3,4,5)P₃ levels determine PKB activity at the plasma membrane. Different doses and different forms of B cell receptor (BCR) agonists were used for stimulation. PI 3-kinase activation was studied carefully following stimulation with low doses of anti-BCR antibody and F(ab')₂ fragments. Low concentrations of F(ab')₂ fragments produced higher levels of PI(3,4,5)P₃ than did a high concentration of F(ab')₂ fragments. Downstream PKB signaling was studied in these models. Similar conclusions were drawn from both SHIP over-expressing BJAB cells and dose-dependent BCR stimulations. We speculated that phosphoinositides’ regulation of the kinetics of PKB phosphorylation at Ser473 and Thr308 might be mediated by additional proteins. Investigation of plasma membrane-associated PKB showed that it formed a protein complex of around 400KD, which we attempted to characterize further with respect to PKB phosphorylation and association with lipids. In conclusion, phosphoinositide production is intricately regulated in vivo to control downstream signaling. The levels of PI(3,4)P₂ and PI(3,4,5)P₃ have precise and profound effects on PKB and other molecules such as TAPP and Bam32. This study has contributed new insight into the PI 3-kinase signaling pathway from the aspect of phosphoinositide lipid function.
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Shore, Angharad Mair. "Study of nuclear targets of phosphatidylinositol-3 kinase in lymphocytes." Thesis, Cardiff University, 2006. http://orca.cf.ac.uk/54332/.
Full textAbstract:
Pathways regulated by Phosphotidylinositide-3-kinase (PI3K) have emerged as important mediators of cell proliferation and survival. When altered, several components of this pathway have been identified to contribute towards a wide range of human malignancies. PI3K has been implicated in the development of several EBV-associated malignancies of both lymphoid and epithelial origin. These include Burkitt's lymphoma, Hodgkin's disease and nasopharyngeal carcinoma. Although progress has been made in dissecting the pathways regulated by PI3K, the key components contributing to lymphocyte transformation have not been fully characterised. This study sought to investigate downstream targets of PI3K in lymphocytes in order to further our understanding of the contribution of PI3K signalling to lymphocyte proliferation and survival, particularly within the context of EBV-associated B-cell lymphomas. Initial work in this study revealed that a component of the mammalian ribosome, S6-ribosomal protein, is a major target for PI3K activation in transformed lymphocytes. In order to study PI3K and EBV regulated proteins on a larger scale, the technology of two-dimensional electrophoresis (2DE) was employed. The use of 2DE in combination with a PI3K inhibitor did not allow the identification of PI3K regulated proteins. However, three EBV regulated proteins were detected in the B-lymphocyte nucleus using this technology. The technology was further developed to study the post-translational modifications of DNA bound transcription factors. This detected multiple isoforms of the cAMP-response element binding protein (CREB), signal transducers and activators of transcription 1 (STAT1) and forkhead box O (FOXO) transcription factors in the nuclei of EBV immortalized lymphocytes. More detailed analysis of the PI3K regulated pro-apoptotic transcription factor, FOXOl, revealed that this protein is downregulated in EBV positive cells at both the transcriptional and translational levels. This downregulation was shown to directly correlate with the protein expression of a known target gene activated by FOXOl, Bcl-6, and to inversely correlate with protein levels of Cyclin D2, a target transcriptionally repressed by FOXOl. Further investigations into the mechanisms by which EBV downregulates FOXOl implicated a role for two EBV encoded proteins, Latent membrane protein-1 (LMP1) and LMP2A in the downregulation of both FOXOl, and its target gene, Bcl-6. In conclusion, this work has explored the use of antibody detection and proteomic techniques for the identification and analysis of nuclear proteins and transcription factors regulated by PI3K and EBV. Together, these investigations have deepened our understanding of the molecular changes that occur in lymphocytes in response to EBV infection, and how EBV may influence malignancy.
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Stamatkin, Christopher W. "PHOSPHATIDYLINOSITOL 3-KINASE (PI3K) AS A THERAPEUTIC TARGET IN NSCLC." UKnowledge, 2014. http://uknowledge.uky.edu/pharmacy_etds/58.
Full textAbstract:
Deregulated activation of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) pathway is central to many human malignancies. The functions of this pathway are critical for normal cell metabolism, proliferation, and survival. In lung cancers, the PI3K pathway activity is often aberrantly driven by multiple mutations, including EGFR, KRAS, and PIK3CA. Molecules targeting the PI3K pathway are intensely investigated as potential anti-cancer agents. Although inhibitors of the pathway are currently in clinical trials, rational and targeted use of these compounds, alone or in combination, requires an understanding of isoform-specific activity in context. We sought to identify class IA PI3K enzyme (p110a/PIK3CA, p110b/PIK3CB, p110d/PIK3CD) activities using isoform-specific inhibitors in a lung cancer model system. Treatment of non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines with PIK3CA, PIK3CB, PIK3CD or PIK3CB/D inhibitors resulted in pharmacokinetic and pharmacodynamic responses that frequently tracked with a specific mutation status. Activation of PIK3CA dictated response to the PIK3CA-specific inhibitor while deletion of PTEN phosphatase indicated response to the PIK3CB inhibitor. The PIK3CD isoform-specific inhibitors lacked efficacy in all NSCLC cell lines tested, however treatment at increased concentrations likely provide concurrent inhibition of both PIK3CB/D isoforms improving activity of either agent alone but did not track with a single biomarker. The observed pharmacodynamic and proliferation responses to isoform-specific inhibitors suggested that PI3K isoforms may functionally compensate for loss of another in certain genetic backgrounds. These studies demonstrate unanticipated cellular responses to PI3K isoform inhibition in NSCLC, suggesting that patient populations with specific mutations can benefit from certain isoform-selective inhibitors, or combinations, allowing for rational and targeted clinical use of these agents.
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Johnson, Erin Ellen. "Physiological Role of Vps34 Phosphatidylinositol 3-Kinase in Mammalian Cells." University of Toledo Health Science Campus / OhioLINK, 2005. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=mco1115925989.
Full text
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Hermelink, Antje. "Phosphatidylinositol 3-kinase [gamma] characterization of a protein-lipid interaction." Berlin dissertation.de, 2008. http://d-nb.info/994112912/04.
Full text
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Wagey-Radjawane, Theophilia Ravenska Elizabeth. "A role of protein kinase C (PKC) and phosphatidylinositol-3-kinase (PI 3-K) in motoneuron dysfunction." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 2001. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk3/ftp04/NQ61192.pdf.
Full text
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Chakravarti, Sumone. "The cloning and functional characterisation of murine phosphatidylinositol 3-kinase gamma." Title page, table of contents and abstract only, 2001. http://web4.library.adelaide.edu.au/theses/09PH/09phc4355.pdf.
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Yau, Tien Yin. "Novel strategies for antagonizing the phosphatidylinositol-3-kinase pathway in disease." Thesis, University of British Columbia, 2010. http://hdl.handle.net/2429/23966.
Full textAbstract:
The phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) signaling pathway is a critical regulator of cell physiology. This project aims to investigate several novel approaches to target the PI3K pathway. First, in order to determine the importance of PI3K regulators on normal cells, I investigated the effect of PTEN haploinsufficiency on glucose regulation in mice. Even a 50% reduction in PTEN expression was sufficient to increase phosphorylation of the downstream targets AKT and GSK3β.
Next, I wanted to see if PI3K pathway could treat idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP). Since the established ITP therapy (IVIg) is thought to signal through SH2-containing inositol 5’ phosphatase (SHIP), I tested the ability of a SHIP activator AQX-MN100 to reverse a murine model of ITP. In the classic model of ITP, AQX-MN100 was unable to rescue mice from antibody-mediated platelet destruction. However, prophylactic AQX-MN100 prevented the infection-mediated form of ITP.
I then studied the potential uses of AQX-016A/AQX-MN100 in the hematopoietic malignancies multiple myeloma (MM) and mantle cell lymphoma (MCL). AQX-016A/AQX-MN100 successfully induced apoptosis of the cancer cell lines in vitro in both a time and dose dependant manner.
I then investigated the potential of a small molecule ILK inhibitor to inhibit early prostatic dysplasia/hyperplasia in a murine model. Under the initial experimental parameters chosen, the ILK inhibitor was not able to inhibit dysplasia/hyperplasia. However, further studies are required to determine whether ILK inhibition may be an effective therapeutic strategy for treatment of prostate cancer.
Finally, I attempted to potentiate the effects of PI3K pathway inhibitors with borrelidin, an inhibitor of tRNA synthetase, which successfully exhibited synergy with the PI3K inhibitor LY294002, but only exhibited additive effects with the ILK inhibitor. The results of this project show the validity of targeting members of the PI3K pathway either in alone or in combination with a synergistic pathway.
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Laqtom, Nouf Nasser Mohammad. "Regulation and function of miR-199-3p in murine and human cytomegalovirus infections." Thesis, University of Edinburgh, 2013. http://hdl.handle.net/1842/8060.
Full textAbstract:
Human Cytomegalovirus (HCMV), the prototypic β-herpesvirus, is the most common cause of congenital infections as well as morbidity and mortality in immunocompromised patients. The anti-HCMV drugs currently available have a number of drawbacks (i.e. detrimental side-effects and/or the appearance of drug resistant strains), which limit their clinical usefulness. Therefore, a better understanding of host-virus interactions is important to develop new, safe and effective ways to treat HCMV. HCMV has evolved various strategies to make the host cell more conducive for the replication process, many of these involve modulation of host signalling pathways through proteins or non-coding RNAs. The focus of this thesis is on the regulation of one class of non-coding RNA, microRNAs (miRNA) by HCMV as well as murine CMV (MCMV). miRNAs are short ~22 nucleotide RNA sequences, which negatively regulate the stability and translational efficiency of specific target messenger RNAs (mRNAs). It has been previously shown that three host-encoded miRNAs, miR-199-3p, miR-199-5p and miR-214, are down-regulated in both MCMV and HCMV infected cells. Despite the biological and genomic differences between the two viruses, this down-regulation occurs in both infections, suggesting a possible conserved antiviral role of the miRNAs in mouse and human cells. Consistent with this, miR-199-3p and miR-214 manifest antiviral properties against MCMV and HCMV when over-expressed in vitro. This thesis investigates two hypotheses: 1) CMV down-regulates the expression of these host miRNAs through a mechanism involving viral factors, 2) The down-regulation of miR-199-3p leads to the up-regulation of its targets and this influences the cell in a way that favours some aspect of the viral life cycle. The first part of this project examined the regulation of miR-199-3p, miR-199-5p, and miR-214, which derive from a single primary transcript (pri-miRNA). The down-regulation of all three miRNAs was found to occur at the transcriptional level by 4 hours post infection. The promoter of the miR-199a/214 cluster was therefore cloned into a reporter vector in order to interrogate the factors regulating transcription of pri-miRNA in infection; this was carried out in the murine model based on availability of reagents. The reduction in the pri-miRNA was found to correlate with a decrease in the transcriptional activity of miR-199a/214 promoter in infected cells. Further analysis revealed the presence of a sequence between -421 to -273 relative to the transcription start site (TSS) that was critical for promoter activity. This sequence contains a putative serum response element (SRE), which includes two binding sites for the SRF dimer (serum response factor) and a binding site for a molecule of TCF (ternary complex factor), ELK-1. Initial knock-down studies suggest that these transcription factors are required for basal activity but it remains unknown whether they are involved in the differential expression of miR-199a/214 observed during infection. Another binding site for the transcription factor TWIST-1 was found outside this region, which is known to regulate the miR-199a/214 cluster in other cell types. Western blot analysis showed reduced expression of TWIST-1 in cells infected with HCMV and MCMV infections, by 24 and 48 hours, respectively, suggesting a role of TWIST-1 in regulating miR-199a/214 cluster during these infections. This regulation seems to be dependent on viral gene expression, as a replication deficient viral mutant fails to repress the promoter function and subsequent pri-miRNA production. Taken together, these results suggest an active viral mechanism for transcriptional repression of the miR-199a/214 promoter. To understand the antiviral function of miR-199-3p, the second part of this thesis examined whether miR-199-3p regulates host signalling pathways important for CMV replication and/or the life cycle. A microarray analysis was carried out with samples from cells transfected with miR- 199-3p mimic versus inhibitor. This revealed 198 genes significantly down-regulated by the miRNA. From the 198 genes, Ingenuity pathway analysis (IPA) software identified several host pathways with a potential role in HCMV infection including: PI3K/AKT signalling, the ERK-MAPK cascade, and prostaglandin production. This thesis examined the role of miR-199-3p in regulating the PI3K/AKT pathway in HCMV infection. It was found that miR-199-3p modulates the phosphorylation of the central regulator of PI3K/AKT signalling, AKT. Transfection of miR-199-3p before the infection impedes the complete phosphorylation of AKT, which is known to be required for the immediate early viral gene expression and replication. This provides an explanation for the antiviral function of miR-199-3p, through its ability to modulate AKT phosphorylation. An open question, however, is how the natural down-regulation of miR-199-3p from 24 to 72 hours post infection naturally affects AKT phosphorylation. Several predicted targets of miR-199-3p, such as PIK3CB, ITGA3, and ITGA6 were shown to be up-regulated at these late time points, correlating with the miR-199-3p down-regulation. The interaction of miR-199-3p with target sites in the 3′UTRs of PIK3CB and ITGA3 was validated by luciferase reporter assays and western blotting and qRT-PCR results indicated that protein and mRNA levels of ITGA6 were regulated by miR-199-3p mimic transfection. However, the knock-down of these three targets did not result in a significant decrease of the viral growth, and thus cannot alone explain the antiviral function of miR-199-3p. Overall, this study suggests that the transcriptional repression of miR- 199a/214 is likely a strategy employed by CMV to support its own growth through attenuating the biological effect of miR-199-3p within the host cell.
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Navé, Barbara Theresa. "The role of phosphatidylinositol 3-kinase in the stimulation of glucose transport." Thesis, University of Cambridge, 1997. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.627076.
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Saci, Abdelhafid. "Etude de la signalisation plaquettaire : implication de p120Cbl, phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-K) et Grb2." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05P605.
Full textAbstract:
Les plaquettes sanguines sont des cellules différenciées provenant de la fragmentation des mégacaryocytes. Annucléées et donc incapables de proliférer, les plaquettes réagissent aux signaux activateurs par des réponses du type adhésion, agrégation et une activité procoagulante. Les réponses plaquettaires diffèrent selon l'agoniste et la voie de transduction du signal activée. L'action d'un agoniste sur les plaquettes transmet un signal, dit inside-out, activateur de l'intégrine αIIb-β3. En conséquence, αIIb-β3 activée fixe le fibrinogène et permet la transmission d'un signal activateur secondaire, dit outside-in. La première partie de ces travaux a consisté en l'étude de l'implication de la protéine adaptatrice Cbl et de la lipide kinase, PI 3-K, dans les voies de signalisation médiées par (i) le récepteur du domaine Fc des IgG (FcγRIIa), (ii) l'intégrine αIIb-β3 (outside-in) et le récepteur de la thrombine. Nous avons montré que Cbl est fortement phosphorylée sur tyrosine au cours de l'activation de la voie de (FcγRIIa), alors qu'elle ne l'est que faiblement à la thrombine. .Blood platelets are anucleated and terminaly differenciated cells. A number of receptors are present on platelet membrane and mediate signalling and activation in response to various agonists. The action of an agonist triggers an inside-out signalling which activates αIIb-β3 integrin. The latter becomes able to link fibrinogen and transduces a secondary outside-in signalling. We first studied the involvement of the adoptor protein, Cbl, and of the lipid kinase, PI 3-K, in platelet signalling mediated by (i) the receptor for Fc domain of IgG (FcγRIIa), (ii) by the αIIb-β3 integrin (outside-in) and (iii) by the thrombin receptor. .
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Piessen, Guillaume. "Rôles des mucines MUC1 et MUC4 dans l'adénocarcinome de l'oesophage : études in vitro, ex vivo et dans un modèle animal de carcinogenèse induite." Lille 2, 2007. http://www.theses.fr/2007LIL2S048.
Full textAbstract:
Le reflux gastro-oesophagien et les acides biliaires ont été incriminés dans la pathogénie de l'oesophage de Barrett, lésion précancéreuse s'accompagnant d'un processus de métaplasie intestinale avec augmentation du nombre de cellules caliciformes, et dans sa dégénérescence en adénocarcinome. Au cours de cette séquence carcinogénétique, a été observée, à partir de tissus humains, une augmentation de l'expression des mucines MUC1 et MUC4. MUC1 et MUC4 sont des O-glycoprotéines membranaires impliquées dans les phénomènes de reconnaissance cellulaire et de signalisation intracellulaire. Dans notre laboratoire, des travaux précédents sur la régulation de l'expression des MUC4 dans la lignée cellulaire d'adénocarcinome de l'oesophage OE33, ont montré que les acides taurocholique (TC), taurodésoxycholique (TDC), aurochénodésoxycholique (TCDC), et glycocholique (GC), ainsi que le glycocholate de sodium (GNa) pouvaient réguler l'expression de MUC4 au niveau transcriptionnel essentiellement via la voie de la phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K). Nous avons entrepris, au cours de ce travail, (i) d'identifier les facteurs de transcription impliqués dans la régulation de MUC4 par les acides biliaires, (ii) d'étudier la régulation de l'expression de MUC1 par les acides biliaires in vitro et ex vivo dans un modèle d'explants, (iii) d'analyser l'intérêt diagnostique et pronostique de l'étude en immunohistochimie de l'expression de MUC1 et MUC4 au cours de la séquence carcinogénétique dans une cohorte de 52 patients et (iv) de mettre au point un modèle animal de carcinogenèse induite chez le rat afin de pouvoir étudier le rôle des mucines in vivo. Nous montrons ainsi que parmi les facteurs de transcription testés, l'Hepatocyte Nuclear Factor-1a (HNF-1a) joue un rôle majeur dans la régulation du promoteur distal de MUC4 par les acides biliaires TDC et TCDC. Dans le modèle cellulaire OE33 et dans un modèle ex vivo d'explants, les acides biliaires TC, TDC, TCDC, GC et GNa, ainsi que l'acide désoxycholique (DC) constituent de puissants activateurs de l'expression de MUC1. Des expériences de transfections cellulaires transitoires, de siRNA (small interfering RNA) et utilisant des inhibiteurs pharmacologiques des voies PI3K, MAPK, PKC et PKA ont permis de montrer que cette régulation était promoteur-dépendante et passait par la voie PI3K. Dans les tissus humains, MUC4 est surexprimé au stade de dysplasie et pourrait constituer un marqueur diagnostique précoce de dégénérescence en adénocarcinome. En revanche, aucun intérêt pronostique n'a pu être mise en évidence pour MUC1 et MUC4. Le modèle animal de carcinogenèse induite chez le rat comportant une anastomose oeso-duodénale associé à la prise de fer en tant que co-carcinogène a pu être établi et a permis de reproduire la totalité de la séquence carcinogénétique. Les résultats préliminaires montrent que le reflux est constitué de façon prépondérante par les acides biliaires TC et TCDC, et que les mucines Muc1 et Muc4 sont surexprimés dans la zone d'exposition au reflux, suggérant leur implication dans le processus de carcinogenèse. Ces nouveaux mécanismes de régulation de l'expression des gènes de mucines MUC1 et MUC4 ainsi que les résultats préliminaires de la modélisation animale mettent en avant le rôle clé des acides biliaires dans les étapes précoces de la carcinogenèse oesophagienne. A terme, ces gènes de mucines pourraient constituer de nouveaux marqueurs biologiques permettant d'affiner les modalités de prise en charge diagnostique et thérapeutique de l'adénocarcinome de l'oesophage et ainsi d'en améliorer le pronostic
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Keßler, Astrid Sabine. "Mutationsanalyse der Phosphatidylinositol-3-Kinase-Region des Ataxia-Telangiektatika-Gens beim sporadischen Mammakarzinom /." Inhaltsverzeichnis, 2005. http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&doc_number=014185140&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA.
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Pham, Fong Hoa. "Regulation of the phosphatidylinositol 3'-kinase pathway on cardiac myocyte hypertrophy and apoptosis." Thesis, Imperial College London, 2001. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.270587.
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Curnock, Adam Peter. "The role of phosphatidylinositol 3-kinase in human B cell growth and survival." Thesis, University of Oxford, 1999. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.301792.
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Padmore, Lauren. "The role of phosphatidylinositol-3-kinase in B cell proliferation, survival and apoptosis." Thesis, University of Oxford, 1996. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.318874.
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Street, Andrew A. "Activation of phosphatidylinositol 3-kinase signalling by the hepatitis C virus NS5A protein." Thesis, University of Leeds, 2005. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.417733.
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