Academic literature on the topic 'Physiopathologie virale'

Le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (severe acute respiratory syndrome-related coronavirus, SARS-CoV-2), de la famille Coronaviridae, est responsable de la maladie à coronavirus de 2019 (coronavirus disease 2019, COVID-19). Malgré la disponibilité de vaccins, en cause dans la fin de l’urgence sanitaire de la COVID-19, la circulation virale du SARS-CoV-2 subsiste ainsi que les recherches sur la compréhension de sa physiopathologie, notamment l’implication et le rôle des microARN (miARN) dans cette infection virale. Les miARN sont des petits ARN non codants régulant l’expression des gènes et connus pour leurs implications dans de nombreuses voies de régulation cellulaire. Récemment, ils se sont révélés l’être également dans l’infection par le SARS-CoV-2. Ces recherches permettraient une meilleure connaissance dans ce domaine et pourraient s’avérer utiles dans le développement de nouveaux diagnostics et de traitements cliniques contre cette infection virale ou d’autres infections de la même famille virale. Ainsi, dans ce projet de recherche, nous avons d’abord caractérisé les miARN cellulaires biomarqueurs de l’infection virale par le SARS-CoV-2 à partir de prélèvements nasopharyngés de patients, qui est le prélèvement recommandé pour le diagnostic de cette infection virale. Nos travaux ont identifié en particulier, des miARN associés à des formes sévères de la COVID-19. Ces derniers ciblent des gènes impliqués dans les infections virales et les réponses antivirales et anti-inflammatoires aux infections virales. Ces potentiels effets antiviraux et anti-inflammatoires des miARN sur l’infection virale par le SARS-CoV-2 n’ont pas pu être démontrés in vitro lors de cette étude. Par la suite, on s’est penché sur l’hypothèse de la dérégulation de la biogénèse des miARN par cette infection virale. On a trouvé aucune sous-expression des ARNm des gènes impliqués de la voie de biogénèse des miARN lors de l’infection par le SARS-CoV-2, que ce soit en ex vivo ou en in vitro. Pour finir, nous avons voulu développer un possible traitement clinique contre l’infection virale par le SARS-CoV-2 ou tout autre pathologie par la délivrance de miARN d’intérêt. Il s’agirait de développer des nanoparticules et des nanomatériaux couplés à des miARN ou autres ARN doubles brins messagers ou non, afin de permettre l’entrée de ces derniers au sein des cellules et rétablir ainsi l’expression basale des gènes impliqués dans l’infection virale<br>Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2 (SARS-CoV-2), a member of the Coronaviridae family, is responsible for coronavirus disease 2019 (COVID-19). Despite the availability of vaccines that helped end the COVID-19 health emergency, the viral circulation of SARS-CoV-2 remains, as well as research on the understanding of its pathophysiology, in particular the involvement and role of microRNAs (miRNAs) in this viral infection. miRNAs are small non-coding RNAs that regulate gene expression and are known to be involved in numerous cellular regulatory pathways. Recently, they have also been shown to be involved in SARS-CoV-2 infection. Such research would provide a better knowledge in this field and could be useful in the development of new diagnoses and clinical treatments against viral infection with SARS-CoV-2 or other infections of the same viral family. Thus, in this research project, we first characterized the cellular miRNA biomarkers of SARS-CoV-2 viral infection from patient nasopharyngeal swabs, which is the first diagnostic tool for this viral infection. In particular, our work has identified miRNAs associated with severe forms of COVID-19. These miRNA target genes involved in viral infections and antiviral and anti-inflammatory responses to viral infections. These potential antiviral and anti-inflammatory effects of miRNAs on SARS-CoV-2 viral infection could not be demonstrated in vitro in this study. Then, the hypothesis of deregulation of miRNA biogenesis by this viral infection was investigated. No under-expression of mRNAs of genes involved in the miRNA biogenesis pathway was found upon infection with SARS-CoV-2, either ex vivo or in vitro. Finally, based on a miRNA of clinical interest, we wanted to develop a possible clinical treatment against viral infection by SARS-CoV-2 or any other pathology through the delivery of miRNAs of interest, in this case antiviral. This would involve developing nanoparticles and nanomaterials coupled to miRNAs or other double-stranded messenger or non-messenger RNAs, to enable the latter to enter cells and thus restore basal expression of the genes involved in viral infection

L'infection de macaques par des lentivirus simiens sivmac reproduit la clinique et la biologie de l'infection humaine par le VIH. La disponibilité de virus attenues, suite à une délétion dans NEF, permet une analyse comparative de la charge virale et de la réponse immune à l'infection dans ces deux types d'infection par sivmac. L'infection par le VIH/SIV s'accompagne d'une atteinte profonde du système immunitaire. Les cytokines sont au centre de la régulation des fonctions immunitaires et de l'expression virale. Deux groupes de macaques ont été inocules par le virus pathogène SIVMAC251 ou le virus attenue SIVMACNEF. L'expression de gènes codant les cytokines a été évaluée dans le sang et dans les ganglions durant la primo-infection des 2 groupes d'animaux. Les animaux infectés par le virus pathogène ont développé une charge virale systémique plus élevée d'environ 2 logs, et une séroconversion en moyenne plus tardive que les singes infectes par le virus attenue. Une augmentation de l'expression des gènes codant l'IFN OU L'IL-13 est mise en évidence dans le sang et les ganglions des deux groupes d'animaux durant le premier mois P. I. . Une induction du gène codant l'IL-2 n'est mesurée que dans les CMSP et les CMGLP des animaux infectés par le virus attenue. En effet, les niveaux des ARNM codant l'IL-2 restent indétectables ou faiblement détectables dans le sang et les ganglions des animaux infectés par le virus pathogène. En revanche, alors que le niveau d'expression du gène codant l'IL-4 reste indétectable chez les animaux infectes par le virus attenue, une surexpression de ce gène est mesurée dans les ganglions des animaux infectes par le virus pathogène. Ces résultats montrent que la primo-infection par un virus pathogène ou un virus attenue s'accompagne de profils cytokiniques différents, qui ne correspondent ni à une réponse de type 1 ni de type 2. La production d'IL-4 durant la primo-infection par le virus pathogène pourrait favoriser la réplication virale, comme le suggère la réplication préférentielle du VIH dans les clones TH2 produisant de l'IL-4. Par ailleurs, la production d'IL-2 restreinte aux macaques infectés par le virus delete dans NEF, suggère que nef puisse interagir avec la voie de transcription de l'IL-2 in vivo, comme cela a été démontré in vitro.

Etude des determinants antigeniques de l'hemagglutinine (h), de la nucleoproteine (np) et de la proteine fusion (f) du virus de la rougeole. Le potentiel immunogene de ces differentes proteines virales a ete estime. Il apparait que les proteines h et f procurent une protection des souris contre une encephalite rougeoleuse. Toutefois l'efficacite de la protection depend du systeme d'histocompatibilite des animaux. De plus, il semble necessaire d'etudier les epitopes impliques soit dans une immunite humorale (epitope b), soit dans une immunite cellulaire (epitope t) afin de pouvoir realiser des vaccins susceptibles de procurer une immunite efficace

La proteine tat du virus vih-1 est un trans-activateur puissant permettant la surexpression de tous les genes viraux, par l'intermediaire de sa cible arn, tar, situee dans le ltr 3' du virus. L'objectif premier de ce travail a ete de purifier la proteine tat sous forme native correctement repliee afin de tester son activite biologique. Differents systemes d'expression et schemas de purification ont ete etudies, dans lesquels l'usage d'agents denaturants a ete proscrit, car la renaturation d'une telle proteine genere le plus souvent un melange en partie inactif. Le gene tat a ete clone et exprime chez e. Coli, seul ou en fusion avec les genes de la glutathione s-transferase (gst) ou de la beta-galactosidase. Seule la fraction de proteine tat soluble, non agregee est utilisee dans les procedures de purification. Par rapport a tat, les niveaux d'expression et de solubilite de la fusion gst-tat sont significativement ameliores (7-8% des proteines totales, dont 80% solubles). Toutefois, l'utilisation de la beta-galactosidase en tant qu'etiquette de purification par affinite s'est averee plus efficace et specifique que la gst. La mise au point de la chromatographie d'immunoaffinite a finalement permis d'isoler tat, non fusionnee ou issue du clivage de la fusion beta-gal-tat par la thrombine, a plus de 90% de purete. Les differents echantillons de tat ont ete testees in vitro pour determiner leur capacite, d'une part a interagir avec tar, et d'autre part a trans-activer l'expression du gene rapporteur cat dans des cellules hela en culture. Les differentes voies de production de tat ne sont pas strictement equivalentes en terme d'activite biologique. Toutes les formes presentent une certaine activite trans-activatrice mais les resultats les plus coherents entre les deux tests sont obtenus avec la proteine non fusionnee. Ceci indique que le repliement de tat, implique dans son activite biologique, est probablement modifie par son partenaire de fusion. Des etudes preliminaires montrent par ailleurs que la proteine tat purifiee exogene est capable d'activer des cellules endotheliales, en provoquant leur adhesion a une lignee de macrophages en synergie avec le tnf-alpha. Tat pourrait ainsi jouer un role indirect dans l'inflammation et eventuellement dans la dissemination des tumeurs, associees a l'infection par le virus

Des lymphocytes T activés infiltrent en permanence le SNC (Système Nerveux Central) mais sont rapidement éliminés par apoptose. La persistance de lymphocytes T activés dans le SNC pourrait être impliquées dans le développement de maladies inflammatoires du SNC, telles que la SEP (Sclérose En Plaques) et la TSP/HAM (myélopathie associée au virus HTLV-I), caractérisées par une infiltration du SNC par des lymphocytes T activés, une destruction de la myéline et une perte anoxale. Les lymphocytes T activés sont suspectés induire la mort des oligodendrocytes et des précurseurs d'oligodendrocytes impliqués dans la remyélinisation du SNC. Un des mécanisme suspectés est un effet "bystander" non MHC-restreint, via la libération de facteurs toxiques (FasL, TNF", NO. . . ) par les lymphocytes T activés. L'implication du récepteur de mort, Fas, et son ligand, FasL, est suspectée. Mais les mécanismes d'activation de Fas et les voies de signalisation mises en jeu ne sont par encore élucidés. Notre but a été de mettre en évidence que des lymphocytes T activés peuvent induire la mort de précurseurs du SNC par l'activation de Fas, et d'analyser les voies de signalisation mises en jeu. Nous avons établi un modèle d'inflammation du SNC mimant les interactions entre des lymphocytes T activés, soit par PMA-ionomycine, soit par une infection virale, et des cellules du SNC. Seuls, des lymphocytes T activés par une infection virale peuvent induire la mort de précurseurs du SNC. Cette mort par apoptose implique l'activation de Fas, mais est indépendante de FasL. Elle est caspasesdépendante et met en jeu la mitochondrie. D'autre part, les lymphocytes T activés par une infection virale sont responsables de l'acquisition de la susceptibilité à la mort, en induisant l'exposition de Fas à la surface des précurseurs du SNC. Cette susceptibilité à la mort est régulée par les métalloprotéases et leurs inhibiteurs endogènes. Ces résultats supportent l'hypothèse que la mort de précurseurs d'oligodendrocytes, induite par des lymphocytes T activés infiltrant le SNC de patients développant la SEP ou la TSP/HAM, pourrait contribuer à la démyélinisation et à l'incapacité de remyélinisation observée chez les patients.

Le virus Lassa entraine une fièvre hémorragique endémique en Afrique de l’Ouest et représente un problème de santé publique. Les connaissances sur la pathogénèse et les réponses immunitaires associées à la maladie sont partielles. Nous avons suivi les paramètres pathologiques, virologiques et immunologiques associés aux infections létales et non létales du LASV chez le singe cynomolgus. Le tableau clinique a été caractérisé par une dépression, une anorexie, une perte de poids et une asthénie chez les animaux survivants, tandis que ces mêmes symptômes ont été accompagnés de fièvre, de difficultés respiratoires et d’épistaxis chez les animaux infectés par une dose létale. Seuls ces derniers ont montré une perturbation des paramètres de coagulation, une rhabdomyolyse et une hausse des marqueurs de lésions rénales. Nous avons observé un tropisme radicalement différent en fonction de la sévérité de la maladie, avec une dissémination virale dans les organes plus importante et plus rapide chez les animaux décédés, la présence de particules infectieuses plus nombreuses et des modifications anatomopathologiques plus sévères. Une réponse immunitaire innée et adaptative précoce et puissante a été associée avec le contrôle de l’infection et la survie tandis que les infections fatales ont été caractérisées par une réponse inflammatoire ressemblant au choc septique, une défaillance de la réponse immunitaire ainsi qu’une réplication virale incontrôlée. Cette étude permet d’améliorer nos connaissances de la pathogénèse de la fièvre de Lassa et d’apporter des marqueurs d’infection prédictifs de la maladie<br>Lassa virus causes a hemorrhagic fever endemic in West Africa and represents a threat for civilians. The pathogenesis and the immune responses associated with the disease are poorly understood. We followed pathological, virological and immunological parameters associated with fatal and non-fatal Lassa virus infection in the cynomolgus monkey. The clinical picture was characterized by depression, anorexia, weight loss and asthenia in survivors whereas the same symptoms were supported by fever, respiratory difficulties and epistaxis in animals infected with the lethal dose. Only fatalities have shown coagulation parameters dysfunction, rhabdomyolysis and an increase of renal function markers. We observed a different viral tropism in a function of the disease severity, with viral dissemination in organs that was more important and faster in fatalities, the appearance of numerous infectious particles number and more severe pathologic changes. Early and robust innate and adaptive immune response has been associated with the control of infection and recovery whereas fatal infections were characterized by a sepsis like inflammatory response, defective immune response as well as uncontrolled viral replication. This study sheds light on the pathogenesis of Lassa fever and reveals infection markers predictive of the disease outcome

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est parmi les principales causes de mortalité dans le monde et les traitements disponibles sont insuffisants. Ceci est dû à la connaissance limitée de la complexité biologique et du microenvironnement hépatiques en situation normale et pathologique. Pour répondre à ces besoins, nous avons développé un protocole de séquençage d’ARN sur cellule unique (scRNA-seq) à partir de tissus primaires de foie humain. Nous avons assemblé un atlas de cellules du foie humain et comparé le profil scRNA-seq du foie normal au profil du CHC. L’atlas a révélé l’hétérogénéité au sein des principales populations de cellules hépatiques, la zonation transcriptomique des cellules endothéliales et l'existence de progéniteurs épithéliaux dans le foie adulte capable de se différencier à la fois en cholangiocytes et en hépatocytes. L'analyse par scRNA-seq du CHC a dévoilé l'hétérogénéité marquée de cette tumeur, les modifications de son microenvironnement cellule par cellule et les interactions entre les cellules tumorales et le virus de l’hépatite B en découvrant des voies et des facteurs moteurs de la cancérogenèse hépatique jusque-là inconnus<br>Hepatocellular carcinoma (HCC) is a leading cause of death worldwide and the current treatments are unsatisfactory. One reason is the limited knowledge on the complexity and microenvironment of healthy and diseased liver. To address this gap, we have developed a single cell RNA sequencing (scRNA-seq) pipeline for primary human liver tissues. We have assembled an atlas of human liver cells and compared the scRNA-seq profile of normal liver and HCC. The atlas revealed an unknown heterogeneity within the main populations of liver cells, the transcriptomic zonation of endothelial cells and the existence of an epithelial progenitor in the adult liver capable of differentiating into both cholangiocytes and hepatocytes. ScRNA-seq analysis uncovered the marked cell heterogeneity of HCC, its microenvironment changes at single-cell level and the interactions between tumor cells and hepatitis B virus discovering previously unknown pathways and drivers of hepatocarcinogenesis

Les @entérovirus (Picornaviridae) sont des agents infectieux communs divisés en 5 espèces (Poliovirus et Entérovirus humains A à D) qui regroupent actuellement 89 sérotypes. Ces virus à ARN positif simple brin, sont responsables de syndromes infectieux variés incluant des infections des voies respiratoires hautes ou basses chez l'adulte ou l’enfant. Actuellement l’importance épidémiologique, les caractéristiques cliniques ainsi que les mécanismes physiopathologiques des infections respiratoires par les entérovirus restent à préciser. La première partie de notre travail a eu pour objectif d’évaluer le rôle étiologique potentiel des picornavirus à tropisme respiratoire chez 192 enfants âgés de moins de 36 mois et hospitalisés pour bronchiolite. Un agent viral a été identifié chez 138 (72. 5%) des 192 enfants étudiés. Les virus les plus fréquemment détectés étaient respectivement le Virus Respiratoire Syncytial (VRS) (30%), les Rhinovirus (RVH) (21%), les entérovirus (EV) (9%), et les Métapneumovirus humains (MPVh) (4%). Les RVH et les EV sont apparus comme étant la seule cause de l'infection virale de l’arbre respiratoire dans 57 (30%) des 192 jeunes enfants, tandis qu’une co-infection avec du RVH ou du EV a été détectée dans 25 (13%) des 192 jeunes enfants (30 vs. 13%, P&lt;10-3). Ces données suggèrent que les picornavirus (RVH et EV) à tropisme respiratoire seraient l'une des principales causes virales de bronchiolite en France. Dans une seconde étude, nous avons analysé 252 cas d’infections pédiatriques à EV diagnostiqués chez 11509 enfants. Les souches d’EV ont été isolées dans des échantillons naso-pharyngés grâce à la culture virale, et identifiées par séroneutralisation. Les syndromes respiratoires (79 (31%) des 252 infections à EV) associés à une infection par un EV sont apparus comme étant la deuxième plus fréquente pathologie pédiatrique après la méningite (111 (44%) des 252 cas) (44 vs 31%, p &lt;10-3). Les EVs ont contribué aux infections respiratoires bases dans 54 % des 79 cas d’infection à EV. La bronchiolite a été la pathologie la plus souvent diagnostiquée dans les infections respiratoires à EV (34 (43%) des 79 cas, p &lt;10-3), survenant le plus souvent chez les enfants âgés de 1-12 mois (P = 0. 0002). Les echovirus 11, 6 et 13 ont été les souches les plus fréquemment identifiées dans les infections respiratoires (24, 13 et 11%, respectivement). L’analyse phylogénétique du gène codant pour la protéine de capside VP1 a révélé la circulation concomitante ou successive de souches distinctes EV à tropisme respiratoire au cours du même mois ou de la période épidémique. Ces résultats indiquent que les infections des voies respiratoires représentent 30% des cas des infections pédiatriques à entérovirus. De plus, la circulation concomitante ou successives de souches génétiquement distinctes d’EV indique la possibilité d’infections respiratoires répétées au sein de la même saison épidémique, et suggère la possibilité de mécanismes de recombinaison génétique entre des souches d’EV d’espèces A ou B. Afin d’identifier les mécanismes qui peuvent réguler le développement de l’inflammation des muqueuses respiratoires au cours de l’infection des voies aériennes basses par les EVs, nous avons étudié les profils et les niveaux de production de « CC et CXC chimiokines » de cellules épithéliales pulmonaires humaines primaires (SAEC), infectées par deux souches sauvages d’EV à tropisme respiratoire. L’exposition des SAEC à l'interféron gamma (INF-γ) et aux virus sauvages de type Coxsackie B5 ou ECHO 30 induit une augmentation significative de la production de RANTES qui est synergique par rapport celle obtenue par l’infection virale ou par l’INF-γ seul. Nous avons observé que l'infection réplicative des entérovirus dans les SAEC induisait une augmentation dose et temps-dépendante des ARNm, et des protéines RANTES, MCP-1 et l'IL-8. La sécrétion de ces chimiokines est significativement augmenté à 48 ou 72 heures suivant l’infection dans les cultures traitées par de faibles doses d’INF-γ, et ceci comparativement aux cellules non infectées (P &lt;0,001). Les chimiokines produites par les SAEC en réponse à l’infection virale ont montrés une forte activité chimiotactique pour les éosinophiles humains du sang périphérique. En outre, nous avons observé une infection productive par les entérovirus à tropisme respiratoire dans les éosinophiles. Ceux-ci ont spécifiquement sécrété des niveaux significatifs de RANTES et MCP-1,et ceci 24 heures après l'infection. Par conséquent, le processus inflammatoire induit par les entérovirus semble être déclenché par l'infection de cellules épithéliales, et amplifié par des mécanismes déclenchés par l’INF-γ ainsi que par la sécrétion de chimiokines par les éosinophiles recrutés dans la lumière bronchique. En conclusion, nos travaux indiquent que les EVs sont une cause fréquente d'infection des voies respiratoires chez les enfants, et qu’ils sont capables d’induire au cours de l’infection des cellules de l'épithélium bronchique, une sécrétion spécifique de chimiokines de type RANTES, MCP-1 et IL-8. Ces résultats suggèrent l’importance du rôle des entérovirus dans le développement de pathologies respiratoires chez les enfants immunocompétents<br>Enteroviruses (EV) (Picornaviridae) are among the most common viruses infecting human beings worldwide. These viral agents are associated with a wide range of human pathologies, including upper respiratory but also lower respiratory tract infections resulting in bronchitis, pneumonia or bronchiolitis in adults or in infants. In the first study, we assessed the potential role of the respiratory picornaviruses as causative agents of bronchiolitis in 192 infants ≤36 months of age and hospitalized for acute bronchiolitis. The detection of common respiratory viruses (respiratory syncytial virus, influenza virus A and B, parainfluenza virus I, II, III, and adenovirus) was performed using classical immunofluorescence antigens and cell culture detection assays in nasopharyngeal aspirates whereas the detection of human metapneumovirus (HMPV) rhinoviruses and enteroviruses was performed by molecular techniques. A potential causative virus was detected in 72. 5 % of the 192 study infants. RSV (30%), rhinovirus (21%), enterovirus (9%), influenza virus A (6%) and human metapneumovirus (4%) were the most frequent causative agents detected. Rhinoviruses or enteroviruses were detected as the only evidence of respiratory viral tract infection in 57 (30%) of 192 infants, whereas rhinovirus or enterovirus occurred in mixed viral infection detected in 25 (13%) of 192 study cases (30 vs. 13%, p&lt;10-3). Our data suggest that respiratory picornaviruses are one of the leading etiological causes of bronchiolitis in French infants. In the second part our investigations, we analysed 252 EV-related infection cases (median age, 5. 1 years) diagnosed among 11,509 consecutive children visiting emergency departments within a 7-year period in the North of France. EV strains were isolated from nasopharyngeal samples by viral cell culture, identified by seroneutralization assay and genetically compared by partial amplification and sequencing of the VP1 gene. The respiratory syndromes (79 (31%) of 252 EV infections) appeared as the second more frequent EV induced pediatric pathologies after meningitis (111 (44%) of 252 cases) (44 vs. 31%, P&lt;10-3), contributing to lower respiratory tract infection (LRTI) in 43 (54%) of 79 EV respiratory infection cases. Bronchiolitis was the most frequent EV induced LRTI (34 (43%) of 79 cases, P&lt;10-3) occurring more often in infants aged 1-12 months (P=0. 0002) with spring-fall seasonality. Viruses ECHO 11, 6 and 13 were the more frequently identified respiratory strains (24, 13 and 11%, respectively). The VP1 gene phylogenetic analysis showed the concomitant or successive circulation of genetically distinct EV respiratory strains (species A or B) during the same month or annual epidemic period. Our findings indicated that respiratory tract infections accounted for appreciatively 30% of EV-induced paediatric pathologies, contributing to LRTIs in 54% of these cases. Moreover, the concomitant or successive circulation of genetically distinct EV strains indicated the possibility of paediatric repeated respiratory infections within the same epidemic season. To identify the mechanisms that can regulate the development of airway mucosa inflammation during EV respiratory lower tract infection, we investigated the production of chemokines by EV-infected bronchial epithelial cells. Cultures of primary human small airway epithelial cell (SAEC) were infected by wild-type respiratory EV strains, demonstrating a replicative and productive infection by Coxsackievirus B5 and Echovirus 30 strains. Exposure of SAEC to gamma interferon (INF-γ), in combination with Coxsackievirus B5 and Echovirus 30 infection, induced a significant increase in RANTES production that was synergistic with respect to that obtained by EV-infection or INF-γ treatment alone. We observed that the replicative infection of the SAEC by Coxsackievirus B5 and Echovirus 30 wild-type viruses induced dose and time-dependent increases in mRNA and protein secretion for RANTES, MCP-1 and IL-8. The protein secretion of these chemokines appeared to be significantly increased at 48 or 72 hours post-infection in cultures treated by low-doses of INF-γ comparatively to mock-infected cells (P&lt;0. 001), and was correlated to the viral replication activity. SAEC-derived chemokines exhibited a strong chemotactic activity for normal human blood eosinophils. Furthermore, we observed an EV productive infection in eosinophils, which specifically released significant levels of RANTES and MCP-1, 24 hours post-infection. Therefore, the inflammatory process in EV-induced bronchiolitis appears to be triggered by the infection of epithelial cells and further amplified via mechanisms driven by INF-γ and by the secretion of eosinophil chemokines. Altogether, our findings suggest that EVs are a common cause of respiratory tract infections in paediatric patients, where they can induce the release of chemokines by bronchial epithelial cells, which may significantly contribute to the various histologic and inflammatory features of EV-induced airway disease

La réponse immune lors d'une infection par le VHB est essentielle pour éliminer le virus. Le virus module le système immunitaire pour échapper à son contrôle. Le mécanisme par lequel le virus module l'immunité est encore mal connu. Les cellules dendritiques plasmocytoides (pDC) jouent un rôle crucial dans l'immunité antivirale de part leur capacité à capturer et apprêter les antigènes viraux afin d'induire une réponse immune adaptative. Les pDCs représentent un bon potentiel pour restaurer une immunité anti-VHB fonctionnelle, mais le VHB pourrait moduler les pDCs pour échapper au contrôle immunitaire. Dans une première partie, nous avons évalué le potentiel des pDCs à restaurer l'immunité anti-VHB en contexte d'hépatite B chronique. Nous avons utilisé une lignée de pDCs HLA-A*0201+ chargée avec des peptides HLA-A*0201 restreints dérivés des antigènes HBc et HBs du virus afin d'amplifier des lymphocytes T spécifiques ex vivo à partir de cellules de patients atteints d'hépatite B chronique. Nous avons ensuite établi un modèle de souris humanisées (Hepato-HuPBL) afin d'évaluer le potentiel thérapeutique de la stratégie in vivo. La stimulation de PBMC ou de lymphocytes infiltrant le foie (LIL) issus de patients HLA-A*0201+ par la lignée de pDC chargée avec le peptide HBc a permis d'amplifier des lymphocytes T spécifiques de HBc et fonctionnels dans 45,8% des cas. Le groupe de non répondeurs était caractérisé par la présence d'Ag HBe ou un plus fort niveau de lymphocytes T régulateurs. L'efficacité thérapeutique du vaccin de pDC a été évaluée dans un modèle de souris NOD-SCID β2m-/- reconstituées avec des PBMC issus de patient VHB et xenotransplantées avec des hépatocytes humains transfectés avec le VHB. La vaccination de ces souris avec la lignée de pDC chargée avec les peptides HBc et HBs a permis l'amplification de lymphocytes T CD8 spécifiques du VHB capables de lyser spécifiquement les hépatocytes infectés in vivo. Ainsi, la lignée de pDC chargée avec des peptides dérivés du VHB est capable d'amplifier des lymphocytes T CD8 spécifiques du VHB et fonctionnels in vitro et in vivo. Cette nouvelle stratégie d'immunothérapie pourrait donc restaurer une immunité antivirale et permettre l'élimination du virus chez les patients atteints d'hépatite B chronique. Dans une deuxième partie, nous avons évalué le rôle physiopathologique des pDCs au cours de l'infection chronique par le VHB et les conséquences fonctionnelles sur le cross-talk pDC/NK. Des défauts fonctionnels des pDCs et des cellules NK ont été observé chez les patients atteints d'hépatite B chronique. Cependant le cross-talk pDC/NK ainsi que les mécanismes en jeu n'ont pas encore été élucidé. Nous avons étudié le phénotype et la capacité de répondre à une stimulation TLR-L des pDCs de patients comparé aux pDCs de donneurs sains puis nous avons étudié les conséquences sur le cross-talk entre pDCs de patients (virémiques ou avirémiques) et cellules NK hétérologues. Les pDCs de patients montrent un phénotype plus activé que les pDCs de donneurs sains mais ne sont pas capables de répondre à une stimulation TLR9-L. De plus, les pDCs de patients virémiques ne sont pas capables d'activer les fonctions cytotoxiques des cellules NK. Cette perturbation du cross-talk pDC/NK semble liée à un défaut de production d'IFNα et d'expression d'OX40L par les pDCs de patients virémiques, ainsi qu'à la présence d'une quantité importante d'IP-10 dans le plasma des patients. Ainsi, le VHB pourrait échapper à l'immunité en altérant la fonction des pDCs et perturbant le cross-talk pDC/NK par un mécanisme dépendant de IP-10, OX40L et IFNα.