Dissertations / Theses on the topic 'Plaquettes, troubles des'

Ce travail avait pour but d'etudier les anomalies, lors des syndromes depressifs, de 2 mecanismes membranaires siegeant au niveau de la plaquette sanguine: la liaison de haute affinite de l'imipramine tritiee et le transport du tryptophane. Une nette diminution de la densite des sites imipraminiques a ete observee chez l'ensemble des patients, independamment de la categorie nosographique de leur trouble. Les patients bipolaires se distinguent des autres patients par une diminution plus marquee du nombre de ces sites, et qui persiste quel que soit leur etat clinique. Dans la depression bipolaire, cette perturbation membranaire pourrait constituer un marqueur de trait. En revanche, dans les troubles dysthymiques, elle pourrait constituer un marqueur de l'etat depressif, le nombre des sites de liaison etant etroitement correle a la severite de la maladie. Nous avons egalement suivi l'evolution de la densite des sites lors d'un traitement antidepresseur, chez des patients souffrant de depression unipolaire. Une normalisation du nombre des sites se produit des la premiere semaine de traitement les patients etant alors cliniquement ameliores, et persiste apres 4 semaines, les patients etant alors euthymiques. Cet effet n'est pas du a une action pharmacologique direct de l'antidepresseur, puisqu'il est induit aussi bien par des drogues qui possedent une haute affinite pour le site imipraminique, que par l'amineptine, qui en est depourvue. Nos resultats concernant le transport du tryptophane montrent que la membrane plaquettaire est dotee d'un systeme de transport specifique et de haute affinite pour cet acide amine. En l'absence de metabolisme intraplaquettaire du tryptophane, ce transport pourrait permettre a la plaquette d'accumuler cet acide amine. Nous avons mis en evidence chez des patients deprimes une baisse de l'affinite du transporteur pour le tryptophane, qui se corrige lors de leur amelioration clinique sous traitement. Il est possible que cette anomalie entraine un defaut de mise en reserve plasmatique de cet acide amine

Un dysfonctionnement de la neurotransmission serotoninergique centrale a ete implique dans la physiopathologie des troubles depressifs. La serotonine cerebrale est presque exclusivement synthetisee a partir du tryptophane issu du compartiment plasmatique. Le globule rouge, dote d'un systeme de transport membranaire specifique pour le tryptophane, le systeme t, joue tres vraisemblablement un role dans l'homeostasie systemique du tryptophane. Nous avons mis en evidence chez 74% des patients deprimes non traites etudies (n=103) une modification du transport erythrocytaire de tryptophane qui etait soit augmente (35%) soit diminue (39%) par rapport aux temoins, ce qui revele l'heterogeneite biologique des patients deprimes au regard de ce systeme. Ces alterations sont etroitement liees a la symptomatologie depressive puisqu'elles ne disparaissent a l'issue d'un traitement antidepresseur de 28 jours que chez les patients ayant repondu favorablement au traitement. Une variation importante de la valeur des parametres cinetiques (vmax) au cours de la premiere semaine de traitement semble predictive de l'efficacite de l'antidepresseur administre. Par ailleurs, nous avons mis en evidence chez 21 patients deprimes non traites une augmentation du nombre de sites 5ht2 plaquettaires marques par l'agoniste selectif, doi, qui ne se lie qu'aux recepteurs fonctionnels. Enfin, une diminution significative des parametres cinetiques du transport erythrocytaire du tryptophane a ete mise en evidence chez 19 patients schizophrenes non traites. Cette diminution s'est averee etre hautement correlee avec la perte de controle pulsionnel indiquant que les modifications du transport erythrocytaire du tryptophane ne sont pas specifiques d'une entite syndromique mais seraient davantage en relation avec une composante psychopathologique elementaire, telle que l'impulsivite

Afin d'etudier les principaux mecanismes affectant la formation des thromboses arterielles et veineuses et d'evaluer differentes strategies antithrombotiques, nous avons mis au point un nouveau modele de thrombose chez le babouin. Le principe du modele est d'incorporer un dispositif thrombogenique a l'interieur d'un shunt arterio-veineux. Ce dispositif est compose d'un segment de tube recouvert de collagene suivi de deux chambres d'expansion. Lorsque ce dispositif est incorpore dans le shunt et expose a du sang natif, un thrombus de type arteriel se forme sur le collagene et un thrombus de type veineux se forme dans les chambres d'expansion. Dans un premier temps, nous etudions l'influence de divers parametres physiques sur la formation du thrombus. L'importance fondamentale du debit sanguin, de la numeration plaquettaire et de l'hematocrite dans ce modele de thrombose est ainsi montree. A l'aide d'une serie d'anticorps monoclonaux et de peptides, nous analysons ensuite le role de l'interaction plaquettes proteines adhesives. Ainsi, une nouvelle strategie therapeutique de la thrombose arterielle basee sur la synthese de peptides contenant la sequence rgd est mise en evidence. Finalement, le role de la thrombine est illustre grace a l'utilisation de differents inhibiteurs de thrombine. Differentes strategies therapeutiques d'inhibition de la thrombine sont alors evaluees quant a leur efficacite antithrombotique et au risque qu'elles entrainent sur le plan hemorragique

Ce travail se proposait de decrire les troubles moteurs digestifs enregistres lors d'inflammations experimentales de l'intestin grele ou du colon chez le rat vigile, mais aussi d'en elucider les mecanismes par l'utilisation d'antagonistes ou d'inhibiteurs de la synthese endogene de divers mediateurs inflammatoires. Les phenomenes moteurs digestifs ont ete apprehendes par electromyographie a l'aide d'electrodes intraparietales implantees a demeure le long du tractus digestif ou par mesure de transit utilisant un marqueur radioactif. Dans une premiere serie d'experimentations, nous avons pu mettre en evidence la participation du paf dans les alterations du profil moteur intestinal observees apres l'administration d'endotoxines d'escherichia coli. Les effets des endotoxines seraient par ailleurs lies a une liberation de radicaux libres et de prostaglandines, eux-memes impliques dans les effets dependants du paf. La deuxieme partie de ce travail revele que le paf et les endotoxines d'escherichia coli presentent des effets similaires au niveau du colon: ils stimulent la motricite, accelerent le transit et augmentent l'humidite des feces. Les effets des endotoxines sur la motricite et le transit coliques sont en partie medies par le paf, mais aussi par les prostaglandines, alors que les effets secretoires tant des endotoxines comme ceux du paf dependraient d'une liberation de prostaglandines, et plus particulierement de prostaglandines de type e#2. La derniere partie de notre travail concerne les effets d'une inflammation du colon induite par l'administration d'acide trinitrobenzene sulfonique (tnb) et montre l'implication du leucotriene d#4 dans la genese des troubles precoces du transit colique. L'ensemble de ces resultats montre l'apparition de troubles moteurs digestifs associes a une inflammation et indique que ces manifestations sont la resultante d'une cascade d'evenements faisant intervenir differents mediateurs produits simultanement ou de facon successive

L’étude de l’identification des défauts moléculaires mis jeu dans les pathologies héréditaires plaquettaires est d’un apport considérable pour améliorer la compréhension des mécanismes physiologiques. Durant ma thèse, j’ai étudié les plaquettes d’individus appartenant à deux familles distinctes souffrant de dysfonctions plaquettaires à l’origine d’hémorragies sévères. Par séquençage entier des exons, nous avons identifié pour la première famille une mutation du gène RASGRP2 à l’origine de la substitution Gβ48W empêchant l’activation de CalDAG-GEFI. Les plaquettes des individus porteurs de la mutation à l’état homozygote ont une capacité réduite à activer Rap1 et l’intégrine αIIbß3 en réponse à de faibles doses d'agonistes. La présence d'un allèle non muté (hétérozygotie) est suffisante pour prévenir lessaignements mais ne permet pas de rétablir totalement une fonction plaquettaire normale. La deuxième famille est porteuse d’une mutation du gène FERMT3 (pN54RfsX142) conduisant à une absence complète de kindline-3. Les plaquettes homozygotes pour cette mutation sont incapables d’activer l’intégrine αIIbß3. Elles forment des filopodes et desnodules d’actine mais ne peuvent étendre des lamellipodes même en présence de Mn2+. La kindline-3 s’est révélée essentielle à la régulation de l’activité de Cdc4β et au réarrangement au cytosquelette d'actine lors de la signalisation «outside-in» de l’intégrineαIIbß3. Seule la kindline-3 a jusqu’ici été impliquée dans l'activation des intégrinesplaquettaires. Nous mettons en évidence la présence de kindline-2 dans les plaquettes et les mégacaryocytes humains. Des localisations différentes ont été mises en évidence pour ces deux kindlines. Dans le mégacaryocyte la kindline-2 se situe dans les zones d’adhérence focales et s’associe préférentiellement avec les intégrines ß3. Dans les plaquettes, seule la kindline-3 est présente dans nodules d’actine. Ces résultats sont en faveur de rôles non redondants des kindlines-2 et -γ et d’une implication potentielle de la kindline-2 dans la mégacaryopoïèse
Inherited platelet disorders are rare diseases that give rise to severe bleeding when platelets fail to fulfill their hemostatic function upon vessel injury. Identifying the molecular mechanisms involved brings important insight into platelet pathophysiology. During my PhD, I studied platelets isolated from members of two families suffering severe bleedings among those one had no established diagnosis. In the first family, using whole exome sequencing, we identified a RASGRP2 mutation causing a G248W substitution leaving CalDAG-GEFI inactive. Platelets from individualscarrying the mutation exhibit a reduced ability to activate Rap1 and to perform proper Inherited platelet disorders are rare diseases that give rise to severe bleeding when platelets fail to fulfill their hemostatic function upon vessel injury. Identifying the molecular mechanisms involved brings important insight into platelet pathophysiology. During my PhD, I studied platelets isolated from members of two families suffering severe bleedings among those one had no established diagnosis. In the first family, using whole exome sequencing, we identified a RASGRP2 mutation causing a G248W substitution leaving CalDAG-GEFI inactive. Platelets from individuals carrying the mutation exhibit a reduced ability to activate Rap1 and to perform proper αIIbß3 integrin inside-out signaling in response to low doses agonists. The presence of a single normal allele is sufficient to prevent bleeding but does not allow normal platelet function. integrin inside-out signaling in response to low doses agonists. The presence of a single normal allele is sufficient to prevent bleeding but does not allow normal platelet function. Members of the second family carry a FERMT3 mutation leading to a completekindlin-3 deficiency (pN54RfsX142). Platelets from the homozygous patient are unable to perform proper integrin αIIbß3 activation. We now observe that kindlin-3 deficient platelets form filipodia and actin nodules but are unable to extend lamellipodia even in presence of Mn2+. We demonstrate that kindlin-3 is essential for Cdc42 activity regulation and actincytoskeleton remodeling during αIIbß3 integrin outside-in signaling To date, only the kindlin-3 has been involved in integrin activation. We show that kindlin-2 is present in human platelets and megakaryocytes. Both kindlins exhibit distinctlocalizations. In megakaryocytes, kindlin-2 specifically localizes within focal adhesion and associates preferentially with ß3 integrins. In platelets, unlike kindline-2, kindline-3 is located in actin nodule. All together these data argue in favor of specific roles played by each kindlins and a possible implication of kindlin-2 in megakaryocytopoiesis

La protéine Bcl-xL fait partie de la famille des protéines anti-apoptotiques Bcl-2. Il a été montré que cette protéine avait un rôle majeur dans la formation des plaquettes chez la souris (mégacaryopoïèse). Une dérégulation de cette protéine pourrait aboutir à une altération de la mégacaryopoïèse et donner des pathologies humaines comme des thrombopénies chroniques. Une des causes de thrombopénies chroniques est le purpura thrombopénique immunologique (ou PTI), qui associe deux mécanismes physiopathologiques : une destruction auto-immune des plaquettes et une insuffisance de leur production par la moelle osseuse. Le PTI est un diagnostic d’exclusion par élimination de toutes les causes connues de thrombopénie. Au sein de notre cohorte de patients suivis en médecine interne pour cette maladie, nous avons identifié certains patients qui présentaient un profil non-immunologique, c’est-à-dire l’absence d’auto-immunité et une non réponse à tous les traitements immunomodulateurs, ou pas d’indication à un traitement compte tenu d’un taux de plaquettes suffisant. Nous montrons dans ce travail de thèse que Bcl-xL est nécessaire pour la survie du mégacaryocyte humain pendant toute la mégacaryopoïèse, à la différence de la souris. Par ailleurs, certains patients ont une altération intrinsèque de la formation des proplaquettes, et certains d’entre eux ont également une diminution de l’ARN messager et de la protéine Bcl-xL dans leurs plaquettes. Ces observations nouvelles suggèrent l’implication de Bcl-xL dans la physiopathologie de leur maladie et ouvrent la voie à l’identification d’une potentielle nouvelle cause de thrombopénie chronique
The Bcl-xL protein is a member of Bcl-2 anti-apoptotic proteins. It has been shown in mouse that this protein had a major role in platelet production (megakaryopoiesis). Bcl-xL deregulation could lead to megakaryopoiesis impairement and explain some human diseases such as chronic thrombocytopenias. One cause of chronic thrombocytopenia is immune thrombocytopenia (ITP) that associates 2 pathophysiological mechanisms: an immune-mediated platelet destruction and an insufficient production from the bone marrow cells. ITP is a diagnosis of exclusion when all known causes of thrombocytopenia have been ruled out by diagnosis work-up. In ITP cohort of patients followed in our internal medicine department, we have identified some patients with a haematological profile of their disease, ie absence of overt features of auto-immunity, and absence of response to immunomudulatory treatments, or no indication to such treatment because of sufficient platelet count. We demonstrate in this study that Bcl-xL is necessary for megakaryocyte survival during all megakaryopoiesis, contrary to what was found in mouse. Moreover, some patients have an intrinsically impaired proplatelet formation, and some of them also have a decrease of Bcl-xL mRNA and protein in their platelets. These novel observations suggest that a deregulation of Bcl-xL is a possible cause of their disease and lead the way to the identification of a potentially new cause of chronic thrombocytopenia in human

Les plaquettes sont les cellules principales de l’hémostase. Leur anomalie qualitative et/ou quantitative est à l’origine d’une diathèse hémorragique. Le diagnostic des anomalies plaquettaires nécessite des tests biologiques. L’objectif de notre travail a été d’améliorer leur diagnostic, en particulier, de développer de nouveaux outils d’exploration des granules denses plaquettaires. Les pathologies plaquettaires héréditaires sont mal connues en Chine. Donc la cadre de notre collaboration Nancy /Wuhan nous avons publié un article en Chinois sur les thrombopénies héréditaires. Ensuite, nous avons évalué les performances du test à la mépacrine combiné à l’expression de CD63 par cytométrie en flux (CMF) pour le diagnostic de la pathologie des grains denses plaquettaires. De plus, notre étude montre que la carence de vitamine C pourrait être associée à une thrombopathie des grains denses. Enfin, nous avons développé une approche par CMF, puis par HPLC, pour la détection de sérotonine plaquettaire
Platelets play an essential role in the hemostasis. Abnormalities in platelet number or platelet function may result in excessive bleeding. Diagnosis of platelet disorders requires platelet count and platelet function testing. Our work is aimed to improve the diagnosis of platelet disorders, especially to develop new approaches for testing the function of platelet dense granules. Inherited platelet disorders are hardly recognized in China. Therefore we published an article in Chinese on the topic of hereditary thrombocytopenia in a Chinese clinical journal, within the framework of collaboration between Nancy and Wuhan. In addition, we evaluated the usefulness of flow cytometric mepacrine assay combined with CD63 expression in the diagnosis of dense granule disorder. Moreover, our work demonstrates that vitamin C deficiency might be associated with platelet dense granule disorder. Finally, we developed a method by flow cytometry and then by HPLC for detection of platelet serotonin

Les thrombopathies congénitales sont des pathologies au phénotype hémorragique hétérogène dues à des anomalies fonctionnelles des plaquettes sanguines parfois associées à des anomalies morphologiques et/ou à une thrombopénie. Les outils diagnostic disponibles permettent de corréler une anomalie fonctionnelle plaquettaire à un déficit protéique voire à une mutation d’un gène spécifique. Cependant, en 2015, au moins 50% des thrombopathies restent non étiquetées. Dans ce contexte, le laboratoire d’hémostase de l’EFS Alsace et l’unité INSERM UMR S949 travaillent de concert à l’identification et à la caractérisation de ces pathologies. Ainsi, nous avons mis en évidence trois nouvelles mutations du récepteur P2Y12 dans trois familles différentes. La mutation p.His187Gln a été entièrement caractérisée sur des plaquettes fraiches du patient et dans un modèle cellulaire adapté. La reproduction des deux autres mutations (p.Tyr259Cys et p.Phe95Ser) est en cours. Nous avons par ailleurs identifié une famille dont trois membres sont atteints d’une maladie du pool vide non syndromique et nous suspectons grâce au séquençage d’exome effectué que le transporteur de nucléotides VNUT est impliqué dans la pathologie
Inherited platelets disorders (IPD) are pathologies associated with heterogeneous bleedingphenotypes. They are due to functional platelets deficiency that may come with morphological abnormalities and/or thrombocytopenia. Available diagnosis tools are used to link a functional deficiency to a protein defect and in some instances to a specific genetic mutation. However, in 2015 at least 50% of IPD are still not identified. In this context, the haemostasis laboratory of the EFS Alsace together with INSERM UMR S949 team are working to diagnose and characterize these pathologies. Thus, we found three new P2Y12 receptor variants in three different families. The mutation p.His187Gln has been fully characterized on blood fresh platelets coming from one patient and in an appropriate cellular model. The reproduction of the two other mutations (p.Tyr259Cys and p.Phe95Ser) is currently ongoing. We also studied a family in which three members are carrying a delta storage pool disease. The full exome sequencing analysis leads us to suspect the involvement of the nucleotides transporter VNUT in this pathology

La thrombopénie immunologique ou purpura thrombopénique immunologique (PTI) est une maladie auto-immune rare responsable d'une destruction périphérique immunologique des plaquettes associée à une production médullaire inadaptée. Dans la première partie de ce travail, nous exposons les connaissances actuelles de sa physiopathologie ainsi que certaines données concernant la réponse immunitaire T, le rôle des lymphocytes T régulateurs (Treg), l'implication de la rate dans la réponse immunitaire ainsi que les modes d'action d'une thérapeutique anti-lymphocytaire B, le rituximab. Dans une seconde partie, nous rapportons les résultats obtenus chez 40 patients atteints de PTI. Nous avons montré que le taux des Treg circulants CD4+CD25HighFoxp3+ est similaire chez les patients et les témoins, avec une élévation de leur taux chez les sujets répondeurs aux traitements. A l'inverse, il existe un déficit quantitatif en Treg au sein de la rate des patients. L'analyse des sous-populations lymphocytaires B spléniques a montré une augmentation du taux de lymphocytes B de la zone marginale chez les patients. Concernant les mécanismes d'action du rituximab, nous avons montré qu'une déplétion lymphocytaire B sanguine et splénique n'est pas suffisante pour obtenir une rémission, et que les plasmocytes ne sont pas sensibles à cette thérapeutique. Par ailleurs, nous proposons un mécanisme d'échappement à ce traitement. En effet, nous avons montré que les patients résistants au RTX présentent une élévation du ratio Th1/Treg spléniques. Chez ces sujets non répondeurs, nous avons également observé une élévation du ratio lymphocytes T CD8+/CD4+, au sein de la rate, suggérant une participation des lymphocytes T cytotoxiques dans la physiopathologie du PTI. Ces résultats ouvrent donc de nouvelles perspectives dans la compréhension de la physiopathologie du PTI, notamment la possible implication des lymphocytes B de la zone marginale et le défaut de contrôle de la réponse immunitaire splénique par les Treg. Concernant le rituximab, son action sur la réponse immunitaire ne semble pas se limiter à une déplétion lymphocytaire B qui n'est pas suffisante pour obtenir une rémission. Un mécanisme d'échappement ou de résistance à cette thérapeutique passe par une orientation Th1 et une probable implication des lymphocytes T CD8+.