Dissertations / Theses on the topic 'Pochonia chlamydosporia'

En esta tesis doctoral se estudia el modo de vida tritrófico del hongo nematófago Pochonia chlamydosporia utilizando técnicas "multiómicas". Pochonia chlamydosporia (= Metacordyceps chlamydosporia) (Goddard) Zare y Gams es un hongo nematófago usado para el control de nematodos agalladores de la raíz (Meloidogyne spp.) (Forghani and Hajihassani, 2020), entre otros. P. chlamydosporia se distribuye por todo el mundo y tiene un modo de vida tritrófico, pudiendo también adoptar estilos de vida endófito y saprófito. El mecanismo que utiliza P. clamydosporia para infectar huevos de nematodo comprende la desacetilación de la quitina de su pared celular a quitosano para facilitar su degradación por quitosanasas (Aranda-Martinez et al., 2016). El quitosano es un biopolímero derivado de la quitina que también se encuentra en el exoesqueleto de artrópodos y crustáceos. El genoma de P. chlamydosporia codifica un elevado número de quitosanasas, gracias a las cuales es resistente a quitosano y puede utilizarlo como fuente de nutrientes (Palma-Guerrero et al., 2010). Ambos pueden combinarse para el control de plagas. En este trabajo de tesis doctoral se pretende estudiar mediante metabolómica, transcriptómica y genómica el modo de vida tritrófico de P. chlamydosporia añadiendo quitosano, para determinar los mecanismos de interacción del hongo en ese entorno. En último término, se pretende sentar las bases para desarrollar un sistema para reducir plagas y enfermedades de forma sostenible.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 522894 bytes, checksum: 671c96196d8b0b7e8b4f7498d0e04248 (MD5) Previous issue date: 2014-02-20
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Echinostoma paraensei is a trematode of the genus Echinostoma that can cause echinostomiasis in humans. The aims of this study were to evaluate the ovicidal activity of the isolates VC1 and VC4 of the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia on solid medium containing 2% water-agar(2% WA) on eggs of E. paraensei, selecting the most efficient isolate (assay A), evaluate the ovicidal effect (destruction of eggs) of most effective isolate on supplemented agar culture media (assay B), and to evaluate the ovicidal capacity of crude enzymatic extract of most effective isolate on E. paraensei eggs (assay C). One thousand eggs of E. paraensei (assay A) were placed in Petri dishes containing 2% WA with one isolate of fungus P. chlamydosporia (VC1 or VC4) grown for 10 days, and without fungus as control. Both the treated and control group consisted of six replicates. After 15 days, approximately one hundred eggs were removed from each dish and classified according to the following parameters: type 1 effect, physiological effect without morphological damage to eggshell, where hyphae are observed attached to the shell; type 2 effect, lytic effect with morphological alteration of embryo and egg shell with hyphal penetration through the shell; and type 3 effect, lytic effect with morphological alteration of embryo and eggshell, in addition to hyphal penetration and internal egg colonization. In assay B, E. paraensei eggs were placed in Petri dishes with different supplemented agar culture media: 2% chitin- agar (2% AC), 2% corn-meal-agar (2% CMA), 2% WA and 2% starch- agar (2% SSA) with isolate VC4 (the most effective); in control group were not used fungus. Each treatment consisted of six replicates. After 25 days, one hundred eggs were removed from each dish and the ovicidal effect was evaluated according to the parameters already mentioned. In assay C, one thousand E. paraensei eggs were poured into Petri dishes with 5 ml of isolate VC4 crude extract constituting the treated group. The control group contained one thousand eggs in 10 ml of distilled water in Petri dishes. Each treatment consisted of six replicates. After 7 days, the total number of E. paraensei eggs present on each dish of the treated and control groups were counted according to the methodology described by Mukhtar and Pervaz. In assay A, there was no difference (p > 0.05) in ovicidal activity among the tested isolates; however, the highest percentage for ovicidal activity (type 3 effect) was demonstrated by the isolate VC4. In assay B, the culture medium starch agar showed the best results for the destruction of the eggs at the end of 25 days of interaction, with a percentage of 46.6%. In assay C, the crude extract of VC4 was effective in the destruction of E. paraensei eggs at the end of 7 days, with a percentage reduction of 53%. Results of in vitro experimental assay A, B and C have shown that P. chlamydosporia (VC1 and VC4) had negative influence on the E. paraensei eggs, and thus can be considered as a potential candidate for the biological control of this helminth.
Echinostoma paraensei é um trematóide do gênero Echinostoma que pode causar a equinostomíase em humanos. Os objetivos desse trabalho foram avaliar a atividade ovicida dos isolados VC1 e VC4 do fungo nematófago Pochonia chlamydosporia em meio sólido ágar- água 2% sobre ovos de Echinostoma paraensei, selecionando o isolado mais eficaz (ensaio A); avaliar o efeito ovicida (destruição dos ovos) do isolado mais eficaz em meios de cultura ágar suplementados (ensaio B) e avaliar a capacidade ovicida do extrato bruto enzimático do melhor isolado sobre ovos de E. paraensei (ensaio C). Mil ovos de E. paraensei (ensaio A) foram colocados em placas de Petri contendo ágar-água 2% (AA 2%) com um isolado do fungo P. chlamydosporia crescido (VC1 ou VC4) durante 10 dias, e sem fungo como controle. Seis repetições foram feitas para ambos o grupo tratado e controle. Após 15 dias, cerca de cem ovos foram retirados de cada placa e classificados de acordo com os seguintes parâmetros: tipo 1, efeito fisiológico sem prejuízo morfológico à casca do ovo, onde hifas são observadas aderidas à casca; tipo 2, efeito lítico com alteração morfológica da casca e embrião do ovo, com penetração de hifas através da casca; e tipo 3 efeito lítico com alteração morfológica do embrião e da casca, além de penetração de hifas e colonização interna do ovo. No ensaio B, ovos de E. paraensei foram colocados em placas de Petri com diferentes meios de cultura ágar suplementados: ágar-quitina 2% (AQ 2%), corn-meal-ágar 2% (CMA 2%), ágar-água 2% (AA 2%) e ágar- amido 2% (SSA 2%) com o isolado VC4 (o mais eficaz), no grupo controle não foram utilizados fungos. Seis repetições foram feitas para cada tratamento. Depois de 25 dias, cem ovos foram retirados de cada placa e o efeito ovicida foi avaliado de acordo com os parâmetros já citados. No ensaio C, mil ovos de E. paraensei foram vertidos para placas de Petri com 5ml de extrato bruto do isolado VC4 constituindo o grupo tratado. O grupo controle tinha 1.000 ovos em 10 ml de água destilada nas placas de Petri. Cada tratamento foi constituído por seis repetições. Após 7 dias, foram contados o número total de ovos de E. paraensei presentes em cada placa dos grupos tratado e controle de acordo com a metodologia descrita por Mukhtar e Pervaz. No ensaio A, foi observado que não houve diferença (p>0,05) na atividade ovicida entre os isolados testados, contudo, o maior percentual para a atividade ovicida (efeito do tipo 3) foi demonstrado pelo isolado VC4. No ensaio B, o meio de cultura ágar- amido 2% (SSA 2%) apresentou os melhores resultados para a destruição dos ovos ao final de 25 dias de interação, com um percentual de 46.6%. No ensaio C, o extrato bruto de VC4 demonstrou ser eficaz na destruição dos ovos de E. paraensei ao final de 7 dias com um percentual de redução de 53%. Os resultados dos ensaios experimentais in vitro A, B e C demonstraram que P. chlamydosporia (VC1 e VC4) influenciou de forma negativa sobre os ovos de E. paraensei, e assim pode ser considerado como um potencial candidato a controlador biológico desse helminto.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-04T15:33:20Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 633073 bytes, checksum: 9f589b3983c89a40a93296fd92fcfb0f (MD5)
Made available in DSpace on 2015-11-04T15:33:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 633073 bytes, checksum: 9f589b3983c89a40a93296fd92fcfb0f (MD5) Previous issue date: 2014-02-20
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
O Brasil possui o maior rebanho de equinos da América Latina e o quarto mundial. Somente a produção de cavalos movimenta R$ 7,3 bilhões anuais. Com relação aos helmintos que geram prejuízos à equideocultura mundial, o Parascaris equorum pode ser destacado, em função dos prejuízos permanentes sobre a capacidade funcional de órgãos como pulmão e fígado, causados pela migração das larvas. Além disso, pesquisas sobre o controle biológico de helmintos de interesse veterinário vêm ocorrendo ao longo dos anos, na tentativa de se encontrarem medidas que venham somar forças ao controle convencional, na busca por melhores condições de sanidade e produtividade animal. Assim, os objetivos do presente trabalho foram: avaliar a ação, in vitro, de dois isolados do fungo helmintófago Pochonia chlamydosporia (isolados VC1 e VC4) crescidos em diferentes meios de cultura, sobre ovos de Parascaris equorum; avaliar a ação do extrato bruto enzimático do fungo P. chlamydosporia sobre ovos de P. equorum; analisar a produção enzimática do fungo P. chlamydosporia (isolados VC1 e VC4) após 21 dias de interação com ovos de P. equorum. Foram utilizados dois isolados do fungo P. chlamydosporia (VC1 e VC4), provenientes da micoteca do Laboratório de Parasitologia do Departamento de Veterinária da Universidade Federal de Viçosa. Os ovos de P. equorum foram obtidos por meio de dissecção de exemplares fêmeas adultos, recuperados de fezes de potros naturalmente infectados, após a administração de citrato de piperazina tetrahidratado. Ao final de um período de 21 dias de interação, foram observados percentuais de destruição dos ovos de P. equorum de 41,9% e 48,3%, para os isolados VC1 e VC4, respectivamente. A ação do extrato bruto enzimático do fungo P. chlamydosporia (isolado VC4) apresentou um percentual de destruição de 36,5, após um período de 48 horas de interação. Os resultados apresentados no presente trabalho sugerem que o fungo Pochonia chlamydosporia, bem como o seu extrato bruto enzimático, podem ser utilizados para auxiliar no controle de ovos embrionados do ascarídeo Parascaris equorum.
Brazil has the largest herd of horses in Latin America and the fourth worldwide. Only the production of horses moves $ 7.3 billion annually. With helminths that generate losses to world equideoculture the Parascaris equorum can be highlighted based on the permanent damage on the functional capacity of organs such as lung and liver, caused by the migration of these larvae. Furthermore , research on the biological control of nematodes in veterinary interest have occurred over the years in an attempt to find measures that will add strength to the conventional control, the search for better conditions of animal health and productivity. Thus, research on the biological control of nematodes in veterinary interest have occurred over the years in an attempt to find measures that will add strength to the conventional control, the search for better conditions of animal health and productivity. The objectives of this study were to assess the efficacy, in vitro, of two isolates (VC1 and VC4) of helmintophagous fungus Pochonia chlamydosporia grown in different culture media on Parascaris equorum eggs; evaluate the action of a crude enzymatic extract of fungus P. chlamydosporia on eggs P. equorum; analyze the enzymatic production of fungus P. chlamydosporia (isolates VC1 and VC4) after 21 days of interaction with P. equorum eggs. Was used two isolates of the fungus P. chlamydosporia (VC1 and VC4) arising from mycology collection Laboratory of Parasitology, Department of Veterinary Medicine of the Federal University of Viçosa. The P. equorum eggs were obtained by dissection of adult female specimens recovered from feces of foals naturally infected after administration piperazine citrate tetrahydrate. At the end of a period of 21 days of interaction, were observed percentage of P. equorum eggs destruction of 41.9 % and 48.3 % for isolates VC1 and VC4, respectively. The action of a crude enzymatic extract of the fungus P. chlamydosporia (isolated VC4) showed a percentage of 36.5% of destruction, after a 48 hours period of interaction. The results presented in this work suggest that the fungus Pochonia chlamydosporia, and its crude enzymatic extract, can be used to assist in the control of embryonated eggs of the ascarid Parascaris equorum.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-10-19T13:48:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 763255 bytes, checksum: 11f247d451047f658af1c92d00bd40d7 (MD5)
Made available in DSpace on 2015-10-19T13:48:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 763255 bytes, checksum: 11f247d451047f658af1c92d00bd40d7 (MD5) Previous issue date: 2015-02-20
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
Fitonematoides são patógenos de difícil manejo, extremamente importantes para a agricultura mundial. Entre as medidas de manejo utilizadas, o controle biológico tem ganhado espaço, principalmente pela maior conscientização acerca dos malefícios causados pelos nematicidas químicos à saúde humana e ao meio ambiente. No presente trabalho, avaliou-se a compatibilidade entre o fungo nematófago Pochonia chlamydosporia e isolados bacterianos obtidos em raízes de plantas antagonistas no manejo de Meloidogyne javanica em casa de vegetação, bem como a utilização de substrato sólido para a multiplicação do isolado bacteriano selecionado para o controle de nematoides. Testando o efeito de Pochonia chlamydosporia, Gracilibacillus dipsosauri e de um condicionador de solo organo-mineral no controle de Meloidogyne javanica em tomateiro, observou-se que na interação dos três tratamentos, e na interação entre G. dipsosauri e P. chlamydosporia, a redução no número de galhas radiculares causadas pelo nematoide foi de 48 e 41% respectivamente. Os tratamentos com G. dipsosauri e P. chlamydosporia + Ribumin proporcionaram redução de 26 e 21% no número de ovos respectivamente. A interação entre o fungo nematófago e a rizobactéria foi positiva para o controle do nematoide, apesar do fato de G. dipsosauri ter inibido o crescimento do fungo P. clamydosporia em até 30% em teste in vitro. Avaliando o controle de M. javanica em tomateiro com bactérias endofíticas, observou-se que dos 51 isolados obtidos, 18 foram eficientes em reduzir o número de galhas de M. javanica, resultando em 51 a 75% de controle em relação à testemunha. Cinco isolados reduziram o número de massas de ovos de 65 a 75% em relação ao tratamento testemunha. Os tratamentos com os isolados Cs-2, Cs-12 e Mc-3 causaram 22, 24 e 27% de imobilidade nos J2 de M. javanica respectivamente. Os isolados Cs-2, Cp-5 e Mc-3, quando aplicados via irrigação do solo, reduziram em até 46% o número de galhas de M. javanica. Além disso, o isolado Mc-3 mostrou-se eficiente também na microbiolização de sementes, reduzindo grandemente a multiplicação do nematoide no interior das raízes. O fungo P. chlamydosporia não produziu compostos antibióticos contra os isolados bacterianos testados e os isolados Cs-2, Cs-12, Cp-1 e Mc-3 foram os que apresentaram maior compatibilidade nos testes de antibiose, efeito dos compostos voláteis e confrontação direta realizados in vitro. Quando aplicados via microbiolização de sementes, observou-se que o tratamento com a bactéria Mc-3 proporcionou redução de 23% no número de ovos do nematoide. A combinação da bactéria Cs-2 com Pc-10 proporcionou redução de 31% e a combinação das três bactérias com P. chlamydosporia proporcionou redução de 37%. Na aplicação via irrigação, Pc-10 isoladamente reduziu o número de galhas em 33% e quando associado a Mc-3, em 30%. Já quanto ao número de ovos por sistema radicular, as reduções foram de 64, 60 e 49% quando o solo foi tratado com Mc-3, Pc-10 e na interação de ambos, respectivamente. Por fim, nos testes para produção de esporos do isolado Mc-3 (Bacillus sp.) em meio sólido, observou-se que a aplicação de 100 mL de água nos sacos contendo 300g de arroz em pré autoclavagem, seguido da aplicação de suspensão bacteriana e incubação por 5 dias a 30° é eficiente em produzir C esporos de Mc-3, gerando em média 1 x 109 esporos por grama de arroz. A adição de meios de cultura líquidos à suspensão bacteriana pós autoclavagem não resultou em aumento da produção. Já a aplicação de doses crescentes de farelo de soja ao arroz, mostrou que a aplicação de 10-20 g de farelo de soja por saco, proporciona aumento da produção de esporos de Mc-3.
Plant-parasitic nematodes are unwieldy pathogens, extremely important for global agriculture. Among the management measures used, biological control has gained ground, mainly due to increased awareness of the harm caused by chemical nematicides to human health and the environment. In this study, were evaluated the compatibility between the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia (Pc-10) and bacteria isolated from nematode-antagonistic plant roots in the management of Meloidogyne javanica in the greenhouse, and the use of solid substrate for multiplication of selected bacterial isolate for the control of nematodes. Testing the effect of Pochonia chlamydosporia, Gracilibacillus dipsosauri and an organo-mineral soil conditioner in the control of Meloidogyne javanica in tomato plants, it was observed that the interaction of the three treatments, and the interaction between G. dipsosauri and P. chlamydosporia, reduction the number of root galls caused by the nematode was 48 and 41%, respectively. Treatments with G. dipsosauri and P. chlamydosporia + soil conditioner resulted in the reduction of 26 and 21% of the number of eggs, respectively. The interaction between the nematophagous fungi and rhizobacteria was positive for controlling nematode, despite the fact that G. dipsosauri inhibited the growth of the fungus P. clamydosporia by 30% in vitro test. Evaluating the control of M. javanica in tomato with endophytic bacteria, it was observed that from the 51 isolates obtained, 18 were effective in reducing the number of galls caused by M. javanica, resulting in 51-75% control when compared to the control treatment. Five isolates reduced the number of egg masses from 65 to 75% when compared to the control treatment. The treatments with the isolates Cs-2, Cs-12 and Mc-3 caused 22, 24 and 27% in immobility J2 of M. javanica respectively. The isolates Cs-2, Cp-5 and Mc-3, when applied via irrigation of the soil, reduced the number of galls of M. javanica by 46%. Furthermore, the isolate Mc-3 was also efficient when used through seed treatment, greatly reducing nematode multiplication in the roots. The fungus P. chlamydosporia did not produce antibiotic compounds against the bacterial isolates, and Cs-2, Cs-12, Cp-1 and Mc-3 isolates had the highest compatibility with the fungus in antibiosis, effect of volatile compounds and direct confrontation tests, performed in vitro. When applied to seeds, it was observed that treatment with Mc-3 bacterium gave 23% of reduction in the number of nematode eggs. The combination of Cs-2 bacteria and Pc-10 gave a reduction of 31%, and combining the three bacteria with P. chlamydosporia gave 37% reduction. When the antagonists where applied through soil irrigation, the number of galls caused by M. javanica was reduced by 33 and 30% for Pc- 10 alone and in combination with Mc-3, respectively. As for the number of eggs per root system, the reductions were 64, 60 and 49% when the soil was treated with Mc-3, Pc-10 and the interaction of both, respectively. Finally, in tests for the production of the Mc-3 (Bacillus sp.) spores in solid state fermentation, we observed that the application of 100 ml of water in bags containing 300g of pre- autoclaved rice, followed by the application of bacterial solution and incubated for 5 days at 30° is effective in producing Mc-3 spores, generating an average C of 1 x 109 spores per gram of rice. The addition of liquid culture media after autoclaving the bacterial solution did not result in increased production. The application of increasing doses of soybean meal into the rice showed that the application of 10-20 g of soybean meal provides increases in the production of Mc-3 spores.

O nemátode das galhas radiculares (NGR) (Meloidogyne spp.) é responsável por um dos principais problemas fitossanitários da rizosfera em Portugal e em vários outros países europeus. São utilizados vários pesticidas no combate a este problema, contudo, muitos têm sido retirados do mercado devido à sua extrema toxicidade. Como exemplo temos o brometo de metilo que foi banido do mercado em 2005 devido à sua forte ação depletora da camada de ozono. Desta forma, tem sido estimulado o aparecimento de alternativas ao uso de pesticidas, nomeadamente no âmbito do controlo biológico. O fungo Pochonia chlamydosporia encontra-se entre os organismos antagonistas que têm suscitado maior interesse e os estudos efetuados apontam para a possibilidade da sua comercialização num futuro próximo. Entre os dois tipos de esporos produzidos pelo fungo, os clamidósporos são os mais adequados a serem usados como inóculo em processos de controlo biológico. Contudo, para que a sua produção e posterior utilização como principio ativo seja um processo rápido e rentável, é necessário o desenvolvimento e aperfeiçoamento de meios de cultura líquida. O desenvolvimento deste tipo de meios implica o estudo dos nutrientes envolvidos na produção de grandes quantidades deste tipo de esporos. O trabalho experimental realizado no âmbito desta dissertação permitiu clarificar alguns dos aspetos mais importantes relacionados com os nutrientes envolvidos na produção de clamidósporos, pelo fungo P. chlamydosporia, em cultura líquida. Os resultados obtidos indicam que, para que a produção de clamidósporos seja iniciada pelo fungo, é necessário que o meio de cultura possua uma fonte adequada de proteína e de lípidos. Enquanto a fonte de proteína pode ser variável, a fonte de lípidos restringe-se a ácidos gordos insaturados, preferencialmente por fosfolípidos e não por triglicéridos. Foi também possível verificar que existe uma proporção, entre estes dois nutrientes, que favorece a produção máxima de clamidósporos. O esclarecimento das necessidades nutricionais do fungo envolvidas na produção de clamidósporos, é essencial ao desenvolvimento de processos fermentativos que possam ser associados aos processos de extração de esporos já desenvolvidos. /ABSTRACT - The root-knot nematode (Meloidogyne spp.) is responsible for one of the most important phytosanitary problems of rhizosphere in Portugal and several other European countries. lt is frequent the use of several pesticides in order to solve this problem, however, some of them have been banned from the market due to their high toxicity. As example, we have methyl bromide, banned in 2005 due to its ozone deleterious effect. Thus, it has been encouraged the utilization of alternatives to pesticide use, namely, biological control. Pochonia chlamydosporia is one of the antagonists that incite more interest. The studies already performed, point to the possibility of its commercialization as biocontrol agent. Between the two kinds of spores produced by the fungus, those who have been considered more reasonable to use as inoculum in biological control, were chlamydospores. Although, to attain a rentable large scale production adequate liquid cultures have to be developed. The development of this liquid media involves the study of the nutrients necessary to chlamydospore production in liquid media. The aim of this work is to clarify the nutritional requirements of chlamydospore production by Pochonia chlamydosporia in liquid media. The results obtained show that chlamydospore production is only achieved when the culture media has, on its composition, an adequate lipid and protein source. Although the protein source can vary, the lipid source is peremptorily an adequate unsaturated fatty acid source, rather phospholipids than triglycerides. It was also shown that to chlamydospore production be allowed or induced, there is necessary an adequate proportion between this lipids a protein source. Elucidating those nutritional needs by the fungus, allows the development of fermentation techniques that could be coupled to the already existing chlamydospore extraction processes.

The work developed in this thesis aimed to increase understanding about the variability and stability in eleven biotypes of Pochonia chlamydosporia, a facultative parasitic fungus with potential as a biological control agent against root-knot (Meloidogyne spp.), false root-knot (Naccobus spp.) and cyst nematodes (Heterodera and Globodera, spp.). Differences in performance were assessed by measuring saprophytic and parasitic growth using in vitro bioassays. Information on virulence (in vitro) was collected for a range of biotypes with the objective to relate in vitro parasitic growth with rhizosphere colonisation ability and secretion of extracellular enzymes. Results showed differences between biotypes in their ability to colonise the rhizosphere of plants, parasitise nematode eggs and to produce a range of extracellular enzymes but no significant relationships were found between saprophytic or parasitic growth and enzyme production. For the first time, the specific activity of protease, chitinase, esterase and lipase enzyme production by eleven biotypes of the fungus was examined. Enzymatic activity was shown to vary with the biotype and type of enzyme assayed and biotypes could be ranked according to their similarities in enzyme production A novel bioassay to estimate egg parasitism using liquid media highlighted the importance of nutrition in infection processes and suggested that all biotypes are able to infect large numbers of eggs rapidly if the conditions are favourable. The assay reliably detected fungal infection in nematode eggs within 48 hours and provided a simple, rapid assay to test the effect of specific nutrients at controlled concentrations on the infection process. Differences in infection rates between biotypes observed in previous tests on agar were not detected in the new assay in which nematode eggs and fungal conidia were added in suspension. Internal colonisation of individual whole Meloidogyne spp. eggs by P. chlamydosporia was observed using microscopy studies. The destruction of nematode eggs infected with the fungus within seven days, was confirmed. The in vitro formation of appressoria was studied in a range of P. chlamydosporia biotypes. for the first time. Biotypes were found to differ in their ability to produce appressoria but this ability was not related to differences in virulence (in vitro) against nematode eggs. Cont/d.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 567180 bytes, checksum: c6e7ebd48ed3a1d70a13bb1e86f0d3a6 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Alternative methods that use a combination of nematophagous fungi associated with organic mineral fertilizer have been little used and shall be studied further, since they present potential for nematode control in addition to supplement fertility and improve soil biota. Moreover, there is a growing demand of the society, which has become more demanding on the use of management practices more environmentally appropriate. Thus, the objective of this work was to test the compatibility of an organic mineral fertilizer based on castor bean cake to Pochonia chlamydosporia for the control of Meloidogyne javanica in lettuce. Two tests were performed to study the viability of P. chlamydosporia in Rizomax (which contains fungus P. chlamydosporia), and UFV-TM100 (organic mineral fertilizer) with or without addition of water. One hundred grams of UFV-TM100 and 1 g of Rizomax were placed in a 3-L plastic bag with no addition of water. The bag was sealed and vigorously shaken until homogenization of the mixture and kept in a closed room. The determination of the CFU of P. chladoutmydosporia was carried out on days 0, 15, 30 and 45 both in pure Rizomax and Rizomax + UFV-TM100. The same methodology was used in the second test, but with the addition of water in the mixture and determination of CFU of P. chlamydosporia was carried out on days 0, 7 and 14. The number of CFU of P. chlamydosporia did not increase within the addition of water in Rizomax in the assessed period; however, the number of CFU was reduced by 27, 54 and 100% in the Rizomax + UFV-TM100 on days 0, 7 and 14, respectively, for the product Rizomax. The number of CFU of P. chlamydosporia in Rizomax did not decrease in the test with no addition of water, but the number of P. chlamydosporia in Rizomax + UFV-TM100 was reduced by 30% on day 45 in comparison to day 0, 15 and 30. A third test was conducted to study the colonization by P. chlamydosporia in a substrate in the presence of UFV-TM100. One litter of substrate was poured in a 5-L plastic bag containing 18 g of UFV- TM100 and 0.18 g of Rizomax. The bag was sealed and shaken vigorously for two minutes to homogenize the mixture, which was distributed into three 200 mL plastic glasses. A second treatment, with no UFV-TM100, was used to evaluate the development of P. chlamydosporia in the absence of UFV-TM100. The substrate in each of the plastic glass was kept moist and samples were taken on days 0 and 14 to determine the number of CFU of P. chlamydosporia. The CFU number of P. chlamydosporia did not differ between Rizomax and Rizomax + UFV-TM treatments in the evaluation periods but the CFU number for P. chlamydosporia was 61% higher on day 14 than on day 0. A forth test was carried out to study the effect of the doses of Rizomax on the growth of lettuce and on the development of M. javanica. Plastic pots containing 2 L of substrate received 36 g of UFV - TM100, and after 15 days, lettuce seedlings at 21 days of age were transplanted. Rizomax was added together with TM100-UFV at doses of 0, 0.36 and 0.45 g/kg substrate, which corresponded to 0, 1, and 1.25% Rizomax . The substrate in each pot was infested with 5,000 eggs of M. javanica on same day of incorporation of UFV- TM100 and Rizomax incorporation. The same doses of Rizomax , but in the absence of UFV - TM100 were tested as control treatment. Sixty days after transplanting, the diameter of the head of lettuce (cm) , the fresh matter weight , the dry matter weight, the fresh root system weight, the number of galls and eggs of M. javanica per gram of root system were evaluated. The diameter of the head of the lettuce, the weight of the shooting fresh matter and the weight of shooting dry matter increased by 41, 44 and 29% , respectively, in the presence of UFV-TM100. The number of gals and eggs per gram of root system was reduced up to 99% when UFV-TM100 + Rizomax were applied at the dose of 1.25%. The application of Rizomax in the absence of UFV-TM100pla root system and the numb also reduced the number of galls per root system and the number of galls per gram of root system, with reductions of up to 50 and 60%, respectively. Therefore, the use of organic mineral fertilizer with the addition of a biological control agent is an efficient alternative to the control of nematodes, in addition to improve plant development.
Métodos alternativos, utilizando a combinação de fungos nematófagos associados a um adubo organomineral têm sido pouco utilizados e devem ser mais estudados, visto que apresentam potencial de controle dos nematoides, além de suplementar a fertilidade e favorecer a biota do solo. Alia-se à isso a demanda crescente da sociedade, que está mais exigente quanto à utilização de práticas de manejo mais ecologicamente adequadas. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi testar a compatibilidade de um fertilizante organomineral à base de torta de mamona com o fungo Pochonia chlamydosporia, visando o controle de Meloidogyne javanica em alface. Dois testes foram realizados para estudar a viabilidade de P. chlamydosporia nos produtos Rizomax (contém o fungo P. chlamydosporia), e UFV-TM100 (fertilizante organomineral), com e sem adição de água. Foram colocados em saco plástico de 3 L, 100 g de UFV-TM100 e 1 g de Rizomax, sem adição de água. O saco foi fechado e agitado vigorosamente até homogeneização da mistura e mantido em uma sala fechada. A determinação do número de UFC de P. chlamydosporia foi realizada aos 0, 15, 30 e 45 dias, tanto no produto Rizomax puro como na mistura Rizomax + UFV-TM100. Para o segundo teste foi utilizada a mesma metodologia, porém com adição de água e a determinação do número de UFC de P. chlamydosporia foi realizada aos 0, 7, e 14 dias. No teste com adição de água não houve decréscimo do número de UFC de P. chlamydosporia no produto Rizomax no período estudado, porém o número de UFC de P. chlamydosporia na mistura Rizomax + UFV-TM100 foi reduzido em de 27, 54 e 100%, respectivamente, aos 0, 7 e 14 dias em relação ao produto Rizomax. No teste sem adição de água não houve decréscimo do número de UFC de P. chlamydosporia no produto Rizomax no período estudado, porém o número de UFC de P. chlamydosporia na mistura Rizomax + UFV-TM100 foi reduzido em 30% aos 45 dias em relação aos 0, 15 e 30 dias. Um terceiro teste foi realizado com objetivo de estudar a colonização de um substrato por P. chlamydosporia na presença do UFV-TM100. Um litro de substrato foi colocado em um saco plástico de 5 L contendo 18 g de UFV-TM100 e 0,18 g de Rizomax. O saco foi fechado e agitado vigorosamente por dois minutos para homogeneizar a mistura, a qual foi distribuída em três copos plásticos de 200 mL de capacidade cada. Um segundo tratamento, sem UFV-TM100, foi utilizado para avaliar o desenvolvimento de P. chlamydosporia na ausência do UFV-TM100. O substrato em cada copo plástico foi mantido úmido e amostras foram retiradas aos 0 e 14 dias para determinar o número de UFC de P. chlamydosporia. Não houve diferença no número de UFC de P. chlamydosporia entre os tratamento Rizomax e Rizomax + UFV-TM no períodos de avaliação, porém o número de UFC de P. chlamydosporia foi 61% maior aos 14 dias com relação ao 0 dia. Um quarto teste foi realizado para estudar o efeito das doses do produto Rizomax nas variáveis de crescimento da alface e no desenvolvimento de M. javanica. Vasos plásticos contendo 2 L de substrato receberam 36 g de UFV- TM100 e, após 15 dias, mudas de alface com 21 dias de idade foram transplantadas. Juntamente com o UFV-TM100, adicionou-se o produto Rizomax nas doses de 0, 0,36 e 0,45 g/2 Kg de substrato, as quais corresponderam a 0, 1 e 1,25% de Rizomax. O substrato em cada vaso foi infestado com 5000 ovos de M. javanica no mesmo dia da incorporação do UFV-TM100 e Rizomax. Como tratamento testemunha, foram testadas as mesmas doses de Rizomax, porém na ausência do UFV-TM100. Após 60 dias do transplantio, avaliou-se o diâmetro da cabeça da alface (cm), o peso da matéria fresca, o peso da matéria seca, o peso do sistema radicular fresco, o número de galhas e de ovos de M. javanica por sistema radicular e o número de galhas e de ovos de M. javanica por grama de sistema radicular. Na presença do produto UFV-TM100 houve aumento de 41, 44 e 29% no diâmetro da cabeça da alface, no peso da matéria fresca da parte aérea e no peso da matéria seca da parte aérea, respectivamente. O número de galhas e ovos pos grama de sistema radicular sofreram reduções de até 99% quando aplicado o UFV- TM100 + Rizomax na dose de 1,25%. A aplicação do Rizomax na ausência do UFV- TM100 também reduziu o número de galhas por sistema radicular e número de galhas por grama de sistema radicular, com reduções de 50 e 60%, respectivamente. Assim, na aplicação do fertilizante organomineral com a adição de um agente de controle biológico é uma alternativa eficiente de controle de nematoides, além de aumentar o desenvolvimento das plantas.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2015.
Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2015-10-08T18:20:55Z No. of bitstreams: 1 2014_ClaudiaPatríciaBravoChaucanés_Parcial.pdf: 1879341 bytes, checksum: c8fbb407d6733d5dcdf63c5ba3fe3cff (MD5)
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Meloidogyne enterolobii vem sendo detectado parasitando goiabeiras e hortaliças. O impacto negativo dos agrotóxicos tem levado ao uso restrito de alguns nematicidas. O potencial de fungos nematófagos vem sendo avaliado como estratégia complementar de controle dessa doença. O objetivo do presente estudo foi avaliar a patogenicidade de isolados de Pochonia chlamydosporia e Purpureocillium lilacinum (=Paecilomyces lilacinus) em ovos de Meloidogyne enterolobii em ensaios in vitro e em casa de vegetação. Foram avaliados 19 isolados de P. chlamydosporia e 17 isolados de Paecilomyces-like pertencentes à Coleção de Fungos de Invertebrados (CFI) da Embrapa Cenargen. Foram conduzidos três experimentos em placas de Elisa com o objetivo de: 1) avaliar a ação patogênica dos isolados sobre ovos do nematoide 2) avaliar os quatro melhores isolados de cada gênero quanto a patogenicidade sobre massas de ovos; 3) avaliar os dois melhores isolados de cada gênero quanto a patogenicidade sobre ovos quando aplicados em conjunto. Foram selecionados os isolados: CG1006, CG1044 (P. chlamydosporia), CG179 (P. lilacinum) e o produto Rizotec® (P. chlamydosporia) para avaliação do controle exercido por esses fungos, sobre a reprodução de M. enterolobii, em cultura de ciclo curto (tomate) e longo (banana), em condições de casa de vegetação. Na avaliação in vitro os isolados CG1006, CG1044, CG1042 e CG1101 (P. chlamydosporia) e CG179, CG1038, CG348 e CG959 (Paecilomyces-like) proporcionaram reduções superiores a 66%, quando aplicados sobre ovos. Na avaliação sobre massas de ovos, os mesmos apresentaram um resultado inferior. A aplicação em conjunto, não alterou a eclosão dos juvenis de segundo estádio (J2) de M. enterolobii. Nos experimentos em casa de vegetação se observou uma alta suscetibilidade da bananeira ao nematoide, embora a cultivar Terra tenha apresentado tolerância ao parasita. O isolado CG1006 proporcionou uma redução de 33% no número de ovos nessa cultura. No experimento com tomateiros, o isolado CG179 apresentou redução de 44,2% no número de ovos no tratamento sob baixa densidade populacional do nematoide; o isolado CG1006 causou uma redução de 33,6%. Não houve controle do nematoide em tomateiros em altas infestações de M. enterolobii, em condições de casa de vegetação. Essa pesquisa sugere que os agentes de controle biológico não podem substituir outros métodos de controle, mas podem ser integrados a outras estratégias de manejo que visem o re-estabelecimento do equilíbrio biológico do solo.
Meloidogyne enterolobii has been detected parasitizing guava and vegetables. The negative impact of pesticides has led to restricted use of some nematicides. The potential of nematophagous fungi has been evaluated as a complementary strategy to control this disease. The aim of this study was to evaluate the pathogenicity of Pochonia chlamydosporia and Purpureocillium lilacinum (=Paecilomyces lilacinus) on Meloidogyne enterolobii eggs in vitro and in greenhouse conditions. Were evaluated 19 isolates of P. chlamydosporia and 17 isolates of P. lilacinum belonging to the Fungi Invertebrates Collection (CFI) of Embrapa Genetic Resources and Biotechnology. Three experiments were conducted in Elisa plates in order to: 1) evaluate the pathogenic action of these isolates on nematode eggs; 2) select the best four isolates of each genus for pathogenicity on egg masses; 3) evaluate the best two isolates of each genus for pathogenicity on eggs when applied together. In vitro evaluation isolates CG1006, CG1044, CG1042 and CG1101 (P. chlamydosporia) and CG179, CG1038, CG348 and CG959 (P. lilacinum) provided reductions of more than 66% when applied on eggs. When applied on egg masses, they show a lower result. The application together, did not alter the hatching of second stage juveniles (J2) of M. enterolobii . The experiments in greenhouse showed a high susceptibility of banana cv. Terra to M. enterolobii, although this plant had shown tolerance to the parasite. The isolated CG1006 provided a 33% of reduction in the number of eggs on this culture. On the experiment with tomato, isolated CG179 decreased 44.2% the number of eggs in the treatment under low nematode; population density; the isolate CG1006 caused a reduction of 33.6%. No control was observed on high infestations of M. enterolobii on tomato, under greenhouse conditions. This research suggests that biological control agents cannot replace other methods of control, but can be integrated with other management strategies to re-establish the biological balance of the soil.

CAPES; Fundação Araucária
O controle biológico e a adição de matéria orgânica ao solo representam as principais alternativas para o controle do nematoide-de-galhas. Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito do subproduto sólido da indústria vinícola (SSIV) sobre o desenvolvimento, in vitro, de Pochonia chlamydosporia e o efeito da associação do SSIV a esse fungo no manejo de Meloidogyne javanica em tomateiros, em casa de vegetação. Para avaliar o efeito direto do SSIV sobre o desenvolvimento do fungo, adicionaram-se as concentrações (0; 5; 10; e 15%) do extrato aquoso do SSIV em meio de cultivo batata-dextrose-ágar (BDA) fundente. Em seguida, a mistura foi vertida em placas de Petri e um disco de meio de cultivo ‘Corn Meal Ágar’ (CMA) colonizado pelo fungo foi colocado no centro de cada placa. Em outro estudo avaliou-se o efeito dos compostos voláteis do SSIV sobre o desenvolvimento de P. chlamydosporia. Para isto, utilizaram-se placas de Petri bipartidas, adicionando em um dos compartimentos as concentrações do SSIV (0,000; 0,065; 0,125; 0,250; e 0,500 g placa-1) e 2 mL de água destilada esterilizada placa-1. No centro do outro compartimento contendo meio de cultivo BDA, adicionou-se um disco de meio de cultivo CMA colonizado pelo fungo. As placas dos dois estudos foram armazenadas em câmara de crescimento, no escuro, a 21°C. Os dois estudos foram realizados duas vezes. Após 14 dias avaliaram-se o diâmetro das colônias e a produção de conídios do fungo. O SSIV reduziu de 9 a 21% o crescimento do fungo nos dois estudos, bem como reduziu a produção de conídios no primeiro estudo. Em casa de vegetação, avaliou-se a associação do SSIV (30 g kg-1 de substrato) às concentrações de P. chlamydosporia com clamidósporos (500; 1.500; 2.500; 3.500; 4.500; e 5.000 clamidósporos g-1 de substrato) ou sem clamidósporos (2,5; 5; 10; e 15 g de inóculo do fungo kg-1 de substrato). Três tratamentos foram utilizados como controle em cada ensaio: adição de P. chlamydosporia (5.000 clamidósporos g-1 de substrato ou 15 g de inóculo do fungo kg-1 de substrato), adição de SSIV (30 g do SSIV kg-1 de substrato) e apenas o substrato. Em seguida, cada saco contendo 4 kg de substrato esterilizado e os respectivos tratamentos foi infestado com 6.000 ovos de M. javanica kg-1 de substrato, homogeneizado e umedecido até 60% de capacidade de campo e armazenado por 14 dias no escuro, a 25 ºC. Depois, o substrato foi transferido para vasos de polipropileno de 500 mL, e uma muda de tomateiro foi transplantada para cada vaso. Após 60 dias foram avaliados a altura, a massa da parte aérea e das raízes frescas e o número de galhas e de ovos do nematoide. A associação do SSIV ao fungo, independentemente do tipo de inóculo do fungo, potencializou o desenvolvimento dos tomateiros e o controle do nematoide. As concentrações mais indicadas do fungo para se associar ao SSIV foram 3.500 clamidósporos g-1 de substrato e 15 g do inóculo sem clamidósporos kg-1 de substrato, pois, além de controlarem efetivamente o nematoide, também proporcionaram o desenvolvimento dos tomateiros. Conclui-se que a associação do SSIV ao fungo P. chlamydosporia potencializa o manejo do nematoide-de-galhas.
The biological control and the addition of organic matter to the soil represent the main alternatives for the control of root-knot nematode. The objectives of this study were to evaluate the effect of solid wine industry by-product (SSIV) on the development, in vitro, of Pochonia chlamydosporia and the effect of combining this fungus with the SSIV on the management of Meloidogyne javanica in tomatoes grown in a greenhouse. To evaluate the direct effect of the SSIV on fungal development, concentrations (0, 5, 10, and 15%) of the aqueous SSIV extract were applied to potato-dextrose-agar (BDA) culture medium. The mixture was then poured into Petri dishes and a disk of 'Corn Meal Agar' (CMA) culture medium colonized by the fungus was placed in the centre of each plate. A further study evaluated the effect of volatile SSIV compounds on the development of P. chlamydosporia. For this, twopart Petri dishes were utilised, to one of the compartments the concentrations of SSIV (0.000, 0.065, 0.125, 0.250, and 0.500 g plate-1) and 2 mL plate-1 sterile distilled water were added. To the other compartment, which contained BDA culture medium, a disc of CMA culture medium colonised by the fungus was added in the centre. The plates from the two studies were stored in a growth chamber in the dark at 21 °C. The two studies were performed twice. After 14 days, the diameter of the colonies and the production of fungal conidia were evaluated. The SSIV reduced fungal growth by 9 to 21% in the two studies, and reduced conidia production in the first study. In the greenhouse, the combination of SSIV (30 g kg-1 of substrate) with the concentrations of P. chlamydosporia with chlamydospores (500; 1,500; 2,500; 3,500; 4,500; and 5,000 chlamydospores g-1 of substrate) or without chlamydospores (2.5, 5, 10, and 15 g of inoculum of fungus kg-1 substrate) were evaluated. Three treatments were used as controls in each assay: the addition of P. chlamydosporia (5,000 chlamydospores g-1 substrate or 15 g of inoculum of fungus kg-1 of substrate), the addition of SSIV (30 g SSIV kg-1 of substrate) and only substrate. Following this, each bag containing 4 kg of sterilised substrate and the respective treatments were infested with 6,000 M. javanica eggs kg-1 of substrate, homogenized, moistened until 60% of field capacity and then stored for 14 days in the dark at 25 °C. The substrate was then transferred to 500 ml polypropylene pots, and one tomato seeding was transplanted into each pot. After 60 days the height, the shoot and fresh root masses, and the numbers of nematode galls and eggs were evaluated. The combination of SSIV and the fungus, independent of the type of fungal inoculum, increased the development of the tomato plants and the control of the nematodes. The fungal concentrations most recommended to combine with the SSIV were 3,500 chlamydospores g-1 of substrate and 15 g of inoculum without chlamydospores kg-1 of substrate, because, besides controlling effectively the nematode, they also improved the development of the tomato plants. It was concluded that the combination of SSIV and the fungus P. chlamydosporia improves the management of this root-knot nematode.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 243315 bytes, checksum: 054bf30c4a50c22bf027493817fb918f (MD5) Previous issue date: 2008-03-10
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Besides increasing production fees, the indiscriminate used of nematicidal chemicals may threaten farmers and consumers health, as well as contaminate the environment. Consequently, alternative methods for management of nematodes are preferred, such as the use of nematophagous fungi allied to organic matter incorporation to the soil. The objectives of this work were: 1- to evaluate the minimum effective dose of papaw seed's flour (FSM) with and without biofumigation, for the control of M. javanica; 2- to evaluate the effect of Pochonia chlamydosporia, applied in the form of chlamydospore or colonized coconut fiber, together with different doses of FMS against M. javanica and 3- to evaluate the effect of fungi and bacteria, isolated from soils treated with FSM, over M. javanica. The collective and accumulative effect of the toxic gasses released during the FSM decomposition, together with the high temperatures, conferred a considerable reduction in the quantity of FSM to be incorporated to the soil, especially if the soil was immediately covered after incorporation. Evaluating the applying of P. chlamydosporia fungi, it was determined that colonized coconut fiber was not efficient as a method for the introduction of this microorganism. Soil application of P. chlamydosporia must be done on infested soil and a period of more than seven days has to be held before planting, in order to allow fungi establishment and its activity over the initial nematode inoculum, with a consequent reduction in penetration, number of root knots and number of eggs at end of the nematode's life cycle. No antagonistic activity against nematodes was observed in bacteria isolated from soils where FSM was incorporated. Only one isolate of the fungi Trichoderma sp. resulted in nematode control, and only when introduced in the soil together with the host planting, 15 days before nematode eggs introduction. This period of exposition was not proportioned in the experiment from where the fungi was isolated, thus it was impossible to determine the role of such isolate in the control of the nematode.
O uso indiscriminado de nematicidas, além de onerar o custo de produção, pode colocar em risco a saúde dos aplicadores, dos consumidores e contaminar o meio ambiente. Desta forma, métodos alternativos para o manejo de nematóides são cada vez mais desejáveis, tais como o uso de fungos nematófagos aliado à incorporação de matéria orgânica. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a dose mínima efetiva de farinha de sementes de mamão (FSM) em biofumigação ou não, para o controle de M. javanica; testar o efeito de Pochonia chlamydosporia, aplicado na forma de clamidósporos ou de fibra de coco colonizada, juntamente com diferentes doses de FSM sobre M. javanica e verificar o efeito de fungos e bactérias, isolados de solos tratados com FSM sobre M. javanica. O efeito conjunto e cumulativo dos gases tóxicos liberados durante a decomposição da FSM, aliado às elevadas temperaturas proporcionou uma considerável redução da quantidade de FSM a ser incorporada no solo, principalmente se o solo for coberto imediatamente após a incorporação desse material. Ao se avaliar a forma de aplicação do fungo P. chlamydosporia constatou-se que a fibra de coco colonizada não foi efetiva como método de introdução deste microrganismo. A aplicação de P. chlamydosporia deve ser feita em solo infestado e deve-se aguardar um período maior do que uma semana antes do plantio para que o fungo possa se estabelecer e atuar sobre o inóculo inicial do nematóide, o que reduz a penetração e os números de galhas e ovos no final do ciclo de vida do nematóide. Bactérias isoladas de solo onde havia sido incorporado FSM não apresentaram atividade antagônica ao nematóide. Somente um isolado do fungo Trichoderma sp. resultou em controle do nematóide e apenas quando introduzido no solo no plantio com o hospedeiro, isto é, 15 dias antes da introdução dos ovos do nematóide. Este período de exposição não foi proporcionado noexperimento de onde este fungo foi isolado, portanto não é possível determinar o papel desse isolado no controle do nematóide.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2273628 bytes, checksum: 5b1679c5e47e66a87032a8293b4946e0 (MD5) Previous issue date: 2011-08-15
Swine meat is one of main sources of animal protein consumed in the world and strong demand for swine meat in the Asian continent has stimulated the development of the internal market, however, has been demanded a production system aimed at animal welfare and organic production. Even though, in given situations intestinal parasites remain a problem for breeding these animals, especially when this is done through the extensive management system. Among these, stands out the parasitic nematodes, Ascaris suum and Oesophagostomum spp, whose infective forms are present in the environment. By the way, the objectives of this study were to evaluate the ovicidal activity of fungus Pochonia chlamydosporia on A. suum eggs and predatory activity of the Duddingtonia flagrans, Monacrosporium sinense and Artrhobotrys robusta on infective forms of Oesophagostomum spp. For this purpose, four experimental trials were set up, where it was evaluated (in vitro) activity of these fungi on the infectious forms of these nematodes and (in vivo) test which evaluated the ability of P. chlamydosporia and D. flagrans to support the passage through the gastrointestinal tract of pigs. Isolates fungal of P. chlamydosporia were able to destroy A. suum eggs in vitro and capable of supporting the passage through the gastrointestinal tract of pigs without losing its capacity to destroy eggs. D. flagrans, M. sinense and A. robusta predated Oesophagostomum spp L3 in vitro. D. flagrans kept its predatory ability after passing through the gastrointestinal tract of pigs. Results presented in this study suggest that the fungi P. chlamydosporia and D. flagrans can be used to assist in the control of infectious forms of the nematodes A. suum and Oesophagostomum spp, respectively.
A carne suína é uma das principais fontes de proteína animal consumida no mundo e a forte demanda por carne suína no continente Asiático tem estimulado o desenvolvimento do mercado interno, entretanto, têm se exigido um sistema de produção que vise o bem estar animal e a produção orgânica. Contudo, em dadas situações as parasitoses intestinais continuam a ser um problema para criação destes animais, principalmente quando essa se faz pelo sistema de manejo extensivo. Entre estas parasitoses destacam-se os nematoides, Ascaris suum e Oesophagostomum spp, cujas formas infePigsctantes encontram-se no ambiente. Dessa forma, os objetivos do presente trabalho foram: avaliar a atividade ovicida do fungo Pochonia chlamydosporia sobre ovos de A. suum e atividade predatória do fungo Duddingtonia flagrans, Monacrosporium sinense e Artrhobotrys robusta sobre formas infectantes e Oesophagostomum spp. Para isso, foram montados quatro ensaios, onde foi avaliada a atividade in vitro dos referidos fungos sobre as formas infectantes destes nematoides e um teste in vivo onde se avaliou a capacidade de P. chlamydosporia e D. flagrans suportar a passagem pelo trato gastrointestinal de suínos. Isolados fúngicos de P. chlamydosporia destruíram ovos de A. suum no teste in vitro e foram capazes de suportar a passagem pelo trato gastrointestinal de suínos sem perder sua capacidade de destruição de ovos. D. flagrans, M. sinense e A. robusta predaram as larvas l3 de Oesophagostomum spp. nos testes in vitro. D. flagrans manteve esta habilidade após a passagem pelo aparelho gastrointestinal dos suínos. Os resultados apresentados no presente trabalho sugerem que os fungos Pochonia chlamydosporia e Duddingtonia flagrans podem ser utilizados para auxiliar no controle das formas infectantes dos nematoides Ascaris suum e Oesophagostomum spp, respectivamente.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-19T12:33:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2096061 bytes, checksum: bc307da4c22fbfa9e0230bdede6f8c29 (MD5)
Made available in DSpace on 2018-04-19T12:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2096061 bytes, checksum: bc307da4c22fbfa9e0230bdede6f8c29 (MD5) Previous issue date: 2018-03-02
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Fungos e plantas produzem enzimas que possuem as mais diversas aplicações biotecnológicas. Uma possível e promissora aplicação dessas enzimas é o controle de nematoides, em substituição aos nematicidas químicos prejudiciais à saúde humana e animal, ao meio ambiente e à microbiota do solo. Outra possível aplicação das enzimas de fungos é o uso da dextranase na redução de dextrana na indústria sucroalcooleira. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo investigar a produção de enzimas pelo fungo Pleurotus eryngii e pelas plantas Euphorbia milii e E. trigona, purificar e caracterizar as enzimas de E. milii, E. trigona e Pochonia chlamydosporia, e testar a atividade nematicida das enzimas das plantas E. milii, E. trigona e do fungo P. eryngii. O fungo P. eryngii e seu extrato reduziram significativamente (p<0,01) o número de larvas intactas de Panagrellus sp. após 24 horas de tratamento em 60 e 90%, respectivamente. Este efeito não está relacionado à atividade enzimática, mas sim à presença de outros metabólitos. Os ovos de Meloidogyne javanica, quando tratados com o extrato de P. eryngii, mostraram redução de 53% (p<0,01) no número de ovos intactos. A redução de ovos intactos de M. javanica é atribuída à atividade enzimática, uma vez que o extrato apresentou atividade quitinolítica e proteolítica de, respectivamente, 32,74 e 3,57 U/mL. A purificação do látex de E. trigona por cromatografia de exclusão molecular permitiu a purificação de três proteases distintas. O peso molecular das proteases foi estimado em aproximadamente: 36, 31 e 29 kDa, para a trigonina 1, 2 e 3, respectivamente. O pH e a temperatura que proporcionaram maior atividade de protease foram 4,0, 6,0 e 9,0, e temperatura de 70 °C. As proteases foram inibidas por fluoreto de fenilmetilsulfonila e iodoacetamida. O pool das três proteases presentes no látex de E. trigona reduziram significativamente (p<0,01) o número de J 2 vivas de M. incognita em 96% após 24 horas de tratamento. A purificação parcial das proteases presentes no látex de E. milii indicou que estas proteases correspondem à milina e miliina. Estas enzimas reduziram em 65,59% e 96,46% o número de larvas de Panagrellus redivivus após 24 e 48 h, respectivamente (p<0,01). A dextranase produzida pelo fungo P. chlamydosporia foi purificada à homogeneidade em duas etapas, com rendimento de 152%, fator de purificação de 6,84 e atividade específica de 358,63 U/mg. Seu peso molecular foi estimado por SDS-PAGE em 64 kDa. A enzima apresentou maior atividade a 50 °C e pH 5,0, usando tampão citrato-fosfato 100 mM, foi inibida por Ag 1+ , Hg 2+ , Cu 2+ , Mg 2+ , e apresentou K M de 1,77 g/L. A dextranase madura é composta por 585 resíduos de aminoácidos, com peso molecular predito de 64,38 kDa e pI 5,96. Esta dextranase demonstrou forte semelhança filogenética em comparação à dextranase de Trichoderma harzianum. Sua estrutura consiste de dois domínios: o primeiro composto por 15 cadeias beta, e o segundo composto por uma β-hélice paralela. Esses resultados evidenciam o potencial biotecnológico desses fungos, plantas e suas enzimas extracelulares informações acerca no da controle dextranase de nematoides, produzida pelo e fornecem fungo P. chlamydosporia, que podem ser utilizadas para futuras aplicações industriais desta enzima.
Fungi and plants produce enzymes that have several biotechnological applications. A possible and promising application of these enzymes is the control of nematodes, replacing chemical nematicides harmful to human and animal health, to the environment and to the soil microbiota. Another possible application of fungi enzymes is the use of dextranase to reduce dextran content in sugar industry. The objective of this work was to investigate the production of enzymes by Pleurotus eryngii, Euphorbia milii and E. trigona, to purify and characterize the enzymes from E. milii, E. trigona and Pochonia chlamydosporia, and to test the nematicidal activity of E. milii, E. trigona and P. eryngii. P. eryngii fungus and its extract significantly reduced (p<0.01) the number of intact Panagrellus sp. larvae after 24 hours treatment in 60 and 90%, respectively. This effect is not related to enzymatic activity, but to the presence of other metabolites. M. javanica eggs, when treated with P. eryngii extract, showed a 53% reduction (p<0.01) in the number of intact eggs. The M. javanica intact eggs reduction is attributed to enzymatic activity, once the extract showed proteolytic and chitinolytic activities of, respectively, 32.74 and 3.57 U/mL. The purification of E. trigona latex with size-exclusion chromatography allowed partially purification of three distinct proteases. The molecular weight of proteases was estimated at approximately: 36, 31 and 29 kDa, for trigonin 1, 2 and 3, respectively. The pH and temperature that provided highest protease activity were 4.0, 6.0 and 9.0, and temperature of 70 °C. The proteases were inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride and iodoacetamide. The pool of three proteases present in E. trigona latex reduced significantly (p<0.01) the number of live M. incognita J 2 in 96% after 24 hours treatment. The partial purification of the proteases present in E. milii latex indicated that these proteases are milin and miliin. These enzymes reduced the Panagrallus redivivus larvae number by 65.59 % and 96.46 % after 24 and 48 hours, respectively (p<0.01). Dextranase produced by the fungus P. chlamydosporia was purified to homogeneity in two steps, with a yield of 152 %, purification factor of 6.84 and specific activity of 358.63 U/mg. Its molecular weight was estimated by SDS-PAGE at 64 kDa. The enzyme presented higher activity at 50 °C and pH 5.0, using 100 mM citrate-phosphate buffer, was inhibited by Ag 1+ , Hg 2+ , Cu 2+ , Mg 2+ , and presented K M of 1.77 g/L. Mature dextranase is composed of 585 amino acids residues, with a predicted molecular weight of 64.38 kDa and pI 5.96. This dextranase showed a strong phylogenetic similarity when compared to Trichoderma harzianum dextranase. Its structure consists of two domains: the first composed by 15 β strands, and the second composed by a right-handed parallel β-helix. These results evidence the biotechnological potential of these fungi, plants and their extracellular enzymes to nematodes control, and provide information about the dextranase produced by P. chlamydosporia fungus, which can be used for future industrial applications of this enzyme.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-06-20T13:25:16Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 845125 bytes, checksum: 4c94c1bbafe8070618ea88db66608e84 (MD5)
Made available in DSpace on 2017-06-20T13:25:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 845125 bytes, checksum: 4c94c1bbafe8070618ea88db66608e84 (MD5) Previous issue date: 2016-07-27
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
A banana (Musa spp.) é uma das frutas mais consumidas no mundo. O Brasil ocupa a 5a colocação na produção mundial dessa cultura, mostrando relevância no cenário agrícola. Os nematoides do gênero Meloidogyne se destacam por sua ampla distribuição mundial e pela magnitude das perdas que causam à cultura, diretamente e pela predisposição ao parasitismo por fungos de solo. O controle biológico de fitonematoides tem sido estudado para essa cultura como uma ferramenta possível de ser usada em manejo integrado. Nesse estudo foram avaliados o controle biológico de Meloidogyne javanicaem mudas micropropagadas de bananeira ‘Prata-Anã’ por sete isolados de Pochonia chlamydosporia(Pc-10; Pc-18; Pc-20; Pc- 42; Pc-54; Pc-64 e Pc-123) e a redução do stress causado pelo nematoide nas mudas de bananeira pela aplicação do isolado Pc-10, medida pela atividade das enzimas polifenoloxidase (PFO)e fenilalanina amônia liase (FAL). Os isolados Pc- 10, Pc-64, Pc-123 e Pc-18 reduziram significativamente o número de ovos do nematoide. Pc-42, Pc-54 e Pc-20 não reduziram o número de ovos. O número de galhas nas raízes foi reduzido apenas pelo isolado Pc-10 em comparação com os outros tratamentos. Existe variação na promoção de crescimento de mudas entre os isolados de P. chlamydosporia. O isolado Pc-42 apresentou a maior concentração no solo (UFC) após os experimentos de controle biológico e de promoção de crescimento. O isolado Pc-10 reduziu o stress em mudas de bananeira inoculadas com M. javanica.
The banana (Musa spp.) is one of the most consumed fruits in the world. Brazil occupies the 5th place in the world production of this crop, showing relevance in the agricultural scenario. The nematodes of the genus Meloidogyne stand out for their worldwide distribution and the magnitude of losses that cause to the culture directly and the predisposition to parasitism by soilborne fungi. Biological control of nematodes has been studied for this crop as a possible sustainable tool to be used in integrated pest management. In this study we assessed the biological control of Meloidogyne javanica in plantlets of banana 'Prata Ana’ by seven isolates Pochonia chlamydosporia (PC-10, PC-18, PC-20, PC-42, PC-54, PC-64 and P-123) and the stress reduction caused by the nematode in banana seedlings by applying the isolate Pc-10, measured by the activity of the enzymes polyphenoloxidase (PPO) and phenylalanine ammonia lyase (PAL). The isolates PC-10, PC-64, PC-123 and PC- 18 reduced the number of nematode eggs significantly. PC-42, PC-54 and PC-20 did not cause reduction in the number of eggs. The number of galls on the roots was only reduced by PC-10 in comparison with other treatments. There was variation in the seedling growth promotion by the isolates of P. chlamydosporia. The isolate Pc-42 showed the highest concentration in the soil (CFU) after the biocontrol and growth promotion experiments. The isolate Pc-10 reduced the stress on plants inoculated with M. javanica.

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-09-18T13:33:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2023955 bytes, checksum: c00bada9d7cdc721128642c40a1fc2a1 (MD5)
Made available in DSpace on 2018-09-18T13:33:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2023955 bytes, checksum: c00bada9d7cdc721128642c40a1fc2a1 (MD5) Previous issue date: 2017-03-31
Na natureza, um fitopatógeno geralmente está sob influência de um complexo de microrganismos, que associados garantem o equilibrio ecológico estável. Com foco no fungo nematófago Pochonia chlamydosporia, começamos investigando sua compatibilidade com Bradyrhizobium japonicum em soja e a influência dessa interação sobre o controle do nematoide das galhas e sobre a absorção de nutrientes pela planta. Constatou-se que a aplicação conjunta desses dois organismos não prejudica a ação de controle de nematoides por P. chlamydosporia e nem a fixação de N 2 por B. japonicum. Adicionalmente, quando os dois agentes estavam juntos, ocorreu maior produção de nódulos da bactéria nas raízes e aumento do conteúdo de Fe na parte aérea das plantas de soja. No segundo capítulo, a compatibilidade dos agentes de controle biológico de nematoides, P. chlamydosporia e P. penetrans foi avaliada. A co-aplicação dos microrganismos possibilitou maior redução do número de ovos do nematoide do que a aplicação em separado e foi possível observar a associação do fungo nas raízes infectadas por nematoides colonizados por P. penetrans. Pesquisamos ainda, no terceiro capítulo, a presença de vírus em isolados de P. chlamydosporia. Dos dezoito isolados avaliados, apenas um (Pc-M4) estava infectado por dois virus, um com genoma de RNA fita dupla (dsRNA) e outro de RNA fita simples sentido negativo (-ssRNA). Os nomes propostos para os micovírus são Pochonia chlamydosporia chrysovirus 1 (PcCV1) e Pochonia chlamydosporia negative-stranded RNA virus 1 (PcNSRV1). Ensaios biológicos do isolado fúngico Pc-M4 revelaram que este foi capaz de parasitar ovos, produzir metabólitos e proteases letais aos juvenis e reduzir a reprodução do nematoide de galhas M. javanica. Os resultados apresentados indicam que o fungo P. chlamydosporia é capaz de interagir com diferentes organismos sem perder a capacidade de controlar o nematoide de galhas e de promover o crescimento vegetal, o que faz dele um excelente agente de biocontrole de nematoides.
In nature, a plant pathogen is usually under the influence of a complex of microorganisms, which guarantees stable ecological balance. Focusing on the nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia, we started investigating its compatibility with Bradyrhizobium japonicum in soybean. We also looked at the influence of this interaction on the control of the root knot nematode and on the nutrient uptake by the plant. It was found that the joint application of these two organisms does not affect the action of control of nematodes by P. chlamydosporia nor the fixation of N 2 by B. japonicum. In addition, when the two agents were together, there was a higher production of nodules of the bacteria in the roots and an increase in the Fe content in the aerial part of the soybean plants. In the second chapter, the compatibility of biological control agents of nematodes, P. chlamydosporia and P. penetrans was evaluated. The co-application of the microorganisms allowed a greater reduction in the number of nematode eggs than the separate application. It was possible to observe the association of the fungus in the roots infected by nematodes colonized by P. penetrans. We also investigated the presence of viruses in isolates of P. chlamydosporia in the third chapter. Of the eighteen isolates evaluated, only one (Pc-M4) was infected by two viruses, one with double-stranded RNA genome (dsRNA) and the other with RNA single-stranded sense negative (-ssRNA). The proposed names for the mycoviruses are Pochonia chlamydosporia chrysovirus 1 (PcCV1) and Pochonia chlamydosporia negative-stranded RNA virus 1 (PcNSRV1). Biological assays of the fungal isolate Pc-M4 revealed that it was able to parasitize eggs, produce metabolites, lethal proteases to juveniles and reduce reproduction of M. javanica. The results indicated that the fungus P. chlamydosporia is capable of interacting with different organisms without losing the ability to control the root knot nematode and to promote plant growth. This makes it an excellent biocontrol agent for plant parasitic nematodes.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1284492 bytes, checksum: 553a1e66f159f200babfafbb0bac0ccd (MD5) Previous issue date: 2013-02-28
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
In vitro and greenhouse tests were carried out in order to: (i) assess the compatibility of the nematophagous fungi Pochonia chlamydosporia and Duddingtonia flagrans; (ii) evaluate the control of Meloidogyne javanica by the nematophagous fungi applied together and separately; (iii) evaluate the development of tomato plants inoculated with the nematophagous fungi and study the action of the fungi on plant nutritional status. All the compatibility tests, with the exception of an antibiosis test, indicated that P. chlamydosporia and D. flagrans are compatible to be applied toghether. An experiment in microcosm soil, in which predation of M. javanica by D. flagrans was assessed, the number of juveniles reduced in up to 72.7%. In a second assay, in microcosm soil, with different doses of the fungi applied together and separately, the application of P. chlamydosporia and D. flagrans reduced in up to 81.35% the number of juveniles when 10.000 chlamydospores of each fungus were applied per g of soil. Two experiments were conducted in a greenhouse to evaluate the effect of different concentration of P. chlamydosporia and D. flagrans in the control M. javanica and growth of tomato. The number of galls, number of eggs, height and dry weight of plants were evaluated. In both experiments the antagonists reduced the number of galls and egg production of root-knot nematode and did not affect plant height. In the first experiment, the addition of P. chlamydosporia increased plant dry matter, what was not observed in second one. An assay, in greenhouse conditions, was also carried out to evaluate growth promotion and mineral nutrients content in the tomato plants depending on the application of P. chlamydosporia and D. flagrans in combination and separated. The content of N, P, K, Ca, Mg and S and dry matter of the plants were evaluated. The two fungi increased total dry matter and mineral nutrients content in tomato plants. The combination of the two antagonists provides greater control of root-knot nematode and proved to be a promising strategy in the biological control of plant nematodes. Growth promotion and the positive effect in the nutritional status of the plants inoculated with the studied fungi indicated the great potential of these organisms for agricultural use, not only for the control of nematodes but also by its direct effect on plant growth and for providing better use of fertilizers.
Testes in vitro e em casa de vegetação foram realizados com os objetivos de: (i) avaliar a compatibilidade dos fungos nematófagos Pochonia chlamydosporia (Pc) e Duddingtonia flagrans (Df); (ii) avaliar a influência do nematoide Meloidogyne javanica e de ambos os fungos nematófagos no desenvolvimento de plantas de tomate; (iii) estudar a ação dos fungos sobre o estado nutricional das plantas. Nos ensaios de compatibilidade de Pc e Df in vitro, com exceção do teste de antibiose, todos os testes de compatibilidade dos isolados indicaram que os organismos são compatíveis. No primeiro experimento no solo em microcosmo em que foi avaliado a predação de M. javanica por Df, houve redução no número de juvenis em até 72,7%. No segundo experimento em microcosmo, em que foram avaliadas doses dos fungos em conjunto e em separado, a aplicação em conjunto dos dois organismos aumentou o controle, reduzindo em até 81,35% o número de juvenis quando 10.000 clamidósporos de cada fungo foram aplicados por g de solo. Dois experimentos foram realizados em casa de vegetação para avaliar o efeito de diferentes concentrações dos fungos nematófagos Pc e Df, isoladamente ou em mistura, no controle de M. javanica e no crescimento do tomateiro. Foram avaliadas as variáveis: número de galhas g-¹ de raiz, número de ovos g-¹ de raiz, altura e massa seca das plantas. Em ambos os experimentos observou-se o efeito dos dois antagonistas na redução do número de galhas e de ovos do nematoide das galhas. Os tratamentos não influenciaram a altura das plantas nos dois experimentos. No experimento 1, a adição de Pc aumentou a massa seca das plantas, o que não ocorreu no experimento 2. Um ensaio em casa de vegetação também foi realizado para avaliar a promoção de crescimento e aquisição de nutrientes minerais no tomateiro em função da aplicação de ambos os fungos. Após 60 dias avaliou-se a massa seca das plantas e o conteúdo de N, P, K, Ca, Mg e S. Houve efeito positivo dos dois fungos aplicados sobre a massa seca total do tomateiro e conteúdo de nutrientes minerais nas plantas. Dos resultados obtidos, conclui-se que a ação conjunta dos dois antagonistas proporciona maior controle do nematoide das galhas, mostrando-se uma estratégia promissora no controle biológico de fitonematoides. Adicionalmente, a promoção de crescimento vegetal pelos dois fungos estudados, associada à melhoria do estado nutricional das plantas, indica o potencial de uso agrícola desses organismos, não apenas para o controle de nematoides, mas também por sua ação direta no desenvolvimento do tomateiro e na economia de fertilizantes.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-01-24T12:14:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 779866 bytes, checksum: 232c3693dbb394fcf079f5d50f5c175a (MD5)
Made available in DSpace on 2018-01-24T12:14:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 779866 bytes, checksum: 232c3693dbb394fcf079f5d50f5c175a (MD5) Previous issue date: 2017-02-23
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais
A micropropagação de mudas de bananeira vem se tornando cada vez mais comum devido ao ganho em escala e tempo na produção, além de se evitar a disseminação de patógenos, que ocorre frequentemente na propagação natural da cultura. Além disso, as mudas micropropagadas podem ser tratadas com microrganismos benéficos, que conferem proteção e vigor extras, agregando valor ao produto. O fungo Pochonia chlamydosporia já é conhecido por sua capacidade de controlar nematoides fitoparasitas e por promover o crescimento vegetal. Sendo assim, este trabalho foram avaliados os benefícios que esse fungo endofítico pode agregar ao ser introduzido em mudas micropropagadas de bananeira durante o período de aclimatação, antes de serem expostas ao contato com o nematoide das galhas radiculares, Meloidogyne javanica. Doses do produto Rizotec®, à base do isolado Pc-10 do fungo P. chlamydosporia, a fim de gerarem concentrações de 2.000, 3.000, 4.000 e 5.000 clamidósporos.g -1 de substrato, foram comparadas quanto à capacidade de conferir proteção e promover crescimento às mudas de banana. As diferentes concentrações do fungo resultaram em redução do número de galhas e de ovos de M. javanica por grama de raiz. O número de galhas e de ovos de M. javanica.g -1 de raízes, na concentração de 5.000 clamidósporos.g -1 de substrato, foram reduzidos em até 47,6% e 67%, respectivamente, em relação ao tratamento controle. Para as variáveis de desenvolvimento da planta, a altura da parte aérea, massa da parte aérea seca, diâmetro do pseudocaule e massa fresca das raízes de bananeira houve maior incremento na concentração de 5.000 clamidósporos.g -1 de substrato quando comparado ao controle. O fungo foi detectado colonizando as raízes das plantas e o substrato ao final do experimento, mostrando sua capacidade de se instalar, multiplicar e sobreviver no ambiente da muda micropropagada, e foi eficiente na redução dos danos causados pelo nematoide e na promoção do crescimento das plântulas de bananeira.
Micropropagation of banana seedlings has become increasingly common due to the gain in scale and time in the production, as well as avoiding the spread of pathogens, which occurs frequently in the natural propagation of the crop. In addition, micropropagated seedlings may be treated with beneficial microorganisms, which provide extra protection and vigor, adding value to the product. The fungus Pochonia chlamydosporia is already known for its ability to control plant-parasitic nematodes and to promote plant growth. Thus, this work evaluated the benefits that this endophytic fungus can add if introduced in micropropagated seedlings during the acclimatization period, before they are exposed to contact with the root gall nematode, Meloidogyne javanica. Doses of the Rizotec® product, based on the P. chlamydosporia fungus Pc-10 isolate, to generate 2000, 3000, 4000 and 5000 chlamydospore.g -1 concentrations in the substrate were compared for their ability to confer protection and promote the growth of banana seedlings. The different concentrations of the fungus resulted in a reduction in the number of galls and eggs of M. javanica per gram of root. The number of root galls showed a greater reduction in the concentration of 5,000 chlamydospores.g -1 than in the other treatments, with a reduction of up to 47.6% when compared to the control treatment. The number of eggs of M. javanica.g -1 of roots obtained a reduction of 67% at the concentration of 5,000 chlamydospores.g -1 of substrate, in relation to the control treatment. The dry shoot mass increased by up to 23% to 5,000 chlamydospores.g - soil. The diameter of the pseudostem also increased with the fungus application, showing an increase of 14%. The fresh root mass of the plants was also higher in the treatments with the fungus, with a 11.4% increase in the concentration of 5,000 chlamydospores.g -1 , in relation to the control treatment. The fungus was detected colonizing the roots of the plants and the substrate at the end of the experiment, showing its ability to install, multiply and survive in the micropropagated seedling environment, and was efficient in reducing the nematode damage and in promoting banana seedling growth.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1867425 bytes, checksum: f26d8b051d4ec39dd9de144658e3edf1 (MD5) Previous issue date: 2008-07-09
The in vitro action of the nematophagous fungi Pochonia chlamydosporia (VC1 and VC4), Paecilomyces lilacinus, Duddingtonia flagrans (AC001) and Monacrosporium thaumasium (NF34), on eggs of Taenia saginata and capsules eggs of Dipylidium caninum was evaluated. A hundred fifty thousand eggs of T. saginata (experimental assay 1) and a hundred fifty thousand eggs capsules of D. caninum (experimental assay 2) were used. These eggs were maintained in plates of Petri containing the isolated fungi and without fungi (controls), in medium water-agar 2% (AA2%), where they grew for 10 days, being made 25 repetitions for each group. In of five, 10 and 15 days, about a hundred eggs were removed of each plate and placed in glass sheets with a drop of Amam blue 1%, and evaluated in agreement with the following parameters: type 1, physiologic and biochemical effect without morphological damage to the eggshell, with hyphae adhered to the eggshell; type 2, lytic effect with morphological change of the embryo and eggshell, without hyphal penetration through eggshell; and type 3, lytic effect with morphological change of the embryo and eggshell, besides hyphal penetration and internal egg colonization. In the experimental assay 1, the isolated fungi P. chlamydosporia (VC1 and VC4) and P. lilacinus presented ovicidal activity for the effects of the types 1, 2 and 3 on eggs of T. saginata, while the isolated fungi D. flagrans (AC001) and M. thaumasium (NF34) only presented effect of the type 1. In the experimental assay 2, the isolated fungi D. flagrans (AC001) and M. thaumasium (NF34) only presented effect of the type 1 for all the analyzed intervals. The isolated fungi of the P. chlamydosporia (VC1 and VC4) and P. lilacinus, presented effects of the type 1, 2 and 3 in the intervals of five, 10 and 15 days. At the end of the experiments 1 and 2, was demonstrated that the isolated P. chlamydosporia (VC1 and VC4) and P. lilacinus acted in a negative effect on eggs of T. saginata and capsules eggs of D. caninum, and the effect can be considered promising candidates in the biological control of those helminths.
Com o objetivo de avaliar a ação in vitro dos fungos nematófagos Pochonia chlamydosporia (VC1 e VC4), Paecilomyces lilacinus, Duddingtonia flagrans (AC001) e Monacrosporium thaumasium (NF34), sobre ovos de Taenia saginata e cápsulas ovígeras de Dipylidium caninum, foram utilizados cento e cinqüenta mil ovos de T. saginata (ensaio experimental 1) e cento e cinqüenta mil cápsulas ovígeras de D. caninum (ensaio experimental 2). Esses ovos foram vertidos em placas de Petri contendo os isolados fúngicos e sem fungo (controle), em meio ágar-água 2% (AA2%), onde cresceram por 10 dias, sendo feitas 25 repetições para cada grupo. Nos intervalos de cinco, 10 e 15 dias, cerca de cem ovos foram retirados de cada placa e colocados em lâminas de vidro com uma gota de azul de Amam 1%, para serem avaliados de acordo com os seguintes parâmetros: efeito do tipo 1: efeito fisiológico e bioquímico sem prejuízo morfológico à casca, onde são visualizadas as hifas aderidas à casca do ovo; efeito do tipo 2: efeito lítico com alteração morfológica da casca e embrião; e efeito do tipo 3: efeito lítico com alteração morfológica do embrião e da casca, além de penetração de hifas e colonização interna do ovo. No ensaio experimental 1, os isolados fúngicos P. chlamydosporia (VC1 e VC4) e P. lilacinus, apresentaram atividade ovicida para todos os efeitos dos tipos 1, 2 e 3 sobre ovos de T. saginata, enquanto os isolados fúngicos D. flagrans (AC001) e M. thaumasium (NF34), só apresentaram efeito do tipo 1. No ensaio experimental 2, os isolados fúngicos D. flagrans (AC001) e M. thaumasium (NF34), também só apresentaram efeito do tipo 1, para todos os intervalos analisados. Já os isolados fúngicos do fungo P. chlamydosporia (VC1 e VC4) e P. lilacinus, apresentaram efeitos do tipo 1, 2 e 3 nos intervalos de cinco, 10 e 15 dias. Ao final dos ensaios experimentais 1 e 2, ficou demonstrado que os isolados P. chlamydosporia (VC1 e VC4) e P. lilacinus, agiram de forma negativa sobre ovos de T. saginata e cápsulas ovígeras de D. caninum, e desta forma, podem ser considerados candidatos promissores no controle biológico desses helmintos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1301950 bytes, checksum: 6fbbf4b2a61f2a6e15625bb5f54e5cd6 (MD5) Previous issue date: 2008-02-19
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
The in vitro effects of four isolates of the nematophagous fungi Duddingtonia flagrans (AC001), Monacrosporium sinense (SF53) and Pochonia chlamydosporia (VC1 and VC4) on eggs of Fasciola hepatica and Schistosoma mansoni was evaluated in two assays (A and B). Eggs of F. hepatica (assay A) and S. mansoni (assay B) were incubated in Petri dishes with 2% water-agar inoculated with the grown fungal isolates and a control without fungus. After seven, 14 and 21 days post- inoculation, one hundred eggs were removed and classified according to the following parameters: type 1, lytic effect without morphological damage to eggshell; type 2, lytic effect with morphological alteration of embryo and eggshell; and type 3, lytic effect with morphological alteration of embryo and eggshell, with hyphal penetration and internal egg colonization. In assay A, D. flagrans (AC001) and M. sinense (SF53) showed results only for type-1 effect on F. hepatica eggs, but with no significant difference (p>0.01) between them. P. chlamydosporia (VC1 and VC4) showed percentage results for ovicidal activity of type-1, -2 and -3 effects on F. hepatica eggs, with type-3 effect of 12.8% (VC1) and 16.5% (VC4); 14.4% (VC1) and 18.7% (VC4), 20.1% (VC1) and 21.5% (VC4) at seven, 14 and 21 days respectively. At the end of assay A no difference was found in the action of VC1 and VC4 for type-1, -2 and -3 effects over the three studied periods. In assay B, D. flagrans (AC001) and M. sinense (SF53) showed percentage results only for type 1 effect on S. mansoni eggs, with no significant difference (p>0.01) between them. P. chlamydosporia showed ovicidal activity on S. mansoni eggs with percentage results for type-1, -2 and -3 effects showing type 3 effect of: 26.6% (VC1) and 17.2% (VC4); 25.6% (VC1) and 22.6% (VC4); 26.3% (VC1) and 23.0% (VC4) at seven, 14 and 21 days respectively. At the end of the assay B, no difference was found in the action between the isolates VC1 and VC4 for type-1, -2 and -3 effects as well. The results of the A and B in vitro assays showed that P. chlamydosporia (VC1 and VC4) negatively affected F. hepatica and S. mansoni eggs and can therefore be used as biological control agent for these helminths.
Avaliou-se, em dois ensaios experimentais (A e B), a ação in vitro de quatro isolados de fungos nematófagos dos gêneros Duddingtonia flagrans (AC001), Monacrosporium sinense (SF53) e Pochonia chlamydosporia (VC1 e VC4) sobre ovos de Fasciola hepatica e Schistosoma mansoni. Ovos de F. hepatica (ensaio A) e ovos de S. mansoni (ensaio B) foram vertidos em placas de Petri com ágar-água 2% com os isolados fúngicos crescidos, e em placas de Petri sem fungo como controle. Ao completarem sete, 14 e 21 dias, aproximadamente cem ovos foram removidos e classificados de acordo com os seguintes parâmetros: efeito do tipo 1, efeito lítico sem prejuízo morfológico à casca do ovo; efeito do tipo 2, efeito lítico com alteração morfológica da casca e embrião; e efeito do tipo 3, efeito lítico com alteração morfológica do embrião e da casca, além de penetração de hifas e colonização interna do ovo. No ensaio A, os fungos D. flagrans (AC001) e M. sinense (SF53) apresentaram resultados percentuais somente para o efeito do tipo 1 sobre os ovos de F. hepatica, porém sem apresentar diferença significativa (p>0,01) entre eles. O fungo P. chlamydosporia (VC1 e VC4) demonstrou resultados percentuais de atividade ovicida para os efeitos dos tipos 1, 2 e 3 sobre os ovos de F. hepatica, com efeito do tipo 3 de 12,8% (VC1) e 16,5% (VC4); 14,4% (VC1) e 18,7% (VC4), 20,2% (VC1) e 21,5% (VC4), respectivamente aos sete, 14 e 21 dias. Ao final do ensaio experimental A, não foi observada diferença na ação de VC1 e VC4 para os efeitos dos tipos 1, 2 e 3 ao longo dos três períodos estudados. No ensaio experimental B, os fungos D. flagrans (AC001) e M. sinense (SF53) apresentaram somente resultados percentuais para o efeito do tipo 1 sobre os ovos de S. mansoni, sem contudo apresentar diferença significativa (p>0,01) entre eles. P. chlamydosporia demonstrou atividade ovicida sobre ovos de S. mansoni com resultados percentuais para os efeitos dos tipos 1, 2 e 3 apresentando um efeito do tipo 3 de 26,6% (VC1) e 17,2% (VC4); 25,6% (VC1) e 22,6% (VC4); 26,3% (VC1) e 23,0% (VC4) respectivamente aos sete, 14 e 21 dias. Contudo ao final do ensaio experimental B, também não foi observada diferença na ação entre os isolados VC1 e VC4 para os efeitos dos tipos 1, 2 e 3. Os resultados dos ensaios experimentais in vitro A e B demonstraram que P. chlamydosporia (VC1 e VC4) influenciou de forma negativa os ovos de F. hepatica e S. mansoni, e assim pode ser considerado como um potencial candidato a controlador biológico desses helmintos.

O fungo Pochonia chlamydospoia é um potencial agente de controlo biológico dos nemátodes-das-galhas-radiculares. Com este trabalho, pretendeu-se avaliar a eficácia de inoculações de clamidósporos no solo, no estabelecimento de uma população do fungo no solo e na raiz de tomateiro em estufa com níveis de densidade iguais ou superiores aos considerados como necessários para um eficaz controlo dos nematodes-das-galhas-radiculares. Ao longo de dois anos de ensaio, fórum efetuadas inoculações do isolado PcMR e avaliada a densidade de fungo no solo e na raiz, As inoculações efetuadas permitiram estabelecer uma população de P. chlamydosporia no solo e atingir os valores de densidade pretendidos. No entanto, os valores pretendidos para colonização da raiz pelo fungo foram atingidos apenas no primeiro ano. Foi igualmente demonstrada a capacidade do fungo em se manter no solo durante longos períodos de tempo mesmo na ausência de cultura e em condições adversas de humidade e temperatura. /ABSTRACT: Pochonia chlamydosporia is a potential root-knot nematode biological control agent. The aim of this work was to evaluate the effectiveness of chlamydospore inoculations at the soil, for the establishment at both soil and greenhouse tomato root, of a fungus population in density levels equal or superior to those considered as needed for an effective control of root-knot nematode. Along two years, several inoculations using the Portuguese isolate PcMR were made and the density of fungus at the soil and roots studied. These inoculations allowed the establishment of a population of P. chlamydosporia at the soil and achieve the desired density values. However, only in the first year of assay, the desired values of root colonization by fungus were achieved. lt was also demonstrated that P. chlamydosporia can survive for itself at the soil for a long period of time even in the absence of plant culture and in adverse moist and temperature conditions.

Orientador: Lourdes Campaner dos Santos
Coorientador: Taís Maria Bauab
Banca: Daniel Rinaldo
Banca: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro
Resumo: Este trabalho apresenta os resultados da pesquisa de metabólitos secundários ativos produzidos por fungos endofíticos associados às partes aéreas (folhas, escapos e capítulos) de Paepalanthus chiquitensis (Eriocaulaceae). Entre os 25 fungos isolados da espécie de Eriocaulaceae, o Fusarium sp. foi o fungo mais promissor quanto à atividade antimicrobiana para as cepas de bactérias Gram-negativa Escherichia coli e Salmonella setubal, da bactéria Gram-positiva Staphylococus aureus e para a levedura Candida albicans resistente ao fluconazol, e ainda exibiu a capacidade bactericida e fungicida. Outro fungo selecionado foi o Bipolaris sp. isolado das folhas de P. chiquitensis devido a sua diversidade química. O cultivo dos fungos em Potato Dextrose Broth (PDB) em escala ampliada resultou no extrato acetato de etila (EAcOEt) que foram purificados por métodos cromatográficos em escala preparativa. A identificação/elucidação por métodos espectrométricos e espectroscópicos (EM, IV, UV, RMN mono e bidimensionais) forneceu as substâncias: 3,4-Piridinadiamina, N4-1-metil-5-(3'-buten-1-il) (S1), ácido fusárico (S2), 2-(1H-indol-6-il)-acético (S3), 2-Piridinametilamina-N8-metil-5-hexanoato (S4) e o sesterterpeno terpestacina (S5), Etanoato de etila-2-(2-acetil-4,6-diidroxifenil) (B4) e um alcalóide inédito na literatura (B1). Com este trabalho, observamos que os fungos endofíticos estudados possuem sua química completamente distinta quando comparada com as classes de substâncias isoladas de espécies vegetais de Eriocaulaceae, sendo uma importante fonte de novos produtos naturais com potencial atividade biológica. Este trabalho contempla também o estudo dos efeitos de modificadores epigenéticos e íons metálicos na diversificação metabólica do fungo Pochonia chlamydosporia (ATCC)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: This work presents the results of the research of active secondary metabolites produced by endophytic fungi associated with the aerial parts (capitulae, scapes and leaves) of Paepalanthus chiquitensis (Eriocaulaceae). Among the 25 species of fungi isolated from the specie of Eriocaulaceae, the Fusarium sp. was the fungus that showed the best biological activity against the strains of Gram-negative bacteria Escherichia coli and Salmonella setubal, the Gram-positive bacterium Staphylococus aureus and Candida albicans yeast resistant to fluconazole. The Fusarium sp also displayed bactericidal and fungicidal effects. The research also presents the chemical studies of the fungus Bipolares sp., isolated from the leaves of P. chiquitensis which was selected due to its chemical profile. The large scale cultivation of both fungi afforded the respective ethyl acetate extracts which were purified by preparative chromatography methods. The chemical structures were elucidated by spectrometric and spectroscopic methods (MS, IR, UV, mono- and bidimensional NMR affording the following substances from the Fusarium sp.: 5-(but-3-en-1-yl)-N4-methylpyridine-3,4-diamine (S1), fusaric acid (S2), 2-(1H-indol-6-yl)-acid (S3), 5-Butil-2-pyridinecarboxamide (S4) and the sesterterpene fusaproliferin (S5), while for the Bipolaris sp.: Acetic acid, (2-acetyl-3,5-dihydroxyphenyl)-, ethyl ester (B4) and a new alkaloid (B1). Herein, we also showed the study of the effects of epigenetic modifiers and metal ions in metabolic diversity from the fungus Pochonia chlamydosporia (ATCC). The presence of anacardic acid in the liquid medium afforded 2.6 times more ethyl acetate extract compared with the PDB (Potato Dextrose Broth) control. Besides, the analysis by analytical HPLC... (Complete abstract click electronic access below)
Mestre

Made available in DSpace on 2018-09-13T23:30:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12247_LORENA SOUZA CASTRO.pdf: 3835850 bytes, checksum: ec425d49543606192868868180011e7b (MD5) Previous issue date: 2018-07-31
Moluscos pertencentes à espécie Pseudosuccinea columella apresentam comportamento aquático e habitam coleções hídricas dulcícolas situadas especialmente em regiões neotropicais. São caramujos hermafroditas, possuindo alta capacidade reprodutiva e com massas ovígeras postas em substratos submersos nas margens dos criadouros expostas ao ressecamento e a patógenos como fungos. Trematódeos do gênero Fasciola são parasitos dos ductos biliares e causam grandes perdas econômicas. Os caramujos, são os primeiros hospedeiros intermediários do espécime Fasciola hepatica e seu controle é umas das ferramentas para o controle da fasciolose. Praticamente nada é sabido sobre a susceptibilidade de massas ovígeras a fungos. Pela primeira vez, a susceptibilidade de massas ovígeras de P. columella ao fungo Pochonia chlamydosporia (isolado Pc10) foi demonstrada sob condições laboratoriais. Para isto, dois grupos experimentais foram edificados: o grupo controle, na qual não verificou a exposição ao fungo, e o grupo tratado, caracterizado pela exposição das massas ovígeras ao isolado fúngico (Pc-10) durante 25 dias. Todo o experimento foi conduzido em duplicata constando de cinco réplicas para cada repetição, utilizando um total de quarenta massas ovígeras. Semanalmente, ao longo de todo o experimento, as massas ovígeras de ambos os grupos experimentais (controle e tratado) foram analisadas sob auxílio de microscópio estereoscópico para a contabilização de moluscos eclodidos. Em paralelo a este estudo, avaliou-se o potencial ovicida do extrato fúngico de P. chlamydosporia da cepa (Pc-10) em 900 ovos de F. hepatica. Para isto, os ovos foram previamente embrionados em B.O.D e posteriormente para estimular a eclosão miracidial, foram expostos à luz artificial e temperatura controlada, do qual foi inoculado no meio contendo os ovos e o extrato do fungo em 8 diferentes concentrações. Os resultados revelaram que o processo de embriogênese foi inibido pelo ascomiceto em questão, sugerindo sua aplicabilidade em programas de controle biológico deste limneídeo. Em adição, a ultraestrutura revelou ocorrência de diferentes tipos de interações estabelecidas entre as massas ovígeras do molusco com os micélios de P. chlamydosporia, as quais resultaram em importantes modificações estruturais nestas, comprometendo, por conseguinte, a viabilidade dos ovos. Em relação ao extrato fúngico enzimático, ambos interferiram signitivamente na viabilidade dos ovos, sendo o micélio dependente de dias para crescimento e estabelecimento do fungo em massas ovígeras e o extrato sendo eficiente avaliado em um período de 60 minutos, sobre concentrações nas quais, as menores dosagens, houve colabamento do ovo e em maiores, o desintegramento parcial da estrutura externa e rompimento.

A cultura do tabaco acumula perdas consideráveis em decorrência do ataque de nematoides das galhas e a constante busca de alternativas para controle desta praga constitui-se numa preocupação mundial. Com o intuito de avaliar a eficiência de dois agentes de controle biológico formulados à base dePochoniachlamydosporia (Pc-10) e Purpureocillium lilacinum (Pae 10)no manejo de Meloidogyneincognitae M.javanicaem mudas de tabaco, foram realizados os seguintesexperimentos: (1)in vitro, no qualse testou a compatibilidade comos fungicidasà base de óxido cuproso, de metalaxil M + mancozebe ou de iprodiona, e a compatibilidade entre eles; (2) em casa de vegetação, para analisaro efeito daaplicação deproduto formulado com P. chlamydosporia (Pc-10)e P. lilacinum (Pae 10)aos 5, 10, 15 e 20 dias antesdo transplantio, e(3) em campopara medir a eficiência de uma ou duas aplicações de produto a base deP. chlamydosporia. Os resultados obtidos in vitro indicaram que os fungos P. chlamydosporia eP. lilacinumnãointeragem entre si, e que os fungicidas testados não afetaramo desenvolvimento destes. Os experimentos em casa de vegetação indicaram quea aplicação do produto a base de P. lilacinumreduziu 56 e 59% na média da massa e número de ovos aos 5 e 15 dias, respectivamente, após o transplantio. Ao passo que, P. chlamydosporia apresentou redução na média no número de ovos e na massa de ovos de M. javanica em todas as épocas testadas.Já em campo, o produto formulado com P. chlamydosporia, em uma aplicação, em solo arenoso, reduziu o número de ovos e índice de galhas, porém, não aumentou a produtividade e qualidade do tabaco nas duas áreas avaliadas. Conclui-se, portanto, que o nematicida a base de P. chlamydosporia, é um produto eficiente na redução de M. incogita and M. javanica.
Nematode attack results into considerable cumulative losses in the tobacco crop, so the constant search for alternatives to manage this pest constitutes a global concern. In order to evaluate the efficiency of two biological control agents formulated based on Pochonia chlamydosporia (Pc-10) and Purpureocillium lilacinum (Pae 10) in management of Meloidogyneincognita and M. javanica in the tobacco crop, the following experiments were performed (1) in vitro, in order to evaluate compatibility with cuprous oxide, metalaxyl M + mancozeb or iprodione fungicides and also compatibility among them; (2) in greenhouse, to analyze the effect of P. chlamydosporia and P. lilacinum at 5, 10, 15 and 20 days before transplanting, and (3) in the field to measure the effectiveness of one and two applications of P. chlamydosporia. Results in vitro showed that there is no interaction between P. chlamydosporia and P. lilacinum, and their developments were not affected by the fungicides tested. The experiments performed in the greenhouse showed a reduction of 56 and 59%in the mass and number of eggs at 5 and 15 days after application, respectively,when the nematicide formulated with P. lilacinumwas used. On the other side, the product formulated with P. chlamydosporia reduced the number and mass of eggs ofM. javanica, regardless the time of application. Regarding the field results, the nematicide formulated with P. chlamydosporia, in sandy soil and one application, reduced the number and index of eggs, however, with no increase of tobacco yield for both areas. We conclude the nematicide formulated with P. chlamydosporia is an effective component of management ofM. incognita andM. javanica

Dissertação de Mestrado em Biodiversidade e Biotecnologia Vegetal apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia
Os nemátodes parasitas de plantas (NPP) são altamente especializados, sendo considerados como uma das maiores ameaças às culturas agrícolas. Os NPP economicamente mais importantes, com grande impacto nas culturas a nível mundial, são os nemátodes-das-galhas-radiculares (NGR), Meloidogyne spp., e os nemátodes de quisto da batateira (NQB), Globodera spp. Os NGR estão entre as pragas agrícolas economicamente mais prejudiciais que atacam uma grande variedade de culturas. Espécies de Meloidogyne, como por exemplo M. incognita, são pragas graves presentes em todos os locais, que têm vindo a ser consideradas como as “principais” espécies pois infetam diversas culturas hortícolas importantes, como, por exemplo, o tomate. Os NQB, G. pallida e G. rostochiensis, são uma das pragas mais especializadas e bem-sucedidas na agricultura em todo o mundo, causando grandes perdas nas culturas de batata. O controlo dos NPP envolve a manipulação das densidades de nemátodes para níveis não prejudiciais utilizando diversas estratégias para os reduzir ou eliminar. O controlo biológico através da ação de organismos vivos pode fornecer um método suplementar para a gestão dos NPP. Esta estratégia de gestão baseia-se em métodos ambientais e economicamente eficientes para eliminar pragas e doenças. No entanto, o controlo biológico precisa de ser integrado com outros métodos de controlo, uma vez que é menos eficaz e atua mais lentamente que o controlo químico. O fungo nematófago Pochonia chlamydosporia parasita fêmeas sedentárias e ovos de NGR e NQB. O potencial doa isolados de P. chlamydosporia como agentes de controlo biológico tem sido bastante estudado em ensaios de vasos e campo. No entanto, a eficácia reduzida de alguns isolados no controlo de populações de nemátodes tem sido demonstrada em alguns estudos. A variação intrínseca entre diferentes isolados de P. chlamydosporia requer uma seleção prévia. O processo de seleção é baseado em três critérios-chave, baseados na capacidade de: produzir clamidósporos; colonizar a rizosfera; e parasitar ovos de nemátodes.O objetivo principal do presente estudo foi avaliar o potencial de isolados portugueses de P. chlamydosporia associados a Meloidogyne spp. Especificamente, os isolados foram identificados e caraterizados a nível molecular e foi avaliada a sua capacidade de produzir clamidósporos, de colonizar a rizosfera e de parasitar ovos de NPP. Foram utilizados treze isolados de P. chlamydosporia (Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX e os isolados de referência Pc2, Pc10 e 392). A variação genética entre isolados foi avaliada através da técnica de PCR com primers de β-tubulina, ERIC e ITS. Os isolados foram selecionados através de bioensaios in vitro no que diz respeito à sua capacidade de produzir clamidósporos, de colonizar a rizosfera do tomate e parasitar os ovos de M. incognita e de G. pallida.A caraterização molecular de P. chlamydosporia revelou diferenças entre P. chlamydosporia var. chlamydosporia e var. catenulata. Para alguns isolados foram obtidos padrões ERIC-PCR muito semelhantes. A técnica de ERIC-PCR pode ser usada para identificar variações intraespecíficas dentro da espécie.Os melhores produtores de clamidósporos nas três réplicas biológicas foram os isolados II, III, IV e VI. A viabilidade foi superior a 80% para a maior parte dos isolados. A maioria dos isolados colonizou extensivamente a rizosfera do tomateiro (mais de 80% dos fragmentos da raiz), exceto os isolados Ib, IX, IV e V. A proporção de ovos parasitados, detetados em placas de agar, foi baixa para ambas as espécies de nemátodes (inferior ou igual a 60% para NGR e inferior a 55% para NQB). Os isolados Ia e VIII foram os melhores parasitas de NGR, e os isolados V e Pc2 foram os melhores parasitas de NQB. Os isolados Ib e IX foram os piores isolados nos três bioensaios in vitro. Os isolados Ia e VIII poderão ser considerados como potenciais agentes de controlo biológico. Embora, estes isolados não tenham sido os melhores produtores de clamidósporos, os resultados foram consistentes entre replicações biológicas. Além disso, os clamidósporos produzidos por estes dois isolados possuíam elevada viabilidade. São também bons colonizadores das raízes do tomateiro e revelaram serem bons parasitas de ovos em ambas as espécies de nemátodes estudadas. As análises moleculares, bioquímicas e biológicas são decisivas na seleção de potenciais agentes de controlo biológico, particularmente no caso de P. chlamydosporia, devido à elevada variabilidade entre isolados.
Plant-parasitic nematodes (PPN) are highly specialised parasites recognized as one of the greatest threat of agricultural crops. The most economically important PPN which have a great impact on crops worldwide are the sedentary root-knot nematode (RKN), Meloidogyne spp. and potato cyst nematodes (PCN), Globodera spp. Root-knot nematodes are among the most economically damaging agricultural pests attacking a wide range of horticultural and field crops. Meloidogyne species, such as M. incognita, are serious ubiquitous pests being considered as “major” species and infect many vegetable crops, such as tomato. Potato cyst nematodes (PCN), G. pallida and G. rostochiensis, are one of the most specialized and successful PPN pests in agriculture around the world causing major losses in potato crops. The control of PPN involves the manipulation of nematode densities to non-injurious levels using several strategies to reduce or eliminate nematodes. Biological control through the action of living organisms may provide an additional method for the management of these pests. This management strategy is set to promote environmental and economically efficient methods to eliminate diseases and pests. However biological control needs to be integrated with other control methods, as it is less effective and slower acting than chemical control. The facultative nematophagous fungus Pochonia chlamydosporia parasitises sedentary females and eggs of RKN and PCN. The biological control potential of P. chlamydosporia isolates has been widely studied in pots and fields experiments. However, the reduced efficacy of selected isolates in controlling nematode populations has been demonstrated in some studies. The intrinsic variation between different isolates of P. chlamydosporia requires prior selection. The selection process is based on rapid in vitro tests to evaluate three important criteria, the ability: to produce chlamydospores; to colonise the rhizosphere; and to parasitise egg nematodes.The main goal of the present study was to evaluate the potential of Portuguese P. chlamydosporia isolates associated with Meloidogyne spp. Specifically isolates were identified and characterized at the molecular level and their ability to produce chlamydospores, colonise the rhizosphere and parasitise PPN eggs was evaluated.Thirteen P. chlamydosporia isolates (Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX and reference isolates Pc2, Pc10 and 392) were evaluated. Genetic variation between isolates was examined using β-tubulin-PCR, ERIC-PCR and ITS-RFLP and isolates were screened by in vitro bioassays for their ability to produce chlamydospores, colonise the rhizosphere of tomato and parasitise eggs of M. incognita and G. pallida.Molecular characterization of P. chlamydosporia revealed differences between P. chlamydosporia: var. chlamydosporia and var. catenulata. For some isolates, very similar ERIC-PCR patterns were obtained. ERIC-PCR can be used to identify intra-specific variation within the species.The best producers of chlamydospores in the three biological replicates were isolates II, III, IV and VI. The viability was higher than 80% for most isolates. Most of isolates extensively colonised the rhizosphere of tomato (more than 80% root fragments) except isolates Ib, IX, IV and V. The proportion of parasitised eggs, detected on agar plates, was low for both nematode species (less than or equal to 60% for RKN and less than 55% for PCN). Isolates Ia and VIII were best parasites of RKN, and isolates V and Pc2 were the best parasites of PCN. Isolates Ib and IX were the worst isolates in the three in vitro bioassays. Isolates Ia and VIII should be considered as good candidates to be developed as potential biological control agents. Although, they were not the best chlamydospore producers, the results were consistent between biological replicates. In addition, they presented a high rate of germinated chlamydospores, were considered good colonisers of tomato roots and revealed to be good parasites of eggs of both species of nematodes. Molecular, biochemical and biological analyses are determinant in the screening of potential biological control agents, particularly in the case of P. chlamydosporia, due to the high variability among isolates.

O fungo nematófago Pochonia chlamydosporia, estirpe PcMR, tem a capacidade de produzir clamidósporos em cultura líquida. Neste estudo quantificou-se o efeito da adição de hidratos de carbono (glucose, sacarose ou amido) ao meio basal de produção de clamidósporos (ALMA), e o efeito da substituição da lecitina no meio ALMA por outro lípido (ácidos gordos ou triglicéridos). Determinou-se as curvas de crescimento de clamidósporos e peso seco para o meio basal e meios ALMA + glucose, sendo medido o consumo de albumina, lecitina e glucose. Foram obtidas produções elevadas de clamidósporos (superior a 5X105 clamidósporos/ml) nos meios com 0 a 5g/L de glucose ou sacarose. A adição de maiores quantidades de hidratos de carbono ao meio ALMA leva à diminuição da produção de clamidósporos e a um aumento proporcional do peso seco. Ácidos gordos insaturados no meio ALMA permitem obter produções de clamidósporos superiores às obtidas com ácidos gordos saturados ou triglicéridos mas inferiores às obtidas com lecitina. No entanto, o peso seco final é menor quando se utiliza meio ALMA contendo ácidos gordos insaturados do que com quando se utilizam os restantes lípidos mais complexos estudados. O fungo desenvolve-se mais rapidamente nos meios com glucose, embora nesses meios a produção de clamidósporos se inicie mais tarde. Com elevadas quantidades de glucose no meio, o consumo de albumina é limitado, e a produção de clamidósporos é reduzida. Estes resultados mostram que os meios líquidos podem ser utilizados para a produção de elevadas quantidades de clamidósporos, permitem estabelecer alguns dos componentes mais importantes no processo de optimização industrial, e estabelecem a lecitina como o lípido mais importante na produção de clamidósporos.