Academic literature on the topic 'Polipeptídeos'

As NTPDases (nucleosídeo trifosfato difosfohidrolases) são enzimas que hidrolisam nucleosídeos di- e trifosfatados sob ativação de íons bivalentes. Uma atividade NTPDásica foi caracterizada em promastigotas de Leishmania infantum, um protozoário causador de leishmaniose visceral.Neste trabalho, a NTPDase 1 foi purificada de preparação de promastigotas usando como estratégia eletroforese em gel não-desnaturante e os detergentes deoxicolato de sódio e Triton X-100, os quais preservam a atividade fosfohidrolítica desta enzima. Após eletroforese, incubação do gel com ATP e inibidor de ATPases do tipo P permitiu a visualização de uma única banda com depósito branco de fosfato de cálcio. Esta banda ativa foi isolada e por SDS-PAGE e coloração pela prata foi identificada como polipeptídeos de 50 e 47 kDa. Por Western blot, os dois polipeptídeos foram reconhecidos pelo soro imune anti-LbB1LJ, o qual reconhece especificamente a porção N-terminal do domínio B de NTPDases 1 de Leishmania. Por espectrometria de massas, a identidade da NTPDase 1 foi confirmada pela identificação de seis peptídeos trípticos coincidentes com a NTPDase 1 anotada em seu genoma (NCBI gi|134068433), uma cobertura de 19% de sua sequência primária. As atividades ATPásica (555 ± 93 nmol Pi x mg-1 x min-1) e ADPásica (644 ± 38 nmol Pi x mg-1 x min-1) revelaram um índice de purificação de aproximadamente 62 vezes e uma razão de atividade ATPase/ADPase de aproximadamente 1, confirmando a efetividade desta estratégia para o isolamento da NTPDase 1 de promastigotas de L. infantum.

Neste estudo, identificaram-se polipeptídeos associados à integridade da membrana plasmática (IMP) de espermatozóides suínos após o processo de congelamento/descongelamento. Por meio do perfil protéico do plasma seminal em SDS-PAGE, observou-se a presença de nove bandas polipeptídicas com pesos moleculares que variaram de 11,97 a 122,52kDa. Detectou-se que uma banda de 26,58kDa esteve associada à baixa IMP (<55%). Não foi verificada associação entre as outras bandas e a IMP. Conclui-se que o fator polipeptídico de 26,58kDa está associado à baixa integridade da membrana plasmática do espermatozóide suíno após o congelamento/descongelamento.

Sete amostras citopáticas do vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) isoladas de casos clínicos e do sangue de bezerros de rebanhos com problemas reprodutivos foram analisadas. Todas as amostras caracterizadas possuíam uma mistura de vírus citopáticos (cp) e não-citopáticos (ncp), que foram clonados biologicamente, originando populações puras de vírus de cada biotipo. Os clones cp e ncp obtidos foram caracterizados antigenicamente com um painel de anticorpos monoclonais (MAbs) e quanto à expressão da proteína não-estrutural NS3. A análise de reconhecimento pelos MAbs revelou dois padrões de reatividade: 1. Em cinco casos, os vírus cp e ncp de uma mesma amostra mostraram-se antigenicamente muito semelhantes entre si, indicando tratar-se de verdadeiros "pares" de vírus, nos quais o vírus cp origina-se do ncp através de mutações ou recombinações; 2. Duas amostras, no entanto, continham vírus cp e ncp com diferenças antigênicas consideráveis entre si. A análise de polipeptídeos não-estruturais das amostras ncp através de Western immunoblot revelou uma única banda de reatividade, de massa aproximada de 125kDa, correspondente à proteína nãoestrutural NS23. As amostras cp expressaram, além da NS23, um polipeptídeo de massa aproximada de 80kDa, correspondente à NS3. Duas amostras cp apresentaram diferenças na migração da NS23. Uma amostra apresentou a NS23 com massa menor do que 125kDa, enquanto outra amostra apresentou duas bandas de reatividade, com massas menor e maior que a NS23 dos demais vírus, respectivamente. Esses resultados confirmam achados anteriores de que amostras de campo citopáticas do BVDV geralmente possuem vírus dos dois biotipos e que o fenótipo citopático está associado à expressão da proteína NS3. O isolamento de amostras citopáticas do sangue de animais clinicamente normais e de um feto, no entanto, demonstra que a ocorrência de vírus cp não se restringe à casos da Doença das Mucosas.

O presente artigo relata a caracterização inicial de 19 amostras do vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) isoladas no Brasil, com relação a aspectos biológicos, antigênicos e moleculares. Onze amostras foram isoladas de fetos bovinos, seis foram obtidas do sangue de animais clinicamente saudáveis de rebanhos com problemas reprodutivos e duas amostras foram isoladas de casos clínicos de enfermidade gastrentérica. Os casos de doença entérica afetaram animais jovens e cursaram com diarréia, às vezes sanguinolenta, erosões e ulcerações na mucosa oronasal e do trato digestivo, e eventualmente hemorragias digestivas e petéquias na vulva. Dezesseis amostras (84,2%), incluindo aquelas isoladas de fetos e dos casos clínicos, pertencem ao biotipo não-citopático (ncp). A replicação de outras três amostras (15,8%), foi caracterizada pelo aparecimento de vacuolização e destruição progressiva do tapete celular. A análise das amostras que produziram citopatologia, após clonagem, revelou tratar-se de populações mistas composta de vírus citopáticos (cp) e não-citopáticos. A análise de polipeptídeos virais através de SDS-PAGE seguida de "Western-immunoblot" revelou a produção da proteína não-estrutural NS3/p80 em células infectadas com as amostras cp. Em contraste, não se evidenciou a geração da NS3/p80 em células infectadas com as amostras ncp que produziram apenas o polipeptídeo precursor NS23/p125. A subsequente análise de reatividade frente a um painel de 15 anticorpos monoclonais (AcMs) revelou uma diversidade antigênica marcante entre os isolados, sobretudo na glicoproteína E2/gp53. Embora um AcM contra essa glicoproteína reagiu com 18 isolados (94,7%), outros nove AcMs anti-E2/gp53 reconheceram entre zero e 57,9% das amostras brasileiras. A grande variabilidade antigênica detectada entre as amostras brasileiras do BVDV pode ter importantes implicações para o diagnóstico e estratégias de controle e imunização contra o vírus.

<span class="texto">Tunicamicina (TM) é um antibiótico isolado de Streptomyces lysosuperficus, caracterizado inicialmente como uma substância com atividade inibidora da proliferação de bactérias, fungos e leveduras. Este antibiótico possui um efeito bloqueador da formação de N -acetilglicosamina, alterando de maneira significativa o processo de glicosilação das proteínas. Neste trabalho, verificamos que, em células de Aedes albopictus, a presença de TM acarreta uma drástica inibição da replicação do vírus Mayaro. Mesmo em baixas concentrações de TM (0,05mg/ml), o tratamento das células durante 24 horas produz uma inibição de 50% na produção de partículas virais infecciosas. Em concentrações mais elevadas, este anti-biótico diminuiu progressivamente a replicação do vírus Mayaro, atingindo valores de 98,5% de inibição, após 48h de tratamento. A análise por eletroforese em gel de poliacrilamida das proteínas virais previamente marcadas com metionina-[35S] revela que a TM nas concentrações de 0,05 mg/ml, 0,1 mg/ml e 0,15 mg/ml não afeta a síntese dos polipeptídeos do vírus Mayaro. Apenas em concentrações mais elevadas (0,5mg/ml) observam-se alterações na síntese e na mobilidade eletroforética das glicoproteínas virais. Estes dados sugerem que, em baixas concentrações, a TM pode afetar a replicação do vírus Mayaro em células de Aedes albopictus através de outros mecanismos.</span>

Um painel de anticorpos monoclonais (AcM) específicos contra o vírus da bronquite infecciosa das galinhas (VBIG) amostra Massachusetts M41 foi desenvolvido com a finalidade de possibilitar ferramentas para futuros estudos de amostras locais de VBIG. Os clones produtores de AcM foram detectados e caracterizados por ELISA, e para a determinação quanto à especificidade ao componente de VBIG foi utilizado western blotting (WB). Os híbridos produtivos foram clonados por diluição limitante, expandidos in vitro e mantidos em nitrogênio líquido. As bandas protéicas reconhecidas em WB pelos AcM apresentaram pesos moleculares que variaram de 180 a 30 kDa. Oito AcM reconheceram apenas um polipeptídeo e quatro ligaram-se ao polipeptídeo S (3, 18, 52 e 57) inteiro, com a banda de peso molecular aproximado de 180 kDa. Cinco AcM (5, 12, 41, 70 e 72) ligaram-se em mais de uma banda de VBIG. Outros sete AcM não se ligaram a nenhum polipeptídeo de VBIG. Entre os AcM que apresentam perspectivas de utilização em pesquisa e diagnóstico de VBIG incluem-se os produzidos pelo clone 42, dirigido contra S1, os produzidos pelos clones 34, 43 e 71, dirigidos contra S2, pelos clones 7 e 22, dirigidos contra M e pelos clones 15 e 50, cujos AcM reagiram contra a nucleoproteína N.

RESUMOMurchas vasculares em tomateiro constituem importante grupo de doenças incitadas por patógenos habitantes de solos, com destaque para Fusarium oxysporumf. sp. lycopersici, que ocasiona perdas significativas de produção. A introgressão de genes que expressam resistência é a principal medida de controle, mas, devido à rápida emergência de raças que suplantam a resistência, vem aumentando a importância do biocontrole, em integração com o controle genético. Objetivou-se avaliar a capacidade de isolados de rizobactérias, especialmente do gênero Bacillus, como agentes de biocontrole da murcha de fusário em tomateiro. O ensaio de laboratório consistiu na verificação da habilidade de os isolados atuarem como inibidores de crescimento micelial, além da detecção de genes envolvidos na expressão de polipeptídios de ação antimicrobiana. Em casa-de-vegetação, o ensaio foi composto por sementes microbiolizadas e adição, ao solo, de suspensão de propágulos de cada rizobactéria, no momento do transplantio das mudas de tomateiro. Todos os isolados de rizobactérias apresentaram controle variável do patógeno in vitro. Os isolados UFG-07 e UFG-10, com alta similaridade a Bacillus subtilis e Bacillus circulans, destacaram-se na supressão da doença. Resultados da PCR detectaram genes-alvo para expressão de polipeptídios, o que reforça a hipótese da ação de substâncias antimicrobianas no biocontrole.

INTRODUÇÃO: A Doença do Refluxo Gastroesofágico (DRGE), chegando até a faringe e laringe, pode cursar com intensa inflamação local e rica sintomatologia (Refluxo Laringofaríngeo RLF). Os estudos atuais não foram capazes de provar que o ácido refluído é o causador das alterações visualizadas na laringite crônica. O Fator de Crescimento Epidérmico (EGF) é um polipeptídeo produzido pelas glândulas salivares, sendo implicado na indução do crescimento epitelial, na inibição da secreção gástrica e na aceleração da cicatrização. Deficiência salivar deste fator foi encontrada na esofagite de refluxo, mas não há relatos sobre a concentração salivar de EGF em indivíduos com RLF. OBJETIVO: Determinar a concentração salivar do EGF em indivíduos com RLF. FORMA DE ESTUDO: Caso controle. CASUÍSTICA E MÉTODO: A concentração salivar de EGF de 39 indivíduos com RLF e 20 controles normais foi estudada pela técnica de ELISA. O RLF foi diagnosticado por história e exame videolaringoscópico característicos. Os 39 pacientes com RLF foram estratificados de acordo com os achados de endoscopia digestiva (com ou sem esofagite associada) e de acordo com a intensidade da laringite crônica. Foram, também, submetidos a manometria esofágica e pH-metria esofágica de 24 horas com dois canais. RESULTADOS: Constatou-se uma concentração de EGF significativamente menor nos indivíduos com RLF quando comparados aos controles normais (p=0,002). Não houve diferença estatisticamente significante na concentração salivar de EGF entre os indivíduos com RLF, nem em relação à presença de esofagite, nem quanto à intensidade da laringite. CONCLUSÕES: Este estudo sugere que uma deficiência na concentração salivar do Fator de Crescimento Epidérmico pode estar associada à patogenia da DRGE, e que este polipeptídeo poderia ser um co-fator na gênese do RLF.

O objetivo deste trabalho foi caracterizar bioquimicamente duas isolinhas de soja com alto teor de proteína. O aumento do teor de proteína nas isolinhas foi acompanhado por redução no teor de óleo e de carboidratos totais. Em relação à composição aminoacídica, o aumento do teor de proteína promoveu acréscimo em todos os aminoácidos, exceto glicina, alanina, metionina, cisteína e tirosina, mantendo a relação enxofre/nitrogênio. A quantificação dos polipeptídios mostrou que o aumento do teor de proteína manteve inalterado o teor das proteínas 7S, promoveu aumento no teor das proteínas 11S e, conseqüentemente, da relação 11S/7S. Pode haver melhoria na qualidade do farelo de soja das isolinhas, uma vez que as proteínas 11S têm melhor qualidade nutricional do que as proteínas 7S.

A prevenção das doenças cardiovasculares é, atualmente, uma das principais metas para o cuidado com a saúde nos países ocidentais. Os inibidores da HMG CoA redutase (estatinas) são os fármacos mais utilizados para a prevenção das doenças cardiovasculares devido a sua eficácia em reduzir os níveis de colesterol e por serem bem tolerados durante o tratamento. Apesar de serem eficazes, existe uma grande variabilidade interindividual à resposta ao tratamento com estatinas. Parte dessa variação pode ser explicada por fatores genéticos, que podem afetar tanto a farmacocinética quanto a farmacodinâmica desses fármacos. Na presente dissertação foram avaliados polimorfismos funcionais nos genes SLCO1B1 e SLCO1B3, que codificam os polipeptídeos transportadores de ânions orgânicos (OATPs) 1B1 e 1B3 respectivamente, e sua possível influência sobre a eficácia e segurança do tratamento com 20 mg diárias de sinvastatina em uma amostra de 161 indivíduos de ancestralidade européia da região metropolitana de Porto Alegre. Os genótipos dos polimorfismos 388A>G, 521T>C e 463C>A do gene SLCO1B1 e 334T>G e 699G>A do gene SLCO1B3 foram determinados por discriminação alélica com ensaios Taqman 5 -nuclease em PCR em tempo real. Polimorfismos do gene SLCO1B1 foram associados significativamente com a resposta ao tratamento com sinvastatina. A variante 388A>G foi significativamente associada com uma maior redução nos níveis de colesterol total e LDL colesterol nos pacientes tratados com sinvastatina (P = 0,011 e P = 0,013 respectivamente). Os haplótipos SLCO1B1*1b e SLCO1B1*14 foram associados significativamente com a redução dos níveis de LDL colesterol após 6 meses de tratamento (P = 0,016 e P = 0,019 respectivamente). As variantes do gene SLCO1B3 estudadas não parecem influenciar a resposta ao tratamento com sinvastatina. Os polimorfismos dos genes SLCO1B1 e SLCO1B3 não estão relacionados com o aparecimento de efeitos adversos devido ao uso de sinvastatina na amostra estudada. Os resultados relatados na presente dissertação demonstram a importância das variantes dos genes que codificam os OATPs para a farmacogenética dos inibidores de HMG CoA redutase. Entretanto, estudos em diferentes populações com as diferentes estatinas devem ser realizados futuramente para avaliar a influência dos polimorfismos dos OATPs na resposta às diferentes estatinas.
At present, cardiovascular disease prevention is the major goal of health care in western countries. HMG-CoA reductase inhibitors (statins) were the most utilized drugs in cardiovascular disease prevention due the high lipid-lowering efficacy and tolerance of treatment. Although a large interindividual variation in statin treatment response is frequently observed. Part of this variability could be explained by genetic factors that affect drug pharmacokinetics and pharmacodynamics. In the present study, we evaluated the influence of functional polymorphisms in SLCO1B1 and SLCO1B3 genes, those codifying organic anions transporters polypeptides (OATPs) 1B1 and 1B3 respectively, on simvastatin 20 mg per day treatment efficacy and tolerance in 161 subjects of European ancestry from Porto Alegre metropolitan region. The 388A>G, 521T>C and 463C>A SLCO1B1 gene polymorphisms and 334T>G and 699G>A SLCO1B3 gene polymorphisms were determined by allele discrimination with Taqman 5 -nuclease assays in real time PCR. SLCO1B1 gene polymorphisms were significantly associated with simvastatin treatment response. The 388A>G SNP was significantly associated with total cholesterol and LDL cholesterol reduction in patients treated with simvastatin (P = 0.011 e P = 0.013 respectively). SLCO1B1*1b and SLCO1B1*14 haplotypes were significantly associated with LDL cholesterol reduction 6 month treatment (P = 0.016 e P = 0.019 respectively). SLCO1B3 gene variants did not seem to influence the simvastatin treatment response. SLCO1B1 and SLCO1B3 gene polymorphisms were not related to the occurrence of adverse effects due to the use of simvastatin in the sample studied. The reported results in the present study demonstrated the OATPs variants are important to the HMG-CoA reductase inhibitor pharmacogenetics. However, future studies in populations and with different statins should be made to assess the OATP polymorphisms influence in response to statins.

Nesse trabalho, são investigadas as propriedades dinâmicas de modelos da mecânica estatística na criticalidade. Inicialmente, trabalhando com modelos de spin e utilizando os conceitos de persistência global e de dimensão anômala da magnetização inicial, mostramos que o modelo de Baxter-Wu não está na mesma classe de universalidade dos modelos de Potts com quatro estados e de Ising com interação de três spins em uma direção, todos bidimensionais. Na segunda parte da tese, estudamos o fenômeno de crescimento da superfície gerada pela deposição segundo as regras que definem os autômatos celulares probabilísticos propostos por Grassberger (modelos A e B). Esses dois autômatos não pertencem à classe de universalidade de Domany-Kinzel e apresentam novos expoentes críticos, cuja origem se deve à conservação de paridade. Determinamos o expoente de crescimento beta w, válido em tempos curtos, assim como os outros expoentes críticos associados ao crescimento de superfície (alfa e z). Nossas estimativas se comparam bem com os resultados obtidos a partir de razões de inteiros propostas por Jensen para os expoentes beta, ni paralelo e ni perpendicular. Finalmente, investigamos a transição de fase entre o estado helicoidal e o estado desordenado (random coil) da polialanina e do fragmento peptídico PTH(1-34), que corresponde aos resíduos 1 a 34 da região aminoterminal do hormônio das paratireóides. Nosso cálculo, que leva em conta as interações entre todos os átomos da molécula, está baseado em uma abordagem de tempos curtos. Os resultados dessa análise indicam que a transição helix-coil das polialaninas e do PTH(1-34) é de segunda ordem e apontam para uma classe de universalidade para a transição helix-coil em homopolímeros e proteínas (partindo de um estado helicoidal).
In this work we investigated dynamic properties of statistical mechanical models at criticality. At first, using the concepts of global persistence and anomalous dimension of initial magnetization, we showed that the Baxter-Wu model does not belong to the same universality class as 4-state Potts model and Ising with multispin interaction in one direction. In the sequence, we studied the roughening behavior generated by deposition governed by rules defined by probabilistic cellular automata proposed by Grassberger (A and B models). Those models are known do not belong to the Domany-Kinzel universality class. They are characterized by different exponents which are related to the parity conserving (PC). We estimated the growth exponent beta w, in short-time regimen, such as, other critical exponents associated to the surface growth (alpha and z). Our results are in good agreement with those expected for parity conserving universality class. At last we studied the phase transition between the completely helical state and the random coil of the polyalanine, such as, for the 34-residue human parathyroid fragment PTH(1-34). Our short-time simulations of the helix-coil transition are based on a detailed all-atom representation of proteins. The results indicate that helix-coil transition in polyalanine and PTH(1-34) is a second-order phase transition and suggest a universality class to the helix-coil transition in homopolymer and (helical) proteins.

Orientador: Dalton José Carneiro
Banca: João martins Pizauro junior
Banca: Luciano Hauschild
Banca: Rose Meire Vidotti
Banca: Eduardo Gianini Abimorad
Resumo: Na aquicultura, o aproveitamento dos resíduos para produção de silagens torna a produção mais sustentável. Foram realizados três experimentos para estudar a viabilidade de fracionamento da proteína da silagem de resíduos de tilápia por meio de avaliações dos processos da hidrólise da proteína e da eficiência de sua utilização de seus polipeptídeos em dietas práticas sobre o desempenho produtivo, nutricional e morfologia intestinal. O primeiro experimento, teve os objetivos de produzir e avaliar as silagens dos resíduos da filetagem de tilápia do Nilo. Foram utilizados dois tipos de matéria-prima, vísceras ou resíduos totais (cabeça, espinha, nadadeiras e vísceras, sem pele), dois processos de hidrólise, ácida e fermentada, com três metodologias para interrupção dos processos, aquecimento, congelamento ou neutralização. Os resultados experimentais mostraram que a hidrólise ocorreu em tempos diferentes para as diferentes matérias-primas e processos de hidrólise. A produção das silagens foram viáveis e apresentaram características favoráveis para utilização deste produto em dietas para peixes. Realizou-se o segundo experimento, para determinação dos coeficientes de digestibilidade aparente de proteína bruta (CDAPB), energia bruta (CDAEB), lisina (CDALys) e metionina (CDAMet) das silagens com diferentes tempos de interrupção da hidrólise em dietas para juvenis de tilápia do Nilo. Foram utilizados 720 juvenis (9,36±0,74g). Foram formuladas 12 dietas-teste, constituídas de 69,5% de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: In Aquaculture, to be sustainable should use of the waste to produce fish silages. Three experiments were conducted to study the feasibility of fractionation protein from tilapia waste hydrolysate through evaluations of the hydrolysis processes of protein and the efficient use of their polypeptides in practical diets on performance, nutrition and intestinal morphology. The experiment 1, aimed to produce and evaluate the silages of Nile tilapia filleting waste. Two types of raw materials, viscera or total residues were used (head, spine, fins and viscera), two processes of hydrolysis, acid and fermented with three methodologies to interrupt the processes, heating, freezing or neutralization. The experimental results showed that the hydrolysis took place at different times for different raw materials and hydrolysis processes. The silage production was viable and showed favorable characteristics for this product use in fish diets. The second experiment was carried out to determinate the apparent digestibility of crude protein (ADCCP), gross energy (ADCGE), lysine (ADCLys) and methionine (ADCMet) of fish silages with different time of hydrolysis in diets for Nile tilapia juvenile. 720 juveniles were used (9.36 ± 0.74 g). 12 test diets were formulated, constituted 69.5% of a reference diet, 0.5% chromium III oxide and 30% of an acid or fermented silage, produced with viscera or total residues at different times of hydrolysis (SVA 24, 72 and 144 hours SVF 24, 48 and 120 hours, and STA STF 24, 96 and 192 hours of hydrolysis). The ADC mean of protein, lysine and methionine silages ranged from 91.75 to 95.80%. The lowest ADC values were determined for crude energy and ranged from 79.30% to 83.62%. These results showed that only total waste silage have high levels of CP and ADCCP. The times 96 and 192 hours of hydrolysis were selected to the (Complete abstract click electronic access below)
Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000396435-Texto+Completo-0.pdf: 5923930 bytes, checksum: 9836e0a21f7fba5b0893387a40431ee7 (MD5) Previous issue date: 2007
In these last years one of the greatest challenges of the Computer Science in Bioinformatics is to develop algorithms, which, in a skillful time generate the tertiary protein structures from the linear sequence of its amino acids. Although there are methods to predict structures for target sequences when a similar protein of known structure (template) is available, this is not true when similarity can not be detected by sequence comparison alone. In the latter case, the methods are very computationally demanding. This work presents a recursive algorithm able to predict the topology of polypeptides of unknown structure using only the polypeptide mainchain torsion angles obtained from PDB templates. The algorithm revealed itself efficient when applied to the mini protein Trp-Cage (PDB ID: 1L2Y) composed of 20 amino acids, predicting its structure with a RMSD of 3,7 Å with respect to the experimental structure. However, for a protein of 34 amino acids – the Disulfide- Stabilized Mini Protein (PDB ID: 1ZDD) – the algorithm was not so efficient, generating the best polypeptide model with a RMSD of 7,2 Å with respect to the experimental structure. Due to the large increase in the possible conformations for the latter (20 to 34 amino acids), its conformational space was not spanned as was the conformational space of 1L2Y. These results and their consequences are discussed in the work.
Nos últimos anos, um dos grandes desafios da Ciência da Computação perante a Bioinformática é o desenvolvimento de algoritmos, os quais, em um tempo hábil, consigam gerar as estruturas terciárias de proteínas a partir da seqüência linear de seus aminoácidos. Embora existam alguns métodos que consigam gerar estruturas quando se possui outra proteína com um alto grau de similaridade, quando não se possui o mesmo, os métodos até então desenvolvidos não consigam realizar esta predição de forma não onerosa computacionalmente. Este trabalho apresenta um algoritmo recursivo capaz de predizer a topologia de polipeptídeos, utilizando apenas os ângulos da cadeia principal de proteínas com estruturas tridimensionais (3D) já conhecidas. O mesmo se mostra eficaz quando aplicado à mini-proteína Trp-Cage (código PDB 1L2Y) que possui apenas 20 aminoácidos, tendo uma estrutura predita de RMSD igual 3,7 Å; no entanto, para uma proteína de 34 aminoácidos – Mini-Proteína Estabilizada por Pontes Dissulfeto (código PDB 1ZDD) – o mesmo se mostra ineficiente, gerando a melhor proteína com o RMSD igual a 7,2 Å, devido ao fato de não ter sido percorrido todo o espaço conformacional esperado para a mesma. Os resultados e as suas conseqüências são discutidos no trabalho.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Centro de Desenvolvimento Sustentável, Programa de Pós-Graduação em Desenvolvimento Sustentável, 2018.
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).
As infecções causadas por microrganismos Gram-negativos são crescentes e preocupantes. Neste contexto, os peptídeos antimicrobianos (PAMs) representam uma classe de moléculas com potencial para atuar como agentes de controle microbiano, pois podem apresentar diferentes atividades funcionais no controle de infecções. A utilização desses compostos associados a diferentes estratégias terapêuticas, como a sua incorporação em sistemas de liberação controlada, pode ser um caminho viável na busca de novos agentes antimicrobianos. No presente trabalho foi realizada a produção heteróloga em sistema procarioto utilizando vetor de expressão pET25b+ modificado de dois peptídeos: Synoeca-MP e Mastoparano-MO, em diferentes construções - com sítio de clivagem e sem este sítio, fusionados a duzentas repetições da sequência codificadora da elastin-like polypeptide (ELP). Após a expressão heteróloga e produção de quatro litros de cada uma das construções, o material foi purificado por histerese térmica, em ciclos a 37ºC e a 4ºC. Seguido desse processo, foi realizada a clivagem da tag de ELP, confirmada por MALDI TOF. Os peptídeos produzidos heterologamente e aqueles produzidos quimicamente, foram avaliados quanto a sua atividade contra uma cepa resistente de K. peneumoniae (KPC1410503). Os testes apresentaram MIC de 80µM com Synoeca-MP-DP, comparado a 40 µM do mesmo peptídeo sintético, enquanto os Mastoparanos, tanto o biossintetizado quanto o sintético não apresentaram resultados de inibição microbiana in vitro.
Infections caused by Gram-negative microorganisms are increasing and worrying. In this context, antimicrobial peptides (AMPs) represent a class of molecules with potential to act as microbial control agents, once they can show many different functional activities and act in infections control. The use of these compounds associated with different therapeutic strategies, such as their incorporation in controlled release systems, may be a viable path in the search for new antimicrobial agents. In the present work the heterologous production was carried out in a prokaryotic system using the modified pET25b+ expression vector. Two peptides: Synoeca-MP and Mastoparano-MO, in different constructions - with the cleavage site and without this site, fused to two hundred replicates of the elastin-like polypeptide (ELP) coding sequence. After the heterologous expression and production of four liters of each construction, the samples were purified by thermic hysteresis, in different cycles of 37ºC and 4ºC. After this procedure, the cleavage of the tag of ELP was performed and confirmed by MALDI TOF. Biosynthesized and synthetically produced peptides were tested their activity against a resistant strain of K. peneumoniae (KPC1410503). The tests showed MIC of 80 μM with Synoeca-MP-DP, compared to 40 μM of the same synthetic peptide, while the biosynthesized and synthetic mastoparans presented no results of microbial inhibition in vitro.

Estudamos a ação das proteases bothropasina e Bothrops protease A, do veneno da serpente Bothrops jararaca, sobre o fibrinogênio (FBG), fibronectina (FN) e cininogênio (HK), como ferramenta para geração de peptídeos bioativos. As sequências primárias dos produtos de digestão foram identificadas por espectrometria de massas, com as buscas direcionadas por peptídeos em comum gerados pelas duas proteases. Foram encontradas oito sequências em comum provenientes do FBG e onze, da FN. Apenas a bothropasina clivou o HK, liberando desArg9BK. Foram sintetizados peptídeos derivados do FBG (FBG1-6) e da FN (FN1-4), além de des-Arg9-BK. Oito peptídeos apresentam potencial atividade antiangiogênica predita in silico. Observamos a inibição da elastase (28-20%) causada por FBG1-2-5-6. A melhor inibição da trombina foi de 17%, por FBG1. Contudo, a maioria dos peptídeos intensificou sua atividade. Por fim, este trabalho sugere que as proteases de veneno de serpentes podem ser usadas como ferramentas para processar componentes do plasma, visando à busca por peptídeos bioativos.
We studied the action of the proteases bothropasin and Bothrops protease A purified from the venom of snake Bothrops jararaca upon fibrinogen (FBG), fibronectin (FN) and kininogen (HK), as a tool to generate bioactive peptides. The primary sequences of the digestion products were identified by mass spectrometry and we focused the search for common peptides released by both proteases simultaneously. Sequences in common released by both proteases were found, being eight peptides from FBG, and 11 from FN. Only bothropasin was able to cleave HK releasing des-Arg9-BK. Peptides from fibrinogen (FBG1-6) and from fibronectin (FN1-4), as well as the des-Arg9-BK were synthetized. Eight peptides have potential antiangiogenic predicted in silico. We observed the inhibition of elastase (28-20%) caused by FBG1-2-5-6. The best inhibition of thrombin was 17% by FBG1. However, most of the peptides intensified its activity. Finally, this work suggests that the snake venom protease can be used as tools to process plasma components in order to search for bioactive peptides.

Nenhuma
A identificação de novos agentes terapêuticos e diagnósticos capazes de inibir o crescimento tumoral é essencial para melhoria no prognóstico de pacientes acometidos por tumores malignos (glioma, mama dentre outros). Nesse contexto, produtos naturais (vegetais e animais) constituem-se numa rica fonte de substâncias com potencial antitumoral. Polipeptídeos isolados dos venenos da serpente Crotalus durissus terrificus (Crtx) e do peixe Scorpaena plumieri (SPGP), apresentam atividade antitumoral contra tumores. Foi demonstrado que os análogos radioiodados de Crtx e SPGP, 125I-Crtx e 125I-SPGP, podem interagir especificamente com tumores malignos e induzir morte celular. Protótipos de radiofármacos baseados em Crtx e SPGP contendo radioiodo 131I foram capazes de produzir imagens de qualidade diagnóstica ao se acumular especificamente no sítio tumoral. Nesse trabalho, dados biocinéticos de 131I-Crtx e 131I-SPGP, avaliados em camundongos portadores do tumor de Ehrlich, foram tratados pelo formalismo MIRD com a finalidade de se avaliar a segurança radiológica e o potencial radiodiagnóstico/terapêutico. Doses absorvidas devidas à administração de 131I-Crtx e 131I-SPGP pelas vias intravenosa e intratumoral em camundongos portadores de tumor de Ehrlich foram determinadas para vários órgãos, bem como para o tumor implantado. Os resultados obtidos para o modelo animal, foram extrapolados para humanos considerando uma relação de concentração entre os vários tecidos similares entre e camundongos e humanos. Na extrapolação, foram utilizadas massas médias experimentais, bem como, do fantoma animal de Hui, para animais; e massas do fantoma de Cristy/Eckerman para humanos. Ambas as radiações, penetrante e não penetrante do 131I no tecido foram consideradas para os cálculos de dose. A dose absorvida na medula devida à administração de 131I-Crtx foi 0,01 mGy/370MBq tanto para a injeção intravenosa quanto para a injeção intratumoral. No tumor, o valor calculado foi 3,28 mGy/370MBq para a injeção intravenosa e 107,18 mGy/370MBq para a injeção intratumoral. Para a administração de 131I-SPGP os valores para a medula foram 1,34 mGy/370MBq para injeção intravenosa e de 0,12 mGy/370MBq para injeção intratumoral. No tumor, 256,29 mGy/370MBq para a injeção intravenosa e 895,69 mGy/370MBq para a injeção intratumoral. Os resultados sugerem boa segurança radiológica para ambos os radiofármacos considerando os valores encontrados para a medula, tanto pela via intravenosa quanto pela intratumoral, tendo em vista a importância deste órgão como gerador de células sanguíneas. Os resultados encontrados para o tumor por via intravenosa indicam aplicabilidade diagnóstica para ambas as moléculas. Pela via intratumoral, os valores encontrados sugerem viabilidade de 131I-Crtx e de 131I-SPGP para uso como agente terapêutico, dada a permanência de radioatividade no sítio tumoral. Embora 131I-Crtx tenha se apresentado mais seguro para aplicações em diagnóstico, o seu potencial para aplicação em radioterapia interna é menor que o de 131I-SPGP. Ambos, 131I-Crtx e 131I-SPGP, mostraram-se bons protótipos para o desenvolvimento de radiofármacos. O presente estudo indica a necessidade da síntese de análogos com menor captação nos órgãos saudáveis e maior captação tumoral, bem como, formulações farmacêuticas, usando nanotecnologia, tais como: lipossomas, nanomateriais para liberação controlada da droga.
The identification of new diagnostic and therapeutic agents capable of inhibiting tumor growth is essential for improving the prognosis of patients suffering from malignant tumors (glioma, breast and others). In this context, natural products (plants and animals) are a rich source of substances with potential antitumor. Despite knowledge of the etiology and pathology of tumors little progress has been observed in the area of diagnosis. Molecules of snake venoms have been shown to play an important role not only in the survival and proliferation of tumor cells but also in the process of tumor cell adhesion, migration and angiogenesis. Polypeptides isolated from the venom of the snake, Crotalus durissus terrificus, Crtx, and Scorpaena plumieri fish, SPGP, have antitumor activity against malignant tumors. It was shown that similar radioiodines Crtx and SPGP, 125I-Crtx and 125I-SPGP, can interact specifically with malignant tumors and induce cell death. Prototype-based radiopharmaceuticals Crtx and SPGP containing radioiodine 131I were able to produce diagnostic images to accumulate specifically in the tumor site. The present study aimed at evaluating the potential radiological safety and diagnostic/therapeutic efficacy of 131I-Crtx 131I-SPGP and (evaluated from the biokinetic data in mice bearing Ehrlich tumor) were treated by the MIRD formalism to carry out internal dosimetry studies. Absorbed doses due to the uptake of 131I-Crtx and 131I-SPGP were determined in various organs of mice and implanted into the tumor. The results obtained for the animal model were extrapolated to humans by assuming a similar concentration ratio among the various tissues between mice and humans. In extrapolation, we used the masses of human organs of the phantom of Cristy/Eckerman. Both radiation penetrating and nonpenetrating of 131I on the tissue were considered in dose calculations. The absorbed dose in the bone marrow due to the administration of 131I-Crtx was 0.01 mGy/370MBq for both intravenous injection and for the intratumoral injection. In tumor, the value was 3.28 mGy/370MBq for intravenous injection and 107.18 mGy/370MBq for intratumoral injection. For the administration of 131I-SPGP values for the bone marrow were 1.34 mGy/370MBq for intravenous injection and 0.12 mGy/370MBq for intratumoral injection. In tumor, 256.29 mGy/370MBq for intravenous injection and 895.69 mGy/370MBq for intratumoral injection. The results suggest good radiation safety for both radiopharmaceuticals considering the values found for the bone marrow by both intratumoral and intravenous routes, in view of the importance of this body to generate blood cells. The results for the tumor intravenously indicate diagnostic applicability for both molecules. Through intratumoral, the values suggest the feasibility for use of 131I-Crtx and of 131I-SPGP as a therapeutic agent, given the persistence of radioactivity in the tumor site. Although 131I-Crtx has proved to be more secure for applications in diagnosis, its potential for application in internal radiotherapy is lower than that of 131I-SPGP. Both 131I-Crtx and 131I-SPGP, proved to be good prototypes for the development of radiopharmaceuticals. This study indicates that is necessary the synthesis of analogues with lower uptake in healthy organs and a higher tumor uptake, as well as pharmaceutical formulations, using nanotechnology, such as liposomes, nano-materials for controlled release of drugs.

Made available in DSpace on 2017-05-12T14:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Iara _Fernanda Rocha (1).pdf: 1203704 bytes, checksum: 3b3c626c8325feae1cf11ce8968fd774 (MD5) Previous issue date: 2015-12-03
Diatraea saccharalis is an important insect pest of sugarcane and other crops, so it has been the focus of research. In general, the insects present innate immune system, which come with a range of immune responses against microorganisms. Many antimicrobial peptides have been isolated and characterized from model insects such as Drosophila melanogaster and Bombyx mori. In the 5th instar larvae of Diatraea saccharalis has already been reported a protein of Gloverin family with antimicrobial activity. Considering these facts, the objectives of this study were to determine the protein profile of hemolymph larvae from Diatraea sacharalis at 5th instar challenged with Escherichia coli (ATCC 11224) and Bacillus subtilis (ATCC 6623), identify differentially expressed proteins and polypeptides by analyzing the proteomic data, and verifying the antimicrobial activity of crude extract on plates by inhibition of microbial growth. Proteins from the hemolymph of larvae of D. sacharalis challenged and unchallenged were extracted. The samples were quantified and subjected to two-dimensional electrophoresis (2-DE) to obtain a proteomic profile of native hemolymph, challenged by E. coli and B. subtilis. Each gel showed an average of 300 protein spots and 92 spots were correspondents in these gels on three conditions. Were taken 41 different protein spots from gels, these spots were digested with trypsin and analyzed by mass spectrometry of the type MALDI-TOF/TOF. In this analysis, it was possible to identify 10 proteins from MS and MS/MS spectra. Among these proteins were expressed by induction with both bacteria such as chitinase and antimicrobial peptides: protein homologous to the turandot (turandot the like-protein), protein homologous to attacin (Attacin like-protein), and protein homologous peptidoglycan recognition. Another antimicrobial peptide was found, the homologous to β-defensin (β-defensin-like protein), induced only in the hemolymph of the larvae challenged by B. subtilis. A homologous protein Cyclophilin (Cyclophilin-like protein) was found in the hemolymph of larvae challenged and non-challenged. In addition, were also found proteins with hatching activity, hydrolytic not characterized and hypothetical protein of unknown function. Additionally, it also tested the antimicrobial activity of crude extracts from the hemolymph, by testing inhibition of microbial growth plate area, and this analysis was observed inhibition of growth of B. subtilis with the hemolymph extract from larvae challenged with B. subtilis. This is the first analysis of proteomic profile of hemolymph of a major agricultural pest, which verified the expression of some proteins with several functions and four related proteins immune response. These results contribute to the understanding of the immune system D. saccharalis under condition of infection.
Diatraea saccharalis é um importante inseto praga da cana-de-açúcar e de outras culturas agrícolas, por isso, tem sido foco de pesquisas. De uma forma geral, os insetos apresentam sistema imunológico inato, que os provêm com uma gama de respostas imunológicas contra microrganismos. Inúmeros peptídeos antimicrobianos têm sido isolados e caracterizados a partir de insetos modelo, como Bombyx mori e Drosophila melanogaster. Em larvas de 5º ínstar de Diatraea saccharalis já foi reportada uma proteína da família Gloverina com atividade antimicrobiana. Considerando estes fatos, os objetivos deste trabalho foram determinar o perfil de proteínas da hemolinfa de larvas de Diatraea sacharalis em 5º ínstar desafiadas com Escherichia coli (ATCC 11224) e Bacillus subtilis (ATCC 6623), identificar proteínas e polipeptídios diferencialmente expressos através da análise dos dados proteômicos, e verificar a atividade antimicrobiana do extrato bruto em placas por meio da inibição do crescimento microbiano. Foram extraídas proteínas da hemolinfa de larvas de D. sacharalis desafiadas e de não desafiadas. As amostras foram quantificadas e submetidas à eletroforese bidimensional (2-DE) para obtenção de um perfil proteômico da hemolinfa nativa, de larvas desafiadas por E. coli e B. subtilis. Cada gel apresentou em média 300 spots protéicos e 92 destes spots eram correspondentes nos géis nas três condições. Foram retirados 41 spots protéicos diferentes dos géis, estes spots foram digeridos com tripsina e analisados por espectrometria de massas do tipo Maldi-ToF/ToF. Nesta análise, foi possível identificar 10 proteínas a partir dos espectros MS e MS/MS. Entre elas, proteínas que foram expressas pela indução com ambas as bactérias, como a quitinase, e os peptídeos antimicrobianos: proteina homóloga à turandot A (turandot A like-protein), proteina homóloga à Atacina (Attacin like-protein), proteína homóloga de reconhecimento de peptideoglicano. Outro peptídeo antimicrobiano encontrado, o homólogo à β-defensina (β-defensin like-protein), foi induzido somente na hemolinfa das larvas desafiadas por B. subtilis. Uma proteína homológa á Ciclofilina (Cyclophilin like-protein) foi encontrada na hemolinfa da larvas desafiadas e não-desafiadas. Além disso, também foram encontradas proteínas com atividade de eclosão, hidrolítica, não caracterizada e proteína hipotética com função desconhecida. Adicionalmente, foi também testada a atividade antimicrobiana dos extratos brutos da hemolinfa, pelo ensaio de zona de inibição do crescimento microbiano em placa, e nesta análise, foi verificada a inibição do crescimento de B. subtilis com o extrato da hemolinfa de larvas desafiadas com B. subtilis. Esta é a primeira análise do perfil proteômico da hemolinfa de uma importante praga agrícola, na qual verificou-se a expressão de algumas proteínas com funções diversas e quatro proteínas relacionadas a resposta imunulógica. Estes resultados contribuem para a compreensão do sistema imunológico da D. saccharalis sob condição de infecção.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000399881-Texto+Completo-0.pdf: 3533066 bytes, checksum: e2d1ae8a7aab3f836474380e9a96e7c0 (MD5) Previous issue date: 2008
Proteins are polypeptides formed by a long chain of amino acids residues which, in physiological conditions (native environment), adopt a unique three-dimensional (3-D) structure. These macromolecules are involved in most of the molecular transformations in the living cells. The native structure of a protein dictates its biochemical function. Hence, knowledge of a protein structure allows one to interfere with it, either by enhancing or inhibiting its function, such as in diseases in which the drug targets are proteins. Experimentally, the 3-D structure of a protein is obtained by techniques such as X-ray diffraction crystallography or nuclear magnetic resonance. However, due to the high cost and time demanded by these techniques, determination of the 3-D structure of a protein is a problem that still challenges the scientists. Many computational protein structure prediction methods have been proposed along the last years in order to address this problem. These methods are organized into two major groups. The first group comprehends comparative homology modelling and knowledge-based methods such as fold recognition via threading. The second group is made up by ab initio and de novo methods. However, these methods also have limitations: comparative homology modelling can only predict structures of proteins with amino acid sequences nearly identical or similar to other protein sequences of known structure in the protein Data Bank (PDB). Ab initio and de novo methods can predict new folds, but the complexity and high dimensionality of the search space, even for a small protein molecule, makes the problem computationally intractable. Despite the relative success of these prediction methods for small proteins and polypeptides, efforts are still needed to develop novel strategies for extracting and manipulating experimental data and to develop methods that use these data for correctly predicting a protein 3-D structure from its amino acid sequence only. In this dissertation we present a new computational method to predict approximate 3-D structure of polypeptides and proteins. A new algorithm was developed, based on information analysis obtained from PDB templates. Data mining techniques, intervals representation and treatment of experimental structural information are used in this algorithm. The polypeptide main chain torsion angles intervals, for each amino acid residue, are reduced with the objective to find a closed interval that contains the conformation with the lowest potential energy. Six case studies illustrate applications of the proposed method.
As proteínas são polipeptídeos formados por uma longa cadeia covalente de resíduos de aminoácidos que, em condições fisiológicas (ambiente nativo), adota uma topologia 3D única. Estas macromoléculas estão envolvidas na maior parte das transformações moleculares nas células vivas. A estrutura nativa dita a função bioquímica específica da proteína. Conhecer a estrutura 3D da proteína implica em também conhecer a sua função. Assim, conhecendo a sua estrutura é possível interferir ativando ou inibindo a sua função, como nas doenças onde os alvos dos fármacos são as proteínas. Experimentalmente, a estrutura 3D de uma proteína pode ser obtida através de técnicas de cristalografia por difração de raios X ou por ressonância magnética nuclear. Porém, devido às diversas dificuldades, incluindo o alto custo e o elevado tempo demandado por estas técnicas, a determinação da estrutura 3D de proteínas ainda é um problema que desafia os cientistas. Diversos métodos de predição in sílico foram criados durante os últimos anos buscando a solução deste problema. Estes métodos estão organizados em dois grandes grupos. Ao primeiro, pertencem os métodos de modelagem comparativa por homologia e métodos baseados em conhecimento como os de alinhavamento (threading). Ao segundo, pertencem os métodos ab initio e os métodos de novo. No entanto, estes métodos de predição possuem limitações: métodos baseados em modelagem comparativa por homologia e alinhavamento somente podem realizar a predição de estruturas que possuem seqüências idênticas ou similares à outras proteínas armazenadas no Protein Data Bank (PDB). Métodos de novo e ab initio, por sua vez, tornam possível a obtenção de novas formas de enovelamento. Entretanto, a complexidade e a grande dimensão do espaço de busca conformacional, mesmo para uma pequena molécula de proteína, torna o problema da predição intratável computacionalmente (Paradoxo de Levinthal). Apesar do relativo sucesso obtido por estes métodos para proteínas de pequeno tamanho, muitos esforços ainda são necessários para o desenvolvimento de estratégias para extração e manipulação de dados experimentais, bem como o desenvolvimento de metodologias que façam utilização destas informações com o propósito de predizer corretamente, a partir apenas da seqüência de aminoácidos de uma proteína, a sua estrutura 3D. Nesta dissertação é apresentada uma nova proposta para a predição in sílico da estrutura 3D aproximada de polipeptídeos e proteínas. Um novo algoritmo foi desenvolvido, baseando-se na análise de informações obtidas de moldes do PDB. Técnicas de mineração de dados, representação de intervalos e de manipulação das informações estruturais são utilizadas neste algoritmo. Os intervalos de variação angular de cada resíduo de aminoácido da cadeia polipeptídica são reduzidos como o objetivo de encontrar um intervalo fechado que contém a conformação com a menor energia potencial. Seis estudos de caso demonstram a aplicação do método desenvolvido.

Mestrado em Biotecnologia - Biotecnologia Molecular
O objetivo principal do trabalho foi identificar os alvos potenciais de ligação do polipéptido Blad na membrana plasmática de Candida albicans que permitam elucidar o mecanismo de ação do polipéptido Blad responsável pela sua potente atividade fungicida. O polipéptido Blad é um antifúngico obtido a partir do tremoço de eficácia igual, ou superior, à dos fungicidas de síntese química existentes no mercado. O polipéptido Blad é um produto intermediário estável do catabolismo da β-conglutina, sendo um polipéptido de 20 kDa, composto por 173 aminoácidos, não glicosilado mas fosforilado e faz parte de uma proteína de 210 kDa. Estudos anteriores efetuados com o fungo patogénico modelo, Candida albicans, revelaram que interfere com a estabilidade da membrana plasmática causando disrupção e inatividade metabólica. Por outro lado, ligando-se a estruturas glicosiladas também foi demonstrado que o polipéptido Blad possui atividade de lectina. Com base nisto, testou-se a hipótese do polipéptido Blad se ligar às proteínas glicosiladas da membrana plasmática de C. albicans, e deste modo desencadear um evento molecular/celular na membrana que leve à morte da célula. Na totalidade dos ensaios de imunodeteção do polipéptido Blad na sua ligação às proteínas da membrana plasmática de C. albicans, verificou-se que este se liga a 9 proteínas com massa molecular aproximada de 75 kDa, 50 kDa, 37 kDa (2), 25 kDa (2), 20 kDa, 15 kDa e 10 kDa. No ensaio de imunodetecção do polipéptido Blad, em que as proteínas da membrana plasmática de C. albicans foram desglicosiladas, parece existir alguma evidência que reforça a assunção do polipéptido Blad possuir atividade de lectina. Após ensaio de imunodeteção do polipéptido Blad ligado a proteínas da membrana plasmática de C. albicans, estas foram isoladas e foram identificadas por espectrometria de massa. As proteínas identificadas com possível afinidade de ligação ao polipéptido Blad foram a enolase 1, alcoól desidrogenase 1 e a subunidade beta da ATP sintetase, que são proteínas descritas na literatura como associadas à membrana plasmática de C. albicans, sendo que a sua função nesta localização celular é desconhecida. Não foi possível realizar a análise das glicanas das proteínas associadas à membrana plasmática de C. albicans com afinidade de ligação ao polipéptido Blad, que foram identificadas neste trabalho, devido a limitações experimentais. Devido às limitações dos procedimentos utilizados neste trabalho, deve-se continuar a tentar, através de procedimentos mais sofisticados, a identificação de potenciais alvos de ligação do polipéptido Blad na membrana plasmática de Candida albicans que permitam elucidar o mecanismo de
The main objective of this work was the identification of potential targets for the polypeptide Blad in the plasma membranes of Candida albicans cells. This knowledge will be a step forward in the elucidation of Blad polypeptide mode of action responsible for it powerful fungicide activity. Blad polypeptide is a fungicide obtained from lupin and has fungicide potency under agricultural conditions equal or greater than that of their chemical counterparts. Blad polypeptide is a stable intermediate of β-conglutin catabolism, with 20 kDa, composed of 173 amino acids, non-glycosylated but phosphorylated and it is part of a protein of 210 kDa. Previous studies performed with the model fungal pathogen, Candida albicans, revealed that Blad interferes with the fungus plasma membrane stability causing disruption and metabolic inactivity. In addition, binding to glycosylated structures it was also demonstrated that Blad polypeptide has lectin activity. Based on these two findings, in this work the hypothesis that Blad polypeptide binds to glycosilated proteins of the plasma membrane, unleashing a molecular/cellular event leading to cell death, was tested. In the immunodetection assays of Blad polypeptide to its binding to the plasma membrane proteins of C. albicans it was found that it binds to nine proteins of approximate molecular mass of 75 kDa, 50 kDa, 37 kDa (2), two of 25 kDa (2), 20 kDa, 15 kDa and 10 kDa. In the immunodetection assay of Blad polypeptide, in which the plasma membrane proteins of C. albicans were deglycosylated, there appears to be some evidence that strengthens the assumption of lectin activity of Blad polypeptide. After immunodetection assay of Blad polypeptide bound to the plasma membrane proteins of C. albicans, these have been isolated and identified by mass spectrometry. The proteins identified with possible binding affinity to Blad polypeptide were enolase 1, alcohol dehydrogenase 1 and the beta subunit of ATP synthase, which are proteins described in literature as being associated with the plasma membrane of C. albicans, although its function in this cellular location is still unknown. It was not possible to perform the analysis of glycans of the proteins associated with the plasma membrane of C. albicans with binding affinity to Blad polypeptide, which were identified in this work, due to experimental limitations. Due to the limitations of the procedures used in this work it’s important to continue to attempt, through more sophisticated procedures, the identification of potential binding targets of Blad polypeptide in the plasma membrane of C. albicans, allowing to elucidate the mechanism of action responsible for its potent fungicide activity.

Introdução: A utilização de polímeros biodegradáveis vem ganhando destaque já que tecnologias alternativas estão sendo desenvolvidas para a minimização do uso de plásticos. Polímeros, como amidos e polipeptídios, são empregados junto à agentes plastificantes e solventes para elaboração de filmes biodegradáveis. Extratos de frutas e vegetais também podem ser adicionados à filmes biodegradáveis, oferecendo boas propriedades mecânicas e de barreira, e permitindo a incorporação de aditivos naturais, como antioxidantes. A jabuticaba (Myrciaria cauliflora), uma fruta nativa brasileira, possui em sua casca uma alta atividade antioxidante e teor de compostos bioativos elevado, apresentando um grande potencial para ser aplicada em filmes biodegradáveis e ativos. Objetivos: desenvolver e caracterizar filmes biodegradáveis à base de amido e gelatina contendo extrato da casca de jabuticaba. Material e Métodos: As cascas de jabuticabas foram liofilizadas e moídas até granulometria de 80 mesh. Para a produção dos filmes, pela técnica casting, foram utilizados quantidades padronizadas de fécula de mandioca, gelatina, glicerol e extrato de casca de jabuticaba em diferentes concentrações (F0:controle, F1:0,5 m/v, F2:1,0 m/v e F3:1,5 m/v). Os filmes foram caracterizados quanto às propriedades mecânicas, solubilidade em água, permeabilidade ao vapor de água, microscopia eletrônica de varredura e calorimetria exploratória diferencial. Resultados: Os filmes produzidos apresentaram-se visualmente homogêneos e maleáveis. Para as propriedades de elongação e resistência a tração, os filmes F2 e F3 mostraram maior elasticidade e menor resistência. Não houve diferença significativa (p<0,05) na solubilidade em água para F1, F2 e F3, enquanto F0 apresentou uma solubilidade significativamente superior. A permeabilidade ao vapor de água dos filmes foi estatisticamente superior nos filmes F2 e F3. As microestruturas obtidas mostraram um aumento da heterogeneidade da matriz polimérica do filme de acordo com o aumento de matéria seca no extrato. A calorimetria exploratória diferencial revelou apenas um evento endotérmico para F1, F2 e F3 em 82,15°C, enquanto F0 mostrou o pico endotérmico em 86,55°C. Conclusão: os filmes F2 e F3 apresentaram características potenciais para serem testados em embalagens flexíveis e ativas para alimentos.