Academic literature on the topic 'Polynucléaire neutrophile'

L’élimination des polynucléaires neutrophiles (PN) du site inflammatoire est nécessaire à la résolution de l’inflammation. Lors de cette phase, les PN s’engagent massivement vers l’apoptose et sont phagocytés par les macrophages. Dans certaines pathologies inflammatoires comme le syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA), un défaut des mécanismes d’apoptose des PN est associé à la persistance de l’inflammation et à un mauvais pronostic. GILZ (Glucocorticoid-induced leucine zipper) est une protéine possédant des propriétés anti-inflammatoires, basées principalement sur l’inhibition des facteurs de transcription, comme NF-кB (nuclear factor-kappa B) et AP-1 (activator protein-1). GILZ module également la survie des cellules hématopoïétiques, en favorisant ou retardant l’apoptose selon le type cellulaire étudié. L’objectif de ce travail a été d’évaluer le rôle de GILZ dans les fonctions et l’apoptose du PN lors de l’inflammation. Dans un premier temps, nous nous sommes intéressés aux situations physiopathologiques dans lesquelles GILZ pouvait être exprimé et plus spécifiquement dans le syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA). Cette pathologie a retenu notre attention pour le caractère systémique de l’inflammation et surtout pour le rôle prépondérant que jouent les neutrophiles dans ce syndrome. Dans le cadre d’une étude clinique prospective menée à l’hôpital Bichat, nous avons pu montrer une plus forte expression de GILZ au niveau transcriptionnel et protéique dans des neutrophiles circulants de patients souffrant de SDRA.Dans la deuxième partie du travail, nous avons évalué le rôle de GILZ dans les fonctions et le phénotype des PN. En utilisant la lignée PLB-985 différenciée en neutrophiles par addition d’acide rétinoïque (ATRA) et de diméthylformamide (DMF), nous avons mis en évidence in vitro que la surexpression de GILZ dans ce modèle de polynucléaires neutrophiles favorisait l’apoptose de ces cellules. Cette apoptose est dépendante des caspases, implique la voie mitochondriale et s’explique notamment par une diminution de l’expression de Mcl-1 (myeloid cell leukemia-1), alors que l’expression des ARNm de mcl-1 n’est pas affectée. Une activation prolongée de JNK (c-JUN N-terminal kinase) serait impliquée et entraînerait la phosphorylation de Mcl-1 et sa dégradation par le protéasome. Ces deux résultats laissent entrevoir un rôle potentiel de GILZ dans la résolution de l’inflammation in vivo. Pour adresser cette question, nous mettons en place le modèle de l’ALI (Acute Lung Injury) ou inflammation pulmonaire aiguë induite par le LPS (lipopolysaccharide), qui est un modèle murin du SDRA. Nous utilisons des souris dans lesquelles l’expression de GILZ a été invalidée spécifiquement dans les neutrophiles. Cette approche nous permettra de mieux comprendre le rôle de GILZ dans la résolution de l’inflammation. GILZ pourrait ainsi représenter une cible thérapeutique dans les pathologies inflammatoires impliquant le PN<br>Elimination of polymorphonuclear neutrophils (PN) from inflammatory site is a necessary step in the resolution of inflammation, where PN undergo massive apoptosis and are phagocyted by macrophages. In some inflammatory disorders, such as acute respiratory distress syndrome (ARDS), defective apoptosis of neutrophils was described and related to persistent inflammation and poor prognosis. GILZ (Glucocorticoid-induced leucine zipper) is a potent anti-inflammatory protein, mainly through inhibition of NF-кB (nuclear factor-kappa B) and AP-1 (activator protein-1) transcription factors. Moreover, GILZ modulates hematopoietic cells survival, either by preventing or inducing their apoptosis. The overall objective of this work has been to evaluate the role of GILZ in neutrophils functions and apoptosis during inflammation. First, we sought pathophysiological situations where GILZ could be expressed. ARDS caught our attention because of the systemic nature of inflammation and the prominent role of neutrophils. A prospective clinical study was conducted at Bichat hospital and showed a higher GILZ expression at protein and transcriptional levels in blood neutrophils of ARDS patients.Secondly, we evaluated the role of GILZ in neutrophils functions and phenotypes. Using the PLB-985 cell line induced towards the neutrophil lineage using all trans retinoic acid (ATRA) and dimethylformamid (DMF), we evidenced that GILZ over-expression promoted exacerbated apoptosis of these cells. This apoptosis was caspase-dependent, involved the mitochondrial pathway and was explained, at least in part, by a diminution of myeloid cell leukemia-1 (Mcl-1) expression, whereas mcl-1 mRNA levels were not affected. A sustained activation of c-Jun N-terminal kinases (JNK) could be involved and lead to Mcl-1 phosphorylation and subsequent degradation by the proteasome machinery.Altogether, these results suggest a potential role of GILZ in the resolution of inflammation in vivo. To address this question, we currently develop an acute lung injury (ALI) model induced by lipopolysaccharides, which mimics the septic component of ARDS. This model will be implemented in mice invalidated for GILZ specifically in neutrophils. This approach should allow a better understanding of the role of GILZ in the resolution of inflammation. In the future, GILZ could represent a therapeutical target in inflammatory diseases involving neutrophils

La production de formes réactives de l'oxygène (explosion oxydative) par les polynucléaires neutrophiles (PN) stimulés joue un rôle majeur dans la défense de l'organisme contre différents agents pathogènes essentiellement bactériens et fungiques. Cette production est soumise à une régulation fine et précise notamment par les cytokines. Dans la première partie de ce travail, nous avons étudié, par cytométrie en flux, l'effet des cytokines proinflammatoires sur l'explosion oxydative des PN dans le sang total. Nous avons ainsi montré qu'aucune des cytokines étudiées (IL-1a, IL-1ß, TNFa, IL-6, IL-8, GM-CSF) ne déclenche isolément l'explosion oxydative des PN. Par contre, le prétraitement des PN par le TNF, l'IL-8 ou le GM-CSF suivie de l'addiction d'un formyl peptide dérivé des protéines bactériennes, conduit à l'apparition d'une sous-population de PN produisant d'importantes quantités de peroxyde d'hydrogène (H2O2). Cette sous-population se caractérise par une augmentation de la liaison des formyl peptides à la surface des PN. Une augmentation de la liaison de formyl peptides à la surface des PN. Une dysrégulation des interactions entre cytokines et PN peut contribuer à l'établissement de lésions entre cytokines et PN peut contribuer à l'établissement de lésions tissulaires sévères lors de certaines situations pathologiques. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons étudié l'activité fonctionnelle des PN au cours de l'infection par VIH, une augmentation des taux plasmiques de certaines cytokines ayant été rapportée chez les patients infectés par le VIH. Cette étude a montré une hyperactivation des polynucléaires dans le sang circulant des patients infectés par le VIH caractérisée par une augmentation de l'expression de la molécule d'adhérence CD 11b, une diminution de l'expression de la L-sélectine (CD62L), une augmentation de la polymérisation de l'actine et une augmentation de la production spontanée d'H2O2. Cet état d'activation pourrait contribuer à l'agression oxydante du système immunitaire et intervenir dans la pathogénie de certaines vascularités leucocytoclasiques rapportées chez les patients infectés par le VIH. De plus, après amorçage par le TNF ou l'IL-8, l'explosion oxydative des polynucléaires en réponse aux formyl-peptides est diminuée. Cette diminution est corrélée avec l'augmentation des taux plasmiques des cytokines suggérant de ce fait un phénomène de désensibilisation. Ces deux dernières anomalies observées après stimulation par les formyl-peptides sont corrélées avec la diminution du taux de cellules CD4+ et pourraient intervenir dans la pathogénie de certaines infections bactériennes et fungiques au cours de l'infection par le VIH.

La nétose du polynucléaire neutrophile (PN) correspond à la libération de filaments d’ADN recouverts de protéines appelés Neutrophil Extracellular Trap (NETs). Outre leur rôle anti-infectieux, les NETs représentent des acteurs émergents de nombreuses pathologies inflammatoires et nous avons souhaité évaluer leur implication au cours de réactions allergiques.Au cours d’une étude clinique multicentrique notre équipe a mis en évidence un mécanisme alternatif de l’anaphylaxie aux curares, impliquant les PN. La phase aiguë de ces réactions s’accompagne d’une libération de NETs dont la concentration est corrélée avec la sévérité et avec une diminution de l’expression des récepteurs activateurs des IgG à la surface des PN (FcγRs) ; ceci suggère un rôle des complexes immuns (CI) IgG/curares dans la formation des NETs au cours de ces réactions anaphylactiques.Pour confirmer cette hypothèse, la capacité d’activation de la nétose par les CI IgG a été étudiée, via la mise au point d’un modèle de stimulation in vitro des PN humains purifiés.Ce travail montre que 2 récepteurs aux IgG du PN (FcγRIIa et FcγRIIIB) contribuent à la libération de NETs en réponse à différents types de CI.En parallèle, la formation des NETs a été explorée dans un modèle de réaction allergique chronique, l’asthme. Au niveau systémique, la concentration de NETs est associée à la présence d’un asthme sévère mal contrôlé et d’une obstruction bronchique peu réversible. Inversement, la concentration de NETs dans le lavage broncho-alvéolaire est plus élevée au cours de l’asthme modéré et semble traduire un recrutement pulmonaire et une activation des PN en réponse à une colonisation microbienne.Au total nous montrons que les NETs sont libérés au cours des deux modèles de réactions allergiques choisis, aiguë (anaphylaxie aux curares) et chronique (asthme) et qu’ils pourraient représenter des biomarqueurs de sévérité. Des travaux complémentaires sont nécessaires pour déterminer dans quelle mesure les NETs contribuent à la physiopathologie des allergies<br>Neutrophil netosis consists in the release of extracellular DNA filaments bound to granular proteins, called Neutrophil extracellular traps (NETs). In addition to their anti-infectious role, NETs are emerging actors of many inflammatory diseases and we decided to investigate their involvement during allergy.In a multicenter clinical study, our team highlighted an alternative mechanism of anaphylaxis to neuromuscular blocking agents (NMBA) involving neutrophils (PN). The acute phase of these reactions is characterized by NETs release which level is correlated with severity and with a decrease in IgG activating receptors (FcγRs) expression on PN; this suggests a role of immune complexes (IC) IgG / NMBA in NETs formation during these anaphylactic reactionsTo confirm this hypothesis, the ability of IgG ICs to activate netosis was studied through the development of an in vitro stimulation model of purified human PNs.This work shows that two PN IgG receptors (FcγRIIa and FcγRIIIB) contribute to NET release upon cellular activation by different ICsIn parallel, NETs formation has been explored in a model of chronic allergic reactions, asthma. At systemic level, NETs levels are associated with severe and poorly controlled asthma as well with the presence of low reversible bronchial obstruction. Conversely, NETs levels in bronchoalveolar lavage are higher in moderate asthma and appear to reflect pulmonary recruitment and activation of PN in response to microbial colonization.Taking together these results show that NETs are released during the two selected models of allergic reactions : acute (NMBA anaphylaxis) and chronic (asthma) and could be used as biomarkers of severity. Furthers works are needed to determine to what extent NETs contribute to the pathophysiology of allergy

Le syndrome de detresse respiratoire aigue (sdra) est un deme pulmonaire lesionnel du a une alteration diffuse de la barriere alveolo-capillaire (endothelium, membranes basales, epithelium), associee a un afflux alveolaire de polynucleaires neutrophiles. Le but general de ce travail est d'evaluer le role du polynucleaire neutrophile dans la physiopathologie du sdra et de ses surinfections respiratoires. Dans un premier travail, nous avons demontre qu'il existait une cooperation des proteases du neutrophile, elastase et gelatinase b, permettant sa migration au travers d'une membrane basale in vitro. Dans un deuxieme travail, nous avons montre la presence de gelatinase b, issue notamment des polynucleaires neutrophiles, en concentration elevee dans les fluides alveolaires de patients atteints de sdra. Nous avons constate que l'etat d'activation des neutrophiles alveolaires ne semblait pas dependre de l'existence d'une defaillance respiratoire. Notre troisieme travail a permis de confirmer cette derniere donnee par l'etude de deux modeles d'agression pulmonaire aigue du rat, i) le premier avec defaillance respiratoire, ii) le second sans defaillance respiratoire severe. Ainsi, un etat d'activation similaire du neutrophile alveolaire a ete trouve dans ces deux modeles. L'importance incidence de surinfections respiratoires observees au cours du sejour en reanimation des patients atteints de sdra serait due a un deficit des fonctions bactericides des polynucleaires alveolaires. Notre quatrieme travail a montre que l'instillation alveolaire d'endotoxine chez le rat induisait un important recrutement de polynucleaires neutrophiles aux fonctions preservees et conferait un effet protecteur vis a vis d'une surinfection bacterienne ulterieure, plaidant contre un deficit de fonctions bactericides du neutrophile alveolaire. En conclusion, nous montrons que le polynucleaire neutrophile migre grace a sa gelatinase b et que cette gelatinase est trouvee dans les espaces alveolaires au cours du sdra. Nous demontrons que l'exocytose de gelatinase par le neutrophile alveolaire ne depend pas du degre d'agression pulmonaire et que le neutrophile alveolaire a des fonctions bactericides conservees ex vivo et in vivo lui permettant de participer a la defense anti-bacterienne.

La mucoviscidose est une maladie génétique caractérisée par une inflammation pulmonairepersistante du poumon résultant d’un recrutement massif de polynucléaires neutrophiles quisécrètent trois protéases à sérine, l’élastase leucocytaire, la protéase 3 et la cathepsine G. Ledéséquilibre de la balance protéases/antiprotéases au site inflammatoire contribue à la protéolyse dutissu pulmonaire et provoque à terme l’insuffisance respiratoire des patients. Les stratégiesthérapeutiques utilisant des inhibiteurs endogènes n’ont pas abouti aux résultats espérés et n’ontciblé que l’élastase soluble. Nous avons étudié l’activité et la régulation des protéases duneutrophile dans les expectorations des patients atteints de mucoviscidose Nous avons démontrél’importance des pièges neutrophiliques extracellulaires (NETs) dans leur séquestration, ce quiexplique leur résistance à l’inhibition et en conséquence leur pouvoir de destruction du tissupulmonaire. Nous avons également démontré qu’un traitement par la DNase facilite l’action desinhibiteurs ce qui ouvre de nouvelles stratégies de thérapie anti-inflammatoire<br>No summary available

Au cours des infections, les polynucléaires neutrophiles libèrent des Neutrophil Extracellular Traps (NETs) pour capturer les agents pathogènes et les détruire. Les NETs; en coordination avec les plaquettes et les cellules immunitaires, activent la coagulation et participent à l’immunothrombose pour piéger les agents pathogènes et éviter leur dissémination. Ils sont dégradés physiologiquement par les DNases et les macrophages. Exacerbée, les NETs sont responsables de dommages cellulaires et tissulaires. Ils sont décrits comme des acteurs centraux de nombreuses pathologies, notamment comme participant à la thrombose (artérielle et veineuse), et aux formes sévères de la COVID-19. Cependant, les techniques de dosages de NETs et des DNases ne sont à ce jour pas standardisés et les mécanismes sous-jacent à l’exacerbation de la NETose au cours de la COVID-19 peu décrits.Nous émettons l’hypothèse que l’aggravation clinique des patients au cours de la COVID-19 est liée à un déséquilibre entre les NETS et les DNases.Pour réponde à cette hypothèse, nous avons pour objectifs : (1) définir les conditions pré-analytiques optimales pour doser les marqueurs de NETs; (2) mettre au point et valider une méthode de dosage de l’activité des DNases plasmatiques ; (3) Évaluer la balance entre marqueurs de NETs et activité des DNases en fonction de la sévérité de la COVID-19 ; (4) Étudier les mécanismes responsables de ce déséquilibre NETs/DNases.Identifier déficit en DNase comme facteur aggravant chez les patents permettrait d’imaginer de nouvelles thérapeutiques innovantes pour prévenir cette aggravation clinique comme l’administration de DNase<br>Neutrophil Extracellular Traps and DNases involvement during During infection, neutrophils release Neutrophil Extracellular Traps (NETs) to capture,prevent the dissemination of, and kill pathogens. NETs contribute to immunothrombosis byinteracting with platelets and immune cells, thus activating coagulation. However, excessiveproduction of NETs can cause thromboinflammation, leading to cellular and tissue damage. NETsare implicated in the pathophysiology of both arterial and venous thrombosis and in severe formsof COVID-19. They are physiologically degraded by DNases and macrophages. Currently, DNasetechniques are not standardized, and the mechanisms underlying the exacerbation of NETosis inCOVID-19 are not well understood. We first aimed to develop a functional assay to evaluate theability of DNases in human samples to degrade DNA or NETs. We established a robust,repeatable, and reproducible method that can be applied to both serum and plasma.Subsequently, we assessed the balance between NET markers and DNase activity according toCOVID-19 severity, and studied the mechanisms responsible for the NETs/DNases imbalance. Weconfirmed that NET markers increase with disease severity and demonstrated a decrease inDNase activity in hospitalized patients, resulting in an imbalance between NET markers andDNase activity in this group. The most severe patients exhibited decreased levels of DNase 1,with some harboring polymorphisms in the DNase 1 gene correlating with low protein levels.Additionally, we observed that critically ill patients had lower levels of plasmacytoid dendriticcells compared to those with severe disease. Reanalysis of public single cell RNA sequencing datashowed that plasmacytoid dendritic cells express less DNase 1L3 RNA as the disease severityincreases. This study demonstrates that COVID-19 severity is associated with an imbalance inNETs and DNases. Identifying this DNase deficit as an aggravating factor in patients could lead tonew therapeutic strategies, such as DNase administration, to prevent clinical deterioration

Lors d’une infection, les polynucléaires neutrophiles patrouillent dans tout l’organisme et sont les premières cellules à affluer au site inflammatoire. La leucosialine (CD43) est la principale sialoglycoprotéine du neutrophile. CD43 est clivée après activation et adhérence des neutrophiles. J’ai démontré que CD43 était clivée et que la conséquence de ce clivage est la libération de son domaine extracellulaire qui inhibe l’adhérence des neutrophiles en conditions de flux et la libération du domaine intracellulaire par le complexe γ-secrétase. Par ailleurs, le rôle des intégrines β1 dans la migration des neutrophiles est encore peu claire. L’intégrine  α9β1 est présent sur les neutrophiles humains et lie les molécules de VCAM-1 sur l’endothélium. J’ai décrit une synergie entre les intégrines β2 et l’intégrine α9β1 dans l’adhérence des neutrophiles aux cellules endothéliales en conditions de flux et une sur-expression de l’intégrine après activation et migration des neutrophiles

Les polynucléaires neutrophiles (PN) sont des cellules essentielles au cours de la réponse immunitaire innée ; recrutés rapidement au site inflammatoire où ils participent à la phase aigüe, ils vont aussi contribuer à la résolution de l'inflammation. Ils peuvent en effet moduler la réponse adaptative par interaction avec les lymphocytes (Ly) ou les cellules dendritiques (DC) via des médiateurs solubles ou des interactions cellulaires directes. Les Neutrophil Extracellular Traps (NETs) libérés par les PN activés pourraient jouer un rôle important dans ce contexte. Les NETs sont des filaments de chromatine décondensée associés à des protéines issues principalement des granulations et du cytoplasme. Ils sont essentiels dans la réponse anti-infectieuse mais semblent également impliqués dans la physiopathologie de certaines maladies auto-immunes et inflammatoires. L'objectif de ce travail a été d'évaluer les effets des NETs sur la maturation des DC dans un contexte inflammatoire au cours duquel les PN et les DC peuvent co-exister, assurant ainsi un pont entre immunité innée et immunité adaptative. La première partie de ce travail a consisté à développer un modèle de production, isolement et caractérisation des NETs issus de PN sanguins humains. L'ionophore de calcium A23187 a été choisi pour induire les NETs et l'enzyme de restriction AluI a permis la récupération de fragments de NETs de taille hétérogène. Certains des composants de ces NETs sont quantifiables (ADN, élastase, histone 3 en particulier), et nous avons montré qu'ils conservaient leurs capacités bactéricides in vitro. Ces échantillons de NETs constituent donc un outil biologique standardisé, permettant d'évaluer leurs effets sur des cellules ou des tissus. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons mis en évidence que ces NETs purifiés régulaient négativement la maturation de moDC induites par le LPS (expression de HLA-DR, CD80, CD83, CD86 et production de TNFα, IL-12, IL-6, IL-23). De plus, les NETs diminuent la capacité de ces moDC à induire la prolifération des LyT, et leur polarisation est modulée en favorisant la production de cytokines de type Th2 (IL-5 et IL-13) aux dépens de cytokines de types Th1 (INFγ) et Th17 (IL-17). De manière intéressante, la capacité de migration des moDC activées par le LPS n'est pas modifiée en présence de NETs. En résumé, ces résultats suggèrent que les NETs pourraient jouer un rôle immunorégulateur sur la maturation des moDC dans des conditions inflammatoires. Les NETs produits par les PN activés pourraient ainsi participer à la régulation indispensable de la réponse inflammatoire.