Dissertations / Theses on the topic 'Predisposición'

INTRODUCCIÓN El cáncer colorrectal (CCR) representa una de las neoplasias más frecuentes a nivel mundial. Los casos de CCR se pueden clasificar en formas esporádicas, hereditarias y familiares en base a la agregación familiar. Las formas hereditarias están causadas por mutaciones germinales de alta penetrancia en genes conocidos que se transmiten en la familia, provocando una fuerte agregación y aparición temprana de la enfermedad. El CCR familiar se caracteriza por la presencia de cierta agregación y causas genéticas de predisposición desconocidas, siendo en algunos casos la agregación familiar tan fuerte como en las formas hereditarias. Estos casos son sugestivos de estar causados por variantes de alta penetrancia en genes aún por identificar. Para detectar la causa germinal de predisposición en las familias con agregación para CCR existen distintas estrategias, siendo la secuenciación de nueva generación una manera de analizar grandes cantidades de datos de forma rápida y económica. La secuenciación del exoma, consistente en secuenciar toda la región codificante del genoma, es una aproximación útil para detectar variantes de alta penetrancia causantes de enfermedades con herencia mendeliana. OBJETIVOS 1) Identificación de nuevos genes candidatos implicados en cáncer colorrectal familiar mediante secuenciación completa del exoma. 2) Implementación de una metodología automática de filtrado y priorización de variantes genéticas a partir de los datos de secuenciación del exoma. 3) Búsqueda de nuevas vías de señalización relacionadas con la aparición de cáncer colorrectal familiar. 4) Cribado de los genes POLE y POLD1 en pacientes con múltiples pólipos o CCR de aparición temprana. ARTÍCULOS (METODOLOGÍA Y RESULTADOS) La metodología y resultados de esta tesis se recogen en tres artículos, siendo los dos primeros estudios de secuenciación del exoma en familias con fuerte agregación para CCR y sin alteraciones germinales en los genes hereditarios APC, MUTYH o los genes de Lynch (Whole-exome sequencing identifies rare pathogenic variants in new predisposition genes for familial colorectal cancer. Genetics in Medicine 2015;17:131-42; The Fanconi anemia DNA damage repair pathway in the spotlight for germline predisposition to colorectal cancer). European Journal of Human Genetics 2016 May 11 doi: 10.1038/ejhg.2016.44). Por otro lado, el tercer estudio se basa en la búsqueda de mutaciones en el dominio exonucleasa de los nuevos genes hereditarios POLE y POLD1 en 155 casos con múltiples pólipos o CCR de aparición temprana mediante secuenciación convencional Sanger (POLE and POLD1 screening in 155 patients with multiple polyps and early-onset colorectal cancer. Scientific reports, en revisión). DISCUSIÓN Los dos primeros estudios, al tener una metodología similar debido a que las técnicas realizadas son las mismas con pequeñas modificaciones en el análisis de datos, se comentan juntos. Se argumenta la adecuación de la tecnología utilizada, la selección de pacientes, la implementación de la metodología de anotación y filtrado de variantes, los genes candidatos de predisposición identificados mediante estos estudios y por último qué estudios adicionales se podrían realizar para reforzar la evidencia de estos descubrimientos. La discusión del tercer artículo incluye la tecnología utilizada, las características de los pacientes secuenciados y las variantes detectadas en nuestro estudio (incluyendo una variante de cambio aminoacídico para la cual se realizan múltiples experimentos para comprobar su patogenicidad).<br>Colorectal cancer (CRC) is one of the most common tumours and an important cause of mortality in the developed world. It is caused by environmental and genetic factors, with 35% of the variation in CRC susceptibility probably explained by inherited causes. The best known examples of inherited CRC predisposition are Mendelian forms such as Lynch syndrome and familial adenomatous polyposis. They account for ~5% of all cases, and are due to germline mutations in APC, MUTYH and the mismatch repair (MMR) genes, which confer a high risk of developing this disease. However, there is still a considerable number of cases with strong familial CRC aggregation and early disease onset with an unknown inherited genetic basis. Next generation sequencing is a good strategy to identify the germline predisposition cause in these cases, being exome sequencing a cost-efective approximation, useful for detecting high penetrance variants. This thesis is focused on the identification of new CRC predisposition genes through whole-exome sequencing in families with a strong aggregation for CRC and no alterations in the genes responsible for the classical hereditary forms. This strategy led to the publication of two papers: * Whole-exome sequencing identifies rare pathogenic variants in new predisposition genes for familial colorectal cáncer. Genetics in Medicine 2015;17:131-42 * The Fanconi anemia DNA damage repair pathway in the spotlight for germline predisposition to colorectal cancer. European Journal of Human Genetics 2016 May 11 doi: 10.1038/ejhg.2016.44 On the other hand, another study was conducted with the aim to find pathogenic variants in the exonuclease domain of the recently discovered hereditary genes POLE and POLD1, in a cohort of 155 Spanish patients, using conventional Sanger sequencing. A paper including the results of this study has been submitted * POLE and POLD1 screening in 155 patients with multiple polyps and early-onset colorectal cáncer. Scientific Reports (under revision)

El objetivo fue determinar los factores de riesgo asociados a la presentación de hipocalcemia subclínica (HCS) en ganado lechero de la provincia de Lima. Se realizó un estudio transversal empleando 534 registros de vacas monitoreadas entre 2016 y 2017. Se encontró 220 vacas con HCS (41.2%) y 314 vacas normocalcémicas (58.8%). Se realizó la prueba de chi cuadrado y un análisis de regresión logística bivariado a los factores significativos, encontrándose que, vacas con partos asistidos presentaron mayor chance de presentar HCS que aquellas sin asistencia, vacas que parieron en estrés calórico tuvieron mayor chance de tener HCS que cuando parieron en confort térmico, vacas procedentes de los establos 1, 2 y 4 tuvieron menor chance de presentar HCS que las del establo 3, vacas multíparas presentaron mayor chance de presentar HCS que las primíparas, vacas mayores a 3 años tuvieron mayor chance de presentar HCS que las menores de 3 años y aquellas con crías de más de 41.5 Kg PV presentaron mayor chance de presentar HCS que aquellas con crías de peso inferior. Finalmente, se realizó un análisis de regresión logística multivariado con los factores con nivel de significancia inferior a 0.20. Se determinó que las vacas multíparas tienen mayor riesgo de desarrollar HCS que las primíparas (OR ajustado = 2.2; p < 0.01). Vacas con partos asistidos tienen mayor riesgo de desarrollar HCS que aquellas sin asistencia (OR ajustado = 2.7; p < 0.01). Vacas que paren en época de estrés calórico tienen mayor riesgo de desarrollar HCS que cuando paren en época de confort térmico (OR ajustado = 6.9; p < 0.001). Vacas cuya producción es mayor o igual a 15 litros de calostro tienen mayor riesgo de desarrollar HCS que aquellas cuya producción es inferior (OR ajustado = 1.0; p < 0.05).

Magíster en farmacología<br>El carcinoma escamoso de laringe es una enfermedad altamente invalidante ya que puede afectar la capacidad del habla, respiración y deglución del paciente que lo sufre. Los principales factores causales identificados son cigarro y alcohol. Las vías de respuesta inflamatoria, proliferativa y de reparación de ADN pueden contribuir al riesgo de cáncer de laringe. El objetivo de este estudio es determinar asociaciones entre variantes genéticas COX-2 rs20417, COX-2 rs689466, EGF rs4444903, EGFR rs2227983, P53 rs1042522 y el riesgo de cáncer de laringe en la población chilena. Se realizó un estudio casos y controles, con 100 pacientes con cáncer escamoso de laringe y 139 voluntarios adultos sin cáncer. La genotipificación se realizó mediante PCR-RLFP. Se observa que estos polimorfismos son capaces de incrementar el riesgo de cáncer de laringe asociado a la combinación de consumo de tabaco y alcohol en una razón de 0,34 veces para COX-2 rs20417, 0,5 veces para EGF rs4444903, 0,56 veces para P53 rs1042522, 1,72 veces para EGFR rs2227983 y 4,7 veces para COX-2 rs689466. Esto sugiere que las variantes COX-2 rs20417, COX-2 rs689466, EGF rs4444903, EGFR rs2227983 y P53 rs1042522 actúan como modificadores de riesgo de cáncer de laringe.<br>Laryngeal squamous cell carcinoma is a kind of cancer that can be highly disabling to the patient, affecting speech, swallowing and respiratory skills, and leading to impaired quality of life. Smoking and alcohol abuse are principal risk factors linked to this disease. Inflammation signaling pathways, mitogens and DNA repair genes are factors that can be involved in carcinogenesis. The aim of this research is to assess the effect of COX-2 rs20417, COX-2 rs689466, EGF rs4444903, EGFR rs2227983, P53 rs1042522 single nucleotide polymorphisms in the risk of laryngeal cancer development in Chilean population. For this case control study, we recruited 100 cancer patients and 139 healthy volunteers. SNP genotype was analyzed from genomic DNA by PCR-RFLP. We observed that these SNPs are capable of increase the smoking plus alcohol risk of laryngeal cancer in a ratio of 0,34 fold for COX-2 rs20417 SNP, 0,5 fold for EGF rs4444903 SNP, 0,56 fold for P53 rs1042522 SNP, 1,72 fold for EGFR rs2227983 SNP and 4,7 fold for COX-2 rs689466 SNP. These findings suggest that COX-2 rs20417, COX-2 rs689466, EGF rs4444903, EGFR rs2227983 and P53 rs1042522 single nucleotide polymorphisms acts as risk modifier factors for laryngeal cancer.

La trombosis es una de las causas más frecuentes de morbilidad y mortalidad en las sociedades desarrolladas. Se estima una prevalencia de un 5-10% para trombosis venosa profunda (TV). La trombofilia es una enfermedad multifactorial y compleja en la que interactúan múltiples genes entre sí y a la vez con factores ambientales. Han sido descritos algunos factores de riesgo genéticos bien caracterizados que incrementan el riesgo de trombosis: deficiencia de Antitrombina (AT), deficiencia de Proteína C (PC) y deficiencia de Proteína S (PS). Sin embargo los conocimientos sobre la base molecular de esta patología son aún escasos. En un estudio multicéntrico realizado en nuestro país, el estudio EMET (Estudio Multicéntrico Español de Trombofilia) se observó que los factores genéticos de riesgo trombótico sólo se identificaban, en el mejor de los casos y dependiendo de la población estudiada, en el 60% de las familias con trombofilia.<br/>El objetivo principal de esta tesis es el análisis de factores genéticos de riesgo tromboembólico (TV) en la población española. Para ello hemos analizado varios factores genéticos desde 3 estrategias diferentes: análisis de ligamiento genético en familias con trombofilia idiopática (Proyecto GAIT: Genetic Analysis of Idiophatic Thrombophilia), análisis de asociación en un estudio caso-control en población española y análisis de asociación en familias con trombofilia portadoras de defectos de la hemostasia conocidos. Finalmente para mejorar el diagnóstico de la trombofilia hereditaria hemos desarrollado un nuevo método analítico.<br/><br/>Los principales resultados son:<br/><br/>1 - La RPCa es un factor de riesgo tromboembólico independiente de la mutación Factor V Leiden (FVL). La deleción en el dominio B del FV (3997-4104EX13del del F5) no parece alterar las propiedades funcionales del FV. <br/><br/>2 - La variante alélica PT20210A en el gen de la protrombina (PT), es un polimorfismo funcional que influye en los niveles de la PT y en la susceptibilidad al TV.<br/><br/>3 - El riesgo de TV, en familias con trombofilia asociadas con algún defecto conocido, muestra una disminución en el siguiente orden: AT> PS> PC> FVL> PT20210A.<br/><br/>4 - La asociación de la mutación FVL a las deficiencias AT, PC y PS incrementa el riesgo a la TV.<br/><br/>5 - La asociación de PT20210A a la deficiencia de AT, PS y a la mutación FVL incrementa el riesgo de TV. En el caso de la asociación de la PT20210A a la deficiencia de PC no incrementa el riesgo de TV. <br/><br/>6 - La homocigosis (T/T) para el polimorfismo C46T del gen F12 es un nuevo factor de riesgo TV en población española. Desarrollamos un método rápido y reproducible mediante un termociclador en tiempo real (LightCycler de Roche) para su genotipación. <br/><br/>7 - Los niveles elevados de FVIII y los grupos sanguíneos del sistema ABO tipo no-O, probablemente el alelo A1, son factores de riesgo independientes para el TV en población española. <br/><br/>8 - Bajo el punto de vista clínico, el estudio de la recurrencia de TV observada en el presente trabajo muestra como:<br/>- Los niveles de FVIII > 232% (percentil 90) incrementa hasta dos veces más el riesgo a padecer trombosis recurrentes.<br/>- Los pacientes de familias que asocian FVL y PT20210A presentan mayor frecuencia de recurrencia.<br/><br/>9 - Las mujeres portadoras de FVL o de PT20210A muestran una mayor tendencia a presentar clínica trombótica relacionada con el uso de anticonceptivos orales.<br/><br/>10 - La combinación del análisis de ligamiento, junto con el estudio de asociación <br/>caso-control, proporciona un sistema muy potente para identificar variantes del ADN que contribuyen a la susceptibilidad de la enfermedad tromboembólica.<br><I>. <br/><br/>Title: Analysis of Hereditary Thrombophilia: Contribution of Genetic<br/>Factors in the Predisposition of Venous Thromboembolism in the Spanish Population.<br/><br/>Although there is little information on the prevalence of venous thromboembolism (VTE), data suggest a minimum lifetime prevalence of 5-10%. Thrombophilia is a complex disease that is caused by both environmental and genetic factors. There are well-characterised genetic defects that increase thrombotic risk such as Antithrombin (AT), Protein S (PS) and Protein C (PC). In the Spanish Multicentric Study on Thrombophilia (EMET-Study) we identified risk factors in 60% of thrombophilic families.<br/>The main objective of this doctoral thesis is the analysis of genetic risks factors of VTE in the Spanish population. We analyzed genetic factors using three different methodologies: genetic linkage analysis in families (GAIT Project: Genetic Analysis of Idiopathic Thrombophilia), a case-control and association family study. Finally, to improve the diagnosis of VTE we develop a rapid method for genotyping the 46C&#61664;T mutation using a new LightCycler PCR (Roche) protocol. <br/><br/>The main results were:<br/><br/>1 - APC-resistant is a VTE risk factor independent of Factor V Leiden mutation (FVL). The mutant allele of the deletion 3997-40104EX13del in F5 is expressed and the resultant protein is functional.<br/><br/>2 - The prothrombin G20210A mutation is a functional polymorphism that jointly influences plasma prothrombin levels and susceptibility to VTE. <br/><br/>3 - The risk of VTE decreases in the following order: AT > PS > PC > FVL > PT20210A.<br/><br/>4 - The FVL increased the risk of VTE in families with AT, PS or PC deficiencies.<br/><br/>5 - The prothrombin G20210A mutation increased the risk of VT in families with AT, PS and FVL but no in families with PC deficiencies. <br/><br/>6 - The homozygosity (T/T) for the 46 C->T polymorphism in the F12 gene is a genetic risk factor for VTE. <br/><br/>7 - High levels of FVIII and non-O blood groups of ABO system, likely those with the A1 allele, are independent risk factors for VTE. <br/><br/>8 - The combination of linkage analysis coupled with association studies is an extremely valuable approach to identify DNA variants that affect to VTE.</I>

A partir del primer año de edad y durante los primeros años de vida, las lesiones no intencionadas son un problema importante de salud, que se encuentran entre las primeras causas de muerte en todos los países. La mayoría de estudios analizan los factores epidemiológicos más relevantes de aquellos accidentes que han llegado a los servicios sanitarios. Sin embargo, no se ha prestado la suficiente atención a los accidentes que no tienen consecuencias graves, ni a las características personales de los menores, o a la interacción de éstos con el medio y con sus cuidadores. Metodología: Se trata de un estudio observacional de carácter transversal, asociado a un seguimiento longitudinal prospectivo. Lo hemos llevado a cabo en una población de 291 niños y niñas de entre dos y cuatro años de edad, pertenecientes a Centros de Atención a la Infancia y Escuelas Infantiles integradas en Colegios Concertados de Murcia capital y alrededores. La información se ha recogido en varias fases y a través de cuestionarios completados por los padres. Las variables analizadas son dimensiones de temperamento (Cuestionario TBAQ-R), conductas relacionadas con los accidentes (Cuestionario CIRA) y perfil educativo paterno (Cuestionario PEE-I). La variable dependiente principal es la accidentalidad infantil evaluada a través de un inventario de los accidentes sufridos en los últimos seis meses. Esta accidentalidad se evaluó transversalmente en el momento de la primera recogida de información y, de nuevo, un año más tarde para analizar la capacidad predictiva de las variables sobre la accidentalidad desde una perspectiva longitudinal. Objetivos: 1.1. Registrar las características y dimensiones temperamentales de los sujetos participantes. 1.2. Explorar los comportamientos infantiles relacionados con una mayor predisposición a sufrir accidentes. 1.3. Evaluar los estilos educativos paternos (sobreprotector, inhibicionista, punitivo o asertivo), y describir el papel de los mismos en el riesgo de sufrir lesiones infantiles no intencionales. 1.4. Identificar la frecuencia y la naturaleza de las lesiones que los niños pueden experimentar de forma no intencional. Resultados: Durante los dos cursos estudiados, los golpes y choques han sido los accidentes que más han sufrido los menores, seguidos de las caídas, y los accidentes menos frecuentes han sido los relacionados con productos químicos, tóxicos y con los efectos de la electricidad. Dentro de las dimensiones temperamentales, la mayor tasa de accidentalidad infantil se ha asociado al aumento de Ira/frustración y a la disminución de Tristeza, Cambio atencional y Control inhibitorio. Tanto los comportamientos de riesgo como los de error se han asociado con un incremento de la frecuencia de accidentes sufridos por los niños. El estilo educativo sobreprotector, no se ha asociado con un menor índice de accidentalidad. Conclusión: Como cabía esperar, tanto los comportamientos de riesgo como los de error se asocian a una mayor accidentalidad. Determinados rasgos de temperamento infantil tienen un importante papel, incrementando el riesgo de desarrollar este tipo de conductas y, por tanto, de sufrir lesiones no intencionadas.<br>SUMMARY From first year of life and during the early years of life, unintentional injuries are a major health problem, which is among the leading causes of death in all countries. Most studies analyze the most relevant epidemiological factors of those accidents that have come to health services. Nevertheless, it has not paid enough attention to disregarding those accidents that have not serious consequences, neither to the personal characteristics of the minors or the interaction of them with the environment and their caregivers. Methodology: This is an observational cross-sectional study, combined with a prospective longitudinal follow-up. We have conducted it in a population of 291 children aged between two and four years old, belonging to Centers Child Care and Schools Children integrated into Charter Schools from Murcia city and surroundings. Information has been collected in several phases and through questionnaires completed by parents. The variables analyzed are dimensions of temperament (Questionnaire TBAQ-R), behaviors related with accidents (Questionnaire CIRA) and paternal educational profile (Questionnaire PEE-I). The main dependent variable is the childish accidentality evaluated through an inventory of accidents occurring in the last six months. This accidentality was assessed transversely at the time of the first data collection and, again, a year later, to analyze the predictive ability of the variables on the accidentality from a longitudinal perspective. Goals: 1.1. Registering the features and temperamental dimensions of the participating subjects. 1.2. Exploration of the infant behaviour related with greater predisposition to suffer accidents. 1.3. Evaluate the paternal parenting styles (overprotective, inhibited, punitive or assertive), and describe the role of these in the risk of unintentional childhood injuries. 1.4. Identify the frequency and nature of injuries that children may experience unintentionally. Results: During the two years studied, the bumps and shocks are the accidents that have suffered most children, followed by falls, and the least frequent accidents are those associated with chemical, toxic products and the effects of electricity. Within the temperamental dimensions, the highest rate of childish accidentality has been associated with increased of anger / frustration and sadness decrease, attentional change and inhibitory control. Both risk behaviors such as error behaviors have also been associated with an increased of frequency of accidents involving children. The overprotective parenting style, has not been associated with a lower accident rate. Conclusion: As expected, both risk such as error behaviors are associated with a higher accidentality rate. Certain features of infant temperament have an important role, increasing the risk of developing this type of behavior and, therefore, to occur unintentional injuries.

Actualmente, las opiniones emitidas mediante Redes Sociales han tomado mucha importancia en cuanto a la intención de compra. En la industria gastronómica, se observa la tendencia a fotografiar la comida para posteriormente, publicarla. De esta manera, la personas que las siguen, pueden conocer dónde está comiendo, qué cosa está comiendo y hasta con quién, por lo que los restaurantes se esfuerzan cada vez más en la presentación de sus platos. La presente investigación busca abordar el tema de la influencia del contenido visualizado en Instagram por los jóvenes Milennials, en la predisposición de compra en restaurantes. Busca elaborar un análisis profundo respecto al boca a boca digital (E-Wom) y la tendencia a fotografiar los platos de comida de forma instagrameable, comportamiento común en los consumidores.<br>Now on this days, the public opinions posted on social media have got more importance on the purchase intent of the customers. On the gastronomic industry, the arising tendency of taking pictures of the food and then publishing them. On this way, all the followers will see where, what and with whom are you eating. That’s why the restaurants are improving their dishes presentation. The present research look to aboard the influence of the content published on Instagram by the millennial users, over their predisposition on consuming at different restaurants. This document make a deep analysis of the digital worth of mouth (E-WoM) and the lately tendency of picturing the dishes for Instagram proposes.<br>Trabajo de investigación

El trasplante alogénico de progenitores hematopoyéticos (alo-TPH) representa la única estrategia curativa para un grupo no desdeñable de enfermedades hematológicas previamente letales. Sus resultados, mejoran de forma progresiva con el paso de los años, sin embargo, la mortalidad relacionada con el trasplante (MRT) oscila entre el 15 y el 50% en función de las características del paciente y el tipo de trasplante. La presente tesis doctoral ahonda en las dos principales causas de MRT, la enfermedad injerto contra el receptor aguda (EICRa) y las infecciones oportunistas, que condicionan gran parte de la morbi-mortalidad asociada al procedimiento y se encuentran íntimamente relacionadas. En este trabajo se identifican, en primer lugar, aspectos que suponen un problema habitual en la práctica clínica diaria que limitan la mejora de los resultados globales del procedimiento y se proponen, a continuación, estrategias prácticas para contrarrestar estas dificultades. En relación a la EICR, los ámbitos en que se centra el interés son, en primer lugar, el impacto de un manejo adecuado de la profilaxis farmacológica en la aparición de EICR aguda con la importancia de evitar niveles infraterapéuticos de Ciclosporina A en sangre las primeras semanas post-trasplante para mejorar los resultados a largo plazo y posteriormente, una vez identificada dicha complicación, y especialmente en el caso de refractariedad a esteroides, un segundo trabajo remarca la importancia del apropiado diseño y el seguimiento prolongado de los pacientes a la hora de evaluar la eficacia de las distintas estrategias de rescate. En el ámbito de las infecciones oportunistas, se muestran datos epidemiológicos sobre la incidencia, momento de aparición, patógenos responsables e impacto de las infecciones en la morbi-mortalidad en el ámbito de la EICR refractaria, un escenario de conocido alto riesgo en el que hasta la fecha, no se habían descrito datos que permitan optimizar las estrategias de profilaxis y tratamiento anticipado aplicadas en otros escenarios. Cada uno de los trabajos incluidos en esta Tesis Doctoral aporta información detallada y original sobre aspectos concretos de las complicaciones post-TPH y su conjunción permite una visión global de la situación actual y las posibles estrategias de mejora que supera, sin duda, la suma de las partes.<br>Allogeneic stem cell transplantation (allo-SCT) is the only curative therapy for many patients with hematologic malignancies. However, this treatment is limited by a high morbidity and mortality that ranges from 15% to 50% depending on patient and transplant characteristics. This doctoral thesis focuses on the two main causes of transplant related mortality (TRM), acute Graft-Versus-Host-Disease (aGVHD) and opportunistic infections, which are closely associated and cause significant morbidity and mortality in the early post-trasplant period. Firstly, this work identifies several issues that remain common obstacles in allo-SCT daily clinical practice. Secondly, evidence-based interventions are proposed to overcome these difficulties. In terms of GVHD, the interest areas are, firstly, the impact of an adequate pharmacological prophylaxis on the occurrence of acute GVHD, especially the importance of avoiding infraterapeutic levels of Ciclosporin A in the blood the first four weeks after SCT to improve long-term outcomes and secondly, once this complication has been developed, and especially in the case of steroid refractoriness, a second report stresses the importance of the appropriate design and long term follow-up of affected patients to evaluate the effectiveness of the different salvage strategies. In the field of opportunistic infections, epidemiological data on the incidence, time of onset, responsible pathogens and impact of infections on morbidity and mortality in patients with refractory acute GVHD (a well known high risk scenario in which data are lacking) are shown. This information seems helpful to optimize monitoring, prophylactic and pre-emptive strategies that have been implemented in other high-risk groups. All manuscripts included in this doctoral thesis provide detailed and original information on specific aspects of post-SCT complications and their conjunction allow a final view of the current situation and possible strategies for improvement of NRM in the SCT field that undoubtedly exceed the sum of the parts.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario<br>La asfixia fetal tiene como consecuencia una disminución de la oxigenación, lo que genera un descenso del aporte sanguíneo en los órganos que no son imperativos para la sobrevivencia inmediata, donde comienza a emplearse la glicólisis anaeróbica para producir energía. Esta vía metabólica es menos eficiente, debido a que la energía producida es reducida y las reservas de carbohidratos son rápidamente agotadas, desarrollándose finalmente una acidosis metabólica por la acumulación de acido láctico. Esta ha sido asociada con disminución de la absorción de inmunoglobulinas y falla en la transferencia de inmunidad pasiva. El objetivo de este estudio fue evaluar la relación entre la lactatemia de terneras neonatas, con la concentración de PST y la predisposición a enfermar durante su primer mes de vida. Se realizó entre mayo y agosto de 2014 en una lechería de la zona central e incluyó a 38 terneras Holstein-Friesian. Se tomaron muestras de sangre para medir el lactato sanguíneo con un analizador portátil y estimar las PST por refractometría. Además se registraron los eventos clínicos producidos durante el primer mes de vida. La comparación estadística entre las medias de los parámetros evaluados se realizó con la prueba t de Student. Se relacionó el lactato con las PST por medio de análisis de regresión y se evaluó la habilidad predictiva de la lactatemia en la morbilidad de las terneras con análisis de ROC. Terneras provenientes de distocias tenían mayores concentraciones de lactato sanguíneo (p<0,1) y menores niveles de PST (p<0,05), que terneras nacidas de partos eutócicos. Las terneras que enfermaron presentaron mayores concentraciones de lactato, en comparación con las terneras sanas (p<0,05). No hubo diferencias significativas entre las concentraciones de PST entre sanas y enfermas. Si bien el lactato sanguíneo y las PST evidenciaron una asociación negativa (p<0,1), no hubo una relación estadística entre ambos parámetros baja (r2=0,1). El análisis ROC demostró que la medición de la lactatemia posee cierto valor predictivo de enfermedades, con un punto de corte de 4,5 mmol/l para distinguir entre terneras sanas y aquellas que tienen más probabilidades de enfermar. Por lo tanto, el uso de analizadores portátiles de lactato sanguíneo, constituye una herramienta útil para ser usada en terreno en la detección temprana de terneras con una mayor susceptibilidad de enfermar

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario<br>Un total de 2.461 individuos de Salmón del Atlántico (Salmo salar), de 29 familias de propios hermanos, con aproximadamente 85 individuos por familia en etapa de pre-smolt fueron desafiados con la bacteria Piscirickettsia salmonis para inducir la enfermedad piscirickettsiosis (SRS). El análisis se realizó definiendo la sobrevivencia a la enfermedad como una característica binaria mediante un modelo binario (MB) y como la respuesta binaria a una suma de factores de efecto desconocido que se comportan según una curva de distribución normal, llamado modelo umbral (MU). El principal parámetro que se obtuvo fue la heredabilidad la que se definió como la capacidad de sobrevivir frente al desafío con el agente patógeno. Además se calculó la respuesta a la selección, definiéndose como la disminución de la mortalidad poblacional debido a la infección con el patógeno. La heredabilidad y la respuesta a la selección fueron analizadas con ambos modelos al día 30, 40 y 51 obteniéndose heredabilidades de entre 0,195 a 0,25 para el modelo binario y de entre 0,457 a 0,417 para el modelo umbral; mientras que la respuesta a la selección con el modelo binario fue entre -0,019 y -0,066 y para el modelo umbral varió entre -0,082 y -0,179. Estos resultados llevan a pensar que un programa genético tendiente a seleccionar la población por su capacidad genética para resistir la piscirickettsiosis, tendría una efectividad considerable y podría ser una buena alternativa para aumentar la competitividad de la industria salmonícola nacional<br>Proyecto Corfo-Innova (05CT6 PP-10)

La incidencia de la enfermedad cardiovascular (ECV) se ha incrementado en los pacientes infectados por el VIH. La replicación del VIH y la terapia antirretroviral pueden contribuir de forma independiente al aumento del riesgo de ECV. Sin embargo, la causa de este aumento del riesgo es multifactorial. Métodos: Esta tesis se centra en el estudio de los trastornos metabólicos y cardiovasculares en una cohorte de pacientes infectados por el VIH. Para ello, se llevaron a cabo tres estudios: Un primer estudio, diseñado con el propósito de determinar si un análisis combinado de variantes genéticas en algunos de los genes responsables de las anomalías lipídicas ayudarían a discriminar los pacientes infectados por el VIH con niveles altos de triglicéridos y bajos niveles de HDL-colesterol (pacientes con perfil aterogénico), considerado un marcador claro de riesgo cardiovascular. Para ello, se realizó la caracterización genética y metabólica de 321 pacientes infectados por el VIH en tratamiento antirretroviral, a través de la determinación del perfil lipídico, la determinación de partículas remanentes de colesterol y la determinación de los genes implicados en la formación y en la eliminación de partículas remanentes de la circulación. Se identificaron varios genes responsables de la modulación de los parámetros lipídicos en esta población. Sin embargo, el diseño transversal del estudio y el pequeño tamaño de la muestra no permitió conclusiones definitivas acerca de la asociación entre polimorfismos en los genes asociados con el metabolismo de los lípidos y los trastornos de lípidos en pacientes infectados por el VIH. El segundo estudio, se centró en la detección precoz de la aterosclerosis subclínica. Para ello, se evaluó la elasticidad arterial a través de la determinación de la velocidad de la onda de pulso (VOP) en pacientes infectados por el VIH, en comparación con sujetos no infectados. Se identificaron factores de riesgo asociados con la alteración de la elasticidad arterial. Pacientes infectados por el VIH con supresión virológica mostraron elasticidad arterial similar a sujetos no infectados. Condiciones relacionadas con el VIH no se asociaron con la rigidez arterial. Sin embargo, la presión arterial diastólica y triglicéridos altos en el momento de la VOP fueron factores de riesgo asociados. Por último, se realizó un tercer estudio descriptivo, observacional, retrospectivo para determinar la prevalencia de la enfermedad coronaria en una cohorte Mediterránea de pacientes infectados por el VIH, identificándose los factores de riesgo modificables más importantes y el manejo de los mismos en la práctica clínica. Se observó una baja prevalencia de eventos coronarios en esta población, los factores de riesgo cardiovascular fueron mal controlados, un bajo porcentaje de pacientes alcanzaron niveles óptimos en los parámetros lipídicos y se observó un mal control de los factores de riesgo no lipídicos después del evento coronario. El diseño retrospectivo de este estudio no permitió determinar la tasa real de algunos factores de riesgo y por lo tanto evaluar los cambios de los factores de riesgo en el tiempo. Conclusión: Algunas variantes genéticas son predoctoras de cambios en los parámetros lipídicos, la información genética podría ayudar a los médicos a individualizar el tratamiento del paciente para reducir el riesgo cardiovascular. Tenemos que ser más proactivos en el diagnóstico, el manejo y el seguimiento de estos factores de riesgo en la población infectada por el VIH y los planes de salud cardiovasculares deben ser una prioridad para garantizar el control adecuado del riesgo cardiovascular en esta población.<br>The incidence of cardiovascular disease (CVD) has increased among HIV-infected patients. Both HIV replication and antiretroviral therapy may contribute independently to increase the risk of CVD. However, the cause of this increased risk is multifactorial. Methods: This thesis focuses on the study of metabolic and cardiovascular disorders in a cohort of HIV-infected patients. Three studies were conducted: A first study was designed with the purpose of ascertaining whether a combined analysis of several genetic variants in some of the genes responsible of lipid abnormalities helped discriminate HIV-infected patients with high triglycerides and low levels of HDL-cholesterol (patients with atherogenic profile), clear marker of cardiovascular risk. It was carried out metabolic and genetic characterization of 321 HIV-infected patients receiving antiretroviral therapy, through the determination of the lipid profile, determination of remnant cholesterol particles and determination of genes involved in the formation, as in removing remaining particles from circulation. Several genes responsible for modulation of lipid parameters in this population were identified. However, the cross-sectional design of the study and the small sample size does not allow definitive conclusions about the association between polymorphisms in genes associated with lipid metabolism and lipid disorders in HIV-infected patients. The second study focused on the early detection of subclinical atherosclerosis. For this, arterial elasticity was evaluated through the determination of the pulse wave velocity (PWV) in HIV-infected patients, compared to non-infected subjects. Risk factors associated with impaired arterial compliance were identified. HIV-infected patients with virologic suppression showed similar arterial elasticity than non-infected subjects. HIV-related conditions were not associated with arterial stiffness. However, high diastolic pressure at the time of the PWV and high triglycerides were risk factors. Finally, we conducted a descriptive, observational, retrospective study (third study) to determine the prevalence of coronary disease in a Mediterranean cohort of HIV-infected patients, also identified the most important modifiable risk factors and the management of these in the clinical practice. We observed a low prevalence of coronary events in this population, the cardiovascular risk factors were poorly controlled, low percentage of patients reached optimal levels in lipid parameters after coronary event and poor control of non-lipid risk factors was performed. The retrospective design of this study did not allow to determinate the actual rate of some risk factors and therefore assess changes over time. However, it gives us a clear picture of actual clinical practice and has given us to know the weaknesses in this context. Conclusions: Some genetic variants are predictive of changes in lipid parameters; genetic information could help physicians individualize patient management to reduce cardiovascular risk. We must be more proactive in the diagnosis, management and monitoring of these risk factors in the population infected by HIV and cardiovascular health plans are a priority to implement and control of cardiovascular risk factors in these subjects.

Diseñador Industrial<br>A pesar de que los ejercicio convencionales mejoran la capacidad aeróbica y ayudan a la funcionalidad en general, están expuestos a sobrecargas articulares, no trabajan el recorrido articular completo y no se focalizan en la zona crítica. Actualmente podemos encontrar distintos equipamientos, tales como las máquinas de fuerza, bicicletas estáticas y máquinas de gimnasio en general, que cubren parcialmente lo que un paciente de artrosis busca en el ejercicio físico. El problema se origina al existir una desconexión entre el equipamiento para el ejercicio físico y las consideraciones de la artrosis en el adulto mayor. El proyecto busca mejorar la predisposición del adulto mayor hacia el ejercicio físico, mediante un equipamiento especializado, que integre tanto los aspectos y beneficios técnicos del ejercicio para la artrosis, como las características y condiciones del adulto mayor.

GRado de magíster en ciencias biológicas, mención biología celular y molecular.<br>A nivel mundial, el cáncer de mama (CM), es el más frecuente y la principal causa de muerte por cáncer en mujeres (14%), representando el 23% del total de casos nuevos de cáncer. En Chile, es la primera causa de muerte por cáncer en mujeres, y la mortalidad por CM, ha ido en aumento en las últimas dos décadas. Debido a lo anterior, es pertinente realizar estudios que permitan conocer mejor sus bases etiológicas, para poder tomar medidas que permitan su prevención y su detección temprana. En la literatura existen variadas publicaciones en relación a genes codificantes que aumentan la susceptibilidad a desarrollar CM. Este, es el caso de los genes BRCA1/2, ATM, PALB2 entre otros, sin embargo en los últimos años se ha puesto mayor atención a la influencia que pudiesen tener secuencias no codificantes sobre el riesgo de desarrollar CM. Especialmente, existe gran interés en los miRNAs, y polimorfismos presentes en ellos, que pudieran ser la causa de aumento de riesgo para CM. Se ha demostrado que la presencia de SNPs en las secuencias de precursores o miRNAs maduros, afecta la maduración y el procesamiento de estos RNAs pequeños, así como también el silenciamiento de sus mRNAs blancos, proponiéndose este mecanismo como el responsable del desarrollo de diversas patologías entre ellas el CM. En este trabajo se analizaron las frecuencias alélicas y genotípicas de tres SNPs (rs2910164, rs3764444 y rs11614913) presentes en los miRNAs 146a y miRNA-499 y miRNA-196 respectivamente, y su asociación con el aumento de susceptibilidad a desarrollar CM en mujeres chilenas. Los resultados muestran que los SNPs presentes tanto en el miRNA-499 como en el miRNA-196, disminuyen el riesgo a desarrollar CM y actuarían como potenciales factores protectores para la patología. Por el contrario, el SNP presente en el miRNA-146a se asoció con aumento de riesgo para desarrollar CM en mujeres con CM esporádico, sin historia familiar para la patología, mientras que en pacientes con historia familiar mostró ser un factor protector. Estos resultados muestran la complejidad biológica que estaría detrás de cada tipo de CM, y los efectos tan distintos que los miRNAs podrían tener en diferentes contextos celulares. Para estudiar la funcionalidad biológica que pudiese tener el SNP presente en el pre- miRNA- 146a, se clonó este fragmento desde pacientes portadores para el alelo de riesgo y de sujetos controles, para posteriormente estudiar su efecto in vitro mediante la transfección en células de mama humana. Aunque no analizado, se espera que un cambio en la secuencia de un precursor de miRNA, afecte de tal manera su estructura secundaria que aumente o disminuya su disponibilidad para la maquinaria de procesamiento, resultando en cambios en los niveles de expresión de los miRNAs maduros. Estos cambios tendrían un impacto directo sobre la tasa de silenciamiento de los mRNAs blancos, que al estar más o menos silenciados promoverían un desequilibrio que aportaría con la transformación celular.<br>Worldwide, breast cancer (CM) is the most common and the leading cause of cancer death in women (14%), representing 23% of all new cancer cases. In Chile, it is the leading cause of cancer death in women, and mortality from CM, has been increasing in the last two decades. Because of this, it is appropriate to conduct studies to better understand their etiological bases, to take measures to prevention and early detection. In the literature there are various publications regarding coding genes that increase susceptibility to CM. This is the case of BRCA1 / 2, ATM, PALB2 among other genes, however in recent years there has been more attention to the influence that may have non-coding sequences on the risk of developing CM, specifically there is great interest in miRNAs, and polymorphisms present in them, which could be the cause of increased risk for CM. It has been shown that the presence of SNPs in the sequences of precursors or mature miRNAs affects maturation and processing of these small RNAs, as well as the silencing of their targets mRNAs, proposing this mechanism as responsible for the development of various diseases among CM them. In this work the allele and genotype frequencies of three SNPs (rs2910164, rs3764444 and rs11614913) present in the miRNAs 146a and miRNA-499 and miRNA-196 respectively, and its association with increased susceptibility to CM in Chilean women were analyzed. The results demonstrate that the SNPs present in both the miRNA-499 and miRNA-196, decrease the risk of developing CM and act as potential protective factors for the disease. By contrast, the SNP present in the miRNA-146a was associated with increased risk for women with CM CM sporadic, without family history of the disease, while in patients with family history was shown to be a protective factor. These results show the biological complexity that would be behind each type of CM, and the very different effects that miRNAs may have in different cellular contexts. To study the biological functionality that might be present in the pre miRNA- SNP 146a, this fragment was cloned from patients for the risk allele and control subjects, transforming later to study its effect in vitro by transfection into cells human breast.Despite not studied, it is expected that a change in the sequence of a miRNA precursor, so affecting its secondary structure to increase or decrease their availability for processing machinery, resulting in changes in the expression levels mature miRNAs. These changes may have a direct impact on the rate of silencing targets mRNAs, which being more or less silenced would promote an imbalance that would contribute to tumor cell transformation.

Magíster en Educación Mención Informática Educativa<br>El propósito de este estudio fue determinar si existe relación entre predisposición docente hacia la Pizarra Digital Interactiva y los niveles de logro en curso de formación del recurso, para incorporarlo como variable en conjunto con las ya conocidas; como son el acceso a tecnología, educadores con destrezas, desarrollo profesional, asistencia técnica, criterios para la selección de contenidos y recursos curriculares, enseñanza centrada en el alumno, evaluación, apoyo de la comunidad, políticas de apoyo, etc. De esta manera contribuir a una incorporación de recursos tecnológicos al aula, necesarios para la formación del ciudadano digital y el desarrollo social y humano, abriendo caminos para el acceso de toda la población a los códigos culturales propios de la modernidad. Se estudió un grupo de 59 docentes de un colegio particular subvencionado de la región metropolitana en Chile bajo una investigación cuantitativa, cuasi experimental de un grupo, con mediciones pre y post intervención. Los resultados son una tendencia a tener mejores niveles de logro en el curso a medida que la predisposición es más positiva. Así como también una tendencia a tener peores niveles de logro a medida que la predisposición es más negativa. No obstante estadísticamente esta correlación no es significativa

El genoma humà està format en un 5% per low-copy repeats (LCR); segments de DNA d’entre 1 i 500 Kb que es repeteixen dues o més vegades al llarg del genoma i que comparteixen una homologia superior al 90%. L’aparellament no al·lèlic d’aquestes seqüències durant la meiosi promou la generació d’esdeveniments de recombinació homòloga no al·lèlica (NAHR) que donen lloc a reorganitzacions cromosòmiques heretables que originen un conjunt de malalties anomenades trastorns genòmics. La deleció de la regió 22q11.2, originada per la NAHR entre els LCR22, causa la síndrome de DiGeorge/velocardiofacial (SDG/VCF), un dels trastorns genòmics més freqüents en els humans. L’objectiu principal d’aquesta tesi doctoral va ser l’avaluació de les característiques genètiques que modulen la susceptibilitat a la NAHR en individus transmissors de la SDG/VCF. Es va caracteritzar la susceptibilitat a la NAHR en 8 homes amb descendència afectada per la SDG/VCF. Aquest estudi es va dur a terme a través de l’anàlisi de la freqüència d’espermatozoides portadors de delecions i duplicacions de la regió 22q11.2, i d’altres regions crítiques amb una arquitectura genòmica similar, mitjançant la hibridació in situ fluorescent (FISH) en nuclis descondensats d’espermatozoides. Els resultats obtinguts van demostrar que 2 pares transmissors de la SDG/VCF presentaven increments significatius d’espermatozoides portadors de la deleció 22q11.2 que es van atribuir a un increment de la NAHR intra-cromàtide focalitzada a la regió 22q11.2. En aquests individus, també es van analitzar els blocs de seqüències en tàndem dels LCR22-2 i LCR22-4 mitjançant la tècnica de la FISH en fibres de cromatina (fiber-FISH) obtingudes de leucòcits. Els resultats de l’anàlisi van mostrar variacions respecte la població control dels blocs de seqüències en tàndem corresponents als fòsmids L9 i K3. Aquestes variacions podrien constituir un factor de predisposició a la NAHR. Per tal de validar els resultats obtinguts mitjançant fiber-FISH, es van analitzar les variacions de seqüències paràlogues en els LCR22 cobertes pels fòsmids L9 i K3 mitjançant la reacció en cadena de la polimerasa de tipus droplet digital (ddPCR). No es van observar diferències significatives entre les poblacions d’individus transmissors de la SDG/VCF i de controls analitzades. Tot i així, els resultats van suggerir una disminució de còpies del pseudogen de AK129567 en els individus transmissors. D’altra banda, també es va analitzar la freqüència de la inversió 22q11.2 mitjançant la FISH interfàsica en limfòcits. No es va detectar cap haplotip d’inversió 22q11.2 en individus transmissors ni en controls. Així doncs, es va confirmar la inexistència d’aquest polimorfisme i es va excloure la seva implicació com a factor de predisposició per la SDG/VCF. Per últim, es va determinar el genotip de PRDM9 mitjançant PCR i seqüenciació Sanger. La comparació de les freqüències al·lèliques entre els individus transmissors i la població control no va mostrar diferències significatives. Tot i així, es va descriure un al·lel nou de PRDM9, que es va denominar L50, en un pare transmissor de la SDG/VCF que havia mostrat increments de delecions 22q11.2 en espermatozoides. Aquest resultat va suggerir que certs al·lels rars de PRDM9 podrien actuar com a factor de predisposició per la NAHR a la regió 22q11.2. En conjunt, l’avaluació dels factors de predisposició a la inestabilitat genòmica de la regió 22q11.2 va reflectir que el risc a la NAHR en aquesta regió és complex i atribuïble a la confluència de diferents característiques genètiques.<br>The 5% of the human genome is constituted by low copy repeats (LCRs). LCRs are DNA fragments from 1 to 500 kb in size, with at least two copies across the genome that share a high level of sequence identity (> 90%). The non-allelic alignment of these sequences during meiosis promotes non-allelic homologous recombination events (NAHR) that could lead to chromosome reorganizations which can be transmitted to the offspring. These reorganizations originate a group of diseases called genomic disorders. Deletions of the 22q11.2 region, caused by NAHR between LCR22, result in the DiGeorge/velocardiofacial syndrome (DGS/VCFS) which is one of the most frequent genomic disorder in humans. The main objective of this thesis was to evaluate the genetic features that could modulate the NAHR susceptibility in DGS/VCFS transmitting individuals. NAHR susceptibility was analysed in a total of eight men with DGS/VCFS affected progeny. This study was achieved by analysing the frequency of deletions and duplications of the 22q11.2 region, and other critical regions with a similar genomic architecture, using fluorescence in situ hybridization (FISH) in decondensed sperm nuclei. Results demonstrated that two transmitting fathers showed statistical significant increases of 22q11.2 deletions in sperm. This abnormality was attributed to an abnormal intra-chromatid NAHR activity focused on the 22q11.2 region. By applying FISH on chromatin fibers obtained from leucocytes (fiber-FISH), the blocks of tandem repeats within LCR22-2 and LCR22-4 were also evaluated for these individuals. With respect to the control population, SDG/VCF transmitting fathers showed copy number variations on tandem sequence blocks corresponding to the L9 and K3 fosmid sequences that could constitute a predisposing factor for NAHR. In order to validate fiber-FISH data, variations of paralogous sequences covered by L9 and K3 fosmids were analysed by using droplet digital polymerase chain reaction (ddPCR). Although differences between the population of DGS/VCFS transmitting parents and control individuals were not observed, the results suggested a decrease of the AK129567 pseudogene copy number in transmitting parents. The frequency of 22q11.2 inversions was also studied by applying interphase FISH in lymphocytes. The inversion haplotype was not detected in any transmitting or control individuals. Therefore, the absence of the 22q11.2 inversion polymorphism was confirmed and this genetic feature was excluded as a possible predisposing factor for DGS/VCFS. Finally, PRDM9 genotype was assessed by using PCR and Sanger sequencing. Allelic frequencies of control and DGS/VCFS transmitting individuals did not show differences. Nevertheless, we described a novel PRDM9 allele, L50, in a DGS/VCFS transmitting father with increased rates of 22q11.2 deletions in sperm. This observation suggested that certain rare alleles of PRDM9 might be a predisposing factor for NAHR at 22q11.2 region. In summary, the evaluation of predisposing factors for the genomic instability at 22q11.2 showed that the NAHR risk in this region is complex and could be attributed to a confluence of different genetic features.

La función principal del sistema de reparación de apareamientos erróneos (MisMatch Repair, MMR) es corregir los errores principalmente introducidos por las DNA polimerasas durante la replicación del genoma. Las mutaciones germinales deletéreas en alguno de los cuatro genes principales del sistema MMR (MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2) son las responsables de los síndromes de predisposición hereditaria a cáncer asociados a deficiencia de este sistema: el síndrome de Lynch (SL), causado por mutaciones monoalélicas en estos genes, y el síndrome de Deficiencia Constitucional de Reparación de Apareamientos Erróneos (CMMRD), causado por mutaciones bialélicas. A consecuencia de la deficiencia de este tipo de reparación, los tumores asociados a estos dos síndromes exhiben pérdida de expresión de las proteínas MMR y/o inestabilidad de microsatélites (MSI) y, aunque en menor grado, estas características también se observan en tejido normal. El diagnóstico de estos síndromes se basa en la identificación de mutaciones patogénicas en los genes MMR en línea germinal. Sin embargo, el diagnóstico no siempre es posible. La presencia de mutaciones crípticas, la identificación de variantes de significado desconocido (VUS) (que representan el 30% de las variantes que se encuentran en la rutina de diagnóstico) y la existencia de fenotipos intermedios o solapantes con otros síndromes, dificultan el diagnóstico, lo que impacta en el manejo clínico del paciente y sus familiares. El objetivo de esta tesis doctoral es mejorar el diagnóstico de los síndromes de predisposición hereditaria al cáncer asociados a deficiencia del sistema MMR. Con este objetivo global nos hemos planteado dos objetivos específicos. El primer objetivo es mejorar la evaluación de la patogenicidad de las variantes aplicando modelos multifactoriales, que integran múltiples líneas de evidencias tanto cualitativas como cuantitativas. También se ha estandarizado el ensayo in vitro de actividad reparadora, dirigido a testar la función más importante de una proteína MMR, con el fin de que pueda ser utilizado en la determinación de la patogenicidad de una VUS. El segundo objetivo es desarrollar una nueva metodología, basada en la detección con alta sensibilidad de la MSI en los tejidos normales de los portadores de mutaciones MMR, para poder diagnosticar de estos síndromes a pesar de no encontrar mutación o de la presencia de VUS. En relación al primer objetivo, se han reclasificado a patogénicas o benignas el 89% de las variantes estudiadas en esta tesis doctoral gracias a la integración del cálculo multifactorial de probabilidad, la frecuencia poblacional, las predicciones in silico y los ensayos funcionales a nivel de RNA y proteína en un nuevo algoritmo de clasificación, lo que apoya su utilidad. Además, el ensayo in vitro de actividad reparadora ha sido optimizado a nivel de reactivos y validado a nivel analítico demostrando robustez y reproducibilidad. A destacar, se han establecido protocolos estándar para su realización, lo que representa el primer paso para su implementación en el diagnóstico En cuanto al segundo objetivo, la metodología desarrollada para la detección con alta sensibilidad de la MSI en sangre periférica discrimina con una sensibilidad y especificidad del 100% a los pacientes CMMRD del resto de grupos (pacientes SL y de otros síndromes con fenotipo solapante), aunque no ha demostrado suficiente sensibilidad para detectar MSI en los pacientes SL. Esta herramienta, por lo tanto, podría ser especialmente útil para el diagnóstico de CMMRD, sobre todo en los casos con ausencia de mutaciones patogénicas identificadas en los genes MMR. Será necesario testar otros tejidos, como la mucosa colónica normal, para profundizar en la dinámica de MSI en tejidos diana de pacientes afectos de SL antes del desarrollo de la neoplasia. El trabajo realizado en esta tesis doctoral representa una mejora de las actuales estrategias para el diagnóstico molecular de los síndromes de síndromes de predisposición hereditaria al cáncer asociados a deficiencia del sistema MMR.

- Introducció: Actualment, hi ha una elevada prevalença d'obesitat en les societats desenvolupades. A causa d'aquest fet, neix un creixent interès per dur a terme una alimentació òptima; així com, de disposar d'adequats biomarcadors robustos de salut/malaltia que ens ajudin a predir si un individu està predisposat a patir una malaltia, com l'obesitat, abans que aquesta es desenvolupi. De manera que, amb aquesta informació es puguin posar en marxa certes estratègies nutricionals per a la seva prevenció. - Contingut de la investigació: L'estudi que s'aborda en aquesta tesi pretén contribuir a identificar i caracteritzar potencials biomarcadors predictius d'obesitat i/o alteracions metabòliques associades. S'ha desenvolupat un model animal basat en la suplementació materna amb leucina durant la lactància, basant-se en la hipòtesi que la suplementació amb leucina podria incrementar els nivells de leptina en llet materna. En aquest context, resultats previs del grup han demostrat el paper protector enfront de l'obesitat de la ingesta de quantitats òptimes de leptina en rates lactants mascles i, en relació a la leucina, encara que hi ha certa controvèrsia en si és beneficiosa o perjudicial, s'ha associat amb l'obesitat i resistència a la insulina. Els resultats indiquen que la suplementació de la dieta estàndard amb leucina (2%) en rates, promou un augment de la leptina en llet i això s'associa al desenvolupament d'una progènie masculina protegida, en certa mesura, enfront del desenvolupament d'obesitat induïda per dietes hipercalòriques. No obstant això, té l'efecte contrari en la progènie femenina, que mostra major propensió a l'obesitat i també resistència a l'acció de la insulina. És interessant destacar que els efectes adversos observats sobre la progènie femenina es contraresten si la suplementació amb leucina es manté la resta de la vida, mentre que a la progènie masculina, això resulta en hiperinsulinèmia. - Conclusió: S'han identificat un conjunt de biomarcadors, dels quals se seleccionen els següents pel seu potencial interès en l'àmbit de l'obesitat i per a la seva validació en altres models experimentals i humans: a) de major susceptibilitat a obesitat en femelles: menor expressió de leptina, adiponectina i UCP2 en teixit adipós; b) de millor control glucèmic en femelles: major proporció de linoleic i menor de oleic i mirístic en plasma; c) de protecció enfront de l'obesitat en mascles: lactància amb llet enriquida en leptina i PUFAs; d) de control glucèmic inadequat en mascles: nivells plasmàtics baixos de linolènic i elevats de linoleic.<br>- Introducción: Actualmente, existe una elevada prevalencia de obesidad en las sociedades desarrolladas. Debido a este hecho, nace un creciente interés por llevar a cabo una alimentación óptima; así como, de disponer de adecuados biomarcadores robustos de salud/enfermedad que nos ayuden a predecir si un individuo está predispuesto a padecer una enfermedad, como la obesidad, antes de que ésta se desarrolle. De manera que, con esta información se puedan poner en marcha ciertas estrategias nutricionales para su prevención. - Contenido de la investigación: El estudio que se aborda en esta tesis pretende contribuir a identificar y caracterizar potenciales biomarcadores predictivos de obesidad y/o alteraciones metabólicas asociadas. Se ha desarrollado un modelo animal basado en la suplementación materna con leucina durante la lactancia, basándose en la hipótesis de que la suplementación con leucina podría incrementar los niveles de leptina en leche materna. En este contexto, resultados previos del grupo han demostrado el papel protector frente a la obesidad de la ingesta de cantidades óptimas de leptina en ratas lactantes machos y, en relación a la leucina, aunque hay cierta controversia en si es beneficiosa o perjudicial, se ha asociado con la obesidad y resistencia a insulina Los resultados indican que la suplementación de la dieta estándar con leucina (2%) en ratas, promueve un aumento de la leptina en leche y ello se asocia al desarrollo de una progenie masculina protegida, en cierta medida, frente al desarrollo de obesidad inducida por dietas hipercalóricas. Sin embargo, tiene el efecto contrario en la progenie femenina, que muestra mayor propensión a la obesidad y también resistencia a la acción de la insulina. Es interesante destacar que los efectos adversos observados sobre la progenie femenina se contrarrestan si la suplementación con leucina se mantiene el resto de la vida, mientras que en la progenie masculina, ello resulta en hiperinsulinemia. - Conclusión: Se han identificado un conjunto de biomarcadores, de los cuales se seleccionan los siguientes por su potencial interés en el ámbito de la obesidad y para su validación en otros modelos experimentales y humanos: a) de mayor susceptibilidad a obesidad en hembras: menor expresión de leptina, adiponectina y UCP2 en tejido adiposo; b) de mejor control glucémico en hembras: mayor proporción de linoleico y menor de oleico y mirístico en plasma; c) de protección frente a la obesidad en machos: lactancia con leche enriquecida en leptina y PUFAs; d) de control glucémico inadecuado en machos: niveles plasmáticos bajos de linolénico y elevados de linoleico.<br>- Introduction: Currently, there is a high prevalence of obesity in developed societies. Due to this fact, there is a growing interest for optimal nutrition and, for adequate and robust biomarkers of health/disease to help in the prediction of health outcome, to know whether an individual is predisposed to a disease, such as obesity, before it develops. So, this information can contribute to the implementation of nutritional strategies for prevention. - Research content: The study addressed in this Thesis aims to contribute to the identification and characterization of potential predictive biomarkers of obesity and/or associated metabolic disturbances. We have developed an animal model based on maternal leucine supplementation during lactation, based on the hypothesis that leucine supplementation might increase levels of leptin in breast milk. In this context, previous results of our research group demonstrated the protective role against obesity associated with the intake of optimal amounts of leptin in lactating male rats; and in relation to leucine, although there is some controversy whether beneficial or detrimental, it has been associated with obesity and insulin resistance. The results indicate that supplementation of standard diet with leucine (2%) in rats, promotes an increase in milk leptin, which is associated to the development of a male offspring protected, to some extent, against the development of obesity induced by high energy dense diets. However, it has the opposite effect on the female progeny, showing greater propensity for obesity and resistance to insulin action. Interestingly, the adverse effects on female offspring were counteracted by chronic leucine supplementation, while in the male offspring, this resulted in hyperinsulinemia. - Conclusion: A set of biomarkers have been identified, of which the following are selected for their potential interest in the field of obesity and for validation in other experimental models and humans: a) of increased susceptibility to obesity in females: lower expression of leptin, adiponectin and UCP2 in adipose tissue; b) better glycemic control in females: higher proportion of linoleic acid and lower of oleic and myristic acids in plasma; c) protection against obesity in males: leptin- and PUFA-enriched milk; d) of inadequate glycemic control in males: low plasma levels of linolenic acid and high plasma linoleic acid.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista<br>Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento<br>ntroducción: Con el objeto de optimizar el proceso de enseñanza-aprendizaje, las nuevas tecnologías de información y comunicación (TICs) se han ido incorporando al ámbito académico. Recientemente en la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile, se ha implementado la plataforma U-Cursos para la administración de la docencia. El objetivo de este trabajo es conocer la correlación entre la predisposición hacia un sistema de aprendizaje apoyado por TICs y el uso de la plataforma U-Cursos en estudiantes de la Facultad de Odontología de la Universidad de Chile, desde una perspectiva cuantitativa y cualitativa. Material y Método: Para conocer la predisposición hacia un sistema de aprendizaje apoyado por TICs, se aplicó una encuesta con escalamiento tipo Likert, a una muestra aleatoria de estudiantes de primer, tercer y quinto año. Con el fin de determinar el uso de la plataforma por parte de los estudiantes de la muestra, se realizó el conteo de sus accesos a U-Cursos. Se realizaron grupos focales, para conocer el significado que los estudiantes atribuyen a la utilización de U-Cursos como una herramienta que favorece el proceso de enseñanzaaprendizaje. Resultados: El 77,1% de los sujetos en estudio presenta una predisposición favorable hacia un sistema de aprendizaje apoyado por TICs. El uso, en términos de número de accesos, presenta diferencias estadísticamente significativas entre los cursos (p=0,000). No existe una correlación entre las variables en estudio (r=0,0253) (p=0,8069). Las categorías para indagar acerca del significado que le otorgan los estudiantes a la utilización de U-Cursos como herramienta educativa, fueron: relativas a la opinión general sobre U-Cursos; la utilidad de la plataforma; la participación docente; la predisposición hacia un método de aprendizaje combinado y la búsqueda de información en Internet. Los estudiantes también plantearon sugerencias para mejorar el sistema con respecto al uso de la plataforma. Conclusión: No existe correlación entre la variable de predisposición hacia un aprendizaje apoyado por TICs y el uso de U-Cursos, por lo que habría otros aspectos implicados en este proceso, necesarios de ser identificados, para incorporar de manera efectiva las TICs al ámbito académico de nuestra Facultad.

El càncer de còlon i recte, o càncer colorectal (CCR), és el tercer tipus de càncer amb més incidència mundial quan ambdós sexes es tenen en compte. El CCR sorgeix per l’acumulació de mutacions genètiques en gens claus que provoquen la progressió del teixit normal i fins al desenvolupament final del càncer. El CCR és d’entre les neoplàsies comuns la que presenta més proporció de casos amb agregació familiar. Estudis de parents i de bessons han estimat que un 30-35% dels casos de CCR presenten alguna forma d’herència familiar de la malaltia, o CCR germinal. Aproximadament un quart dels casos que presenten agregació familiar per CCR s’identifiquen entre les anomenades formes hereditàries, associades a mutacions d’alta penetrància en gens coneguts i que aporten alt risc a desenvolupar la malaltia. Les variants de número de còpia (CNVs, copy number variants) formen part del conjunt de les variants estructurals i representen variacions genòmiques “no balancejades” (duplicacions o delecions), alterant el caràcter diploide del genoma i aportant diversitat a la població genètica humana. Gràcies al desenvolupament de mètodes estadístics aplicats a l’anàlisi de dades de seqüenciació massiva, aquestes formes de variants genòmiques estructurals també poden ésser detectades mitjançant la seva inferència en dades de seqüenciació de l’exoma o del genoma. La predisposició genètica de molts casos amb forta agregació familiar per CCR i que no presenten mutacions als gens de les formes hereditàries encara és desconeguda. El primer estudi d’aquesta tesi presenta la identificació de CNVs potencialment implicades en la predisposició al CCR en famílies amb forta agregació per aquesta patologia, mitjançant la seva inferència en les dades de seqüenciació de l’exoma del DNA germinal de membres d’aquestes famílies. S’ha identificat, validat i caracteritzat una duplicació de 392 Kb del cromosoma 1 (chr1:117591257-117982865) en una de les famílies estudiades. En la regió genòmica de la duplicació s’hi localitzen quatre gens (TTF2, TRIM45, VTCN1 i MAN1A2) i un miRNA (MIR942), localitzat en l’intró 18 del gen TTF2. Per tal de caracteritzar els possibles efectes moleculars de la variant a sobre d’aquests gens, s’han estudiat els nivells d’expressió gènica i proteica d’aquests. D’altra banda, el concepte d’alteracions del número de còpia (CNAs, copy number alterations) va molt lligat al context tumoral somàtic. L’aneuploïdia, o adquisició d’alteracions numèriques i estructurals dels cromosomes, es considera un dels processos més importants a l’hora de facilitar la progressió tumoral, diferenciant-se entre les alteracions àmplies (broad): guanys i pèrdues de cromosomes o braços cromosòmics; i les alteracions focals, que afecten regions puntuals del genoma. Diversos estudis han demostrat la presència de patrons recurrents de CNAs específiques entre els distints tipus de càncer. La caracterització i integració d’aquest tipus d’esdeveniments genòmics amb anotacions moleculars o clíniques pot ajudar a la identificació de CNAs com a potencials bio-marcadors. Al segon estudi d’aquesta tesi s’ha desenvolupat l’eina bioinformàtica CNApp, amb l’objectiu d’analitzar i integrar la detecció de CNAs amb les anotacions molecular i/o clíniques disponibles en les mostres estudiades. CNApp genera perfils complets del genoma utilitzant segments genòmics, calcula la càrrega de CNAs diferenciant entre alteracions broad i focals, i utilitza sistemes d’aprenentatge automàtic per a la re-classificació de mostres. Aplicant aquesta eina a les 10.635 mostres del consorci TCGA, s’ha aconseguit diferenciar els distints tipus tumorals d’acord al seu perfil genòmic i segons el seu teixit d’origen. A més, CNApp ha estat capaç de re-classificar els distints subtipus moleculars de CCR depenent dels nivells de càrrega d’alteracions broad o focals, a més d’identificar certes regions genòmiques específiques entre els mateixos subtipus. CNApp facilita l’anàlisi de dades genòmiques amb un maneig senzill i òptim, i és accessible a https://tools.idibaps.org/CNApp/.<br>Colorectal cancer (CRC) is the third most common cancer worldwide. A considerable number of cases with strong familial CRC aggregation and early disease onset remain unresolved at the genetic level. The first work analyzes germline whole- exome sequencing data from 38 families with strong CRC aggregation without alterations in known hereditary genes to infer rare candidate copy number variants involved in the predisposition to this disease. A duplication in chromosome 1 in one family stood out as interesting. TTF2, TRIM45, VTCN1 and MIR942 genes were found to be included in the duplication. Expression studies pointed to TTF2 and MIR942 overexpression in duplication carriers, and tumor immunohistochemistry showed TTF2 protein overexpression and under-expression of the TMEM158 protein, a predicted target of MIR942. The identified duplication may correspond to the mutational event involved in colorectal cancer predisposition in this family. On the other hand, somatic copy number alterations (CNAs) are a hallmark of cancer, but their role in tumorigenesis and clinical relevance remain largely unclear. In the second study, we developed CNApp, a web- based tool that allows a comprehensive exploration of CNAs by using genomic segmented data. CNApp generates genome-wide profiles, computes CNA scores for broad, focal and global CNA burdens, and uses machine learning-based predictions to classify samples. We applied CNApp to the TCGA pan-cancer dataset of 10,635 genomes showing that CNAs classify cancer types according to their tissue-of-origin, and that each cancer type shows specific ranges of broad and focal CNA scores. Moreover, CNApp reproduces recurrent CNAs in hepatocellular carcinoma and predicts colon cancer molecular subtypes and microsatellite instability based on broad CNA scores and discrete genomic imbalances. In summary, CNApp facilitates CNA-driven research by providing a unique framework to identify relevant clinical implications. CNApp is hosted at https://tools.idibaps.org/CNApp/.

L'esquizofrènia és un trastorn cerebral crònic, greu i incapacitant que afecta l'1% de la població i s'expressa en funcions mentals anormals i alteracions en el comportament. La causa de l'esquizofrènia és desconeguda, ara bé, la vulnerabilitat de patir aquesta malaltia psiquiàtrica està clarament relacionada amb factors genètics. Existeixen evidències que suggereixen que aquest trastorn es relaciona amb una activitat i connectivitat alterada de l'escorça prefrontal (EPF) i àrees relacionades anatòmicament i funcional com el tàlem i els nuclis del mesencèfal (nuclis del rafe-NR, locus coeruleus-LC i l'àrea tegmental ventral-ATV). S'han elaborat nombroses hipòtesis sobre l'etiologia de l'esquizofrènia que inclouen una hiperactivació de la neurotransmissió dopaminèrgica i una hipofunció glutamatèrgica. Ara bé, recentment s'ha suggerit que la hipofunció del receptor NMDA pot originar un excés compensatori d'alliberació de glutamat i incrementar l'activitat de les neurones piramidals de l'EPF. Endemés, en models de desconnexió neonatal de l'hipocamp s'ha observat una més elevada activitat excitadora de dopamina sobre neurones piramidals corticals.<br/><br/>En la present Tesi Doctoral hem caracteritzat el paper que exerceixen receptors corticals excitadors i inhibitoris sobre l'activitat del circuit EPF-NR, i hem estudiat l'acció dels fàrmacs antipsicòtics sobre aquests receptors per tal de conèixer millor les bases neurobiològiques de la seva acció terapèutica.<br/><br/>L'EPF medial (EPFm) expressa abundantment receptors serotoninèrgics 5-HT1A (inhibitoris) i 5-HT2A (excitadors). Els nostres treballs han mostrat que l'activació farmacològica d'aquests receptors corticals modula de manera oposada l'alliberació local de 5-HT mitjançant canvis en l'excitabilitat de les neurones piramidals que coexpressen àmpliament ambdós receptors i que projecten als nuclis serotoninèrgics. Antecents del grup mostren que l'administració de DOI (al.lucinogen, agonista 5-HT2A/2C) incrementa la freqüència de descàrrega de les neurones piramidals i l'alliberació cortical de serotonina (5-HT), activació circuit EPFm-NR. Així hem estudiat l'alliberació de 5-HT cortical, mitjançant la tècnica de microdiàlisi intracerebral in vivo, com a mesura indirecta de l'activitat de les neurones piramidals. <br/><br/>Hem descrit també que l'estimulació dels receptors excitadors adrenèrgics &#61537;1 corticals incrementa l'alliberació local i al NDR de 5-HT, possiblement a través del mateix mecanisme que l'activació dels receptors 5-HT2A (estimulació de les vies excitadores descendents cap al NDR). De la mateixa manera, l'augment de la neurotransmissió glutamatèrgica a l'EPFm, mitjançant i) l'aplicació local de S-AMPA, ii) la desinhibició de les aferències glutamatèrgiques talàmiques o bé iii) l'administració sistèmica d'antagonistes glutamatèrgics dels receptors NMDA, estimula l'alliberació de 5-HT a l'EPF, fet que és probablement degut a una major activitat de les neurones piramidals que projecten al NDR i al conseqüent increment de l'activitat serotoninèrgica. Amdós efectes (adrenèrgic-&#61537;1 i glutamatèrgic) són revertits pel bloqueig de receptors adrenèrgics &#61537;1 i 5-HT2A.<br/><br/>Endemés hem observat que l'estimulació del receptor 5-HT1A a l'EPFm reverteix l'increment de l' alliberació local de 5-HT induït per l'agonista 5-HT2A/2C DOI, l'agonista adrenèrgic &#61537;1 cirazolina i S-AMPA. La implicació dels receptors 5-HT1A postsinàptics a EPFm en aquesta inhibició es fa palesa perquè i) és comuna a cinc agonistes diferents, ii) és revertida per la inactivació prèvia i el bloqueig dels receptors 5-HT1A, i iii) està totalment absent en ratolins genoanul·lats d' aquest receptor. <br/><br/>Finalment, hem descrit que els fàrmacs antipsicòtics reverteixen l'increment de l'alliberació de 5-HT a l'EPFm induït per l' estimulació de receptors excitadors corticals. Aquesta acció és possiblement deguda a la seva capacitat de bloquejar in vivo els receptors &#61537;1 adrenèrgics (típics i atípics) i 5-HT2A (atípics) pels quals presenten una elevada afinitat. Aquestes dades suggereixen que els fàrmacs antipsicòtics exercirien en part la seva acció terapèutica disminuint una possible hiperactivitat de les neurones de l'EPF. Ara bé, la incapacitat de l'haloperidol de bloquejar l'efecte dels antagonistes NMDA indica possiblement diferències d'acció entre antipsicòtics típics i atípics sobre les neurones corticals.<br><I>The prefrontal cortex (PFC) plays a crucial role in higher brain functions which are altered in schizophrenic patients. Pyramidal neurons in medial PFC (mPFC) integrate excitatory inputs from cortex and thalamus, and modulatory inputs from brainstem aminergic nuclei like raphe nuclei (RN). In turn, mPFC controls the activity of raphe serotonergic neurons. Previous reports showed that the stimulation of prefrontal 5-HT2A or AMPA receptors increases pyramidal and serotonergic cell firing, and 5-hydroxytryptamine (5-HT) release in mPFC. We use 5-HT release (microdialysis technique) as an indirect measure of pyramidal activity.<br/><br/>In this Doctoral Thesis we have examined the role of cortical excitatory and inhibitory receptors in the mPFC-RN circuit, which has been implicated in schizophrenia. Given the similar laminar distribution of 5-HT2A receptors and a1-adrenoceptors in mPFC and their excitatory action on pyramidal neuron activity, we tested the hypothesis that a1-adrenoceptors might also modulate 5-HT release. Antipsychotics exhibit high affinity for receptors expressed in pyramidal neurons such as 5-HT2A and a1-adrenoceptors. Therefore, we have also examined the effects of antipsychotics, as well as selective antagonists for these receptors, on the increased mPFC 5-HT release induced by cirazoline (a1-adrenoceptor agonist), DOI (5-HT2A/2C agonist), and the increase in glutamatergic transmission.<br/><br/>The results showed that the stimulation of prefrontal a1-adrenoceptors and the increase in mPFC glutamatergic transmission (exogenous stimulation of AMPA receptors, disinhibition of thalamic afferents to mPFC or acute administration of NMDA antagonists) activate pyramidal afferents to ascending serotonergic neurons (measured as an increase in 5-HT release in RN and mPFC) possibly in a manner similar to that observed for 5-HT2A receptors. This effect was reversed by antipsychotics and antagonists of excitatory receptors located in pyramidal neurons.<br/>The PFC contains high density of serotonin 5-HT1A (inhibitory) and 5-HT2A (excitatory) receptors. Likewise, we report that the activation of cortical 5-HT1A receptors reverse the increase in local 5-HT release induced by cirazoline, DOI and S-AMPA. <br/><br/>Finally, our results suggest that antipsychotics may exert their therapeutic action by reducing the increased excitability of prefrontal pyramidal neurons. The effect of classical antipsychotics may involve blockade of a1-adrenoceptors, whereas that of atypical may also involve blockade of 5-HT2A receptors. </I>

La trombofilia és la tendència genètica al tromboembolisme venós. Amb la finalitat d'aprofundir en les bases genètiques de la trombofília hereditària, l'objectiu principal d'aquesta tesi és la identificació dels factors genètics que determinen la variabilitat dels nivells de FVII a la població espanyola. <br/>En primer lloc, es va calcular l'heretabilitat dels nivells de FVII en un 53%, i mitjançant una anàlisi global del genoma es va localitzar el gen responsable de la variabilitat dels nivells de FVII en la zona 13q, just on es localitza el gen estructural del FVII <i>(F7)</i>. Aquest resultat indica que els factors genètics que determinen la variabilitat de FVII en plasma es troben en el gen estructural. <br/>A continuació es va realitzar una anàlisi genètica exhaustiva i es van obtenir 49 posicions polimòrfiques al llarg del gen <i>(F7)</i>, la majoria canvis d'una sola base (SNPs). A més, mitjançant una anàlisi de l'organització haplotípica de la variació en la seqüència del <i>(F7)</i>, es va observar que existeixen tres clars llinatges d'haplotips que s'han mantingut paral·lelament en la població espanyola per selecció estabilitzadora, molt probablement per un avantatge dels individus heterozigots. L'anàlisi d'associació entre aquests llinatges i els nivells de FVII indica que un d'ells, caracteritzat pels al·lels [-670C, -630G, -402A] està associat a nivells elevats en la població, i un altre, caracteritzat pels al·lels [-2989A, -401T, -323ins10, -122C] està associat a nivells reduïts.<br/>Les anàlisis posteriors de transfecció <i>in vitro</i> amb els diferents al·lels utilitzant un sistema <i>reporter</i> GFP <i>(Green Fluorescent Protein)</i> van permetre determinar que les variants -323ins10 i -122C tenen un efecte reductor sobre els nivells de proteïna, i que la variant -402A provoca un augment significatiu dels nivells de FVII. Finalment, la nova variant -2989A incrementa també de forma molt significativa els nivells d'expressió. Aquests resultats es confirmen a més en un estudi cas-control amb pacients amb trombosi venosa profunda, així com en dues famílies amb deficiència de FVII. <br/>El disseny, l'estratègia i la metodologia emprades són un bon exemple de com localitzar i identificar <i>loci</i> implicats en caràcters complexes.<br>There is a definite genetic predisposition to venous thromboembolism. The levels of FVII in plasma has been clearly implicated in thrombophilia. The aim of this thesis was to identify and characterize the genetic factors that determine the variability of FVII plasma levels in the Spanish population. <br/><br/>First, the heritability of FVII levels was calculated as 53%indicating a substantial genetic component. A Genome Wide Scan allowed the localization of the responsible gene on the long arm of chromosome 13, exactly where the FVII "(F7)" structural gene has been located. This indicates that the genetic factors that determine FVII variability are localized in the structural gene.<br/>Second, from an exhaustive genetic analysis, we obtained 49 polymorphisms (variants) in the "F7" gene. Further, by an analysis of sequence variations and haplotype organization, three main haplotype lineages were detected that have been maintained presumably by balanced selection, probably due to an advantage of heterozygous individuals. The association analysis among these lineages and the FVII levels indicates that one of these lineages, containing allelic variants [-670C, -630G, -402A] was associated with elevated FVII levels. Also, another lineage, containing allelic variants [-2989A, -401T, -323ins10, -122C] was associated with reduced levels of FVII. <br/>Posterior functional analyses of "in vitro" transfection of the different variants in a "reporter" system with GFP "(Green Fluorescent Protein)" showed that allelic variants -323ins10 i -122C significantly reduce expression levels while allelic variant -402A significantly increases them. The new allelic variant -2989A also increases expression levels significantly. Finally, these results have been confirmed in a case-control study with patients with deep venous thrombosis and in a study of two families with a FVII deficiency. <br/>The strategy and methodology of the present work are good examples of how to localize and identify genes implicated in complex human diseases.

Les malalties complexes conformen en l'actualitat la principal causa de mortalitat en les societats occidentals. D'entre elles, destaquen les malalties cardiovasculars per la seva elevada incidència tot i mostrar diferències poblacionals, com a la Mediterrània, on la mortalitat és inferior a la d'altres països europeus. Els factors genètics semblen jugar un paper important en la predisposició a patir aquestes malalties, actuant a diferents nivells i sobre diferents mecanismes de regulació fisiològica. L'òxid nítric (NO) és un dels elements implicats en aquesta regulació mitjançant els seus efectes tan directes com indirectes. El present treball ha analitzat la variació de 14 polimorfismes de DNA en els gens de les sintases d'òxid nítric NOS1, NOS2 i NOS3 en 9 poblacions humanes de la Península Ibèrica, Sardenya, Sud de França, berbers del Nord d'Àfrica i Alemanya, per avaluar-ne la seva variabilitat a la Mediterrània i la seva utilitat per reconstruir la història de les poblacions humanes. Alhora, s'ha analitzat la implicació d'aquests polimorfismes en la predisposició a la cardiopatia isquèmica (CAI) mitjançant el test de desequilibri de la transmissió (TDT) en una mostra de 101 famílies nuclears (n=302) amb un fill afectat per CAI. Per tal d'establir un significat funcional de les possibles associacions detectades s'han analitzat els nivells de nitrats i nitrits (NOx), indicadors de la producció d'òxid nítric. Totes tres regions gèniques han presentat un elevat grau de desequilibri de lligament al llarg de tota la seqüència, inclús entre parelles de polimorfismes separats més de 140 Kb. La variació observada a nivell poblacional evidencia una variabilitat interpoblacional significativa estructurada en tres grups (Europa continental, Sardenya i Berbers del Marroc) amb una variabilitat més gran entre els grups que dins dels grups. Aquesta variabilitat s'ha mostrat equivalent a la d'altres polimorfismes en regions no funcionals que s'utilitzen en estudis de genètics de poblacions, tot i que la variabilitat al gen NOS3 semblaria menys adequada per detectar relacions interpoblacionals. Les poblacions sardes analitzades es mostren com les més diferenciades de la resta i les de menor variabilitat. D'altra banda, les poblacions berbers mostren la major variabilitat del conjunt i una relativa heterogeneïtat entre si, diferenciant-se de la resta de poblacions analitzades. L'al·lel T del polimorfisme C3391T del gen NOS1 s'ha associat, sol o en haplotips que l'inclouen, amb un risc incrementat per la CAI (RR=1.8-2.0), així com també amb nivells disminuits de nitrats i nitrits en plasma en els fills amb hipertensió. La manca de funcionalitat d'aquest polimorfisme fa suposar que un altre polimorfisme (possiblement a la regió codificant pel domini reductasa de la proteïna) sigui el veritable causant d'aquesta associació. L'al·lel de 9 repeticions del pentanucleòtid (CCTTT)n de la regió promotora del gen NOS2 ha presentat associació significativa amb la malaltia (p=0.008) conferint un risc menor per la CAI (RR=0.027). L'estudi de la regió promotora d'aquest gen podria proporcionar informació important sobre la implicació del gen NOS2 en la malaltia cardiovascular. Al gen NOS3, els al·lels de &#8805;38 repeticions del dinucleòtid (CA)n de l'intró 13 es mostren significativament associats a un menor risc (RR=0.17) per la CAI. Estudis in vivo i in vitro indiquen que l'associació podria estar relacionada amb una major eficiència en els processos de splicing, tot i que els resultats discrepen totalment amb els d'alguns treballs previs.<br><I> EXTRACTE EN ANGLÈS - SUMMARY: <br/><br/>Cardiovascular diseases are a leading cause of mortality in western countries, although their incidence is not equally distributed among them, showing Mediterranean countries the lowest mortalities in Europe. Genetic risk factors play an important role in the pathophysiology of cardiovascular disorders, where nitric oxide (NO) mediates vasoprotective processes through reactions with its target molecules. The present work has analyzed the variation of 14 polymorphisms in the nitric oxide synthase (NOS1, NOS2 and NOS3) in 9 human populations from Iberian Peninsula, Sardinia, South France, berbers from North Africa, and Germany in order to evaluate their variation and their usefulness to reconstruct human populations history. Furthermore, an association study between these markers and ischaemic heart disease (IHD) has been performed in a 101 families sample (n=302) through transmission disequilibrium test (TDT). Aditionally, nitrate and nitrite (NOx) levels (indicators of NO production) have been quantified in the families sample to stablish a functional explanation for the detected associations. NOS variability has been useful to assess population relationships, being the most reliable estructuration that constituted by three groups: continental Europe, Sardinia, and North-Africa. Sardinian samples have shown the lower levels of intrapopulation variation and the Berber samples the highest heterogeneity. The T-allele of C3391T polymorphism in NOS1 gene has been associated with a lower risk for IHD (RR=1.8-2.0) together with lower NOx levels among hypertensive affected offspring. This polymorphism has not a functional role, and the association is probably related with an unidentified polymorphism in the NOS1 sequence. 9-repeats allele of the pentanucleotide (CCTTT)n in NOS2 promoter region plays a protective role (RR=0.27) in IHD, and the analysis of this promoter region could provide information on NOS2 implication in cardiovascular disease. In NOS3 gene, &#8805;38-repeats alleles of intron 13 (CA)n dinucleotide show a reduced risk (RR=0.17) for IHD. In vivo and in vitro models indicate that this association could be related to a greater efficacy in splicing processes, although there are discrepancies with previous association studies. </i>

En aquesta tesi s'ha realitzat un estudi genètic de les malalties complexes de forma específica en la població espanyola. El treball s'ha centrat en l'estudi de dues malalties inflamatòries, complementàries tant a nivell experimental, quant a l'aproximació realitzada en els mètodes de mapatge genètic, com també a nivell de l'etiopatogènia inflamatòria de la malaltia.<br/><br/>L'estudi de la psoriasi en la població espanyola ha evidenciat la presència de dos loci de predisposició, un a la regió de 6p21 (PSORS1), definit com un locus de múltiples gens lligats (HLA-Cw*6, HCR, CDSN), i un altre possible a la regió 4q35 (PSORS3), que presenta una interacció positiva, però no epistàtica amb PSORS1, implicant dues vies diferents i independents en l'etiopatogènia de la malaltia. A més s'ha posat de manifest un efecte parental en l'herència de la predisposició genètica en PSORS1, possiblement mitjançant un efecte d'imprinting matern en la regió. D'altra banda, s'ha determinat la presència d'un haplotip comú en distintes poblacions, format per quatre de les variants codificants del gen HCR (HCR*WWCC), convertint-se en un dels determinants majors i més estesos dintre de PSORS1.<br/> <br/>L'estudi de l'asma ha demostrat la important heterogeneïtat fenotípica inclosa en la definició de la malaltia, posant de manifest però la important determinació genètica dels fenotips associats a la malaltia (principalment del control de la resposta de les IgEs). De forma clara s'ha evidenciat la important variació del risc genètic associat a determinades variants en els distints moments de l'evolució de la malaltia, sent en molts casos oposats en l'edat adulta i en l'edat infantil. A més s'ha pogut associar la predisposició a l'asma amb variants del gen CFTR (Cystic fibrosis transmenbrane conductance regulator gene), amb una alta prevalença de variants d'error de sentit en els individus (adults i infantils) amb asma. <br/><br/>En resum, l'anàlisi genètica ha demostrat la utilitat de la combinació d'estudis d'anàlisi de lligament amb els mètodes d'associació, així com la necessitat d'una definició i restricció important en la definició del fenotip "genètic" a estudiar, això és la definició del tret fenotípic determinat genèticament. A més s'ha posat de manifest la importància del coneixement de les bases de predisposició genètica de determinats trets associats a la malaltia per a la millor definició de la mateixa, i també en el procés de la identificació de l'heterogeneïtat genètica de la malaltia.<br/><br/>D'altra banda, encara que les variants estudiades difícilment poden ser utilitzades per a un diagnòstic genètic, sí que poden ser emprades com a pronòstic en l'evolució, o de la severitat de la malaltia, afavorint una intervenció mèdica més eficient i preventiva més que correctora.

Esta Tesis Doctoral ha consistido en el estudio de los mecanismos implicados en la comorbilidad entre el abuso de drogas y los trastornos de ansiedad, así como en las regiones cerebrales responsables de la coexistencia de estos dos trastornos en modelos transgénicos. Nos hemos centrado en dos grandes familias de genes, que podrían actuar como interfaz genético en la comorbilidad entre trastornos de ansiedad y de abuso de sustancias: neurotrofinas por su intervención en el neurodesarrollo y en la neuroplasticidad, y elementos de sistemas de neurotransmisión concretos como son los receptores nicotínicos, cuya implicación en adicción y ansiedad ha sido previamente demostrada a través de estudios farmacológicos.<br/><br/>1) HIPÓTESIS:<br/><br/>La comorbilidad entre trastornos de ansiedad y de abuso de sustancias es un hecho bien establecido y que tiene importantes implicaciones clínicas, terapéuticas y pronósticas. Si bien los mecanismos patogenéticos de cada uno de estos trastornos por separado se conocen relativamente bien, el mecanismo que subyace a la comorbilidad no está bien delimitado. Se ha propuesto la existencia de factores genéticos, neurobiológicos y/o ambientales comunes a ambos trastornos, pero todavía no está claro qué genes podrían estar implicados o ser predisponenentes a esta comorbilidad. Nosotros proponemos que los factores genéticos de susceptibilidad para la patología dual deberían modular componentes de desarrollo, y componentes funcionales, que están implicados en la coexistencia entre ambos trastornos. Por esta razón el trabajo, se centra en genes de dos familias: el receptor de la neurotrofina-3 <I>(NTRK3)</I> y un cluster que contiene los genes de las subunidades, &#945;3, &#945;5, &#946;4 de receptores nicotínicos <I>(CHRNA3/A5/B4)</I>. Así, <I>NTRK3</I> podría participar en el desarrollo y los mecanismos adaptativos a través de su implicación en proliferación, diferenciación y plasticidad neuronal, mientras que el cluster <I>CHRNA3/A5/B4</I> podría estar implicado en la activación de circuitos neuronales específicos que podrían ser comunes a ambos trastornos.<br/><br/>2) OBJETIVOS:<br/><br/>El objetivo general de esta tesis ha consistido en el estudio de la posible implicación funcional de los genes objeto de estudio en elementos de la comorbilidad entre trastornos de ansiedad y abuso de sustancias mediante el uso de ratones transgénicos como modelo de aproximación experimental. Para ello hemos caracterizado el impacto de la sobreexpresión in vivo de los genes <I>NTRK3</I> y <I>CHRNA3/A5/B4</I> sobre el fenotipo conductual, neuromorfológico y neurofisiológico.<br/><br/>Dado que intentamos comprender los mecanismos implicados en la comorbilidad entre el abuso de drogas y los trastornos de ansiedad, pero también delimitar las regiones cerebrales responsables de la co-ocurrencia de estos dos trastornos se han realizado estudios conductuales, farmacológicos con drogas de abuso como morfina o nicotina, y experimentos de caracterización histológica y molecular.<br/><br/>3) CONCLUSIONES:<br/><br/>Como conclusión general, los resultados obtenidos demuestran que alteraciones en los niveles de expresión de genes tan diferentes como los factores neurotróficos o los receptores nicotínicos, pueden modificar la actividad de regiones cerebrales implicadas en la aparición simultánea de diferentes trastornos psiquiátricos. De nuestros experimentos se desprende que el sistema mesocorticolímbico, junto con regiones troncoencefálicas como el LC, jugaría un papel clave en la comorbilidad de trastornos como la ansiedad, la adicción o la epilepsia. Un mecanismo de convergencia podría depender de los cambios en receptores glutamatérgicos, que son elementos clave en la plasticidad neuronal. Nuestros resultados apoyan la naturaleza poligénica de la patología dual y sugieren que los cambios de dosis de determinados genes podrían ejercer un papel esencial en la morbilidad de la misma.<br><I>This Doctoral Thesis has been focused on understanding the mechanisms and the cerebral regions implicated in the commorbidity between drug abuse and anxiety disorders. To this aim we have focused on two families of genes that may act as genetic interface to the commorbidity between these neuropsychiatric disorders: 1/ neurotrophins, that may interfere in neurodevelopment and neuroplasticity, and 2/ elements of specific neurotransmitter systems such as nicotinic receptors, that have been implicated in addiction and anxiety, previously demonstrated by pharmacological studies. Our hypothesis proposes the existence of a development component and a functional component in the generation of an addictive and anxious brain. To this study we used two mouse models: 1/ A transgenic mouse model overexpressing the neurotrophin-3 receptor, TrkC (TgNTRK3), since it has been implicated in plasticity, proliferation and cellular differentiation with a possible pathogenetic intervention in the dual pathology, such as the noradrenergic system, and 2/ A transgenic mouse model overexpressing the &#945;3, &#945;5, &#946;4 nicotinic receptor subunits (TgCHRNA3/A5/B4), candidates to the development of psychiatric disorders and addiction. To determine the gene overexpression effects on the appearance of this dual pathology we have performed pharmacological studies using drug abuse, such as nicotine and morphine. The results obtained suggest that alterations in the expression levels of these genes could be modifying the activity of different cerebral regions responsible for the commorbidity between both disorders in transgenic mouse models. Thus, our experiments suggest that the mesocorticolimbic system, as well brainstem regions, such as the Locus coeruleus, would play a key role in the commorbidity between anxiety and addiction. That could be due to alterations on glutamatergic receptors, key elements in neuronal plasticity. </I>