Dissertations / Theses on the topic 'Présentation croisée'

Les cellules dendritiques (DC) sont les seules présentatrices d'antigènes capables d'activer les lymphocytes T (LT) naïfs. Lors de l'infection par le VIH, elles sont cruciales pour initier les réponses immunitaires adaptatives indispensables au contrôle de la réplication virale. Nous avons mis en évidence un transfert d'antigènes du VIH aux DC, depuis des LT CD4 infectés vivants. Ces antigènes sont aussi efficacement présentés aux LT CD8 que ceux issus de débris apoptotiques, et plus efficacement que ceux du VIH libre. Nous avons aussi montré l'antigénicité de DC transfectées par des ARNm de gag du VIH. Ces résultats permettent d'envisager des thérapies contre les formes provirales issues des cellules quiescentes qui sont des réservoirs viraux difficiles à éradiquer. Dans un but de vaccination préventive, nous avons comparé des vecteurs vaccinaux rougeole, MVA, Ad5 et BCG, codant le gène gag du VIH. Nous montrons que les vecteurs viraux induisent une maturation incomplète des DC, tandis que le BCG induit une maturation complète, mais beaucoup d'IL1O. Nous avons alors restauré les propriétés déficientes de ces vecteurs par des agonistes des récepteurs de type Toll. Enfin nous montrons que les DC plasmacytoïdes (pDC) humaines peuvent effectuer la présentation croisée d'un vaccin lipopeptidique, et d'antigènes issus de LT CD4 infectés apoptotiques. La présentation croisée par les pDC pourrait conduire à la tolérance en l'absence d'une stimulation appropriée. Nous montrons qu'une stimulation par le virus de la grippe augmente les réponses effectrices induites par la présentation croisée des pDC. Ces résultats devraient améliorer les protocoles de vaccination contre le VIH
Dendritic cells (DC) are the only antigen presenting cells able to stimulate naive T lymphocytes. Upon HIV infection, they are crucial to initiate adaptive immune responses that control viral replication. We have shown the transfer of HIV antigens to DC from live infected CD4 T cells. These antigens were presented as efficiently as those from apoptotic infected CD4 T cells and much more effïciently than those from free HIV particles. We also showed the antigenic potential of HTV gag mRNA transfected DC. These results may be important in developing new therapies against provirus from resting cells that represent an important viral reservoir difficult to eradicate. To improve preventive vaccination, we compared the vaccinal vectors MV (measles), MVA, Ad5 and BCG, all encoding the HlV-1lai gag gene. We showed that the viral vectors induced an incomplete DC maturation, whereas BCG induces complete maturation but high levels of IL 10. We were able to restore these missing properties by using specific TLR agonists. Finally, we demonstrated that plasmacytoid dendritic cells (pDC) can cross-present a vaccinal lipopeptide and HIV antigens from infected, apoptotic CD4 T cells. Cross-presentation by pDC might lead to tolerance in vivo in the absence of an appropriate stimulation. We show here that stimulation with Influenza virus enhances effector responses induced by cross presentation by pDC. These results will hopefully be useful in designing new vaccination strategies against HIV

Les cellules apoptotiques représentent une source d’antigènes induisant une présentation croisée efficace. Notre travail a consisté à évaluer le potentiel des cellules vivantes en tant que source d’antigènes pour la présentation croisée. Nous avons montré que des DC internalisent du matériel cellulaire à partir de cellules vivantes et que ce mécanisme est actif et implique les PI3 Kinases, les récepteurs scavenger et des lectines. La capture d’antigènes à partir de fibroblastes exprimant l’ovalbumine (L-OVA), induit une activation des lymphocytes T CD8+ naïfs OT-I. In vivo, la capture de matériel cellulaire à partir de cellules vivantes par les DC a été démontré dans la rate par microscopie confocale en 3D. Les DC cultivées avec des cellules L-OVA vivantes induisent une activation de lymphocytes T OT-I naïfs, même en absence de DC endogènes capables de présenter l’épitope. Finalement, des DC cultivées avec des cellules vivantes portant des antigènes naturels induisent des réponses T naturelles plus fortes qu’à partir de cellules apoptotiques. La présentation croisée à partir de cellules vivantes doit être pris en compte dans le cadre de l’immunothérapie ou de l’autoimmunité

La présentation croisée dépendante du transporteur associé à la présentation antigénique (TAP) est considérée comme la voie de présentation croisée la plus efficace. La dépendance de TAP dans cette voie est interprétée comme une preuve de sa fonction de transport actif des précurseurs peptidiques dans les compartiments où a lieu le chargement des molécules du complexe majeur d’histocompatibilité de classe I (CMH de classe I) : le reticulum endoplasmique (RE) et les vésicules endo-phagosomales. Dans ce travail, nous avons réexaminé ce concept en utilisant des cellules dendritiques TAP déficientes. L’outil principal utilisé lors des expériences est la pré-incubation des cellules dendritiques déficientes pour TAP toute une nuit à 26°C. Cette procédure est connue pour augmenter l’expression en surface cellulaire des molécules de classe I dans de telles cellules. Au cours de ce travail, nous avons trouvé que les cellules dendritiques déficientes pour TAP et pré-incubées à 26°C crossprésentent les antigènes particulaires avec une grande efficacité, égale ou souvent meilleure que des cellules normales. De façon surprenante, la restauration de la présentation croisée par la pré-incubation à 26°C est complètement abolie par les inhibiteurs du protéasome. Parallèlement, l’inhibition du protéasome n’a pas affecté la présentation croisée des antigènes particulaires qui ne nécessitent pas une digestion par le protéasome pour la génération des épitopes pour les lymphocytes T. Ce dernier résultat suggère que l'inhibition du protéasome dans nos expériences n’interfère pas avec la maturation du phagosome ou avec d'autres mécanismes cellulaires impliqués dans la présentation croisée. En revanche, cette inhibition semble affecter la protéolyse cytosolique des antigènes phagocytés. Pris ensemble, nos données expérimentales suggèrent que dans les cellules dendritiques déficientes pour TAP, les antigènes particulaires cross-présentés sont dégradés dans le cytosol par le protéasome,, retrotransloqués dans les phagosomes et / ou le réticulum endoplasmique pour être chargés sur les molécules de CMH de classe I (vraisemblablement les molécules de recyclage) de manière TAP indépendante. De manière surprenante, la normalisation des molécules CMH de classe I à la surface cellulaire par la pré-incubation à 26°C des cellules dendritiques déficientes pour TAP n'a aucun effet sur la présentation croisée d'antigènes internalisés par l’intermédiaire d’un récepteur membranaire. Ainsi, l'origine des molécules CMH de classe I et / ou leur chargement en peptides varie fortement entre les voies de présentation croisée endosomales et phagosomales. La présentation croisée phagosomale semble donc employer un nouveau mécanisme de transport des peptides du cytosol dans le compartiment de chargement des molécules CMH de classe I
The dominant role of TAP-dependent pathway(s) in cross-presentation is commonly interpreted as evidence for transport of cross-presented antigenic peptides into specialized cross-presentation compartments or into the perinuclear ER by the TAP transporters. I have re-examined this concept using TAP-deficient dendritic cells. The main tool used for these experiments were TAP - deficient dendritic cells pre-incubated overnight at 26°C, a procedure known to increase cell-surface expression of class I molecules in such cells. I found that TAP-deficient dendritic cells pre-incubated overnight at 26°C cross-present particulate antigens with an efficiency equal to, or exceeding that of wild type cells. Surprisingly, restoration of cross-presentation by pre-incubation at 26°C is abolished by proteasome inhibitors. At the same time, proteasome inhibition does not affect cross-presentation of a particulate antigen not requiring proteasomal proteolysis for the T cells epitope generation. The latter result suggests that proteasome inhibition as used does not interfere with phagosome maturation or other cellular mechanisms involved in the cross presentation, but instead inhibits cytosolic proteolysis of phagocytosed antigen. Taken together, my experimental data suggest that in TAP-deficient DCs, cross-presented particulate antigens are degraded in the cytosol by the proteasome and gain access to (presumably recycling) MHC class I molecules in phagosomes and/or the ER in a TAP-independent manner. Interestingly, normalization of cell surface MHC class I molecules by pre-incubation at 26°C of TAP-deficient DCs has no effect at all on cross-presentation of receptor-targeted antigen. Thus, the origin of MHC class I molecules and/or the mode of their peptide loading differ strikingly between the endosomal and phagosomal cross-presentation pathways. Moreover, phagosomal cross-presentation appears to employ a novel mechanism for peptide transport from the cytosol into an MHC class I loading compartment

Le récent essor dans l'identification d'antigènes exprimés par les cellules tumorales et reconnus par les lymphocytes T CD8+ a permis d'envisager le développement d'immunothérapies des cancers. Aujourd'hui, l'injection de cellules dendritiques (DC) exprimant des antigènes de tumeurs est considérée comme l'une des approches d'immunothérapie active les plus prometteuses. La source d'antigènes de tumeurs pour les DC reste un élément critique qui va déterminer l'efficacité de ces vaccins anti-tumoraux. Dans cette étude, nous avons mis en évidence la pertinence de l'utilisation de cellules apoptotiques exprimant des protéines de stress (HSP) comme stratégie de chargement d'antigènes de tumeurs pour les DC. En effet, nous montrons la faisabilité de générer des réponses T cytotoxiques spécifiquement dirigées contre des tumeurs de mésotheliome via la stimulation de lymphocytes T naïfs par des DC ayant phagocyté des corps apoptotiques exprimant des HSP. L'ensemble de ces résultats soulignent l'importance d'associer l'apoptose à des signaux dangers dans le but d'induire des réponses anti-tumorales
Over the past decade, the increasing knowledge in the molecular identification of tumour antigens that are capable of eliciting T-cell responses has revolutionised the field of cancer therapy. To date, injections of tumour antigen-expressing dendritic cells (DC) represent a promising of active immunotherapy strategy. However, the source of tumour-associated antigens (TAA) remains a critical issue which will further determine the efficacy of DC-based vaccines. In this study, we show the relevance of using heat shock proteins (HSP)-expressing apoptotic cells as TAA loading strategy for DC. Indeed, we demonstrate the feasibility of inducing mesothelioma tumour-specific cytotoxic T cell responses from stimulations of naïve T cells with DC loaded with HSP-expressing apoptotic cells. Altogether, these results emphasize the importance of providing danger signals to apoptosis in order to induce potent anti-tumour responses

Les cellules dendritiques (DC) sont spécialisées dans la capture, l’apprêtement et la présentation des antigènes. Elles ont développé une voie spécifique de présentation, la présentation croisée, leur permettant d’internaliser des antigènes exogènes, de les digérer et de les associer aux molécules du CMH de classe I afin de les présenter aux lymphocytes T CD8+. La présentation croisée est essentielle à la présentation d’antigènes qui ne sont pas synthétisés directement dans les DC (antigènes du soi, de tumeurs, de microorganismes n’infectant pas les DC) et donc à l’établissement de réponses T CD8+ anti‐infectieuses ou anti-tumorales. Son étude est donc primordiale pour la vaccination et pour l’immunothérapie mettant en jeu une présentation par les DC. Notre équipe a montré qu’à l’instar des cellules apoptotiques, les cellules vivantes sont une source d’antigènes efficace pour la présentation croisée par les DC in vitro et in vivo. Elle a ainsi montré que l’immunisation de souris avec des DC ayant capturé du matériel provenant de cellules vivantes permettait de protéger efficacement contre une tumeur dérivée de cellules de mélanome (B16) dans un protocole de type prophylactique. Durant ma thèse, j’ai pu montrer que cette immunisation était également très efficace dans un protocole de type thérapeutique. De façon surprenante, la protection et la réponse T CD8+ obtenues en utilisant des cellules vivantes comme source d’antigènes sont meilleures que celles obtenues avec des cellules apoptotiques. Les DC cultivées avec des cellules donneuses d’antigènes, vivantes ou apoptotiques, expriment des niveaux équivalents de molécules de costimulation. En revanche, les DC cultivées avec des cellules apoptotiques sécrètent plus d’IL--‐10, leur conférant un phénotype plus tolérogène. De plus, nous avons également montré que les antigènes tumoraux étaient mieux préservés au sein des cellules vivantes que des cellules apoptotiques, et que la quantité de complexes CMH--‐I/peptide à la surface des DC après culture avec des cellules vivantes était plus importante qu’après culture avec des cellules apoptotiques. Dans une seconde partie de ma thèse, je me suis attachée à caractériser les récepteurs et mécanismes impliqués dans le transfert d’antigènes provenant de cellules vivantes aux DC. J’ai pu montrer que ce transfert ne dépend ni de la sécrétion d’exosomes, ni du « cross-dressing ». En revanche, il est initié après un contact étroit avec les DC qui semble dépendre au moins en partie des récepteurs de type scavenger (SR) et de la calréticuline. Les images obtenues en microscopie suggèrent le passage de molécules de grande taille au sein d’une structure qui pourrait s’apparenter aux jonctions annulaires (Annular Gap Junctions). En effet, nous observons le passage de connexine 43 (Cx3) et de matériel cellulaire sous une conformation native (protéine GFP de 70kDa) provenant de la cellule vivante et colocalisant partiellement avec le marqueur d’endosomes précoces EEA-1 dans la DC. Cependant, l’utilisation de shRNA spécifique de la Cx43 indique que la présentation croisée ne nécessite pas son expression. Nos résultats suggèrent donc l’existence d’un mécanisme de communication intercellulaire permettant le passage d’antigènes de grande taille, qui pourraient ensuite être apprêtés par la DC
Dendritic cells (DC) are specialized in the capture, processing and antigen presentation. They have developed a special antigen presentation mechanism, known as cross-presentation, allowing them to internalize exogenous antigens, to digest and associate them to MHC class I molecules for presentation to CD8+ T lymphocytes. The cross-presentation is essential to the presentation of antigens that are not directly synthesized by the DC (self antigens, tumor antigens, microorganisms that don’t infect DC) and therefore to establish anti-infectious or anti-tumoral CD8+ T cell responses. His study is therefore essential for vaccination and immunotherapy involving a presentation by the DC. Our team showed that, like apoptotic cells, living cells are an efficient antigen source for cross-presentation by DC in vitro and in vivo. We have shown that immunization of mice with DCs that have captured material from living cells could protect effectively against a B16 melanoma challenge in a prophylactic model. During my PhD, I have shown that immunization was also very effective in a therapeutic model. Surprisingly, the protection and the CD8+ T cell response obtained using living cells as antigen source, are better than those obtained with apoptotic cells. DCs cultured with live or apoptotic antigen donor cells, expressed equivalent levels of costimulatory molecules. In contrast, DCs cultured with apoptotic cells secrete more IL- 10, giving them a tolerogenic phenotype. Furthermore, we have also shown that tumor antigens were better preserved within living cells than apoptotic cells, and the amount of MHC-I/peptide complexes at the surface of DC after culture with living cells was greater than after culture with apoptotic cells. In a second part of my thesis, I tried to characterize the receptors and mechanisms involved in the transfer of antigen from living cells to DCs. I have shown that this transfer is not dependent on exosomes transfer, nor on "cross-dressing". However, it is initiated after a close contact with the DC that seems to depend at least in part in scavenger receptors (SR) and calreticulin. The microscopy images obtained suggest the passage of large molecules in a structure, which may be similar to annular junctions (Annular Gap Junctions). Indeed, we observe the passage of connexin 43 (Cx3) and cellular material in a native conformation (GFP 70 kDa protein) from the living cell that partially colocalize with the early endosome marker EEA-1 in DCs. However, the use of an shRNA specific for Cx43 indicates that the cross-presentation does not require its expression. Our results suggest the existence of a mechanism of intercellular communication allowing the passage of large antigen, which could then be processed by DCs

Les cellules dendritiques (DC) sont spécialisées dans la capture, l'apprêtement et la présentation des antigènes. Elles ont développé une voie spécifique de présentation, la présentation croisée, leur permettant d'internaliser des antigènes exogènes, de les digérer et de les associer aux molécules du CMH de classe I afin de les présenter aux lymphocytes T CD8+. La présentation croisée est essentielle à la présentation d'antigènes qui ne sont pas synthétisés directement dans les DC (antigènes du soi, de tumeurs, de microorganismes n'infectant pas les DC) et donc à l'établissement de réponses T CD8+ anti‐infectieuses ou anti-tumorales. Son étude est donc primordiale pour la vaccination et pour l'immunothérapie mettant en jeu une présentation par les DC. Notre équipe a montré qu'à l'instar des cellules apoptotiques, les cellules vivantes sont une source d'antigènes efficace pour la présentation croisée par les DC in vitro et in vivo. Elle a ainsi montré que l'immunisation de souris avec des DC ayant capturé du matériel provenant de cellules vivantes permettait de protéger efficacement contre une tumeur dérivée de cellules de mélanome (B16) dans un protocole de type prophylactique. Durant ma thèse, j'ai pu montrer que cette immunisation était également très efficace dans un protocole de type thérapeutique. De façon surprenante, la protection et la réponse T CD8+ obtenues en utilisant des cellules vivantes comme source d'antigènes sont meilleures que celles obtenues avec des cellules apoptotiques. Les DC cultivées avec des cellules donneuses d'antigènes, vivantes ou apoptotiques, expriment des niveaux équivalents de molécules de costimulation. En revanche, les DC cultivées avec des cellules apoptotiques sécrètent plus d'IL--‐10, leur conférant un phénotype plus tolérogène. De plus, nous avons également montré que les antigènes tumoraux étaient mieux préservés au sein des cellules vivantes que des cellules apoptotiques, et que la quantité de complexes CMH--‐I/peptide à la surface des DC après culture avec des cellules vivantes était plus importante qu'après culture avec des cellules apoptotiques. Dans une seconde partie de ma thèse, je me suis attachée à caractériser les récepteurs et mécanismes impliqués dans le transfert d'antigènes provenant de cellules vivantes aux DC. J'ai pu montrer que ce transfert ne dépend ni de la sécrétion d'exosomes, ni du " cross-dressing ". En revanche, il est initié après un contact étroit avec les DC qui semble dépendre au moins en partie des récepteurs de type scavenger (SR) et de la calréticuline. Les images obtenues en microscopie suggèrent le passage de molécules de grande taille au sein d'une structure qui pourrait s'apparenter aux jonctions annulaires (Annular Gap Junctions). En effet, nous observons le passage de connexine 43 (Cx3) et de matériel cellulaire sous une conformation native (protéine GFP de 70kDa) provenant de la cellule vivante et colocalisant partiellement avec le marqueur d'endosomes précoces EEA-1 dans la DC. Cependant, l'utilisation de shRNA spécifique de la Cx43 indique que la présentation croisée ne nécessite pas son expression. Nos résultats suggèrent donc l'existence d'un mécanisme de communication intercellulaire permettant le passage d'antigènes de grande taille, qui pourraient ensuite être apprêtés par la DC.

Les traitements antirétroviraux combinés limitent la morbidité et la mortalité liées au SIDA après l'infection par le VIH, mais une hyperactivation du système immunitaire persiste, notamment au niveau des cellules myéloïdes, en corrélation avec une morbidité et une mortalité métabolique et cardio-vasculaire plus précoces que celles de la population générale. Il existe deux types de VIH ; l'infection par le VIH-2, prévalente en Afrique de l'Ouest et dans des communautés émigrées de cette région, conduit moins rapidement et moins fréquemment au SIDA que l'infection par le VIH-1, pour des raisons de relation hôte-virus encore à élucider. Lors de l'infection aigüe par le VIH-1, un pic sérique d'interféron (IFN) de type I et d'autres cytokines est observé, puis régulé négativement. Il est accompagné d'une forte réponse des gènes stimulés par l'IFN, qui persiste lors du passage à l'infection chronique, avec hyperactivation du système immunitaire. Les IFN de type I sont produits par toutes les cellules, mais en particulier par les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC). Les IFN de type III (lambda) sont liés à la résolution de l'infection par le VHC, mais leur production en réponse au VIH reste à explorer. Durant mon doctorat, j'ai montré pour la première fois qu'in vitro, le VIH-1 et le VIH-2 stimulent la production d'IFN-lambda par les PBMC de donneurs sains de façon comparable. Chez des donneurs sains, les pDC produisent ces IFN de façon intrinsèque, mais pas les autres DC myéloïdes. Les pDC ont également un rôle dans la réponse immunitaire adaptative contre le VIH. L’équipe a en effet montré qu’elles peuvent effectuer la présentation croisée d’antigènes de cellules mortes infectées par le VIH, comme le font les autres DC. Elles peuvent ainsi activer des réponses T cytotoxiques spécifiques qui vont éliminer les cellules infectées. J’ai étudié ce mécanisme et montré que l’activation spécifique des lymphocytes T par les pDC est potentialisée par une pré-activation non-spécifique. En effet, les pDC s’activent en présence du virus et sécrètent des cytokines qui pré-activent une production intracellulaire d'IFN-gamma par les lymphocytes T CD8. Ces lymphocytes ne relarguent l'IFN-gamma qu'après reconnaissance spécifique par leur récepteur T d'un complexe peptide-CMH. Les résultats de cette thèse pourraient donner une place aux IFN-lambda ou à leur inhibition dans l'arsenal thérapeutique contre le VIH, ainsi qu'à l'activation des pDC pour conduire à une meilleure détection et élimination des réservoirs viraux par présentation croisée
Combined antiretroviral treatments limit AIDS-related morbidity and mortality after HIV infection. But hyperactivation of the immune system persists, notably within the myeloid cell compartment, in correlation with metabolic and cardiovascular morbidity, which occurs earlier than in the general population. Two types of HIV have been described: HIV-2 infection, prevalent in West Africa and in emigrated communities originating from this area, leads less frequently and less rapidly to AIDS compared to HIV-1 infection, because of host-virus, which still need to be characterized. During acute HIV-1 infection, in the plasma, peak levels of type I Interferon (IFN) and other cytokines are observed, then they are down-modulated. A strong IFN stimulated gene (ISG) response is also observed. During chronic infection, the ISG response persists, with hyperactivation of the immune system. Type I IFN are produced by all cell types, but more specifically by plasmacytoid Dendritic Cells (pDC). Certain type III IFN (lambda) gene variants correlate with clearance of HCV infection, but IFN-lambda production in response to HIV remained to be studied. During my PhD, I showed for the first time that, in vitro, HIV-1 and HIV-2 induce IFN-lambda production by healthy donors PBMC at comparable levels. Plasmacytoid DC from healthy donors produce these IFN intrinsically, but not conventional DC. Plasmacytoid DC also have a role in the induction of adaptive immune responses against HIV. Our team demonstrated that they can crosspresent antigens from HIV infected apoptotic cells, like other DC. They can therefore activate specific cytotoxic T cell responses which eliminate infected cells. I studied this mechanism and showed that the activation of specific T cell by pDC is potentiated by non-specific pre-activation. Indeed, pDC become activated in the presence of virus and secrete cytokines which pre-activate intracellular IFN-gamma production by CD8 T cells. IFN-gamma is then secreted only after cognate MHC-peptide-T cell receptor interaction. The results of this thesis potentially give a role to IFN-lambda or their blockade in HIV treatment, and to the activation of pDC to induce better detection and elimination of HIV reservoirs through crosspresentation

Les Cellules Dendritiques (DC) constituent une population de cellules présentatrices d'antigène professionnelles capables d'activer les Lymphocytes T et d'initier une réponse immunitaire adaptative. En plus de leur capacité à présenter des antigènes exogènes et endogènes (du soi ou viraux) respectivement via les Complexes Majeurs d'Histocompatibilité (CMH) de classe II et de classe I, elles peuvent également capturer, apprêter et présenter des antigènes extracellulaires par le CMH-I. Ce processus, appelé Présentation Croisée («cross-presentation» ou PC), peut être réalisé selon deux voies, la voie vacuolaire et la voie cytosolique, majoritaire. Dans cette dernière, les antigènes sont phagocytés/endocytés avant d'être exportés depuis les phago/endosomes vers le cytosol où ils sont dégradés par le protéasome. Les peptides ainsi générés sont ensuite transférés par les transporteurs TAP dans le réticulum endoplasmique ou dans des compartiments intracellulaires, lieux de leur association aux molécules de CMH-I. Cependant, les mécanismes par lesquels les antigènes sont transférés depuis les endosomes/phagosomes vers le cytosol demeurent mal caractérisés. Deux hypothèses sont proposées pour tenter d'expliquer le déroulement de cette étape clé. La première suppose l'implication d'un transporteur tandis que la seconde avance que l'export des antigènes vers le cytosol résulterait d'une perturbation temporaire de la membrane endo/phagosomale. Longtemps rejeté, le modèle de la «rupture membranaire» nécessiterait la mise en oeuvre de mécanismes de réparation compensatoires pour contenir les dommages endomembranaires et ainsi préserver la viabilité cellulaire. Les travaux réalisés au cours de ma thèse ont porté sur l'étude de l'implication du complexe ESCRT-III (Endosomal Sorting Complex Required for Transport), responsable de la réparation des membranes biologiques, dans l'export cytosolique des antigènes et la PC. Nous avons montré que les DC CD8+, sous-population la plus efficace en termes d'export et de PC, présentent un plus grand nombre de dommages intracellulaires que leurs homologues CD11b+, suite à un traitement par une drogue lysosomotropique. Cette susceptibilité accrue quant à la survenue de dommages endomembranaires dans les DC CD8+ corrèle avec le recrutement de différents composants d'ESCRT-III spécifiquement dans les compartiments intracellulaires de cette sous-population de DC. Par ailleurs, dans une lignée de DC CD8+, l'extinction de l'expression de Chmp4b ou de Chmp2a, deux sous-unités effectrices du complexe, conduit à une augmentation drastique de l'export cytosolique d'un antigène modèle ainsi qu'à une amélioration spécifique de l'efficacité de la PC, in vitro et in vivo. Enfin, au regard de l'implication d'ESCRT-III dans la réparation de dommages membranaires causés par la formation de canaux d'octamères de phospho-MLKL au cours de l'induction de la nécroptose, nous avons étudié les interactions entre cette voie de mort cellulaire et l'export cytosolique des antigènes en supposant qu'en l'absence d'ESCRT-III, ces canaux persistent dans les membranes et sont à l'origine d'une perméabilité accrue, pouvant expliquer le phénotype d'export cytosolique. A la suite de l'inhibition pharmacologique de RIPK3, la kinase phosphorylant MLKL, nous observons une forte diminution de l'export cytosolique dans les DC déficientes pour ESCRT-III. Nos résultats démontrent un rôle majeur de la fonction réparatrice d'ESCRT-III dans la régulation de l'export cytosolique des antigènes et de la PC. Ils renforcent l'idée selon laquelle les antigènes sont exportés dans le cytosol des DC à la suite de perturbations membranaires, plutôt que par l'intermédiaire de transporteurs. La découverte de l'importance fonctionnelle d'ESCRT-III dans une voie immunologique illustre la cooptation de mécanismes eukaryotes ancestraux dans des fonctions propres aux vertebrés supérieurs, telles que l'initiation de réponses immunitaires adaptatives
Dendritic cells (DCs) play a central role in immune homeostasis by linking innate signals to adaptive responses. In addition to their capacity to expose exogenous antigens on Major Histocompatibility Complex (MHC) class II molecules or endogenous antigens (derived from self or viral proteins) on MHC class I, they also show a remarkable ability to take-up, process and present extracellular antigens on MHC class I molecules. This process, termed Cross-Presentation (CP) plays a critical role in eliciting Cytotoxic T Cell responses to tumors and pathogens that do not readily infect DCs. So far, two main intracellular pathways have been described for CP, namely the vacuolar and the cytosolic pathways, the latter being predominant in CD8+ DC at homeostasis. The first step of the cytosolic pathway resides in the phagocytosis of exogenous antigens that are subsequently exported into the cytosol, where they are processed by the proteasome. The resulting processed antigens can then be channeled through the TAP transporter into the endoplasmic reticulum or into intracellular compartments where they are loaded on MHC class I. While the contributions of the proteasome and TAP transporter to this process are now well established, the way endocytosed antigens gain access to the cytosol remains unclear and is a long-standing matter of controversy, that confronts two main models: transfer through specific transporters or rupture of endocytic membranes and leakage of luminal content. Although the latter hypothesis has been repeatedly dismissed owing to its presumable lack of control, we reasoned that it could only be operational if membrane damages were contained by effective repair, to preserve cell survival. My PhD work thereby focused on the possible implication of the ESCRT-III (Endosomal Sorting Complex Required for Transport) complex, the main repair system for biological membranes, in antigen export to the cytosol during antigen CP by DCs. We showed that CD8+ DCs, corresponding to the most efficient exporting and cross-presenting DC subset, display higher amounts to intracellular damages triggered by a lysosomotropic drug, compared to their CD11b+ counterparts. This increased susceptibility to intracellular damages in CD8+ DCs correlates with the observed enriched recruitment of ESCRT-III subunits in this DC subset's endocytic compartments, relatively to CD11b+ DCs. Additionally, in a CD8+ DC cell line, silencing of Chmp2a or Chmp4b, two effector subunits of ESCRT-III, enhances cytosolic antigen export, as well as in vitro and in vivo CP, without affecting MHC-II presentation. Finally, in the light of recent studies demonstrating that ESCRT-III is repairing steady-state necroptotic damages formed by channels of phospho-MLKL octamers, we studied interactions between the induction of necroptosis and export to the cytosol in ESCRT-III-silenced cells. We supposed that, in absence of a functional repair system, MLKL channels could persist at biological membranes (plasma or endocytic) and result in increased membrane permeability, possibly explaining the increased antigen export phenotype displayed by ESCRT-III-silenced cells. Indeed, following pharmacological inhibition of RIPK3, the kinase phosphorylating MLKL, we observed a strong reduction of antigen export to the cytosol in ESCRT-III-deficient DCs. Altogether, these results show a critical role for membrane repair in containing cytosolic antigen export and CP in DCs. They identify a new fundamental cellular mechanism involved in antigen CP and strengthen the idea that antigens are exiting intracellular compartments following membrane disruption, rather than through transporters. The discovery of the functional relevance of ESCRT-III in a key immunological pathway illustrates the fascinating co-option of ancestral cellular mechanisms present in early eukaryotes in new crucial functions specifically carried by higher vertebrates, such as the induction of adaptive immune responses

Malgré le statut immunologique particulier du système nerveux central (SNC), l'immunothérapie active représente une approche intéressante dans le traitement des tumeurs cérébrales. Loin d'être immunologiquement muet, le SNC possède même son propre réseau de cellules immunocompétentes spécialisées : les cellules microgliales. D'origine myeloïdes, elles sont capables de jouer le rôle de cellules présentatrices d'antigènes (CPA) après activation et sont idéalement situées pour induire une réponse immunitaire cytotoxique anti-tumorale efficace La manipulation de la microglie pour augmenter les réponses immunes représentent donc une approche thérapeutique particulièrement attractive dans le traitement de ces cancers. Afin de mieux caractériser les cellules microgliales, nous avons développé un modèle de souris rendues aplasique par irradiation, au sein duquel seule la microglie peut jouer le rôle de CPA. Ainsi, nous avons pu observé que dans des conditions adéquates (CpG-ODN, GM-CSF, sCD40L) les cellules microgliales sont douées in vivo d'une activité de présentation antigénique croisée et que celle-ci conduit à l'activation des LT CD8+ spécifique. En parallèle, nous avons évalué un protocole d'immunothérapie active dans un modèle préclinique de tumeur cérébrale basé sur l'implantation stéréotaxique de cellules E.G7-OVA. Ce protocole se base sur l'injection de CpG-ODN, une molécule d'origine microbienne permettant d'activer les cellules du système immunitaire et plus précisément les CPA infiltrant les tumeurs, et sur l'élimination temporaire des lymphocytes T régulateurs, des cellules qui assimilent les antigènes tumoraux à des peptides du soi et conduisent à l'anergie du système immunitaire. Les résultats obtenus montrent que ce traitement induit le rejet de la tumeur pour l'ensemble des souris et que ce rejet est dépendant de la présence des cellules NK (" natural killer ").

Malgré le statut immunologique particulier du système nerveux central (SNC), l'immunothérapie active représente une approche intéressante dans le traitement des tumeurs cérébrales. Loin d'être immunologiquement muet, le SNC possède même son propre réseau de cellules immunocompétentes spécialisées : les cellules microgliales. D'origine myeloïdes, elles sont capables de jouer le rôle de cellules présentatrices d'antigènes (CPA) après activation et sont idéalement situées pour induire une réponse immunitaire cytotoxique anti-tumorale efficace La manipulation de la microglie pour augmenter les réponses immunes représentent donc une approche thérapeutique particulièrement attractive dans le traitement de ces cancers. Afin de mieux caractériser les cellules microgliales, nous avons développé un modèle de souris rendues aplasique par irradiation, au sein duquel seule la microglie peut jouer le rôle de CPA. Ainsi, nous avons pu observé que dans des conditions adéquates (CpG-ODN, GM-CSF, sCD40L) les cellules microgliales sont douées in vivo d'une activité de présentation antigénique croisée et que celle-ci conduit à l'activation des LT CD8+ spécifique. En parallèle, nous avons évalué un protocole d'immunothérapie active dans un modèle préclinique de tumeur cérébrale basé sur l'implantation stéréotaxique de cellules E. G7-OVA. Ce protocole se base sur l'injection de CpG-ODN, une molécule d'origine microbienne permettant d'activer les cellules du système immunitaire et plus précisément les CPA infiltrant les tumeurs, et sur l'élimination temporaire des lymphocytes T régulateurs, des cellules qui assimilent les antigènes tumoraux à des peptides du soi et conduisent à l'anergie du système immunitaire. Les résultats obtenus montrent que ce traitement induit le rejet de la tumeur pour l'ensemble des souris et que ce rejet est dépendant de la présence des cellules NK (" natural killer ")
Despite the particular immune status of the central nervous system (CNS), active immunotherapy represents a promising approach for the treatment of malignant brain tumor. Of myeloid origin, microglia are the major immunocompetent cells of the CNS. They harbour an interesting potential in anti-cancer therapies through their preferential location in cerebral tumors and their antigen presenting cell (APC) activities. In order to better characterization of microglia, we have set up an original protocol, based on the mice body irradiation (except the head), allowing to exclude the involvement of migrating peripheral APC. Results showed that resident microglia cross-present in vivo exogenous Ag and prime naive CD8+ T lymphocytes. Moreover, their Ag cross-presentation activity is potentiated by a multistep activation process, including proinflammatory signals (CpG-ODN and GM-CSF) and sCD40L. At the same time, we evaluated immunotherapy for the treatment of mice brain tumor, based on CpG-ODN injection, a potent APC activator, and regulatory T cells (Treg) depletion, which are described to favour tumor escape. Results showed that applied-protocol allows the tumor rejection in all mice and that NK cells are essential for tumor rejection

La plupart des tumeurs expriment des antigènes susceptibles d'être reconnus par des lymphocytes T CD8 cytotoxiques. Néanmoins, les essais d'immunothérapies réalisés chez l'homme, ciblant différents antigènes reconnus par des lymphocytes T, ont montré une efficacité limitée. L'une des voies possibles pour améliorer ces traitements consiste à identifier de nouveaux antigènes tumoraux. Dans ce but, nous avons étudié la spécificité de lymphocytes T ayant infiltré les mélanomes de 22 patients. Ce criblage a permis d'identifier un nouvel antigène de tumeur reconnu par un clone T CD8 dans le contexte HLA-A*0201 : la métalloprotéase matricielle-2 (MMP-2). Nous avons également montré que l'épitope MMP-2560-568 n'était pas présenté par la voie endogène classique, mais par présentation croisée. L'apprêtement original de MMP-2, utilisé exclusivement par les cellules de mélanome, et ses fonctions pro-tumorales en font un candidat idéal à cibler en immunothérapie anti-mélanome
Most tumor cells express antigens that can be recognized by cytotoxic T CD8 lymphocytes. Nevertheless, immunotherapeutic trials, targeting various human tumor cell antigens recognized by T lymphocytes, have shown limited efficacy. To improve these treatments, it is necessary to identify new tumor antigens. With this aim, we studied the specificity of melanoma infiltrating lymphocytes from 22 patients. This screening allowed us to identify a new tumor antigen recognized by a CD8 T cell clone in the HLA-A*0201 context : the matrix metalloproteinase-2 (MMP-2). We also showed that the MMP-2560-568 epitope is not processed by the classical endogenous pathway, but by cross-presentation. The original processing of the MMP-2 epitope, only used by melanoma cells, and the pro-tumoral functions of MMP-2 make of this new antigen an ideal target for immunotherapy, and opens the way to new innovative therapeutic strategies to treat HLA-A*0201 melanoma patients

Les données de la littérature ont récemment souligné l’importance du dialogue réciproque qui s’instaure entre les cellules Natural Killer (NK) et les cellules dendritiques (DC) au cours des phases précoces de la réponse immune pour l’initiation des réponses T spécifiques. La présentation croisée d’antigènes (Ag), processus qui permet aux DC de présenter des Ag exprimés par d’autres cellules aux lymphocytes T CD8+, est requise pour le développement d’une immunité cellulaire spécifique dans la plupart des infections par des pathogènes intracellulaires et des tumeurs. L’étude des mécanismes physiologiques impliqués dans la régulation de cette fonction suscite donc un intérêt majeur. Ce travail a permis de mettre en lumière une coopération entre les cellules NK et les DC humaines pour la présentation croisée d’un Ag exprimé par des cibles tumorales. Dans ce contexte, nous avons montré que la lyse de ces cibles par les cellules NK n’est pas nécessaire à la capture de leurs Ag par les DC. Au contraire, la sécrétion d’IFN-γ et de TNF-α par les cellules NK activées au contact des cibles tumorales joue un rôle prépondérant dans l’induction de la présentation croisée d’Ag. Ainsi, nous avons identifié une nouvelle fonction « helper » des cellules NK à l’interface entre l’immunité innée et adaptative. Le ciblage de cette fonction pourrait offrir de nouvelles perspectives en immunothérapies anti-tumorales dont le but ultime est le développement d’une immunité cellulaire spécifique
Recent reports have demonstrated the importance of the reciprocal crosstalk between natural killer (NK) cells and dendritic cells (DC) occurring during early phase of immune response for shaping downstream T cell immunity. Antigen (Ag) cross-presentation, a process by which DC present Ag from neighboring cells to CD8+ T lymphocytes is a prerequisite for the developpment of specific cellular immunity against most intracellular pathogens and tumors. A more detailed understanding of the mechanisms that regulate this specific DC function is thus a major challenge for immunologists. Here, we highlight the cooperation between NK and DC for tumor cell-derived Ag cross-presentation. In this context, we show that the NK cell-mediated lysis of target cells is not required for Ag capture by DC. In contrast, both IFN-γ and TNF-α produced by NK cells upon recognition of tumor cells play a critical role in the induction of Ag cross-presentation. These findings define a novel « helper» function of NK cells bridging innate and adaptive immunity. This novel function could be harnessed in cancer immunotherapy for inducing Ag-specific cellular immunity

La présentation croisée est un mécanisme crucial dans l’immunité tumorale et virale car elle permet la présentation des Ag exogènes en association avec les molécules de CMH I induisant des réponses T CD8+. Notre étude a permis de montrer que les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) internalisent différentes formulations antigéniques in vitro et in vivo. Cependant, à l’état initial, elles sont incapables d’apprêter ces Ag dans la voir de CMH de classe I. Après activation par des TLR ligands synthétiques ou par des virus, les pDC acquièrent la capacité de réaliser la présentation croisée aboutissant à l’induction d’une réponse CTL fonctionnelle in vivo. De manière intéressante, les pDC dégradent très fortement les Ag à l’état initial. Or, il a été montré qu’une dégradation antigénique trop extensive détruit les épitopes, rendant la présentation inefficace. Après activation les pDC réduisent drastiquement leur potentiel de dégradation, expliquant leur capacité de présentation croisée. Une oxydase sensible à l’inhibition par le DPI (diphenyleneiodonium), et que nous n’avons pas encore identifié, est impliquée dans cette régulation.

La présentation antigénique croisée permet de générer directement des lymphocytes T cytotoxiques, cellules les plus efficaces pour éliminer les cellules tumorales. Ce travail montre que les cellules microgliales adultes, principales cellules présentatrices d’antigènes (CPA) du système nerveux central (SNC), et donc en première ligne face aux tumeurs cérébrales, sont capables in vivo de présenter de façon croisée des antigènes tumoraux issus de cellules tumorales mourantes traitées par un agent chimiothérapeutique (BCNU). Ainsi, la microglie constitue un appui pour l’efficacité des réponses immunitaires anti-tumorales dans le cerveau. Cependant, pour une activation lymphocytaire optimale, cette aptitude est soumise à l’injection d’adjuvants destinés à contrer l’immunosuppression locale du SNC. En parallèle, dans un modèle pré-clinique de gliome murin, le bénéfice de l’association d’une chimiothérapie administrée localement (BCNU) avec un protocole d’immunothérapie a été étudié. La chimiothérapie permet l’apoptose massive des cellules tumorales et donc la libération d’antigènes. Le bras immunothérapeutique a pour but de lever une part de l’immunosuppression tumorale par la déplétion des lymphocytes T régulateurs et à restimuler la réponse immunitaire via un agoniste du TLR9 capable de promouvoir l’activation des CPA. L’association de ces deux approches thérapeutiques permet ainsi à 93% des souris traitées de survivre ainsi que l’induction d’une réponse mémoire protégeant 43% d’entre-elles d’une seconde injection du gliome
Antigen cross-presentation induces cytotoxic T lymphocyte generation, the most efficient cells allowing tumor cell elimination. This work shows that adult microglial cells, the main antigen presenting cells (APC) of the central nervous system (CNS), in first line to brain tumors, are able to cross-present antigens from dying tumor cells treated by chemotherapy (BCNU) in vivo. Thus, microglia are necessary for anti-tumor immune response efficiency in the brain. Nevertheless, this ability is subjected to the injection of several adjuvants to counterbalance the local immunosuppression of the CNS and to obtain an optimal lymphocyte activation. Moreover, in a pre-clinical murine glioma model, we studied the benefit of the association of a local chemotherapy (BCNU) with an immunotherapeutic protocol. Chemotherapy enables a massive tumor apoptosis and therefore antigen release. The immunotherapeutic arm aims to remove a part of the tumor immunosuppression by the regulatory T lymphocyte depletion and to restimulate the immune response through a TLR9 agonist promoting APC activation. The combination of these two therapeutic approaches allows 93% of treated mice to survive and induces a memory immune response protecting 43% of them from tumor rechallenging

La présentation d'antigènes exogènes sur les molécules du CMH de classe I, appelée cross- présentation, est essentielle pour l'induction des réponses T CD8 cytotoxiques. La manipulation de la cross-présentation est une stratégie thérapeutique attrayante, mais une meilleure compréhension des mécanismes impliqués est essentielle. Dans les cellules dendritiques (DC) de souris, la cross- présentation se fait par la voie «cytosolique» ou «vacuolaire», en fonction de la localisation intracellulaire de la dégradation de l'antigène. Nous avons déjà montré que la DC résidentes dans les organes lymphoïdes humains présentait par la voie cytosolique. L'importance physiologique de la voie vacuolaire dans la DC humaine qui sont trouvés in vivo reste peu claire. Pour répondre à cette question, nous avons analysé la capacité de la DC dérivées de monocytes générée in vivo à cross- présenter. En utilisant le Single Cell RNA-seq, nous avons d'abord confirmé l'identification des ascites tumorales DC comme des cellules dérivées de monocytes. Nous avons trouvé que les ascites DC et les macrophages cross-présentent efficacement, mais sont incapables de transférer des protéines exogènes dans leur cytosol. De plus, l'inhibition du protéasome n'a pas affecté la cross-présentation. Ces propriétés n'étaient pas dues au microenvironnement tumoral, car les homologues in vitro des ascites DC et des macrophages présentaient les mêmes propriétés. Nous concluons que les cellules humaines dérivées de monocytes cross-présentent exclusivement par la voie vacuolaire. Enfin, nous avons trouvé que les DC dans l’ascite étaient aussi efficaces que les DC des amygdales pour l'induction des cellules T CD8 cytotoxiques effectrices, alors que les macrophages dans l’ascite étaient de mauvais stimulateurs des cellules T CD8. Ces résultats auront des implications importantes pour les stratégies thérapeutiques visant à moduler la cross-présentation
The presentation of exogenous antigens on MHC class I molecules, termed cross-presentation, is essential for the induction of cytotoxic CD8+ T cells. In mouse, dendritic cells (DC) that arise from monocytes (mo-DC) during inflammation play a key role in cytotoxic T cell responses by cross- presenting antigens directly in peripheral tissues. Whether human naturally-occuring mo- DC can cross-present is unknown. To address this question, we have used human mo-DC directly purified from peritoneal tumor ascites. Using single-cell RNA-seq, we first confirm that ascites DC contain exclusively monocyte-derived cells. Both ascites mo-DC and macrophages cross- present efficiently, but are unable to transfer exogenous proteins into their cytosol. Inhibition of cysteine proteases, but not of proteasome, abolishes cross-presentation by mo-DC. We conclude that human monocyte- derived cells cross-present exclusively using a vacuolar pathway. Finally, we demonstrate that only ascites mo-DC, but not macrophages, efficiently induce effector cytotoxic CD8+ T cells. These results will have important implications for harnessing cross-presentation for therapeutic purposes

Les cellules microgliales, principales cellules immunocompétentes résidentes du système nerveux central (SNC), d'origine myéloïde, présentent un potentiel intéressant dans la lutte contre le cancer par leur localisation privilégiée dans les tumeurs cérébrales. A la moindre perturbation de leur microenvironnement, elles s'activent graduellement, ré-expriment toutes les molécules nécessaires à la présentation de l'antigène, perdent leurs prolongements cytoplasmiques jusqu'à devenir amiboïdes et sont donc à terme totalement indiscernables des macrophages périphériques. Dans le cadre d'une immunothérapie anti-tumorale, il est important pour mieux comprendre les réponses immunitaires de pouvoir distinguer les divers protagonistes. Au sein des produits d'une banque soustractive microgliale réalisée auparavant au laboratoire, trois ARNm se sont révélés discriminants entre cellules microgliales et macrophages primaires et ce, même en condition pro- ou anti-inflammatoire. Les cellules microgliales peuvent également dans certaines conditions se différencier en cellules type dendritique. Or ces dernières sont très prometteuses en immunothérapie active, notamment par leur capacité à effectuer la présentation croisée. En utilisant la microglie néonatale ou adulte primaire, nous avons mis en évidence que la microglie in vitro et ex vivo était aussi capable de présentation croisée et que celle-ci, bien que de faible intensité, peut être modulée positivement par le GM-CSF et le CpG. Deux modèles de tumeurs intracérébrales plus ou moins immunogènes implantées par stéréotaxie chez la souris ont alors été développés afin d'évaluer des protocoles utilisant ces résultats. Ainsi un traitement combinant déplétion des lymphocytes T régulateurs et injection de CpG permet de guérir la plupart des animaux ayant la tumeur la moins agressive mais ne montre en revanche pas de réel bénéfice pour la tumeur très agressive en intracérébral alors qu'en périphérie les résultats sont systématiquement meilleurs. Enfin, l'immune responsive gene 1, issu de la banque soustractive, a été caractérisé et s'avère être un nouveau marqueur potentiel d'activation des cellules immunitaires innées stimulées par les interférons ou les ligands des récepteurs Toll, aussi bien chez la souris que chez l'homme, et pourrait donc être intéressant pour suivre l'évolution de la réponse du système immunitaire après une thérapie.

Le présent travail est l'établissement minutieux, d'une anthologie non exhaustive, mais la plus représentative possible, des récits circonstanciés ou des allusions de connivence se rencontrant dans les textes de fiction, de morale ou de médecine, depuis l'Antiquité jusqu'à l'Âge classique, ayant pour sujet le motif légendaire des Amours d’ Antiochus et Stratonice. Cette légende prolifique a pour intérêt majeur d'utiliser les savoirs médico-moraux sur la souffrance amoureuse dans une perspective de fable théâtrale et mystificatrice, alliant l'imaginaire antique et ancien à l'histoire littéraire des narrations anecdotiques à usage exemplaire. L'analyse comparée du traitement du motif permet de mettre en lumière l'évolution conjointe de la psychologie de la maladie d'amour, de la poétique des exempla, et des réflexions menées sur les savoirs partagés et leur diffusion dans l'opinion éclairée, durant un millénaire. La longue durée, sur laquelle le corpus jamais encore réuni est examiné, tend à révéler une figure centrale de l'imaginaire collectif européen, celle de l'amoureux en souffrance, à l'origine des développements narratifs, poétiques et dramaturgiques les plus variés. L’étude s'épanouit dans une logique à la fois en diachronie et en synchronie : diachronie du passage du monde païen au monde chrétien, du monde antique au monde moderne, des temps des « légendes » à l'ère de la « raison » ; synchronie d'une narration assez simplement composée pour entrer dans la mémoire universelle, et suffisamment riche pour porter toute la complexité et les évolutions d'un thème majeur de l'Occident : la mélancolie d'amour
The work herein is the careful establishment of an anthology, non-exhaustive yet as representative as possible, of circumstantial stories or connivance allusions occurring in fictional, moral, or medicine text from ancient times to the classical Age, dealing with the legendary motif of the Loves of Antiochus and Stratonice. This prolific legend has the major advantage of using medical-moral knowledge about love-sickness to feed a theatrical and mystifying fable, combining the ancient imaginary with the literary history of exemplary anecdotal narratives. The comparative analysis of the motif's treatment allows us to highlight the joint evolution of love-sickness psychology, poetic exempla, and reflections on the shared knowledge and its dissemination in enlightened opinion, over a millennium. This long term, over which this novel corpus is discussed, reveals a central figure in the European collective imagination, that of lovers in suffering, point of origin of varied narrative, poetic, and dramatic developments. The study flourishes in a logic both diachronic and synchronic: diachronic passage from the pagan world to the Christian world, from the ancient world to the modern world, from the time of "legends" to the age of "reason" ; synchrony on the other hand of a story simple enough to seep into universal memory, and nevertheless rich enough to bear all the complexity and evolutions of a major theme of the Occident: love melancholy

Les cellules dendritiques {DC) jouent un rôle majeur dans l'induction de l'immunité anti-tumorale spécifique de l'antigène {Ag). Récemment, les DC BDCA3high humaines sont apparues comme étant homologues aux DC CD8a+ connues pour activer très efficacement les lymphocytes T CD8 par présentation croisée d'Ag chez la souris. Par ailleurs, ces deux populations de DC sont les productrices principales d'interféron-λ{IFN-λ), une cytokine récemment découverte et possédant des propriétés antivirales, antiprolifératives et anti-tumorales. Mon travail de thèse a permis de mieux caractériser la présentation croisée d'Ag cellulaire par les DC BDCA3high à l'aide d'un modèle in vitro et de mettre en lumière le rôle des cellules NK dans l'induction de ce processus. Ce travail a également aboutit à la mise en évidence des DC BDCA3high dans les tumeurs de sein et de révéler l'inhibition de leur sécrétion d'IFN-λ par des facteurs solubles présents dans le microenvironnement tumoral. L'ensemble de ces résultats devraient permettre de concevoir de nouvelles stratégies thérapeutiques basées sur le ciblage des DC BDCA3high
Dendritic cells {DC) play a major role in the induction of antigen {Ag) specific anti-tumoral immunity. Recently, human BDCA3high DC appeared to be homologous with CD8a+ DC known to activate very efficiently T CD8 lymphocyte by Ag cross-presentation in mice. Moreover, those two DC populations are the main producers of interferon-λ {IFN-λ), a recently discovered cytokine family with antiviral, anti-proliferative and anti-tumoral properties. My works participated to better characterize cell derived Ag cross-presentation by BDCA3high DC using an in vitro model and enlightened the role of NK cells in its induction. This works also end up in revealing the presence of BDCA3high DC in breast tumors and the inhibition of their IFN-λsecretion by soluble factor from tumor microenvironment. Altogether, those results should allow designing new anti-tumoral immunotherapeutic strategies based on BDCA3high DC targeting

La protection contre certains agents infectieux ainsi que le traitement de cancers nécessite l'induction d'une réponse cellulaire. Le développement de vaccins induisant une réponse T CD8 efficace est donc essentiel. La présentation croisée de l'antigène est importante pour l'activation de lymphocytes T CD8 spécifiques et de nombreux facteurs participent au développement d'une réponse lymphocytaire T efficace. Nous nous sommes intéressés à deux d'entre eux : la voie d'immunisation et la séquence d'aministration de l'antigène et d'un adjuvant. Nous avons développé une technique d'enrichissement des lymphocytes T CD8 spécifiques d'un antigène, ce qui a permis une étude précise de la réponse T CD8 endogène. Nous avons ensuite étudié l'influence de la voie d'immunisation sur l'efficacité de la réponse T CD8. Nous avons observé que l'injection intradermique d'un antigène cellulaire induit une réponse T CD8 plus tardive, comparée à une administration par voie systémique. Cependant, la réponse T CD8 induite par une injection locale de l'antigène est plus efficace. Puis, nous avons évalué l'influence de l'administration d'un adjuvant - le poly I:C connu pour induire la production d'interférons (IFN) de type I - en parallèle de celle de l'antigène. Nous avons montré que le moment optimal d'administration de l'adjuvant dépend de la voie d'immunisation. De plus, il existe une durée limitée durant laquelle l'adjuvant induit des effets positifs sur l'activation des lymphocytes T CD8. Nous avons identifié plusieurs effets du poly I:C et des IFN de type I sur les cellules du système immunitaire

L’apprêtement antigénique par les protéases intracellulaires et la présentation des épitopes sont essentiels pour la reconnaissance des cellules infectées par les lymphocytes CD8+. Ici nous avons montré que certains inhibiteurs de la protéase de la VIH (IPs) modulent l’activité de la protéasome et aminopeptidase impliqué dans l’apprêtement antigénique endogène et l’activité cathepsins importante dans l’apprêtement croisée. Deux IPs agissent directement sur les cathepsins et leurs régulateurs en inhibant les activités kinase, NOX2 et en régulant le pH phagolysosomal. Les IPs ont changé la dégradation des protéines viral et la production des épitopes de façon séquence- et cellule-spécifique, ont altéré la présentation direct et croisée des épitopes, et ont partiellement changé l’auto-peptidome des cellules primaires. La modulation par les drogues de l’apprêtement et la présentation des épitopes peut fournir une approche thérapeutique alternative pour moduler la reconnaissance immunitaire
Antigen processing by intracellular proteases and peptidases and epitope presentation are critical for recognition of pathogen-infected cells by CD8+ T lymphocytes. Here we show that several HIV protease inhibitors (PIs) prescribed to HIV-infected persons variably modulate proteasome and aminopeptidase activities involved in endogenous antigen presentation and cathepsin activities involved in antigen cross-presentation. Two HIV PIs acted directly on cathepsins and on their regulators by inhibiting kinases, NOX2 and the regulation of phagolysosomal pH, subsequently enhancing cathepsin activities. HIV PIs modified HIV protein degradation and epitope production in a sequence- and cell-dependent manner, altered direct- and cross-presentation and T cell-mediated killing, and partly changed the self-peptidome of primary cells. Drug-induced modulation of antigen processing and peptidome may provide an alternate therapeutic approach to modulate immune recognition

L’offre islamique circulant sur le champ religieux français est hétérogène. Elle regroupe discours produits sur le terrain français et éléments importés du monde musulman, accessibles sur cassettes, chaînes satellites et Internet. Dans certains quartiers de la banlieue parisienne, cette offre discursive représente une source de valorisation essentielle pour des lycéens (15-20 ans), se sentant affligés de nombreux stigmates relatifs à leur appartenance même à la banlieue, a l’origine maghrébine et à la religion musulmane. Pour répondre à ces disqualifications et discriminations, réelles ou imaginaires, dont ils font l’objet, les jeunes ont recours à des stratégies de présentations d’eux-mêmes où ils cherchent la reconnaissance de l’Autre et où la visibilité de l’islam peut aller jusqu’à la provocation. Dans ces parts d’expérience religieuse, les acteurs se réapproprient les discours islamiques pour réaliser leurs objectifs et avancent des propos intéressants à analyser en rapport avec l’offre religieuse de départ
The Islamic offer in the French religious field is heterogeneous as it covers different discourses produced in France as well as others produced in the Islamic world accessible on cassettes, satellite channels and Internet. In certain Parisian suburbs (banlieues), these Islamic discourses are a fundamental source of valorisation for High School students (15-20 years old) who feel the burden of numerous stigmas (such as being part of the banlieue, born in a family of North African origin and Muslim). As a response to these disqualifications which may be real or imaginary, these young people follow different strategies of self presentation, trying to win the recognition of the Others. In these presentations, Islam could become so visible that it would be provoking. Going through these religious experiences, the actors make theirs the Islamic discourses to realise their objectives and, therefore, they produce their own discourses which are interesting to analyse in parallel with the original Islamic offer

Dans l'introduction, diverses voies de trafic intracellulaire et endocytose seront discutées. Je familiarise le lecteur avec des protéines inactivant les ribosomes, en mettant l'accent sur la structure, l'endocytose, et le trafic intracellulaire de la toxine bactérienne Shiga toxin (STX). STx et la ricine suivent la voie rétrograde pour exercer leur effet toxique sur les cellules. Ils sont respectivement, une menace maladie infectieuse pour la santé humaine et des outils potentiels pour le bioterrorisme pour lequel aucun antidote n’existe actuellement. D'un criblage à haut débit, Retro-1 et Retro-2 avaient déjà été identifiés comme de puissants inhibiteurs de la voie rétrograde à l'interface des endosomes précoces-TGN, et Retro-2 a été démontré pour protéger les souris contre la ricine. Parmi les facteurs de trafic analysés, seule la protéine SNARE syntaxine-5 a été ré- localisée dans les cellules traitées avec Rétro - 2
In the introduction, various endocytic and intracellular trafficking pathways will be discussed. I acquaint the reader with ribosome-inactivating proteins, with emphasis on the structure, endocytosis, and intracellular trafficking of the bacterial toxin Shiga toxin (STx). STx and ricin follow the retrograde route to exert their toxic effect on cells. They are respectively, an infectious disease threat to human health and potential tools for bioterrorism for which no antidote currently exists. From a high throughput screening, Retro-1 and Retro-2 had previously been identified as potent inhibitors of the retrograde route at the early endosomes-TGN interface, and Retro-2 was demonstrated to protect mice against ricin. Of the trafficking factors analyzed, only the SNARE protein syntaxin-5 was re-localized in Retro-2 treated cells. Yet, whether syntaxin-5 is the direct target of Retro-2 and whether its re-localization was directly responsible for retrograde transport inhibition remained to be established

Il existe plusieurs défis au développement d’une thérapie visant à stimuler l’immunité cellulaire. Dans la prévention contre certains virus et en immunothérapie du cancer, l’induction de lymphocytes T spécifiques est cependant primordiale. Dans la première partie de l’étude, nous avons porté notre attention sur la compréhension de la présentation croisée par le complexe majeur d’histocompatibilité de classe I (CMH I) médiée par des particules pseudo-virales (VLP) composées de la protéine de surface de potexvirus à laquelle nous avons ajouté un épitope de la protéine M1 du virus de l’influenza ou un épitope de la protéine gp100 du mélanome. Cette VLP se caractérise par sa capacité à stimuler, sans l’aide d’adjuvant, le système immunitaire et de présenter de façon croisée l’épitope inséré dans sa protéine de surface et ce, indépendamment de l’activité du protéasome. Nous avons, tout d’abord, comparé les propriétés de présentation antigénique croisée des VLP formées du virus de la mosaïque de la malva (MaMV) à celles des VLP du virus de la mosaïque de la papaye (PapMV). Les résultats confirment que ces propriétés sont partagées par plusieurs membres de la famille des potexvirus malgré des divergences de séquences (Hanafi et al. Vaccine 2010). De plus, nous avons procédé à des expériences pour préciser le mécanisme menant à la présentation de l’épitope inséré dans les VLP de PapMV. Les résultats nous confirment une voie vacuolaire dépendante de l’activité de la cathepsine S et de l’acidification des lysosomes pour l’apprêtement antigénique. L’induction de l’autophagie par les VLP semble également nécessaire à la présentation croisée par les VLP de PapMV. Nous avons donc établi un nouveau mécanisme de présentation croisée vacuolaire dépendant de l’autophagie (Hanafi et al. soumis Autophagy). En second lieu, en immunothérapie du cancer, il est aussi important de contrôler les mécanismes d’évasion immunitaire mis en branle par la tumeur. Nous avons spécifiquement étudié l’enzyme immunosuppressive indoleamine 2,3-dioxygénase (IDO) (revue de la littérature dans les tumeurs humaines; Hanafi et al. Clin. Can. Res 2011) et son inhibition dans les cellules tumorales. Pour ce faire, nous avons tenté d’inhiber son expression par la fludarabine, agent chimiothérapeutique précédemment étudié pour son activité inhibitrice de l’activation de STAT1 (signal transducers and activators of transcription 1). Étonnamment, nos résultats ont montré l’inhibition d’IDO dans les cellules tumorales par la fludarabine, indépendamment de l’inhibition de la phosphorylation de STAT1. Nous avons démontré que le mécanisme d’action dépendait plutôt de l’induction de la dégradation d’IDO par le protéasome (Hanafi et al. PlosOne 2014). Les travaux présentés dans cette thèse ont donc portés autant sur la compréhension d’une nouvelle plateforme de vaccination pouvant médier l’activation de lymphocytes T CD8+ cytotoxiques et sur le contrôle d’une immunosuppression établie par les cellules tumorales pour évader au système immunitaire. Ces deux grandes stratégies sont à considérer en immunothérapie du cancer et la combinaison avec d’autres thérapies déjà existantes pourra permettre une meilleure réponse clinique.
There are several challenges to the development of therapies aimed at stimulating cellular immunity. In viral infection prevention and in cancer immunotherapy, the induction of specific T lymphocytes is, however, of paramount importance. In the first part of this study, we focused our attention on understanding the major histocompatibility complex class I (MHC I) cross-presentation mediated by virus-like particles (VLP) composed of potexvirus coat protein, in which we had inserted an epitope from the M1 protein of the Influenza virus or an epitope from gp100, a tumour antigen of melanoma. This particular VLP is characterized by its ability to stimulate the immune system with no adjuvant and its cross-presentation of the inserted epitope independently of proteasome activity. First, we compared the antigenic cross-presentation properties of Malva mosaic virus (MaMV) VLPs to that of Papaya mosaic virus (PapMV) VLPs. The results confirm that cross-presentation mechanisms are shared among different members of the potexvirus family despite marked differences in their sequences (Hanafi et al. Vaccine 2010). Furthermore, we have conducted experiments to clarify the mechanism leading to the cross-presentation of the inserted epitope in PapMV VLPs. The results confirm a vacuolar pathway dependent on cathepsin S activity and on lysosomal acidification for antigen presentation. Autophagy induction by VLPs is also important to PapMV VLP antigen cross-presentation. We have herein described a new vacuolar MHC I cross-presentation pathway dependent on autophagy (Hanafi et al. in preparation). Secondly, in cancer immunotherapy, it is crucial to control immune evasion mechanisms that are initiated by the tumour. We have specifically studied the immunosuppressive enzyme indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) (human cancer literature review in Hanafi et al. Clin. Can. Res. 2011), and its inhibition in tumour cells. To this end, we inhibited its expression using fludarabine, a chemotherapeutic agent previously studied for its inhibitory effect on STAT1 (signal transducers and activators of transcription 1) phosphorylation. Surprisingly, our results demonstrate that IDO inhibition in cancer cells by fludarabine was independent of STAT1 phosphorylation. We showed that the mechanism of action was rather dependent on the induction of IDO degradation by the proteasome (Hanafi et al. PlosOne 2014). The work presented in this thesis provides a better understanding of how a new vaccine platform can mediate cytotoxic CD8+ T lymphocytes activation and the control of the problem of immunosuppression by tumour cells for the evading of the immune system. These two main strategies are to key for the consideration of cancer immunotherapy in combination with other existing therapies, as these should allow a better clinical response to cancer treatment.

Les lymphocytes B jouent un rôle central dans l’immunité humorale par leur capacité à présenter des antigènes aux lymphocytes T, à sécréter des cytokines et à se différencier en plasmocytes produisant des anticorps. Ces fonctions peuvent être induites par leur stimulation in vitro. Par leur aptitude à présenter des antigènes indépendamment de la spécificité du récepteur des lymphocytes B (BCR), les lymphocytes B peuvent être utilisés comme cellules présentatrices d’antigènes (antigen-presenting cells, APC) afin d’induire la réponse cellulaire des lymphocytes T CD8+ cytotoxiques spécifiques. L’immunité cellulaire est cruciale pour prévenir les infections contre certains virus et en immunothérapie du cancer. L’objectif général de ces travaux est d’étudier la biologie des lymphocytes B. Plus particulièrement, nous souhaitons comprendre et améliorer leur fonction de présentation d’antigène afin d’utiliser les lymphocytes B comme source alternative d’APC. Dans la première partie de ces travaux, notre attention s’est portée sur la compréhension du mécanisme de présentation croisée par le complexe majeur d’histocompatibilité de classe I (CMH-I) par lequel un épitope de la protéine gp100 du mélanome, inséré dans une nanoparticule pseudo-virale (VLP) composée de la protéine de surface du virus de la mosaïque de la papaye (PapMV), est présenté par les lymphocytes B. Cette VLP est une plateforme vaccinale capable de stimuler le système immunitaire sans l’aide d’adjuvant et facilite la présentation croisée de l’épitope inséré, de façon indépendante de l’activité du protéasome. Les résultats obtenus démontrent que l’apprêtement de l’épitope inséré dans la nanoparticule s’effectue selon une voie de présentation croisée vacuolaire qui dépend de l’activité de la cathepsine S, de l’acidification des lysosomes et requiert l’induction de l’autophagie. Ainsi, nous avons défini plus précisément le mécanisme de présentation croisée par lequel les lymphocytes B apprêtent et présentent un épitope inséré dans la VLP de PapMV. Par la suite, nous avons cherché à améliorer le protocole d’activation in vitro permettant d’amplifier et d’induire les fonctions de présentation d’antigènes des lymphocytes B, dans le but d’utiliser ces cellules pour activer les réponses cellulaires des lymphocytes T CD8+ cytotoxiques. Les stimulations in vitro des lymphocytes B par le CD40 ligand (CD40L) et l’interleukine (IL)-21 ou la combinaison de l’IL-4 et l’IL-21 au lieu de l’activation standard avec le CD40L et l’IL-4 ont été évaluées. Nos résultats ont approfondi nos connaissances de la biologie des lymphocytes B. Nous avons démontré que la stimulation des lymphocytes B avec le CD40L et l’IL-21 augmente leur prolifération, mais mène à leur différenciation en plasmocytes sécrétant des anticorps. Au contraire, la stimulation avec le CD40L et l’IL-4 induit efficacement leur fonction de présentation d’antigènes. La stimulation des lymphocytes B avec le CD40L et la combinaison de l’IL-4 et de l’IL-21 augmente leur prolifération, mène seulement faiblement à leur différenciation en cellules sécrétrices d’anticorps, mais induit efficacement leur fonction de présentation d’antigènes. Nous avons démontré pour la première fois que cette méthode permet de générer des APC puissantes capables d’induire la réponse des lymphocytes T CD8+ cytotoxiques in vitro. Nos résultats nous permettent de postuler que ces cellules pourraient être capables de mener à une réponse cellulaire in vivo. En tant qu’APC efficaces, les lymphocytes B pourraient être utilisés dans une stratégie vaccinale ou être employés comme APC afin d’améliorer les traitements d’immunothérapie du cancer par transfert adoptif de lymphocytes T. Ainsi, les travaux présentés dans cette thèse ont porté tant sur la compréhension des mécanismes de présentation croisée d’un épitope inséré dans la VLP de PapMV par les lymphocytes B, que sur l’amélioration de la méthode permettant d’induire leur fonction de présentation d’antigènes pour activer les lymphocytes T CD8+ cytotoxiques. Ces travaux de recherche fondamentale ont permis de contribuer à des avancées sur les connaissances de la biologie des lymphocytes B. Ils offrent de nouvelles pistes de réflexion quant aux utilisations biotechnologiques des lymphocytes B comme source alternative d’APC pour des applications de recherche fondamentale et clinique telles que la vaccination et les traitements d’immunothérapie du cancer.
B lymphocytes are central to humoral immunity due to their ability to present antigens to T cells, secrete cytokines and to differentiate into antibody-producing plasma cells. These functions can be induced by their in vitro stimulation. Being able to present antigens independently of the specificity of their B cell receptor (BCR), B cells can be used as antigen-presenting cells (APC) to induce specific cytotoxic CD8+ T cell cellular responses. Cellular immunity is crucial to prevent infections against viruses and in cancer immunotherapy. The main aim of this thesis is to study B cell biology. Specifically, we aim to deepen our understanding of their antigen presentation function and improve this function to use B cells as an alternative source of APC. First, we focused on deciphering the class I major histocompatibility complex (MHC-I) cross-presentation mechanism by which an epitope from gp100 melanoma protein, inserted in a virus-like particle (VLP) made of the coat protein of the papaya mosaic virus (PapMV), is presented by B cells. This VLP is a vaccine platform able to stimulate the immune system with no adjuvant and mediate a proteasome independent cross-presentation of the inserted epitope. Our results show that the inserted epitope is processed through a vacuolar pathway dependent on cathepsin S activity, lysosome acidification and requires the induction of autophagy. Thus, we provide a more detailed characterization of the mechanism used by B cells to process and cross-present an epitope inserted in PapMV VLP. Secondly, we aimed to improve the in vitro activation protocol used to expand B cells and induce their antigen presentation functions to use these cells to trigger cytotoxic CD8+ T cell cellular responses. We evaluated the in vitro stimulation of B cells with CD40 ligand (CD40L) and interleukin (IL)-21 or the combination of IL-4 and IL-21 instead of the standard activation method based on CD40L and IL-4. Our results deepen our knowledge of B cell biology. We showed that stimulating B cells with CD40L and IL-21 increases their proliferation but leads to their differentiation in antibody-producing plasma cells. In comparison, the stimulation with CD40L and IL-4 efficiently induces their antigen presentation function. The stimulation of B lymphocytes with CD40L and the combination of IL-4 and IL-21 increases their proliferation, weakly leads to their differentiation in antibody-secreting cells but is very efficient in inducing their antigen presentation function. We show for the first time that this method can generate potent APC able to induce cytotoxic CD8+ T cell responses in vitro. Our results allow us to hypothesize that these cells could be capable of triggering cellular immunity in vivo. As efficient APC, B cells could be used in a vaccination strategy or be employed as APC to improve cancer immunotherapy treatments such as adoptive cell transfer of T lymphocytes. Thus, the work presented in this thesis provides a deeper understanding of the antigen cross-presentation pathway by which B cells process and present an epitope inserted in PapMV VLP. It also reports an improved method to induce antigen presentation function of B cells to stimulate cytotoxic CD8+ T cells. This research work constitutes a leap forward in fundamental B cell research by increasing our knowledge of B cell biology. It also brings new opportunities regarding biotechnological uses of B cells as an alternative source of APC for fundamental and clinical applications such as vaccination and cancer immunotherapy treatments.