Academic literature on the topic 'Protéine HT'

A neuromedina B (NB) e o peptídeo liberador de gastrina são peptídeos bombesina-símiles encontrados em mamíferos, inclusive em seres humanos. Ambos inibem a secreção hipofisária de tireotrofina (TSH); entretanto, somente a NB tem importância fisiológica demonstrada. A NB é produzida em abundância em tireotrofos e parece inibir a secreção de TSH por via autócrina, uma vez que o bloqueio do peptídeo endógeno causa aumento na liberação do TSH, tanto in vivo quanto in vitro. A NB é positivamente regulada pelos hormônios tireóideos (HT). Os HT aumentam o conteúdo de neuromedina B e do seu RNAm em adeno-hipófises de ratos hipotireóideos, poucas horas após sua administração, o que coincide com diminuição do TSH sérico. Isto nos levou a sugerir que a NB possa ser um intermediário protéico envolvido na inibição aguda da liberação de TSH induzida pelos HT. O TRH também altera rapidamente a expressão da NB. Quinze e 30 minutos após a administração do TRH em ratos normais já há diminuição do conteúdo hipofisário de NB e dos níveis do seu RNAm. No jejum e diabetes experimental, que se caracterizam por diminuição de HT séricos com níveis inadequadamente normais ou diminuídos de TSH, ocorre aumento do conteúdo de NB e de seu RNAm. O análogo de somatostatina, octreotide, também é capaz de aumentar o conteúdo de NB. Assim, a neuromedina B é um importante inibidor local da secreção de TSH, podendo ser uma via final comum de hormônios e neuro-hormônios que determinam variações na secreção de TSH.

RACIONAL: O câncer de esôfago tem impacto relevante no metabolismo protéico do hospedeiro, mas pouco se conhece sobre as implicações no metabolismo protéico sulfurado. Deste, destaca-se a taurina, composto participante de várias funções fisiológicas importantes como a manutenção do sistema de defesa celular e possível sobrevida do paciente. OBJETIVO: Estudar as variações plasmáticas da taurina e de seus precursores em pacientes com câncer de esôfago. MÉTODO: Em estudo transversal foram triados 16 pacientes (43-73 anos) com câncer de esôfago e 20 voluntários (27-65 anos) controles sadios que preencheram os critérios clínicos e éticos da pesquisa. Para caracterização do estado geral de saúde efetuou-se avaliação antropométrica, hematimétrica (Hb, Ht, glóbulos brancos, linfócitos) e bioquímica (albumina, glicose, lipídios, aminotransferases). Adicionalmente, foram realizadas, no plasma, análises cromatográficas de taurina e seus precursores cisteína e homocisteína. Foi registrado o tempo de sobrevivência dos pacientes, a partir do diagnóstico histopatológico. RESULTADOS: Os pacientes com câncer de esôfago foram predominantemente do sexo masculino, raça branca, classe socioeconômica baixa, tipo carcinoma espinocelular de localização no terço superior, em estádio IV, sobrevida de 7,8 ± 5,5 anos, referindo perda de peso em 16,4% e apresentando hipoalbuminemia em 50%, com massa muscular e adiposa semelhante ao controle. Os pacientes apresentaram valores estatisticamente menores do que os controles para Hb, Ht, colesterol total, HDL-colesterol e cisteína e maiores de AST, ALT, taurina e homocisteína. Dentre os pacientes houve correlação positiva da taurina tanto com a contagem total de linfócitos, como com a sobrevida dos pacientes. CONCLUSÃO: Os níveis reduzidos de cisteína e elevados de homocisteína, taurina e as associações positivas da taurina com os indicadores da imunocompetência celular e da mortalidade sugerem participação efetiva da taurina na sobrevida dos pacientes e, portanto, os cuidados nutricionais específicos com a sua via geradora (cisteína, metionina e vitaminas do complexo B).

Le polyomavirus à cellules de Merkel est aujourd’hui reconnu comme l’agent étiologique du carcinome à cellules de Merkel (CCM). Le cycle viral et les mécanismes de l’oncogenèse viro-induite sont peu connus et les connaissances se basent essentiellement sur les études menées notamment sur le polyomavirus SV40. L’objectif des travaux de thèse était d’identifier les interactions entre les protéines virales et les protéines cellulaires lors de l’infection ou dans le contexte du carcinome à cellules de Merkel (CCM). Pour identifier ces interactions, nous avons réalisé des cribles double hybride en levures sur les oncogènes du MCPyV et du BKPyV. Afin valider les interactions obtenues en levures, nous avons utilisé une méthode orthogonale de validation par complémentation en cellules de mammifères reposant sur la restauration de la luciférase de Gaussia princeps. La combinaison de ses deux techniques nous a permis de valider des interactions avec des partenaires cellulaires impliqués dans la régulation du cycle cellulaire ou encore de la voie Akt-mTOR. Les précédents travaux du laboratoire, qui portaient sur l’interactome des protéines mineures de capsides VP2/VP3, avaient également permis d’identifier des interactions avec des protéines de la voie NF-kB. Nous avons alors testé les interactions entre les oncogènes et la protéine mineure de capside VP2 avec des protéines cellulaires impliquées dans cette voie. Ces travaux nous ont conduits à tester l’activation de la voie, l’expression des gènes sous le contrôle de NF-kB et la régulation de l’apoptose. Les résultats obtenus montrent une action de la protéine VP2 sur l’activation de la voie NF-kB et une induction de l’apoptose
The Merkel cell polyomavirus is now recognized as the etiologic agent of Merkel cell carcinoma (MCC). The viral cycle and viro-induced oncogenesis mechanisms are not fully understood and the knowledge is mainly based on the studies carried out particularly on the SV40 polyomavirus. The aim of our work is to identify interactions between viral proteins and cellular proteins during productive infection or in MCC context. To identify these interactions, we performed yeast two hybrid screens on MCPyV and BKPyV oncogenes, as control. To validate the interactions obtained in yeasts, we used an orthogonal method of validation by complementation in mammalian cells based on the restoration of Gaussia princeps luciferase. The combination of these two orthogonal techniques allowed us to validate interactions with cellular partners involved in cell cycle regulation or Akt-mTOR pathway. Previous lab work on VP2/VP3 minor capsid proteins allowed the identification of interactions with NF-kB pathway involved proteins. We examined the interactions between oncogenes, VP2, with the cellular proteins involved in this pathway. This work led us to evaluate pathway activation, genes expression under the control of NF-kB and apoptosis regulation. These results evidenced an action of the VP2 protein on the activation of NF-kB pathway and an induction of apoptosis

Nous avons étudié 2 protéines impliquées dans l'absorption iléale de la vitamine B12 ou cobalamine : le récepteur du complexe facteur intrinsèque-cobalamine et la transcobalamine. Le récepteur du complexe facteur intrinsèque-cobalamine est exprimé dès la dixième semaine du développement fœtal chez l'homme. Le récepteur iléal porcin a été purifié par chromatographie d'affinité sur un support sépharose-facteur intrinsèque. Il se compose de 4 polypeptides dont trois sont glycosyles. La liaison entre le récepteur et son ligand peut être inhibé en présence d'agglutinine de germe de blé. L'inhibition est due à la fixation de cette lectine à la sous-unité alpha du récepteur qui contient le site de fixation du complexe facteur intrinsèque-cobalamine. Les résidus galactosyls de la copule glucidique du facteur sont importants dans la formation de la liaison entre le récepteur et son ligand. Enfin, nous avons montré l'existence de la synthèse et de la sécrétion de transcobalamine par les cellules HT 29. Ces cellules ont été stabilisées à partir d'un carcinome colique et représentent un modèle entérocytaire in vitro

La polarisation des cellules épithéliales dépend de mécanismes finement régulés pour le ciblage des protéines et lipides vers les différents domaines membranaires. Les travaux antérieurs de l'équipe ont montré que le traitement des cellules polarisées de la lignée HT-29 par l'inhibiteur de glycosylation GalNAca-O-benzyl provoquait une inhibition de la sécrétion des mucines, et une altération de la distribution des glycoprotéines de la bordure en brosse telle que la glycoprotéine transmembranaire dipeptidylpeptidase-IV (DPP-IV), celles-ci s'accumulant à l'intérieur de la cellule. En revanche, cet inhibiteur épargnait les glycoprotéines de la membrane basolatérale. Cette observation laissait entendre un rôle de la glycosylation au niveau du contrôle du trafic intracellulaire vers le pôle apical, et l'effet du GalNAca-O-benzyl pouvait se situer soit au niveau de la voie d'exocytose, soit au niveau de la voie de recyclage. Pour répondre à cette question, nous avons étudié la distribution de protéines de la famille des SNAREs, et la sécrétion d'une forme soluble de la dipeptidylpeptidase-IV murine, amputée de son domaine transmembranaire donc non internalisée, en utilisant le modèle des cellules HT-29 5M12 de phénotype entérocytaire. Les résultats ont montré que le GalNAca-O-benzyl bloquait la voie antérograde vers la surface apicale. Au niveau biochimique, une altération des microdomaines membranaires de type radeaux lipidiques (rafts) a été mise en évidence. L'hypothèse d'un mécanisme d'adressage à la membrane apicale basé sur une lectine a alors été proposée. Par une approche protéomique, nous avons identifié une lectine dans les microdomaines membranaires des cellules HT-29 5M12, la galectine-4, et montré la quasi-disparition de cette lectine dans les rafts des cellules traitées par le GalNAca-O-benzyl. L'étude de la distribution de cette lectine a montré sa présence au niveau du TGN, des vésicules post-golgiennes, et de la membrane plasmique apicale. Nous avons démontré que la galectine-4 était associée aux rafts via une interaction avec des glycosphingolipides sulfatés (sulfatides) substitués par des longues chaînes d'acides gras insaturés. Le rôle fonctionnel de la galectine-4 dans l'adressage apical a été ensuite étudié avec l'utilisation de la technique de l'ARN interférence. L'inhibition de l'expression de la galectine-4 dans les cellules HT-29 5M12 a entraîné la perte de la localisation apicale des marqueurs de la bordure en brosse avec leur accumulation à l'intérieur de la cellule. En conclusion, nos résultats nous ont permis de montrer un rôle fonctionnel de la galectine-4 associée aux sulfatides dans l'adressage apical via les rafts
Epithelial cell polarity depends on highly regulated mechanisms for targeting proteins and lipids to the apical or basolateral plasma membrane. We previously reported that the inhibitor of glycosylation GalNAca-O-benzyl inhibited mucin secretion and altered the localization of brush border glycoproteins such as the transmembrane dipeptidylpeptidase-IV (DPP-IV) which accumulated intracellularly. In contrast, no alteration was observed for basolateral glycoproteins. These observations led us to hypothesize for a role of glycosylation in intracellular trafficking, and GalNAca-O-benzyl could affect the exocytosis or the recycling pathway of apical proteins. To answer to this question, we studied the cellular distribution of SNARE proteins and the secretion of a murine soluble form of DPP-IV, which does not follow the endocytosis / recycling pathway, using HT-29 5M12 cells of enterocytic phenotype. Results showed that GalNAca-O-benzyl induced a block on the anterograde biosynthetic pathway towards the apical membrane. Furthermore, GalNAca-O-benzyl altered the composition of lipid-rich microdomains. Thus, the hypothesis of a lectin-based mechanism was raised. By proteomics analysis, we have identified galectin-4 as a major component of raft microdomains. This lectin was no more raft-associated after GalNAca-O-benzyl treatment. In HT-29 5M12 cells, galectin-4 was localized in TGN, post-Golgi carrier vesicles, and at the apical membrane. The functional role of galectin-4 in polarized trafficking in HT-29 5M12 cells was studied by using a retrovirus-mediated RNA interference (RNAi). In galectin-4-depleted HT-29 5M12 cells apical membrane markers accumulated intracellularly. In contrast, basolateral membrane markers were not affected. Moreover, galectin-4 depletion altered the DRM association characteristics of apical proteins. Sulfatides with long chain-hydroxylated fatty acids, which were also enriched in DRMs, were identified as high-affinity ligands for galectin-4. Taken together, our data propose that interaction between galectin-4 and sulfatides plays a functional role in the organization of lipid rafts for apical delivery

Le rôle de la lactotransferrine (LTF) et de la sérotransferrine (STF) humaines dans l'absorption intestinale du fer reste mal connu. Les cellules HT 29, provenant d'un adénocarcinome colique humain, qui développent une différenciation de type entérocytaire, ont permis d'étudier d'une part, la fixation de la STF et de la LTF et, d'autre part, l'endocytose de la LTF. Les études de la fixation de la STF ont montré que les cellules indifférenciées possédaient un récepteur membranaire de la STF alors que les cellules différenciées n'en possèdent que sur les membranes baso-latérales. L'étude de la fixation de la LTF a révélé que le récepteur de la LTF était présent sur la bordure en brosse des HT 29 différenciées et absents des HT 29 indifférenciées. L'évolution du nombre de récepteurs lors de la différenciation des cellules montre que le récepteur de la LTF est un marqueur précoce de la différenciation entérocytaire. L'internalisation de la LTF par endocytose en phase adsorptive a été démontrée. La LTF endocytée est dirigée vers les lysosomes où elle est dégradée. Les produits de dégradation sont externalisés. L'ensemble des résultats de fixation et d'internalisation est en faveur du rôle joué par la LTF dans l'absorption intestinale du fer.

Serotonin 5-HT4 receptors (5-HT4R) are members of G protein-coupled receptors (GPCRs). Given the recent recognition that many GPCRs can dimerize, the present study was undertaken to determine whether 5-HT4R can form dimers and what are the molecular determinants involved in the dimerization process. Using co-immunoprecipitation and bioluminescence resonance energy transfer, we showed that the human 5-HT4R isoforms can form constitutive homodimers and heterodimers. In addition, we showed heterodimer formation between the 5-HT4(d)R and the beta2-adrenergic receptor. The 5-HT4(d)R dimer is sensible to dithiothreitol (reducing agent). Mutation of two cysteines in the 3 and 4 transmembrane domains, inhibits 5-HT4 receptor dimerization and brings about reticulum endoplasmic retention. Specific 5-HT4 receptor bivalent ligand do not have special affinity or efficacy for the 5-HT4 receptor but are able to stabilize receptor dimerization
Les récepteurs 5-HT4 de la sérotonine sont des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG). Les RCPGs peuvent se dimériser, ce qui influence leurs propriétés pharmacologiques. Les récepteurs 5-HT4 étant impliqués dans d'importants processus physiologiques, nous avons étudié leur processus de dimérisation. Nous avons montré par co-immunoprécipitation et Bioluminescence Resonnance Energy Transfert, que les isoformes 5-HT4 s'homodimérisent et s'hétérodimérisent constitutivement, entre elles et avec le récepteur β2-adrénergique. Le dimère de récepteur 5-HT4 est sensible au dithiothréitol (agent réducteur de ponts disulfures). La mutation de deux cystéines localisées dans les domaines transmembranaires 3 et 4, inhibe la dimérisation du récepteur 5-HT4 et entraîne sa rétention dans le réticulum endoplasmique. Des ligands bivalents spécifiques du récepteur 5-HT4 ne présentent pas d'affinité ou d'efficacité particulière pour le récepteur 5-HT4 mais peuvent stabiliser les dimères de récepteurs

Le récepteur sérotoninergique 5-HT4 appartient à la famille des RCPG et est exprimé dans de nombreux tissus, dans lesquels il contrôle diverses fonctions physiologiques. Un dysfonctionnement du récepteur 5-HT4 pourrait intervenir dans plusieurs pathologies pour lesquelles aucune thérapie n'est efficace. Afin de mieux comprendre le mode de fixation des ligands sur le récepteur 5-HT4, nous avons entrepris une étude structurale du récepteur. Par homologie avec la structure de la rhodopsine bovine, nous avons modélisé le récepteur 5-HT4 dans le vide. Par mutagénèse dirigée, nous avons analysé les interactions entre le récepteur et ses ligands, en particulier dans une poche hydrophobe du site de liaison. Nous avons ensuite placé le récepteur dans un modèle de bicouche lipidique et fait une dynamique moléculaire de plusieurs ns. Enfin, nous avons appliqué les méthodes de perturbations d'énergie libre sur notre modèle, afin de relier les constantes d'affinité à la différence d'énergie libre.

Notre laboratoire a développé depuis de nombreuses années une chimiothèque sérotoninergique (programme ATBI). Celle-ci contient plus de 1500 composés testés vis-à-vis des récepteurs découverts le plus récemment : 5-HT4R, 5-HT5R, 5-HT6R and 5-HT7R. Nous rapportons ici plusieurs travaux réalisés dans le contexte de l’analyse des échantillons ATBI. Après une brève introduction, nous développons les aspects les plus importants du système sérotoninergique et plus spécialement des récepteurs 5-HT6R (chapitre II). Dans le chapitre III, nous traitons de l’évaluation et la détermination de protocoles de classification (clustering) optimaux. Nous n’avons pas réussi à obtenir une classification correcte pour deux de nos échantillons (5-HT6 et 5-HT7). Afin d’en comprendre la raison, nous avons développé une nouvelle méthode d’extraction de pharmacophore topologique 2D en utilisant les motifs émergents (chapitre IV) et nous avons construit des modèles par homologie de séquence afin d’étudier les modes de liaison des ligands 5-HT6 et 5-HT7 (chapitre V). Enfin, nous montrons comment un acide aminé (F7. 38) peut expliquer la sélectivité interespèces (humain/rat) de ligands 5-HT7Rs en se basant sur la modélisation par homologie de séquence et une étude de mutagénèse dirigée (chapitre V)
Our laboratory has developed from many years a serotoninergic chemolibrary (ATBI program). This chemolibrary contains more than 1500 compounds tested toward the most recently discovered receptors: 5-HT4R, 5-HT5R, 5-HT6R and 5-HT7R. We report here several works carried out in the context of ATBI datasets analysis. After a brief introduction we develop the most important biological aspect of serotoninergic system (chapter II). In chapter III, we deal with evaluation and determination of optimal clustering protocols in relation with our internal chemolibrary. Because a good clustering classification for two of our ATBI datasets is really an issue (5-HT6 and 5-HT7) and in order to understand the reasons, we have developed a new method to extract 2D topological pharmacophores using emerging patterns (chapter IV) and built homology models to study binding mode of 5-HT6 ligands (chapter V). Finally we show how a single amino acid (F7. 38) can explain interspecies (human/rat) selectivity ligands of 5-HT7Rs using homology modelling and site-directed mutagenesis (chapter V)

Il y a une quinzaine d'annees, l'utilisation des baculovirus, virus infeodes aux arthropodes, ouvrait de nouveaux horizons en lutte biologique contre de nombreux insectes ravageurs. Depuis, la mise en place de culture de cellules d'insectes ainsi que l'etude de son genome ont fait de lui un candidat serieux en tant que vecteur d'expression. Desormais, le systeme baculovirus/cellules d'insectes est couramment employe pour la production de proteines recombinantes. Cet interet massif pour un tel systeme- au detriment des systemes deja connus employant des bacteries, des levures ou des cellules de mammiferes- est lie aux nombreux avantages qu'il propose : production de proteines recombinantes en grande quantite, modifications post-traductionelles correctes, production dans des milieux depourvus de serum de veau fetal et surtout un virus non pathogene pour l'homme. Toutefois, la majorite des proteines recombinantes synthetisees sont d'origine humaine, ou plus generalement issues de mammiferes. De plus, le baculovirus est depuis peu envisage comme vecteur de gene pour la therapie genique. En appliquant des conditions de cultures de cellules de mammiferes aux cellules d'insectes, nous pourrions ainsi ameliorer la qualite, et peut-etre la quantite des proteines synthetisees. Pour cela, nous avons donc tente d'obtenir une lignee de cellules d'insectes capable de se maintenir a 37c, ainsi qu'un baculovirus pouvant se repliquer dans ce nouvel environnement. Nous tenterons egalement de montrer les avantages d'un tel systeme ainsi que ses defauts. Le systeme baculovirus/cellules d'insectes classique pourrait etre ameliore en eliminant le probleme majeur qui est la lyse des cellules en fin de cycle viral. Nous utilisons pour cela un systeme dit stable utilisant certaines proprietes de genes provenant du virus.

Nos études ont permis de mettre en évidence une réduction de la sensibilité des autorécepteurs et hétérorécepteurs 5-HT 1B dans la substance noire, de rats soumis à deux types d'entraînements (modéré et intensif) à la course sur tapis roulant. Effet probablement lié à une diminution de leur activité fonctionnelle. Cette désensibilisation des autorécepteurs 5-HT 1B pendant un entraînement physique prolongé peut être à l'origine d'une augmentation de la libération extracellulaire de sérotonine. Cette augmentation été montrée par notre étude complémentaire utilisant la technique de microdialyse intracérébrale sur animal vigile au cours d'un exercice intense et aigu. Divers mécanismes ont été avancés afin d'expliquer cette désensibilisation. La première hypothèse expliquant la désensibilisation des récepteurs 5-HTla fut le rôle joué par les glucocorticoïdes. Mais les résultats infirment en partie cette hypothèse car la surrénalectomie entraîne une diminution de la sensibilité des récepteurs 5-HT1B. En effet, les glucocorticoïdes semblent au contraire prévenir d'une désensibilisation lors d'un exercice physique. Le mécanisme exact n'est pas encore clarifié et peut avoir plusieurs origines. La seconde hypothèse repose sur l'intervention possible de la 5-HT-moduline, tétrapeptide endogène (leu-ser-ala-ser) qui interagit spécifiquement avec les récepteurs 5-HT1B comme antagoniste non-compétitif. Ce peptide induit une désensibilisation de ces récepteurs. Nos résultats montrent une augmentation significative du contenu tissul'aire hippocampique de 5-HT-moduline après un entraînement physique intensif. L'augmentation concomitante avec la désensibilisation quasi totale des récepteurs 5-HT 1B, favorise bien l'implication d'une régulation par ce peptide. Enfin, la désensibilisation des récepteurs 5-HT1B peut faire également intervenir des mécanismes de régulation à long terme comme la régulation de l'expression génique. Nos résultats montrent que l'exercice physique induit des différences dans l'expression des ARNm du récepteur 5-HT1B selon les régions cérébrales. Ainsi le fait qu'aucune modification des quantités d'ARNm n'étant observée dans le striatum après un entraînement physique, suggère bien l'existence d'un mécanisme post­ transcriptionnel. Parmi les hypothèses les plus vraisemblables, le rôle de la 5-HT-moduline dans cette désensibilisation est donc la plus probable. La pharmacologie de la 5-HT-moduline, via la modulation des récepteurs 5-HT 1B, est une nouvelle approche thérapeutique des désordres liés à la dépression, l'anxiété, le stress et les phénomènes de fatigue centrale et de surentraînement physique, chez l’homme
Our studies have evidenced a decrease in auto and heterorcceptors 5-HT 1B sensitivity in substantia nigra of rat submitted to two different treadmill training (i. E. , moderate and intensive). An effect probably linked to a decrease in their functional activity. This 5-HT1B autoreceptors desensitization during a prolonged physical training could probably induce an increase in the forebrain 5-HT release. Our study, using in vivo intracerebral microdialysis method, has shown a signiticant increase in hippocampal and cortical 5-HT release during an acute intensive exercise. Different mechanisms have been proposed in order to justly the observed 5-HT 1B reccptors desensitization. The first hypothesis lied on the potential role played by glucocorticoids. However, as adrenalectomization in rats induced a decrease in 5-HT 1B receptors sensitivity, we could suggest that our results discarded, in part, the glucocorticoids hypothesis. Ln contrary, glucocorticoids seem to prevent the exercise-induced 5-HT1B receptors desensitization. For instance, the precise mechanism involved in the exercise-induced 5-HT1B receptors desensitization is not enlightened and it could arise from several origins. The second hypothesis lied on the possible role of 5-HT-moduline, an endogen tetrapeptide (leu-ser-ala-leu), which specifically interact with 5-HT1B receptors as a non-competitive antagonist. This peptide induces a 5-HT 1B receptors desensitization. Our results shown a significant increase in hippocampal 5-HT-moduline tissue-content after an intensive training, in rats. This increase combined with a significant 5-HT1B receptors desensitization, promote a possible regulation by 5-HT-moduline. Moreover a long-term mechanism of regulation such as genetic expression, could be involved in the 5-HT1B receptors desensitization. Our results shown that physical exercise induces site-dependent differences in 5-HT1B m-RNA expression, in brain. As there is any diiTerence in 5-HT1B m-RNa expression in striatum, we could suggest that a post-transcriptional mechanism exist. Thus, 5-HT-moduline is probably a major component in exercise-elicited 5-HT1B receptors desensitization. 5-HT-moduline pharmacology, via a 5-HT1B receptors modulation, could play an interesting role in human therapeutic for mental disorders such as depression, anxiety, stress and the central fatigue phenomena linked to physical overtraining