Academic literature on the topic 'Protéine S – Dissertations universitaires comme sujet'

Trois cofacteurs interviennent dans le système anticoagulant naturel de la protéine C (PC) : la thrombomoduline (TM), le récepteur des cellules endothéliales à la PC (EPCR) et la protéine S (PS). Les deux premiers jouent un rôle dans la première étape du système, en permettant au zymogène qu'est la PC d'être activé en PC activée (PCa), tandis que la PS exerce son rôle de cofacteur en augmentant la vitesse de protéolyse des facteurs Va et VIIIa de la coagulation par la PCa, protéolyse qui limite la génération de thrombine. Si l'effet cofacteur de la TM est clair (elle accélère la réaction d'activation de la PC en PCa d'un facteur 20000), ceux de la PS et de l'EPCR sont en revanche atypiques, puisque les facteurs d'accélération qu'ils confèrent aux réactions enzymatiques ne sont que de 5 et 20, respectivement. Pourtant, l'importance physiologique de la PS est indéniable au regard de la sévérité de l'expression clinique du déficit homozygote en cette protéine. C'est cette discordance entre la sévérité de l'expression clinique du déficit et ce qu'on connaît des fonctions de la PS qui a motivé la première partie de notre étude. Nous nous sommes focalisée sur un domaine de la PS dont les fonctions étaient peu connues et qui en constitue une particularité structurale puisqu'il n'est présent dans aucune autre protéine de la coagulation. Ce domaine, homologue à la Sex hormone binding globulin (domaine SHBG), a été exprimé en système eucaryote, seul (rSHBG) ou avec son domaine adjacent dans la protéine naturelle (rEGF4-SHBG). Les deux modules recombinants ont été purifiés, caractérisés biochimiquement ; nous avons montré qu'ils adoptent une conformation identique à celle de la PS native, possèdent leur propre autonomie de repliement, que le domaine SHBG est seul responsable de la liaison de la PS à la C4b-binding protein, et contient un site de liaison au Ca2+, ce qui n'avait jamais été démontré de façon directe auparavant. Par contre, ce domaine est dépourvu en lui-même d'activité cofacteur pour la PCa, mais contribuerait à l'activité de la PS en maintenant ses autres domaines dans une conformation permettant une interaction optimale avec la PCa. Dans la seconde partie de notre travail, nous nous sommes attachée à rechercher des anomalies génétiques de l'EPCR. La découverte de telles anomalies associées à un risque de thrombose serait un argument fort en faveur de l'importance physiologique de l'EPCR dans la régulation de la coagulation humaine. Ce risque de thrombose peut être lié soit à une diminution de l'expression de l'EPCR membranaire ou à l'inverse, à une augmentation de la forme plasmatique soluble de ce récepteur (EPCRs) qui inhibe la PC et la PCa. Des taux élevés d'EPCRs ont été décrits chez environ 20% des sujets de la population générale sans qu'origine et conséquences cliniques n'aient été identifiées. En dosant l'EPCRs chez 100 sujets sains, nous avons retrouvé cette proportion de sujets ayant un taux élevé d'ERCRs et constaté une stabilité temporelle de ces taux, ce qui était en faveur d'un contrôle génétique. .
Three cofactors participate to protein C (PC) anticoagulant pathway, the thrombomodulin (TM), the endothelial protein C receptor (EPCR) and the protein S (PS). TM and EPCR are involved in the first step of the pathway by accelerating the PC activation step, whereas PS increases factors Va and VIIIa inactivation by activated PC (aPC), thereby inhibits further thrombin generation. If TM plays an unequivocal role by increasing by 20000 fold the PC activation into aPC, the role of PS and EPCR are more elusive since enzymatic reactions they favorize are increased by 20 or 5 fold, respectively. Nevertheless, the severe thrombotic disease observed in patients with homozygous protein S deficiency highlights the key role of PS in maintaining blood fluidity. Then, the mechanism by which PS inhibits coagulation in vitro remained to be elucidated, and this motivated the first part of our study. We focussed our work on the PS C-terminal domain, which is a sex hormone binding globulin (SHBG)-like domain which replaces the serine protease domain found in other vitamin K dependent plasma proteins, the functions of which are unclear. We expressed the PS SHBG-like domain alone or together with its adjacent domain EGF4. These both recombinant modules were purified and their biochemical features revealed that they adopted the conformation of native PS, indicating that PS SHBG-like region is an independent folding unit. We also obtained the first evidence that the SHBG-like domain alone is sufficient to support the interaction with C4b-binding protein, and contains one Calcium binding site. However, neither recombinant module exhibited aPC cofactor activity in a clotting assay, suggesting that the PS SHBG-like domain must be part of the intact molecule for it to contribute to aPC activity, possibly by constraining the different domains in a conformation that permits optimal interaction with aPC. .

En phase stationnaire de croissance ou en réponse à certains stress, les Enterobactéries s'adaptent, notamment par la mise en place du régulon sigma S. La sous unité as (codé par le gène rpoS) de l'ARM polymérase est un facteur a dont l'expression et l'activité sont extrêmement régulées et qui joue un rôle majeur dans la résistance généralisée au stress, la formation de biofilms et la virulence de Salmonella enterica sérovar Typhimurium. Nous avons utilisé la technologie ProteinChip SELDI-TOF afin de caractériser le protéome de mutants de Salmonella, en particulier un mutant du gène yncC. Ce gène, de fonction inconnue, fait partie du régulon sigma S et code un régulateur potentiel de la famille GntR/FadR. Nous avons ainsi pu identifier des cibles potentielles de YncC, que nous avons validées par des études in vivo et in vitro. Ces cibles sont organisées en operon, yclGFEkatN, qui appartient au régulon sigma S et code pour une catalase et des protéines de fonctions inconnues. Cet operon est réprimé par H-NS, une protéine du nucléoïde connue pour éteindre l'expression de nombreux gènes, en particulier ceux acquis par transfert horizontaux. L'opéron est en partie présent chez Escherichia coli K-12 où il est également régulé par sigma S , YncC et H-NS. Cependant, les mécanismes de régulation de son expression dans les 2 espèces sont différents. L'acquisition de cet operon résulte très probablement d'un transfert horizontal mais cet événement semble plus récent dans le cas de E. Coli K-12 que dans le cas de Salmonella. L'acquisition ancestrale des gènes yclGFEkatN chez Salmonella a probablement permis d'intégrer cet operon, et de moduler la régulation de son expression, au sein du régulon sigma S
The a regulon is set up to allow Enterobacteria to adapt to stationary phase of growth or in response to some stresses. The RNA polymerase subunit sigma S (encoded by rpoS) is a a factor whose expression and activity are tightly regulated and it plays a major role in general stress resistance, biofilm formation and virulence of Salmonella enterica serovar Typhimurium. Our study deals with the functional characterization of the as regulon. We used the ProteinChip SELDI- TOF technology in order to characterize the proteome of Salmonella mutants, including the yncC mutant. The sigma S- dependent gene yncC is of unkown function and encodes a putative regulatory protein that belongs to the GntR/FadR family of transcriptional regulators. Potential targets for YncC regulation were identified and subsequently validated by in vivo and in vitro experiments. These belong to the sigma S-dependent operon yclGFEkatN, which encodes a catalase and proteins of unknown function. The yclGFEkatN operon is repressed by H-NS, an histone-like protein known to repress the expression of numerous genes, especially horizontally acquired genes. The operon is partially present in Escherichia coli K-12 where it is also regulated by sigma S, YncC and H-NS. However, levels of expression and mechanisms of regulation the operon are different in the two species. This operon has probably been acquired by horizontal gene transfer in both species, but more recently in E. Coli K-12 than in Salmonella. Presumably, the ancestral acquisition of the yciGFEkatN genes in Salmonella has allowed integration of this operon, and tight regulation of its expression, within the sigma S regulatory network

Nous étudions la fonction de mTOR dans la prolifération physiologique, régénératrice et tumorale en utilisant plusieurs approches qui vont de la mutagenèse dirigée chez la souris aux traitements pharmacologiques. Nous avons pu mettre en évidence une surprenante spécificité fonctionnelle des substrats de mTOR, Akt et S6K, qui interviennent dans des processus distincts lors de la régénération hépatique et la progression tumorale. Nous avons montré que le complexe mTORCl et plus précisément la S6K1 ont un rôle prépodérant dans la régénération hépatique. Nos résultats indiquent un rôle de la cycline Dl. Nous avons également montré que le complexe mTORCZ et plus précisément Akt2 ont un rôle dans la carcinogenèse. Ces avancées dans la connaissance des cibles de mTOR qui régulent le cycle cellulaire et la progression tumorale ont des implications importantes dans la compréhension de la croissance et du métabolisme cellulaire
We are studying the function of mTOR in physiological, regenerative tumoral proliferation using several approaches ranging from site-directed mutagenesis in mice to pharmacological treatments. We were able to demonstrate a surprising functional specificity of substrates of mTOR, S6K and Akt, which are involved in distinct processes during liver regeneration and tumoral progression. We have shown that the mTORCl complex and more precisely the S6K1 have a role in liver regeneration. Our results indicate a role of cyclin Dl. We also showed that mTORC2 complex and more precisely Akt2 have a role in carcinogenesis. These advances in knowledge of targets of mTOR that regulate the cell cycle and tumoral progression have important implications in understanding the growth and cellular metabolism

L'Interleukine-4 est une cytokine pléiotropique qui joue de nombreux rôles biologiques après fixation sur son récepteur. L'activation des tyrosines kinases JAK a un rôle clef dans l'activation des voies de signalisation, incluant le recrutement et la tyrosine phosphorylation du facteur de transcription STAT6. Les protéines STATs peuvent dimériser, transloquer dans le noyau et réguler de nombreux gènes en réponse à l'IL-4. Afin de contre réguler l'effet des cytokines, il existe des régulateurs négatifs. Parmi ces régulateurs, les protéines SOCS ont été décrites pour réguler négativement la voie JAK-STAT. Notre travail a consisté à caractériser le promoteur du gène Socs-1 et à étudier les régions promotrices ainsi que les voies de signalisation mises en jeu après une stimulation des cellules HaCaT (kératinocytes) par l'IL-4. Nous avons également étudié la régulation du promoteur du gène Socs-1 après une stimulation des kératinocytes par l'Interféron-γ qui est connu pour être un très bon inducteur du gène Socs-1. Nous avons mis en évidence l'implication du facteur de transcription IRF-1 dans la régulation de l'expression du gène codant pour la protéine SOCS-1 dans des kératinocytes stimulés par l'IFN-γ
Interleukin (IL)-4 is a pleotropic cytokine, which displays a variety of biological responses by binding to high affinity receptor complexes. The Jak-STAT pathway has been shown to be activated by IL-4. Activation of JAK, is pivotal for the activation of downstream signaling events including the recruitment and rapid tyrosine phosphorylation of STAT6. STAT6 can dimerize and translocate into the nucleus, where it regulates IL-4 target genes. Responsiveness to cytokines depends upon a balance of positive and negative regulators. Among these regulators SOCS proteins have been described to negatively regulate the JAK/STAT pathway. IL-4 upregulates Socs-1 in the keratinocyte HaCaT cell line, we investigated which sequence of the 5' Socs-1 gene are responsive to IL-4. Collectively, our data demonstrate the involvement of STAT6 and Ets, via a composite DNA element, in IL-4 regulation of Socs-1 gene expression in keratinocytes. We also studied the regulation of the promoter of the Socs-1 gene after stimulation by the IFN-g which is known to be very good inductive Socs-1 gene. We therefore examined the IFN-g activated transcription factors implicated in regulation of Socs-1 gene

La protéine de matrice (M) du virus de la stomatite vésiculaire (VSV) est une petite protéine multifonctionnelle de 26,6 kDa. La protéine M joue un rôle majeur dans les processus d'assemblage et de bourgeonnement du VSV. Elle est aussi responsable de l'extinction des synthèses cellulaires, elle déstabilise le réseau de microtubule et induit l'apoptose par voie mitochondriale. Pour remplir l'ensemble de ses fonctions, la protéine M recrute des partenaires cellulaires. Certains de ces partenaires étaient déjà connus. Parmi ceux-ci, nous nous sommes intéressés aux protéines Nedd4, une ubiquitine ligase, et TSG101, un composant du complexe ESCRT I. Lors d'un crible double hybride effectué au laboratoire, nous avons identifié trois nouveaux partenaires de la protéine M : la dynamine, une GTPase impliquée dans le processus d'endocytose, LMP2, une sous-unité catalytique de l'immunoprotéasome et l'a-caténine, une protéine appartenant aux complexes formant les jonctions intercellulaires. Dans un premier temps, nous avons étudié les rôles des protéines Nedd4, TSG101 et dynamine dans les étapes tardives du cycle viral : l'assemblage et le bourgeonnement. Nous avons caractérisé des virus recombinants mutants dont la protéine de matrice n'interagit plus avec un ou deux de ces partenaires. Pour ce faire, nous avons mis au point une nouvelle technique, plus précise, de titration du virus par fluorescence. Cette technique a été utilisée pour établir les cinétiques de production des différents virus recombinants dans divers types cellulaires. L'ensemble de nos résultats suggère que TSG101 a un rôle dans le bourgeonnement que l'on ne met en évidence que dans un contexte de double mutation. Nos observations de microscopie électronique nous ont indiqué que la dynamine intervient en amont de la protéine Nedd4. Enfin, les virions dont la protéine de matrice n'interagit plus avec Nedd4 ont une morphologie aberrante et leur protéine de matrice n'est plus ubiquitinylée. Nous nous sommes ensuite intéressés aux nouveaux partenaires de la protéine de matrice : les protéines LMP2 et l'a-caténine. Nous avions exprimé ces protéines en fusion avec la GST et nous avons montré que ces constructions étaient bien capables d'interagir avec la protéine de matrice, confirmant ainsi les interactions mise en évidence par double hybride. Enfin, nous avons précisé les résidus et les domaines impliqués dans les associations M-LMP2 et M-a-caténine. Des expériences préliminaires nous ont aussi permis de voir que la protéine de matrice et l'a-caténine colocalisent au niveau de la membrane des cellules. L'ensemble de ces résultats contribue à une meilleure compréhension de l'interactome complexe de la protéine de matrice et au rôle des diverses protéines le constituant
The matrix protein (M) of vesicular stomatitis virus (VSV) is a multifunctional 26,6 kDa small protein. M protein plays a key role in assembly and budding processes and is responsible for cellular synthesis shut down, microtubules destabilization and apoptosis. For these reasons, M protein recruits several cellular partners. Among cellular proteins identified so far, we are interested in Nedd4, E3 unbiquitin ligase and TSG101, a component of ESCRT I complex. 2-Yeast Hybrid technique allowed us to identify three news partners for M protein: Dynamin, protein involved in endocytic pathway, LMP2, catalytic subunit of immunoproteasome and Catenin a, that belongs to intercellular junctions. First, we studied the implication of Nedd4, TSG101 and dynamin during late stages of the viral cycle: assembly and budding. We characterized recombinants mutant virus containing matrix protein that does not interact anymore with one or two partners. For that, we developed a new technique to titrate with higher accuracy viral supernatants. We applied this technique for growth curves in different cell type. Our results" suggest that TSG101 plays a role during budding that highlighted with double mutant virus. EM observations indicate that dynamin acts upstream Nedd4. We also showed that some viral particles produced from an infection using virus containing M protein that does not interact with Nedd4 display an aberrant morphology and their M protein is no longer ubiquitinated. After, we started the study of new partners of M protein: LMP2 and Catenin a, previously identified. We expressed these proteins in fusion with GST and we have shown that these buildings were well able to interact with the M, confirming both interactions. Finally we could define residues and domains involved in M-LMP2 and M-Catenin a interactions. Preliminary experiments show that M protein and Catenin a colocalize at level of epithelial cells membrane. An results contribute to a better understanding of the interactome complex matrix protein

La protéine TAT1/SLC26A8 a été isolée dans le laboratoire comme une cible des GTPases Rho, exclusivement exprimée dans le testicule humain adulte. Elle appartient à la famille des protéines de transport SLC26 et l'équipe a précédemment montré sa localisation à la membrane plasmique des cellules germinales mâles aux stades spermatocyte et spermatide, ainsi que son activité vis-à-vis des anions sulfate et chlorure. Durant ma thèse, j'ai caractérisé un modèle d'inactivation du gène Tatl chez la souris (Knock ouf) et mis en évidence l'importance de la protéine Tatl pour la différenciation et la mobilité des spermatozoïdes. Ainsi, les souris mâles Tat1-/- sont stériles suite à une asthénozoospermie sévère et des défauts structuraux des spermatozoïdes. Les spermatozoïdes Tat1-/- présentent une atrophie de l'annulus, structure en forme d'anneau située à la jonction des pièces intermédiaire (PI) et principale (PP) du flagelle, une disjonction PI/PP, une plicature du flagelle et une cassure de l'axonème; par ailleurs les spermatozoïdes TaT1-/- présentent une absence d'hyperphosphorylation en conditions capacitantes. En accord avec ce phénotype, nous avons montré que chez l'homme comme chez la souris, la protéine TAT1 est également exprimée dans le spermatozoïde mature où elle se localise à l'annulus. De manière à tester l'implication de la protéine TAT1 dans les infertilités masculines humaines, nous avons réalisé des immunodétections de la protéine TAT1 sur des frottis de spermatozoïdes de sujets asthénozoospermiques. Le criblage d'une cohorte de 75 sujets a permis d'isoler un patient présentant une asthénozoospermie modérée associée à une absence de marquage TAXI à l'annulus. Par microscopie électronique à transmission, nous avons observé l'absence complète de l'annulus et une disjonction PI/PP. Ces résultats inédits suggèrent que chez l'homme comme chez la souris, l'intégrité de l'annulus conditionne la mobilité et la différenciation flagellaire des spermatozoïdes. Finalement, afin de déterminer si le rôle de la protéine Tatl dans le contrôle de la mobilité du spermatozoïde fait intervenir son activité de transport anionique, j'ai crée deux mutants ponctuels de la protéine TAT1 (D95N et G218V); ces mutations précédemment décrites dans la littérature abolissent l'activité de transport des protéines SLC26 mais préservent leur adressage à la membrane plasmique. In vitro, y ai vérifié que les mutants TAT1 D95N et TAT1 G218V présentent une expression quantitativement normale et un adressage correct à la membrane plasmique des cellules COS. Si comme attendu, ces mutations induisent, in vitro, une perte de l'activité de transport d'anions, elles seront introduites (de manière indépendante) dans le gène Tatl murin pour la création de modèles d'étude de type « Knock in »
We have previously identified TAT1/SLC26A8 as a potential target of Rho GTPases, exclusively expressed in human adult testis. TAT1 is a member of the SLC26 family and we have shown that TAT1 is located at the plasma membrane of germ cells at spermatocyte/spermatid stages and exhibits a transport activity towards sulfate and chloride anions. During my thesis, I characterized the phenotype of mice with a targeted disruption of Tat gene (knock out) and showed that Tatl protein is essential for sperm flagella differentiation and motility. Hence, Tat1-/- males are sterile due to severe asthenozoospermia and structural defects of the spermatozoa. Tatr spermatozoa display an atrophia of the annulus (the ring shape structure connecting the midpiece to the principal piece), a midpiece-principal piece disjunction and hairpin-like bending of the flagella leading to the disruption of the axonemal structure. In addition, we observed that Tat1-/- spermatozoa do not display the phosphorylation profile required for sperm capacitation. According to this phenotype, we showed that TAT1 is also expressed in mature sperm where it is specifically localized at the annulus. In order to investigate the implication of TAT1 in human asthenozoospermia, we performed imunodetection of TAT1 on sperm smear preparations from a cohort of 75 asthenozoospermic subjects. We identified one patient with a moderate asthenozoospermia associated with the absence of TAT1 staining at the annulus. By transmission electron miscroscopy, we observed complete lack of the annulus and midpiece-principal piece disjunction in spermatozoa from the patient. This case, so far unique, suggests that in human the integrity of the annulus is also required for proper sperm motility and flagella differentiation. Finally, in order to address the role of TAT1 anion transport activity in the control of sperm motility and capacitation, I generated two mutants (D95N and G218V) in TAT1 sequence, based on published data concerning mutations in SLC26 proteins that abolish transport activity without affecting plasma membrane localization. I analyzed these mutants, in vitro, and showed normal expression level and proper localization of the proteins at plasma membrane of COS cells. If, as we expect, these mutations inhibit TAT1 transport activity in vitro, we will proceed to their introduction into the murine Tatl gene in order to generate « knock in » mouse models

Des mutations dans OCRL1 conduisent au syndrome de Lowe, une maladie génétique rare de transmission récessive liée au chromosome X qui affecte principalement le rein, l'œil et le cerveau. En accord avec les partenaires de la protéine OCRL1, nous avons étudié son rôle dans l'endocytose au sein de modèles cellulaires humains de chacune de ces atteintes. Nous avons ainsi montré, dans des cellules rénales de patients, un défaut d'internalisation de l'albumine corrélé à l'altération du réseau d'actine et à l'hyperactivation de la cofiline. Nous avons ensuite montré, dans des cellules épithéliales de cristallin, que les deux isoformes d'OCRLl lient différemment la clathrine et ont des répartitions cellulaires différentes, suggérant leur recrutement séquentiel aux vésicules recouvertes de clathrine. Enfin, nous avons mis en évidence dans des cellules d'origine neuronale, qu'OCRLl colocalise avec Rab5 et APPL1 dans les neurites et que sa déplétion perturbe le trafic et la signalisation de TrkA
Mutations of OCRL 1 cause syndrome of Lowe, a rare X-linked disorder, mainly characterized by defects in kidneys, eyes and the brain. Regarding its partners, we studied the implication of OCRL1 in endocytosis in various human cell lines, each originated from affected organs. Thus we showed, in renal cells from Lowe patients, a defect in albumin uptake, correlated with an alteration of the actin cytoskeleton network and an increased level of phosphorylation-inactivated cofilin, a signaling pathway downstream of Rac. In a second part, we showed, in lens epithelial cells, that the two OCRL1 isoforms have different affinities to clathrin heavy chain and present different subcellular localizations; suggesting they are sequentially recruited to clathrin-coated pits. Finally, we observed, in human neuronal cells, that OCRL1 colocalizes with Rab5 and APPL1 within neuritis and that its depletion leads to the alteration of TrkA trafficking and signalisation

Des études épidémiologiques ont montré qu'environ 20% des patients atteints de myopathie de Duchenne présentent des déficits cognitifs non progressifs. L'implication de la Dp71, produit distal du gène DMD et qui est fortement exprimé dans le cerveau, a été suggérée par des études concernant un nombre limité de patients, mais les bases précises moléculaires et cellulaires du RM restent largement inconnues et peu explorées. Afin de mieux comprendre l'implication de la Dp71 dans ce retard mental et son rôle dans le développement des fonctions cognitives, nous avons effectué une étude comparative sur le plan clinique, neuropsychologique et moléculaire entre deux larges populations de patients dont la seule différence, sur le plan moléculaire, est l'expression ou non de la protéine Dp71. Ainsi nous avons pu conclure que l'absence de Dp71 constitue un facteur aggravant du déficit cognitif observé chez les patients DMD. Lors de l'étude des bases moléculaires des mécanismes physiologiques impliqués dans les déficiences mentales associées aux dystrophinopathies, nous avons démontré que la protéine Dp71 est exprimée dans les compartiments pré et postsynaptiques des synapses glutamatergiques et y forme un complexe Dp71-APC (Dp71-associated protein complex) qui interagit avec plusieurs protéines impliquées dans le signalisation synaptique. L'absence de la Dp71 dans les synapses des neurones KoDp71 est responsable d'une anomalie de distribution des protéines PSD-95, PSD-93 et SHANK. Les tests neuro-électrophysiologiques réalisés au niveau des synapses de l'aire CA1 de l'hippocampe déficients en Dp71 montrent une augmentation de la transmission synaptique de base médiée par les récepteurs du glutamate AMPA et NMDA. En revanche l'induction de la potentialisation à long terme est réduite chez ces animaux. L'étude du comportement des souris déficientes en Dp71 a révélé de légers troubles sélectifs, caractérisés par la réduction des performances d'exploration et un retard de l'apprentissage spatial. Ces résultats mettent en évidence les bases moléculaires et cellulaires qui expliquent le déficit cognitif sévère associé à la perte de fonction de la Dp71. Ces résultats suggèrent aussi que la perte de fonction de Dp71 est responsable du dysfonctionnement de la synapse et permettent de mieux comprendre le RM présent chez les patients DMD ayant des mutations situées en aval de l'exon 62
The presence of variable degrees of cognitive impairment, extending from selective cognitive deficit to severe MR in patients with dystrophinopathies is a well recognized problem. Dp71 is the major DMD-gene product in brain. To better understand molecular basis underlying mental retardation and its severity, we report a large phenotype/genotype study based on the comparison of clinical, neurosychological, molecular and expression data in a large cohort patients bearing mutations predicted to affect either all dystrophin products, including Dp71, or all dystrophin products, except Dp71. These phenotype-genotype correlations strangle indicate that loss of function of all dystrophin products is systematically associated with severe form of MR, and Dp71 deficit is a factor that contributes in the severity of MR. Then, we used complementary approaches to explore the role of Dp71 in neuronal function and identify putative mechanisms by which Dp71 'loss may impair neuronal and cognitive functions. We showed that Dp71 is expressed at both pre- and postsynaptic compartments of excitatory synapses. We found that Dp71-associated protein complexes interact with specialized modular scaffolds that cluster glutamate receptors and organize signaling in postsynaptic densities. We further showed that Dp71-null synapses display an abnormal distribution of postsynaptic proteins PSD-95, PSD-93 and SHANK. Electrophysiological analysis show an abnormally enhanced glutamatergic transmission mediated by AMPA and NMDA receptors and altered synaptic plasticity in CA1 hippocampal area. Analysis of the behavioral phenotype of Dp71-null mice revealed mild behavioral disturbances characterized by reduced exploratory behavior and delayed spatial learning. These findings suggest that Dp71 acts as a key regulator of glutamatergic synapse organization and function. This link between genetic loss of Dp71 and altered glutamatergic synapse function provides a mechanism which may underlie the increased severity of MR when inactivation of Dp71 is associated with that of other brain products of the DMD gene

Avec environ 500 000 décès annuels, les rotaviroses représentent l'une des causes majeures de gastroentérites infectieuses dans le monde. L'agent étiologique virale de ces infections, le rotavirus, code pour six protéines structurales (VP) et six protéines non structurales (NSP). Parmi celles-ci, la protéine NSP3 interagit avec l'ARN viral et le facteur de traduction eIF4G, et joue un rôle central dans la traduction des ARNm viraux. Un nouveau partenaire pour NSP3, la protéine cellulaire RoXaN (Rotavirus X protein associated with NSP3), a été identifiée. Ce travail avait pour objet l'étude de l'interaction NSP3-RoXan et la caractérisation des propriétés de la protéine RoXan. Les domaines d'interaction ont été identifiés sur les deux protéines. Ils impliquent la région centrale de NSP3 (aa 170-234), prédite en coiled-coil, et un domaine putatif Ld présent dans la région amino-terminale de RoXan (aa 255-279). RoXan a une distribution nucléo-cytoplasmique dans la cellule. Par ailleurs, nous avons pu montrer qu'elle était phosphorylable et que l'extrémité amino-terminale (aa 1-174), qui contient un domaine tétratricopeptidique (TPR), co-localisait partiellemnt avec le réseau de vimentine. L'existence, enfin, d'un complexe ternaire RoXan-NSP3-eIF4G, et la co-immunoprécipitation ARN-dépendante de la poly(A)-binding protein (PABP) avec la région carboxy-terminale de RoXan suggèrent un rôle traductionnel pour cette dernière. Cette hypothèse requirt cependant des investigations supplémentaires et ne permet pas d'écarter une ou plusieurs autres fonctions pour la protéine.

Le système nerveux et les muscles des mammifères expriment le variant T de l'acétylcholinestérase (AChET), associé à des protéines d'ancrage ColQ et PRiMA produisant respectivement des formes avec des queues collagéniques et des tétramères membranaires. Les formes collagéniques sont ancrés dans la lame basale de la jonction neuro-musculaire, tandis que les tétramères membranaires sont ancrés à la surface cellulaire par le domaine transmembranaire de PRiMA. Les tétramères membranaires constituent la forme majoritaire de l'enzyme dans le cerveau. L'association de l'AChET avec ColQ a été bien étudiée : elle est basée sur l'interaction de 4 peptides t avec un motif riche en pralines, appelé PRAD ("Proline-Rich Attachment Domain"), localisé dans la région N-terminale de ColQ. L'association de l'AChET avec PRiMA paraît similaire puisque cette protéine transmembranaire contient aussi un PRAD, mais qui est significativement différent par le nombre de pralines (8 dans ColQ, 14 dans PRiMA) et par le nombre et positions des cystéines qui peuvent former des ponts disulfures avec les cystéines C-terminales des peptides t. Donc, nous avons analysé l'association de l'AChET avec PRiMA. En effectuant des délétions et des mutations dans PRiMA, nous avons défini un motif peptidique, suffisant pour l'interaction avec les sous-unités AChET
The nervous tissue and muscles of mammals express the T splice variant of acetylcholinesterase (ACHET), associatied with anchoring proteins, ColQ and PRiMA, producing respectively collagen-tailed forms and membrane-bound tetramers. These interactions are important since they condition the functional anchoring of AChE in cholinergic tissues. The collagen-tailed forms are inserted in the basal lamina at neuromuscular junction, while the membrane-bound tetramers are anchored at the cell surface through the transmembrane domain of PRiMA. The membrane-bound tetramers represent the major enzyme species in the brain. The association of AChEr subunits with ColQ has been extensively studied : it is based on an tight interaction between four t peptides and a praline-rich motif, called PRAD ("Proline-Rich Attachment Domain"), located in the N-terminal region of ColQ. The association of AChEj subunits with PRiMA appears similar because this transmembrane protein also contains a proline-rich motif, but there are significant differences in the number of pralines (8 in ColQ, 14 in PRiMA) and in the number and positions of cysteines that might form intercatenary disulfide bonds with the cysteine located near the C-terminus of the t peptides. Therefore, we have undertaken an analysis of the association of AChET with PRiMA. Using deletions and point mutations in PRiMA, we defined a minimal motif in PRiMA, which could associate with AChEr subunits