Academic literature on the topic 'Protéine SNARE'

When one reads the words ”heat vision,” it is common to imagine Superman flying through the air, blasting red beams from his eye sockets. Although this is a fairly creative image, the type of “heat vision” found in many snakes is different. When alluding to “heat vision” in snakes, one refers to the ability of certain snake species to sense heat through pit organs. These structures connect with a snake’s sense of touch, with the trigeminal nerves and ganglia being major components of this mechanism. Transient receptor potential cation channel, member A1, or PRTA1, is a protein found in the stems of trigeminal nerves. It is often asserted that the evolution of PRTA1 is directly connected to the evolution of infrared sensory pitbearing snakes. Quand une personne lit les mots ”vision de chaleur,” il est naturel que la première chose qui vient a tête est l’image de Superman qui vole dans le ciel avec des rayons rouges quit sortes de ses yeux. Bien que ceci est une image créative, le type de “vision de chaleur” qui se trouve dans les serpents est très différent. Lorsqu’on parle de “vision de chaleur” dans les serpents souvent on réfère à l’abilité que l’èspece de serpent peut sentir la chaleur à travers de ses organes. Ces structures on des connections avec le sens du toucher d’un serpent, avec les nerves trijumeau et le ganglion qui sont des composants major de cette méchanism. Le canal cationique potentiel de récepteur transitoire, membre A1, ou PRTA1, est un protéin qui se trouve dans les tuyaux des nerves trijumeau. Il est souvent affirmé que l’évolution du PRTA1 est directement connecté à l’évolution des serpents de puits avec sensorielle infrarouge.

CFTR est un canal chlorure localisée dans la membrane apicale des cellules épithéliales dont les mutations causent la mucoviscidose. Notre équipe a montré que la surexpression de la syntaxine 8 (protéine SNARE impliquée dans la fusion membranaire intracellulaire) inhibe l'activité et la localisation membranaire de CFTR. De plus, ces deux protéines interagissent faiblement. Or, la syntaxine 8 appartient au complexe SNARE endosomal également constitué de syntaxine 7, VAMP8 et vti1b. Nous avons donc caractérisé leurs interactions avec CFTR. Les trois protéines existent en complexe avec CFTR, et VAMP8 et vti1b interagissent fortement avec CFTR. La surexpression de ces protéines inhibe spécifiquement l'activité canal chlorure de CFTR et sa localisation membranaire apicale. Les protéines SNARE endosomales et CFTR étant alors co-localisées dans les endosomes du recyclage. Nos résultats montrent que le complexe SNARE endosomal participe au trafic et à la régulation de la protéine CFTR
CFTR is a chloride channel localized in the apical membrane of epithelial cells and mutations cause cystic fibrosis. Our lab has shown that syntaxin 8 overexpression (SNARE protein involved in membrane fusion events) inhibits CFTR activity and localization. Moreover, both proteins weakly interact. Syntaxin 8 belongs to the endosomal SNARE complex also constituted of syntaxin 7, VAMP8 and vti1b. Therefore, we have characterized their interactions with CFTR. The three proteins and CFTR are in a same complex, and VAMP8 and vti1b strongly interact with CFTR. Proteins overexpressions specifically inhibit CFTR activity and CFTR membrane localization. SNARE proteins and CFTR were then co-localized in recycling endosomes. Our results demonstrate the endosomal SNARE complex participate to CFTR traffic and regulation

Le maintien de l’homéostasie passe notamment par la sécrétion d’hormones provenant des cellules neuro-endocrines ou endocrines telles que les cellules chromaffines ou les cellules b pancréatiques. Par exemple, la régulation de la glycémie nécessite l’exocytose de l’insuline depuis les cellules b pancréatiques des îlots de Langerhans. Une famille de protéines membranaires est au cœur de la machinerie de fusion d’une vésicule avec la membrane plasmique. Ce groupe appelé, la famille des protéines SNARE est composé de trois protéines. VAMP2 est localisée à la membrane vésiculaire alors que syntaxine 1A et SNAP25 sont localisées à la membrane plasmique. Syntaxine 1A et VAMP2 ont un domaine transmembranaire alors que SNAP25 est reliée à la membrane par prénylation de résidus cystéine. Cette famille forme le complexe cytosolique SNARE décrit comme essentiel à l’exocytose. La structure et la fonction du complexe cytosolique ont été étudiées en profondeur et ont mené au modèle du « zipper ». Celui-ci décrit un enroulement progressif des domaines cytosoliques SNARE permettant l’apposition des membranes puis la fusion. Le rôle des domaines transmembranaires reste encore peu décrit. Pourtant, leur étude est nécessaire afin d’établir un modèle complet de la fusion membranaire par les protéines SNARE. Nous avons donc mené une étude alliant une analyse structurale dynamique à une analyse biologique pour déterminer l’importance du domaine transmembranaire de VAMP2 dans la sécrétion. L’analyse biologique représente donc le centre de ma thèse. Le système biologique utilisé est basé sur l’extinction de l’expression de la protéine VAMP2 endogène et l’expression concomitante d’une protéine VAMP2 mutée dans son domaine transmembranaire. Deux lignées cellulaires considérées comme des modèles dans l’étude de la sécrétion hormonale et du trafic vésiculaire ont servi de support à notre étude. Par des approches de microscopies (confocal, TIRF) et d’analyses biochimiques, nous avons observé les conséquences fonctionnelles des mutations ponctuelles, établis par mutagénèse dirigée, sur le trafic vésiculaire et sur la capacité des cellules à sécréter.Les mutations induites présentent différents effets cellulaires. Certaines bloquent la sortie de VAMP2 du réseau golgien alors que d’autres ont un effet important sur la sécrétion hormonale et plus précisément sur l’exocytose. Les études structurales ont permis de corréler ces effets avec une diminution de la flexibilité structurale dans le cas de la diminution de l’exocytose, ou avec une restriction à la conformation hélice alpha dans le cas du sorting. Ce projet pluridisciplinaire a pu mettre en avant le rôle biologique du domaine transmembranaire de VAMP2 au cours de l’exocytose probablement soutenue par la dynamique conformationelle unique observée par le versant structural du projet
The hormonal secretion plays a key role in the maintenance of homeostasis. For example, the maintenance of normoglycaemia requires insulin exocytosis from the pancreatic beta cells. The SNARE membrane family protein has been described as the core machinery of fusion between the vesicle containing hormones and the plasma membrane. This family consists of 3 different membrane proteins that are essential during exocytosis. VAMP2 is localized on the vesicle and Syntaxin 1A - on the plasma membrane. They both are transmembrane protein whereas SNAP25 is linked to the plasma membrane by palmitoylation. The SNAREs appear to be essential as they form the cytosolic SNARE complex to dock the vesicle to the plasma membrane. Even though the role of this cytosolic domain has been studied in depth, much less is known on the role of their transmembrane domain during the fusion. Their study remains necessary to establish a complete model of membrane fusion mediated by the SNARE proteins.Here, we have studied the behavior and the role of the SNARE transmembrane domain during exocytosis. In a multidisciplinary project, we have combined a structural approach with a biological study to evaluate the role of this domain. Using mutagenesis in the transmembrane domain of VAMP2 and a cellular system with a clean background, we have assessed the effect of mutations on the secretion and exocytosis in two different cell lines (INS1E and PC12). The biological system is based on the silencing of endogenous VAMP2 and reconstitution of the expression of VAMP2 wt or mutated in the transmembrane domain. Using biochemistry assay and TIRF microscopy we have shown that mutations in this domain can lead to a missorting of the Golgi apparatus or a reduction of the stimulated secretion and exocytosis. This effect can be correlated to a modification of the structural dynamics of this domain.The obtained results clearly demonstrate the role of the transmembrane domain of VAMP2 during exocytosis probably sustained by its unique structural dynamics observed by physico-chemistry

Le trafic membranaire assure la communication entre les différents compartiments intracellulaires ainsi qu’entre les cellules et leur environnement via l’exocytose et l’endocytose. Les protéines SNARE vésiculaires (v-SNARE) et leurs partenaires à la membrane cible (t-SNARE) sont responsables de la fusion membranaire. Des travaux antérieurs ont montré le rôle de la v-SNARE TI-VAMP dans une voie d’exocytose impliquée dans la croissance neuritique et le remodelage de la membrane plasmique. Le domaine amino-terminal Longin de TI-VAMP régule l'activité fusogénique de la protéine et son ciblage. J'ai montré que ce domaine interagit avec la protéine Hrb, un nouveau partenaire de TI-VAMP. Hrb est localisée dans des structures membranaires recouvertes de clathrine et régule l’internalisation de TI-VAMP. Le domaine Longin interagit également avec certains lipides, indiquant que ces derniers pourraient réguler le ciblage ou l'activité de TI-VAMP. Ces nouvelles données moléculaires et cellulaires établissent des liens moléculaires inédits entre une protéine responsable de la fusion membranaire, une protéine régulatrice de l'endocytose et les lipides.

Les Chlamydia sont des bactéries intracellulaires strictes dont trois espèces sont pathogènes pour l'Homme. Elles sont responsables, selon les souches, d'infections oculaires et génitales et d'infections respiratoires. Après avoir induit leur propre entrée, les bactéries se développent dans un compartiment délimité par une membrane, appelé inclusion. Au cours du cycle infectieux, les bactéries transloquent, par leur appareil de sécrétion de type trois (STT), des protéines dont certaines s'ancrent dans la membrane de l'inclusion où elles sont en contact avec le cytosol de la cellule hôte, les protéines Inc. Mon travail de thèse a porté sur les protéines bactériennes sécrétées, au cours du cycle infectieux, dans la cellule hôte. Une approche globale nous a permis d'identifier de 24 nouvelles protéines de Chlamydia sécrétées par l'appareil de STT. Ce travail a ouvert la voie à l'étude fonctionnelle de ces protéines bactériennes qui sont en contact avec l'hôte. De manière plus spécifique, nous avons étudié la fonction d'une protéine de l'inclusion, IncA, au cours du cycle infectieux. Nous avons montré que IncA présente des similitudes structurales et fonctionnelles avec les protéines eucaryotes, les SNAREs, facteurs essentiels de la fusion des membranes cellulaires. IncA interagit dans un modèle cellulaire, et in vitro, avec certaines SNAREs. De plus, dans des expériences de fusion de liposomes in vitro, la fusion membranaire induite par un complexe SNARE des endosomes tardifs est inhibée par IncA. Ce travail a permis de proposer que IncA puisse mimer les SNAREs et participer au détournement du trafic intracellulaire induit par Chlamydia
Chlamydiae are obligate intracellular pathogens of humans and animals. Depending on the species, they are responsible for ocular and genital infections, and respiratory diseases. After inducing their own entry, the bacteria develop in a membrane-bound compartment, called the inclusion. During the infectious cycle, they translocate a subset of proteins via a type three secretion (TTS) apparatus into the host cytosol. Among these, the Inc proteins remain anchored in the inclusion membrane where they face the host cytosol. My work has focused on bacterial proteins secreted into the host cell. By a global approach, we have identified 24 new proteins secreted by the TTS apparatus of Chlamydia. This work has opened the functional studies of these bacterial proteins that are in contact with the host cell cytosol. More specifically, we have studied the function of an inclusion protein, IncA. We have shown that IncA, from different chlamydial species, share structural and functional homologies with the SNARE family of eukaryotic proteins, which are essential factors for cellular membrane fusion events. We have shown that IncA interact with SNAREs in both a cellular and an in vitro model. Moreover, in liposome fusion assays, IncA inhibit membrane fusion induced by a cognate SNARE complex specific from the late endosomal compartment. We propose that IncA, by mimicking SNAREs proteins, participate in the control of the interactions between the inclusion membrane and intracellular compartments of the host cell

L’exocytose des neurotransmetteurs repose sur la fusion des vésicules synaptiques avec la membrane plasmique en réponse à l’influx calcique qui accompagne les potentiels d’action. La fusion nécessite l’assemblage des protéines SNAREs de la vésicule (la VAMP2) et de la membrane plasmique (la syntaxine 1 et la SNAP25) à l’interface des deux bicouches lipidiques, et elle est déclenchée par la synaptotagmine, un senseur de Ca2+ aux propriétés fusogènes. Des senseurs calciques additionnels semblent participer au déclenchement de la libération et à la dynamique du pore de fusion, en particulier la calmoduline dont le rôle au cours de l’exocytose demeure obscur. Au moyen d’une technique dérivée de la FRET, nous démontrons ici que la Ca2+/calmoduline inhibe l’assemblage du complexe SNARE et la fusion membranaire SNARE-dépendante in vitro en se liant aux domaines juxtamembranaires de la VAMP2 et de la syntaxine 1. De plus des données récentes indiquent que le secteur V0 de la pompe à protons V-ATPase peut participer à la fusion membranaire, et plus particulièrement qu’un hexamère formé de ses sous-unités c constitue un pore capable de libérer de l’acétylcholine en présence de calmoduline. Au moyen des techniques du double-hybride de levure et de SPR notamment, nous avons identifié un lien direct entre boucle 3-4 de la sous-unité c et VAMP2, impliquant le domaine de liaison à la calmoduline de cette dernière. La perturbation de cette interaction in vivo, par injection d’un peptide interférant, inhibe la neurotransmission, suggérant que l’interaction de la machinerie d’exocytose avec ce pore protéique potentiel est impliquée dans la libération des neurotransmetteurs
Action potential-evoked neurotransmitter release relies on Ca2+-driven synaptic vesicle fusion with the plasma membrane. Fusion involves assembly of the vesicular protein VAMP2 (a v-SNARE) with the plasma membrane proteins syntaxin 1 and SNAP25 (t-SNAREs) into a tight trans complex at the interface between the bilayers, and is triggered by synaptotagmin, a fusogenic Ca2+-sensor. Additional Ca2+-sensors are likely to participate in release triggering and fusion pore dynamics, and notably our understanding of calmodulins actions in exocytosis remains elusive. By means of a FRET-derived method, we demonstrate that Ca2+/calmodulin inhibits SNARE complex assembly and SNAREdependent membrane fusion in vitro, by binding to the juxtamembrane regions of VAMP2 and syntaxin 1. The newly-identified calmodulin binding site on syntaxin overlaps with the synaptotagmin- interacting region, and the two interactions are mutually exclusive, suggesting antagonistic roles for the two sensors in membrane fusion. Moreover, recent data point to the involvement of the V0 sector of the proton pump V-ATPase in various membrane fusion events. They indicate that pore-forming c-subunits hexamers confer Ca2+- dependent release of acetylcholine to synthetic liposomes in the presence of calmodulin. Using yeasttwo- hybrid and SPR, we have identified a direct link between the c-subunit loop 3-4 and the v-SNARE VAMP2, involving the calmodulin-binding domain of the latter. Disturbing this interaction in vivo by acute injection of an interfering peptide inhibited neurotransmission, suggesting that association of the exocytotic machinery with the putative proteic pore is involved in neurotransmitter release

Le locus soumis à empreinte en 6q24. 2 est associé à plusieurs pathologies métaboliques dont le diabète néonatal transitoire (DNT) et le diabète de type 2 (DT2). Des anomalies génétiques et épigénétiques sont trouvées dans le DNT mais le processus physiopathologique n’est pas élucidé. Un défaut général de la méthylation est suggéré dans le DT2 et le DNT est l’unique forme de diabète avec des anomalies épigénétiques. Durant ma thèse, j’ai recherché au locus 6q24. 2 des déterminants génétiques et épigénétiques pouvant participer à l’altération des processus de sécrétion d’insuline. Nous avons identifié un nouvel îlot CpG contenu dans l’EXON 2 / Exon 3 du gène STX11/Stx11. Cette région apparaît être impliquée dans l’établissement du statut épigénétique du domaine locus 6q24. 2 au cours du développement. Nos données suggèrent que Stx11 participe au trafic des vésicules d’insuline immatures et que ce gène contribue au diabète chez l’homme.

La cellule mastocytaire comporte un système sécrétoire très spécialisé. Elle possède des granules et plus de 80% de leur contenu peuvent être libères dans les quelques minutes suivant la stimulation. Les granules contiennent de nombreux médiateurs inflammatoires qui, secrètes dans le milieu extérieur, sont en grande partie responsables des réactions d'hypersensibilité immédiate. Au cours de ce travail, nous avons caractérisé les protéines contrôlant les fonctions sécrétoires des mastocytes après leur activation via le récepteur de haute affinité pour les IGE (RFCI). Nous avons étudié le rôle des petites proteines g rab3 connues pour etre specifiquement impliquees dans l'exocytose regulee. L'identification de ces gtpases a montré que les iso formes RAB3A et RAB3D étaient exprimées et que seule l'iso forme RAB3D semble intervenir dans le contrôle de la dégranulation induite via le récepteur RFCI, dans les mastocytes. Nous avons ensuite entrepris l'analyse du complexe de fusion membranaire, le complexe snare. Le noyau de ce complexe est compose de trois grandes familles de protéines : les syntaxines, les snap et les vamp. Dans la famille des syntaxines, les isoformes 2, 3, et 4 sont exprimées, alors que les snap ne semblent être représentées que par l'isoforme snap23. Le groupe des vamp quant a lui comprend vamp2, cellubrevine, ti-vamp et vamp8. Nous avons ensuite montre que 1) la syntaxine 4 est un élément central dans la formation des complexes snare et 2) elle est impliquée fonctionnellement dans la degranulation des RBL-2H3. Enfin nous avons pu montrer que vamp8, présente sur les granules sécrétoires, est mobilisée au cours de la stimulation. Tous ces résultats sont en faveur de l'existence d'un complexe de fusion dans les cellules RBL-2H3, compose de la syntaxine 4, de snap23 et de la protéine vamp8.

Le trafic vésiculaire permet le transport des protéines et des lipides entre les compartiments intracellulaires. Les v-SNARE, à la membrane des vésicules et les t-SNARE, à la membrane des compartiments cibles, interagissent via leurs domaines SNARE, et forment un complexe permettant la fusion membranaire. TI-VAMPNAMP7 est un v-SNARE présent au niveau de l'appareil de Golgi, des endosomes tardifs et des lysosomes, qui intervient dans le transport apical, la croissance neuritique et la migration cellulaire. Nous avons montré d'une part que TI-VAMP est phosphorylée par c¬Src et qu'un mutant phospho-mimétique active son exocytose. D'autre part, par une approche protéomique, nous avons mis en évidence une interaction entre TI-VAMP et le t-SNARE SNAP-47. Nous avons montré que SNAP-47 interagit aussi avec VAMP4 et VAMP8, et présente une localisation périnucléaire, proche du réticulum endoplasmique et de l'ERGIC. Un mutant délété de son domaine carboxy-terminal, que nous avons généré, interagit toujours avec les v¬SNARE VAMP4,7, et 8 et affecte la distribution des VAMP4 et 7, suggérant un rôle de SNAP-47 dans leur localisation subcellulaire. Par ailleurs, ce mutant est partiellement délocalisé au noyau. SNAP-47 possède des signaux de localisation et d'export nucléaire et un traitement des cellules à la leptomycine B induit la relocalisation de la protéine sauvage au noyau, suggérant un transit entre noyau et cytoplasme. SNAP-47 apparaît donc différente des t-SNARE classiques et pourrait intervenir dans d'autres mécanismes, que la fusion membranaire. Nous suggérons que SNAP-47 pourrait notamment jouer un rôle de chaperonne en régulant la localisation des v-SNARE partenaires
Vesicular trafficking allows for protein and lipid transport between intracellular compartments. V-SNAREs, present at the vesicular membrane, and t-SNAREs, present at the target membrane, interact via their SNARE domains, and form a complex that allows membrane fusion. TI-VAMPNAMP7 is a v-SNARE localized in the Golgi apparatus, late endosomes and lysosomes, which plays a role in apical transport, neurite growth and cell migration. First, we showed that TI-VAMP is phosphorylated by c-src and that a phosphomimetic mutant activates its exocytosis. Secondly, by a proteomics approach, we found that TI-VAMP interacts with the t-SNARE SNAP-47. We highlighted that SNAP-47 interacts also with VAMP4 and VAMP8, and has a perinuclear localization, closed to the endoplasmic reticulum and the ERGIC. A carboxy-terminal domain deleted mutant still interacts with VAMPs 4, 7 and 8 and affects VAMPs 4 and 7 distribution, suggesting a role of SNAP-47 in the v-SNAREs' subcellular localization. Moreover, SNAP-47 mutant is partially delocalized to the nucleus. SNAP-47 possesses nuclear localization and export signais, and cell treatment with leptomycine B induces relocalization of the WT protein in the nucleus, suggesting a transit between nucleus and cytoplasm. Thus, SNAP-47 appears different from classical t-SNAREs and could potentially have a fonction in other mechanisms than membrane fusion. We suggest that SNAP-47 could play a role of chaperone by regulating its v-SNARE partners'localization

La structure des protéines SNAREs (VAMP1 et Syntaxine1A) et de leur domaines trans- et juxtamembranaires (VAMP22, Syn23 et Syn27 respectivement) a été étudiée dans des membranes lipidiques modèles. Nous avons fait varier la concentration peptidique et la composition lipidique afin de déterminer les paramètres contrôlant l’activité de ces molécules dans la membrane durant la fusion. L’étude tructurale (IR et CD) des peptides VAMP22 et Syn23 ont montré une transition structurale dépendante de la concentration, entre un feuillet béta à forte concentration et une hélice alpha à faible concentration. Cette transition était réversible pour le peptide VAMP22 uniquement. Des perturbations de la membrane lipidique ont été observées suite à ce changement de structure. Les analyses structurales en PM-IRRAS de la protéine VAMP1 seule ou dans un film lipidique neutre (DMPC) a montré une transition structurale réversible entre une hélice alpha et un feuillet béta en fonction de la compression. Dans un film lipidique chargé du DMPG, cette transition n’a pas été observée. Cela laisse suggérer une influence des charges membranaires sur l’organisation de cette protéine. En parallèle, la protéine Syntaxine1A a montré une structure secondaire stable en hélice alpha, indépendamment de la composition lipidique de la membrane. L’addition de quatre résidus juxtamembranaires au peptide Syn23 était associée à une nouvelle organisation structurale du domaine transmembranaire. L’étude structurale associée à l’étude cinétique de fusion ou d’agrégation des peptido-liposomes du peptide Syn 27, permettent de suggérer un éventuel lien entre la structure et la fonction de ce peptide dans la membrane
The structure of SNARE proteins (VAMP1 & Syntaxine1A) and of their trans- and juxtamembrane domains (respectively VAMP22, Syn23 & Syn27) was investigated in synthetic lipid membranes. Different protein concentrations and lipid compositions were used in this study. VAMP22 and Syn23 peptides were studied in IR and CD. A structural transition between an alpha helix and a beta sheet was observed depending on peptide concentration. This transition was reversible only for VAMP22. Membrane Lipid phase was disturbed upon this structural evolution. PM-IRRAS data of pure full length VAMP1 protein film and mixed DMPC/VAMP1 film showed a dynamic behavior of this protein on the interface with a reversible structural transition upon surface compression/decompression cycles. Negatively charged lipid membranes (DMPG, DMPG/DMPC) prohibited this protein from changing structure under same conditions. Syntaxine1A protein subjected to a similar analysis showed no consequences of lipid composition or surface pressure on the structure of the originally alpha helix structured protein. Addition of four juxtamembrane residues to the Syn23 peptide produced modifications within the structural organization of this transmembrane peptide in model membranes. This larger peptide facilitated vesicles membranes fusion when organized as beta sheet

Le trafic membranaire est un processus universel qui est essentiel pour la fonction neuronale dans un large spectre de fonctions. De la croissance neuronale et le développement morphologique à la libération des neurotransmetteurs et la plasticité synaptique, il prend en charge l'activité neuronale et donne d'innombrables questions qui animent la recherche sur la neurobiologie d'aujourd'hui. Notamment, l’exocytose des endosomes de recyclage (ER) dans les compartiments somatodendritiques participe à la transmission synaptique et à la potentialisation synaptique à long terme (PLT). Cependant la machine moléculaire sous-tendant l’exocytose des ER reste encore méconnue. Afin d’identifier les protéines SNAREs vésiculaires (v-SNARE) impliquées dans les différentes formes d’exocytose des ER postsynaptiques, nous avons d'abord imagé les protéines VAMP neuronales fusionnées avec la pHluorine, une GFP mutée sensible au pH dans les neurones de l’hippocampe en culture. Nous avons constaté que seulement VAMP2 et VAMP4, mais pas VAMP7, rapportaient des événements d’exocytose somatodendritique dans les neurones matures. Après avoir identifié ces deux protéines candidates, nous avons utilisé la combinaison de différentes techniques de régulation négative chronique ou aiguë pour désactiver leur fonction et observer les conséquences sur l’exocytose des ER, la transmission synaptique basale ou la PLT. Nos résultats suggèrent que VAMP2 est impliqué dans une forme d’exocytose régulée importante pour la PLT, mais pas l’exocytose constitutive des récepteurs AMPA, qui stabilise la transmission basale. VAMP4 est nécessaire pour l'exocytose constitutive d'une grande partie des endosomes, mais l'implication fonctionnelle de ces endosomes doit encore être explorée, car la régulation négative de VAMP4 ne modifie pas la transmission basale
Membrane trafficking is a universal process that is essential for neuronal function in a wide spectrum of applications. From neuronal growth and morphological development to neurotransmitter release and synaptic plasticity, it supports neuronal activity and gives countless questions that drive today’s neurobiology research. Notably, the trafficking of recycling endosomes (REs) in somatodendritic compartments participates in synaptic transmission and plasticity, such as long-term synaptic potentiation (LTP). However, the fusion machinery mediating RE exocytosis is still unclear. To identify the vesicular SNAREs (v-SNAREs) involved in different forms of postsynaptic RE exocytosis, we first imaged neuronal VAMP proteins fused with pH-sensitive pHluorin in cultured hippocampal neurons, and found that only VAMP2 and VAMP4, but not VAMP7, underwent somatodendritic exocytosis in mature neurons. After identifying these two candidate proteins, we used a combination of different downregulation techniques to chronically or acutely deactivate their function and observe consequences on REs exocytosis, basal synaptic transmission and LTP. Our results suggest that VAMP2 is involved in activity-regulated exocytosis important for LTP, but not constitutive postsynaptic AMPARs exocytosis, supporting basal transmission. VAMP4 is required for constitutive exocytosis of at least a large proportion of REs, but the functional implication of these endosomes still need to be explored, as VAMP4 downregulation did not alter basal synaptic transmission