Dissertations / Theses: 'Protéines de transport du phosphate'

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Merametdjian, Laure. "Phosphate et minéralisation dentaire : quel rôle pour les transporteurs de phosphate ?" Thesis, Nantes, 2016. http://www.theses.fr/2016NANT1032/document.

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Abstract:

La place essentielle du phosphate dans la composante minérale dentaire laisse supposer un rôle physiologique déterminant pour les protéines membranaires permettant son entrée dans les cellules dentaires. Contrairement aux données disponibles pour le calcium, les molécules permettant la production et la régulation du flux de phosphate aux sites de formation du minéral par les cellules minéralisantes dentaires sont peu connues. Ces informations sont pourtant déterminantes pour la compréhension des mécanismes de minéralisation dentaire. La première étape dans la compréhension du rôle des six transporteurs de phosphate connus (SLC17A1, SLC34A1, SLC34A2, SLC34A3, SLC20A1 et SLC20A2) pendant l’odontogenèse et la minéralisation dentaire a été de déterminer leur expression spatio temporelle par différentes techniques. Nos résultats ont montré que SLC34A2, SLC20A1 et SLC20A2 sont les transporteurs de phosphate exprimés pendant le développement dentaire. Cependant le schéma spatiotemporel d’expression de ces transporteurs ne coincidant pas avec la cinétique de minéralisation la question de leur implication fonctionnelle dans les processus de minéralisation, en tant que transporteurs de phosphate dans la dent, ou en tant que protéines multifonctionnelles restait ouverte. Pour répondre à cette question, nous avons mis en place plusieurs modèles d’analyse in vitro, ex vivo et in vivo. Les résultats les plus importants, issus de l’analyse phénotypique des dents des souris Slc20a2- /- ont montré que l’absence de Slc20a2 entraîne des anomalies de la dentine avec des calcosphérites au front de minéralisation avec un retard de minéralisation dentinaire The importance of phosphate in dental mineralization suggests a key role for membrane proteins controlling Pi uptake into dental cells. In contrast to calcium, there is no study assessing the functional implication of the different sodium-phosphate transporters in tooth mineralization and odontogenesis. As a first step to determine the functional involvement of the six known phosphate transporters (Npt1/SLC17A1, Npt2a/SLC34A1, Npt2b/SLC34A2, Npt2c/SLC34A3, PiT1/SLC20A1 and PiT2/SLC20A2) during tooth development and mineralization, we have determined their spatiotemporal expression in mouse model during large timescale of odontogenesis by different techniques. Our results obtained by Real Time PCR as well as by in situ hybridization, immunohistochemistry and Xgal staining unravel that SLC34A2, SLC20A1 and SLC20A2 are the main phosphate transporters expressed during tooth development. These results coincide with our results on human dental samples. Considering the spatiotemporal pattern of expression, it remains so to be determined the functional implication of these transporters in mineralization processes, and whether these proteins act indeed as transporters of phosphate in the tooth, or as multifunctional proteins. To answer this question we adressed several models: in vitro (cell lines culture) ex vivo (dental germ culture) and in vivo ( trasngenic mouse models). Multimodal analysis (histology, microCT, SEM, EDX, immunohistochemistry) on Slc20a2-/- mice dental structures show that absence of Slc20a2 leads to abnormal dentin structures displaying calcospherites at the mineralization front, together with delayed dentin mineralization

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Moser, von Filseck Joachim. "Mécanismes du transport lipidique par les protéines ORP/Osh." Thesis, Nice, 2014. http://www.theses.fr/2014NICE4138/document.

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Abstract:

Une distribution lipidique hétérogène est essentielle à l’identité et fonction des organelles, mais l’échange par trafic vésiculaire tend à annuler cette distribution. Il existe donc des mécanismes qui assurent l’homéostasie des lipides. Les protéines Osh (S. cerevisiae) et les OSBP-Related Proteins (ORP, H. sapiens), sont des transporteurs de lipides. Osh4 est capable d’échanger de l’ergostérol contre le phosphatidylinositol-4-phosphate (PI4P), présent sur l’appareil de Golgi. Utilisant des outils fluorescents mesurant avec une précision inégalée le transport de stérol et de PI4P, nous démontrons qu’Osh4 transporte du stérol contre son gradient de concentration en utilisant l’énergie d’un gradient de PI4P. Un couplage au métabolisme du PI4P permettrait à Osh4 d’alimenter le Golgi avec du stérol, ainsi créant le gradient de stérol entre ces organelles. La protéine OSBP participe, via sa capacité à connecter la membrane du RE à celle du trans-Golgi, à la création de jonctions entre ces organelles. Nous avons montré qu’OSBP, par échange stérol/PI4P, utilise le PI4P pour transférer du cholestérol au Golgi, mais également pour autoréguler sa capacité à former les jonctions. Osh6 lie la phosphatidylsérine, nous permettant d’étudier un nouveau mécanisme d’échange. Nous avons résolu la structure cristallographique d’un complexe Osh6/PI4P et avons pu observer l’échange de ces deux ligands par Osh6 entre deux membranes. Cette étude nous permet de suggérer que l’échange de PI4P avec divers lipides, via les protéines Osh/ORP, serait un mécanisme général permettant aux cellules de maintenir le gradient lipidique entre le RE et les membranes tardives de la voie sécrétoire An uneven lipid distribution is essential for the function of eukaryotic organelles. However, exchange of material by vesicular trafficking has a tendency to perturb this distribution; mechanisms must though exist to ensure lipid homeostasis. Osh proteins (S. cerevisiae) and OSBP-Related Proteins (ORPs, H. sapiens), are lipid transfer proteins (LTPs). Osh4 is capable of exchanging ergosterol for phosphatidylinositol 4-phosphate (PI4P), found on the Golgi. Using novel fluorescent tools to measure with unprecedented precision the transport of sterol and PI4P, we find that Osh4 can transport sterol against its concentration gradient using the energy of a PI4P gradient. Coupled to phosphoinositide metabolism, this allows Osh4 to transport sterol to the trans-Golgi and create the sterol gradients observed between these organelles. OSBP participates in the creation of membrane contact sites (MCSs) via its capacity to connect ER membranes to those of the trans-Golgi. We have shown that it uses PI4P for transporting cholesterol from the ER to the trans-Golgi by sterol/PI4P counterexchange, hence also autoregulating its tethering activity. Finally, the identification of phosphatidylserine as a ligand for Osh6 allowed us to analyze the possible extrapolation of the PI4P counterexchange mechanism. We have solved the crystal structure of Osh6 in complex with PI4P and have been able to follow counterexchange of PI(4)P and PS in vitro. Concluding, our studies allow us to suggest a general mechanism for ORP/Osh-mediated counterexchange of PI4P for other lipids to maintain lipid gradients between the ER and late membranes of the secretory pathway

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Fall, Ndeye Gamou. "Mise en place et dynamique des modifications du globule rouge induites par le parasite Plasmodium falciparum." Montpellier 2, 2009. http://www.theses.fr/2009MON20021.

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Abstract:

Plasmodium falciparum exporte des protéines parasitaires dans le cytoplasme et à la membrane de sa cellule hôte, l'érythrocyte. Cela permet lui permet de modifier sa cellule hôte et d'assurer sa survie et sa dissémination. Parmi ces modifications, les structures de Maurer constituent un compartiment sécrétoire original exporté par le parasite dans le cytoplasme de l'érythrocyte. Notre travail s'intéresse particulièrement à la caractérisation des structures de Maurer, dans le but de mieux comprendre sa biogenèse et ses fonctions biologiques. Une étude protéomique des fantômes de globules rouges parasités (ghosts) contenant les structures de Maurer, la membrane et le squelette sous-membranaire du globule rouge a identifié PfRhopH2, une protéine localisée dans les rhoptries. Nous avons au cours de ce travail caractérisé sa présence dans le cytoplasme du globule rouge parasité. Nous avons montré aussi que les structures de Maurer contiennent des micro-domaines membranaires de type lipid rafts, et que les protéines transmembranaires de ce compartiment transitent dans le cytoplasme du globule rouge sous une forme soluble, et n'adoptent une topologie transmembranaire qu'aux structures de Maurer. Nous nous sommes intéressés également aux interactions protéines-protéines dans le cytoplasme du globule rouge, notamment entre protéines humaine et parasitaire. Nous avons ainsi mis en évidence une interaction entre la protéine 14-3-3 humaine et PfEMP1 qui est phosphorylée, et montré son rôle dans la mise en place des knobs, une autre modification majeure du globule rouge, induite par le parasite. Nous avons montré aussi que l'interaction entre PfSBP1 localisée dans les structures de Maurer et LANCL1, une protéine périphérique du globule rouge, dépend de l'état de phosphorylation de PfSBP1. Ces deux études soulignent l'importance de la phosphorylation des protéines parasitaires dans le cytoplasme du globule rouge. La dernière approche de notre travail a ainsi consisté à faire une étude phosphoprotéomique des ghosts. A terme notre analyse devrait permettre de mieux comprendre la mise en place et la dynamique des modifications du globule rouge induites par Plasmodium falciparum. Mots clés : Paludisme, Plasmodium falciparum, structures de Maurer, knobs, lipid rafts, transport de protéines, interactions protéines-protéines, phosphorylation, phosphatase.

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Thouvenot, Benoit. "Etude de la régulation de l'expression des gènes chez Escherichia coli, en lien avec le transport et le métabolisme du glucose : comprenant : - l'analyse moléculaire de la région promoteur dirigeant l'expression des gènes gapA et yeaA, - l'étude de l'effet de l'absence de protéine EIIBCGlc assurant le transport spécifique du glucose sur le transcriptome d'Escherichia coli." Nancy 1, 2004. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_2004_0191_THOUVENOT.pdf.

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Abstract:

Chez Escherichia coli, la glycéraldéhyde 3-phosphate déshydrogénase (GAPDH), qui est une enzyme clé du métabolisme du glucose est codée par le gène gapA. La transcription de ce gène est initiée au niveau de 4 promoteurs et majoritairement au niveau du promoteur gapA P1 en phase exponentielle de croissance. Nous avons montré qu'il a la particularité d'avoir une boîte -10 étendue, mais de nécessiter la présence d'une boîte -35 pour être efficace. La méthionine sulfoxyde réductase de type B (MsrB) est codée par le gène yeaA situé en amont et en sens opposé à gapA. Nous avons montré que des éléments de séquences inter-ORF régulent chacun des deux gènes soit dans le même sens, soit en sens opposé et nous avons obtenu des arguments en faveur d'une régulation traductionnelle de l'expression de la protéine MsrB par le petit ARN non codant RyhB. Nous avons développé l'approche puces à ADN pour tester l'effet de l'inactivation du transporteur EIIBCGlc sur le transcriptome d'E. Coli. Nous avons ainsi montré que l'expression de gènes permettant la formation de pores de plus grande taille dans la membrane externe et de flagelles favorisant la motilité de la bactérie était augmentée In Escherichia coli, the glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) is a key enzyme for glucose metabolism and is encoded by the gapA gene. The transcription of this gene is initiated at 4 promoters and mainly at the gapA P1 promoter in the exponential phase of growth. We found that altought beeing a promoter of the -10 extended class, promoter P1 needs a -35 hexamer for activity. The E. Coli methionine sulfoxide reductase of the B type (MsrB) is encoded by the yeaA gene which is located upstream and in the opposite direction of gapA. We showed that elements of the gapA-yeaA inter-ORF sequence are involved in the regulation of the two genes, either activating both genes or having opposite effects on them and we obtained data in favor of a translation regulation by the small non-coding RNA RyhB of the MsrB protein expression. We developped a DNA macroarray approach to test for the effect of the inactivation of the EIIBCGlc protein on the E. Coli transcriptome. We showed that the expression of genes allowing formation of large pores in the external membrane and flagella were upregulated. We demonstrated the increased motility of the bacteria

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Jadid, Nurul. "Etude moléculaire et fonctionnelle du rôle des isoprénoïdes cytosoliques (dolichol et stérol) au cours du développement chez Arabidopsis thaliana." Thesis, Strasbourg, 2013. http://www.theses.fr/2013STRAJ118.

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Abstract:

Les isoprénoïdes constituent une vaste famille de constituants cellulaires synthétisés chez la plupart des organismes vivants. Chez les plantes, la biosynthèse des isoprénoïdes est réalisée dans trois compartiments : le plaste, le cytoplasme-réticulum endoplasmique et la mitochondrie. Nous avons orienté nos travaux vers l'étude moléculaire et fonctionnelle du rôle de 2 types d'isoprénoïdes cytosoliques (dolichols et stérols) au cours du développement chez les plantes. Pour mener à bien notre étude, nous avons créé des lignées mutantes « knockdown » via la technique de !'ARN interférence (RNAi) et caractérisé des mutant~d'insertion T-DNAs « knockout » pour les gènes d'intérêt chez Arabidopsis.Dans le premier chapitre, nous montrons que les isoprénoïdes sont impliqués de façon indirecte dans la Nglycosylation de protéines via le Dolichol-P-Mannose (Dol-P-Man) dont la synthèse est catalysée par la dolichol phosphate mannose synthase (DPMS). Nous démontrons que chez les plantes, la DPMS est organisée en un complexe hétéromérique localisé dans le réticulum endoplasmique (RE) qui comprend 3 sous unités DPMS1, DPMS2 et DPMS3 codées par 3 gènes. Seule DPMS1 possède une activité catalytique. Les lignées DPMS 1-RNAi et dpms 1 présentent une hypo N-glycosylation des protéines, une forte chlorose et une inhibition de la croissance racinaire. Ces traits sont associés à une hypersensibilité à l'ammonium et à une induction de la« unfolded protein response »au niveau du RE. L'ensemble de ces données montrent que les gènes DPMS jouent un rôle important dans la N-glycosylation des protéines et le développement des plantes.Dans le deuxième chapitre, nous avons porté notre attention sur le rôle des intermédiaires de biosynthèse des stérols («SBls») dans la régulation du développement des plantes en choisissant comme cible ERG28,une protéine impliquée dans le complexe enzymatique de déméthylation en C-4 des stérols « SC4DM ». Nous montrons que ERG28 est localisée dans le RE et assemble 3 enzymes du complexe« SC4DM », la«sterol 4a-methyl oxidase ». la « 4a-carboxysterol-C3-dehydrogenase/C4-decarboxylase » et la « sterone ketoreductase ». Nous démontrons que la perte de fonction de ERG28 dans les lignées ERG28-RNAi eterg28 se traduit par des phénotypes caractéristiques d'une inhibition du transport polaire de l'auxine« PAT»(différenciation d'inflorescence de type «PIN», perte de dominance apicale, fusion des feuilles et inhibition du développement racinaire ... ). Ces phénotypes sont corrélés à l'accumulation de méthylène-cycloartanol-4-carboxy-4-méthyl (MCCM), un« SBI »qui inhibe de façon spécifique le« PAT». Ces données mettent en évidence un nouveau type d'interaction entre l'auxine et les stérols Isoprenoids represent important cell constituents synthesized in many living organisms. ln plants, isoprenoid biogenesis occurs in three compartments : plastids, the endoplasmic reticulum-cytosol and mitochondrie.We focused on the molecular and functional studies of the role of Iwo cytosolic isoprenoids ( dolichol andsterol) in the development of plants. The key Io our strategy is the targeted silencing of specific Arabidopsis genes using the RNAi technology (knockdown) and the identification of T-DNA insertion mutants (knockout). ln the first chapter, we show that isoprenoids are involved indirectly in protein N-glycosylation via Dolichol P-Mannose derived from dolichol phosphate mannose synthase (DPMS). We demonstrate that plant DPMSis organized as a heteromeric enzyme complex localized in the endoplasmic reticulum (ER) and consists of DPMS1 acting as the catalytic core and two interacting subunits DPMS2 and DPMS3. The DPMS1-RNAiand dpms1 lines display an altered N-glycosylation pattern and exhibit extensive chlorosis, strong inhibition of root growth and hypersensitivity to ammonium. These phenotypic defects are associated with an «unfolded protein response» in the ER. These data demonstrate that the DPMS genes are essential for the protein N-glycome and plant development. ln the second chapter, we focused on the potentiel roles of sterol biosynthetic intermediates (SBls) in plant development using ERG28 protein, a component of the sterol C-4 demethylation (SC4DM) complex, as a target. We demonstrate that ERG28 is localized in ER and tethers 3 enzymes, sterol 4alpha-methyl oxidase, 4alpha carboxysterol-C3-dehydrogenase/C4- decarboxylase and sterone ketoreductase. We show that the Arabidopsis ERG28-RNAi and erg28 lines develop the hallmarks of altered polar auxin transport (PAT) including the differentiation of pin-like inflorescences, the loss of apical dominance, leaf fusion and inhibition root growth. The observed phenotypes correlate with the accumulation of methylene-cycloartanol-4-carboxy-4-methyl, a cryptic SBI. Our data provide a new level of interaction between sterols and auxin

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Lopez, Sanchez Uriel. "Dual functions of the XPR1/SLC53A1 phosphate exporter and other transporters as nutrient transporters and receptors of gammaretrovirus envelope-like glycoproteins." Thesis, Montpellier, 2018. http://www.theses.fr/2018MONTT042.

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Abstract:

Le phosphate inorganique (Pi) est un minéral essentiel de notre organisme, qui intervient dans la composition des acides nucléiques et des phospholipides, dans la minéralisation des os et des dents, dans la production d’énergie, et dans la régulation des voies de signalisation. L’homéostasie du Pi est étroitement régulée par différents transporteurs, et des anomalies du transport de Pi peuvent avoir des conséquences cliniques sévères. Chez l’homme, ils existent 3 transporteurs de Pi distincts de type SLC (solute carrier) avec une distribution tissulaire large et initialement identifiés en tant que récepteurs de rétrovirus : PiT1/SLC20A1, PiT2/SLC20A2, et XPR1/SLC53A1.Des mutations dans PiT2 sont associées à une maladie rare, la calcification cérébrale primaire familiale (PFBC), caractérisée par des dépôts de phosphate de calcium dans les noyaux gris centraux et par l’expression de troubles neuropsychiatriques. Alors que PiT1 ne semble pas être impliqué dans cette maladie, nous avons découvert que des mutations dans XPR1 étaient présentes chez des patients PFBC, renforçant le lien entre la maladie PFBC et les désordres de l’homéostasie du phosphate.Dans ce travail, nous avons cherché à comprendre comment PiT2 et XPR1, deux transporteurs de Pi mais de flux opposés peuvent conduire à une même maladie. Pour cela, nous avons étudié le lien entre PiT2 et XPR1 dans la régulation du Pi ainsi que les domaines de XPR1 impliqués dans le transport. Nous avons d’abord identifié de nouveaux variants PFBC dans PiT2 et XPR1 et confirmé l'effet délétère de ces mutations sur l’import et l’export. Nous avons pu distinguer des mutations qui abolissaient l’expression en surface de XPR1, et donc indirectement l’export de Pi, alors que d’autres avaient un impact fonctionnel direct sur les transporteurs pourtant présents à la membrane plasmique.L’inactivation de XPR1 dans des cellules haploïdes humaines induit une altération profonde de l’export de Pi sans effet notable sur l’import. De manière surprenante, l’inactivation de PiT2 entraine un effet modéré sur l’import, probablement dû à l'activité complémentaire de PiT1, avec une chute de l’export dépendant de XPR1. Cet effet identifie une boucle de régulation que nous avons montrée être essentielle au maintien des niveaux de phosphate et d’ATP. Ces résultats révèlent que le défaut d’export de phosphate par inactivation de PiT2 et XPR1 est susceptible d’être l’étape-clé qui conduit à une maladie commune, la PFBC.Nous nous sommes concentrés sur cette étape d‘export régulée en étudiant le domaine SPX de XPR1 dans lequel la plupart des mutations PFBC ont été retrouvées. Nous avons identifié la tankyrase (TNK) comme interactant cellulaire, et localisé son site d’interaction à la bordure carboxyle de SPX. Nous avons observé que la délétion de SPX entrainait un défaut d’export de Pi, et que la perte d’interaction de TNK à XPR1 par mutagenèse ponctuelle avait le même effet, suggérant que TNK et SPX sont 2 composants essentiels à l’export de phosphate. Enfin, nous avons identifié de nouvelles mutations de XPR1 à l'extrémité C-terminale qui abolissaient l’export de Pi, et montré que la délétion de ce domaine entrainait un défaut d’expression de XPR1 à la membrane plasmique. Nos résultats indiquent donc que les domaines N- et C-terminaux jouent un rôle clé dans l’export, et donc dans l’homéostasie du phosphate, avec le domaine C-terminal jouant plutôt un rôle dans le trafic en surface de XPR1.L’ensemble de ce travail a permis de documenter de nouvelles mutations PFBC dans les gènes PiT2 et XPR1, de démontrer que ces transporteurs étaient impliqués dans l’homéostasie intracellulaire du phosphate, en dévoilant que l’export de phosphate est vraisemblablement l’étape clé de la PFBC, ouvrant ainsi de nouvelles pistes dans la compréhension de cette maladie. Nous avons également identifié des domaines de XPR1 et un partenaire cellulaire, essentiels à l’export de Pi et/ou au trafic membranaire Phosphate (Pi) is a key mineral that participates directly in the synthesis of nucleic acids and membranes, bone and tooth mineralization, energy production, and signal transduction. Pi homeostasis is tightly regulated by transporter-mediated fluxes that adjust Pi concentration in real time, and defect in Pi transport has been associated with several pathologies. In humans, three Pi transporters, which belong to the solute carrier (SLC) superfamily, are widely expressed: PiT1/SLC20A1, PiT2/SLC20A2, and XPR1/SLC53A1. Interestingly, all three were initially identified as receptors for mammalian gammaretroviruses.Mutations in PiT2/SLC20A2 are responsible for a rare neurodegenerative disorder, the primary familial brain calcification (PFBC), characterized by deposits of calcium Pi in the basal ganglia and other regions of the brain, and associated with diverse neuropsychiatric clinical manifestations. While PiT1/SLC20A1 has not been involved in PFBC, we recently identified mutations in XPR1/SLC53A1 as causative for PFBC, thus linking further the disease with cellular Pi homeostasis dysfunction.In this work, we aimed to understand how defects of opposite Pi transport functions lead to PFBC, investigated the relationship between PiT2 and XPR1 in cellular Pi regulation, and studied XPR1 domains in Pi transport. We first identified several PFBC mutations in PiT2/SLC20A2 and XPR1/SLC53A1, and confirmed their impact on Pi import or export, respectively. Some of the mutations altered transporter cell surface expression, resulting in Pi transport impairment, while others did neither alter cell surface expression, nor retroviral receptor functions, confirming that Pi transport function and viral envelope glycoprotein binding can be structurally distinguished.Using single gene knock-out human haploid cells, we showed that depletion of XPR1/SLC53A1 resulted in a dramatic Pi export alteration, with no detectable effect on Pi import, in agreement with Pi exporter function of XPR1. Interestingly, depletion of PiT2/SLC20A2 had little impact on Pi uptake, most likely due to compensatory function of PiT1/SLC20A1, with, however, a surprising impact on Pi export mediated by XPR1. This effect is reminiscent to a regulation loop that we found to maintain both Pi and ATP constant. This results unveil for the first time that Pi export alteration, and not Pi import, is likely to be the common pathophysiological impact of mutations in both PiT2 and XPR1. This would explain the synonymous pathological effects of two transporters that have opposite transport activity.We further explored this regulated phosphate export by characterizing the SPX N-terminal cytoplasmic domain of XPR1, which harbors most of the PFBC mutations. We identified a cellular tankyrase (TNK) as a binding partner and mapped the TNK-binding site to the carboxyl border of SPX; furthermore, we found that mutations that abolished TNK binding resulted in loss of Pi export. Full deletion of SPX domain maintained cell surface expression but altered export, suggesting that both TNK and SPX are essential components for Pi export. Finally, during this work, we identified mutations in the XPR1 C-terminal domain as responsible for PFBC that also impaired Pi export, and showed that deletion of this domain prevented XPR1 cell surface expression. Our results therefore indicate that N- and C-terminal domains of XPR1 play a key role in phosphate homeostasis, the latter domain appearing to exert a more prominent role in XPR1 membrane trafficking and/or folding

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Andersson, Michael R. "Functional aspects of inorganic phosphate transport." Doctoral thesis, Linnéuniversitetet, Institutionen för naturvetenskap, NV, 2012. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:lnu:diva-18651.

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Abstract:

Inorganic phosphate is an essential nutrient for all organisms. It is required for many cellular components as nucleic acids and phospholipids, and as energy-carrying compounds such as ATP. Thus, a regulated uptake of this pivotal nutrient is of outermost importance. Depending of the availability of phosphate in the surroundings the yeast Saccharomyces cerevisiae make use of two different systems for transporting phosphate into the interior of the cell: a low-affinity system that is active during surplus phosphate conditions and a high-affinity system that is active when the availability becomes limited. This thesis focuses on the high-affinity system, which is comprised of the Pho84 and Pho89 transporters. Of the two transporters, Pho84 is the predominant one, responsible for almost all phosphate uptake during low phosphate conditions, and the contribution of Pho89 is of minor importance. Hence Pho84 is by far the most well characterized phosphate transporter. Even though much is known about phosphate transporters in yeast little in known about how phosphate is transported. The work in this thesis aims to broaden the knowledge about the transport mechanism by the means of site-directed mutagenesis and functional characterization. Also the similarity of Pho84 to glucose sensors and the potential role of conserved residues in phosphate signaling are investigated. By the use of a high-affinity system deletion strain (∆Pho84 ∆Pho89), we also managed to investigate the functional importance of well conserved residues in Pho89. In summary: the work presented in this thesis has contributed to increase the knowledge about transport mechanisms in phosphate transporters.

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Braibant, Martine. "Transport du phosphate chez Mycobacterium tuberculosis." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1998. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211979.

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Yuan, Ze-Chun Finan Turlough M. "Study of phosphate transport and phosphate regulated genes in Sinorhizobium meliloti." *McMaster only, 2006.

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Stefanova, Helena Ivanova. "Calcium and phosphate transport in sarcoplasmic reticulum." Thesis, University of Southampton, 1989. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.303376.

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Solomon, Daniel. "Phosphate transport and mineralising processes in articular cartilage." Thesis, University of Oxford, 2006. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.436955.

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Nadaraja, S. P. "Regulation of pathways involved in intestinal phosphate transport." Thesis, University College London (University of London), 2011. http://discovery.ucl.ac.uk/1333250/.

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Abstract:

Despite the importance of extracellular phosphate, the mechanisms and control of intestinal phosphate transport remain unclear. The present study used in vivo and in vitro methods to compare the extent of Na+- dependent versus Na+-independent phosphate transport along the rat small intestine and colon at different luminal phosphate concentrations. Na+-dependent and Na+-independent phosphate transport and genomic expression of type II (NaPi-II) and type III (PiT) transporters in young (3- week old) and adult (8- and 16-week old) animals fed a control or low phosphate diet have also been quantified. mRNA levels of Na+- dependent phosphate transporters have been analysed in the 5/6 nephrectomy model of chronic renal failure and following treatment with matrix extracellular phosphoglycoprotein (MEPE). The acute effects of altered luminal phosphate concentration on intestinal phosphate transport and renal phosphate transporter expression was also assessed. The findings confirm the jejunum to be the main site of Na+-dependent phosphate absorption under both normal and low dietary phosphate conditions. Low phosphate diet upregulates Na+-dependent and Na+- independent phosphate transport in both duodenum and jejunum, whereas age only affects Na+-dependent component in the duodenum and jejunum. When luminal phosphate concentrations are in the physiological (millimolar) range, absorption in the jejunum displays less Na+-dependency and is unlikely to be mediated exclusively by the Na+- dependent NaPi-IIb cotransporter. In the ileum, again using millimolar luminal phosphate concentrations, significant Na+-dependent phosphate transport was detected, but the rate of phosphate absorption was lower than in the jejunum. Since NaPi-IIb is not expressed at the rat ileal brush-border membrane (BBM), the presence of significant Na+- dependent phosphate transport suggests an alternative phosphate uptake pathway in the ileum. At millimolar luminal phosphate concentrations in the distal colon, only Na+-independent phosphate absorption was detected. Thus, at concentrations of phosphate normally present in the intestinal lumen, Na+-independent pathways of phosphate absorption are present in the proximal small intestine and distal colon, as well as a non-NaPi-IIb-mediated Na+-dependent pathway in the distal small intestine. PiT2 assumes a dominant role in phosphate transport in the jejunum of pre-weaned animals, and in the kidneys of animals fed a low phosphate diet. PiT1 transporter is not regulated by age or low phosphate diet at the genomic level. Chronic renal failure reduces intestinal and renal expression of the major transporter NaPi-II, and also PiT1 and PiT2. However, MEPE reduces intestinal expression of NaPi-IIb and PiT2 alone in chronic renal failure animals. Acute duodenal instillation of either 15 mM or 1.3 M phosphate did not affect the renal BBM protein expression of NaPi-IIa and NaPi-IIc. Duodenal instillation of 1.3 M, but not 15 mM, phosphate increased phosphate uptake in the duodenum only; however, the small intestine is unlikely to encounter phosphate concentrations in the molar range.

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Hirst, Peter Hanson. "Inositol phosphate-mediated iron transport in Pseudomonas aeruginosa." Thesis, University of Bath, 1996. https://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.320475.

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Kennedy, Patrick Wade. "Ambient pH signaling influences phosphate transport in Neurospora crassa." Texas A&M University, 2005. http://hdl.handle.net/1969.1/4796.

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Abstract:

In the course of our efforts to resolve Pi transport mechanisms in the model fungus Neurospora crassa we identified a null mutant, par-1, that displays enhanced Pi transport activity specifically under alkaline growth conditions. The PAR-1 protein is related to PalF of Aspergillus nidulans, which is one component of an ambient pH signaling pathway that is conserved among fungi. A deletion mutant for the PacC homolog, another component of the same pathway, phenocopies par-1, demonstrating that a defect in pH signaling is responsible for the altered Pi transport activity. Our results indicate that pH signaling in N. crassa plays an important role in coordinating high and low affinity Pi transport in response to ambient pH, but through different mechanisms. Sulfate acquisition also is influenced by pH signaling, suggesting that this regulatory system has a broad role in nutrient uptake and homeostasis.

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Poole, Raymond Keith. "Phosphate transport across the outer membrane of Pseudomonas aeruginosa." Thesis, University of British Columbia, 1986. http://hdl.handle.net/2429/27186.

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Abstract:

When wild-type cells of Pseudomonas aeruginosa were grown in a phosphate-limiting medium (0.2 mM orthophosphate) they were derepressed for the production of an outer membrane protein, designated protein P. This protein was purified to homogeneity and demonstrated to form channels in planar lipid bilayer membranes. In agreement with previous data, the channels formed by protein P were anion-specific (due to the presence of a binding site for anions in the channel) and exhibited a marked selectivity for phosphate 2- (HPO₄²⁻) over other anions (e.g chloride). These properties were not altered in protein P preparations purified free of lipopolysaccharide. Protein P was coinducible with the enzymes alkaline phosphatase and phospholipase C, and with a periplasmic protein of 34,000 molecular weight. Mutants of P. aeruginosa, constitutive or non-inducible for these constituents, were isolated. This suggested that the genes encoding these products were part of a phosphate regulon. Alkaline phosphatase and phospholipase C were demonstrated to be secreted into the external medium upon induction, although this extracellular release was specific and did not involve an increase in outer membrane permeability. The 34K periplasmic protein was purified and demonstrated to bind phosphate in vitro (Kd=0.34 uM). Specificity studies revealed that inorganic phosphate polymers (up to P15) and arsenate could inhibit the binding of orthophosphate to the binding protein, although organic phosphates (e.g. glucose-6-phosphate) could not. The ability of the phosphate-binding protein and protein P to associate was demonstrated in vitro, with implications concerning the means by which phosphate crosses the outer membrane. Two major inorganic phosphate transport systems were identifed, of low (Km=l9.3 uM phosphate) and high-affinity (Km=0.39 uM phosphate), respectively. Mutants deficient in the phosphate-binding protein were isolated and shown to lack the high-affinity phosphate uptake system, confirming the role of the binding protein in high-affinity phosphate transport in P. aeruginosa. In addition, a role for protein P in high-affinity phosphate transport was confirmed by the isolation of a Tn501 insertion mutant lacking porin protein P. This mutant exhibited a ten-fold increase in Km for high-affinity phosphate transport. The loss of these proteins in the respective mutants was correlated with a growth defect in a phosphate-deficient medium. Protein P, like most porins, was isolated as an oligomer (trimer) in its native (functional) state, dissociating to non-functional monomers at high temperatures. A polyclonal antiserum specific for protein P trimers was raised and shown to cross-react with other phosphate-starvation-inducible outer membrane proteins of the families Pseudomonadaceae and Enterobactereaceae. This cross-reactivity was observed only with the native, oligomeric forms of these proteins. No cross-reactivity was seen with the constitutive porins produced by these strains, indicating that the cross-reactivity of phosphate-limitation-inducible oligomeric outer membrane proteins was not due to any homologies relating to porin structure in general. Using a polyclonal antiserum specific for protein P monomers, no reactivity was observed with either the oligomeric or monomeric forms of any of the phosphate-limitation-inducible outer membrane proteins (except for protein P monomers). These data suggested that the common antigenic determinants present in these proteins were conserved in the native functional proteins only. Examination of some of the physical properties of the phosphate-starvation-inducible outer membrane proteins (e.g. molecular weight, peptidoglycan association, detergent solubility) revealed that these proteins could be grouped into two classes, represented by protein P of P. aeruginosa and protein PhoE of Escherichia coli. Those proteins resembling protein P were identified in members of the fluorescent Pseudomonads, including P. putida, P. fluorescens, P. aureofaciens and P. chlororaphis. The purified proteins formed small, anion/phosphate-selective channels in planar lipid bilayers which were quite similar to protein P channels. Science, Faculty of Microbiology and Immunology, Department of Graduate

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Kipnusu, Wycliffe K., Ciprian Iacob, Joshua R. Sangoro, and Friedrich Kremer. "Molecular dynamics of tris(2-ethylhexyl)phosphate in 2D confinement." Universitätsbibliothek Leipzig, 2015. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bsz:15-qucosa-185160.

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Al-Dabbagh, Bayan. "Etude de deux enzymes paralogues MraY et WecA impliquées dans la biosynthèse de la paroi bactérienne, membres d’une famille de protéines membranaires Polyprényl-phosphate n-acétyl-hexosamine 1-phosphate transférases." Paris 11, 2008. http://www.theses.fr/2008PA112091.

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Abstract:

L’enzyme mray catalyse la premiere etape membranaire de la biosynthese du peptidoglycane. Elle est essentielle à la viabilite de la bacterie, ce qui fait de cette enzyme une cible privilegiee pour la recherche de nouveaux antibiotiques. La topologie membranaire de mray a ete determinee. Elle est composee de 10 segments transmembranaires, 4 sequences periplasmiques, et 5 sequences cytoplasmiques contenant de nombreux residus invariants. Une partie de ce travail de these a concerne la cartographie du site actif de la translocase mray et l’etude de son mecanisme catalytique. Pour cela, dix-neuf proteines mutantes de mray de bacillus subtilis ont ete produites par mutagenese dirigee des residus invariants. Les plasmides portant ces mutations ont ete testes par complementation fonctionnelle in vivo. Quatorze proteines mutantes, qui n’assurent pas la complementation d’une souche mutante mray thermosensible, ont alors ete purifiees a homogeneite et leur analyse enzymatique a ete effectuee. Les etudes d’activite a differents ph suggerent l’implication du residu d98 dans la deprotonation de l’undecaprenyl-phosphate (c55-p) pendant la catalyse. L’activite enzymatique des proteines mutantes a differentes concentrations de mg2+ a ete determinee. Les resultats suggerent l’implication des residus d174, d177 et h45 dans la fixation du mg2+. L’etude du mecanisme catalytique de l’enzyme mray a ete entreprise. Les resultats de nos experiences supportent l’hypothese selon laquelle la formation du lipide i s’effectuerait selon un mecanisme catalytique en une etape, a savoir l’attaque directe d’un oxyanion du phosphate de l’undecaprenyl-phosphate sur le phosphate ß du substrat nucleotidique. Un autre volet de ce travail a ete consacre a l’etude de la transferase membranaire weca, paralogue de mray et membre de la meme famille d’enzymes, les polyprenyl-phosphate n-acetyl-hexosamine 1-phosphate transferases. Pour la premiere fois, nous avons reussi la surproduction, l’extraction des membranes et la purification a homogeneite de cette enzyme. Sa caracterisation biochimique a egalement ete effectuee. Une partie importante de cette these concerne l’etude et la recherche de nouveaux antibiotiques. Sur la base de la structure de la liposidomycine, un inhibiteur naturel de mray, de nouveaux composes ont ete synthetises. Les effets de ces derniers sur l’activite enzymatique de mray ont ete analyses. Une inhibition interessante a ete observee avec un de ces composes avec une ic50 de 0,58 mm. La derniere partie de cette these concerne l’etude de l’interaction entre les intermediaires lipidiques de la biosynthese du peptidoglycane et un nouveau lantibiotique produit par bacillus claucii, baptise claucine. Ce travail a ete realise par des approches de biophysique. Nous avons montre que les lipides i et ii sont des cibles de ce nouveau lantibiotique. En revanche, l’undecaprenyl-phosphate, l’udp-murnac-pentapeptide ou son analogue pyrophospho-murnac-pentapeptide n’interagissent pas avec la claucine The mray transferase is an integral membrane protein that catalyzes an essential step of peptidoglycan biosynthesis, namely the transfer of the phospho-n-acetylmuramoyl pentapeptide motif onto the undecaprenyl phosphate carrier lipid. It belongs to a large superfamily of eukaryotic and prokaryotic prenyl sugar transferases. Nineteen polar residues located in the five cytoplasmic segments of mray appeared as invariants in the sequences of mray orthologues. A certain number of these invariant residues were found to be conserved in the whole superfamily. To assess the importance of these residues in the catalytic process, site-directed mutagenesis was performed using the bacillus subtilis mray as a model. Fourteen residues were shown to be important for mray activity by an in vivo functional complementation assay using a constructed conditional mray mutant strain. The corresponding mutant proteins were purified and biochemically characterized. None of these mutations did significantly affect the binding of both the nucleotidic and lipidic substrates, but the kcat was drastically reduced in almost all cases. The important residues for activity appeared to be distributed in all the cytoplasmic segments, indicating that these five regions contribute to the structure of the catalytic site. Our data show that the d98 residue which is invariant in the whole superfamily should be involved in the deprotonation of the lipid substrate during the catalytic process. The effects of magnesium (required for mray activity) on the activity of the wild-type and mutant proteins were tested. Moreover, our results suggest the involvement of h45, d174 and d177 residues in the binding of the metal ion. We also studied the catalytic mechanism of mray. Based on our present results, we here propose a reaction proceeding via a single displacement mechanism. In this “one-step” mechanism, the oxyanion of the undecaprenyl-phosphate attacks the β phosphate of the nucleotidic substrate leading to the formation of lipid i and the liberation of ump. During this thesis, we were also interested in studying the weca transferase, an integral membrane protein, paralogue of mray. In this thesis and for the first time, the weca protein was overproduced and purified to near homogeneity in milligram quantities. Its kinetic parameters and biochemical characterization were determined. Another aspect of our work concerned the research of new antibacterial drugs. Indeed, mray, an essential integral membrane protein is a promising potential target to be exploited for new antibacterial discovery. Based on the structure of the liposidomycin, a natural inhibitor of mray, new compounds were synthesized. Their effects on the enzymatic activity of mray were analyzed. In the case of one compound, an important inhibition was observed with an ic50 of 0. 58 mm. In the last part of this manuscript we investigated the specificity of interaction of a new type a lantibiotic, termed claucin, isolated from bacillus claucii with the lipid precursors of the peptidoglycan biosynthesis. Our data show that these lipid intermediates are the targets of this new lantibiotic. However, no interaction was observed when undecaprenyl-phosphate, udp-murnac-pentapetide and its analogue the pyrophosphate-murnac-pentapeptide were tested

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ESCOUBET, BRIGITTE. "Adaptation a la privation de phosphate du transport de phosphate dependant du sodium. Etude des mecanismes cellulaires." Paris 7, 1990. http://www.theses.fr/1990PA077032.

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Abstract:

Le transport de phosphate inorganique dependant du sodium du tube proximal et de l'intestin est module par la privation de phosphate. Nous avons mis en evidence le caractere ubiquitaire de ce transport de phosphate puisqu'il est exprime dans la partie distale du nephron, le foie et le cur. Dans ces types cellulaires, il est stimule par la privation de phosphate. Cet effet est lie a une augmentation de la vmax du transport et necessite une transcription et une synthese proteique. Les mecanismes cellulaires mis en jeu par la privation de phosphate dans les cellules mdck ne font pas intervenir la diminution de la concentration cellulaire de phosphate ou d'atp. Par contre, il existe une diminution du calcium cytosolique lors de la privation de phosphate. La diminution du calcium cytosolique module aussi le transport de phosphate dependant du sodium par un mecanisme different de celui de la privation de phosphate. La proteine kinase c n'intervient pas dans cette adaptation. Une proteine induite lors de la privation de phosphate a ete identifiee dans les cellules mdck ainsi que plusieurs arn messagers. Le clonage de cdna modifies par la privation de phosphate a ete fait par des hybridations differentielles. Cinq cdna induits ont ete clones

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Raju, Vijay Kumar. "A TRANSPORT STUDY OF SODIUM PHOSPHATE DODECAHYDRATE PIPELINE PLUGGING MECHANISMS." MSSTATE, 2001. http://sun.library.msstate.edu/ETD-db/theses/available/etd-11082001-171636/.

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Abstract:

The thesis investigates pipeline plugging mechanisms that have occurred during interim stabilization transfers at Hanford. A laboratory-scale saltwell pumping test loop was designed to evaluate a surrogate of Hanford Tank 241-SX-104 supernate. The effect of surrogate flow rate, cooling water flow rate and phosphate concentrations on plugging mechanisms was investigated. Critical parameters like particle and agglomerate size, velocity and bed growth rate were determined. Theoretical models were used to compare the experimental pressure rise and temperature drop of the surrogate in the channel. An operating region in which a plug would not form was developed, based on the experimental results. Experiments are also reported on plug remediation. Unplugging experiments at varying pump pressure heads and residence time of plug in the line were performed.

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Carpentier, Gabriel, and Gabriel Carpentier. "Transport du silicium par les aquaporines animales." Doctoral thesis, Université Laval, 2015. http://hdl.handle.net/20.500.11794/26450.

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Abstract:

Cette thèse de doctorat porte sur le transport du silicium (Si) par les aquaporines animales. Le Si est un élément abondant dans la nature où il joue des rôles im-portants, chez les plantes notamment. Il jouerait également des rôles importants en physiologie animale en contribuant à l’intégrité osseuse, à la santé tégumen-taire et au maintien du collagène. Bien que des transporteurs de Si soient déjà connus chez les diatomées et les plantes, aucun n’a encore été décrit chez l’animal. Toutefois, la compartimentalisation du Si au sein de l’organisme et son assimilation nutritionnelle suppose l’existence de tels transporteurs. En raison de l’homologie qu’elles partagent avec les transporteurs de Si chez les plantes, les aquaporines (AQPs) animales correspondent à des candidats pertinents. Dans ce contexte, les objectifs de la thèse étaient de déterminer si les AQPs sont per-méables au Si et, le cas échéant, de caractériser le rôle physiologique du trans-port en Si par les AQPs et d’identifier des résidus qui permettent à ces canaux d’agir ainsi. Nos travaux ont permis de constater que les AQP3, AQP7, AQP9 et AQP10 humaines, connues sous le nom d’aquaglycéroporines (AQGPs), peuvent toutes agir comme des transporteurs de Si ou plus spécifiquement de l’acide or-thosilicique qui permet à l’atome d’exister sous forme soluble. Le transport obser-vé est de nature michaelienne, sensible à la phlorétine (AQP7 et AQP9) mais in-sensible aux changements de pH et d’osmolalité extracellulaire. Aussi, la distribu-tion tissulaire de ces transporteurs concorde avec celle du Si, et l’expression des AQP3, AQP7 AQP9 dans le petit intestin de la souris est augmentée avec une diète faible en Si. Par ailleurs, nous avons démontré que la région des AQPs connue sous le nom de filtre aromatique/Arginine joue un rôle important dans la sélectivité à l’OSA, et que les résidus L84 chez AQP1 et N208 chez AQP10 jouent un rôle dans la sélectivité à l’eau et au Si respectivement. Ces travaux ont mené à la première description de transporteurs de Si chez l’animal, et à une meilleure compréhension de la physiologie de l’atome chez les mammifères. Cette thèse de doctorat porte sur le transport du silicium (Si) par les aquaporines animales. Le Si est un élément abondant dans la nature où il joue des rôles im-portants, chez les plantes notamment. Il jouerait également des rôles importants en physiologie animale en contribuant à l’intégrité osseuse, à la santé tégumen-taire et au maintien du collagène. Bien que des transporteurs de Si soient déjà connus chez les diatomées et les plantes, aucun n’a encore été décrit chez l’animal. Toutefois, la compartimentalisation du Si au sein de l’organisme et son assimilation nutritionnelle suppose l’existence de tels transporteurs. En raison de l’homologie qu’elles partagent avec les transporteurs de Si chez les plantes, les aquaporines (AQPs) animales correspondent à des candidats pertinents. Dans ce contexte, les objectifs de la thèse étaient de déterminer si les AQPs sont per-méables au Si et, le cas échéant, de caractériser le rôle physiologique du trans-port en Si par les AQPs et d’identifier des résidus qui permettent à ces canaux d’agir ainsi. Nos travaux ont permis de constater que les AQP3, AQP7, AQP9 et AQP10 humaines, connues sous le nom d’aquaglycéroporines (AQGPs), peuvent toutes agir comme des transporteurs de Si ou plus spécifiquement de l’acide or-thosilicique qui permet à l’atome d’exister sous forme soluble. Le transport obser-vé est de nature michaelienne, sensible à la phlorétine (AQP7 et AQP9) mais in-sensible aux changements de pH et d’osmolalité extracellulaire. Aussi, la distribu-tion tissulaire de ces transporteurs concorde avec celle du Si, et l’expression des AQP3, AQP7 AQP9 dans le petit intestin de la souris est augmentée avec une diète faible en Si. Par ailleurs, nous avons démontré que la région des AQPs connue sous le nom de filtre aromatique/Arginine joue un rôle important dans la sélectivité à l’OSA, et que les résidus L84 chez AQP1 et N208 chez AQP10 jouent un rôle dans la sélectivité à l’eau et au Si respectivement. Ces travaux ont mené à la première description de transporteurs de Si chez l’animal, et à une meilleure compréhension de la physiologie de l’atome chez les mammifères. The subject of this Ph.D. thesis is the transport of silicon (Si) by animal aqua-porins. Si is an abundant element in nature where it plays important roles, namely in plants. It also appears to play important physiological roles in animal physiolo-gy, by contributing to bone integrity, tegumentary health and collagen mainte-nance. Even though Si transporters have already been identified in diatoms and plants, none have been described in animals thus far. However, compartmentali-zation of Si throughout the mammalian body and nutritional assimilation suggest the existence of such transporters. Given the homology that they share with the Si transporters of plants, the mammalian aquaporins (AQPs) correspond to relevant candidates. In this context, the thesis’ objectives were, to determine whether AQPs are permeable to Si, and if so, to characterize the physiological role of Si transport by the AQP and to identify residues that allow these channels to act as such. Our work has allowed us to observe that human AQP3, AQP7, AQP9 and AQP10, also known as aquaglyceroporins (AQGPs), can all act as transporters for Si or more specifically for orthosilicic acid (OSA) that allow Si to be soluble in this form. The observed transport is michaelian in behavior, sensitive to phloretin (AQP7 and AQP9), but insensitive to changes in pH and extracellular osmolality. Also, tissular distribution of these carriers concords with that of Si, and expression of AQP3, AQP7 and AQP9 in the small intestine of mice is upregulated through a Si-poor diet. Otherwise, we have demonstrated that the region within the AQP that is knows as that aromatic/arginine filter (ar/R) plays an important role in OSA selec-tivity, and that residues L84 in AQP1 and N208 in AQP10 plays an important role in water permeability and Si permeability respectively. These results have led to the first description of Si transporters in animals, and a better understanding of the role played by this atom in mammalian physiology. The subject of this Ph.D. thesis is the transport of silicon (Si) by animal aqua-porins. Si is an abundant element in nature where it plays important roles, namely in plants. It also appears to play important physiological roles in animal physiolo-gy, by contributing to bone integrity, tegumentary health and collagen mainte-nance. Even though Si transporters have already been identified in diatoms and plants, none have been described in animals thus far. However, compartmentali-zation of Si throughout the mammalian body and nutritional assimilation suggest the existence of such transporters. Given the homology that they share with the Si transporters of plants, the mammalian aquaporins (AQPs) correspond to relevant candidates. In this context, the thesis’ objectives were, to determine whether AQPs are permeable to Si, and if so, to characterize the physiological role of Si transport by the AQP and to identify residues that allow these channels to act as such. Our work has allowed us to observe that human AQP3, AQP7, AQP9 and AQP10, also known as aquaglyceroporins (AQGPs), can all act as transporters for Si or more specifically for orthosilicic acid (OSA) that allow Si to be soluble in this form. The observed transport is michaelian in behavior, sensitive to phloretin (AQP7 and AQP9), but insensitive to changes in pH and extracellular osmolality. Also, tissular distribution of these carriers concords with that of Si, and expression of AQP3, AQP7 and AQP9 in the small intestine of mice is upregulated through a Si-poor diet. Otherwise, we have demonstrated that the region within the AQP that is knows as that aromatic/arginine filter (ar/R) plays an important role in OSA selec-tivity, and that residues L84 in AQP1 and N208 in AQP10 plays an important role in water permeability and Si permeability respectively. These results have led to the first description of Si transporters in animals, and a better understanding of the role played by this atom in mammalian physiology.

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Kipnusu, Wycliffe K., Ciprian Iacob, Joshua R. Sangoro, and Friedrich Kremer. "Molecular dynamics of tris(2-ethylhexyl)phosphate in 2D confinement." Diffusion fundamentals 16 (2011) 50, S. 1-2, 2011. https://ul.qucosa.de/id/qucosa%3A13787.

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Sterling, Tremaine M. "Hormone Mediated Transport of Calcium and Phosphate in Polarized Epithelial Cells." DigitalCommons@USU, 2004. https://digitalcommons.usu.edu/etd/5544.

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Abstract:

The effects of 1,25(OH)2D3, PTH and 25(OH)D3 on phosphate or calcium uptake were studied in cultured, adherent chick enterocytes over a period of 10 min after hormone addition. Time course studies of cells treated with 130 pM 1,25(OH)2D3 showed an increase in 32P uptake as early as 3 min. Similar studies with 65 pM bPTH(l1-34) resulted in an increase in 45Ca uptake only if the cells had been cultured in serum. (OH)D3, which is not firmly established as an active metabolite of vitamin D, was shown to increase 45Ca uptake within 5 min at a 100 nM concentration. Analyses of signal transduction events involving each hormone were undertaken using PKC and PKA inhibitors, chelerythrine and Rp-cAMP, respectively. In the presence of PKC inhibitor and 1,25(OH)2D3 elevated 32P levels were apparent; however, further investigations involving efflux studies showed PKC inhibition of 32P extrusion in the presence or absence of hormone. On the other hand, suppression of the PKA pathway stimulated an increase in 1,25(OH)2D3-mediated 32P uptake. Preincubation of enterocytes with Ab099 against a putative membrane receptor for 1,25(OH)2D3 abolished steroid-stimulated 32P uptake. While PKC inhibition had no effect on 45Ca uptake in enterocytes exposed to 65 pM bPTH(1-34) in serum, pretreatment with PKA inhibitor resulted in 45Ca levels relatively close to basal levels. Cells pretreated with PKC inhibitor and exposed to 25(OH)D3 demonstrated no changes in 45Ca levels, whereas inhibition of PKA induced decreased 45Ca levels after 10 min of incubation. In equivalent time course studies of membrane trafficking using confocal microscopy, potential vectorial transport initiated by each hormone was analyzed with agonist alone or in the presence of PKC and PKA inhibitors. In addition 1,25(OH)2D3 was tested in the presence of Ab099 against its putative membrane receptor. Visualization of these experiments using the endocytotic marker dye, FM 1-43, demonstrated that hormone-mediated membrane trafficking is rapid enough to contribute to ion transport. These results also suggest that vectorial vesicular transport mechanisms were involved to some extent in response to each hormone. Moreover, the pattern for membrane trafficking was different for each agonist. These combined results indicate that adherent chick enterocytes demonstrate hormone-mediated uptake that occurs more rapidly than cells in suspension or in perfusion studies. This research supports previous studies that identify 25(OH)D3 as an active vitamin D metabolite. The PKA signal transduction pathway is a possible mechanism for PTH- and 25(OH)D3-mediated increases in 45Ca. In addition, a central role for the basal lateral membrane receptor protein, 1,25(OH)2D3MARRS-bp, in 1,25(OH)2D3-mediated 32P uptake is supported. Confocal imaging suggests that the transport mechanism for phosphate or calcium ions in the presence of these hormones involves vesicular carriers.

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Helps, Christopher R. "A study of sodium dependent phosphate transport across bovine renal border membranes." Thesis, University of Bristol, 1992. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.357989.

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Lamaze, Thierry. "Effets du nitrate sur le transport du phosphate inorganique par la racine." Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37598913t.

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Lamaze, Thierry. "Effet du nitrate sur le transport du phosphate inorganique par la racine." Montpellier 2, 1986. http://www.theses.fr/1986MON20117.

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Abstract:

Etude de l'orthophosphate chez le mais, l'orge, le riz, la feverole, le soja. On precise les effets du nitrate sur l'influx unidirectionnel, l'accumulation, la secretion dans le xyleme, les echanges cytoplasme-vacuole. Comparaison avec les effets de so::(4)**(2-) et de cl**(-). Etude des roles du nitrate endocellulaire, de la stimulation de l'assimilation de l'orthophosphate, du flux de seve, du controle par les parties aeriennes, de la modification du pool cytosolique de l'orthophosphate, des forces electriques, d'un controle allosterique de l'influx

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Zwiegelaar, Jacobus Petrus. "Molecular studies on phosphate homeostasis in higher plants." Thesis, Stellenbosch : University of Stellenbsoch, 2010. http://hdl.handle.net/10019.1/4839.

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Abstract:

Thesis (PhD (Genetics))--University of Stellenbosch, 2010. Dissertation presented for the degree of Doctor of Philosophy Stellenbosch University. ENGLISH ABSTRACT: Phosphorus (P) is essential for the survival of all living organisms and forms part of several key biological molecules and processes. The basic biological function of all cells depends on the availability of P as structural element in phospholipids and nucleic acids. P plays a central role in the energy metabolism of the cell by activating metabolic intermediates of carbohydrate metabolism and by acting as an energy currency in the form of adenosine tri-phosphate (ATP). ATP is produced during photosynthesis from the energy derived from sunlight, probably the most important biological process on earth. The balance of P supply and demand is of critical importance here. Plants assimilate P in the form of orthophosphate (Pi) via its roots and utilises complex mechanisms to redistribute and balance the Pi concentrations throughout the plant. These processes are collectively known as phosphate homeostasis and in this study we utilised molecular techniques to study some key aspects of this complex network of mechanisms in the plant Arabidopsis thaliana. When the role of the PHT1;5 Pi transporter was investigated in photosynthesis under Pi limitation a new mechanism utilised by plants to supply Pi for the production of ATP in the chloroplast was discovered. During periods of adequate Pi supply plants make use of the triose phosphate / phosphate translocator (TPT) to exchange Pi for phosphorylated carbon intermediates. This transporter does, however, not function at the low Pi concentrations present during Pi limitation and the plant therefore express an alternative transporter i.e. PHT1;5. Together with this transporter several genes were identified that was expressed to allow the export of carbon intermediates from the chloroplast via starch turnover. Amongst these, several alternative isoforms of the enzymes responsible for starch turnover are expressed during Pi limiting conditions. It is therefore suggested that the products of starch degradation, e.g. glucose and maltose are the potential candidates for carbon export from chloroplasts under Pi limiting conditions. In an attempt to perturb the Pi concentrations in the Arabidopsis vacuole we expressed the three genes of a newly discovered polyphosphate (PolyP) polymerase from the yeast Sacharomyces cerevisiae in Arabidopsis. This enzyme complex accumulates PolyP in the yeast vacuole and since the plant vacuole is playing a key role in buffering Pi concentrations we anticipated some observable effects that could lead to the elucidation of the mechanisms involved. Production of PolyP was conclusively shown in plant callus, but it was only at very low concentrations with no detectable perturbing effect and undetectable in whole plants. With the aim to apply this technology to the PolyP and PHT1;5 lines developed in the other parts of this study, newly developed fluorescent indicator protein nanosensors (FLIPPi) were evaluated as a method for detecting and monitoring in vivo Pi concentrations in multicellular plant organs. This technique is capable of detecting changes in metabolite concentrations in real-time and it was applied to the roots of Arabidopsis seedlings subjected to Pi limitation. We specifically looked at changes in the cytosol, but our results revealed no detectable changes occurring in the Pi concentrations in this compartment. This was interpreted to indicate lower levels of Pi in this compartment as was previously expected. AFRIKAANSE OPSOMMING: Fosfaat (P) is essensieël vir die oorlewing van alle organismes en maak deel uit van etlike kern biologiese prosesse en molekules. Die basiese biologiese funksionering van alle selle hang direk af van die beskikbaarheid van P as strukturele element van fosfolipiede en nuklëinsure. Fosfaat speel 'n sentrale rol in die energie metabolisme van 'n sel deur metaboliese intermediante te aktiveer en deur op te tree as die geld eenheid van sellulere energie in die vorm van adenosien tri-fosfaat (ATP). ATP word gegenereer gedurende fotosintese vanaf die energie wat van sonlig vasgevang word, dit is waarskeinlik die belangrikste biologiese proses op aarde. Dit is van kritiese belang dat die fosfaat vraag en aanbod hier fyn gebalanseer word. Plante assimileer P in die vorm van ortofosfaat (Pi) deur hulle wortels en maak gebruik van komplekse meganismes om Pi deur die plant te versprei en konsentrasies te balanseer. Hierdie prosesse staan gesamentlik bekend as fosfaat homeostase en in die huidige studie het ons gebruik gemaak van molekulêre tegnieke om 'n paar belangrike aspekte van hierdie komplekse netwerk van prosesse in die plant Arabidopsis thaliana te bestudeer. Toe die rol van die PHT1;5 Pi transporter in fotosintese onder toestande van Pi tekort bestudeer is, is 'n nuwe meganisme ontdek waarmee plante Pi verskaf aan chloroplaste vir die proses van fotosintese onder toestande van Pi tekort. Gedurende periodes wat die plant genoegsame Pi tot sy beskikking het, word van die triose fosfaat / fosfaat uitruiler (TPT) gebruik gemaak om Pi uit te ruil vir gefosforileerde koolstof metaboliete. Hierdie transporter kan egter nie onder die lae Pi konsentrasies wat voorkom in die sitoplasma onder Pi tekort toestande funksioneer nie, en gevolglik moet die plant van 'n alternatiewe transporter naamlik PHT1;5 uitdruk. Verskeie ander gene is ook geidentifiseer wat saam met hierdie transporter onder toestande van Pi tekort uitgedruk word en die plant toelaat om koolstof tussengangers uit die chloroplaste uit te vervoer via die proses van stysel produksie en afbraak. Onderandere is verskeie alternatiewe isoforme van die gene wat verandwoordelik is vir stysel produksie en afbraak identifiseer wat uitgedruk word onder toestande van Pi tekort. In 'n poging om die Pi konsentrasies in die Arabidopsis vakuool te versteur is drie gene van die nuut ontdekte polifosfaat (PolyP) polimerase kompleks van die gis Sacharomyces cerevisiae in Arabidopsis uitgedruk. Hierdie ensiem kompleks is verandwoordelik vir die akkumulasie van PolyP in die gis vakuool en siende die plant vakuool 'n kern rol speel in die buffering van Pi konsentrasies in die plant, het ons sekere waarneembare gevolge verwag wat kon lei tot die ontrafeling van die meganismes hierby betrokke. Die produksie van PolyP in plant kallus is duidelik gedemonstreer, maar dit was slegs teen baie lae konsentrasies met geen waarneembare versteuringseffek nie, en kon glad nie in heel plante waargeneem word nie. Met die oog daarop om hierdie tegnologie toe te pas op die bestudering van die PolyP en PHT1;5 lyne wat in die ander dele van hierdie studie ontwikkel is, is 'n nuut ontwikkelde fluoresente indikator protein nanosensor (FLIPPi) tegnologie evalueer as 'n metode om Pi konsentrasies in vivo in multisellulere plant organe waar te neem en te monitor. Hierdie tegniek is in staat daartoe om veranderinge in Pi konsentrasies in selle direk te monitor en is gevolglik op die wortels van Arabidopsis saailinge onder Pi tekort toestande toegepas. Daar is spesifiek na veranderinge in die sitosol gekyk, maar ons resultate kon geen waarneembare veranderinge in Pi konsentrasies in hierdie kompartement uitwys nie. Hierdie resultaat beteken waarkeinlik dat die Pi konsentrasies in hierdie kompartement waarskeinlik baie laer is as wat voorheen verwag is.

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Samson, Michel. "Le transport membranaire des hormones thyroïdiennes : caractérisation, identification et purification partielle des protéines de transport de l'érythracyte." Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA11T035.

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Oukhaled, Abdelghani. "Transport de macromolécules à travers un pore nanométrique unique." Evry-Val d'Essonne, 2006. http://www.theses.fr/2006EVRY0037.

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Abstract:

Nous présentons dans ce travail une étude expérimentale du transport de différents polymères, neutres, chargés, et partiellement structurés à travers un pore protéique nanométique (l’-Hémolysine du Staphylocoque doré). Dans un domaine où la taille des chaînes de polymères est comparable ou supérieure au diamètre du pore. Le pore est inséré dans une bicouche lipidique plane soumise à une différence de potentiel. Le passage de polymère est détecté électriquement en mesurant les fluctuations du courant électrique induite par la présence des chaînes dans le pore. Nous avons mis en évidence un seuil de concentration en régime semi-dilué permettant le passage de grandes chaînes neutres et flexibles de taille très supérieure devant le diamètre du pore. Le temps de passage de ces chaînes obtenu expérimentalement est en excellent accord avec celui décrit par le modèle de reptation. Cependant la dynamique des chaînes de taille comparable au diamètre du pore est anormalement ralentie comparée aux différentes prédictions théoriques. Nous avons prouvé expérimentalement l’existence d’un seuil en force ionique qui gouverne l’entrée des chaînes chargées. Une chaîne chargée passe dans le pore seulement si l’épaisseur du nuage de contre ions qui entour la chaîne est inférieure au diamètre du pore. Nous avons mis en évidence l’existence d’états intermédiaires correspondant à longue durée de vie dans des protéine partiellement repliées. De plus nous avons montré la coexistence de conformation dépliée et partiellement repliée pour une concentration donnée en agent dénaturant An experimental study of the transport of various polymers chains, neutral, charged, and partially structured through a proteic nanopore (-Hémolysin from Staphylococcus aureus) is presented in this work. In the domain where the size of the polymer chains is comparable or higher than the diameter of the pore. A proteinic pore is inserted in lipid bilayers subjected to an electrical tension. The passage of chains is detected electrically by measuring the electrical current fluctuation induced by the presence of chains in the pore. We observe a threshold of concentration in the semi-dilute regime allowing the passage of large neural flexible chains. The residence time of these chains obtained in experiments is in excellent agreement with that described by the model of reptation. However the dynamics of the chains of size comparable with the diameter of the pore is abnormally slowed down compared with the various theoretical predictions. We proved in experiments the existence of a threshold in ionic strength which controls the entry of the charged chains. A charged chain passes in the pore only if the thickness of the cloud of conter-ions around the chain is smaller than the diameter of the pore. We highlighted the existence of intermediate states corresponding to long life in protein partially folded. Moreover we showed the coexistence of conformation (unfolded and partially folded) for a given concentration of denaturing agent

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Berrada, Gouzi Ai͏̈cha. "Secrétion des protéines et génie génétique." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05P063.

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Djeghader, Ahmed. "Etude structurale et fonctionnelle des phosphates-binding proteins : Illustration avec les protéines ding et ding-like et leur implication dans l'infection /inhibition du Vih." Thesis, Aix-Marseille, 2013. http://www.theses.fr/2013AIXM4073.

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Abstract:

L’acquisition du phosphate du milieu extracellulaire est un processus biologique primordial pour toute les cellules vivantes. Durant ce travail nous nous sommes intéressé à deux famille de phosphate-binding proteins, les protéines DING et DING-like. Les protéines DING sont des protéines ubiquitaires nommées ainsi en raison de leur extrémité N-terminal très conservée DINGGG-. Bien que largement représentées chez les bactéries, ces protéines ont été identifiées initialement chez l’homme en vertu de leurs propriétés biologiques ou leur implication dans les maladies, y compris dans l’inhibition du VIH. La présence chez l’homme de telles protéines soulève plusieurs questions quant à leur rôle lors de l’infection par ce virus. Nous avons entrepris une étude visant à quantifier ces protéines chez une population d’individus infectés par le VIH. Nos résultats montrent une augmentation surprenante de leur concentration chez ces derniers par rapport aux sujet sains. D’autre part, nos travaux sur les protéines DING nous ont amené à nous intéresser à la famille des DING-like, très proche de la famille des protéines DING. Inversement, les protéines DING-like sont exclusivement bactériennes. En plus de leur capacité à fixer le phosphate, certains membres de cette famille semblent jouir d’une activité phosphatase. Durant ce travail nous avons caractérisé structuralement et enzymatiquement deux représentants de ces protéines isolés à partir de Pseudomonas aeruginosa. L’analyse structurale de ces protéines ainsi de la caractérisation de leurs activités pourraient être d’un grand intérêt afin de comprendre leur rôle dans le schéma d’acquisition du phosphate chez cette bactérie Phosphate acquisition from the extracellular environment is a key process for all living cells. In bacteria, its importation is ensured, in part, by high affinity phosphate binding proteins (PBP). During this work, we are interested to two families of PBPs named DING and DING like proteins. DING proteins are ubiquitous proteins, so named due to their highly conserved N-terminal sequence DINGGG-. Although widely represented in bacteria, these proteins were initially identified in human by virtue of their biological properties or their involvement in diseases, including in HIV-inhibition. Currently, the anti-HIV activity has been shown for two human members of the DING family, HPBP and X-DING CD4. The presence in human of such proteins raises numerous questions about their role during HIV-infection. Thus, we undertook a study to evaluate their serum concentration in HIV-infected patients. Our results shows a surprising increase of the concentration of DING proteins in this population, compared to controls. On the other hand, our work on the DING proteins family led us to be interested on the family of DING-like proteins, closely related to the DING family. Unlike DING proteins, DING-like members were identified exclusively in bacteria. In addition to their ability to bind phosphate, some DING-like members appear to have a phosphatase activity. In this work we have characterize structurally and enzymatically two members of this family isolated from Pseudomonas aeruginosa. The structural analysis of these proteins combined with activities characterization could be of a great interest in order to understand their role in phosphate acquisition in this bacterium

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Gebhard, Susanne, and n/a. "The Phn and Pst systems of Mycobacterium smegmatis : phosphate transport and gene regulation." University of Otago. Department of Microbiology & Immunology, 2006. http://adt.otago.ac.nz./public/adt-NZDU20070502.112113.

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Abstract:

Phosphate is an essential but often growth-limiting nutrient for bacteria. At low concentrations of phosphate in the growth medium, bacteria induce high-affinity uptake systems for phosphate, and this is usually the ABC-type phosphate specific transport system Pst. In the fully sequenced genomes of pathogenic species of mycobacteria, several copies of the genes encoding for the Pst system (pstSCAB) have been identified and some of these genes have been shown to be virulence factors. The reasons for the presence of multiple copies of pst genes in pathogenic mycobacteria are not understood, and phosphate transport by these bacteria, as well as the gene regulation involved, is poorly characterised. The fast-growing M. smegmatis contains only a single copy of the pst operon, but we recently identified a gene locus containing three genes, phnDCE, which encode for a putative ABC-type phosphate/phosphonate transport system, and a gene, phnF, which encodes for a putative transcriptional regulator of the HutC subfamily of GntR like regulators. To identify a function for the PhnDCE transport system and to characterise high-affinity phosphate transport in M. smegmatis, we created allelic exchange mutants in phnD and pstS, as well as a phnD pstS double deletion mutant. All three mutants failed to grow in minimal medium containing 10 mM phosphate, while the wildtype was able to grow in the presence of micromolar phosphate concentrations. No differences were observed in complex growth medium. Steady-state levels of [��P]-phosphate uptake were approximately 25% lower in all mutant strains as compared to the wildtype. Kinetics of phosphate uptake in the wildtype strain when grown at low phosphate concentrations (50 [mu]M P[i]) were biphasic, suggesting the presence of two inducible transport systems with apparent K[m] values of 16 [mu]M P[i] and 64 [mu]M P[i], respectively. Analysis of the kinetics of phosphate transport in the mutant strains led us to the proposition that the Pst system has an apparent Km value of ca. 16 [mu]M P[i], and the Phn system has an apparent Km of ca. 60 [mu]M P[i]. A third inducible phosphate transport system, which was active in the double mutant strain, had an apparent K[m] of ca. 90 [mu]M P[i]. Uptake of phosphate in all strains was not inhibited by the presence of excess phosphonates or phosphite, suggesting that all three transport systems were specific for phosphate. The study of phosphate transport in the presence of various metabolic inhibitors revealed that uptake by the Phn and Pst systems is driven by ATP-hydrolysis, consistent with ABC-type transport, while the third, unidentified transport system may be driven by the proton motive force. We showed that phnDCE formed an operon, and that the promoter area of the operon lies within 200 bp of the start of phnD. To investigate the regulation of the phn and pst genes, β-galacosidase activities of strains carrying transcriptional lacZ-fusions of the pstSCAB, phnDCE and phnF promoter areas, and levels of mRNA of the phn and pst genes were studied. All genes were induced when phosphate concentrations fell below a threshold value of 30 [mu]M, which coincided with a shift in the growth characteristics of M. smegmatis. Expression of the pst operon appeared to be controlled directly by the PhoPR two-component regulatory system, while the phn operon may be under direct or indirect control by PhoPR. To identify a role for PhnF in the regulation of phn gene expression, we created a phnF deletion mutant. PhnF appeared to repress transcription of phnDCE and phnF under phosphate-replete conditions. We identified two putative binding sequences for PhnF in the intergenic region between phnD and phnF with the sequence TGGTATAGACCA, which is similar to the proposed recognition consensus for HutC-like transcriptional regulators. Using site-directed mutagenesis of these sequences, we demonstrated that they are required for the repression of phnDCE and phnF. To prove PhnF binding to these potential binding sites, we attempted to express the M. smegmatis PhnF protein in E. coli, but could not obtain soluble recombinant protein. Electrophoretic mobility shift assays of the phnDCE promoter fragment using cell-free crude extracts of M. smegmatis were not successful. We propose that Pst and Phn both constitute high-affinity phosphate specific transport systems of M. smegmatis, and that a third inducible phosphate transport system is present in this bacterium. PhnF is required for repression of phnDCE and phnF transcription under phosphate-replete conditions, while induction of the pst operon, and possibly the phn operon, under phosphate-limited conditions involves the PhoPR system.

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Salaün, Christine. "Structure du récepteur du rétrovirus murin amphotrope/transporteur de phosphate PiT-2 : topologie, assemblages quaternaires et modulation in situ par le phosphate." Paris 6, 2001. http://www.theses.fr/2001PA066474.

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Ekani, Nkodo Axel. "Transport électrophorétique de l'ADN en solution de polymères neutres." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2001. http://www.theses.fr/2001STR13123.

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Gray, Alexander. "Uptake and metabolism of purine nucleotide and pyridoxal phosphate precursors in Trypanosoma brucei brucei." Thesis, University of Edinburgh, 1988. http://hdl.handle.net/1842/18920.

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Mavoungou, Donatien. "Hypertension et protéines de transport de l'aldostérone et du sulfate de DHEA." Lyon 1, 1986. http://www.theses.fr/1986LYO10033.

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Abstract:

Chez l'hypertendu noir africain, l'activite de la renine plasmatique est basse ou completement supprimee et les taux de sulfate de dehydroepiandrosterone sont eleves. Les diuretiques se sont reveles tres efficaces dans le traitement de base. On trouve une prevalence plus elevee de l'hypertension chez les pygmees. On trouve une capacite de liaison de l'aldosterone a abg diminuee chez des sujets atteints de cancer

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Brohée, Sylvain. "Etude bioinformatique du réseau d'interactions entre protéines de transport ches les Fungi." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2008. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/210432.

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Abstract:

Les protéines associées aux membranes sont d'une importance cruciale pour la cellule. Cependant, en raison d'une plus grande difficulté de manipulation, les données biochimiques les concernant sont très lacunaires, notamment au point de vue de la formation de complexes entre ces protéines.L'objectif global de notre travail consiste à combler ces lacunes et à préciser les interactions entre protéines membranaires chez la levure Saccharomyces cerevisiae et plus précisément, entre les transporteurs. Nous avons commencé notre travail par l'étude d'un jeu de données d'interactions à grande échelle entre toutes les perméases détectées par une méthode de double hybride spécialement adaptée aux protéines insolubles (split ubiquitin). Premièrement, la qualité des données a été estimée en étudiant le comportement global des données et des témoins négatifs et positifs. Les données ont ensuite été standardisées et filtrées de façon à ne conserver que les plus significatives. Ces interactions ont ensuite été étudiées en les modélisant dans un réseau d'interactions que nous avons étudié par des techniques issues de la théorie des graphes. Après une évaluation systématique de différentes méthodes de clustering, nous avons notamment recherché au sein du réseau des groupes de protéines densément interconnectées et de fonctions similaires qui correspondraient éventuellement à des complexes protéiques. Les résultats révélés par l'étude du réseau expérimental se sont révélés assez décevants. En effet, même si nous avons pu retrouver certaines interactions déjà décrites, un bon nombre des interactions filtrées semblait n'avoir aucune réalité biologique et nous n'avons pu retrouver que très peu de modules de protéines de fonction semblable hautement inter-connectées. Parmi ceux-ci, il est apparu que les transporteurs d'acides aminés semblaient interagir entre eux.L'approche expérimentale n'ayant eu que peu de succès, nous l'avons contournée en utilisant des méthodes de génomique comparative d'inférence d'interactions fonctionnelles. Dans un premier temps, malgré une évaluation rigoureuse, l'étude des profils phylogénétiques (la prédiction d'interactions fonctionnelles en étudiant la corrééélation des profils de présence - absence des gènes dans un ensemble de génomes), n'a produit que des résultats mitigés car les perméases semblent très peu conservées dès lors que l'on considère d'autres organismes que les \ Doctorat en Sciences info:eu-repo/semantics/nonPublished

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Pendaries, Caroline. "Synthèse et rôle d'un nouveau second messager lipidique : le phosphatidylinositol 5-phosphate." Toulouse 3, 2005. http://www.theses.fr/2005TOU30141.

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Abstract:

Outre leur rôle de constituants des membranes, les phospholipides participent de façon dynamique à de nombreux mécanismes de signalisation intracellulaire. C'est en particulier le cas des phosphoinositides qui exercent leur rôle en tant que précurseurs de seconds messagers ou en organisant directement de façon spatio-temporelle certaines grandes voies de signalisation. Leurs taux sont finement contrôlés par le jeu de kinases, phosphatases et phospholipases spécifiques dont la dérégulation peut conduire à des pathologies telles que cancers ou maladies génétiques. Récemment, un nouveau phosphoinositide, le phosphatidylinositol 5-phosphate (PI(5)P), a été identifié. Nous avons étudié son rôle en utilisant un modèle d'infection par le pathogène Shigella flexneri. Au cours de l'invasion, cette bactérie injecte dans la cellule hôte une PI(4,5)P2 4-phosphatase, IpgD, qui transforme alors une fraction importante de PI(4,5)P2 en PI(5)P. Cette conversion induit l'activation de la voie du proto-oncogène Akt. Des sondes spécifiques liant le PI(5)P ont permis de colocaliser ce dernier avec la forme activée d'Akt au niveau du foyer d'entrée de la bactérie. L'infection avec des Shigelles sauvages ou délétées d'IpgD, ou l'expression ectopique d'IpgD ont montré que la production de PI(5)P conduit à une augmentation des produits de la phosphoinositide 3-kinase (PI3K) responsables de l'activation d'Akt. L'implication spécifique du PI(5)P dans ce mécanisme a été déterminée par une série d'approches génétiques et biochimiques permettant de manipuler sélectivement les taux intracellulaires de PI(5)P ou d'autres phosphoinositides. . Besides their structural role as membrane components, phospholipids play an active part in the regulation of many intracellular signalling pathways. This is particularly the case for phosphoinositides that act as precursors of second messengers or that govern signaling pathways in a spatio-temporal manner. Phosphoinositides levels are tightly controled by specific kinases, phosphatases and phopholipases, and deregulation of some of these enzymes have been linked to pathologies such as cancers or genetic diseases. Recently, a new phosphoinositide, the phosphatidylinositol 5-phosphate (PI(5)P), has been identified. We have studied the function of PI(5)P using an infection model with the pathogen Shigella flexneri. During invasion, the bacteria injects in the host cell the PI(4,5)P2 4-phosphatase, IpgD, that was shown to convert most of the PI(4,5)P2 into PI(5)P. This conversion induces the activation of the Akt oncogenic pathway. Specific probes that bind PI(5)P enable us to colocalize this lipid with activated Akt at entry foci. .

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Ducluzeau, Pierre-Henri. "Régulation par l'insuline du transport du glucose dans l'adipocyte." Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO10014.

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Abstract:

L'insuline augmente le transport du glucose dans l'adipocyte par la translocation à la membrane plasmatique d'un transporteur du glucose, Glut4, appartenant à un groupe de vésicules spécialisées. A l'état de base, ces vésicules sont séquestrées en position peri-nucléaire par le réseau de microtubules. L'insuline stimule fortement la translocation des vésicules contenant Glut4 à la membrane plasmatique en utilisant une double voie de signalisation : la voie dépendante de la phosphatidylinositol 3-kinase et la voie dépendante de la TC-10-kinase. La PKB est une sérine-thréonine kinase indispensable à l'action de l'insuline sur Glut4. Notre hypothèse est que la PKB, en plus de son activation par l'insuline en position membranaire, joue également un rôle au niveau même des vésicules Glut4. En utilisant des techniques d'imagerie cellulaire avec la Green Fluorescent Protein, nous montrons que l'expression de forme négative de PKB au niveau des vésicules Glut4 inhibe leur translocation en réponse à l'insuline. L'expression d'un mutant constitutionnellement actif n'a aucun effet par lui-même mais n'altère pas la translocation induite par l'insuline. In vivo, nous observons dans le tissu adipeux de sujets diabétiques insulinorésistants, une diminution de l'expression du gène codant pour Glut4 à l'état de base, associé à un défaut de stimulation de son expression en réponse à l'insuline. Notre travail montre que le transport du glucose dans l'adipocyte est un processus finement régulé par l'insuline et que la PKB possède un rôle fondamental dans cette régulation. Les sujets présentant une résistance à l'action de l'insuline ont également une baisse d'expression de Glut4 dans le tissu adipeux dont les conséquences sur le métabolisme adipocytaire restent à déterminer.

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Xie, Wensheng. "Phosphate homeostasis and transport in relation with the liver microsomal glucose-6-phosphatase system." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 2000. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk1/tape2/PQDD_0020/NQ55480.pdf.

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Klein, Cécile. "Production de quatre isoformes de protéines de transfert de lipides du blé dans "Pichia pastoris". Expression des gènes codant ces protéines dans le blé." Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20065.

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Abstract:

Les proteines de transfert de lipides (ltp) sont des proteines des faible masse moleculaire qui sont capables de realiser in vitro un transfert de lipides entre deux membranes. Dans le ble, les genes de ltp forment une famille mutigenique et il existe au moins cinq genes de ltp exprimes dans le grain de ble. Dans un premier temps, nous avons utilise le systeme d'expression levurien pichia pastoris pour produire quatre isoformes de ltp de ble dur (triticum durum) et de ble tendre (triticum aestivum). Ce systeme permet de secreter trois ltp recombinantes solubles dans le milieu de culture en quantite variable (1,1 g/l, 700 mg/l et 80 mg/l). Quand l'acide amine n-terminal de la proteine deduite de l'adnc est un residu alanine et non un residu isoleucine, la maturation de la ltp recombinante correspondante est optimale. Nos resultats ont montre qu'il y a une grande diversite de production selon le clone considere et les conditions de cultures utilisees. Dans un deuxieme temps, nous avons suivi l'expression des genes de ltp de ble au cours de la maturation et de la germination du grain de ble dur, et l'effet de stress abiotiques sur l'expression de ces memes genes dans des plantules de ble dur. Au cours de la maturation, ce sont les transcrits des genes ltp4. 90 et ltp8. 3 qui sont les plus abondants. Apres application des stress abiotiques, une variation de la quantite de transcrits des genes ltp6. 48 et ltpd2 est observee dans les pousses. Chaque gene de ltp de ble etudie semble avoir une expression spatiale et temporelle specifique.

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Cescau, Sandra. "Sécrétion de l'hémophore HasA de Serratia marcescens via un transporteur ABC." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077213.

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Abstract:

Chez les bactéries à Gram négatif, la voie de sécrétion ABC (T1SS) permet l'export de protéines présentant un signal de sécrétion C-terminal non clivable. Les transporteurs sont constitués de 3 protéines membranaires : une ATPase de la famille largement répandue des protéines ABC, une deuxième protéine de membrane interne et une protéine de membrane externe de la famille de TolC. TolC participe également aux pompes d'efflux de détergents et d'antibiotiques, les T1SS et les pompes d'efflux co-exprimés se partageant TolC sans perte de fonctionnalité. Le complexe de sécrétion n'est pas associé de façon permanente. Sa formation est induite par l'interaction entre le signal de sécrétion et la protéine ABC. L'oligomérisation du transporteur a été étudié par des approches biochimiques : chromatographie d'affinité et pontage chimique. Les mécanismes moléculaires permettant l'association et la dissociation du transporteur sont inconnus. Lors de ces travaux, le T1SS modèle utilisé est celui de l'hémophore HasA de S. Marcescens. Nous avons montré que HasA dépourvu de son signal C-terminal induit une oligomérisation stable du transporteur, séquestrant la protéine TolC. La pénurie de molécules TolC disponibles pour l'association aux pompes d'efflux entraîne une sensibilité accrue au SDS. L'hyperproduction de la protéine TolC réverse le phénotype de sensibilité. L'expression du signal de sécrétion sous forme de polypeptide distinct restaure aussi la résistance montrant que le signal C-terminal est actif de façon intermoléculaire. Ainsi, l'hémophore a deux domaines d'interaction avec la protéine ABC : le signal C- terminal et un 2eme domaine dit domaine d'ancrage The Type I secretion System makes it possible the Gram negative bacteria to export proteins presenting an uncleaved C-terminal secretion signal. The transporter are constituted of 3 proteins: a membrane ATPase of the large family of ABC proteins, a second cytoplasmic membrane protein and an outer membrane protein belonging to TolC family. TolC is multifunctional. It participates also to efflux pump which expulse detergents and antibiotics. When they are co-expressed, T1SS and efflux pump share TolC without lost of functionality. The secretion complex is not permanently associated. Its formation is induced by the interaction between the secretion signal and the ABC protein. The oligomerisation of the transporter has been studied by several biochemical approaches: affinity chromatography and cross-linking. Th molecular mechanisms of the association-dissociation of the transporter are unknown. During this work, the model studied was the T1SS of the HasA hemophore of S. Marcescens. We have shown that Has deleted for its C-terminal secretion signal induced a stable oligomerisation of the transporter, trapping TolC proteins. The unavailability of TolC molecules for the efflux pump involved a increased SDS sensitivity. The hyperproduction of the TolC protein reversed this phenotype. The expression of the secretion signal as a single molecule also restored the resistance This suggests that the secretion signal is active in an intermolecular manner. Thus, the hemophore presents 2 interaction domains with the ABC protein: the secretion signal and a second site name the anchoring domain

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Schlosser, Margarete [Verfasser], Hans-Joachim [Akademischer Betreuer] Kleebe, and Christoph [Akademischer Betreuer] Schüth. "Vapor transport sintering of calcium phosphate ceramics / Margarete Schlosser. Betreuer: Hans-Joachim Kleebe ; Christoph Schüth." Darmstadt : Universitäts- und Landesbibliothek Darmstadt, 2012. http://d-nb.info/1106453352/34.

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Chirivino, Dafne. "Rôle de l’ezrine dans l’endocytose et la stabilité des récepteurs de type tyrosine kinase." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA112281.

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Abstract:

L’ezrine appartient à la famille des protéines ERM. Ces protéines assurent la liaison entre la membrane plasmique et le cytosquelette d’actine. L’ezrine est impliquée dans le trafic de protéines membranaires, cependant sa fonction dans ce processus n’est pas connue à ce jour. Des cribles doubles hybrides utilisant l’ezrine comme appât ont permis l’identification de protéines impliquées dans le transport de protéines membranaires. Nous avons étudié la fonction de l’interaction de l’ezrine avec la sous unité Vps11 du complex HOPS et WWP1, une ubiquitine ligase de type E3. Le complexe HOPS orchestre la fusion de compartiments intracellulaires car il coordonne les activités des protéines Rab et SNARE. Nous avons étudié comment l’interaction de l’ezrine avec Vps11 régule le transport du récepteur de l’EGF vers la voie de dégradation par les lysosomes. Nous avons montré que cette interaction promeut la maturation des endosomes et qu’elle est nécessaire au transport du récepteur à l’EGF des endosomes précoces aux tardifs ainsi participant à la régulation de la dégradation du récepteur à l’EGF. WWP1 a été impliquée dans la régulation et la dégradation des récepteurs aux facteurs de croissance ainsi que des facteurs de transcription. Nous avons montré que l’interaction entre l’ezrine et WWP1 induit l’ubiquitylation de l’ezrine sans toutefois entraîner sa dégradation. Nous avons montré que l’interaction de l’ezrine avec WWP1 stabilise le récepteur c-Met. Nos résultats indiquent que l’ezrine participe au contrôle de la dégradation des récepteurs de type tyrosine kinase en régulant l’assemblage de complexes multiprotéiques impliqués dans le transport et l’ubiquitylation des protéines Ezrin is a member of the ERM protein family, which provides a regulated linkage between the plasma membrane and the actin cytoskeleton. Ezrin has been involved in the trafficking of membrane proteins however its function in this process is as of yet unknown. Two-hybrid screens performed with ezrin as baits led to the identification of proteins involved in membrane protein transport. We analyzed the function of ezrin association with two new interactors: the HOPS complex subunit Vps11 and the E3 ubiquitin ligase WWP1. Vps11 is a member of the tethering HOPS complex that coordinates Rab and SNARE functions during vesicular fusion along the endocytic pathway. We have investigated the role of ezrin/Vps11 interaction in the endocytosis of the EGF receptor. We have shown that the interaction between ezrin and the HOPS complex promotes endosome maturation and is necessary for EGF receptor transport from early to late endosomes, therefore participating in the regulation of EGFR endocytosis and degradation. WWP1 is an E3 ubiquitin ligase of the Nedd4 family. A role for WWP1 was identified in the regulation and degradation of growth factors receptors and transcription factors. We have shown that Ezrin/WWP1 interaction results in ezrin ubiquitylation, but is not involved in regulating ezrin degradation. Rather, we were able to show that this ubiquitylation likely mediates protein interaction and that the binding between ezrin and WWP1 promotes c-Met receptor stabilization. Altogether our results indicate that ezrin participates in the control of tyrosine kinase receptor degradation by regulating the assembly of multimeric complexes involved in protein trafficking and ubiquitylation

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Beneteau, Julie. "Etude de la structure et de la fonction des protéines phloémiennes PP2 chez arabidopsis thaliana." Paris 11, 2008. http://www.theses.fr/2008PA112296.

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Abstract:

Chez les dicotylédones, des corps protéiques, caractéristiques des tubes criblés appelés protéines P (protéines du Phloème), peuvent être observés par microscopie électronique. Chez les cucurbitacées, 2 constituants majeurs des protéines P ont été identifiés: les PP1 (Phloem Proteins 1) et les PP2 (Phloem Proteins 2). Afin d’élucider le rôle des PP2 dans le fonctionnement du phloème chez Arabidopsis thaliana, nos travaux se sont basés sur deux hypothèses: les PP2 auraient un rôle dans la régulation des flux de sève via des propriétés auto-associatives, ou dans le transport de macromolécules, par rétention ou facilitation de leur translocation dans les tubes criblés. L’étude de lignées affectées dans l’expression du gène PP2-A1 a mis en évidence des altérations dans le profil vasculaire des cotylédons et des organes latéraux, des modifications d’architecture et une réduction de la croissance des plantes. Ces observations suggèrent que la dérégulation du gène PP2-A1 affecterait différents processus de développement, via des perturbations de la signalisation ou de la nutrition. La protéine PP2-A1 a été produite par voie recombinante en système hétérologue et présente un comportement original en solution où, selon les conditions, des oligomères, de structure étendue et branchée et de degré d’agrégation compris entre 3 et 24, ont été identifiés. L’hypothèse est avancée que les oligomères formeraient les nuclei à l’origine de la formation des filaments selon un mécanisme de « nucléation – polymérisation ». Enfin, il a été mis en évidence l’interaction de PP2-A1 avec des oligomères de N-acetyl-glucosamine et riche en mannose, démontrant ainsi ses propriétés de lectine In dicotyledonous plants, some protein bodies, characteristic of sieve elements, called P Proteins (for Phloem Proteins), are observed by electron microscopy. In Cucurbitaceae species, two major components of P Proteins have been identified: PP1 (Phloem Proteins 1) and PP2 (Phloem Proteins 2). In order to elucidate the role of PP2 in Arabidopsis thaliana phloem function, our work was based on two hypotheses: PP2 proteins may have either a role in the regulation of the phloem sap flow through self-assembly properties, or in the transport of macromolecules by retention or facilitation of their translocation in sieve elements. The study of lines affected in the expression of PP2-A1 (RNAi or insertion lines) showed alterations in the vascular pattern of cotyledons and lateral organs, modifications of architecture and a reduced growth of the plants. These observations suggest that the deregulation of PP2-A1 could affect different processes of development, through indirect disruptions of either signalling or nutrition. The protein PP2-A1 was produced by heterologous expression and displays an original behaviour in solution where, depending on conditions, oligomers were identified with extended and branched structures and with a degree of association between 3 and 24. It was suggested that oligomers would form nuclei at the origin of filaments formation through a “nucleation-polymerization” mechanism. Finally, it was shown that PP2-A1 interacted with N-acetylglucosamine oligomers and high mannose N-glycans, highlighting its lectin activity

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Monterrat, Carole. "Les synaptotagmines et le transport vésiculaire dans les cellules β pancréatiques : une isoforme pour chaque étape ?" Bordeaux 1, 2004. http://www.theses.fr/2004BOR12941.

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Abstract:

La libération de l'insuline dans le milieu extracellulaire nécessite la fusion d'une vésicule large à cœur dense (VLCD) avec la membrane plasmique. Ce phénomène, appelé exocytose, est déclenché par une augmentation de la concentration intracellulaire de calcium. Le senseur calcique des cellules β pancréatiques n'est pas strictement connu, cependant une famille de protéines, les Synaptotagmines (Syt) est impliquée dans cette fonction dans d'autres types cellulaires. Afin de caractériser cette famille de protéines dans les cellules insulino-sécrétoires, nous avons produit des anticorps des isoformes des Syt (Syt 8 à Syt 11 et Syt 13). Grâce à ces anticorps et par des techniques de fractionnement cellulaire et d'immunofluorescence nous avons pu établir (1) que l'isoforme Syt 8 a un comportement biochimique de protéine cytosolique (2) que Syt 10 est exprimée dans les cellules primaires du pancréas endocrine, dans les neurones d'hippocampe et dans les cellules chromaffines (3) que Syt 11 et Syt 13 sont exprimées dans les cellules insulino-sécrétoires (4) que Syt 11 est localisée, dans les cellules β pancréatiques, dans un compartiment précoce de la voie de sécrétion qui pourrait être le compartiment intermédiaire. De plus Syt 7, dans les cellules insulino-sécrétoires, n'est pas localisée sur les VLCD ou la membrane plasmique et ne joue donc pas le rôle de senseur calcique de l'exocytose de l'insuline. En revanche, Syt 9 est localisée sur les VLCD dans ces cellules et pourrait donc jouer le rôle de senseur calcique de la sécrétion d'insuline. En conclusion, ce travail a permis de caractériser plus précisément la distribution des isoformes des Syt dans les cellules insulino-sécrétoires. Grâce aux anticorps spécifiques et au travail de localisation nous avons ouvert la voie des études fonctionnelles de cette famille de protéines qui semble impliquée dans toutes les étapes du transport vésiculaire.

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Galmiche-Rolland, Louise Planelles Gabrielle. "Mutations du transporteur rénal sodium/phosphate NPT2a associées à des lithiases rénales chez l'homme." [S.l.] : [s.n.], 2005. http://theses.univ-nantes.fr/thesemed/SPEgalmiche.pdf.

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Paradis, Geneviève. "Transport de protéines thérapeutiques à travers diverses barrières biologiques à l'aide d'un ligand peptidique." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2003. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4604.

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Abstract:

Plusieurs protéines ont été identifiées comme ayant des effets bénéfiques contre plusieurs maladies. Celles-ci sont normalement administrées par la voie intraveineuse (i.v.) ce qui limite et complique leur utilisation. En effet, le transport des protéines à travers les diverses barrières biologiques est hautement limité par leur grosseur et leurs propriétés biochimiques intrinsèques. Dans la nouvelle ère de la protéomique, la poursuite de la recherche afin de trouver un système de transport protéique a gagné beaucoup d'importance. Il existe différentes méthodes pour augmenter le transport protéique dont l'utilisation d'un ligand peptidique. Exploitant cette dernière méthode, nous avions comme objectifs d'améliorer l'efficacité du transport protéique à travers les barrières biologiques en fusionnant le peptide SP8ca à une protéine cargo de façon fonctionnelle et de vérifier si la fusion d'un tel peptide a un impact sur la biodistribution et la biodisponibilité des protéines".--Résumé abrégé par UMI.

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Parent, Audrey. "Découverte de nouveaux complexes protéiques impliqués dans la synthèse et le transport intracellulaire des récepteurs couplés aux protéines G." Thèse, Université de Sherbrooke, 2010. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4304.

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Abstract:

Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPGs) constituent la plus grande famille de récepteurs membranaires et sont impliqués dans le contrôle de la majorité des processus physiologiques. Dans le modèle classique, la signalisation par les RCPGs se résumait à l'activation de protéines G hétérotrimériques capables de moduler l'activité d'effecteurs, qui, à leur tour, contrôlent la concentration intracellulaire de seconds messagers tels que l'AMPc ou le calcium. Cette vision classique de la signalisation s'est par contre complexifiée au fil des années et l'on sait maintenant que les RCPGs interagissent avec une multitude d'autres protéines afin de transmettre de façon spécifique les signaux extracellulaires. Ainsi, pour bien comprendre comment est régulé un RCPG, il devient primordial de connaître les protéines interagissant avec celui-ci. Nous avons donc entrepris d'identifier de nouveaux partenaires d'interaction pour les récepteurs DP (récepteur de la prostaglandine D[indice inférieur 2]), TP[bêta] (récepteur du thromboxane A[indice inférieur 2]) et [bêta][indice inférieur 2]-adrénergique, puis, de déterminer le rôle de ces complexes protéiques dans la fonction des récepteurs. Lors d'un criblage par double-hybride visant à identifier de nouveaux partenaires d'interaction pour DP, nous avons identifié la protéine ankyrin repeat domain-containing protein 13C (ANKRD13C), une protéine n'ayant pas encore été caractérisée jusqu'à maintenant. Des études de localisation ont montré qu'ANKRD13C est associée à la membrane du réticulum endoplasmique (RE), où elle interagit avec DP. Cette interaction facilite d'abord la biogenèse du récepteur en ralentissant la dégradation des récepteurs nouvellement synthétisés. Elle régule aussi le transport de DP vers la membrane plasmique en induisant la rétention dans le RE des formes immatures du récepteur. Elle facilite finalement la dégradation par le protéasome des formes de récepteurs retenues dans le RE. Ces expériences suggèrent donc un rôle de chaperonne pour ANKRD13C dans la biogenèse du récepteur DP. La protéine adaptatrice RACK1 (Receptor for Activated C-Kinase 1) a ensuite été identifiée comme nouveau partenaire d'interaction pour l'isoforme [bêta] du récepteur du thromboxane A[indice inférieur 2] (TP[bêta]).Les résultats présentés dans cette étude montrent que les deux protéines interagissent directement et qu'elles forment un complexe au niveau du RE. L'interaction entre TP[bêta] et RACK1 s'est d'ailleurs avérée essentielle pour que le récepteur puisse être exporté du RE vers la membrane plasmique. Ces travaux ont donc révélé un rôle majeur de RACK1 dans la fonction de TP[bêta], plus précisément au niveau de son transport vers la surface cellulaire. Finalement, une nouvelle interaction entre le récepteur [bêta][indice inférieur 2]-adrénergique ([bêta][indice inférieur2]-AR) et la petite protéine G Rab11 a été caractérisée.Les expériences réalisées démontrent que les deux protéines s'associent en cellules via une interaction directe. Une construction du [bêta][indice inférieur 2]-AR où les sites d'interaction avec Rab11 sont mutés a été générée. La mise en évidence d'un défaut de recyclage de ce mutant suite à une stimulation avec un agoniste spécifique a permis d'établir que l'interaction directe avec Rab11 est essentielle pour que le [bêta][indice inférieur 2]-AR puisse recycler de façon adéquate.Les résultats présentés dans cette thèse illustrent le rôle joué par trois nouveaux complexes protéiques dans la synthèse, l'export et le recyclage de RCPGs. L'identification et la caractérisation de ces nouvelles interactions permettra de mieux comprendre comment sont régulés les récepteurs DP, TP[bêta] et [bêta][indice inférieur 2]-adrénergique, et permettra éventuellement d'améliorer les connaissances quant à la régulation de l'ensemble des récepteurs couplés aux protéines G.

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Nunez, Quintana Laura Marcela. "Le cytochrome b5 humain comme modèle dans les mécanismes d'interactions pour la formation du complexe protéine-protéine dans les réactions de transport d'électrons du réticulum endoplasmique." Paris 11, 2006. http://www.theses.fr/2006PA112255.

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Abstract:

Les mécanismes de reconnaissance qui gouvernent les réactions de transfert d'électrons entre partenaires redox du réticulum endoplasmique ne sont pas complètement décrits. Nous avons étudié ce système en utilisant comme modèle le cytochrome b5 (cytb5), membre d'un complexe formé par le cytochrome P450 3A4 (CYP3A4) et la NADPH-cytochrome P450 réductase. Ces protéines sont constituées par un domaine hydrosoluble qui contient le centre redox et un domaine hydrophobe qui ancre la protéine à la membrane. Dans le cas du cytb5, ces deux segments sont reliés par un segment dit de jonction. Notre modèle d'étude se base sur les propriétés différentes de reconnaissance entre deux cytb5 de différentes espèces (humain et levure) et le CYP3A4 humain. Les études biochimiques sur les propriétés des protéines mosaïques montrent qu'une part de la reconnaissance entre cytb5 et CYP3A4 est modulée par le segment de jonction et une partie du domaine membranaire. Nous présentons également une analyse structurale et dynamique par RMN du liquide de la partie hydrosoluble du cytb5 humain, ainsi qu'une approche structurale du domaine membranaire de cette protéine Protein recognition mechanisms which control electron transfers between redox partners in the endoplasmic reticulum are not completely understood. We have studied this system using, as a model, the cytochrome b5 (cytb5), member of a multi-protein complex formed by the P450 3A4 (CYP3A4) and NADPH-cytochrome P450 réductase. These proteins consist of a water-soluble domain that contains the redox center and a hydrophobic domain which anchors protein to the membrane. In the case of cytb5, these two segments are connected by a junction segment. Our study is based on the different recognition properties of two cytb5 of various species (human and yeast) with the human CYP3A4. The biochemical studies on the properties of mosaic proteins show that a part of the recognition between cytb5 and CYP3A4 is modulated by the junction segment and part of the membrane domain. We also present a structural and dynamic analysis by liquid NMR of the hydrophylic part of the human cytb5, as well as a starting approach of the structural properties of the membrane domain of this protein

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Grillo, Sophie. "Étude du rôle des protéines phosphatidyl inositol 3 kinase et protéine kinase B dans le transport de glucose stimulé par l'insuline." Nice, 2000. http://www.theses.fr/2000NICE5446.

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Abstract:

L'insuline stimule le transport de glucose en recrutant les transporteurs de glucose Glut4, d'un compartiment intracellulaire vers la membrane plasmique. L'activité PI 3 kinase est nécessaire à ce mécanisme. Mais certains stimuli qui l'activent ne stimulent pas le transport de glucose, indiquant l'implication d'une autre voie en réponse à l'insuline. Nous avons recherché si la PI 3 kinase était suffisante pour le transport de glucose. L'expression d'une forme constitutivement active de la PI 3 kinase entraîne la translocation de Glut4 dans les adipocytes de rats isolés. L'activité de la PI 3 kinase serait donc suffisante au transport de glucose. Nous avons ensuite étudié le rôle potentiel des protéines PDK1 et PKB dans ce mécanisme. PDK1 active PKB de manière dépendante de la PI 3 kinase en réponse à l'insuline. PDK1 et PKB possèdent un domaine PH qui interagit avec les PI3,4,5P3. La liaison du domaine PH de PKB avec les PI3,4,5P3 entraîne sa translocation du cytosol vers les membranes et sa phosphorylation par PDK1. Les surexpressions de PDK1 ou de PKB constitutivement active induisent la translocation de Glut4 en absence de stimulation par l'insuline, de plus l'expression de PDK1 sans domaine PH inhibe cette translocation stimulée par l'insuline. Cela suggère un rôle de PDK1 et PKB dans la stimulation du transport de glucose par l'insuline. Pour mieux comprendre le mécanisme d'activation de PKB, nous avons étudié la localisation subcellulaire de PDK1 lors de l'activation par l'insuline et le peroxovanadate, un agent insulino-mimétique. (. . . )

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Dissertations / Theses on the topic 'Protéines de transport du phosphate'

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