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Dissertations / Theses on the topic 'Protéines – Dénaturation'
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1
Toustou, Mathilde. "Stabilisation thermique de protéines par des polymères." Paris 6, 2004. http://www.theses.fr/2004PA066424.
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2
Awama, Mohamad Ayman. "Relation structure-fonction dans la famille des guanidino kinases." Lyon 1, 2008. http://www.theses.fr/2008LYO10255.
Full textAbstract:
La première partie de cette thèse décrit la dénaturation comparée de plusieurs guanidino kinases (GdnK) de structures quaternaires variées (monomère, dimère ou octamère). Ces enzymes catalysent le transfert réversible du phosphate γ de l’ATP vers un accepteur guanidylique (créatine, arginine). Nous avons montré que, pour les créatine kinases multimériques, l’association des sous-unités est requise pour l’expression de l’activité enzymatique mais que cette association ne leur apporte pas une plus grande stabilité conformationnelle par rapport à une arginine kinase monomérique. Dans la seconde partie, nous décrivons la caractérisation d’une nouvelle guanidino kinase à la structure dupliquée qui est exprimée dans les cercaires de Schistosoma mansoni. Nous avons mis au point un protocole d’expression et de purification pour cette enzyme, identifié ses substrats physiologiques, défini les paramètres enzymatiques pour ces substrats dans le sens de formation du phosphagène, cristallisé cette enzyme et résolu sa structure tridimensionnelle par diffraction des rayons XThe first part of this thesis describes the comparative unfolding of guanidino kinases with differing quaternary structure (monomer, dimer or octamer). These enzymes catalyze the reversible transfer of the ATP γ phosphate to a guanidylic acceptor (creatine, arginine). We have shown, that for dimer or octamer creatine kinases, association of subunits is required for expression of catalytic activity. However, a higher level of quaternary structure does not provide these enzymes an increased conformational stability as compared to a monomeric arginine kinase. In a second part, we describe the characterization of a new guanidino kinase displaying a duplicated structure and which is expressed in Schistosoma mansoni cercariae. We have developed expression and purification protocols for the untagged protein, identified its physiological substrates, defined its enzymatic parameters in the direction of phosphagene formation, crystallized this enzyme and determined its three-dimensional structure by X-ray diffraction
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Capron, Arnaud. "Etude de la voie de protéolyse D-box-dépendante chez les plantes." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2003. http://www.theses.fr/2003STR13191.
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4
Sourisseau, Tony. "Etude du système ubiquitine-protéasome dans l'apoptose." Rennes 1, 2002. http://www.theses.fr/2002REN10009.
Full textAbstract:
Les modifications post-traductionnelles constituent un niveau crucial de régulation de l'expression des gènes. Parmi elles, la conjugaison peptidique impliquant l'ubiquitine intervient entre autre dans la régulation de la stabilité protéique. Le travail présenté décrit le mode de régulation d'un facteur anti-apoptotique, Bag-1 (Bcl-2 AnthanoGene-1). Le contrôle de son niveau d'expression fait intervenir la voie ubiquitine-protéasome. L'enzyme de ligation de l'ubiquitine Siah2 (Seven In Absencia Homolog 2) a par ailleurs été identifiée comme étant potentiellement impliquée dans l'ubiquitination de Bag-1, stimulée par l'induction de l'apoptose. La caractérisation d'autres modulateurs de l'apoptose régulés par la voie ubiquitine-protéasome a été un objectif de notre travail. Un outil moléculaire nouveau a été mis au point et testés dans ce but. Il devrait permettre la purification des cibles d'ubiquitination et leur identification par les techniques de la protéomique.
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Solis, Pacheco Josue Raymundo. "Modifications de la surface de la [béta]-galactosidase de Kluyveromyces lactis : effets sur la stabilisation thermique." Toulouse, INSA, 2003. http://www.theses.fr/2003ISAT0007.
Full textAbstract:
L'effet de la modification de la surface de la b-galactosidase et sur sa stabilité thermique a été étudié. Deux types de molécules ont été utilisées pour la modification : la dextrane qui a un caractère nettement hydrophile et le polyéthylène glycol qui est un polymère amphiphile. La liaison covalente de la dextrane a été effectué grâce à l'aide du CNBr. Alors que la molécule de PEG a été fixé covalente à l'enzyme en utilisant du metoxypolyéthylène glycol activé avec s-chlorotriazine. Les propriétés de la b-galactosidase ainsi modifiées ont été étudiées. Des variations de la charge et du caractère hydrophobe de la surface consécutives aux modifications ont été observées par chromatographie. Des propriétés des enzymes modifiées par rapport à sa stabilité à été observée grâce à la détermination de d'effet protecteur et de la dénaturation par calorimétrie différentielle à balayage. Nous avons pu montrer que la liaison de la dextrane induit une faible augmentation de l'hydrophilie de la surface de l'enzyme, ainsi qu'une augmentation de sa stabilité thermique en milieu aqueux. La dérivatisation réalisée avec du PEG (bas niveau) donne lieu à un accroissement du caractère hydrophobe de la b-galactosidase. Toutefois une diminution très prononcée de l'activité de la b-galactosidase a pu être observée après ces modifications. La dénaturation de la b-galactosidase a été étudie en présence d'additifs tels comme la dextrane et le polyéthylène glycol, dans sa forme libre à plusieurs concentrations. Dans le deux cas se montre un effet protecteur par rapport à l'enzyme native sans additifsTwo types of molecules were used for the chemical modification of th beta-galactosidase : The dextran that has a hydrophile character and the glycol polyethylene that is an amphiphile polymer. The property of the modified beta-galactosidase were studied. The variations such that the hydrodynamics volume, the charge and the hydrophobe character of the surface ; also variations of catalytic parameters of the enzyme and his thermal stability. Property of modified enzymes in comparison with his stability to been observed thanks to the determination the protective effect and deactivation by differential determination scanning. We were able to show that the liaison of the dextran induces an increase of his thermal stability in aqueous environment. The realized modification with PEG (low level) give place to increase of the hydrophobe character of the beta-galactosidase. Nevertheless a very pronounced decrease of the activity of the beta-galactosidase could be observed after these modifications
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Linares, Laëtitia. "Caractérisation de l'ubiquitylation-dégradation médiée par Mdm2, de la protéine oncosuppressive p53." Montpellier 2, 2003. http://www.theses.fr/2003MON20079.
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7
Thirant, Cécile. "Approche protéomique de la physiopathologie des gliomes humains." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066338.
Full textAbstract:
Les gliomes malins sont les tumeurs primitives du système nerveux central humain adulte les plus fréquentes. Malgré les récentes avancées thérapeutiques, ces cancers restent incurables. Pour commencer, nous avons établi le profil protéomique des oligodendrogliomes (ODG) de l’adulte présentant la mutation de l’isocitrate déshydrogénase 1 (IDH1). Nous avons établi une signature des cellules tumorales, parmi une série de 68 protéines dérégulées dans le tissu tumoral. Nous avons ensuite établi un profil moléculaire de 42 protéines spécifiquement dérégulées dans les ODG mutés, en comparaison aux non mutés. Ensuite, nous avons établi les protéomes des cellules souches cancéreuses issues de glioblastomes de l’adulte (CSC), et les avons comparées à celui de cellules souches neurales normales (CSN), et au tissu tumoral d’origine. Parmi les protéines dérégulées dans les CSC, nous avons identifié le facteur Hepatoma-derived growth factor (HDGF) et montré qu’il est spécifiquement sécrété par les CSC, entrainant la prolifération et la migration des cellules endothéliales in vitro, et la formation d’une angiogénèse in vivo. Nous avons également testé le Résveratrol, une molécule naturelle aux propriétés anti-cancéreuses. Nous avons démontré que cette drogue est capable de cibler spécifiquement les CSC en épargnant les CSN, suggérant une application clinique potentielle. Enfin, nous avons pu identifier des cellules souches cancéreuses parmi les gliomes de l’enfant quel que soient le type et le grade de gliome. Nous les avons caractérisées et avons montré une corrélation entre le devenir des patients et le potentiel d’auto-renouvellement, proposé donc comme facteur de mauvais pronostic.
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Betton, Jean-Michel. "Étude du repliement in-vitro de la phosphoglycérate kinase in-vitro." Paris 11, 1987. http://www.theses.fr/1987PA112277.
Full textAbstract:
Cette thèse présente l’étude de la transition de dénaturation renaturation de la phosphoglycérate kinase (PGK) induite par le chlorure de guanidine. Dans la première partie, la transition conformationnelle a été étudiée à l’équilibre à l’aide de trois signaux: l’activité enzymatique, la fluorescence des tryptophanes et l’ellipcité. A partir de ces données, il a éte clairement constaté que le processus dévie significativement d’un modèle à deux états et qu’il existe des intermédiaires: les courbes de transition obtenues par les différents signaux ne coïncident pas et celle mesurée par dichroïsme circulaire est nettement asymétrique. Dans la seconde partie, les cinétiques de dénaturation et de renaturation ont été suivies par les mêmes signaux. Nous avons pu détecter plusieurs phases cinétiques. Les cinétiques expérimentales ont été comparées aux propriétés cinétiques de plusieurs schémas simulés. Un schéma minimum, tenant compte des diverses observations expérimentale été proposé. Dans la troisième partie, la réversibilité du processus de dénaturation a été étudiée en mesurant la réapparition de l’activité enzymatique. Certaines conditions expérimentales (0,8 M de chlorure de guanidine) permettent de piéger un intermédiaire structuré mal dépourvu de propriétés fonctionnelles. Cet intermédiaire correspond à une partie structurée du domaine C-terminal de la PGK. Ceci a été confirmé dans la dernière partie de la thèse où est présentée l’obtention du domaine C-terminal isolé par protéolyse ménagée. En conclusion, nous proposons un schéma pour la formation de la structure fonctionnelle de la phosphoglycérate kinase.
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Couthon, Fabienne. "Etude de la dénaturation d'une protéine dimérique : la créatine kinase de muscle de lapin." Lyon 1, 1995. http://www.theses.fr/1995LYO10257.
Full textAbstract:
La creatine kinase est un enzyme essentiel a la repartition de l'energie dans certains tissus comme les muscles squelettique et cardiaque ou le systeme nerveux. Il existe des isoenzymes mitochondriaux et cytosoliques. Ces derniers sont exclusivement dimeriques et formes de deux sous-unites qui peuvent etre de type different (m: muscle, b: systeme nerveux). Ainsi, trois isoformes distinctes de creatine kinase cytosoliques peuvent etre mise en evidence (mm, bb, mb). Les isoenzymes mitochondriaux presentent la caracteristique unique d'exister sous deux formes moleculaires (octamerique ou dimerique) interconvertibles sous l'effet du ph et des substrats de l'enzyme. Les deux types d'isoenzymes differents dans leur comportement et leur localisation ont cependant une similitude de sequence elevee, de l'ordre de 65 a 70%. Neanmoins, leur structure tridimensionnelle n'a pas encore ete resolue, les cristaux obtenus n'etant pas exploitables. Notre etude a ete focalisee sur la forme mm. Nous avons dans un premier temps etudie les caracteristiques structurales de cet enzyme en combinant des techniques biochimiques et biophysiques. Nous avons ensuite entrepris une etude de denaturation et de renaturation. Differents agents (comme l'uree, le chlorure de guanidine, le ph, les fortes concentrations salines) dont le mode d'action est variable ont ete utilises pour caracteriser les interactions qui stabilisent le monomere, le centre actif et la structure globale de l'enzyme. Nous avons aussi recherche la presence d'etats intermediaires stables et plus particulierement, nous avons recherche la presence d'un etat type globule fondu. Enfin, la derniere etape de notre travail a consiste a suivre les modifications induites par le dodecyl sulfate de sodium (sds). La structure des complexes sds-proteine a ete discutee par rapport aux differents modeles existants
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Nominé, Yves. "Caractérisation biophysique de la qualité des protéines de fusion : application à l'étude structurale et fonctionnelle de l'oncoprotéine virale E6." Strasbourg 1, 2002. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2002/NOMINE_Yves_2002.pdf.
Full textAbstract:
"L'oncoprotéine E6 des papillomavirus humains (HPV) à " haut-risque " est à l'origine du cancer du col de l'utérus. Elle participe à l'oncogénèse notamment en dégradant p53, la protéine cellulaire suppresseur de tumeurs. Le but de la thèse était d'obtenir la structure tridimensionnelle par Résonance Magnétique Nucléaire (RMN) de la protéine E6. Le manuscrit revient d'abord sur les différents états (micro- et macroscopique) d'une protéine globulaire en solution, et sur des notions telles que repliement et stabilité. Il rappelle ensuite les principes et limites de différentes techniques biophysiques appliquées à l'étude de protéines. Enfin, il décrit brièvement le contexte biologique de E6. Bien que sa séquence primaire soit connue depuis 1985, la protéine E6 n'avait pas encore été purifiée. Nous décrivons ici un protocole d'expression et de purification de cette molécule, en montrant tout d'abord que l'expression bactérienne de fusions MBP-E6 (Maltose Binding Protein) génère des " corps d'inclusion solubles ". Ces particules, engendrés par l'agrégation de protéines E6 mal repliées, restent toutefois en solution grâce à la haute solubilité de MBP. Grâce à ces observations, nous avons pu produire des échantillons de la protéine E6 entière soluble et repliée, puis de ses deux domaines à zinc. Nous avons finalement obtenu la détermination de la structure tridimensionnelle par RMN du domaine C-terminal de E6. L'amélioration de la qualité de E6 recombinante a permis également de démontrer l'interaction de E6 avec un motif structural d'ADN présent dans l'ADN cruciforme, puis de déterminer les paramètres cinétiques de cette interaction par BIAcore. Ce travail ouvre donc la voie à une meilleure compréhension moléculaire des modes d'actions de E6, et donc à de nouvelles stratégies de thérapie du cancer du col de l'utérus. De plus, nos méthodologies de contrôle et d'optimisation de la qualité des protéines de fusion sont généralisables à l'étude de toute protéine récalcitrante. "E6 is an oncoprotein produced by "high risk" Human Papillomaviruses (HPVs) involved in cervical cancers. E6 participates oncogenesis through different pathways, in particular by degrading the cellular tumor suppressor protein p53. The aim of this thesis was to solve the solution structure of E6 by Nuclear Magnetic Resonance (NMR). The introduction chapter first focuses on the different states (micro- and macroscopic) adopted by globular proteins in solution, including notions such as folding and stability. Then we record the principles, applications and limits of various biophysical techniques for the study of proteins. Finally, we briefly introduce the biological context of E6 protein. At the start of this work, E6 had never been purified although its sequence was known since 1985. In the results section, we first demonstrate that bacterial expression of E6 fused to the C-terminus of MBP (Maltose Binding Protein) generates " soluble inclusion bodies ". These particles, which originate from agregation of misfolded E6 moieties, remain soluble thanks to the high solubility of MBP moities. These observations have allowed us to produce soluble and folded samples of full-length E6 as well as its two zinc-binding domains. Finally, we have managed to solve the NMR structure of the C-terminal zinc-binding domain. On another hand, the optimized quality of our E6 samples have allowed us to demonstrate E6 binding to a particular DNA structural motif found in four-way DNA junctions. The kinetic parameters of this interaction have been determined by BIAcore. This work will provide a better understanding of the molecular pathways of E6 action and opens the way for new therapeutic strategies against cervical cancers. Furthermore, our methods for control and optimization of protein fusion quality can be generalized for future studies of other recalcitrant proteins
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Bossis, Guillaume. "Etude de la dégradation et de la sumoylation de la proto-oncoprotéine c-FOS." Montpellier 2, 2003. http://www.theses.fr/2003MON20052.
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Couturier, Bruno. "Étude conformationnelle de la phosphatase alcaline de mammifère : influence des ponts disulfure et de l'ancre glycosylphosphatidylinositol." Lyon 1, 1999. http://www.theses.fr/1999LYO10266.
Full textAbstract:
Les phosphatases alcalines sont des enzymes tres repandues des bacteries aux mammiferes. Les proteines des mammiferes se differencient des formes bacteriennes par la presence a l'extremite c-terminale d'un groupement glycosylphosphatidylinositol (gpi) qui permet leur ancrage sur la face externe de la membrane plasmique. Alors que la proteine d'escherichia coli est tres etudiee, les donnees structurales sont plus rares pour les formes de mammifere. Dans le but de mieux comprendre l'organisation structurale de cette enzyme, nous avons entrepris l'etude de la denaturation de la phosphatase alcaline d'intestin de buf en presence d'agents chaotropes et de differents reactifs des cysteines. Ces techniques ont ete appliquees a la proteine, avec et sans ancre gpi, afin d'obtenir des informations sur sa structure et d'evaluer l'influence de la partie lipidique sur la conformation de la partie proteique. Les resultats des etudes de denaturation par des agents chaotropes permettent de proposer un modele a trois etats : 1) l'etat natif est dimerique, actif, les trp et cys sont enfouis, 2) l'etat intermediaire est mis en evidence par l'exposition d'un premier pont disulfure, 3) l'etat denature est monomerique, inactif, les trp et cys sont exposes. De plus, nous mettons en evidence une contribution des cysteines a la conformation de la proteine : le premier pont disulfure intervient directement dans la stabilisation du site actif alors que le second joue un role dans la stabilisation reciproque des monomeres et du dimere. Ces resultats nous permettent de proposer une organisation structurale semblable a celle de la phosphatase alcaline d'e. Coli : chaque monomere comprendrait deux domaines dont l'un pourrait etre le siege d'un evolution divergente. L'etude de l'influence du gpi ne montre pas d'effet marquant de l'ancre sur la structure de la proteine mais suggere une modulation des interactions intermoleculaires.
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Duval, Caroline. "Elaboration de dérivés du pullulane à amphiphilie contrôlée : Application à l'extraction de protéines membranaires intégrales." Rouen, 2002. http://www.theses.fr/2002ROUES003.
Full textAbstract:
Les protéines membranaires intégrales très hydrophobes étant insolubles dans l'eau, l'emploi d'agents tensioactifs est nécessaire à leur purification et leur caractérisation en solution aqueuse. Parmi les tensioactifs récemment développés, des polymères amphiphiles synthétiques, les amphipols, présentent des potentialités intéressantes. Leur substitution par des biopolymères amphiphiles à propriétés similaires semblant très attractive, nous avons cherché à mettre au point des polysaccharides hydrophobiquement modifiés, capables d'extraire et de solubiliser des protéines membranaires dans des conditions non dénaturantes. Le polysaccharide choisi est le pullulane: hydrosoluble, flexible, sa modification chimique est bien maîtrisée. .Study of integral membrane proteins is of great importance for the understanding of cellular mechanisms, such as photosynthesis, respiration, or bacterial resistance to antibiotics. Those highly hydrophobic proteins are water insoluble; surfactants are thus necessary for their handling in aqueous solutions. Among surfactants recently developed for this use, amphiphilic polymers called amphipols display interesting potential. Amphiphilic biopolymers with similar properties would be particularly attractive. Therefore, we tried to develop hydrophobically-modified polysaccharides able to extract integral membrane proteins and to make them soluble, under non-denaturing conditions. Pullulan is a water-soluble, flexible polysaccharide. Its chemical modification is well controlled. A set of amphiphilic pullulan derivatives with moderate molar mass ( " 30 000 g. Mol-1) was prepared. Carboxymethyl groups were first introduced (0,2 to 1,2 per anhydroglucose unit) to favor water-solubility of amphiphilic derivatives. Large extents (up to 48%) of alkyl (C8 to C12) and 3-phenylpropyl hydrophobic chains were then grafted through amide or ester linkages. Amphiphilic carboxymethylpullulans display surface-active properties. Hydrophobic microdomain formation was evidenced in aqueous solution. According to the samples studied, various aggregation phenomena were observed. Some amphiphilic carboxymethylpullulans are actually able to extract membrane proteins from their lipid surrounding. Comparison of their capacities led to identify C4?18C10d (pullulan with 18% decyl groups and 91% ungrafted carboxymethyl groups) as the most efficient sample. The effect of this amphiphilic biopolymer on protein activity is similar to that of a mild detergent
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Welsch, Carole Alice. "Identification des voies métaboliques et cibles moléculaires impliquées dans le mécanisme d'action de l'immunosuppresseur FTY720 dans le système modèle de la levure Saccharomyces cerevisiae." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2002. http://www.theses.fr/2002STR13086.
Full textAbstract:
FTY720 est une nouvelle substance immunossuppressive dérivée par synthèse du composé naturel, la myriocine. Nous avons cherché à comprendre son mécanisme d'action moléculaire à partir du système modèle pour l'étude des cellules eucaryotes que représente la Levure de Boulanger, Saccharomyces cerevisiae. Ainsi, nous avons pû isoler des cellules rendues résistantes au composé par surexpression de gènes de librairies d'ADN génomique de Levure cloné dans des vecteurs à haut nombre de copies. Parallèlement, des mutants génomiques résistants à FTY720 ont été isolés et caractérisés. Les données obtenues indiquent que la dégradation des protéines impliquant le système de l'ubiquitine ainsi que des transporteurs d'acides aminés seraient impliqués dans le mécanisme d'action de l'immunosuppresseur. Plusieurs modèles sont proposés pour replacer les gènes candidats. En outres, une analyse de profile d'expression des gènes ainsi qu'une analyse du protéome sont venus compléter ces études génétiquesFTY720 is a novel immunosuppressor synthetically derived from the natural compound, myriocin. We identified molecular targets and pathways involved in FTY720's mechanism of action using the baker's yeast, Saccharomyces cerevisiae as a model system for eukaryotic cells. We isolated cells that were resistant to the drug by simple gene overexpression from yeast genomic DNA libraries cloned into high copy vector. In addition, genomic mutants resistant to FTY720 were isolated and characterised. Data indicated that ubiquitin-mediated protein degradation as well as amino acid transporters were involved in the mechanism of action of the compound. Several models are proposed to replace our candidate genes. In parallel, gene expression profiles and a proteome-wide analysis were performed to complete the previous genetic studies
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Chapelier, Alhan. "Modifications radioinduites dans les protéines à l'état solide." Paris 11, 2001. http://www.theses.fr/2001PA112351.
Full textAbstract:
Dans ces travaux, nous avons irradié quatre protéines à l'état solide et à température ambiante, sous air. Le lysozyme du blanc d'oeuf de poule, la thiorédoxine de E. Coli, et l'a-lactalbumine humaine ont été irradiées à l'état lyophilisé. L'insuline humaine a été irradiée à l'état dune hexamère cristallin. Quelle que soit la nature de la protéine, deux populations de protéines semblent présentes dans l'échantillon : après irradiation et dissolution: une population majoritaire ayant le même poids moléculaire et le même comportement sur une matrice hydrophobe que la protéine non irradiée. Cependant, les structure primaire, secondaire et tertiaire de ce produit serait affectée. Une population de protéines ayant subit des modifications structurales très importantes et sont donc très différentes de la protéine non irradiée. Lorsque l'irradiation est fait à l'état solide, les modifications semblent être de nature conformationelle, et n'implique pas de coupure de la chaîne polypeptidique, ni l'intégrité de ponts disulfure, ni la modification du poids moléculaire de la protéine. .In this study four proteins were irradiated in the solid state at ambient temperature. Thioredoxine, lysozyme and a-lactalbumine were irradiated in the lyophilised state, human insulin was irradiated in the hexameric crystalline state. For all proteins and whatever the irradiation atmosphere is, irradiation seems to lead to only small changes. For doses lower than 5 kGy, all methods lead to the same conclusion : the percent of degradation is lower than 5 %. Irradiation affect all levels of organisation. As for primary structure, we did not detect any sequence or residue that would be specially sensitive. We have evidences for oxidative degradation pathway, specially on aromatic residues and this conclusion seems general. As for the secondary structure, insulin appears more sensitive than other proteins. Two different kinds of degradation appear, since we get more compact and more released proteins. .
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Derevier, Aude. "Etude de la protéolyse dépendante du motif Dbox au cours du cycle cellulaire et du développement chez les végétaux supérieurs." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2002. http://www.theses.fr/2002STR13180.
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Leydier, Chantal. "Etude structurale de la créatine kinase cytosolique MM : caractérisation des processus de dépliement-repliement." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO10181.
Full textAbstract:
Ce travail apporte des informations sur la structure tridimensionnelle d'une proteine homodimerique, la creatine kinase cytosolique de muscle de lapin (ck-mm). La ck-mm, caracterisee en conditions non denaturantes par proteolyse limitee et par de techniques biochimiques et biophysiques, est un enzyme compact, chaque monomere etant delimite par deux entites, l'une n-terminale (k1, 1-325) et l'autre c-terminale (k2, 328-380) reliees entre elles par une boucle flexible accessible aux proteases et impliquee dans le rapprochement des substrats lors de la catalyse. Le clivage de la chaine polypeptidique dans cette region conduit a la formation d'un heterotetramere inactif (k1k2) 2 possedant des proprietes identiques a celles de l'enzyme intact. Les deux peptides k1 et k2 sont stabilises par de fortes interactions. Leur separation ou leur surexpression conduisant generalement a la precipitation de k1, il s'est avere indispensable de mieux connaitre le processus de depliement-repliement de la proteine. La denaturation a l'equilibre de la ck-mm en presence de guanidine revele la fragilite du centre actif et a permis de detecter et caracteriser des intermediaires de type globule fondu et pre-globule fondu. Ce processus est partiellement reversible. La renaturation de l'enzyme suit deux voies distinctes, l'une conduisant a un dimere natif actif, l'autre a un monomere incorrect non productif. L'integrite de la chaine polypeptidique est indispensable a l'activite catalytique et a l'acquisition de la structure spatiale correcte. Les sous-unites k1 et k2 sont des unites dependantes de repliement, la partie c-terminale de la proteine chaperonnant le repliement de la region n-terminale.
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Cluet, David. "Nef, protéine multifonctionnelle des lentivirus de primates : Aspects moléculaires de la dérégulation de l'expression de surface du CD4." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2004. http://www.theses.fr/2004STR13016.
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Kieffer, Anne-Estelle. "Implication de l'ubiquitine dans l'immunité innée : Activité antimicrobienne des fragments N-et C-terminaux de l'ubiquitine." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2003. http://www.theses.fr/2003STR13146.
Full textAbstract:
L'ubiquitine (Ub) est une protéine multifonctionnelle très conservée, impliquée dans la dégradation des protéines. Nos résultats l'intègrent dans le concept de la Neuroimmunité. Stockée dans les granules de sécrétion des cellules chromaffines, l'Ub est libérée dans la circulation, lors d'un stress avec les catécholamines et des peptides antimicrobiens dérivés des chromogranines et de la proenképhaline A. Le fragment C-terminal Ub65-76 possède une puissante activité antifongique, traverse le mur cellulaire fongique et inhibe la calcineurine, une enzyme calmoduline-dépendante nécessaire à la croissance fongique. L'Ub65-76 et le fragment N-terminal Ub1-34 qui pourraient être générés suite à une infection par S. Aureus, agissent en synergie pour tuer les champignons et ne montrent pas de toxicité vis-à-vis des cellules mammaliennes. La partie C-terminale de l'Ub (65-76) pourrait être utilisée en clinique en combinaison avec le peptide N-terminal (1-34) et des peptides antimicrobiens issus des chromograninesUbiquitin (Ub) is a multifunctionnal highly converved protein, which is implicated in protein degradation. Our results integrate Ub into the concept of Neuroimmunity. Ub is stored in secretory granules of chromaffin cells and released during stress into the circulation with catecholamines and antimicrobial peptides derived from chromogranins and proenkephalin-A during stress. The C-terminal fragment Ub65-76 displays a potent antifungal activity, crosses the cell wall of fungi and inhibits calmodulin-dependent calcineurin, an enzyme crucial for fungal growth. Ub65-76 and the N-terminal peptide (residues 1-34) could be generated during an infection with S. Aureus and act synergistically to kill fungi. Furthermore, they don't display any toxicity towards mammalian cells. The Ub C-terminal-derived peptide (Ub65-76) could be used with the N-terminal peptide (Ub1-34) and antimicrobial peptides derived from chromogranins as new antifungal agents
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N'Ngue, Marie-Andrée. "L'alpha-lactalbumine : susceptibilité à la protéolyse liée aux changements conformationnels induits thermiquement : Recherche de peptides à activité anti-oxydante." Nancy 1, 2006. http://www.theses.fr/2006NAN10051.
Full textAbstract:
Les modifications structurales de l'a-lactalbumine bovine, connue pour sa résistance aux protéases, ont été étudiées à différentes températures (25–70°C), par dichroïsme circulaire et par une approche protéolytique utilisant une enzyme thermostable, la thermolysine (EC 3. 4. 24. 27). Les peptides variés produits lors des hydrolyses ont été identifiés par spectrométrie de masse. L'a-lactalbumine, résistante à l'hydrolyse à 25°C, devient sensible à partir de 40°C, car elle adopte un état dénaturé de type globule fondu tout en conservant son calcium chélaté. Cet état est majoritaire à 70°C, température à laquelle la protéine est totalement hydrolysée dès 1 min. Les régions amino-terminale 1-58 et carboxy-terminale 95-123 de l'a-lactalbumine dans son état dénaturé sont rapidement hydrolysées, alors que la région centrale, qui inclut le site de fixation du calcium, est plus résistante à l'hydrolyse à 70°C. Des peptides à activité anti-oxydante ont été identifiés dans des hydrolysats thermolysiques d'a-lactalbumines bovine et équine. Leur concentration peptidique diminuant de 50% la concentration du cation radicalaire généré à partir de l'acide 2,2'-azinobis[3-éthylbenzothiazoline-6-sulfonique] est inférieure à 10 mM. Ces peptides anti-oxydants, homologues pour les deux espèces, sont en général courts et renferment dans leurs séquences un ou deux résidus d'acides aminés aromatiques ou un pont disulfure. L'hydrolyse de l'a-lactalbumine à haute température par une protéase thermostable permet donc de générer des peptides à activité anti-oxydanteThe structural modifications of bovine a-lactalbumin, known for its resistance toward proteases, were studied at various temperatures (from 25 to 70°C) by circular dichroism and by proteolytic approach using a thermostable enzyme, thermolysin (EC 3. 4. 24. 27). The various peptides produced during the hydrolyses were identified by mass spectrometry. A-Lactalbumin, resistant toward the hydrolysis at 25°C, becomes sensible from 40°C, because it adopts a molten globule-like state (MG) while preserving its chelated calcium. The MG-like state is the main form at 70°C and the protein is completely hydrolysed for 1 min of incubation at this temperature. The 1-58 amino-terminal and 95-123 carboxy-terminal regions of a-lactalbumin in its MG-like state are quickly hydrolysed by thermolysin, whereas the central region, which includes the binding site of calcium, is more resistant toward the hydrolysis at 70°C. Peptides with antioxidant activity have been identified in thermolysic hydrolysates from bovine and equine a-lactalbumins. Their concentration that decreases by 50% the concentration of the 2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonic acid) radical cation is lower than 10 mM. These antioxydant peptides, that are homologous for the two species, are in general short and contain within their sequences one or two aromatic amino acid residues or a disulphide bridge. To conclude, the hydrolysis of a-lactalbumin at high temperature by a thermostable protease makes it possible to generate peptides with antioxidant activity
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Lechevalier, Valérie. "Cisaillements, création d'interfaces et traitements thermiques : effet sur la dénaturation des protéines du blanc d'œuf et leurs propriétés fonctionnelles." Rennes, Agrocampus Ouest, 2005. http://www.theses.fr/2005NSARB157.
Full textAbstract:
Les ovoproduits sont utilisés comme ingrédients dans de nombreux secteurs agroalimentaires pour leur techno-fonctionnalité unique. Les industriels de la filière ovoproduits doivent fournir un produit alliant fonctionnalité et sécurité sanitaire. Les traitements de stabilisation appliqués au blanc d'œuf permettent une bonne maîtrise de l'hygiène mais entraînent aussi une altération des propriétés fonctionnelles. L'objectif de cette étude est donc d'identifier les étapes des procédés industriels les plus dénaturantes pour la fonctionnalité du blanc d'œuf et d'élucider les mécanismes moléculaires responsables de ces dénaturations. La première partie de cette étude est consacrée à la cartographie des lignes industrielles de transformation du blanc d'œuf. Les effets de chaque étape sur les propriétés fonctionnelles du produit et la conformation de ses protéines sont analysés. Outre l'effet connu des traitements thermiques, les interfaces avec l'air et les cisaillements s'avèrent aussi responsables de pertes de fonctionnalité. Par ailleurs, ces modifications ont pu être corrélées avec des changements de conformation de protéines. La seconde partie de cette étude est consacrée à l'effet de l'interface air-eau sur la structure de 3 protéines majeures du blanc d'œuf : ovalbumine, ovotransferrine et lysozyme. Seules en solution, l'ovalbumine se dénature et s'agrège à l'interface, l'ovotransferrine subit d'importants changements de structure tertiaire et secondaire, alors que le lysozyme ne subit aucune modification irréversible de sa structure. En mélange ternaire, ces protéines forment des agrégats covalents. Enfin, la troisième partie de ce travail constitue une première approche de l'effet des cisaillements sur la fonctionnalité et la structure des protéines de blanc d'œuf. Des interactions importantes avec les traitements thermiques, les variations de pH ou de force ionique ont été démontréesEgg products are used as ingredients in many food industries for their unique fonctional properties. Egg product manufacturers have to provide safe and functional products. Stabilization treatments of egg white ensure a good control of hygiene but are responsible for damage caused to functional properties. The aim of this study is to identify the most damaging indusrial processing steps on egg white functional properties and to clarify the modlecular mechanisms responsible for these denaturations. The first part of this study was devoted to the mapping of the industrial lines of egg white processing. The effects of eachstep on functional properties and protein structure were analysed. In addition to the already known effects of thermal treatments, air-water interfaces and shear rates also caused losses of functionality. These changes were correlated with protein structure modifications. The second part of this study was devoted to the improvement of the understanding of the effects of air-water interface on the structure of three major egg white proteins, ovalbumin, ovotransferrin and lysozyme. In a single protein system, ovalbuin unfolded and aggregated at the interface, ovotransferrin lost most of its tertiary and secondary structure whereas lysozyme did not undergo any non-reversible changes. In tertiary mixture, these proteins formed covalently bound aggregates. Lastly, the third part of this study was devoted to a first step in the understanding of shear rate effects on egg white functionality and protein structure. Predominant interactions with heat treatment, pH or ionic strength variations were demonstrated
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Monsellier, Elodie. "Stabilité des anticorps recombinants : mesure, amélioration, applications." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077190.
Full textAbstract:
LES ANTICORPS RECOMBINANTS ONT DE NOMBREUSES APPLICATIONS, LIMITEES PAR UNE STABILITE INSUFFISANTE. NOUS VOULIONS DEVELOPPER UNE METHODE SIMPLE ET ROBUSTE DE STABILISATION DES FRAGMENTS D'ANTICORPS, ET COMPRENDRE LES MECANISMES DE STABILISATION CORRESPONDANTS. NOUS AVONS DEVELOPPE UNE METHODE FIABLE ET PRECISE POUR MESURER LA STABILITE DES FRAGMENTS D'ANTICORPS. POUR CELA, NOUS AVONS ETABLI UNE LOI RIGOUREUSE DU SIGNAL POUR LA LONGUEUR D'ONDE DU MAXIMUM DE FLUORESCENCE LMAX. LES TERMES CORRECTIFS A APPORTER A LA STABILITE ΔG(H2O) ET AU COEFFICIENT DE COOPERATIVITE m, OBTENUS EN UTILISANT UNE LOI LINEAIRE EMPIRIQUE DU SIGNAL POUR LMAX, ETAIENT MESURABLES EXPERIMENTALEMENT. NOUS AVONS PREDIT AVEC SUCCES UN ENSEMBLE DE MUTATIONS STABILISATRICES SUR LE FRAGMENT MODELE scFvD1. 3, EN UTILISANT DES CRITERES COMPLEMENTAIRES DE STRUCTURES, SEQUENCES ET DONNEES EXPERIMENTALES SUR LES ANTICORPS. UN DERIVE RECOMBINANT CES MUTATIONS AVAIT UNE TRES HAUTE STABILITE, UNE AMELIORATION DE STABILITE ΔΔG(H2O) SUPERIEURE A CELLES PUBLIEES PRECEDEMMENT, UNE ACTIVITE CYTOPLASMIQUE AMELIOREE, ET UNE AFFINITE INCHANGEE POUR L'ANTIGENE. NOS REGLES DE CONCEPTION PERMETTAIENT DE PREDIRE LES EFFETS DES MUTATIONS DE FAÇON QUALITATIVE POUR ΔG(H2O) ET QUANTITATIVE POUR LA CONCENTRATION EN UREE DE DEMI-DENATURATION. L'ACCROISSEMENT DE m CONSTITUAIT UN MECANISME IMPORTANT DE STABILISATION. LES EFFETS DES MUTATIONS DEPENDAIENT DU CONTEXTE STRUCTURAL. CES RESULTATS INDIQUAIENT L'EXISTENCE DE STRUCTURES RESIDUELLES DANS L'ETAT DENATURE DU TYPE PARENTAL. CETTE METHODE A ETE APPLIQUEE A LA STABILISATION DTMMUNOCAPTEURS FLUORESCENTS AUTONOMES, QUI POURRONT SERVIR DE BASE A LA CONSTRUCTION DE PUCES A PROTEINESRECOMBINANT ANTIBODIES HAVE A NUMBER OF APPLICATIONS, SOME OF THEM LIMITED BY A LOW STABILITY. WE INTENTED TO DEVELOP A SIMPLE AND ROBUST METHOD TO IMPROVE RECOMBINANT ANTIBODIES STABILITY, AND TO UNDERSTAND THE UNDERLYING MECHANISMS OF STABILISATION. WE DEVELOPED A RELIABLE METHOD TO PRECISELY MEASURE THE STABILITY OF ANTIBODY FRAGMENTS. WE ESTABLISHED A RIGOROUS LAW OF THE SIGNAL FOR THE WAVELENGTH OF THE MAXIMUM FLUORESCENCE INTENSITY LAMBDA MAX. THE STABILITY ΔG(H2O) AND THE COEFFICIENT OF COOPERATIVITY m WHEN THE EMPIRICAL LINEAR LAW OF THE SIGNAL IS APPLIED, HAVE TO BE CORRECTED. THE CORRECTIVE TERMS CAN BE DETERMINED EXPERIMENTALE Y. USING COMPLEMENTARY CRITERIA OF SEQUENCE, STRUCTURE AND EXPERIMENTAL DATA ON ANTIBODIES, WE FRAGMENT, COMBINING ALL THE DESIGNED MUTATIONS, HAD A PARTICULARLY HIGH STABILITY, A STABILITY IMPROVEMENT COMPARED TO THE WILD-TYPE HlGHER THAN REPORTED SO FAR BY ANY METHOD, AN INCREASED CYTOPLASMIC ACTIVITY, AND AN UNMODIFIED AFFINITY FOR THE ANTIGEN. OUR RULES OF DESIGN ALLOWED US TO PREDICT THE EFFECTS OF MUTATIONS QUALITATIVELY FOR ΔG(H2O) AND QUANTITATIVELY FOR THE CONCENTRATION OF UREA AT HALF-DENATURATION. THE IMPROVEMENT OF m WAS AN IMPORTANT MECHANISM OF STABILISATION. THE EFFECTS OF MUTATIONS DEPENDED OF THE STRUCTURAL CONTEXT. THESE RESULTS INDICATED THE EXISTENCE OF RESIDUAL STRUCTURES IN THE DENATURATE STATE OF THE WILD-TYPE. WE THEN USED THIS METHOD TO IMPROVE THE PRODUCTION LEVEE AND THE LIFE-SPAN OF REAGENTLESS FLUORESCENT IMMUNOSENSORS, WHICH COULD BE USED FOR THE DEVELOPMENT OF ANTIBODY ARRAYS
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Mazon, Hortense. "Caractérisation des variations structurales de la créatine kinase à l'aide de sondes spectroscopiques et de l'échange H/D couplé à la spectrométrie de masse." Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO10175.
Full textAbstract:
Ce travail concerne un enzyme homodimérique, la créatine kinase cytosolique de muscle de lapin (CK-MM). L'utilisation combinée de méthodes biophysiques et de la technique d'échange H/D couplé à la protéolyse et à la spectrométrie de masse renseigne sur le processus de dépliement-repliement de la CK-MM dénaturée par le chlorure de guanidinium et sur sa dynamique structurale en présence ou non de substrats. La protéinase K clive la CK-MM en un segment N-terminal K1 et un segment C-terminal K2. L'analyse du repliement de cette protéine (K1K2)2 a permis de montrer que le domaine C-terminal joue un rôle essentiel dans la compaction finale de l'enzyme sous sa forme native. L'échange H/D a permis de caractériser un intermédiaire de dépliement, le globule fondu, comme ayant une structure très fluctuante. Il a aussi permis de montrer des changements structuraux importants de la CK-MM permettant un alignement des substrats lors de la formation du complexe analogue de l'état de transition.
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Mombelli, Enrico. "Stabilité conformationnelle et mécanisme de dénaturation de protéines thermostables : étude de la carboxypeptidase et de la ribonucléase Sso7D de l'archéobactérie thermoacidophile "Sulfolobus solfataricus"." Montpellier 2, 1999. http://www.theses.fr/1999MON20165.
Full textAbstract:
L'etude des determinants au niveau moleculaire de la stabilite des proteines est d'une importance fondamentale en biochimie. La comprehension du chemin de repliement des proteines est aussi une autre question biochimique centrale. Afin d'etudier ces questions, nous avons choisi deux proteines modeles de l'archaebacterie sulfolobus solfataricus : la ribonuclease sso7d et une carboxypeptidase. Ces proteines d'archaebacteries sont connues pour leur extreme stabilite et leurs proprietes catalytiques qui font d'elles des candidates ideales pour ce genre d'etudes. Les experiences menees dans cette these constituent une investigation thermodynamique et cinetique par le biais de la pression afin d'etudier la relation structure-fonction des proteines. La comprehension notamment de l'effet de la pression sur les proteines est parmi les aspects les moins explores en biophysique. Notre travail sur la carboxypeptidase suggere que la pression peut etre employee dans le domaine biotechnologique en tant que facteur thermo-stabilisant des proteines. L'etude effectuee sur la ribonuclease sso7d a demontre l'importance de la juxtaposition des acides amines aromatiques a l'interieur du centre hydrophobe et des liaisons hydrogene afin de stabiliser la structure native des proteines. L'etude des cinetiques de repliement (induites par des sauts de pression) a permis de caracteriser l'etat de transition de la reaction du repliement de sso7d par son volume d'activation. De plus, l'analyse fine des spectres d'absorbance uv par la methode des derivees quatriemes a revele des informations nouvelles concernant la mobilite des residus a l'interieur des proteines.
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Gillard, Nathalie. "EFFETS DES RADIATIONS IONISANTES SUR DES COMPLEXES ADN-PROTÉINE." Phd thesis, Université d'Orléans, 2005. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00011412.
Full textAbstract:
La destruction radio-induite des complexes ADN-protéine peut avoir des conséquences graves pour des systèmes impliqués dans des fonctions cellulaires importantes. Le premier système qui a été étudié est un système de régulation de l'expression génique chez Escherichia coli, celui de l'opéron lactose. Le complexe répresseur-opérateur est détruit après l'irradiation du complexe ou de la protéine seule. L'endommagement du domaine de fixation du répresseur à l'ADN (appelé headpiece) a été démontré et étudié tant du point de vue de l'intégrité de la chaîne peptidique que de la conformation et des modifications de certains acides aminés. Dans un deuxième temps, des dysfonctionnements de l'induction in vitro d'un complexe répresseur irradié-opérateur non irradié ont été mises en évidence. Ces perturbations, dues à une diminution du nombre de sites de fixation sur le répresseur, sont corrélées à l'endommagement de résidus tryptophane. D'autre part, l'inducteur protège le répresseur lorsque ces deux partenaires sont irradiés ensemble, d'une part par capture (pouvoir scavenger) des radicaux en solution et d'autre part par le masquage de son site de fixation sur la protéine. Le deuxième système étudié est formé par Fpg (ou Formamidopyrimidine glycosylase), protéine de réparation de l'ADN, et par de l'ADN porteur d'une lésion oxidative. Les résultats obtenus montrent que l'irradiation de la protéine perturbe la réparation à la fois en diminuant son efficacité de reconnaissance et de fixation des lésions, et en modifiant son activité enzymatique.
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Zitouni, Nedjma Baya. "Caractérisation des protéines allergéniques de la graine et de l'huile de tournesol (Helianthus annuus) : contribution à l'étude des modifications des propriétés immunochimiques des protéines par les produits d'oxydation de l'acide chlorogénique." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2000. http://www.theses.fr/2000INPL024N.
Full textAbstract:
Nous avons étudié la composition protéique de la graine de tournesol et précisé l'allergénicité des différentes protéines à l'égard de sérums de patients sensibilisés à la graine de tournesol. Les méthodes utilisées sont le fractionnement chromatographique et électrophorétique des protéines ainsi que l'immunoblotting. Par une méthodologie appropriée, nous avons extrait et caractérisé des protéines allergéniques dans l'huile brute et raffinée de tournesol, d'origine industrielle. Nous avons montré que le transfert des protéines en milieu chimique dépend étroitement de la composition des tampons utilisés et des conditions physicochimiques. Nous montrons la présence de protéines allergéniques dans l'huile raffinée. Le broyage des graines de tournesol conduit à un brunissement enzymatique imputable à la fois à l'acide chlorogénique, à l'oxygène et à l'activité de la polyphénoloxydase. Afin de mieux cerner leur influence sur la modification des propriétés antigéniques, nous nous sommes intéressés aux associations et combinaisons protéines-ACG. A cet effet, une protéine allergénique modèle : la B-lactoglobuline A a été utilisée.
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Lecomte, Sylvain. "Implication des facteurs de choc thermique HSF1 et HSF2 dans la réponse à l'inhibition du protéasome." Rennes 1, 2010. http://www.theses.fr/2010REN1S059.
Full textAbstract:
Les cellules d’un tissu sont soumises à des variations de leur environnement qui sont susceptibles de perturber leur équilibre et de provoquer un stress. Afin de se défendre, elles se sont dotées de mécanismes adaptatifs spécifiques du type de composants affectés (lipides, acides nucléiques, protéines). Ce travail s’est intéressé au stress protéotoxique provoqué par une inhibition du protéasome. La réponse mise en place se caractérise par une surexpression des protéines de choc thermique (HSPs) qui est dépendante d’un événement transcriptionnel impliquant les facteurs de transcription HSF. Ce travail s’est focalisé sur le rôle d’HSF1 et d’HSF2 dans cette réponse. Nous avons montré qu’HSF1 est primordial pour l’induction des HSPs alors qu’HSF2 intervient dans l’expression des sous-unités du protéasome. De plus, nos résultats montrent que les isoformes d’HSF2 ont des rôles opposés sur l’activité transcriptionnelle d’HSF1 et que la quantité relative de ces isoformes est régulée par l’inhibition du protéasome. Ce dernier est une cible dans la lutte contre le cancer et des traitements le ciblant existent. Cependant, des cancers résistent et le développement d’inhibiteurs d’HSF2 pourrait être envisagé pour augmenter l’effet de ces droguesCells of a tissue are subject to changes in their environment that can disrupt their balance and to cause stress. To defend themselves, the cells are equipped with adaptive mechanisms specific to the type of affected components (lipids, nucleic acids, proteins). This work focused on proteotoxic stress caused by proteasome inhibition. The established answer is characterized by an overexpression of heat shock proteins (HSPs) which is dependent on a transcriptional event involving transcription factors HSF. This work has focused on the role of HSF1 and HSF2 in response to proteasome inhibition. We have shown that HSF1 is essential for the induction of Hsps whereas HSF2 mediate proteasome subunit expressions. Moreover, data obtained have show that HSF2 isoforms have opposite roles in transcriptional activity of HSF1 and the relative amount of these two isoforms is regulated by proteasome inhibition. Proteasome is a target in the fight against cancer and treatments targeting it exist. However cancers are resistant and development of inhibitors of HSF2 could be a valuable approach to increase the therapeutic effect of these drugs
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Briant, Emmanuelle. "Mise au point et application de la technologie FALI (Fluorophore-Assisted Light Inactivation) à l'étude de moteurs moléculaires." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2007. http://www.theses.fr/2007STR13182.
Full textAbstract:
Dans le but d’améliorer notre capacité à analyser le rôle de protéines multifonctionnelles impliquées dans la division cellulaire, nous avons entrepris de développer la technologie FALI (Fluorophore-Assisted Light Inactivation). Le principe de FALI est de coupler un fluorophore à une protéine d’intérêt. L’illumination contrôlée de ce fluorophore permet la production de radicaux libres qui dénaturent spécifiquement et localement la protéine taguée. Pour mettre au point et valider cette technologie nous avons développé deux approches : une méthode directe par surexpression de protéines taguées avec un fluorophore (réactifs FlAsH/ReAsH), et une méthode indirecte où le fluorophore (FITC ou FlAsH/ReAsH) est apporté par un anticorps single-chain (ScFv). Nous avons ainsi confirmé l’implication de la protéine ZW10 dans le transport des vésicules golgiennes, montrant par la même occasion que nous parvenons à faire FALI. Nous avons également pu montrer pour la première fois l’implication de la protéine LIS1 dans ce même mécanisme. Nos premières tentatives de FALI dans les cellules U2OS sur l’étude du mouvement rapide des chromosomes médié par la dynéine n’ont pu être effectués du fait de la trop grande toxicité de la méthode de marquage. Ces expériences nous ont appris l’importance de tester pour chaque lignée cellulaire et chaque protéine étudiée, la toxicité de la méthode de marquage par les ligands biarseniquesTo improve our capacity to analyze the role of multifonctional proteins involved in the cellular division, we decided to develop the FALI technology (Fluorophore-Assisted Light Inactivation). The principle of FALI is to tag a fluorophore to a protein of interest. The controlled illumination of this fluorophore allows the production of free radicals which denature specifically and locally the tagged protein. To develop and to validate this technology we developed two approaches: a method in which we overexpress a protein tagged with a fluorophore (FlAsH reagent), and a method where the fluorophore (FITC or FlAsH) is brought by a single-chain antibody (ScFv). We thus confirmed the implication of ZW10 protein in the transport of Golgi fragments, showing also that we manage to develop FALI. We also could show for the first time the implication of LIS1 protein in this same mechanism. Our first FALI experiments to study the fast poleward movement of chromosomes mediated by dynein in U2OS cells could not be carried out because of the too great toxicity of the labeling. These experiments show the importance to test the toxicity of the biarsenical ligands for each cell line and each protein we want to study
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Pana, Massama Esso. "Impact des traitements thermiques sur la structure des protéines de lentilles et leur digestibilité." Thesis, Université Laval, 2012. http://www.theses.ulaval.ca/2012/29506/29506.pdf.
Full textAbstract:
Les lentilles produites au Canada sont peu transformées et peu valorisées, bien qu’elles constituent une importante source de protéines dont les effets santé sont de plus en plus reconnus. Certains bénéfices potentiels ayant été répertoriés incluent la séquestration des acides biliaires, l'inhibition de l'enzyme convertissant l'angiotensine-1, l'abaissement du cholestérol, l'équilibre de la glycémie, et des effets préventifs contre la maladie artérielle périphérique, le diabète et le cancer. Cependant, leur faible digestibilité et biodisponibilité liées aux facteurs antinutritionnels limitent l’utilisation des lentilles. Ce projet vise à étudier l’impact du traitement à la chaleur sur la structure et la digestibilité des protéines de lentilles. Dans un premier temps, l’impact des traitements thermiques sur la dénaturation et la gélification des protéines de lentilles a été étudié en faisant varier les conditions du milieu, notamment le pH et la force ionique. Le mécanisme de formation des gels a été étudié par calorimétrie DSC, FTIR et par rhéologie à petites déformations à différents pH 3, 7 et 9 en absence et en présence de CaCl2. Les résultats de DSC ont montré qu’aux pH 3, 7 et 9, il n’y a pas de différence significative (0,05) de la température de dénaturation (Td) enregistrée. Par contre Td augmente en présence de CaCl2 mais reste significative (p ˂ 0,05) à 50 mM de CaCl2. Avec le FTIR, nos résultats ont montré une intensité plus importante des bandes d’agrégation dans les conditions en présence de CaCl2. Cependant, la rhéologie dynamique à petite déformation a montré qu’à pH 9 en présence et en absence de CaCl2, le module d’élasticité (G’) reste plus élevé que les autres pH dans les mêmes conditions.
Dans un deuxième temps, l’impact du traitement à la chaleur sur la digestibilité des protéines de lentilles a été étudié in vitro. La sensibilité aux enzymes digestives des protéines natives et dénaturées à la chaleur a été étudiée et comparée à celle des protéines gélifiées.
Les résultats de la deuxième partie ont montré que les protéines dénaturées avaient une sensibilité plus élevée à l’hydrolyse par les enzymes protéolytiques que les protéines natives. Les protéines gélifiées à pH 9 ont générées des peptides avec un poids moléculaires environ 3 kDa et moins, plus petits par rapport aux gels à pH 3 et 7. De même, la présence de CaCl2 (50 mM) dans les différentes conditions de pH n’a pas
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modifié la sensibilité à la dégradation des gels formés. Bien que le CaCl2 favorise l’agrégation des protéines de lentilles, la chaleur semble nécessaire à l’exposition des sites d’attaques des enzymes protéolytiques, comparé à l’hydrolyse protéique des échantillons sans traitement thermique.Most lentils produced in Canada are not processed and valorized, although they constitute an important source of proteins, the health benefits of which are now well recognized. These health benefits include the sequestration of bile acids, inhibition of angiotensin-converting-enzyme-1, lowering of cholesterol, maintaining blood sugar levels, and preventive effects against peripheral arterial disease, diabetes and cancer. However, the low digestibility and bioavailability deriving from anti-nutritional factors limit the use of lentils. This project aims to study the impact of heat treatment on the structure and digestibility of lentils’ proteins. Initially, the impact of heat treatment on the denaturation and gelation of the proteins of lentils was studied by varying environmental conditions such as the pH and ionic strength. The mechanism of formation of gels was studied by DSC, FTIR and small deformation rheology at pH 3, 7 and 9, in absence and presence of CaCl2. The results obtained from DSC indicate that at pH 3, 7 and 9, there is no significant difference (p ˂ 0.05) between the denaturation temperatures (Td). However, the Td increases in the presence of CaCl2 and is significantly higher (p ˂ 0.05) when the concentration of CaCl2 reaches 50 mM. Furthermore, FTIR results show a higher intensity of the aggregation bands in the presence of CaCl2. On the other hand, small deformation rheology indicates that at pH 9, in the presence or absence of CaCl2, the elastic modulus (G’) is the highest. The impact of heat treatment on the digestibility of lentils’ proteins was then studied in vitro. The effects of digestive enzymes on native, heat denatured and gelled proteins were evaluated. The data indicate that the denatured proteins are more sensitive to proteolytic hydrolysis than the native proteins. At pH 9, the gelled proteins generate peptides with a molecular weight around 3 kDa or less, which are much smaller compared to that obtained at pH 3 and pH 7. Similarly, the presence of CaCl2 (50 mM) in different pH conditions does not affect the degradation of the gels. Although CaCl2 promotes the aggregation of lentil proteins, heat treatment is necessary to reveal the target sites of proteolytic enzymes.
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Regnault, Stéphanie. "Influence des hautes pressions à température basse ou modérée sur certaines caractéristiques physico-chimiques et biochimiques de systèmes protéiques laitiers : Taille des micelles de caséines, équilibres protéiques et minéraux, aptitude à la coagulation et à l'émulsification." Montpellier 2, 2004. http://www.theses.fr/2004MON20045.
Full text
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Loison, Fabien. "Régulation transcriptionnelle de la clusterine par le stress protéotoxique : vectorisation peptidique." Rennes 1, 2005. http://www.theses.fr/2005REN1S075.
Full textAbstract:
L'expression des protéines chaperon, telles que la clusterine, est régulée par le stress via les facteurs de choc thermique HSF (Heat Shock Factor). Ils se fixent sur un élément consensus appelé HSE (Heat Shock Element). Nous avons mis en évidence que l'inhibition du protéasome entraîne l'hétérotrimérisation d'HSF1 et HSF2 qui se fixent au niveau de l'élément HSE de la clusterine, appelé CLE. Toutefois, nous avons montré que les facteurs de transcription de la famille AP1 participent également à la surexpression de la protéine. Le développement d'un test enzymatique pour la vectorisation peptidique a été le second objectif de cette thèse. Ce test repose sur l'activité d'enzymes de déubiquitination intracytoplasmiques. Ce test nous a permis de montrer que le peptide TAT issu du VIH ne permet pas d'atteindre le cytoplasme des cellules, et de valider grâce à un modèle particulier, la cellule dendritique, l'ubiquitine comme système de libération de molécules vectorisées dans la cellule.
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Pellissier, Marie. "Développement d'une pile à combustibles biologiques fonctionnelle en milieu biologique : optimisation des constituants des électrodes et analyse de leurs fonctionnements par micro-électrochimie." Rennes 1, 2008. http://www.theses.fr/2008REN1S109.
Full textAbstract:
Les piles à combustibles biologiques enzymatiques (biopile) sont définies comme des dispositifs transformant l'énergie chimique en énergie électrique via des réactions électrochimiques impliquant des composés biologiques. Les applications visées sont nombreuses notamment l'élaboration de sources d'énergie implantable pour alimenter des appareils médicaux. L'état de l'art effectué montre que de nombreuses stratégies sont développées pour améliorer les caractéristiques des biopiles assemblées, notamment la tension de fonctionnement et la puissance des dispositifs. Cependant un problème majeur reste à résoudre pour obtenir un dispositif implantable : la stabilité dans le temps des biopiles, qui devrait être de quelques années au lieu de quelques jours. De plus, beaucoup de prototypes manquent de caractérisation limitant la compréhension des systèmes catalytiques mis en œuvre. Une partie de ce travail a donc consisté à construire des électrodes catalytiques stables dans le temps. Nous avons mis en place une méthode couplant le greffage covalent et la réticulation par formation d'un hydrogel d'enzymes. Les électrodes modifiées par des enzymes présentent une activité catalytique stable durant 6 semaines. Une autre partie de ce travail a porté sur la caractérisation des électrodes modifiées par des enzymes par microscopie électrochimique à balayage (SECM). La première étude a concerné des surfaces micro-gravées, la fonctionnalisation étant la première étape de préparation de surfaces biocatalytiques. La deuxième a porté sur des surfaces conductrices modifiées par des enzymes et la dernière sur des surfaces isolantes modifiées par des enzymesBiocatalytic fuel cells are devices which rely upon biocatalytic reactions at the electrodes to convert chemical fuels and oxidants into electrical power. The long-term goal is the design of a small, implantable, and long-lived, low power source for biomedical applications. A lot of different strategies are developed in order to improve the devices, particularly their voltage and their power output. However, the main drawback to obtain an implantable device is the very low stability in time of the biofuel cells, which should be about a few years instead of a few days. Moreover, the prototypes generally have not been really characterized: this limits the understanding of the catalytic systems. The fist part of this work relates to the construction of stable catalytic electrodes. Our method uses two methods: the covalent grafting and the formation of enzymes hydrogel. Our modified electrodes have a catalytic activity stable during 6 weeks. The second part of this work relates to the characterization of electrodes modified with enzymes using scanning electrochemical microscopy (SECM). The first study refers to micro-patterned surfaces as the functionalization is the first step of the preparation of biocatalytic surfaces. The second study refers to enzyme-modified conducting surfaces and the last to enzyme-modified insulating surfaces
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Thill-Chardot, Valérie. "Étude de la dynamique de l'agrégation des micelles de caséines lors de l'acidification du lait : effet de la dénaturation thermique des protéines sériques." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2004. http://www.theses.fr/2004INPL023N.
Full textAbstract:
La compréhension des mécanismes réactionnels engagés dans la gélification acide du lait implique une connaissance de l'agrégation des micelles de caséines et des différentes étapes conduisant à la formation du gel laitier. Deux techniques instrumentales ont été utilisées au cours de cette étude, une technique de diffusion statique de la lumière aux petits angles (DSL) et une technique de diffusion de la lumière en milieu turbide (DWS, diffusing wave spectroscopy). L'étude par DSL a permis de suivre les étapes de l'agrégation micellaire en milieu dilué et de calculer la dimension fractale des agrégats acides obtenus. Les résultats montrent, lors de l'acidification, l'apparition de quatre familles successives de particules, dont la première correspond aux micelles de caséines et les trois suivantes à des agrégats de taille croissante. La dimension fractale calculée indique une valeur d'environ 1,8 et serait représentative d'une agrégation amas-amas limitée par la diffusion (DLCA). Par DSL, il apparaît que la vitesse de croissance des agrégats caséiques est influencée par le rapport caséines/protéines sériques natives et le traitement thermique du lait alors que la structure fractale des agrégats caséiques n'est modifiée significativement que dans le cas du traitement thermique du lait où une structure plus poreuse est observée. L'étude par DWS a permis de caractériser les transformations macroscopiques qui se manifestent au sein du système au cours du processus d'acidification. Les résultats obtenus en DWS montrent l'existence d'une phase d'agrégation des micelles de caséines dès pH 4,9 préliminaire à la gélification du lait à pH 4,8Understanding mechanisms of acidic milk gelation implies the knowledge of casein micelles aggregation and of the different steps leading to gel formation. Small angle static light scattering and diffusing wave spectroscopy (DWS), which is based on light scattering in turbid medium, were used in this study. Static light scattering measurements permitted to follow micelles aggregation steps in diluted media and to calculate the fractal dimension of acidic aggreptes formed. Results showed the formation of four successive particle populations. The first population corresponds to casein micelles and the others populations correspond to casein aggregates with increasing size. The fractal dimension value, determined from double logarithmic plots of intensity versus scattering wave vector (q) resulted in value around 1. 8, which reflects a diffusion limited cluster aggregation mechanisms (DLCA). By static light scattering, casein/whey proteins ratio and heat treatment of milk were shown to influence the growth kinetics of aggregates, but only heat treatment of milk modified fractal dimension leading to more porous aggregates. The DWS results showed that acid gelation of unheated milk occurred via a single-stage aggregation. The aggregation pH was measured at pH 4. 9 and the gelation pH was estimated at pH 4. 8
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Dulau, Laurent. "Recherche sur les protéines responsables de la casse protéique des vins blancs secs : approche biochimique et génétique." Bordeaux 2, 1990. http://www.theses.fr/1990BOR20110.
Full textAbstract:
Les protéines du mout sont une cause bien connue d'instabilité des vins blancs. En l'absence de traitement spécifique de stabilisation protéique, ces protéines sont partiellement précipitées entrainant l'apparition de troubles caractéristiques. L'étude en chromatofocalisation de ces protéines, obtenues à partir d'un mout de sauvignon, montre que trois fractions de phi 6,17 ; 5,65 et supérieur à 9 sont responsables de l'apparition de troubles. Ces protéines, cause de la casse protéique ont des poids moléculaires compris entre 18 000 et 30 000 da. La teneur de ces protéines dans les mouts varie en fonction du cépage, du degré de maturité de la vendange et des modalités préfermentaires. La bentonite constitue depuis plus de 50 ans le seul traitement efficace de stabilisation des vins blancs. Cependant, à cause de certains progrès technologiques les doses de bentonite utilisées sont en augmentation. Aux niveaux d'utilisation actuels, les qualités organoleptiques des vins sont affectées par ce traitement. Des solutions de substitutions ont été étudiées. Le potentiel protéolytique de Saccharomyces cerevisiae par le biais de la protéase a permet de diminuer la teneur protéique des mouts de Sauvignon. Des approches génétiques faisant appel a différentes techniques de mutagenèse n'ont pas permis d'obtenir une souche œnologique a caractère protéolytique. Grace à une approche biochimique, une activité protéasique acide, dégradant les protéines d'un mout de Sauvignon, a été obtenue a partir d'extraits extracellulaires de Trichoderma harzianum. Au stade actuel de la purification et dans nos conditions d'analyse, il n'est pas possible de traiter efficacement les vins par ce procédé. Enfin, il a été possible de purifier des procyanidines de rafles précipitant une proportion importante des protéines d'un vin de Sauvignon. Cette action tannante réduit fortement la teneur en protéines des vins blancs.
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Achir, Samira. "Etude des mécanismes de stabilisation des protéines par spectroscopie Raman et dynamique moléculaire." Thesis, Lille 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL10022/document.
Full textAbstract:
Cette thèse est une contribution à l’étude des mécanismes de stabilisation des protéines en solution et à l’état sec. Un nombre considérable de biomolécules thérapeutiques émanant des avancées de la technologie ADN recombinant sont porteuses de nouvelles approches thérapeutiques, mais ne peuvent pas être utilisées à cause de leur très faible stabilité. Celle-ci est améliorée à l’état sec, après lyophilisation qui est toutefois source de nombreux stress pour la protéine. Les travaux ont principalement focalisé sur l’étude de la stabilité de l’état physique de protéines modèles, par micro-spectroscopie Raman in-situ au cours d’une procédure de lyophilisation. Cette analyse a permis de déterminer les sources et le processus de dénaturation, ainsi que les transformations structurales de la protéine inhérente à la lyophilisation. Des cartographies Raman réalisées aux différentes étapes d’un cycle de lyophilisation, ont conduit à la description des interactions entre protéine, solvant et co-solvant et au décryptage des mécanismes de stabilisation de la protéine pendant l’opération de lyophilisation. La stabilité de l’état physique des protéines, lyophilisées en utilisant différents agents bioprotecteurs, a également été analysée lors de vieillissements accélérés, révélant l’efficacité bioprotectrice du tréhalose, exacerbée par l’ajout d’une faible quantité de glycérol. Des simulations de dynamique moléculaire ont aussi été réalisées sur les matrices vitreuses bioprotectrices tréhalose-glycérol pour lesquelles les effets plastifiants/anti-plastifiants de l’eau résiduelle ont été étudiésThe mechanisms of protein stabilization in solution and dry state have been investigated in this thesis. New therapeutic approaches are developing from many therapeutic biomolecules related to advances in recombinant DNA technology. Although we are not able to use them because of their low stability. The latter is improved in the dry state albeit freeze-drying gets a source of stress for many proteins. This work has mainly focused on the stability of model proteins, by in-situ Raman micro-spectroscopy during freeze-drying. The analysis identified the origin and the process of denaturation and the structural transformations of the inherent protein freeze-drying. Raman mapping was implemented at different stages of drying cycle, leading to the description of the protein/solvent/co-solvent interactions and decrypting the protein stabilizing mechanisms during the whole freeze-drying process. The protein stability was also analyzed during accelerated aging, by using several biopreservers. It revealed that the bioprotective efficiency of trehalose is enhanced by adding a small amount of glycerol. Molecular dynamics simulations were also carried out on trehalose-glycerol glassy matrices and the plasticizing / anti- plasticizing effects of the residual water were studied
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Peroz, David. "Dégradation du canal KCNQ1 dans le syndrome du QT long : nouveaux partenaires des canaux KCNQ1 et SCN5A." Nantes, 2008. https://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show/show?id=9cc1d0e1-51d1-4d44-ad6e-3b5eff709f14.
Full textAbstract:
Le syndrome du QT long est une arythmie cardiaque responsable de morts subites. Les formes familiales de QT long sont dues à des mutations sur des gènes codant pour des canaux ioniques. Je me suis intéressé à deux de ces canaux : KCNQ1 et SCN5A. La mutation Y111C située sur la partie N-terminale du canal KCNQ1 provoque une rétention du canal dans le réticulum endoplasmique. J'ai étudié les conséquences de cette rétention sur la biosynthèse du canal KCNQ1 et j'ai cherché à identifier les acteurs du contrôle qualité mis en jeu. Par des expériences de western blot et de pulse-chase, j'ai montré que la protéine mutante était moins exprimée que le protéine sauvage et que ceci était dû à une stabilité moindre de la protéine mutante. J'ai également montré que le canal KCNQ1 était dégradé par le système ubiquitine protéasome et que la chaperonne Hsp70 était capable de s'associer avec KCNQ1. Enfin, la protéine Derlin-1 ne participe pas à la dégradation du canal KCNQ1. En effet, ni la sur-expression ni la sous-expression de cette protéine n'ont eu d'impact ni sur le niveau d'expression ni sur la demi-vie du canal sauvage ou mutant. Les canaux ioniques KCNQ1 et SCN5A fonctionnent au sein de complexes protéiques. Par des expériences de pull-down et de double hybride, j'ai identifié plusieurs partenaires potentiels pour KCNQ1 ; leurs rôles sur le trafic ou la fonction du canal restent à déterminer. Nous avons également identifié 14-3-3 comme nouveau partenaire de SCN5A et montré qu'il modulait le courant sodique cardiaque. Identifier ces protéines permet de mieux comprendre le fonctionnement des canaux ioniques et de pointer vers de nouveaux gènes candidats d'intérêt diagnosticThe long QT syndrome is a cardiac arrhythmia responsible for sudden deaths. The familial forms of long QT are induced by mutations in genes coding for ion channels. During my thesis I have worked on two of these channels : KCNQ1 and SCN5A. The Y111C mutation located in the N-terminus of KCNQ1 channel leads to endoplasmic reticulum retention of the channel. I have studied the consequences of this retention on the biosynthesis of KCNQ1 and identified some of the players implicated in the quality control of the proteins. Using western blot and pulse-chase experiments, I have showed that the mutant protein was less expressed than the wild and that it was due to a lower stability of the mutated protein. I have also showed that the KCNQ1 channel was degraded by the ubiquitin proteasome system and that the chaperone Hsp70 was able to associate with KCNQ1. Finally, the protein Derlin-1 was not involved in the degradation of KCNQ1 channel. Indeed, neither over nor under-expression of this protein had any impact on the expression level or the half-life of wild or mutated channel. The ion channels KCNQ1 and SCN5A operate within protein complexes. By a combination of pull-down and double hybrid experiments, I have identified several potential partners for KCNQ1. Their roles on KCNQ1 function or trafficking remain to be analyzed. We have also identified 14-3-3 as a new partner of SCN5A and we have showed that it modulated the cardiac sodium current. Identification of these proteins help to better understand how ion channels function and point to new candidate genes for diagnosis
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Thomann, Alexis. "Caractérisation du complexe Culline3-BTB chez Arabidopsis thaliana." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2006. http://www.theses.fr/2006STR13161.
Full textAbstract:
La protéolyse ubiquitine-dépendante est un mécanisme conservé chez les eucaryotes permettant la dégradation ciblée de nombreuses protéines. Cette réaction se fait en trois étapes successives qui font intervenir l’activité de trois types d’enzymes. Une enzyme d’activation, « ubiquitin-activating » ou E1, prend en charge l’ubiquitine libre et la transfère sur une enzyme de conjugaison, « ubiquitin-conjugating » ou E2. L’ubiquitine est ensuite liée au substrat par l’intermédiaire d’une « ubiquitin-ligase » ou E3. C’est l’enzyme E3 qui a la fonction la plus importante dans ce processus car c’est elle qui détermine la spécificité de reconnaissance de la protéine à dégrader. Il en existe de différents types que l’on peut regrouper en sept classes distinctes selon leur mode d’action et leur structure. L’une des classes est représentée par le complexe CUL3-BTB/POZ (Bric à brac, Tramtrack and Broad complex/Pox virus and Zinc finger). Le génome d’Arabidopsis thaliana possède deux gènes codant pour des homologues de la Culline 3, nommés CUL3A et CUL3B. Au cours de mon travail de thèse j’ai participé à la caractérisation fonctionnelle de cette enzyme. Ainsi nous avons montré que les deux gènes CUL3A et CUL3B sont exprimés de manière ubiquitaire. De plus, nous avons identifié 76 protéines à domaine BTB dans le génome d’Arabidopsis et montré que certaines d’entres elles interagissent avec les deux protéines CUL3A et CUL3B dans la levure. Les deux Cullines 3 d’Arabidopsis interagissent également avec la protéine Rbx1. Dans le but d’identifier la fonction du gène CUL3A nous avons utilisé une approche par génétique inverse. Nous avons ainsi pu montrer que le mutant nul de la cul3a fleurit plus tardivement que la plante contrôle et qu’il présente une sensibilité réduite à la lumière rouge lointaine. Nous avons ensuite caractérisé plus en détail, l’expression des deux gènes CUL3A et CUL3B dans le tissus et organes reproducteurs et observé qu’ils sont exprimés de manière similaires dans la fleur et au cours de l’embryogenèse. Nous avons alors analysé les conséquences pour la plante de la perte de fonction de ces deux gènes en créant un double mutant. Les résultats obtenus montrent que la perte de fonction des cullines 3 chez Arabidopsis réduit la transmission gamétophytique et cause la létalité embryonnaire avec un arrêt prédominant au stade cœur du développement de l’embryon. Au niveau cytologique ces embryons avortés présentent des aberrations du plan de formation de l’embryon et de l’endosperme. Finalement, mes travaux en cours mettent en évidence la participation des cullines 3 dans la régulation de la synthèse de l’éthylène mais aussi dans le contrôle de la transition entre le stade végétatif et le stade floralUbiquitin-dependent degradation by the 26S proteasome has emerged as a central mechanism to control protein turnover in eukaryotes. Ubiquitin transfer requires the activity of E1 (ubiquitin activating), E2 (ubiquitin conjugating) and E3 (ubiquitin ligase) enzymes. Ubiquitin ligases are multiprotein complexes that specifically recognize the substrates and mediate their ubiquitin-dependent degradation. To date several classes of E3s have been reported, most of them based on a protein with cullin domain. Eukaryote genomes encode several cullins: CUL1, CUL2, CUL3, CUL4 and CUL5, which are all believed to form protein complexes with ubiquitin-ligase activity. I focused my work on one of these cullin based E3 ligase, the CUL3-BTB complex. In this report, I describe the molecular and genetic characterizations of the plant Cullin3. We found that CUL3A is ubiquitously expressed in plants and is able to interact with the ring-finger protein RBX1. Yeast two-hybrid experiments indicate that BTB-domain proteins are able to physically interact with both CUL3A and CUL3B, suggesting that Arabidopsis CUL3 forms E3 protein complexes with certain BTB proteins. In order to determine the function of CUL3A, we used a reverse genetic approach. The cul3a null mutants flowers slightly later than the control plants. Homozygous cul3b mutant plants developed normally and were fully fertile. Thus, we investigated the consequences on plant development of combined Arabidopsis cul3a cul3b loss-of-function mutations. The disruption of both the CUL3A and CUL3B genes reduced gametophytic transmission and caused embryo lethality. Arrest of embryogenesis occurred at multiple stages of embryo development, but predominantly at the heart stage. At the cytological level, CUL3 loss-of-function mutations affected both embryo pattern formation and endosperm development. In addtion, recent results show that the Culline 3 is also involved in the regulation of ethylene biosynthesis
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Errahali, Younès. "Identification des protéines allergéniques dans les huiles non raffinée et raffinée et la lécithine, issues de la graine de soja." Nancy 1, 2004. http://www.theses.fr/2004NAN10005.
Full textAbstract:
Les huiles et lécithines de soja, issues de graines potentiellement allergéniques, sont très utilisées dans les industries agroalimentaire et pharmaceutique. Cette relation permet d'expliquer à priori que des réactions de sensibilisation à l'huile et à la lécithine puissent être observées. Nous avons étudié la composition protéique d'huiles, lécithines et graines de soja et précisé leur réactivité à l'égard de sérums de patients sensibilisés aux protéines de la graine. Par des méthodes d'extraction appropriées nous avons confirmé l'existence de protéines allergéniques dans les huiles non raffinée et raffinée ainsi que dans la lécithine. Nous avons identifié par spectrométrie de masse une protéine de 56 kDa (b-amylase), se liant aux Ig E spécifiques de patients allergiques au soja, très résistante aux traitements de raffinage des huiles. D'autres allergènes ont également été identifiés, (lipoxygénase, lectine, inhibiteur trypsique de Kunitz) dont les immunoréactivités dépendent des dénaturations subies au cours des traitements industriels. L'élimination des phospholipides au cours du dégommage entraîne en même temps l'élimination d'une bonne partie des protéinesSoy oil and lecithin, resulting from potentially allergenic seeds, are often used in agro-foodstuffs and pharmaceutical industrial sectors. This relation allows for the observation of sensitizing reactions to oil and lecithin to be explained. We studied the protein composition of soy oils, lecithin and seeds and specified their reactivity with regard to serums of patients sensitized to seed proteins. Using appropriate extraction methods, we confirmed the presence of allergenic proteins in both unrefined and refined oils and in lecithin. Mass spectrometry allowed us to identify a 56 kDa protein (?-amylase) binding to Ig E, specific to patients allergic to soybean, and very resistant to oil refining processes. Other allergens whose immunoreactivities depend on denaturations undergone during industrial processing were also identified (lipoxygenase, lectin, tryptisin inhibitor of Kunitz). The elimination of phospholipids during ungumming involves simultaneous elimination of many proteins
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Hervé, Mireille. "Étude conformationnelle de l'alpha-antiprotéase et de son complexe avec l'élastase pancréatique." Paris 11, 1988. http://www.theses.fr/1988PA112123.
Full textAbstract:
Les transitions de dénaturation-renaturation l'équilibre, induites par le chlorure de guanidinium de l’α1 antiprotéase humaine active ou protéolysée, de l'élastase pancréatique porcine et de leur complexe covalent ont été étudiées par trois méthodes spectroscopiques: émission de fluorescence, spectrophotométrie de différence d'absorption dans l'ultra-violet et dichroïsme circulaire. La réversibilité de la dénaturation a également été étudiée par mesure du pouvoir inhibiteur de l’α1, antiprotéase ou par le retour des propriétés antigéniques. Des formes intermédiaires correspondant à des modifications conformationnelles intervenant dans la région contenant les résidus de tryptophane ont été mis en évidence avec l’α1, antiprotéase active ou protéolysée. De plus, la forme protéolysée de l'inhibiteur est stabilisée vis-à-vis du dénaturant par rapport à forme active. Dans le complexe, le comportement de l’α1 antiprotéase est comparable à celui de la forme protéolysée et la stabilité conformationnelle de l’élastase semble diminuée par rapport à celle de la proteine libre.
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Ivo, Dina Isabel Antunes. "Menin : un nouvel acteur dans le cycle cellulaire ?" Thesis, Tours, 2011. http://www.theses.fr/2011TOUR4002/document.
Full textAbstract:
La NEM1 est un syndrome cancéreux affectant de nombreuses glandes endocrines, qui résulte d’une prédisposition génétique liée à des mutations du gène MEN1. La Menin, protéine codée par MEN1 possède de nombreux partenaires qui interviennent dans la dynamique de la chromatine, la régulation de la transcription et de la stabilité du génome. Le besoin de mieux connaître les fonctions biochimiques de la Menin m’a conduit à tenter de produire la protéine purifiée en grande quantité. Ce faisant, j’ai pu apporter des informations sur la structure de la Menin. Sur un plan fonctionnel, j’ai étudié l’interaction entre Menin et l’oncosuppresseur p53, et montré que certaines modifications post-traductionnelles de p53 déterminantes pour son activité et sa stabilité en réponse à un stress génotoxique, n’affectent pas l’interaction, rendant possible que ce soient des modifications de la Menin qui y jouent un rôle déterminant. J’ai ainsi montré que la Menin pouvait être mono-ubiquitinée. La Menin interfère également avec un autre régulateur du cycle cellulaire, la protéine RB dont elle semble réguler le niveau de phosphorylation et peut-être même la quantité totale dans la celluleMEN1 is a cancer syndrome affecting many endocrine glands, which results from a genetic predisposition related to mutations of the MEN1 gene. Menin, the protein encoded by MEN1 has many partners that play a role in the dynamics of chromatin and in the regulation of the transcription and of genome stability. The need for knowing better the biochemical functions of Menin led me to try to produce the purified protein in great quantity. By doing this, I could bring information on the structure of Menin. On a functional level, I studied the interaction between Menin and the oncosuppressor p53, and showed that certain post-translational modifications of p53 crucial for its activity and its stability in response to a genotoxic stress, do not affect the interaction, making possible that modifications of Menin play a determining role there. I thus showed that Menin could be monoubiquitinylated. Menin also interferes with another regulator of the cell cycle, the protein RB of which it seems to control the level of phosphorylation and perhaps even the total amount in the cell
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Belmejdoub, Jihane. "Sur l’intégrité des protéines et la valorisation des effluents pour une production durable par membrane d’ultrafiltration : application à l’industrie laitière." Rennes 1, 2010. http://www.theses.fr/2010REN1S220.
Full textAbstract:
Les protéines solubles du lait de vache ont un intérêt reconnu dans les industries agro-alimentaire en raison de leur valeur nutritionnelle et de leurs propriétés techno-fonctionnelles. A condition de valider que les protéines ne sont pas dénaturées par les procédés membranaires, ceci pourraient être utilisés à l’échelle industrielle pour la préparation de fractions protéiques à fonctions ciblées. Cette thèse propose une première partie sur la mise au point d’une méthodologie pour étudier la possibilité de dénaturation des protéines par des membranes fortement rétentives en comparant avec des expériences modèles de dénaturation mécanique et thermique (mixeur, agitateur magnétique et bain marie). L’analyse par fluorescence intrinsèque et HPLC en phase inverse pour laquelle de nouveaux gradients ont été mis au point pour chaque protéine, s’avèrent être deux outils pertinents pour la mise en évidence de la dénaturation ciblées. Par ailleurs, les procédés à membranes génèrent des volumes d’effluents qui doivent être minimisés pour une production éco-compatible et durable. La deuxième partie de cette thèse propose une démarche pour une valorisation des effluents globaux après traitement par ultrafiltration pour le nettoyage de membranes PES spirales colmatées par du lait écréméThe soluble proteins of cow milk have an interest recognized in the food industry because of their nutritional values and their techno-functional properties. Provided to validate that the proteins are not denatured by membrane processes, this can be used at industrial scale for preparation of proteins fractions with targeted functions. The first part of this thesis is focused on a methodology to study the possibility of the denaturation of proteins by highly retentive membranes in comparison with model experiments of mechanical and thermal denaturation (blender, magnetic stirrer and Marie bath). The analysis of intrinsic fluorescence and reversed phase HPLC for which new gradients were proposed for each protein, prove to be two relevant tools for highlighting targeted denaturation. Moreover, the membranes processes generates large volumes of effluents that must be minimized for an eco-friendly and sustainable production. The second part for this thesis proposes a step for a valorization of global effluents after ultrafiltration for the cleaning of spiral wounded PES membranes fouled by skim milk
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Thibaudeau-Mourer, Murielle. "Modifications de la biosynthèse des protéines lors du développement de l'ectomycorhize Eucalyptus globulus bicostata-Pisolithus tinctorius : Rôle potentiel de la protéolyse dépendante de l'ubiquitine et du protéasome." Nancy 1, 1998. http://www.theses.fr/1998NAN10214.
Full textAbstract:
La formation d'une ectomycorhize Eucalyptus globulus - Pisolithus tinctorius s'accompagne de modifications des profils polypeptidiques des partenaires et notamment de la disparition massive des protéines végétales. Le clonage, la caractérisation de gènes impliqués dans la protéolyse ont fait l'objet de cette thèse. Ainsi, la régulation de deux systèmes protéolytiques complémentaires a été étudiée lors de la formation de l'organe symbiotique. Le premier système correspond a l'ubiquitination des protéines et leur dégradation par le protéasome 26S (« the protein death machine ») tandis que le second fait intervenir des protéases. Lorsque le travail a été initié, aucun gène codant les composants de ces systèmes protéolytiques n'avait été identifié dans le cadre de l'ectomycorhization. Dans un premier temps, nous avons vérifié l'existence du système d'ubiquitination des protéines dans notre système. Les immuno-empreintes électrophorétiques indiquent que l'ubiquitine existe à l'état libre et conjugue à des protéines de différents poids moléculaires chez l'Eucalyptus, le Pisolithe et dans l'ectomycorhize. Cette vérification faite, le clonage des gènes impliqués dans la protéolyse a été initié. Le clonage aléatoire d'étiquettes de séquences exprimées (est) a permis l'identification de 9 gènes codant différents composants des voies protéolytiques. L'expression de 2 enzymes de conjugaison de l'ubiquitine (e2) et d'une sous-unité du protéasome 26S fongiques lors de l'ontogénie de l'ectomycorhize n'est pas modifiée par la symbiose. Par contre, l'expression de la sous-unité du protéasome 26S végétal est stimulée lors du stade de différenciation. La voie protéolytique végétale serait impliquée dans la dégradation massive des protéines d'Eucalyptus. Le travail réalisé sur la métalloprotéase fongique indique que son expression est réprimée au cours de la mycorhizogenèse et qu'elle serait impliquée dans la morphogenèse du champignon.
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Corteggiani, Eric. "Contribution à l'étude de la structure et de la conformation des sous-unités ribosomiques 60S de foie de rat." Lyon 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LYO11762.
Full textAbstract:
La denaturation thermique, birefringence electrique, dichroisme circulaire et accessibilite de l'arn a la ribonuclease t1 des sous-unites ribosomiques 60s de foie de rat en elongation ou inactive ont ete etudiees. Une diminution de la stabilite thermique des arn due a la presence des proteines resistantes est decrite
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Saint, Denis Thierry. "Etude de la thermosensibilité du système Plasmine-plasminogène-Activateurs du Plasminogène du lait à l'aide de nouvelles méthodes de dosage : Application à l'étude de la stabilité de produits à base de lait chauffé." Nancy 1, 2002. http://www.theses.fr/2002NAN10054.
Full textAbstract:
L'objectif de cette étude était de mesurer l'influence du système plasmine endogène sur la stabilité des laits infantiles à base de lait chauffé. De nouvelles méthodes performantes pour le dosage enzymatique de la plasmine (PLM), du plasminogène (PLG) et des activateurs du plasminogène (PA) ont été mises au point. L'application de ces méthodes à des laits représentatifs de ceux utilisés pour la fabrication des produits a permis de mesurer les variations annuelles des teneurs en PLM, PLG et PA. Les teneurs en PLM et en PLG sont apparues plus variables que la teneur en PA, sans effet significatif de la saison de collecte du lait (période hivernale ou estivale). Ces méthodes enzymatiques ont également été utilisées pour étudier la thermosensibilité des différents acteurs du système (PLM/PLG/PA) sur une large gamme de températures (60 à 140 CC). Si la thermosensibilité de la PLM et du PLG s'est révélée conforme aux données de la littérature, celle des PA, supposés jusqu'alors thermostables, était du même ordre que la PLM et le PLG dans un milieu lait. La ß-lactoglobuline jouait un rôle prépondérant dans le mécanisme et la cinétique de dénaturation de la PLM, du PLG, mais aussi des PA. La protéolyse affectant les laits infantiles pendant leur stockage, suivie par l'analyse en RP-HPLC des peptides de la fraction soluble, s'est révélée très différente de celle obtenue par action de la plasmine ajoutée. L'identification par LC-MS/MS-MS des principaux peptides générés lors de ces protéolyses a permis de confirmer que la protéolyse observée dans les produits finis n'était pas d'origine plasmine. L'action de protéases microbiennes de la flore psychrotrophe du lait est d'autant plus suspectée que ces agents protéolytiques se sont montrés, contrairement au système plasmine, extrêmement résistants à la chaleur (jusqu'à 1 heure à 90 CC). Les éléments de cette étude ont servi à l'optimisation des traitements thermiques industriels appliqués au lait au cours du process de fabricationThe purpose of this study was to evaluate the influence of the endogenous plasmin system on stability of infant milk based on heated milk. Improved enzymatic methods were developped to assay plasmin (PLM), plasminogen (PLG) and plasminogen activators (PA) in bovine milk. Those assays were used to monitor the levels of endogenous PLM/PLG/P A in milk samples used at the facility during a whole year. The PA level appeared to be stable, while PLM and PLG levels ranged respectively froID alto 3 and 1 to 2 factor, independently froID the season (winter/summer). Thermal inactivation, at temperature between 60 cC and 140 cC, of native PLM, PLG and PA were studied using the Saille improved enzymatic methods. While measured heat inactivation of kinetic of PLM and PLG were in line with previously reported values, PA were, surprisingly, found to be as heat sensible as PLM and PLG in a milk system containing proteins with free -SR group. Thus, heat inactivation of the who le plasmin system in milk appeared to be directly influenced by the presence of ß-lactoglobulin. Proteolysis affecting infant milks during storage (at 37 cC or at room temperature), monitored by RPHPLC analysis of peptides present in the soluble fraction, were significantly different froID proteolysis induced with added plasmin. Main peptides generated by those proteolysis were identified by LC-MS/MSMS. The results lead us to conclude that natural proteolysîs observed in commercial products was flOt due to the plasmin system. The proteolytic agents responsible for this natural proteolysis were found to be heat resistant, even at 90 CC for 60 minutes. This led us to suspect the presence of proteinases froID endogenous psychrotrophic flora in milk. These results have been used for an optimization of the industrial heat treatments during process
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Boitard, Charlotte. "Polymères à empreintes de protéines couplés à des nanoparticules magnétiques : de la synthèse aux applications en nanomédecine." Thesis, Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS032.
Full textAbstract:
Cette thèse porte sur le développement de nanoparticules magnétiques hybrides pour la nanomédecine. Un enjeu majeur est de proposer des solutions innovantes dans le traitement et/ou le diagnostic de certaines pathologies, comme les cancers. Les nanoparticules magnétiques possèdent des propriétés extrêmement intéressantes pour la nanomédecine. Elles peuvent servir à guider magnétiquement un vecteur vers une cible ou à chauffer localement cette cible lorsqu’elles sont soumises à un champ magnétique alternatif. Par ailleurs, l’utilisation de polymères à empreintes de protéines peut permettre de cibler des protéines d’intérêt. L’idée ici est donc de coupler des nanoparticules magnétiques et des polymères à empreintes de protéines (PEP) afin de cibler, détecter et traiter des cellules d’intérêt. Les nano-objets γ-Fe2O3@PEP sont synthétisés en polymérisant un polyacrylamide autour de protéines servant de gabarit, telles que la protéine fluorescente verte ou le complexe de différentiation 44. Les objets obtenus sont composés pour 10 à 30% de PEP, selon la méthode de synthèse. Un ciblage efficace de cellules exprimant ces protéines d’intérêt a été mis en œuvre. Sous champ magnétique alternatif, les protéines sont dénaturées mais les nano-objets γ-Fe2O3@PEP ne se détachent pas des cellules, et seront donc à terme internalisés. Une étude approfondie a montré une absence de toxicité aigüe des objets hybrides, et leur métabolisation dans les lysosomes. Les propriétés de ciblage et d’hyperthermie de γ-Fe2O3@PEP en font donc un bon candidat pour détecter et ralentir le développement de métastases cancéreusesThis thesis focuses on the development of hybrid magnetic nanoparticles for nanomedicine. A major challenge is to propose innovative solutions in the treatment and/or diagnosis of some pathologies, such as cancers. Magnetic nanoparticles are interesting for nanomedicine because they can be employed to magnetically direct a vector toward a target, or locally heat this target when submitted to an alternating magnetic field. Moreover, protein imprinted polymers can be used to selectively target proteins of interest. Thus, the idea of this project is to bind magnetic nanoparticles and protein imprinted polymers (PIP), to propose a new system to target, detect and treat cells of interest. γ-Fe2O3@PIP hybrid nano-objects were synthesized through polymerization of polyacrylamide around template proteins, such as green fluorescent proteins or the glycoproteins CD44. PIP represent less than 30 % of final hybrid nano-objects, which have hydrodynamic diameters smaller than 400 nm, according to the synthetic pathway. Effective targeting of cells displaying these proteins of interest occurred while using γ-Fe2O3@PIP nano-objects. Under an alternating magnetic field, proteins are denatured thanks to magnetic hyperthermia. γ-Fe2O3@PIP particles will not detach themselves from the cell, and will thus be internalized. A further study denoted the absence of an acute cytotoxicity for hybrid nano-objects, which will be metabolized inside lysosomes. Targeting and magnetic hyperthermia properties of γ-Fe2O3@PIP make them ideal candidates to detect cancer metastasis and slow down their development
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Desmolaize, Benoît. "Etude de la relation entre séquence, stabilité et activité chez les cytochromes b5 de deux espèces éloignées, l’homme et la levure." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066036.
Full textAbstract:
Les cytochromes b5 (cytb5) sont des hémoprotéines. Chez les mammifères, deux formes de cytb5, microsomale et mitochondriale existent. Ces deux formes présentent une forte identité de séquence et un repliement tridimensionnel identique, mais des stabilités et affinités pour l’hème significativement différentes. Les propriétés physicochimiques sont contrôlées par certains résidus non conservés. Durant cette thèse, deux formes de cytb5 distantes en terme d’évolution ont été comparées, la levure et l’humaine. Différentes techniques biophysiques ont été utilisées pour caractériser la stabilité des cytb5, l’affinité et la cinétique de fixation de l’hème. L’ensemble des données met en évidence une grande similarité de comportement entre les cytb5 de levure et humain, malgré une identité de séquence de 40%. Une analyse détaillée de la relation entre séquence et propriétés physicochimiques des cytb5, et une interprétation des résultats dans le cadre de l’évolution de ces protéines est proposée.
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Khaldi, Marwa. "Étude du lien entre la physico-chimie de dérivés laitiers et leur aptitude à l’encrassement lors du traitement thermomécanique en échangeur de chaleur." Thesis, Lille 1, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL10032/document.
Full textAbstract:
Ce travail de thèse est une contribution à la compréhension de l’encrassement des échangeurs de chaleur à plaques (ECP) lors du traitement thermique de solutions de protéines du lactosérum. Ce travail vise principalement à établir les liens existants entre la composition des différentes solutions de lactosérum (teneurs en β-lactoglobuline (β-lg) et en calcium), leurs comportements en dénaturation et leurs aptitudes à encrasser les surfaces chaudes de l’ECP. Cette étude a montré l’influence de la teneur en calcium et du ratio molaire calcium/protéine sur les mécanismes de dénaturation thermique de la β-lg, les distributions des masses de dépôt protéique, la dynamique de formation de dépôt et la structure des premières couches de dépôt en surface. Par ailleurs, la détermination des constantes cinétiques de dénaturation chaude de la β-lg et la connaissance de l’histoire thermique du produit ont permis de simuler les profils de concentrations des différentes espèces de β-lg (native, dépliée et agrégée) le long de l’ECP et d’étudier la corrélation entre la masse de dépôt sec et les quantités de β-lg dénaturées dans l’ECP. Ainsi, cette simulation a pu mettre en évidence le faible rôle des agrégats dans les mécanismes d’encrassement et à la fois l’influence de l’espèce dépliée et de la teneur en calcium dans la distribution du dépôt protéique. Enfin, une corrélation originale entre la distribution de la masse de dépôt sec dans chaque canal de l’ECP et les paramètres cinétiques de dénaturation a été établie pour chaque solution protéique modèle étudiée, montrant ainsi l’impérieuse nécessité des approches de génie de la réaction chimique pour prédire l’encrassement protéiqueThis Ph.D. work is a contribution for understanding the fouling in plate heat exchangers (PHE) during the heat treatment of whey protein solutions. This work aims at establishing the relationship between the composition of the different whey protein solutions (β-lactoglobulin content (β-lg) and calcium), their denaturation behaviour and their ability to foul the hot surfaces of the PHE.This study showed the strong impact of the calcium content and the calcium/protein molar ratio on the β-lg thermal denaturation mechanisms, the distributions of the deposit fouling, deposit formation dynamics and the structure of the first deposit layers.The determination of the β-lg denaturation kinetic constants and the knowledge of the thermal profile allowed to simulate the concentration profiles of the different β-lg species (native, unfolded and aggregated) along the PHE and to study the correlation between the dry deposit mass of and the amount of denatured β-lg in the PHE. This simulation highlighted the negligible role of the aggregates in the fouling mechanisms and both the influence of the unfolded species and the calcium content on the distribution of protein deposition. Finally, a new correlation between the distribution of dry deposit masses in each channel of the PHE and the denaturation kinetic parameters was determined for each studied protein solution, showing thus that chemical reaction engineering approaches are requested for predicting proteinaceous fouling
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Etou, Mongo Antoine. "Applications des lactosérums : 1 - comportement des protéines sériques dans des systèmes polydispersés en milieu lipidique; 2 - rôle de l'ajout des poudres de lactosérums dans l'évolution des systèmes cristallisés pseudoternaires." Compiègne, 1993. http://www.theses.fr/1993COMPD601.
Full textAbstract:
Les propriétés fonctionnelles et la dénaturation thermique des protéines de lactosérum dans un système dispersant en phase lipidique ont été respectivement étudiées par la technique de conchage à températures croissantes (65-95°C). La viscosité du système et la dénaturation protéique ont été respectivement évaluées par un viscosimètre rotatif à cylindres coaxiaux et par résonance magnétique nucléaire basse résolution. Avec les systèmes contenant 1,5% de séroprotéines en remplacement soit de 1,5% de sucre, soit de 1,5% de beurre de cacao, on observe une corrélation positive entre l'élévation de la température et la baisse progressive de la viscosité du système. La plus faible viscosité (52 poises) est enregistrée à 95°C et la plus élevée (108 poises) est obtenue a 65°C de conchage. En fonction de la teneur en séroprotéines, la viscosité des systèmes baisse régulièrement pour des taux en protéines inferieurs à 4,5%, remonte légèrement pour des taux en protéines supérieurs à 4,5%. En présence de phospholipides, les séroprotéines se trouvent en situation de concurrence physicochimique. La viscosité du système augmente (28 poises) lorsque les séroprotéines sont ajoutées après les phospholipides, baisse (25 poises) lorsque les séroprotéines sont introduites avant. Les temps de relaxation transversaux courts mesurés sur les protéines sériques par RMN pulsée basse résolution évoluent linéairement avec l'augmentation de la température et de la teneur en protéines. L'utilisation des poudres de lactosérums dans les formulations des produits de confiserie confèrent aux produits finis de bonnes caractéristiques organoleptiques pour des teneurs en poudre de lactosérum comprises entre 10 et 20%Functional properties and thermal denaturation of whey proteins in lipidic phase have been studied by conching at increasing temperatures between 65-950C. The system viscosity and the protein denaturation have been measured respeetively with a coaxial cylinder viscosimeter and by low resolution NMR spectroscopy. 1,5% whey proteins are added in the system in the place of 1,5% sugar or coma butter. The viscosity of the system decreased when temperature increased. The lowest viscosity (52 poises) has been obtained at 95°C and the highest viscosity (108 poises) has been obtained at 65°C. Protein denaturation was investigated after each thermal traitment by measuring T2 water proton relation time. Water proton T2 relaxation increased proportionally to the heating temperature and protein concentration. In the presence of lecithins, whey proteins are physicochimical competitive position. When whey proteins are added after lecithins, the viscosity of the system increased (28 poises), and decreased (25 poises) when whey proteins are added before. The use of whey solids (10-20%) in various confections formulations in the place of skimmed and nonfat milk powder gave good flavored products
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Boucherit, Kebir. "Enzymes immobilises d'Escherichia coli : dénaturation et renaturation de la β -galactosidase immobilisée, électrode a enzyme utilisant la chaine respiratoire immobilisée pour la mesure du L-malate." Paris 7, 1985. http://www.theses.fr/1985PA077105.
Full textAbstract:
La première partie de notre travail porte sur la réactivation, par traitement à l'urée, de la 13-galactosidase de l'extrait brut d' Escherichia coli inactivée par la température avant et après immobilisation. L'inactivation par la température entraine une perte d'activité de la β-galactosidase soluble et après passage dans l'urée 8M et dialyse de 18 heures avec du tampon, l'activité est régénérée à 75% par rapport à l'ex trait brut initial. La β -galactosidase immobilisée en présence de gélatine par le glutaraldéhyde (0,25%) et inactivée par la température peut être réactivée dans une colonne après traitement à l'urée et lavage du polymère avec du tampon. La cinétique de réactivation de la β-galactosidase immobilisée est complète au bout de 100 minutes environ. Le rendement de l'immobilisation est constant à 0,25 - 0,50 et 0,75% de glutaraldéhyde par contre le pourcentage de réactivation diminue quand la concentration de l'agent pontant augmente. La deuxième partie consiste à mettre au point une électrode enzymatique pour le dosage du L-malate. La flavoprotéine spécifique de l'oxydation du L-malate, élément de la chaîne respiratoire d’ Escherichia coli est induite par la culture des bactéries en milieu minimum en présence de D-L-malate 1% comme seule source de carbone. Les bactéries entières D-L-malate sont immobilisées sur film par inc lusion dans de la gélatine et coréticulation avec du glutaraldéhyde. Les conditions optimales d'immobilisation sont établies, elles concernent la quantité de matériel biologique et les concentrations de gélatine et de glutaraldéhyde. Après immobilisation, la chaîne respiratoire est active et est capable d'oxyder le L-malate en absence de cofacteurs (NAD+, NADP. . . ). Le film enzymatique est mis en contact étroit avec la partie sensible d'une électrode à oxygène (type électrode de Clark). L'addition du L-malate provoque une diminution de la concentration d'oxygène dans le film et donne un signal qui est enregistré. Après avoir analysé le signal émis par l'électrode à L-malate, les constantes cinétiques (VM, K50) ont été déterminées, une courbe de pH a été effectuée, le pH optimum est situé entre 6 et 7, à pH 4 l'activité du film enzymatique n'est réduite que de 50% et permet l'utilisation de l'électrode à L-malate directement dans les milieux biologiques (exemple le vin). L'oxaloacétate (produit de la réaction) et le D-malate inhibent de façon réversible la respiration du L-malate. Le malate peut être dosé dans la gamme de concentration de 0,1mM à 30mM.
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Soupison, Laurent. "Intérêt du dosage des chaines légères kappa et lambda dans la mise en évidence et le typage d'une immunoglobuline monoclonale sérique." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05P148.
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