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Dissertations / Theses on the topic 'Protéines Tyrosines Kinases'
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Guizani, Lamia. "Signalisation de l'interleukine 2 : régulation du récepteur et induction du facteur de transcription AP-1." Paris 6, 1994. http://www.theses.fr/1994PA066815.
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Grangeasse, Christophe. "Phosphorylation des protéines bactériennes au niveau de la tyrosine : étude des activités protéine-tyrosine kinase et phosphotyrosine-protéine phosphatase chez Acinetobacter johnsonii." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO10061.
Full textAbstract:
Nous avons demontre l'existence d'une modification post-traductionnelle des proteines par phosphorylation chez la bacterie acinetobacter johnsonii. Cette modification concerne principalement une proteine de 82 kilodaltons, localisee dans la membrane interne de la cellule bacterienne, que nous avons purifiee a homogeneite. Nous avons montre que cette proteine, appelee ptk pour prokaryotic protein-tyrosine kinase, est capable de s'autophosphoryler au niveau de plusieurs residus de tyrosine. Le gene correspondant, ptk, a ete clone et totalement sequence. L'analyse theorique de la sequence de la proteine ptk a revele differents motifs caracteristiques des proteine-kinases et des homologies avec plusieurs proteines bacteriennes intervenant dans la biosynthese des polysaccharides de surface. Par ailleurs, le sequencage du genome d'a. Johnsonii en amont du gene ptk a permis de caracteriser un second gene, appelee ptp, codant pour une proteine homologue de certaines phosphotyrosine-proteine phosphatases. Nous avons ainsi mis en evidence deux genes successifs, localises au sein d'un meme operon, qui codent pour deux enzymes d'activites opposees : une proteine-tyrosine kinase et une phosphotyrosine-proteine phosphatase. Cette observation nous a conduits a etudier le caractere reversible de la reaction de phosphorylation et le role regulateur que peut jouer cette modification dans la physiologie de la cellule. A cet effet, les deux proteines ont ete surproduites par genie genetique et purifiees. L'activite phosphotyrosine-proteine phosphatase de la proteine ptp a ete caracterisee sur un plan biochimique et la proteine ptk s'est averee etre le substrat endogene de la proteine ptp. Une organisation genomique similaire a ete retrouvee chez differentes especes bacteriennes, au sein d'operons tous impliques dans la synthese de polysaccharides de surface. Or, ces glycocomposes sont connus pour etre des facteurs de virulence des bacteries pathogenes. A partir de la, une relation possible entre la phosphorylation des proteines et la pathogenicite des bacteries a ete envisagee.
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Mekki, Meriem Sarah. "Conséquences de l'hypoxie sur la régulation de la signalisation HGF/SF-MET." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S047/document.
Full textAbstract:
Le récepteur à activité tyrosine kinase MET et son ligand le facteur de croissance des hepatocytes (Hepatocyte Growth Factor/Scattor Factor (HGF/SF)) sont essentiels pour la migration, la morphogenèse et la survie des cellules épithéliales. En plus de son implication et son importance physiologiques, la dérégulation de la signalisation de MET favorise la progression et l’invasion tumorales dans plusieurs types de cancers. Au sein des tumeurs, l’hypoxie est également un phénomène crucial qui induit une réponse adaptative menant à l’invasion, la métastase cancéreuses et la résistance aux traitements.Nous avons démontré que dans des conditions hypoxiques, la phosphorylation de MET induite par sa liaison au ligand, des mutations activatrices ou sa surexpression, est diminuée de manière importante in vitro et in vivo dans des modèles de tumeurs expérimentales chez la souris. Cette baisse de phosphorylation est très rapide et est réversible quand les cellules sont replacées en normoxie. Alors que la phosphorylation de GAB1, principal partenaire de MET, est également diminuée en hypoxie, l’activation des voies de signalisation en aval AKT et ERK n’est pas affectée et reste bien dépendante de l’activité du récepteur et du recrutement de GAB1. De la même façon, l’HGF/SF induit des réponses de motilité, de dispersion, de morphogenèse et de survie similaires en normoxie et en hypoxie. De manière intéressante, le traitement par deux inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK) ciblant MET (PHA-665752 et SU11274) est moins efficace en hypoxie pour inhiber les voies de signalisation AKT et ERK ainsi les réponses cellulaires induites par MET. Comme pour la phosphorylation de MET, la résistance à ces ITK est un phénomène réversible. Ainsi, alors que l’hypoxie n’affecte pas les voies de signalisation en aval ni les effets biologiques, elle diminue la sensibilité de MET aux ITK induisant donc une résistance immédiate. L’ensemble de ces données pourrait fournir de nouvelles perspectives dans l’utilisation des thérapies ciblant MET dans les tumeurs solidesThe receptor tyrosine kinase MET and its ligand the Hepatocyte Growth Factor/Scattor Factor (HGF/SF) are essential for migration, morphogenesis and survival of epithelial cells. Beside its physiological involvement, deregulation of MET signaling has been shown to promote tumor progression and invasion in many cancers. Inside the tumors, hypoxia is also a crucial phenomenon promoting an adaptive response able to induce invasion, metastasis and resistance to treatment.We show that under hypoxia, MET phosphorylation induced by ligand-stimulation, activating mutation or overexpression, is drastically decreased both in cell culture and in experimental tumors. This decrease in MET phosphorylation occurs within minutes and is reversible when cells are returned to normoxia. While phosphorylation of the proximal signaling adaptor GAB1 is also decreased in hypoxia, activation of the downstream kinases ERK and AKT is not affected, but is still dependent on MET receptor activity. Consistently, several cellular responses induced by HGF/SF, including motility, morphogenesis or survival, are still efficiently induced. Interestingly, treatment with two tyrosine kinase inhibitors targeting MET (PHA-665752 and SU11274) are less efficient to inhibit the downstream kinases ERK and AKT and cellular responses induced by MET in hypoxia compared to normoxia. Similarly to MET phosphorylation, this resistance to TKI is a reversible phenomenon. Therefore, while hypoxia does not affect downstream signaling and cellular responses, it decreases MET sensitivity to TKIs targeting the receptor thus providing an immediate resistance. This may provide new insights in the use of MET targeted therapies in solid tumors
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Murati, Anne. "Les protéines tyrosine kinases dans les syndromes myéloprolifératifs." Aix-Marseille 2, 2005. http://www.theses.fr/2005AIX20686.
Full textAbstract:
Ces dernières années, des avancées majeures ont permis une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires impliqués dans la leucémogenèse. Ceci est particulièrement vrai en ce qui concerne la caractérisation d'altérations ciblant des protéines tyrosine kinases dans les hémopathies. Ces progrès ont conduit au développement de petites molécules qui inhibent spécifiquement la kinase anormalement activée. La premier exemple de thérapie ciblée est celui de l'imatinib qui inhibe l'activité kinase de la protéine de fusion BCR-ABL issue de la translocation réciproque t(9;22)(q34;q11) retrouvée dans 90% des patients atteints de leucémie myéloïde chronique Ph1 positive (LMC). Dans les autres syndromes myéloprolifératifs qui sont Ph1 négatifs, les altérations moléculaires sont rares et le diagnostic basé sur des critères clinicobiologiques reste difficile en l'absence d'anomalie moléculaire. Toutefois, la caractérisation moléculaire de translocations réciproques dans les SMP Ph1 négatifs impliquant des tyrosine kinases ainsi que la découverte récente de la mutation de JAK2V617F dans une grande majorité des SMP Ph1 négatifs renforcent l'idée que ces kinases sont des cibles importantes dans cette pathologie. Nous nous sommes intéressés à la caractérisation moléculaire de deux translocations affectant la région chromosomique 8p dans le sous groupe de syndromes myéloprolifératifs dits " inclassables " par les critères clinico-biologiques définis par l'OMS. Ces translocations impliquent les gènes des tyrosine kinases FGFR1 et JAK2 en 8p11 et en 9p24, respectivement. Une troisième translocation associée à un SMP avec hyperéosinophilie a été caractérisée, mettant en jeu d'autres gènes que des tyrosine kinases. Il est important de caractériser les gènes impliqués dans ces translocations afin de comprendre le rôle de leur protéine de fusion dans les mécanismes de leucémogenèse associés au phénotype particulier de la maladie. La mise en évidence de ces gènes dans les translocations permet d'individualiser de nouvelles entités moléculaires au sein des syndromes myéloprolifératifs et nous conduit progressivement d'une classification semi-moléculaire vers une classification moléculaire centrée sur les protéines tyrosine kinases. Bien sûr, cette classification moléculaire prend toute son importance dans le concept de thérapie ciblée
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Collin, Guillaume. "Régulation de la signalisation oncogénique des tyrosine kinases par la nouvelle protéine du trafic vésiculaire Tom1L1." Montpellier 2, 2009. http://www.theses.fr/2009MON20226.
Full textAbstract:
Mon travail de thèse a consisté en la caractérisation du rôle de la nouvelle protéine du trafic vésiculaire Tom1L1 dans la régulation de la signalisation des tyrosine kinases Src et HER2. Tom1L1 a été identifiée au laboratoire comme nouveau substrat et interacteur de Src. Bien que Tom1L1 soit un excellent activateur de Src in vitro, cette protéine inhibe la voie mitogénique des Src kinases (SFK) en réponse aux facteurs de croissance. Mon objectif a été de caractériser les mécanismes moléculaires associés au rôle négatif de Tom1L1 in vivo. J'ai montré que Tom1L1, en association avec la chaîne lourde de la clathrine régule l'activité mitogénique et transformante des SFK par un mécanisme de relocalisation subcellulaire. Bien que Tom1L1 puisse être vue comme un suppresseur de tumeur, l'équipe de Charles Theillet à l'IRCM de Montpellier a observé la co-amplification de Tom1L1 avec HER2 dans un sous-type de cancer du sein. J'ai donc analysé le rôle de Tom1L1 dans l'activité oncogénique de HER2. De manière intéressante, je montre que Tom1L1 augmente de manière remarquable les propriétés invasives des cellules du cancer du sein HER2+. Cette nouvelle fonction requiert le domaine GAT de Tom1L1 et son association avec Tollip. D'autre part, mes résultats suggèrent que Tom1L1 régule la formation et la fonction des invadopodes. En conclusion, nous proposons que le complexe Tom1L1-Tollip augmente les propriétés invasives des cellules de cancer du sein HER2+ en régulant le trafic de composants importants pour la formation et la fonction des invadopodesMy thesis work deals with the role of the novel vesicular trafficking protein Tom1L1 in signaling regulation of Src and HER2 Tyrosine kinases. Tom1L1 had been cloned in the lab as a new substrate and interactor of Src. While it activates Src in vitro, it behaves as a negative regulator of Src signalling in cells. The first part of my thesis work was dedicated to Tom1L1 function in Src kinases signaling regulation. I show that Tom1L1 in a complex with the clathrin heavy chain regulates membrane partitioning of the tyrosine kinase Src required for mitogenic and transforming activities. While Tom1L1 can be viewed as a negative regulator of oncogenic signalling, our partner Charles Theillet observed that Tom1L1 was co-amplified with HER2 in breast cancer. The second part of my thesis work was dedicated to Tom1L1 function in HER2 oncogenic signalling. Interestingly, I observed that Tom1L1 strongly promotes invasiveness of HER2+ breast cancer cells. This novel function of Tom1L1 requires GAT-mediated interaction with vesicular traffic protein Tollip. In addition, my data suggest that Tom1L1 regulates invadopodia formation and function. In summary, my data suggest that Tom1L1-Tollip complex may potentiate HER2-induced breast cancer cell invasion by promoting the traffick of protein important for invadopodia formation and function
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Carreno, Sébastien. "Etude moléculaire et cellulaire des fonctions associées à chacune des isoformes de la protéine tyrosine kinase Hck dans les phagocytes." Toulouse 3, 2001. http://www.theses.fr/2001TOU30196.
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Lermet, Anne. "Synthèse d'inhibiteurs de la protéine à activité tyrosine kinase c-kit de type sauvage et muté." Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10026.
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Dang-Trung, Khoi͏̈-Nguyên. "Intérêt potentiel en chimiothérapie anticancéreuse des inhibiteurs de protéines à activité tyrosine kinase : exemple de la génistéine." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05P119.
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9
Garron, Marie-Line. "Etudes structurales et fonctionnelles de FAT et de ses homologues." Montpellier 1, 2007. http://www.theses.fr/2007MON13520.
Full textAbstract:
Les adhésions focales (AFs) sont des complexes multi-protéiques cytoplasmiques qui régulent d’important processus cellulaires. La kinase des adhésions focales (FAK) est une protéine « d’échafaudage » centrale pour l’assemblage et le désassemblage des AFs. Son domaine C-terminal FAT (Focal Adhesion Targeting), en dépit de sa petite taille (15KDa), et de sa structure relativement simple (un faisceau de quatre hélices a antiparallèles), accomplit une panoplie de fonctions. Des études bio-informatiques ont montré que d’autres protéines des AFs présentaient des homologies de structure avec FAT. De plus, d’après la littérature, ces domaines sont tous des domaines C-terminaux, et jouent un rôle cellulaire comparable à FAT. Nous nous sommes donc interrogés s’il existait une famille de protéines structurellement et fonctionnellement homologues à FAT : les domaines HF (pour Homologue à FAT). Par une approche biophysique multidisciplinaire, nous avons étudié la structure, fonction et régulation de FAT, ainsi de deux de ses homologues potentiels, le domaine C-terminal de la famille de GIT et celui de la famille de CAS. Par des expériences de SAXS et de dichroïsme circulaire, nous avons pu confirmer un repliement homologue à FAT pour le domaine C-terminal de la famille de GIT. Une étude comparative entre FAT et GIT1, mêlant l’ITC et la mutagenèse, nous a permis de mettre en évidence le mécanisme de la régulation de leurs interactions avec les motifs LD de paxilline. Des études d’ITC portant sur la spécificité d’interaction entre FAT et les motifs dileucines nous ont permis de découvrir CD4 comme un nouveau ligand du domaine FAT, suggérant un rôle de FAK dans la signalisation des cellules T. Puis par cristallographie, nous avons pu déterminer la base moléculaire de cette interaction. Enfin, nous avons résolu, par des expériences de SAXS, la structure à basse résolution (14Å) d’un complexe atypique entre le domaine GEF (Guanine Nucleotide Exchange Factor) de AND-34 et le domaine C-terminal de la famille de CAS. Nos résultats soulignent la polyvalence de FAT, et suggèrent un lien évolutif pour les domaines C-terminaux des familles de FAK et GIT. Ces domaines fonderaient donc la nouvelle famille des domaines HF. Par contre, les domaines C-terminaux de la famille de CAS n’apparaissent être que des analogues structuraux. En effet, la structure en fagot d’hélice antiparallèle n’est pas typique des domaines HF, puisqu’on la retrouve dans beaucoup de domaines d’interaction des protéines des AFs. La capacité de ces structures en hélices à interagir entre elles semble importante pour former les interactions multiples et variées qui permettent aux AFs de se lier, de façon signal-dépendante, au cytosqueletteFocal adhesions (FAs) are multi-protein complexes involved in cellular processes such as proliferation, adhesion, migration, as well as in oncogenic transformation. The FA targeting (FAT) domain is the C-terminal domain of the docking protein FA kinase (FAK). FAT allows FAK localisation at FAs by interacting with paxillin LD motifs. This localisation is essential for FA assembly and regulation. Structure based sequence alignment revealed homology with C-terminal domains of three FA protein families: Vinculin, Cas, p95/GIT1. Currently, only the structures of the FAT and Vinculin tail domains have been determined. By Small Angle X-ray Scattering (SAXS) and circular dichroïsm experiments we now confirm structural similarity of HEF-1 (a Cas family member) and GIT1 C-terminal domains with FAT. Both domains are, like FAT, required for protein localisation at FAs. We show that regulation of the interaction between GIT1 and paxillin LD motifs are different from FAT. HEF-1, in contrast does not bind LD motifs, but, surprisingly, associates intimately with the Guanidine Exchange Factor (GEF) domain of AND-34, a recently discovered protein implicated in the resistance of breast cancer cells to anti-estrogen tamoxifen treatment. We here present first structural insights into this atypical interaction between a GEF domain and a non-G-protein. In summary, even though 4-helix structure and FA localisation are conserved features of FAT-like domain, they have evolved individual molecular mechanisms for recruitment and regulation. Inhibitors for FAT-like domains might prove useful in blocking formation of metastases
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Majo, Vanessa. "Phosphorylation de la protéine liant les ARNs HuR/ELAVL1 par la tyrosine kinase Abelson : implications sur la fonction de HuR/ELAVL1 dans le carcinome hépatocellulaire." Thesis, Bordeaux 2, 2010. http://www.theses.fr/2010BOR21803/document.
Full textAbstract:
La protéine liant les ARNs HuR/ELAVL1 est impliquée dans la stabilisation d’ARNm dont la région 3’UTR présente des motifs riches en A et U (« AU-rich element », ARE). Ces ARNm codent majoritairement des protéines dont la dérégulation favorise l’émergence de cancers (oncogènes, cyclines, facteurs de croissance…). Notamment, HuR est surexprimée dans le carcinome hépatocellulaire (CHC) humain et dans des lignées de CHC en culture et est anormalement retrouvée dans le cytoplasme des cellules hépatiques tumorales participant à leur prolifération. De plus, les modifications post-traductionnelles des protéines liant les ARNs modulent leur localisation subcellulaire ainsi que leur capacité à lier et contrôler le devenir de leurs cibles. Plusieurs serine/thréonine kinases identifiées sont capables de moduler la fonction de l’AUBP (« AU-binding protein ») HuR. Via des études in vitro, nous avons identifié la Y200 comme étant une cible (probablement la seule) de la « tyrosine kinase non-récepteur » Abelson sur HuR. Cette tyrosine kinase est également surexprimée dans le CHC humain et dans des lignées de CHC en culture (comme les cellules HuH7). L’inhibition d’Abl par le Nilotinib influence le profil acido-basique de la protéine HuR, en gel bidimensionnel, dans les cellules HuH7, suggérant un rôle d’Abl dans les fonctions d’HuR sur ses cibles ARNmThe RNA binding proteins (RBPs) HuR/ELAVL1 is involved in the stabilization of mRNAs whose 3'UTR contains motifs enriched in A and U (« AU-rich element », ARE). These mRNAs encode mainly proteins whose deregulation promotes the emergence of cancer (oncogenes, cyclins, growth factors...). In particular, HuR is overexpressed in hepatocellular carcinoma (HCC) and in human HCC cell lines in culture and is abnormally found in the cytoplasm of liver tumor cells contributing to their proliferation. Furthermore, the Posttranslational modifications of RNA binding proteins (RBPs) modulate their subcellular localization and their ability to bind and control the fate of their targeted mRNAs. Some sérine/thréonine identified kinase are capable of modulating the function of the AUBP (« AU-binding protein ») HuR. By in vitro studies, we identified Y200 as a target (probably the only one) of the « non-receptor tyrosine kinase » Abelson on HuR. This kinase is also overexpressed in hepatocellular carcinoma (HCC) and in human HCC cell lines in culture (as cells HuH7). The inhibition of Abl by Nilotinib (one inhibitor) influences the acido-basic profile of the protein HuR, on Gel 2D, in cells HuH7, suggesting a role of Abl in the functions of HuR on its targets ARNm
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Chaix, Amandine. "Les spécificités de la signalisation oncogénique par rapport à la signalisation physiologique : le modèle de KIT, un récepteur à activité tyrosine kinase." Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX22079/document.
Full textAbstract:
Le système de communication SCF/KIT est impliqué dans le développement et l’homéostasie de plusieurs lignages cellulaires. Des dysfonctionnements de la voie sont à l’origine de pathologies affectant ces compartiments. En particulier, des mutations gain-de-fonction, qui entraînent l’activation constitutive du récepteur à activité tyrosine kinase KIT, sont responsables de néoplasies chez l’homme.L’objectif des travaux réalisés durant cette thèse était d’étudier certaines spécificités de la signalisation de formes oncogéniques de KIT, ceci dans le modèle du mastocyte transformé par l’oncogène KIT-D816V. Cette étude a été menée au niveau proximal sur le récepteur lui-même ainsi qu’au niveau distal sur la voie STAT ,une des voies de signalisation spécifiquement activée de manière constitutive par le récepteur mutant.Au niveau proximal, nous avons pu montrer que le motif dityrosine Y568-Y570situé dans le domaine juxtamembranaire de hKIT est une plateforme majeure de recrutement des effecteurs de la signalisation intracellulaire avec au moins 15partenaires différents recrutées. Par ailleurs l’étude de modèles cellulaires dans des analyses liées aux fonctions physiologiques du récepteur réalisés in vitro et in vivo ont révélé que le site est impliqué dans la régulation négative du signal transformant issu de l’oncogène KIT-D816.Au niveau distal, nous avons analysé les mécanismes de phosphorylation des protéines STAT1, -3 et -5 ainsi que l’importance fonctionnelle de leur activation dans la transformation dépendante de KIT-D816. Nous avons ainsi étudié la contribution de différentes kinases dans les phosphorylations activatrices des STATs sur tyrosine et serine. Nos résultats suggèrent que seul STAT5 a une activité transcriptionnelle dans nos modèles suggérant une implication potentielle non canonique des STAT1et -3 dans la transformation dépendante de KIT-D816.L’ensemble de nos travaux contribue à une meilleure compréhension des mécanismes de l’oncogenèse dépendante de KIT-D816, un point critique dans le développement raisonné de thérapeutiques anticancéreuses cibléesThe receptor tyrosine kinase KIT and its ligand, the stem cell factor (SCF), are implicated both in the development and the homeostasis of multiple cell lineages. Dysfunctions in the KIT/SCF pathway are involved in several pathologies affecting these compartments. In particular, gain-of-function mutations that lead to constitutive activation of the receptor KIT are found in human neoplasia.The purpose of this thesis project was to investigate some differences between normal and oncogenic signalling of KIT receptor using mast cells transformed by the KIT-D816 oncogene as a model. This question was analysed at aproximal level on the oncogenic receptor itself and at a more distal level on the STAT signal transduction pathway, which is specifically and constitutively activated by theKIT-D816 mutant.At the proximal level, we show that the juxtamembrane dityrosine motif Y568-Y570 of KIT is the major platform of recruitment of intracellular signalling partnerswith more than 15 interactors found in mast cells. Furthermore, the analysis ofcellular models in both in vitro and in vivo assays related to KIT physiological functions has revealed the negative role of the motif in KIT-D816-mediated cell transformation. At the distal level, we have analysed the mechanisms of phosphorylation ofSTAT1, -3 and -5 proteins and the functional relevance of their activation in KITD816-mediated transformation. We describe the contribution of different kinases inthe phosphorylation of STATs on both serine and tyrosine residues. Our results suggest that only STAT5 is transcriptionaly active whereas STAT1 and STAT3 are not, suggesting a non conventional implication of their activation in celltransformation. Our work contributes to a better understanding of the mechanisms of KITD816-mediated oncogenesis and could be used to improve the rational developmentof new targeted cancer therapies
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Mijakovic̀, Ivan. "Protéine kinases avec un motif Walker A chez Bacillus subtilis." Paris 11, 2003. http://www.theses.fr/2003PA112152.
Full textAbstract:
La phosphorylation des protéines est un phénomène omniprésent dans le monde du vivant, observé chez les trois grands règnes: Bacteria, Eukarya et Archaea. Les protéines capables de catalyser la formation d'une liaison covalente entre le phosphate et la chaîne latérale d'un acide aminé d'une protéine s'appellent protéine kinases. En revanche, les phospho-protéine phosphatases sont les protéines capables de dé-modifier une protéine phosphorylée, en catalysant l'hydrolyse du lien covalent entre la protéine et le phosphate. L'état de phosphorylation d'une protéine à un instant donné est alors déterminé par les activités antagonistes de sa kinase et sa phosphatase, qui à leur tour sont très souvent soumis à un contrôle de leur activité. Les occurrences de protéine kinases avec un motif Walker A (GXXXXGK(T/S)) documentées sont aujourd'hui relativement rares et confinées exclusivement aux bactéries. Ce travail représente une caractérisation de deux de ces kinases: l'HPr kinase/phosphorylase et une tyrosine-kinase dénommé YwqD. Le résultat le plus important de la partie de travail portant sur l'HPr kinase/phosphorylase est la découverte d'un nouveau mécanisme de déphosphorylation de protéines, dénommé phospho-phosphorolyse. La recherche sur la tyrosine kinase YwqD a permit de mettre en évidence le premier substrat protéique phosphorylé par une tyrosine kinase bactérienne. Il s'agit d'YwqF, une UDP-glucose déshydrogenase dont l'activité enzymatique est contrôlée par la phosphorylation sur tyrosineProtein phosphorylation is an omnipresent phenomenon in the living world, observed in Bacteria, Eukarya and Archaea. Proteins capable of catalysing the formation of a covalent bond between the phosphate and an amino acid side chain in a specific target protein are called protein kinases. Inversely, phospho-protein phosphatases are proteins capable of demodifying a phosphorylated protein by hydrolysing the covalent bond between the protein and the phosphate. The phosphorylation state of a protein target is therefore determined by antagonistic actions of its kinase and phosphatase, both of which are in turn often independantly regulated. The protein kinases known to contain a Walker A (GXXXXGK(T/S)) motif are few, and are strictly confined to the bacterial kingdom. This work presents a caracterisation of two such kinases: HPr kinase/phosphorylase and a tyrosine- kinase YwqD. The most important result stemming from the research on HPr kinase/phosphorylase is the discovery of a new mecanism of protein dephosphorylation that was named phospho-phosphorolysis. The research on YwqD led to the discovery of the first proteic substrate of a bacterial tyrosine kinase. This substrate is YwqF, a UDF-glucose dehydrogenase whose activity is controlled by reversible tyrosine phosphorylation
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Hassaïne, Ghérici. "Etude fonctionnelle de la protéine VIF du VIH-1." Aix-Marseille 2, 2001. http://www.theses.fr/2002AIX22009.
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Garçon, Fabien [Jacques Claude]. "La régulation de la protéine tyrosine kinase Tec lors de l'activation lymphocytaire T." Aix-Marseille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003AIX22077.
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Nowak, Frédérique. "Inhibiteurs de protéines tyrosine kinases et transduction : effet d'une tyrphostine sur les récepteurs de classe I et sur la signalisation conduisant à l'activation de la MAP kinase dans des cellules éphithéliales du colon." Châtenay-Malabry, Ecole centrale de Paris, 1996. http://www.theses.fr/1996ECAP0449.
Full textAbstract:
Nous avons étudié le mécanisme d'action d'un inhibiteur de protéines tyrosine kinases, la tyrphostine AG 213, sur les évènements induits par l'activation du R-EGF et de p185erbB2. Pour cela, nous avons utilisé la lignée d'origine tumorale humaine SW613-S. Nous avons transfecté les cellules SW 613-S avec soit le gène c-erbB2, soit le gène c-erbB2 muté dans la région transmembranaire, erbB2 (V-E). Cette mutation rend ce gène beaucoup plus transformant dans des fibroblastes. Dans les clones issus de la transfection, p185erbB2 et p185erbB2 (V-E) présentent une autophosphorylation constitutive, mais la phosphorylation de la protéine mutée est plus importante. L'expression de p185erbB2 (V-E) dans les cellules SW 613-S conduit à la phosphorylation constitutive des protéines Shc et a l'activation constitutive de la MAP kinase. Pourtant, ces cellules ne sont pas devenues tumorigènes. Au contraire, les cellules SW 613-S exprimant p185erbB2 (V-E) semblent présenter une régression de leur phénotype transformé. Nous avons ensuite analysé les effets de l'AG 213, sur le signal déclenché par l'activation du R-EGF et de p185erbB2. Lors de brefs traitements, l'AG 213 ne modifie pas la phosphorylation sur résidu tyrosine des deux récepteurs. Par contre, elle agit sur au moins deux cibles différentes. L'une se trouve en amont de MEK1 et l'autre semble être MEK1 elle même. De même, lors de traitements prolongés, l'inhibition par l'AG 213 de la synthèse d'ADN n'est pas reliée à l'inhibition de l'activité tyrosine kinase du R-EGF et de p185erbB2 (V-E).
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Hammam, Kahina. "Nouveau concept de resensibilisation à la chimiothérapie en activant la nucléoside kinase dCK par le masitinib, un inhibiteur de protéines tyrosine kinases." Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM5047.
Full textAbstract:
La résistance à la chimiothérapie constitue un frein majeur à son efficacité. Notre équipe a récemment pu montrer que le masitinib, un nouvel inhibiteur de protéines tyrosine kinases, possède une activité de resensibilisation des cellules tumorales résistantes à la chimiothérapie lorsqu'il est combiné à certaines chimio-drogues. L'objectif des travaux de cette thèse est de déterminer les voies de signalisation, modulées par l'action du masitinib, qui sont impliquées dans la resensibilisation aux chimiothérapies et amélioration de l'activité anti-tumorale.Dans la première partie de la thèse, nous avons pu identifier la nucléoside kinase dCK (désoxycytidine kinase), protéine activatrice d'un grand nombre de chimiothérapies, comme nouvelle cible du masitinib. Cette première étude nous a permis de mettre en évidence un nouveau concept thérapeutique: le masitinib, un composé chimique de type inhibiteur de protéines tyrosine kinases, peut jouer en même temps le rôle d'activateur de nucléoside kinase.Nous avons pu mettre en évidence dans la deuxième partie de la thèse que le traitement combiné entre l'épi-drogue décitabine et le masitinib peut être plus efficace pour la réexpression de certains gènes non ou peu induits par la décitabine seule.En conclusion, ces travaux nous ont permis de mettre en évidence l'interaction entre un inhibiteur de protéine tyrosine kinases et une nucléoside kinase, dans un concept d'activation enzymatique qui pourra certainement servir de base pour l'élaboration de nouvelles petites molécules chimiques spécifiques de l'activation de dCK ou d'autres nucléosides kinases nécessaires à l'activation des drogues de chimiothérapieResistance to chemotherapy is considered as one of the major blockers of its efficacy. Recently, our team demonstrated that masitinib, a new tyrosine kinases inhibitor, possesse a resensitization activity of cell lines resistant to chemotherapy when associated with chemodrugs.The aim of this work is to determine signaling pathways, modulated by masitinib action, that could explain the resensitization to chemotherapy and improvement of anti-tumoral activity.In the first part of this work, we identified the nucleoside kinase dCK (deoxycytidine kinase), a chemotherapy activating protein, as a new target of masitinib. In summary, this first part of the work allowed us to describe a new and never described concept: masitinib, a small molecule belonging to tyrosine kinases group, can also play a role as nucleoside kinase activator.We were able to demonstrate through the second part of the work that the combined treatment of the epidrug decitabine and masitinib can be more effective than decitabine treatment for the re-expression of some genes non or weakly induced by decitabine when used alone.In conclusion, These data allowed us to introduce an interaction between a tyrosine kinases inhibitor and a nucleoside kinase, as an enzymatic activation new concept. This could be used as a base for the design of new small chemical molecules specific for dCK or other nucleoside kinases essential for the activation of chemodrugs. This concept will obviously help to imagine and evaluate more potential therapeutic combinations of chemodrugs and small chemical molecules to overcome the resistance to chemotherapy dependent on nucleoside kinases
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Soulat, Didier. "Phosphorylation des protéines au niveau de la tyrosine chez Staphylococcus Aureus : mécanisme moléculaire et rôle biologique." Lyon 1, 2005. http://www.theses.fr/2005LYO10019.
Full textAbstract:
Ce travail s'inscrit dans le cadre de l'étude de la phosphorylation réversible des protéines au niveau de la tyrosine chez Staphylococcus aureus. Nous avons tout d'abord identifié, chez cette bactérie, deux activités déphosphorylantes, les tyrosine-phosphatases de bas poids moléculaire Ptp5A et Ptp5B, et une activité phosphorylante, la tyrosine-kinase Cap5B2. Nous avons ensuite réalisé la caractérisation biochimique des protéines Ptp5A et Ptp5B. Nous avons également déterminé le mécanisme moléculaire d'activation de l'activité kinase de la protéine Cap5B2. Une étude comparable réalisée sur la tyrosine-kinase Wzc d'Escherichia coli a permis de mettre en évidence deux modes d'activation différents entre les tyrosine-kinases de ces deux espèces bactériennes. Enfin, nous avons identifié un substrat endogène de la protéine Cap5B2 : la protéine Cap5O codée par un gène appartenant à l'opéron de biosynthèse de la capsule. Cette protéine possède une activité UDP-N-acétylmannosamine déshydrogénase qui augmente lorsqu'elle est phosphorylée sur des résidus tyrosyles. L'étude au niveau moléculaire de ces tyrosine-kinases et tyrosine-phosphatases vise à mieux appréhender le rôle de ces enzymes dans le métabolisme des bactéries et, plus particulièrement, dans la régulation de leur virulence
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Castel, Hélène. "Contribution à l'étude de la régulation du récepteur GABA-A par les protéines kinases et le monoxyde d'azote dans les cellules mélanotropes de l'hypophyse de grenouille." Rouen, 2000. http://www.theses.fr/2000ROUES081.
Full textAbstract:
Le lobe intermédiaire de l’hypophyse des amphibiens est constitué d’une seule population de cellules endocrines, les cellules mélanotropes, qui synthétisent l’hormone mélanotrope α (α-MSH). Les cellules mélanotropes expriment les sous-unités α2, α3, β2/β3, γ2 et/ou γ3 qui présentent des séquences consensus de phosphorylation par la PKA, la PKC, la PKG, la CaM KII et la PTK. Des études histochimiques ont démontré la présence de l’enzyme de synthèse du monoxyde d’azote (NO), la NO synthase (NOS), dans le lobe neurointermédiaire de l’hypophyse. Le but de notre travail était de déterminer le rôle de la phosphorylation des sous-unités du récepteur GABA-A et d’étudier les voies de transduction mises en jeu par le NO impliquées dans la régulation du courant évoqué par le GABA. Deux inhibiteurs de PTK, le genistein (10⁻⁹ à 10⁻⁵ M) et la lavendustin A (10⁻¹² à 10⁻⁷ M), provoquent une potentialisation du courant induit par le GABA, tandis que leurs analogues inactifs respectifs, le daidzein et le lavendustin B, n’entraînent aucune modification des réponses au GABA. En configuration inside-out, le genistein (10⁻⁷ M) prévient l’effet inhibiteur direct de la PTK pp60ͨͭͨͨᶜ⁻ᶳᵗᶜ sur la probabilité d’ouverture du canal Cl⁻. De plus, il inhibe le taux de phosphorylation de résidus tyrosine des sous-unités β2/β3 du récepteur GABA-A. Un inhibiteur de tyrosine phosphatase , l’orthovanadate de sodium, entraîne à la fois une diminution du courant contrôle et du courant potentialisé par le genistein. Ces données indiquent que la phosphorylation des sous-unités β2/β3 du récepteur GABA-A par une PTK endogène provoque une diminution de la transmission GABAergique. Les études histochimiques et immunohistochimiques montrent qu’une NOS neuronale (nNOS) est exprimée dans les cellules mélanotropes. Le substrat de la NOS, la L-arginine (L-Arg), et un donneur de NO, le SNP, induisent une inhibition persistante du courant évoqué par le GABA. Par ailleurs, l’inhibiteur sélectif de nNOS, le 7-NI et l’inhibiteur spécifique de NOS inductible, l’aminoguanidine, provoquent une diminution transitoire suivie d’une potentialisation prolongée du courant. La formation de GMPc dans les lobes neurointermédiaires est augmentée en orésence de L-Arg ou de caféine, et bloquée par un inhibiteur du complexe Ca²⁺/calmoduline, le W7. De plus, l’activation d’une PKG par le 8pCPTcGMP inhibe l’amplitude des réponses au GABA. Ces résultats démontrent que le NO, synthétisé dans les cellules mélanotropes par une nNOS, entraîne une diminution du courant évoqué par le GABA via l’activation de la voie de transduction GMPc/PKG. En présence des inhibiteurs de GCs, le LY 83583 ou l’ODQ, le SNP provoque une potentialisation des courants macroscopiques évoqués par le GABA. Dans la configuration de patch-clamp inside-out, la probabilité d’ouverture du canal Cl⁻ est augmentée par les donneurs de NO, tels que le SNP et le DEA/NO, ou les agents alkylants, comme le H2O2 et le DTNB. Les agents réducteurs, le β-mercaptoéthanol et le DTT, abaissent la probabilité d’ouverture du canal et antagonisent l’effet des donneurs de NO ou des agents alkylants. Ces résultats suggèrent que le NO potentialise les courants évoqués par le GABA en agissant sur des résidus cystéines des sous-unités du récepteur GABA-A et/ou d’une protéine qui lui est étroitement associée. En conclusion, nos résultats démontrent pour la première fois que, dans les cellules endocrines, la phosphorylation constitutive des sous-unités β2/β3 du récepteur GABA-A par la PTK et l’activation de la PKG résultant de la stimulation de la GCs par le NO endogène, entraînent une inhibition des réponses au GABA. Par ailleurs, le NO exercerait un effet potentialisateur direct sur l’ouverture du canal Cl⁻ en induisant la S-nitrolysation des sous-unités du récepteur GABA-A et/ou de protéines étroitement associées.
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Pinet, Louise. "Structural and functional investigation of the C-terminal intrinsically disordered fragment of ErbB2." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS375/document.
Full textAbstract:
ErbB2/HER2 est un récepteur tyrosine kinase de la famille d'EGFR (ErbB1) surexprimé dans plus de 20% des cancers du sein et associé à une forme particulièrement agressive de la maladie. Les récepteurs ErbBs sont actifs seulement sous forme de dimères, permettant la phosphorylation de leur queue C-terminale par leur domaine tyrosine kinase. La phosphorylation entraine l'interaction avec des protéines adaptatrices et l'activation de voies de signalisation, Ras/MAPK et PI3K/Akt principalement. Ces voies contrôlent la prolifération, la motilité cellulaire et la résistance à l'apoptose. Contrairement à ErbB1/3/4, ErbB2 dimérise en l'absence de ligand. Comprendre les autres mécanismes de régulation de la phosphorylation de ses tyrosines et de ses interactions est donc particulièrement intéressant.ErbB2 a fait l'objet de nombreuses études structurales et fonctionnelles. Elles ont permis la mise au point de traitements ciblés efficaces mais sujets à l'apparition de résistance, dont l'anticorps Trastuzumab, ciblant sa partie extracellulaire. La queue C-terminale d'ErbB2 (CtErbB2) a été très souvent ignorée dans ces études. Cette partie étant intrinsèquement désordonnée, il a fallu attendre ces dernières années pour que les concepts et les outils permettant de l'étudier émergent.Dans cette thèse, j'ai d'abord effectué la caractérisation structurale et dynamique de CtErbB2. J'ai montré que bien qu'étant dépourvue de toute structure stable, cette région riche en prolines possède plusieurs structures secondaires transitoires et un contact longue-distance participant très probablement à la régulation de ses interactions intra- et inter-moléculaires. Dans une deuxième partie je me suis intéressée à la caractérisation de la protéine adaptatrice Grb2, partenaire essentiel de ErbB2 pour l'activation de la voie des MAP kinases. L'organisation en solution des domaines de cette protéine modulaire dans sa forme libre était jusque là inconnue. J'ai ensuite étudié l'interaction entre Grb2 et CtErbB2, et montré que CtErbB2 interagit non seulement avec le domaine SH2 de Grb2 (par l'intermédiaire d'une phosphotyrosine), mais aussi avec son domaine SH3 N-terminal (grâce à un motif polyproline). Enfin, j'ai mis en place plusieurs stratégies de phosphorylation des tyrosines de CtErbB2, dans le but d'étudier plus largement l'effet des phosphorylations sur l'ensemble de cette régionErbB2/HER2 is a receptor tyrosine kinase of the EGFR (ErbB1) family overexpressed in 20% of breast cancers and associated to a particularly aggressive form of the disease. ErbB receptors are only active upon dimerization that enables phosphorylation of their C-terminal tail by their tyrosine kinase domain. Phosphorylation then triggers interaction with adaptor proteins and activation of signaling pathways, mainly Ras/MAPK and Akt/PI3K. Those pathways control cell proliferation, motility and resistance to apoptosis. Contrary to ErbB1/3/4, ErbB2 can dimerize without any ligand. Understanding other mechanisms of regulation of its tyrosine phosphorylation and of its interactions is thus particularly interesting.ErbB2 structure and function have been extensively studied. This has led to the development of several FDA-approved targeted drugs, that are effective but to which resistance occurs, amongst which the Trastuzumab antibody that targets ErbB2 extracellular domain. The C-terminal tail of ErbB2 (CtErbB2) has been widely ignored in these studies. Since it is intrinsically disordered, the concepts and tools to study it have only emerged in the last few years.In the present work, I have performed the structural and dynamic study of CtErbB2. I showed that despite its lack of any stable structure, this proline-rich region exhibits several transient secondary structures and a long-range contact that might participate in the regulation of its intra- and inter-molecular interactions. Then, I characterized the adaptor protein Grb2, which is a partner of ErbB2 that is essential for the activation of the MAPK pathway. The solution organization of the domains of this modular protein in its apo-form was unknown so far. I also studied the interaction between Grb2 and CtErbB2, showing that in addition to the known SH2-phosphotyrosine interaction, a polyproline motif of CtErbB2 binds to the N-terminal SH3 domain of Grb2. Finally, I implemented several strategies to phosphorylate CtErbB2 tyrosines, to study more extensively the effect of phosphorylation on the whole tail
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Schneider, Jean-Christophe. "Régulation de la synthèse de NO par les tyrosine kinases, la Ca 2+/calmoduline protéine kinase II et l'échangeur Na+/Ca2+." Paris 5, 2002. http://www.theses.fr/2002PA05CD08.
Full textAbstract:
La relaxation vasculaire est en majeure partie régulée par le monoxyde d'azote (NO) synthétisé par l'isoforme endothéliale de la NO synthase (NOS III). La NOS III localisée au niveau d'une unité fonctionnelle la cavéolae, est elle-même dépendante de la concentration intracellulaire de la Ca2+ libre ([Ca2+]i), de réactions de phosphorylation et de l'homéostasie calcique cavéolaire. Récemment, l'implication des tyrosines kinases, de la Ca2+/calmoduline protei͏̈ne kinase II (CaMK II) et de l'échangeur Na+/Ca2+ dans la synthèse de NO ont été supposées. L'objet de cette étude a été de caractériser le rôle de ces trois systèmes dans la relaxation d'anneaux d'aorte de rat et la production de NO par une lignée de cellule endothéliale d'aorte de porc. Les effets des tyrosines kinases, de la CaMK II et de l'échangeur Na/+Ca2+ ont été étudiés par l'intermédiaire d'activateurs et d'inhibiteurs des kinases et de l'échangeur. La relaxation a été suivie sur les anneaux en chambre d'organe par leur allongements isométriques après stimulation par différents activateurs de la NOS III. La production de NO cellulaire a été quantifiée par la concentration des nitrites et nitrates dans le milieu de culture ou la détermination en temps-réel du NO libéré par sonde ampérométrique. Les inhibiteurs des tyrosines kynases et phosphatases ont montré une diminution de la relaxation dépendante de l'endothélium et une diminution de la production de NO. Ces effets n'ont pas été associés à la phosphorylation des radicaux tyrosyls de la NOS III. Au total, nos résultats confirment l'implication des tyrosines kinases, de la CaMK II et de l'échangeur Na+/Ca2 +dans la régulation de la NOS III. Si les tyrosines kynases solubles interviennent via la régulation de la [Ca2+] i , la CaMK II phosphoryle directement la NOS III alors que l'échangeur Na+/Ca2+ en mode Ca2+ entrant régule la concentration de Ca2+ libre cavéolaire. Ces trois systèmes supposent de nouveaux niveaux de régulation de la NOS III et la perspective de développements pharmacologiques.
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Lebeau, Alexandre. "Conception d’inhibiteurs de l’activité tyrosine kinase basée sur la plasticité conformationnelle : applications aux domaines kinase des protéines Axl, Abl et Src." Thesis, Montpellier 2, 2013. http://www.theses.fr/2013MON20250/document.
Full textAbstract:
Le récepteur tyrosine kinase Axl a été découvert en 1988. Depuis, son implication dans les phénomènes de cancérisation a été mis en lumière. Ce récepteur est surexprimé, entre autres, dans les lignées cellulaires du cancer du pancréas et du cancer du sein triple négatif. Le succès des inhibiteurs de kinase contre les cancers (imatinib, erlotinib …) nous a poussés à nous focaliser sur la conception d'inhibiteurs du domaine kinase de la protéine Axl afin d'élaborer de nouveaux anticancéreux. Pour ce faire, nous avons décidé de modéliser le domaine kinase de la protéine Axl en conformations dites ‘active' et ‘inactive'. Les modèles ont ensuite été validés par différentes méthodes : des méthodes de bioinformatique structurale mais aussi par amarrage comparatif et par criblage virtuel focalisé. Sur la base de ces modèles, une chimiothèque virtuelle focalisée a été construite et amarrée dans les modèles d'Axl. J'ai ensuite effectué la synthèse chimique de 15 des ligands conçus à l'étape précédente et ciblant la conformation ‘inactive' du domaine kinase d'Axl. Aucun de ces ligands n'est apparu actif dans les tests in vitro. Dans un second temps, nous nous sommes intéressés à la chimie des noyaux 4- et 7-azaindoles. Ces travaux ont permis la synthèse de 12 ligands dirigés contre les conformations ‘inactives' des domaines kinases d'Abl et de Src dont certains ont montré une activité prometteuse. Parallèlement, un criblage a très large échelle a été publié et nous avons utilisé ces nouveaux résultats pour réévaluer l'existence d'une conformation -inactive' – de type « DFG-out » - du domaine kinase d'Axl. Ces travaux permettront la conception de nouveaux ligands ciblant efficacement AxlThe receptor tyrosine kinase Axl was discovered in 1988. Latter on, its involvement in the cancer development was highlighted. Axl is overexpressed in pancreatic cancer and triple-negative breast cancer cell lines. The success of kinase inhibitors (imatinib, erlotinib ...) led us to focus on the design of inhibitors targetting the kinase domain of Axl. As a guide, we modeled the protein-kinase domain in its active and inactive conformations to perform structure-based drug design. The models were then validated by different methods: structural bioinformatics, comparative docking and focused virtual screening. A virtual chemical library was built and docked into Axl models.Then, I synthetized 15 chemical compounds targetting the ‘inactive' conformation of the kinase domain of Axl. However, none were active in an in vitro assay. Then we were interested in the chemistry of 4 and 7-azaindole cores. This work led to the synthesis of 12 ligands among which several showed promising activity against the ‘inactive' conformation of the kinase domains of Abl and Src.Meanwhile, a large-scale screening was published and we used that new data to re-evaluate the modeling of a "DFG-out" inactive conformation of Axl
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Morel, Marion. "Les récepteurs venus kinase (VKRs) de schistosoma mansoni : étude des voies de signalisation de SmVKR1 et rôle de la protéine adaptatrice SmShb." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S003/document.
Full textAbstract:
La schistosomiase est une parasitose causée par un ver plat trématode du genre Schistosoma. Cette pathologie, responsable de près de 300 000 décès par an, est essentiellement due à la forte fécondité des vers et à l’accumulation des œufs dans les tissus de l’hôte. Pour lutter contre la pathologie, un seul traitement efficace, le Praziquantel, est utilisé en masse dans les régions endémiques. Afin de parer à l’apparition de résistances au Praziquantel, le développement de molécules régulant la ponte du parasite fait partie des solutions alternatives envisagées.Les récepteurs Venus Kinase (VKRs) forment une famille de récepteurs tyrosine kinase (RTKs) spécifique des invertébrés découverte au laboratoire chez le parasite Schistosoma mansoni. Les VKRs possèdent une structure atypique associant un domaine extracellulaire de fixation au ligand de type Venus Flytrap (VFT) associé à un domaine Tyrosine Kinase (TK) intracellulaire. Deux VKRs sont exprimés chez S. mansoni : SmVKR1 et SmVKR2. Ces deux récepteurs activent les voies de signalisation ERK, Akt et JNK et jouent un rôle dans la reproduction du parasite.Du fait de leur absence dans le génome de l’Homme, et de leur rôle potentiel dans la modulation de la reproduction et du développement des parasites, les SmVKRs constituent des cibles intéressantes pour lutter contre la schistosomiase.La première partie de mon travail de thèse expose les données acquises quant au rôle des RTKs dans la régulation de la reproduction des schistosomes. Nous avons pu montrer que la conservation des domaines catalytiques des différents RTKs ouvre la voie à l’élaboration de molécules pouvant inhiber simultanément plusieurs RTKs de schistosomes afin de lutter contre la schistosomiase en agissant sur la ponte du parasite.La seconde partie de mon travail met en évidence qu’en plus d’agir directement sur l’activité des RTKs, il est possible d’inhiber les voies qu’ils activent. En effet, un criblage d’inhibiteurs de protéines kinases a permis d’identifier les composants de la voie Akt comme cibles potentielles pour lutter contre la schistosomiase : des doses très faibles (de l’ordre du nM) de certains inhibiteurs d’Akt sont capables d’inhiber l’appariement des schistosomes et la ponte.Dans la dernière partie, nous montrons que la protéine adaptatrice SmShb interagit spécifiquement avec SmVKR1 phosphorylé. Cette interaction se fait par la liaison du domaine SH2 de SmShb sur une Tyrosine phosphorylée spécifique, située dans la région juxtamembranaire du récepteur (pY979). La formation de ce complexe induit la phosphorylation de SmShb et dirige le signal de SmVKR1 spécifiquement vers la voie JNK. Des expériences d’hybridation in situ ont mis en évidence une colocalisation des transcrits de SmShb avec ceux de Smvkr1 au niveau des organes reproducteurs des vers adultes, notamment au niveau des ovocytes matures et des testicules. Le knock-down de SmShb par ARN interférence conduit à une accumulation de spermatozoïdes dans les testicules des vers mâles. Parallèlement, un criblage par la technique du triple hybride, en utilisant SmShb phosphorylé par SmVKR1 comme appât, a permis l’identification de diverses protéines partenaires de SmShb. En raison des résultats précédents, notre attention s’est portée sur deux protéines partenaires pour lesquelles l’interaction avec SmShb a été confirmée. 1) La GTPase RhoU, qui possède des fonctions potentielles dans la signalisation JNK et sur la dynamique du cytosquelette. 2) Une chaine légère de la dynéine TcTex-1 possédant un rôle potentiel dans la motilité des spermatozoïdes. L’ensemble de ces résultats suggère un rôle de SmShb dans la régulation de l’activité de SmVKR1 en permettant la formation d’un complexe multi-protéique incluant des protéines impliquées dans l’organisation du cytosqueletteSchistosomiasis is a parasitic disease caused by trematode flatworm species belonging to the genus Schistosoma. Responsible for about 300,000 deaths per year, the disease is mainly due to the high fertility of the worms and to encystment of eggs in host tissues. In order to fight against schistosomiasis, a single drug (Praziquantel) is efficient and massively distributed in endemic areas. To deal with the emergence of resistance to Praziquantel, one alternative is to consider the design of molecules that target parasite reproduction.Venus Kinase Receptors (VKRs) constitute an invertebrate Receptor Tyrosine Kinase (RTK) family initially discovered in the parasite Schistosoma mansoni. VKRs are atypical RTKs formed by an extracellular Venus Fly Trap (VFT) ligand binding domain associated via a transmembrane domain with an intracellular tyrosine kinase (TK) domain. Two VKRs are expressed in S. mansoni: SmVKR1 and SmVKR2. They both activate Erk, Akt and JNK signaling pathways and act on the parasite reproduction.As they are absent from the human genome and as they have potential roles in the modulation of reproductive processes and development of parasites, SmVKRs appear as attractive targets to fight schistosomiasis.The first part of my thesis work sets known data concerning the role of RTKs in schistosome reproduction. Here, we show that the catalytic domains are conserved across various RTKs and we open the perspective to design drugs which could inhibit several RTKs at the same time to control egg laying by schistosomes.The second part of my work describes the importance of using an alternative strategy of inhibiting downstream partners of RTKs. By screening a kinase inhibitor library, we defined the Akt pathway components as potential targets to fight schistosomiasis. Nanomolar doses of Akt inhibitors can inhibit schistosome pairing and egg laying.In the last part, we present the specific interaction of the adaptor protein SmShb with the phosphorylated form of SmVKR1. This binding occurs between the SH2 domain of SmShb and a phosphotyrosine residue (pY979) located in the juxtamembrane region of the receptor. That interaction leads to the phosphorylation of SmShb and promotes the signal of SmVKR1 towards a JNK pathway. In situ hybridization experiments highlighted that SmShb and Smvkr1 transcripts were both located in mature oocytes and testes of adult worms. RNA interference experiments using double-stranded RNA targeting SmShb led to an accumulation of mature sperm in testes of male worms. Finally, a yeast three hybrid screening, using SmShb phosphorylated by SmVKR1 as prey, allowed us to identify various protein partners. Taking advantage of previous results, we focused on two partners and confirmed their interaction with SmShb. 1) RhoU GTPase which has potential functions in JNK signalling and cytoskeleton dynamic. 2) The dynein light chain TcTex-1, with potential role in sperm motility. Altogether, this results argue for a potential role of SmShb in the regulation of the SmVKR1 activity by forming a multiprotein complex including proteins with various roles in cytoskeleton reorganization
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Galas, Ludovic. "Contribution à l'étude du couplage stimulus-sécrétion dans les cellules mélanotropes de l'hypophyse : mécanismes d'action de la TRH et du NPY." Rouen, 2001. http://www.theses.fr/2001ROUES024.
Full textAbstract:
Dans les cellules mélanotropes, la réponse calcique induite par la TRH résulte de l'influx du Ca2+ via 3 types de canaux Ca2+ (sensibles au Ni2+, L et N) et de la mobilisation du Ca2+ à partir des stocks IP3-dépendants. Le Ca2+ extracellulaire via les canaux de type L et le Ca2+ intracellulaire contribuent avec les PKC et PTK à la libération d'α-MSH induite par la TRH. Le NPY supprime l'effet sécrétoire de la TRH via un récepteur Y1 couplé à une protéine G sensible à la PTX et diminue la libération spontanée d'α-MSH via un récepteur Y5 couplé négativement à l'adénylyl cyclase et aux canaux Ca2+. En conclusion, dans les cellules mélanotropes, le NPY abolit via un récepteur Y1 couplé à une protéine G sensible à la PTX, la libération d'α-MSH induite par la TRH, laquelle résulte d'une augmentation de la [Ca2+]i et de l'activation des PKC et PTK. De plus, le NPY diminue la libération basale d'α-MSH via un récepteur Y5 en inhibant la production d'AMPc et l'influx de Ca2+In melanotrope cells, activation of TRH receptors induces an increase in [Ca2+]i that results from Ca2+ influx through 3 types of Ca2+ channels (Ni2+-sensitive, L- and N-type Ca2+-channels) and Ca2+ mobilization from IP3-sensitive intracellular pools. Ca2+ entry through LCC and mobilization of intracellular Ca2+, together with PKC and PTK, contribute in TRH-evoked α-MSH release. Melanotrope cells express the mRNAs encoding for Y1 and Y5 receptors. NPY inhibits the spontaneous release of α-MSH through a Y5 receptor coupled to adenylyl cyclase and suppresses TRH-induced α-MSH release through a Y1 receptor coupled to a PTX-sensitive G protein. In conclusion, in frog melanotrope cells, NPY abolishes, through a Y1 receptor coupled to a PTX-sensitive G protein, TRH-induced α-MSH release that results from an increase in [Ca2+]i and activation of protein kinase C et tyrosine kinase. In addition, NPY decreases basal α-MSH release through a Y5 receptor by inhibiting cAMP formation and Ca2+ influx
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Picard, Christophe. "Régulations intramoléculaires et intermoléculaires des membres de la famille Src : implication des interactions du domaine SH3 avec l'interdomaine." Aix-Marseille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003AIX20658.
Full textAbstract:
Les protéines Tyrosine kinase de la famille Src sont impliquées dans de nombreux processus physiologiques. Leur activité est régulée par des mécanismes qui modifient les contraintes moléculaires. Notre travail a apporté de nouvelles connaissances sur le rôle du domaine d'interaction SH3 et de l'interdomaine dans la régulation inter-et intra-moléculaire des protéines Src. Nous avons déterminé le mécanisme explicitant la spécificité d'interaction des protéines virales Nef pour le domaine SH3 de certaines protéines Src. De plus, nous avons validé un modèle d'étude de la pathogénie du SIDA. Enfin, l'analyse des deux isoformes de Fyn qui diffèrent par leur interdomaine nous a permis de mieux comprendre l'émergence du système immunitaire adaptatif et la fonction des interdomaines dans la sélection des substrats et dans la régulation intramoléculaire des protéines Src. Les conséquences potentielles morbides et thérapeutiques des anomalies de la réglation des protéines Src sont discutées.
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Vincent-Monégat, Carole. "Contribution à l'étude de la phosphorylation des protéines bactériennes au niveau de la tyrosine : proposition d'un rôle biologique." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO10263.
Full textAbstract:
Ce travail s'inscrit dans le cadre général de l'étude de la phosphorylation des protéines bactériennes. Récemment, la première activité tyrosine kinase bactérienne a été identifiée au laboratoire. Cette protéine, appelée Ptk pour "prokaryotic protein-tyrosine kinase", a été isolée à partir des membranes internes d'Acinetobacter johnsonii, bactérie aérobie stricte à Gram-négatif. Elle est capable de s'autophosphoryler aux dépens de l'ATP au niveau de plusieurs résidus tyrosyles. Nous avons, tout d'abord, réalisé une étude biochimique de la protéine Ptk en identifiant le site de fixation du nucléotide donneur de phosphate, l'ATP. Il est apparu qu'à la différence des protéine-kinases classiques eucaryotes, la protéines Ptk utilise les motifs A et B de Walker pour fixer l'ATP au cours de la réaction de phosphorylation. Par ailleurs, en étudiant la région du génome d'A. Johnsonii immédiatement en amont du gène Ptk, nous avons détecté, cloné et séquencé un autre gène, appelé ptp, codant pour une phosphotyrosine-protéine phosphatase, Ptp. Ainsi, nous avons identifié une situation très particulière où deux gènes adjacents sur le génome bactérien codent, en termes de phosphorylation, pour deux activités antagonistes. Une organisation génomique similaire a été retrouvée chez d'autres espèces bactériennes, dont Escherichia coli, au sein d'opérons qui sont tous impliqués dans la biosynthèse des polysaccharides de surface. Nous avons effectivement caractérisé chez E. Coli K12 deux nouveaux couples de protéines tyrosine kinase/phosphatase, Wzb/Wzc et Etk/Etp. Nous avons également pu appréhender le rôle régulateur de la protéine Wzc dans la physiologie de la cellule et, plus particulièrement, le rôle de la phosphorylation de cette protéine sur la biosynthèse de la capsule polysaccharide grâce à la réalisation de mutants génomiques. Ces glycocomposés étant connus pour être des facteurs de virulence importants chez les bactéries pathogènes, nous envisageons un rôle plus général de la phosphorylation réversible sur la tyrosine au niveau de la cascade de réactions qui déterminent la virulence des bactéries pathogènes.
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Tahtouh, Tania. "Optimisation et caractérisation de nouveaux inhibiteurs pharmacologiques de DYRKs et CLKs, les leucettines." Thesis, Rennes 1, 2013. http://www.theses.fr/2013REN1S015.
Full textAbstract:
Les DYRKs (dual specificity, tyrosine phosphorylation regulated Kinases) et CLKs (cdc2-like kinases) sont deux familles de kinases du groupe CMGC. Elles sont impliquées dans le développement de la maladie d'Alzheimer et de la trisomie 21. Nous présentons ici une optimisation et une caractérisation biologique détaillée des Leucettines, une famille d’inhibiteurs pharmacologiques de DYRKs/CLKs dérivés de la Leucettamine B, un alcaloïde extrait d'une éponge marine. Nous avons étudié la relation structure/activité de cette classe d'inhibiteurs sur un ensemble de réponses biologiques. Afin d'étudier les cibles potentielles de ces inhibiteurs, nous avons mis en œuvre une méthode de chromatographie d’affinité. La sélectivité de la Leucettine L41, sélectionnée comme représentative des Leucettines, a été étudiée par des essais d'activité et d'interaction de kinases recombinantes in vitro, et des tests de chromatographie d'affinité (Leucettines immobilisées sur billes d'agarose, compétition sur billes d’inhibiteurs non sélectifs). Des approches transcriptomiques et protéomiques ont été utilisées afin de mieux comprendre le mécanisme d'action cellulaire de la Leucettine L41. Ces approches ont confirmé la sélectivité de la Leucettine L41 pour DYRKs et CLKs mais aussi révélé l’existence de cibles secondaires intéressantes. La Leucettine L41 module l'épissage alternatif de pré-ARNm. Elle présente des propriétés neuroprotectrices vis-à-vis de la mort cellulaire induite par le glutamate. Les Leucettines méritent un développement en tant qu'agents thérapeutiques potentiels pour le traitement de la maladie d'Alzheimer et de la trisomie 21DYRKs (dual specificity, tyrosine phosphorylation regulated kinases) and CLKs (cdc2-like kinases) are two families of kinases belonging to the CMGC group. They are involved in the development of Alzheimer's disease and Down syndrome. We here present the optimization and a detailed biological characterization of Leucettines, a family of pharmacological inhibitors of DYRKs/CLKs derived from Leucettamine B, an alkaloid produced by a marine sponge. We studied the structure/activity relationship of this class of inhibitors on a set of biological responses. To investigate potential targets of these inhibitors, we implemented an affinity chromatography method. The selectivity of Leucettine L41, selected as a representative Leucettine, was studied by in vitro activity and interaction assays of recombinant kinases and affinity chromatography approaches (Leucettines immobilized on agarose beads, competition on non-selective inhibitors). Transcriptomics and proteomics approaches were used to better understand the cellular mechanism of action of Leucettine L41. These approaches confirmed the selectivity of Leucettine L41 for DYRKs and CLKs but also revealed the existence of interesting secondary targets. Leucettine L41 modulates alternative splicing of pre-mRNAs. It displays neuroprotective properties towards glutamate-induced cell death. Leucettines deserve further development as potential therapeutic agents for the treatment of Alzheimer's disease and Down syndrome
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Lopez, Jonathan. "L’oncogène Src et les protéines de la famille Bcl-2 : une coopération coupable : implication de la protéine Bik dans la résistance à l’apoptose de cellules transformées par l’oncogène Src." Thesis, Lyon 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LYO10057.
Full textAbstract:
La protéine tyrosine kinase c-Src est surexprimée et activée dans de nombreux cancers. De manière remarquable, Src est activé dans plus de 80% des adénocarcinomes coliques où il joue un rôle dans la carcinogenèse et la progression vers un phénotype métastatique. c-Src et son homologue viral v-Src activent un grand nombre de voies cellulaires permettant à la tumeur de proliférer, de résister à la mort cellulaire et d’acquérir des capacités accrues de migration et d’angiogenèse. Au cours de ma thèse nous avons mis en évidence un mécanisme inattendu d’échappement à l’apoptose de fibroblastes murins surexprimant de manière stable v-Src et de plusieurs lignées tumorales humaines (coliques en particulier) présentant une activité c-Src dérégulée. Nous avons montré que Src stimule la dégradation protéasomedépendantede la protéine Bik, un membre pro-apoptotique de la famille Bcl-2, connu pour être un suppresseur de tumeurs. Cette régulation post-traductionnelle du niveau d’expression de Bik est à l’origine d’une forte résistance de la voie mitochondriale de l’apoptose. L’inhibition de l’activité kinase de Src ou le blocage de la dégradation de Bik par le protéasome permettent de restaurer des concentrations normales de la protéine Bik dans les cellules transformées et de les restaurer efficacement l’apoptose. En revanche, l’inhibition des protéines anti-apoptotiques de la famille Bcl-2 par l’ABT-737 semble moins efficace. Par ailleurs, nous avons également contribué à mettre en évidence le rôle anti-migratoire et anti-invasif du lithium sur des cellules transformées par Src. Le mécanisme moléculaire mis en jeu implique l’activation redox des protéines tyrosine phosphatases cellulaires. Enfin, nous avons participé à l’étude de peptides mimant les hélices centrales d’insertion de Bax, Bcl-xL et Bid, représentant les trois sous-groupes de protéines de la famille Bcl-2. Nous avons comparé leur comportement vis-à-vis d’une monocouche lipidique mimant la membrane mitochondriale externe ainsi que leur capacité à perméabiliser des mitochondries isolées. Nos résultats nous ont permis de proposer que les fragments centraux d’insertion membranaire des protéines Bcl-2 seraient directement impliqués dans la divergence fonctionnelle des différents sous groupes qui composent la familleC-Src tyrosine kinase is overexpressed and activated in a number of cancers. Remarkably, Src is deregulated in more than 80% of colorectal adenocarcinoma, playing a role in carcinogenesis and progression toward a metastatic phenotype. c-Src and v-Src activate a large number of intracellular pathways which allow the tumor to proliferate, to evade the cell death machinery and to acquired enhanced migratory and angiogenic abilities. During my PhD, we discovered an unknown mechanism to evade apoptosis developed by murine fibroblasts stably overexpressing v-Src and by some human tumor cell lines with c-Srcb deregulation. We have shown that Src stimulate the proteasomal degradation of the Bik protein, a proapoptotic member of the Bcl-2 family proteins known to act as a tumor suppressor. This post-translationnal regulation of the Bik protein expression level leads to a strong resistance of the mitochondrial pathway of apoptosis. Inhibition of the Src kinase activity or of the Bik proteasome-dependent degradation restore normal levels of the Bik protein and efficiently resensitize these cells to apoptosis. Inhibition of the antiapoptotic Bcl-2 proteins by ABT737 seems to be less efficient in these cells. We also contribute to show that lithium suppresses motility and invasivity of v-Src transformed cells. The molecular mechanism involve a redox activation of the protein tyrosine phosphatases. Finally, we compared the membrane behavior and the ability to permeabilize mitochondria of synthetic peptides derived from the central helical hairpin of Bax,Bcl-xL and Bid. We showed that these structurally analogous domains have distinct membrane behavior which could account for the functional divergence between the Bcl-2 family members
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Jacquet, Kevin. "Étude de la spécificité fonctionnelle des protéines adaptatrices NCK1 et NCK2." Doctoral thesis, Université Laval, 2019. http://hdl.handle.net/20.500.11794/35439.
Full textAbstract:
Plusieurs réponses cellulaires aux stimuli extracellulaires sont transmises par des voies de signalisation qui agissent en aval de récepteurs membranaires tels les récepteurs tyrosine kinase (RTK). Les signaux provenant des RTK sont souvent relayés via des protéines adaptatrices comme NCK1 (Non-Catalytic region of tyrosine Kinase 1) et NCK2 dont les fonctions sont considérées redondantes et indissociables. Toutefois, certaines études suggèrent que chacune de ces deux protéines pourraient avoir des cibles cellulaires spécifiques et des fonctions uniques. L’objectif de mon projet de doctorat était d’analyser la spécificité des protéines NCK1/2, c’est-à-dire d’identifier pour chacune des cibles uniques, pour ensuite caractériser ce qui génère cette spécificité tout en définissant la fonction de ces interactions. En premier lieu, j’ai utilisé deux techniques complémentaires de protéomique, soit (i) des purifications d’affinité (AP) et (ii) du marquage de proximité in vivo (BioID) suivies d’analyses en spectrométrie de masse (MS) afin de caractériser les interactomes respectifs de NCK1/2. La combinaison de ces deux approches m’a permis d’identifier plus d’une centaine d’interactions spécifiques pour chaque NCK. Des analyses bio-informatiques basées sur ces résultats m’ont permises de mettre en évidence que NCK2 semble plus spécifiquement impliquée que NCK1 dans la régulation de l’organisation du cytosquelette d’actine, structure essentielle lors de la division et de la cytokinèse. En comparant simultanément des cellules fibroblastiques murines (MEF) déplétées soit pour NCK1, soit pour NCK2, j’ai remarqué que les cellules Nck2-/-, à l’inverse des cellules Nck1-/- étaient plus multinucléées et présentent un midbody altéré en longueur. Également, j’ai remarqué une altération dans la composition du midbody des cellules Nck2-/- tel que suggéré par l’absence dans cette structure des protéines Polo-like kinase1 (PLK1), Epithelial cell transforming 2 (ECT2) ou encore Aurora B (AURKB), régulateurs clefs de la cytokinèse. Finalement, j’ai montré que la fonction de NCK2 durant la cytokinèse repose principalement sur son domaine SH2. Dans un deuxième temps, j’ai sélectionné 27 partenaires identifiés en MS et confirmé par une méthode orthogonale leurs interactions respectives avec NCK1 et/ou NCK2. Grâce à des tests de liaison in vitro, j’ai déterminé que plusieurs protéines dont la Plakophiline 4 (PKP4), un régulateur de la cytokinèse, lient directement et spécifiquement NCK2. Par différentes expériences in vitro, j’ai pu déterminer que NCK2 lie les portions N-terminale et centrale de PKP4 grâce à son domaine Src Homology (SH) 2 et que la spécificité de NCK2 envers PKP4 ne semble pas dépendre seulement des propriétés intrinsèques du SH2. L’association résulte plutôt de la combinaison d’une partie ou de l’ensemble des propriétés des domaines et régions interdomaines constituant les protéines NCK1/2. En conclusion, bien que les fonctions de NCK1/2 soient généralement considérées comme redondantes, mes résultats démontrent que ces protéines sont capables de lier des partenaires différentspour réguler des fonctions biologiques distinctes. Ainsi, mes travaux suggèrent que NCK2 semble spécifiquement requise lors du processus de cytokinèse. De plus, l’ensemble de mes expériences in vitro apporte une première idée du mécanisme de spécificité des protéines NCK1/2 en suggérant que leur spécificité ne semble pas entièrement provenir des propriétés intrinsèques de leurs domaines individuels, mais plutôt d’une combinaison des propriétés de leurs domaines et/ou régions interdomaines respectives.Signals from cell surface receptors are often relayed via adaptor proteins that can serve as hubs to recruit appropriate target signaling molecules and guide signals along specific pathways. Among these, adaptor proteins NCK1 (Non-Catalytic region of tyrosine Kinase 1) and NCK2 have functions that are often considered redundant and/or indistinguishable. The main goal of my work was to demonstrate that NCK1 and NCK2 are not fully redundant and may each display functional specificity. To achieve this, I delineated NCK1-and NCK2-specific signalling networks, identified for each unique target, then characterized what generates this specificity and obtained the function of these interactions. First, to identify the complement of interaction partners for NCK1 and NCK2, I used two unbiased mass spectrometry (MS)-based approaches: (i) epitope-tagged protein affinity purification (AP) followed by MS analysis and (ii) in vivo proximity labelling (BioID). The combination of these two approaches allowed me to identify more than one hundred specific interactions for each NCK. Bioinformatics analyzes based on the specific partners identified in MS enabled me to highlight that NCK2 was more specifically involved in the regulation of the actin cytoskeleton organization, structure essential for cell division and cytokinesis. By simultaneously comparing mouse embryo fibroblasts (MEF) depleted either for NCK1 or NCK2, I noticed that Nck2-/-, but not Nck1-/-cells are multi-nucleated and display extended protrusions reminiscent of intercellular bridges, which correlate with an extended time spent in cytokinesis as well as a failure of a significant proportion of cells to complete abscission. Further analysis of this phenotype revealed that the midbody of NCK2-deficient cells is not only increased in length, but also altered in composition, as judged by the mislocalization of the Polo-like kinase 1 (PLK1), Epithelial cell transforming 2 (ECT2) and Aurora B (AURKB) proteins. Moreover, I showed that NCK2 function during cytokinesis requires its SH2 domain. Second, to underline the molecular mechanism of specific protein complex formation, I selected based on my MS results 27 partners to confirm by an orthogonal method their respective interactions with NCK1 and/or NCK2. By using in vitro binding assays, I was able to determine that several proteins including Plakophilin 4(PKP4), a key regulator of the cytokinesis process, were able to bind directly and specifically to NCK2. Through various in vitro experiments, I was able to determine that NCK2 binds the N-terminal and central portions of PKP4 through its SH2 domain and that the specificity of PKP4 toward NCK2 does not appear to result from the intrinsic properties of its SH2 alone. This association seems to result from the combination of some or all of the properties of the individual domains and inter-regions constituting the NCK1/2 proteins. In conclusion, despite what is generally accepted, I showed that both NCK1 and NCK2 may form specific protein complexes, thus reflecting the functional specificity of these two adaptor proteins. I further demonstrated that NCK1 and NCK2 are not completely redundant. I also shed light on a previously uncharacterized function for the NCK2 adaptor protein in cell division. Finally, my in vitro experiments provide an explanation for the specificity mechanism of NCK1/2 adaptor proteins by suggesting that their specificity come from the combination of the properties of their respective domains and/or interdomain regions.
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Boulven, Isaline. "Réseaux de transduction stimulés par les récepteurs à activité tyrosine kinase et les récepteurs couplés aux protéines G dans les cellules myométriales : rôle dans l'activation des protéines ERK et impact sur la prolifération cellulaire." Paris 11, 2002. http://www.theses.fr/2002PA112007.
Full textAbstract:
Cette étude concerne les réseaux de signalisation impliqués dans la régulation de la prolifération des cellules musculaires lisses utérines (cellules myomètriales), celle-ci jouant un rôle essentiel dans le contrôle des activités de l'utérus. Nous avons démontré, dans des cellules de myomètre de rate en culture primaire, l'implication des MAP kinases de type ERK dans l'effet mitogène de différents agents: le PDGF, un facteur de croissance qui interagit avec un récepteur à activité tyrosine kinase, l'endothéline-1 (ET-1), un peptide mitogénique qui interagit avec un récepteur couplé aux protéines Gi et Gq dans le myomètre, et le pervanadate (PV), un inhibiteur de protéines tyrosine phosphatases. Nos résultats ont démontré que le PDGF et le PV stimulent les voies PLCγ1/InsP3 et ERK qui conduisent à la libération d'acide arachidonique et à la biosynthèse de prostaglandines impliquées dans la production d'AMPc. L'effet inhibiteur de l'AMPc sur l'activation de ERK et la synthèse d'ADN induites par les PDGF et le PV souligne l'existence d'une boucle de rétroinhibition au niveau des réponses médiées par ces deux agents. Nous avons également montré la présence et l'activation par le PV des protéines tyrosine kinases de la famille Src dans les cellules de myomètre. Ces protéines sont impliquées dans l'activation de la PLCγ1 et la production d'InsP3 dues au PV, et dans l'activation de ERK par ET-1. En effet, l'activation de ERK par ET-1 met en jeu la stimulation séquentielle de PKC, Src et Ras. Par ailleurs, deux voies de transduction contribuent à l'activation PKC-dépendante de ERK par ET-l: une voie Gq/PLCβ/InsP3/PKC conventionnelles et nouvelles, et une voie Gi/PI3-kinase/PKC atypiques. L'ensemble de cette étude contribue à une meilleure compréhension des mécanismes de régulation de la prolifération des cellules de myomètre, qui intervient dans des conditions physiologiques (gestation) mais aussi pathologiques (fibromes) et physiopathologiques (préterme)In this study, we aimed to analyse the signalling pathways involved in the regulation of myometrial cells proliferation which plays an essential role in uterine functions. We demonstrated, in rat myometrial cells in primary culture, the involvement of MAP kinases of the ERK type in the mitogenic effect of various agents: PDGF, a growth factor acting through a receptor tyrosine kinase, endothelin-1 (ET -1), a mitogenic peptide which interacts in the myometrium with receptors coupled to Gi and Gq proteins, and pervanadate (PV), a potent protein tyrosine phosphatase inhibitor. Our results showed that PDGF and PV induced PLC-γ1/Ins3 stimulation and ERK activation that both contribute to cAMP production by increasing the release of arachidonic acid and the biosynthesis of prostaglandin. The inhibition of ERK activation and DNA synthesis by cAMP constitutes a potentially important negative feedback loop for PDGF and PV- mediated responses. The presence and the activation by PV of tyrosine kinases of the Src family was also demonstrated in rat myometrial cells. These kinases contributed to the activation of PLCγ1 and the production of InsP3 triggered by PV, and to the activation of ERK induced by ET-1. Indeed, we demonstrated that ET-1-mediated ERK activation involves the sequential activation of PKC, Src and Ras. We also showed that two signalling pathways contribute to the PKC-dependant ERK activation induced by ET-1: a Gq-PLCβ-InsP3-conventional/novel PKC and a Gi-PI3kinase-atypical PKC pathway. Altogether, the results demonstrate the presence of signalling networks required for the regulation of myometrial cells proliferation which play an essential role in physiological conditions (gestation) as well as pathological (fibroma) and physiopathological (preterm) conditions
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Naudin, Cécile. "Régulation de la signalisation oncogénique de Src par l'adaptateur SLAP dans les cellules de cancer colorectal." Thesis, Montpellier 2, 2012. http://www.theses.fr/2012MON20082.
Full textAbstract:
La tyrosine kinase cytoplasmique Src est un régulateur clé de la signalisation induite par les facteurs de croissance et les intégrines. Src présente des propriétés oncogéniques lorsqu'elle est dérégulée, une situation fréquemment retrouvée dans les cancers colorectaux (CCR). Sous sa forme activée, Src participe à la croissance tumorale et à la formation de métastases. Cependant, les mécanismes de dérégulation impliqués sont mal connus. En effet, SRC est rarement muté dans ces cancers. Mon travail de thèse a mis en évidence un nouveau mécanisme de dérégulation de Src via l'inactivation de SLAP. SLAP est une protéine de signalisation de type adaptateur qui régule négativement la signalisation lymphocytaire. De part son association avec l'E3-ligase Cbl, il induit la dégradation de substrats importants de la tyrosine kinase Lck nécessaires à l'activation lymphocytaire. Je montre que SLAP est également exprimé dans le tissu épithélial colique et que son expression est fréquemment perdue au cours de la progression tumorale colorectale. SLAP inhibe la tumorigénicité et le potentiel métastasant des cellules de CCR. Sur le plan moléculaire, SLAP définit une boucle de rétrocontrôle d'une voie oncogénique Src/EphA2/Akt initiée par Src via la dégradation protéasome-dépendante du récepteur EphA2 impliquant l'ubiquitine E4-ligase UBE4A. Ces résultats révèlent un nouveau mécanisme d'induction oncogénique de Src, une fonction insoupçonnée de suppresseur de tumeurs de SLAP et montrent l'importance d'une E4-ligase et des protéines adaptatrices dans la régulation négative de la signalisation initiée par les tyrosine kinases dans la progression tumoraleThe cytoplasmic tyrosine kinase Src mediates intracellular signaling induced by growth factors and integrins. When deregulated, Src acquires oncogenic properties. Src deregulation largely occurs in the absence of mutation of the corresponding gene but the underlying molecular mechanisms involved in this process are still unclear. Here I uncovered a novel mechanism of Src oncogenic induction in colorectal cancer (CRC) via SLAP silencing. SLAP is an adaptor protein and signaling molecule that controls lymphocytes activation. By association with E3-ligase Cbl, SLAP induces proteasomal degradation of important components of T cell receptor signaling, which impedes lymphocytes activation. I show that SLAP is also expressed in the epithelial tissue of the colon, but its expression is frequently lost during tumorigenesis. I also show that SLAP controls tumorigenicity and invasiveness of CRC cells. At the molecular level, SLAP specifies a feedback loop of a Src/EphA2/Akt oncogenic signaling that is initiated by Src itself. Precisely, phosphorylation of EphA2 on Tyr594 by Src creates a binding site for SLAP-SH2 to elicit receptor degradation. This novel SLAP function is independent of Cbl but requires its interaction with the E4-ligase UBE4A. SLAP down-regulation observed in cancer cells dramatically increases EphA2 levels and amplifies a Src/EphA2/Akt signaling required for cell tumorigenicity. Thus, SLAP inactivation defines a novel mechanism of Src oncogenic induction in human cancer
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Peyressatre, Marion. "Développement de biosenseurs fluorescents et d’inhibiteurs pour suivre et cibler CDK5/p25 dans le glioblastome." Thesis, Montpellier, 2016. http://www.theses.fr/2016MONT3513/document.
Full textAbstract:
CDK5 est une protéine kinase exprimée de façon ubiquitaire et activée principalement dans le système nerveux central, ou elle joue un rôle important dans la transmission synaptique, la guidance axonale et la migration cellulaire, la plasticité synaptique et le développement neuronal. CDK5 est associée à la protéine p35 au niveau de la membrane cellulaire, et activée par clivage calpaine-dépendant de cette dernière en p25, ce qui conduit à la relocalisation de CDK5/p25 dans le cytoplasme cellulaire. CDK5/p25 phosphoryle de nombreux substrats dont la protéine Tau, contribuant ainsi à l’apparition de plaques neurofibrillaires responsable des pathologies neurodégénératives comme Alzheimer et Parkinson, lorsqu’elle est hyperactivée. Plus récemment, l’expression et l’hyperactivation de CDK5 a été décrite comme impliquée dans le développement de cancers et en particulier de tumeurs cérébrales. Toutefois aucune approche ne permet actuellement de détecter et de mesurer l’activité de CDK5/p25 directement dans des cellules vivantes, au sein des tissus et des tumeurs concernées, dû à un manque d’outils fiables et sensibles pour quantifier les changements dynamiques de son activité kinase. Par ailleurs, peu d’inhibiteurs sont actuellement disponibles pour inhiber CDK5/p25, de manière spécifique, la plupart ciblant la poche de fixation de l’ATP.Le premier objectif de ma thèse a consisté à développer un biosenseur d’activité fluorescent de nature peptidique appelé CDKACT5 qui rapporte l’activité kinase de CDK5/p25 recombinante et dans des extraits cellulaires de manière dynamique et réversible suivant stimulation ou inhibition de cette kinase. Une fois caractérisé et validé in vitro, le biosenseur a été appliqué à la détection d’altérations de CDK5/p25 dans différentes lignées cellulaires de glioblastome dans des essais fluorescents d’activité kinase. Enfin CDKACT5 a été introduit dans des cellules neuronales vivantes afin de suivre les changements dynamiques d’activité de CDK5/p25 par microscopie de fluorescence et vidéo microscopie.Le deuxième objectif de ma thèse a consisté à développer un biosenseur fluorescent conformationnel dans le but d’identifier des inhibiteurs non compétitifs de l’ATP ciblant la boucle d’activation de CDK5. Le biosenseur CDKCONF5 a été exploité pour réaliser un criblage haut débit de trois chimiothèques de petites molécules. Les touches identifiées ont été validées et caractérisées in vitro, pour déterminer leur potentiel inhibiteur dans des tests d’activité kinase et de prolifération cellulaire, ainsi que leur mécanisme d’action. Ces molécules constituent des candidats prometteurs pour une chimiothérapie sélective du glioblastomeCDK5 is a protein kinase ubiquitously expressed but mainly activated in the central nervous system, where it plays an important role in neuronal functions such as synaptic transmission, axonal guidance and migration, synaptic plasticity and neuronal development. CDK5 is associated with p35 protein at the cell membrane, then activated by calpain-mediated cleavage of p35 into p25, which promotes relocalization of CDK5/p25 into the cytoplasm. CDK5/p25 phosphorylates a wide variety of substrates including Tau, thereby contributing to appearance of neurofibrillary plaques responsable for neurodegenerative pathologies such as comme Alzheimer’s et Parkinson’s, when hyperactivated. More recent studies suggest that CDK5 expression and hyperactivation are involved in glioblastoma during cell invasion and CDK5 expression has been reported to be correlated with the pathological grade of gliomas. However there are currently no tools available to monitor CDK5/p25 activity in its native cellular environment, in tissues or in tumours, due to an overall lack of reliable tools to quantify dynamic changes in its kinase activity in a sensitive and continuous fashion. Furthermore, few inhibitors are currently available to target CDK5/p25 in a specific fashion and most of them are ATP competitive inhibitors.The first goal of my thesis was to develop a fluorescent peptide biosensor named CDKACT5, that specifically reports on recombinant CDK5/p25 and on endogenous CDK5 activity in cell extracts in a dynamic and reversible fashion following stimulation or inhibition of this kinase. Once validated in vitro, this biosensor was applied to detect alterations in CDK5/p25 activity in different glioblastoma cell lines in fluorescent kinase activity assays. Finally CDKACT5 was introduced into cultured neuronal cells to monitor dynamic changes in CDK5/p25 activity by fluorescence imaging and time-lapse microscopy.The second goal of my thesis project consisted in developing a conformational fluorescent biosensor to identify non-ATP competitive inhibitors targeting the activation loop of CDK5. CDKCONF5 was implemented to perform a high throughput screen of three small molecule libraries. The hits identified were validated and characterized to determine their inhibitory potential in kinase activity and proliferation assays, as well as their mechanism of action. These compounds constitute promising for selective chemotherapy in glioblastoma
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Prénéta, Rachel. "Contribution à l'étude de la phosphorylation des protéines chez trois espèces bactériennes." Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO10155.
Full textAbstract:
Chez Klebsiella pneumoniae, nous avons montré que deux gènes successifs,yor5 et yco6, localisés au sein de l'opéron cps impliqué dans la synthèse de la capsule, codent respectivement deux enzymes d'activités opposées, une phosphotyrosine-protéine phosphatase, Yor5, et une protéine-tyrosine kinase, Yco6. De plus, Yco6 s'est avéré être un substrat endogène de Yor5. Chez Rhizobium meliloti, nous avons retrouvé une activité protéine-tyrosine kinase portée par la protéine Exop impliquée dans la biosynthèse d'un exopolysaccharide majeur, qui joue un rôle essentiel dans la mise en place de la symbiose entre la bactérie et la plante. Toutefois, aucune activité phosphotyrosine phosphatase n'a été observée. Ces résultats nous ont conduits à émettre l'hypothèse d'une relation entre la phosphorylation des protéines sur la tyrosine et la synthèse de la capsule. Ches Mycobacterium tuberculosis, nous avons montré que les deux protéines de choc thermique HspX et Hsp71, ont la capacité de s'autophosphoryler respectivement sur les résidus séryles et thréonyles. Puis à partir d'alignements de séquences, nous avons observé, que la protéine PknG possède les domaines conservés des protéine-sérine/thréonine kinase eucaryotes. Nous avons ensuite montré que PknG s'autophosphoryle sur la sérine et que cette protéine est sensible aux inhibiteurs spécifiques cde ce type de protéines. Une intervention de la phosphorylation ATP-dépendante sur la sérine ou sur la thréonine, dans la mise en place des mécanismes de survie de la bactérie au sein de son hôte, semble donc envisageable.
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Popova, Milena. "Caractérisation et rôle de la phosphorylation de la protéine Rad51." Nantes, 2009. https://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show/show?id=f265ac85-cb5b-456d-9217-1cdf0775da90.
Full text
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Lebrun, D'ambrosio Patricia. "Relations entre les voies de signalisation des intégrines et celles de l'insuline et de l'IGF-I : un rôle pour les protéines FAK et IRS-1." Nice, 2000. http://www.theses.fr/2000NICE5476.
Full textAbstract:
La protéine IRS-1 (Insulin Receptor Substrate-1) est un des substrats majeurs des récepteurs de l'insuline et de l'IGF-I. En présence d'insuline, IRS-1 est phosphorylé sur tyrosine et peut interagir avec les intégrines. Les intégrines jouent un rôle important dans l'adhésion des cellules entre elles et dans leur attachement à la matrice extracellulaire. Après adhésion cellulaire, la tyrosine kinase FAK est phosphorylée sur tyrosine et activée. Nous avons mis en évidence que l'engagement des intégrines induit la phosphorylation sur tyrosine d'IRS-1 et que FAK interagit avec IRS-1. Cette association est dépendante du domaine C-terminal de FAK, mais ne requiert pas son activité kinase. La surexpression d'IRS-1 avec FAK induit une importante phosphorylation sur tyrosine d'IRS-1 et une activation de la PI 3-kinase associée à IRS-1. Nous avons ensuite montré que les intégrines contrôlent l'expression d'IRS-1. Des fibroblastes en suspension expriment très faiblement l'ARNm d'IRS-1 et la ré-adhésion de ces fibroblastes sur fibronectine ou vitronectine restaure le niveau de l'ARNm. Nous nous sommes également intéresés au rôle de FAK dans la régulation de l'expression d'IRS-1. (. . . ). Le contrôle de l'expression d'IRS-1 par les intégrines permettrait d'expliquer une potentialisation à long terme par l'adhésion cellulaire du signal généré par l'insuline ou l'IGF-I. En revanche, la formation du complexe FAK/IRS-1, ainsi que la phosphorylation d'IRS-1 induite par FAK permettrait d'expliquer une potentialisation à court terme de l'action de l'insuline et de l'IGF-I.
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Tisserand, Julie. "Mise en évidence d'un rôle suppresseur de tumeur pour la protéine tyrosine-kinase FES dans le mélanome." Thesis, Aix-Marseille, 2016. http://www.theses.fr/2016AIXM5035.
Full textAbstract:
Le mélanome est un cancer de la peau agressif et au mauvais pronostic. Si de nouvelles solutions thérapeutiques efficaces ont été développées, les taux de réponses sont variables et transitoires. Découvrir de nouveaux mécanismes oncogéniques dans cette pathologie reste donc nécessaire. Durant mes travaux, j’ai pu démontrer que la protéine tyrosine-kinase FES est exprimée dans les mélanocytes normaux. Cette expression est largement perdue dans un panel de lignées cellulaires de mélanome, au niveau protéique et transcriptionnel ainsi que dans des cultures primaires d’échantillons de patients. La perte de FES est due à une hyper-méthylation de son promoteur et est réversible. En ré-exprimant FES de manière stable dans deux lignées cellulaires de mélanomes, j’ai montré que cette réexpression entraînait une diminution des capacités oncogéniques des cellules. De plus, en analysant les données d’une cohorte de mélanomes (TCGA), j’ai pu établir qu’une diminution importante ou une perte d’expression de FES se retrouve dans près de 40% des patients, et qu’elle est corrélée à une hyper-méthylation du gène FES. Les patients ayant une faible expression de FES présentent un moins bon pronostic soulignant l’importance de ce phénomène. Enfin, en croisant un modèle murin déficient pour le gène Fes avec un modèle de mélanome, nous observons que les tumeurs sous fond Fes KO sont plus prolifératives et plus volumineuses.Ainsi, par des analyses in vitro, sur des données de patients ou en croisant des modèles murins, j’ai pu démontrer que FES est exprimée au niveau des mélanocytes normaux et y exerce un rôle de suppresseur de tumeurAmong skin cancers, melanoma is the most aggressive and has the worst prognosis. In the last years, new therapeutic tools have been developed but responses differ between patients and are often transient due to resistance mechanisms. This highlights the need to improve understanding of molecular mechanisms of the disease. During my thesis, I have shown for the first time that FES tyrosine kinase is expressed in normal melanocytes, and that its expression is lost at the protein and RNA levels in most melanoma cell lines. The same result is observed in a panel of 12 patients’ short-term cultures. The lack of expression is due to FES promoter hyper-methylation and can be reverted using a hypomethylating agent. By restoring FES expression in two melanoma cell lines, I observe a decrease of oncogenic properties of the cells. Moreover, the analysis of the TCGA data on melanoma indicate that FES expression is strongly decreased or lost in about 40% of patients, and that this loss of expression is correlated with FES promoter methylation. Importantly, patients with low level of FES mRNA have poor prognosis compared to FES expressing patients. Finally, Fes knock-out mice crossed with an inducible melanoma mouse model indicate that tumors proliferation and size are more important under a Fes KO background.In conclusion, by using melanoma cells in vitro, data from melanoma patients and mouse models, I have demonstrated that FES is expressed in normal melanocytes and clearly plays a tumor suppressor role.in melanoma
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Luciano, Frédéric. "Apoptose et survie dans les lymphocytes : rôle des tyrosine kinases de la famille SRC et du membre pro-apoptotique de la famille BCL-2, BIM." Nice, 2002. http://www.theses.fr/2002NICE5781.
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Saucier, Marc-André. "Le rôle des protéines d’échafaudage Gab dans la transformation des cellules épithéliales intestinales." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2014. http://hdl.handle.net/11143/5925.
Full textAbstract:
Des études cliniques indiquent que l’hétérogénéité des récepteurs tyrosine kinase (RTK) dérégulés dans le cancer colorectal (CCR) contribue à la résistance aux thérapies ciblant qu’un seul RTK. Une alternative serait de cibler les protéines effectrices engagées par plusieurs RTK régissant les processus clés à la progression du CCR, mais la signalisation des RTK dans le CCR reste peu définie. Des travaux réalisés au laboratoire ont démontré par une approche dominante négative que le pouvoir oncogénique du RTK Met chez les cellules épithéliales intestinales transformées par une forme active de Met (Tpr-Met-IEC-6) serait dépendant des protéines Gab (Grb2-associated binder). Cette approche reposait sur l’inhibition de l’interaction entres les protéines Gab et Met par l’expression du domaine de Gab1 renfermant un motif d’interaction indirect aux RTK, via la protéine Grb2, et le site de liaison direct, unique à Gab1, avec Met. Ainsi, cette approche ne permet pas de discerner les effets de Gab1 de ceux de Gab2 en aval de Met.
L’objectif de cette présente étude était de définir les rôles qui sont propres à Gab1 et à Gab2, en aval de Met, dans les cellules Tpr-Met-IEC-6. Pour ce faire, nous avons évalué l’impact d’une modulation de l’expression de Gab1 et de Gab2, par une approche d’interférence à l’ARN et de surexpression, sur les caractéristiques oncogéniques de ces cellules. De façon surprenante, nous démontrons que Gab1 affecte positivement l’expression Tpr-Met, la transformation morphologique ainsi que la croissance cellulaire. De plus, nous démontrons que la diminution ou la surexpression de Gab2 dans les cellules Tpr-Met-IEC-6 n’a aucun effet sur la morphologie, la croissance cellulaire, la capacité des cellules à croître au-delà de la confluence et sans ancrage à la matrice extracellulaire et enfin sur la migration.
En conclusion, mes travaux de recherche suggèrent que la protéine Gab1, et non Gab2, joue un rôle essentiel dans le pouvoir oncogénique de Met dans les cellules épithéliales intestinales. Ainsi, Gab1 et ses voies de signalisation pourraient représenter des cibles prometteuses pour l’élaboration de nouvelles thérapies contre le CCR.
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Naud, Josy Baldaheania. "Inhibition du transport des analogues nucléosidiques par l'inhibiteur de tyrosine kinase nilotinib." Master's thesis, Université Laval, 2013. http://hdl.handle.net/20.500.11794/24025.
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Yang, Wen-Chin. "Le rôle de la protéine tyrosine kinase Tec dans l'activation cellulaire T." Aix-Marseille 2, 1998. http://www.theses.fr/1998AIX22116.
Full textAbstract:
Les proteines tyrosine kinases (ptk) sont indispensables pour la signalisation de la cellule t. Trois familles (src, syk/zap70 et tec) ont ete decrites comme etant impliquees dans des voies de transduction des cellules t. Cependant, le role de la famille tec reste peu connu. La famille tec comprend cinq membres : btk, itk, tec, rlk et bmx. Tec, itk et rlk sont exprimes dans la cellule t. Nous avons pu montrer que tec est impliquee dans les voies de signalisation passant par le recepteur t (tcr) et par la molecule cd28 puisque l'engagement du tcr ou de cd28 peut stimuler l'activite tyrosine kinase de tec. Dans ces cas, l'activation de tec peut etre regulee positivement par une autre famille de ptk : la famille src. Tec kinase est fonctionnelle, elle peut reguler l'expression de cytokines comme il-2, ifn ou il-4. Tec active des voies de signalisation conduisant a l'activation des promoteurs de ces genes codant pour il-2, ifn ou il-4 en particulier en agissant sur des facteurs de transcription nfat et nfb. Au niveau de la molecule cd28, nous avons mis en evidence une interaction entre tec et cd28 de maniere activation-dependante. Cette interaction provient d'une liaison entre le domaine sh3 de tec et la region riche en proline de cd28. La stimulation de cd28, contrairement a une stimulation du tcr, conduit a la phosphorylation sur residu tyrosine d'une proteine p62 d o k associee a rasgap. P62 d o k est un substrat de tec kinase. En parallele, un autre membre de la famille tec : itk a ete etudie. Par rapport a tec, itk n'est pas impliquee dans l'expression des cytokines, de plus p62 d o k n'est pas un substrat cellulaire de itk. Ces resultats montrent que ces deux membres de la famille tec : tec et itk ont des fonctions differentes dans les cellules t bien qu'elles soient toutes les deux stimulees lors de l'engagement de recepteurs (tcr, cd28) activant la cellule t.
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Semaan, Noha. "Rôle des protéine tyrosine kinases Tec dans la réponse inflammatoire induite par les interactions PAMPs/PRRs dans la polyarthrite rhumatoïde." Strasbourg, 2009. http://www.theses.fr/2009STRA3005.
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Banerjee, Sara Luiza. "Identification de nouvelles protéines effectrices dans la signalisation des récepteurs Eph." Doctoral thesis, Université Laval, 2021. http://hdl.handle.net/20.500.11794/69034.
Full textAbstract:
La réponse cellulaire aux stimuli extracellulaires est souvent médiée par des voies de signalisation qui agissent en aval des récepteurs transmembranaires, comme les récepteurs tyrosine kinases (RTK). Avec quatorze membres, la famille des récepteurs Eph représente la plus grande famille de RTK chez l'humain. Contrairement aux autres RTK, les ligands des récepteurs Eph, les éphrines, sont des protéines associées à la membrane cellulaire. La signalisation Eph-éprhines est donc principalement impliquée dans des événements de communication qui impliquent des contacts cellule-cellule comme la migration cellulaire, la répulsion et l'adhésion cellule-cellule. Ces événements sont cruciaux pour certains processus biologiques tels le guidage axonal et l'organisation tissulaire dans l'organisme en développement et chez l'adulte. Les récepteurs Eph sont fréquemment surexprimés ou dérégulés dans divers cancers, en particulier dans les plus agressifs et mortels. Récemment, la signalisation Eph-éphrines est devenue une nouvelle cible émergente pour le traitement du cancer. Bien que les fonctions biologiques des récepteurs Eph aient été largement étudiées, notre compréhension des mécanismes moléculaires grâce auxquels les récepteurs Eph régulent des phénotypes cellulaires précis demeure incomplète. Pour mieux comprendre le système de signalisation impliquant les Eph, mes travaux ont porté sur l'identification de nouvelles protéines effectrices en aval des récepteurs Eph et sur l'étude de leurs implications dans les fonctions régulées par les récepteurs Eph. Pour mieux comprendre les complexes de signalisation associés aux récepteurs Eph dans des conditions natives, j'ai appliqué une approche basée sur la spectrométrie de masse (MS), le marquage de proximité BioID. Cela m'a permis de surmonter les limites de l'utilisation d'approches conventionnelles de purification par affinité pour cartographier les interactions protéine-protéine liées aux récepteurs transmembranaires. J'ai obtenu un réseau de signalisation dépendant des récepteurs EphA4, - B2, -B3 et -B4, qui comprend 395 protéines, dont la plupart n'avaient jamais été liées à la signalisation Eph-dépendante. Pour tester la pertinence biologique des partenaires identifiés, j'ai examiné la contribution de 17 candidats en utilisant une approche de perte de fonction dans une expérience de tri cellulaire dépendante des récepteurs Eph. J'ai pu montrer que la déplétion de quelques candidats, incluant la protéine Par3, bloque le tri des cellules. En utilisant la purification par affinité combinée à la MS, j'ai aussi identifié un complexe de signalisation impliquant la kinase C-terminal SRC (CSK), dont le recrutement aux complexes Par3 dépend des signaux des récepteurs Eph. Pour mieux comprendre les interactions protéiques suivant la liaison Eph-éphrine, j'ai effectué des expériences de TurboID. Ces études m'ont permis d'identifier des complexes protéiques associés au récepteur EphA4 lorsqu'il est lié à l'éphrine-B2. J'ai également étudié les interactions protéine-protéine dépendantes de la liaison du récepteur EphB2 aux éphrines-B1 et -B2. Pour explorer si l'interaction d'EphB2 avec ces deux ligands peut mener à une réponse de signalisation inverse différente, j'ai identifié les partenaires de des ephrin-B1/-B2 lorsque stimulés par EphB2. Enfin, j'ai cartographié les réseaux de signalisation dépendants des récepteurs EphA4 et EphB2 sauvages ou kinase-inactifs, ce qui m'a permis de conclure que la perte de leur activité catalytique a conduit à des changements majeurs dans les interactomes dépendants de ces récepteurs. L'ensemble de mes résultats a permis de mieux définir les complexes protéiques dépendants des récepteurs Eph. Mes études ont mené à une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires sous-jacents aux récepteurs Eph et de leur contribution dans le processus de délimitation des tissus, un processus souvent perturbé dans des maladies comme le cancer.The cellular response to extracellular stimuli is often mediated by signaling pathways that act downstream of transmembrane receptors, such as receptor tyrosine kinases (RTKs). With fourteen members, the Eph family of RTKs is the largest in humans. In contrast to other RTKs, Eph receptor cognate ligands, ephrins, are tethered to the cell surface. This results in Eph receptor-ephrin signaling being mainly involved in short-range cell-cell communication events that regulate cell migration, repulsion and cell-cell adhesion. These events are crucial in biological processes such as axon guidance and tissue boundary formation in the developing and adult organisms. Eph receptors are frequently overexpressed or deregulated in a variety of human tumors, especially in the more aggressive and lethal ones. In recent years, the Eph-ephrin signaling system became an emerging new target for cancer treatment. Although a plethora of Eph receptor biological functions have been extensively studied, we still have a vague idea on the molecular mechanisms of Eph receptor signal transduction, underlying how Eph receptors regulate precise cellular phenotypes. To better understand the Eph receptor signaling system, my studies focused on the identification of novel Eph receptor downstream effector proteins and the determination of their requirement for Eph receptor-regulated functions. To unravel Eph receptor-associated signaling complexes under native conditions, I applied a mass spectrometry (MS)-based approach, namely BioID proximity labeling. This allowed me to overcome the limitations of conventional affinity purification approaches for mapping protein-protein interactions of transmembrane receptors. I obtained a composite signaling network from EphA4, -B2, -B3 and -B4 receptors that comprises 395 proteins, most of which not previously linked to Eph signaling. To test the biological relevance of the identified Eph receptor proximity interactors, I examined the contribution of 17 candidates using a loss-of-function approach in an Eph receptor-dependent cell sorting assay. I showed that depletion of a few candidates, including the signaling scaffold Par3, blocks Eph receptordependent cell sorting. Using affinity purification combined with MS, I further delineated a signaling complex involving C-terminal SRC kinase (CSK), whose recruitment to Par3 complexes is dependent on Eph receptor signals. To further elucidate Eph receptor-centric signaling complexes that are formed upon ephrin binding and are affected by Eph receptor catalytic activity I performed TurboID experiments. I systematically mapped ligand stimulation-dependent signaling networks downstream of EphA4 and EphB2 receptors. I dissected the impact of ephrin-B2 stimulation on the formation of EphA4- nucleated proximal protein complexes. Moreover, I showed the differential recruitment of EphB2 partners upon receptor binding to the same subclass of ligands, ephrin-B1 and ephrin-B2. To explore whether the EphB2 interactions with these two ephrin-B ligands elicit different reverse signaling responses, I delineated ephrin-B1/-B2 proximity partners recruited upon EphB2 stimulation. I also determined that the kinase domain of EphA4/-B2 plays a major role in determining the composition of signaling networks around the receptors, as a loss of catalytic activity led to a drastic decrease in a number of interactors with the receptors. Collectively, my definition of Eph receptor signaling networks sheds light on physiologically relevant Eph receptor-centered protein complexes that occur in living cells. These studies will lead to a better understanding of the mechanisms by which Eph receptors transmit signals at the membrane and give insight into how Eph receptor-mediated signaling pathways contribute to boundary formation, a process often disrupted in diseases like cancer.
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Barete, Stéphane. "Implications des tyrosine kinases dans la physiopathologie et la thérapeutique des mastocytoses." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077058.
Full textAbstract:
Les mastocytoses représentent un ensemble de pathologies hétérogènes par l'accumulation et/ou à l'activation de mastocytes dans divers tissus. Les mastocytes, dérivent de progéniteurs, expriment KIT un récepteur membranaire à activité tyrosine kinase (TK) codé par le proto-oncogène A77", impliqué dans la différenciation et l'activation du mastocyte. Des mutations activatrices situées majoritairement sur l'exon 17 (au codon 816) de KIT sont impliquées dans les mastocytoses. Or, certains adultes (5% à 30%) et enfants (14%) atteints n'ont pas de mutation de KIT trouvée après séquençage (wild type : WT). Une physiopathologie impliquant d'autres TK est alors envisageable. Les formes indolentes de mastocytoses peuvent être traitées par thérapie ciblée, quand le traitement standard est insuffisant, en bloquant KIT WT comme avec Pimatinib. Dans ce travail nous avons décrit des précurseurs des mastocytes et les prévalences des mutations sur des cohortes de patients. Nous avons étudié le transcriptome centrée sur le kinome en recherchant dans les tissus infiltrés (peau et moelle) s'il existait un profil de tyrosine kinase particulier pour les patients WT par comparaison à ceux mutés en 816. Nos résultats ont montré la surexpression de 4 kinases (JAK3, LYN, TEK, IGF1R) dans la peau mutée en KIT 816. Ensuite nous avons rapporté dans deux études, dans les formes indolentes, l'efficacité du masitinib, un nouvel inhibiteur de TK, qui agirait par blocage de la kinase LYN indépendamment du statut mutationnel de KIT. Si les TK peuvent représenter des cibles thérapeutiques pour les mastocytoses avec KIT muté, la physiopathologie des mastocytoses WT reste à explorer par d'autres techniquesMastocytosis is a heterogeneous disorder characterized by an accumulation of proliferative mast cells with activation in various tissues. Derived from progenitors, mast cells express the membrane KIT receptor encoded by KIT proto-oncogene, which is involved in cellular differentiation and activation. KIT activating mutations, mainly in exon 17 (816 codon position), have been involved in mastocytosis, However, mutation after KIT sequencing analysis is lacking for some affected adults (5% to 30%) and children (14%) (wild type: WT). So, one can speculate that others tyrosine kinases might be involved in pathophysiology of WT mastocytosis. Targeted therapy is an option for indolent systemic mastocytosis (ISM) when symptomatic care is inefficient, to block KIT WT signal transduction and/or proliferation as observed with imatinib. In this work, we have described mast cells precursors and mutations' frequencies among patients cohorts. In another work about WT patients, we have searched in inflltrated tissues (skin and bone marrow) to identify a specific kinase profile comparing to mutated patients. In this transcriptomic study, focused on kinome, our results showed up-regulation of four kinases TK (JAK3, LYN, TEK, IGF1R) in KIT 816 skin. We have then observed in two studies in ISM, a similar efficacy of masitinib, a new tyrosine kinase inhibitor, which might block LYN kinase, independently of KIT mutational status. If these TK might open therapeutic targets for mutated patients, WT mastocytosis pathophysiology remains to be investigated with others research tools
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Vincent, Claire. "Etude du rôle de la protéine Hck, tyrosine kinase de la famille Src, dans la motilité des lysosomes : implication de la polymérisation de l'actine." Toulouse 3, 2007. http://www.theses.fr/2007TOU30072.
Full textAbstract:
Bien qu'essentielle à la destruction des agents infectieux par les phagocytes, l'exocytose des lysosomes demeure un événement biologique partiellement caractérisé. L'activation de l'isoforme lysosomale de la tyrosine kinase de la famille Src, p61Hck (Hematopoietic cell kinase), est concomitante à la sécrétion de ces organelles et induit des réarrangements importants du cytosquelette d‘actine. Hck interagit par ailleurs avec des protéines induisant la polymérisation de l'actine. Mon travail de thèse a permis d'établir la capacité de Hck à induire la polymérisation de l'actine de novo, qui, dans le contexte cellulaire, s'organise en comète à la surface des lysosomes associés à Hck. La reconstitution de ce processus in vitro a permis de démontrer que Hck est capable d'induire la biogénèse de ces structures indépendamment d'autres protéines lysosomales. Dans ce contexte, la mise en place des comètes d'actine dépend de l'activité kinase de Hck, de WASp, du complexe Arp2/3, de Cdc42 et de Rho-GDI. Dans la cellule, la biogénèse de comète d'actine induite par l'activation de Hck a été corrélée à une accélération de 35% des lysosomes-p61Hck, qui dépend de la polymérisation de l'actine de novo et de l'intégrité du cytosquelette de microtubules. Ces résultats ont ainsi permis d'identifier p61Hck comme la première protéine lysosomale capable de recruter la machinerie moléculaire responsable de la biogénèse de comète d'actine. L'ensemble de ces données suggère également un nouveau mécanisme de motilité des lysosomes qui implique p61Hck, la formation de comètes d'actine et le cytosquelette de microtubulesWhile essential for the destruction of pathogens by phagocytes, the exocytosis of lysosomes remains a partially characterized biological event. The activation of the lysosomal isoform of the Src-tyrosine kinase p61Hck (Hematopoietic cell kinase), is concomitant to the secretion of these organelles and induces important remodelling of the actin cytoskeleton. Moreover, Hck interacts with proteins that are able to induce actin polymerization. The work I performed demonstrated the ability of Hck to induce de novo actin polymerization. In the cellular context, this process triggered the biogenesis of actin-comet tails at the surface of lysosomes associated with Hck. The in vitro reconstitution of this process indicated that other lysosomal proteins were dispensable in this mechanism. In this context, the actin-comet tails biogenesis was dependant on the kinase activity of Hck, WASp, the Arp2/3 complex, Cdc42 and Rho-GDI. This actin-comet biogenesis was correlated to a 35%-acceleration of p61Hck-lysosomes in cells, that was dependent on de novo actin polymerization and required an intact microtubular network. These results establish p61Hck as the first lysosomal protein able to recruit the molecular machinery responsible for actin tail formation. Altogether, these data suggest a new mechanism for lysosome motility involving p61Hck, actin-comet tail biogenesis and the microtubule network
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Hanemian, Mathieu. "Rôle de la protéine CLV1 dans la sensibilité d'Arabidopsis thaliana à la bactérie phytopathogène Ralstonia solanacearum." Toulouse 3, 2012. http://thesesups.ups-tlse.fr/2754/.
Full textAbstract:
Les mécanismes moléculaires associés au développement de la maladie causée par la bactérie phytopathogène R. Solanacearum sont relativement peu connus à ce jour. La recherche de mutants d'Arabidopsis incapables de développer des symptômes de flétrissement associée à la maladie a mené à l'identification de gènes dit de sensibilité. Les produits de ces gènes peuvent être des cibles de facteurs de virulence aussi bien que des composantes végétales requises pour la " fitness " de la bactérie. Le gène CLAVATA1 (CLV1), très étudié dans le contexte du développement, code pour une protéine appartenant à la famille des récepteurs kinase possédant un domaine extracellulaire riche en leucine. Cette protéine joue un rôle crucial dans le maintien d'une population de cellules souches au niveau du méristème caulinaire donnant naissance à toute la partie aérienne de la plante. La mutation clv1 entraîne une résistance accrue à R. Solanacearum associée à une réduction de la croissance bactérienne in planta. Mes travaux de thèse ont consisté à élucider les mécanismes sous-tendant la résistance accrue conférée par la mutation du gène CLV1 en utilisant différents types d'approche (génétique, moléculaire et transcriptomique). Nous avons été capables de démontrer l'implication de facteurs de transcription de la famille de gènes NF-YA, eux-mêmes contrôlés par les microARNs miR169, dans la résistance accrue des mutants clv1. Ces résultats démontrent que la protéine CLV1 est une composante requise pour l'établissement de la maladie causée par R. Solanacearum. Mes travaux de thèse mettent en lumière une nouvelle fonction de cette protéine et illustrent la grande diversité des rôles biologiques de protéines de type récepteur-kinaseThe molecular mechanisms associated to disease development caused by the phytopathogenic bacteria Ralstonia solanacearum are poorly understood. Search for mutants altered in their response to the pathogen led to the identification of some susceptibility genes including targets of virulence factors as well as plant components required for pathogen fitness. The CLAVATA1 (CLV1) gene, extensively studied for its role in plant development, encodes a receptor-like kinase with a leucin-rich repeat extracellular domain. This protein plays indeed a key role in maintaining a pool of stem cell within the shoot apical meristem. The clv1 mutation leads to an increased resistance to R. Solanacearum, associated with a decrease of in planta bacterial growth. The aim of my PhD work was the understanding of the mechanisms underlying the increased resistance conferred by the clv1 mutation in using different approach (molecular, genetic and transcriptomic). We have been able to demonstrate the implication of the NF-YA transcription factor family, controlled by microRNA miR169, in the increased resistance of these mutants. These results demonstrate that the CLV1 protein is a required component for the establishment of the disease caused by R. Solanacearum. And illustrate the wide diversity of functions fulfilled by receptors kinases
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Hamdane, Malika. "Activation de la protéine P65NF- kB dans les cellules transformées par la protéine hybride P210BCR-ABL : étude dans la lignée myéloïde DA1." Lille 1, 1996. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1996/50376-1996-412.pdf.
Full textAbstract:
La protéine p210bcr-abl possède une activité tyrosine kinase élevée associée a son pouvoir oncogénique. L'implication de cette protéine dans la genèse de la leucémie myéloïde chronique a été montrée in vitro et in vivo mais son mécanisme d'action n'est pas élucide. Notre travail, se situant dans le cadre de l'étude des voies signalétiques, s'est porte sur l'identification d'effecteurs de la protéine p210bcr-abl. Nous nous sommes intéresses plus particulièrement a la famille des facteurs de transcription Rel/nf-kappab, en utilisant comme modelé d'étude la lignée cellulaire murine da1 dérivant d'un pro géniteur myéloïde pluripotent et dont la croissance dépend de l'il-3. Les études d'activation transcription elles ont révèle une augmentation spécifique de l'activité nf-kappab, sous l'effet de l'expression de la protéine hybride possédant un domaine tyrosine kinase intact. L'analyse par expériences de retard en gel avec utilisation d'anticorps spécifiques a révèle la présence de la protéine p65 nf-kappab (rel a) dans les extraits nucléaires des cellules exprimant de manière stable la protéine hybride mais pas dans ceux issus des cellules parentales. Les études réalisées par la suite ont montré que la protéine p210bcr-abl ayant une activité tyrosine fonctionnelle augmente la stabilité de la protéine p65. Ceci pourrait constituer le mécanisme d'activation de la protéine p65 par la p210bcr-abl. L'inhibition de l'expression de la p65, par l'utilisation d'oligonucleotides anti sens, empêche la transformation des cellules da1 induite par la protéine hybride, suggérant un rôle important de la protéine p65 dans le pouvoir oncogénique de la p210bcr-abl.
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Yannoukakos, Drakoulis. "Structure de la protéine bande 3 érythrocytaire humaine : caractérisation de ses sites de phosphorylation et du polymorphisme "Memphis"." Paris 12, 1991. http://www.theses.fr/1991PA120056.
Full textAbstract:
La proteine bande 3, glycoproteine integrale la plus abondante de la membrane du globule rouge, est formee de deux domaines distincts, n- et c-terminaux, possedant chacun un role fonctionnel precis. Le domaine cytoplasmique de 43 kda interagit avec les proteines du squelette erythrocytaire et d'autres proteines cytosoliques. Le domaine transmembranaire de 55 kda catalyse l'echange electroneutre des anions chlorure et bicarbonate a travers la membrane erythrocytaire. Afin de caracteriser les sites de phosphorylation de la proteine, les membranes isolees ont ete phosphorylees par l'atp marque. La proteine bande 3 phosphorylee ainsi que ses segments cytoplasmique et transmembranaire ont ete purifies. L'analyse par rp-hplc des peptides trypsiques de ces trois polypeptides isoles nous a permis la localisation precise des residus phosphoryles. La tyr 8 est le site principal de phosphorylation de la proteine, la tyr 21 et la tyr 46 sont egalement phosphorylees mais a un degre moindre. Les cibles principales des caseine-kinases membranaires, sont les ser 28 et 50 et une ou plusieurs thr 39, 42, 44, 48, 49, 54, toutes dans le peptide t1. Deux autres tyrosines, la tyr 359 et la tyr 904, sont egalement des cibles des tyrosine-kinases. Ces residus se trouvent dans des regions de la proteine exposees vers le cytoplasme: la jonction entre le domaine cytoplasmique et transmembranaire et le peptide c-terminal respectivement. Nous avons egalement identifie le premier variant de la proteine: la proteine bande 3 memphis. Il s'agit d'une substitution du residu lysine 56 par un acide glutamique
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Bignon, Jérôme. "Rôle de la protéine tyrosine phosphatase, PTP1C, dans la régularité de l'activité catalytique de la protéine tyrosine kinase pp60c-src et au cours du développement des cellules hématopoietiques." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05CD08.
Full textAbstract:
Pour étudier le rôle de la tyrosine, PTP1C, dans la régulation de l'activité kinase de pp60c-src, nous avons utilisé un modèle murin (la souris motheaten) présentant un déficit congénitale en PTPIC. Nous avons montré que l'activité kinase de pp60c-src était fortement diminuée dans les thymocytes (Th-) de cette souris. De plus, après immunoprécipitation de pp60c-src à partir de thymocytes (Th-), l'addition d'une forme recombinante de PTPIC restaure son activité kinase. Enfin, nous avons observé que PTPIC déphosphorylait spécifiquement le résidu tyrosine, localisé dans la partie C-terminale de pp60-src, dans la forme hosphorylée participe au maintien de cette protéine dans une conformation inactive. D'autre part, une association physique entre PTPIC et pp60-src a été détectée, in vitro et in vivo, dans des thymocytes murins ainsi que dans des plaquettes et des lymphoblastes humains. Cette association est uniquement observée en présence d'orthovanadate , ce qui suggère qu'elle serait dépendante du degré de phosphorylation de ces protéines sur des résidus tyrosine. Nous avons donc identifié, dans des conditions physiologiques, la première phosphatase impliquée dans la régulation de l'activité pp60c-src et nous avons montré que PTPIC participait à la régulation positive de certaines molécules impliquées dans des processus intracellulaires. La souris motheaten est caractérisée par des anomalies au niveau des cellules hématopoïétiques. Pour étudier le rôle joué par PTPIC au cours du développement de ces cellules, nous avons choisi d'exprimer cette protéine de façon ectopique, dans les cellules souche hématopoïétiques de la moelle osseuse de cette souris. Nous avons construit deux vecteurs rétroviraux capables d'exprimer PTPIC dans des cellules cibles infectées et nous avons préparé des cellules d'empaquetage qui produisent ces virions avec une efficacité permettant l'infection des cellules progénitrices de la moelle osseuse (titre viral = 10 exposant 7). L'obtention de ces vecteurs rétroviraux recombinante nous permettre d'étudier, in vitro et in vivo, le rôle de PTPIC au cours du développement et du fonctionnement des cellules hématopoïétiques.
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Hubert-Buron, Aurélie. "Stress osmotique et production de cytokines proinflammatoires dans une lignée cellulaire intestinale Caco-2/TC7." Rouen, 2004. http://www.theses.fr/2004ROUES037.
Full textAbstract:
L'intestin est un organe clé dans les réponses immunitaire et inflammatoire. La réponse inflammatoire intestinale, qu'elle soit locale ou dans le cadre d'une réponse systémique, peut par la production importante et non contrôlée des médiateurs de l'inflammation avoir un effet délétère, entraînant des lésions intestinales. Dans ce travail, nous avons étudié l'effet d'un stress osmotique, qu'il soit hypo- ou hyper-osmolaire, sur la production de deux cytokines proinflammatoires, l'IL-6 et l'IL-8, par les cellules de la lignée cellulaire intestinale Caco-2/TC7. Nous avons ensuite comparé l'effet inducteur du stress osmotique à celui de stimuli proinflammatoires connus et également étudié les effets potentiels de synergie ou d'additivité de tels stimuli inflammatoires. Enfin, nous avons essayé de préciser la voie de signalisation impliquée dans l'effet du stress osmotique en se focalisant sur l'IL-8. Pour cela, nous avons étudié l'implication potentielle de différentes MAPK ainsi que celle de protéine tyrosine kinases. L'ensemble des résultats montre que les cellules Caco-2/TC7 produisent de façon constitutive la chimiokine IL-8 et que la production de celle-ci est minimale en condition isoosmolaire. A l'opposé, aucune production d'IL-6 n'est détectable dans ces conditions expérimentales. Le stress osmotique, qu'il soit hypo- ou hyper-osmolaire, entraîne une augmentation de la production d'IL-8 et induit celle d'IL-6. Les résultats montrent également que la variation de l'osmolarité du milieu induit un effet stimulateur sur les productions d'IL-6 et d'IL-8, effet qui est, au moins en partie, additif à celui de l'IL-1b. Concernant le stress hypoosmolaire, l'ensemble des résultats montrent qu'une protéine kinase de la famille JNK et que la déphosphorylation d'une protéine sur un résidu tyrosyle sont impliquées dans la voie de signalisation de ce type de stress. De plus, le stress hypoosmolaire agit, au moins en partie, par activation du facteur NF-kB. Concernant le stress hyperosmolaire, aucune des trois protéines MAP Kinases étudiées (p38MAPK, JNK et p42/44MAPK) n'est impliquée dans ce type de stress. De même, la phosphorylation d'une protéine sur un résidu tyrosyle n'est pas spécifiquement impliquée dans l'effet du stress hyperosmolaire. La voie de signalisation mise en jeu lors d'un stress hyperosmolaire reste donc à identifier. En conclusion, ces résultats démontrent que le stress osmotique per se est un signal de type proinflammatoire dans les cellules Caco-2/TC7 et suggèrent qu'un osmosensor pourrait exister dans les cellules épithéliales intestinalesThe intestine play a key role in the immune and inflammatory response. Local or systemic intestinal inflammatory response could be deleterious by the uncontrolled and massive production of inflammatory mediators leading to intestinal damages. In the present study, the effect of hyper- and hypoosmotic stresses on the production of two proinflammatory cytokines, IL-6 and IL-8 were investigated in the intestinal epithelial cell line Caco-2/TC7. We also studied the potential additivity of to that induced by proinflammatory cytokines and tried to specify the signalling pathway involved in the effect of osmotic stress focusing on IL-8 production. For this purpose, different MAPK and protein tyrosine kinases pathways have been investigated. The results obtained show that Caco-2 cells constitutively produce the chemokine IL-8. IL-8 production is minimal under isoosmolar condition whereas IL-6 production is undetectable under these experimental conditions. Hyper- and hypoosmotic stresses both (i) enhance the endogenous production of IL-8 and induce that of IL-6, and (ii) reinforce cytokine production induced by IL-1ß. Regarding the hypoosmotic stress, the results show the involvement of (i) the protein c-jun-NH2-terminal kinase (JNK) and (ii) the protein tyrosine kinase. This is not the case for hyperosmolarity. The signalling for hyperosmotic stress remains still unknown. Moreover, hypoosmotic stress acts partially through activation of the transcription factor. Taken together, these results demonstrate that osmotic stress is a proinflammatory signal in Caco-2 cells and suggest that an osmosensor might specifically exist in intestinal epithelial cells
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Chirivino, Dafne. "Rôle de l’ezrine dans l’endocytose et la stabilité des récepteurs de type tyrosine kinase." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA112281.
Full textAbstract:
L’ezrine appartient à la famille des protéines ERM. Ces protéines assurent la liaison entre la membrane plasmique et le cytosquelette d’actine. L’ezrine est impliquée dans le trafic de protéines membranaires, cependant sa fonction dans ce processus n’est pas connue à ce jour. Des cribles doubles hybrides utilisant l’ezrine comme appât ont permis l’identification de protéines impliquées dans le transport de protéines membranaires. Nous avons étudié la fonction de l’interaction de l’ezrine avec la sous unité Vps11 du complex HOPS et WWP1, une ubiquitine ligase de type E3. Le complexe HOPS orchestre la fusion de compartiments intracellulaires car il coordonne les activités des protéines Rab et SNARE. Nous avons étudié comment l’interaction de l’ezrine avec Vps11 régule le transport du récepteur de l’EGF vers la voie de dégradation par les lysosomes. Nous avons montré que cette interaction promeut la maturation des endosomes et qu’elle est nécessaire au transport du récepteur à l’EGF des endosomes précoces aux tardifs ainsi participant à la régulation de la dégradation du récepteur à l’EGF. WWP1 a été impliquée dans la régulation et la dégradation des récepteurs aux facteurs de croissance ainsi que des facteurs de transcription. Nous avons montré que l’interaction entre l’ezrine et WWP1 induit l’ubiquitylation de l’ezrine sans toutefois entraîner sa dégradation. Nous avons montré que l’interaction de l’ezrine avec WWP1 stabilise le récepteur c-Met. Nos résultats indiquent que l’ezrine participe au contrôle de la dégradation des récepteurs de type tyrosine kinase en régulant l’assemblage de complexes multiprotéiques impliqués dans le transport et l’ubiquitylation des protéinesEzrin is a member of the ERM protein family, which provides a regulated linkage between the plasma membrane and the actin cytoskeleton. Ezrin has been involved in the trafficking of membrane proteins however its function in this process is as of yet unknown. Two-hybrid screens performed with ezrin as baits led to the identification of proteins involved in membrane protein transport. We analyzed the function of ezrin association with two new interactors: the HOPS complex subunit Vps11 and the E3 ubiquitin ligase WWP1. Vps11 is a member of the tethering HOPS complex that coordinates Rab and SNARE functions during vesicular fusion along the endocytic pathway. We have investigated the role of ezrin/Vps11 interaction in the endocytosis of the EGF receptor. We have shown that the interaction between ezrin and the HOPS complex promotes endosome maturation and is necessary for EGF receptor transport from early to late endosomes, therefore participating in the regulation of EGFR endocytosis and degradation. WWP1 is an E3 ubiquitin ligase of the Nedd4 family. A role for WWP1 was identified in the regulation and degradation of growth factors receptors and transcription factors. We have shown that Ezrin/WWP1 interaction results in ezrin ubiquitylation, but is not involved in regulating ezrin degradation. Rather, we were able to show that this ubiquitylation likely mediates protein interaction and that the binding between ezrin and WWP1 promotes c-Met receptor stabilization. Altogether our results indicate that ezrin participates in the control of tyrosine kinase receptor degradation by regulating the assembly of multimeric complexes involved in protein trafficking and ubiquitylation
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Bachet, Jean-Baptiste. "Récepteurs tyrosine-kinase, voies de signalisation et tumeurs digestives." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2013. http://www.theses.fr/2013VERS0019.
Full textAbstract:
Les récepteurs tyrosine kinase (RTK) sont des pro-oncogènes impliqués dans la pathogénèse de nombreuses tumeurs digestives. Nous avons mené plusieurs travaux de recherche translationnelle et fondamentale sur le RTK KIT et les tumeurs stromales gastro-intestinales (GISTs). Les GISTs avec la delWK557-558 et celles avec une délétion emportant les deux résidus tyrosine de l'exon 11 de KIT semblaient avoir le même pronostique. Les GISTs homozygotes étaient par contre plus souvent malignes que les GISTs hétérozygotes. Les GISTs homozygotes seraient secondaires à une perte d’heterozygotie sans perte de matériel génétique. A partir de lignées cellulaires, nous avons démontré que la biologie de KIT dans les cellules hétérozygotes était plus proche de celle des cellules hémizygotes KIT non muté que des hémizygotes KIT muté. Le statut hémizygote/hétérozygote d'une part et la perte ou non des résidus tyrosine de l'exon 11 de KIT d'autre part étaient associés à des profils d'expression d'ARNm et de miARN spécifiques. Enfin, nous avons pu décrire trois familles avec une mutation germinale de l'exon 13 de KIT et proposer des recommandations pour leur prise en chargeReceptor tyrosine kinases (RTKs) are pro-oncogenes involved in the pathogenesis of many gastrointestinal tumors. We conducted several studies of translational and basic research on the RTK KIT and the gastrointestinal stromal tumors (GISTs). GISTs with delWK557-558 and those with a deletion carrying the two tyrosine residues in KIT exon 11 had the same prognosis. Homozygous GISTs appear more often malignant than heterozygous GISTs. We then reported that homozygous GISTs may be secondary to loss of heterozygosity without loss of genetic material. From cell lines, we demonstrated that the biology of KIT in heterozygous cells was closer to that hemizygous unmutated KIT cells that hemizygous mutated KIT. The hemizygous/heterozygous status on the one hand and the loss or non-tyrosine residues of the KIT exon 11 on the other hand were associated with specific expression profiles of mRNA and miRNAs. Finally, we have described three families with a germline mutation in exon 13 of KIT, and we proposed recommendations for their management