Academic literature on the topic 'Psicrotróficas'

A difusão do uso da tecnologia do resfriamento, como estratégia para manutenção das características microbiológicas e organolépticas do leite, não associada aos cuidados básicos de higiene na obtenção do produto, fez com que os micro-organismos psicrotróficos emergissem como as principais bactérias deteriorantes da indústria láctea. Este estudo teve por objetivo avaliar como o metabolismo psicrotrófico proteolítico responde a diferentes temperaturas de incubação do leite, delineando um paralelo entre multiplicação de psicrotróficos, quantidade de micro-organismos com capacidade de hidrolisar proteínas e quantidade de GMP (glicomacropeptídeo) liberada. As amostras de leite, coletadas diretamente do tanque de resfriamento, foram submetidas à contagem de micro-organismos psicrotróficos, contagem de micro-organismos proteolíticos e determinação da concentração de GMP, em diferentes tempos (12 h; 24 h; 48 h) e temperaturas (4°C; 8°C; 12°C) de armazenamento. Não houve linearidade entre os parâmetros microbiológicos e o GMP aferido, segundo o binômio tempo/temperatura. A maior concentração de GMP (5,07 µg/mL) foi aferida no binômio 8°C/24 h (T8/M24). Esses dados indicam a necessidade de estudos sobre o metabolismo da microbiota psicrotrófica, de forma a elucidar questões básicas e de profunda relevância sobre seu metabolismo.

Objetivou-se com o presente trabalho isolar e caracterizar bioquimicamente a microbiota psicrotrófica, bem como avaliar seu poder deteriorador no leite cru refrigerado, armazenado em tanques de expansão, individuais e coletivos, de propriedades das regiões Agreste e Sertão do Estado de Alagoas. Foram analisadas amostras de leite coletadas em 23 tanques individuais e 13 coletivos, onde se verificou a presença de bactérias psicrotróficas nos dois tipos de tanques de refrigeração, sendo um total de 105 isolados bacterianos. Foi detectada a predominância de bactérias psicrotróficas gram-negativas 78,09% (82/105), dos gêneros Pseudomonas, Enterobacter, Aeromonas, Burkholderia, Acinetobacter e Shigella, enquanto que as bactérias gram-positivas foram da ordem de 21,90% dos gêneros Streptococcus, Corynebacterium, Enterococcus, Micrococcus e Bacillus. Pseudomonas foi o gênero predominante com 43,81%. A grande maioria dos isolados bacterianos demonstrou alto poder de produção de enzimas extracelulares – protease, lipase e/ou lecitinase, evidenciando assim potencial deteriorador do leite e derivados. Estatisticamente não foi significativa a diferença de produção enzimática pelos isolados entre tanques individuais e coletivos, não havendo dependência entre o número de isolados bacterianos produtores de enzimas e o tipo de tanque.

Com o objetivo de avaliar a qualidade microbiológica e físico-química da linguiça toscana comercializada no Município de Mossoró, RN, foram analisadas 28 amostras de seis supermercados, verificando-se o Número Mais Provável (NMP) de coliformes termotolerantes, Salmonella spp. e bactérias psicrotróficas, umidade, pH e atividade de água. Todas as amostras estavam dentro do padrão vigente que estabelece um limite máximo de 5 x 10³ NMP/g-1 para coliformes termotole-rantes conforme a ANVISA. Na contagem de bactérias psicrotróficas houve uma variação de 2,9 x 10¹ a 1,31 x 10(4) UFC/g-1. Das 28 amostras pesquisadas quanto a presença de Salmonella spp., em cinco verificou-se a presença deste micro-organismo em 25 g. Para umidade, todas as amostras encontravam-se dentro da legislação estabelecida (< 70%) e para atividade de água os limites variaram de 0,772 a 0,809. Os valores de pH das amostras estavam entre 5,7 e 6,2. Apesar das amostras analisadas estarem dentro do estabelecido pela legislação brasileira, faz necessária a aplicação de boas práticas, visto que a contaminação por micro-organismos psicrotróficos e Salmonella foi significativa, podendo diminuir a vida de prateleira do produto e causar danos a saúde pública.

A indústria leiteira atravessa um período de intensas transformações em sua estrutura, e a qualidade do leite é uma das principais exigências. A correta adoção de medidas de higiene adequadas na produção, armazenamento e transporte do leite podem prevenir a contaminação de microrganismos psicrotróficos que representam um grave problema econômico para a indústria de laticínios. Desta forma, este estudo realizou-se com o objetivo de avaliar o efeito de diferentes técnicas profiláticas de higiene e limpeza, durante o manejo de produção, na qualidade microbiológica de leite através da contagem de bactérias psicrotróficas. As técnicas profiláticas foram avaliadas envolvendo quatro propriedades produtoras de leite. Tais técnicas foram testadas antes, durante e após a ordenha para a adoção de práticas de higiene e limpeza de utensílios e equipamentos, dos operadores/ordenhadores, do ambiente de ordenha e do manejo dos animais. Em cada propriedade foi coletada uma amostra controle, antes da adoção das profilaxias, e posteriormente amostras periódicas de quatro ordenhas. Com base no questionário aplicado, constatou-se que em todas as propriedades havia falhas nos procedimentos de higiene e limpeza e ocorrência de muitos animais com mastite sub-clínica. Concluiu-se que após a adoção das técnicas de profilaxias, ocorreram diminuições significativas na contagem de bactérias psicrotróficas do leite em todas as propriedades rurais estudadas, comprovando a importância das práticas preventivas de higiene e limpeza sobre a qualidade microbiológica do leite.

Devido a importância econômica da indústria de laticínios, a qualidade dos derivados lácteos deve ser uma preocupação constante. Algumas propriedades sensoriais e tecnológicas do leite e derivados estão relacionadas à microbiota deterioradora contaminante, representada, principalmente, por bactérias psicrotróficas proteolíticas que produzem enzimas termoresistentes. Os queijos frescos produzidos artesanalmente são geralmente fabricados com leite cru, por isso, é de grande importância conhecer a microbiota desses produtos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi enumerar e isolar as bactérias psicrotróficas proteolíticas além de avaliar o potencial deteriorador desses microrganismos isolados de queijos frescos artesanais comercializados em Salinas, MG, Brasil. Após o isolamento das bactérias psicrotróficas proteolíticas presentes no queijo fresco, os isolados foram caracterizados em termos de coloração de Gram, forma e atividade de oxidase. A atividade proteolítica dos isolados foi confirmada pela formação de halo de hidrólise em meio de cultura específico. Os resultados destacaram a predominância de bactérias proteolíticas psicrotróficas Gram-positivas quando foi avaliada a microbiota deterioradora das amostras de queijo fresco. Considerando o potencial proteolítico, 34% dos isolados foram classificados como altamente proteolíticos. Os resultados mostraram que a contaminação inicial de queijos frescos pode interferir na qualidade microbiológica destes produtos.

A refrigeração do leite cru em tanques de granelização representa um entrave na cadeia produtiva do leite associado à seleção de bactérias psicrotróficas deterioran tes com consequências negativas para a indústria. Objetivou-se avaliar a temperatura e a qualidade microbiológica de leite cru armazenado em 15 tanques de refrigeração do município de Rio Pomba, MG, nas estações do ano, entre outubro de 2016 e julho de 2017. A temperatura do leite em cada tanque foi determinada no momento da coleta das amostras. Posteriormente, realizou-se a contagem de microrganismos mesófilos aeróbios, psicrotróficos, psicrotróficos proteolíticos, psicrotróficos lipolíticos, psicrotróficos produtores de lecitinase e de Pseudomonas sp. Não houve diferença (p > 0,05) de temperatura do leite no momento da coleta entre os 15 tanques de granelização, porém as médias das temperaturas foram acima de 4,0 ºC, portanto em desacordo com a Instrução Normativa n.º 76. A contagem de microrganismos me sófilos aeróbios apresentou variação entre 3,4 a 6,8 Log UFC/mL, sendo que 42% das amostras não estavam em conformidade com o padrão legal. A contagem de microrganismos psicrotróficos apresentou variação entre 3,0 e 8,1 Log UFC/mL com média igual (p > 0,05) à média da contagem de microrganismos mesófilos aeróbios. Mais de 50% das amostras apresentaram contagens de Pseudomonas sp. acima de 4,0 Log UFC/mL. Concluiu-se que as condições higiênico-sanitárias na obtenção de leite cru no município de Rio Pomba, MG, apresentaram-se inadequadas, destacando-se, portanto, a importância da prevenção de contaminação do leite cru por meio da implementação das Boas Práticas na cadeia produtiva.

Com os objetivos de quantificar, isolar e caracterizar bactérias psicrotróficas contaminantes de leite cru refrigerado, produzido na região da Zona da Mata de Minas Gerais e Sudeste do Rio de Janeiro, foram analisadas amostras de leite coletadas de 20 tanques coletivos e 23 tanques individuais. As contagens de bactérias psicrotróficas nas amostras de leite para os dois tipos de tanques de refrigeração variaram entre 10² e 10(7) Unidades Formadoras de Colônias (UFC) ml-1, porém, um maior número de tanques coletivos apresentou contagens acima de 1 x 10(5) UFC ml-1. Foi verificada a predominância de bactérias psicrotróficas gram-negativas (81,2%), que foram identificadas pelos sistemas API 20E e API 20NE nos gêneros: Aeromonas, Alcaligenes, Acinetobacter, Burkholderia,Chryseomonas, Enterobacter, Ewingella, Klebsiella, Hafnia, Methylobacterium, Moraxella, Pantoea, Pseudomonas, Serratia, Sphingomonas e Yersinia. As bactérias gram-positivas (18,8%) foram identificadas com API 50 CH, API Coryne e API Staph, nos gêneros: Bacillus, Brevibacterium, Cellum/Microbacterium, Kurthia e Staphylococcus. Os sistemas API utilizados não identificaram todos os isolados bacterianos. Pseudomonas foi o gênero mais isolado e P. fluorescens foi a espécie predominante. A maioria dos isolados bacterianos apresentou atividade proteolítica e/ou lipolítica a temperaturas de refrigeração de 4°C, 7°C e 10°C, evidenciando seu alto potencial de deterioração do leite e dos produtos lácteos. Os resultados ressaltam que maior atenção deve ser dada aos procedimentos que impeçam a contaminação do leite por esses microrganismos.

RESUMO No período de outubro de 2006 a maio de 2007, foi avaliada a qualidade microbiológica de 30 amostras de queijo tipo Minas Padrão comercializados em diferentes supermercados do Município de São Luis, MA, por meio da contagem de bactérias aeróbias mesófilas, psicrotróficas, Staphylococcus coagulase positiva e pesquisa de Salmonella spp. As contagens médias de bactérias aeróbias mesófilas, psicrotróficas e Staphylococcus spp. foram de 5,4 x 106 UFC/g; 1,2 x 107 UFC/g e 1,7 x 105 UFC/g, respectivamente. Para os valores obtidos na contagem de Staphylococcus coagulase positiva, 6,6% das amostras apresentaram-se em desacordo com o estabelecido pela Anvisa. Com relação à pesquisa de Salmonella spp., não foi evidenciada a presença deste micro-organismo em 25 g do produto, estando ele dentro dos padrões estabelecidos para esse agente. Estes resultados indicam que o queijo analisado nesta pesquisa apresentava uma qualidade microbiológica insatisfatória podendo o produto ser um importante veículo de intoxicação alimentar estafilocócica.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-19T12:02:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1276596 bytes, checksum: e320e36eac8ecfc4d887e0c9f618329e (MD5)
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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
Por meio de um mecanismo denominado quorum sensing, diversas bactérias podem comunicar-se umas com as outras e coordenar a expressão gênica de acordo com a densidade populacional de forma semelhante aos organismos multicelulares. Este trabalho teve como objetivo investigar a produção de moléculas sinalizadoras de quorum, conhecidas como homoserinas lactonas aciladas (AHLs), por bactérias psicrotróficas proteolíticas isoladas de leite cru refrigerado. Verificou-se também se a atividade proteolítica de Pseudomonas fluorescens 07A é dependente da densidade populacional. Foram avaliados 53 isolados psicrotróficos proteolíticos e sete estirpes ATCC quanto à produção de AHL em meio sólido utilizando as bactérias Agrobacterium tumefaciens A136, Chromobacterium violaceum CV026 e Escherichia coli pSB403 como sistemas monitores ou sensores da presença de AHL. A produção de moléculas sinalizadoras foi freqüente entre os isolados psicrotróficos proteolíticos, constatando-se que, aproximadamente, 89 % das estirpes avaliadas foram produtoras de AHL. A extração de moléculas autoindutoras foi realizada em dois isolados, Serratia liquefaciens 016 e P. fluorescens 07A e, a presença de AHL nos extratos foi confirmada pelas estirpes monitoras C. violaceum CV026 e A. tumefaciens KYC55, respectivamente. A produção de AHL pelo isolado P. fluorescens 07A foi determinada em meio de cultivo à base de triptona suplementado com 0,25 % de cálcio (TYEP + CaCl 2 0,25 %) e em meio de constituição mínima (MMS), utilizando a estirpe monitora A. tumefaciens KYC55. Em meio TYEP + CaCl 2 0,25 % a produção de AHL(s) alcançou o máximo ao final da fase logarítmica, quando a população de P. fluorescens 07A foi da ordem de 10 9 UFC mL -1 . Esta mesma população resultou em uma concentração de AHL(s) cerca de três vezes menor no MMS. Os resultados indicaram que a produção de AHL pode estar sob controle de autoindução. O crescimento e a atividade proteolítica do isolado 07A foram avaliados em seis meios de cultivo. Não foi observada diferença no crescimento do isolado nos diferentes meios, exceto no MMS, onde a estirpe cresceu de forma mais lenta. Entretanto, a produção de proteases foi maior em meio TYEP + CaCl 2 0,25 % e em leite desnatado reconstituído (LDR 12 %). A detecção da atividade proteolítica só foi possível quando a cultura atingiu concentração populacional elevada em todos os meios avaliados, excetuando-se no meio MMS, quando a atividade proteolítica foi detectada em uma densidade populacional 10 vezes menor. Nos meios a base de triptona o pH aumentou para valores próximos a 8,5. Meios contendo íons Ca +2 apresentaram grande fluorescência ao final do período de incubação, indicando maior produção do sideróforo pioverdina. A adição de duas AHLs sintéticas não afetou o crescimento e a atividade proteolítica da estirpe P. fluorescens 07A em meio TYEP + CaCl 2 0,25 %. Quando comparada ao controle, a atividade proteolítica específica de P. fluorescens 07A não foi afetada significativamente, ao nível de 5% de probabilidade, pela suplementação do meio TYEP + CaCl 2 0,25 % com extrato de AHL obtido da própria estirpe. O quorum sensing pode não estar regulando a atividade proteolítica em P. fluorescens 07A.
In a process called quorum sensing, a range of bacterial cells communicate and coordinate the expression of multiple phenotypes according to cell density. This work aimed to evaluate the production of signaling molecules known as N-acyl homoserine lactone (AHL) by psychrotrophic proteolytic bacteria isolated from raw milk as well as to verify if the proteolytic activity of Pseudomonas fluorescens 07A is under the control of quorum sensing. Fifty three psychrotrophic isolates and seven ATCC cultures were screened for the production of AHL in agar systems using the monitor strains Agrobacterium tumefaciens A136, Chromobacterium violaceum CV026 and Escherichia coli pSB403. It was verified that almost 89 % of the psychrotrophic isolates tested elicited a positive response in at least one of the monitor strains of AHL. Signaling molecules were extracted from Serratia liquefaciens 016 and P. fluorescens 07A and the presence of AHL was detected with the monitor strains C. violaceum CV026 and A. tumefaciens KYC55, respectively. The production of AHL by the strain 07A was evaluated in a complex medium (TYEP + CaCl 2 0,25 %) and a defined medium (MMS). A. tumefaciens KYC55 was used to quantify AHL in this assay. In TYEP + CaCl 2 0,25 % the AHL concentration reached a maximum value at the end of xvthe stationary phase, when the population of P. fluorescens 07A was 10 9 CFU mL -1 . When MMS medium was used, a similar cell population was achieved, but the AHL concentration was three fold lower. The results indicated that AHL production by P. fluorescens 07A could be regulated by autoinduction. The growth and proteolytic activity of the P. fluorescens 07A were monitored in six different media. It was not observed difference in the specific growth rate of the strain in the media tested, except in MMS, where it grew slower. On the other hand, the protease activity was higher in the complex medium (TYEP + CaCl 2 0,25 %) and reconstituted skimmed milk (LDR 12 %). Proteolytic activity was only detected when the culture reached high population densities (10 8 UFC mL -1 ) in all media evaluated. In MMS, proteolytic activity was detected at lower population densities (10 7 UFC ml -1 ). An increase in pH values was observed during cultivation in media containing tryptone. The emission of fluorescence was intensified in media containing calcium. The addition of two synthetic AHLs did not affect the growth rates and the proteolytic activity of the strain 07A in TYEP + CaCl 2 0,25 %. Furthermore, the addition of AHL extracted from the culture did not increase the specific proteolytic activity in TYEP + CaCl 2 0,25 %. These results indicate that quorum sensing may not have a direct role in the regulation of protease production in P. fluorescens 07A.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-13T18:45:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2125079 bytes, checksum: 2f29b3e644ffe90cb9eac41d4f5568f1 (MD5)
Made available in DSpace on 2017-06-13T18:45:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2125079 bytes, checksum: 2f29b3e644ffe90cb9eac41d4f5568f1 (MD5) Previous issue date: 2004-05-03
O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito de fatores determinados pela granelização do leite cru refrigerado na estabilidade do leite. Foram enfati- zados os efeitos da temperatura de refrigeração e do tempo de estocagem na composição da microbiota contaminante do leite cru, na atividade proteolítica do leite, na atividade enzimática residual após tratamento UHT, bem como seu possível efeito na estabilidade do leite UHT. Amostras de leite cru coletadas em tanques de refrigeração, na fonte de produção e no silo de uma indústria processadora de leite UHT, foram analisadas quanto as suas características microbiológicas. Bactérias psicrotróficas proteolíticas Gram-negativas e Gram- positivas foram isoladas do leite cru refrigerado, sendo o gênero Pseudomonas o mais freqüentemente isolado, especialmente a espécie P. fluorescens. Bactérias Gram-positivas e Gram-negativas fermentadoras de glicose apre- sentaram predominantemente atividade proteolítica a 6,5, 21 e 35oC e bactérias Gram-negativas não-fermentadoras de glicose apresentaram um maior percentual de isolados com atividades associadas de proteases, lipases e lecitinases a 6,5 e 21oC, ressaltando seu maior potencial deteriorador. A presença de atividade de enzimas proteolíticas termorresistentes foi observada em sobrenadantes de culturas de bactérias psicrotróficas proteolíticas. A capacidade de adesão a superfícies de aço inoxidável foi constatada em bactérias psicrotróficas proteolíticas Gram-positivas e Gram-negativas até uma densidade de 10 5 células por cm 2 , quando inoculadas em leite desnatado esterilizado a 7oC, por 48 horas. Observou-se o crescimento de P. fluorescens inoculado em leite desnatado a 2, 4, 7 e 10°C, constatando-se o aumento de sua população, do grau de proteólise e da velocidade específica máxima de crescimento com o aumento da temperatura de estocagem. O tempo, em dias, para a perda de estabilidade térmica dessas amostras foi maior a 2 e a 4oC, em relação a 7 e 10oC. Por meio da eletroforese em gel de poliacrilamida obser- vou-se que a temperatura e o tempo de estocagem influenciaram na hidrólise das frações de caseína e da albumina. As amostras de leite cru integral, coletadas assepticamente e usadas como controle, não diferiram quanto aos perfis eletroforéticos após seis dias de estocagem, nas temperaturas avaliadas, demonstrando a importância de investimentos para a implementação de práticas higiênicas de obtenção e conservação da matéria-prima. O tratamento UHT reduziu, em média, 93,2% da atividade proteolítica presente no leite cru integral usado como matéria-prima para o processamento do leite UHT, indicando a presença de atividade proteolítica residual de origem bacteriana e, ou, endógena. Observou-se o aumento da massa de sedimentos, do grau de proteólise e da atividade proteolítica durante a estocagem do leite UHT integral a 37°C, por 120 dias. Em nenhuma das amostras de leite UHT foram consta- tadas contaminações por bactérias mesofílicas e por bactérias mesofílicas esporuladas, além de indícios de gelificação. Todas as amostras permane- ceram termicamente estáveis durante o período de validade do produto.
This work aimed at investigating the effect of variables determined for refrigerated bulk raw milk on milk stability. Emphasis was given to the effects of refrigeration temperature and storage time on raw milk s contaminant microbiota composition, proteolytic activity, residual enzymatic activity after UHT treatment as well as their possible effect on UHT milk stability. Samples of bulk raw milk, collected from cooling tanks at the production sites and from a silo of a UHT milk processing industry were analyzed for microbiological characteristics. Gram-negative and Gram-positive proteolytic psychrotrophs were isolated from the refrigerated raw milk, with the genus Pseudomonas being the most frequently isolated strain, especially the species P. fluorescens. Gram-positive and Gram-negative glucose-fermenting bacteria presented a predominantly proteolytic activity at 6.5, 21, and 35oC and Gram-negative non-glucose fermenting bacteria presented a higher percentage of isolates with activities associated to proteases, lipases, and lecithinase at 6.5 and 21oC, indicating their higher deteriorating potential. The presence of heat-resistant proteolytic activity was observed in the supernatants of psychrotrophic bacterial cultures. The capacity to adhere to stainless steel surfaces was confirmed in Gram- positive and Gram-negative proteolytic psychrotrophics up to a density of 10 5 cells per cm 2 inoculated in sterilized skim milk at 7oC after 48 h of incubation. The maximum specific growth rate and the proteolytic activity of P. fluorescens inoculated in skim milk increased with increasing storage temperatures (2, 4, 7 and 10°C). Heat-stability loss (in days) for these samples was higher at 2 and at 4oC, in relation to 7 and 10oC. Temperature and storage time influenced the hydrolysis of casein and albumim. The raw whole milk samples, aseptically collected and used as control, showed no changes in the eletrophoretic profiles after six storage days under the temperatures evaluated, showing the importance of investing on the implementation of hygienic practices of raw material acquisition and conservation. The UHT treatment reduced, on average, 93.2% of the proteolytic activity in the raw whole milk used as raw material for UHT milk processing, indicating the presence of residual proteolytic activity of bacterial and, or endogenous origin. Increased sediment mass, proteolysis degree, and proteolytic activity were observed during storage of UHT whole milk at 37°C, for 120 days. None of the UHT milk samples were found to be contaminated with sporulating mesophilic bacteria or showed signs of gelation. All the samples remained heat stable during shelf-life.
Tese importada do Alexandria

A presença de enzimas microbianas deteriorantes termoestáveis proteolíticas e lipolíticas pode comprometer a qualidade e vida útil do leite processado e derivados, mesmo que o leite cru apresente baixas contagens totais de micro-organismos. Além disso, as formas microbianas vegetativas ou esporuladas podem resistir à pasteurização e também atuarem como deteriorantes do leite pasteurizado. Como passo preliminar para redução dos micro-organismos deteriorantes no leite cru refrigerado, aumento da vida útil e do potencial tecnológico do leite pasteurizado, o presente trabalho teve como objetivo identificar a diversidade genética de micro-organismos psicrotróficos e termodúricos com potencial deteriorante proteolítico e/ou lipolítico no leite cru refrigerado de alta qualidade microbiológica. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado produzido na bacia leiteira da região de Castro, Paraná, nas quais foram utilizados métodos oficiais para a contagem e isolamento de psicrotróficos e termodúricos e técnicas biomoleculares de agrupamento genético hierárquico (Restriction Fragment Length Polymorphism) e caracterização (sequenciamento parcial do gene 16S rRNA e análise filogenética) dos isolados. As contagens médias de psicrotróficos e termodúricos foram 1,1 x 104 e 3,2 x 102 UFC/mL, respectivamente. Entre os psicrotróficos, 47,8% do total de isolados (n = 295) apresentaram atividade deteriorante, dos quais 30,5% foram proteolíticos e lipolíticos simultaneamente, 31,9% exclusivamente proteolíticos e 37,6% lipolíticos. Pelos dendrogramas foram determinados 36 clusters de psicrotróficos proteolíticos e 47 de lipolíticos com 70% de similaridade hierárquica, cuja identificação filogenética determinou o predomínio das espécies com os mesmos perfis polimórficos de Lactococcus lactis (24,5%), Enterobacter kobei (15,4%), Aerococcus urinaeequi (8,4%) e Acinetobacter lwoffii (6,3%) entre os psicrotróficos deteriorantes. Serratia ureilytica, Enterobacter kobei, Pseudomonas spp. e Yersinia enterocolitica foram os psicrotróficos identificados como potencialmente produtores de metaloprotease alcalina (aprX). Entre os termodúricos, 42,6% do total de isolados (n = 310) foram deteriorantes, dos quais 32,6% apresentaram atividade proteolítica e lipolítica simultaneamente, 31% exclusivamente proteolítica e 36,4% apenas lipolítica. Esses isolados proteolíticos e lipolíticos foram agrupados em 41 e 38 clusters, respectivamente, considerando 50% de similaridade. A análise filogenética das sequências parciais do gene 16S rRNA revelou que predominam entre os termodúricos deteriorantes as espécies Bacillus licheniformis (34,1%), Brachybacterium nesterenkovii (14,4%), Enterococcus faecalis (9,1%) e Streptococcus agalactiae (8,3%). Foi observado que 50% das cepas de termodúricos pertencem aos gêneros Bacillus e Paenibacillus, frequentemente descritos como esporulados que resistem a tratamentos térmicos mais intensos que a pasteurização e que comprometem a vida útil do leite pasteurizado dos Estados Unidos. Os resultados do presente trabalho demonstram que a composição da microbiota é tão importante quanto a sua quantificação. Apesar de baixas contagens, psicrotróficos e termodúricos podem comprometer a qualidade do leite e derivados pela sua atividade deteriorante, sendo um fator limitante na manutenção da qualidade do leite fluido e derivados. Portanto, é necessário desenvolver ferramentas sensíveis e eficientes para monitorar e controlar a presença desses micro-organismos no leite cru.
The presence of heat-stable spoilage enzymes can compromise the milk and dairy products quality and shelf life, even if raw milk with low total microorganisms counts. In addition, the vegetative or sporulated microbial forms may resist pasteurization and also deteriorate pasteurized milk. The present work aimed to identify the genetic diversity of psychrotrophic and thermoduric microorganisms with proteolytic and/or lipolytic potential in high microbiological quality refrigerated raw milk. Twenty samples of refrigerated raw milk produced in the dairy region of Castro, Paraná State, Brazil, were evaluated per official methods for the counting and isolation of psychrotrophic and thermoduric. Biomolecular techniques of hierarchical genetic grouping (Restriction Fragment Length Polymorphism) and identification by partial sequencing of the 16S rRNA gene and phylogenetic analysis. The mean of psychrotrophic and thermoduric counts were 1.1 x 104 and 3.2 x 102 CFU/mL, respectively. Among the psychrotrophs, 47.8% of the total isolates (n = 295) presented spoilage potential, of which 30.5% were proteolytic and lipolytic simultaneously, 31.9% exclusively proteolytic and 37.6% lipolytic. The dendrograms determined 36 clusters of proteolytic and 47 lipolytic psychrotrophs with 70% genetic hierarchical similarity, whose phylogenetic identification shows the predominance of the species with the same polymorphic profiles of Lactococcus lactis (24.5%), Enterobacter kobei (15.4%), Aerococcus urinaeequi (8.4%) and Acinetobacter lwoffii (6.3%) among the deteriorating psychrotrophs. Serratia ureilytica, Enterobacter kobei, Pseudomonas spp. and Yersinia enterocolitica were the psychrotrophs identified as potentially producing of alkaline metalloprotease (aprX gene positive). Among the thermoduric, 42.6% of the total isolates (n = 310) shows spoilage potential, of which 32.6% presented proteolytic and lipolytic activity simultaneously, 31% were exclusively proteolytic and 36.4% only lipolytic. These proteolytic and lipolytic isolates were grouped in 41 and 38 clusters, respectively, considering 50% of genetic similarity. Phylogenetic analysis of partial sequences of 16S rRNA gene revealed that Bacillus licheniformis (34.1%), Brachybacterium nesterenkovii (14.4%), Enterococcus faecalis (9.1%) and Streptococcus agalactiae (8.3%). It was observed that 50% of the thermoduric strains belong to the genus Bacillus and Paenibacillus, often described as sporulated that resist heat treatments that are more intense at pasteurization and that compromise the shelf life of the pasteurized milk in the United States. The results of the present study demonstrate that the microbiota composition of raw milk as so important that your quantification. Although low counts, psychrotrophic and thermoduric can compromise the milk quality and dairy produtcs by their deteriorating activity, being a limiting factor for the maintenance of the quality. Therefore, it is necessary to development of a sensitive and efficient tools to monitor and control the presence of these microorganisms in raw milk.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-13T14:45:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 282625 bytes, checksum: 1e1c48c9480ac4efd3e2ae6aca4983db (MD5)
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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
A diversidade genética entre 113 culturas de bactérias psicrotróficas proteolíticas isoladas de amostras de leite cru granelizado foi avaliada utilizando- se a técnica de RAPD. Foi constatada uma grande diversidade genética entre os isolados, indicando fontes de contaminação diversas. A presença do gene apr, que codifica metaloproteases termorresistentes, foi avaliada por PCR em 26 culturas controle e em 133 isolados psicrotróficos proteolíticos de leite cru resfriado e granelizado. Detectou-se a presença do amplificado do gene apr apenas nas culturas de referência Serratia marcescens ATCC 8100, Pseudomonas fluorescens ATCC 13525 e estirpes de P. aeruginosa ATCC 15442 e ATCC 27853. A presença do gene apr foi detectada na mistura de DNA dos isolados psicrotróficos proteolíticos que apresentaram características fenotípicas de espécies do gênero Pseudomonas, quais sejam, Gram-negativas, não fermentadoras, catalase e oxidase positivas. Os demais isolados Gram-negativos e os Gram-positivos, embora tenham apresentado atividade proteolítica, não apresentaram o amplificado do gene apr. A técnica de PCR permitiu identificar a presença de população acima de 10 5 UFC/mL de P. fluorescens inoculada em leite desnatado reconstituído após a extração do DNA total das bactérias. Entretanto, quando amostras de leite pasteurizado inoculado com populações variando de 10 5 a 10 8 UFC/mL foram analisadas por PCR, sem a etapa de extração do DNA total, o limite de detecção foi de 10 8 UFC/mL.
The genetic diversity of 113 cultures of proteolytic psychrotrophic bacteria isolated from raw milk collected from cooling tanks was analyzed by RAPD. A great genetic diversity was detected among these isolates indicating different sources of contamination. The presence of the apr gene, which codes a heat- resistant metalloprotease, was assessed by PCR in 26 type strains and in 136 proteolytic psychrotrophic bacteria isolated from raw milk. The presence of the apr gene was only detected in Serratia marcescens ATCC 8100, Pseudomonas fluorescens ATCC 13525 and, strains of P. aeruginosa ATCC 15442 and ATCC 27853. The apr gene was detected in total DNA extracted from proteolytic psychrotrophics that showed phenotypic characteristics belonging to Pseudomonads such as Gram-negative, non-fermentative, positive-catalase and positive-oxidase. The apr gene was not detected in the other Gram-negative and Gram-positive isolates studied although they have displayed proteolysis. The PCR technique identified the presence of Pseudomonas fluorescens when total DNA was extracted from skim milk previously inoculated with a bacterial population containing 10 5 CFU/mL. However, the detection limit of apr gene without the DNA extraction step was 10 8 CFU/mL in pasteurized milk.

Biofilmes nos resfriadores de leite representam uma fonte perene de contaminação e um entrave à qualidade dos produtos lácteos. Esta pesquisa propôs-se a isolar e caracterizar microrganismos provenientes de resfriadores de leite cru de propriedades rurais, estudando também a formação e o controle de biofilmes formados in vitro. Isolados de Pseudomonas sp., Bacillus cereus e oriundos de colônias não identificadas foram caracterizados quanto à produção de enzimas e formação de biofilme in vitro. Após, foi selecionado um isolado de Pseudomonas sp. para estudo da formação e do controle de biofilmes, na presença de óleos essenciais, furanona e sanificantes. Contagens microbianas realizadas indicam a presença de biofilmes nos resfriadores. Dos 297 isolados obtidos, 62,9% produziram proteases, 55,8% produziram lipases e 50,1% formaram biofilmes in vitro, destacando o potencial dos biofilmes para a contaminação microbiana e também enzimática do leite cru. A combinação de ácido peracético com óleos essenciais de orégano e alecrim, embora promissora para trabalhos futuros, não potencializou a ação do sanificante, mesmo após três dias consecutivos de tratamento sobre biofilmes já estabelecidos. A formação de biofilmes pela cepa na presença dos óleos essenciais de alecrim, orégano, mandarina verde, mandarina vermelha, laranja e tangerina demonstrou que somente o primeiro reduziu o biofilme formado, talvez com interferência no quorum sensing da cepa. A presença de 2(5H)- furanona favoreceu a formação de biofilme pela cepa. Este trabalho contribui com estratégias inovadoras para o controle de biofilmes, cuja aplicação pode resultar no desenvolvimento de produtos mais eficazes no controle microbiológico, além de menos poluentes.
Biofilms in milk cooling tanks represent a perennial source of contamination and an obstacle to the dairy products quality. This research has proposed to isolate and characterize microorganisms from raw milk cooling tanks in farms, also studying the formation and control of biofilms formed in vitro. Isolates of Pseudomonas spp., Bacillus cereus and non-identified colonies were characterized for enzyme production and biofilm formation in vitro. After, the formation and control of biofilms with essential oils, furanone and sanitizers was studied for a selected isolate of Pseudomonas sp. Microbial counts indicate the presence of biofilms in the coolers. Of the 297 isolates obtained, 62.9% produced proteases, 55.8% produced lipases and 50.1% formed biofilms in vitro, highlighting the potential of biofilms for microbial and also enzymatic contamination of the raw milk. The combination of peracetic acid with essential oils of oregano and rosemary, although promising for further work, did not potentiate the action of sanitizing, even after three consecutive days of treatment on established biofilms. The biofilm formation by the selected strain in the presence of essential oils of rosemary, oregano, green mandarine, red mandarine, orange and tangerine showed that only the first oil reduced the biofilm, perhaps with interference in the quorum sensing of the strain. The presence of 2(5H)-furanone promoted biofilm formation of the strain. This work has contributed to innovative strategies for controlling biofilms, whose application can result in the development of more effective and less polluting microbiological control products.

A nisina é uma bacteriocina produzida por Lactococcus factis subsp. lactis e seu uso é permitido como conservador de alimentos em diversos países. Em 1998, o Ministério da Agricultura e Abastecimento do Brasil, em atitude pioneira, autorizou a aplicação de 200 ppm de Nisaplin® em solução de ácido fosfórico grau alimentício na superfície de produtos cárneos embutidos, tais como salsichas, como alternativa tecnológica para aumentar a segurança microbiológica e a vida-de-prateleira desses produtos. Este trabalho avaliou a eficiência deste tratamento na inibição da deterioração microbiana e controle da multiplicação de Listeria monocytogenes em salsichas tratadas com nisina conforme preconizado, e armazenadas sob refrigeração (8°C) e abuso de temperatura (12°C). Salsichas foram coletadas em uma planta processadora da cidade de São Paulo e submetidas a tratamento por imersão em solução de 200 ppm de Nisaplin® em ácido fosfórico grau alimentício a 0,1 % durante 1 minuto. Para o estudo da eficiência do tratamento sobre Listeria monocytogenes, as salsichas foram contaminadas experimentalmente após o tratamento através de imersão em suspensões contendo L. monocytogenes Scott A, resultando em dois níveis de contaminação superficial denominados baixo (103-104UFC/cm2) e alto (106-107 UFOcm2). Controles não tratados e não inoculados foram realizados concomitantemente. As amostras foram embaladas a vácuo e armazenadas a 8°C e 12°C durante 42 dias. A enumeração das populações de microrganismos aeróbios mesófilos, bactérias láticas, microrganismos psicrotróficos e L. monocytogenes foi realizada semanalmente até o final do período de estocagem. Os resultados indicam que não há diferença estatisticamente significativa entre as populações de bactérias aeróbias mesófilas, psicrotróficas e bactérias láticas em produtos tratados e não tratados com solução de Nisaplin® e armazenados a 8°C ou a 12°C. A redução das populações de L. monocytogenes em salsichas tratadas com Nisaplin® quando a contaminação superficial foi de 103 a 104UFC/cm2 e o produto foi armazenado a 8°e foi pequena (<1 log UFC/cm2), porém estatisticamente significativa. Esses resultados indicam serem necessárias medidas adicionais para garantir a segurança do produto.
Nisin is a bacteriocin produced by Lactococcus lactis subsp lactis and its use is permitted as a food preservative in severaI countries. In 1998, the Brazilian Ministry of Agriculture authorized the application of 200 ppm nisin (Nisaplin®) on the surface of meat products by immersion or spraying, as a technological alternative to increase safety and shelf-life of cooked frankfurters. This work intended to evaluate the effectiveness of this treatment on inhibition of microbial spoilage and control of growth of Listeria monocytogenes in frankfurters during storage under refrigeration (8°C) and temperature abuse (12°C). Frankfurters from a local meat industry were submerged for 1 min in nisin solution (200 ppm) in 0.1% phosphoric acid and experimentally contaminated with low (103-104 CFU/cm2) and high (106-107CFU/cm2) levels of L. monocytogenes. Non-treated and non-inoculated controls were also prepared. Counts of lactic acid bacteria, aerobes (mesophilic and psychrotrophic) and L. monocytogenes were carried out weekly up to 42 days, in four genuine repetitions. Results available indicate that the differences of counts of mesophilic and psychrotrophic aerobes, lactic acid bacteria in nisin-treated and non-treated controls are not significant. Reduction of L. monocytogenes populations in nisin-treated frankfurters experimentally contaminated with low (103-104CFU/cm2) leveis of L. monocytogenes stored under refrigeration (8°C) was low (<1 log UFC/cm