Dissertations / Theses: 'Recepteur cellule t'

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Halary, Franck. "Etude des lymphocytes t gamma/delta humains : aspect du controle des fonctions biologiques et de la specificite antigenique (doctorat : immunologie)." Nantes, 1999. http://www.theses.fr/1999NANT10VS.

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TILLOY, FLORENCE. "Etude des sous-populations lymphocytaires t exprimant les chaines alpha invariantes du tcr : ontogenie des cellules t-nk et mise en evidence d'une nouvelle sous-population conservee chez les mammiferes." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05N097.

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Mancini, Stéphane. "Différenciation des lymphocytes T et recombinaison des gènes du TCR : quel rôle pour le pré-TCR dans la régulation du réarrangement des gènes codant pour la chaîne [alpha] du TCR ?" Université Joseph Fourier (Grenoble), 2000. http://www.theses.fr/2000GRE10116.

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Abstract:

Les genes codant pour les chaines alpha et beta du recepteur a l'antigene des cellules t (tcr) sont rearranges sequentiellement durant la differenciation intrathymique des lymphocytes t, caracterisee par l'expression de plusieurs molecules membranaires, dont cd4 et cd8. Le rearrangement des genes tcrb, codant pour la chaine beta, intervient durant le stade cd4 8 (dn), et permet l'expression d'un pre-tcr comprenant la chaine beta, ptalpha et le complexe cd3, responsable de la transduction des signaux d'activation. L'assemblage du pre-tcr induit la maturation des thymocytes jusqu'au stade cd4 +8 + (dp). Il est generalement admis que les genes tcra, codant pour la chaine alpha, sont rearranges a la transition dn/dp, apres signalisation par le pre-tcr. Ma these a pour objet l'etude de la regulation des rearrangements des genes tcra, et du role du pre-tcr dans ce processus. L'inactivation du gene codant pour ptalpha entraine chez la souris un blocage partiel de la differenciation des lymphocytes t au stade dn. Nous avons montre que le repertoire des chaines tcralpha exprimees chez ces animaux est essentiellement normal. Il semble donc que le pre-tcr ne soit pas requis pour le rearrangement et l'expression des genes tcra, et que ces evenements peuvent potentiellement se produire au stade dn. Nous avons poursuivi ces travaux en analysant le statut des genes tcra dans d'autres modeles de souris genetiquement modifiees ou la differenciation des thymocytes est bloquee au stade dn. Nous avons pu formellement demontrer, pour la premiere fois, la presence de rearrangements tcra des le stade dn, en absence de signaux issus de cd3, du pre-tcr ou du tcr. Enfin, nous avons etudie la reponse a l'irradiation des thymocytes de souris n'exprimant pas cd3. L'irradiation conduit a l'induction des rearrangements tcra et a la reprise de la differenciation a la fois par des voies p53 dependantes et independantes.

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Vigan, Finlin Ines Nadège. "Caractéristiques phénotypiques et fonctionnelles des lymphocytes T intra-hépatiques et périphériques au cours de l'hépatite virale chronique C." Université Joseph Fourier (Grenoble), 2001. http://www.theses.fr/2001GRE10117.

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Abstract:

L'hepatite virale c (hvc) represente un reel probleme de sante publique compte tenu de sa prevalence et du risque important d'evolution vers la cirrhose et le carcinome hepato-cellulaire. Ma these a pour objet de caracteriser la diversite, le phenotype et la fonction des populations lymphocytaires t intra-hepatiques et peripheriques au cours de l'hepatite chronique virale c. Nous avons evalue la diversite des lymphocytes t + intra-hepatiques et peripheriques, par analyse moleculaire de l'heterogeneite des regions hypervariables cdr3 des transcrits codant pour la chaine du recepteur a l'antigene des lymphocytes t(tcr). Cette etude montre que les lymphocytes t intra-hepatiques expriment une grande diversite de tcr. La reponse immune intra-hepatique developpee par l'hote au cours de la pathologie est de type polyclonale et multi-specifique. Nous avons ensuite etudie par cytometrie de flux et rt-pcr quantitative les caracteristiques phenotypiques et fonctionnelles des populations lymphocytaires t intra-hepatiques et peripheriques et ce en relation avec les parametres virologiques, histologiques et biochimiques des patients infectes par le virus de l'hepatite c. L'analyse par cytometrie montre une correlation etroite et significative entre la frequence de lymphocytes conventionnels cd3 +cd56 - intra hepatiques et les marqueurs de la severite de la maladie (scores histologiques de knodell et de metavir, et le taux de transaminases). Une correlation significative a egalement ete retrouvee entre le lymphocytes t cd3 +cd56 - peripheriques et les marqueurs de la severite de la maladie. L'analyse par rt-pcr quantitative des transcrits specifiques des populations lymphocytaires t montre que les quantites de transcrits cd3, tcr, cd8, cd69, perforine et plus particulierement celle des transcrits cd8 sont significativement correlees au taux de transaminases, au score de knodell et a l'index d'activite metavir. Ces resultats renforcent ceux obtenus par cytomertrie et suggerent une fois de plus un role deletere des lymphocytes t conventionnels cd3 +tcr +cd8 + intra-hepatiques au cours de la phase chronique de la pathologie.

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CHEVALIER, SYLVIE. "Etude de la tolerance induite par des transfusions sanguines dans un modele de rat : etude de la forme soluble du recepteur a l'il2 dans un modele de rat, etude du deuxieme recepteur t : tcr gamma/delta chez l'homme." Nantes, 1988. http://www.theses.fr/1988NANT2011.

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Hoghoughi, Neda. "Caractérisation fonctionnelle d'une nouvelle translocation t(3;5)(q21;q31), ciblant le gène du récepteur aux glucocorticoïde et un ARN non-codant, dans la leucémie aigüe à cellules plasmocytoides dendritiques." Thesis, Grenoble, 2014. http://www.theses.fr/2014GRENV073/document.

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Abstract:

La leucémie aiguë à cellules dendritiques plasmacytoïdes (BPDCN) fait partie des cancers incurables pour lesquels les mécanismes impliqués dans la pathogénèse restent inconnus. Dans ce travail, nous avons identifié le gène NR3C1 (5q31), qui code pour le récepteur des glucocorticoïdes (GCR), et un long ARN non-codant inter-génique (appelé ici lincRNA-3q), comme étant des cibles d'altération géniques ou de dérégulation transcriptionnelles dans les BPDCN. La translocation/délétion de NR3C1 est associée avec un temps de survie extrêmement court et des activités anormales du réseau de régulation des gènes GCR, EZH2 et FOXP3. Nous avons découvert que lincRNA-3q code pour une forme nucléaire d'ARN non-codant qui est activé de façon ectopique dans les BPDCN et les AML à haut risque. Dans les cancers myéloïdes, une déplétion de lincRNA-3q induit un arrêt du cycle cellulaire qui coïncide avec la suppression des signatures d'expression génique de E2F1/Rb et des gènes spécifiques aux cellules souches leucémiques. Nos résultats démontrent qu'une inhibition des protéines à bromodomaine BET supprime sélectivement l'expression lincRNA-3q, indiquant une stratégie thérapeutique potentielle pour contrer l'activité oncogénique de cet ARN non-codant. Ce travail défini, un nouveau cadre de recherche pour comprendre la pathogénèse et la résistance au traitement dans les BPDCN
Blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm (BPDCN) is an incurable malignancy for which disease mechanisms are unknown. Here, we identify the NR3C1 gene (5q31), encoding the glucocorticoid receptor (GCR), and a long, intergenic, non-coding RNA gene (named here lincRNA-3q), respectively, as targets for genetic alteration or transcriptional deregulation in BPDCN. NR3C1 translocation/deletion was associated to critically short survival in BPDCN and to abnormal activity of GCR, EZH2, and FOXP3 gene regulatory networks. LincRNA-3q, was found to encode a nuclear, non- coding RNA that is ectopically activated in BPDCN and high-risk AML. Depletion of lincRNA-3q in myeloid cancer cells induced cell cycle arrest, coincident to suppression of E2F1/Rb and leukemia stem cell-specific gene expression signatures. BET bromodomain protein inhibition could selectively suppress lincRNA-3q indicating a treatment strategy for counteracting oncogenic activity of this non- coding RNA. Thus, this work defines a new framework for understanding disease pathogenesis and treatment resistance in BPDCN

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Moisan, Jean-Paul. "Etude et caracterisation de marqueurs genetiques specifiques du chromosome x humain (suivi de) etude des rearrangements du recepteur a l'antigene, sur des lymphocites t actives in vivo." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1987. http://www.theses.fr/1987STR13231.

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Le, Paslier Denis. "Genetique moleculaire de deux familles multigeniques primordiales pour l'immunite : les genes des recepteurs des cellules t pour l'antigene et le complexe majeur d'histocompatibilite chez l'homme." Paris 7, 1988. http://www.theses.fr/1988PA077104.

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Mathieu-Mahul, Danièle. "Analyse moleculaire d'anomalies chromosomiques specifiques d'hemopathies malignes humaines." Paris 7, 1987. http://www.theses.fr/1987PA077133.

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AIFANTIS, IOANNIS. "Analyse du role du recepteur pre-tcr dans le developpement des cellules t." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05N085.

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Cohen-Kaminsky, Sylvia. "Analyse de composants cellulaires et moleculaires du microenvironnement thymique chez l'homme : interet dans l'etude du role du thymus dans la myasthenie." Paris 6, 1988. http://www.theses.fr/1988PA066157.

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Palmer, M. S. "Studies on the murine T-cell receptor." Thesis, University of Oxford, 1987. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.379915.

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EDOUARD, PHILIPPE. "Developpement thymo-independant et selection negative des cellules t exprimant le recepteur t alpha-beta dans l'epithelium intestinal." Toulouse 3, 1993. http://www.theses.fr/1993TOU31504.

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Dushek, Omer. "Mathematical modeling in cellular immunology: T cell activation and parameter estimation." Thesis, University of British Columbia, 2008. http://hdl.handle.net/2429/2894.

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Abstract:

A critical step in mounting an immune response is antigen recognition by T cells. This step proceeds by productive interactions between T cell receptors (TCR) on the surface of T cells and foreign antigen, in the form of peptide-major-histocompatibility-complexes (pMHC), on the surface of antigen-presenting-cells (APC). Antigen recognition is exceedingly difficult to understand because the vast majority of pMHC on APCs are derived from self-proteins. Nevertheless, T cells have been shown to be exquisitely sensitive, responding to as few as 10 antigenic pMHC in an ocean of tens of thousands of self pMHC. In addition, T cells are extremely specific and respond only to a small subset of pMHC by virtue of their specific TCR. To explain the sensitivity of T cells to pMHC it has been proposed that a single pMHC may serially bind multiple TCRs. Integrating present knowledge on the spatial-temporal dynamics of TCR/pMHC in the T cell-APC contact interface, we have constructed mathematical models to investigate the degree of TCR serial engagements by pMHC. In addition to reactions within clusters, the models capture the formation and mobility of TCR clusters. We find that a single pMHC serially binds a substantial number of TCRs in a TCR cluster only if the TCR/pMHC bond is stabilized by coreceptors and/or pMHC dimerization. In a separate study we propose that serial engagements can explain T cell specificity. Using Monte Carlo simulations, we show that the stochastic nature of TCR/pMHC interactions means that multiple binding events are needed for accurate detection of foreign pMHC. Critical to our studies are estimates of TCR/pMHC reaction rates and mobilities. In the second half of the thesis, we show that Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) experiments can reveal effective diffusion coefficients. We then show, using asymptotic analysis and model fitting, that FRAP experiments can be used to estimate reaction rates between cell surface proteins, like TCR/pMHC. Lastly, we use FRAP experiments to investigate how the actin cytoskeleton modulates TCR mobility and report effective reaction rates between TCR and the cytoskeleton.

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Herr, Florence. "Rôle de l'interleukine 2 sur la cellule dendritique." Thesis, Tours, 2013. http://www.theses.fr/2013TOUR3305/document.

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Abstract:

Le rôle de l'interleukine 2 (IL-2) dans les cellules dendritiques (DC) humaines n’est pas bien défini. Dans ce travail, nous avons exploré les effets de l'IL-2 sur des DC dérivées de monocytes. Nous démontrons une expression constitutive des chaines des β et γ du récepteur de l’IL-2 sur les DC ainsi qu’une une expression inductible de la chaîne α en réponse à des agents ‘maturants’ tels le LPS et le TNFα. L’IL-2 induit la phosphorylation du facteur de transcription STAT5 provoquant l’augmentation de la synthèse d'IFN-γ par les DC sans modifier leur phénotype ou leur survie. En revanche, nous n'avons pas mis en évidence d’activation des autres voies de signalisation du récepteur de l’IL-2. Nous avons également démontré que l'IL-2 augmente les capacités des DC à activer les lymphocytes T CD4+ allogéniques et les lymphocytes T CD8+ indépendamment des lymphocytes T auxilliaires. Nous n’avons pas pu mettre en évidence la sécrétion endogène d'IL-2 par les DC cependant les anticorps anti-CD25 diminuent les capacités allostimulatrices de DC en absence d’IL-2 exogène. Ainsi nos travaux indiquent que l’expression de CD25 par les DC matures est un événement clé menant la DC à un nouvel état d’activation
Human dendritic cells (DC) express interleukin 2 (IL-2) receptor α-chain (CD25), but the role of IL-2 in DC is poorly understood. In this work, we explored the effects of IL-2 on monocyte-derived DC. First, we demonstrated the constitutional expression of β and γ chain of IL-2R on DC, while the α-chain was inducible by LPS and TNFα. Then we found that IL-2 does not affect DC phenotype and apoptosis but increases IFN-γ synthesis in DC through activation of transcription factor STAT5. Moreover we reported that IL-2 increases the ability of DC to activate allogeneic CD4+ T cells and helpless CD8+ T lymphocytes, most likely because of IL-2–triggered IFN-γ synthesis. We have not been able to demonstrate the endogenous secretion of IL-2 by DC, however anti-CD25 decreased allostimulatory capacity of DC in the absence of exogenous IL-2.In summary, we disclose that IL-2 induces DC functional maturation and activation. Interestingly, our study suggests a direct effect of anti-CD25 monoclonal antibodies on DC and that CD25 expression regulation on human DC could be used to control immune response in vivo

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Sawicka, Anna. "Aspects biophysiques de l'activation des cellules T." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCB079.

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Abstract:

Les cellules T jouent différents rôles dans la réponse immunitaire adaptative : elles stimulent les cellules B à produire les anticorps ; elles sécrètent les cytokines qui dirigent l'action des autres cellules immunitaires ; elles tuent les cellules du corps infectées ou porteuses de mutations ; elles assurent la mémoire immunitaire, permettant de répondre plus vite en cas de nouvelle infection avec le même pathogène. Toutes les cellules T s'activent quand elles reconnaissent leur antigène spécifique : un peptide court présenté par le complexe majeur d'histocompatibilité exprimé à la surface de la cellule présentatrice d'antigène. La liaison du récepteur de cellules T (TCR, ang. T cell receptor) à cet antigène initie la cascade de transduction de signal dans la cellule T ; ce processus mène aux modifications du cytosquelette, aux changements dans l'expression des gènes, et à la prolifération des cellules T. Récemment, il a été découvert que quand les cellules T reconnaissent l'antigène, elles poussent et tirent sur les cellules présentatrices d'antigène. Même si ces forces mécaniques ont été l'objet de recherches intenses pendant ces dernières années, leur nature et leur rôle restent toujours largement méconnus. La caractérisation des forces générées par les cellules T était l'objectif de ma recherche doctorale. J'ai mesuré les forces avec la technique appelée "micropipette force probe", qui utilise une micropipette en verre comme un cantilever de rigidité connue. Cette technique a permis de mesurer la force maximale et la vitesse de génération des forces, et, en même temps, de capturer l'image de la morphologie des cellules de profil. J'ai trouvé que les cellules T humaines, primaires, au repos, CD4+, activées avec les anticorps contre les molécules CD3 et CD28, suivent une succession de changements de morphologie, pendant laquelle elles génèrent des forces. Cette succession était qualitativement identique pour les lymphoblastes CD4+, un modèle des cellules T activées. Ensuite, j'ai étudié cette succession d'événements dans le contexte biologique de l'activation des cellules T. Les cellules T interagissent avec les cellules présentatrices d'antigène qui ont des propriétés mécaniques différentes. J'ai donc changé la rigidité de la micropipette utilisée comme sonde, afin de mesurer la réponse des cellules T à des cibles de rigidité différentes. J'ai trouvé que les forces générées par les cellules T sont mécanosensibles, car la vitesse de génération des forces de poussée et de traction changeaient avec la rigidité de la micropipette. Ensuite, j'ai étudié les conditions nécessaires à la génération des forces. Les forces étaient liées au processus d'activation, car l'attachement des anticorps aux molécules CD45 n'a pas conduit à la génération des forces. Pour étudier la contribution aux forces des différents acteurs du cytosquelette d'actine, j'ai utilisé différents inhibiteurs du remaniement du cytosquelette. L'influence la plus grande sur la génération de forces a été trouvée avec SMIFH2, un inhibiteur des formines. Ces protéines jouent donc probablement un rôle important dans le processus d'activation des cellules T. La recherche décrite dans cette thèse contribue à la compréhension des aspects biophysiques de l'activation des cellules T. Elle montre que la génération des forces est un des événements les plus précoces de l'activation des lymphocytes T, et qu'elle est modifiée par la rigidité de la cible des cellules T. Dans le futur, la recherche liant la génération des forces avec la cascade biochimique de transduction de signal induit par le TCR sera nécessaire pour décrire la base de la mécanosensibilité des cellules T. Cette recherche sera complétée par l'étude des fonctions des forces dans le processus de l'activation des lymphocytes T en conditions normales et pathologiques
T cells play many roles in the adaptive immune response: they stimulate B cells for the production of antibodies; they secrete cytokines, which guide the action of other immune cells; they kill infected or mutated cells of the body; they assure the immune memory, staying ready to respond upon another infection with the same pathogen. All T cells activate when they recognise their specific antigen: a short peptide presented on the major histocompatibility complex on the surface of the antigen-presenting cell. The binding of the T cell receptor (TCR) to this antigen triggers a cascade of signalling events inside the T cell, resulting in cytoskeleton modifications, changes in the expression levels of different genes, and proliferation. One of the early responses of T cells to the antigen recognition is force generation. T cells, upon TCR triggering, push and pull on the antigen-presenting cell. Although the body of research concerning these forces has been recently growing, their nature and role is still largely unknown. The goal of my PhD project was to characterise the pushing and pulling forces generated by T cells. I measured the forces with the micropipette force probe, which uses a glass micropipette as a cantilever of known bending stiffness. The technique allowed to measure the maximal force generated by T cells and the speed at which T cells generated forces (force rate), and, simultaneously, to track the morphology of cells as seen from the side. These experiments revealed that human primary resting CD4+ T cells, when activated with antibodies against CD3 and CD28 molecules, followed a sequence of morphology changes and force generation. This sequence was qualitatively the same for CD4+ T lymphoblasts, a model of effector T cells. The sequence was then studied in the biological context of T cell activation. As different antigen-presenting cells, with which T cells interact in the body, were shown to have different mechanical properties, I varied the bending stiffness of the micropipette probe, to measure the response of T cells to targets of different stiffness. The force rate changed with this bending stiffness, indicating that force generation in T cell activation is a mechanosensitive process. Next, the conditions necessary for force generation were investigated. Binding to antibodies against CD45 molecule did not result in force generation, suggesting that force generation is specific to TCR triggering. To dissect the contribution of the different components of the actin cytoskeleton to the process, T cells were treated with different cytoskeleton inhibitors. The largest influence was found with SMIFH2, an inhibitor of formins, suggesting an important role for formins in force generation in early T cell activation. This work contributes to the understanding of the biophysical aspects of T cell activation. It shows that force generation is incorporated into the early events of the activation process, and is directly influenced by the stiffness of the T cell target. Further work is needed to link the force generation with the signalling pathways induced by TCR triggering, to explain the molecular basis of T cell mechanosensitivity. This link will open the possibility of functional studies of forces in T cell activation, to answer the open questions regarding the function of T cells in physiology and pathology of the immune system

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AMMAR, ADLEN. "Caracterisation biologique et biochimique et mode d'action d'une proteine immunosuppressive (p29) produite par les cellules adherentes de sujets vih+." Paris 11, 1991. http://www.theses.fr/1991PA115004.

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Chen, Zhu. "Etude de la structure du gene codant pour la chaine gamma du recepteur des cellules t chez l'homme." Paris 7, 1989. http://www.theses.fr/1989PA077032.

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Abstract:

Etude du rearrangement et de l'expression des genes des chaines alpha, beta, gamma et delta du recepteur t dans les leucemies aigues lymphoblastiques. Identification, clonage et sequence des segments v du gene tcr gamma

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Simons, Donald Mark Lelkes Peter I. "A dissection of T cell receptor signaling pathways in primary human T cells activated in the rotating-wall vessel bioreactor /." Philadelphia, Pa. : Drexel University, 2007. http://hdl.handle.net/1860/2522.

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Lamontagne-Blouin, Christopher. "Modulation of T cell antigen receptor signaling in CD8+ T lymphocytes following priming with homeostatic and inflammatory cytokines." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2012. http://hdl.handle.net/11143/6325.

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Abstract:

La stimulation de cellules T naïves nécessite du déclenchement de la signalisation par l'intermédiaire du récepteur d'antigène de cellule T (TCR) ainsi que l'activation simultanée des récepteurs de co-stimulation. Toutefois, les cellules T CD8+ naïves peuvent proliférer de façon antigène-indépendants suite à la stimulation synergique par certaines cytokines homéostatiques (IL-7 ou IL-15) et inflammatoires (IL-6 ou IL-21). Ces cellules pré-stimulées prolifèrent même à des faibles concentrations d'antigènes ou en présence d’agonistes du TCR. Ceci leur permet de sécréter des cytokines effectrices, d'être plus spécifiques à leur antigène et d’avoir une activité cytolytique plus importante. Les mécanismes déclenchés par les cellules T CD8+ permettant une sensibilité accrue à l'antigène suite à la "pré-stimulation aux cytokines" n'ont pas encore été élucidés. Nous avons utilisé trois différents modèles de souris transgéniques portant le TCR P14, PMEL ou 8.3-NOD sur les lymphocytes T CD8+ afin d’étudier les mécanismes moléculaires suite à la pré-stimulation aux cytokines. Les cellules T CD8+ portant le TCR transgénique amorcées avec les cytokines, possèdent une augmentation globale des protéines tyrosine-phosphorylés après stimulation du TCR par rapport aux cellules naïves. Cette augmentation de la phosphorylation de la protéine tyrosine a été associée à une augmentation de l'expression de CD8, et a été moins prononcé lorsque CD8 a également été réticulés avec le TCR. Ceci suggère que l'amorçage aux cytokines peut prédisposer le TCR et CD8 à colocaliser, ce qui renforcerait la phosphorylation des chaînes du TCR par la kinase Lck associée à CD8. Les lymphocytes T CD8+ amorcées aux cytokines présentent également des quantités accrues de radeaux lipidiques plasmatiques à la membrane, qui organisent la plate-forme de signalisation du TCR au cours de la stimulation antigénique. L’amorçage aux cytokines des lymphocytes T CD8+ a également augmenté la localisation de CD45, une phosphatase qui diminue l’inhibition automatique de la Lck dans les radeaux lipidiques. Cependant, l'amorçage aux cytokines n'a pas d'incidence sur la capacité des cellules CD8+ T pour former des conjugués avec les cellules présentatrices d'antigène puisées avec des peptides apparentés. En conclusion, ces résultats suggèrent que la composition et les fonctions des radeaux lipidiques peuvent moduler la sensibilité à l'antigène via le TCR lorsque les lymphocytes T CD8+ ont été pré-stimulés aux cytokines.

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Maekawa, Akiko Medical Sciences Faculty of Medicine UNSW. "Characterisation of the immune co-receptor function of CD4." Publisher:University of New South Wales. Medical Sciences, 2007. http://handle.unsw.edu.au/1959.4/40498.

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Abstract:

CD4 is a co-receptor for binding of T cells to antigen-presenting cells (APC) and the primary receptor for human immunodeficiency virus-I. The disulfide bond in the second extracellular domain (D2) of CD4 is reduced on the cell surface, which leads to formation of disulfide-linked homodimers. A large conformational change must take place in D2 to allow for formation of the disulfide-linked dimer. Domain swapping of D2 is the most likely candidate for the conformational change leading to formation of two disulfide-bonds between Cysl30 in one monomer and Cysl59 in the other one (Cys133 and Cysl62 in the mouse CD4). Thus, we hypothesized that the domain swapping of D2 in CD4 regulates its co-receptor function of antigenspecific T cell activation. We found that mild reduction of the extracellular part of human CD4 resulted in formation of disulfide-linked dimers. We then tested the functional significance of dimer formation for co-receptor function using the engineered Jurkat T cell system by expressing wild-type or disulfide-bond mutant mouse CD4. Eliminating the D2 disulfide bond markedly impaired CD4's coreceptor function as assessed by antigen-specific IL-2 production. Exogenous wild type thioredoxin, but not redox-inactive thioredoxin, could inhibit the CD4-mediated IL-2 production, suggesting that the redox state of D2 disulfide bond is controlled by this oxidoreductase. Furthermore, structural modeling of the complex ofthe T cell receptor and domain-swapped CD4 dimer bound to class II major histocompatibility complex and antigen supports the domain-swapped dimer as the immune co-receptor. The known involvement of D4 residues Lys318 and Gln344 in dimer formation isalso accommodated by this model. These findings imply that disulfide-linked dimeric CD4 is the preferred functional co-receptor for binding to APC. Strategies to promote dimerisation of CD4 should, therefore, enhance the immune response, while inhibiting dimer formation is predicted to be immunosuppressive.

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Navas, Penaherrera Victor Hugo. "Characterization of T cell development and function in a mouse strain expressing the mutant scaffold protein SLP76-S376A." Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066677.

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Abstract:

Le hématopoïétique protéine adaptateur spécifique SLP-76 est un élément clé des voies de transduction du signal en aval du récepteur des cellules T (TCR). Analyse des lignées de cellules T SLP-76 déficient et SLP-76 souris knock-out montré que SLP-76 est indispensable pour le développement des lymphocytes T et de réactivité des cellules T matures. Les travaux antérieurs de notre laboratoire en utilisant des lignées de cellules T a conduit à l'identification et la caractérisation d'une boucle de rétroaction négative impliquant SLP-76, qui module la signalisation TCR-dépendante et l'activation des cellules T. Cependant, la signification physiologique de ce mécanisme de régulation n'a pas été abordé jusqu'à présent. L'objectif de cette thèse est de répondre à la fonction de ce mécanisme de régulation in vivo par l'analyse de la fonction des cellules T dans une souche de souris généré récemment "knock-in", exprimant un mutant SLP-76-S376A. Basé sur les résultats précédents, était attendu ce mutant de perturber la boucle de rétroaction négative SLP-76-dépendante. Je montre ici que l'expression de SLP-76-S376A ne donne pas lieu à des modifications phénotypiques significatives de thymocytes matures ou des sous-ensembles de cellules T, ce qui suggère que ce mutant ne modifie pas de manière significative le développement des cellules T. En outre, aucune différence n'a été observée dans le taux de prolifération ou la mort cellulaire induite par activation de cellules T mutantes par rapport aux témoins, et l'expression des marqueurs d'activation de surface n'a été que légèrement affectées. Cependant, une activation accrue de plusieurs protéines de signalisation a été observée dans les cellules CD4 + et CD8 + T stimulées in vitro, conformément aux résultats précédents dans les lignées de cellules T humaines. In vitro les cellules T CD4 + activés ont montré une augmentation significative de la sécrétion de l'interleukine-4 et -5, tandis que d'autres cytokines comme l'interleukine-2 et l'interféron-γ est apparu insensible. Ces résultats suggèrent que le réglage de la signalisation TCR-dépendante par la boucle de rétroaction négative SLP-76-dépendante peut favoriser réponses de type Th2, avec des conséquences potentielles dans certaines pathologies telles que l'asthme ou les infections parasitaires. Ainsi, nous avons utilisé un modèle expérimental de l'asthme d'évaluer la réponse des cellules eosinophiles in vivo. En effet, les résultats préliminaires ont montré que l'antigène contesté souris mutantes d'asthme induisant recrutent beaucoup plus d'éosinophiles dans les poumons par rapport aux souris témoins. Pris ensemble, ces données suggèrent que les cellules SLP76-S376A T comprennent modulations dans proximale signal de transduction TCR qui peuvent générer un biais vers la production de cytokines Th2 en réponse à la stimulation du TCR
The hematopoietic specific adapter protein SLP-76 is a key element of signal transduction pathways downstream of the T cell receptor (TCR). Analysis of SLP-76-deficient T cell lines and SLP-76 knockout mice showed that SLP-76 is indispensable for T cell development and for responsiveness of mature T cells. Previous work of our laboratory using T cell lines led to the identification and characterization of a negative-feedback loop involving SLP-76, which modulates TCR-dependent signaling and T cell activation. However, the physiological significance of this regulatory mechanism was not addressed thus far. The aim of this PhD thesis is to address the function of this regulatory mechanism in vivo by analyzing T cell function in a recently generated “knock-in” mouse strain expressing a SLP-76-S376A mutant. Based on previous results, this mutant was expected to disrupt the SLP-76-dependent negative feedback loop. I show here that expression of SLP-76-S376A does not result in significant phenotypic alterations of thymocytes or mature T cell subsets, suggesting that this mutant does not significantly affect T cell development. Furthermore, no differences were observed in proliferation rates or activation-induced cell death of mutant T cells compared to controls, and the expression of surface activation markers was only slightly affected. However, an increased activation of several signaling proteins was observed in both CD4+ and CD8+ T cells stimulated in vitro, in line with previous results in human T cell lines. In vitro activated CD4+ T cells showed a significant increase in secretion of interleukin-4 and -5, whereas other cytokines like interleukin-2 and interferon- appeared unaffected. These results, suggest that tuning of TCR-dependent signaling by the SLP-76-dependent negative feedback loop may favor Th2-type responses, with potential consequences in specific pathologies such as asthma or parasite infections. Thus, we have employed an experimental model of asthma to evaluate the eosinophil response in vivo. Indeed, preliminary results showed that asthma-inducing antigen challenged mutant mice recruit significantly more eosinophils to the lung compared to control mice. Taken together, these data suggest that SLP76-S376A T cells comprise modulations in proximal TCR signal transduction that may generate a bias towards production of Th2-cytokines in response to TCR stimulation

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Araujo, Felipe Saldanha de. "Avaliação fenotípica dos linfócitos T em um modelo animal de deficiência de ferro." Universidade de São Paulo, 2006. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60135/tde-17052007-094115/.

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Abstract:

O ferro é um elemento chave em muitos processos metabólicos, como transporte de oxigênio, síntese de hormônios esteróides, respiração celular, transporte de elétrons, síntese de DNA, proliferação e diferenciação celular e regulação gênica. A deficiência de ferro é a desordem nutricional mais comum afetando aproximadamente um terço da população mundial. Pequenos déficits no compartimento funcional de ferro têm sérias conseqüências sobre o sistema imune, principalmente na imunidade mediada por células. A abordagem dos pais ou responsáveis, as exigências éticas e a aderência de crianças da mesma faixa etária e sem outros problemas que afetem o metabolismo do ferro e o sistema imune são as principais dificuldades enfrentadas no desenvolvimento de pesquisas com seres humanos, sendo necessário o estabelecimento de modelos experimentais. Este trabalho teve como objetivo estabelecer um modelo de indução e recuperação de deficiência de ferro em camundongos, visando a sua utilização em estudos sobre alterações do sistema imune induzidas por esta deficiência. A deficiência de ferro foi induzida por ingestão de uma ração com baixo teor de ferro (5 mg /kg de ração) por 4 e 8 semanas. No termino deste período foram determinados: concentração de hemoglobina (colorimetrico), hematócrito (microhematócrito), estoques de ferro hepático (espectrometria de absorção atômica) e fenotipagem (citometria de fluxo) dos linfócitos presentes no sangue periférico e em suspensão de células do baço dos animais dos grupos controle (C) e deficiente em ferro (DF), sendo avaliado a porcentagem de células T CD4+ e CD8+, bem como a expressão do receptor de transferrina (CD71+) nessas subpopulações. Não houve diferenças na concentração de hemoglobina e no valor do hematócrito entre os animais dos grupos DF e C, porém os estoques de ferro estavam significantemente reduzidos nos animais do grupo DF de quatro (p<0,05) e oito (p<0,01) semanas. Não houve diferenças na porcentagem de linfócitos T CD4+ e T CD8+ entre os animais dos grupos DF e C, porém os animais deficientes em ferro apresentaram maior porcentagem de linfócitos T CD8+ do baço expressando CD71+ (p< 0,001). Este trabalho sugere que a depleção nos estoques de ferro não altera a proporção dos subtipos de linfócitos, porem as células T CD8 + do baço são mais sensíveis à deficiência de ferro.
Iron have a crucial role in several metabolic pathways, such oxygen transport, steroid hormone synthesis, cellular respiration, electron transport, DNA synthesis, cellular proliferation and differentiation and genic regulation. The iron deficiency is most common disorder nutrition, affecting about 30% world population. Deficits in iron functional compartment have serious delays about immunity systems, especially in the cellular immunity. Because of environmental problems, age, deficiency of nutrients other than iron, prevalence of infection, which may make human studies difficult, we used an animal model. This work aimed established iron deficiency induction and recuperation in mouse, for study about immune systems alteration. Iron deficiency was induced by feeding mice a diet that contained only 5 mg Fe/Kg for 4 and 8 weeks. After this period were determined: hemoglobin (colorimetry), hematocrit (microhematocrit), liver iron stores (atomic absorption spectrophotometer) and we performed a flow cytometry analyses in peripheral blood and spleen lymphocytes in control (C) and iron deficient (ID) mouse. We defined the effects of iron deficiency on T-cell subset and expression of cell-surface transferrin receptor (CD71+) in these cells. Hemoglobin concentration and hematocrit of ID mice were not difference those of C mice, but iron stores of ID mice (4 and 8 weeks) were reduced (p< 0,05 and p< 0,01; respectively). Although T-cells subsets in peripheral blood and spleen were not altered, iron deficiency significantly increased the number of spleen T CD8+ cells that express CD 71+ (p< 0,001). Data suggest that depletion of iron storage not alter T-cells subsets and spleen T CD8+ is the most sensible subset in iron deficiency.

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Yeo, Tiong Chia. "Nijmegen breakage syndrome : role of nibrin in antigen receptor gene rearrangement and cellular responses to ionizing radiation /." Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2000. http://hdl.handle.net/1773/8340.

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Salim, Mahboob. "Understanding the molecular basis of γδ T cell receptor ligand recognition in cellular stress surveillance." Thesis, University of Birmingham, 2013. http://etheses.bham.ac.uk//id/eprint/4537/.

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Abstract:

γδ T-cells are unconventional lymphocytes hypothesised to act at the interface between innate and adaptive immunity. Emerging evidence indicates γδ T-cells play important, nonredundant roles in lymphoid stress surveillance during infection and tumourigenesis, and γδ T-cell-focussed immunotherapy trials suggest their potential exploitation in cancer immunotherapy. However, the molecular basis of γδ TCR/ligand recognition is poorly understood. In this thesis I first focussed on ligand recognition by the LES TCR, which is derived from a Vδ2-negative T-cell and mediates TCR-dependent recognition of CMVinfected cells and tumour cell lines by binding to Endothelial Protein C Receptor (EPCR). After producing LES TCR in a conformationally correct form, I used mutagenesis to map the LES TCR binding site on EPCR. Importantly, EPCR was recognised independently of bound lipid, suggesting it acts as a stress ligand rather than an antigen presenting molecule, and highlighting the importance of TCR-extrinsic factors in recognition. Secondly, I determined an NMR structure of Skint-1, a selecting ligand for mouse skin-resident DETC γδ T-cells that play important roles in immunoregulation and tumour immunosurveillance. This emphasised structural features unique to Skint-1, and suggested interaction with a separate ligand, such as the DETC TCR. Collectively, these studies improve understanding of γδ T-cell recognition.

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Al, Dulaimi Dina. "Développement et fonction des cellules INKT." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCC116.

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Abstract:

Les cellules invariantes « natural killer » T (iNKT) constituent une population particulière de LT non conventionnelle qui exprime un récepteur TCRαβ semi-invariant composé de la chaine Vα14-Jα18 associée aux chaines Vβ8, -7 ou -2 chez la souris et dont le développement a lieu dans le thymus. Ainsi, les cellules iNKT sont capables de reconnaitre via leur TCR des antigènes de type glycolipidique présentés par une molécule de classe I non polymorphique : le CD1d. Ces cellules sont connues pour être impliquées dans diverses réponses immunes grâce à leur capacité à produire rapidement des cytokines immunorégulatrices. De la même façon que les LTc SP CD4+, il existe trois phénotypes de cellules iNKT : Th1, -2 et -17 permettant de distinguer trois sous-populations de cellules iNKT. La sous-population iNKT1 dite iNKT conventionnelle exprime des récepteurs appartenant au lignage NK. Cette sous-population est localisée préférentiellement dans le foie, le thymus et la rate et produit majoritairement de l’IFN-. La sous-population iNKT2, qui reste jusqu’à aujourd’hui insuffisamment décrite, se localise préférentiellement dans les poumons et produit majoritairement de l’IL-4 et de l’IL-13. La sous-population iNKT17 a été caractérisée et mise en évidence au sein de notre laboratoire comme une sous-population de cellules iNKT exprimant le facteur de transcription RORt et capable de sécréter de l’IL-17 en réponse à l’IL-1 et l’IL-23 et se localisant principalement dans les ganglions périphériques et la peau. A ce jour, seul le développement des cellules iNKT conventionnelles est bien connu tandis que celui des cellules iNKT17 demeurent ignorés. Ainsi, ayant remarqué une faible proportion des cellules iNKT17 dans le thymus de la souris C57BL/6 comparées aux autres sous-populations de cellules iNKT, nous nous sommes intéressés dans un premier temps à expliquer les causes de cette faible distribution de cette sous-population, ainsi qu’à définir la séquence d’acquisition de ses marqueurs lors de son développement thymique et de sa migration en périphérie. Les résultats montrent que ces cellules n’ont aucun défaut de prolifération, ni de réponse aux cytokines de l’homéostasie permettant d’expliquer leur plus faible nombre. En revanche, nous avons constaté une absence d’accumulation thymique de ces cellules qui ont la capacité de migrer en périphérie, accompagnée d’une sensibilité plus accrue à la mort par apoptose et une diminution de l’expression des facteurs de survie comme le Bcl-2 pouvant ainsi expliquer leur nombre réduit. Les analyses de leur développement aux stades précoces ont montré un biais préétabli de leur faible nombre observable dès le stade CD44-. L’étude de leur ontogénique a permis de montrer une cinétique d’acquisition séquentielle des marqueurs CCR6 et CD138 permettant d’établir pour la première fois un modèle de maturation thymique de cette sous-population iNKT17 qui était encore inconnue. Ainsi, au stade précoce HSAhigh, les cellules iNKT RORt+ observé correspondent à des précurseurs communs des cellules iNKT et non pas à des précurseurs des cellules iNKT17 montrant que la différenciation de ces cellules ne se fait pas au stade de sélection positive et que leur faible nombre dépend des signaux que ces cellules reçoivent lors de leur engagement vers le lignage “Th17 like“
Invariant natural killer cells T (iNKT) constitute a particular population of unconventional LT which expresses a semi-invariant TCRαβ receptor composed of the Vα14-Jα18 chain associated with the Vβ8, -7 or -2 chains in mice and which develops in the thymus. Thus, iNKT cells are able to recognize glycolipid antigens via their TCR presented by a non-polymorphic class I molecule: CD1d. These cells are known to be involved in various immune responses because of their ability to rapidly produce cytokines. However, like conventional SP T CD4+ lymphocytes, iNKT cells can differentiate into three phenotypes: Th1, -2 and -17. The iNKT1 subset also named conventional iNKT cells expresses receptors belonging to the NK lineage, is mainly located in the liver, thymus and spleen and produces mainly IFN-. The iNKT2 subset which until now remains insufficiently described, is localized preferentially in the lungs and produces mainly IL-4 and IL-13. The iNKT17 subset has been characterized in our laboratory as a subset of iNKT cells expressing the RORt transcription factor and capable of secreting IL-17 in response to IL-1 and IL-23 and located mainly in the peripheral lymph nodes and the skin. To date, only the development of conventional iNKT cells is well known while that of iNKT17 cells remains unknown. Thus, having noticed the low distribution of the iNKT17 cells present in the thymus of the C57BL/6 mouse compared to other iNKT cell subset, we were initially interested in explaining the causes of this poor distribution of this subset, as well as to define the acquisition sequence of its markers during its thymic development and peripheral migration. The results show that these cells have no defect of proliferation or response to cytokines of homeostasis that can explain their lower number in the thymus. In contrast, we found a lack of thymic accumulation of these cells that have the ability to migrate peripherally, accompanied by increased sensitivity to death by apoptosis and decreased expression of survival factors such as Bcl-2 which can explain their reduced number. Analyzes of their development at early stages showed a pre-established bias of their low number from the CD44- stage. The study of their ontogeny has shown a sequential acquisition kinetics of CCR6 and CD138 markers to establish for the first time a model of thymic maturation of this iNKT subset which was still unknown

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BEN, ARIBIA MOHAMED-HABIB. "Role de l'interleukine 2 et de son recepteur dans l'activite des lymphocytes t et des cellules nk du sang peripherique humain." Paris 6, 1990. http://www.theses.fr/1990PA066398.

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Abstract:

Differentes methodes de purification ont ete utilisees pour identifier les lymphocytes du sang peripherique proliferant en presence d'il 2. Les cellules nk repondent directement a l'il 2 par une forte proliferation tandis que les cellules t ne repondent pas a l'il 2, a moins que des monocytes autologues irradies ne soient ajoutes. Les recepteurs pour l'il 2 exprimes par les cellules nk et les petits lymphocytes t ont ete enumeres par fixation d'il 2 marquee a l'iode-125. Les 2 types de cellules exprimaient environ 150 recepteurs/cellule de haute affinite et 500 recepteurs/cellule de moyenne affinite, ces derniers etant identifies comme etant la sous-unite p70 isolee du recepteur de l'il 2. Les cellules nk etaient capables de proliferer intensement en presence d'il 2 tandis que les cellules t au repos ne repondaient pas a des doses d'il 2 saturantes pour les recepteurs p70, a moins que des monocytes ne soient presents. L'initiation des divisions cellulaires impliquait la formation de recepteurs de haute affinite, au vu de l'effet inhibiteur de l'anticorps anti-tac introduit dans les cultures. Les arnm tac-specifiques etaient induits en 18 heures dans les cellules nk tandis que cette induction restait tres faible dans les cellules t. Nous montrons que les cellules t cd8#+/leu-7#+ de patients ayant recu une greffe de moelle osseuse sont des ctl preactives in vivo capables de se differencier en effecteurs cytolytiques sous le seul effet de l'il 2. L'anticorps tu27 dirige vis-a-vis de la sous-unite il 2 receptor beta inhibe completement l'induction de fonction cytolytique des cellules t cd8#+ tandis qu'un autre anticorps dirige vis-a-vis de la sous-unite il 2 receptor alpha n'a pas d'effet

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Martin, Eric. "Assemblage et transport du recepteur a l'antigene des lymphocytes t : etude du controle de l'association entre tcralpha.beta/cd3gamma.delta.epsilon et l'homodimere zeta au sein de cellules t leucemiques humaines." Toulouse 3, 1999. http://www.theses.fr/1999TOU30226.

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Abstract:

La specificite de reconnaissance du systeme immunitaire est assuree par les lymphocytes t et b via leur recepteur a l'antigene. Les recepteurs des lymphocytes t (tcr : t cell receptor) sont des complexes multimeriques transmembranaires constitues de deux modules : un module de reconnaissance de l'antigene peptidique forme par les chaines clonotypiques tcr alpha et beta, auquel s'adjoint un module de transduction du signal compose des chaines invariantes cd3 gamma, epsilon, delta et zeta. Les proteines de ce complexe sont repliees et assemblees selon un schema precis au niveau du reticulum endoplasmique avant leur transport vers la surface cellulaire : tout complexe incomplet ou non fonctionnel sera repere par la machinerie cellulaire le long de la voie de secretion des proteines et finira par etre degrade. Tout particulierement, la derniere etape d'assemblage entre l'hexamere tcralpha-beta/cd3delta-epsilon,gamma-epsilon et l'homodimere zeta-zeta semble determinante mais souffre d'une grande meconnaissance des mecanismes impliques. L'etude de mutants spontanes ou induits de cellules t lymphomateuses jurkat n'exprimant plus le complexe tcr/cd3 a la surface des cellules t permet de mettre en evidence les zones d'interaction des diverses chaines proteiques entre elles ainsi que les elements indispensables a tout le processus d'assemblage et d'expression membranaire. Ainsi, le variant j79 de la lignee jurkat et mute sur c (la phenylalanine 195 est remplacee par une valine), presente un defaut d'association entre l'hexamere et le dimere menant a un complexe avorte. Cependant, le meme complexe est fonctionnel chez le variant j79r58, issu de j79 apres mutagenese. J79r58 a ete de ce fait denomme revertant phenotypique. Sa caracterisation a permis de mettre en evidence la necessite de molecule(s) auxiliaire(s) quant a l'association entre l'hexamere tcralpha-beta/cd3delta-epsilon,gamma-epsilon et l'homodimere zeta-zeta et de preciser la localisation cette association.

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Montane, Valérie. "Lymphome T cutané et lymphadénite dermatopathique : intérêt diagnostique et pronostique des méthodes moléculaires : à propos de seize observations." Bordeaux 2, 1992. http://www.theses.fr/1992BOR23091.

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Zeboudj, Lynda. "Exploration et modulation du récepteur à l’EGF au cours du développement de l’athérosclérose." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCB262.

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Abstract:

Le récepteur à l’EGF (Epidermal Growth Factor) est exprimé, entre autres, par les cellules inflammatoires et vasculaires. Il est impliqué dans la survie et la migration cellulaire. L’EGF-R et ses ligand sont exprimés dans les plaques d’athérosclérose. L’objectif de cette étude est d’évaluer les effets de l’inhibition de l’EGF-R sur les fonctions des lymphocytes T CD4+ et sur les macrophages au cours du développement de l’athérosclérose expérimentale. L’EGFR est exprimé par les lymphocytes T CD4+, ainsi que par les macrophages au sein des plaques d’athérosclérose murines. L’inhibition pharmacologique de l’EGFR (Erlotinib) chez des souris Ldlr-/- sous régime riche en matières grasses réduit le développement et la progression des lésions athéromateuses. Afin d’étudier le rôle spécifique de l’EGFR dans les lymphocytes T CD4+, nous avons généré des souris Cd4Cre Egfrlox/lox. Des souris Ldlr-/- ont été irradiées et retransplantées avec une moelle Cd4Cre Egf-r+/+ ou Cd4Cre Egf-rlox/lox puis mise sous régime riche en matières grasses. L’invalidation spécifique de l’EGFR dans les lymphocytes T CD4+ induit une diminution de la prolifération lymphocytaire T CD4+ in vitro et in vivo, une diminution de la production d’IFN-γ, d’IL-4 et d’IL-2. La transplantation de la moelle Cd4Cre Egf-rlox/lox induit une réduction de la taille des lésions d’athérosclérose sans différence concernant la cholestérolémie, et une diminution de l’infiltration lymphocytaire T dans les plaques. Nous avons ensuite généré des souris LysMCre Egf-rlox/lox pour étudier le rôle spécifique de l’EGF-R exprimé par les cellules myéloides. Des souris Ldlr-/- ont été irradiées et retransplantées avec une moelle LysMCre-Egf-rlox/lox ou LysMCre+Egfrlox/lox. La transplantation de la moelle LysMCre+Egf-rlox/lox induit une réduction de la taille des lésions après 4, 7 et 12 semaines de régime riche en matière grasses. Les plaques des souris chimères Ldlr-/-/LysMCre+Egf rlox/lox sont caractérisées par une diminution significative de l’infiltration macrophagique ainsi qu’une diminution de la taille du noyau nécrotique. L’invalidation génétique de l’EGFR dans la lignée myéloide réduit significativement la production du TNF-α et d’IL-6. Par ailleurs, l’inhibition pharmacologique et l’invalidation génétique d’EGFR réduit la formation des cellules spumeuses par une « down-régulation » du CD36. L’inhibition pharmacologique l’EGF-R diminue l’activité pro-inflammatoire pro-athérogène des lymphocytes T CD4+ et des macrophages, et in fine réduit le développement et la progression de l’athérosclérose expérimentale. Nos résultats suggèrent que l’inhibition de l’EGFR pourrait être une nouvelle stratégie thérapeutique pour le traitement de l’athérosclérose
Background: Several Epidermal Growth Factor receptor (EGF-R) inhibitors have been successfully developed for the treatment of cancer, inhibiting tumor cell survival, proliferation and migration. EGF-R is expressed by leucocytes, but little is known about its role in the modulation of the immune response. The first part of the projet is to determine whether EGFR expressed on myeloid cells is functional, and to address the consequences of EGFR inhibition specifically in myeloid cells on atherosclerosis. The second part is to explore the expression of EGF-R on CD4+ T cells, and to study the effects of the specific EGF-R invalidation on CD4+ T cells during atherosclerosis development. Methods and results: Ldlr-/- mice were orally treated with a specific EGFR inhibitor (Erlotinib, 15mg/kg) for 6 weeks, under a high fat diet. EGFR pharmacological inhibition reduced T cell infiltration, decreases macrophage accumulation within atherosclerotic lesions, and thus, protected against atherosclerosis development in the aortic sinus. In parallel, we generated chimeric Ldlr-/- mice. Ldlr-/- mice were lethally irradiated and reconstituted with LysMCre+ EgfrLox/lox or LysM Cre- EgfrLox/lox bone marrow cells. In addition, irradiated Ldlr-/- mice were also reconstituted with bone marrow from Cd4Cre Egfrlox/lox , or Cd4Cre Egfr+/+ and put under a high fat diet. Animal weight and cholesterolemia were not different between groups. We observed a decrease of atherosclerosis plaque size in the aortic sinus in chimeric Ldlr-/-/LysMCre+ EgfrLox/lox and Ldlr-/-Cd4Cre Egfrlox/lox mice in comparison with chimeric Ldlr-/-/LysMCre- EgfrLox/lox, and Ldlr-/-Cd4Cre Egfr+/+ respectively. Myeloid invalidation of EGFR and pharmacological inhibition using AG-1478, a specific tyrosine kinase inhibitor, affected cytoskeleton reorganization limiting macrophage adhesion, spreading and migration. EGF-R blockage significantly reduced lipid uptake and foam cell formation through the down-regulation of CD36 expression. Selective deletion of Egfr in CD4+ T cells resulted in decreased T cell proliferation and activation both in vitro and in vivo, as well as reduced IFN-γ, IL-17A, IL-4 and IL-10 production. Finally, human blood T cells expressed EGFR and EGFR inhibition reduced T cell proliferation both in vivo and in vitro. Conclusion. EGFR is expressed by human and mouse CD4+ T cells. EGFR pharmacological inhibition or genetic invalidation induced T cell anergy in vitro and in vivo, blocked macrophage activity, and limited atherosclerosis initiation and progression. Our results suggest that targeting EGFR may be a novel strategy to combat atherosclerosis

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Prinz, Immo. "Molecular and cellular analysis of a crossreactive hsp60 specific T cell receptor in vitro and in vivo." [S.l. : s.n.], 2002. http://www.diss.fu-berlin.de/2002/252/index.html.

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Yong, Carmen. "Enhancing adoptive immunotherapy : redirecting immune subsets and metabolic pathways." Thesis, Montpellier, 2017. http://www.theses.fr/2017MONTT059.

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Abstract:

Le transfert adoptif de cellules T exprimant un récepteur chimérique reconnaissant un antigène (CAR), est un traitement qui génère des réponses impressionnantes dans les cancers hématologiques mais est beaucoup moins efficace pour le traitement de tumeurs solides. Les tumeurs solides modulent leur microenvironnement induisant des formes multiples d’immunosuppression qui inhibent l’efficacité des fonctions effectrices des cellules T ayant infiltrées la tumeur. Au cours de ma thèse, j’ai évalué le potentiel de deux stratégies pour améliorer les réponses anti-tumorales des cellules T CAR. La première se focalise sur l’étude du rôle potentiel des cellules immunes non T, exprimant un CAR sur la stimulation des fonctions et de la persistance de cellules T CAR+ dans le microenvironnement tumoral. Afin d’étudier la fonction des cellules CAR non T, nous avons généré un modèle de souris transgénique (vav-CAR) dans lequel les cellules immunes expriment un CAR reconnaissant l’antigène tumoral Her2 (ErbB2). Comme attendu, les cellules T CAR+ possèdent des fonctions anti-tumorales, mais nous avons aussi mis en évidence que les macrophages et les cellules NK exprimant le CAR montraient une réponse cytokinique, cytotoxique et phagocytiques spécifiques de l’antigène. De plus, en utilisant le modèle vav-CAR, nous avons démontré le potentiel des cellules immunes CAR+ dans le rejet des tumeurs et cela indépendamment des cellules T CD8+. Les cellules T CD4+ sont essentielles puisque leur élimination réduit considérablement les réponses anti-tumorales dans notre modèle vav-CAR. Il a été démontré que certaines sous-populations de cellules T auxiliaires participent aux réponses anti-tumorales avec les cellules Th1 et Th17 démontrant une efficacité plus robuste que les autres sous-populations. Notre deuxième stratégie s’est focalisée sur l’étude de l’impact du métabolisme au cours de la polarisation des cellules T CD4+ et plus particulièrement lors de la différenciation des cellules T CAR+ en cellules Th1. En effet, l’activation et différenciation des cellules T sont fortement associées à une augmentation des besoins métaboliques. Dans le microenvironnement tumoral, en raison de la forte demande en ressources de la tumeur, la déprivation en nutriments ainsi générée peut limiter l’accès aux nutriments d’autres types cellulaires et ainsi altérer le devenir et les fonctions des cellules immunes greffés infiltrant la tumeur. En conséquence, modifier les cellules immunes CAR+ afin qu’elles puissent résister à la compétition métabolique du microenvironnement tumoral pourrait leur permettre de conserver leurs fonctions effectrices. En étudiant l’impact de la déprivation en nutriments sur la différenciation des cellules T, nous avons trouvé que des concentrations limitantes en glutamine, l’acide aminé le plus abondant du plasma, inhibaient le potentiel des cellules T à se différencier vers la voie Th1 associée à la production d’IFNγ. Au contraire, cette condition favorisait la conversion de cellules T CD4 naïves en cellules régulatrices Foxp3+ ayant des fonctions suppressives (Tregs). De plus, nous avons montré que la présence d’un seul métabolite dérivé de la glutamine, l’α-ketoglutarate (αKG), suffisait à augmenter les fonctions effectrices anti-tumorales de plusieurs sous-types de cellules T auxiliaires CAR+, augmentant la production d’IFNγ et diminuant l’expression de FOXP3. Ainsi, durant ma thèse, j’ai développé un modèle murin vav-CAR, générant un outil permettant d’étudier et manipuler les fonctions de multiples populations de cellules immunitaires exprimant un CAR. Ce modèle permettra de promouvoir l’utilisation de cellules immunes optimisées exprimant un CAR dans le cadre d’immunothérapies dirigées contre des tumeurs solides. De plus, en utilisant ce modèle, nous avons identifié un métabolite de la glutamine, qui orchestre les réponses immunitaires au moyen d’une reprogrammation métabolique des cellules T CD4
The adoptive transfer of T cells expressing a chimeric antigen receptor (CAR) as a treatment for cancer has achieved impressive responses in haematological malignancies, but has been less successful in the treatment of solid tumors. The tumor microenvironment of solid tumors presents multiple forms of immunosuppression, inhibiting the efficient effector function of infiltrating anti-tumor T cells. During my PhD, we assessed the potential of two strategies to enhance the anti-tumor function of CAR T cells. The first focuses on the potential of other CAR-expressing immune subsets to stimulate CAR T cell function and persistence in the tumor microenvironment. To elucidate the function of CAR-expressing non-T lymphocytes, we generated a transgenic mouse model (vav-CAR) in which immune cells express a CAR against the Her2 (ErbB2) tumor antigen. As expected, CAR T cells harboured anti-tumor function but we also found that CAR-modified macrophages and natural killer cells (NKs) exhibited significant antigen specific cytokine secretion, cytotoxicity and phagocytosis. Moreover, using the vav-CAR model, we demonstrated the potential of CAR immune cells to mediate tumor rejection independently of CD8+ T cells. CD4+ T cells were critical for this response as their deletion severely abrogated the anti-tumor responses in our vav-CAR model. Distinct T helper subsets have been shown to participate to anti-tumor responses, with Th1 and Th17 cells demonstrating a more robust efficacy as compared to other T helper subsets. Our second strategy was focused on the impact of metabolism in the polarisation of CD4+ T cells, in particular the differentiation of CAR T cells to Th1 lineage. T cell activation and polarisation is highly associated with increased metabolic needs. Given that nutrient deprivation in the tumor microenvironment, due to a high demand of the tumor for resources, can limit the nutrients available for other cell types, the fate and function of adoptively transferred immune cells may be altered upon entering the tumor. Therefore, modifying CAR immune cells to resist metabolic suppression in the tumor microenvironment may help retain their effector functions. Upon assessing the effects of nutrient deprivation on T cell differentiation, we found that limiting concentrations of glutamine, the most abundant amino acid in the plasma, inhibited the potential of T cells to undergo Th1 differentiation with associated IFNγ secretion. Rather, this condition resulted in the conversion of naïve CD4+ T cells into suppressive Foxp3+ regulatory T cells (Tregs). Furthermore, we determined that a single glutamine-derived metabolite, α-ketoglutarate (αKG), enhanced the anti-tumor effector functions of multiple CAR T helper subsets, increasing the production of IFNγ and reducing FOXP3 expression.Thus, during my PhD, I generated a vav-CAR model, providing a platform in which the function of multiple CAR-bearing immune subsets can be studied and manipulated. This model will promote the utilisation of optimized CAR-bearing immune cells in adoptive immunotherapy for solid tumors. Furthermore, using the CAR model, we have identified a glutamine metabolite that orchestrates immune responses through the metabolic reprogramming of CD4 T cells

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Grigoriadou, Kalliopi. "Sélection du répertoire TCR exprimé par les cellules T gamma delta dans le thymus et l'épithélium intestinal de la souris." Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066164.

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Das, Vincent. "Rôle de la polarisation du trafic intracellulaire dans la formation de la synapse immunologique." Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066396.

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Borianne, Tom. "Immune synapse : T cell receptor clustering is associated with a liquid-disordered plasma membrane." Thesis, Aix-Marseille, 2019. http://www.theses.fr/2019AIXM0459.

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Abstract:

La composition lipidique et protéique de la membrane des lymphocytes T est remodelée pendant la formation de la synapse immunologique. Le fait que ce remodelage puisse être accompagné d’un changement d’ordre n’a pas été élucidé. En combinant imagerie solvatometriques et quantitative en live, nous avons observé que l’interaction agoniste TCR-pMHC induit une séparation de phase du feuillet externe de la membrane plasmique de lymphocytes T murins, au contact d’une cellule présentatrice d’antigène. Etonnamment, le TCR partitionne dans la région liquide désordonnée de la membrane plasmique et ce phénomène est indépendant de l’activité des Src-kinases. Nous montrons ensuite que l’agglomération du TCR corrèle avec l’amplitude de la séparation de phase et que la mobilité apparente du TCR n’est pas réduite à la synapse immune. À notre connaissance, ceci est la première observation directe de la séparation de phase d’un membrane plasmique primaire en live, induite par un ligand naturel. Cette observation a des conséquences importantes pour notre compréhension de la relation entre ordre membranaire, agglomération des récepteurs et mobilité des récepteurs
The lipid and protein composition of the plasma membrane of T cells is remodeled during the immune synapse formation. Whether this remodeling is accompanied with a change of ordering of the plasma membrane is not well understood. Using a combination of live cell solvatometric and quantitative imaging, we report that agonist TCR-pMHC interaction induces the phase separation of the outer leaflet of murine T cells plasma membrane in contact with an engineered antigen-presenting cell. Surprisingly, the TCR partitions into the liquid-disordered region of the plasma membrane and this segregation is Src-kinase independent. We further show that TCR clustering correlates with the amplitude of the phase separation and that apparent TCR mobility is not reduced at the immune synapse. To our knowledge, this is the first direct visualization of the phase separation of a live primary plasma membrane upon natural ligand interaction. These observations have important consequences for our understanding of the relationship between membrane order, receptor clustering and receptor mobility

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Miloro, Giorgia. "Déterminer le rôle du récepteur de mort Fas/CD95 dans la co-stimulation des cellules T." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2020. http://www.theses.fr/2020COAZ6036.

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Abstract:

Fas (CD95 / TNFRSF6), un récepteur transmembranaire de type I de la superfamille des récepteurs au TNF (TNFR), est un activateur de mort cellulaire bien connu. Cependant, il a également été impliqué dans des fonctions de non-mort cellulaires, telles que la survie, la différenciation et la migration. Alors que la cascade moléculaire qui initie l'apoptose lors de l'engagement de Fas avec son ligand FasL est particulièrement bien décrite, les informations concernant les mécanismes moléculaires sous-tendants les voies non apoptotiques médiées par Fas sont rares.Comme indiqué par les manifestations d’auto-immunité et de lymphoprolifération chez les patients ALPS porteurs de mutations dans le récepteur ou dans son ligand, le système Fas / FasL joue un rôle majeur dans l'homéostasie des lymphocytes T et dans le contrôle de l'auto-immunité et du cancer. D'un côté, la mort médiée par Fas a été décrite comme critique pour (i) la suppression des lymphocytes autoréactifs, et donc dans le maintien de la tolérance périphérique; (ii) le contrôle du nombre de lymphocytes activés par des antigènes faibles lors d'infections par des pathogènes.De l'autre côté, certaines fonctions de non mort de Fas ont été décrites dans les cellules T, parmi lesquelles le rôle de Fas comme récepteur co-régulateur de l’activation du TCR. Malgré l'importance potentielle de ce rôle dans les stratégies immunothérapeutiques, seules quelques études controversées liées à cette implication ont été réalisées. En effet, alors que plusieurs études ont décrit Fas comme un récepteur costimulateur du TCR, d'autres ont défini une inhibition de l'activation des lymphocytes T lors d’une stimulation concomitante de Fas et du TCR. Dans ce contexte, l'objectif de mon projet de thèse consistait à disséquer moléculairement la co-signalisation Fas-TCR.En utilisant à la fois des cellules T primaires et des lignées cellulaires portant un TCR transgéniquespécifique, nous avons pu définir Fas comme un récepteur co-stimulateur. En exploitant les approches biochimiques ainsi que la cytométrie en flux et la microscopie, nous avons déchiffré la co-stimulation Fas-TCR à la fois au niveau fonctionnel et moléculaire. Premièrement, nous avons montré que la co-stimulation Fas-TCR se produit à la fois dans les cellules T naïves et les cellules T mémoire ainsi que dans les souspopulations CD4 + et CD8 +. Moléculairement, nous avons décrit que Fas renforce la signalisation TCR dès les étapes précoces, puisque la phosphorylation des premières protéines impliquées dans l'activation du TCR est augmentée. En outre, les formes membranaires et solubles de FasL sont capables d'initier le signal co-stimulateur de Fas. Enfin, nous avons pu exclure l'implication de FADD et Caspase-8, premiers acteurs de la signalisation Fas, dans la co-activation, et , de manière importante, l'implication du domaine de mort de Fas, suggérant le rôle d'un autre domaine de Fas . Décrire les mécanismes moléculaires et le contexte dans lequel la co-stimulation Fas-TCR se produit pourrait être d'une importance cruciale dans la compréhension de la physiopathologie de Fas dans les cellules T, mais également pour l’établissement de futures stratégies immunothérapeutiques
Fas (CD95/TNFRSF6), a type-I transmembrane receptor of the tumor necrosis factor receptor (TNFR) superfamily, is a well-known cell death activator. However, it has been also implicated in non-cell death processes including cell survival, differentiation, migration. Whereas the molecular cascade that initiates apoptosis upon Fas engagement with its ligand FasL is particularly well described, the informations concerning the molecular mechanisms underlying the Fas mediated non-apoptotic pathways are sparse.As indicated by the induction of autoimmunity and lymphoproliferation in ALPS patients harboringmutations in either the receptor or its ligand, the Fas/FasL system plays a major role in T cell immune homeostasis and thus, in the control of autoimmunity and cancer. On one side, the Fas mediated death has been described critical for (i) the deletion of autoreactive lymphocytes, and thus in the maintenance of peripheral tolerance; (ii) the control of the number of lymphocytes activated by weak antigens during pathogen infections.On the other side, and beyond cell death induction, some Fas non-death pathways have been described in T cells, among which the role of Fas as co-regulatory receptor for the TCR during its activation. Despite the potential importance of this role in immunotherapeutic strategies, only few and controversial studies related to this involvement were done. Indeed, whereas several studies have described Fas as a TCR co-stimulatory receptor, others defined an inhibition of T cell activation by Fas-TCR concomitant stimulation. In this context, the aim of my PhD project consisted into molecularly dissect the Fas-TCR co-signaling.By using both primary T cells and cell lines bearing a specific transgenic TCR, we could define Fas as a costimulatory receptor. By exploiting biochemical approaches as well as flow cytometry and microscopy we could decipher the Fas-TCR crosstalk both at functional and molecular level. First, we show that Fas-TCR costimulation occurs in both naïve and in memory T cells as well as in both CD4+ and CD8+ T cell subpopulations.Molecularly, we could describe that Fas enhances the TCR signaling at membrane proximal level, since the phosphorylation of the first proteins involved in TCR activation is increased. Furthermore, both membrane-bound and soluble FasL are capable to initiate Fas co-stimulatory signal. Lastly, we could exclude the involvement of FADD and Caspase-8, first actors of Fas signaling, in the co-activation, and even more importantly, the involvement of the death domain of Fas cytoplasmic tail, unveiling the implication of another Fas receptor domain. To describe the molecular mechanisms and the context where Fas-TCR co-stimulation occurs might be of an outstanding importance in the comprehension of Fas physiopathology in T cells and for future studies that might involve its potential for immunotherapeutic strategies

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Robert, Olivier. "Implication des axes récepteur des glucocorticoïdes-GILZ et CXCR4-CXCL12 dans l’inflammation hépatique liée à l’obésité." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA114850.

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Abstract:

La NAFLD (non alcoholic fatty liver disease) ou stéatopathie dysmétabolique est la manifestation hépatique du syndrome métabolique. Elle regroupe l’ensemble des lésions hépatiques liées à l’obésité en dehors de toute consommation d’alcool : la stéatose, la NASH (non alcoholic steatohepatitis), la fibrose, la cirrhose et le carcinome hépatocellulaire. Les systèmes immunitaires inné et adaptatif participent activement à la pathologie. J’ai étudié deux axes : l’axe du récepteur des glucocorticoïdes-GILZ dans les cellules de Kupffer et CXCR4-CXCL12 dans les lymphocytes T CD4+.Les cellules de Kupffer (CK) jouent un rôle clé dans la pathologie de la NASH. GILZ (glucocorticoid induced leucine zipper) est exprimé par les monocytes/macrophages et est sous le contrôle du récepteur aux glucocorticoïdes (GR). De plus, GILZ intervient dans l’inhibition des processus inflammatoires. J’ai montré que l’obésité entraîne une diminution de l’expression du GR et de GILZ dans les CK. En utilisant du RU486, un antagoniste spécifique du GR, j’ai prouvé que la diminution de l’expression du GR entraîne la diminution de l’expression de GILZ et sensibilise les CK au LPS. Ce mécanisme joue un rôle déterminant dans le développement de l’inflammation hépatique au cours de l’obésité, en modulant la réponse inflammatoire des CK. Le recrutement de cellules inflammatoires dans le foie est un élément clé de la progression de la NASH. Les lymphocytes T CD4+ issus de souris obèses ont des propriétés chimiotactiques accrues dépendantes de CXCR4. J’ai montré que la NASH augmente les propriétés migratoires dépendantes de CXCR4 des lymphocytes T CD4+ chez l’homme et la souris dans trois modèles murins de NASH. Le traitement de souris obèses par de l’AMD3100, un antagoniste de CXCR4, permet de diminuer le recrutement hépatique de lymphocytes. L’augmentation du chimiotactisme des lymphocytes T CD4+ n’était pas dû, ni à une augmentation de l’expression de CXCR4 et CXCR7, ni même de CXCL12 au niveau du foie. J’ai montré que ce mécanisme dépendait de l’augmentation de l’affinité de CXCR4 pour CXCL12.Ainsi, j’ai mis en évidence deux axes participant à l’inflammation hépatique au cours de l’obésité. Ces axes représentent de nouvelles cibles thérapeutiques potentielles
NAFLD (non alcoholic fatty liver disease) is the hepatic manifestation of metabolic syndrome. It encompasses the entire spectrum of obesity-related liver lesions : steatosis, NASH (non alcoholic steatohepatitis), fibrosis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Innate and adaptative immune systems participate actively to the pathophysiology.I studied two axis : the glucocorticoid receptor-GILZ axis in Kupffer cells and CXCR4-CXCL12 in CD4+ T lymphocytes.Kupffer cells (KC) play a key role in pathophysiology of NASH. GILZ (glucocorticoid induced leucine zipper) is expressed by monocytes/macrophages and is under the control of glucocorticoid receptor (GR). Moreover, GILZ takes part in inhibition of inflammatory processes. I showed that obesity induces a decreased expression of GR and GILZ in KC. Using RU486, a GR antagonist, I proved that decreased expression of GR induces the decreased expression of GILZ and sensitize KC to LPS. This mechanism plays a decisive role in initiation of liver inflammation in obesity, modulating inflammatory response of KC. In obese mice, recruitment of inflammatory cells into the liver is a key element in the progression of NASH. CD4+ T lymphocytes from obese mice have enhanced CXCR4-dependent chemotactic properties. I showed that NASH enhances CXCR4-dependent chemotactic properties of CD4+ T lymphocytes in patients and in three mouse models of NASH. Obese mice treatment with AMD3100, a CXCR4 antagonist, decreases lymphocytes recruitement into the liver. Enhanced chemotactic properties of CD4+ T lymphocytes were not due to increased expressions of nor CXCR4 and CXCR7, neither CXCL12 in the liver. I showed that this mechanism was dependent of an increased affinity of CXCR4 to CXCL12.Therefore, I highlighted two axis participating to obesity-related liver inflammation. These axis represent new potential therapeutic targets

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Virion, Zoé. "Interaction de Neisseria meningitidis avec les cellules endothéliales humaines : rôle des glycosylations des récepteurs cellulaires eucaryotes Receptor recognition by meningococcal type IV pili relies on a specific triantennary N-glycan Sialic acid‐mediated allosteric activation of β2-adrenoceptors An ADAM-10 dependent EPCR shedding links meningococcal interaction with endothelial cells to purpura fulminans." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. https://wo.app.u-paris.fr/cgi-bin/WebObjects/TheseWeb.woa/wa/show?t=2296&f=12491.

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Abstract:

Neisseria meningitidis est une bactérie commensale du rhinopharynx portée de façon asymptomatique par 10 à 35% de la population. Pour une raison encore inconnue à ce jour, cette bactérie est capable de traverser la barrière épithéliale et ainsi proliférer dans la circulation sanguine de l’hôte, où elle est capable d’adhérer aux cellules endothéliales grâce aux pili de type IV. Sur ces cellules, le méningocoque interagit spécifiquement avec le récepteur d’adhésion CD147 et le récepteur β2-adrénergique qui active la signalisation sous la colonie bactérienne adhérente, favorisant l’ancrage de celle-ci à la surface cellulaire et l’ouverture des jonctions cellulaires. Nous avons montré que l’adhésion aux cellules endothéliales humaines est dépendante des motifs spécifiques de N-glycosylation portés par les récepteurs cellulaires eucaryotes. Les résultats montrent que le troisième site de N-glycosylation du récepteur CD147 est indispensable pour permettre l’adhésion de la bactérie, et que l’interaction est permise par les résidus d’acide sialique portés par ces chaînes de glycosylation. Les acides sialiques sont également essentiels pour l’interaction du méningocoque avec le récepteur β2-adrénergique et l’activation de la signalisation cellulaire sous la colonie. Les résultats montrent que la forme Neu5Ac (acide N-acétylneuraminique) des acides sialiques retrouvée dans l’espèce humaine pourrait participer à la spécificité d’espèce de N. meningitidis, la plupart des autres espèces de mammifères présentant une forme Neu5Gc (acide N-glycolylneuraminique). Nous avons ainsi pu montrer qu’une partie de la spécificité d’espèce du méningocoque est liée à l’interaction des pili de type IV avec des sucres spécifiques
Neisseria meningitidis is a commensal bacteria found in the nasopharynx of 10 to 35% of the population. For a still unknown reason, the bacteria a able to cross the epithelial barrier and to reach the bloodstream, where it can proliferate and adhere to the human endothelial cells via the type IV pili. The meningococcus specifically interacts with the adhesion receptor CD147 and the β2-adrenergic receptor, responsible for the activation of signaling under the adherent colony. We showed that the adhesion to the human endothelial cells is dependent on specific N-glycosylation patterns carried by the cellular receptors. The results show that the third N-glycosylation site of CD147 is essential to the adhesion of the bacteria, and that the interaction is due to the presence of sialic acid residues of the N-glycosylation chains. The sialic acids are also essential for the interaction of the meningococcus with the β2-adrenergic receptor and the activation of the signaling under the colony. The results show that the sialic acid of the form Neu5Ac (N-acetylneuraminic acid) found in humans could explain de species specificity of the meningococcal infection, most of the other mammals species possessing a Neu5Gc (N-glycolylneuraminic acid) form of the sialic acid. So we showed that a part of the species specificity of the meningococcus is due to the interaction of the type IV pili with specific glycosylations

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Warda, Walid. "Ciblage de la cellule souche leucémique exprimant la protéine lL-1RAP : Approche d'immunothérapie anti-tumorale utilisant des lymphocytes T génétiquement modifiés pour exprimer un récepteur chimérique à l’antigène(CAR)." Thesis, Bourgogne Franche-Comté, 2018. http://www.theses.fr/2018UBFCE002/document.

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Abstract:

Nous avons produit des CART-cells et des LT-mock ont été produits ex-vivo. L'efficacité de transduction est mesuré par l'expression CD3+/CD19+ (82% en moyenne, n=S), en cytométrie en flux. L'expression protéique de CAR a été vérifiée par western blot et en cytométrie en flux attestant de son expression membranaire. Nous avons testé la fonctionnalité de la cassette suicide iCaspase9/ AP1903 sur CART-cells après 48h de traitement à I' AP1903. Nous avons montré que plus de 90% des CART-cells entrent en apoptose (Marquage 7-AAD en cytométrie en flux). Nous avons ensuite réalisé des tests fonctionnels in-vitro des CART-cells contre des lignées LMC exprimant naturellement IL-lRAP ou contre des lignées transfectées pour exprimer la forme membranaire d'IL-lRAP. Après coculture des CART-cells en présence des cellules cibles IL-lRAP+ nous avons montré qu'ils prolifèrent (test CFSE), qu'ils sécrètent de l'interféron y et des cytokines inflammatoires. Enfin, par marquage 7-AAD, nous avons démontré la cytotoxicité des CART-cells contre les cellules ILl-RAP+. Finalement, nous avons montré l'efficacité des CART-cells in vivo, dans un modèle de xénogreffe tumorales dans des souris immunodéficiences NSG greffées par la lignée K562-IL1RAP+ / Luciférase +. On constate une diminution de la masse tumorale 4 jours après injection des CART-cells, jusqu'à disparition totale. Cette preuve de concept laisse entrevoir des perspectives thérapeutiques alternatives dans le traitement de la LMC ou LAM, qui devront être optimiser dans des modèles murins (séquence et nombres d'injection, nombres de cellules, associations avec ITKS ou autres chimiothérapies) afin de conduire un essai clinique de phase I, pour démontrer la faisabilité et la sécurité de l'approche pour envisager une démonstration d'efficacité chez l'homme. La sécurisation par la cassette suicide permet d'envisager l'utilisation des CART-cells en situation autologue ou allogénique (Donor Lymphocytes infusion, DU)
Chronic myeloid leukemia (CML) is a myeloproliferative disorder and is characterized by the presence of a Philadelphia chromosome (Phl) encoding the BCR-ABL fusion protein with constitutive tyrosine kinase activity. The treatment by Tyrosine Kinase lnhibitors (ITK) is not curative. The problem today is ta target leukemic stem cells (HSCs) to prevent relapse of patients after stopping treatment with TKI and permanently eradicate the disease. Studies have identified the interleukin-1 accessory protein receptor (IL-lRAP) as a potential target for killing CSL (BCR-ABL1 positive) in CML or in acute myeloid leukemia (AML). We therefore propose to develop a cell therapy approach targeting IL-lRAP, using T cells (LT) redirected by a CAR (Chimeric Antigen Receptor) in the treatment of CML and AML. We produced a specific anti-lL-1RAP murine monoclonal antibody (mAb) called # A3C3. We tested the specificity of the antibody # A3C3 in flow cytometry, in Western blot, by immunohistochemistry or confocal microcopy, on positive human cell lines IL-1RAP (KU812) or IL-1RAP negative (Raji). Moreover, by using this antibody, we have demonstrated by immunohistochemistry, on 20 different normal tissues that our antibody does not recognize or very few non-specific (off-target) targets. Finally, we demonstrated that this antibody is able to detect positive IL-1RAP CSLs in primary bone marrow or peripheral blood samples of LMC patients at diagnosis or after ITK treatment. By molecular biology, we have sequenced and identified rearrangements of the heavy (lgH) and light {lgL) chains coding region for hypervariable regions of# A3C3. The coding sequence for the "single chain variable fragment" (scFv), lin king the 2 lgH and lgl chains, was cloned into a 3rd generation lentiviral skeleton securised by a suicide gene, inducible caspase 9 (iCASP9). We produced CART-cells and LT-mock ex-vivo. The transduction efficiency is measured by CD3 + / CD19 + expression (82% on average, n = 5), in flow cytometry. The functionality of the suicide cassette iCaspase9/AP1903 on CART-cells after 48h treatment with AP1903 was tested. We have shown the death of more than 90% of CART-cells (7-AAD labeling in flow cytometry). We then performed in-vitro functional tests of CART-cells against LMC lines naturally expressing IL-1RAP or against transfected lines to express the membrane form of IL-1RAP. After co-culture of CART-cells in the presence of IL-1RAP + target cells, we have shown that they proliferate (CFSE test), that they secrete interferon y and inflammatory cytokines (intracellular labeling and Cytokines Bead Array assay). They are able to degranulate (CD107a & b labeling). Finally, by 7 AAD labeling, we demonstrated the cytotoxicity of CART-cells against IL1-RAP + cells. Finally, we showed the effectiveness of CART-cells in vivo, in a tumor xenograft model in NSG immunodeficiency mice engrafted by the K562-IL1RAP+/Luciferase+ line. There is a decrease in the tumor load 4 days after injection of CART-cells, until complete disappearance.This proof of concept suggests alternative therapeutic perspectives in the treatment of CML or AML, which should be optimized in murine models (sequence and injection numbers, cell numbers, associations with ITKS or other chemotherapies) in order to Phase I clinical trial, to demonstrate the feasibility and safety of the approach to consider a demonstration of efficacy in human. Securing by the suicide cassette makes it possible to consider the use of CART-cells in an autologous or allogeneic situation (Donor Lymphocytes infusion, DU)

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Leruste, Amaury. "Immune context of malignant rhabdoid tumors : description and identification of new therapeutic targets." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS050.

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Abstract:

Les tumeurs rhabdoïdes (TR) constituent un rare cancer indifférencié du jeune enfant et du nourrisson, avec un âge médian au diagnostic de 20 mois. Ces tumeurs sont caractérisées par une inactivation biallélique du gène suppresseur de tumeur SMARCB1, un des membres du complexe SWI/SNF, acteur majeur du remodelage de la chromatine, sans autre altération génomique récurrente. Le pronostic des TR est péjoratif, le taux de survie globale atteignant 30% dans la plupart des séries, malgré des approches thérapeutiques conventionnelles particulièrement agressives. Les approches d’immunothérapies ont obtenu un succès certain dans certains cancers de l’adulte, et récentes analyses de l’infiltrat immun des cancers pédiatriques ne montrent pas un fort taux de tumeurs infiltrées à l’exception de rare types de cancers dont les TR intracrâniennes. Nous avons donc procédé à une analyse multimodale de l’infiltrat immun de cohortes de patients ainsi que d’un modèle de TR murines établi dans notre laboratoire. Nous avons identifié une forte proportion de tumeurs infiltrées dans certains sous-groupes de TR. Cet infiltrat était composé à la fois de cellules myéloïdes incluant des populations au phénotype immunosuppresseur, et lymphocytaires T notamment de phénotype résident mémoire caractérisées par une forte expansion clonale probablement spécifique d’un antigène tumoral. Nous avons identifié des cibles thérapeutiques communes aux tumeurs humaines et au modèle murin syngénique, et trouvé que cibler l’infiltrat lymphocytaire T ou myéloïde était susceptible d’induire une réponse tumorale complète avec induction d’une mémoire immunitaire, confirmant le caractère immunogénique des TR, et apportant de nouvelles stratégies thérapeutiques utiles en clinique. Enfin, nous avons identifié que les TR étaient le site d’une réexpression de rétrovirus endogènes, dépendante de celle de SMARCB1, avec activation des voies de l’interféron, apportant une base à une immunogénicité des TR issue du génome non codant
Rhabdoid tumors (RT) are highly undifferentiated cancers occurring in infancy and early childhood, with a median age at diagnosis about 20 months. These tumors are characterized by the biallelic inactivation of SMARCB1 tumor suppressor gene, core member of the SWI/SNF complex, one major chromatin remodeling actor, in an otherwise highly stable genome. The prognosis of RT is dismal with overall survival hardly reaching 30% in most series, despite particularly aggressive conventional treatment. Immunotherapy approaches has gained a striking success within some adult cancer types and recent analyses of immune cell content of pediatric cancers don’t reveal a high rate of infiltrated tumors, except in few tumor types such as intracranial rhabdoid tumors. Then, we conducted a comprehensive analysis of the immune context of both human RT cohorts and a mouse RT model, including at single cell level. We identified a high recurrence of infiltrated tumors, in a RT-subgroup related manner, composed of both myeloid cells including cells with immune suppressive phenotypes, and T cells with notably a tissue resident memory phenotype demonstrating a high clonal expansion highly suggestive of immunogenicity. We identified common targetable immune populations between human and mouse RTs, and found that targeting both T and myeloid infiltrating cells was able to induce complete anti-tumor response with induced memory, confirming the immunogenic properties of RTs, and identifying new therapeutic strategies of clinical relevance. We finally identified that RTs were the site of SMARCB1-dependent endogenous retroviruses reexpression, with subsequent activation of interferon signaling, likely triggering the immune response in the context of RT, and providing a basis of non-coding genome-driven immunogenicity for these tumors

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Patasic, Lea [Verfasser], Beatrix [Akademischer Betreuer] Süß, Alexander [Akademischer Betreuer] Löwer, Klaus [Akademischer Betreuer] Cichutek, and Hinrich [Akademischer Betreuer] Abken. "DARPin-targeted Chimeric Antigen Receptor T cells: CD4 as a cellular target shows potential to evade HIV latency reservoir / Lea Patasic ; Beatrix Süß, Alexander Löwer, Klaus Cichutek, Hinrich Abken." Darmstadt : Universitäts- und Landesbibliothek Darmstadt, 2020. http://d-nb.info/1216997764/34.

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Rong, Yiping. "Bcl-2 Regulates Proapoptotic Calcium Signals by Interacting with the Inositol 1, 4, 5-Trisphosphate Receptor." Case Western Reserve University School of Graduate Studies / OhioLINK, 2008. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=case1228322705.

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Karnam, Anupama. "Role of Wnt/β-catenin pathway in the anti-inflammatory mechanism of therapeutic normal immunoglobulins Wuchereria bancrofti filaria activates human dendritic cells and polarizes T helper 1 and regulatory T cells via toll-like receptor 4 Regulatory T cells induce activation rather than suppression of human basophils." Thesis, Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS642.

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Abstract:

Les immunoglobulines polyclonales intraveineuses (IVIG) sont préparées à partir de plasmas provenant de plusieurs milliers de donneurs sains et utilisées comme traitement dans de nombreuses maladies inflammatoires et autoimmunes. Lors de ma thèse, j’ai investigué si cette thérapie pouvait interférer avec la détection sérique du virus Zika chez des patients atteints du syndrome de Guillain-Barré (GBS). J’ai démontré que la thérapie par IVIG n’interférait pas avec la détection sérique du virus dans le plasma des patients atteints de GBS suivant un traitement aux IVIG. Contrairement aux souris, les IVIG peuvent activer les basophiles humains par une voie différente que celle de l’IL-33. Les IVIG induisent la sécrétion d’Il-4, IL-6 et IL-8 par interaction directe avec les IgE à la surface des basophiles. Cette fonction est dépendante de la fraction F(ab’)2 et implique l’activation de Syk. Ces résultats montrent un nouveau mécanisme dans l’activation des basophiles humains par les IVIG. La dernière partie de ma thèse m’a permis d’étudier le rôle de la voie de signalisation β-caténine sur les effets anti-inflammatoires médiées pars les IVIG. La β-caténine, composante de la voie Wnt, joue un rôle important dans la tolérogénicité des cellules dendritiques (DC) et dans la protection contre l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE). Les données générées montrent que les IVIG activent la voie β-caténine chez les DC humains en plus de la production de Wnt 5a nécessitant une IgG complète ainsi que les co-récepteurs LRP5/6. En dépit de l’induction de β-caténine par les IVIG, cette voie est dispensable pour ses actions anti-inflammatoires in vitro et in vivo dans le modèle EAE
Intravenous immunoglobulin (IVIG) is a therapeutic preparation of pooled normal IgG obtained from the several thousand healthy donors. It is established as first-line therapy for many autoimmune and inflammatory diseases. In the first part of my thesis, I have investigated if IVIG therapy interferes with the serological detection of Zika virus infection in Guillain–Barré syndrome (GBS) patients. By analyzing the plasma of GBS patients treated with IVIG for anti-Zika IgG, I have demonstrated that IVIG therapy in GBS patients does not interfere with the serological Zika detection. The second part addresses the immunoregulatory role of IVIG on human basophil function. Unlike in mice, IVIG does not require DC-SIGN-dependent IL-33 for the activation of human basophils. IVIG directly induces the activation of IL-3-primed human basophils and secretion of IL-4, IL-6, and IL-8 by directly interacting with the basophil surface-bound IgE. This function was F(ab’)2-dependent and involves Syk activation. These results demonstrate a novel mechanism of human basophil activation by IVIG. The last part unravels the signaling pathways associated with IVIG-mediated anti-inflammatory effects specifically the Wnt/β-catenin pathway, which imparts tolerogenic properties to dendritic cells (DCs) and protection against experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). My data shows that IVIG activates β-catenin in human DC along with upregulation of Wnt 5a. Activation of β-catenin requires intact IgG and LRP5/6 co-receptors. However, despite the activation of β-catenin by IVIG, this pathway is dispensable for its anti-inflammatory actions both in vitro and in vivo in the EAE model

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Westman, Gabriel. "Herpesvirus Infection and Immunity in Neurocognitive Disorders." Doctoral thesis, Uppsala universitet, Infektionssjukdomar, 2015. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-247187.

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Abstract:

Herpesviruses have co-speciated with several vertebrate and invertebrate animals throughout the history of evolution. In the immunocompetent human host, primary infection is usually benign, whereafter the virus is brought into life-long latency. Viral reactivation can however cause severe disease in immunocompromised, and rarely also in immunocompetent, patients. The overall aim of this thesis was to study the immunologic effects of cytomegalovirus (CMV) and herpes simplex type 1 (HSV-1) infection in neurocognitive disorders. CMV is known to promote T-cell differentiation towards a more effector-oriented phenotype, similar to what is seen in the elderly. We have addressed the frequency of CMV-specific CD8+ T-cells in Alzheimer's disease (AD). Furthermore, we have investigated whether AD patients present with a different CMV-specific immune profile, overall CD8 phenotype or inflammatory cytokine response to anti-CD3/CD28 beads, CMV pp65 and amyloid beta. Subjects with AD presented with a lower proportion of CMV-specific CD8+ T-cells compared to non-demented (ND) controls, but no differences in overall CD8 differentiation were seen. Overall, AD subjects presented with a more pro-inflammatory peripheral blood mononuclear cell (PBMC) phenotype. When PBMCs were challenged with CD3/CD28-stimulation, CMV seropositive AD subjects presented with more IFN-γ release than both CMV seronegative AD subjects and CMV seropositive ND controls. For effective screening of humoral herpesvirus immunity, both in research and in clinical practice, efficient immunoassays are needed. We have addressed the methodology of multiplex herpesvirus immunoassays and related bioinformatics and investigated antibody levels in AD patients and ND controls. Subjects with AD presented with lower levels of human herpesvirus 6 (HHV-6) IgG. However, there was no difference in HHV-6 DNA levels in PBMCs between the groups. Herpes simplex encephalitis (HSE) is a devastating disease, where antiviral treatment has greatly decreased mortality but not eliminated the associated long-term neurocognitive morbidity. We have investigated the correlation between N-Methyl-D-Aspartate Receptor (NMDAR) autoimmunity and recovery of neurocognitive functions after HSE. Approximately one quarter of all HSE cases developed NMDAR autoantibodies within 3 months after onset of disease. Antibody development was associated with an impaired neurocognitive recovery during the two year follow-up and could become an important therapy guiding factor in the future.

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Leston, Araujo Itaua. "Facteurs environnementaux et génétiques déterminant la fonction thymique chez l'adulte sain." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2019. http://www.theses.fr/2019USPCC092.

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Abstract:

Le thymus est un organe clé de l’immunité, permettant tout au long de la vie la production de cellules T naïves. L'involution thymique associée à l'âge est liée à une réduction de la masse tissulaire et de la cellularité thymique, ainsi que la perte de la structure tissulaire et de l’architecture normale conduisant à une baisse de la production de cellules T naïfs. Cependant, à l'exception de l'âge, les facteurs environnementaux ou génétiques susceptibles de régir la fonction thymique chez l'Homme restent mal connus. Nous avons caractérisé la variabilité de la fonction thymique chez 1000 adultes sains stratifiés par l’âge et par sexe sur la cohorte Milieu Intérieur, en utilisant la quantification des cercles d’excision (TRECs) dans le sang périphérique comme marqueur de la thymopoïèse. L'âge et le sexe sont les seuls facteurs non héritables identifiés qui affectent la fonction thymique. Les quantités de TREC diminuent avec l'âge étant plus élevée chez les femmes de tout âge. Surtout, une étude d'association pangénomique a révélé l’existence d’un variant génétique (rs2204985) dans le locus TCRA-TCRD, situé entre les segments géniques DD2 et DD3, l’allèle G étant associé à un niveau de TRECs supérieur à l’allèle A. Cette association a été validée dans une cohorte de réplication (cohorte MARTHA). La transplantation de cellules souches hématopoïétiques humaines de foie fetal avec le génotype GG dans des souris immunodéficientes est associée à une thymopoïèse accrue avec des TRECs plus élevés, une augmentation du nombre de thymocytes et aussi une plus grande diversité du répertoire TCRA-TCRD. Notre approche d’immunologie des populations a mis en évidence un variant génétique influençant la thymopoïèse l’adulte sain. Ceci pourrait avoir un impact direct en médecine dite de précision dans les domaines du vieillissement et de la vaccination, en transplantation de cellules souches hématopoïétiques, ainsi qu’en autoimmunité. Ces travaux conduisent également à étudier plus en détail les mécanismes de la thymopoïèse précoce et des réarrangements du locus TCRATCRD
The thymus is a vital organ for homeostatic maintenance of the peripheral immune system. Age-associated thymic involution is associated with a reduction in tissue mass and thymic cellularity, loss of tissue structure and abnormal architecture leading to a decline in naïve T cell output. However, with the exception of age, the underlying parameters that govern thymic function in healthy humans remain to be defined. We characterized the variability of thymic function among 1000 age- and sex-stratified healthy adults of the Milieu Intérieur cohort, using quantification of TRECs in peripheral blood T cells as a surrogate marker of thymopoiesis. Age and sex were the only nonheritable factors identified that affect thymic function. TREC amounts decreased with age and were higher in women compared to men of all ages. In addition, a genome-wide association study revealed a common variant (rs2204985) within the T cell receptor TCRA-TCRD locus, between the DD2 and DD3 gene segments, which associated with TREC amounts. This association was validated in a replication cohort (MARTHA cohort). Strikingly, transplantation of human hematopoietic stem cells with the rs2204985 GG genotype into immunodeficient mice led to thymopoiesis with higher TRECs, increased thymocyte counts, and a higher TCR repertoire diversity. Our population immunology approach revealed a genetic locus that influences thymopoiesis in healthy children and adults, with potentially broad implications in precision medicine, especially in aging and vaccines, hematopoietic stem cell transplantation and autoimmunity. This study leads also to further study the precise mechanisms of TCRA-TCRD rearrangements at early steps of thymopoiesis

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Leignadier, Julie. "Étude de l’implication de la force du signal transmis par le récepteur des cellules T dans le développement et la survie des lymphocytes T mémoires." Thèse, 2010. http://hdl.handle.net/1866/4140.

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Abstract:

Suite à la rencontre d’un antigène (Ag) présenté à la surface des cellules présentatrice de l’Ag (CPA), les lymphocytes T naïfs, ayant un récepteur des cellules T (RCT) spécifique de l’Ag, vont proliférer et se différencier en LT effecteurs (1). Suite à l’élimination de l’Ag la majorité des LTe vont mourir par apoptose alors que les restants vont se différencier en LT mémoire (LTm) protégeant l’organisme à long terme. Les mécanismes qui permettent la différenciation des LTe en LTm sont encore inconnus. Pour comprendre comment les LTm CD8+ sont générés à partir des LTe, nous avons émis l’hypothèse que la densité de l’Ag présenté par les CPA peut avoir un impact sur la sélection des LT CD8+ répondant l’Ag à se différencier en LTm. De manière intéressante, nos résultats montrent qu’une immunisation avec des cellules dendritiques (DCs) exprimant un haut niveau de complexe CMH/peptide à sa surface permet le développement de LTm. À l’inverse, le développement des LTm est fortement réduit (10-20X) lorsque les souris sont immunisées avec des DCs exprimant un niveau faible de complexes CMH/peptide à leur surface. De plus, la quantité d’Ag n’a aucune influence ni sur l’expansion des LT CD8+ ni sur l’acquisition de leurs fonctions effectrices, mais affecte de manière critique la génération des LTm. Nos résultats suggèrent que le nombre de RCT engagé lors de la reconnaissance de l’Ag est important pour la formation des LTm. Pour cela nous avons observé par vidéo-microscopie le temps d’interaction entre des LTn et des DCs. Nos résultats montrent que le temps et la qualité de l’interaction sont dépendants de la densité d’Ag présenté par les DCs. Effectivement, nous observons une diminution dans le pourcentage de LT faisant une interaction prolongée avec les DCs quand le niveau d’Ag est faible. De plus, nous observons des variations de l’expression des facteurs de transcription clefs impliqués dans la différenciation des LTm tels qu’Eomes, Bcl-6 et Blimp-1. Par ailleurs, la densité d’Ag fait varier l’expression du Neuron-derived orphan nuclear receptor 1 (Nor-1). Nor-1 est impliqué dans la conversion de Bcl-2 en molécule pro-apoptotique et contribue à la mort par apoptose des LTe pendant la phase de contraction. Notre modèle propose que la densité de l’épitope contrôle la génération des CD8+ LTm. Une meilleure compréhension des mécanismes impliqués dans la génération des LTm permettra le développement de meilleures stratégies pour la génération de vaccin. Dans un second temps, nous avons évalué le rôle du signal RCT dans l’homéostasie des LTm. Pour ce faire, nous avons utilisé un modèle de souris transgénique pour le RCT dont son expression peut être modulée par un traitement à la tétracycline. Ce système nous a permis d’abolir l’expression du RCT à la surface des LTm. De manière intéressante, en absence de RCT exprimé, les LTm CD8+ peuvent survivre à long terme dans l’organisme et rester fonctionnels. De plus, une sous population des LTm CD4+ a la capacité de survivre sans RCT exprimé dans un hôte lymphopénique alors que l’autre sous population nécessite l’expression du RCT.
Following antigen (Ag) encounter presented at surface of antigen presenting cell (APC), naïve T lymphocytes, which express a T cell receptor (TCR) specific for Ag, undergo massive proliferation and differentiate into effector T cells (1). After elimination of the pathogen, most effector T cells die, while the remaining differenciates into memory T cells (LTm) which are responsible for long-term protection of the organism. The mechanism that promotes the differentiation of effectors T cells into memory T cells is still largely unknown. To understand how Tm cells are generated from effectors, we hypothesized that the density of antigen on the APC could have an impact on the selection of CD8+ T cell responders differentiating into memory. Very interestingly, our results show that immunization of mice with dendritic cells (DCs) expressing high levels of peptide-MHC complexes on their surface allow a strong development of LTm. In contrast, the development of memory T cells was strongly reduced (10-20X) when mice were immunized with DCs expressing two-fold less level of peptide-MHC complexes. In agreement with the results described above, the amount of Ag does not have any influence on T cell expansion and acquisition of effector functions, but critically affects memory T cell generation. Our data suggest that the numbers of TCR engaged in MHC/peptide recognition are important for the formation of memory T cells. To do that, we evaluated by time-lapse videomicroscopy the time of interaction between LTn and DCs. Effectively, we observed a significant reduction in the percentage of cells making prolonged interaction with DCs when the level of Ag is decreased. Moreover, we observed a modification in the expression of key transcription factors involved in the differentiation of Tm cells, such as Eomes, Bcl6 and Blimp-1. Further analysis reveals that the Ag density influences the expression of Neuron-derived orphan nuclear receptor 1 (Nor1). Nor-1 is involved in the conversion of Bcl-2 into a pro-apoptotic molecule and contributes to effector death by apoptosis during contraction phase. Our model proposes that density of Ag controls the generation of LTm. A better understanding of the role of TCR signals in the generation of LTm will help to develop better vaccination strategies. Second time, we have evaluated the role of TCR signals in Tm cell homeostasis. To do that, we have used a tetracycline-inducible expression system of the TCR in mice. This system allows us to abolish TCR expression on Tm cells. Interestingly, we show that the ablation of TCR expression did not influence the survival and functionnality of Ag-specific CD8+ LTm cells. Furthermore, our results show that a subset of CD4 Tm cells can survive in the absence of TCR expression in nonlymphopenic hosts while another subset requires the TCR expression to survive.

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Bonkoungou, Carole A. "Rôle de CD271 dans l'immunomodulation des cellules T." Thèse, 2018. http://hdl.handle.net/1866/20790.

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Gagne, Matthew James. "Cellular mechanisms that establish HIV-1 latency in CD4+ T cells and the potential for their manipulation as a therapeutic strategy." Thesis, 2019. https://hdl.handle.net/2144/36677.

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Abstract:

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) remains a significant public health concern due to the lack of a cure. In spite of anti-retroviral therapies, HIV-1 persists within infected cells as integrated transcriptionally silent proviruses. Re-activation after therapy interruption results in new HIV-1 replication. Attempts to clear this reservoir through the use of latency reversing agents by targeting cellular mechanisms that maintain HIV-1 in a latent state have been unsuccessful. In addition, subsets of latently infected cells exist within the reservoir that display differential capacities for provirus induction. In order to understand the nature of the reservoir and manipulate it therapeutically, more knowledge is needed regarding factors that bias a virus towards latency or replication at the time of infection. Because multiple mechanisms that regulate HIV-1 transcription, including chromatin remodeling, transcription factor activation and polymerase pausing, are regulated by the T cell receptor (TCR), I hypothesized that signaling at the time of infection determines proviral fate. I transduced Jurkat cell lines and primary CD4+ T cells with chimeric antigen receptors (CARs) that mimicked signaling from the TCR. These CARs spanned a 3-log range of binding affinities for their ligand, providing a tunable model. High levels of TCR stimulation during infection biased cells towards productive replication and the formation of an inducible latent reservoir. Examination of the mechanisms downstream from TCR signaling revealed that robust cellular activation led to a release of the repressor Negative Elongation Factor from the paused RNA Polymerase II, facilitating transcriptional elongation. Because signaling determined the presence of repressive factors, I sought to manipulate the balance between latency and expression through recruitment of repressors to the HIV-1 provirus using a nuclease-deficient CRISPR Associated Protein 9 fused to a Krüppel Associated Box Domain. I screened a pool of guide RNAs that mediated transcriptional repression of HIV-1. Our lab discovered that guides bound to the HIV-1 Long Terminal Repeat prevented viral re-activation in an integrated cell model of HIV-1 latency. The research presented here confirms my hypothesis that signals during infection have prolonged effects on latency reversal. I provide evidence that manipulation of these mechanisms represent therapeutic targets for cure efforts.

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Connolly, Audrey. "Rôle de la modulation de la phosphatidylsérine dans l’activation des cellules T." Thesis, 2020. http://hdl.handle.net/1866/25294.

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Abstract:

Les lymphocytes T orchestrent la réponse immunitaire adaptative afin de nous protéger contre les pathogènes. Les lymphocytes T sont dotés d’un récepteur de surface, le récepteur de cellules T (TCR), qui transmet le signal de stimulation vers l’intérieur de la cellule afin d’amorcer la cascade d’activation des cellules T. Le TCR est un complexe multimérique composé des dimères TCRαβ, CDεγ, CD3εδ et CD3ζζ. Les chaînes TCRαβ reconnaissent les antigènes pathogéniques tandis que les chaînes CD3 initient la cascade de signalisation des cellules T par la phosphorylation de leurs chaînes cytoplasmiques. Il est toujours incompris comment le signal d’activation du TCR est transmis des chaînes TCRαβ jusqu’aux domaines cytoplasmiques des chaînes CD3. Chez les lymphocytes T au repos, les chaînes CD3ε et CD3ζ sont associées au feuillet interne de la membrane plasmique (MP). Le domaine cytoplasmique de CD3ε et CD3ζ est riche en acides aminés basiques, ce qui permet leur association électrostatique avec les phospholipides acides de la MP. La phosphatidylsérine (PS) est le phospholipide acide le plus abondant de la MP. La PS est redistribuée exclusivement à la face cytoplasmique de la MP. Lors de l’activation des lymphocytes T, les chaînes CD3ε et CD3ζ des TCRs doivent se détacher de la PS pour leur phosphorylation. La dissociation membranaire d’un grand nombre de chaînes CD3 est essentielle à l’amplification de l’activation des lymphocytes T. Un mécanisme de dissociation des chaînes CD3ε et CD3ζ des TCRs proposé dans la littérature est par l’élévation intracellulaire de calcium. Un influx robuste de calcium est généré suivant la stimulation des cellules T. En plus d’être essentiel à l’activation efficace des cellules T, il a été proposé que le calcium neutralise les phospholipides acides de la MP afin de dissocier les chaînes CD3. Le calcium est également un co-facteur dans l’activité de plusieurs enzymes, comme la scramblase lipidique TMEM16F. TMEM16F redistribue la PS à la MP suivant l’élévation du calcium intracellulaire, ce qui résulte en la réduction de la PS au feuillet interne. Nous avons donc émis l’hypothèse que le calcium régule la dissociation des chaînes CD3 par l’activation de TMEM16F. Notre étude démontre que la redistribution calcium-dépendante de la PS par TMEM16F est essentielle à la dissociation membranaire de CD3ε dans la lignée de cellules T Jurkat. La réduction de l’expression de TMEM16F par ARN interférant (shTMEM16F) empêche la dissociation massive des chaînes CD3ε suivant la stimulation des cellules T. De plus, les cellules shTMEM16F démontrent une diminution de la phosphorylation des molécules de signalisation des cellules T. En contraste, l’expression d’une forme constitutivement active de TMEM16F augmente la redistribution de PS à la MP, la dissociation membranaire des chaînes CD3ε et la phosphorylation des molécules de signalisation. Notre étude démontre que la redistribution de la PS par la scramblase calcium-dépendante TMEM16F régule la dissociation membranaire des chaînes CD3 du TCR afin d’amplifier l’activation des cellules T. Enfin, nous avons confirmé les défauts d’activation dans des cellules T murines primaires exprimant shTMEM16F lors d’une réponse immunitaire. En conclusion, notre étude démontre le rôle de la régulation de la PS dans l’activation des cellules T. Nous avons démontré que nous pouvons modifier le niveau d’activation des cellules T en modulant la PS à la MP. Nos résultats ont ainsi plusieurs implications pour la conception et l’amélioration des immunothérapies basées sur les cellules T.
T lymphocytes protect us against pathogens by orchestrating the adaptive immune response. T lymphocytes possess a specific surface receptor, the T cell receptor (TCR), which conveys the stimulation signal towards the cytoplasm for the initiation of the T cell activation cascade. The TCR is a multimeric complex composed of the TCRαβ, CDεγ, CD3εδ and CD3ζζ dimers. The TCRαβ chains recognize the pathogenic antigens while the CD3 chains initiate the T cells signaling cascade through the phosphorylation of their cytoplasmic tails. It is not yet understood how the TCR activating signal is transmitted through the membrane from the TCRαβ chains towards the cytoplasmic tails of the CD3 chains. In resting T cells, the CD3ε and CD3ζ chains are associated to the inner leaflet of the plasma membrane (PM). The cytoplasmic tails of CD3ε and CD3ζ are rich in basic amino acids, which allow electrostatic association with acidic phospholipids at the PM. Phosphatidylserine (PS) is the most abundant acidic phospholipid and is exclusively distributed towards the cytoplasmic PM leaflet. During T cell activation, the CD3ε and CD3ζ cytoplasmic tails have to dissociate from PS for their phosphorylation. The membrane dissociation of a large number of CD3 chains is essential for the amplification of T cell activation. A mechanism of CD3ε and CD3ζ chain dissociation that has been proposed in the literature is through intracellular calcium elevation. A robust calcium influx is generated following T cell stimulation. In addition to its essential role in regulating T cell activation, it has been proposed that calcium ions neutralize the PM acidic phospholipids for CD3 chain dissociation. Calcium is also an essential cofactor for the activity of many enzymes, such as the phospholipid scramblase TMEM16F. TMEM16F redistributes PS at the PM following intracellular calcium mobilization, resulting in a reduction of inner leaflet PS. We propose that calcium regulates CD3 chain dissociation through TMEM16F activity. Our study demonstrates that calcium-dependent PS redistribution by TMEM16F is required for CD3ε membrane dissociation in the Jurkat T cell line. Reduction of TMEM16F expression by shRNA targeting (shTMEM16F) prevents massive CD3ε chain dissociation following 8 T cell stimulation. The shTMEM16F cells show a reduction in the phosphorylation of TCR-proximal signaling molecules. In contrast, expression of a constitutively active mutant of TMEM16F increases PS redistribution, CD3ε chain dissociation and phosphorylation of TCR-proximal signaling molecules. Our study demonstrates that PS redistribution by the calcium-dependent TMEM16F scramblase regulates CD3 chain dissociation for the amplification of T cell activation. In addition, we have confirmed T cell activation defects in shTMEM16F murine primary T cells during an immune response. In conclusion, our study demonstrates the role of PS regulation by TMEM16F in T cell activation. We showed that we could modify the level of T cell activation by modulating the concentration of PS at the inner leaflet of the PM. Our results thus have important implications for the development and improvement of immune receptor-based cancer immunotherapies.

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"Developing a CRISPR-Mediated Knockout TCR Human T Cell Line for Use in Cloning Antigen-Specific T Cell Receptors." Master's thesis, 2020. http://hdl.handle.net/2286/R.I.57440.

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Abstract:

abstract: Adoptive transfer of T cells engineered to express synthetic antigen-specific T cell receptors (TCRs) has provocative therapeutic applications for treating cancer. However, expressing these synthetic TCRs in a CD4+ T cell line is a challenge. The CD4+ Jurkat T cell line expresses endogenous TCRs that compete for space, accessory proteins, and proliferative signaling, and there is the potential for mixed dimer formation between the α and β chains of the endogenous receptor and that of the synthetic cancer-specific TCRs. To prevent hybridization between the receptors and to ensure the binding affinity measured with flow cytometry analysis is between the tetramer and the TCR construct, a CRISPR-Cas9 gene editing pipeline was developed. The guide RNAs (gRNAs) within the complex were designed to target the constant region of the α and β chains, as they are conserved between TCR clonotypes. To minimize further interference and confer cytotoxic capabilities, gRNAs were designed to target the CD4 coreceptor, and the CD8 coreceptor was delivered in a mammalian expression vector. Further, Golden Gate cloning methods were validated in integrating the gRNAs into a CRISPR-compatible mammalian expression vector. These constructs were transfected via electroporation into CD4+ Jurkat T cells to create a CD8+ knockout TCR Jurkat cell line for broadly applicable uses in T cell immunotherapies.
Dissertation/Thesis
Masters Thesis Biology 2020

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Dissertations / Theses on the topic 'Recepteur cellule t'

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