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Dissertations / Theses on the topic 'Récepteur des lymphocytes T (TCR)'
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Miloro, Giorgia. "Déterminer le rôle du récepteur de mort Fas/CD95 dans la co-stimulation des cellules T." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2020. http://www.theses.fr/2020COAZ6036.
Full textAbstract:
Fas (CD95 / TNFRSF6), un récepteur transmembranaire de type I de la superfamille des récepteurs au TNF (TNFR), est un activateur de mort cellulaire bien connu. Cependant, il a également été impliqué dans des fonctions de non-mort cellulaires, telles que la survie, la différenciation et la migration. Alors que la cascade moléculaire qui initie l'apoptose lors de l'engagement de Fas avec son ligand FasL est particulièrement bien décrite, les informations concernant les mécanismes moléculaires sous-tendants les voies non apoptotiques médiées par Fas sont rares.Comme indiqué par les manifestations d’auto-immunité et de lymphoprolifération chez les patients ALPS porteurs de mutations dans le récepteur ou dans son ligand, le système Fas / FasL joue un rôle majeur dans l'homéostasie des lymphocytes T et dans le contrôle de l'auto-immunité et du cancer. D'un côté, la mort médiée par Fas a été décrite comme critique pour (i) la suppression des lymphocytes autoréactifs, et donc dans le maintien de la tolérance périphérique; (ii) le contrôle du nombre de lymphocytes activés par des antigènes faibles lors d'infections par des pathogènes.De l'autre côté, certaines fonctions de non mort de Fas ont été décrites dans les cellules T, parmi lesquelles le rôle de Fas comme récepteur co-régulateur de l’activation du TCR. Malgré l'importance potentielle de ce rôle dans les stratégies immunothérapeutiques, seules quelques études controversées liées à cette implication ont été réalisées. En effet, alors que plusieurs études ont décrit Fas comme un récepteur costimulateur du TCR, d'autres ont défini une inhibition de l'activation des lymphocytes T lors d’une stimulation concomitante de Fas et du TCR. Dans ce contexte, l'objectif de mon projet de thèse consistait à disséquer moléculairement la co-signalisation Fas-TCR.En utilisant à la fois des cellules T primaires et des lignées cellulaires portant un TCR transgéniquespécifique, nous avons pu définir Fas comme un récepteur co-stimulateur. En exploitant les approches biochimiques ainsi que la cytométrie en flux et la microscopie, nous avons déchiffré la co-stimulation Fas-TCR à la fois au niveau fonctionnel et moléculaire. Premièrement, nous avons montré que la co-stimulation Fas-TCR se produit à la fois dans les cellules T naïves et les cellules T mémoire ainsi que dans les souspopulations CD4 + et CD8 +. Moléculairement, nous avons décrit que Fas renforce la signalisation TCR dès les étapes précoces, puisque la phosphorylation des premières protéines impliquées dans l'activation du TCR est augmentée. En outre, les formes membranaires et solubles de FasL sont capables d'initier le signal co-stimulateur de Fas. Enfin, nous avons pu exclure l'implication de FADD et Caspase-8, premiers acteurs de la signalisation Fas, dans la co-activation, et , de manière importante, l'implication du domaine de mort de Fas, suggérant le rôle d'un autre domaine de Fas . Décrire les mécanismes moléculaires et le contexte dans lequel la co-stimulation Fas-TCR se produit pourrait être d'une importance cruciale dans la compréhension de la physiopathologie de Fas dans les cellules T, mais également pour l’établissement de futures stratégies immunothérapeutiquesFas (CD95/TNFRSF6), a type-I transmembrane receptor of the tumor necrosis factor receptor (TNFR) superfamily, is a well-known cell death activator. However, it has been also implicated in non-cell death processes including cell survival, differentiation, migration. Whereas the molecular cascade that initiates apoptosis upon Fas engagement with its ligand FasL is particularly well described, the informations concerning the molecular mechanisms underlying the Fas mediated non-apoptotic pathways are sparse.As indicated by the induction of autoimmunity and lymphoproliferation in ALPS patients harboringmutations in either the receptor or its ligand, the Fas/FasL system plays a major role in T cell immune homeostasis and thus, in the control of autoimmunity and cancer. On one side, the Fas mediated death has been described critical for (i) the deletion of autoreactive lymphocytes, and thus in the maintenance of peripheral tolerance; (ii) the control of the number of lymphocytes activated by weak antigens during pathogen infections.On the other side, and beyond cell death induction, some Fas non-death pathways have been described in T cells, among which the role of Fas as co-regulatory receptor for the TCR during its activation. Despite the potential importance of this role in immunotherapeutic strategies, only few and controversial studies related to this involvement were done. Indeed, whereas several studies have described Fas as a TCR co-stimulatory receptor, others defined an inhibition of T cell activation by Fas-TCR concomitant stimulation. In this context, the aim of my PhD project consisted into molecularly dissect the Fas-TCR co-signaling.By using both primary T cells and cell lines bearing a specific transgenic TCR, we could define Fas as a costimulatory receptor. By exploiting biochemical approaches as well as flow cytometry and microscopy we could decipher the Fas-TCR crosstalk both at functional and molecular level. First, we show that Fas-TCR costimulation occurs in both naïve and in memory T cells as well as in both CD4+ and CD8+ T cell subpopulations.Molecularly, we could describe that Fas enhances the TCR signaling at membrane proximal level, since the phosphorylation of the first proteins involved in TCR activation is increased. Furthermore, both membrane-bound and soluble FasL are capable to initiate Fas co-stimulatory signal. Lastly, we could exclude the involvement of FADD and Caspase-8, first actors of Fas signaling, in the co-activation, and even more importantly, the involvement of the death domain of Fas cytoplasmic tail, unveiling the implication of another Fas receptor domain. To describe the molecular mechanisms and the context where Fas-TCR co-stimulation occurs might be of an outstanding importance in the comprehension of Fas physiopathology in T cells and for future studies that might involve its potential for immunotherapeutic strategies
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Semana, Gilbert. "Immunogénétique de la sclérose en plaques : rôle des gènes du CMH et du récepteur des lymphocytes T pour l'antigène (TCR)." Rennes 1, 1993. http://www.theses.fr/1993REN1B004.
Full text
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Guillet, Marina. "Analyse de la régulation du TCR dans différentes situations immunologiques." Nantes, 2002. http://www.theses.fr/2002NANT12VS.
Full textAbstract:
Grâce à l'utilisation d'une nouvelle méthode d'analyse de la régulation de la chaine β du TCR, nommée TcLandscape, nous avons observé que les cellules T nai͏̈ves stimulées in vitro dans des conditions de reconnaissance " directe " stricte présentaient un profil TCR particulier. En effet, la reconnaissance directe du CMH allogénique par des cellules T nai͏̈ves est associée à une forte accumulation des transcrits Vβ, sans altération de la distribution de taille du CDR3. . . . . Ces profils mettant en évidence des cellules T présentant une distribution altérée de la taille du CDR3 permettent d'identifier et de hiérarchiser des populations impliquées dans la réaction immunitaire. Une telle capacité s'avère particulièrement utile pour suivre dans le temps la réponse immune dans divers contextes. Un exemple ayant trait à des patients infectés par le VIH et vaccinés avec un mélange de lipopeptides est développéUsing a new global approach referred to as TcLandscape, we previously observed that direct -type pathway of allorecognition was associated with a strong accumulation of V~ transcript without skewing of CDR3 length distribution. Such a pattern was also observed in vivo in acute rejection of cardiac allografts and in acute delayed rejection of " accommodated " cardiac xenografis in rats. In contrast, T cell infiltrating cardiac tolerated allografis showed an altered pattern of TCR V~ chain that might represent the molecular signature of regulatory T cells. This pattern allowed to attribute quantitative difference in the response of different T cell families. This quantitative/qualitative approach allowed to follow over time the effect of an immune-based therapy in HIV-1 infected patients vaccinated with a mixture of lipopeptides
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Bernatchez, Chantale. "Signalisation du récepteur des lymphocytes T (TCR) dans le thymus : interactions entre différentes voies MAPK (mitogen activated protein kinase) et régulation par l'adénosine." Thesis, Université Laval, 2004. http://www.theses.ulaval.ca/2004/21803/21803.pdf.
Full textAbstract:
Les travaux présentés dans cette thèse ont été entrepris dans le but de mieux caractériser des événements influençant la signalisation du récepteur de surface des lymphocytes T (TCR) au cours de la sélection thymique, étape importante dans la maturation des lymphocytes T.
Le premier aspect étudié a été la modulation de l’activation de la MAPK (mitogen-activated protein kinase) ERK par le TCR, puisqu’il semble que l’intensité et la durée de l’activation de cette protéine contrôle l’issue de la sélection thymique soit la survie ou la mort de la cellule activée. Nous avons mis en évidence une interrelation entre l’activation de ERK et celle d’une autre protéine de la famille des MAPKs, p38. En utilisant un inhibiteur spécifique de l’activité p38 et également par la transduction d’une protéine dominante négative de p38 fusionnée au peptide TAT, permettant au complexe TAT-p38 d’entrer rapidement dans les cellules, nous avons observé que l’activation maximale de ERK par le TCR est dépendante de celle de p38.
En deuxième lieu nous avons observé que l’adénosine inhibe l’activation du TCR en interagissant avec ses récepteurs de surface. Nous avons tenté d’identifier le ou les récepteurs d’adénosine responsable(s) du phénomène. Notre étude a déterminé que l’activation de ERK par le TCR était diminuée en présence d’adénosine et d’inhibiteur d’adénosine déaminase (de façon à empêcher la dégradation d’adénosine dans le milieu). L’utilisation d’agonistes et d’antagonistes des différents récepteurs d’adénosine connus (A1, A2A, A2B et A3) chez des souris normales ou déficientes pour le récepteur A2A a permis d’impliquer le récepteur A2A et de suggérer l’implication du récepteur A2B dans l’inhibition de la signalisation du TCR par l’adénosine.
En conclusion, nos travaux ont apportés une meilleure connaissance des processus de régulation de l’activation de ERK par le TCR, une protéine déterminante dans le résultat final de la sélection thymique. De plus, il a été démontré que l’inhibition de la signalisation du TCR par l’adénosine est attribuable, du moins en partie, au récepteur A2A.
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Iken, Saci. "Immunothérapie cellulaire adoptive des maladies à prions par transfert de lymphocytes T CD4+ TCR transgéniques." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066725.
Full textAbstract:
Les maladies à prions sont des affections neurodégénératives létales provoquées par la conversion posttraductionnelle d’une protéine constitutive de l’hôte, la PrPC en un isoforme conformationnelle pathogène, la PrPSc. La perspective de traiter ces affections par l’immunothérapie, de même que la maladie d’Alzheimer, suscite un espoir légitime. Elle laisse aussi entrevoir des difficultés dues à ce que l’antigène cible, la PrPSc, est un constituant du soi, donc pas ou peu immunogène et que l’action se situe dans le SNC, site peu accessible aux agents de l’immunité et sous haut risque. Entre le transfert passif d’anticorps et la vaccination par la PrP, deux stratégies qui ont jusqu’à présent montré une efficacité relative, le transfert cellulaire adoptif apparaît comme une alternative intéressante. Les cellules persistent chez l’hôte, elles peuvent être réactivées, elles franchissent sous certaines conditions la barrière hématoméningée et peuvent recruter d’autres populations effectrices. Nous avons produit une souris Tg exprimant la chaîne d’un TCR anti-PrP. Malgré des réarrangements libres, cette souris possède un répertoire CD4+ très enrichi en précurseurs d’intérêt. Vues par immunoscope, les chaînes associées à la Tg sont quasi monoclonales. Une première étude a consisté à comprendre le devenir de ces lymphocytes anti-PrP après transfert dans un environnement PrP+ soumis à la tolérance. Ils sont capables de s’activer et de proliférer en réponse au peptide d’intérêt. Dans un second temps nous avons transféré ces CD4 Tg dans des souris déficientes en lymphocytes T infectées par une souche de prion. Ces transferts ont permis de retarder la maladie
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Majri, Sonia. "Regulation of CD4⁺ memory T cell homeostasis by STAT5 during TCR restimulation." Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCC139.
Full textAbstract:
Les facteurs de transcriptions Signal Transducer and Activator Transcription (STAT) sont essentiels pour la régulation de gènes impliqués dans plusieurs fonctions biologiques, y compris la réponse immunitaire. Nous avons étudié un patient ayant une nouvelle mutation ponctuelle hétérozygote dans le gène STAT5B. Les symptômes cliniques majeurs observés chez ce patient sont thrombocytopénie immune (TPI), lymphadenopathies, concentration élevée en anticorps IgM dans le sérum et hypergammaglobulinémie. Nous avons observé une accumulation anormale de lymphocytes T mémoires effecteurs (LME). Une analyse du transcriptome du patient a permis d'observer une sous-expression des gènes régulés par STAT5. De plus, nous avons révélé que les LME du patient étaient résistants à la mort induite par la restimulation du TCR. Ces résultats démontrent un rôle important et inattendu de STAT5 dans la régulation de l'homéostasie des lymphocytes T mémoires pendant la restimulation du TCRSignal transducer and activator transcription (STAT) proteins are essential transcription factors regulating gene expression involved in many biological functions especially immune responses. Here we report a patient with a de novo heterozygous missense mutation in STAT5B gene resulting in altered STAT5 transcriptional function. The patient presented with immune thrombocytopenia, lymphadenopathy, splenomegaly, an antibody class switching defect and granulocytosis with necrotizing granulomas. We found a specific dysregulation of CD4+ T cell subsets with an abnormal accumulation of effector memory T (TEM) cells. Transcriptome analysis in patient's T cells revealed a selective downregulation of the STAT5-dependent IL-2 signaling pathway. We found that TEM cells from the patient were resistant to in vitro TCR restimulation-induced cell death. These results demonstrate a key role of STAT5 in memory T cell homeostasis by regulating cell death during TCR restimulation
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Irles, Machuca Claudine L. "Étude sur la fonction de la protéine tyrosine phosphatase CD45 dans l'activation des lymphocytes T : évidences sur le rôle clé de l'ectodomaine dans la régulation du seuil d'activation." Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066184.
Full text
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Wurtz, Olivier. "Développement d'un nouveau modèle de souris transgéniques permettant un marquage génique des cellules Th1 et Th2, et rôle des signaux dérivés du TCR et des récepteurs aux cytokines dans la différenciation des cellules Th1." Aix-Marseille 2, 2002. http://www.theses.fr/2002AIX22041.
Full text
9
Leal, Sanchez Juana. "Rôle de la protéine Daxx dans la signalisation des récepteurs TCR et Fas, deux voies de signalisation principales de l'homéostasie lymphocytaire T." Nice, 2006. http://www.theses.fr/2006NICE4055.
Full textAbstract:
Daxx (Death Associated protein) est une protéine adaptatrice aux fonctions multiples impliquée dans différentes voies de signalisation. Au cours de ma thèse, j’ai étudié le rôle de Daxx dans l’homéostasie lymphocytaire T, en me focalisant sur son rôle dans les voies de signalisation des récepteurs Fas/CD95 et TCR-CD3. L’activation de Fas suite à l’interaction avec son ligand induit une mort cellulaire. Après activation de Fas, les protéines FADD et Caspase 8 sont recrutées au récepteur, donnant lieu au « Death-Inducing Signaling Complex » (DISC). Nous avons montré que, dans les cellules T, Daxx est également recruté à Fas après activation, ce qui favorise la formation du DISC. En effet, dans les cellules T où Daxx a été aboli (par la surexpression d’un dominant négatif de Daxx ou par la technique du siRNA), Daxx n’est plus recruté au récepteur, ce qui empêche la formation du DISC et donc inhibe la mort cellulaire. Par ailleurs, l’activation du complexe TCR-CD3 par l’antigène génère un signal qui induit la prolifération des cellules T. Le recrutement de la protéine ZAP70 au complexe TCR-CD3 et sa phosphorylation sont des étapes initiales de l’induction de ce signal prolifératif. Nous avons montré que Daxx est également recruté au complexe TCR-CD3, ce qui inhibe le recrutement de ZAP70 phosphorylé et donc la prolifération. En effet, dans les cellules T où Daxx a été aboli, Daxx n’est plus recruté au TCR-CD3, ce qui favorise l’association de ZAP70 phosphorylé. L’ensemble de ces résultats démontre que Daxx est un élément régulateur critique de l’homéostasie lymphocytaire TDaxx (Death Associated protein) is a multifunctional adaptor protein involved in several signalling pathways. During my PhD, I studied the role of Daxx in T cell homeostasis, focussing on its role in Fas and TCR-CD3 signalling pathways. The activation of Fas pathway, by the engagement of the receptor Fas by its ligand, induces cell death. After activation, the proteins Fadd and Caspase 8 are recruited to Fas, forming the Death Inducing Signalling Complex (DISC). We have shown that, in T cells, Daxx is also recruited to Fas after activation, enhancing the DISC formation. In fact, in T cells in which Daxx has been abolished (by the overexpressing a dominant negative form of Daxx (Daxx-DN) or by siRNA technique) Fas-induced cell death is inhibited because of the impaired Daxx recruitment to the receptor, preventing DISC formation. On the other hand, the activation of TCR-CD3 signalling pathway by the antigen in T cells generates a signal inducing proliferation. The recruitment of the protein ZAP70 to the TCR-CD3 complex and its phosphorylation are initial steps of this pathway. We have shown that Daxx is also recruited to TCR-CD3 complex, what prevents the recruitment of phosphorylated ZAP70 to the signalling complex and so inhibits TCR-induced proliferation. Indeed, we have observed, in vivo and in vitro, that TCR-induced proliferation is increased in T cells in which Daxx has been abolished because of the impaired recruitment of Daxx to the TCR-CD3 complex, enhancing phosphorylated ZAP70 recruitment. All together, these results show that Daxx is a critical regulator element in T cell homeostasis
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Dong, Shen. "Caractérisation de deux nouveaux mécanismes de régulation de l'initiation du signal induit par le récepteur pour l'antigène du lymphocyte T." Paris 6, 2009. http://www.theses.fr/2009PA066163.
Full textAbstract:
Mes travaux montrent que la stimulation du récepteur pour l’antigène du lymphocyte T induit la phosphorylation sur tyrosine et le recrutement à la protéine d’échafaudage LAT de l’adaptateur inhibiteur Dok-2. Ce dernier et son homologue Dok-1 sont alors caractérisés comme modulateurs du signal précoce induit par l’engagement du TCR et comme régulateurs du seuil d’activation du lymphocyte T. Par ailleurs, j’ai montré que les lymphocytes T CD4+ naïfs présentent une activation basale de Lck et Fyn qui n’est pas augmentée après stimulation du TCR. L’inhibition stable de l’expression de LAT par interférence d’ARN messagers diminue l’activation de Lck et Fyn et la phosphorylation des substrats directs de Lck. Ces défauts de signalisation sont corrigés lorsque le TCR est engagé fortement. Ainsi, mes données indiquent que l’engagement du TCR entraîne la stabilisation du pool de Lck actif auprès de ses substrats de façon dépendante de LAT et de la force de stimulation.
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Briant, Laurence. "Immunogénétique du diabète insulino-dépendant et de la sclérose en plaques : marqueurs HLA-DQ, des gènes des "Tumor Necrosis Factor" (TNF) et des récepteurs des lymphocytes T pour l'antigène (TCR)." Toulouse 3, 1991. http://www.theses.fr/1991TOU30278.
Full textAbstract:
Le diabete insulino-dependant (did) et la sclerose en plaques (sep) sont des maladies auto-immunitaires a determinisme multigenique. Un des loci de susceptibilite est localise dans la region des genes hla de classe ii du complexe majeur d'histocompatibilite (cmh). Nos travaux sont bases sur l'etude des polymorphismes des genes hla-dq, de marqueurs non-hla du cmh: marqueurs des genes du tumor necrosis factor (tnf) et des genes beta des recepteurs des lymphocytes t pour l'antigene (tcr). Ils ont permis de preciser la composante genetique du did et de la sep. L'etude des polymorphismes des genes dqa et dqb dans des familles multicas de did a confirme le role determinant du locus dqb et de l'acide amine en position 57 de la chaine dq beta dans la susceptibilite au did, sans toutefois demontrer la contribution des genes dqa dans la composante genetique de cette maladie. L'analyse de trois marqueurs polymorphes de la region des genes tnf montre l'association de certains alleles avec le did. Finalement l'etude des polymorphismes genomiques des genes des tcr chez des patients et des paires de jumeaux atteints de sclerose en plaques a montre qu'un gene de susceptibilite pour la sep pourrait etre situe sur le chromosome 7, a proximite du locus codant la chaine beta du tcr
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Sawicka, Anna. "Aspects biophysiques de l'activation des cellules T." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCB079.
Full textAbstract:
Les cellules T jouent différents rôles dans la réponse immunitaire adaptative : elles stimulent les cellules B à produire les anticorps ; elles sécrètent les cytokines qui dirigent l'action des autres cellules immunitaires ; elles tuent les cellules du corps infectées ou porteuses de mutations ; elles assurent la mémoire immunitaire, permettant de répondre plus vite en cas de nouvelle infection avec le même pathogène. Toutes les cellules T s'activent quand elles reconnaissent leur antigène spécifique : un peptide court présenté par le complexe majeur d'histocompatibilité exprimé à la surface de la cellule présentatrice d'antigène. La liaison du récepteur de cellules T (TCR, ang. T cell receptor) à cet antigène initie la cascade de transduction de signal dans la cellule T ; ce processus mène aux modifications du cytosquelette, aux changements dans l'expression des gènes, et à la prolifération des cellules T. Récemment, il a été découvert que quand les cellules T reconnaissent l'antigène, elles poussent et tirent sur les cellules présentatrices d'antigène. Même si ces forces mécaniques ont été l'objet de recherches intenses pendant ces dernières années, leur nature et leur rôle restent toujours largement méconnus. La caractérisation des forces générées par les cellules T était l'objectif de ma recherche doctorale. J'ai mesuré les forces avec la technique appelée "micropipette force probe", qui utilise une micropipette en verre comme un cantilever de rigidité connue. Cette technique a permis de mesurer la force maximale et la vitesse de génération des forces, et, en même temps, de capturer l'image de la morphologie des cellules de profil. J'ai trouvé que les cellules T humaines, primaires, au repos, CD4+, activées avec les anticorps contre les molécules CD3 et CD28, suivent une succession de changements de morphologie, pendant laquelle elles génèrent des forces. Cette succession était qualitativement identique pour les lymphoblastes CD4+, un modèle des cellules T activées. Ensuite, j'ai étudié cette succession d'événements dans le contexte biologique de l'activation des cellules T. Les cellules T interagissent avec les cellules présentatrices d'antigène qui ont des propriétés mécaniques différentes. J'ai donc changé la rigidité de la micropipette utilisée comme sonde, afin de mesurer la réponse des cellules T à des cibles de rigidité différentes. J'ai trouvé que les forces générées par les cellules T sont mécanosensibles, car la vitesse de génération des forces de poussée et de traction changeaient avec la rigidité de la micropipette. Ensuite, j'ai étudié les conditions nécessaires à la génération des forces. Les forces étaient liées au processus d'activation, car l'attachement des anticorps aux molécules CD45 n'a pas conduit à la génération des forces. Pour étudier la contribution aux forces des différents acteurs du cytosquelette d'actine, j'ai utilisé différents inhibiteurs du remaniement du cytosquelette. L'influence la plus grande sur la génération de forces a été trouvée avec SMIFH2, un inhibiteur des formines. Ces protéines jouent donc probablement un rôle important dans le processus d'activation des cellules T. La recherche décrite dans cette thèse contribue à la compréhension des aspects biophysiques de l'activation des cellules T. Elle montre que la génération des forces est un des événements les plus précoces de l'activation des lymphocytes T, et qu'elle est modifiée par la rigidité de la cible des cellules T. Dans le futur, la recherche liant la génération des forces avec la cascade biochimique de transduction de signal induit par le TCR sera nécessaire pour décrire la base de la mécanosensibilité des cellules T. Cette recherche sera complétée par l'étude des fonctions des forces dans le processus de l'activation des lymphocytes T en conditions normales et pathologiquesT cells play many roles in the adaptive immune response: they stimulate B cells for the production of antibodies; they secrete cytokines, which guide the action of other immune cells; they kill infected or mutated cells of the body; they assure the immune memory, staying ready to respond upon another infection with the same pathogen. All T cells activate when they recognise their specific antigen: a short peptide presented on the major histocompatibility complex on the surface of the antigen-presenting cell. The binding of the T cell receptor (TCR) to this antigen triggers a cascade of signalling events inside the T cell, resulting in cytoskeleton modifications, changes in the expression levels of different genes, and proliferation. One of the early responses of T cells to the antigen recognition is force generation. T cells, upon TCR triggering, push and pull on the antigen-presenting cell. Although the body of research concerning these forces has been recently growing, their nature and role is still largely unknown. The goal of my PhD project was to characterise the pushing and pulling forces generated by T cells. I measured the forces with the micropipette force probe, which uses a glass micropipette as a cantilever of known bending stiffness. The technique allowed to measure the maximal force generated by T cells and the speed at which T cells generated forces (force rate), and, simultaneously, to track the morphology of cells as seen from the side. These experiments revealed that human primary resting CD4+ T cells, when activated with antibodies against CD3 and CD28 molecules, followed a sequence of morphology changes and force generation. This sequence was qualitatively the same for CD4+ T lymphoblasts, a model of effector T cells. The sequence was then studied in the biological context of T cell activation. As different antigen-presenting cells, with which T cells interact in the body, were shown to have different mechanical properties, I varied the bending stiffness of the micropipette probe, to measure the response of T cells to targets of different stiffness. The force rate changed with this bending stiffness, indicating that force generation in T cell activation is a mechanosensitive process. Next, the conditions necessary for force generation were investigated. Binding to antibodies against CD45 molecule did not result in force generation, suggesting that force generation is specific to TCR triggering. To dissect the contribution of the different components of the actin cytoskeleton to the process, T cells were treated with different cytoskeleton inhibitors. The largest influence was found with SMIFH2, an inhibitor of formins, suggesting an important role for formins in force generation in early T cell activation. This work contributes to the understanding of the biophysical aspects of T cell activation. It shows that force generation is incorporated into the early events of the activation process, and is directly influenced by the stiffness of the T cell target. Further work is needed to link the force generation with the signalling pathways induced by TCR triggering, to explain the molecular basis of T cell mechanosensitivity. This link will open the possibility of functional studies of forces in T cell activation, to answer the open questions regarding the function of T cells in physiology and pathology of the immune system
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Soula-Rothhut, Mahdhia. "Etude de la phosphorylation de la P56Ick et détection des sites de phosphorylation par les voies de signalisation CD4 et TcR/CD3 dans les cellules T." Paris 7, 1993. http://www.theses.fr/1993PA077343.
Full textAbstract:
Dans cette thèse nous avons analysé les mécanismes de phosphorylation de la p56Ick et son activité kinase après stimulation des cellules Jurkat par des anticorps anti-CD4, les gp160 ou gp 120 du VIH et des anticorps anti-TcR/CD3. Nous avons essayé de rapprocher ce phénomène avec un modèle d'adhésion nécessitant la voie du CD4 et un modèle de sécrétion de cytokines (IL-2) par la stimulation du TcR/CD3. Ces deux voies de signalisation n'induisent pas le même effet cellulaire (IPs, Ca⁺⁺ prolifération), mais le point commun réside dans la phosphorylation de la p56Ick. Nous avons démontré que les lymphocytes T stimules par l'anticorps anti-cd4 ou la gp160 et ou la gp120 du VIH, augmentent l'activité kinase de p56Ick et augmentent la phosphorylation des sites tyrosine et serine. Cette augmentation s'effectue très rapidement dès les premières minutes qui suivent la stimulation sans changement de poids moléculaire de la p56Ick. L'utilisation d'un modèle d'adhésion montre que la voie CD4 induit un signal négatif qui nécessite l'hyperphosphorylation de la p56Ick. Une stimulation par la voie TcR/CD3 induit une modification des sites de phosphorylation sur serine et tyrosine associée avec un changement du poids moléculaire de la p56Ick. Par l'utilisation d'un inhibiteur de PKC nous avons analysé la forme de haut poids moléculaire et détermine les sites impliques dans la modification de l'état de phosphorylation de la molécule induit par la stimulation via CD3 et par le PMA. Ces deux sites de phosphorylation sont différents mais situes dans le même domaine SH2 de la kinase.
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Tongiani, Stefania. "Etude de la population lymphocytaire de patients atteints d'hépatite virale C chronique." Université Joseph Fourier (Grenoble), 2007. http://www.theses.fr/2007GRE10049.
Full textAbstract:
Notre étude porte sur l'évaluation des lymphocytes T intra hépatiques (UH), spécifique ou non du virus de l'hépatite C (YHC), obtenus à partir des biopsies hépatiques des patients atteints d'hépatite C chronique (HCC). Yu le nombre des UH extraits d'une biopsie insuffisante pour permettre une analyse fonctionnelle, nous avons mis en place un protocole expérimental qui n'implique aucune stimulation antigénique. La diversité de récepteurs à l'antigène (TCR) est étudiée par analyse moléculaire de la région COR3 avec la technique d'analyse par RT-PCR et par immunotluorescence pour les récepteurs des V[ Bêta] β. Il n'existe pas une expansion préférentielle d'une population V[ Bêta] β parmi les 24 familles V[ Bêta] β étudiées. L'étude montre que la réponse intra hépatique au cours de l'infection est poly clonaI. L'utilisation de la technique des tétramères CMH classe 1 tluorescents chargés avec des peptides YHC (core 35, NS3, NS5), nous a permis d'évaluer en cytométrie la fréquence d'une population de L T C08 spécifiques. La stimulation chronique peut induire l'expression sur les cellules L T C08+ des récepteurs inhibiteurs NKRs (naturel killer) susceptible d'avoir une fonction soit effectrice ou inhibitrice. L'expression de KIRs est absente sur les cellules vierges, mais est exprimée sur les cellules mémoire régulant négativement les fonctions effectrices, tandis que l'hétero dimer inhibiteur C094/NKG2A est exprimé sur les cellules effectrices/mémoire et dépend du TCR. Nous avons observé une corrélation positive entre la fréquence intra hépatiques des cellules L T CD8+ exprimant NKG2A et le degré de sévérité ces lésions hépatiquesOur study was the evaluation of the lymphocytes T will intra hepatic (UH) specific or no of the virus ofhepatitis C (YHC) obtained starting from the hepatic biopsies of the patients infected bychronic hepatitis C (HCC). Considering the number of the UH extracted from an insufficient biopsyto allow a functional analysis, we set up an experimental protocol which does not imply any specific antigenic stimulation. The diversity ofT cell receptor(TCR) was studied by molecular analysis of area COR3 with the technique of analysis by RT-PCR and immunotluorescence for the receptor Y beta. Ooes not exist a preferential expansion of a population Yb respect with un' other among the 24 families Yb studitrl. The study shows that the answer will intra hepatic during the infection is poly clonally. The use of the technique of the tetramers classifies 1 tluorescent CMH class 1 charged with peptides YHC (core 35, NS3, NS5), us made it possible to evaluate in cytometry of tlow the frequency of a population of specific L T COS Chronic stimulation can coat the expression on cells L T C08+ of the inhibiting receivers NKRs (natural killer) likely is functions effector that inhibiting the expression of KIRs misses on the virgin cells, but is expressed on the cells memory controlling theeffectors functions negatively, while the hétero dimer inhibiting C094/NKG2A is expressedon the cells effector/memory and depends on the TCR distribution L T C08 expressing NKG2A (receptor ofmolecules HLA-E) and molecules of the group KIR (CD I58a and b) which bind molecules HLA-C. We observed a positive correlation between the frequency intra- hepatic of cells TC08+ expressing NKG2A and the degree of severity of the lesions
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Oruganti, Sreenivasa Rao. "Regulation of activation of NF-κB by Calmodulin in T-lymphocytes." Doctoral thesis, Umeå universitet, Institutionen för molekylärbiologi (Medicinska fakulteten), 2011. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:umu:diva-46561.
Full textAbstract:
Nuclear factor kappa B (NF-kB) is a widely expressed family of transcription factors that are involved in a diverse number of processes. These include inflammation or differentiation, survival or apoptosis, and proliferation or cell cycle arrest. NF-kB is usually associated with inhibitory kB proteins (IkB), which mask the nuclear localisation sequence (NLS) of NF-kB and renders it in the cytoplasm. Various stimuli result in the activation of the I kappa B kinase (IKK) protein complex, which phosphorylates IκB proteins and thereby marks them for degradation by the ubiquitin-proteasome pathway. Thereby NF-kB enters the nucleus and acts on its target genes. The study of T- and B-lymphocyte antigen receptor signalling to NF-kB is a field of intense investigation, with much attention being focused on the molecular scaffolding proteins Carma1, Bcl10 and MALT1 and their post-translational modifications. These have been shown to be crucial for the organization of the immunological synapse structure under the activated receptor, to which IKK is recruited and becomes activated, which subsequently leads to the activation of NF-kB. T cell receptor (TCR) activation results in a rapid increase in the intracellular Ca2+ level and NF-kB activation is known to be regulated by those increases, but the mechanisms have remained unclear. Calmodulin (CaM) is a calcium sensory protein that responds to increases in intracellular Ca2+ levels. When CaM binds Ca2+ ions, it leads to structural changes that directly as well as indirectly, through CaM dependent kinases (CaMKs), phosphatases and other enzymes, alters a variety of cellular processes, among them transcriptional regulation. Here CaM is shown to interact directly with Bcl10 in a Ca2+ dependent manner. Increases in the intracellular Ca2+ level are shown to induce the proximity of Bcl10 and CaM in vivo. Carma1 associates with Bcl10 through a CARD-CARD domain interaction that is known to be crucial for TCR signalling to NF-kB. The interaction of CaM with Bcl10 was mapped to the CARD domain and was shown to be a negative regulator for the Bcl10-Carma1 interaction. Inhibition of the CaM interaction by a point mutation within the CaM binding site of Bcl10 results in decreased binding of CaM to Bcl10 in vivo, as well as an increased ability of Bcl10 to induce NF-kB transcriptional activity, which is further enhanced by TCR activating stimuli. NF-kB activation is also shown here to be regulated by CaM indirectly through actions of CaMKII. The CaMKII is recruited to the immunological synapse where it interacts with Bcl10 in an inducible fashion and phosphorylates Bcl10. Phosphorylations of Bcl10 by CaMKII are shown to be important for the ability of Bcl10 to induce NF-κB transcriptional activity. Upon mutation of its most important CaMKII site, Bcl10 fails to activate an NF-kB reporter and an NF-kB target gene (IL-2). This mutated Bcl10 also fails to induce activating phosphorylations of IKKa/b and the kinase JNK2 but not JNK1. Furthermore, phosphorylation of Bcl10 by CaMKII regulates the interactions within the important Carma1, Bcl10, Malt1 signaling complex and the essential signal induced ubiquitinations of Bcl10 and IKKg. Phosphorylation of IKK by TAK1 is also regulated by CaMKII, and serine 82 is a putative CaMKII target site of TAK1 that appears to be important for IκBα degradation. In summary, this thesis explores that not only NF-kB but also CaM is a double-edged sword, since the multi-functional NF-kB family of transcription factors is regulated by CaM both negatively and positively.
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Turqueti, Neves Adriana. "Recognition of renal cell carcinoma by CD8+ and CD4+ TCR-engineered T lymphocytes." Diss., lmu, 2011. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:19-128858.
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Soubiès, Sébastien Boullier Séverine. "Étude des mécanismes moléculaires concourant à la mobilité des TCR en surface des lymphocytes T." [S.l.] : [s.n.], 2008. http://oatao.univ-toulouse.fr/2077/1/debouch_2077.pdf.
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Laplagne, Chloé. "Activation des lymphocytes T gamma delta dans les cancers." Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30109.
Full textAbstract:
Les lymphocytes T (LT) gamma delta présentent une hétérogénéité structurelle et fonctionnelle et forment un pont entre l'immunité innée et adaptative. Ils comprennent notamment les LT Vgamma9Vdelta2, qui représentent 1 à 5% des LT circulants, proportion qui peut rapidement croître en réponse à un stress (inflammation, infection ou cancer). Les LT Vgamma9Vdelta2 sont très cytotoxiques et produisent de nombreuses cytokines pro-inflammatoires. Ces fonctions sont permises suite à la reconnaissance d'antigènes non peptidiques par leur TCR, appelés phosphoantigènes (PAgs), de façon indépendante des molécules du CMH. Différentes études ont montré que les LT Vgamma9Vdelta2 sont capables de tuer un large panel de cellules tumorales provenant de cancers solides et hématologiques, mais cet effet est limité par l'apparition d'anergie. Leur activation est médiée par différentes protéines, notamment les butyrophilines (BTN) BTN2A1 et BTN3A1, formant un complexe autour du TCR Vgamma9Vdelta2 et permettant la reconnaissance du PAg. D'autres acteurs interviennent également pour réguler ce mécanisme comme le transporteur ABCA-1 ou encore la protéine RhoB. Dès lors que le rôle de RhoB dans l'activation des LT Vgamma9Vdelta2 par des cancers solides n'est pas clairement défini, le premier objectif de mes travaux de thèse visait à préciser davantage ce mécanisme, grâce à un modèle in vitro de cancer du poumon. Par ailleurs, les LT Vgamma9Vdelta2 présentent la faculté originale mais peu étudiée de pouvoir s'activer en l'absence de cellule cible. Ainsi, l'objectif de la seconde partie de mes travaux de thèse était de caractériser cette "self-activation". L'ensemble de ces résultats soulignent l'importance de la compréhension du mécanisme complexe d'activation des LT Vgamma9Vdelta2 pour améliorer leur efficacité en cliniqueGamma delta T lymphocytes (TL) exhibit structural and functional heterogeneity and form a bridge between innate and adaptive immunity. They include in particular Vgamma9Vdelta2 TL, which represent 1 to 5% of circulating TL, a proportion which can quickly increase in response to stress (inflammation, infection or cancer). Vgamma9Vdelta2 TL are very cytotoxic and produce many proinflammatory cytokines. These functions are enabled following the recognition of non peptide antigens by their TCR, called phosphoantigens (PAgs), independently of the MHC molecules. Various studies have shown that Vgamma9Vdelta2 TL are capable of killing a large panel of tumor cells from solid and hematological cancers, but this effect is limited by the appearance of anergy. Their activation is mediated by various proteins, in particular the butyrophilins (BTN) BTN2A1 and BTN3A1, forming a complex around the TCR Vgamma9Vdelta2 and allowing recognition of PAg. Other actors also intervene to regulate this mechanism; like the ABCA-1 transporter or RhoB protein. Since the role of RhoB during the activation of Vgamma9Vdelta2 TL by solid cancers is not clearly defined, the first objective of my thesis was to further clarify this mechanism, using an in vitro model of lung cancer. In addition, the Vgamma9Vdelta2 TL have the original but little studied ability to be activated in the absence of target cell. Thus, the objective of the second part of my thesis was to characterize this "self activation". All of these results underline the importance of understanding the complex mechanism of activation of LT Vgamma9Vdelta2 to improve their efficacy in the clinic
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Huang, Eugene Y. "The effect of enforced Notch signaling on TCR beta, positive, and negative selection of developing T cells /." Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2003. http://hdl.handle.net/1773/8350.
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Rivera, Reyes Brenda Mariola. "Regulation of the TCR signaling pathway." Connect to text online, 2006. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc%5Fnum=case1132588714.
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Smelty, Philippe. "Caractérisation de la chaîne pré-TCR alpha, constituant du pré-TCR, chez les vertébrés non-mammaliens : étude comparative." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066740.
Full textAbstract:
Chez les mammifères, le développement intrathymique des lymphocytes T est conditionné par l’expression d’une molécule clé appelée chaîne pré-TCR alpha (pTa). Celle-ci forme un hétérodimère avec la chaîne TCR pour constituer à la surface des thymocytes le pré-TCR, indispensable à la poursuite de la maturation des lymphocytes T. La fonction du pré-TCR serait ligand indépendant et se déroulerait par homo-oligomérisation du pré-TCR médiée par la pTa. La pTa n’avait été caractérisée que chez 3 espèces mammifères. Mon travail a permis d’identifier la pTa chez toutes les classes de mammifères, mais également pour la première fois, chez les vertébrés non mammaliens, les oiseaux et les reptiles (sauropsidés). L’étude des profils d’expression de la pT aviaire, établie par hybridation in situ et RT-PCR sur cellules triées suggèrent que la fonction de la pT dans le développement des lymphocytes est identique chez les espèces non mammaliennes et mammaliennes. Cependant, les comparaisons des séquences des pTa ont révélé que certains résidus, indispensables pour la fonction de la pTa chez la souris et l’homme, tels que ceux responsables de l’homo-oligomérisation du pré-TCR ou tels que les prolines intracellulaires liées à la transduction du signal, sont localisés différemment ou sont absents au niveau des pTa de sauropsidés et de certaines classes de mammifères. L’hypothèse développée à la suite de ce travail défend ainsi l’idée d’une fonction ancestrale de la pTa bornée à l’adressage du complexe pré-TCR à la membrane, fonction qui s’est complexifiée au cours de l’évolution afin de permettre une plus grande efficacité et une meilleure régulation des signaux de transduction
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Wei, Cheng-Hong. "Regulation of T cell activation and death by the affinity of TCR for peptide/MHC complexes /." Stockholm : Karolinska Univ. Press, 2002. http://diss.kib.ki.se/2002/91-7349-239-6.
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Mancini, Stéphane. "Différenciation des lymphocytes T et recombinaison des gènes du TCR : quel rôle pour le pré-TCR dans la régulation du réarrangement des gènes codant pour la chaîne [alpha] du TCR ?" Université Joseph Fourier (Grenoble), 2000. http://www.theses.fr/2000GRE10116.
Full textAbstract:
Les genes codant pour les chaines alpha et beta du recepteur a l'antigene des cellules t (tcr) sont rearranges sequentiellement durant la differenciation intrathymique des lymphocytes t, caracterisee par l'expression de plusieurs molecules membranaires, dont cd4 et cd8. Le rearrangement des genes tcrb, codant pour la chaine beta, intervient durant le stade cd4 8 (dn), et permet l'expression d'un pre-tcr comprenant la chaine beta, ptalpha et le complexe cd3, responsable de la transduction des signaux d'activation. L'assemblage du pre-tcr induit la maturation des thymocytes jusqu'au stade cd4 +8 + (dp). Il est generalement admis que les genes tcra, codant pour la chaine alpha, sont rearranges a la transition dn/dp, apres signalisation par le pre-tcr. Ma these a pour objet l'etude de la regulation des rearrangements des genes tcra, et du role du pre-tcr dans ce processus. L'inactivation du gene codant pour ptalpha entraine chez la souris un blocage partiel de la differenciation des lymphocytes t au stade dn. Nous avons montre que le repertoire des chaines tcralpha exprimees chez ces animaux est essentiellement normal. Il semble donc que le pre-tcr ne soit pas requis pour le rearrangement et l'expression des genes tcra, et que ces evenements peuvent potentiellement se produire au stade dn. Nous avons poursuivi ces travaux en analysant le statut des genes tcra dans d'autres modeles de souris genetiquement modifiees ou la differenciation des thymocytes est bloquee au stade dn. Nous avons pu formellement demontrer, pour la premiere fois, la presence de rearrangements tcra des le stade dn, en absence de signaux issus de cd3, du pre-tcr ou du tcr. Enfin, nous avons etudie la reponse a l'irradiation des thymocytes de souris n'exprimant pas cd3. L'irradiation conduit a l'induction des rearrangements tcra et a la reprise de la differenciation a la fois par des voies p53 dependantes et independantes.
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Larbi, Anis. "Rôle des radeaux lipidiques dans l'immunosénescence des sous-populations de lymphocytes T humains." Thèse, Université de Sherbrooke, 2005. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4225.
Full textAbstract:
Le vieillissement s'accompagne d'un déclin de l'immunité, c'est l'immunosénéscence. Les lymphocytes sont des cibles du vieillissement et lors de la stimulation de leur récepteur (TCR) la production d'interleukine-2 est déficiente. Pour expliquer la perte de fonctionnalité des lymphocytes T avec le vieillissement humain, plusieurs hypothèses sont mises en avant dont celle suggérant un défaut de transmission du signal intracellulaire à partir du TCR. Plusieurs études ont démontré que des défauts de signalisation sont effectivement présents dans les voies de signalisation du TCR. La plupart des voies de signalisation sont affectées et il est possible qu'une défaillance en amont puisse toutes les expliquer. Cependant, aucune explication ne pouvait être apportée jusqu'à la découverte de l'existence des radeaux lipidiques membranaires. Ces radeaux lipidiques enrichis en cholestérol et molécules facilitent la signalisation intracellulaire en permettant la formation du signalosome. Ces structures sont initiatrices de la signalisation du TCR. Nous avons émis l'hypothèse que ce sont des défaillances dans les fonctions des radeaux lipidiques qui expliqueraient les altérations en aval de la membrane. Nous avons démontré que les cellules T quiescentes de la personne âgée (+ 65 ans) ont une quantité de cholestérol deux fois plus importante dans les radeaux lipidiques. Ceci s'accompagne d'une diminution de la fluidité. La modulation du contenu en cholestérol par la cyclodextrine permet de contrôler la fluidité membranaire. Cependant, la cyclodextrine a d'autres effets et n'est pas préconisée pour moduler les fonctions des lymphocytes T. De plus, LAT est dans un état de phosphorylation significativement supérieur avec le vieillissement. En ce qui concerne Lck, la molécule est hyper-phosphorylée dans les radeaux lipidiques. Cet état d'activation est relié au phénomène d'Inflamm-Aging. Lors de la stimulation du TCR, le recrutement des molécules de signalisation est diminué par rapport aux sujets jeunes (18-25 ans). La phosphorylation de LAT et Lck est significativement diminuée dans les radeaux lipidiques des lymphocytes CD4[indice supérieur +] activés de personnes âgées. La signalisation issue du CD28 est altérée dans ces cellules (Akt). La mesure de la quantité de CD28 dans les radeaux lipidiques est significativement supérieure dans les cellules CD8 [indice supérieur +] comparativement aux cellules CD4[indice supérieur +]. Les cellules CD8[indice supérieur +] ont un signalosome pré-formé alors que les lymphocytes CD4[indice supérieur +] sont dépendants de la polarisation des radeaux lipidiques. La perte d'expression du CD28 chez les cellules CD8[indice supérieur +] n'a pas de répercussion sur sa signalisation alors que les cellules CD4[indice supérieur +] ont un défaut dans la phosphorylation de Akt malgré l'expression du CD28 inchangée. L'immunosénéscence s'explique en partie par la perte de fonction des radeaux lipidiques dans les cellules CD4[indice supérieur +]. Ces résultats suggèrent que les fonctions des radeaux lipidiques dans les sous-populations lymphocytaires définissent la capacité des cellules à répondre et à s'adapter au milieu environnant.
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Salles, Audrey. "Influence de l'organisation latérale de la membrane sur l'activation lymphocytaire T." Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX22137.
Full textAbstract:
Les rafts lipidiques sont des nanodomaines membranaires enrichis en cholestérol et en sphingolipides impliqués dans la régulation de la signalisation médiée par le TCR. Néanmoins l'existence et la fonction de ces domaines sont sujettes à controverse compte tenu des difficultés expérimentales pour les étudier in vivo. En utilisant des traitements non invasifs ciblant spécifiquement la voie de biosynthèse de ces lipides, nous avons étudié l'influence de l'organisation latérale de la membrane sur l'activation lymphocytaire T. Par des approches biophysiques, nous avons démontré au sein de lymphocytes T primaires CD4+, que les molécules TCR, CD4 et Lck sont constitutivement partitionnées dans les rafts lipidiques dont est exclue CD45. De plus, cette préorganisation moléculaire modifie les paramètres d'adhésion entre le TCR. Pour étudier le rôle de ces structures au sein de cellules individuelles, nous avons développé une nouvelle méthodologie permettant de détecter et d'analyser à haut débit et de manière automatique la réponse calcique des cellules T. Nous avons confirmé l'influence des rafts membranaires dans la signalisation TCR par les rafts lipidiques joue un rôle majeur dans l'initiation de la reconnaissance antigénique des cellules TLipid rafts are membrane nanodomains enriched in chrolesterol and sphingolipids, which ahave previously been implanted in TCR signaling mechanisms. This contention, however, has beacome highly controversial due to experimental difficulties to study these membrane organizations in vivo. Using non invasive treatments that target specific lipid biosynthesis, we have studied the influence of lateral membrane organization in T lymphocyte activation. By using biophysical approaches, we have demonstrated that in murine CD4+Tcelles, TCR, CD4 and Lck are constitutively and dynamically trapped in lipid rafts, whereas CD45 is excluded. Moreover, this pre-organization impacts binding of TCR to the MHC II-peptide complex and controls the initiation of early TCR signaling. To investigate the role of these structures within individual live cells, we have developed a new high throughput methodology to monitor the calcium mobilization in T cells. We have confirmed the influence of membrane rafts in TCR signaling. Our results have thus demonstrated that pre-organization of TCR signaling protagonists by lipid rafts play a major role in the initiation of T cell antigen recognition
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Legrand, Julie. "Rôle du récepteur P2X7R dans le maintien de l'homéostasie des lymphocytes T." Paris 11, 2010. http://www.theses.fr/2010PA11T040.
Full text
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Hao, Yi. "Mécanismes de sélection et de survie des lymphocytes T CD8+ et lymphocytes B." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077202.
Full textAbstract:
"Chez un vertébré adulte, le nombre total de lymphocytes est maintenu constant, chaque nouveau lymphocyte ne peut survivre qu'après la mort d'autres cellules. Les bases du contrôle homéostatique du nombre total de lymphocytes sont encore mal connues. Dans ce travail de thèse, les phénomènes suivants ont été étudiés. Nous avons étudié le rôle des molécules du CMH dans la survie de plusieurs sous-populations T CD8+ monoclonales. Nous avons utilisé des cellules T CD8+ exprimant différents TCR, spécificités et phénotypes, et avons suivi leur devenir après transfert dans des souris dépourvues de cellules T et déficientes pour certaines molécules de classe I du CMH. Nos résultats suggèrent que le nombre de cellules exprimant des molécules de classe I du CMH et la promiscuité du TCR des cellules T CD8+ peuvent contrôler la survie des ces dernières, leur prolifération induite par lymphopénie et leur compétition capacité. Bien que la sélection de répertoire dans le thymus soit principalement conditionnée par l'affinité des interactions de TCR-CMH, la sélection périphérique est déterminée par la réactivité croisé (ou dégénérescence) des TCR aux ligands environnementaux. L'établissement des populations de lymphocytes B matures est déterminé par des sélections négative et positive. Nous avons étudié le rôle des quantités d'un auto-antigène (HEL) et l'avidité de BCR dans la sélection et la survie des lymphocytes B spécifiques de HEL. Nos résultats montrent que la quantité d'auto-Antigène ainsi que l'avidité du BCR détermine le devenir des populations de cellules B. La présence des quantités élevées de HEL induit la délétion des cellules B spécifiques de HEL. Mais, la présence de quantités faibles de HEL permet la survie des cellules B de haute avidité et induit la sélection positive des cellules B de faible avidité. Ces résultats ont des implications importantes concernant l'homéostasie et la sélection des cellules B auto-réactives ainsi que l'origine des anticorps naturels auto-réactifs. Les IgMs naturelles sont essentielles dans la résistance aux infections bactériennes. Les mécanismes de différentiation, survie ou maintien des populations B qui produisent ces IgMs sont encore méconnus. Les dernières études au laboratoire ont montré que la sélection des cellules B périphériques suit la règle du "premier arrivé, premier servi" et que les cellules B sécrétrices d'IgM présentent une homéostasie indépendante. Nous avons étudié donc le rôle des IgM dans les mécanismes de rétro-contrôle régulant l'arrivée de nouvelles cellules B dans les compartiments B périphériques et la production d'IgM. Nous avons utilisé le système de transfert séquentiel de cellules B matures chez des hôtes Rag2-/-. La première population de cellules B transférées est issue de souris incapables de produire des IgM sériques. Nous avons observé qu'il y a quand même inhibition de la production d'IgM par la deuxième population avec la réduction du nombre de cellules B MZ originaires de la deuxième population. Nous conclurons que ce ne sont pas les IgMs circulantes, mais d'autres facteurs, qui sont responsables de cette régulation rétro-contrôle. Nous avons étudié le rôle des récepteurs toll-like dans le développement des lymphocytes B. Nous avons montré que le compartiment des cellules B immatures de souris jeunes déficientes pour TLR9, mais pas de souris adultes, se développait plus tôt que chez la souris C57BL/6. En utilisant une stratégie de repopulation compétitive, nous avons démontré que le signal de TLR9 est nécessaire aux points clés du développement des cellules B murines, de la sélection dans les organes lymphoïdes secondaires et de la différentiation dans des cellules sanguines sécrétrices d'Ig. Nous avons aussi montré que le développement de cellule B est indépendant de MyD88. "After cell maturation, the repertoire selection and lymphocyte survival in the periphery are controlled by homeostatic mechanisms to keep the equilibrium. In the present work, selection and peripheral survival of CD8+ T cells and B cells were studied. The requirements for TCR signaling for T cell survival have been subjected to much debate and controversial fmdings. It is yet unclear whether ail lymphocytes are similarly dependent on TCR/MHC triggering for survival and/or LDP. We studied the peripheral survival and clone sizes of three monoclonal Tg CD8 T cell populations in conditions of progressive reduction of restricting MHC-bearing cells or ablation of different MHC molecules. We observed heterogeneous requirement of TCR/MHC signal for peripheral CD8+ T cells survival. The number of MHC class I molecules expressing cells and the ability of the TCR to recognize different MHC molecules determine CD8+ T cell survival and-the size of peripheral pool. Thus, although repertoire selection in the thymus is mainly conditioned by the affinity of TCR-MHC interactions, peripheral selection is determined by TCR cross-reactivity to environmental ligands. The effects of varying quantifies of self-antigen in- the development and selection of conventional B cells were examined by using a mouse model in which HEL-specific BCR transgenic B cells develop in the presence of the neo self-antigen HEL. We demonstrated that developing self-reactive B cells are not always highly sensitive to the deletion mechanisms imposed by membrane-bound self-antigens. Our findings demonstrated that conventional B cells can undergo positive selection and that the fate of a self-reactive B cell depends on the quantity of self-antigen, the number of BCRs engaged, and on its overall antigen-binding avidity, rather than on the affinity of individual BCRs. Previous studies in the lab have demonstrated that peripheral B cell selection follows the rule "first corne, first served" and that IgM-secreting cells are generated from a pool of stable activated B cells with an independent homeostasis. We questioned whether Ig secretion by the first population was responsible for the feedback effect observed. To test this hypothesis we used B cells from mutant mice, which are unable to secrete IgM. The production of IgM by the second population was still inhibited. Our findings indicate that IgM secretion does not mediate the feedback effect. We are currently testing alternative mechanisms. In addition, we studied the role of toll-like receptors in the development of B lymphocytes. We showed that the immature B cell compartment of young, but not adult, TLR9-defïcient mice developed earlier than that of wild type C57BL/6 mice. By a competitive repopulation strategy we showed that TLR9 signaling is necessary at key checkpoints of the murine B cell developmental program, selection into secondary lymphoid organs, and differentiation into Ig-secreting plasma cells. However, this role of TLR9 seems to be MyD88-independent
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Villarese, Patrick. "Apport de l'analyse des réarrangements du TCR dans l'oncogenèse et l'ontogénie T." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015PA05S007.
Full textAbstract:
Les cellules T maturent dans le thymus lors d’un processus très régulé par l’intermédiaire de facteurs intrinsèques, comme des facteurs de transcription, et des facteurs extrinsèques (par exemple des cytokines des cellules stromales). L’acquisition du potentiel T au cours de la thymopoïèse, à partir d’un précurseur médullaire, se réalise grâce à des étapes successives définies par l’expression de molécules de surface et par les différents réarrangements des gènes du TCR qui sont ordonnés : le TCRd étant le premier à se produire, suivi par le TCRg et TCRb, pour finir par le TCRa. Les réarrangements du TCR restent également parfaitement ordonnancés dans les leucémies aigues lymphoblastiques T et ce malgré l’accumulation successive d’évènements oncogéniques. Il est ainsi possible de définir trois sous-groupes immunogénétiques de LAL-T ; (i) les formes immatures n’exprimant pas de TCRb cytoplasmique (ii) les LAL-T matures exprimant un TCR de surface et enfin (iii) les LAL-T intermédiaires, dites pré-ab, exprimant le TCRb en intracytoplasmique sans expression membranaire d’un hétérodimère ab ou gd. Dans ce dernier sous groupe de LAL-T de phénotype cortical, deux oncogènes à homéodomaines, TLX1 et TLX3, appartenant à la famille des gènes homéotiques orphelins NKL, sont souvent dérégulés. Nous avons précédemment mis en évidence le rôle direct des oncoprotéines TLX dans le processus de l’arrêt de maturation, grâce à leur interaction avec le facteur de transcription ETS1, bloquant l’expression et les réarrangements du TCRa. Néanmoins, une partie des LAL-T corticales ne surexprime ni TLX1 ni TLX3, posant la question de l’implication potentielle d’autres gènes de la famille NKL dans le blocage de maturation. Nous avons donc réalisé une analyse transcriptionnelle de l’ensemble des 46 gènes de la famille NKL dans une large série de LAL-T et comparé les résultats avec ceux obtenus dans des sous populations thymiques humaines triées. Nous avons ainsi identifié 10 gènes dérégulés de manière ectopique dans notre série de LAL-T, incluant 6 gènes dont la dérégulation était inconnue dans ce contexte. Par ailleurs, nous avons mis au point une approche complexe combinant une analyse en CGH-array haute résolution, le dosage allélique du locus TCRa et un système de RT-PCR multiplex afin d’étudier de manière exhaustive le statut du locus TCRa dans cette même série de LAL-T. Nos résultats ont ainsi montré que ces nouveaux gènes NKL aboutissent aussi à une répression du TCRa par un mécanisme similaire à celui observé avec les oncoprotéines TLX. Les lymphomes anaplasiques (ALCL), qui sont caractérisés par une expression aberrante d’ALK, issue de la t(2;5), expriment des marqueurs d’activation T (CD30), cytotoxique (granzyme, perforin, TIA1) et des réarrangements clonaux du TCR, mais sans signalisation du TCR/CD3. Le stade du développement lymphoïde T où est initié la lymphomagenèse est inconnu, il est possible que cette translocation se produise avant l’expulsion thymique. Pour étudier cette hypothèse, nous avons analysé l’ensemble des TCR (d,g,b,a) par PCR et CGH array dans une série d’ALCL humain et utilisé un modèle murin de lymphomagénèse T dans lequel NPM-ALK est exprimé à l’aide du promoteur de CD4. Nous avons croisé ce premier modèle avec des souris transgéniques RAG déficient et/ou en présence d’un transgène TCR (OT1), afin d’étudier le rôle du TCR dans le développement tumoral. Le modèle de lymphomagenèse identifié est basé sur une expression de NPM-ALK dès les stades précoces de la différenciation thymique, lorsque le transcrit de fusion peut remplacer le TCRb, et lors de l’expansion des thymocytes corticaux au niveau de la « b-sélection ». Un TCR est cependant nécessaire pour la sortie du thymus, bien que perdu lors du développement des ALCL en périphérie. En conclusion, nous avons montré l’implication du TCR dans deux modèles d’oncogenèse. (...)T cells mature in the thymus through a highly regulated process mediated by intrinsic factors (e.g. transcription factors) and extrinsic factors (e.g. cytokines or stromal cells). The acquisition of T lymphoid commitment during thymopoiesis, originating from a bone marrow precursor, is carried out through successive stages defined by the expression of various surface molecules and the precisely ordered TCR gene rearrangements; TCRd being the first to occur, followed by the TCRg and TCRb, and finally TCRa. TCR rearrangements are also highly coordinated in T acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) despite the successive accumulation of oncogenic events. It is thus possible to define three immunogenetic subgroups of T-ALL; (I) the immature forms that do not express cytoplasmic TCRb, (ii) mature T-ALL which express a surface TCR and finally (iii) intermediate T-ALL, termed preab, which express intracytoplasmic TCRb without membrane expression of a TCR ab or gd Complex. In the latter subgroup, classically termed cortical T-ALL, two oncogenic transcription factors belonging to the NKL family of homeobox genes, TLX1 and TLX3, are commonly deregulated. We have previously demonstrated the direct role of TLX oncoproteins in the process of maturation arrest through their interaction with the ETS1 transcription factor, which blocks expression and rearrangements of TCRa. Not all cortical T-ALL cortical overexpress TLX1 nor TLX3, however, suggesting that other NKL family genes might be involved in the maturation arrest. We therefore, conducted a transcriptional analysis of all 46 NKL family genes in a large series of T-ALL and compared the results with those obtained in sorted human thymic subpopulations. We identified 10 ‘ectopic’ deregulated genes in T-ALL, including 6 genes whose deregulation was previously unknown in this leukemia. By combining high resolution CGH array, allelic of TCRa locus dosage and a novel TCRa RT-PCR multiplex, we show that these deregulated NKL genes also lead to inhibition of TCRa rearrangement, similar to that observed with TLX. These date demonstrate that homeobox inhibition of TCRa rearrangement is likely to explain the maturation arrest in the majority of cortical T-ALL, the commonest and most emblematic subgroup in this leukemia. Anaplastic lymphoma (ALCL), which are characterized by t(2;5) driven aberrant expression of ALK, express T activation markers (CD30), cytotoxic (granzyme, perforin, TIA1), and clonal TCR rearrangements in the intriguing absence of TCR/CD3 signaling. It is not clear at what stage of development ALCL lymphomagenesis is initiated, but as the expression of NPM is ubiquitous, it is possible that this translocation occurs before thymic egress. To investigate this, we analyzed all TCR(a,b,g,d) by PCR and CGH array in a series of human ALCL and compared these results with a T lymphomagenesis murine model in which NPM-ALK is regulated by the CD4 promoter. We crossed this first model with RAG deficient transgenic mice in the presence or not of a TCR transgene (OT1), to study the role of the TCR in tumor development. NPM-ALK expression from the earliest stages of thymic differentiation allow the fusion transcript to replace TCRb during the cortical thymic cellular expansion process known as "beta-selection". A TCR is, however, necessary for thymus egress, but is subsequently lost during the development of ALCL in the periphery, suggesting that the coexistence of TCR and NPM-ALK signaling is not compatible with lymphomagenesis and that the TCR may act as a tumor suppressor gene. In conclusion, we have delineated the involvement of TCRa in two models of oncogenesis. In T-ALL, NKL oncoproteins NKL prevent TCRa rearrangements and block cells at the highly proliferative TCRb-selection cortical thymic stage. In ALCL, a functional TCR appears to act as a tumor suppressor gene. Both models pave the way to differentiation therapy via TCR modulation
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Rouquette-Jazdanian, Alexandre. "Rafts lipidiques et activation lymphocytaire par le complexe CD3-TCR : rôle du cholestérol et de la sphingomyeline." Nice, 2004. http://www.theses.fr/2004NICE4041.
Full textAbstract:
La membrane plasmique des lymphocytes T CD4+ contiendrait, in vivo, des microdomaines ordonnés appelés rafts. Expérimentalement, ces derniers sont purifiés sous forme de DRM (" detergent-resistant membranes ") particulièrement riches en cholestérol et en sphingomyéline (SM). Un nombre croissant d'études montre que ces rafts jouent un rôle essentiel dans l'activation lymphocytaire par CD3. En effet, son engagement permet le recrutement de molécules clés dans les rafts et la désorganisation de ces structures lipidiques par des agents pharmacologiques inhibent les signaux émis par CD3. La déplétion en cholestérol par la méthyl-b-cyclodextrine (m-b-CD) est devenue la méthode la plus utilisée pour désorganiser les rafts. Parce que son utilisation a révélé d'importants désaccords, certains auteurs doutent de l'importance des rafts dans l'activation lymphocytaire. Tenant compte de ces résultats contradictoires, nous avons entrepris des doses-réponses et des cinétiques de m-b-CD. Nous avons démontré que les lymphocytes T contiennent deux " pools " cinétiques de cholestérol. Il y a un " pool " rapide correspondant aux rafts (31,5%, t1/2=17 secondes) et un " pool " lent (68,5%, t1/2=15 minutes) correspondant au reste des membranes cellulaires. L'extraction spécifique du cholestérol des rafts suffit à inhiber les flux calciques induits par CD3 mais cette inhibition est due à une forte dépolarisation de la membrane plasmique. En revanche, il est nécessaire d'enlever le cholestérol du " pool " lent pour inhiber les phosphorylations sur tyrosine. De plus, nous avons démontré que la désorganisation des rafts grâce à l'oxydation spécifique du cholestérol par la cholestérol oxydase (COase) n'inhibe absolument pas l'activation lymphocytaire (étude des phosphorylations, de l'interaction PLCg1-LAT, des flux calciques, de la production de diacylglycérol (DAG), du remaniement du cytosquelette d'actine et de l'expression de CD69 et de CD25). Nous avons alors émis deux hypothèses : soit l'activation lymphocytaire ne passe pas par les rafts, soit elle utilise des rafts dépourvus de cholestérol et qui pourraient être extrêmement riches en sphingolipides comme il en a déjà été décrit dans la littérature. De manière intéressante, nous avons montré que les traitements longs par la m-b-CD, qui inhibent le TCR, extraient également les SM des rafts. Nous avons alors étudié l'effet de la sphingomyélinase (SMase) exogène sur l'activation lymphocytaire. La SMase transforme les rafts en domaines qui sont riches en céramides et pauvres en cholestérol. Ces " ceramides-rich domains " (CRD) permettent toujours aux phosphorylations d'avoir lieu, seuls les flux calciques et le DAG sont inhibés, mais cela est explicable par la baisse du potentiel de membrane. En revanche, nous avons montré que l'inhibition de la synthèse des sphingolipides par la Fumonisine B1 (FB1) empêche l'activation tardive des Jurkat ; le PDMP, inhibiteur de la synthèse de glycosphingolipides (GSL), n'ayant aucun effet, nos résultats suggèrent un rôle important pour les SM dans l'activation lymphocytaire. En conclusion, nos quatre années de recherches nous permettent d'affirmer avec conviction que les rafts enrichis en cholestérol ne sont pas indispensables à la propagation des signaux émis par le complexe CD3-TCR. Peut-être passent-ils par des rafts enrichis en sphingolipides, peut-être passent-ils hors des rafts ? Le débat reste ouvert.
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Naouel, Hachehouche Lamia. "Expression du récepteur à domaine discoïdine 1 chez le lymphocyte T et son implication dans la migration cellulaire." Master's thesis, Université Laval, 2009. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20908.
Full textAbstract:
La migration des lymphocytes T dans les tissus interstitiels est régulée par la matrice extracellulaire dont le collagène type l est la composante majeure. Nous avons caractérisé l'expression chez les lymphocytes T d'un récepteur du collagène de la famille des récepteurs à domaine discoïdine (DDRl) et investigué son implication dans la migration. Nous avons démontré que l'activation des lymphocytes T primaires provenant du sang périphérique (PBL) par le récepteur des lymphocytes T induit l'expression de DDRl. Cette induction dépend de la voie des MAPK-Erk. L'activation des PBL augmente leur migration dans une matrice tridimensionnelle de collagène type l et cette augmentation est inhibée par l'addition de récepteurs bloquants DDRI-FC. Nous avons également observé que l'adhésion des PBL au collagène type l augmente en présence de DDRI-FC. Le récepteur DDRI serait donc impliqué dans la migration des PBL activés possiblement grâce à sa capacité de modérer l'adhésion au collagène type 1.
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Mellouk, Amine. "Rôle des récepteurs purinergiques P2X7 et d'apoptose Fas dans l'homéostasie des lymphocytes T et le développement des maladies auto-immunes." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS221.
Full textAbstract:
Mon étude a porté sur le rôle du récepteur purinergique P2X7 (P2X7R) dans les processus physiopathologiques impliqués dans le développement des maladies auto-immunes de type lupique. Les souris MRL/lpr, déficientes en récepteurs d’apoptose Fas (mutation lpr), développent spontanément ces pathologies suite à l’accumulation lymphocytes T pathogéniques CD4−CD8− (DN) B220+ dans les organes lymphoïdes secondaires. Nous avons observé que ces lymphocytes ont également un déficit d’expression en P2X7R à leur surface. Cela nous a amené à postuler que P2X7R pourrait jouer un rôle clé dans l’homéostasie des lymphocytes T et le développement du lupus. Afin de vérifier notre hypothèse, nous avons produit des souris C57BL/6J (B6) déficientes simultanément pour Fas (lpr) et P2X7R (P2X7KO). Ces souris présentent une accumulation massive de lymphocytes T DN B220+ et des titres très élevés en auto-anticorps et en cytokines proinflammatoires ce qui n’est pas le cas pour les souris B6 simples mutantes lpr ou P2X7KO confirmant pour la première fois l’implication de P2X7R dans l’homéostasie des lymphocytes T, en synergie avec le récepteur Fas. Les lymphocytes T DN pathogéniques responsables de la lymphoaccumulation sont issues majoritairement de la sous populations des lymphocytes T CD8+. L’inflammation chronique présente chez les souris B6/lpr P2X7KO induit l’activation de l’ensemble des populations lymphocytaires T CD4+ et CD8+ naïves conduisant à l’accumulation de lymphocytes T Effecteurs/Mémoires : EM et CM et atteignent parfois le stade exhausted PD1+TIM3+. Ces cellules accumulées CD4+, CD8+ et DN B220+ ont une capacité de réactivation réduite. Ce biais fonctionnel et phénotypique a été confirmé en comparant la réponse immunitaire adaptative anti-adénovirus entre des souris déficientes en Fas et/ou P2X7R. Les réponses cellulaires et humorales sont moins importantes dans les souris B6/lpr P2X7KO que B6, B6-P2X7KO. Ces réponses antivirales sont intermédiaires dans les souris B6/lpr. L’ensemble de ces résultats renforcent notre hypothèse sur le rôle synergique des récepteurs Fas et P2X7R dans l’homéostasie des lymphocytes T. Le taux d’apoptose induit par l’activation des récepteurs Fas ou P2X7R séparément est moins important dans les lymphocytes T CD8+ par rapport au lymphocytes T CD4+. La synergie Fas-P2X7R serait donc nécessaire pour l’homéostasie des lymphocytes T CD8+. Afin de préciser les mécanismes à l’origine de la maladie et d’identifier l’influence de chaque récepteur sur l’expression des loci de susceptibilité, nous avons séquencé les ARNm exprimés dans la rate et les ganglions lymphatiques des souris MRL/lpr avant et après le développement de l’auto-immunité ainsi que chez les souris B6, B6/lpr, B6 P2X7KO et B6/lpr P2X7KOMy project aims to determine the role of the purinergic receptor P2X7 (P2X7R) in the pathophysiological processes involved in the development of autoimmune lupus-like syndrome. MRL/lpr mice, deficient for the cell death receptor Fas (lpr mutation), spontaneously develop this pathology following the accumulation of pathogenic B220+CD4−CD8− (DN) T lymphocytes in secondary lymphoid organs. We have observed that these lymphocytes are also deficient in P2X7R cell surface expression. This led us to hypothesize that P2X7R could play a key role in T cell homeostasis and lupus development. To test our hypothesis, we produced B6 mice deficient for both Fas (lpr) and P2X7R (P2X7KO). These mice, but not single mutant B6 mice (lpr or P2X7KO), develop a massive accumulation of DN B220+ T lymphocytes and high levels of autoantibodies and proinflammatory cytokines, confirming for the first time the involvement of P2X7R in T-cell homeostasis. I have found that the pathogenic DN T lymphocytes are predominantly derived from the CD8+ T lymphocyte subpopulation. Chronic inflammation in B6/lpr P2X7KO mice induces the activation of the whole CD4+ and CD8+ naïve T lymphocyte subpopulations leading to the accumulation of Effector/Memory and exhausted T lymphocytes. Accumulated T-cells lose the ability to be reactivated. To confirm these results, I compared the adaptive immune response against adenovirus between mice deficient for Fas (lpr mutation), P2X7R-deficient mice or both receptors. The cellular and the humoral responses were lower in the B6/lpr-P2X7KO mouse strain compared to B6, B6-P2X7KO and B6/lpr mouse strains. The antiviral immune response in the B6/lpr mice was lower than in B6 and B6-P2X7KO mice. These results reinforce our hypothesis about the synergistic role of both receptors in the maintaining of T cell homeostasis. Ours results suggest that Fas and P2X7R play their synergistic role in T-cell homeostasis. In collaboration with a team from the University of Taiwan, we sequenced the mRNAs expressed in the spleen and lymph nodes of MRL/lpr mice before and after the onset of the diseases as well as in the B6, B6/lpr, B6 P2X7KO and B6/lpr P2X7KO mouse strains in order to better understand the mechanism triggering the disease and to identify the role of each receptor on the expression of the susceptibility loci
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Xia, Fan. "Décryptage des mécanismes de signalisation précoce de la costimulation dans l' activation des lymphocytes T naifs." Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM4064.
Full textAbstract:
L'objectif de notre travail est de comprendre la contribution relative des voies de signalisation précoces du TCR et de CD28 dans l'activation des lymphocytes T naïfs. Notre étude a d'abord montré que dans les cellules T CD4+ naïves, la stimulation du TCR augmente de manière significative la liaison en deux dimensions (2D) de CD28 avec ses ligands B7, et ceci dépend à la fois du domaine cytoplasmique de CD28 et de l'activité des src kinases. Par la suite, notre analyse biochimique a démontré que l'engagement du TCR par son ligand (CMHp) potentialise la phosphorylation de CD28 stimulée par son ligand B7. En outre, la stimulation conjointe du TCR et de CD28 augmente fortement la phosphorylation des protéines de signalisation proximales telles que les molécules Vav-1 et PLCγ-1. Nous avons également examiné la mobilisation des ions calcique (Ca++). Nous avons trouvé que l'engagement du TCR ou de CD28 seul est capable de déclencher une élévation de la concentration intracellulaire d'ions Ca++ dans des cellules T naïves. Cette élévation qui se caractérise par de fortes fluctuations de la concentration calcique impliquerait principalement 2 types de canaux calciques de la membrane plasmique. De façon attendue, une stimulation conjointe des lymphocytes par le TCR et CD28 augmente l'amplitude moyenne de la réponse calcique. Nos données ont révélé que seule une stimulation conjointe, et non individuelle, du TCR et de CD28 augmente significativement le temps de résidence du Ca++ libres fluctuants par rapport aux cellules non stimulées. Par conséquent, cette augmentation du temps de résidence caractérise spécifiquement la réponse calcique induite par TCR et CD28In this work, we aimed at determining the relationship between and specific contribution of TCR and CD28 early signaling pathways in naïve CD4+ T cell activation. Our data showed that in naïve CD4+ T cells, TCR stimulation significantly increased the 2D binding of CD28 to its B7 ligands and this increase depended on both cytoplasmic tail of CD28 and activity of src kinases. Our biochemical analysis then demonstrated that TCR engagement with its ligand pMHC strongly enhanced the CD28 tyrosine phosphorylation triggered by B7. Moreover, the conjoint stimulation of TCR and CD28 markedly augmented activation of proximal signaling molecules such like Vav-1 and PLCγ-1 compared to the stimulation with each receptor alone. We next went to examine the calcium ion (Ca2+) mobilization. We found that in naïve CD4+ T cells, engagement with ligand of TCR or CD28 alone was able to trigger rise of the fluctuating cytosolic-free Ca2+ level. Unexpectedly, such rises implicated predominantly the involvements of two different types of calcium channels: Cav and CRAC channels. The conjoint stimulation with both TCR and CD28 enabled the augment of average amplitude of the calcium response. Through the time series analysis, our data unveiled that the conjoint, but not separate, TCR and CD28 stimulation in naïve CD4+ T cells significantly increased the fluctuating cytosolic-free Ca2+ dwell time relative to that found in unstimulated cells. The increase of the cytosolic-free Ca2+ dwell time therefore uniquely characterized the calcium response triggered by TCR and CD28 and presumably corresponded to a fundamental feature for the high efficiency of T cell activation induction
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Brabb, Thea. "The fate of MBP-specific T cells in MBP TCR transgenic mice /." Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 1999. http://hdl.handle.net/1773/10853.
Full text
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GAHERY-SEGARD, GAHERY HANNE. "Repertoire des lymphocytes t chez la souris. Structure et organisation du locus alpha/delta du tcr." Paris 6, 1994. http://www.theses.fr/1994PA066127.
Full textAbstract:
Le travail porte sur l'etude du repertoire t chez la souris, et consiste en l'analyse des genes valpha et vbeta des lymphocytes t ainsi que des facteurs qui influencent leur expression. Nous avons identifie une nouvelle famille, valpha5t constituee de deux membres ; valpha5tpseudo qui est non fonctionnel et valpha5t qui presente toutes les caracteristiques d'un segment fonctionnel. Les transcrits valpha5t sont frequemment episses entre valpha5t et calpha au lieu de jalpha-calpha, en effet un site alternatif d'epissage se situe au niveau de la jonction. Ceci restreint la probabilite pour ce gene de produire un transcrit complet. Ce phenomene pourrait etre un facteur de regulation intervenant dans l'exclusion allelique, pour les chaines alpha. Nous avons egalement determine la structure de l'ensemble des genes de la famille valpha2 chez la souris b10. A dans le but d'etudier la complexite des familles valpha. Cette famille est constituee de dix genes valpha2 et plusieurs genes valpha2 sont identiques. Les differentes substitutions observees dans les regions valpha2, ont ete positionnees sur un modele tridimensionnel. La plupart des changements sont situes dans les regions exposees au solvant. Les genes valpha2 de la souris balb/c ont ete identifies en reference a leurs homologues chez la souris b10. A. Le taux de conservation entre les alleles est tres fort, 1 a 3 substitutions seulement etant observees. L'ensemble de ces donnees indique que des duplications et des deletions successives sont impliquees dans l'evolution des familles valpha multigeniques. Enfin, nous avons analyse la diversite des tcr alpha, beta selectionnes par un antigene homologue au sol, le collagene de type ii. Pour cela, nous avons caracterise les regions valpha et vbeta de clones t specifiques de cet antigene qui, une fois injecte, induit une arthritte au collagene de type ii. La diversite des tcr selectionnes par cet antigene est reduite. Un des clones t etudies a la particularite de prevenir la maladie lorsqu'il est injecte a des souris avant immunisation par le collagene de type ii
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Six, Adrien, and P. A. CAZENAVE. "Repertoire des lymphocytes t chez la souris : organisation genetique et mecanisme d'expression du tcr alpha/beta." Paris 6, 1993. http://www.theses.fr/1993PA066643.
Full textAbstract:
Ce travail porte sur l'etude du repertoire des genes codant pour les chaines du tcr alpha/beta chez la souris et des mecanismes qui en influencent l'expression. Nous avons decrit deux nouvelles sous-familles de segments geniques, vbeta20 et valpha5t. La sous-famille valpha5t comprend deux membres, valpha5tpseudo qui est non fonctionnel et valpha5t qui presente toutes les caracteristiques d'un segment fonctionnel. Curieusement, les transcrits valpha5t sont frequemment episses entre valpha5t et calpha au lieu de jalpha-calpha, du a un site alternatif d'epissage au niveau de la jonction. Ceci restreint la probabilite pour ce gene de produire un transcrit complet. La sous-famille vbeta20 comprend un membre unique, structuralement proche de vbeta3 et vbeta17. L'expression de nombreux segments vbeta est controlee par les molecules de classe ii du cmh et les superantigenes endogenes qui correspondent a la proteine orf d'integrations retrovirales mtv (mammary tumor virus). Nous avons montre, en utilisant une technique de pcr semi-quantitative, que l'expression de vbeta20 est controlee par la molecule i-e du cmh sans que l'intervention probable d'un determinant mtv ait pu etre demontree. Par ailleurs, nous avons caracterise chez la souris sauvage ddo une integration mtv, mtvddo, qui controle l'expression de vbeta2. Une comparaison attentive des sequences orf revele que la zone interagissant avec les regions vbeta, que nous appelons vbeta-specific region correspond aux onze residus c-terminaux. Deux hypotheses, se rapportant a l'influence des integrations mtv sur la valeur selective des individus, sont proposees afin de rendre compte de leur presence dans le genome murin. Enfin, la definition de superantigene est reevaluee en fonction des proprietes des superantigenes averes ou possibles, de leur implication dans la reponse immunitaire, et de leur pouvoir demonstratif et explicatif des phenomenes de selection du repertoire des lymphocytes t
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Caspar-Bauguil, Sylvie. "Acides aminés structurellement importants pour l'expression du récepteur de l'antigène des lymphocytes T." Toulouse 3, 1993. http://www.theses.fr/1993TOU30067.
Full textAbstract:
L'etude de variants negatifs de la lignee cellulaire t jurkat pour l'expression du recepteur a l'antigene permet de mieux comprendre les processus de biosynthese, d'assemblage, de transport intracellulaire et d'expression membranaire du complexe tcr/cd3. Nos resultats montrent l'importance de certains acides amines de la partie constante extracellulaire situee entre les deux cysteines responsables des ponts disulfures intra et intercatenaires des chaines ti-a et ti-b dans l'assemblage du complexe. Ces acides amines sont la pyenylaline en position 216 et la cysteine en position 212 qui avec la cysteine responsable du pont disulfure intercatenaire, sont les seuls residus tres conserves de cette region parmi les especes
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Milpied, Pierre. "EXPRESSION DE LA NEUROPILINE-1 DANS LES LYMPHOCYTES T CONVENTIONNELS ET « INVARIANT NATURAL KILLER T » (iNKT) MURINS." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00547066.
Full textAbstract:
La neuropiline-1 (Nrp-1) est une protéine transmembranaire agissant comme récepteur des sémaphorines de classe 3 (Sema3) et du facteur de croissance de l'endothélium vasculaire (VEGF). En plus de son rôle crucial dans le développement des systèmes nerveux et cardiovasculaires, Nrp-1 est impliquée dans des processus physiopathologiques impliquant certains de ses ligands classiques (Sema3 et VEGF) ou récemment caractérisés (TGF-β1 et PDGF) dans les tissus adultes. Dans le système immunitaire, Nrp-1 participe aux interactions entre les lymphocytes T et les cellules dendritiques, transmet les effets immunorégulateurs de Sema3A sur les lymphocytes T, et est impliqué dans le mécanisme suppresseur des lymphocytes T régulateurs (Treg) Foxp3+. Cependant, l'expression de Nrp-1 dans les lymphocytes T non-Treg humains et murins n'a été que peu étudiée. L'objectif de ce projet était de caractériser les populations de lymphocytes T Nrp-1+ non-Treg chez la souris, d'analyser leurs fonctions, d'identifier les mécanismes conduisant à l'expression de Nrp-1 dans ces cellules, et de comprendre le rôle joué par Nrp-1 dans les réponses immunitaires T. Mon travail s'est d'une part intéressé à une population de lymphocytes T non-conventionnels appelés lymphocytes « invariant natural killer T » (iNKT). Les lymphocytes iNKT sont des lymphocytes Tαβ dérivés du thymus aux propriétés immunomodulatrices reposant sur la sécrétion rapide de cytokines TH1 et TH2 après engagement de leur TCR semi-invariant par des complexes CD1d/glycolipide. Un sous-type distinct de cellules iNKT, dont l'origine et l'homéostasie sont encore mal connues, produit la cytokine pro-inflammatoire IL-17. Dans ce travail, j'ai montré que les lymphocytes iNKT émigrés thymiques récents sont identifiés spécifiquement par l'expression de Nrp-1. Les lymphocytes iNKT producteurs d'IL-17 expriment Nrp-1 et dépendent de l'export thymique. D'autre part, Nrp-1 est exprimé par les thymocytes immatures en division et certains lymphocytes Tαβ conventionnels mémoires en prolifération homéostatique rapide. In vitro, l'activation des lymphocytes T par le TCR induit l'expression de Nrp-1 de manière dépendante de la voie de signalisation Ca2+/calcineurine/NFAT. L'expression de Nrp-1 dans les lymphocytes T activés les sensibilise aux effets régulateurs de Sema3A et TGF-β1. En conclusion, ces résultats apportent de nouvelles données concernant l'expression et la fonction de Nrp-1 dans le système immunitaire. Plus généralement, cette étude permet d'envisager des stratégies thérapeutiques ciblant les processus dépendants de Nrp-1 dans les pathologies du système immunitaire et du système nerveux ou les cancers.
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Milhas, Delphine. "Rôle des caspases et des sphingolipides dans la signalisation cytotoxique du récepteur FAS dans les lymphocytes T." Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/70/.
Full textAbstract:
Le récepteur Fas (CD95) et son ligand FasL (CD95-L) jouent un rôle clé dans la mort des lymphocytes T. Alors que la caspase-8 a été montrée comme essentielle dans l'apoptose induite par la stimulation de Fas, des travaux récents suggèrent l'existence de voies de signalisation indépendantes de la caspase-8. Le céramide, un sphingolipide bioactif, joue un rôle potentiel dans l'induction de la mort cellulaire. L'objectif de notre travail a été de clarifier le rôle des caspases et du céramide dans la mort de lymphocytes T induite par FasL. Nous montrons que la caspase-10 est capable de se substituer à la caspase-8 dans la signalisation apoptotique de Fas, en clivant Bid (Bcl-2 interacting domain) et en activant la cascade des caspases dans des cellules Jurkat. De plus, les caspases-8 et -10 jouent un rôle dans l'induction d'une mort nécrotique, indépendamment de leur activité catalytique. Une inhibition de l'activité de la sphingomyéline synthase (SMS), une enzyme qui convertit le céramide en sphingomyéline, est détectée en réponse à FasL. L'inhibition préalable de la SMS, par approche pharmacologique ou épigénétique (siRNA), favorise l'augmentation du taux intracellulaire de céramide et la mort induite par FasL. L'incubation de cellules Jurkat en présence d'analogues exogènes de céramide s'accompagne d'une toxicité, suggérant un rôle du céramide dans la signalisation cytotoxique de Fas. Nos résultats mettent en évidence le rôle essentiel des caspases-8 et -10 dans la mort apoptotique et nécrotique des lymphocytes T induite par FasL. Interférer avec l'activité de la SMS pourrait représenter une nouvelle stratégie thérapeutique pour sensibiliser les lymphocytes T à FasLFas (CD95) engagement by FasL (CD95L) plays a crucial function in T lymphocytes cell death. In contrast to caspase-8, controversy exists as to the ability of caspase-10 to mediate apoptosis in response to FasL. The ceramide, a bioactive sphingolipid, plays a potential role in cell death. The aim of our study was to clarify the role of caspases and ceramide in FasL-induced T lymphocyte death. Ours results indicate that caspase-10 can substitute to caspase-8 as an initiator caspase in Fas signaling leading to Bid (Bcl-2 interating protein) processing, caspase cascade activation, and apoptosis of human leukemia Jurkat T cells. Moreover, initiator caspases-8 and -10 can trigger cell death independently of their catalytic activities, and are absolutely required for FasL-induced ceramide production and cell death, including necrosis. The ceramide is converted to sphingomyelin (SM) by SM synthase (SMS). In Jurkat cells, FasL treatment inhibits SMS activity in a dose- and time-dependent manner. The inhibition of ceramide conversion to SM, by pharmacological approach or by siRNA, enhances FasL-induced death of Jurkat and activated T cells. Novel ceramide analogs elevate endogenous ceramide content and promote Jurkat cell death, suggesting a role of ceramide in cytotoxic Fas signaling. Altogether our results highlight the essential role of caspases-8 and -10 in FasL-induced apoptotic and necrotic leukemia cell death. Moreover the inhibition of SM synthesis may facilitate FasL-induced ceramide increase and lymphocytes death. Inhibiting SMS activity may represent an interesting therapeutic strategy to sensitize T lymphocytes to FasL
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McMahan, Rachel H. "Relating TCR-peptide-MHC affinity to immunogenicity for the design of tumor vaccines /." Connect to full text via ProQuest. Limited to UCD Anschutz Medical Campus, 2007.
Find full textAbstract:
Thesis (Ph.D. in Immunology) -- University of Colorado Denver, 2007.Typescript. Includes bibliographical references (leaves 133-156). Free to UCD affiliates. Online version available via ProQuest Digital Dissertations;
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Gallagher, Maighréad. "Régulation de l'expression des gènes codant les chaînes TCR[alpha] et TCR[delta] au cours de la différenciation des lymphocytes T chez la souris." Université Joseph Fourier (Grenoble), 2000. http://www.theses.fr/2000GRE10150.
Full textAbstract:
Le recepteur a l'antigene des lymphocytes t (tcr) se compose de deux modules : le module de transduction du signal, ou complexe cd3 ; et le module de reconnaissance du peptide antigenique, compose de deux chaines clonotypiques, tcralpha et tcrbeta ou tcrgamma et tcrdelta. Celles-ci sont codees par des genes ayant subi une recombinaison somatique de segments variables (v), de diversite (d) pour tcrbeta et tcrdelta uniquement et de jonction (j). Chez la souris, les genes codant les chaines tcralpha et tcrdelta partagent un meme locus, le locus tcrad. L'organisation de ce locus permet l'utilisation des segments v (ou adv) par les deux chaines, tcralpha et tcrdelta, mais aucune etude definitive de la question existe a cette date. Cette these a pour objet l'etude du rearrangement et de la transcription des genes tcra et tcrd chez la souris dans differentes conditions. L'inactivation du gene cd3epsilon chez la souris permet l'etude des transcrits tcrdelta en l'absence de transcrits tcralpha. Les resultats de cette etude demontrent : un controle independant du rearrangement et de la transcription des chaines tcralpha et tcrdelta ; et l'absence d'un effet lie a la position des segments adv sur le locus sur les rearrangements tcrd permis. En analysant les sequences d'un grand nombre de transcrits adv2-ac chez la souris de type sauvage adulte nous avons pu detecter des rearrangements preferentiels entre segments adv2 et aj selon leurs positions relatives sur le locus tcrad. L'analyse des transcrits de l'ensemble des 23 familles adv presentes sur le locus tcrad par des techniques de pcr classique et quantitative a permis : la definition d'un repertoire tcrdelta plus etendu que precedemment suppose ; la confirmation de l'absence d'un effet due a la position des segments adv sur le locus ; la mise en evidence d'une evolution du repertoire tcralpha au cours de l'ontogenie ; et une grande difference entre les repertoires adultes tcralpha et tcrdelta chez la souris.
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Grigoriadou, Kalliopi. "Sélection du répertoire TCR exprimé par les cellules T gamma delta dans le thymus et l'épithélium intestinal de la souris." Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066164.
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Pedros, Christophe. "Vav1 et Themis contrôlent la susceptibilité aux pathologies inflammatoires en modulant les fonctions lymphocytaires T." Toulouse 3, 2013. http://thesesups.ups-tlse.fr/2216/.
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Les voies de signalisation induites par l'engagement du récepteur (TCR) des lymphocytes T (LT) jouent un rôle clef dans le maintien de l'homéostasie du système immunitaire. Mon travail de thèse a eu pour objectif l'identification de facteurs génétiques influençant la susceptibilité à certaines maladies impliquant une dérégulation du système immunitaire. Ce travail a permis de révéler l'implication de deux molécules de signalisation proximale du TCR, Vav1 et Themis, dans le contrôle des fonctions lymphocytaires T CD4. Par l'utilisation de lignées congéniques, nous avons identifié chez le rat un intervalle de 117-kb sur le chromosome 9 qui contrôle la susceptibilité opposée des rats BN et LEW aux désordres immunologiques induits par les sels d'or et de mercure. Nous avons mis en évidence que cet intervalle contrôle la polarisation des LT CD4 effecteurs in vitro et leur capacité à déclencher ces troubles auto-immuns in vivo. Au sein de la région identifiée, le polymorphisme R63W du gène de signalisation du TCR Vav1 est un candidat majeur. En effet, nous avons montré que ce polymorphisme influence les fonctions enzymatiques et adaptatrices de Vav1. En parallèle, l'étude d'une mutation spontanée a permis la découverte du rôle de Themis dans le développement thymique des LT et les fonctions suppressives des LT régulateurs (Tregs). La déficience pour Themis chez le rat BN entraîne le développement spontané d'une maladie inflammatoire des intestins associée à un défaut fonctionnel des Tregs. A l'inverse, les Tregs des rats LEW déficients pour Themis sont fonctionnels et ces animaux ne développent aucune pathologie spontanée. L'emploi de lignées congéniques de fond génétique BN exprimant l'un ou l'autre des variants de Vav1, nous a permis de révéler que le polymorphisme de Vav1 est responsable du défaut fonctionnel des Tregs chez les rats BN déficients pour Themis. Ainsi, ce travail a révélé une coopération entre ces deux molécules, impliquées au sein du même signalosome et d'identifier l'importance de l'intégrité du signalosome Themis / Vav1 dans le contrôle des fonctions lymphocytaires T et de l'homéostasie du système immunitaire. Récemment, Themis et Vav1 ont été identifiés comme gènes candidats responsables du développement de pathologies humaines médiées par le système immunitaire. Il est donc important de disséquer les mécanismes moléculaires par lesquels Vav1 et Themis contrôlent les fonctions lymphocytaires. Ceci pourrait aboutir à l'identification de nouvelles cibles thérapeutiques pour les maladies impliquant une dérégulation du système immunitaireSignaling cascades triggered by engagement of the T cell receptor (TCR) play key roles in the control of immune system homeostasis. My PhD work aimed at identifying genetic factors involved in the susceptibility to immune mediated diseases using BN and LEW rat models, two rat strains that differ in their susceptibility to atopic and autoimmune diseases. This led us to identify two proximal TCR signaling molecules, Vav1 and Themis, that play a key role in the control of CD4 T cell functions and susceptibility to immune-mediated diseases. At first, by using congenic lines, we identified a 117-kb interval on rat chromosome 9 that controls the opposite susceptibility of BN and LEW rat strains to immuno-pathological disorders induced by gold or mercury salts. We revealed that this interval controls the polarization of effector CD4 T cells in vitro and their ability to trigger autoimmune manifestations in vivo. In the identified region, the R63W polymorphism of the TCR signaling gene Vav1 is a major candidate. Indeed, we demonstrated that this polymorphism influences Vav1 enzymatic and adaptor functions. Secondly, the analysis of a spontaneous mutation that occurred in our BN rat colony led us to discover Themis for its role in thymic T cell development and regulatory T cell (Treg) suppressive functions. Indeed, Themis deficiency in BN rats leads to the spontaneous development of an inflammatory bowel disease linked to a functional defect of Treg. Surprisingly, Treg from Themis deficient LEW rats are functional and those animals do not develop any spontaneous disease. By the use of congenic lines of the BN genomic background expressing either the R63 or W63 Vav1 variant, we revealed that the R63W Vav1 polymorphism is responsible for the Treg defect of Themis deficient BN rats. Thus, this work revealed cooperation between those two molecules involved in the same signalosome and showed that the Themis/Vav1 signalosome is mandatory for Treg suppressive functions and maintenance of the immune system homeostasis. Recently, independent studies have identified Themis and Vav1 as candidate genes responsible for the development of human inflammatory and autoimmune diseases. Thus, dissecting the molecular mechanisms whereby Themis and Vav1 control T cell functions may lead to the identification of new therapeutic targets for immune-mediated diseases
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Garreau, Anne. "Caractérisation des processus d'ubiquitination régulant la protéine Themis durant le développement des lymphocytes T." Thesis, Toulouse 3, 2017. http://www.theses.fr/2017TOU30025/document.
Full textAbstract:
Themis est une protéine de signalisation des récepteurs des lymphocytes T (TCR) essentielle pour la sélection positive des cellules T. La fonction moléculaire de Themis a été controversée mais de récentes études suggèrent qu'il est un régulateur positif des voies de signalisation des TCR. Nous avons montré dans une étude préliminaire que Themis interagit avec des déubiquitinases et qu'il est ubiquitiné dans les thymocytes. L'objectif de ma thèse était de caractériser les mécanismes moléculaires qui régulent l'ubiquitination de Themis et de déterminer si ces processus affectent la fonction de Themis durant le développement des lymphocytes T. Nous avons montré que si l'expression des ARNm codant pour Themis diminue dans les stades précoces de la sélection positive, son expression protéique est parallèlement augmentée, suggérant une stabilisation de Themis par des modifications post-traductionnelles durant cette étape. Nous avons montré que la déubiquitinase USP9X déubiquitine Themis pour stabiliser son expression durant la stimulation des TCR. L'ensemble de nos résultats proposent qu'USP9X soit activé durant la stimulation des TCR grâce à son recrutement dans les complexes proximaux des TCR par l'intermédiaire de l'adaptateur Grb2 et Themis, entrainant la stabilisation de l'expression de Themis. Nous pensons que ce mécanisme est important pour maintenir l'expression de Themis durant la sélection positive afin de favoriser l'induction d'un signal des TCR soutenu, requis pour l'efficacité de ce processusThe protein Themis is a new actor of the T cell receptor (TCR) signaling essential for the positive selection of T cells. The molecular function of Themis has been controversial but recent findings suggest that it acts as positive regulator of TCR signaling. We demonstrated in an initial research that Themis interacts with deubiquitylases and is covalently associated to ubiquitin chains in thymocytes. The aim of my PhD project was to characterize the molecular process that regulates the ubiquitination of Themis and to investigate how these post-translational modifications affect Themis function during T cell development. We demonstrated that Themis mRNA expression is progressively decreased after positive selection whereas Themis protein expression is enhanced at the early stages of positive selection, suggesting that Themis is stabilized by post-translational modifications during positive selection. We demonstrated that USP9X allows the deubiquitination of Themis and its stabilization following TCR engagement. Ours results suggest that USP9X is activated during TCR engagement following its recruitment to proximal signaling complexes through Grb2 and Themis, leading to the deubiquitination and stabilization of Themis expression. We believe that this mechanism is important to sustain Themis expression during positive selection and to promote durable TCR signals required for the efficiency of this process
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Wong, Phillip. "Changing TCR recognition requirements at discrete stages of intrathymic CD4 T cell development /." Thesis, Connect to this title online; UW restricted, 2000. http://hdl.handle.net/1773/8351.
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Safya, Hanaa. "Modulation des activités du récepteur purinergique P2X7 au cours de l’activation des lymphocytes T." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T083/document.
Full textAbstract:
L’ATP extracellulaire, à travers l’activation du récepteur P2X7, joue un rôle important dans l’immunité inné comme signal de danger responsable de l’assemblage de l’inflammasome, de la migration des cellules immunitaires et de la mort cellulaire. Bien que le rôle de la voie ATP/P2X7 dans l’immunité adaptative reste sous-estimé, il a été rapporté que le récepteur P2X7 participe aux mécanismes de signalisation impliqués dans l’activation des lymphocytes T, leur prolifération et leur différentiation. Notre laboratoire a récemment montré que les lymphocytes T effecteurs (CD4+ ou CD8+) en fin de réponse immunitaire secondaire, exprimant à la membrane la tyrosine phosphatase de membrane B220, sont totalement résistant à l’activation du récepteur P2X7 à cause d’une perte d’adressage de ce récepteur à la membrane. Le but de ce travail de thèse est d’étudier la sensibilité des lymphocytes T, à différents stades d’activation, aux activités cellulaires induites par l’ATP, notamment le clivage de la molécule de homing CD62L ou L-sélectine, l’ouverture du canal ionique, la formation du pore et l’externalisation de la PS. Mes principaux résultats montrent que les activités cellulaires dépendantes du récepteur P2X7 sont dissociées. Les lymphocytes T au stade effecteur/mémoire sont moins sensibles au clivage de la molécule CD62L que les lymphocytes T au stade naïf et récemment activé. Les lymphocytes naïfs T récemment activé en réponse immunitaire primaire sont les plus sensibles à la formation du pore. De plus, les lymphocytes T récemment activés, aussi bien en réponse immunitaire primaire que secondaire, sont les plus sensibles à l’externalisation de la PS. Enfin, dans les lymphocytes T récemment activé, les activités de pore et d’externalisation de PS, mais pas le clivage de CD62L, sont dépendantes du taux de calciumExtracellular ATP through the receptor P2X7 (P2X7R) plays a key role in innate immunity as a danger signal that causes the activation of the inflammasome, enhancement of immune cell migration and cell death. Although the role of the ATP/P2X7R pathway in adaptative immunity remains underestimated, it has been reported that P2X7R regulates signaling events involved in T-cell activation, proliferation, and differentiation into effector lineages. Moreover, we have previously shown that effector T lymphocytes (either CD4+ or CD8+) that express the B220 isoform of CD45 at the plasma membrane at the end of the secondary immune response are totally resistant to ATP stimulation due to loss of P2X7R membrane expression. In the present study, we compared the sensitivity of T lymphocytes to cellular activities trigerred by P2X7R according to their stage of activation. Interestingly, our results showed that P2X7-dependent cellular activities are dissociated. T lymphocytes at effector/memory stage are less sensitive to CD62L shedding than naïve or recently activated T lymphocyte during primary immune response. Naive T lymphocytes recently activated during primary immune response are the most sensitive to pore formation. Furthermore, recently activated T lymphocytes at both primary and secondary immune responses are the most sensitive to PS externalization. Finally, pore formation, PS externalization but not CD62L shedding, are dependent on calcium signaling
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Hue, Isabelle. "Contribution à l'analyse structurale des gènes codant pour le récepteur Alpha-Beta des lymphocytes T de souris." Aix-Marseille 2, 1990. http://www.theses.fr/1990AIX22002.
Full textAbstract:
L'etude des rearrangements geniques alpha et beta d'un cone t de souris a montre que l'un des alleles alpha presente un rearrangement aberrant nouveau: un segment j alpha s'y trouve accole a une sequence atypique, presente en situation germinale a une kilobase en amont d'un segment v2 (article 1). L'absence de sequences consensus au site de recombinaison rapprocherait ce rearrangement de ceux decrits pour des souris scid ou des tumeurs t humaines. Il apparait donc que le locus alpha presente frequemment deux alleles rearranges a la meme position et que les exclusions d'alleles aux loci alpha et beta reposent sur des mecanismes differents. Dans un deuxieme temps, nous avons determine l'organisation generale du locus alpha/delta de souris en utilisant la cartographie des deletins de segments v survenues sur des lymphomes t et le clonage direct de segments v. Il est alors apparu que le locus alpha/delta est organise en unites repetees dans lesquelles les segments v de sous-familles differentes sont interdigites. Les implications de ces donnees structurales quant a l'expression des segments v alpha et v delta sont discutees dans l'article 2
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Chaouni, Benabdallah Ilham. "Etude phénotypique, génotypique et fonctionnelle des lymphocytes T à récepteur gamma/delta dans la polyarthrite rhumatoi͏̈de : analyse comparative avec les lymphocytes T alpha/bêta." Montpellier 2, 1992. http://www.theses.fr/1992MON20221.
Full textAbstract:
Afin d'evaluer les interactions entre le repertoire du recepteur des lymphocytes t (tcr) et l'induction et/ou le maintien d'une maladie autoimmune, la polyarthrite rhumatoide (pr), nous avons analyse le taux d'expression et la distribution des lymphocytes t alpha-beta et gamma-delta, ainsi que leur utilisation de certains produits de genes variables dans le sang peripherique et le site synovial des patients. Un role eventuel du polymorphisme des genes trgvi dans la susceptibilite a la maladie a ete ecarte. Une etude comparative en situation normale et pathologique montre une reactivite et une activation differentielles des lymphocytes t alpha beta et t gamma-delta, en particulier sous l'effet du tgf beta. L'ensemble des resultats obtenus n'est pas en faveur de l'implication d'une reponse specifique des lymphocytes t gamma delta dans la pathogenie de la pr mais indique une restriction individuelle du repertoire t alpha-beta dans le site synovial
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Picarda, Elodie. "Étude de l'interaction TCR/peptide/CMH des lymphocytes T régulateurs CD8+CD45RClow en allotransplantation chez le rat." Nantes, 2013. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=42ed9d82-2fdf-47a2-8790-94f9c0b793fd.
Full textAbstract:
Actuellement, les études en transplantation ont pour objectif d'induire une tolérance spécifique du donneur à long terme. Notre équipe a montré dans un modèle d'allotransplantation cardiaque chez le rat que le blocage de la voie CD40/CD40L induit des lymphocytes T régulateurs (Tregs) CD8+CD45RClow spécifiques du donneur et avec un fort potentiel suppresseur. L'importance de l'interaction du récepteur des Tregs (TCR) dans leur développement et leur fonction reste mal connue. Ces travaux de thèse ont eu pour objectif d'étudier la spécificité antigénique et le répertoire TCR associé des Tregs CD8+. Nous avons démontré pour la première fois en transplantation que les Tregs CD8+CD45RClow induits reconnaissent un allopeptide de 15 acides aminés, dérivé d'une molécule du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) de classe II du donneur. Ce peptide active les Tregs in vitro en présence de cellules dendritiques plasmacytoïdes et stimule in vivo, et sans autre traitement, la génération et/ou la fonction de Tregs CD8+ spécifiques, qui inhibent les réponses immunes anti-donneur et induisent une tolérance chez des receveurs naïfs transplantés. De plus, le complexe CMH du soi/allopeptide identifié est reconnu par des TCRs sélectionnés pour les chaînes Vβ11 et Vβ18 exprimées par les Tregs, présentant un répertoire privé et assez divers dans la rate, mais plus restreint dans le greffon, et assurant une inhibition efficace des réponses alloimmunes. Ces travaux ont permis d'approfondir les connaissances sur la biologie des Tregs CD8+ chez le rat et mettent en évidence le potentiel thérapeutique des Tregs spécifiques d'antigènes dans le contrôle des rejets aigu et chronique d'allogreffeCurrently, a major goal of transplantation research is to induce long term donor-specific tolerance. Our team has already shown in a rat cardiac allotransplantation model that CD40/CD40L costimulation blockade induces donor-specific CD8+CD45RClow regulatory T cells (Tregs), with potent suppressive activity. The requirement for a TCR interaction in the development and function of Tregs remains unclear. The purpose of this study was to characterize the antigenic specificity and the related CD8+ Tregs' TCR repertoire. We have demonstrated for the first time in transplantation that induced CD8+ Tregs recognize a 15 amino acids allopeptide derived from a donor major histocompatibility complex class II (MHC) molecule. This peptide activates Tregs in vitro in presence of plasmacytoid dendritic cells and supports in vivo, without additional treatment, specific CD8+ Tregs generation and/or function, that in turn, inhibit anti-donor immune responses allowing establishement of tolerance in naive transplanted recipients. In addition, the self-MHC/allopeptide complex identified is recognized by Vβ11 and Vβ18-specific Tregs' TCRs displaying a private and diverse repertoire in the spleen, but restricted in the graft, that ensures effective suppression of alloreactive immune responses. This work has increased our knowledge of the biology of CD8+ Tregs in the rat and highlights the therapeutic potential of antigen-specific Tregs in the control of acute and chronic allograft rejection
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Dallanegra, Anne. "Étude de l'activation lymphocytaire dans l'environnement épidermique : régulation de l'expression de surface du complexe CD3/TCR et implications biologiques : rôle des cytokines dans les interactions entre les lymphocytes et les cellules épidermiques." Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO1T182.
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Morin, Stéphanie. "CD28 : nouvelles données sur un récepteur majeur de la costimulation lymphocytaire T." Thesis, Aix-Marseille, 2017. http://www.theses.fr/2017AIXM0508.
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La progression tumorale est le résultat d’une interaction dynamique entre les cellules tumorales et leur microenvironnement. Parmi toutes les cellules qui composent le stroma tumoral, dont les cellules du système immunitaire (SI) comme les lymphocytes T (LT), les adipocytes sont majoritairement présents dans le micro-environnement de certaines tumeurs, comme le cancer du sein. Je travaille sur une molécule clé de la costimulation des LT naïfs, la molécule CD28. L’expression de ses ligands B7 sur les cellules tumorales favorise leur reconnaissance et leur élimination par le SI. L’obésité s’accompagne d’un état micro-inflammatoire chronique. L’importance des phénomènes de costimulation dans le processus inflammatoire lié à l’obésité, en particulier dans un contexte de progression tumorale, est le cœur de mon travail doctoral. Tout d’abord, j’ai participé à la caractérisation de modèles murins d’obésité où le SI est altéré (déficience en CD28), puis j’ai utilisé ces systèmes pour suivre des progressions tumorales. Pour cela, j'ai réalisé des analyses fonctionnelles sur des souris CD28 KO obèses, et afin d'augmenter nos systèmes d'études autour du rôle de CD28, j'ai caractérisé un nouveau modèle : des souris CD28 KI où le récepteur CD28 est dépourvu de sa partie cytoplasmique. Enfin, j'ai mis au point un système de développement tumoral chez la souris à partir d'une lignée syngénique de cancer du sein permettant d'analyser différents paramètres dans le contexte d'un micro-environnement adipocytaire. Au final, notre objectif était de démontrer l’influence combinée du SI et des adipocytes sur la progression tumorale chez des souris obèses plus ou moins immunocompétentesTumor progression is the result of a dynamic interaction between tumor cells and the tumor microenvironment. Immune cells such as T lymphocytes and adipocytes are present in the tumor stroma. Adipocytes are the most numerous cells in some tumor microenvironment such as in breast cancer. I work on a key molecule of naïve T cells costimulation, the CD28 molecule. CD28 and its ligands B7 play an important role in the induction of the inflammatory response. The expression of B7 molecules on tumor cells promotes their recognition and their elimination by the immune system. Obesity is accompanied by a chronic micro-inflammatory state. We studied the role of CD28 in obesity’s inflammation process. Adipose tissue is the site of infiltration of pro-inflammatory immune cells. The importance of costimulation in obesity’s inflammation process is the core of my doctoral work. We studied consequences of this process in the context of tumor progression. First, we characterized mouse models of obesity in CD28 deficient background. Since their immune system is impaired (CD28 deficiency) we followed-up tumor progression. We then performed functional analyzes on obese CD28 KO mice compared to WT mice. In order to study more precisely the role of CD28, we generated a CD28 “knock-in” (KI) mouse model. In this model, the endogenous CD28 receptor lacks its intracytoplasmic part. Finally, we set up a pre-clinical model to study breast tumor development (adipose tissue) using a syngenic cancer cell line. Our objective was to demonstrate the combined influence of the immune system and adipocytes on tumor progression, this by developing new immunodeficient and obese mice models