Academic literature on the topic 'Récepteur lectine'

Les contacts paroi-plasmalemme d'A. Thaliana, sont rompus à l'aide de peptides contenant le motif RGD (Arg-Gly-Asp). Il est montré que le domaine extracellulaire de type lectine de LecRK79, un récepteur kinase, interagit avec les motifs RGD et RGE de peptides synthétiques et de la protéine IPI-O de Phytophthora infestans. Une forte expression de LecRK79 est observée dans les racines: apex et stèle des racines primaires et latérales, primordia, racines adventives. Un mutant insertionnel n'exprimant plus le gène possède un phénotype racinaire, caractérisé par un dédoublement de l'endoderme. Une induction rapide et transitoire de LecRK79 est observée après inoculation de souches avirulentes de la bactérie pathogène P. Syringae pv. Tomato. L'ensemble des résultats indique que LecRK79 est capable de participer à des interactions protéine-protéine afin d'établir des contacts paroi-plasmalemme. LecRK79 peut être impliquée dans le développement racinaire et les interactions plantes-pathogènes. Les contacts paroi-plasmalemme d'A. Thaliana, sont rompus à l'aide de peptides contenant le motif RGD (Arg-Gly-Asp). Il est montré que le domaine extracellulaire de type lectine de LecRK79, un récepteur kinase, interagit avec les motifs RGD et RGE de peptides synthétiques et de la protéine IPI-O de Phytophthora infestans. Une forte expression de LecRK79 est observée dans les racines: apex et stèle des racines primaires et latérales, primordia, racines adventives. Un mutant insertionnel n'exprimant plus le gène possède un phénotype racinaire, caractérisé par un dédoublement de l'endoderme. .<br>Plasma membrane – cell wall contacts in A. Thaliana are disrupted by addition of RGD (Arg-Gly-Asp) containing peptides or proteins. Here we show that the extracellular legume-lectin domain of LecRK79, a receptor kinase, is able to interact with RGD- or RGE-containing peptides or proteins: the RGD motif of IPI-O, a protein from Phytophthora infestans, is also recognized. A strong expression of LecRK79 was observed in roots: apex and stele of apical and lateral roots, primordia, adventive roots. LecRK79 knock-out plants revealed that the endodermis layer splits into two rows of cells starting at the apex of apical and lateral roots. The induction of LecRK79 expression was detected in response to avirulent strains of Pseudomonas syringae pv. Tomato. Altogether, our results indicate that LecRK79 is able to mediate protein-protein interactions to possibly establish plasma membrane – cell wall contacts. They suggest LecRK79 is involved in root development and in plant-pathogen interactions. .

L'immunité, un système de défense incroyable, protège la plupart des organismes vivants des pathogènes nuisibles. Les composantes innée et acquise de l'immunité travaillent ensemble pour assurer une protection efficace de l'homme ainsi que de tous les autres vertébrés à mâchoires. Les cellules dendritiques, la composante de l'immunité innée, passent régulièrement en revue les tissus périphériques, capturent et traitent les agents pathogènes envahisseurs et enfin, présentent les antigènes aux lymphocytes T pour stimuler les réponses immunitaires adaptatives spécifiques. Ces cellules reconnaissent les organismes étrangers à l'aide de plusieurs "Pattern Recognition Receptors" (PRRs), qui se lient spécifiquement à des molécules à la surface des agents pathogènes, dits "Pathogen Associated Molecular Patterns (PAMPs). Parmi les PRR, les récepteurs lectine de type C (CLRs) ont un rôle important dans la reconnaissance et dans la capture des pathogènes. Cependant, DC-SIGN, l'un de ces CLR, peut être détourné par de nombreux agents pathogènes dangereux, y compris le VIH, afin de promouvoir leur infection. Ce travail vise à développer des antagonistes de DC-SIGN, qui serait en mesure de bloquer l'utilisation de ce récepteur par des agents pathogènes. Pour atteindre cet objectif, la stratégie du développement de ligands glycomimétique de DC-SIGN et la présentation multivalente des glycomimétiques monovalents sélectionnés a été employée. Les études présentées ont été réalisées en collaboration avec plusieurs groupes de chimistes, qui ont conçu et synthétisé différents composés glycomimétiques ainsi que différentes plates-formes multivalentes. Des ligands monovalents de DC-SIGN basés sue le mannose, le fucose et sur les composés C-glycosidiques ont été explorés et différentes plates-formes de valence avec différents modes de présentation dans l'espace ont été étudiées. En utilisant la résonance plasmonique de surface (SPR), l'activité des composés à inhiber DC-SIGN a été estimée. De plus, les composés ont été évalués pour leur sélectivité pour DC-SIGN par rapport à la Langerine, un autre CLR ayant un rôle protecteur contre l'infection par le VIH. Certains de ces composés ont été caractérisés par cristallographie aux rayons X et par spectrométrie RMN. Les études de SPR de composés multivalents ont confirmé l'amélioration de l'activité, mais a également révélé des complications possibles. Dans l'ensemble, ces études ont permis d'identifier les deux meilleurs nouveaux composés et de suggérer des perspectives pour l'amélioration de ces composés et des plates-formes de présentation multivalentes.

La paroi donne une enveloppe rigide à la cellule végétale. Elle renferme des polysaccharides (cellulose, hémicelluloses, pectines), des lignines dans certains types cellulaires, des protéines structurales et enzymatiques. La paroi est une structure dynamique: les parois sont modifiées au cours du développement et en réponse aux contraintes environnementales. Les protéines sont des acteurs de cette dynamique en participant à l'assemblage et au remodelage des polysaccharides, à la signalisation cellulaire. La paroi permet notamment aux cellules de résister à la pression de turgescence, force motrice de l'élongation cellulaire: les étapes de relaxation, d'intégration de nouveaux constituants et de consolidation de la paroi doivent être parfaitement coordonnées pour maintenir les structures pariétales. Un système de surveillance et des senseurs du statut de la paroi pourraient assurer cette coordination. Nous sommes intéressés par un récepteur lectine-kinase (LecRK-I.9) d'Arabidopsis thaliana dont le domaine extracellulaire est de type lectine de Légumineuses. Il est un acteur potentiel d'un système de surveillance du statut de la paroi. Les questions posées dans ce travail sont: (i) dans quels processus de développement LecRK-I.9 peut-il être impliqué ? (ii) quelles sont les régulations que ciblent LecRK-I.9 ? (iii) quelle est la nature des ligands de LecRK-I.9 ? L'expression de LecRK-I.9 est prépondérante dans les tissus racinaires et nous avons pu montrer que LecRK-I.9 est impliqué dans les processus d'initiation et d'émergence des racines latérales et adventives pour lesquels des remodelages pariétaux sont nécessaires. Il apparaît comme régulateur négatif de ces processus. En effet, chez les plantes lecrk-I.9, l'expression de gènes codant des peptides pariétaux CEP, régulateurs précoces de l'initiation des racines latérales, est dérégulée, de même pour de nombreuses enzymes travaillant de façon concertée à un relâchement des structures pariétales. Les plantes lecrk-I.9 présentent ainsi des parois modifiées dans leur composition en polysaccharides. Un dommage causé à la paroi a été obtenu par un traitement inhibiteur de la biosynthèse de cellulose. En particulier, des dépôts de lignine ectopique se mettent en place dans les apex racinaires sous le contrôle de l'acide jasmonique (JA) et des espèces réactives de l'oxygène (ROS). Nous avons pu montrer que LecRK-I.9 contrôle les teneurs en JA dans ce processus. De plus, via la régulation JA, LecRK-I.9 contrôle l'expression de gènes codant des protéines et des peptides pariétaux, mais également des protéines de détoxification des ROS. L'ensemble des résultats suggèrent que LecRK-I.9 est un régulateur de la dynamique pariétale avec pour cibles, les teneurs en JA, l'homéostasie des ROS, les enzymes de remodelage des polysaccharides. Le travail s'oriente maintenant vers les conséquences de modifications de la composition pariétale sur la nutrition minérale en fer. En effet, les plantes lecrk-I.9 montrent une forte accumulation de fer pariétal. Enfin, LecRK-I.9 est associé aux brins d'Hecht, en particulier dans les points d'ancrage pariétaux. L'interaction entre domaines lectine et composés pariétaux à l'aide de puces à oligosaccharides pourrait déterminer la participation de LecRK-I.9 à une continuité structurale entre paroi et plasmalemme<br>Cell walls are complex structures of cellulose, hemicelluloses, pectins and proteins secreted by the cell, so setting up a rigid and continuous structure within the tissue of plants. Cell walls are dynamic structures that are continuously modified in the course of development and in response to environmental cues: cell wall proteins play a primarily role by assembling and remodelling polysaccharides, and by participating to cell signalling. In particular, cell walls are designed to handle turgor pressure, the driving force of cell elongation: the loosening of polysaccharide networks, the addition of new components and stiffening should be tightly coordinated to maintain the cell wall structures. A sensory complex to monitor the cell wall status should provide this coordination in an effective manner. We are interested in an Arabidopsis thaliana lectin receptor kinase (LecRK-I.9) with a Legume lectin-type extracellular domain. It is hypothesized that LecRK-I.9 is part of a cell wall surveillance system. The questions asked in this work are: (i) in which developmental processes is LecRK-I.9 involved? (ii) what are the regulations targeted by LecRK-I.9? (iii) what are the ligands for LecRK-I.9? LecRK-I.9 expression was primarily found in root tissues and, LecRK-I.9 was shown to be involved in the processes of adventitious and lateral root initiation and emergence. Both processes require large cell wall remodelling. LecRK-I.9 was defined as a negative regulator of the processes. Indeed, the cell wall peptides CEP are early regulators of lateral root initiation: genes encoding CEP were up-regulated in lecrk-I.9 seedlings. In the same way, genes encoding cell wall remodelling enzymes working together for cell wall loosening are also up-regulated. Finally, lecrk-I.9 seedlings showed modified cell walls in their polysaccharide content. Cellulose biosynthesis inhibition was employed to impair the cell wall structures. In particular, jasmonic acid (JA)- and reactive oxygen species (ROS)- mediated signalling may regulate ectopic lignin deposits in root apices induced by cell wall damage. LecRK-I.9 was shown to control the JA levels during the process of ectopic lignin deposition. Moreover, through JA tuning, LecRK-I.9 regulates the expression of genes encoding cell wall proteins and peptides, but also proteins for detoxifying ROS. Our results suggest that LecRK-I.9 regulates cell wall dynamics in roots by targeting JA levels, ROS homeostasis and remodelling enzymes for polysaccharides. Future prospects include relationships between cell wall composition and mineral nutrition for iron. Indeed, lecrk-I.9 seedlings showed an enhanced accumulation of iron in cell walls. Finally, LecRK-I.9 was found to be associated to Hechtian strands particularly in the cell wall anchor points. Interactions between lectin domains and cell wall polysaccharides are currently searched using glycoarrays for cell wall polysaccharides: LecRK-I.9 could be the linker to establish a physical connection between cell wall and plasma membrane

Implication des monocytes/macrophages dans le développement de l’inflammation colique et de la carcinose péritonéale d’origine colorectale : Rôle des récepteurs lectine de type-C et des récepteurs nucléaires PPARγ et LRH-1.Les monocytes et les macrophages, cellules clés de l’immunité innée, expriment un large panel de récepteurs membranaires et nucléaires leur permettant de moduler leurs phénotypes et leurs fonctions en réponse aux stimuli présents dans leur environnement. Du fait de cette adaptabilité cellulaire, les monocytes/macrophages contrôlent la réponse immunitaire innée et adaptative. Ainsi, ces cellules jouent un rôle central dans le développement de nombreuses pathologies, et par conséquent, représentent des cibles thérapeutiques pertinentes. Dans ce travail de thèse, nous nous sommes, dans un premier temps, intéressés au rôle des récepteurs lectine de type-C des macrophages dans le contrôle de l’inflammation colique. Nous montrons grâce à l’utilisation de deux modèles murins spécifiquement invalidés pour Dectine-1 et le récepteur mannose (RM) dans la lignée myéloïde, que Dectine-1 participe au développement de l’inflammation intestinale, tandis qu’inversement, le RM la prévient. En effet, dans un modèle de colite induite au DSS (Dextran Sodium Sulfate), le récepteur Dectine-1 des macrophages induit une augmentation du recrutement de monocytes inflammatoires dans le colon de façon CCL2-dépendante. Nous mettons également en évidence que Dectine-1 est impliqué dans la polarisation des macrophages du colon vers un phénotype pro-inflammatoire. En effet, Dectine-1 favorise la synthèse du leucotriène B4 (LTB4) qui à son tour induit la sécrétion de l’interleukine-1β (IL-1β). Ces résultats mettent en évidence l’implication délétère de l’axe Dectine-1/CCL2/LTB4/IL-1β dans le développement de l’inflammation colique et attribuent, inversement, un rôle protecteur au RM dans ce contexte. Ces données ont été corrélées avec une augmentation de l’expression de Dectine-1 et une diminution de l’expression du RM au niveau du colon de patients atteints de maladies inflammatoires chroniques de l’intestin (MICI). Ce travail est publié dans Cell Reports 2020 : Divergent Roles for Macrophage C-type Lectin Receptors, Dectin-1 and Mannose Receptors, in the Intestinal Inflammatory Response. Cell Rep. 30, 4386-4398.e5Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés aux rôles des récepteurs nucléaires PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor) et LRH-1 (Liver receptor homolog-1) des macrophages dans le développement d’une carcinose péritonéale d’origine colorectale (CPCR). Nous avons mis en évidence pour la première fois, en utilisant deux modèles murins délétés pour LRH-1 ou PPARγ spécifiquement dans la lignée myéloïde, que ces récepteurs nucléaires jouent un rôle majeur dans la différenciation des précurseurs myéloïdes en cellules immunosuppressives dérivées de la lignée myéloïde (MDSC) au cours de la CPCR. En effet, l’absence de LRH-1 et de PPARγ dans les cellules myéloïdes inhibe la différenciation des MDSC et favorise la réactivation du système immunitaire anti-tumoral. En association à cette réactivation immunitaire, les souris présentent une forte diminution de la charge tumorale, identifiant LRH-1 et PPARγ comme des cibles thérapeutiques innovantes capables de lever l’immunosuppression. A l’aide d’un modèle in vitro de différenciation des MDSC, nous avons montré l’interdépendance de LRH-1 et PPARγ dans la différenciation des MDSC via l’activation de l’axe LRH-1/15-HETE/PPARγ. Parallèlement, nous avons mis en évidence la capacité d’un agoniste inverse de LRH-1 (ML-180) à inhiber le développement de la CPCR, la différenciation des MDSC et la prolifération des cellules tumorales de colon<br>Involvement of monocytes/macrophages in the development of colonic inflammation and peritoneal carcinomatosis of colorectal origin: Role of C-type lectin receptors and nuclear receptors PPARγ and LRH-1.Monocytes and macrophages, key cells of innate immunity, express a large panel of membrane and nuclear receptors allowing them to modulate their phenotypes and functions in response to environmental stimuli. Due to this cellular adaptability, monocytes/macrophages control the innate and adaptive immune responses. Thus, these cells play a central role in the development of many pathologies, and consequently, represent relevant therapeutic targets. In this work, we first focused on the role of macrophage C-type lectin receptors in the control of colonic inflammation. We show, using two mouse models specifically invalidated for Dectin-1 and mannose receptor (MR) in the myeloid lineage, that Dectin-1 participates in the development of intestinal inflammation, whereas MR prevents it. Indeed, in a DSS (Dextran Sodium Sulfate)-induced colitis model, the Dectin-1 receptor on macrophages induces an increase in the recruitment of inflammatory monocytes in the colon in a CCL2-dependent manner. We also demonstrate that Dectin-1 is involved in the polarization of colonic macrophages towards a pro-inflammatory phenotype. Indeed, Dectin-1 promotes the synthesis of leukotriene B4 (LTB4) which, in turn, induces the secretion of interleukin-1β (IL-1β). These results highlight the involvement of the Dectin-1/CCL2/LTB4/IL-1β axis in the development of colonic inflammation and conversely assign a protective role to MR in this context. These data were correlated with an increase in Dectin-1 expression and a decrease in MR expression in the colon of inflammatory bowel disease (IBD) patients. This work is published in Cell Reports 2020: Divergent Roles for Macrophage C-type Lectin Receptors, Dectin-1 and Mannose Receptors, in the Intestinal Inflammatory Response. Cell Rep. 30, 4386-4398.e5In a second step, we investigated the roles of the nuclear receptors PPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor) and LRH-1 (Liver receptor homolog-1) of macrophages in the development of peritoneal carcinomatosis of colorectal origin (PCR). We have demonstrated for the first time, using two mouse models deleted for LRH-1 or PPARγ specifically in the myeloid lineage, that these nuclear receptors play a major role in the differentiation of myeloid precursors into myeloid-derived suppressor cells (MDSC) during PCR. Indeed, the absence of LRH-1 and PPARγ in myeloid cells inhibits MDSC differentiation and promotes the reactivation of the anti-tumor immune system. Associated with this immune reactivation, the mice show a strong decrease in tumor burden, identifying LRH-1 and PPARγ as novel therapeutic targets capable of removing immunosuppression. Using an in vitro model of MDSC differentiation, we demonstrated the interdependence of LRH-1 and PPARγ in MDSC differentiation via the activation of the LRH-1/15-HETE/PPARγ axis. In parallel, we demonstrated the ability of an LRH-1 inverse agonist (ML-180) to inhibit PCR development, MDSC differentiation and colon tumor cell proliferation. This work identifies the nuclear receptor LRH-1 as a key element in PCR progression and opens new therapeutic perspectives allowing both to remove immunosuppression by blocking MDSC differentiation and to directly inhibit colon tumor cell proliferation. This work is in progress

CLEC12B a été identifié pour la première fois comme étant un récepteur inhibiteur exprimé par les cellules myéloïdes qui neutralise la cytotoxicité médiée par les cellules NK. CLEC12B est un récepteur de lectine de type C (CLR) possédant un domaine ITIM, mais dont la signalisation en aval et le ou les ligands restent en grande partie inconnus. Au cours des 30 dernières années, une fonction de présentation d'antigène des mélanocytes a émergé en raison de leur nature dendritique, de leur position stratégique dans la peau et de leur capacité phagocytaire. Dans un contexte de vitiligo, notre équipe a montré que l'activation de CXCR3B, le récepteur des chimiokines immunitaires CXCL9, CXCL10 et CXCL11, induit l'apoptose des mélanocytes humains en culture. Les mélanocytes restants, activés par la production d'IFNγ, expriment des marqueurs de costimulation, déclenchant ainsi la prolifération des lymphocytes T et l'immunité anti-mélanocytaire qui en résulte. De récents résultats de notre équipe ont montré que CLEC12B est principalement exprimé par les mélanocytes humains et joue un rôle important dans la régulation de la pigmentation cutanée, mais également dans la prolifération du mélanome.Dans ce projet, nous avons cherché à déterminer le rôle de CLEC12B dans l'immunité de la peau en utilisant des mélanocytes humains primaires provenant de donneurs sains. Nous démontrons ici que CLEC12B est essentiel à la production d'IFNγ et des chimiokines innées CXCL9, CXCL10 et CXCL11 par les mélanocytes, comme le montre la modulation de l'expression de CLEC12B à l'aide de techniques de surexpression ou d'extinction génique. Cette régulation se fait via la phosphorylation du domaine ITIM de CLEC12B, comme le montre la forme mutée du gène CLEC12B. De plus, CLEC12B peut non seulement moduler la production de chimiokines mélanocytaires, mais il est également capable d'augmenter directement le chimiotactisme des cellules immunitaires de la peau et donc de déclencher une immunité adaptative à long terme. D'un point de vue signalisation, nous montrons que CLEC12B module la voie de signalisation de l'IFNγ via l'axe STAT1/IRF1. De plus, CLEC12B potentialise l'effet de l'IFNγ dans les mélanocytes activés, induisant ainsi une plus grande production de chimiokines innées et in fine une plus grande chimio-attraction des cellules immunitaires. Nous avons également démontré que CLEC12B interagit directement avec Staphylococcus aureus et Escherichia coli et module une réponse immunitaire innée contre ces bactéries opportunistes présentes sur la peau via l'axe STAT1/IRF1/CXCL9. Enfin, nous avons montré que CLEC12B détecte des motifs présents sur les mélanocytes, les fibroblastes et les macrophages pro- et anti-inflammatoires, mais son ou ses ligands restent encore à être identifiés. Dans l'ensemble, ces résultats démontrent que CLEC12B est un acteur important dans l'immunité cutanée innée en modulant la production d'IFNγ et de chimiokines immunitaires, mais également dans l'immunité adaptative en modulant le chimiotactisme des cellules immunitaires via la phosphorylation de son domaine ITIM. Ce mécanisme présente un grand intérêt car l'IFNγ et le recrutement de cellules immunitaires sont des étapes initiales clés impliquées dans l'inflammation de nombreuses pathologies de la peau, faisant de ce récepteur une cible thérapeutique intéressante pour le traitement de maladies infectieuses, des troubles cutanés inflammatoires et pigmentaires, ainsi que du cancer ; tout cela pouvant être directement immuno-régulé par CLEC12B dans les mélanocytes. Cette nouvelle perspective prometteuse reste encore à être testée dans de futures études<br>CLEC12B was first identified as an inhibitory receptor on myeloid cells that counteracts NK cells-mediated cytotoxicity. CLEC12B is a C-type Lectin Receptor (CLR) which possesses an ITIM domain, but ligand and downstream signaling are largely unknown. Over the past 30 years, an antigen-presenting function of melanocytes has emerged due to their dendritic nature, their strategic position in the skin and their phagocytic capacity. In a vitiligo context, our team has shown that CXCR3B activation, the receptor for immune chemokines CXCL9, CXCL10 and CXCL11, induces apoptosis of cultured human melanocytes. The remaining melanocytes, activated by the IFNγ production, express co-stimulatory markers which trigger T cell proliferation and subsequent anti-melanocytic immunity. Recent results from our team have shown that CLEC12B is mainly expressed in human melanocytes and plays an important role in the regulation of skin pigmentation, but also in melanoma proliferation.In this project, we set out to determine the role of CLEC12B in skin immunity using primary human melanocytes from healthy donors. We demonstrate that CLEC12B is critical in production of IFNγ and innate chemokines CXCL9, CXCL10 and CXCL11 by melanocytes, as shown by our regulation of CLEC12B expression using silencing or overexpression techniques. This regulation was driven by the phosphorylation of CLEC12B's ITIM domain as shown using CLEC12B mutated form of the gene. Furthermore, not only can CLEC12B drive melanocyte chemokine production, but it is also capable of directly increase chemoattraction of immune cells in the skin and therefore trigger a long-term adaptative immunity. From a signaling point of view, we show that CLEC12B modulates IFNγ signaling pathway through the STAT1/IRF1 axis. Moreover, CLEC12B potentiates the effect of IFNγ in primed melanocytes, thus inducing a larger production of innate chemokines and subsequent greater chemoattraction of immune cells. In addition, we have demonstrated that CLEC12B directly interacts with Staphylococcus aureus and Escherichia coli and modulates an innate immune response against these opportunistic bacteria found on the skin through the STAT1/IRF1/CXCL9 axis. Finally, we have shown that CLEC12B senses motifs present on melanocytes, fibroblasts, and both pro- and anti-inflammatory macrophages, but its exact ligand(s) still remains to be identified. Together, these results demonstrate that CLEC12B is an important player in innate skin immunity by modulating the production of IFNγ and immune chemokines, and in adaptative immunity by modulating the migration ability of immune cells through the phosphorylation of its ITIM domain. This mechanism is of great interest as IFNγ and cellular recruitment are key initial steps involved in inflammation of many skin pathologies, making this receptor an interesting therapeutic target for the treatment of infectious diseases, inflammatory and pigmentary skin disorders, as well as cancer; all which may be able to be directly immuneregulated by CLEC12B on melanocytes. This exciting novel prospect remains to be tested in future studies

RAE-1 est un ligand du récepteur activateur NKG2D exprimé par les cellules NK, impliquées dans les pathologies tumorales, infectieuses et auto-immunes. Les transcrits de Rae-1 sont exprimés dans l'embryon et sont réprimés pendant le développement sauf au niveau de la zone sous-ventriculaire (SVZ), principale zone de neurogenèse. Ils sont surexprimés dans le tissu nerveux après l’induction de l’EAE et dans les bulbes olfactifs après axotomie des afférences olfactives. Les neurosphères, issues de cellules souches neurales, expriment RAE-1 et l’expression disparait dès leur différenciation en cellules neurales, reproduisant ainsi la situation développementale. RAE-1 joue un rôle nonimmun dans la prolifération cellulaire des neurosphères. La souche C57BL/6 possède 2 protéines RAE-1 : RAE-1δ et RAE-1ε. RAE-1ε est caractérisée par une affinité plus élevée pour NKG2D que RAE-1δ. On observe des différences d’expression des transcrits de Rae-1δ et Rae-1ε en fonction des lignées cellulaires, des cultures primaires et des tissus que nous avons analysés. Ces différences s’expliquent notamment par un contrôle de la transcription par des régions promotrices différentes. L’expression de Rae-1 en condition pathologique corrèle avec un recrutement de cellules immunes exprimant NKG2D et NKp46, marqueur spécifique des cellules NK. La déplétion des cellules NK avant l’immunisation induit une phase aigüe plus sévère. Celle au moment du pic inhibe la rémission. Le nombre de cellules NK, très limité au moment de la phase aigüe, augmente pendant la phase de rémission. Nous proposons que les cellules NK jouent un rôle protecteur dans l’EAE soit en agissant sur les étapes de la réponse immune en périphérie, soit en interagissant localement avec des cellules exprimant RAE-1 comme les cellules souches neurales, les cellules macrophagiques recrutées ou la microglie activée.

L’ensemble des cellules, qu’elles soient procaryotes ou eucaryotes, est doté d’une couche de glycosylation externe riche et diversifiée, composant la face dominante immédiate en relation à leur environnement. Elles résultent de processus enzymatiques complexes liant les sucres entre eux et sur des protéines ou lipides. Des variations du « glycome » peuvent apparaître dans certaines pathologies. Les cancers sont les pathologies les plus fréquentes présentant des anomalies de ces glycosylations. Ces altérations sont quasi systématiques à la surface des cellules cancéreuses. Parmi celles-ci, l’antigène Thomsen-nouveau (Tn), un N-acétylgalactosamine (GalNAc) sur une sérine ou une thréonine, est fortement exprimé dans 90% des carcinomes mammaires ainsi que dans les cancers de la vessie, du col de l’utérus, de l’ovaire, du colon, de l’estomac et de la prostate. L’omniprésence de l’antigène Tn dans de nombreux cancers, associés à son absence dans les cellules saines, en fait une cible de choix pour la thérapie ciblée ou des vaccins synthétiques antitumoraux. Aucun anticorps ciblant l’antigène Tn n’est à ce jour disponible du fait de la difficulté à développer un anticorps avec une telle spécificité. Ainsi, nous nous sommes intéressés à une autre stratégie de ciblage, basée sur l’utilisation d’une molécule capable de reconnaître l’antigène Tn. Les lectines de type C sont une famille de protéines capables de se lier spécifiquement et de façon réversible à certains glucides, en présence de calcium. La macrophage galactose lectine (MGL) est une lectine de type C ayant une affinité très importante pour le GalNac et ses dérivés comme l’antigène Tn. Ce travail a consisté, dans un premier temps, à l’utilisation d’une forme recombinante soluble de la MGL pour valider le potentiel de cet outil pour le ciblage des cellules cancéreuses. Les différentes expériences, in vitro et in vivo, impliquant la MGL, ont démontré la capacité de cette dernière à cibler spécifiquement les tumeurs humaines via l’antigène Tn. La partie extracellulaire de la MGL est de ce fait un très bon candidat de vecteur pour le diagnostic et l’imagerie de tumeurs humaines et potentiellement pour l’administration de médicaments. Dans un deuxième temps, diverses stratégies de développement d’un outil bifonctionnel exploitant cette lectine ont été exploré. Le but était de créer une plateforme peptidique fonctionnalisable d’une part avec plusieurs domaines lectines, afin de contrôler l’affinité de reconnaissance, et d’autre part des groupements fonctionnels variable selon l’application recherché (diagnostique, thérapeutique, ...). Les différentes stratégies de couplage employées nous ont permis d’accrocher plusieurs CRD de lectine sur un support peptidique, cela en conservant l’état tridimensionnel et fonctionnel des protéines. Les caractérisations effectuées démontrent une importante augmentation de l’affinité directement fonction du nombre de lectine ajouté sur la plateforme. Ce travail ouvre la voie vers de nouveaux systèmes de ciblage des sucres modulable à façon<br>All cells, whether prokaryotic or eukaryotic, have a rich and diversified external glycosylation layer, forming the immediate dominant face in relation to their environment. They result from complex enzymatic processes linking sugars to each other and to proteins or lipids. Variations of the "glycome" can appear in certain pathologies. Cancers are the most frequent pathologies with abnormalities in these glycosylations. These alterations are almost systematic on the surface of cancer cells. Among them, the Thomsen-new antigen (Tn), an N-acetylgalactosamine (GalNAc) on a serine or threonine, is strongly expressed in 90% of mammary carcinomas as well as in cancers of the bladder, cervix, ovary, colon, stomach and prostate. The ubiquitous presence of the Tn antigen in many cancers, combined with its absence in healthy cells, makes it a target of choice for targeted therapy or synthetic anti-tumor vaccines. No antibody targeting the Tn antigen is currently available because of the difficulty in developing an antibody with such specificity. Thus, we were interested in an alternative targeting strategy, based on the use of a molecule capable of recognizing the Tn antigen. C-Type lectins are a family of proteins capable of specifically and reversibly binding to certain carbohydrates in the presence of calcium. Macrophage galactose lectin (MGL) is a C-type lectin with a high affinity for GalNac and its derivatives such as the Tn antigen. This work consisted, initially, in the use of a soluble recombinant form of MGL to validate the potential of this tool for the targeting of cancer cells. The different experiments, in vitro and in vivo, involving MGL, demonstrated the latter's ability to specifically target human tumors via the Tn antigen. The extracellular portion of MGL is therefore a very good vector candidate for the diagnosis and imaging of human tumors and potentially for drug delivery. In a second step, various strategies for the development of a bifunctional tool exploiting this lectin were explored. The goal was to create a peptide platform that could be functionalized on one hand with several lectin domains, in order to control recognition affinity, and on the other hand with functional groups that could be variable according to the application (diagnostic, therapeutic, ...). The different coupling strategies employed allowed us to attach several lectin CRDs to a peptide support, while preserving the three-dimensional and functional state of the proteins. The characterizations carried out show a significant increase in affinity directly related to the number of lectins added to the platform. This work paves the way to new customizable sugar-targeting systems

L'approche par le recepteur et l'approche par les ligands sont les deux techniques utilisees classiquement dans l'industrie pharmaceutique pour rationaliser la conception de nouveaux medicaments. Par le biais de la modelisation des deux lectines de legumineuses ulex europaeus et lima bean et de l'etude de leurs interactions avec leur glucide respectif, le fucose et le n-acetyl-d-galactosamine, cette these illustre les differentes techniques utilisables pour modeliser une proteine globulaire par homologie et pour decrire les interactions proteine-ligand. Dans le cas des recepteurs couples aux proteines g, cette approche par le recepteur est confrontee a la difficulte de modeliser le recepteur. Afin d'apporter des elements de reflexion supplementaires sur les caracteristiques de ce type de recepteur, nous avons tente de qualifier les interactions hydrophiles/hydrophobes entre les helices de la bacteriorhodopsine. Pour le cas du recepteur kappa opiace, l'approche par le ligand illustree par une analyse qsar-comfa semble donner de meilleurs resultats que l'approche par le recepteur : bien que les ligands etudies soient flexibles, une relation structure-activite a ete obtenue apres une etude conformationelle des ligands.

Au même titre que les hormones, les facteurs de croissance et les autres cellules, la matrice extracellulaire exerce un rôle fondamental dans le contrôle des fonctions cellulaires. Les informations codées par la matrice sont transmises à la cellule par des récepteurs membranaires, via des interactions entre le cytosquelette et des protéines kinases. Notre étude a porté sur la caractérisation de l'adhérence des cellules hep g2 sur différents composes matriciels, l'identification des signaux émis et des récepteurs impliqués lors de cette adhérence. Les cellules hep g2 adhèrent de façon similaire sur la fn, la lm, les collagènes i et iv, mais elles adoptent des morphologies différentes. Contrairement à l'hypothèse généralement admise, nous avons montre que, quelle que soit la matrice, l'adhérence de ces cellules implique des signaux de même nature : protéines kinases c (pkc), protéines tyrosine kinases (ptk) et protéines kinases ca 2 +/calmoduline-dépendantes (camk). Les ptk et les camk sont indispensables pour entrainer l'attachement cellulaire, tandis que les pkc sont impliquées dans la phase d'étalement et la réorganisation du cytosquelette. Les intégrines sont des récepteurs membranaires de la matrice, connus pour permettre la transmission de signaux de la matrice vers la cellule. Nous avons déterminé que les cellules hep g2 expriment et utilisent de nombreux récepteurs intégrines (11, 21, 31, 51, 61, v3), spécifiques d'un ou plusieurs ligand(s) matriciel(s). Ceci montrait que, (1) les signaux émis ne dépendaient pas d'une intégrine particulière a une matrice, et que (2) d'autres types de récepteurs étaient impliques pour permettre l'adoption de morphologies cellulaires spécifiques. Notre étude a permis de démontrer la présence membranaire de deux lectines de spécificité n-acetylglucosamine, capables d'interagir avec la laminine. Ces lectines n'ont pas un rôle direct dans l'adhérence cellulaire, mais sont recrutées dans les sites focaux.

Les cellules dendritiques (DCs), comprenant les cDC2s BDCA1+, les cDC1s BDCA3+ et les pDCs BDCA2+ sont les chefs d’orchestre des réponses immunitaires. Leur plasticité joue un rôle crucial dans l’orientation des réponses immunitaires, notamment en contexte de cancer. Cependant, l’échappement à la surveillance immunitaire est une étape essentielle dans le développement des tumeurs. En contexte de mélanome, les DCs trouvées dans la tumeur ont une fonctionnalité altérée, influençant négativement l’évolution clinique des patients. Les mécanismes employés par le mélanome pour moduler l’immunité ne sont que partiellement élucidés. L’immuno-métabolisme émerge comme un facteur décisif pour l’orientation des réponses immunes en contexte de cancer. Parallèlement, les cellules tumorales présentent à leur surface une glycosylation aberrante des protéines et lipides qui peut être reconnue par les lectines, récepteurs exprimés par les DCs. Parmi eux, les récepteurs lectines de type C (CLR) sont cruciaux pour la plasticité des DCs et le façonnement des réponses immunitaires, et leur expression est perturbée sur les DCs des patients mélanome. De plus, le glycocode des cellules tumorales de mélanome est corrélé avec la fonction des DCs et l’évolution clinique des patients. Néanmoins, l’impact des différents motifs de glycosylation dans le mélanome sur le phénotype, la fonction et le métabolisme des DCs n’est pas connu.Nous avons étudié les interactions des sous-types de DCs avec six glycans présents à la surface des cellules de mélanome (Gal, Man, GalNAc, s-Tn, Fuc, GlcNAc). Nous avons analysé l’impact de ces glycans sur le phénotype (état d’activation, points de contrôle immunitaires (ICP)) et la fonction (cytokines/chimiokines) des DCs. Afin de mieux comprendre la dérégulation de la fonction des DCs dans le mélanome, nous avons exploré leur métabolisme chez les patients grâce à la technique SCENITH, et mis en relation leur profil métabolique avec leur phénotype, leur fonction et l’évolution clinique des patients. Nous avons aussi évalué l’impact des cellules tumorales et du glycocode sur le métabolisme des DCs, et évalué la possibilité de moduler les voies métaboliques afin de réverser l’impact des glycans sur la fonction des DCs.Les DCs sont capables d’interagir avec et d’internaliser les glycans étudiés, à différentes intensités selon le sous-type de DCs et la nature du glycan. Le fucose induit un remodelage de l’expression des ICPs et une augmentation des molécules d’activation, et provoque la sécrétion de cytokines/chimiokines associées à l’inflammation et à la progression tumorale. Après activation des DCs, leur sécrétome est complètement remodelé par l’exposition aux glycans, particulièrement avec le fucose. Parallèlement, nous avons mis en évidence des perturbations métaboliques majeures des DCs dans le sang et la tumeur des patients mélanome par rapport aux donneurs sains. L’expression de marqueurs d’activation et d’ICPs par les DCs ainsi que l’évolution clinique des patients sont liés au profil métabolique des DCs. De plus, le métabolisme des DCs en co-culture avec des cellules de mélanome est corrélé avec l’expression de certains glycans tumoraux. En accord avec ces résultats, les glycans étudiés modulent directement le métabolisme des DCs en plus de leur phénotype et de leur fonction. Le blocage du transporteur de lactate MCT-1 permet de restaurer la fonctionnalité des DCs altérée par les glycans.Cette étude révèle l’importance des motifs glycosylés dans la modulation et la régulation des DCs. L’axe glycan-lectine-DC émerge comme un nouveau point de contrôle immunitaire dans le mélanome, lié au métabolisme et qui pourrait permettre la restauration de l’immunité anti-tumorale en empêchant les interactions des DCs avec les glycans ou en modulant leur métabolisme. Cet axe ouvre la voie au développement de nouvelles stratégies thérapeutiques afin d’améliorer l’évolution clinique des patients atteints de mélanome<br>Dendritic cells (DCs), mostly consisting of BDCA1+ cDC2s, BDCA3+ cDC1s, and BDCA2+ pDCs are the conductors of immune responses. Their plasticity plays a crucial role in the orientation of immune responses, especially in the context of cancer. However, escape from immune surveillance is a key step for tumor development. In the context of melanoma, tumor-infiltrating and circulating DCs harbor an altered functionality, negatively linked with the clinical outcome of patients. The mechanisms employed by melanoma to modulate immunity are only partially deciphered. Immuno-metabolism emerges as a decisive factor for the orientation of immune responses in cancer. In parallel, tumor cells display aberrant glycans on surface protein and lipids that can be recognized by lectin receptors, expressed by DCs. Among them, C-type lectin receptors (CLRs) are crucial for DCs’ plasticity and the modeling of immune responses, and their expression is perturbed on DCs from melanoma patients. In addition, the tumor cells’ glycocode correlates with DC function and clinical outcome of patients. Nevertheless, influence of the various glycosylation motifs on immunity remains unknown in melanoma.We investigated the interactions of DC subsets with six glycans present on the surface of melanoma tumor cells (Gal, Man, GalNAc, s-Tn, Fuc, GlcNAc). We analyzed the effect of these glycans on the phenotype (activation status, immune checkpoints (ICP)), and the function (cytokines/chemokines) of DCs. In order to better understand DCs dysregulation in melanoma, we explored their metabolism among patients thanks to the SCENITH technique, and analyzed the correlation with their phenotype, their function and the clinical outcome of patients. We also assessed the impact of tumor cells and their glycocode on DCs’ metabolism, and we evaluated the possibility to modulate metabolic pathways with the aim of reverting the impact of glycans on DCs’ function.DCs are able to interact with and to internalize the studied glycans, at different intensities according to the DC subset and to the nature of the glycan. Fucose induces a remodeling of ICP expression and increases activation molecules, in addition to trigger the secretion of pro-inflammatory and pro-tumoral cytokines/chemokines. After activation, DC’s secretome is completely reshaped by glycan exposure, particularly with fucose. In parallel, we highlight major metabolic disturbances in DCs from patients’ blood and tumor compared to healthy donors. The expression of activation markers and ICPs by DCs as well as the clinical outcome of patients are linked with the metabolic profile of DCs. Moreover, DCs’ metabolism in co-culture with melanoma cells correlates with the expression of particular tumor glycans. Coherently, the studied glycans directly modulate DCs’ metabolism in addition to their phenotype and function. The blockade of the MCT-1 lactate transporter allows restoring DCs’ function altered by glycans.This study unveils the importance of glycan motifs in the modulation and regulation of DCs. The glycan-lectin-DC axis emerges as a new immune checkpoint in melanoma, linked with metabolism, and which could enable the restoration of anti-tumor immunity by preventing DC-glycan interactions or by acting on their metabolism. This axis opens the way for the development of new therapeutic strategies with the aim of improving clinical success for melanoma patients