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Dissertations / Theses on the topic 'Récepteur Met'
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Lefebvre, Jonathan. "Etude des propriétés apoptotiques du récepteur tyrosine kinase Met." Thesis, Lille 1, 2011. http://www.theses.fr/2011LIL10151/document.
Full textAbstract:
Le récepteur Met et son ligand l’HGF/SF sont essentiels pour le développement embryonnaire tandis que la dérégulation de la signalisation du récepteur Met est associée à la progression tumorale. Activé par son ligand, Met induit un large panel de réponses biologiques telles que la survie cellulaire, la migration ou la prolifération. En revanche, le fragment p40 Met issu du clivage du récepteur par les caspases participe à l’apoptose. Cette dualité fonctionnelle est caractéristique de la famille des récepteurs à dépendance. Bien que la signalisation positive des RTK soit bien décrite, les mécanismes moléculaires leur permettant de participer aux processus de mort restent encore méconnus. Nous avons montré que le fragment p40 Met est capable d’amplifier l’apoptose indépendamment de l’activité kinase bien qu’il comprenne l’intégralité du domaine catalytique. Au cours de l’apoptose, nous avons montré à partir de lignées cellulaires épithéliales ou dans des foies de souris que p40 Met présente une localisation mitochondriale indispensable à ses fonctions apoptotiques. De manière intéressante, p40 Met possède au sein du site de fixation de l’ATP un domaine BH3 comparable à celui des protéines pro apoptotiques Bcl-2 de type BH3-only. A l’image des BH3-only, ce domaine est impliqué à la fois dans l’activité apoptotique du fragment et dans son association avec la protéine Bcl 2. Le fragment p40 Met est capable d’induire la perméabilisation mitochondriale independamment des caspases ce qui conduit au relargage du cytochrome c. Enfin, au cours de l’apoptose, l’extinction de l’expression de Met entraîne un retard du relargage du cytochrome c, démontrant ainsi la participation du récepteur dans la voie intrinsèque de l’apoptoseThe receptor tyrosine kinase Met and its ligand, the hepatocyte growth factor, are essential to embryonic development, whereas deregulation of Met signaling is associated with tumorigenesis. While ligand-activated Met promotes survival, caspase-dependent generation of the p40 Met fragment leads to apoptosis induction, hallmark of the dependence receptor. We show that although p40 Met contains the entire kinase domain, it amplifies apoptosis independently of kinase activity. In cell cultures and mouse liver undergoing apoptosis, the fragment shows a mitochondrial localization, required for p40-Met-induced cell death. Interestingly, p40 Met exhibits a BH3-like domain overlapping with its ATP-binding site and required for the apoptotic response. It induces mitochondrial permeabilization, while Met silencing delays this response. This demonstrates the involvement of receptor cleavage in regulating mitochondrial cell death. The Met dependence receptor thus displays overlapping kinase and BH3 domains, the former involved in survival, the latter in cell death via the intrinsic apoptosis pathway
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Ancot, Frédéric. "Dégradation du récepteur tyrosine kinase Met par clivages protéolytiques." Thesis, Lille 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LIL10073/document.
Full textAbstract:
La dérégulation de la signalisation du récepteur tyrosine kinase Met et de son ligand l'HGF/SF est associée à la progression tumorale et à la métastase dans de nombreux types de cancers. En condition de stress et en absence de ligand, Met est clivé par des caspases dans le domaine juxta-membranaire et libère un fragment proapoptotique dans le cytoplasme, p40 Met. J'ai pu montrer qu'un clivage C-terminal de Met créée une séquentialité dans ces clivages. Le clivage C-terminal du récepteur Met est important dans la formation du fragment apoptotique mais n'affecte pas les réponses biologiques induites par l’HGF/SF. D'autre part, Met est une cible de la « presenilin-dependent regulated intramembrane proteolysis » (ou PS-RIP). Ce processus de dégradation implique un double clivage séquentiel par des métalloprotéases membranaires puis par le complexe g-secrétase. Ces clivages régulent la demi-vie du récepteur Met et préviennent son activation en absence de ligand. Suite au clivage par les métalloprotéases, Met peut également échapper au complexe g-secrétase par son internalisation préalable. Les fragments générés sont alors dégradés par le lysosome. Les fragments de ces deux voies de dégradation ont la capacité de transformer des fibroblastes. De façon intéressante, l’analyse de xénogreffes de tumeurs humaines chez des souris a montré une accumulation de ces fragments. Nous proposons donc que les voies de dégradation PS-RIP et lysosomale préviennent l’accumulation de fragments délétères de Met. Les différents clivages du récepteur Met permettent de réguler son action en absence d'HGF/SF et pourraient donc jouer un rôle important dans les réponses physiologiquesSignalling dysregulation of receptor tyrosine kinase Met and its ligand the HGF/SF (Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factors) is associated with tumor growth and metastasis in numerous cancer. Iin stress condition and without its ligand, Met is cleaved by caspases in the juxtamembrane domain which liberates a proapoptotic fragment in cytoplasm, p40 Met. I have shown that a C-terminal cleavage of Met creates a hierarchical organization of these cleavages. The C-terminal cleavage of Met receptor is important to generate apoptotic fragment but does not affect the biological responses induced by the HGF/SF. On the other hand, Met is targeted by PreSenilin-dependent Regulated Intramembrane Proteolysis (called PS-RIP). This proteolytic process of degradation involves two sequential cleavages by membranous metalloproteases and by g-secretase complex. These cleavages regulate half-life of Met receptor and prevent its activation without ligand.Following the cleavage by metalloproteases, Met can escape from g-secretase complex through its prior internalization. Generated fragments are then degraded by the lysosome. Fragments of both degradation patways are able to transform fibroblasts. Interestingly, human tumor xenografts in mice display accumulation of these fragments, suggesting these PS-RIP and lysosomal degradations pathways prevent accumulation of deleterious fragments of Met.Different cleavages of Met receptor can regulate its action without HGF/SF and could have an important role in physiological responses
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Deheuninck, Julien. "Le récepteur MET, une cible fonctionnelle des caspases." Lille 1, 2006. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2006/50376-2006-Deheuninck.pdf.
Full textAbstract:
L' hépatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) est le ligand du récepteur tyrosine kinase MET, qui favorise les capacités de survie, prolifération, motilité et morphogenèse des cellules épithéIiales. La signalisation de l' HGF/SF-MET est essentieIle au cours du développement et sa dérégulation peut conduire au développement tumoral et à la progression métastatique. La surexpression du récepteur et/ou du ligaud est associée à de nombreux cancers et est souvent corrélée à un mauvais pronostic. De plus, un lien causatif entre MET et le cancer est établi depuis l'identification de mutations activatrices de MET dans le cancer papillaire rénal héréditaire. L'activation du récepteur MET par l'HGF/SF est classiquement associé à la survie cellulaire, en réponse à des stress variés. Cependant, nos travaux nous ont amené à montrer qu'en absence d'HGF/SF, ces même stress peuvent convertir le récepteur MET en facteur pro-apoptotique. En effet, nous avons montré que le récepteur est clivé par les caspases dans sa région juxtamembranaire, permettant la génération de deux fragments fonctionnels : un fragment transmembranaire, p100 MET, correspondant à un récepteur-leurre, et un fragment p40 MET, cytosolique, possédant des capacités pro-apoptotiques. Nous avons également montré que le clivage juxtamembranaire est régulé négativement par l'activation du récepteur, par la phosphorylation d'un résidu tyrosine juxtaposé au site de clivage par les caspases. Ces travaux révèlent que MET est une cible fonctionnelle des caspases et mettent en évidence que l'HGF/SF et MET participent à la balance survie/apoptose.
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Apostol, Costin. "Apports bioinformatiques et statistiques à l'identification d'inhibiteurs du récepteur MET." Thesis, Lille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010LIL2S053.
Full textAbstract:
L’effet des polysaccharides sur l’interaction HGF-MET est étudié à l’aide d’un plan d’expérience comportant plusieurs puces à protéines sous différentes conditions d’expérimentation. Le but de l’analyse est la sélection des meilleurs polysaccharides inhibiteurs de l’interaction HGF-MET. D’un point de vue statistique c’est un problème de classification. Le traitement informatique et statistique des biopuces obtenues nécessite la mise en place de la plateforme PASE avec des plug-ins d’analyse statistique pour ce type de données. La principale caractéristique statistique de ces données est le caractère de répétition : l’expérience est répétée sur 5 puces et les polysaccharides, au sein d’une même puce, sont répliqués 3 fois. On n’est donc plus dans le cas classique des données indépendantes globalement, mais de celui d’une indépendance seulement au niveau intersujets et intrasujet. Nous proposons les modèles mixtes pour la normalisation des données et la représentation des sujets par la fonction de répartition empirique. L’utilisation de la statistique de Kolmogorov-Smirnov apparaît naturelle dans ce contexte et nous étudions son comportement dans les algorithmes de classification de type nuées dynamique et hiérarchique. Le choix du nombre de classes ainsi que du nombre de répétitions nécessaires pour une classification robuste sont traités en détail. L’efficacité de cette méthodologie est mesurée sur des simulations et appliquée aux données HGF-MET. Les résultats obtenus ont aidé au choix des meilleurs polysaccharides dans les essais effectués par les biologistes et les chimistes de l’Institut de Biologie de Lille. Certains de ces résultats ont aussi conforté l’intuition des ces chercheurs. Les scripts R implémentant cette méthodologie sont intégrés à la plateforme PASE. L’utilisation de l’analyse des données fonctionnelles sur ce type de données fait partie des perspectives immédiates de ce travailThe effect of polysaccharides on HGF-MET interaction was studied using an experimental design with several microarrays under different experimental conditions. The purpose of the analysis is the selection of the best polysaccharides, inhibitors of HGF-MET interaction. From a statistical point of view this is a classification problem. Statistical and computer processing of the obtained microarrays requires the implementation of the PASE platform with statistical analysis plug-ins for this type of data. The main feature of these statistical data is the repeated measurements: the experiment was repeated on 5 microarrays and all studied polysaccharides are replicated 3 times on each microarray. We are no longer in the classical case of globally independent data, we only have independence at inter-subjects and intra-subject levels. We propose mixed models for data normalization and representation of subjects by the empirical cumulative distribution function. The use of the Kolmogorov-Smirnov statistic appears natural in this context and we study its behavior in the classification algorithms like hierarchical classification and k-means. The choice of the number of clusters and the number of repetitions needed for a robust classification are discussed in detail. The robustness of this methodology is measured by simulations and applied to HGF-MET data. The results helped the biologists and chemists from the Institute of Biology of Lille to choose the best polysaccharides in tests conducted by them. Some of these results also confirmed the intuition of the researchers. The R scripts implementing this methodology are integrated into the platform PASE. The use of functional data analysis on such data is part of the immediate future work
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Barras, Alexandre. "Synthèse et vectorisation d'inhibiteurs du récepteur à activité tyrosine kinase MET." Lille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009LIL2S021.
Full textAbstract:
Les protéines kinase jouent un rôle central dans la régulation de nombreux processus cellulaires. Parmi elles, le récepteur MET est un récepteur transmembranaire à activité tyrosine kinase (RTK) présent sur les cellules épithéliales. Son ligand est le facteur de croissance HGF/SF (Hepatocyte Growth Factor/Scatter factor). L'activation de MET par HGF/SF stimule la survie et la prolifération de nombreux types cellulaires et de manière caractéristique la dispersion, l'invasion et la morphogenèse de cellules épithéliales. Dans de nombreux cancers (carcinomes, sarcomes. . . ), l'HGF/SF et MET sont surexprimés et la voie de signalisation qui en découle dérégulée. Ils apparaissent donc comme d'excellentes cibles pour une thérapie anticancéreuse. L'objectif du projet consiste à développer de nouveaux inhibiteurs du RTK MET par deux approches distinctes et complémentaires en utilisant d'une part un inhibiteur extracellulaire de l'interaction de HGF/SF - MET et d'autre par un inhibiteur intracellulaire de l'activité tyrosine kinase de MET. Cette bithérapie sera véhiculée par des nanocapsules lipidiques fonctionnalisées conçues pour cibler spécifiquement les cellules cancéreuses. Notre stratégie intracellulaire consiste dans un premier temps à synthétiser une série de composés issus de la pharmacomodulation du noyau pyrrole indolin-2-one (connue pour être responsable de l'activité inhibitrice de nombreux récepteurs à activité tyrosine kinase dont MET) par allongement, fonctionnalisation et cyclisation des chaînes latérales en position 5, 3' et 4'. Dans un deuxième temps, nous souhaitons identifier de nouveaux pharmacophores spécifiques du RTK MET par chemo-informatique. Une collaboration avec l'équipe de D. Horvath a permis l'utilisation d'une nouvelle classe de descripteurs moléculaires que sont les « triplets pharmacophoriques flous » très bien adaptés pour le criblage virtuel par similitude de structures et pour la génération des relations structure - activité. L'efficacité des stratégies thérapeutiques peut être entravée par les propriétés physico-chimiques des principes actifs et/ou des mécanismes cellulaires (modification des structures initiales, pharmaco-résistances. . . ). Pour ces raisons, le développement de nouvelle forme galénique de taille submicronique a pris un essor considérable ces dernières années. Dans cette optique, nous avons imaginé la conception de nanoparticules « intelligentes » reconnaissant le récepteur MET et transportant l'inhibiteur de l'activité tyrosine kinase. La fonctionnalisation de la surface des nanocapsules lipidiques est réalisée par post-insertion d'ancres synthétiques présentant des fonctions chimiques réactives (aminooxy, acylhydrazine). Ces dérivés peuvent réagir en solution aqueuse de façon chimiosélective sur des dérivés carbonylés et ainsi permettre la conjugaison de biomolécules (polysaccharides, anticorps oxydés. . . ). Une collaboration avec l'équipe de D. Tulasne a permis l'évaluation de ces complexes moléculaires sur des tests cellulaires (MDCK, MDA MB-231)
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Foveau, Bénédicte. "Régulation des fonctions du récepteur tyrosine kinase MET par clivages protéolytiques." Lille 1, 2007. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2007/50376-2007-Foveau.pdf.
Full textAbstract:
L'hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) est le ligand du récepteur tyrosine kinase MET, qui induit des réponses de survie, prolifération, motilité et morphogenèse sur des cellules épithéliales. La signalisation de l'HGF/SF-MET est essentielle au cours du développement et sa dérégulation peut conduire au développement tumoral et à la progression métastatique. L'activation du récepteur MET par l'HGF/SF est classiquement associée à la survie cellulaire, en réponse à des stress variés. Cependant, nous avons montré qu'en absence d'HGF/SF, ces mêmes stress peuvent convertir le récepteur MET en facteur pro-apoptotique capable d'amplifier l'apoptose. En effet, MET est clivé de manière séquentielle par les caspases durant l'apoptose, sur son extrémité C-terminale puis dans sa région juxtamembranaire, générant un fragment p40 MET. La fonction apoptotique de p40 MET nécessite son activité kinase mais également sa dimérisation via son domaine C-terminal. D'autre part, nous avons montré que le récepteur MET est constitutivement clivé par des métalloprotéases dans son domaine extracellulaire, créant un fragment N-terminal soluble (MET-NTF) et un C-terminal membranaire (MET-CTF). Ce dernier est ensuite protéolysé par le complexe γ-secrétase, conduisant à la libération d'un fragment intracellulaire instable (MET-ICD), qui peut transloquer dans le noyau. De plus, l'inhibition des activités métalloprotéase et γ-secrétase empêche l'expression de c-Jun induite par l'HGF/SF. Nos résultats démontrent que les clivages protéolytiques du récepteur MET conduisent à la génération de différents fragments actifs qui redéploient le récepteur vers d'autres localisations cellulaires et qui diversifient ses réponses biologiques.
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Asses, Yasmine. "Conception par modélisation et criblage in silico d'inhibiteurs du récepteur c-Met." Phd thesis, Université Henri Poincaré - Nancy I, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00653609.
Full textAbstract:
L'enjeu des travaux effectués au cours de cette thèse est l'extraction in silico de molécules potentiellement intéressantes dans le processus d'inhibition du récepteur tyrosine kinase c-Met. La faculté de cette protéine à interagir dans les phénomènes d'embryogenèse et de réparation tissulaires rendent son inhibition cruciale dans les traitements contre les développements tumoraux où c-Met se trouve impliquée. Dans ce but, la stratégie que nous avons employée implique l'utilisation de plusieurs méthodes in silico de conception rationnelle de médicaments. Nous avons utilisé comme support les multiples structures cristallographiques publiées sur la ProteinData Base (PDB). Un travail de modélisation par homologie fut tout d'abord nécessaire pour combler les lacunes des structures cristallographiques collectées. Afin d'échantillonner au mieux l'espace conformationnel du récepteur kinase c-Met et de caractériser sa flexibilité, une longue campagne de simulation de Dynamique Moléculaire (DM) fut menée concernant les formes apo et holo des structures cristallographiques disponibles. Pour compléter ces simulations, une partie du travail consista à utiliser également la méthode des modes normaux de vibration (NM). De ces 2 approches (DM et NM), nous avons extrait un ensemble de 10 conformères considérés comme les plus représentatifs de l'espace conformationnel simulé pour la kinase c-Met et avons proposé un mode de fonctionnement de ce récepteur. Utilisant les conformations extraites de l'échantillonnage conformationnel, nous avons ensuite mené une importante campagne de criblage virtuel sur plusieurs chimiothèques constituant au total environ 70.000 composés. L'analyse des résultats de l'arrimage moléculaire nous a conduits à la sélection de plusieurs molécules intéressantes possédant théoriquement une bonne affinité pour la kinase c-Met. Ces molécules ont été soumises aux tests expérimentaux effectués par l'équipe de biologistes associée à nos travaux.
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Ding, Shunli. "Rôle du couple HGF/C-MET dans l'angiogenèse." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077188.
Full text
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Montagne, Rémi. "Effets des clivages du récepteur tyrosine kinase Met par les calpaïnes sur la motilité et la mort cellulaire." Thesis, Lille 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL10177/document.
Full textAbstract:
L’activation du récepteur tyrosine kinase Met par son ligand, l’Hépatocyte Growth Factor, induit des réponses cellulaires nécessaires au développement embryonnaire, comme la survie ou la migration. Cependant une dérégulation de sa signalisation favorise la tumorigenèse. Mon laboratoire a montré que le récepteur Met subit des clivages protéolytiques régulant son activité. Ainsi, le « PreSenilin-dependent Regulated Intramembrane Proteolysis », un double clivage par des métalloprotéases membranaires puis le complexe γ-sécrétase, contrôle sa demi-vie. Suite à un stress apoptotique, Met est clivé par les caspases en un fragment intracellulaire amplificateur d’apoptose. J’ai pu montrer que le récepteur Met est la cible d’une autre famille de protéases, les calpaïnes, qui réalisent deux clivages distincts en fonction du contexte cellulaire. En effet, la mutation R970C observée dans certains cancers ou une forte densité cellulaire induisent le clivage de Met en un fragment de 45 kDa, p45 Met, qui se relocalise dans le noyau et augmente la dispersion et la motilité cellulaire, suggérant un rôle dans la transformation cellulaire. D’autre part, lors d'un stress calcique induisant la nécrose, le récepteur Met est à la fois clivé par les calpaïnes et les métalloprotéases. Bien que les fragments générés ne semble pas amplifier la mort cellulaire, ce double clivage permet une dégradation efficace de Met et inhibe ainsi des signaux de survie transmis pas Met. L’ensemble de ces fragments est détecté dans des tumeurs pulmonaires surexprimant Met, indiquant que les clivages identifiés par notre laboratoire reflètent des mécanismes existant dans des conditions pathologiquesMet receptor activation by its ligand, Heptocyte Growth Factor, induces cell responses necessary for embryonic development such as cell survival or motility. However, its deregulation is involved in tumorigenesis. My laboratory previously showed that Met activity is regulated by proteolytic cleavage. Indeed, PreSenilin-dependent Regulated Intramembrane Proteolysis (or PS-RIP), two sequential cleavages mediated by membrane metalloproteases and the γ-secretase complex, controls Met half-life. Following apoptotic stress, Met is also cleaved by caspases into an intracellular fragment which amplifies apoptosis.I showed that Met is targeted by calpains, another protease family mediating two different cleavages in two different cellular contexts. Indeed, the R970C Met mutation or high cell density induces cleavage of Met into a fragment about 45kDa, p45 Met, which translocates in the nucleus and favors cell scattering and motility, suggesting it is involved in cell transformation. On the other hand, during necrosis induced by calcium stress, Met receptor is cleaved by both calpains and metalloproteases. Although the generated fragments do not seem to have biological properties, these two cleavages mediate an efficient degradation of Met receptor and consequently inhibiting of the survival signals it can provide. Interestingly, these fragments are detected in lung cancer samples overexpressing Met indicating that proteolytic cleavages of Met we identified have a pathological relevance
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Champagne, Audrey. "Transgéline dans la carcinogénèse colorectale induite par Met." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2015. http://hdl.handle.net/11143/7569.
Full textAbstract:
Plusieurs évidences cliniques et expérimentales soutiennent un rôle important de la dérégulation du récepteur à activité tyrosine kinase (RTK) Met dans l’étiologie et la progression du cancer colorectal (CCR). En effet, Met contrôle plusieurs fonctions biologiques nécessitant une étroite régulation telles que la prolifération, la survie cellulaire, la migration et l’invasion. Lorsqu’une forme constitutivement active de Met, Tpr-Met, est exprimée dans des cellules épithéliales intestinales (CEI), celles-ci se transforment et acquièrent des pouvoirs oncogéniques. Par des analyses de protéomique quantitative, notre équipe a démontré que la transformation induite par Tpr-Met dans les CEI était accompagnée d’une modulation des niveaux de protéines impliquées dans la régulation du cytosquelette, incluant une diminution de 31,2 fois de transgéline (TAGLN). Étant une protéine régulant plusieurs processus cellulaires de par sa capacité à réorganiser le cytosquelette d’actine, nous avons émis l’hypothèse que la perte de TAGLN dans le CCR serait due à la suractivation du récepteur Met et que celle-ci contribuerait aux fonctions oncogéniques de Met.
Nos travaux de recherche indiquent, pour la première fois, que Met régule négativement la protéine TAGLN de façon dépendante et indépendante de MEK, notamment par le recrutement des protéines Shc et Grb2 aux résidus tyrosine du récepteur. De plus, par la réexpression de TAGLN dans les CEI transformées par Tpr-Met, nous démontrons que la perte de TAGLN contribue aux fonctions oncogéniques de Met, telles que la croissance au-delà de la confluence et en indépendance d’ancrage, la migration, ainsi que la croissance de tumeurs in vivo chez la souris. De plus, cette étude valide cliniquement la corrélation inverse entre l’expression de Met et de TAGLN dans le CCR. Étonnamment, à des faibles niveaux d’expression de MET, l’expression de TAGLN est corrélée de façon négative avec la survie des patients. Au contraire, à des hauts niveaux de MET, l’expression de TAGLN ne permet pas une stratification des patients selon leur pronostic de survie.
En conclusion, nous démontrons que le RTK Met régule négativement TAGLN. Cependant, chez les patients où cette régulation n’a pas lieu, l’expression de MET protègerait ceux-ci d’un mauvais pronostic. Cette étude suggère que les niveaux de TAGLN et de MET pourraient représenter des biomarqueurs permettant d’identifier en clinique les patients atteints de CCR susceptibles de bénéficier de thérapies ciblant le récepteur Met.
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Gui, Yirui. "Régulation de la signalisation du récepteur MET par la protéine SOCS1 dans le carcinome hépatocellulaire." Thèse, Université de Sherbrooke, 2014. http://hdl.handle.net/11143/5390.
Full textAbstract:
Résumé : La répression fréquente du gène encodant pour le « suppressor of cytokine signaling 1 » (SOCS1) dans le carcinome hépatocellulaire (CHC) et la forte susceptibilité des souris déficientes pour SOCS1 à développer des tumeurs hépatiques expérimentales suggèrent que SOCS joue un rôle de suppresseur de tumeur. Cette notion est supportée par les études impliquant la répression de l’expression de SOCS1 via des évènements épigénétiques ou par les microARN dans plusieurs autres types de cancers. Les mécanismes moléculaires sous-jacents au rôle potentiel de suppresseur de tumeur de SOCS1 dans le foie demeurent à ce jour inconnus. Bien que les récepteurs à activité tyrosine kinase (RTK) sont reconnus pour induire l’expression de l’ARNm de SOCS1, le rôle et les mécanismes par lesquels SOCS1 peut réguler la signalisation des RTK sont incertains. Le RTK MET, qui a pour ligand le facteur de croissance des hépatocytes (HGF), régule plusieurs fonctions cellulaires normales. La dérégulation de la signalisation du récepteur MET joue des rôles importants dans la pathogenèse du CHC. Des études ont démontré que l’activation de MET promeut la prolifération, l’invasion et la migration des cellules cancéreuses du foie ainsi que leur dissémination métastatique. La signalisation aberrante de MET est un trait commun de plusieurs autres cancers et serait à l’origine de l’émergence de la résistance à la chimiothérapie. Dans ce projet, j’ai investigué les mécanismes moléculaires par lesquels SOCS1 régule l’activité du récepteur MET.
Mes résultats indiquent que le foie des souris Socs1[indice supérieur -/-]Ifng[indice supérieur -/-] se régénère plus rapidement que celui des souris contrôles. Suivant une stimulation au HGF, les hépatocytes issus des souris Socs1[indice supérieur -/-] Ifng[indice supérieur -/-] présentent une augmentation de la signalisation de MET, de la migration et de la prolifération cellulaires. L’expression exogène de SOCS1 dans différentes lignées cellulaires d’hépatocarcinomes humains et murins inhibe la signalisation induite par HGF. De plus, SOCS1 diminue la prolifération, la croissance indépendante de l’anchrage et la migration dans ces lignées de CHC in cellulo et réduit de façon significative leur croissance dans les essais de xénogreffes chez les souris immunodéficientes. Mes résultats suggèrent que l’activation de la signalisation HGF-MET induit la transcription du gène SOCS1, suivi par une interaction physique entre SOCS1 et MET. L’analyse de divers mutants de SOCS1 révèle que cette interaction implique principalement les domaines SH2 et « kinase inhibitory region » (KIR) de SOCS1. L’activité kinasique de MET est requise pour cette interaction puisque l’interaction entre SOCS1 et un mutant kinase-inactif de MET est fortement réduite. SOCS1 est aussi phosphorylé en aval de MET sur quatre résidus tyrosine (Tyr). Quoique ces résidus Tyr représentent théoriquement des sites d’interaction pour des protéines adaptatrices possédant des domaines de liaison aux phospho-Tyr, elles ne semblent pas impliquées dans l’interaction de SOCS1 avec MET. Je démontre également que SOCS1 induit l’ubiquitination de MET via l’élongation de chaînes de polyubiquitine de type K48, conduisant à sa dégradation par le protéasome. Cette modulation négative de MET par SOCS1 dans les cellules CHC survient indépendamment de la voie de dégradation lysosomale de Cbl qui est partagée par plusieurs autres RTK. // Abstract : Frequent repression of the gene coding for the suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) in hepatocellular carcinoma (HCC) and increased susceptibility of SOCS1 deficient mice to experimental hepatocarcinogenesis suggest a tumor suppressor role for SOCS1. This notion is supported by epigenetic and micro-RNA-mediated blockade of SOCS1 expression in several other cancers. Molecular mechanisms underlying the putative tumor suppressor function of SOCS1 in the liver have not been elucidated yet. Although receptor tyrosine kinases (RTK) can induce SOCS1 mRNA expression, the role and mechanisms of SOCS1 in regulating RTK signaling are not yet clear. c-Met is the RTK for hepatocyte growth factor (HGF) and mediates several normal cellular functions. HGF signaling and MET activation also play important roles in the pathogenesis of HCC. Experimental studies have shown that the activated MET promotes proliferation, invasion and migration of liver cancer cells and enhances metastasis. Aberrant MET signaling is a hallmark of many other cancers and underlies the emergence of chemoresistant clones. In this project, I investigated the molecular mechanisms by which SOCS1 regulates MET RTK activity. My results illustrate that the Socs1[superscript -/-]Ifng[superscript -/-] liver regenerates at a faster rate than the control one. Following HGF stimulation, hepatocytes from Socs1[superscrip -/-]Ifng[superscript -/-] mice display increased MET signaling, cell migration and proliferation. Forced expression of SOCS1 inhibits HGF-induced signaling pathways in different human or murine hepatoma cell lines. Furthermore, SOCS1 also decreases cell proliferation, anchorage-independent growth, and migration of HCC cell lines in cellulo, and results in significant inhibition of their growth as xenografts in immunodeficient mice. My findings show that activation of HGF-MET signaling results in transcriptional activation of SOCS1 gene, followed a physical interaction between SOCS1 and MET. Analysis of various SOCS1 mutants reveals that this interaction is mediated primarily via the SH2 and the kinase inhibitory region (KIR) domain of SOCS1. MET kinase activity is required for this interaction since SOCS1 binding to a kinase-dead MET mutant is dramatically reduced. MET promotes phosphorylation of SOCS1 on four tyrosine (Tyr) residues. Although these Tyr might represent potential binding sites for adaptors containing phospho-Tyr-binding domains, they do not appear to be involved in the interaction of SOCS1 with MET. I also show that SOCS1 induces polyubiquitination of MET via K48-ubiquitin chain elongation leading to its degradation by proteasomes. The SOCS1-mediated downmodulation of MET expression in HCC cells occurs independently of the Cbl-mediated lysosomal degradation pathway shared by many other RTKs. Taken together, my findings show that SOCS1 attenuates HGF-induced cellular functions by targeting the activated MET receptor for proteasomal degradation.
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Galoul, Mohamed Chérif. "Rôle de la protéine d'échafaudage Gab1 dans le pouvoir oncogénique du récepteur Met dans les cellules épithéliales intestinales." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2012. http://hdl.handle.net/11143/5555.
Full textAbstract:
Plusieurs évidences indiquent que de la dérégulation des récepteurs tyrosine kinase (RTK) joue un rôle clé dans l'étiologie et la progression du cancer colorectal (CCR). Notamment, des bénéfices ont été observés en clinique avec des agents ciblant le récepteur de EGF dans le traitement des CCR métastatiques avancés. Considérant l'hétérogénéité des RTK dérégulés dans le CCR, une approche thérapeutique alternative serait de plutôt cibler les protéines effectrices engagées par plusieurs RTK, notamment celles qui régulent des processus essentiels à la progression du CCR. Toutefois, le rôle des protéines de signalisation engagées par les RTK dans le CCR reste encore très peu défini. De récents travaux menés dans notre laboratoire ont démontré que l'activation oncogénique du RTK Met, le récepteur du facteur de croissance d'hépatocyte (HGF), confère aux cellules épithéliales intestinales non cancéreuses IEC-6, des propriétés angiogéniques, tumorigéniques et métastatiques in vitro et in vivo . L'activité biologique des RTK, telle que celle du récepteur Met, s'avère étroitement liée à leur capacité d'initier une variété de voies de signalisation intracellulaire par le biais du recrutement de protéines adaptatrices, dont les protéines Gab1 et Gab2 (Grb2-associated binder). Ainsi, le but de mon projet fut de valider l'hypothèse que le pouvoir oncogénique du récepteur Met dans les cellules épithéliales intestinales serait en partie dépendant de l'engagement des voies de signalisation des protéines Gab. Pour ce faire, nous avons utilisé une approche dominante négative, soit par l'expression du domaine MBD (Met-Binding Domain) de Gab1 dans les cellules IEC-6 transformées par la forme oncogénique du récepteur Met, Tpr-Met (Tpr-Met-IEC-6). Cette stratégie repose sur le fait que la région MBD de Gab1 renferme les deux motifs de liaison, un motif riche en proline qui lie les protéines Gab aux RTK par un mécanisme indirect dépendant, de Grb2, ainsi que le motif MBM (Met-Binding Motif) qui est unique à Gab1, et qui permet une interaction directe entre Gab1 et le récepteur Met. Mes résultats montrent que l'expression du domaine MBD de Gab1 dans les cellules TprMet-IEC-6 diminue la phosphorylation de la protéine Gab1 sur tyrosine, restaure la formation de contacts cellule-cellule et une morphologie épithéliale typique ainsi qu'augmente le niveau protéique du marqueur épithéliale E-cadhérine et sa relocalisation membranaire aux zones de contact cellule-cellule. De plus, les cellules Tpr-Met-IEC-6 qui expriment le MBD de Gab1 affichent en culture une capacité réduite à proliférer au-delà de la confluence et en absence d'ancrage à la matrice extracellulaire, et de migration, ainsi qu'une diminution de leur aptitude à former des tumeurs sous-cutanées in vivo dans les souris nues. L'ensemble de mes résultats démontre pour la première fois que le pouvoir oncogénique du récepteur Met dans les cellules épithéliales intestinales dépend en partie de l'engagement des voies de signalisation de Gab1. En considérant que tous les RTK dérégulés dans le CCR peuvent se lier aux protéines Gab, ou engager leurs voies de signalisation, nos résultats identifient ces dernières comme des cibles prometteuses pour le développement de nouveaux agents thérapeutiques contre le CCR.
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Saucier, Marc-André. "Le rôle des protéines d’échafaudage Gab dans la transformation des cellules épithéliales intestinales." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2014. http://hdl.handle.net/11143/5925.
Full textAbstract:
Des études cliniques indiquent que l’hétérogénéité des récepteurs tyrosine kinase (RTK) dérégulés dans le cancer colorectal (CCR) contribue à la résistance aux thérapies ciblant qu’un seul RTK. Une alternative serait de cibler les protéines effectrices engagées par plusieurs RTK régissant les processus clés à la progression du CCR, mais la signalisation des RTK dans le CCR reste peu définie. Des travaux réalisés au laboratoire ont démontré par une approche dominante négative que le pouvoir oncogénique du RTK Met chez les cellules épithéliales intestinales transformées par une forme active de Met (Tpr-Met-IEC-6) serait dépendant des protéines Gab (Grb2-associated binder). Cette approche reposait sur l’inhibition de l’interaction entres les protéines Gab et Met par l’expression du domaine de Gab1 renfermant un motif d’interaction indirect aux RTK, via la protéine Grb2, et le site de liaison direct, unique à Gab1, avec Met. Ainsi, cette approche ne permet pas de discerner les effets de Gab1 de ceux de Gab2 en aval de Met.
L’objectif de cette présente étude était de définir les rôles qui sont propres à Gab1 et à Gab2, en aval de Met, dans les cellules Tpr-Met-IEC-6. Pour ce faire, nous avons évalué l’impact d’une modulation de l’expression de Gab1 et de Gab2, par une approche d’interférence à l’ARN et de surexpression, sur les caractéristiques oncogéniques de ces cellules. De façon surprenante, nous démontrons que Gab1 affecte positivement l’expression Tpr-Met, la transformation morphologique ainsi que la croissance cellulaire. De plus, nous démontrons que la diminution ou la surexpression de Gab2 dans les cellules Tpr-Met-IEC-6 n’a aucun effet sur la morphologie, la croissance cellulaire, la capacité des cellules à croître au-delà de la confluence et sans ancrage à la matrice extracellulaire et enfin sur la migration.
En conclusion, mes travaux de recherche suggèrent que la protéine Gab1, et non Gab2, joue un rôle essentiel dans le pouvoir oncogénique de Met dans les cellules épithéliales intestinales. Ainsi, Gab1 et ses voies de signalisation pourraient représenter des cibles prometteuses pour l’élaboration de nouvelles thérapies contre le CCR.
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Carouge, Élisa. "Récepteur MET et fusions ETS : co-acteurs dans la progression du cancer de la prostate." Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2024. https://pepite-depot.univ-lille.fr/ToutIDP/EDBSL/2024/2024ULILS005.pdf.
Full textAbstract:
Le cancer de la prostate (CaP) a l'incidence la plus élevée parmi les cancers masculins dans les pays européens et américains. Dans les stades avancés de la maladie, le développement des métastases (osseuses dans 80% des cas) entraîne un taux de mortalité important. Le récepteur MET et les fusions de gènes ETS avec un promoteur hormono-dépendant sont des acteurs importants dans la progression du cancer de la prostate. Parmi les membres de la famille de facteurs de transcription ETS, ERG est retrouvé dans 60% des cas des fusions et ETV1 dans 10% des cas. MET est un récepteur à activité tyrosine kinase exprimé dans les stades avancés de la maladie, dans les tumeurs hormono-résistantes et les métastases osseuses. Les fusions ERG et ETV1 sont retrouvées tout au long de la maladie, allant des stades d'initiation jusqu'aux stades métastatiques. De façon intéressante, il existe de nombreux liens fonctionnels entre MET et ERG/ETV1 suggérant leur appartenance à la même voie de régulation. Le but de notre étude est de comprendre le rôle individuel du récepteur MET et des fusions ETS ainsi que leur collaboration dans la progression du CaP.Pour ce faire, nous avons mis en place des modèles cellulaires de CaP hormono-indépendants dans lesquels l'expression et l'activité du récepteur MET sont effectives et pour lesquels une surexpression de ERG ou ETV1 a été induite via une infection rétrovirale. Ces modèles ont été utilisés pour réaliser des tests phénotypiques de prolifération, migration ou encore invasion, une analyse transcriptomique comparative (RNAseq) et des tests in vivo chez des souris humanisées exprimant l'HGF humain.Les résultats que nous avons obtenus montrent que les facteurs de transcription ERG et ETV1 induisent des capacités migratoires et invasives plus importantes in vitro et que l'activation de la voie de signalisation du récepteur amplifie les effets. In vivo, ERG et ETV1 entraînent des volumes tumoraux plus importants après injection des cellules en sous-cutanée et l'application d'un traitement par un inhibiteur spécifique de MET réverse ces effets. Finalement, la réalisation d'une analyse transcriptomique, comparant les différents modèles, a permis d'identifier des gènes différentiellement exprimés selon la surexpression de ERG, de ETV1 et/ou de l'activation de la voie MET, gènes cibles signature pouvant potentiellement être impliqués dans la progression tumorale.Ainsi, les données obtenues montrent pour la première fois une collaboration entre le récepteur MET et les facteurs ERG/ETV1 pour induire des caractéristiques plus agressives dans des modèles de CaP. A terme, le projet vise à identifier des signatures moléculaires de cette coopération afin de mettre en lumière des outils de pronostic, diagnostic ou encore de thérapie cibléeProstate cancer (PCa) has the highest incidence of all male cancers in Europe and the USA. In the advanced stages of the disease, the development of metastases (bone metastases in 80% of cases) leads to a high mortality rate. MET receptor and ETS gene fusions with a hormone-dependent promoter are important actors in the progression of prostate cancer. Among the members of the ETS family of transcription factors, ERG is found in 60% of fusions and ETV1 in 10%. MET is a tyrosine kinase receptor expressed in the advanced stages of the disease, in hormone-resistant tumours and in bone metastases. ERG and ETV1 fusions are found throughout the disease, from initiation to metastatic stages. Interestingly, there are many functional links between MET and ERG/ETV1, suggesting that they belong to the same regulatory pathway. The aim of our study is to understand the individual roles of MET receptor and ETS fusions and their collaboration in PCa progression.To this end, we built hormone-independent CaP cellular models in which MET receptor expression and activity are effective and ERG or ETV1 overexpression has been induced via retroviral infection. These models were used to perform phenotypic tests of proliferation, migration and invasion, comparative transcriptomic analysis (RNAseq) and in vivo tests in humanised mice expressing human HGF. The results we obtained show that the transcription factors ERG and ETV1 induce greater migratory and invasive capacities in vitro and that activation of the receptor signalling pathway amplifies the effects. In vivo, ERG and ETV1 induce larger tumour volumes after subcutaneous injection of the cells, and treatment with a specific MET inhibitor reverses these effects. Finally, a transcriptomic analysis comparing the different models, permits to identify genes differentially expressed according to overexpression of ERG, ETV1 and/or activation of MET pathway, signature target genes potentially involved in tumour progression.The data obtained show, for the first time, a collaboration between MET receptor and ERG/ETV1 factors to induce more aggressive characteristics in PCa models. The project aims to identify the molecular signatures of this cooperation in order to highlight prognostic, diagnostic and targeted therapy tools
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Hedou, Élodie. "Modulation de la signalisation glutamatergique par l'activateur tissulaire du plasminogène et le récepteur MET dans le système nerveux central Tissue type plasminogen activator dependant crosstalk between MET and NMDA receptors containing gluN2B: possible involvement in autism spectrum disorders." Thesis, Normandie, 2020. http://www.theses.fr/2020NORMC410.
Full textAbstract:
L’activateur tissulaire du plasminogène (tPA) est une sérine protéase initialement découverte dans le compartiment vasculaire, qui constitue la molécule active de l’Actilyse®, médicament utilisé en clinique dans la phase aigüe de l’AVC ischémique pour ses propriétés fibrinolytiques. Le tPA est également exprimé dans le parenchyme cérébral où il peut moduler la neurotransmission glutamatergique de type NMDA (N-Methyl-D-Aspartate). Cette protéase existe sous deux formes actives : une forme simple chaîne (sc-tPA) et une forme double chaîne (tc-tPA). Malgré une activité fibrinolytique similaire, ces deux formes de tPA ont des rôles distincts. En effet, seul le sc-tPA peut potentialiser la mort neuronale de type excitotoxique induite par du NMDA. Ainsi, afin de mieux comprendre ces différences de signalisation entre les deux formes de tPA, nous avons utilisé des cultures primaires de neurones corticaux traitées avec du sc-tPA et du tc-tPA. Nos résultats ont mis en évidence l’implication d’un nouveau récepteur partenaire, le récepteur MET au sein de la signalisation glutamatergique de type NMDA. Nous avons montré que seul le tc-tPA active les récepteurs MET, conduisant à une augmentation de la proximité des récepteurs NMDA et MET à la surface neuronale. De plus, le tc-tPA diminue la phosphorylation de GluN2B et dégrade cette même sous-unité. En imagerie calcique, l’utilisation d’inhibiteurs sélectifs de MET réverse l’effet du tc-tPA sur la signalisation des récepteurs NMDA. En parallèle, l’étude transcriptomique menée sur des souris déficientes en tPA (tPA Null) a révélé une diminution du nombre de transcrits MET dans l’amygdale et le cortex entorhinal ainsi que des déficits comportementaux caractéristiques des troubles du spectre autistiqueTissue-type plasminogen activator (tPA) is a serine protease originally discovered in the vascular compartment. It is the active compound of Actilyse®, the only-approved drug for the clinical treatment of the acute phase of ischemic stroke thanks to its fibrinolytic properties. tPA is also expressed in the cerebral parenchyma where it modulates the NMDA (N-Methyl-D-aspartate) glutamatergic neurotransmission. This protease exists in two active forms: a single chain tPA form (sc-tPA) and a two chain tPA form (tc-tPA). Despite a similar fibrinolytic activity, these two forms have different roles within the parenchyma. Indeed, only sc-tPA potentiates excitotoxic neuronal death induced by NMDA. In order to better understand the signalling pathways involved by each forms of tPA, we used primary cultures of cortical neurons treated with sc-tPA or tc-tPA. Our results have highlighted the implication of a new partner receptor, MET, within NMDA glutamatergic signalling. We have shown that only tc-tPA activates MET receptors, leading to an increase of the proximity between MET and NMDA receptors at the neuronal surface. Moreover, tc-tPA decreases the GluN2B phosphorylation and allows the degradation of this subunit. By using calcium imaging, MET inhibitors reverses the effect of tc-tPA on NMDA receptors signalling. In parallel, a transcriptomic study realized on tPA-deficient mice (tPA Null) revealed a decrease of MET gene in two cerebral structures: amygdala and entorhinal cortex in addition to behavioural deficits which are features of autism spectrum disorder
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Tulasne, David. "Voies de signalisation induites par l'HGF/SF et son récepteur tyrosine kinase MET dans les cellules épithéliales MDCK." Lille 1, 1999. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1999/50376-1999-243.pdf.
Full textAbstract:
L'HGF/SF est un facteur de croissance mésenchymateux, dont le récepteur tyrosine kinase MET est présent majoritairement sur les cellules d'origine épithéliale. Sur les cellules en culture, HGF/SF est capable d'induire des réponses variées comme la prolifération, la dispersion et la morphogenèse de branchement. Cependant, les mécanismes intracellulaires mis en jeu par le couple HGF/SF-MET sont encore mal connus. Dans un premier temps, nous avons établi un modèle de signalisation de l'HGF/SF dans les cellules épithéliales MDCK. L'HGF/SF est capable d'induire une réponse transcriptionnelle via RAS et le facteur de transcription ETS1, permettant l'activation de promoteurs contenant des sites composites EBS/AP1. Cette mise en jeu fonctionnelle de ETS1 par l'HGF/SF a été associée à des résultats décrivant l'augmentation de l'expression de ETS1, lors de la dispersion des cellules MDCK induite par l'HGF/SF. Ensuite, nous avons évalué l'implication des résidus tyrosines autophosphorylés de MET, lors de cette réponse transcriptionnelle RAS-dépendante. Nos résultats montrent que des récepteurs chimères TRK-MET, mutes sur les quatre résidus tyrosines de la partie C-terminale, induisent efficacement l'activation de la voie RAS-ERK et la dispersion, alors que deux de ces résidus sont indispensables pour le recrutement de nombreuses protéines de signalisation. De façon similaire, dans les fibroblastes, l'étude de formes constitutivement activées de MET, nous a permis de montrer que les tyrosines de l'extrémité C-terminale ne sont pas requises pour la réponse transcriptionnelle RAS-dépendante, alors qu'elles le sont pour la transformation. Nos résultats remettent en question les mécanismes de signalisation initiés par MET, de même que leur implication dans les réponses biologiques et permettent d'envisager la caractérisation de mécanismes de signalisation originaux et l'identification de nouveaux partenaires pour le récepteur MET.
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Simonneau, Claire. "Mécanismes d'activation du récepteur tyrosine kinase MET par son ligand l'HGF/SF : rôles des domaines N et K1." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S071.
Full textAbstract:
L’HGF/SF (Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor) est le ligand du Récepteur Tyrosine Kinase (RTK) MET. Ce couple ligand-récepteur joue un rôle essentiel dans de nombreux processus biologiques tels que l’embryogenèse, la régénération tissulaire et l’angiogenèse. Comme pour de nombreux RTK, la dérégulation de l’activité de MET est associée à la progression et l’invasion tumorales. Bien que le récepteur MET ait été intensivement étudié au cours de ces dernières décennies, les processus moléculaires conduisant à son activation par l’HGF/SF restent encore mal connus et controversés.NK1, un variant naturel de l’HGF/SF, comprenant la partie N-terminale (N) et le premier domaine kringle (K1) de l’HGF/SF, possède une activité agoniste. En effet, NK1 dimérise spontanément en position « tête-bêche » et est considéré aujourd’hui comme la structure minimale permettant la dimérisation de MET et son activation. Afin de déterminer leur contribution respective, les domaines N et K1 isolés ont été produits par voie recombinante et ne montrent aucune ou qu’une très faible activité agoniste respectivement. Une présentation monovalente de ces domaines au récepteur MET ne semble donc pas pertinente pour déterminer leur fonction.Par conséquent, nous avons souhaité générer des complexes multivalents mimant le positionnement des domaines N et K1 au sein du dimère naturel. En tirant partie de la « One-Pot SEA ligation » développée au laboratoire, ces domaines ont été synthétisés par voie chimique et fonctionnalisés avec une extrémité C-terminale biotinylée (NB et K1B). En utilisant la streptavidine (S) comme plateforme de multimérisation, nous avons généré des complexes semi-synthétiques NB/S et K1B/S et déterminé les propriétés biologiques de ces nouvelles constructions multivalentes.L’ensemble des analyses de signalisations cellulaires et phénotypiques démontre sans équivoque que le complexe K1B/S est capable de mimer les réponses biologiques induites par l’HGF/SF et son variant NK1. De plus, le complexe K1B/S, injecté dans la circulation systémique, déclenche la signalisation de MET dans le foie. L’utilisation de ce complexe K1B/S nous a permis de démontrer que deux domaines K1, correctement assemblés et orientés, constituent l'interface minimale et suffisante requise pour déclencher une pleine activation de MET. A l’inverse, les premières données fonctionnelles ont démontré que le complexe NB/S ne lie pas directement MET mais utilise les héparanes sulfates comme pont moléculaire.Ces études utilisant de nouvelles configurations structurales pourraient donc servir de modèle de base au développement de nouveaux agonistes de MET dans le cadre de thérapies régénératives ou préservatrices, mais aussi d’antagonistes dans le cadre de thérapies anticancéreuses cibléesHepatocyte Growth Factor/Scatter Factor (HGF/SF) and its receptor tyrosine kinase (RTK) MET play an essential role in embryogenesis, tissue regeneration and angiogenesis. As observed for many others RTK, MET is also strongly involved in tumor progression and invasion mechanisms. Although numerous biological and structural approaches have been focused on the molecular processes leading to MET activation by HGF/SF, the HGF/SF-MET interaction framework remains only partially understood due to the complexity of the multivalent ligand-receptor binding events.NK1, a naturally occurring splice variant of HGF/SF, comprising the N-terminal part and the first kringle domain (K1) of HGF/SF, exhibits a partial agonistic activity toward MET. Indeed, in presence of heparan sulfates, NK1 self-associates into a “head-to-tail” dimer and is considered as the minimal structural module able to trigger MET dimerization and activation. Nevertheless, the individual role of N and K1 domains in the dimerization/activation of MET remain elusive.Stimulated by the conviction that monomeric N and K1 domains are not suitable for studying the functioning of HGF/SF-MET, we produced, by total chemical synthesis, biotinylated analogs of the N and K1 domains (NB and K1B). By combining with streptavidin (S), we engineered the semisynthetic constructs NB/S and K1B/S in order to determine the biological properties of these new multivalent architectures of N and K1 domains.In vitro, as observed with HGF/SF or NK1, we show that the K1B/S complex is able to fully activate MET signaling cascades to promote scattering, morphogenesis and survival phenotypes in various cell types. Even more, the K1B/S complex stimulates angiogenesis in vivo and, when injected systemically, triggers MET signaling in the liver. The use of this K1B/S complex allows us to demonstrate that two K1 domains, correctly assembled and oriented, constitute the minimal unit for sufficient MET activation. In contrast, first in vitro data have demonstrated that NB/S complex does not bind directly MET as previously thought, but rather, uses heparan sulfates as a molecular bridge.We envision these new structural configurations serving as a template for both the rational design of potent MET agonists (e.g. using K1B/S for regenerative therapies) and antagonists (e.g. using NB/S for targeted cancer therapies)
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Duclos, Catherine. "La protéolyse de SNX2 par les caspases empêche l’assemblage du complexe rétromère et augmente la signalisation du récepteur Met." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2017. http://hdl.handle.net/11143/10572.
Full textAbstract:
Durant l’exécution de l’apoptose, plus de 2 000 protéines sont protéolysées par les caspases, une famille de protéases à cystéine. Le clivage de plusieurs d’entre elles a pour effet d’interrompre les processus régulant le trafic intracellulaire. Durant mes études, je me suis intéressée à deux substrats potentiels des caspases, soit les sorting nexins SNX1 et SNX2. Leur clivage en N-terminal avait auparavant été identifié par protéomie dans des extraits cellulaires apoptotiques, respectivement aux sites LFAD91[flèche vers le bas]A et VSLD84[flèche vers le bas]S. Conjointement avec le complexe rétromère, SNX1 et SNX2 jouent un rôle essentiel dans le transport rétrograde de cargos, tel le récepteur lysosomal CI-MPR, des endosomes vers le TGN, évitant ainsi leur dégradation aux lysosomes. Notamment, l’association entre SNX1 et SNX2 et le complexe rétromère, via la sous-unité Vps35, requerrait leur domaine N-terminal, or, celui-ci est clivé durant l’apoptose. Dans le but de déterminer l’impact de la protéolyse de SNX1 et SNX2 sur la fonction du complexe rétromère et le transport rétrograde, nous avons étudié leur clivage par les caspases. Nos résultats indiquent qu’in vitro, les caspases initiatrices 8, 9 et 10 protéolysent SNX1 et SNX2 tandis que seule la caspase-6 exécutrice clive SNX2. Plusieurs fragments de SNX1 sont générés par le clivage à 16 sites, dont le site LFAD91[flèche vers le bas]A en N-terminal ainsi que plusieurs suivant un résidu glutamate. Durant l’apoptose, SNX2 est entre autres clivée par la caspase-6, et ce au site VSLD84[flèche vers le bas]S en N-terminal. Nous avons par la suite étudié l’effet de la protéolyse de SNX1 et SNX2 sur la fonction du complexe rétromère. Nos résultats démontrent que SNX2 tronquée, imitant le clivage au site VSLD84[flèche vers le bas]S, n’interagit plus avec Vps35, la sous-unité centrale du complexe rétromère. De plus, la déplétion de SNX1 et SNX2, récapitulant potentiellement leur protéolyse, a pour effet de délocaliser Vps26, une autre sous-unité du complexe rétromère. Par ailleurs, nous avons évalué l’effet de la protéolyse de SNX2 sur la régulation du récepteur Met, lequel serait régulé entre autres par SNX1 et SNX2. La déplétion de SNX2 induit une augmentation de la phosphorylation du récepteur Met et de ERK1/2 suivant sa stimulation. De plus, l’ARNm de SNX1 et SNX2 sont tous deux réduits dans les tissus de tumeurs de patients atteints du cancer colorectal (CCR) et une diminution des niveaux de SNX2 corrèle avec une hausse de mortalité chez ces patients. Pour conclure, notre étude démontre un effet direct de la protéolyse de SNX2 sur le complexe rétromère durant l’apoptose et suggère un lien entre SNX2 et la pathogenèse du CCR.Abstract: During the execution of apoptosis, more than 2,000 proteins are proteolysed by caspases, a family of cysteine proteases. The cleavage of several of them results in the interruption of intracellular trafficking processes. During my studies, I investigated two potential caspases substrates, namely the sorting nexin SNX1 and SNX2. Their cleavage at their N-terminus has previously been identified in apoptotic cell lysates by proteomics, respectively at LFAD91[down arrow]A and VSLD84[down arrow]S sites. Together with the retromer complex, SNX1 and SNX2 play an essential role in the retrograde transport of cargos, such as the lysosomal receptor CI-MPR, from endosomes to TGN, thus avoiding their degradation by lysosomes. In particular, the association between SNX1 and SNX2 and the retromer complex, via the Vps35 subunit, seems to require their N-terminal domain, which is thought to be cleaved during apoptosis. To determine the impact of SNX1 and SNX2 proteolysis on the function of the retromer complex and retrograde transport, we have first studied their cleavage by caspases. Our results indicate that in vitro, initiator caspases 8, 9, and 10 proteolyze SNX1 and SNX2 while only executioner caspase-6 cleaves SNX2. Several fragments of SNX1 are generated by the cleavage of up to 16 sites, including at the N-terminus LFAD91[down arrow]A site and following glutamate residues. During apoptosis, SNX2 is directly cleaved by caspase-6 at the site VSLD84[down arrow]S in its N-terminus. We next investigated the effect of SNX1 and SNX2 proteolysis on the function of retromer complex. Our results demonstrate that truncated SNX2, mimicking cleavage at the VSLD84[down arrow]S site, no longer interacts with Vps35, the central subunit of retromer complex. Furthermore, depletion of SNX1 and SNX2, potentially recapitulating their proteolysis, redistributes Vps26, another retromer subunit. In addition, we evaluated the effect of SNX2 proteolysis on the regulation of Met receptor, which has been shown to be regulated by SNX1 and SNX2. SNX2 depletion induces an increase in Met and ERK1/2 phosphorylation after stimulation. In addition, both SNX1 and SNX2 mRNAs are reduced in tumor tissues of colorectal cancer patients and decreased expression levels of SNX2 correlates with increased mortality. In conclusion, our study demonstrates a direct effect of SNX2 proteolysis on retromer complex association during apoptosis and suggests a link between SNX2 and the pathogenesis of colorectal cancer.
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Duplaquet, Leslie. "Implication du récepteur à activité tyrosine kinase (RTK) MET sur la balance survie/apoptose et identification de nouvelles mutations de RTKs dans les cancers colorectaux métastatiques." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S031/document.
Full textAbstract:
Les RTKs sont impliqués dans le dialogue au sein des tissus par la régulation de nombreuses réponses cellulaires dont la survie, la prolifération ou la mobilité. Dans les cancers, ces récepteurs sont fréquemment dérégulés notamment par des mutations activatrices. Ainsi, la suractivation des RTKs induit la transformation cellulaire et la tumorigenèse en favorisant par exemple la survie cellulaire. Depuis le début des années 2000, le développement de molécules inhibitrices de l’activité tyrosine kinase (TKI) et d’anticorps bloquant l’interaction ligand/récepteur ont montré que les RTKs représentent des cibles thérapeutiques majeures dans le traitement des cancers.MET est un RTK exprimé par les cellules épithéliales, dont le ligand est l’Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor (HGF/SF). En plus de son rôle pro-survie, MET peut également favoriser l’apoptose en absence de ligand et sous l’effet d’un stress. MET est alors clivé par les caspases et libère dans le cytosol un fragment de 40 kDa nommé p40MET. Ce fragment active la voie intrinsèque de l’apoptose en causant la perméabilisation des mitochondries. Cependant, les mécanismes moléculaires responsables de cette perméabilisation et l’impact physiologique de la fonction pro-apoptotique de MET étaient encore inconnus.Mon travail de thèse a permis de démontrer que le fragment p40MET se localise dans la région des MAMs, constituant l’interface entre le réticulum endoplasmique et les mitochondries, où il favorise un transfert de calcium entre les deux organites. Ce transfert déclenche une surcharge de calcium dans les mitochondries, responsable de leur perméabilisation. De plus, nous avons développé une lignée de souris transgéniques dans lesquelles MET est muté sur l’un des sites caspases. Ces souris sont incapables de produire le fragment p40MET pro-apoptotique. Ce modèle nous a permis de démontrer l'importance du clivage de MET dans l’amplification de l’apoptose in vivo. Ainsi, nos travaux apportent les premières preuves de la fonction de MET en tant que récepteur à dépendance au sein d’un organisme et décrivent un nouveau mécanisme de signalisation pro-apoptotique par la dérégulation des flux calciques.Ces dernières années, la découverte de mutations touchant les RTKs dans les cancers a augmenté de façon exponentielle. Toutefois, pour une grande majorité de mutations, leurs conséquences fonctionnelles sont totalement inconnues. Ainsi, en parallèle de mon principal sujet de thèse nous avons évalué la pertinence biologique et clinique des mutations de RTK identifiées par séquençage haut débit à partir d’échantillons de patients. Le séquençage de tissus sains, de tumeurs colorectales et de métastases hépatiques de 30 patients a permis d'identifier de nombreuses mutations somatiques. Parmi elles, certaines affectent le domaine kinase des récepteurs et sont présentes à la fois dans les tumeurs et les métastases. L’analyse fonctionnelle que j’ai menée sur 7 de ces mutations révèle qu’elles ne provoquent ni la suractivation de la kinase ni la transformation des fibroblastes NIH3T3. Au contraire, deux mutations de RTKs provoquent une inhibition drastique de leur activité kinase. Ces résultats démontrent que ces variants de RTK ne sont pas des cibles appropriées pour l’utilisation de TKI à des fins thérapeutiques et démontre l’intérêt de coupler la recherche de variants à des études fonctionnelles [...]RTKs are involved in tissue dialogue by regulating many cellular mechanisms such as survival, proliferation or mobility. In cancers, these receptors are frequently deregulated, as a result of various molecular alterations leading to their activation. RTKs overactivation induces cell transformation and tumorigenesis notably by promoting survival. Since the early 2000s, the development of tyrosine kinase inhibitors (TKI) demonstrated that RTKs represent major therapeutic targets in cancer treatment.MET receptor and its ligand the Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor (HGF/SF) are known to promote survival of many epithelial structures during embryogenesis and later during adulthood. Besides pro-survival role of the ligand-activated MET, the receptor is also able to promote apoptosis, which has led to classify it within the dependence receptor family. Indeed, in absence of its ligand and under stress conditions, MET is cleaved by caspases leading to the production of an intracellular fragment of nearly 40 kDa named p40MET able to amplify apoptosis. This fragment activates the intrinsic pathway of apoptosis by causing mitochondrial permeabilization. However, the molecular mechanisms involved in this permeabilization and the physiological impact of the pro-apoptotic function of MET were still unknown.My PhD work has evidenced p40MET localization at the MAM microdomain and characterized a calcium transfer from the endoplasmic reticulum to the mitochondria triggered by p40MET. This calcium transfer triggers a calcium overload in mitochondria leading to their membrane permeabilization and apoptosis. In addition, we engineered a knock-in mouse model expressing mutated MET at the C-terminal caspase site. These mice are unable to produce the pro-apoptotic p40MET fragment. This model allowed us to assess the importance of MET cleavage in physiological apoptosis in vivo. Altogether, our work brings the first evidence for MET function as a dependence receptor in an organism and demonstrates a new signaling mechanism involved in apoptosis amplification by p40MET through calcium flux deregulation. This process may be relevant in the physio-pathology of organs where MET is expressed.In recent years, the discovery of mutations affecting RTKs in cancers has increased exponentially. However, for a large majority of mutations, their functional consequences are totally unknown. Thus, in parallel of my main thesis topic, we evaluated the biological and clinical relevance of RTKs mutations identified by high throughput sequencing from patient samples. Sequencing of healthy tissues, colorectal tumours and liver metastases of 30 patients has identified many somatic mutations. Some of them affect the receptor kinase domain and are present in both tumors and metastases. Functional analysis of 7 of these mutations shows that they do not cause neither kinase overactivation nor transformation of NIH3T3 fibroblasts. On the contrary, two RTK mutations cause drastic inhibition of the corresponding kinase activity. These findings indicate that these RTK variants are not suitable targets for TKI. Therefore, it appears important to set up reliable functional assays to interpret identified variants and classify them as pathogenic or neutral.In conclusion, my work opens up new perspectives on therapeutic strategies targeting RTKs in cancers. First of all, the pro-apoptotic capacities of some RTKs are undoubtedly a brake to tumorigenesis, and their stimulations could reinforce the effectiveness of anti-cancer therapies. On the other hand, we have shown that RTKs mutations in the kinase domain do not necessarily lead to overactivation of the receptor suggesting that they are probably not involved in tumorigenesis and that treatment with TKIs targeting them would be ineffective. This functional information could notably influence the choice of a suitable targeted therapy
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Chabot, Thomas. "Modulation de l'activité du Rad51 par le récepteur tyrosine kinase c-Met dans la réparation des cassures double-brin de l'ADN." Thesis, Nantes, 2020. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=360755d5-6a18-407f-9af7-fe215a83747f.
Full textAbstract:
L'instabilité génomique due à la dérégulation des voies de réparation de l'ADN peut être à l’initiation de cancer et entraîner par la suite une résistance à la chimiothérapie et à la radiothérapie. La compréhension de ces mécanismes biologiques est donc essentielle dans la lutte contre le cancer. RAD51 est la protéine centrale de la voie de réparation des cassures double-brin de l'ADN par recombinaison homologue. Cette réparation conduit à une réparation fidèle de l'ADN. L'activité recombinase de la protéine RAD51 est finement régulée par des modifications post- traductionnelles telles que la phosphorylation. Au cours de la dernière décennie, de plus en plus d’études, suggèrent l'existence d'une relation entre les récepteurs à activité tyrosine kinases, souvent suractivés et impliqués dans l’agressivité et la prolifération cancéreuse, et la réparation de l'ADN. Parmi ces récepteurs à activité tyrosine kinases, le duo c-Met/HGF-SF est souvent muté, sur exprimé ou activé constitutivement dans de nombreux cancers et son inhibition a été montrée comme induisant une diminution de la réparation par recombinaison homologue. Au travers de cette thèse, nous montrons pour la première fois que c-Met est capable de phosphoryler la protéine RAD51 sur quatre résidus tyrosine localisés principalement dans l'interface monomère- monomère du nucléofilament de la recombinase humaine. Nous montrons l’implication de ces phosphorylations sur l’activité de RAD51 dans les différentes étapes de la recombinaison homologue. L'ensemble des résultats obtenus suggère le rôle possible de ces modifications dans la régulation de RAD51 et souligne l'importance de c-Met dans la réponse aux lésions de l'ADNGenomic instability due to deregulation of DNA repair pathways may be at the onset of cancer and subsequently lead to resistance to chemotherapy and radiotherapy. Understanding these biological mechanisms is therefore essential in the fight against cancer. RAD51 is the core protein of the homologous recombinant double-stranded DNA repair pathway. This repair leads to faithful DNA repair. The recombinase activity of the RAD51 protein is finely regulated by post-translational modifications such as phosphorylation. Over the last decade, more and more studies have suggested the existence of a relationship between receptors with tyrosine kinase activity, which are often overactivated and involved in aggressiveness and cancer proliferation; and DNA repair. Among these receptors with tyrosine kinase activity, the c-Met/HGF-SF duo is often mutated, over-expressed or constitutively activated in many cancers and its inhibition has been shown to induce a decrease in repair by homologous recombination. Through this thesis, we show for the first time that c-Met is able to phosphorylate the RAD51 protein on four tyrosine residues located mainly in the human recombinase nucleofilament monomer- monomer interface. We show the implication of these phosphorylations on the activity of RAD51 in the different steps of homologous recombination. All the results obtained suggest the possible role of these modifications in the regulation of RAD51 and underline the importance of c-Met in the response to DNA damage
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Guérin, Célia. "Caractérisation de nouvelles mutations activatrices dépendantes de l'HGF dans le lobe N-terminal du domaine kinase du récepteur MET dans le cancer du rein héréditaire." Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2023. https://pepite-depot.univ-lille.fr/ToutIDP/EDBSL/2023/2023ULILS074.pdf.
Full textAbstract:
Les thérapies ciblées révolutionnent actuellement la prise en charge des patients atteints de cancer, à la condition qu’ils présentent une altération moléculaire ciblable responsable de la progression tumorale. Les récepteurs à activité tyrosine kinase (RTK) présentant des mutations activatrices sont les cibles majeures des thérapies ciblées avec, comme exemple représentatif, l’EGFR dont les mutations conduisent à son activation constitutive le rendant indépendant d’une stimulation par son ligand.Le récepteur MET, un autre RTK de cette famille, présente des mutations activatrices dans le cancer du rein et le cancer du poumon. En effet, le carcinome rénal papillaire de type I (HPRC), un cancer héréditaire peu fréquent, a la particularité de présenter dans plus de 80 % des cas des mutations activatrices de MET. En revanche, dans le cancer du poumon non à petites cellules (CBNPC), les mutations de MET conduisent au saut de l’exon 14 codant pour le domaine juxtamembranaire (mutations MET ex14). Ce saut d’exon conduit à la perte du domaine juxtamembranaire, un domaine régulateur impliqué dans la régulation négative du récepteur. De façon originale par rapport à d’autres mutations de RTK, ces mutations nécessitent toujours une stimulation par l’HGF, le ligand de MET, plaçant la production d’HGF comme un paramètre à considérer dans la stratification des patients pouvant bénéficier de thérapies ciblées.Des inhibiteurs de tyrosine kinase (TKI) dirigés contre MET ont été approuvés très récemment pour une utilisation en clinique, offrant un véritable espoir pour les patients présentant ces mutations.Grâce au développement du séquençage haut-débit pour le diagnostic et l’émergence de nouvelles mutations de résistance suite aux traitements par les thérapies ciblées, le spectre des mutations affectant les RTK s’élargit considérablement. L’enjeu actuel n’est plus la détection de ces mutations mais leur interprétation fonctionnelle, pouvant démontrer leur caractère activateur ou leur ciblage par des TKI.Dans ce contexte, mon objectif de thèse a été d’exploiter les données de séquençage de patients souffrant d’un HPRC ou d’un CBNPC afin d’identifier de nouvelles mutations activatrices de MET et de caractériser leurs mécanismes d’activation afin de déterminer leur éligibilité pour un traitement potentiel par des TKI.Grâce à une collaboration avec l'Institut Gustave Roussy qui centralise les données de séquençage des patients atteints d’HPRC, nous avons identifié dans une cohorte de 158 patients, 8 mutations non décrites jusqu'à présent, touchant le domaine extracellulaire (V37A et R426P), le domaine juxtamembranaire (S1018P et G1086E) et le lobe N-terminal de la kinase de MET (H1086L, I1102T, C1125G et L1130S). En parallèle, grâce à notre collaboration avec le CHU de Lille, qui centralise les données de 2808 patients atteint d’un CBNPC, nous avons identifié 2 mutations du domaine kinase non décrites.Dans un premier temps, nous avons démontré dans un modèle de transformation de fibroblastes que les quatre mutations du lobe N-terminal, répertoriées dans les HPRC, sont potentiellement des mutations activatrices de MET. De façon intéressante, bien qu’elles soient localisées dans la kinase, ces mutations conservent une dépendance à l’HGF pour induire la transformation cellulaire. De plus, ces quatre mutations sont sensibles aux TKI dirigés contre MET.Dans un second temps, afin de mieux caractériser ces nouvelles mutations activatrices, nous avons établis des lignées cellulaires épithéliales T47D exprimant deux des nouvelles mutations activatrices (H1086L et I1102T) que nous avons comparé à MET sauvage et MET ex14, connue pour conserver sa dépendance à l’HGF. Nos résultats confirment que ces deux mutations nécessitent une activation par l’HGF pour l’activation des voies de signalisation en aval et l’induction de réponse comme la mobilité cellulaire [...]Targeted therapies are currently revolutionizing the management of cancer patients, provided they present a targetable molecular alteration responsible for tumor progression. Receptor tyrosine kinases (RTKs) with activating mutations are major targets of targeted therapies, with EGFR as a representative example, whose mutations lead to its constitutive activation, making it independent of stimulation by its ligand.The MET receptor, another RTK in this family, has activating mutations in kidney and lung cancer. Indeed, type I papillary renal cell carcinoma (HPRC), an uncommon hereditary cancer, is unique in that over 80% of cases have MET activating mutations. In contrast, in non-small cell lung cancer (NSCLC), MET mutations lead to skipping of exon 14 encoding the juxtamembrane domain (MET ex14 mutations). This exon skipping leads to the loss of the juxtamembrane domain, a regulatory domain involved in the negative regulation of the receptor. In an original way from other RTK mutations, these mutations always require stimulation by HGF, the ligand of MET, making HGF production a parameter to be considered in the stratification of patients eligible for targeted therapies.Tyrosine kinase inhibitors (TKIs) directed against MET have very recently been approved for clinical use, offering real hope for patients with these mutations.Thanks to the development of high-throughput sequencing for diagnosis and the emergence of new resistance mutations following treatment with targeted therapies, the spectrum of mutations affecting TKIs is expanding considerably. The current challenge is no longer the detection of these mutations, but their functional interpretation, which can demonstrate their activating character or their targeting by TKIs.In this context, my thesis objective was to exploit sequencing data from patients suffering from HPRC or NSCLC to identify new MET activating mutations and characterize their activation mechanisms in order to determine their eligibility for potential treatment by TKIs.Thanks to a collaboration with the Institute Gustave Roussy, which centralizes sequencing data from HPRC patients, we have identified 8 previously undescribed mutations in a cohort of 158 patients, affecting the extracellular domain (V37A and R426P), the juxtamembrane domain (S1018P and G1086E) and the N-terminal lobe of MET kinase (H1086L, I1102T, C1125G and L1130S). In parallel, thanks to our collaboration with the Lille University Hospital, which centralizes data on 2808 NSCLC patients, we have identified 2 undescribed kinase domain mutations.First, we demonstrated in a fibroblast transformation model that the four N-terminal lobe mutations identified in HPRC are potential MET-activating mutations. Interestingly, although localized to the kinase, these mutations retain a dependence on HGF to induce cell transformation. Moreover, all four mutations are sensitive to TKIs directed against MET.In a second step, to better characterize these new activating mutations, we established T47D epithelial cell lines expressing two of the new activating mutations (H1086L and I1102T), which we compared with wild-type MET and MET ex14, known to retain its dependence on HGF. Our results confirm that both mutations require activation by HGF for activation of downstream signaling pathways and induction of responses such as cell motility. Transcriptomic analysis reveals significant similarities between the transcriptional programs of the MET I1102T, H1086L and MET exon14 mutations, highlighting their involvement in extracellular matrix remodeling and invasion. Xenografts of cells expressing these new mutations in mouse models demonstrate their ability to promote tumor growth [...]
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Villalobos, Hernandez Alberto. "Role of suppressor of cytokine signalling 1 (SOCS1) in the pathogenesis of prostate cancer." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2016. http://hdl.handle.net/11143/11618.
Full textAbstract:
Le cancer de la prostate (PCa) est le deuxième cancer le plus courant chez les hommes au niveau mondial. Le suppresseur de la signalisation des cytokines 1 (SOCS1) est considéré comme un suppresseur de tumeur en raison de la fréquente répression épigénétique de ce gène dans de nombreux cancers. Il a été reporté que SOCS1 inhibait l’activation de STAT3 induite par l’IL-6, ainsi que les cyclines et les kinases dépendantes des cyclines dans les cellules malignes de la prostate. D’autre part, il a été montré que SOCS1 n’était pas essentiel lors du contrôle de la signalisation de l’IL-6 dans les hépatocytes dépourvus de cette protéine, cependant elle est essentielle pour atténuer la signalisation du facteur de croissance des hépatocytes (HGF) via son récepteur MET. MET est un récepteur de tyrosine kinases qui est surexprimé dans le PCa agressif et métastatique. Notre hypothèse de recherche propose que la répression de SOCS1 par méthylation du promoteur et la dérégulation de l’expression de MET et de sa signalisation, sont des mécanismes pathogéniques liés au développement et à la progression du PCa. Nous avons généré des lignées de cellules PC3 et DU145 stables exprimant SOCS1. Les cellules ont été stimulées avec HGF et l’activation des voies de signalisation a été évaluée par immunobuvardage. Des essais in vitro de migration, de prolifération et d’invasion ont été effectués en présence de HGF. Des gènes de transition épithélio-mésenchymateuse ont été évalués par PCR quantitatif en présence ou non du facteur de croissance. Les cellules du PCa transfectées ou pas avec SOCS1 ont été inoculées dans des souris NOD SCID gamma de façon sous-cutanée ou orthoptique afin d’évaluer respectivement la croissance tumorale et la formation de métastases. Les tumeurs reséquées ont été analysées histologiquement et biochimiquement. Nos résultats montrent que SOCS1 atténue l'activation de MET induite par HGF et la phosphorylation d’ERK dans les cellules PC3, ainsi que la phosphorylation d’ERK et d’AKT dans les cellules DU145. SOCS1 inhibe également la prolifération cellulaire induite par HGF, ainsi que la migration et l’invasion in vitro. De plus, SOCS1 réduit l’expression des gènes de transition épithélio-mésenchymateuse impliqués dans la dégradation des composants de la matrice extracellulaire dans les cellules DU145 mais pas dans les cellules PC3. La surexpression de SOCS1 a stimulé l’augmentation de déposition de collagène, in vivo. Les tumeurs formées par les cellules exprimant SOCS1 étaient de taille significativement plus petites avec une réduction de la prolifération comparé aux tumeurs provenant des cellules contrôles. En outre, SOCS1 a inhibé la formation de métastases à distance dans un modèle orthotopique. En conclusion, nous suggérons que SOCS1 est un suppresseur de tumeur indispensable de la prostate, et qu’au moins une partie de sa fonction a lieu via la régulation négative de la signalisation du récepteur MET.Abstract : Prostate cancer (PCa) is the second most common cancer among men worldwide. Suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) is considered a tumor suppressor due to frequent epigenetic repression of the SOCS1 gene in several human malignancies. Inactivation of SOCS1 also occurs in PCa by gene methylation and micro-RNA-mediated repression. SOCS1 has been reported to inhibit IL-6-induced STAT3 activation and down-regulates cyclins and cyclin-dependent kinases in PCa cells. It has been shown that SOCS1 is not required to control IL-6 signaling in SOCS1-deficient hepatocytes, but is essential to attenuate hepatocyte growth factor (HGF) signaling via its receptor MET. This protein is a receptor tyrosine kinase (RTK), overexpressed in aggressive and metastatic PCa. Thus we hypothesized that the repression of SOCS1 via promoter methylation and deregulated MET expression and signaling are inter-related pathogenic mechanisms in PCa development and progression. We generated stable SOCS1-expressing PCa cell lines (PC3 and DU145) using lentiviral transduction followed by clonal selection via limiting dilution. Cells were stimulated with HGF and downstream signaling events were assessed by Western blot. Proliferation, migration and invasion assays were also conducted in the presence of HGF in vitro. Epithelial mesenchymal transition genes were evaluated by qPCR in the presence or absence of the growth factor. The PCa cells transfected with SOCS1 and non-transfected controls were inoculated into NOD SCID gamma mice as xenografts or as orthotopic tumors to assess tumor growth and metastasis formation, respectively. Resected tumors were further analyzed histologically and biochemically. Our results showed that SOCS1 attenuates HGF-induced MET activation and ERK phosphorylation in PC3 and DU145 PCa cell lines. SOCS1 inhibited HGF induced cell proliferation, migration and invasion in vitro. Additionally, SOCS1 decreased epithelial mesenchymal transition genes involved in the degradation of extracellular matrix components in DU145 cells but not in PC3. In vivo, SOCS1 overexpression leads to an increase of collagen deposition. Tumors formed by SOCS1 expressing cells were significantly smaller in size with reduced cell proliferation compared to tumors arising from control cells. Furthermore, SOCS1 inhibited distant metastasis formation in the orthotopic model. Overall our results suggest that SOCS1 has a tumor suppressor role in PCa evolution and part of this function is mediated by the negative regulation of MET receptor signalling and down-regulation of genes supporting migration and invasion processes such as matrix metalloproteinases.
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Landry, Mélissa. "L'implication de la dualité fonctionnelle de la protéine p66Shc en aval des récepteurs tyrosine kinase dans la progression du cancer." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2012. http://hdl.handle.net/11143/6327.
Full textAbstract:
Le gène ShcA code pour trois isoformes de protéines adaptatrices (p46, p52 et p66Shc), possédant entre eux une forte homologie structurelle. Les études antérieures ont attribué un rôle essentiel à l'isoforme p52Shc dans l'activation de la voie mitogénique des MAPK, ainsi que dans la transformation cellulaire en aval des récepteurs de type tyrosine kinase (RTK). L'activation des MAPK fait intervenir une liaison directe de p52Shc aux RTK suivant leur activation, ce qui permet la phosphorylation sur tyrosines de Shc et ainsi, le recrutement de la protéine adaptatrice Grb2. Pendant longtemps, ces fonctions ont été attribuées aux trois isoformes des protéines Shc. Cependant, il est maintenant évident que Pisciforme p66Shc joue des rôles distincts de p52Shc. En effet, l'expression de p66Shc n'induit pas la transformation cellulaire et inhibe l'activité des MAPK en aval des RTK. D'ailleurs, p66Shc induit l'apoptose en réponse aux stress oxydatifs, par le biais de la phosphorylation d'une sérine située dans son domaine unique en N-terminal. Bien que ces caractéristiques proposent un pouvoir anti-tumorigénique à p66Shc, son rôle dans la progression du cancer demeure controversé. Mes travaux de recherche démontrent que p66Shc est constitutivement associé au récepteur dii facteur de croissance des hépatocytes, le RTK Met, et diminue fortement l'interaction entre le récepteur Met actif et Grb2. Nos études in cellulo et in vivo dans un modèle de cellules épithéliales intestinales transformées par Tpr-Met (Tpr-Met-IEC-6), une forme oncogénique du récepteur Met, révèlent que l'expression de p66Shc induit l'apoptose à l'atteinte de la confluence et diminue la croissance tumorale, dépendamment de sa phosphorylation sur sérine. En revanche, p66Shc augmente la capacité de ces cellules à survivre sans ancrage à la matrice extracellulaire et favorise la formation de métastases. En conclusion, nous démontrons qu'une protéine Shc s'associe à un RTK indépendamment de son activation. Il s'agit de la première évidence que les modes d'interaction de p66Shc avec les RTK different de ceux caractérisés pour p52Shc. De plus, nos études permettent d'illustrer la dualité fonctionnelle de p66Shc, où son expression diminue la capacité tumorigénique des cellules en adhésion, mais augmente leur potentiel métastatique lorsqu'elles sont en suspension, dénotant le rôle controversé de p66Shc dans le cancer. Cette nouvelle compréhension des rôles distincts associés à p66Shc selon le contexte de la cellule cancéreuse permet de cibler différentes étapes du développement du cancer.
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Chevilley, Arnaud. "MET, un nouveau partenaire de l'activateur tissulaire du plasminogène dans le système nerveux central." Caen, 2016. http://www.theses.fr/2016CAEN3167.
Full textAbstract:
Le facteur de croissance hépatocytaire (HGF) est un mitogène puissant et un facteur de survie pour un grand nombre de type cellulaire, y compris les neurones. Son récepteur, appelé MET, est connu pour jouer un rôle clé au cours du développement et dans la mise en place de certaines maladies. L’activateur tissulaire du plasminogène (tPA) est la molécule active de l’Actilyse®, seul médicament actuellement utilisé en clinique pour le traitement des accidents vasculaires cérébraux à la phase aigüe (seul ou combiné à la thrombectomie). Cette sérine protéase, impliquée dans la dégradation des caillots sanguins, contrôle également la neurotransmission glutamatergique de type NMDA dans le parenchyme cérébrale. Le tPA existe sous deux formes actives, une forme dite simple chaine (sc-tPA) et une forme dite double chaine (tc-tPA). Dans le compartiment vasculaire, ces tPAs ont la même capacité de se lier à la fibrine et affichent la même activité fibrinolytique. Dans le parenchyme cérébral, ils jouent des rôles différentiels dans la survie neuronale. Seul le sc-tPA est capable de potentialiser la signalisation NMDA et l’excitotoxicité. Les tPAs partagent avec l’HGF des homologies de structure. Au cours de cette thèse, nous avons mis en évidence que seul le tc-tPA convertit le pro-HGF en HGF et ainsi activer MET, qu’il existait des complexes MET/R-NMDA au niveau neuronal et que l’activation de MET augmentait le nombre de ces complexes et inhibait la signalisation des NMDA et la mort neuronale de type excitotoxique. Enfin, dans un modèle d’infarctus cérébral chez la souris, nous avons apporté la preuve que l’activation de MET augmentait la fenêtre thérapeutique de l’Actilyse®Hepatocyte growth factor (HGF) is a potent mitogen and a pro-survival factor in a large spectrum of cells, including neurons. Its receptor, called MET, is known to play a key role during development and in diseases. Tissue-type plasminogen activator (tPA) is the active compound of Actilyse®, the only-approved drug for the clinical treatment of the acute phase of ischemia (alone or combined with thrombectomy). This serine protease is implicated in the degradation of fibrin clots, but also controls the NMDA- glutamatergic neurotransmission (NMDAR, N-Methyl-D-Aspartate) within the brain parenchyma. TPA exists in two active forms: a single-chain (sc-) and a two-chain (tc-) form. Within the vascular compartment, sc- and tc-tPA have the same ability to bind to fibrin and display the same fibrinolytic activity. Within the brain parenchyma, the tPAs play differential roles in neuronal survival. Only the sc-tPA promotes glutamate signaling and excitotoxicity. TPAs share structural homologies with HGF. During this thesis, I demonstrate that only the tc-tPA can convert pro-HGF into HGF and activate MET. I also show the neuronal existence of MET/NMDA-R complexes on neurons. Moreover, the indirect activation of MET by tc-tPA increases the number of these complexes and inhibits NMDAR signaling and excitotoxic neuronal death. Finally, in a mice model of cerebral ischemia, we validate that the activation of MET increases the therapeutic window of Actilyse®
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Garnier, Eugenie. "Expression du Facteur XII dans le système nerveux central et son rôle dans l'apoptose neuronale." Thesis, Normandie, 2018. http://www.theses.fr/2018NORMC413.
Full textAbstract:
Le facteur XII (FXII) est une sérine protéase de 80 kDa produite et sécrétée par le foie qui initie la voie intrinsèque de la coagulation. Diverses études ont montré un rôle délétère du FXII dans des pathologies cérébrales telles que l'accident vasulaie cérébral, la maladie d'Alzheimer et la slérose en plaques. Néanmoins, l'impact direct du FXII sur le devenir des cellules neuronales reste inconnu. De plus, l'expression du FXII dans le système nerveux central (SNC) n'a pas encore été étudiée. Le premier objectif de nos travaux a été d'étudier le rôle du FXII dans l'apoptose neuronale puis dans un second temps d'étudier l'expession du FXII dans le SNC. Dans notre étude, nous avons constaté que le FXII protège les neurones en culture de la mort apoptotique. Les effets bénéfiques du FXII résultent de l'interaction directe du FXII avec le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR). L'activation de l'EGFR par le FXII déclenche les voies signalétiques antiapoptotiques MAPK. Il est intéressant de noter que la forme double chaîne du FXII, αFXIIa, exerce des effets protecteurs complémentaires en convertissant le précurseur du facteur de croissance hépatocytaire en sa forme mature, ce qui active à son tour le récepteur MET. Enfin, dans notre étude, nous avons observé que le FXII était exprimé dans le SNC (à la fois l'ARNm et la protéine). Cette expression est notamment retrouvée au niveau des neurones corticaux. Ce travail décrit un nouveau mécanisme d'action du FXII et décrit les neurones en tant que cellules cibles pour les effets facteur de croissance du FXII. Dans l'ensemble, ces travaux devraient donc aider à mieux comprendre comment le FXII agit dans les pathologies cérébrales en tant que sérine-protéase unique à l'interface de la thrombose, de l'inflammation et de la survie cellulaireFactor XII (FXII) is an 80 kDa serine protease produced and secreted by the liver that participates in the intrinsic coagulation pathway. Various studies have shown a deleterious role of FXII in cerebral pathologies like stroke, Alzheimer disease and multiple sclerosis. Nevertheless, the direct impact of FXII on neuronal cell fate remains unknown. In addition, the expression of FXII in the central nervous system (CNS) has not been investigated yet. The first objective of our work was to study the role of FXII in neuronal apoptosis and then to study the expression of FXII in the CNS. In our work, we found that FXII protects cultured neurons from apoptotic death by a growth factorlike effect. The beneficial effects of FXII result from the direct interaction with the epidermal growth factor receptor (EGFR). Activation of EGFR by FXII triggers antiapoptotic signaling MAPK pathways. Iteestigl, the to hai fo of FXII, αFXIIa, eets opleeta potetie effets oetig the hepatocyte growth factor (HGF) precursor into its mature form, which in turn activates MET receptor. Finally in our work we observed FXII expression in the CNS (both mRNA and protein). This expression is particularly found in cortical neurons. This work describes a novel mechanism of action of FXII and discloses neurons as target cells for growth factor effects of FXII. Overall, these works should thus help further understanding how FXII acts in brain diseases as a unique serine-protease at the interface of thrombosis, inflammation and cell survival
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Gassiot, Matthieu. "Rôle du récepteur des xénobiotiques PXR (Pregnane X Receptor) et de ses gènes cibles sur la sensibilité des lignées de cancer de prostate aux inhibiteurs de kinases." Thesis, Montpellier, 2017. http://www.theses.fr/2017MONTT133/document.
Full textAbstract:
De plus en plus d’inhibiteurs de kinase (IKs) sont testés dans le cancer de la prostate qui représente chez l’homme un enjeu de santé publique majeur de par son incidence (1er cancer) et sa mortalité (4ème cancer). Les essais cliniques pour évaluer l'efficacité des IKs dans cette indication ont donné des résultats mitigés malgré la présence de leurs cibles pharmacologiques dans les tumeurs de prostate (VEGF, EGFR, CMET..), pouvant faire penser que l’inefficacité serait en partie liée à la molécule elle-même et à sa pharmacocinétique/pharmacodynamie. En effet, les IKs sont sujets à un métabolisme et un transport intense via des enzymes de phase I et II et des transporteurs contrôlés pour la majorité par le récepteur nucléaire PXR (Pregnane X Receptor, gène NR1I2). En plus d’être abondamment exprimé dans le foie et le long du tractus gastro-intestinal, PXR est également exprimé dans certaines tumeurs épithéliales et pourrait être impliqué dans la résistance aux chimiothérapies par augmentation du catabolisme et de l’efflux de ces agents anticancéreux. A ce jour une seule étude a révélé l’expression de PXR dans le cancer de la prostate sans en avoir évalué l’impact sur la réponse aux traitements utilisés dans cette indication. En collaboration avec le Pr G. Fromont, nous avons observé dans une cohorte de 449 patients que l’expression de PXR était plus fréquemment retrouvée dans les cancers résistants à la castration et les métastases, par rapport aux cancers cliniquement localisés dans lesquels l’expression de PXR était corrélée avec le stade TNM et le score ISUP. Ces résultats confirment donc l’intérêt d’étudier le rôle que peut jouer PXR et les gènes du métabolisme et du transport qu’il régule, dans la sensibilité aux IKs dans les cancers de la prostate.Nous avons mesuré l’expression de PXR et de ses gènes cibles dans les lignées de cancer de la prostate 22RV1, LnCap, PC3 et DU145. Les résultats montrent une expression significative des enzymes et transporteurs responsables de la détoxication des IKs mais une faible expression de PXR liée à des phénomènes d’hyperméthylation NR1I2 dans nos lignées Cela nous a conduit à établir des modèles de surexpression stable de PXR dans lesquels l’agoniste SR12813 est capable d’induire l’activité transcriptionnelle de ce xénorécepteur, indiquant la compétence métabolique de ces lignées. À l'aide de ces modèles, nous avons démontré que la surexpression de PXR module la réponse à l’erlotinib, le dasatinib, le dabrafénib et l’afatinib démontrant que PXR joue un rôle fonctionnel dans la sensibilité à ces IKs. Nous avons également démontré que certains inhibiteurs avaient des propriétés agonistes de PXR, notamment le dabrafénib qui montre un effet agoniste plus marqué que le composé de référence SR12813, ce qui n’a jamais été démontré. Cette découverte originale nous a conduit à engager une collaboration pour tenter de cristalliser le complexe PXR/dabrafénib et à tester l’hypothèse que l’induction de l’activité PXR pouvait entraîner une modification du métabolisme et/ou du transport d’autres médicaments co-administrés. Or, nous avons observé dans la lignée 22RV1 un effet additif entre le dabrafénib et le tramétinib, une combinaison approuvée dans le traitement du mélanome, qui devient antagoniste lorsque PXR est surexprimé, résultat qui va effectivement dans le sens de notre hypothèse même s’il reste à démontrer que cet effet est bien lié à une altération du métabolisme de ces IKs, ce que nous sommes en train d’évaluer en dosant les métabolites de ces IKs. L’ensemble de nos données pourraient servir de rationnel biologique dans le choix des IKs ou de leurs combinaisons à tester avec les hormonothérapies et chimiothérapies déjà utilisés dans le traitement du cancer de la prostate, afin de potentialiser la réponse tumoraleMore and more kinase inhibitors (KIs) are tested in prostate cancer that represents a major health issue in men with its incidence and mortality rates. Clinical trials to evaluate KIs efficacy in prostate cancer gave disapointing results depsite the presence of KIs pharmacological targets in prostate tumors (VEGF, EGFR, CMET..), suggesting that inefficiency of these drugs would be at least in part linked to the inhibitor itself or its pharmacodynamics/pharmacokinetics parameters. Indeed KIs are metabolized and transported via phase I and II enzymes that are mainly controlled by the xenoreceptor PXR (Pregnane X Receptor, gène NR1I2). It is mainly expressed in liver and gastro-intestinal tract but also in epithelial tumors. PXR is also involved in the resistance to chemotherapies by increasing the catabolism and the efflux of these anticancer agents. To date only one study evaluated PXR expression in prostate cancer without evaluating its impact on treatment efficacy. In collaboration with Pr G. Fromont we analyzed a cohort of 449 prostate tumors and observed that PXR was more frequently detected in castration resistant or metastatic tumors as compared to clinically localized forms in which PXR expression was significantly correlated with TNM and ISUP Score. These results confirmed the interest to study the potential role of PXR and its target genes in the sensitivity to kinase inhibitors in prostate cancer models.We measured the expression of PXR and its target genes in prostate cancer cell lines 22RV1, LnCap, PC3 and DU145. The results showed that enzymes and transporters involved in KI detoxification was significantly expressed in these cells whereasPXR was poorly expressed due to hypermethylation of NR1I2 in our cells. This lead us to develop specific prostate cancer cell models stably overexpressing PXR in which transcriptional activity of PXR can be induced by its known agonist SR12813 further indicating that prostate cancer cells are metabolically competent. Using these models we showed that PXR overexpression modulates the sensitivity of 22RV1 cells to erlotinib, dasatinib, dabrafenib and afatinib, demonstrating that PXR plays a functional role in the sensitivity to KIs. We also demonstrated that several KIs were PXR agonists, including dabrafenib that displayed enhanced agonistic properties as compared to SR12813, a result that was never published before. This original finding led us to engage the cristalization of PXR/dabrafenib complex and to test whether induction of PXR could lead to an alteration of metabolism and transport of other drugs that are co-administered. In this line we have observed that in 22RV1 cells the additive effect of the combination of dabrafenib with trametinib that is already approved in the treatment of melanomas, became antagonistic when PXR was overexpressed in these cells. This result is supporting our hypothesis though we still need to demonstrate that this effect is linked to a change in drugs metabolism, which is currently under investigation by the measurement of the known metabolites of these KIs.Altogether, our data could serve as rational basis for the choice of kinase inhibitors or their potential combinations that could be tested in further clinical trials alone or in association with hormone therapies or with chemotherapies that are currently prescribed in the treatment of advanced prostate cancers, in order to potentiate tumor response
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Laouali, Mahamadou Abdel Nasser. "Hormones sexuelles et mortalité chez les hommes au cours du vieillissement dans l’étude de cohorte des Trois Cités." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS226/document.
Full textAbstract:
Malgré de nombreuses études concernant le rôle des hormones sexuelles endogènes sur la mortalité chez les hommes, les résultats demeurent à ce jour contradictoires et pourraient dépendre des caractéristiques des sujets ainsi que des causes de décès. A partir de l’étude prospective de cohorte des Trois Cités réalisée en France, nous avons évalué le rôle de la testostérone et de l’estradiol endogènes sur le risque de mortalité après 12 ans de suivi chez les hommes de plus de 65 ans, en prenant en compte le contexte clinique et génétique des sujets ainsi que les causes spécifiques de décès. Tout d’abord, nous avons mis en évidence une interaction significative entre les concentrations de testostérone et la présence du syndrome métabolique (SM) sur la mortalité. Les taux bas d’hormone étaient associés à une augmentation du risque de mortalité chez les hommes présentant un SM alors qu’aucune relation entre la testostérone et le décès n’a été observée chez les sujets sains. De plus, nous avons montré que les taux élevés de testostérone étaient associés à un risque de mortalité cardiovasculaire mais ne modifieraient pas le risque de mortalité par cancers ou par autres causes chez les hommes sains. Enfin, nous avons mis en évidence une association quadratique entre les niveaux d’estrogène et le risque de mortalité toutes causes. Cette relation n’était pas modifiée par les polymorphismes génétiques des récepteurs aux estrogènes mais dépendait en revanche des causes de décès. Une relation quadratique plus marquée a été mise en évidence avec la mortalité cardiovasculaire alors qu’aucune association n’a été trouvée entre les niveaux d’estradiol et le risque de mortalité par cancers et par autres causes. En conclusion, ce travail a confirmé les liens complexes entre les hormones endogènes et le risque de mortalité chez les hommes et a permis de comprendre en partie la divergence des résultats de la littérature. Ces résultats pourraient permettre l’identification de sousgroupes à haut risque et d’améliorer la prise en charge clinique et thérapeutique des hommes au cours du vieillissementDespite a number of studies regarding the association of endogenous sex steroid hormones with mortality in men, the results remain controversial and could depend on the characteristics of the subjects and the cause of death. Using the data from the prospective ThreeCity cohort study set-up in France, we investigated the role of endogenous testosterone and estradiol on 12-year mortality in men over 65 years, taking into account the clinical and genetic background, as well as the cause-specific of death. Firstly, we found a significant interaction of testosterone with metabolic syndrome (MetS) on mortality. Low levels of testosterone were associated with an increased risk of mortality among men suffering from MetS while there was no association of hormone with death in healthy subjects. Then, we showed that high levels of testosterone increased the risk of death from cardiovascular disease but not from cancer or other cause in healthy men. Finally, we highlighted a quadratic association between endogenous estradiol and all-cause mortality. This relationship was not modified by genetic polymorphisms of estrogen receptors but could depend on the cause of death. A stronger quadratic association was found with cardiovascular disease mortality but estradiol did not influence the risk of cancer or other cause of mortality. In conclusion, this thesis confirmed the complex role of endogenous sex steroid hormones on mortality in men and allowed to better understand previous controversial results. If confirmed, these results could help identifying subgroups at high risk, improving the clinical and therapeutic management of men during aging
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Gauthier, Rosemarie. "La phosphorylation des protéines de la famille Elmo par les récepteurs Tyr03, Axl et Mer : un mécanisme potentiel pour l`activation de la GTPase Rac et la promotion de la migration cellulaire." Thesis, McGill University, 2010. http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=87016.
Full textAbstract:
Elmo proteins act with Dock180 to mediate evolutionarily conserved Rac activation during cell migration, cell-cell fusion and phagocytosis. Molecular events leading to the activation of the Elmo/Dock180 pathway are poorly understood.In our study, we demonstrate that Elmo proteins are substrates of the TAM (Tyro3/Axl/Mer) kinases family. The TAM kinases have been previously described as regulators of cell migration and phagocytosis. They are also believed to be central mediator of cell invasion in various types of tumors.
Using mass spectrometry, we identified tyrosine residues phosphorylated on Elmo1 protein by Tyro3. We also uncovered that Elmo1 physically interacts with Tyro3 and Axl, but not with Mer. We demonstrate the formation of a trimolecular complex including the receptor Tyro3, the Elmo1 protein and the GEF Dock180. This complex may control Rac activation during cell migration and invasion.
Our study uncovered a novel pathway that may explain how TAM kinases mediate cell invasion.
Les protéines de la famille Elmo agissent de concert avec la GEF Dock180 pour médier l'activation de la GTPase Rac. Fonctionnellement, le complexe Elmo/Dock180 est impliqué dans la migration cellulaire, la phagocytose et la fusion cellulaire. Les mécanismes moléculaires permettant l'activation de la signalisation via Elmo/Dock180 sont peu connus.
Nous avons démontré que les récepteurs kinases à tyrosine de la famille TAM (Tyro3/Axl/Mer) phosphorylent Elmo. Les kinases TAM régulent la migration cellulaire, la phagocytose et elles sont impliquées dans les processus métastatiques des tumeurs.
Nous avons déterminé les tyrosines phosphorylées sur Elmo par les kinases TAM. De plus, nous avons démontré une interaction physique entre les TAM (Tyro3 et Axl), Elmo et Dock180.
Notre étude dévoile la relation TAM/Elmo/Dock180 pouvant expliquer, en partie, l'activation de Rac, la réorganisation du cytosquelette, la migration cellulaire et le potentiel invasif des tumeurs associés à la signalisation par les récepteurs TAM.
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Baldacci, Simon. "Conséquences de la dérégulation de MET sur le phénotype des cancers bronchiques non à petites cellules EGFR mutés devenus résistant aux inhibiteurs de tyrosine kinase d’EGFR." Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S043/document.
Full textAbstract:
Introduction : Le traitement des cancers bronchiques non à petites cellules (CBNPC) EGFR mutés repose sur les inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK) du récepteur de l’Epidermal Growth Factor (EGFR). Cependant tous les patients traités par ITK EGFR finissent par présenter une progression tumorale, du fait de mécanismes de résistance comme l’amplification du gène codant pour le récepteur tyrosine kinase MET. Il n’existe actuellement aucune donnée sur les modifications phénotypiques induites par l’activation de MET dans ce contexte. L’objectif de cette thèse est de déterminer si l’amplification de MET, lors de la résistance aux ITK EGFR dans les CBNPC EGFR mutés, confère aux cellules tumorales un phénotype plus agressif et modifie l’histoire naturelle de la maladie.Méthodes : Les capacités de prolifération, de croissance sans ancrage, de formation de sphéroïdes, de résistance à l’anoïkis et de migration ont été étudiées in vitro dans la lignée HCC827, dérivée d’un CBNPC EGFR muté, et dans sa lignée fille HCC827-GR6 (GR6) devenue résistante aux ITK EGFR via une amplification du gène MET. L’expression de la vimentine, de ZEB1, et de la E-cadherine a également été étudiée dans les deux lignées cellulaires afin d’évaluer l’impact de l’amplification de MET sur la transition épithélio-mésenchymateuse (TEM). In vivo la croissance tumorale et le potentiel métastatique ont respectivement été analysés dans des modèles murins de xénogreffe ectopique et d’injection intracardiaque. Enfin les données cliniques de patients issus de 15 centres avec un CBNPC EGFR muté métastatique, présentant une forte surexpression de MET en immunohistochimie (score 3+) ou une amplification de MET en FISH sur une re-biopsie réalisée après la progression sous ITK EGFR ont été analysées rétrospectivement. Résultats : In vitro, l’amplification de MET induisait une augmentation significative de la prolifération, de la croissance sans ancrage, de la formation de sphéroïdes, de la résistance à l’anoïkis et de la migration. En présence d’un inhibiteur de MET, le PHA-665752, ces différentes propriétés biologiques étaient réduites de façon significative dans les cellules GR6 porteuses de l’amplification de MET. Il était également mis en évidence dans les cellules GR6 une augmentation de l’expression de la vimentine et de ZEB1. In vivo, l’amplification de MET augmentait significativement la croissance tumorale et le potentiel métastatique. Un traitement par crizotinib, ITK ciblant MET, diminuait de façon significative le potentiel métastatique des cellules porteuses de l’amplification de MET. Enfin les patients atteints d’un CBNPC EGFR muté, porteur d’une amplification de MET à la résistance à l’ITK EGFR, présentaient une durée jusqu’à apparition de nouvelles métastases plus courte après progression sous ITK EGFR que les patients avec une forte surexpression de MET sans amplification génique. Conclusion L’amplification de MET dans un contexte de résistance aux ITK EGFR est associée à un phénotype tumoral plus agressif. Ces résultats plaident en faveur d’une utilisation précoce d’inhibiteurs de MET en association avec les ITK EGFR afin d’éviter l’émergence d’un clone tumoral résistant plus agressifIntroduction: Treatment of Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) mutated non-small cell lung cancers (NSCLC) relies on EGFR tyrosine kinase inhibitors (TKI). However, all patients treated with EGFR TKI eventually present tumor progression, due to mechanisms of resistance such as the MET amplification. There is currently no data on phenotypic changes induced by MET activation in this context. The objective of this thesis is to determine whether the MET amplification during EGFR TKI resistance in the EGFR mutated NSCLC induces a more aggressive phenotype in tumor cells and alters the natural history of the disease.Methods: Proliferation, anchorage independent growth, spheroid formation, anoïkis resistance and migration were studied in vitro in the HCC827 cell line, derived from an EGFR mutated NSCLC, and in its daughter cell line HCC827-GR6 (GR6) which became resistant to EGFR TKI through MET amplification. The expression of vimentin, ZEB1, and E-cadherin was evaluated in these cellular models in order to investigate an epithelial to mesenchymal transition (EMT) process induced by the MET amplification. In vivo, the tumor growth and the metastatic potential were analyzed by subcutaneous xenograft and intracardiac injection in mouse models. Finally, the clinical data of patients from 15 centers with a metastatic EGFR mutated NSCLC, exhibiting high MET overexpression in immunohistochemistry (score 3+) or MET amplification assessed by FISH on a re-biopsy performed after TKI EGFR progression were analyzed retrospectively.Results: In vitro, the MET amplification induced a significant increase in proliferation, anchorage independent growth, spheroid formation, anoïkis resistance and migration. Treatment with PHA-665752, a MET TKI, significantly reduced these biological properties in the GR6 cells harboring the MET amplification. An increase in the expression of vimentin and ZEB1 was also observed in the GR6 cells. In vivo, the MET amplification significantly increased the tumor growth and the metastatic potential. Treatment with crizotinib, another MET TKI, significantly decreased the metastatic potential of cells carrying MET amplification. Finally, patients with an EGFR mutated NSCLC, displayed a time to new metastases after TKI EGFR progression shorter than patients with high MET overexpression without MET amplification.Conclusion: The MET amplification during EGFR TKI resistance is associated in EGFR muted NSCLC with a more aggressive tumor phenotype. These results argue for the early use of MET inhibitors in combination with EGFR TKIs to avoid the emergence of a more aggressive resistant tumor clone
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Caraux, Anouk. "Le grand chemin des cellules natural killer : développement et fonctions chez la souris." Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066082.
Full text
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Ponaire, Sarah. "Synthèse d'analogues de substrats ou d'inhibiteurs d'enzymes de la voie du 2-C-méthyl-D-érythritol 4-phosphate (MEP) pour la synthèse des isoprénoïdes." Strasbourg, 2010. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2010/PONAIRE_Sarah_2010_ED222.pdf.
Full textAbstract:
La résistance de plus en plus importante des microorganismes aux antibiotiques et antiparasitaires actuels, nous incite à identifier de nouvelles cibles thérapeutiques pour lutter contre ces agents pathogènes. Les isoprénoïdes constituent une vaste famille de composés naturels présents chez tous les organismes vivants. Ils peuvent être biosynthétisés selon deux voies: la voie du mévalonate et la voie du 2-C-méthylérythritol 4-phosphate (MEP) ; Cette dernière voie est présente chez de nombreux microorganismes pathogènes ou parasites, mais absente chez l’homme. La voie de biosynthèse des isoprénoïdes selon la voie du MEP devient donc une cible parfaite pour identifier de nouveaux antimicrobiens. Dans cette optique, nous avons choisi de synthétiser dans une première partie six prodrogues de deux acides phosphoniques déjà synthétisés au laboratoire. Ces derniers, dérivés de la fosmidomycine, s’étant déjà distingués par leur pouvoir inhibiteur sur la DXR d’Escherichia coli. Ces prodrogues ont été testées sur des cultures de cellules de tabac, les BY-2 ainsi que sur une bactérie, Mycobacterium smegmatis. Les résultats obtenus sur BY-2 révèlent que ces prodrogues sont de meilleurs inhibiteurs que la fosmidomycine et qu’ils sont toujours actifs à des concentrations auxquelles la fosmidomycine n’a plus aucun effet. Parallèlement à ce travail une synthèse de MEP sous forme de prodrogue a été envisagée ; malgré les différents groupements utilisés pour masquer le phosphate ainsi que les nombreux jeux de protections et déprotections, le MEP prodrogue n’a pu être obtenu. Dans une troisième partie nous nous sommes intéressés à la synthèse de la DHAP (dihydroxyacétonephosphate) qui est une petite molécule hautement fonctionnalisée intervenant dans bon nombre de voies métaboliques. La synthèse mise au point dépasse par sa simplicité et son efficacité toutes les préparations de DHAP réalisées à ce jour. La dernière partie de ce travail est consacrée à l’étude de la sélectivité de la première enzyme de la voie du MEP, la désoxyxylulose phosphate synthase (DXS). Pour ce faire, nous avons tenté de synthétiser le L-GAP (L-glycéraldéhyde 3- phosphate) qui est l’énantiomère du substrat naturel de la DXS. Malgré les différents chemins réactionnels testés, cette synthèse n’a pu être menée à son termeIsoprenoïds are components of the vast family of « natural compounds » present in all living organisms. They are biosynthetically obtained by two distinct pathways: the mevalonate pathway and the 2-C-methylerithritol 4-phosphate pathway; the latter is present in numerous pathogenous microorganisms and parasites. Growing microorganism resistance to antibiotics and antiparasitics forces us to identify new therapeutic targets to fight against pathogens. The great advantage of the 2-C-methylerithritol 4-phosphate pathway is that it is absent in humans thus being the ideal target to discover new antibiotics. To that end, we decided to synthesize six prodrugs derived from two phosphonic acids previously obtained in our research group. The latter, directly related to fosmidomycin were proven to be potent inhibitors of E. Coli’s DXR enzyme. The new prodrugs were tested on tobacco cell cultures, on BY-2 as well on Mycobacterium smegmatis. Results obtained on BY-2 show that our prodrugs are stronger inhibitors than fosmidomycin. Moreover, they still have an inhibitory effect on very low concentrations were fosmidomycin does not. In addition, organic synthesis of 2-C-methylerithritol 4-phosphate was studied. Though various protecting groups of the phosphate moiety were used and numerous protection / deprotection steps were tested, 2-C-methylerithritol 4-phosphate was never obtained. We then pursued our efforts on synthesizing dihydroyacetone phosphate, a small organic compound found in various metabolic pathways. The organic synthesis we propose surpasses all others by its simplicity and efficiency. Finally, we tried to synthesize L-glyceraldehyde 3-phosphate; this compound is the enantiomericaly pure substrate of DXS (deoxyxylulose phosphate synthase). Though many different synthetic schemes were tested, none of them yielded the desired product
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Busquet, Magali. "Synthèse et évaluation biologique de conjugués dolastine 15-oestradiol pour le ciblage de cellules cancéreuses." Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20018.
Full textAbstract:
Les dolastatines 10 et 15 sont de puissants agents antimitotiques naturels, qui suscitent actuellement de nombreuses etudes, tant sur le plan des relations structure-activite que sur celui de l'elucidation de leur pharmacologie. L'objet de ce travail consiste en l'etude de l'amelioration de la biodisponibilite de la dolastatine 15, en synthetisant des conjugues associant cette molecule a une hormone steroidienne, l'stradiol. Cette approche de ciblage, repose sur le fait que certaines tumeurs sont strogeno-dependantes. Plusieurs types de constructions ont ete realises en faisant varier les positions de greffage sur les deux entites ainsi que la nature du bras espaceur. Les capacites de ciblage de ces molecules ont ete evaluees en mesurant, d'une part leur liaison aux recepteurs de l'stradiol, et d'autre part, leur cytotoxicite sur des lignees cellulaires exprimant ou non ces recepteurs.
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Benzine, Youcef. "Enzymatically triggered polymeric drug delivery systems for colon targeting." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S036.
Full textAbstract:
De nos jours, les maladies inflammatoires chroniques de l'intestin (MICI) comme la rectocolite hémorragique et la maladie de Crohn touchent près de 200 000 personnes en France. Elles se caractérisent par l'inflammation de la paroi de différentes régions du tractus gastro-intestinal (TGI). Les deux sont des maladies chroniques qui impliquent une inflammation de la muqueuse colique. La principale différence entre la maladie de Crohn et la rectocolite hémorragique réside dans la localisation et la nature de l’inflammation. La maladie de Crohn peut toucher n’importe quelle partie du tractus gastro-intestinal (TGI), de la bouche à l’anus, mais dans la plupart des cas, elle atteint l’iléon. En revanche, la rectocolite hémorragique est limitée au côlon et au rectum.Le ciblage du colon peut offrir des avantages majeurs pour le traitement des MICI. Les formes galéniques conventionnelles entraînent une libération prématurée de la substance active dans l'estomac et l’intestin grêle. La substance active est alors absorbée dans la circulation sanguine ce qui provoque de sérieux effets secondaires. De ce fait la concentration de substance active qui arrive au site d’action (partie distale du TGI) est très faible, ce qui entraîne une faible efficacité thérapeutique voire échec de la thérapie.Pour pallier ce problème, une forme galénique idéale devrait effectivement protéger la substance active dans le haut TGI, puis la libérer dans la partie distale du TGI de manière contrôlée. Des systèmes réservoirs (granules enrobés, capsules…) ou des systèmes matriciels (comprimés, extrudats…) peuvent être utilisés pour protéger la substance active dans le haut TGI. Les polysaccharides qui ne sont dégradés que par des enzymes bactériennes localisées dans le colon peuvent être utilisés dans le développement des formes galéniques pour le traitement des MICI. L’objectif de ce travail était de développer de nouvelles formes galéniques contenant un polysaccharide (pectine, gomme de guar…) dégradable par la flore colique et d’un polymère thermoplastique hydrophobe (éthylcellulose, HPMC…) qui vas réduire l’hydrophilicité du polysaccharide. Or, le mélange des deux polymères ne doit pas enrober le polysaccharide qui va servir pour le ciblage de la partie distale du TGIChronic inflammatory bowel diseases (IBD) today affects close to 200,000 people in France. They are characterized by the inflammation of the wall of a part of the digestive tract. They usually include Ulcerative Colitis and Crohn’s disease. Both are chronic diseases that involve inflammation of the colonic mucosa. The main difference between Crohn’s disease and Ulcerative Colitis is the location and nature of inflammation. Crohn’s disease can affect any part of the GIT from mouth to anus but in most cases attacks the terminal ileum. In contrast, Ulcerative Colitis is restricted to the colon and the rectum. An ideal dosage form should effectively protect the drug in the stomach and small intestine and subsequently release the drug in the colon in a targeted and controlled manner. The objective of this work was to develop new drug delivery systems containing a polysaccharide (pectin, guar gum, inulin ...), which are degradable by the colonic bacteria and a hydrophobic thermoplastic polymer (ethylcellulose, polyurethane, polyvinyl acetate ...), which will reduce the hydrophilicity of the polysaccharide. The technique used for the preparation of these dosage forms is hot-melt extrusion. It is a continuous and free solvent process that allows the manufacturing of a dosage form called "extrudate" by forcing the soften material through an orifice. It has been demonstrated that extrudates based on polyvinyl acetate/polyurethane and inulin can minimize the release of a model active substance in the upper part of GIT due to the hydrophobic properties of polyvinyl acetate. Indeed, these extrudates uptake low amount of water and lose low dry mass upon exposure to media simulating the stomach and the small intestine. However, once in contact with the colonic flora, these systems show a considerable loss of mass due to the degradation of inulin by enzymes secreted by colonic bacteria. In another study, hot melt extrudates based on ethylcellulose blended with different types of polysaccharides (guar gum, inulin, corn starch, maltodextrin, pectin and chitosan) were studied for the development of controlled drug delivery systems. Anhydrous theophylline and diprophylline have been used as model drugs. This study was useful to set the extrusion parameters: temperature 100 °C; screw speed 30 rpm; feed rate 3 cc/min; 30 % dibutyl sebacate as a plasticizer. Importantly, hot melt extrudates based on ethylcellulose:guar gum blends offer an interesting potential as controlled drug delivery systems: They can be prepared at temperatures of about 100 °C, provide broad spectra of drug release patterns (in particular about constant drug release rates). Finally, hot melt extrudates remained stable after 1 year storage at ambient conditions
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Cambronel, Melyssa. "Analyse de la réponse physiologique et génétique de Pseudomonas aeruginosa et Enterococcus faecalis envers l'épinéphine et recherche de senseurs putatifs. Epinephrine affects motility, and increases adhesion, biofilm and virulence of Pseudomonas aeruginosa H103 Influence of catecholamines (epinephrine/norepinephrine) on biofilm formation and adhesion in pathogenic and probiotic strains of Enterococcus faecalis Evaluation of probiotic properties and safety of Enterococcus faecium isolated from artisanal Tunisian meat "dried ossban" Probiotic potential and safety evaluation of Enterococcus faecalis OB14 and OB15, isolated from traditional Tunisian Testouri cheese and Rigouta, using physiological and genomic analysis Draft genome sequence of Enterococcus faecalis strain OB15, a probiotic strain recently isolated from "Tunisian Rigouta Cheese"." Thesis, Normandie, 2019. http://www.theses.fr/2019NORMR106.
Full textAbstract:
L’endocrinologie microbienne a pour objet d’étude les interactions qui peuvent survenir entre les bactéries et les molécules sécrétées par l’hôte. Pseudomonas aeruginosa et Enterococcus faecalis sont deux pathogènes opportunistes impliqués dans des infections nosocomiales. Leur présence au sein du corps humain, les place donc au contact de molécules eucaryotes, dont les catécholamines (épinéphrine et norépinéphrine) qui sont produites en cas de réponse « combat-fuite » mais aussi lors de trauma, ou d’actes chirurgicaux. Ces substances sont connues pour être capables de moduler la physiologie bactérienne, notamment la virulence et la formation de biofilm. Les travaux menés au cours de cette thèse ont permis de montrer que l’épinéphrine pouvait moduler la physiologie de P. aeruginosa et de souches probiotiques et pathogènes d’E. faecalis. L’épinéphrine stimule, entres autres, la formation de biofilm et l’adhésion et pourrait, chez P. aeruginosa, jouer le rôle de xénosidérophore, favorisant ainsi la mise en place d’une infection par un apport de fer. Nous avons aussi émis l’hypothèse de la présence de senseurs adrénergiques putatifs, respectivement chez P. aeruginosa et E. faecalis, PmrB et VicK. Ces travaux de thèse ont permis d’approfondir les connaissances sur la communication hôte/pathogènes, et de mieux connaître l’effet de l’épinéphrine sur des bactéries présentes au sein du microbiote humain. Ceci pourrait permettre à l’avenir d’aider à la découverte de nouvelles cibles thérapeutiquesMicrobial endocrinology studies the interactions that can occur between bacteria and molecules secreted by the host. Pseudomonas aeruginosa and Enterococcus faecalis are two opportunistic pathogens involved in nosocomial infections. Their presence in the human body puts them in contact with eukaryotic molecules, including catecholamines (epinephrine andnorepinephrine) which are produced in the event of a "Fight of Flight" response but also during trauma or surgical procedures. These substances are known to be able to modulate bacterial physiology, including virulence and biofilm formation. The present study has shown that epinephrine could modulate the physiology of P. aeruginosa and E. faecalis probiotic and pathogenic strains. Epinephrine stimulates, among other things, biofilm formation andadherence, and could play, in P. aeruginosa, the role of xenosiderophore, thus promoting the development of infection by iron intake. We also hypothesized the presence of putative adrenergic sensors in P. aeruginosa and E. faecalis, PmrB and VicK, respectively. This work has increased our knowledge on host/pathogen communication and the effect of epinephrine on bacteria within the human microbiota. This may help in the future to discover novel therapeutic targets
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Brocqueville, Guillaume. "Dualité fonctionnelle de LMP1 : implication dans l’apoptose et la transformation cellulaire." Thesis, Lille 2, 2011. http://www.theses.fr/2011LIL2S030/document.
Full textAbstract:
Le virus d’Epstein-Barr (EBV) est un herpèsvirus humain qui infecte plus de 90% de la population généralement de façon bénigne et asymptomatique. Cependant, de nombreuses données démontrent que ce virus peut également contribuer à certains processus de cancérisation. En effet, l’EBV est associé à de nombreuses pathologies malignes telles que le lymphome de Burkitt, le lymphome hodgkinien et le carcinome du nasopharynx. Dans la grande majorité de ces cancers associées à ce virus, l’EBV exprime un programme de latence de type II durant lequel la protéine LMP1 est exprimée. Elle est décrite comme l’oncogène majeur de l’EBV car son expression est nécessaire à la survie et à la prolifération des lignées transformées in vitro. Cette protéine membranaire est fonctionnellement apparentée aux membres de la famille des récepteurs du TNF. LMP1 est constitutivement active et son expression conduit à l’activation de voies de signalisation telles que les voies NF-κB, PI3K et des MAPK. L’activation de ces voies de signalisation cellulaire confère à LMP1 des propriétés oncogéniques, cependant, des effets toxiques liés à son expression ont également été décrits. Effectivement, LMP1 est capable d’induire l’apoptose dans différents types cellulaires. Dans ce contexte, nous avons d’abord développé et caractérisé, des variants dérivés de LMP1 constitués de sa partie C-terminale signalisatrice, complète ou partielle, fusionnée à la protéine GFP. Nous montrons que ces variants sont capables de séquestrer les protéines adaptatrices se fixant à LMP1 ou au récepteur TNFR1, et d’inhiber le signal et les phénotypes induits par ces derniers. Ces protéines à effet dominant négatif peuvent ainsi contrecarrer les effets transformants de LMP1 dans des modèles de latence II et III. Ces dominants négatifs peuvent aussi inhiber l’activation du TNFR1 et les phénotypes qui en découlent. Puis, nous avons étudié les propriétés de LMP1 en dehors d’un contexte infectieux et son rôle dans la transformation épithéliale. Nous démontrons que LMP1 induit la mort des cellules épithéliales MDCK mais certaines cellules outrepassent ses effets cytotoxiques générant des lignées qui expriment stablement LMP1 et dans lesquelles cet oncogène viral favorise la survie et exacerbe les phénotypes induits par le facteur de croissance HGF. Le caractère ambivalent de LMP1 pourrait limiter le pouvoir oncogène de l’EBV mais en contrepartie favoriser l’émergence de cellules résistantes à l’apoptose et capables de répondre de façon accrue à des facteurs de croissance. Nos travaux ont permis de mieux comprendre la dualité fonctionnelle de LMP1, d’une part ses effets oncogènes favorisant la survie cellulaire et d’autre part ses propriétés pro-apoptotiques, induites directement ou révélées suite à son inhibition, limitant la tumorigenèse. La caractérisation des mécanismes moléculaires impliquant LMP1 pourrait ainsi participer à la définition de potentielles stratégies thérapeutiques pour le traitement de cancers associés à l’EBV et où LMP1 est expriméeEpstein-Barr virus (EBV) is a human herpesvirus that infects more than 90% of worldwide population, generally asymptomatically. However, numerous studies show that EBV promotes tumorigenesis. Indeed, EBV infection is associated with many human malignancies including Burkitt’s lymphoma, Hodgkin’s lymphoma and nasopharyngeal carcinoma. In most of these cancers associated with EBV, it expresses latency II program in which the latent membrane protein 1 (LMP1) is expressed. LMP1 is described as the major EBV oncogene because its expression is necessary in vitro for survival and proliferation of transformed cell lines. This membrane protein is functionally related to members of the TNF receptors superfamily. LMP1 is constitutively active and its expression leads to activation of NF-κB, PI3K and MAPK signaling pathways. These activation confers oncogenic properties to LMP1, however, toxic effects associated with its expression are also described. Indeed, LMP1 can induce cell death in different cell types. In this context, we first developed and characterized LMP1 derivative variants consisting of its C-terminal signal, complete or partial, fused to GFP. We show that these variants are able to sequester adaptors binding to LMP1 and TNFR1, and inhibit signal and phenotypes induced by them. These proteins have dominant negative effect and may counteract LMP1 transformant properties in latency II cellular models. In addition, these dominant negatives impair TNFR1 signaling and associated phenotypes. Then, we studied LMP1 properties outside infectious context and its involvement in epithelial transformation. We show that LMP1 induces cell death in MDCK epithelial cells, but some go beyond its cytotoxic effects generating lines stably expressing LMP1 and in which this viral oncogene promotes survival and exacerbates HGF-induced phenotypes. Ambivalent character of LMP1 could limit the oncogenic potential of EBV but in return support the emergence of cells resistant to apoptosis and able to enhance growth factor responses. Our work allowed us to better understand the functional duality of LMP1 on the one hand its oncogenic effects favoring cell survival and other pro-apoptotic properties, induced directly or reveal by its inhibition, limiting tumorigenesis. Thus, characterization of molecular mechanisms involving LMP1 could participate in the definition of potential therapeutic strategies for treating cancers associated with EBV and where LMP1 is expressed
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N'guessan, Ginette. "Synthèse de prodrogues de l’[aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6, α-acyloxyéthyl carbamates, pour réguler le récepteur CD36." Thesis, 2020. http://hdl.handle.net/1866/24154.
Full textAbstract:
Les prodrogues sont des dérivés biologiquement inactifs d’un principe actif qui, après administration à un organisme, subissent une transformation chimique ou enzymatique pour libérer le principe actif au site d’action. Elles améliorent les propriétés physicochimiques du principe actif pour permettre un meilleur transport à travers les barrières biologiques et pour augmenter l’activité in vivo. Elles sont utilisées pour améliorer la formulation et l’administration, accroître la perméabilité et l’absorption, modifier le profil de distribution et éviter le métabolisme et la toxicité. Cette approche est très utile pour améliorer l'administration de principes actifs. Il existe deux types de prodrogues : les prodrogues liées à un transporteur et les bioprécurseurs. Dans le premier cas, la molécule active est liée par une liaison covalente à un groupement temporaire, ce qui fournit une nouvelle molécule, qui est inactive. Le groupement temporaire libéré ne doit pas avoir, par lui-même, d'action pharmacologique ni de toxicité. Dans le second cas, le principe actif est transformé métaboliquement ou chimiquement par réaction d’hydratation, d’oxydation ou de réduction.
Les azapeptides sont des mimes peptidiques dans lesquels un ou plusieurs carbones de la chaîne peptidique sont remplacés par des atomes d’azote. Ce remplacement augmente la rigidité de la chaîne peptidique et favorise le repliement de type β. Le repliement β des azapeptides est associé à plusieurs propriétés thérapeutiques. Certains azapeptides ont montré une meilleure activité, une meilleure sélectivité et une plus grande stabilité comparativement aux peptides parents ce qui prolonge leur durée d'action et les rend plus résistants aux dégradations métaboliques. Ce mémoire s’intéresse particulièrement à l’azapeptide : [aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6. Celui-ci est un analogue du peptide sécréteur d’hormone de croissance 6 (GHRP-6, H-His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH₂), qui possède une affinité pour deux récepteurs distincts : les récepteurs de growth hormone secretagogue receptor 1a (GHS-R1a) et le récepteur cluster of differentiation 36 (CD36).
L’[aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6 démontre une sélectivité envers le récepteur CD36 offrant des possibilités de traitement de maladies telles que l’athérosclérose et la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA). De plus, le récepteur CD36 peut interagir avec un corécepteur toll-like receptor 2 (TLR2), et l’[aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6 peut réduire des réponses immunitaires innées. La stratégie des prodrogues a été utilisée dans ce mémoire pour augmenter la durée d’action de l’azapeptide [aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6. Plus précisément, cinq analogues des prodrogues α-acyloxyéthylcarbamates de l’aza(p-MeO)F⁴-GHRP-6 ont été synthétisées. Ce mémoire présente la première synthèse de prodrogues α-acyloxyéthylcarbamates à caractère PEG de l’[aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6.A prodrug is a biologically inactive derivative of a drug which after administration undergoes chemical or enzymatic modification to release the active drug at targeted sites of activity. Prodrugs improve physicochemical properties to enable better transport through biological barriers and enhance activity. They are used to improve formulation and administration, to enhance permeability and absorption, to modify distribution profiles and to avoid metabolism and toxicity. The prodrug approach is useful for improving drug delivery. Prodrugs are classified into two types: carrier-linked prodrugs and bio-precursors. In the first case, the parent drug is linked by a covalent bond to an inert carrier or transport moiety. The carrier should not be active or toxic. The active drug is released by a chemical or enzymatic cleavage in vivo. In the second case, the parent drug is converted metabolically or chemically by hydration, oxidation or reduction reactions. Azapeptides employ a semicarbazide as an amino amide surrogate in a peptide analog in which the backbone α-CH is replaced by nitrogen. Through electronic interactions, the semicarbazide favors backbone β-turn geometry due to a combination of urea planarity and hydrazine nitrogen lone pair – lone pair repulsion. Azapeptides have proven therapeutic utility. Some of them exhibit better selectivity, activity and stability than the parent peptides with increased duration of action and improved metabolic stability. Growth hormone releasing peptide-6 (GHRP-6, H-His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH₂) is a synthetic peptide possessing an affinity for two different receptors: growth hormone secretagogue receptor 1a (GHS-R1a) and cluster of differentiation receptor 36 (CD36). The GHRP-6 azapeptide analogue, [aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6, has exhibited good affinity for CD36 and reduced nitric oxide overproduction in macrophage cells stimulated with the TLR-2 agonist R-FSL-1. Azapeptide ligands of CD36, such as [aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6, offers potential as prototypes for developing treatments of diseases such as atherosclerosis and age-related macular degeneration. A prodrug strategy has been pursued to improve the pharmacokinetic properties, such as duration of action, of [aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6. The first examples of α-acyloxyethyl carbamate peptides have been prepared. Five α-acyloxyethyl carbamate analogues of [aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6 have been synthesized by routes featuring acylation of the resin-bound peptide using different activated α-acyloxyethyl carbonates prior to resin cleavage and side chain deprotection. The evaluation of the activity of the pharmacokinetic properties of the [aza(p-MeO)F⁴]-GHRP-6 prodrugs is currently in progress and will be reported in due time.