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Dissertations / Theses on the topic 'Récepteurs à la vasopressine – Dissertations universitaires comme sujet'
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Robert, Jessica. "Mécanismes moléculaires du trafic intracellulaire du récepteur V1b/V3 de la vasopressine." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N04S.
Full textAbstract:
Des mutations naturelles de récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) entrainent leur rétention dans le réticulum endoplasmique (RE) et leur absence à la membrane plasmique et sont responsables de maladies comme le dièbète insipide ou la rétinite pigmentaire. Au cours de ma thèse, j'ai identifié une courte séquence peptidique, FN(X)2LL(X)3L, dans le domaine carboxy-terminal cytosolique du récepteur hypophysaire V1b de la vasopressine (V1bR), mon modèle d'étude des RPCPGs, indispensable à sa sortie du RE. La mutation de ce motif entraine la rétention totale du V1bR dans le RE, qui est alors non fonctionnel. Puis j'ai découvert qu'un antagoniste sélectif du V1bR et perméable aux membranes biologiques, le SSR149415, se comporte comme un chaperon pharmacologique en restaurant l' expression à la membrane plasmique, la maturation et l' expression à la membrane plasmique, la maturation et la fonctionnalité de ce premier mutant V1bR d'export. Ces résultats laissent entrevoir une possible approche thérapeutique pharmacologique des défauts d'export<br>Natural mutations of several G-protein-coupled receptors (GPCR) cause retention of the receptors in the endoplasmic reticulum (ER) and are responsible for diseases. I identified a short sequence,FN(X)2LL(X)3L, in the C-terminus of the pituitary vasopressin V1b receptor (V1bR) our model to investigate the mechanisms of GPCR export, necessary for its ER exit. The mutation of this motif totally abolished the plasma membrane expression and functions of the receptor and retained it in the ER,Treatment with a specific non-peptide V1bR antagonist SSR149415 restored expression of the mutated receptor on the cell surface and its correct maturation, resulting into the functional recovery of its signaling properties. SSR149415 acts by stabilizing a native-like conformation of the V1bR, reducing its association with calnexin and thus favoring a secretory pathway rather than the proteasomal degradation pathway. These results highlight a promising pharmacological approach of the folding defects
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Gil, Sophie. "Régulation de l'endocytose des asialoglycoprotéines médiée par une lectine transmembranaire de l'hépatocyte : étude sur hépatocytes de rat à l'aide d'une pathologie in vivo (le diabète insulino-dépendant) et de drogues in vitro (la monensine et la vasopressine)." Paris 11, 1992. http://www.theses.fr/1992PA114809.
Full text
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Lucas, Hervé. "Etude des glycoprotéines pellucidaires fucosylées et de leurs récepteurs spermatiques." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05CD12.
Full textAbstract:
La zone pellucide (ZP) est une enveloppe acellulaire transparente qui entoure l'ovocyte et l'embryon de mammifère jusqu'à son implantation. Au cours de l'interaction gamètique, elle intervient dans la reconnaissance et la fixation des spermatozoi͏̈des, dans le déclenchement de la réaction acrosomique ainsi que dans le blocage de la polyspermie. Trois glycoprotéines appelées ZP1, ZP2 et ZP3 composent la zone pellucide murine mais la composition de la zone pellucide humaine est encore imparfaitement connue. C'est pourquoi nous avons cherché à caractériser la structure pellucidaire humaine en électrophorèse après biotinylation des protéines et avons étudié ses glycoconjugués, en blot et en cytochimie, à l'aide de lectines et d'anticorps anti-oligosaccharides. La zone pellucide humaine se compose de trois protéines majoritaires appelées ZP1, ZP2 et ZP3 ainsi que d'une glycoprotéine polymérique minoritaire de 180 kDa. Les glycoconjugués Lewis b, sialyl-Lewis a et sialyl-Lewis x se retrouvent également dans la composition des chaînes saccharidiques des zones pellucides humaines. D'autre part, nous avons testé les lectines AAL et LTA ainsi que les anticorps anti-Lewis b, anti-sialyl-Lewis a et anti-sialyl-Lewis x dans le cadre de tests de fixation pellucidaire des spermatozoi͏̈des. Ces deux lectines ainsi que les anticorps anti-Lewis b et anti-sialyl-Lewis a inhibent significativement la fixation des spermatozoi͏̈des. De même, les néoglycoconjugués Lewis b, sialyl-Lewis a et syalyl-Lewis x inhibent significativement la fixation des spermatozoi͏̈des aux ZP. Nous avons pu localiser la fixation du néoglycoconjugué Lewis b sur la portion acrosomique des spermatozoi͏̈des humains. Avec cette même localisation, un anticorps anti L-sélectine marquait les spermatozoi͏̈des capacités. L'ensemble de ces résultats permet de mieux définir la composition protéique et saccharidique de la ZP humaine et nous avons identifié des glycoconjugués intervenant dans la fixation des spermatozoi͏̈des par l'intermédiaire de récepteurs qui restent à caractériser.
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Raoul, Marion. "2-vinyltryptamines : préparation et utilisation comme diènes dans la synthèse du squelette de l'échitamine Ligands sélectifs des récepteurs sérotoninergiques 5-HT6." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMP208.
Full textAbstract:
@Une réaction tandem Diels-Alder - cyclisation intramoléculaire d'une 2-vinyltryptamine mise au point au laboratoire, a ouvert une voie d'accès à une structure tétracyclique proche du squelette de l'échitamine. La réactivité des 2-vinyltryptamines vis à vis de différents diènophiles dans cette séquence a été étudiée. Les groupements BOM (benzyloxyméthyle) et MOM (méthoxyméthyle) comme protecteur de l'azote indolique se sont révélés peu stables à la température de la réaction (130-170ʿC). Le méthyle ayant donné de meilleurs résultats, les cycloadduits résultant de la réaction tandem avec l'acétylène dicarboxylate de diméthyle et le propiolate de méthyle ont été utilisés pour les essais de formation du cinquième cycle de l'échitamine. Dans cet objectif, différentes conditions pour une cyclisation radicalaire ou une réaction de Heck, ont été essayées, mais sans succès. Une approche intramoléculaire a également été tentée mais la réaction tandem n'a pas réussi. Au cours de cette voie, une azétidin-3-one a été obtenue à partir de la tryptamine et du (E)-5-bromo-4-oxo-pent-2-ènoate d'éthyle. Cette réaction a pu être appliquée à différentes amines primaires et constitue une méthode de synthèse simple, rapide et directe de ce type de cycle à quatre. Les 2-vinyltryptamines se sont également montrées être des ligands des récepteurs sérotoninergiques 5-HT6. Pour une étude de pharmacomodulation, une vingtaine de composés a été préparée. Avec des pourcentages d'inhibition allant de 90 à 97 % à 10-6M et 27 à 48 % à 10-8M, les dérivés N1-substitués par un groupement benzènesulfonyle ont montré la plus haute affinité et une sélectivité pour ces récepteurs<br>@Tandem Diels-Alder - intramolecular cyclization of a 2-vinyltryptamine settled in the laboratory, opens the way to the tetracyclic systemclosely related to echitamine's skeleton. Reactivity of 2-vinyltryptamines toward different dienophiles using this sequence was studied. BOM (benzyloxymethyl) and MOM (methoxymethyl), as indole nitrogen protecting groups, seemed to be unstable at the reaction temperature (130-170ʿC). Methyl substitution gave better results and cycloadducts from tandem reaction with dimethylacetylene dicarboxylate and methyl-propiolate were used for trying to form echitamine's fifth cycle. In this purpose, different conditions for radical cyclization or Heck reaction were tried, with no success. An intramolecular approach also failed to afford pentacyclic target. During this latest experiment, an azetidin-3-one was obtained from tryptamine and (E)-5-bromo-4-oxo-pent-2-enoic acid ethyl ester. This reaction could be generalized with different primary amines and constitute a simple, rapid and direct synthesis of azetidin-3-ones. 2-Vinyltryptamines also appeared to be 5-HT6 receptor ligands. About twenty compounds were prepared for pharmacomodulation; with inhibition from 90 to 97 % at 10-6M and 27 to 48 % at 10-8M, N1-benzenesulfonyle derivatives showed the best affinity and selectivity for this kind of receptors
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Mechiche, Hakima. "Récepteurs des neurokinines et des leucotriènes sur les muscles lisses vasculaires et bronchiques humains : expression et fonction." Reims, 2002. http://www.theses.fr/2002REIMM207.
Full textAbstract:
Peu d'études ont été consacrées à l'expression, la localisation et à la fonction des sous-types de récepteurs impliqués dans les effets des leucotriènes et des neurokinines sur les tissus vasculaires systémiques. Pour ce qui concerne les neurokinines, ce travail démontre pour la première fois, sur veine saphène humaine, l'expression des récepteurs NK1 et NK2 au niveau du muscle lisse et la réponse contractile induite par la NKA par stimulation des récepteurs NK2. De plus, les récepteurs NK1 ont été également localisés au niveau de l'endothélium de ce type de vaisseaux. Sur vaisseaux pulmonaires, seuls des récepteurs NK1 sont exprimés au niveau endothélial et leur stimulation induit une relaxation concentration-dépendante médiée à la fois par l'oxyde nitrique et les prostaglandines. Sur ces deux types de vaisseaux humains, la réponse aux neurokinines est caractérisée par l'apparition rapide d'une tachyphylaxie. Pour ce qui concerne les leucotriènes, les récepteurs de type CysLT1 et CysLT2 sont exprimés par les veines saphènes alors que les récepteurs CysLT1 sont les seuls exprimés par les bronches humaines. Sur les deux types de vaisseaux, seuls les récepteurs de type CysLT1 sont impliqués dans la réponse contractile. Les bronches humaines de petit diamètre (inférieur à 1mm) sont environ 30 fois plus sensibles aux leucotriènes que les bronches de plus grand diamètre. L'ensemble de ces résultats suggèrent l'intérêt thérapeutique potentiel des antagonistes des récepteurs des neurokinines et des leucotriènes en pathologies cardiovasculaire<br>Few studies have been devoted to the expression, localization and function of the receptor subtypes involved in the effects of leukotrienes and neurokinins on systemic vascular tissues. With respect to neurokinins, this work demonstrates for the first time the expression of NK1- and NK2-receptors on the smooth muscle of human saphenous veins and the contractile effect of NKA through NK2-receptor activation. In addition, NK1-receptors have been also localized on the endothelium of this vessel type. On human pulmonary vessels, we have only found the expression of NK1-receptors on the endothelium. These endothelial NK1-receptors are involved in substance P-induced relaxation through the release of nitric oxide and prostaglandins. On this two types of human vascular tissues, the functional responses are characterized by the rapid onset of tachyphylaxis. With respect to leukotrienes, both CysLT1- and CysLT2-receptors are expressed by saphenous veins whereas only CysLT1-receptors are expressed by human bronchus. On both tissues, only CysLT1-receptors are involved in the contractile response. The small human bronchi (internal diameter > 1mm) are about 30-fold more sensitive to the leukotriene contractile effects than the large human bronchi. As a whole, these results suggest the potential therapeutic interest of neurokinin and leukotriene antagonists in vascular diseases
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Poaty, Virginie. "Hyperréactivité bronchique après transplantation pulmonaire syngénique chez le rat : étude des récepteurs muscariniques et de la synthèse du neuropeptide Y." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05CD09.
Full textAbstract:
Une hyperactivité bronchique (HRB) est décrite chez le patient ayant bénéficié d'une transplantation pulmonaire. Parallèlement une HRB a été mise en évidence in vitro après transplantation pulmonaire syngénique chez le rat pour une contraction induite par stimulation par champ électrique. Cette contraction est liée à une libération d'Ach endogène. Une hypersensibilité des récepteurs muscariniques cholinergiques a été suggérée par certains auteurs pour expliquer l'HRB observée. Nous avons abordé cette hypothèse en caractérisant les récepteurs muscariniques pulmonaires par liaison de radioligand ([3MH](-)QNB) dans des préparations membranaires de poumon de rat après transplantation pulmonaire syngénique et de rat contrôlé. Aucune modification de l'affinité ou de la densité des récepteurs muscariniques totaux n'a été observée. Des expériences de déplacements de la liaison du [3MH](-)QNB à l'aide d'antagonistes spécifiques de trois types de récepteurs muscariniques caractérisés pharmacologiquement, la pirenzépine (M1), le 4-DAMP (M1+M3) et l'AFDX-116BS (M2), suggèrent une analogie des différents types de récepteurs muscariniques après transplantation. Ceci signifie que l'HRB observée après transplantation pulmonaire n'est pas liée à une " hypersensibilité de dénervation " mais plutôt à une grande libération d'Ach, due à une déficience des mécanismes inhibiteurs du système cholinergique. L'un des mécanismes inhibiteurs de la neurotransmission cholinergique est représenté par le neuropeptide Y (NPY), un neuropeptide décrit dans l'innervation sympathique des voies aériennes. Nous avons mis en évidence dans les voies aériennes par immunohistochimie une diminution de la quantité des fibres immunoréactives pour le NPY dans le poumon après transplantation pulmonaire par rapport au contrôle. Cette diminution du NPY dans le poumon après transplantation pourrait donc contribuer à l'HRB observée. L'origine du NPY dans le poumon transplanté a été abordée par hybridation in situ. Nous avons montré la présence d'ARN messager codant pour le NPY dans les cellules ganglionnaires parasympathiques aussi bien dans la bronche témoin que dans la bronche transplantée. Le NPY restant dans les voies aériennes après transplantation pulmonaire pourrait donc appartenir aux fibres parasympathiques.
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Zinzendorf, Nanga Yessé. "Infection expérimentale par des bactéries à developpment intracellulaire. Régulation du TNF-α et de ses récepteurs". Reims, 2002. http://www.theses.fr/2002REIMP202.
Full textAbstract:
@Dans le premier modèle les cellules monocytaires humaines sont infectées par quatre souches de R. Equi qui diffèrent par leur sensibilité aux b-lactamines. Les souches régulent différemment la production de TNF-a. Les messagers du TNF-a sont réprimés et la production de TNF-a est inhibée dans le cas de l'infection des monocytes par les souches résistantes aux b-lactamines. En outre, la présence de surnagent de culture de la souche résistante aux b-lactamines affecte négativement l'expression des messagers et la production du TNF-a chez la cellule infectée par la souche sensible. Dans le second modèle, les cellules monocytaires humaines sont infectées par deux souches de L. Monocytogenes, la souche sauvage EGD et son mutant non hémolytique. Les souches régulent différemment l'expression des messagers des récepteurs du TNF-a (TNF-R) et l'activité du TNF-a. La souche hémolytique réprime l'expression des messagers du TNF-RI, induit celle du TNF-RII et la solubilisation du TNF-RI<br>@In the first model, human monocytic cells were infected with 4 R. Equi strains differing in b-lactamin resistance. These strains regulate differently TNF-a production. The b-lactam resitant strains do not induce any measurable TNF-a mRNA expression and TNF-a secretion upon infection. The supernatant from b-lactam resitant R. Equi cultures promoted an inhibition of the induction of both TNF-a expression and release by the macrophages infected by the b-lactam susceptible strains. In the second model, human monocytic cells were infected with two strains of L. Monocytogenes, a hemolytic strain EGD and a non hemolytic mutant. These two strains regulate differently TNF-a activity and TNF-a receptors (TNF-R) mRNA expression. The hemolytic strain down-regulates TNF-RI mRNA expression, up-regulates TNF-RII mRNA expression, inhibits TNF-a activity and induces the release of soluble TNF-RI
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Guyard, Anne-Claire. "Etude comparative du mecanisme d'action de deux antidepresseurs de la classe des imao : la toloxatone et la tranylcypromine." Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05S006.
Full textAbstract:
Ce travail, realise au niveau du cortex cerebral et de l'hippocampe de rat, comporte deux parties : - l'examen des interactions moleculaires ; outre le caractere imao reversible et selectif de la toloxatone, deja decrit, une nouvelle propriete est mise en evidence : l'interaction allosterique avec le recepteur gaba-a ; - l'observation, apres traitements aigus ou chroniques, de la regulation des recepteurs noradrenergiques (β, α1, α2) et serotoninergiques (5-ht1a, 5-ht2, 5-ht3) ainsi que des elements de transduction associes a ces recepteurs. L'analyse des resultats permet d'avancer un certain nombre de conclusions sur la regulation des recepteurs noradrenergiques et serotoninergiques, qui sont developpes en discussion.
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Le, Vraux Valérie. "Régulation de la production du TNF par les stimulants des récepteurs de l'adénosine et d'autres médicaments anticytokines." Paris 5, 1994. http://www.theses.fr/1994PA05CD05.
Full textAbstract:
Le TNF est une cytokine pléiotropique avec des propriétés pro-inflammatoires. Il joue un rôle pathogénique ou de facteur aggravant dans de multiples pathologies touchant les grands systèmes de l'organisme. Ainsi, inhiber la production et/ou les effets du TNF représentent des cibles thérapeutiques majeures. Le but de notre travail a été de caractériser le profil d'action anti-TNF des stimulants des récepteurs de l'adénosine par une approche in vitro, utilisant la culture de monocytes humains associée à une approche in vivo, évaluant les effets d'un des agonistes des récepteurs de l'adénosine les plus puissants in vitro, dans deux modèles de réaction de phase aiguë chez le rat: modèle du choc endotoxinique connu comme étant dépendant du TNF et le modèle de l'œdème plantaire à la carragénine dont nous montrons qu'il est, au moins en partie, également dépendant du TNF. A partir de l'étude sur les monocytes humains stimulés avec de l'endotoxine, nous avons établi que l'adénosine et ses analogues inhibent la production de TNF à des concentrations, pour les plus actifs, inférieures à 10-6M voire 10-7M. De l'ordre de puissance d'activité des agonistes testés suggère la mise en jeu, partielle mais prépondérante, des récepteurs purinergiques du sous-type A2b. La mise en évidence d'une propriété anti-TNF similaire avec les médicaments agissant par l'intermédiaire de l'adénosine, (inhibant son captage par la cellule ou inhibant sa dégradation) suggère que l'adénosine puisse être ajoutée à la liste des substances endogènes anti-inflammatoires. La recherche de facteurs de couplage mis en jeu dans l'inhibition de la régulation du TNF par les agonistes des récepteurs de l'adénosine permet d'éliminer l'AMPc et le GMPc en tant que seconds messagers et incite à rechercher d'autres mécanismes de transduction. Néanmoins, l'association des agonistes des récepteurs de l'adénosine avec les agents stimulant l'adénylate cyclase ou avec les inhibiteurs de phosphodiestérase à AMPc permet de renforcer, voire de potentialiser, l'inhibition de la production de TNF. Les effets observés in vitro apparaissent pharmacologiquement relevants car l'utilisation des deux modèles d'inflammation a permis d'établir que la R-phénylisopropyladénosine (R-PIA), à de faibles doses (inférieurs à 0,5 mg/kg) inhibe fortement la production sérique de TNF dans le modèle du choc endotoxinique et est presque aussi puissante qu'un glucocorticoïde dans le modèle de l'œdème plantaire à la carragénine. Son action anti-oedémateuse est reproduite par l'administration d'un anticorps monoclonal anti-TNF et est associée à une réduction marquée des concentrations de TNF au site inflammatoire local. En revanche, la régulation de la production de la production d'IL6, systémique ou locale est régulée de façon différente dans les deux modèles expérimentaux. Ces résultats indiquent que les stimulants des récepteurs de l'adénosine peuvent être considérés comme une nouvelle classe pharmacologique d'anticytokines anti-inflammatoires qui agissent soit directement en tant qu'agonistes purinergiques P1 soit par l'intermédiaire de l'adénosine endogène.
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Achour, Lamia. "Contrôle de l'expression à la surface cellulaire du récepteur de chimiokine CCR5." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T011.
Full textAbstract:
CCR5 est un récepteur de chimiokine appartenant à la famille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG), jouant un rôle important dans l'entrée du VIH, en association avec la glycoprotéine CD4. Nous avons pu démontrer que la grande majorité de CCR5 (90%) était maintenue à l'état fonctionnel dans les compartiments intracellulaires des cellules immunitaires humaines et des fibroblastes transfectés. CCR5 est particulièrement localisé dans le réticulum endoplasmique (RE) et le Golgi. Les mécanismes moléculaires qui régulent l'export de CCR5 en provenance des compartiments intracellulaires s'avèrent différents dans le RE et le Golgi. La progression de CCR5 hors du RE est lente, et favorisée par son association avec CD4, qui fonctionne comme une protéine d'escorte et régule l'adressage de CCR5 vers la membrane plasmique. D'un point de vue mécanistique, CD4 induirait un changement conformationnel de CCR5, permettant de lever sa rétention dans le RE par PRAF2, une protéine résidente de ce compartiment. Dans le Golgi, la libération de CCR5 est beaucoup plus rapide (5-10min) et contrôlée par des signaux extracellulaires initiés par l'adhésion cellulaire. La rétention dans les compartiments intracellulaires de CCR5 et, plus généralement, des RCPG, pourrait constituer un système d'adaptation permettant de maintenir une réponse physiologique prolongée, dans des contextes cellulaires qui requièrent une réactivité de réponse soutenue, comme au cours du chimiotactisme des leucocytes, via le remplacement progressif des récepteurs de surface désensibilisés et internalisés<br>CCR5 a chemokine receptor belonging to the G protein-coupled receptor (GPCR) family, plays a major role in HIV entry, by forming the viral receptor in association with the glycoprotein CD4. We report that the vast majority of fully functional CCR5 (=90%) is maintained within the intracellular compartments of human immune cells and of transfected fibroblasts. Intracellular CCR5 is mostly localized in the endoplasmic reticulum (ER) and the Golgi apparatus. The molecular mechanisms which control the export of CCR5 from the intracellular compartments are different in the ER and the Golgi. In the ER, the progression of CCR5 is slow and depends on its association with CD4 which functions as an escort protein and controls the CCR5 exit. Association with CD4 would induce a conformational change of CCR5, which would release the receptor from its retention in the ER by a resident protein, PRAF2. In the Golgi, the release of CCR5 is faster (5-10min) and is controlled by extracellular signals promoted by cell adhesion. The intracellular retention of CCR5 and, more generally, of GPCRs could represent an adaptive mechanism to maintain a prolonged physiological response. In particular contexts, which require sustained receptor response such as leukocyte chemotaxis, intracellular receptors would allow the permanent replacement of cell surface desensitized and internalized receptors
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Mony, Laetitia. "Modulateurs allostériques des récepteurs NMDA contenant la sous-unité GluN2B : sites de liaison et mécanismes d'action." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05S005.
Full textAbstract:
Les récepteurs NMDA (rNMDA) forment une classe de récepteurs-canaux membranaires activés par le glutamate, le principal neurotransmetteur excitateur du cerveau des Vertébrés. Ils jouent un rôle prépondérant dans l'initiation de différentes formes de plasticité synaptique mais sont également impliqués dans diverses pathologies comme les ischémies cérébrales, les douleurs chroniques ou la schizophrénie. Les composés régulant l'activité des rNMDA ont donc un fort intérêt thérapeutique. De façon remarquable, les rNMDA possèdent de nombreux sites modulateurs extracellulaires pouvant lier des ions ou des petites molécules. Ces sites allostériques, qui diffèrent des sites de liaison pour les agonistes et de ceux situés dans le canal, sont d'autant plus intéressants qu'ils permettent de cibler sélectivement certains sous-types de rNMDA, ce que les autres sites ne permettent généralement pas. Ainsi, l'ifenprodil (modulateur négatif synthétique) et les polyamines (modulateurs positifs présents naturellement) sont des composés agissant sélectivement sur les rNMDA contenant la sous-unité GluN2B. Les sites de liaison et les mécanismes d'action de ces composés restaient cependant mal connus. En combinant modélisation moléculaire, électrophysiologie, mutagénèse dirigée et biochimie sur cystéines, nous avons tout d'abord établi un modèle tridimensionnel d'interactions de l'ifenprodil avec le domaine N-terminal (NTD) de la sous-unité GluN2B. Nous avons de plus identité l'interface de dimérisation entre les NTDs des sous-unités GluN1 et GluN2B comme le site de liaison des polyamines, et proposons que ces molécules potentialisent les rNMDA en maintenant proches les deux NTDs, empêchant ainsi leur fermeture. Ces travaux apportent de nouvelles informations sur les bases moléculaires qui régissent la régulation allostérique des rNMDA. Ils soulignent notamment le rôle central des NTDs dans le contrôle de l'activité des rNMDA et révèlent l'importance des interfaces entre sous-unités comme sites d'action de ligands allostériques<br>NMDA receptors (NMDARs) are a major class of excitatory neurotransmitter receptors in the brain of Vertebrates. They form glutamate-gated ion channels highly permeable to calcium that mediate synaptic plasticity. NMDAR dysfunction is involved in multiple brain disorders, including stroke, chronic pain and shizophrenia Compounds that regulate NMDAR activity are thus of therapeutic interest. Remarkably, NMDARs are endowed with multiple extracellular regulatory sites that recognise ions or small molecule ligands. These allosteric sites, which are distinct from agonist-binding and channel-permeation sites, are of particular interest because they can selectively target certain NMDAR subtypes. Thus, ifenprodil (a synthetic allosteric modulator) and polyamines (naturally occuring positive allosteric modulators) selectively modulate GluN2B-containing NMDARs. However, the binding sites and mechanisms of action of these compounds were still ill-denied. By combining molecular modelling, electrophysiology, site-directed mutagenesis and chemical protein modifcations, we first built a tridimensional model of ifenprodil interacting with the N-terminal domain (NTD) of the GluN2B subunit. Moreover, we have identified the dimerisation interface between GluN1 and GluN2B NTDs as polyamine binding-site. We propose that these molecules potentiate NMDARs by maintaining both NTDs in close proximity, thus preventing their closure. This work reveals new information about the molecular mechanisms underlying allosteric regulation of NMDARs. They highlight the central role of NTDs in the one control of NMDAR activity and show the importance of interfaces between subunits as binding sites for allosteric ligands
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Agadir, Anissa. "Récepteurs nucléaires de l'acide rétinoïque et concentrations cellulaires efficaces : implication dans la réponse au traitement différenciateur des leucémies aiguës promyélocytaires." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05CD04.
Full textAbstract:
Nous présentons dans cette étude les pharmacocinétiques plasmatiques et intracellulaires de l'acide rétinoïque tout-trans (ATRA) dans les leucémies aiguës promyélocytaires, et la caractérisation des récepteurs nucléaires de l'ATRA dans ces cellules. La mise au point de techniques spécifiques d'extraction et d'analyse par HPLC de l'ATRA et de ses dérivés (9-cis, 13-cis et 4-oxo métabolites), nous a permis de montrer que des concentrations importantes d'ATRA (2x10-6M) sont atteintes rapidement au niveau du plasma. A l'intérieur des cellules, l'ATRA pénètre très rapidement ( en quelques minutes) et les concentrations atteintes sont corrélées au degré de différenciation des cellules et à la réponse in vivo des patients. L'étude des métabolites plasmatiques et intracellulaires de l'ATRA, met en évidence des quantités faibles de l'AR 9-cis, d'AR 13-cis et pas d'oxo-métabolites. Une conversion rapide de ces derniers en dérivés polaires instables, dont les hydroxy ou d'autres molécules non identifiées, pourrait expliquer leur faible abondance. Les cellules blastiques des LAM³ possèdent une translocation chromosomique t(15 ;17), qui fusionnent un allèle du gène RARa au gène PML. Le rôle putatif des protéines de fusion résultantes et de la protéine RARa normale dans la différenciation, représente un point capital dans la compréhension de leurs implications dans les phénomènes de leucémogénèse et de réponse à l'ATRA. Nos résultats de purifications (HPLC, FPLC) et d'étude de l'affinité des récepteurs nucléaires de l'acide rétinoïque apportent un élément supplémentaire. En effet, nous avons montré que l'affinité des récepteurs nucléaires des cellules HL –60 est proche de celle retrouvée dans les cellules COS transfectées par RARa ou PML-RARa et que par contre, l'affinité des récepteurs nucléaires présents dans les cellules promyélocytaires NB4 est inférieure. Nous avons, par ailleurs, montré une modulation de la protéine RARa normale dans les cellules LAM 3. Ainsi, l'induction de l'allèle normal pourrait expliquer, au moins en partie, l'effet thérapeutique de l'ATRA dans les LAM3, par le biais d'une compétition fonctionnelle entre l'activité normale stimulée par le traitement et l'activité pathologique, résultat de la translocation. L'ATRA, permettrait la réversion du phénotype malin en restaurant une régulation " physiologique " des voies de contrôle de la différenciation cellulaires.
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Sbai, Hakima. "Contribution à l'étude de la réponse immunitaire induite par l'immunisation par l'ADN : anticorps et récepteurs cellulaires pour immunisation par l'ADN." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05CD06.
Full textAbstract:
L'immunisation par l'ADN est une nouvelle approche vaccinale. Elle consiste en l'introduction de l'ADN exprimant une protéine antigénique d'un pathogène dans les cellules d'un hôte. Si cette approche a déjà montré son efficacité dans plusieurs modèles animaux de maladies infectieuses, le mécanisme de son fonctionnement est encore mal connu. Nous avons donc entrepris l'étude du mécanisme d'activation des cellules T cytotoxiques (CTLs) chez la souris à la suite de l'immunisation par cette méthode. Nous avons pour cela choisi le modèle du virus de l'hépatite B (VHB) dont l'une des caractéristiques intéressantes est la forte réponse CTL obtenue après injection intramusculaire d'ADN exprimant l'antigène de surface du VHB (AgHBs). Dans la première partie de cette thèse, nous avons cherché à savoir si la sécrétion de l'antigène par les cellules transfectées était obligatoire pour le développement de la réponse CTL comme l'avaient suggéré d'autres résultats. Les souris ont été immunisées par des plasmides exprimant soit une forme non sécrétée de l'AgHBs, soit la forme sauvage sécrétée. Les résultats obtenus montrent que l'activité CTL est identique que l'AgHBs soit sécrété ou non. Ainsi, la sécrétion ou la libération de la protéine après immunisation par l'ADN, n'est pas nécessaire pour activer les CTLs. On peut donc conclure que le transfert de la protéine vers les cellules professionnelles présentatrices de l'antigène (ACPs) n'est pas un mécanisme indispensable pour l'activation des cellules T. Ces résultats suggèrent donc que la capture directe de l'ADN par les APCs (cellules dendritiques ou macrophages) est une conséquence majeure de l'immunisation par l'ADN. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons essayé de mieux comprendre les caractéristiques structuraux de l'épitope CTL de l'AgHBS reconnu chez les souris BALB/c. Ces connaissances pourraient nous renseigner sur les possibilités de moduler la réponse cytotoxique. L'ADN plasmidique exprimant l'AgHBs a été modifié de façon à ce que chacun des douze acides aminés de l'épitope CTL (Ld) soient individuellement substitué par le résidu alanine. La réponse cytotoxique induite chez la souris a été analysée un mois après immunisation par chaque plasmide. Cette étude a permis d'identifier les résidus essentiels pour l'induction de la réponse CTL. Nous avons également remarqué que certaines mutations conduisaient à une activité CTL plus forte que celle obtenue avec l'épitope Ld non muté. La réactivité de ces " hyperagonistes " indique clairement des réactions croisées avec la séquence sauvage de l'épitope CTL. Ces résultats soulèvent donc la possibilité d'utiliser des séquences agonistes comme un moyen de recrutement de CTLs de différents répertoires T qui réagissent néanmoins avec l'épitope naturel. Cette stratégie d'immunisation, encore très peu explorée, peut stimuler la réponse CTL chez des individus qui, pour une raison ou une autre, ne réussissent pas à initier une telle réponse lors d'un contact avec le pathogène. Nos résultats permettent ainsi de mieux comprendre le mécanisme d'induction de la réponse immunitaire après immunisation par l'ADN. Ils suggèrent quelques applications thérapeutiques possibles avec une telle approche vaccinale. Ce travail montre également que l'immunisation par l'ADN plasmidique permet de manipuler les séquences antigéniques avec un degré de facilité qui peut accélérer la recherche en vaccinologie.
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Ettahar, Asma. "Rôle de la nouvelle ubiquitine ligase PHRF1 dans la transduction des effets du TGF-β". Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T043.
Full textAbstract:
Le TGF-β est une cytokine multifonctionnelle dont l'un des effet principaux est l'inhibition de la prolifération cellulaire qui joue un rôle important dans la suppression de la tumorigénicité. La signalisation induite par le TGF-β est soumise à une régulation négative par le corépresseur transcriptionnel TGIF. Ce dernier a son tour a besoin d'être régulé. Pour cela, la cellule met en place des mécanismes de régulation négative parmi lesquels figure le système ubiquitine-protéasome. L'ubiquitination joue un rôle crucial dans la transduction de la signalisation du TGF-β. Nous avons identifié par le système du double-hybride de nouveaux partenaires du TGIF dont la nouvelle ubiquitine ligase E3 à domaine RING fïnger PHRF1 (PHD and RING Finger 1). L'ubiquitine ligase PHRF1 amplifie les effets du TGF-β sur la transcription et sur l'inhibition de la croissance cellulaire en agissant à deux niveaux. Dans un premier temps, PHRF1 ubiquitine TGIF et entraîne sa dégradation par le protéasome. Suite à cette dégradation, PHRF1 induit la redistribution de cPML dans le cytoplasme ou il participe à la formation du complexe Smad2/TβRI/SARA. Le gène PHRF1 est localisé dans le locus 11p15. 5, qui est souvent altéré dans les cancers du sein. En effet, nous avons démontré que la surexpression du PHRF1 peut supprimer la transformation tumorale dans des lignées du cancer du sein. Ces résultats nous permettent de proposer PHRF1 comme suppresseur de tumeurs des cancers du sein dont la dérégulation contribue à la perte des effets cytostatiques du TGF-β et par conséquent a la progression tumorale<br>The TGF-β is an antiproliferative agent that plays an important role in suppressing tumorigenicity. The homeodomain protein TGIF is well known as a negative regulator of the TGF-β signaling. TGIF is regulated by the ubiquitin-proteasom system. Ubiquitination plays an important role in the transduction of TGF-β signaling. Using a two-hybrid screen, we identified the RING finger protein PHRF1 (PHD and RING Finger 1) as a novel ubiquitin ligase that targets TGIF for degradation through the proteasome pathway, and thereby promoting the initiation of TGF-β signaling by enabling cPML relocalization in the cytoplasm, where it associates with SARA and coordinates the access of Smad2 for phosphorylation by the activated TGF-β receptor. We show that over-expression of PHRF1 may disable the tumoral development in the breast cancer cell lines. Indeed, the PHRF1 gene, which maps to a tumor suppressor locus at 11p15. 5, is somatically deleted or silenced in a significant proportion of human breast cancer. Therefore, our findings on the mode of action of PHRF1 provide new and important insights into the role of the TGF-β tumor suppressor network in malignant transformation
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Boularan, Cédric. "Mécanismes de régulation des βarrestines et des récepteurs couplés aux protéines G : Oligomérisation et échafaudage moléculaire". Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T004.
Full textAbstract:
Les βarrestines (βarrs) contrôlent dans le temps et l'espace la signalisation en aval des récepteurs couplés aux protéines G en favorisant leur désensibilisation et leur endocytose. Les βarrs participent également à différentes voies de signalisation et leur capacité d'échafauder de multiples complexes expliquent la pléiotropie de leurs fonctions biologiques. Nos travaux montrent que l'oligomérisation des βarrs stabilise le suppresseur de tumeur p53. En délocalisant la protéine Mdm2, la quantité d'oligomères de βarr2 transitant par le noyau contrôle la transition G2/M. De plus, la progression du cycle cellulaire est liée à la localisation deβarr2 au centrosome et au cil primaire. Nos travaux étayent l'hypothèse que ce ne sont plus les protéines mais les complexes moléculaires qu'elles mettent en œuvre qui régulent les fonctions cellulaires. Nos données permettent d'envisager la βarr2 en tant que suppresseur de tumeurs dont l'implication dans les processus cancéreux doit être étudiée<br>G protein coupled receptor (GPCR) are spatio-temporal regulated by βarrestins proteins (βarrs) that mediate desensitization, endocytosis or modulation of signaling pathway. Oligomerization and scaffolding concepts explain the multiplicity of parrs functions. Our work focused on the role played by these multimolecular complexes. We showed that βarr2 oligomerizatio i, coupled to its nucleo-cytoplasmic shuttling, inhibited Mdm2-dependant degradation of p53 to mediate cell cycle regulation. We have also shown that βarr2 localizations to centrosome and to primary cilium are involved in proliferation processes. Altogether, these data supported the hypothesis that rather than proteins alone, multimolecular complexes are key regulator of cellular functions. Moreover, our data also revealed the βarr2 could be a tumor suppressor, and constitued a new target in tumoral processes
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Slama, Abdelhamid. "Étude comparée du récepteur des asialoglycoprotéines sur rat normal et diabétique : purification, biosynthèse et endocytose en présence ou non de monensine." Paris 11, 1990. http://www.theses.fr/1990PA114851.
Full textAbstract:
Le récepteur hépatique des asialoglycoprotéines ou HBP (hepatic binding protein) est caractérisé par sa capacité à reconnaître et à médier l'endocytose et la dégradation des agiologlycoprotéines. Sa capacité fonctionnelle est diminuée au cours du diabète insulinodépendant induit par la streptozotocine. Nous avons démontré que le diabète provoque l'inactivation d'environ 50% des récepteurs HBP. Leur purification par chromatographie d'immunoaffinité montre la présence connue de trois sous-unités : l'une majeure de 42 Kd et deux mineures de 49 et 54 Kd ; Il apparaît de plus une nouvelle et importante sous-unité de 38 Kd, présente mais en moindre quantité chez les rats normaux. L'étude de la biosynthèse du récepteur sur hépatocytes isolés montre que cette sous-unité correspond à un intermédiaire de biosynthèse. Sa persistance chez les diabétiques s'accompagne d'une diminution de la sous-unité majeure du récepteur. Au niveau fonctionnel, l'étude de l'endocytose par l'intermédiaire d'une vague synchrone de ligands met en évidence la présence de deux populations différentes de récepteurs caractérisées par leur cinétique d'internalisation : l'une est lente, l'autre rapide. La dissociation des complexes internalisés se fait également avec deux vitesses différentes. L'état diabétique provoque une diminution du nombre de récepteurs à internalisation rapide. Cette diminution se traduit par une faible dissociation des complexes internalisés. La Monensine ionophore carboxylique qui empêche l'acidification des vésicules intracellulaires provoque, aussi bien au niveau de la biosynthèse du récepteur que de ces capacités d'endocytose, des perturbations très proches de celles induites par le diabète. L'emploi de modulations soit in vivo comme le diabète soit in vitro comme la Monensine se révèlent donc comme des outils précieux pour mieux décrire et tenter d'approcher les régulations de fonctionnement du récepteur modèle qu'est le HBP.
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Verneuil, Laurence. "L' apoptose caspase-dépendante dans les interactions hôte / virus et en immunopathologie." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077200.
Full textAbstract:
L'apoptose est un processus physiologique actif de mort cellulaire impliquant un programme génétiquement contrôlé d'autodestruction de la cellule. Deux voies effectrices de l'apoptose sont décrites, la voie des récepteurs membranaires de mort cellulaire se liant à un ligand et la voie mitochondriale impliquant le relarguage de molécules effectrices pro-apoptotiques. Ces deux voies activent en aval les caspases effectrices de l'apoptose. Un dysfonctionnement des mécanismes régulateurs de l'apoptose peut engendrer des pathologies. Nos travaux ont exploré un rôle possible de l'induction de l'apoptose et les mécanismes moléculaires impliqués, dans l'infection par le cytomégalovirus (CMV) et la GVHD aiguë (maladie du greffon contre l'hôte). Des protéines anti-apoptotiques du CMV humain sont connues, en revanche aucune protéine pro-apoptotique n'a été décrite. Dans un modèle cellulaire, in vitro, nous avons montré que, l'expression du récepteur viral de chimiokines US28, produit d'un gène du CMV, induisait une apoptose caspase dépendante de manière constitutive (indépendante d'un ligand), et indépendante de la voie mitochondriale et de celle des récepteurs de mort. Dans le contexte de la greffe de moelle osseuse, la GVHD correspond à une réponse allogénique par les lymphocytes T d'un donneur contre des cellules cibles épithéliales d'un receveur. Dans un modèle murin de GVHD aiguë, in vivo, nous avons montré une apoptose des cellules endothéliales précédant l'induction de l'apoptose des cellules épithéliales dans la muqueuse orale, dépendante de l'expression de FasL (ligand du récepteur de mort Pas) par les lymphocytes T activés du donneur, sans conditionnement préalable<br>Apoptosis is an active physiological process involving a genetically regulated cell suicide process. Two effector cytolytic pathways of apoptosis are involved: one is triggered by the engagement of cell-surface death receptors of the Fas/tumor necrosis factor receptor (TNFR) family, and the other is the mitochondrial pathway, which involves released of pro-apoptotic effectors. These two pathways trigger the effector caspases activation. A deregulation of apoptosis control mechanisms can provide some pathologies. We investigate a possible implication of apoptosis induction and the molecular mechanisms involved in the cytomegalovirus infection and in the acute graft versus host disease (GVHD). HCMV (human cytomegalovirus) encodes proteins with antiapoptotic properties but no proapoptotic protein is known. Here we show, in vitro, that the G protein coupled receptor (GPCR), US28 encoded by HCMV, constitutively induced a caspase-dependent apoptosis but independent of the mitochondrial pathway activation and of cellular TNF family death receptor activation. In the context of allogeneic bone marrow grafting, the GVHD corresponds to an allogeneic response of donor effector cells against recipient epithelial target cells. In a murine model of acute GVHD, in vivo, our results shown that endothelial cell death precedes the induction of epithelial cell death in the oral mucosa and that FasL expression by allogeneic actived lymphocytes T is required, in the absence of any conditioning treatment
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Kollen, Mélanie. "Etude du viellissement des mécanismes de la mémoire dans l'aire CA1 de l'hippocampe de rongeurs." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T025.
Full textAbstract:
Le vieillissement s'accompagne de troubles mnésiques. On pense aujourd'hui, que des modifications de la plasticité synoptique, sont à l'origine de ces troubles. Les récepteurs NMD A sont particulièrement important dans l'induction de cette plasticité, et notamment de la LTD (Long Term Dépression). Cette thèse montre le rôle de ces récepteurs en fonction (1) de leurs sous-unités (NR2A ou NR2B), (2) de leur localisation à la synapse (synaptique ou extrasynaptique), et (3) de l'âge des animaux (Smois vs 24mois). Nous avons aussi étudié les capacités mnésiques, la transmission et la plasticité synaptique de la souche de rats Lou/C/Jall, ayant un métabolisme et une longévité particuliers (restriction calorique continue et spontanée, et longévité moyenne de 28 mois), mais dont les capacités cognitives sont encore inconnues. Enfin, nous avons précisé le rôle de la protéine phosphatase 1 (PP1), activée en aval des récepteurs NMDA dans la modulation de la plasticité synaptique<br>Aging is associated with memory deficits. Alteration of synaptic plasticity is probably the basis of age-related memory deficits. NMDA receptors are particularly important in the induction of synaptic plasticity such as long term depression (LTD). The 1st aim of this PhD is to underline the role of these receptors according to (1) their subunit composition (NR2A or NR2B), (2) their localization at the synapse (synaptic or extrasynaptic), and (3) the age of the animals (3 or 24 month-old). The 2nd aim is to study mnesic capacities as well as hippocampal synaptic transmission and synaptic plasticity in the Lou/C/Jall rat strain, already studied for its specific metabolism and its longevity (rats of this strain show a natural and continuous caloric restriction, as well as a median lifespan of 28 month-old). However, their mnesic capacities are still unknown. The 3rd aim of this study is to precise the role of protein phosphatase 1 (PP1), activated downstream NMDA receptor during LTD
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Molla, Herman Anahi. "Trafic intracellulaire et ciliogénèse." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T020.
Full textAbstract:
Le cil primaire (CP) est présent dans presque la totalité de cellules des vertébrés, et des défauts de son assemblage/fonctionnement sont associés à des nombreuses ciliopathies. Le CP semble fonctionner comme une antenne mécanosensorielle dû à la présence de récepteurs dans la membrane ciliaire, comme les récepteurs couplés aux protéines G (RCPGs). Les beta-arrestines (βarrs) 1 et 2 sont connues pour réguler les RCPGs membranaires, ce qui suggère qu'elles pourraient également réguler les RCPGs ciliaires. Nous avons observé que la parr2 est localisée au cil primaire de façon spécifique et qu'elle interagit avec Kif3A et 14-3-3, deux protéines importantes pour la ciliogenèse, suggérant un possible rôle directe sur la formation du cil. En effet, la parr2 joue un rôle sur la ciliogenèse, cependant, ceci semble être indirecte car son absence entraîne une surproliferation cellulaire, empêchant la formation du cil. Nous avons constaté que le cil est invaginé dans une poche ciliaire qui peut être transitoire ou permanente selon le type cellulaire d'où bourgeonnent de puits couverts de clathrine, ce qui nous a invité à étudier le rôle de complexes adaptateurs (AP) dans la ciliogenèse, observant que AP1 serait important pour la morphologie/orientation du cil. Ainsi, il est possible d'imaginer que cette poche ciliaire serve de plateforme d'arrimage de vésicules provenant du Golgi ainsi que pour de processus d'endocytose qui pourraient réguler des composant ciliaires<br>The primary cilium (PC) is present in almost all vertebrate cells and defects in its assembly/function are associated with a huge number of ciliopathies. PC seems to function as a mecanosensory antenna since is enriched in receptors, like the G-protein coupled receptors (RCPGs). Beta-arrestines (βarrs) 1 and 2 regulate GPCR at the cell membrane, suggesting that they could also play a role in cilia-associated GPCRs. We found that βarr2 is specifically localised to PC and that it interacts with Kif3A and 14-3-3, two proteins involved in ciliogenesis, suggesting a possible function of βarr2 in ciliogenesis. Indeed, βarr2 absence impedes PC formation. Nevertheless, this seems to be an indirect effect due to the fact that the absence of βarr2 leads to a cell over proliferation, preventing cilia formation. We also observed that PC is invaginated in what we call the ciliary pocket, which can be transitory or permanent, depending on the cell type, from which clathrin coated pits bud forming clathrine coated vesicles. This led us to study the role of clathrin adaptor complexes (AP) in ciliogenesis, and we could observe that API would be important for the morphology/orientation of PC. Thus, it is possible to imagine that the ciliary pocket serves as a membrane platteform for the docking of Golgi-coming vesicles or for endocytic process which could control ciliary components
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Grémiaux, Alexandre. "Sex-pheronome representation in the moth olfactory pathway : from data analysis to model." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T055.
Full textAbstract:
Le but de ce travail est d'identifier, quantifier et interpréter les transformations du signal de la phéromone sexuelle entre les neurones de 1er ordre et les neurones du 2nd ordre chez le papillon de nuit A. Ipsilon. D'abord nous avons analysé statistiquement les enregistrements de neurones récepteurs olfactifs (NRO, 1er ordre) stimulés avec différentes doses du composé majoritaire de la phéromone sexuelle. Cela a permis de reconstruire le signal de projection (NP, 2nd ordre) stimulés de la même façon. Puis nous avons décrit la transformation du signal des NRO aux NP en termes de taux de décharge et de latence des réponses. Enfin, nous avons modélisé le réseau neural connectant NRO et NP et qui rend compte des transformations observées. De plus, nous avons contribué à une revue des modèles de chimio-transduction dans les NRO et écrit une autre revue sur l'intégration d'information dans les deux premiers niveaux du système olfactif<br>This work aims at identifying, quantifying and interpreting the transformations from first- t second-order sensory neurons of the sex pheromone signal in the moth Agrotis ipsilon. First, we analysed statistically single-unit electrophysiological recordings from olfactory receptor neurons (ORNs, first order) stimulated with different doses of the major compound of the sex pheromone blend, which allowed us to reconstruct the sex pheronome input to the olfactory system. Second, we did the same analysis on projection neurons (PNs, second order) stimulated in the same way. Third, we described the signal transformation from ORNs to PNs in terms of firing rates and response latencies. Fourth, we developed a model of the neural network connecting ORNs and PNs accounting for the observed transformations. In addition, we contributed to a review summarizing the chemotransduction models in ORNs another review on information processing in two first layers of the olfactory system
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Shirvani, Hamasseh. "Export régulé des récepteurs couplés aux protéines G depuis des compartiments de biosynthèse vers la membrane plasmique." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T053.
Full textAbstract:
Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG), la plus grande famille de récepteurs membranaires, sont impliqués dans presque toutes les grandes fonctions physiologiques de l'organisme. Le nombre de ces récepteurs à la surface cellulaire au moment de la stimulation représente un paramètre essentiel de leur réponse fonctionnelle. Les travaux présentés dans ce manuscrit étudient les mécanismes qui contrôlent l'adressage vers la membrane plasmique de deux récepteurs en particulier, le récepteur de chimiokine CCR5 et le récepteur métabotropique GBR1 de l'acide gamma amiobutyrique (GABA), pour lesquels l'adressage vers la surface constitue une régulation essentielle de leurs fonctions physiologiques. Nous avons pu caractériser une famille de protéines ubiquitaires, les PRAF (de Prenylated Rab Acceptor Protein), comptant trois isoformes, qui contribuent à la rétention intracellulaire de CCR5 et GBR1. En particulier, l'adressage de surface de CCR5 et GBR1 depuis le RE est contrôlé négativement par PRAF2. En ce qui concerne CCR5, nous avons découvert qu'il était majoritairement (à 90%) retenu à l'état fonctionnel dans le réticulum endoplasmique (RE) et le Golgi. Nous avons montré que la libération de CCR5 à partir du RE était favorisée par son association avec CD4, qui fonctionne, dans ce contexte, comme une protéine d'escorte. CD4 induirait un changement conformationnel permettant de lever la rétention de CCR5 par PRAF2 dans le RE. L'adressage de GBR1 à la surface nécessite l'interaction avec l'isoforme GBR2 du récepteur. Comme PRAF2, GBR2 interagit avec la queue C-terminale de GBR1, masquant ainsi le signal de rétention de type RXR qui représente une interface d'interaction entre GBR1 et PRAF2. PRAF2 est un "gate-keeper", un contrôleur négatif de l'export de GB1. L'interaction de GB1-PRAF2 représente un nouveau mécanisme de contrôle de la fonction du GBR, fondée sur l'équilibre stoechiométrique entre PRAF2 et GBR2. Nos suggèrent que tous les membres de la famille des PRAFs, pourraient fonctionner comme des gate-keepers dans les compartiments où ils sont exprimés et que leur niveau d'expression est inversement proportionnel à la densité des récepteurs en surface. Nos travaux ont permis de montrer que ce nouveau mécanisme de régulation de l'expression de surface des RCPG peut être perturbé dans des conditions pathologiques comme la dépression<br>G-protein coupled receptors (GPCRs) are the largest family of membrane receptors and are involved in major physiological functions. The number of these receptors on the cell surface at the time of stimulation is crucial for their functional response. Our work focuses on the mechanisms that control the targeting to the plasma membrane of two GPCRs, the chemokine CCR5 receptor and the -aminobutiric acid (GABA) metabotropic receptor (GB1). Here, we demonstrate how a family of ubiquitus proteins, PRAFs (Prenylated Rab Acceptor of protein), contribute to the intracellular retention of CCR5 and GB1. In particular, the membrane export of CCR5 and GB1 from the endoplasmic reticulum (ER) is negatively controlled by PRAF2. For CCR5, we report that the majority of fully functional CCR5 (90%) is maintained within intracellular compartments (ER and Golgi). We show that the release of CCR5 from the ER is enhanced by its association with CD4, which functions in this context, as an escort protein. CD4 induces a conformational change in the CCR5/praf2 complex, thereby liberating CCR5 from PRAF2 and promoting its trafficking to the plasma membrane. As for GB1, its cell surface translocation requires the interaction with the GB2 receptor isoform. GB2 interacts with the C-terminal tail of GB1, masking an RXR retention signal that represents a new mechanisms for controlling the function of GABA receptors based on the stoichiometric balance between PRAF2 and GB2. PRAF2 is therefore considered a "gatekeeper," a negative controller for export of GB1. In conclusion, our data suggest that specific PRAF family members work as "gatekeepers" within the compartments where they are expressed and therefore could act as regulators of GPCR export. This mechanism of GPCR regulation can be perturbed in pathologic conditions since PRAF2 itself is regulated in vivo in depression-like states in mice
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Gbahou, Florence. "Etude moléculaire et pharmacologique du récepteur H3 de l'histamine." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05S016.
Full textAbstract:
Identifiée dans notre laboratoire en 1983 en tant qu'autorécepteur régulant la libération et la synthèse de l'histamine cérébrale, le récepteur H3 (RH3) de l'histamine a finalement été cloné en 1999. Les études que nous avons menées sur le RH3 ont permis de beaucoup avancer dans sa connaissance moléculaire grâce à la mise en évidence de plusieurs sources de variation de sa pharmacologie telles que ses nombreuses isoformes fonctionnelles et non fonctionelles ainsi que l'existence d'un récepteur apparenté, le récepteur H4. Ces études nous ont également permis de démontrer l'existence physiologique de deux concepts pharmacologiques (activité constitutive et agonisme protée) qui remettent en cause le principe général d'activation des RCPG. En conclusion, le RH3 est un outil de choix pour l'étude moléculaire des RCPG pusqu'il permet d'étudier plusieurs aspects importants de leur hétérogénéité pharmacologique allant des formes apparentées, aux isoformes et aux états conformationnels multiples<br>The histamine H3 receptor (RH3) has been identified in 1983 by our group as a presynaptic autoreceptor regulating histamine release and synthesis in the brain. Following its cloning in 1999, the molecular studies initiated by our group allowed to progress in the RH3 molecular knowledge and pharmacological heterogeneity such as its various functional and non functional isoforms as well as the existence of RH3-like, the histamine receptor H4. These studies also allowed us to demonstrate the physiological existence of two pharmacological concepts (constitutive activity and protean agonism) which may be taken into account for the general principle of RCPGs activation. In conclusion, the RH3 is a target of choice for the molecular study of GPCRs since it allows studying several important aspects of their pharmacological heterogeneity such as the receptors-like, the isoforms as well as the multiple conformational states
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Mbika-Binzangi, Jean-Pierre. "Etude du rôle de la sarcolectine dans le développement tissulaire et le système immunitaire." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05S008.
Full textAbstract:
La sarcolectine (SCL) a été isolée pour la première fois en 1968. C’est une protéine de 55 kDa composée de 469 acides aminés. Elle fut d’abord appelée TAI (Tissue Antagonist of Interferon) parce qu’elle lève l’activité antivirale établie de l’interféron. La sarcolectine se trouve en quantité anormalement élevée dans beaucoup des tumeurs et outre l’inhibition de l’activité antivirale établie de l’interféron, elle se fixe sur de nombreux sucres et maintient en culture des lignées cellulaires dans un milieu exempt de sérum de veau fœtal. La sarcolectine est donc un facteur de croissance qui active l’ADN cellulaire et induit la prolifération cellulaire. Dans ce travail, nous avons exploré le rôle qu’elle peut jouer dans le système immunitaire humain. Le traitement de 30 échantillons de cellules mononucléaires de sang périphérique avec la SCL montre que certains répondent faiblement et d’ autres fortement. Le pic d’activation qui survient entre 6 et 7 jours de culture de ces cellules nécessite la présence des monocytes/macrophages car en leur absence les lymphocytes T ne prolifèrent pas. La SCL augmente aussi l’expression membranaire du récepteur de l’IL-2 (CD25), du récepteur CD28 de co-stimulation des lymphocytes T4, et active les lymphocytes T4 mémoires de phénotype CD3+CD4+CD45RO+. Cette activation du récepteur CD25 de l’IL-2 ne s’accompagne pas de la sécrétion de l’IL-2 dans le milieu de culture. Le traitement des cellules mononucléaires du sang périphérique avec la SCL et les anticorps anti-CD3 et anti-CD28 montre une inhibition totale ou partielle de prolifération des lymphocytes T. Nous avons aussi constaté que la SCL est un bon inducteur des cytokines pro et anti-inflammatoires. Elle induit aussi l’augmentation des ARNm qui codent pour l’IFN- et l’IFN-, ainsi que la sécrétion de ces cytokines dans le milieu de culture des cellules mononucléaires de sang périphérique. Cette production des IFN dans le milieu de culture est précoce quand les cellules sont activées en présence de l’IL-2 exogène. ’autre part, nous avons aussi établi que la SCL active les récepteurs de la réponse immunitaire innée présents à la surface membranaire des cellules du système immunitaire, plus spécialement les récepteurs de type Toll ou TLRs et en l’occurrence TLR-3 et TLR-9. TLR-3 reconnaît les dsRNA viraux, tandis que TLR-9 reconnaît les motifs CpG non méthylés des ADN bactériens et viraux. Le traitement prolongé des cellules mononucléaires de sang périphérique montre également la sécrétion de novo de la SCL qui agit en feed-back contre l’interféron produit dans le milieu de culture, formant une boucle d’activation/inhibition du système immunitaire. En résumé, la SCL peut être considérée comme un immunomodulateur qui stimule les cellules immunitaires, active les TLRs 3 et 9 et produit des cytokines pro et anti-inflammatoires<br>Sarcolectin (SOL) is a 55 kDa protein with 469 aminoacids, isolated in the first time in 1968. Abnormally elevated in most tumors, SCL is a cell growth factor which activates cell DNA, induces cell proliferation, and antagonises antiviral effect of interferon. In this issue, we explored the SCL effects on the human immune system. The SCL treatment cf 30 peripheral blood mononuclear samples (PBMC) showed two types of celI stimulation: a low and a hight one. This cell stimulation picked up after 6 or 7 days of culture in the presence of monocytes/macrophages, because in the absence of these cells, no effect was observed. The SCL-stimulated PBMC exhibited CD3+CD4+CD45RO+ memory T4 lymphocytes proliferation with CD25 and CD28 celI surface receptor over-expression, and with pro and anti-inflammatory cytokines including IFN-α/β and TLR-3 and TLR-9 mRNA over-expression. TLR-3 recognises viral double-stranded RNA and TLR-9 senses un-methylated CpG DNA
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Philippart, François. "Résistance des macrophages alvéolaires à la tolérance aux agonistes des Toll-like receptors : implication et origine du microenvironnement cytokinique." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T041.
Full textAbstract:
La tolérance aux endotoxines et plus généralement aux agonistes des Toll-like receptors (TLR), des monocytes et macrophages est un phénomène correspondant à une modification de la réponse fonctionnelle (en particulier une altération de la production de cytokines proinflammatoires) au cours de stimulation itératives par ces agonistes, notamment le lipopolysaccharide (LPS). La tolérance est observée avec les monocytes ainsi que les macrophages de nombreux tissus (cavité péritonéale, rate, moelle osseuse), mais elle n’est pas retrouvée avec les macrophages alvéolaires (MA). Notre étude s’est intéressée aux particularités cellulaires et cytokiniques du microenvironnement pulmonaire pouvant participer à cette singularité fonctionnelle des MA. Nous avons confirmé l’absence de tolérance des MA tant ex vivo qu’in vitro. Alors qu’une homotolérance et une tolérance croisée est retrouvée in vitro avec les macrophages péritonéaux en réponse aux agonistes TLR2 (Pam3CSK4), TLR3 (poly I:C), TLR4 (LPS) et TLR9 (CpG), aucune tolérance n’est observée avec les MA. Au contraire, un phénomène de « priming » a été mis en évidence dans la majorité des situations de stimulation croisée à l’exception des stimulations par le LPS et CpG. L’inhibition systémique in vivo du granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) produit en grande quantité par les pneumocytes II (PCII), est responsable d’une modification de la seconde réponse des MA au LPS. De même la réponse des MA issus de souris déficientes pour le récepteur de l’interféron- (IFN-) ou l’inhibition de cette cytokine in vivo aboutit à des résultats semblables. L’étude de la réponse des MA issus de lignées de souris déficientes en différentes lignées leucocytaires (rag2-/-, rag2/c -/-, cd3 -/-, -/-, il-15 -/-, Jα18 -/-) nous permet de démontrer l’implication des cellules NK (NK) et des lymphocytes B (LB) dans la production de l’IFN- au niveau du microenvironnement pulmonaire. En conclusion, les MA sont résistants à la tolérance aux agonistes TLR. Cette singularité fonctionnelle est sous-tendue par la présence de GM-CSF (produit par les PCII) et d’IFN- (dont la production est sous la dépendance des NK et des LB) dans le microenvironnement alvéolaire<br>Monocytes and macrophages endotoxin tolerance, and more widely Toll-like receptors (TLR) agonists tolerance is a phenomenon corresponding to a modification of functional response of these cells (particularly an alteration of proinflammatory cytokines) during iterative stimulation by theses agonists, notably the lipopolysaccharide (LPS). Tolerance is observed with monocytes and macrophages from many tissue (peritoneal cavity, spleen, bone marrow), but is not detected with alveolar macrophages (AM). We investigated the cytokine and cell specificities of lung microenvironment possibly involved in that singular behavior of AM. We confirmed the absence of tolerization of AM either ex vivo, or in vitro. While an homotolérance and a cross-tolerance was observed in vitro with peritoneal macrophages in response to TLR2 (Pam3CSK4), TLR3 (poly I:C), TLR4 (LPS) and TLR9 (CpG) ligand, no such tolerance was observed with AM. In contrast, the majority of cross stimulations gave rise to a priming effect. In vivo systemic inhibition of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) (produce in large amounts by type II pneumocytes, IIPC) led to a modification of the second response of AM to LPS. Similarly, AM obtained from interferon-gamma (IFN-gamma) receptor KO mice, or after in vivo inhibition of this cytokine, allowed the observation of tolerance. The responses of AM isolated from different KO mice (rag2-/-, rag2/gammac -/-, cd3epsilon -/-, mu-/-, il-15 -/-, Jα18 -/-) lacking various leukocytes lineages led us to demonstrate the involvement of NK cells and B cells in the IFN-gamma production within the lung microenvironment. In summary, AM are resistant to tolerance to TLR agonists. This functional singularity is underlined by the presence of GM-CSF (produced by IIPC) and of IFN-gamma of which production is depending of NK and B cells) within lung microenvironment
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Elbim, Carole. "Interactions des cytosines proinflammatoires avec le polynucléaire neutrophile humain." Paris 5, 1994. http://www.theses.fr/1994PA05CD09.
Full textAbstract:
La production de formes réactives de l'oxygène (explosion oxydative) par les polynucléaires neutrophiles (PN) stimulés joue un rôle majeur dans la défense de l'organisme contre différents agents pathogènes essentiellement bactériens et fungiques. Cette production est soumise à une régulation fine et précise notamment par les cytokines. Dans la première partie de ce travail, nous avons étudié, par cytométrie en flux, l'effet des cytokines proinflammatoires sur l'explosion oxydative des PN dans le sang total. Nous avons ainsi montré qu'aucune des cytokines étudiées (IL-1a, IL-1ß, TNFa, IL-6, IL-8, GM-CSF) ne déclenche isolément l'explosion oxydative des PN. Par contre, le prétraitement des PN par le TNF, l'IL-8 ou le GM-CSF suivie de l'addiction d'un formyl peptide dérivé des protéines bactériennes, conduit à l'apparition d'une sous-population de PN produisant d'importantes quantités de peroxyde d'hydrogène (H2O2). Cette sous-population se caractérise par une augmentation de la liaison des formyl peptides à la surface des PN. Une augmentation de la liaison de formyl peptides à la surface des PN. Une dysrégulation des interactions entre cytokines et PN peut contribuer à l'établissement de lésions entre cytokines et PN peut contribuer à l'établissement de lésions tissulaires sévères lors de certaines situations pathologiques. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons étudié l'activité fonctionnelle des PN au cours de l'infection par VIH, une augmentation des taux plasmiques de certaines cytokines ayant été rapportée chez les patients infectés par le VIH. Cette étude a montré une hyperactivation des polynucléaires dans le sang circulant des patients infectés par le VIH caractérisée par une augmentation de l'expression de la molécule d'adhérence CD 11b, une diminution de l'expression de la L-sélectine (CD62L), une augmentation de la polymérisation de l'actine et une augmentation de la production spontanée d'H2O2. Cet état d'activation pourrait contribuer à l'agression oxydante du système immunitaire et intervenir dans la pathogénie de certaines vascularités leucocytoclasiques rapportées chez les patients infectés par le VIH. De plus, après amorçage par le TNF ou l'IL-8, l'explosion oxydative des polynucléaires en réponse aux formyl-peptides est diminuée. Cette diminution est corrélée avec l'augmentation des taux plasmiques des cytokines suggérant de ce fait un phénomène de désensibilisation. Ces deux dernières anomalies observées après stimulation par les formyl-peptides sont corrélées avec la diminution du taux de cellules CD4+ et pourraient intervenir dans la pathogénie de certaines infections bactériennes et fungiques au cours de l'infection par le VIH.
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Zhang, Shen-Ying. "Herpes simplex encephalitis in children : deficiences in Toll-Like receptor 3 signalling pathway." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05T016.
Full textAbstract:
Herpes simplex virus (HSV)-l encephalitis (HSE) is the most common sporadic viral encephalitis in western countries, the pathogenesis of HSE remains elusive. We hypothesized that HSE may result, in at least some children, from an unidentified form of primary immunodeficiency, associated with a Mendelian susceptibility to HSV-1, with impaired IFN-a-, -ft- and -A-mediated immunity. Our identification of autosomal recessive UNC-93B deficiency in two otherwise healthy HSE patients and autosomal dominant TLR3 deficiency in other two otherwise healthy HSE patients provided the first two genetic aetiologies of isolated HSE. The production of IFN-P and -A, in UNC-93B-deficient and TLR3-heterozygous fibroblasts was impaired upon poly(LC) stimulation and viral infections including HSV-1. Higher virus titres and enhanced cell mortality upon HSV-1 and VSV infection were observed in both UNC93B-deficient and TLR3-heterozygous fibroblasts, rescued with IFN-a, -0 and -A, treatment, indicating a plausible pathogenesis of HSE. However the patients'' blood dendritic cells (DCs) and keratinocytes produced IFNs in response to poly(LC), and most other viruses induced IFNs in a TLR3-independent manner, providing the first clue for the lack oil other severe viral infections in these patients. Human UNC-93B-TLR3-IFNs pathway is thus suggested to be critical for anti-HSV-1 immunity in the CNS, at least in some circumstances, but redundant in host defense to most other virus infections.
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Chantôme, Aurélie. "Régulation de la NO synthase inductible dans des cellules épithéliales mammaires murines par des récepteurs à domaine TIR." Dijon, 2004. http://www.theses.fr/2004DIJOMU03.
Full textAbstract:
Les cellules EMT-6J produisent 3 fois plus de NO que les cellules EMT-6H en réponse à l'IL-1β ou aux LPS, effet corrélé avec l'activation de NF-kB. La dégradation des lkB, le transport nucléo-cytoplasmique de NF-kB ainsi que son activité de liaison à l'ADN sont similaires dans les 2 clones. En revanche, la phosphorylation des résidus sérines de p65 est observée dans les cellules EMT-6J et non dans les cellules EMT-6H. Cette phosphorylation est inhibée par un inhibiteur de l'activité CKII. La déplétion en CKII diminue l'activité transcriptionnelle de NF-kB ainsi que la transcription du gène NOSII dans les cellules EMT-6J pour revenir au niveau observé dans les cellules EMT-6H traitées dans les même conditions. Ces résultats démontrent que la phosphorylation de p65 médiée par la CKII potentialise l'activité du facteur in vivo. Cette modification post-traductionnelle de p65 permet d'augmenter la transcription du gène NOSII dans les cellules tumorales stimulées par de l'IL-1β ou des LPS.
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Vallois, David. "Analyse de facteurs génétiques impliqués dans le développement du diabète de type 1 chez la souris NOD." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05T026.
Full textAbstract:
Le diabète de type 1 (DT1) est une maladie multifactorielle pour laquelle des facteurs environnementaux associés à un terrain génétique de prédisposition sont responsables de la destruction auto-immune des cellules |3 insulino-sécrétrices par des lymphocytes T. Au locus Iddô du chromosome 6 murin, les allèles NOD confèrent à la lignée témoin NOD (CO) une susceptibilité au DT1 alors que les allèles C3H/HeJ confèrent une protection contre la maladie à la lignée congénique NOD. C3H 6. VHI (lignée 6. YIII). Mes résultats suggèrent que plusieurs facteurs concourent à une meilleure régulation de la réaction auto-immune chez la lignée 6. VTH : (i) une activité suppressive in vivo accrue des cellules T régulatrices, (ii) une diminution de la voie de signalisation TLR1 conduisant à l'altération des signaux de costimulation au niveau des cellules T et à la diminution de l'expression de cytokines pro-inflammatoires par les macrophages, (iii) une altération du développement des cellules iNKT CD4+<br>Type 1 diabetes (T1D) is a multifactotial disease: some environmental factors in association with susceptible genetic background lead to the destruction of insuline-producing {J cells by autoreactive T cells. NOD alleles at the Idd6 locus (murine chromosome 6) confer susceptibility to T1D whereas C3H/HeJ alleles in NOD genetic background confer resistance to the disease. Our studies of the congenic mouse strain NOD. C3H 6. VTH (strain 6. VHI) showed that some factors are responsible of its diabetes resistance : (i) a higher suppressive function of regulatory T cells, (ii) the downregulation of Tlrl gene expression leads to reduced costimulatory signals on T cells and to the downregulation of pro-inflammatory cytokines genes expression by macrophages. Genetic(s) factor(s) involved in this phenotype localize at the Idd6. 3 locus (iii) a two fold reduction of iNKT CD4+ cells subset, restricted to the Idd6. 2 locus
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Callewaere, Céline. "Interaction de la chimiokine SDF-1α/CXCL12 avec le système vasopressinergique". Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05P620.
Full textAbstract:
La chimiokine SDF-1α (CXCL12) et son récepteur CXCR4 co-localisent avec l’hormone antidiurétique, l’arginine vasopressine (AVP) dans l’hypothalamus et la neurohypophyse. Au cours de nos études, nous avons établi que : 1) le SDF-1α et l’AVP présentent une distribution cellulaire spécifique dans les neurones des noyaux magnocellulaires hypothalamiques et sont localisés dans les mêmes vésicules neurosécrétoires de la neurohypophyse ; 2) le SDF-1α, par l’intermédiaire du CXCR4, module l’activité électrique du système à AVP et la libération plasmatique d’AVP; 3) l’expression du couple SDF-1α/CXCR4 est régulée lors de changements dans l’équilibre hydrique suite à une déshydratation ou chez des animaux Brattleboro ; animaux déficients en synthèse centrale d’ AVP. Les données originales obtenues au cours de ce travail ouvrent un axe de recherche novateur dans l’implication des chimiokines dans la régulation hydrique et plus généralement dans la régulation des fonctions neuroendocriniennes<br>The chemokine SDF-1α (CXCL12) and its receptor CXCR4 are co-localized with the antidiuretic hormone arginine vasopressin (AVP) in the hypothalamus and in the posterior pituitary. During our studies we demonstrated that: 1) SDF-1α and AVP present a selective cellular distribution inside the neuronal cell and can be found in the same dense core vesicles in the nerve terminals in the posterior pituitary; 2) SDF-1α can modulate, through CXCR4, the electrical activity of AVP neurons and plasma AVP release; 3) the expression of SDF-1α/CXCR4 is regulated when the hydro-osmotic balance is disturbed as in case of dehydration or in Brattleboro rats ; an endogenous knock-out model for brain AVP deficiency. The original data obtained during this work open new avenues in the implication of chemokines in the water balance regulation and more generally in neuroendocrine functions
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Lécuyer, Hervé. "Interaction de Neisseria meningitidis avec les cellules de l’hôte : mécanismes de franchissement des barrières oropharyngée et hémato-encéphalique." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T035.
Full textAbstract:
Neisseria meningitidis (Nm) ou méningocoque est une bactérie commensale de l’oropharynx de l’homme, colonisant de 10% à 30% de la population. Dans de très rares cas cette bactérie traverse l’oropharynx et envahit la circulation sanguine. Dans la microcirculation Nm est capable d’adhérer aux vaisseaux et de s’y développer en microcolonies à la surface cellulaire, puis de traverser la barrière hémato‐encéphalique (BHE) et d’envahir les méninges. La BHE repose pourtant sur un endothélium aux jonctions serrées propre à empêcher tout passage paracellulaire de microorganismes. Nous avons montré que la microcolonie de Nm recrute les protéines du complexe depolarité Par3/Par6/PKC et les protéines de jonctions adhérentes et jonctions serrées. Ce recrutement se fait au détriment des jonctions cellulaires existantes, celles‐ci sont déstabilisées et l’endothélium d’ordinaire imperméable est « ouvert », permettant un passage paracellulaire de la bactérie. Ce phénomène est la conséquence d’une voie de signalisation cellulaire déclenchée par l’interaction entre les pili, appendices filamenteux bactériens nécessaires à l’adhésion, et la cellule endothéliale. Le récepteur cellulaire impliqué dans cette signalisation a été identifié : il s’agit du récepteur β2‐adrénergique, qui est activé de façon biaisé par Nm vers une voie β‐arrestine dépendante. Le recrutement des protéines de jonction et l’ouverture de l’endothélium sont donc la conséquence de ce détournement de la voie β2‐adrénergique. Mais avant d’interagir avec la BHE, Nm doit avant tout traverser l’épithélium oropharyngé, composé d’une monocouche de cellules épithéliales là encore aux jonctions serrées. Nous avons montré en comparant les modèles épithéliaux et endothéliaux que le recrutement des composants des jonctions intercellulaires est un phénomène spécifique des cellules endothéliales. Le passage de l’épithélium n’est donc pas paracellulaire. Par ailleurs, la mise en jeu de la voie de signalisation β2‐adrénergique/β‐arrestine est également spécifique des cellules endothéliales. L’interaction du méningocoque avec les cellules épithéliales et endothéliales est donc fondamentalement différente selon le type cellulaire<br>Neisseria meningitidis (Nm, meningococcus) is a commensal of the human oropharynx that colonizes between 10% and 30% of a population. This bacteria is able to cross the epithelial barrier of the oropharynx, invading the bloodstream. Once in the bloodstream, Nm adheres to the endothelial cells, spreads as microcolonies on the apical surface of the host cells, and then is able to cross the blood brain barrier (BBB), invading the meninges. However the BBB is composed of a tight-junction formed endothelium which is supposed to prevent any paracellular crossing. We showed that the Nm microcolony recruits the components of the polarity complex Par3/Par6/PKC and the components of the intercellular junctions leading to a leakage of the existing cell-cell junctions and therefore opening a paracellular pathway to the subendothelium. This is the consequence of a cellular response triggered by the pili, filamentous bacterial structures allowing bacterial adhesion of capsulated strains onto host cells. We identified the cellular receptor hijacked by the bacteria : the β2-adrenergic receptor, which is biasedly activated toward a β-arrestin signalling pathway. The recruitment of the junctionnal components and the opening of the paracellular route are the consequences of the β2-adrenergic/β-arrestins signalling pathway. However, before reaching the blood circulation and latter the meninges, the meningococcus has to cross a first tight-junction based cellular barrier, the oropharynx epithelium. We showed here that Nm does not recruit the components of the cellular junctions when adhering onto epithelial cells. The paracellular route is therefore specific of the Nm/endothelial interaction. Moreover the β2-adrenergic/β-arrestins cellular response is a specific feature of the endothelial cells and is not found in the epithelial model. The cellular responses to Nm adhesion onto endothelial and epithelial cells are therefore strikingly different
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Heinis, Mylène. "Etude des effets de l'oxygène dans le développement pancréatique : implication de HIF-1 alpha." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T040.
Full textAbstract:
Le dysfonctionnement du tissu endocrine du pancréas peut aboutir au diabète. La thérapie cellulaire du diabète constitue un axe de recherche important, afin de produire en masse des cellules 3 fonctionnelles. Ainsi la compréhension des mécanismes cellulaires et moléculaires qui gouvernent la différenciation des cellules 3 est primordiale. L'objectif de ma thèse a été de caractériser le rôle de l'oxygène. Nous avons montré que la différenciation des cellules p dépend de la pression d'oxygène (pO2) et que la pO2 contrôle. L'expression de Ngn3 en modulant la stabilité de la protéine HIF-la. L'hypoxie régule également l'expression de Hesl, une cible du récepteur Notch activé, via HIF-la. Ainsi, une voie Notch intacte est nécessaire pour que l'hypoxie puisse réprimer la différenciation des cellules β. Nous avons également montré qu'au cours du développement, HIF-la était exprimé dans les cellules précurseurs puis diminuait, suggérant que HIF-la pourrait avoir un rôle physiologique<br>The dysfunction of the endocrine tissue of pancreas can lead to diabetes. Up to date, diabetes can be treated but not cured. Cell therapy of diabetes is a important area of research to produce an important functional β cell mass. Thus, understanding the molecular and cellular mechanisms that govern the differentiation of β cells is paramount. The objective of my thesis was to characterize the role of the tension of oxygen (pO2). We have shown that differentiation of ft-cells depends on the pO2. Notably, pO2 controls the expression of Ngn3 by modulating the stability of HIF-1a protein. Hypoxia also regulates the expression of Hes 1, a target of the activated Notch receptor via HIF-1 alpha. Furthermore, our data indicate that integrity of the Notch pathway is essential for hypoxia to repress β cells differentiation. We have also shown that during pancreas development, HIF-1 alpha was expressed in the precursor cells and next decreased, suggesting that HIF-1 alpha have a physiological role
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Grela, Françoise-Irène. "Modulation de la réponse immunitaire par TLR7 : rôle dans le diabète de type 1 et l'asthme allergique." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T016.
Full textAbstract:
Conformément à l'hypothèse de l'hygiène, les infections peuvent protéger des désordres immunologiques. Nous montrons que la stimulation des TLR2, 3, 4 et 7 qui détectent les infections, peut protéger les souris Non obese-diabetic (NOD), développant un diabète de type 1 spontané. Cet effet serait porté par des populations de cellules régulatrices et des cytokines immunorégulatrices. Nous avons observé que la protection induite par des agonistes de TLR2 et 3 est dépendante des cellules iNKT avec une implication de l'IL-4 pour TLR3. Par ailleurs, nous avons décrit dans un modèle d'asthme allergique que la protection induite par un agoniste de TLR7 était portée par les lymphocytes iNKT et l'IFN-y. Nous montrons in vitro que ce produit cible directement les iNKT et que la réponse ne nécessite pas la présence de cellules présentatrices de l'antigène. En conclusion, nos travaux soulignent que le ciblage des TLR module les réponses immunitaires, notamment celles dues à une perte de tolérance<br>According to hygiene hypothesis, infections can protect from immune disorders. We demonstrate that stimulation of TLR2, 3, 4 and 7 that are implicated in sensing infections, can protect Non obese-diabetic (NOD) mice, which develop a spontaneous type 1 diabetes. This effect would depend on the activation of regulatory cells and immunoregulatory cytokines. We have further demonstrated that TLR2- and TLR3-induced protection were dependent on iNKT cells with an implication of IL-4 for TLR3. In an allergic asthma model, we have shown that TLR7-induced protection was dependent on iNKT cells and IFN-y. We show in vitro that this product directly target iNKT cells without requirement of antigen presenting cells. Taken together, our work emphasize the modulatory role of TLR in immune responses, and especially those due to a rupture of tolerance
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Gautheron, Jérémie Francis Alexis. "Les processus d’ubiquitination dans la voie de signalisation NF-kB et leurs dérèglements en pathologie." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T052.
Full textAbstract:
La voie de signalisation NF-kB joue un rôle essentiel dans l’inflammation, la réponse immunitaire et la protection contre l’apoptose. Son activation est contrôlée par la kinase IKK, composée de deux sous-unités catalytiques (IKK1/IKK2) et d’une sous-unité régulatrice, NEMO. Il a été montré que des processus d’ubiquitination complexes encore mal compris régulent l’activité d’IKK et impliquent notamment NEMO. Dans ce travail nous avons essayé de mieux définir le rôle de l’ubiquitination de NEMO dans le processus d’activation d’IKK et comment il est contrôlé par l’E3 ligase TRAF6. Une analyse moléculaire de mutations de NEMO causant la maladie génétique Incontinentia Pigmenti (IP) a été entreprise. Elle a permis de définir les domaines d’interaction entre NEMO et TRAF6, de progresser dans la compréhension des défauts caractérisant IP et, en exploitant les données concernant l’interface NEMO/TRAF6, de proposer une nouvelle stratégie pour agir sur le processus d’activation de NF-kB<br>The NF-kB signaling pathway plays a key role in inflammation, immune response and protection against apoptosis. Its activity is controled by IKK, a kinase complex which is composed of two catalytic subunits (IKK1/IKK2) and one regulatory subunit (NEMO). It has been reported that intricate ubiquitination processes, still poorly defined, regulate the activity of IKK and involve NEMO. During this work, we have tried to define in more details the role of NEMO ubiquitination in the activation process of IKK and how it is controled by the E3 ubiquitin ligase TRAF6. A molecular analysis of NEMO mutations causing the genetic disease Incontinentia Pigmenti (IP) has been carried out. This has allowed us to identify the interaction domains between NEMO and TRAF6, to get insights into the defects causing IP and, exploiting the data concerning the NEMO/TRAF6 interface, to propose a new strategy to modulate the NF-kB activation process
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Marduel, Marie. "Génétique de l’hypercholestérolémie familiale, de l’analyse des mutations fréquentes à l’identification d’un gène impliqué dans des formes rares." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T046.
Full textAbstract:
L’hypercholestérolémie est un risque majeur d’athérosclérose et de maladies cardiovasculaires graves. Elle a souvent des causes multifactorielles, mais il existe aussi des formes monogéniques, comme l’Hypercholestérolémie Familiale (HCF), caractérisée par une hyperLDLémie isolée. L'HCF est une maladie fréquente qui n’est que partiellement élucidée sur le plan génétique. Trois gènes majeurs sont connus : LDLR (récepteur des lipoprotéines LDL), APOB (apolipoprotéine B, constituant des LDL et ligand de leur récepteur) et PCSK9 (enzyme régulant la quantité de récepteurs des LDL à la surface cellulaire). Notre équipe a localisé un 4ème gène majeur, HCHOLA4, et montré une hétérogénéité génétique encore plus grande. L’objectif était de procéder à l’analyse des mutations responsables d’HCF dans la population française et d’identifier un nouveau gène majeur. Nous avons décrit la répartition et la nature des mutations LDLR, APOB, PSCK9 et « autres » dans une cohorte de 1358 proposants, et montré une certaine spécificité française avec 45% des événements encore jamais rapportés. Leur causalité a été évaluée par des analyses in silico et/ou par étude de coségrégation. De plus, nous avons mis en évidence un gradient de sévérité entre ces différentes formes. Nous avons par ailleurs localisé un cinquième gène responsable d’HCF en 19q13. 31 et détecté plusieurs mutations dans l’APOE, qui n’ont pas été retrouvées dans une large série de témoins. Leurs effets ont été étudiés par des approches génétiques, d’analyses in silico et/ou in vivo. Ce travail a permis de décrire plus précisément l’HCF et de montrer que certaines mutations de l’APOE pouvaient être à l’origine d’une nouvelle forme d’HCF<br>Hypercholesterolomia is a major risk factor for atherosclerosis and serious cardiovascular weaknesses. It often is caused by more than one factor, but there exist monogenic forms, like Autosomal Dominant Hypercholesterolemia (ADH), that are caracterised by high levels of plasmatic LDL cholesterol. ADH is a frequent disease, but its molecular bases are not fully understood. Three major genes had been identified so far : LDLR (LDL receptor), APOB (apolipoprotein B, constituent of LDL accepted by their receptors) and PCSK9 (an enzyme regulating the quantity of receptors at the surface of their cell). Our team had recently identified a 4th major gene, HCHOLA4, and showed that the disease was genetically more heterogenous. The objective of the present work was to analyse mutations responsible of ADH in the French population, and search another major gene. We have analysed the distribution and the nature of the mutations LDLR, APOB, PSCK9 and “others” in 1358 French probands and shown a specific spectrum of mutations in the French population : 45% of the events had not been reported before. Their causal effect has been assessed by in silico analyses and/or by cosegretation studies. Moreover, we showed a gradient of severity between different ADH causing gene. We have also localised a 5th gene responsible of ADH, in 19q13. 31, and detected several mutations in the APOE gene that have not been traced in a normocholesterolemic control population. Effects of the mutations have been gauged by genetic approach and in silico and in vivo analysis. This work has thus been able to describe ADH more precisely, and show that some mutations of APOE might be the cause for a new type of ADH
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Ghiringhelli, François. "Le rôle des lymphocytes T CD4+ CD25+ régulateurs dans le cancer : étude dans des modèles animaux et chez l'homme." Dijon, 2005. http://www.theses.fr/2005DIJOMU12.
Full textAbstract:
Les lymphocytes T régulateurs ( Treg) sont une population de lymphocytes T exprimant les molécules CD4 et CD25 ainsi que le facteur de transcription Foxp3. Les Treg ont la capacité d'inhiber les mymphocytes B, T CD4, T CD8, les NK, ainsi que la maturation des cellules dendritiques. Nous nous sommes intéressés au rôle de cette population cellulaire dans le cadre des pathologies cancéreuses. Nous avons démontré qu'il existe une augmentation du nombre de Treg dans les organes lymphoïdes d'animaux porteurs de tumeurs. La tumeur fabrique un facteur soluble induisant la production de TGF-β par les cellules dendritiques. Ces cellules dendritiques deviennent alors capables d'induire la prolifération des Treg. Chez l'homme il existe aussi une augmentation du nombre de Treg chez les patients porteurs de cancers. Nous avons démontré que ces cellules peuvent contrôler les fonctions NK en diminuant l'expression de NKG2D à la surface des NK. Une augmentation du nombre de Treg aggrave le pronostic des patients porteurs de cancers NK sensibles. Les techniques de déplétions en Treg comme le cyclophosphamide pourraient augmenter l'efficacité de l'immunothérapie des cancers.
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Berthouze, Magali. "Étude structurale et fonctionnelle de la dimérisation du récepteur 5-HT 4 de la sérotonine." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114835.
Full textAbstract:
Serotonin 5-HT4 receptors (5-HT4R) are members of G protein-coupled receptors (GPCRs). Given the recent recognition that many GPCRs can dimerize, the present study was undertaken to determine whether 5-HT4R can form dimers and what are the molecular determinants involved in the dimerization process. Using co-immunoprecipitation and bioluminescence resonance energy transfer, we showed that the human 5-HT4R isoforms can form constitutive homodimers and heterodimers. In addition, we showed heterodimer formation between the 5-HT4(d)R and the beta2-adrenergic receptor. The 5-HT4(d)R dimer is sensible to dithiothreitol (reducing agent). Mutation of two cysteines in the 3 and 4 transmembrane domains, inhibits 5-HT4 receptor dimerization and brings about reticulum endoplasmic retention. Specific 5-HT4 receptor bivalent ligand do not have special affinity or efficacy for the 5-HT4 receptor but are able to stabilize receptor dimerization<br>Les récepteurs 5-HT4 de la sérotonine sont des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG). Les RCPGs peuvent se dimériser, ce qui influence leurs propriétés pharmacologiques. Les récepteurs 5-HT4 étant impliqués dans d'importants processus physiologiques, nous avons étudié leur processus de dimérisation. Nous avons montré par co-immunoprécipitation et Bioluminescence Resonnance Energy Transfert, que les isoformes 5-HT4 s'homodimérisent et s'hétérodimérisent constitutivement, entre elles et avec le récepteur β2-adrénergique. Le dimère de récepteur 5-HT4 est sensible au dithiothréitol (agent réducteur de ponts disulfures). La mutation de deux cystéines localisées dans les domaines transmembranaires 3 et 4, inhibe la dimérisation du récepteur 5-HT4 et entraîne sa rétention dans le réticulum endoplasmique. Des ligands bivalents spécifiques du récepteur 5-HT4 ne présentent pas d'affinité ou d'efficacité particulière pour le récepteur 5-HT4 mais peuvent stabiliser les dimères de récepteurs
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Bonniaud, Philippe. "Transforming growth factor-β1, connective tissue growth factor et fibrose pulmonaire". Dijon, 2005. http://www.theses.fr/2005DIJOMU01.
Full textAbstract:
La fibrose pulmonaire (FP) est une maladie incurable. Nous nous sommes intéressés aux effets pathobiologiques de Transforming growth factor (TGF)βsur la FP. Par adénovecteurs, nous avons transféré à des poumons de rongeurs des cytokines susceptibles d'être impliqués dans la FP-TGF-β1, interleukine (IL)-1β, et connective tissue growth factor (CTGF)-. Nous démontrons que :1) TGFβ est essentiel pour l'initiation et la progression de la FP 2)CTGF est nécessaire mais incapable par lui seul d'induire la progression de la FP. CTGF pourrait être un cofacteur de TGFβ 3)FP et emphysème sont dépendants de Smad3, molécule de signal de TGFβ, démontrant l'importance de TGFβ dans l'équilibre entre accumulation et dégradation de matrice 4)la FP induite par IL-1β est dépendante de TGFβ 5)un inhibiteur spécifique du récepteur ALK5 de TGFβ bloque la FP induite par TGFβ. Conclusion : TGFβet ses voies de signal sont clés dans la FP. Ce travail est une ouverture à des possibilités thérapeutiques.
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Lardic, Morgane. "Synthèse et évaluation pharmacologique de 3,6-diaryl-2,5-dihydroxy-1,4-benzoquinones et de 2 (ou 3)-arylméthylènenaphtofuran-3 (ou 2)-ones modulateurs de protéines kinases." Nantes, 2004. http://www.theses.fr/2004NANT16VS.
Full textAbstract:
Ce mémoire présente la synthèse de deux familles de composés et leur évaluation pharmacologique sur l'activation ou l'inhibition de protéines kinases, cibles thérapeutiques potentielles dans de nombreuses pathologies comme le diabète ou le cancer. La première partie décrit la synthèse de 3,6-diaryl-2,5-dihydroxy-1,4-benzoquinones, analogues de la déméthylasterriquinione. Deux stratégies de synthèse ont été exploitées : la première via des 4-aryl-6-arylméthylène-3-hydroxypyrane-2,5-diones ; la seconde approche s'appuie sur des réactions d'arylation sélectives d'un noyau benzoquinone. Les benzoquinones finales ont été. Soumises à des tests de phosphorylation du récepteur à l'insuline et de la PKB, molécule clé dans le signal de transmission de l'insuline. La deuxième partie expose la synthèse d"aryiméthylènenaphtofuranones, obtenues par couplage de Knoevenagel entre une naphtofuranone et un aldéhyde. Ces structures ont été évaluées sur l'inhibition de la protéine kinase cytosolique Src<br>Protein kinases are often involved in many pathologies such as diabetes or cancer and thereby constitute new potential therapeutic targets. In this way, this work reports the synthesis of two familv of compounds and their protein kinase activation or inhibition evaluation. In a first part, numerous analogues of demethylasterriquinone. With a 3,6-diaryl-2. 5-dihydroxy-1. 4-benzoquinone core, were obtained. Two pathways have been investigated : via rearrangement of 4-aryl-6-arylmethylene-3-hydroxypyrane-2,5-diones or through selective arylation reactions of a benzoquinone unit. The targeted benzoquinones were evaluated in vitro, towards the phosphorylation of insulin receptor and protein kinase B, a key molecule in the transduction signal of insulin. The second part deals with the synthesis of a second class of compounds, arylmethylenenaphthofuranones, synthesised by Knoevenagel coupling between a naphthofuranone and a formyl derivative, and their evaluation on Src kinase inhibition
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Lesourne, Renaud. "Bases moléculaires et cellulaires du recrutement des phosphatases à domaine SH2 par les RFcyIIB, des récepteurs pour la portion Fc des IgG inhibiteurs de l'activation cellulaire." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05N13S.
Full textAbstract:
Les RFcyIIB sont des régulateurs négatifs de l'activation cellulaire induite par les récepteurs d'antigène. L'inhibition induite par ces récepteus dépend d'un motif intracytoplasmique, appelé ITIM. Lorsqu'il est phosphorylé, ce motif recrute des phosphatases qui sont les effecteurs de l'inhibition. In vitro, des peptides contenant l'ITIM phosphorylé des RFcyIIB se lient à deux types de phosphatases, les SHP et les SHIP. In vivo, les RFcyIIB phosphorylés recrutent sélectivement les SHIP. Ce travail a consisté à déterminer les bases fondamentales du recrutement sélectif des SHIP par les RFcyIIB. Il démontre, 1) que le degré de phosphorylation des RFcyIIB atteint dans des conditions mimant les situations physiologiques est insuffisant pour leur permettre de recruter les SHP, 2) que le cytosquelette d'actine est nécessaire à l'inbition induite par les RFcyIIB parce qu'il coordonne les interactions entre les SHIP et les RFcyIIB par l'intermédiaire d' une protéine, la filamine<br>FcyRIIB are negative regulators of cell activation induced by antigen receptors. The inhibition induced by these receptors depend on an intracytoplasmic motif, call ITIM. When phosphorylated, this motif is a docking site for phosphatases wich are the effectors of inhibition. In vitro, peptides containing the phosphorylated ITIM of FcyRIIB bind two types of phosphatases, the SHP and the SHIP. In vivo, phosphorylated FcyRIIB selectively recruit the SHP. This work consisted to determine the molecular and cellular bases of the selective recruitment of SHIP by FcyRIIB. It shows, 1) that the level of FcyRIIB phosphorylation reach under physiological conditions is insufficient for the recruitment of SHP-1 by these receptors, 2) that the F-actin cytoskeleton is necessary for FcyRIIB-depend inhibition because it coordinates the interactions between SHIP and FcyRIIBvia a protein called filamin
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El, Rawadi Charles. "Mécanisme de l'action chronotrope positive de la sérotonine sur les oreillettes isolées de rat : interaction avec la transmission noradrénergique." Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA114830.
Full text
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Kuhn, Chantal. "Immunothérapie du diabète auto-immun : de la prévention au traitement de la maladie établie." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T038.
Full textAbstract:
Le but de notre travail a été de mettre en place des stratégies innovantes d'immuno-intervention permettant d'agir de manière efficace sur la progression du diabète auto-immun. Nous nous sommes focalisés sur deux stratégies : l'utilisation d'anticorps monoclonaux anti-CD3 et celle de produits bactériens. Les anticorps anti-CD3 possèdent la capacité remarquable d'induire une tolérance durable et spécifique vis-à-vis les antigènes du soi chez la souris NOD, spontanément diabétique. Nous avons établi et caractérisé des souris NOD transgéniques exprimant la molécule CD3s humaine (NOD-huCD3e). Cette souris développe un diabète auto-immun spontané identique à la souris NOD conventionnelle, est sensible au traitement par les anticorps anti-CD3 murins et humains et représente donc un modèle préclinique idéal. Dans un deuxième effort, nous avons étudié le rôle protecteur de certains composants bactériens, prioritairement des agonistes du récepteur Toll-like 4 (TLR4), sur la survenue du diabète<br>Our aim was the development of innovative strategies of immune-intervention allowing efficient interfering with progression of autoimmune diabetes, even at a late stage. We focussed on two strategies: usage of monoclonal anti-CD3 antibodies and of bacterial products. Anti-CD3 antibodies have the remarkable capacity to induce long-lasting and antigen-specific tolerance in NOD mice, which spontaneously develop diabetes. We generated and characterised transgenic NOD mice expressing the human CD3s chain (NOD-huCD3s). These mice spontaneously develop autoimmune diabetes, identical to conventional NOD mice, respond to treatment with murine- or human-specific anti-CD3 antibodies and thus present an ideal preclinical model. In a second effort, we studied the protective effect of certain bacterial products, primary of Toll-like receptor 4 (TLR4) agonists, on the development of diabetes. These molecules are interesting candidates for a transfer into the clinics
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Moser, Anna. "IDE deficiency protects NOD mice from diabetes by attenuating the inflammatory process and delaying the auto-aggressive T cell response." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T005.
Full textAbstract:
Insulin-degrading enzyme (IDE) est une metallo-protéase avec une forte affinité pour l'insuline. Les souris déficients en IDE sur fond B6 montrent un niveau élevé d'insuline et une intolérance pour le glucose. Ces phénotypes sont associés au diabète de type 2. Dans un modèle murin du diabète de type 1, un phénotype exceptionnel a été mis en évidence dans des souris invalidées pour le gène IDE: une baisse de l'incidence du diabète auto-immun et de l'infiltrat dans les cellules bêta du pancréas. En analysant ces souris protégées, nous avons pu observer une réduction d'activation et du nombre de lymphocytes T auto-immuns. Des transferts de cellules effectrices dans des souris Rag KO ont montré que les cellules issues de souris IDE KO induisent un diabète retardé. En outre la réponse des cellules T CD8+ aux peptides immunodominants était réduite dans les souris IDE KO. Une différence dans la réponse cytokinique a été également observée. Des PBMCs activés des souris IDE KO sécrètent plus d'IL-4 anti-inflammatoire et moins de TNF-alpha proinflammatoire. Des résultats analogues ont été observés pour les lymphocytes infiltrants et les splénocytes. Le mécanisme expliquant ces résultats sont à confirmer. La déficience en IDE pourrait changer la présentation antigénique et la sélection négative des cellules T autoréactives dans le thymus. La protection contre le diabète pourrait alternativement s'expliquer par une réduction de la présentation antigénique de l'épitope PI 15-23 par des cellules bêta ou les cellules dendritiques expliquer. Il est possible que IDE joue un rôle dans le metabolism et la réponse au stress<br>Insulin-degrading enzyme (IDE) is a metalloprotease with high affinity for insulin. IDE knockout mice on thé C57BL/6 genetic background show increased sérum insulin levels and glucose intolérance, findings associated with type 2 diabètes. To investigate thé rôle of IDE in type I diabètes, IDE knockout was bred to thé NOD background. IDE déficient NOD mice were found to be protected from diabètes and also displayed reduced levels of insulitis. To explore thé mechanism of protection, we performed transfers of splenic effector T cells from IDE ko and wt mice to Rag2 ko NOD mice. Effector T cells from IDE wt mice transfered diabètes more rapidly then enriched effector cells from IDE knockout mice, suggesting a réduction in thé number and/or functional activity of diabetogenic T cells in IDE déficient mice. Moreover, thé CD8+ T cell responses to immunodominant bêta cell epitopes derived from proinsulin and IGRP were reduced in IDE ko mice. Additionally a différence in thé cytokine répertoire was observed: activated PBMC from IDE knockout mice secret more anti-inflammatory IL-4 and less pro-inflammatory TNF-a compared to IDE wildtype mice. Analogous results were obtained with islet-infiltrating lymphocytes and splenocytes. The mechanism underlying thèse findings remains to be clarified. IDE deficiency could change antigen présentation and négative sélection of autoreactive T cells by thymic epithelial cells. Alternatively, reduced présentation of thé immunodominant CD8+ T cell epitope proinsulin 615-23 by bêta cells or cross presenting LN dendritic cells is conceivable. It is also possible that IDE plays a rôle in thé metabolism and/or stress response of bêta cells
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Toubiana, Julie. "Signalisation de TLR2, organisation et variabilité de la réponse immunitaire innée." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T016.
Full textAbstract:
L'invasion de l'hôte par un pathogène induit une réponse immunitaire innée qui aboutit à l'activation cellulaire, à une réaction inflammatoire et parfois à l'initiation d'une immunité acquise. Des différences fondamentales existent dans l'organisation de la réponse immune innée à un pathogène, d'une cellule , d'un organe, ou d'un individu à l'autre. L'organisation de la réponse immune innée en réponse à l'invasion bactérienne, parasitaire ou fongique nécessitent la coopération du récepteur de type Toll 2 (TLR2) avec TLR1 ou TLR6 et la formation de complexes d'activation dans les radeaux lipidiques, qui déterminent une réponse spécifique et adaptée au pathogène. Cependant, les mécanismes de rapprochement moléculaire et la régulation des voies de signalisation impliqués dans la réponse inflammatoire sont encore mal compris. L'objectif de ce travail était d'investiguer les mécanismes impliqués dans la reconnaissance et la signalisation via TLR2, ainsi que dans la variabilité du phénotype inflammatoire. Par une méthode d'analyse protéomique différentielle, nous avons étudié la composition moléculaire du complexe d'activation et les modifications post-traductionnelles en fonction du dimère de TLR2 engagé. Cette approche a permis d'identifier et caractériser le rôle de la tyrosine kinase Lyn et d'IMPDHII dans la régulation de la signalisation de TLR2. Enfin, dans une approche translationnelle nous avons étudié le rôle d'un polymorphisme du gène IRAK1, dont la protéine est en aval de la majorité des TLRs, dans la variabilité du phénotype chez des patients septiques. Ce travail introduit des perspectives nouvelles sur l'organisation, la régulation et la variabilité de la réponse immunitaire innée<br>Host invasion by micro-organisms induces an innate immune response that leads to cell activation, inflammation and potentially to the initiation of an adaptative response. Major differences are found within the organisation of innate immune responses depending on the pathogen, the invaded cell-type and the host itself. Initiation and organisation of innate immune responses facing bacteria, parasites, or fungi need the cooperation of Toll-like receptor 2 (TLR2) with TLR1 or TLR6, and multimolecular complexes in lipid rafts that determine a specific response. However, our understanding of molecular interactions within lipid rafts remains cryptic. Specifically, little is known regarding the composition of signaling complexes induced by distinct pathogens and the activation mechanisms involved in the initiation and regulation of a potent inflammatory response. The aim of this research project was to investigate the mechanisms involved in recognition and signaling downstream TLR2, and factors that account for variability of the inflammatory phenotype. For this purpose, we established a differential proteomic strategy to identiy the composition of TLR2 activation cluster and post-translationnal modifications of proteins after the recruitment of TLR2 dimers to lipid rafts. This approach enabled us to identify tyrosine-kinase Lyn and IMPDHII as essential regulators of TLR2 signaling. In a translational approach, we studied the effect of an haplotype of IRAKI gene, which codes for a key signaling protein downstream TLRs, on clinical variability in patients with septic shock. Our results provide new insights in ogranisation, regulation and variability of innate imune response
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Boutant, Marie. "Fonction et régulation du facteur de transcription COUP-TFII dans les cellules β du pancréas". Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T047.
Full textAbstract:
La plasticité du pancréas endocrine est essentielle pour répondre de façon adaptée à une demande accrue en insuline et maintenir un contrôle optimal de l’homéostasie glucidique. L’invalidation génique de COUP-TFII dans les cellules ß pancréatiques à l’état hétérozygote chez la souris adulte conduit à une intolérance au glucose suite à une diminution de la sécrétion d’insuline en réponse au glucose. De plus, l’expression transcriptionnelle de COUP-TFII est inhibée par l’insuline. Au cours de cette thèse, l’étude des souris homozygotes et de la lignée cellulaire INS-1 832/13 nous a permis de mettre en évidence que COUP-TFII participe au maintien du nombre de cellules ! au cours de la période post-natale en activant la voie de signalisation Wnt/ß-caténine/TCF7L2 en réponse au GLP-1. Nous avons aussi mis en évidence une région du promoteur COUP-TFII activée par liaison d’HNF4 !MODY1 en réponse à de faibles concentrations de glucose. La diminution de COUP-TFII en réponse à de fortes concentrations de glucose implique la diminution d’HNF4" dont l’expression génique est sous le contrôle de la voie de signalisation de FOXO1, facteur réprimé par l’insuline. Enfin, nous avons établi une corrélation entre le polymorphisme rs3743462-C situé dans les régions régulatrices amont du gène COUP-TFII et des paramètres glucidiques liés à la sensibilité à l’insuline chez l’homme. Dans la cellule ß, ce variant lie COUP-TFII avec une plus grande affinité et est associé à une diminution de l’expression basale de COUP-TFII conduisant à une plus forte répression par le glucose. L’ensemble de ces données suggèrent que COUP-TFII participe in vivo à l’homéostasie glucidique de la souris et de l’homme<br>The development and maintenance of functional pancreatic β cell mass are essentials for an appropriate response to changes in blood glucose levels. Pancreatic β cell knockout of the COUP-TFII (Chicken Ovalbumin Upstream Promoter Transcription Factor II) gene, in adult heterozygous mice, led to glucose intolerance due to an impaired glucose-stimulated insulin secretion. We also reported that COUP-TFII expression is repressed by insulin. During this PhD, using COUP-TFII homozygous knockout mice and the 832/13 INS-1 β cells, our results suggested that COUP-TFII can provide sufficient stimulation of the Wnt/β-catenin/TCF7L2 dependent transcription signaling pathway in response to GLP-1 to allow development of an appropriate β cell mass during the postnatal period. We also identified a DNA region of the promoter that down-regulates COUP-TFII expression by attenuating the activating effect of HNF4 !MODY1 in response to high glucose concentrations through FoxO1 signaling, a major downstream target of the insulin signaling pathway. Finally, individuals from the prospective DESIR cohort carrying the minor C-allele at rs3743462 which is located in these conserved upstream regulatory regions, displayed lower basal levels of circulating insulin and a lower insulin resistance index. In β cells, this polymorphism is associated with a decreased of basal level of COUP-TFII gene activation and an increased repression to high glucose concentrations. We showed that COUP-TFII binds the rs3743462-C oligonucleotide with higher affinity suggesting a possible autorepression of its expression. In conclusion, COUPTFII could be a key regulator of in vivo glucose homeostasis in mice and in human
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Ku, Cheng-Lung. "Human IRAK-4 deficiency and invasive pneumococcal disease." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05T019.
Full textAbstract:
The susceptibility to severe Streptococcus pneumoniae is associated with a variety of human primary immunodeficiencies. Previous studies in human inherited defects showed several immune responses that were critical for this protection: antibody- and complement-mediated opsonization, the spleen and NF-KB-mediated immune responses. Recently, human Interleukin-l-receptor-associated-kinase-4 (IRAK-4) deficiency which presented a complete impairment in most Toll-like receptors' (TLRs) signaling was found and patients suffered from mostly pyogenic bacterial infections, especially caused by S. Pneumoniae. To provide a global view, we diagnosed up to 28 patients with IRAK-4 deficiency and assessed blood TLRs responses and the production of multiple cytokines in individual leukocyte subsets, which revealed a multi-cytokines and —leukocytes impairment upon TLRs activation. Most patients (22/28, 79%) suffered from invasive pneumococcal disease, often recurrent (13/22, 59%). Other infections were rare, with the exception of severe staphylococcal disease. Almost half the patients died (12/28, 43%). No death or invasive infection occurred in patients over 8 and 14 years of age, respectively. The TIR-1RAK-4 pathway is therefore vital for childhood immunity to pyogenic bacteria and plays a non-redundant role in the immunity against S. Pneumoniae. LRAK-4-dependent human TLRs appear to be less important in protective immunity to most infections, at most limited to childhood immunity to some pyogenic bacteria.
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Varadaradjalou, Sonia. "Etudes des interactions moléculaires entre mastocytes et bactéries : rôle des récepteurs Toll-Like." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05P606.
Full textAbstract:
Nous avons montré d'une part, que des mastocytes humains (CBMC) expriment les ARNm des dix TLRs humains identifiés et sont activables par le LPS, le PGN et la flagelline, agonistes respectifs des TLR4, TLR2 et TLR5. L'activation des CBMC par le LPS, mais pas par le PGN, nécessite un pré-traitement des cellules par l'IL-4 et la présence de facteurs sériques, dont le CD14 soluble. Le LPS et le PGN induisent la libération de TNF-ALPHA ? D4il-5 ? d'IL-10 et d'IL-13 par les CBMC, de façon dépendante de TLR4 et de TLR2 respectivement, mais seul le PGN entraîne la libération d'histamines. De plus, la flagelline induit la dégranulation des CBMC sans libération de TNF-alpha. D'autre part, nous avons montré que les bactéries FimH+ induisent une libération d'IL-12 par les cellules dendritiques murines, qui est dépendante de TLR4, de MyD88 et indépendante du CD14, tandis que la réponse des MC murins à la lectine FimH purifée semble dépendre de l'expression du TLR4, et partiellement du TLR2<br>We show here the expression of various TLRs (from TLR1 to TLR10) by human cordblood derived mast cells (CBMC) at the mRNA level and that LPS and PGN induced the release of TNF-alpha, IL-5, IL-10 and IL-13 by CBMC, in a TLR4- and a TLR2-dependent manner respectively. However, the response of CBMC towards LPS, and not towards PGN, required the pre-treatment of the cells by IL-4 and the presence of soluble CD14 found in serum. Of not, PGN, but not LPS, induced the release of histamine by CBMC. Furthermore, flagellin, an agonist of TLR5, induced the degranulation of CBMC without any release of TNF-alpha. Besides, we demonstrated that FimH-expressing bacteria induce a significant release of IL-12 p40 by murine dendritic cells, which is serum- and CD14-independent, but MyD88 and TLR4-dependent. Finally, we demonstrated herein that purified lectin induces significant
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Gautier, Benoit. "Evaluation biochimique et biologique d'antagonistes des récepteurs au VEGF à visée anti-angiogénique." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05S004.
Full textAbstract:
L'angiogenèse tumorale constitue une cible thérapeutique novatrice dans le traitement des cancers à tumeurs solides. Elle est, entre autre, initiée par la fixation du VEGF, un facteur pro-angiogénique sur ces récepteurs, les VEGFR. Le laboratoire s'est orienté vers une approche anti-angiogénique originale, consistant à développer des ligands antagonistes des VEGFR. Ce travail de thèse a consisté en l'évaluation biologique de ligands peptidiques conçus rationnellement et de ligands non peptidiques issus d'un criblage in sïlico. Leur activité biochimique et biologique a été évaluée sur des tests de déplacement non radioactifs préalablement mis au point puis examiné sur cellules endothéliales. Les résultats ont montré leurs effets antagonistes avec des spécificités différentes pour les VEGFR. Enfin, une étude approfondie par RMN et par un Ala-scan a mis en évidence les résidus des peptides impliqués dans l'interaction avec les VEGFR<br>Tumoral angiogenesis is a novel therapeutic target in the treatment of solid tumor cancers. It is initiated, among others, by the binding of VEGF, a pro-angiogenic factor, on these receptors, the VEGFR. At the laboratory, we develop VEGFRs antagonists as original anti-angiogenic approach. This thesis has consisted in the biological assessment of peptides designed rationally and non-peptidic compounds identified by an in silico screening. Their biochemical activity was evaluated on non-radioactive displacement assays previously developed and then examined on endothelial cells. The results showed their antagonist effect with different specificities for VEGFR. Finally, a detailed study by NMR and by an Ala-scan showed residues of peptides involved in the interaction with VEGFR
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Rouget, Céline. "Le récepteur β3-adrénergique du muscle lisse utérin humain : une cible potentielle d'agents tocolytiques". Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05P614.
Full textAbstract:
La prématurité reste la principale cause de mortalité et morbidité néonatales dans les pays industrialisés. Les stratégies de prise en charge médicale restent limitées et relativement inefficaces. Parmi les différentes mesures à mettre en place pour tenter de diminuer le taux de prématurité et les complications aigues ou retardées affectant le nouveau-né prématuré, le développement d'outils pharmacologiques nouveaux visant à traiter les dysfonctionnements de la contractilité utérine est indispensable. Nous nous sommes intéressés au récepteur b3-adrénergique et à ses agonistes connus pour avoir un effet myorelaxant sur le muscle lisse utérin, le myomètre. L'objectif de notre travail a été de poursuivre la caractérisation pharmacologique du récepteur b3-adrénergique dans le myomètre humain, d'une part en étudiant l'influence de la grossesse sur l'expression de ce récepteur et d'autre part en explorant les phénomènes de désensibilisation pouvant l'affecter. L'ensemble de nos résultats permet ainsi d'envisager le développement clinique d'agonistes sélectifs du récepteur b3-adrénergique dans la prise en charge pharmacologique de la menace d'accouchement prématuré<br>The preterm birth represents the leading cause of neonatal mortality and morbidity in developed countries. The strategies for medical management remain restricted and relatively inefficient. Amongst different actions undertaken to reduce preterm birth and health problems of preterm neonates, the development of new pharmacological tools to treat uterine contractility dysfunction is essential. We were interested in the b3-adrenoceptor and its agonists known to have myorelaxant properties on the uterus smooth muscle, the myometrium. The aim of our work consisted in the pharmacological characterisation of the b3-adrenoceptor in the human myometrium, on the one hand in studying the influence of pregnancy on the expression of this receptor and on the other hand, by exploring the desensitisation phenomenon which can affect it. Our results give arguments in favour of clinical development of selective b3- adrenoceptor agonists in the pharmacological treatment of preterm labour
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Alilèche, Abdelkrim. "Étude de l'expression et de la fonction du système IL2/IL2R par les cellules fibroblastiques et les cellules de mélanome." Paris 11, 1994. http://www.theses.fr/1994PA114801.
Full text
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Manzoni, Olivier. "Messagers intra- et extracellulaires des récepteurs du glutamate dans le système nerveux central." Montpellier 2, 1992. http://www.theses.fr/1992MON20173.
Full textAbstract:
Nous avons mis en evidence et caracterise un agoniste specifique du recepteur metabotropique du glutamate, le t-acpd. Cet outil nous a permis de montrer que l'activation de ce recepteur entraine la formation d'insp3 et la mobilisation du calcium intracellulaire. Il y a activation de la proteine kinase c qui desensibilise en retour le recepteur. Nous avons decouvert et caracterise un second type de recepteur negativement coule a l'adenylate cyclase. Nous avons etudie les interactions complexes entre recepteurs au nmda et un messager intercellulaire produit par l'activation de ce recepteur. Des drogues produisant no ont permis de definir le monoxyde d'azote (no). Deux nouveaux sites de regulation du recepteur nmda: un site sensible aux ions ferrocyanures et un site specifique a no, independant de mecanismes intracellulaires enzymatiques. Le role de telles interactions dans la plasticite synaptique est discute