Dissertations / Theses: 'Récepteurs des oestrogènes – Dissertations universitaires'

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Alabed-Alibrahim, Eid. "Régulation de l’angiogenèse par le chlordécone : implication du stress oxydatif et de la mitochondrie." Thesis, Angers, 2016. http://www.theses.fr/2016ANGE0053.

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Abstract:

Des études épidémiologiques ont démontré que l’exposition aux pesticides tels que le chlordécone augmente le risque du cancer, en particulier de la prostate. Il avait été précédemment montré au laboratoire que le chlordécone possède des propriétés pro-angiogéniques impliquant la libération de NO et la production de VEGF suite à l’activation du récepteur aux oestrogènes de type alpha (ERα). Les processus angiogéniques pouvant impliquer les espèces réactives de l’oxygène (EROs), produites notamment par la mitochondrie, l’objectif de ce travail a été d’évaluer la contribution de la biogenèse mitochondriale et du stress oxydatif dans l’angiogenèse induite par le chlordécone.Les résultats obtenus montrent que la biogenèse mitochondriale n’est pas essentielle pour la réponse angiogénique du chlordécone puisqu’elle n’est retrouvée que pour de forte concentration de chlordécone. Les mécanismes mis en jeu ont été identifiés au niveau des cellules endothéliales humaines. Ils impliquent une régulation spatio temporellede la production des EROs impliquant dans un premier temps la NADPH oxydase, elle même capable de stimuler la production mitochondriale d’EROs via la voie impliquant la NO synthase. Le chlordécone serait par ailleurs capable de favoriser la localisation périnucléaire des EROs afin de favoriser la production de VEGF. L’ensemble de ces effets implique le récepteur aux oestrogènes. Ce travail a donc permis d’identifier les mécanismes cellulaires impliqués dans la modulation de l’angiogenèse par le chlordécone. Ces mécanismes moléculaires pourraient contribuer à identifier de nouvelles cibles permettant de réguler les processus angiogéniques et la tumorigenèse induites par ce toxique
Epidemiological studies report that exposure to pesticides like chlordecone increases risk of prostate cancer and tumorigenesis. We have reported recently that the pro-angiogenic effect of chlordecone involving NO release and VEGF production is mediated through activation of α isoform of the estrogen receptor (ERα). Since mitochondria and ROS have been implicated inthe process of angiogenesis, this study aims to determine the contribution of mitochondrial biogenesisand oxidative stress in chlordecone-induce dangiogenesis. Firstly, our results indicate that mitochondrial biogenesis is not essential for chlordecone angiogenic response. We also identified the molecular mechanism involved; chlordecone induces endothelial cells angiogenesis by a spatiotemporal regulation of ROS production involving NADPH oxidase then mitochondrial O2 -via a NO sensitive pathways through activation of ERα.These findings propose that a molecular mechanism may partly explain the epidemiological evidence implicating chlordecone as risk factor of prostatic cancer

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Guivarc'h, Emmanuel. "Etude de la protection œstrogénique dans l’hypertension artérielle et le vieillissement chez la souris femelle." Thesis, Angers, 2017. http://www.theses.fr/2017ANGE0064.

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Abstract:

Contexte : les hormones œstrogéniques ont de nombreux effets protecteurs au niveau cardiovasculaire et rénal mais leurs mécanismes sont très complexes. Le récepteur aux œstrogènes ERα est le principal effecteur des effets bénéfiques de ces hormones. Il possède deux voies d’action. Dans le noyau, il a des effets génomiques via ses fonctions d’activation AF. A la membrane, il a des effets non-génomiques via une signalisation membranaire MISS. Première étude : dans une première étude, nous avons exploré le mécanisme protecteur d’ERα dans l’hypertension artérielle, un facteur de risque majeur de maladies cardiovasculaires. Nous avons mis en évidence le rôle protecteur des effets génomiques d’ERα via sa fonction AF-2 contre l’hypertension. Nous avons également observé que la stimulation de cette fonction par l’Estétrol suffisait à reproduire les effets protecteurs des œstrogènes, ce qui ouvre une perspective thérapeutique potentielle. Deuxième étude : dans une deuxième partie, nous avons étudié l’effet protecteur d’ERα dans le vieillissement cardiovasculaire et rénal. Cette étude, toujours en cours, a pu mettre en évidence que la souris femelle ne présentait pas d’altération majeure de la fonction vasculaire et rénale . Toutefois, le récepteur ERα ne semble pas impliqué dans cette protection vis-à-vis du vieillissement. Cette étude a toutefois permis de mettre en évidence que les œstrogènes agissaient sur la biogénèse mitochondriale, d’une manière inattendue. Ces résultats seront approfondis dans de prochaines expériences.Conclusion En conclusion, ce travail de thèse a permis de mieux cerner l’implication des hormones œstrogéniques et de leur récepteur ERα dans le système cardiovasculaire
Context : estrogenic hormones have numerous beneficial effects in the cardiovascular and renal systems but the underlying mechanisms are extensively complex. Estrogen receptor ERα is described as the main effector of the positive actions of estrogens. This receptor acts in the cell using two different pathways. In the nucleus, ERα acts as a transcription factor with genomic effects, through its activating functions AF. At the membrane, it exerts non-genomic effects, called MISS. First Study : in a first study, we have explored the protective mechanism of ERα in hypertension, a main risk factor in cardiovascular diseases. Using genetically modified mice, we have been able to highlight the involvement of AF-2 genomic actions against angiotensin II-induced hypertension. On the other hand, ERα-dependant MISS was not involved in ERα protection. Confirming our hypothesis, we found that AF-2 stimulation with estetrol was sufficient to completely prevent hypertension, thus providing a possible therapeutic perspective. Second Study : in a second project, we have investigated the protective actions of ERα against aging-related cardiovascular and renal alterations. This work is still ongoing but we found that 16 months-old female mice presented no obvious vascular or renal dysfunctions. Those results are surprising considering past published data on the subject. Aging mice lacking ERα-/-did not exhibit any particular alterations either. However, we were able to find that estrogens and ERs were involved in the mitochondria biogenesis in a surprising manner. These results will be further investigated in the future. Conclusion : to conclude, this work has allowed a better understanding of the estrogens receptors actions in the cardiovascular and renal systems

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Garcia, Aurélie. "Établissement de modèles cellulaires de cancer du sein et de l'ovaire permettant l'étude des effets des récepteurs des œstrogènes sur la proliférération et l'activation de gènes." Montpellier 1, 2010. http://www.theses.fr/2010MON1TA07.

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Abstract:

Les récepteurs des oestrogènes a et β (REa et REβ) régissent de manière opposée l'expression de gènes nécessaires à la prolifération et à la différentiation cellulaire. Leur activité transcriptionnelle dépend d'un ligand naturel et de molécules environnementales capables de perturber leur fonctionnement. Les cancers du sein et de l'ovaire peuvent être hormono-dépendants. Les thérapies visant à contrecarrer la progression des cancers du sein exprimant le REa reposent sur son inactivation par inhibition de la production d'oestrogènes et inhibition de son activité. L'hormonothérapie n'est pas proposée pour traiter les cancers de l'ovaire, en raison d'une résistance de nova qu'il faudrait mieux comprendre. Il est également nécessaire de mieux appréhender les mécanismes de la résistance acquise dans le cas de cancers du sein{ afin de rechercher de nouvelles thérapies. L'objectif de cette thèse a été de préciser les effets des RE sur la prolifération cellulaire et l'activation des gènes. Pour cela, nous avons établi des modèles cellulaires bioluminescents de cancer du sein et de l'ovaire, dont la bioluminescence est dépendante des ligands oestrogéniques. Ces lignées nous ont permis de préciser les effets de ligands sélectifs naturels, synthétiques et environnementaux sur l'activation de gènes par les RE a et β. L'autre volet de ce travail a consisté à établir d'autres modèles bioluminescents mammaires et ovariens permettant d'étudier la prolifération cellulaire et tumorale in vitro et in vivo. Nous démontrons également l'intérêt de ces modèles pour l'étude du mécanisme d'acquisition de l'hormono-résistance et la recherche de nouveaux traitements antitumoraux
Estrogen Receptors a and β (ERa and ERβ), which are members of the nuclear receptors superfamily, impact on cell proliferation and difrrentiation genes expression in an opposite manner. Both transcription factors activity belong to a natural ligand, but also to many environmental molecules, efficient to bind and disrupt their mechanism. Breast and ovarian cancers can be hormono-dependant cancers. Therapies aimed at counteract ERa positive breast cancers progression are mainly based on its invalidation. Nowadays, two strategies are applied: estrogen production inhibition using aromatase inhibitors, and ERa activity inhibition by anti-estrogens. On the contrary, hormono-therapy is not proposed for ovarian cancer treatment, because of a de nova resistance which remains to be better understood. It also appears essential to improve our knowledge about breast cancer resistance acquisition mechanisms, in order to research new therapies. The aim of this work was first to precise estrogen actions on~ cell proliferati n and target genes activation. For that, we established estrogen-responsive bioluminescent breast and ovarian cancers models. These cell lines allowed us to determine effects of naturat synthetic and environmental selective ligands on natural and synthetic genes activation through ERa and ERβ. The other part of this study consisted in establishing other breast and ovarian bioluminescent cell lines, allowing us to study cell and tumor proliferation in vitro and in vivo. We also show these bioluminescent models relevance to investigate hormono-resistance acquirement mechanisms and new anti-tumoral treatments

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El, Jabri Jamila. "Obtention d'anticorps monoclonaux anti-oestrogenes de haute affinite et leur utilisation pour la mise au point d'immunodosages non radioactifs." Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05S004.

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Abstract:

La mise au point de methodes immunologiques appliquees au dosage d'haptenes necessite la mise en oeuvre de technologies particulieres du fait : -des faibles affinites generalement obtenues pour les anticorps anti-haptene -de la difficulte d'immobilisation des haptenes sur le support solide - de la necessite d'amplifier le signal de la sonde dans le cas de dosages de haute sensibilite. L'objectif de ce travail est de mettre au point des methodes immunocompetitives, non isotopiques, sensibles et fiables pour les dosages cliniques des hormones steroidiques, en particulier les oestrogenes plasmatiques ou urinaires chez la femme. Dans une premiere etape, nous avons selectionne et obtenu des anticorps monoclonaux anti-oestrogenes de haute affinite (1. 4 et 2. 10#1#0m#-#1) et d'etroite specificite, apres une etude de differents types d'immunogenes et d'immunisations. Dans une deuxieme etape nous avons effectue la synthese de differents immunoreactifs : - le marquage des anticorps par des sondes fluorescentes et par des sondes enzymatiques. Ces marquages ont ete effectues soit directement soit indirectement par l'intermediaire du systeme biotine/avidine. - le couplage des steroides a des proteines permettant leur immobilisation sur les supports solides. Dans une troisieme etape nous avons developpe quatre types d'immunodosages : -un fluoroimmunodosage des steroides a ete effectue a l'aide d'un fluorimetre a excitation laser hautement sensible, mis au point par une equipe du cnam. - un enzymoimmunodosage de l'oestradiol plasmatique chez la femme - un enzymoimmunodosage avec une amplification du signal enzymatique par le systeme biotine/avidine - un enzymoimmunodosage dot-blot des steroides et sa quantification au moyen d'un systeme de double fibres optiques. Cette meme methode permet la realisation de bandelettes test a reponse tout ou rien pour deceler la periode de fertilite chez la femme.

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Lucas, Hervé. "Etude des glycoprotéines pellucidaires fucosylées et de leurs récepteurs spermatiques." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05CD12.

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Abstract:

La zone pellucide (ZP) est une enveloppe acellulaire transparente qui entoure l'ovocyte et l'embryon de mammifère jusqu'à son implantation. Au cours de l'interaction gamètique, elle intervient dans la reconnaissance et la fixation des spermatozoi͏̈des, dans le déclenchement de la réaction acrosomique ainsi que dans le blocage de la polyspermie. Trois glycoprotéines appelées ZP1, ZP2 et ZP3 composent la zone pellucide murine mais la composition de la zone pellucide humaine est encore imparfaitement connue. C'est pourquoi nous avons cherché à caractériser la structure pellucidaire humaine en électrophorèse après biotinylation des protéines et avons étudié ses glycoconjugués, en blot et en cytochimie, à l'aide de lectines et d'anticorps anti-oligosaccharides. La zone pellucide humaine se compose de trois protéines majoritaires appelées ZP1, ZP2 et ZP3 ainsi que d'une glycoprotéine polymérique minoritaire de 180 kDa. Les glycoconjugués Lewis b, sialyl-Lewis a et sialyl-Lewis x se retrouvent également dans la composition des chaînes saccharidiques des zones pellucides humaines. D'autre part, nous avons testé les lectines AAL et LTA ainsi que les anticorps anti-Lewis b, anti-sialyl-Lewis a et anti-sialyl-Lewis x dans le cadre de tests de fixation pellucidaire des spermatozoi͏̈des. Ces deux lectines ainsi que les anticorps anti-Lewis b et anti-sialyl-Lewis a inhibent significativement la fixation des spermatozoi͏̈des. De même, les néoglycoconjugués Lewis b, sialyl-Lewis a et syalyl-Lewis x inhibent significativement la fixation des spermatozoi͏̈des aux ZP. Nous avons pu localiser la fixation du néoglycoconjugué Lewis b sur la portion acrosomique des spermatozoi͏̈des humains. Avec cette même localisation, un anticorps anti L-sélectine marquait les spermatozoi͏̈des capacités. L'ensemble de ces résultats permet de mieux définir la composition protéique et saccharidique de la ZP humaine et nous avons identifié des glycoconjugués intervenant dans la fixation des spermatozoi͏̈des par l'intermédiaire de récepteurs qui restent à caractériser.

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Duroux, Romain. "Conception, synthèse et évaluation d'antagonistes des récepteurs A2A." Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S015/document.

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Abstract:

La maladie d’Alzheimer (MA) est la maladie neurodégénérative touchant le plus de personnes dans le monde. Jusqu’à présent, aucun traitement curatif n’existe pour soigner cette maladie, d’où la nécessité d’identifier et d’étudier de nouvelles cibles thérapeutiques.La découverte des effets bénéfiques de la caféine, antagoniste du récepteur à adénosine A2A (A2AR), conjuguée à une surexpression de ce dernier chez les patients atteints de la MA, font de ce récepteur une cible d’intérêt. En effet, des antagonistes des A2ARs ont montré leur capacité à améliorer les performances cognitives de par une diminution de la charge amyloïde associée à une diminution la phosphorylation de la protéine Tau.Bien que plusieurs antagonistes aient été développés pour le traitement de maladies neurodégénératives, ceux-ci présentent un manque d’efficacité corrélée à de faibles propriétés pharmacocinétiques. Ainsi, à partir d’études de modélisation moléculaire, deux nouvelles familles d’antagonistes présentant un noyau central benzoxazole ou quinazoline ont été conçus, synthétisés et évalués pharmacologiquement. Trois composés ont été sélectionnés et font actuellement l’objet d’études pharmacologiques complémentaires sur modèles animaux
Alzheimer’s disease (AD) is the most prevalent form of dementia in the aged population. So far, there is no way to halt or slow-down AD. Therefore, there is a constant need of developing novel therapeutic strategies.In recent years, adenosine A2A receptor (A2AR) has attracted a growing interest since it has been proved that this receptor is over-expressed during AD. Also, epidemiological studies showed that people consuming regularly caffeine-based beverages over a lifetime are substantially less likely to develop this disease. Indeed, A2AR antagonists improve memory performance as it reduces β-amyloid deposits and Tau-phosphorylation.Though several antagonists have been developed for the treatment of neurodegenerative diseases, current research efforts are focus on developing new antagonists with relevant ADME properties and a better efficacy. Based on a molecular modeling-guided design, we synthesised new A2AR antagonists with benzoxazole and quinazoline as central scaffold. Three molecules were selected and will be subject to evaluation on animal’s model

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Mechiche, Hakima. "Récepteurs des neurokinines et des leucotriènes sur les muscles lisses vasculaires et bronchiques humains : expression et fonction." Reims, 2002. http://www.theses.fr/2002REIMM207.

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Abstract:

Peu d'études ont été consacrées à l'expression, la localisation et à la fonction des sous-types de récepteurs impliqués dans les effets des leucotriènes et des neurokinines sur les tissus vasculaires systémiques. Pour ce qui concerne les neurokinines, ce travail démontre pour la première fois, sur veine saphène humaine, l'expression des récepteurs NK1 et NK2 au niveau du muscle lisse et la réponse contractile induite par la NKA par stimulation des récepteurs NK2. De plus, les récepteurs NK1 ont été également localisés au niveau de l'endothélium de ce type de vaisseaux. Sur vaisseaux pulmonaires, seuls des récepteurs NK1 sont exprimés au niveau endothélial et leur stimulation induit une relaxation concentration-dépendante médiée à la fois par l'oxyde nitrique et les prostaglandines. Sur ces deux types de vaisseaux humains, la réponse aux neurokinines est caractérisée par l'apparition rapide d'une tachyphylaxie. Pour ce qui concerne les leucotriènes, les récepteurs de type CysLT1 et CysLT2 sont exprimés par les veines saphènes alors que les récepteurs CysLT1 sont les seuls exprimés par les bronches humaines. Sur les deux types de vaisseaux, seuls les récepteurs de type CysLT1 sont impliqués dans la réponse contractile. Les bronches humaines de petit diamètre (inférieur à 1mm) sont environ 30 fois plus sensibles aux leucotriènes que les bronches de plus grand diamètre. L'ensemble de ces résultats suggèrent l'intérêt thérapeutique potentiel des antagonistes des récepteurs des neurokinines et des leucotriènes en pathologies cardiovasculaire
Few studies have been devoted to the expression, localization and function of the receptor subtypes involved in the effects of leukotrienes and neurokinins on systemic vascular tissues. With respect to neurokinins, this work demonstrates for the first time the expression of NK1- and NK2-receptors on the smooth muscle of human saphenous veins and the contractile effect of NKA through NK2-receptor activation. In addition, NK1-receptors have been also localized on the endothelium of this vessel type. On human pulmonary vessels, we have only found the expression of NK1-receptors on the endothelium. These endothelial NK1-receptors are involved in substance P-induced relaxation through the release of nitric oxide and prostaglandins. On this two types of human vascular tissues, the functional responses are characterized by the rapid onset of tachyphylaxis. With respect to leukotrienes, both CysLT1- and CysLT2-receptors are expressed by saphenous veins whereas only CysLT1-receptors are expressed by human bronchus. On both tissues, only CysLT1-receptors are involved in the contractile response. The small human bronchi (internal diameter > 1mm) are about 30-fold more sensitive to the leukotriene contractile effects than the large human bronchi. As a whole, these results suggest the potential therapeutic interest of neurokinin and leukotriene antagonists in vascular diseases

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Moas, Heloire Valeria. "Conception, synthèse et évaluation de nouveaux ligands antagonistes de récepteurs A2a." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S007/document.

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Abstract:

L’adénosine est un neuromodulateur ubiquitaire impliqué dans différents processus physiologiques et neuroprotecteurs du système nerveux central. Elle agit via quatre sous-types de récepteurs couplés à protéine G (A1, A2a, A2b et A3). Le récepteur A2a (A2aR) est fortement exprimé dans des régions riches en dopamine, avec de fortes concentrations dans la zone du caudate-putamen du cerveau, où elle a un rôle important dans la transmission neuronale et dans le processus dégénératif d’origine extrapyramidale. Ainsi, le blocage du récepteur A2a s’est révélé être une cible prometteuse pour le traitement des maladies neurodégénératives tels la Maladie de Parkinson (MP) et la Maladie d’Alzheimer (MA). A ce jour, seulement trois composés sont en phase clinique dans le cadre du traitement de la MP. Toutefois, bien que très affins, ils ne possèdent pas des propriétés ADME ou une sélectivité optimales.Au début de ce projet, la sous-structure Tic-hydantoïne a été identifiée comme présentant une bonne affinité pour A2aR. Après étude des fonctions manquantes de cette molécule et en respectant les éléments pharmacophoriques nécessaires pour une bonne activité, nous avons imaginé et évalué dans la structure co-cristallisé du A2aR et du ligand antagoniste de référence ZM241385 différentes modulations autour de l’hétérocycle. Ceci a permis de proposer la famille des Tic-guanidines, qui présente une fonction donneur de liaison hydrogène avec le résidu Asn253 du site et qui a été synthétisé après optimisation d’un chemin synthétique original. De plus, 1700 molécules ont été conçues de novo et évaluées in silico. Parmi les familles potentiellement intéressantes, deux d’entre elles, les quinolizidinones et les amino-imidazopyridines ont été synthétisées et évaluées in vitro afin de déterminer leur affinité vis-à-vis le récepteur A2a ainsi que leur cytotoxicité vis-à-vis les cellules neuronales
Adenosine is a ubiquitous neuromodulator able to regulate many physiological processes and plays an important neuroprotective role in the central nervous system. Its effects are transmitted by four distinct G protein receptor subtypes designated A1, A2a, A2b, and A3. A2a receptors (A2aR) show a restricted distribution, being characteristic of the dopamine enriched areas, the highest concentration being in the caudate-putamen in brain, where it has an important role in neuronal signaling with this region and potential involvement in neurologic disease of extrapyramidal origin.A2a antagonism was shown to be a promising pharmacological target for neurodegenerative diseases such as Parkinson’s disease (PD) and Alzheimer disease (AD). Currently, only three compounds are still in clinical phase for PD treatment. Even if they show good affinities for the receptor, there is still a need for improving their ADME properties by keeping their selectivity towards other adenosine receptors.At the beginning of this project, a Tic-hydantoin derivative was identified as a new ligand with a good affinity for the A2a receptor. Based on the recently published crystalline structure of the A2A receptor complexed with the selective and high-affinity antagonist ZM241385 and a pharmacophoric model, we identified the missing features needed for a good affinity in our molecule. We designed and evaluated in silico many pharmacomodulations around the heterocyclic ring and Tic-guanidin substructure was proposed to present favorable hydrogen bound with Asn253 of the A2a binding site. This structure was obtained after optimization of a new synthetic pathway. Moreover, 1700 molecules were originally designed and evaluated in silico. Among potential interesting families, two of them, quinolizidinones and amino-imidazopyridines were synthesized and evaluated in vitro toward their affinity for A2a receptor and their cytotoxicity towards neuronal cells

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Damaj-Kaafarany, Itidal. "Etude du rôle de l'adrénomédulline dans l'angiogenèse tumorale via ses récepteurs CRLR/RAMP2, CRLR/RAMP3." Aix-Marseille 2, 2007. http://www.theses.fr/2007AIX20654.

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Bertin, Benjamin. "Caractérisation fonctionnelle d'un récepteur nucléaire de la famille FTZ-F1 (Fushi Tarazu-Factor 1) chez le parasite trématode schistosoma mansoni." Lille 2, 2004. http://www.theses.fr/2005LIL2S047.

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Abstract:

Avec plus de 200 millions de personnes infectées et 600 millions d'individus exposés, les schistosomiases représentent la deuxième endémie parasitaire mondiale après le paludisme. L'utilisation d'une seule drogue (avec la description des premiers isolats résistants) et l'absence actuelle de vaccin disponible, témoignent de l'urgence et du besoin de développer de nouvelles stratégies de lutte contre le parasite. Le développement rationnel et efficace de nouvelles cibles chimiothérapeutiques et/ou vaccinales passe par une meilleure compréhension des mécanismes de développement et de différenciation du schistosome. Dans ce cadre, les récepteurs nucléaires d'hormones constituent des candidats d'étude privilégiés. Les récepteurs nucléaires sont une superfamille de facteurs de transcription ligand dépendant, impliqués dans les processus liés au développement et à la différenciation chez les métazoaires. Six membres ont été isolés chez le schistosome, dont SmFtz-F1 (S. Mansoni Fushi Tarazu-Factor1), objet d'étude de cette thèse. Les rôles des orthologues de ce récepteur, dans les processus du développement et de la différenciation sexuelle, au sein d'autres organismes, pourraient présager des fonctions similaires chez le parasite. Les membres de la famille Ftz-F1 sont des récepteurs orphelins (sans ligand caractérisé) se liant à l'ADN en monomères. La caractérisation fonctionnelle approfondie de SmFtz-F1 a révélé une conservation de certaines grandes fonctions, mais a surtout dévoilé l'existence de propriétés originales qui pourraient être propres à ce récepteur de schistosome. En effet, la modélisation moléculaire de son domaine de liaison au ligand suggère l'existence d'une activité ligand dépendante, indiquant que SmFtz-F1 ne serait pas un récepteur orphelin. De plus, nous avons observé, pour la première fois, une dimérisation originale et spécifique entre SmFtz-F1 et un homologue au récepteur RXR de vertébré chez le schistosome, SmRXR1 (Schistosoma mansoni Retinoid X Receptor 1). D'une manière générale, l'identification de mécanismes transcriptionnels et/ou de voies de signalisation propres au parasite, participe(nt), d'une part, à la compréhension des mécanismes de l'évolution du développement animal, et d'autre part, constitue une étape importante dans la recherche de nouveaux moyens de lutte contre les schistosomiases
Schistosomiasis is a major public health problem afflicting 200 million people with 600 million exposed to infection, and represents the second most important worldwide parasitic disease after malaria. In the absence of an effective vaccine and with only one drug effective against all schistosome species, there is a clear need for novel treatments. A rational approach to this problem is to characterize schistosome proteins that are potentially strongly involved in parasitic development and differentiation and are thus chemotherapeutic targets. One such family of proteins is represented by the nuclear hormone receptors (NRs). Nuclear receptors constitute a superfamily of ligand-dependent transcription factors which regulate a wide array of physiological and vital processes in the metazoa, including growth, development, sexual differentiation and metabolism. Six members of this superfamily have been isolated in schistosomes. The aim of this work was to investigate the functional properties of one of them, SmFtz-F1 (Schistosoma mansoni Fushi Tarazu-Factor 1). The Ftz-F1 subfamily contains orphan receptors that bind to their response element as monomers. The functional characterization of SmFtz-F1 has shown some conserved functions, but has especially revealed original functional properties that could be specific for this schistosome receptor. Indeed, the 3D modelling of the E domain suggests that SmFtz-F1 could be a ligand-dependant nuclear receptor. Moreover, we have observed, for the first time, an original and specific interaction between SmFtz-F1 and a schistosome RXR homologue, SmRXR1 (S. Mansoni Retinoid X Receptor). Overall, the characterization of specific parasite signaling pathways, first, allows the comprehension of the molecular mechanisms involved in the evolution of animal developement and, second, represents a key step in the search for new strategies to control schistosomiasis

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Zinzendorf, Nanga Yessé. "Infection expérimentale par des bactéries à developpment intracellulaire. Régulation du TNF-α et de ses récepteurs." Reims, 2002. http://www.theses.fr/2002REIMP202.

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Abstract:

@Dans le premier modèle les cellules monocytaires humaines sont infectées par quatre souches de R. Equi qui diffèrent par leur sensibilité aux b-lactamines. Les souches régulent différemment la production de TNF-a. Les messagers du TNF-a sont réprimés et la production de TNF-a est inhibée dans le cas de l'infection des monocytes par les souches résistantes aux b-lactamines. En outre, la présence de surnagent de culture de la souche résistante aux b-lactamines affecte négativement l'expression des messagers et la production du TNF-a chez la cellule infectée par la souche sensible. Dans le second modèle, les cellules monocytaires humaines sont infectées par deux souches de L. Monocytogenes, la souche sauvage EGD et son mutant non hémolytique. Les souches régulent différemment l'expression des messagers des récepteurs du TNF-a (TNF-R) et l'activité du TNF-a. La souche hémolytique réprime l'expression des messagers du TNF-RI, induit celle du TNF-RII et la solubilisation du TNF-RI
@In the first model, human monocytic cells were infected with 4 R. Equi strains differing in b-lactamin resistance. These strains regulate differently TNF-a production. The b-lactam resitant strains do not induce any measurable TNF-a mRNA expression and TNF-a secretion upon infection. The supernatant from b-lactam resitant R. Equi cultures promoted an inhibition of the induction of both TNF-a expression and release by the macrophages infected by the b-lactam susceptible strains. In the second model, human monocytic cells were infected with two strains of L. Monocytogenes, a hemolytic strain EGD and a non hemolytic mutant. These two strains regulate differently TNF-a activity and TNF-a receptors (TNF-R) mRNA expression. The hemolytic strain down-regulates TNF-RI mRNA expression, up-regulates TNF-RII mRNA expression, inhibits TNF-a activity and induces the release of soluble TNF-RI

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Raoul, Marion. "2-vinyltryptamines : préparation et utilisation comme diènes dans la synthèse du squelette de l'échitamine Ligands sélectifs des récepteurs sérotoninergiques 5-HT6." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMP208.

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Abstract:

@Une réaction tandem Diels-Alder - cyclisation intramoléculaire d'une 2-vinyltryptamine mise au point au laboratoire, a ouvert une voie d'accès à une structure tétracyclique proche du squelette de l'échitamine. La réactivité des 2-vinyltryptamines vis à vis de différents diènophiles dans cette séquence a été étudiée. Les groupements BOM (benzyloxyméthyle) et MOM (méthoxyméthyle) comme protecteur de l'azote indolique se sont révélés peu stables à la température de la réaction (130-170ʿC). Le méthyle ayant donné de meilleurs résultats, les cycloadduits résultant de la réaction tandem avec l'acétylène dicarboxylate de diméthyle et le propiolate de méthyle ont été utilisés pour les essais de formation du cinquième cycle de l'échitamine. Dans cet objectif, différentes conditions pour une cyclisation radicalaire ou une réaction de Heck, ont été essayées, mais sans succès. Une approche intramoléculaire a également été tentée mais la réaction tandem n'a pas réussi. Au cours de cette voie, une azétidin-3-one a été obtenue à partir de la tryptamine et du (E)-5-bromo-4-oxo-pent-2-ènoate d'éthyle. Cette réaction a pu être appliquée à différentes amines primaires et constitue une méthode de synthèse simple, rapide et directe de ce type de cycle à quatre. Les 2-vinyltryptamines se sont également montrées être des ligands des récepteurs sérotoninergiques 5-HT6. Pour une étude de pharmacomodulation, une vingtaine de composés a été préparée. Avec des pourcentages d'inhibition allant de 90 à 97 % à 10-6M et 27 à 48 % à 10-8M, les dérivés N1-substitués par un groupement benzènesulfonyle ont montré la plus haute affinité et une sélectivité pour ces récepteurs
@Tandem Diels-Alder - intramolecular cyclization of a 2-vinyltryptamine settled in the laboratory, opens the way to the tetracyclic systemclosely related to echitamine's skeleton. Reactivity of 2-vinyltryptamines toward different dienophiles using this sequence was studied. BOM (benzyloxymethyl) and MOM (methoxymethyl), as indole nitrogen protecting groups, seemed to be unstable at the reaction temperature (130-170ʿC). Methyl substitution gave better results and cycloadducts from tandem reaction with dimethylacetylene dicarboxylate and methyl-propiolate were used for trying to form echitamine's fifth cycle. In this purpose, different conditions for radical cyclization or Heck reaction were tried, with no success. An intramolecular approach also failed to afford pentacyclic target. During this latest experiment, an azetidin-3-one was obtained from tryptamine and (E)-5-bromo-4-oxo-pent-2-enoic acid ethyl ester. This reaction could be generalized with different primary amines and constitute a simple, rapid and direct synthesis of azetidin-3-ones. 2-Vinyltryptamines also appeared to be 5-HT6 receptor ligands. About twenty compounds were prepared for pharmacomodulation; with inhibition from 90 to 97 % at 10-6M and 27 to 48 % at 10-8M, N1-benzenesulfonyle derivatives showed the best affinity and selectivity for this kind of receptors

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Poaty, Virginie. "Hyperréactivité bronchique après transplantation pulmonaire syngénique chez le rat : étude des récepteurs muscariniques et de la synthèse du neuropeptide Y." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05CD09.

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Abstract:

Une hyperactivité bronchique (HRB) est décrite chez le patient ayant bénéficié d'une transplantation pulmonaire. Parallèlement une HRB a été mise en évidence in vitro après transplantation pulmonaire syngénique chez le rat pour une contraction induite par stimulation par champ électrique. Cette contraction est liée à une libération d'Ach endogène. Une hypersensibilité des récepteurs muscariniques cholinergiques a été suggérée par certains auteurs pour expliquer l'HRB observée. Nous avons abordé cette hypothèse en caractérisant les récepteurs muscariniques pulmonaires par liaison de radioligand ([3MH](-)QNB) dans des préparations membranaires de poumon de rat après transplantation pulmonaire syngénique et de rat contrôlé. Aucune modification de l'affinité ou de la densité des récepteurs muscariniques totaux n'a été observée. Des expériences de déplacements de la liaison du [3MH](-)QNB à l'aide d'antagonistes spécifiques de trois types de récepteurs muscariniques caractérisés pharmacologiquement, la pirenzépine (M1), le 4-DAMP (M1+M3) et l'AFDX-116BS (M2), suggèrent une analogie des différents types de récepteurs muscariniques après transplantation. Ceci signifie que l'HRB observée après transplantation pulmonaire n'est pas liée à une " hypersensibilité de dénervation " mais plutôt à une grande libération d'Ach, due à une déficience des mécanismes inhibiteurs du système cholinergique. L'un des mécanismes inhibiteurs de la neurotransmission cholinergique est représenté par le neuropeptide Y (NPY), un neuropeptide décrit dans l'innervation sympathique des voies aériennes. Nous avons mis en évidence dans les voies aériennes par immunohistochimie une diminution de la quantité des fibres immunoréactives pour le NPY dans le poumon après transplantation pulmonaire par rapport au contrôle. Cette diminution du NPY dans le poumon après transplantation pourrait donc contribuer à l'HRB observée. L'origine du NPY dans le poumon transplanté a été abordée par hybridation in situ. Nous avons montré la présence d'ARN messager codant pour le NPY dans les cellules ganglionnaires parasympathiques aussi bien dans la bronche témoin que dans la bronche transplantée. Le NPY restant dans les voies aériennes après transplantation pulmonaire pourrait donc appartenir aux fibres parasympathiques.

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Le, Vraux Valérie. "Régulation de la production du TNF par les stimulants des récepteurs de l'adénosine et d'autres médicaments anticytokines." Paris 5, 1994. http://www.theses.fr/1994PA05CD05.

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Abstract:

Le TNF est une cytokine pléiotropique avec des propriétés pro-inflammatoires. Il joue un rôle pathogénique ou de facteur aggravant dans de multiples pathologies touchant les grands systèmes de l'organisme. Ainsi, inhiber la production et/ou les effets du TNF représentent des cibles thérapeutiques majeures. Le but de notre travail a été de caractériser le profil d'action anti-TNF des stimulants des récepteurs de l'adénosine par une approche in vitro, utilisant la culture de monocytes humains associée à une approche in vivo, évaluant les effets d'un des agonistes des récepteurs de l'adénosine les plus puissants in vitro, dans deux modèles de réaction de phase aiguë chez le rat: modèle du choc endotoxinique connu comme étant dépendant du TNF et le modèle de l'œdème plantaire à la carragénine dont nous montrons qu'il est, au moins en partie, également dépendant du TNF. A partir de l'étude sur les monocytes humains stimulés avec de l'endotoxine, nous avons établi que l'adénosine et ses analogues inhibent la production de TNF à des concentrations, pour les plus actifs, inférieures à 10-6M voire 10-7M. De l'ordre de puissance d'activité des agonistes testés suggère la mise en jeu, partielle mais prépondérante, des récepteurs purinergiques du sous-type A2b. La mise en évidence d'une propriété anti-TNF similaire avec les médicaments agissant par l'intermédiaire de l'adénosine, (inhibant son captage par la cellule ou inhibant sa dégradation) suggère que l'adénosine puisse être ajoutée à la liste des substances endogènes anti-inflammatoires. La recherche de facteurs de couplage mis en jeu dans l'inhibition de la régulation du TNF par les agonistes des récepteurs de l'adénosine permet d'éliminer l'AMPc et le GMPc en tant que seconds messagers et incite à rechercher d'autres mécanismes de transduction. Néanmoins, l'association des agonistes des récepteurs de l'adénosine avec les agents stimulant l'adénylate cyclase ou avec les inhibiteurs de phosphodiestérase à AMPc permet de renforcer, voire de potentialiser, l'inhibition de la production de TNF. Les effets observés in vitro apparaissent pharmacologiquement relevants car l'utilisation des deux modèles d'inflammation a permis d'établir que la R-phénylisopropyladénosine (R-PIA), à de faibles doses (inférieurs à 0,5 mg/kg) inhibe fortement la production sérique de TNF dans le modèle du choc endotoxinique et est presque aussi puissante qu'un glucocorticoïde dans le modèle de l'œdème plantaire à la carragénine. Son action anti-oedémateuse est reproduite par l'administration d'un anticorps monoclonal anti-TNF et est associée à une réduction marquée des concentrations de TNF au site inflammatoire local. En revanche, la régulation de la production de la production d'IL6, systémique ou locale est régulée de façon différente dans les deux modèles expérimentaux. Ces résultats indiquent que les stimulants des récepteurs de l'adénosine peuvent être considérés comme une nouvelle classe pharmacologique d'anticytokines anti-inflammatoires qui agissent soit directement en tant qu'agonistes purinergiques P1 soit par l'intermédiaire de l'adénosine endogène.

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Mony, Laetitia. "Modulateurs allostériques des récepteurs NMDA contenant la sous-unité GluN2B : sites de liaison et mécanismes d'action." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05S005.

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Abstract:

Les récepteurs NMDA (rNMDA) forment une classe de récepteurs-canaux membranaires activés par le glutamate, le principal neurotransmetteur excitateur du cerveau des Vertébrés. Ils jouent un rôle prépondérant dans l'initiation de différentes formes de plasticité synaptique mais sont également impliqués dans diverses pathologies comme les ischémies cérébrales, les douleurs chroniques ou la schizophrénie. Les composés régulant l'activité des rNMDA ont donc un fort intérêt thérapeutique. De façon remarquable, les rNMDA possèdent de nombreux sites modulateurs extracellulaires pouvant lier des ions ou des petites molécules. Ces sites allostériques, qui diffèrent des sites de liaison pour les agonistes et de ceux situés dans le canal, sont d'autant plus intéressants qu'ils permettent de cibler sélectivement certains sous-types de rNMDA, ce que les autres sites ne permettent généralement pas. Ainsi, l'ifenprodil (modulateur négatif synthétique) et les polyamines (modulateurs positifs présents naturellement) sont des composés agissant sélectivement sur les rNMDA contenant la sous-unité GluN2B. Les sites de liaison et les mécanismes d'action de ces composés restaient cependant mal connus. En combinant modélisation moléculaire, électrophysiologie, mutagénèse dirigée et biochimie sur cystéines, nous avons tout d'abord établi un modèle tridimensionnel d'interactions de l'ifenprodil avec le domaine N-terminal (NTD) de la sous-unité GluN2B. Nous avons de plus identité l'interface de dimérisation entre les NTDs des sous-unités GluN1 et GluN2B comme le site de liaison des polyamines, et proposons que ces molécules potentialisent les rNMDA en maintenant proches les deux NTDs, empêchant ainsi leur fermeture. Ces travaux apportent de nouvelles informations sur les bases moléculaires qui régissent la régulation allostérique des rNMDA. Ils soulignent notamment le rôle central des NTDs dans le contrôle de l'activité des rNMDA et révèlent l'importance des interfaces entre sous-unités comme sites d'action de ligands allostériques
NMDA receptors (NMDARs) are a major class of excitatory neurotransmitter receptors in the brain of Vertebrates. They form glutamate-gated ion channels highly permeable to calcium that mediate synaptic plasticity. NMDAR dysfunction is involved in multiple brain disorders, including stroke, chronic pain and shizophrenia Compounds that regulate NMDAR activity are thus of therapeutic interest. Remarkably, NMDARs are endowed with multiple extracellular regulatory sites that recognise ions or small molecule ligands. These allosteric sites, which are distinct from agonist-binding and channel-permeation sites, are of particular interest because they can selectively target certain NMDAR subtypes. Thus, ifenprodil (a synthetic allosteric modulator) and polyamines (naturally occuring positive allosteric modulators) selectively modulate GluN2B-containing NMDARs. However, the binding sites and mechanisms of action of these compounds were still ill-denied. By combining molecular modelling, electrophysiology, site-directed mutagenesis and chemical protein modifcations, we first built a tridimensional model of ifenprodil interacting with the N-terminal domain (NTD) of the GluN2B subunit. Moreover, we have identified the dimerisation interface between GluN1 and GluN2B NTDs as polyamine binding-site. We propose that these molecules potentiate NMDARs by maintaining both NTDs in close proximity, thus preventing their closure. This work reveals new information about the molecular mechanisms underlying allosteric regulation of NMDARs. They highlight the central role of NTDs in the one control of NMDAR activity and show the importance of interfaces between subunits as binding sites for allosteric ligands

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Chachlaki, Konstantina. "Molecular characterization of NO-synthesizing neurons and assessment of their function in the maturation of the hypothalamic - pituitary - gonadal axis." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S047.

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Abstract:

L’apparition de la puberté et la régulation de la fertilité chez les mammifères sont contrôlées par un réseau neuronal complexe, situé principalement dans l'hypothalamus, et qui converge vers les neurones synthétisant l'hormone de libération des gonadotrophines (GnRH). Ces neurones régulent la sécrétion des gonadotrophines, la croissance et le fonctionnement des gonades. Le développement correct du système à GnRH, incluant des changements rapides dans l'expression et la signalisation de l’hormone GnRH au sein de cette population clairsemée de quelques centaines de neurones, est essentiel pour la maturation sexuelle et le fonctionnement normal de l'axe hypothalamo-hypophyso-gonadique. Lors du développement embryonnaire, ces neurones migrent de la placode olfactive vers leur emplacement définitif, l’hypothalamus, pour y recevoir les connexions afférentes qui permettront une libération pulsatile de la GnRH et la libération subséquente des gonadotrophines (l'hormone de stimulation des follicules (FSH) et l'hormone lutéinisante (LH)). Dès les années 90, l'oxyde nitrique (NO) a été identifié comme molécule clé dans la décharge pré-ovulatoire de GnRH/LH. En effet, de nombreux travaux ont suggéré que des interactions entre les neurones exprimant la forme neuronale de l’enzyme de synthèse du NO (la nNOS) et le système GnRH étaient impliquées dans le contrôle central de la fonction de reproduction à l'âge adulte. De plus, si le NO est reconnu depuis longtemps comme un acteur majeur du contrôle central de l’ovulation à l’âge adulte, la possibilité qu’il soit aussi impliqué dans la maturation sexuelle en régulant l’activité des neurones à GnRH à des stades précoces précédant la puberté n’a pas été explorée auparavant. Cependant, même si nous avons progressé dans la connaissance des interactions entre les neurones à nNOS et des différents acteurs importants de l’axe gonadotrope, l’identité moléculaire de ces neurones reste mal connue. Au cours de cette étude, nous avons recherché 1) l'identité moléculaire des neurones á nNOS dans l'hypothalamus au cours de développement 2) si le NO régule la migration et l’intégration des neurones à GnRH dans l’hypothalamus et 3) si le NO régule la maturation sexuelle. Pendant ma thèse nous avons répertorié pour la première fois les différents neurotransmetteurs et les principaux récepteurs dans les neurones à nNOS au cours du développement post-natal. De plus, les résultats de ma thèse montrent pour la première fois une implication de la signalisation du NO dans la migration des neurones à GnRH vers l'hypothalamus et font échos à l'identification d'une série de mutations de la NOS1 chez des patients atteints du syndrome de Kallmann, une maladie génétique congénitale rare qui associe une carence en GnRH, due à un défaut de migration neuronale, et une anosmie. Enfin, mes travaux montrent que le NO est un nouveau protagoniste dans la maturation post-natale du système à GnRH, la survenue de la puberté et l’acquisition de la capacité à se reproduire. Plus généralement, les résultats de ce travail de thèse permettent d’identifier de nouveaux mécanismes potentiellement responsables de troubles développementaux dans la mise en place des circuits neuronaux contrôlant l’axe gonadotrope chez les mammifères en général et l’homme en particulier. Nous espérons que ces résultats élargiront notre compréhension de la régulation de l'axe reproducteur, offrant ainsi des possibilités nouvelles de stratégies thérapeutiques contre les troubles de la fertilité
The onset of puberty and the regulation of fertility in mammals are governed by a complex neural network, primarily in the hypothalamus, that converges onto gonadotropin-releasing hormone (GnRH)-producing neurons, the master regulators of gonadotropin secretion and postnatal gonadal growth and function. The proper development of the GnRH system, including timely changes in GnRH expression and signaling by this sparse population of a few hundred neurons, is essential for sexual maturation and the normal functioning of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. As the brain develops during embryogenesis, these neurons should move from the olfactory placode into the correct brain location in adequate numbers, and then establish the afferent connections that will allow the pulsatile release of GnRH peptide, and the subsequent release of the gonadotropins (follicle stimulating hormone, i.e FSH and luteinizing hormone, ie. LH). As early as in the 90’s NO was presented as a key molecule in the preovulatory GnRH/LH surge, and results from different groups, have suggested the interaction of NOS-containing neurons with the GnRH system, and their involvement in the regulation of reproductive capacity. Even though nitric oxide has now been long recognized as a key player in the central hormonal regulation of ovulation during adulthood, no one has considered the possibility that it could act in an earlier stage as the master regulator of GnRH neurons before puberty, hence participating in the actual maturation of the neuroendocrine axis. The relationship of nNOS-expressing neurons with other important molecules of the hypothalamic axis has been well studied, whilst the molecular identity of this neuronal NOS-expressing population is poorly documented. . To this end, we address the hitherto unaddressed questions concerning 1) the molecular identity of nNOS-expressing neurons in the developing hypothalamus, 2) the putative involvement of the NO molecule in the migration of GnRH neurons and the proper establishment of their afferent connections in the hypothalamic region and 3) the plausible determinant role of NO signaling in the maturation of the reproductive system. During this study we identified for the first time the cohort of the principal neurotransmitters and important receptors expressed by these cells in the hypothalamic region during development. Additionally, our results reveal for the first time an involvement of NO signaling in the migration of GnRH neurons in the hypothalamus and are in line with the identification of a series of NOS1 mutations in Kallmann syndrome (KS), a rare congenital genetic condition presenting a unique combination of GnRH deficiency, arising from a faulty migration of the neuronal population, and anosmia. Lastly, our study identifies NO as a novel protagonist during postnatal development, in the regulation of the onset of puberty and the acquisition of reproductive competence. Overall, the results of my Phd thesis identify putative new targets causing alterations of developmental programming under pathophysiological gestational environment in mammals in general, and in humans in particular. Here we thus provide new insights into the mechanisms by which the alteration of GnRH neuronal function leads to hypogonadotropic hypogonadism and infertility. We are hopeful that our results will expand our understanding of how the neuroendocrine axis is regulated and will possibly provide opportunities for therapeutic strategies against debilitating conditions

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Boularan, Cédric. "Mécanismes de régulation des βarrestines et des récepteurs couplés aux protéines G : Oligomérisation et échafaudage moléculaire." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T004.

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Abstract:

Les βarrestines (βarrs) contrôlent dans le temps et l'espace la signalisation en aval des récepteurs couplés aux protéines G en favorisant leur désensibilisation et leur endocytose. Les βarrs participent également à différentes voies de signalisation et leur capacité d'échafauder de multiples complexes expliquent la pléiotropie de leurs fonctions biologiques. Nos travaux montrent que l'oligomérisation des βarrs stabilise le suppresseur de tumeur p53. En délocalisant la protéine Mdm2, la quantité d'oligomères de βarr2 transitant par le noyau contrôle la transition G2/M. De plus, la progression du cycle cellulaire est liée à la localisation deβarr2 au centrosome et au cil primaire. Nos travaux étayent l'hypothèse que ce ne sont plus les protéines mais les complexes moléculaires qu'elles mettent en œuvre qui régulent les fonctions cellulaires. Nos données permettent d'envisager la βarr2 en tant que suppresseur de tumeurs dont l'implication dans les processus cancéreux doit être étudiée
G protein coupled receptor (GPCR) are spatio-temporal regulated by βarrestins proteins (βarrs) that mediate desensitization, endocytosis or modulation of signaling pathway. Oligomerization and scaffolding concepts explain the multiplicity of parrs functions. Our work focused on the role played by these multimolecular complexes. We showed that βarr2 oligomerizatio i, coupled to its nucleo-cytoplasmic shuttling, inhibited Mdm2-dependant degradation of p53 to mediate cell cycle regulation. We have also shown that βarr2 localizations to centrosome and to primary cilium are involved in proliferation processes. Altogether, these data supported the hypothesis that rather than proteins alone, multimolecular complexes are key regulator of cellular functions. Moreover, our data also revealed the βarr2 could be a tumor suppressor, and constitued a new target in tumoral processes

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Guyard, Anne-Claire. "Etude comparative du mecanisme d'action de deux antidepresseurs de la classe des imao : la toloxatone et la tranylcypromine." Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05S006.

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Abstract:

Ce travail, realise au niveau du cortex cerebral et de l'hippocampe de rat, comporte deux parties : - l'examen des interactions moleculaires ; outre le caractere imao reversible et selectif de la toloxatone, deja decrit, une nouvelle propriete est mise en evidence : l'interaction allosterique avec le recepteur gaba-a ; - l'observation, apres traitements aigus ou chroniques, de la regulation des recepteurs noradrenergiques (β, α1, α2) et serotoninergiques (5-ht1a, 5-ht2, 5-ht3) ainsi que des elements de transduction associes a ces recepteurs. L'analyse des resultats permet d'avancer un certain nombre de conclusions sur la regulation des recepteurs noradrenergiques et serotoninergiques, qui sont developpes en discussion.

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Agadir, Anissa. "Récepteurs nucléaires de l'acide rétinoïque et concentrations cellulaires efficaces : implication dans la réponse au traitement différenciateur des leucémies aiguës promyélocytaires." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05CD04.

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Abstract:

Nous présentons dans cette étude les pharmacocinétiques plasmatiques et intracellulaires de l'acide rétinoïque tout-trans (ATRA) dans les leucémies aiguës promyélocytaires, et la caractérisation des récepteurs nucléaires de l'ATRA dans ces cellules. La mise au point de techniques spécifiques d'extraction et d'analyse par HPLC de l'ATRA et de ses dérivés (9-cis, 13-cis et 4-oxo métabolites), nous a permis de montrer que des concentrations importantes d'ATRA (2x10-6M) sont atteintes rapidement au niveau du plasma. A l'intérieur des cellules, l'ATRA pénètre très rapidement ( en quelques minutes) et les concentrations atteintes sont corrélées au degré de différenciation des cellules et à la réponse in vivo des patients. L'étude des métabolites plasmatiques et intracellulaires de l'ATRA, met en évidence des quantités faibles de l'AR 9-cis, d'AR 13-cis et pas d'oxo-métabolites. Une conversion rapide de ces derniers en dérivés polaires instables, dont les hydroxy ou d'autres molécules non identifiées, pourrait expliquer leur faible abondance. Les cellules blastiques des LAM³ possèdent une translocation chromosomique t(15 ;17), qui fusionnent un allèle du gène RARa au gène PML. Le rôle putatif des protéines de fusion résultantes et de la protéine RARa normale dans la différenciation, représente un point capital dans la compréhension de leurs implications dans les phénomènes de leucémogénèse et de réponse à l'ATRA. Nos résultats de purifications (HPLC, FPLC) et d'étude de l'affinité des récepteurs nucléaires de l'acide rétinoïque apportent un élément supplémentaire. En effet, nous avons montré que l'affinité des récepteurs nucléaires des cellules HL –60 est proche de celle retrouvée dans les cellules COS transfectées par RARa ou PML-RARa et que par contre, l'affinité des récepteurs nucléaires présents dans les cellules promyélocytaires NB4 est inférieure. Nous avons, par ailleurs, montré une modulation de la protéine RARa normale dans les cellules LAM 3. Ainsi, l'induction de l'allèle normal pourrait expliquer, au moins en partie, l'effet thérapeutique de l'ATRA dans les LAM3, par le biais d'une compétition fonctionnelle entre l'activité normale stimulée par le traitement et l'activité pathologique, résultat de la translocation. L'ATRA, permettrait la réversion du phénotype malin en restaurant une régulation " physiologique " des voies de contrôle de la différenciation cellulaires.

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Sbai, Hakima. "Contribution à l'étude de la réponse immunitaire induite par l'immunisation par l'ADN : anticorps et récepteurs cellulaires pour immunisation par l'ADN." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05CD06.

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Abstract:

L'immunisation par l'ADN est une nouvelle approche vaccinale. Elle consiste en l'introduction de l'ADN exprimant une protéine antigénique d'un pathogène dans les cellules d'un hôte. Si cette approche a déjà montré son efficacité dans plusieurs modèles animaux de maladies infectieuses, le mécanisme de son fonctionnement est encore mal connu. Nous avons donc entrepris l'étude du mécanisme d'activation des cellules T cytotoxiques (CTLs) chez la souris à la suite de l'immunisation par cette méthode. Nous avons pour cela choisi le modèle du virus de l'hépatite B (VHB) dont l'une des caractéristiques intéressantes est la forte réponse CTL obtenue après injection intramusculaire d'ADN exprimant l'antigène de surface du VHB (AgHBs). Dans la première partie de cette thèse, nous avons cherché à savoir si la sécrétion de l'antigène par les cellules transfectées était obligatoire pour le développement de la réponse CTL comme l'avaient suggéré d'autres résultats. Les souris ont été immunisées par des plasmides exprimant soit une forme non sécrétée de l'AgHBs, soit la forme sauvage sécrétée. Les résultats obtenus montrent que l'activité CTL est identique que l'AgHBs soit sécrété ou non. Ainsi, la sécrétion ou la libération de la protéine après immunisation par l'ADN, n'est pas nécessaire pour activer les CTLs. On peut donc conclure que le transfert de la protéine vers les cellules professionnelles présentatrices de l'antigène (ACPs) n'est pas un mécanisme indispensable pour l'activation des cellules T. Ces résultats suggèrent donc que la capture directe de l'ADN par les APCs (cellules dendritiques ou macrophages) est une conséquence majeure de l'immunisation par l'ADN. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons essayé de mieux comprendre les caractéristiques structuraux de l'épitope CTL de l'AgHBS reconnu chez les souris BALB/c. Ces connaissances pourraient nous renseigner sur les possibilités de moduler la réponse cytotoxique. L'ADN plasmidique exprimant l'AgHBs a été modifié de façon à ce que chacun des douze acides aminés de l'épitope CTL (Ld) soient individuellement substitué par le résidu alanine. La réponse cytotoxique induite chez la souris a été analysée un mois après immunisation par chaque plasmide. Cette étude a permis d'identifier les résidus essentiels pour l'induction de la réponse CTL. Nous avons également remarqué que certaines mutations conduisaient à une activité CTL plus forte que celle obtenue avec l'épitope Ld non muté. La réactivité de ces " hyperagonistes " indique clairement des réactions croisées avec la séquence sauvage de l'épitope CTL. Ces résultats soulèvent donc la possibilité d'utiliser des séquences agonistes comme un moyen de recrutement de CTLs de différents répertoires T qui réagissent néanmoins avec l'épitope naturel. Cette stratégie d'immunisation, encore très peu explorée, peut stimuler la réponse CTL chez des individus qui, pour une raison ou une autre, ne réussissent pas à initier une telle réponse lors d'un contact avec le pathogène. Nos résultats permettent ainsi de mieux comprendre le mécanisme d'induction de la réponse immunitaire après immunisation par l'ADN. Ils suggèrent quelques applications thérapeutiques possibles avec une telle approche vaccinale. Ce travail montre également que l'immunisation par l'ADN plasmidique permet de manipuler les séquences antigéniques avec un degré de facilité qui peut accélérer la recherche en vaccinologie.

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Khayath, Naji. "Etude de l'adaptation de schistosoma mansoni à son environnement nutritif : rôles de la glutanime dans le métabolisme énergétique du sporocyste et analyse de la diversification de la famille des récepteurs de l'insuline chez le parasite." Lille 2, 2006. http://www.theses.fr/2006LIL2S026.

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La schistosomiase est un problème majeur de santé publique dans de nombreux pays émergents d’Afrique, d’Amérique latine et d’Asie du sud Est, causant près de 300 000 décès par an. Cette maladie est due au schistosome qui est un ver parasite possédant un cycle de vie complexe durant lequel il passe par deux hôtes différents et six stades de développement distincts. Au cours de ma thèse je me suis penché sur la remarquable capcité d’adaptation du parasite à ses hôtes successifs et notamment à l’environnement nutritif qu’il rencontre. Le sporocyste hébergé par l’hôte intermédiaire mollusque, se trouve dans un milieu moins favorable que les stades évoluant dans les veines mésentériques riches en glucose, de l’hôte vertébré. Nous avons pu montrer que la glutamine pouvait être une source d’énergie alternative pour le sporocyste, ainsi qu’un précurseur dans la voie de la glycéronéogénèse dépendante de la PEPCK. Cette voie métabolique qui n’avait jusqu’alors été observée que chez les mammifères, pourrait jouer un rôle important dans la physiologie du parasite. D’autre part nous avons caractérisé chez S. Mansoni, deux membres de la famille des récepteurs de l’insuline (IR), connue pour être un régulateur clé du métabolisme énergétique chez les métazoaires. L’étude des structures géniques et protéiques de SmIR-1 et SmIR-2 et leur capacité à lier la pro-insuline humaine, suggèrent fortement leur appartenance à la famille des IR. Cependant les différences du profil d’expression de ces deux IR et les résultats de l’analyse phylogénétique indiquent que SmIR-1 et SmIR-2 joueraient ds roôles distincts dans le développement du schistosome, contrastant ainsi avec la présence d’un IR unique chez les autres invertébrés. Ces résultats suggèrent également l’émergence et le maintient de SmIR-1 chez le schistosome afin d’y exercer une fonction biologique spécifique ce que confirme des expériences d’ARN interférence dans lesquels nous montrons l’implication de ce récepteur dans la régulation de la prise de glucose, source d’énergie majeure, par le parasite

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Landagaray, Elodie. "Conception, synthèse et évaluation pharmacologique d’antidépresseurs potentiels : ligands mixtes des récepteurs mélatoninergiques MT1/MT2 et des récepteurs sérotoninergiques 5-HT2c." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S063/document.

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Abstract:

La dépression est l’un des troubles mentaux les plus fréquents de nos jours. C’est une maladie liée en général à un déficit en neurotransmetteurs monoaminergiques (sérotonine, noradrénaline et dopamine). Les antidépresseurs actuels agissant via des mécanismes monoaminergiques présentent de nombreux effets secondaires et peuvent conduire à une accoutumance. L’une des approches impliquerait le ciblage des récepteurs mélatoninergiques afin de resynchroniser les rythmes circadiens qui sont perturbés dans certaines pathologies du système nerveux central, notamment la dépression. La conception de ligands non monoaminergiques et possédant des propriétés chronobiotiques constituerait une stratégie prometteuse.L’agomélatine (Valdoxan®) issue d’une collaboration entre le laboratoire de chimie thérapeutique (EA4481 - GRIIOT) et les laboratoires Servier est commercialisée depuis 2009 pour le traitement de la dépression majeure. Ce bioisoster naphtalénique de la mélatonine possède un mécanisme d’action innovant. Elle se distingue par ses propriétés agoniste non sélectif des récepteurs mélatoninergiques MT1 et MT2 et antagoniste des récepteurs 5-HT2c.L’objectif de ce travail réside dans la conception et la synthèse de nouveaux ligands successeurs de l’agomélatine présentant un profil pharmacologique et pharmacocinétique amélioré. Différentes pharmacomodulations ont été réalisées sur l’agomélatine. Les stratégies de «Drug Design» notamment le principe de bioisostérie ont été appliquées, nous permettant ainsi la synthèse de nouvelles familles de composés présentant des profils pharmacologiques intéressants
Nowadays, depression related to a deficit in nonoaminergic neurotransmitters, is the most frequent mental illness. Available antidepressive drugs acting through monoamnergic mechanisms possess a lot of side effects and can lead to an addiction. One approach involves targeting melatoninergic receptors to resynchronize circadian rhythms, which are known to be perturbed in some pathology related to nervous central system as depression. So conception of non-monoaminergic ligands with chronobiotic properties would constitute a promising strategy.Agomelatine (Valdoxan®) a novel antidepressant developed by Servier and our laboratory (EA4481 - GRIIOT) was granted marketing authorization in 2009 for the treatment of major depressive disorder. This naphthalen analogous of melatonin possess an innovative mechanism. It acts as a non selective melatoninergic MT1/MT2 receptors agonist and a serotonin 5-HT2c receptor antagonist.The aim of this work is to design and synthesize new potential successors of agomelatine with an improved pharmacological and pharmacokinetic profile. Drug Design strategies such as bioisosterism were applied to allow the elaboration of new series of compounds with interesting pharmacological profiles

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Shirvani, Hamasseh. "Export régulé des récepteurs couplés aux protéines G depuis des compartiments de biosynthèse vers la membrane plasmique." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T053.

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Abstract:

Les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG), la plus grande famille de récepteurs membranaires, sont impliqués dans presque toutes les grandes fonctions physiologiques de l'organisme. Le nombre de ces récepteurs à la surface cellulaire au moment de la stimulation représente un paramètre essentiel de leur réponse fonctionnelle. Les travaux présentés dans ce manuscrit étudient les mécanismes qui contrôlent l'adressage vers la membrane plasmique de deux récepteurs en particulier, le récepteur de chimiokine CCR5 et le récepteur métabotropique GBR1 de l'acide gamma amiobutyrique (GABA), pour lesquels l'adressage vers la surface constitue une régulation essentielle de leurs fonctions physiologiques. Nous avons pu caractériser une famille de protéines ubiquitaires, les PRAF (de Prenylated Rab Acceptor Protein), comptant trois isoformes, qui contribuent à la rétention intracellulaire de CCR5 et GBR1. En particulier, l'adressage de surface de CCR5 et GBR1 depuis le RE est contrôlé négativement par PRAF2. En ce qui concerne CCR5, nous avons découvert qu'il était majoritairement (à 90%) retenu à l'état fonctionnel dans le réticulum endoplasmique (RE) et le Golgi. Nous avons montré que la libération de CCR5 à partir du RE était favorisée par son association avec CD4, qui fonctionne, dans ce contexte, comme une protéine d'escorte. CD4 induirait un changement conformationnel permettant de lever la rétention de CCR5 par PRAF2 dans le RE. L'adressage de GBR1 à la surface nécessite l'interaction avec l'isoforme GBR2 du récepteur. Comme PRAF2, GBR2 interagit avec la queue C-terminale de GBR1, masquant ainsi le signal de rétention de type RXR qui représente une interface d'interaction entre GBR1 et PRAF2. PRAF2 est un "gate-keeper", un contrôleur négatif de l'export de GB1. L'interaction de GB1-PRAF2 représente un nouveau mécanisme de contrôle de la fonction du GBR, fondée sur l'équilibre stoechiométrique entre PRAF2 et GBR2. Nos suggèrent que tous les membres de la famille des PRAFs, pourraient fonctionner comme des gate-keepers dans les compartiments où ils sont exprimés et que leur niveau d'expression est inversement proportionnel à la densité des récepteurs en surface. Nos travaux ont permis de montrer que ce nouveau mécanisme de régulation de l'expression de surface des RCPG peut être perturbé dans des conditions pathologiques comme la dépression
G-protein coupled receptors (GPCRs) are the largest family of membrane receptors and are involved in major physiological functions. The number of these receptors on the cell surface at the time of stimulation is crucial for their functional response. Our work focuses on the mechanisms that control the targeting to the plasma membrane of two GPCRs, the chemokine CCR5 receptor and the -aminobutiric acid (GABA) metabotropic receptor (GB1). Here, we demonstrate how a family of ubiquitus proteins, PRAFs (Prenylated Rab Acceptor of protein), contribute to the intracellular retention of CCR5 and GB1. In particular, the membrane export of CCR5 and GB1 from the endoplasmic reticulum (ER) is negatively controlled by PRAF2. For CCR5, we report that the majority of fully functional CCR5 (90%) is maintained within intracellular compartments (ER and Golgi). We show that the release of CCR5 from the ER is enhanced by its association with CD4, which functions in this context, as an escort protein. CD4 induces a conformational change in the CCR5/praf2 complex, thereby liberating CCR5 from PRAF2 and promoting its trafficking to the plasma membrane. As for GB1, its cell surface translocation requires the interaction with the GB2 receptor isoform. GB2 interacts with the C-terminal tail of GB1, masking an RXR retention signal that represents a new mechanisms for controlling the function of GABA receptors based on the stoichiometric balance between PRAF2 and GB2. PRAF2 is therefore considered a "gatekeeper," a negative controller for export of GB1. In conclusion, our data suggest that specific PRAF family members work as "gatekeepers" within the compartments where they are expressed and therefore could act as regulators of GPCR export. This mechanism of GPCR regulation can be perturbed in pathologic conditions since PRAF2 itself is regulated in vivo in depression-like states in mice

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Achour, Lamia. "Contrôle de l'expression à la surface cellulaire du récepteur de chimiokine CCR5." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T011.

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Abstract:

CCR5 est un récepteur de chimiokine appartenant à la famille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG), jouant un rôle important dans l'entrée du VIH, en association avec la glycoprotéine CD4. Nous avons pu démontrer que la grande majorité de CCR5 (90%) était maintenue à l'état fonctionnel dans les compartiments intracellulaires des cellules immunitaires humaines et des fibroblastes transfectés. CCR5 est particulièrement localisé dans le réticulum endoplasmique (RE) et le Golgi. Les mécanismes moléculaires qui régulent l'export de CCR5 en provenance des compartiments intracellulaires s'avèrent différents dans le RE et le Golgi. La progression de CCR5 hors du RE est lente, et favorisée par son association avec CD4, qui fonctionne comme une protéine d'escorte et régule l'adressage de CCR5 vers la membrane plasmique. D'un point de vue mécanistique, CD4 induirait un changement conformationnel de CCR5, permettant de lever sa rétention dans le RE par PRAF2, une protéine résidente de ce compartiment. Dans le Golgi, la libération de CCR5 est beaucoup plus rapide (5-10min) et contrôlée par des signaux extracellulaires initiés par l'adhésion cellulaire. La rétention dans les compartiments intracellulaires de CCR5 et, plus généralement, des RCPG, pourrait constituer un système d'adaptation permettant de maintenir une réponse physiologique prolongée, dans des contextes cellulaires qui requièrent une réactivité de réponse soutenue, comme au cours du chimiotactisme des leucocytes, via le remplacement progressif des récepteurs de surface désensibilisés et internalisés
CCR5 a chemokine receptor belonging to the G protein-coupled receptor (GPCR) family, plays a major role in HIV entry, by forming the viral receptor in association with the glycoprotein CD4. We report that the vast majority of fully functional CCR5 (=90%) is maintained within the intracellular compartments of human immune cells and of transfected fibroblasts. Intracellular CCR5 is mostly localized in the endoplasmic reticulum (ER) and the Golgi apparatus. The molecular mechanisms which control the export of CCR5 from the intracellular compartments are different in the ER and the Golgi. In the ER, the progression of CCR5 is slow and depends on its association with CD4 which functions as an escort protein and controls the CCR5 exit. Association with CD4 would induce a conformational change of CCR5, which would release the receptor from its retention in the ER by a resident protein, PRAF2. In the Golgi, the release of CCR5 is faster (5-10min) and is controlled by extracellular signals promoted by cell adhesion. The intracellular retention of CCR5 and, more generally, of GPCRs could represent an adaptive mechanism to maintain a prolonged physiological response. In particular contexts, which require sustained receptor response such as leukocyte chemotaxis, intracellular receptors would allow the permanent replacement of cell surface desensitized and internalized receptors

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Laurent, Cyril. "Conséquences de l'invalidation génétique et pharmacologique des récepteurs adénosinergiques A2A dans un modèle de pathologie Tau. Relation avec les aspects neuro-inflammatoires." Thesis, Lille 2, 2013. http://www.theses.fr/2013LIL2S041/document.

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Abstract:

Le vieillissement de la population est à l’origine de l’augmentation du nombre de personnes souffrant de démences, dont la plus fréquente est la maladie d’Alzheimer (MA). La MA est une maladie neurodégénérative incurable caractérisée par une atteinte progressive des fonctions cognitives, en premier lieu les fonctions mnésiques. Son diagnostic formel repose sur l’examen post-mortem du cerveau des patients. Il est basé sur la présence conjointe de deux lésions caractéristiques: des dépôts extracellulaires majoritairement composés de peptide amyloïde fibrillaire, résultat d’un clivage anormal du précurseur transmembranaire APP, et d’une dégénérescence neurofibrillaire ou pathologie tau, caractérisée par l’accumulation intra-neuronale de protéines tau hyper- et anormalement phosphorylées. Parallèlement à ces deux lésions se développe une réponse neuro-inflammatoire, notamment caractérisée par une augmentation du nombre et de l’activité des cellules microgliales et astrocytaires. Bien que les relations entre la pathologie amyloïde et la mise en place des processus neuro-inflammatoires aient fait l’objet d’intenses investigations, peu d’études se sont intéressés aux liens réciproques existants entre ces processus et la pathologie tau. A travers l’utilisation d’un modèle murin transgénique mimant le versant tau de la MA, la lignée THY-Tau22, un des objectifs de ma thèse a consisté à caractériser les différents aspects de leur réponse neuro-inflammatoire. Ces souris développent une pathologie tau hippocampique progressive associée à des altérations mnésiques. Les études transcriptomiques, biochimiques et histologiques réalisées ont mis en évidence une augmentation progressive de l’expression hippocampique de marqueurs de l’immunité innée mais également adaptative chez les souris THY-Tau22. Nous observons particulièrement l’établissement progressif de réactions microgliales et astrocytaires, une augmentation des niveaux de différentes chimiokines (CCL3, CCL4 et CCL5) conjointement à une infiltration parenchymateuse de lymphocytes T, en l’absence d’altération majeure de l’intégrité de la barrière hémato-encéphalique. Ces résultats mettent en exergue une corrélation entre le développement de troubles mnésiques et de la pathologie Tau hippocampique d’une part, et la présence d’une réponse neuro-inflammatoire d’autre part. La MA est une maladie multifactorielle dont la survenue est modulée par différents facteurs génétiques et environnementaux. Parmi les facteurs environnementaux mis en évidence par les études épidémiologiques, la consommation de caféine réduit notablement le risque de développer la MA. La caféine est une substance psychoactive dont les effets sont essentiellement médiés par le blocage des récepteurs adénosinergiques A1 et A2A, ces derniers étant particulièrement décrits pour moduler les processus neuroinflammatoires. Le rôle de ces récepteurs étant mal connus dans le contexte de la MA, et inconnu concernant ses relations à la pathologie Tau, la seconde partie de ma thèse a consisté à évaluer les effets de la caféine mais également d’un blocage spécifique des récepteurs A2A, par des approches génétiques et pharmacologiques, vis-à-vis des altérations comportementales, de la pathologie tau et de la réponse neuro-inflammatoire dans le modèle THY-Tau22. Les résultats obtenus démontrent que la caféine et le blocage spécifique des récepteurs A2A exercent des effets bénéfiques dans ce modèle de Tauopathie, avec une prévention des altérations mnésiques, une réduction de l’hyperphosphorylation de Tau et des effets anti-inflammatoires. Ces modifications sont associées à des effets bénéfiques en terme neurochimique et synaptique. L’ensemble de ces résultats démontrent pour la première fois un effet bénéfique de la caféine et du blocage des récepteurs A2A dans un modèle murin de tauopathie et suggèrent qu’un ciblage thérapeutique de ces récepteurs puisse être d’intérêt dans la MA
Population ageing is a major risk factor for dementia, the most prevalent being Alzheimer disease (AD). AD is a neurodegenerative disorder characterized by a progressive cognitive decline, notably impacting memory functions. Its formal diagnosis is based on the post-mortem examination of AD patients’ brains and defined by the combination of two lesions: extracellular deposition of fibrillar amyloid peptide, resulting from the abnormal cleavage of transmembrane APP precursor, and neurofibrillary tangles, characterized by intraneuronal accumulation of hyper- and abnormal phosphorylated tau protein (Tau pathology). Besides these two lesions hallmarks, neuro-inflammatory processes, mainly defined by an increase of the number and the activity of microglial and astroglial cells, are considered as a third pathological component. Although the relationships between amyloid pathology and neuro-inflammatory processes had been the subject of intense investigations, few studies has been achieved with regards to tau pathology. As a first aim of this work, neuro-inflammatory processes associated with Tau pathology has been evaluated using a transgenic mouse model mimicking AD-like Tau pathology, THY-Tau22 strain.. These mice overexpress a mutated human tau protein under the control of a neuronal promoter and progressively hippocampal tau pathology associated to memory decline. Transcriptomic, biochemical and histological evaluations revealed a progressive increase several markers of both innate and adaptive immunity in the hippocampus of THY-Tau22 transgenic mice. We notably observed a progressive rise of microglial and astrogliale reactions, the overproduction of many chemokines (CCL3, CCL4, CCL5) in association with a parenchymatous infiltration of T cells, without major disruption of blood brain barrier (BBB). These results highlight a correlation between the establishments of memory alterations and hippocampal tau pathology on the one hand, and the occurrence of a neuro-inflammatory response on the other hand. AD is a multifactorial disorder whose occurrence depends on different genetic and environmental factors. Among the latter, epidemiological studies have shown that caffeine consumption significantly reduces the risk to develop AD. Caffeine is a psychoactive drug, whose effects are mainly ascribed to the blockade of A1 and A2A adenosinergic receptors, the latter beeing known to modulate neuro-inflammatory processes. The role of A2A receptors in AD is far from understood, and relationship with tau pathology currently unknown. The second part of my PhD aimed at evaluating effects of caffeine but also of a specific A2AR blockade, using genetic and pharmacological means, towards behavioural alterations, tau pathology and neuro-inflammatory processes in THY-Tau22 model. Results obtained demonstrate that caffeine and specific A2AR blockade lead to beneficial effects towards memory dysfunction, tau hyperphosphorylation and hippocampal neuro-inflammation. These improvements are associated with beneficial neurochemical and electrophysiological changes. Theses results demonstrate for the first time a beneficial effect of caffeine and A2A receptor blockade in a mouse model of tauopathy and support that therapeutic targeting of A2A receptors could be of interest in AD

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Mary, Aurélien. "Influence de la vitamine D sur l'expression du récepteur sensible au calcium : implication dans les mécanismes des calcifications cardiovasculaires au cours de l'insuffisance rénale chronique." Amiens, 2014. http://www.theses.fr/2014AMIED006.

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Abstract:

La Maladie Rénale Chronique (MRC) est caractérisée par une destruction progressive de la fonction rénale qui s’accompagne d’une mortalité cardiovasculaire multipliée par quatre dès le stade modéré. Dans les stades sévères, il apparaît une hyperparathyroïdie secondaire qui se caractérise par un déficit en calcitriol (1,25(OH)2D3) et par une calcification vasculaire (CV) accrue. Récemment, au sein de notre équipe de recherche, il a été mis en évidence que l’activation et l’expression du Récepteur Sensible au Calcium (CaSR) au niveau vasculaire permettait de limiter la CV. L’existence d’éléments de réponse à la vitamine D dans les deux promoteurs du gène du CaSR, nous a fait émettre l’hypothèse que le déficit en vitamine D dans la MRC pouvait réguler l’expression du CaSR, et de cette façon, aggraver les CV et leurs conséquences en terme de morbi-mortalité. Un premier objectif de ce travail était d’évaluer in vitro l’existence et les conséquences de la régulation du CaSR par la 1,25(OH)2D3 au niveau des cellules musculaires lisses vasculaires humaines et des monocytes. Le deuxième objectif était de savoir si la régulation du CaSR par la 1,25(OH)2D pouvait être observée cliniquement, et en particulier dans la MRC. Dans une première étude in vitro, nous montrons que la 1,25(OH)2D3 favorise l’expression du CaSR au niveau transcriptionnel et traductionnel. L'exposition des cellules à la 1,25(OH)2D3 entraîne également une mise à disposition membranaire du CaSR, et cela dans une marge d’action étroite centrée autour de la concentration de 1 nmol/L. L’utilisation de siRNA nous a permis de déterminer que ce mécanisme était VDR dépendant. Nos résultats démontrent également qu'en condition procalcifiante (5 mmol/L Ca2+), la 1,25(OH)2D3 exerce un effet anti-calcifiant qui dépend du contrôle de l'expression du CaSR. A l'inverse, l'exposition des cellules à des concentrations croissantes de 25(OH)D3 n'exerce aucun effet sur l'expression du CaSR, ne permettant pas de protéger les cellules du phénomène de minéralisation. Dans ce contexte, nous avons émis l'hypothèse que l'évaluation et le suivi de l'expression du CaSR de monocytes isolés du sang périphérique pourraient refléter des effets de l'organisme sur l'expression du CaSR. Un suivi longitudinal de l'expression du CaSR de monocytes isolés chez des individus sains a donc été réalisé, avant et après supplémentation en vitamine D native. Nous n'avons pas été en mesure d'observer, lors de cette investigation clinique, d'effet significatif de la vitamine D concernant le contrôle de l’expression du CaSR monocytaire. Confirmant ce résultat, chez les patients en MRC, l’expression du CaSR n’est pas corrélée aux concentrations circulantes de 1,25(OH)2D ou de 25(OH)D. L’expression membranaire est cependant inversement corrélée avec le débit de filtration glomérulaire, démontrant que la MRC perturbe l'expression du CaSR dès les phases précoces de la maladie. Des travaux complémentaires sont nécessaires afin de préciser le rôle du CaSR dans la survenue de CV et d’étudier l'intérêt du suivi de sa modulation dans la prise en charge des patients atteints de MRC.

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Ettahar, Asma. "Rôle de la nouvelle ubiquitine ligase PHRF1 dans la transduction des effets du TGF-β." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T043.

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Abstract:

Le TGF-β est une cytokine multifonctionnelle dont l'un des effet principaux est l'inhibition de la prolifération cellulaire qui joue un rôle important dans la suppression de la tumorigénicité. La signalisation induite par le TGF-β est soumise à une régulation négative par le corépresseur transcriptionnel TGIF. Ce dernier a son tour a besoin d'être régulé. Pour cela, la cellule met en place des mécanismes de régulation négative parmi lesquels figure le système ubiquitine-protéasome. L'ubiquitination joue un rôle crucial dans la transduction de la signalisation du TGF-β. Nous avons identifié par le système du double-hybride de nouveaux partenaires du TGIF dont la nouvelle ubiquitine ligase E3 à domaine RING fïnger PHRF1 (PHD and RING Finger 1). L'ubiquitine ligase PHRF1 amplifie les effets du TGF-β sur la transcription et sur l'inhibition de la croissance cellulaire en agissant à deux niveaux. Dans un premier temps, PHRF1 ubiquitine TGIF et entraîne sa dégradation par le protéasome. Suite à cette dégradation, PHRF1 induit la redistribution de cPML dans le cytoplasme ou il participe à la formation du complexe Smad2/TβRI/SARA. Le gène PHRF1 est localisé dans le locus 11p15. 5, qui est souvent altéré dans les cancers du sein. En effet, nous avons démontré que la surexpression du PHRF1 peut supprimer la transformation tumorale dans des lignées du cancer du sein. Ces résultats nous permettent de proposer PHRF1 comme suppresseur de tumeurs des cancers du sein dont la dérégulation contribue à la perte des effets cytostatiques du TGF-β et par conséquent a la progression tumorale
The TGF-β is an antiproliferative agent that plays an important role in suppressing tumorigenicity. The homeodomain protein TGIF is well known as a negative regulator of the TGF-β signaling. TGIF is regulated by the ubiquitin-proteasom system. Ubiquitination plays an important role in the transduction of TGF-β signaling. Using a two-hybrid screen, we identified the RING finger protein PHRF1 (PHD and RING Finger 1) as a novel ubiquitin ligase that targets TGIF for degradation through the proteasome pathway, and thereby promoting the initiation of TGF-β signaling by enabling cPML relocalization in the cytoplasm, where it associates with SARA and coordinates the access of Smad2 for phosphorylation by the activated TGF-β receptor. We show that over-expression of PHRF1 may disable the tumoral development in the breast cancer cell lines. Indeed, the PHRF1 gene, which maps to a tumor suppressor locus at 11p15. 5, is somatically deleted or silenced in a significant proportion of human breast cancer. Therefore, our findings on the mode of action of PHRF1 provide new and important insights into the role of the TGF-β tumor suppressor network in malignant transformation

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Caudrillier, Axelle. "Effets du calcium extracellulaire et du récepteur sensible au calcium dans les mécanismes impliquant les CMLh dans l'athérogenèse." Amiens, 2009. http://www.theses.fr/2009AMIED012.

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Sous l’influence de facteurs environnementaux, durant l’athérogenèse, les CML migrent et se transdifférencient en cellules vasculaires calcifiantes (CVC). Une meilleure compréhension des mécanismes cellulaires et moléculaires régulant la migration et la transdifférenciation des CML, permettrait l’avènement de nouvelles stratégies thérapeutiques visant à réduire ou bloquer le développement des calcifications vasculaires. Dans ce travail nous avons voulu définir les effets du Ca2+o et du CaR dans les phénomènes biologiques impliquant les CMLh dans l’athérogenèse. Nous montrons que le Ca2+o inhibe de façon dose dépendante la migration des CMLh. Ce mécanisme est dépendant de la stimulation du CaR et des voies de signalisation PLCß et ERK. Nos résultats indiquent que l’augmentation en Ca2+o induit la transdifférenciation des CML en CVC, marquée par l’augmentation de synthèse de collagène de type I et de protéoglycanes, in vitro et ex vivo. L’utilisation d’un SiRNA dirigé contre le CaR et d’un calcimimétique (NPS R-568) a permis de démontrer que ce mécanisme est indépendant du CaR, et que la stimulation du CaR protégerait les cellules face à la calcification. Ainsi, le CaR semble stabiliser le phénotype contractile, marqué par l’α-SM actine, comme le démontre l’association de leur expression. En conclusion, suite à la stimulation du CaR, le Ca2+o inhibe la migration des CML et leur transdifférenciation en CVC, freinant le processus de minéralisation vasculaire. De plus, le Ca2+o exercerait un effet prominéralisant, indépendant quant à lui de l’activation du CaR.

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Molla, Herman Anahi. "Trafic intracellulaire et ciliogénèse." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T020.

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Le cil primaire (CP) est présent dans presque la totalité de cellules des vertébrés, et des défauts de son assemblage/fonctionnement sont associés à des nombreuses ciliopathies. Le CP semble fonctionner comme une antenne mécanosensorielle dû à la présence de récepteurs dans la membrane ciliaire, comme les récepteurs couplés aux protéines G (RCPGs). Les beta-arrestines (βarrs) 1 et 2 sont connues pour réguler les RCPGs membranaires, ce qui suggère qu'elles pourraient également réguler les RCPGs ciliaires. Nous avons observé que la parr2 est localisée au cil primaire de façon spécifique et qu'elle interagit avec Kif3A et 14-3-3, deux protéines importantes pour la ciliogenèse, suggérant un possible rôle directe sur la formation du cil. En effet, la parr2 joue un rôle sur la ciliogenèse, cependant, ceci semble être indirecte car son absence entraîne une surproliferation cellulaire, empêchant la formation du cil. Nous avons constaté que le cil est invaginé dans une poche ciliaire qui peut être transitoire ou permanente selon le type cellulaire d'où bourgeonnent de puits couverts de clathrine, ce qui nous a invité à étudier le rôle de complexes adaptateurs (AP) dans la ciliogenèse, observant que AP1 serait important pour la morphologie/orientation du cil. Ainsi, il est possible d'imaginer que cette poche ciliaire serve de plateforme d'arrimage de vésicules provenant du Golgi ainsi que pour de processus d'endocytose qui pourraient réguler des composant ciliaires
The primary cilium (PC) is present in almost all vertebrate cells and defects in its assembly/function are associated with a huge number of ciliopathies. PC seems to function as a mecanosensory antenna since is enriched in receptors, like the G-protein coupled receptors (RCPGs). Beta-arrestines (βarrs) 1 and 2 regulate GPCR at the cell membrane, suggesting that they could also play a role in cilia-associated GPCRs. We found that βarr2 is specifically localised to PC and that it interacts with Kif3A and 14-3-3, two proteins involved in ciliogenesis, suggesting a possible function of βarr2 in ciliogenesis. Indeed, βarr2 absence impedes PC formation. Nevertheless, this seems to be an indirect effect due to the fact that the absence of βarr2 leads to a cell over proliferation, preventing cilia formation. We also observed that PC is invaginated in what we call the ciliary pocket, which can be transitory or permanent, depending on the cell type, from which clathrin coated pits bud forming clathrine coated vesicles. This led us to study the role of clathrin adaptor complexes (AP) in ciliogenesis, and we could observe that API would be important for the morphology/orientation of PC. Thus, it is possible to imagine that the ciliary pocket serves as a membrane platteform for the docking of Golgi-coming vesicles or for endocytic process which could control ciliary components

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Chantôme, Aurélie. "Régulation de la NO synthase inductible dans des cellules épithéliales mammaires murines par des récepteurs à domaine TIR." Dijon, 2004. http://www.theses.fr/2004DIJOMU03.

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Les cellules EMT-6J produisent 3 fois plus de NO que les cellules EMT-6H en réponse à l'IL-1β ou aux LPS, effet corrélé avec l'activation de NF-kB. La dégradation des lkB, le transport nucléo-cytoplasmique de NF-kB ainsi que son activité de liaison à l'ADN sont similaires dans les 2 clones. En revanche, la phosphorylation des résidus sérines de p65 est observée dans les cellules EMT-6J et non dans les cellules EMT-6H. Cette phosphorylation est inhibée par un inhibiteur de l'activité CKII. La déplétion en CKII diminue l'activité transcriptionnelle de NF-kB ainsi que la transcription du gène NOSII dans les cellules EMT-6J pour revenir au niveau observé dans les cellules EMT-6H traitées dans les même conditions. Ces résultats démontrent que la phosphorylation de p65 médiée par la CKII potentialise l'activité du facteur in vivo. Cette modification post-traductionnelle de p65 permet d'augmenter la transcription du gène NOSII dans les cellules tumorales stimulées par de l'IL-1β ou des LPS.

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Daveu, Cyril. "Etudes des relations structure-activité et pharmacomodulation de ligands sérotoninergiques." Caen, 2000. http://www.theses.fr/2000CAEN4044.

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Morel, Marion. "Les récepteurs venus kinase (VKRs) de schistosoma mansoni : étude des voies de signalisation de SmVKR1 et rôle de la protéine adaptatrice SmShb." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S003/document.

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Abstract:

La schistosomiase est une parasitose causée par un ver plat trématode du genre Schistosoma. Cette pathologie, responsable de près de 300 000 décès par an, est essentiellement due à la forte fécondité des vers et à l’accumulation des œufs dans les tissus de l’hôte. Pour lutter contre la pathologie, un seul traitement efficace, le Praziquantel, est utilisé en masse dans les régions endémiques. Afin de parer à l’apparition de résistances au Praziquantel, le développement de molécules régulant la ponte du parasite fait partie des solutions alternatives envisagées.Les récepteurs Venus Kinase (VKRs) forment une famille de récepteurs tyrosine kinase (RTKs) spécifique des invertébrés découverte au laboratoire chez le parasite Schistosoma mansoni. Les VKRs possèdent une structure atypique associant un domaine extracellulaire de fixation au ligand de type Venus Flytrap (VFT) associé à un domaine Tyrosine Kinase (TK) intracellulaire. Deux VKRs sont exprimés chez S. mansoni : SmVKR1 et SmVKR2. Ces deux récepteurs activent les voies de signalisation ERK, Akt et JNK et jouent un rôle dans la reproduction du parasite.Du fait de leur absence dans le génome de l’Homme, et de leur rôle potentiel dans la modulation de la reproduction et du développement des parasites, les SmVKRs constituent des cibles intéressantes pour lutter contre la schistosomiase.La première partie de mon travail de thèse expose les données acquises quant au rôle des RTKs dans la régulation de la reproduction des schistosomes. Nous avons pu montrer que la conservation des domaines catalytiques des différents RTKs ouvre la voie à l’élaboration de molécules pouvant inhiber simultanément plusieurs RTKs de schistosomes afin de lutter contre la schistosomiase en agissant sur la ponte du parasite.La seconde partie de mon travail met en évidence qu’en plus d’agir directement sur l’activité des RTKs, il est possible d’inhiber les voies qu’ils activent. En effet, un criblage d’inhibiteurs de protéines kinases a permis d’identifier les composants de la voie Akt comme cibles potentielles pour lutter contre la schistosomiase : des doses très faibles (de l’ordre du nM) de certains inhibiteurs d’Akt sont capables d’inhiber l’appariement des schistosomes et la ponte.Dans la dernière partie, nous montrons que la protéine adaptatrice SmShb interagit spécifiquement avec SmVKR1 phosphorylé. Cette interaction se fait par la liaison du domaine SH2 de SmShb sur une Tyrosine phosphorylée spécifique, située dans la région juxtamembranaire du récepteur (pY979). La formation de ce complexe induit la phosphorylation de SmShb et dirige le signal de SmVKR1 spécifiquement vers la voie JNK. Des expériences d’hybridation in situ ont mis en évidence une colocalisation des transcrits de SmShb avec ceux de Smvkr1 au niveau des organes reproducteurs des vers adultes, notamment au niveau des ovocytes matures et des testicules. Le knock-down de SmShb par ARN interférence conduit à une accumulation de spermatozoïdes dans les testicules des vers mâles. Parallèlement, un criblage par la technique du triple hybride, en utilisant SmShb phosphorylé par SmVKR1 comme appât, a permis l’identification de diverses protéines partenaires de SmShb. En raison des résultats précédents, notre attention s’est portée sur deux protéines partenaires pour lesquelles l’interaction avec SmShb a été confirmée. 1) La GTPase RhoU, qui possède des fonctions potentielles dans la signalisation JNK et sur la dynamique du cytosquelette. 2) Une chaine légère de la dynéine TcTex-1 possédant un rôle potentiel dans la motilité des spermatozoïdes. L’ensemble de ces résultats suggère un rôle de SmShb dans la régulation de l’activité de SmVKR1 en permettant la formation d’un complexe multi-protéique incluant des protéines impliquées dans l’organisation du cytosquelette
Schistosomiasis is a parasitic disease caused by trematode flatworm species belonging to the genus Schistosoma. Responsible for about 300,000 deaths per year, the disease is mainly due to the high fertility of the worms and to encystment of eggs in host tissues. In order to fight against schistosomiasis, a single drug (Praziquantel) is efficient and massively distributed in endemic areas. To deal with the emergence of resistance to Praziquantel, one alternative is to consider the design of molecules that target parasite reproduction.Venus Kinase Receptors (VKRs) constitute an invertebrate Receptor Tyrosine Kinase (RTK) family initially discovered in the parasite Schistosoma mansoni. VKRs are atypical RTKs formed by an extracellular Venus Fly Trap (VFT) ligand binding domain associated via a transmembrane domain with an intracellular tyrosine kinase (TK) domain. Two VKRs are expressed in S. mansoni: SmVKR1 and SmVKR2. They both activate Erk, Akt and JNK signaling pathways and act on the parasite reproduction.As they are absent from the human genome and as they have potential roles in the modulation of reproductive processes and development of parasites, SmVKRs appear as attractive targets to fight schistosomiasis.The first part of my thesis work sets known data concerning the role of RTKs in schistosome reproduction. Here, we show that the catalytic domains are conserved across various RTKs and we open the perspective to design drugs which could inhibit several RTKs at the same time to control egg laying by schistosomes.The second part of my work describes the importance of using an alternative strategy of inhibiting downstream partners of RTKs. By screening a kinase inhibitor library, we defined the Akt pathway components as potential targets to fight schistosomiasis. Nanomolar doses of Akt inhibitors can inhibit schistosome pairing and egg laying.In the last part, we present the specific interaction of the adaptor protein SmShb with the phosphorylated form of SmVKR1. This binding occurs between the SH2 domain of SmShb and a phosphotyrosine residue (pY979) located in the juxtamembrane region of the receptor. That interaction leads to the phosphorylation of SmShb and promotes the signal of SmVKR1 towards a JNK pathway. In situ hybridization experiments highlighted that SmShb and Smvkr1 transcripts were both located in mature oocytes and testes of adult worms. RNA interference experiments using double-stranded RNA targeting SmShb led to an accumulation of mature sperm in testes of male worms. Finally, a yeast three hybrid screening, using SmShb phosphorylated by SmVKR1 as prey, allowed us to identify various protein partners. Taking advantage of previous results, we focused on two partners and confirmed their interaction with SmShb. 1) RhoU GTPase which has potential functions in JNK signalling and cytoskeleton dynamic. 2) The dynein light chain TcTex-1, with potential role in sperm motility. Altogether, this results argue for a potential role of SmShb in the regulation of the SmVKR1 activity by forming a multiprotein complex including proteins with various roles in cytoskeleton reorganization

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Slama, Abdelhamid. "Étude comparée du récepteur des asialoglycoprotéines sur rat normal et diabétique : purification, biosynthèse et endocytose en présence ou non de monensine." Paris 11, 1990. http://www.theses.fr/1990PA114851.

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Abstract:

Le récepteur hépatique des asialoglycoprotéines ou HBP (hepatic binding protein) est caractérisé par sa capacité à reconnaître et à médier l'endocytose et la dégradation des agiologlycoprotéines. Sa capacité fonctionnelle est diminuée au cours du diabète insulinodépendant induit par la streptozotocine. Nous avons démontré que le diabète provoque l'inactivation d'environ 50% des récepteurs HBP. Leur purification par chromatographie d'immunoaffinité montre la présence connue de trois sous-unités : l'une majeure de 42 Kd et deux mineures de 49 et 54 Kd ; Il apparaît de plus une nouvelle et importante sous-unité de 38 Kd, présente mais en moindre quantité chez les rats normaux. L'étude de la biosynthèse du récepteur sur hépatocytes isolés montre que cette sous-unité correspond à un intermédiaire de biosynthèse. Sa persistance chez les diabétiques s'accompagne d'une diminution de la sous-unité majeure du récepteur. Au niveau fonctionnel, l'étude de l'endocytose par l'intermédiaire d'une vague synchrone de ligands met en évidence la présence de deux populations différentes de récepteurs caractérisées par leur cinétique d'internalisation : l'une est lente, l'autre rapide. La dissociation des complexes internalisés se fait également avec deux vitesses différentes. L'état diabétique provoque une diminution du nombre de récepteurs à internalisation rapide. Cette diminution se traduit par une faible dissociation des complexes internalisés. La Monensine ionophore carboxylique qui empêche l'acidification des vésicules intracellulaires provoque, aussi bien au niveau de la biosynthèse du récepteur que de ces capacités d'endocytose, des perturbations très proches de celles induites par le diabète. L'emploi de modulations soit in vivo comme le diabète soit in vitro comme la Monensine se révèlent donc comme des outils précieux pour mieux décrire et tenter d'approcher les régulations de fonctionnement du récepteur modèle qu'est le HBP.

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Lécuyer, Hervé. "Interaction de Neisseria meningitidis avec les cellules de l’hôte : mécanismes de franchissement des barrières oropharyngée et hémato-encéphalique." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T035.

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Abstract:

Neisseria meningitidis (Nm) ou méningocoque est une bactérie commensale de l’oropharynx de l’homme, colonisant de 10% à 30% de la population. Dans de très rares cas cette bactérie traverse l’oropharynx et envahit la circulation sanguine. Dans la microcirculation Nm est capable d’adhérer aux vaisseaux et de s’y développer en microcolonies à la surface cellulaire, puis de traverser la barrière hémato‐encéphalique (BHE) et d’envahir les méninges. La BHE repose pourtant sur un endothélium aux jonctions serrées propre à empêcher tout passage paracellulaire de microorganismes. Nous avons montré que la microcolonie de Nm recrute les protéines du complexe depolarité Par3/Par6/PKC et les protéines de jonctions adhérentes et jonctions serrées. Ce recrutement se fait au détriment des jonctions cellulaires existantes, celles‐ci sont déstabilisées et l’endothélium d’ordinaire imperméable est « ouvert », permettant un passage paracellulaire de la bactérie. Ce phénomène est la conséquence d’une voie de signalisation cellulaire déclenchée par l’interaction entre les pili, appendices filamenteux bactériens nécessaires à l’adhésion, et la cellule endothéliale. Le récepteur cellulaire impliqué dans cette signalisation a été identifié : il s’agit du récepteur β2‐adrénergique, qui est activé de façon biaisé par Nm vers une voie β‐arrestine dépendante. Le recrutement des protéines de jonction et l’ouverture de l’endothélium sont donc la conséquence de ce détournement de la voie β2‐adrénergique. Mais avant d’interagir avec la BHE, Nm doit avant tout traverser l’épithélium oropharyngé, composé d’une monocouche de cellules épithéliales là encore aux jonctions serrées. Nous avons montré en comparant les modèles épithéliaux et endothéliaux que le recrutement des composants des jonctions intercellulaires est un phénomène spécifique des cellules endothéliales. Le passage de l’épithélium n’est donc pas paracellulaire. Par ailleurs, la mise en jeu de la voie de signalisation β2‐adrénergique/β‐arrestine est également spécifique des cellules endothéliales. L’interaction du méningocoque avec les cellules épithéliales et endothéliales est donc fondamentalement différente selon le type cellulaire
Neisseria meningitidis (Nm, meningococcus) is a commensal of the human oropharynx that colonizes between 10% and 30% of a population. This bacteria is able to cross the epithelial barrier of the oropharynx, invading the bloodstream. Once in the bloodstream, Nm adheres to the endothelial cells, spreads as microcolonies on the apical surface of the host cells, and then is able to cross the blood brain barrier (BBB), invading the meninges. However the BBB is composed of a tight-junction formed endothelium which is supposed to prevent any paracellular crossing. We showed that the Nm microcolony recruits the components of the polarity complex Par3/Par6/PKC and the components of the intercellular junctions leading to a leakage of the existing cell-cell junctions and therefore opening a paracellular pathway to the subendothelium. This is the consequence of a cellular response triggered by the pili, filamentous bacterial structures allowing bacterial adhesion of capsulated strains onto host cells. We identified the cellular receptor hijacked by the bacteria : the β2-adrenergic receptor, which is biasedly activated toward a β-arrestin signalling pathway. The recruitment of the junctionnal components and the opening of the paracellular route are the consequences of the β2-adrenergic/β-arrestins signalling pathway. However, before reaching the blood circulation and latter the meninges, the meningococcus has to cross a first tight-junction based cellular barrier, the oropharynx epithelium. We showed here that Nm does not recruit the components of the cellular junctions when adhering onto epithelial cells. The paracellular route is therefore specific of the Nm/endothelial interaction. Moreover the β2-adrenergic/β-arrestins cellular response is a specific feature of the endothelial cells and is not found in the epithelial model. The cellular responses to Nm adhesion onto endothelial and epithelial cells are therefore strikingly different

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Philippart, François. "Résistance des macrophages alvéolaires à la tolérance aux agonistes des Toll-like receptors : implication et origine du microenvironnement cytokinique." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T041.

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Abstract:

La tolérance aux endotoxines et plus généralement aux agonistes des Toll-like receptors (TLR), des monocytes et macrophages est un phénomène correspondant à une modification de la réponse fonctionnelle (en particulier une altération de la production de cytokines proinflammatoires) au cours de stimulation itératives par ces agonistes, notamment le lipopolysaccharide (LPS). La tolérance est observée avec les monocytes ainsi que les macrophages de nombreux tissus (cavité péritonéale, rate, moelle osseuse), mais elle n’est pas retrouvée avec les macrophages alvéolaires (MA). Notre étude s’est intéressée aux particularités cellulaires et cytokiniques du microenvironnement pulmonaire pouvant participer à cette singularité fonctionnelle des MA. Nous avons confirmé l’absence de tolérance des MA tant ex vivo qu’in vitro. Alors qu’une homotolérance et une tolérance croisée est retrouvée in vitro avec les macrophages péritonéaux en réponse aux agonistes TLR2 (Pam3CSK4), TLR3 (poly I:C), TLR4 (LPS) et TLR9 (CpG), aucune tolérance n’est observée avec les MA. Au contraire, un phénomène de « priming » a été mis en évidence dans la majorité des situations de stimulation croisée à l’exception des stimulations par le LPS et CpG. L’inhibition systémique in vivo du granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) produit en grande quantité par les pneumocytes II (PCII), est responsable d’une modification de la seconde réponse des MA au LPS. De même la réponse des MA issus de souris déficientes pour le récepteur de l’interféron- (IFN-) ou l’inhibition de cette cytokine in vivo aboutit à des résultats semblables. L’étude de la réponse des MA issus de lignées de souris déficientes en différentes lignées leucocytaires (rag2-/-, rag2/c -/-, cd3 -/-, -/-, il-15 -/-, Jα18 -/-) nous permet de démontrer l’implication des cellules NK (NK) et des lymphocytes B (LB) dans la production de l’IFN- au niveau du microenvironnement pulmonaire. En conclusion, les MA sont résistants à la tolérance aux agonistes TLR. Cette singularité fonctionnelle est sous-tendue par la présence de GM-CSF (produit par les PCII) et d’IFN- (dont la production est sous la dépendance des NK et des LB) dans le microenvironnement alvéolaire
Monocytes and macrophages endotoxin tolerance, and more widely Toll-like receptors (TLR) agonists tolerance is a phenomenon corresponding to a modification of functional response of these cells (particularly an alteration of proinflammatory cytokines) during iterative stimulation by theses agonists, notably the lipopolysaccharide (LPS). Tolerance is observed with monocytes and macrophages from many tissue (peritoneal cavity, spleen, bone marrow), but is not detected with alveolar macrophages (AM). We investigated the cytokine and cell specificities of lung microenvironment possibly involved in that singular behavior of AM. We confirmed the absence of tolerization of AM either ex vivo, or in vitro. While an homotolérance and a cross-tolerance was observed in vitro with peritoneal macrophages in response to TLR2 (Pam3CSK4), TLR3 (poly I:C), TLR4 (LPS) and TLR9 (CpG) ligand, no such tolerance was observed with AM. In contrast, the majority of cross stimulations gave rise to a priming effect. In vivo systemic inhibition of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) (produce in large amounts by type II pneumocytes, IIPC) led to a modification of the second response of AM to LPS. Similarly, AM obtained from interferon-gamma (IFN-gamma) receptor KO mice, or after in vivo inhibition of this cytokine, allowed the observation of tolerance. The responses of AM isolated from different KO mice (rag2-/-, rag2/gammac -/-, cd3epsilon -/-, mu-/-, il-15 -/-, Jα18 -/-) lacking various leukocytes lineages led us to demonstrate the involvement of NK cells and B cells in the IFN-gamma production within the lung microenvironment. In summary, AM are resistant to tolerance to TLR agonists. This functional singularity is underlined by the presence of GM-CSF (produced by IIPC) and of IFN-gamma of which production is depending of NK and B cells) within lung microenvironment

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Grémiaux, Alexandre. "Sex-pheronome representation in the moth olfactory pathway : from data analysis to model." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T055.

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Abstract:

Le but de ce travail est d'identifier, quantifier et interpréter les transformations du signal de la phéromone sexuelle entre les neurones de 1er ordre et les neurones du 2nd ordre chez le papillon de nuit A. Ipsilon. D'abord nous avons analysé statistiquement les enregistrements de neurones récepteurs olfactifs (NRO, 1er ordre) stimulés avec différentes doses du composé majoritaire de la phéromone sexuelle. Cela a permis de reconstruire le signal de projection (NP, 2nd ordre) stimulés de la même façon. Puis nous avons décrit la transformation du signal des NRO aux NP en termes de taux de décharge et de latence des réponses. Enfin, nous avons modélisé le réseau neural connectant NRO et NP et qui rend compte des transformations observées. De plus, nous avons contribué à une revue des modèles de chimio-transduction dans les NRO et écrit une autre revue sur l'intégration d'information dans les deux premiers niveaux du système olfactif
This work aims at identifying, quantifying and interpreting the transformations from first- t second-order sensory neurons of the sex pheromone signal in the moth Agrotis ipsilon. First, we analysed statistically single-unit electrophysiological recordings from olfactory receptor neurons (ORNs, first order) stimulated with different doses of the major compound of the sex pheromone blend, which allowed us to reconstruct the sex pheronome input to the olfactory system. Second, we did the same analysis on projection neurons (PNs, second order) stimulated in the same way. Third, we described the signal transformation from ORNs to PNs in terms of firing rates and response latencies. Fourth, we developed a model of the neural network connecting ORNs and PNs accounting for the observed transformations. In addition, we contributed to a review summarizing the chemotransduction models in ORNs another review on information processing in two first layers of the olfactory system

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Gil, Sophie. "Régulation de l'endocytose des asialoglycoprotéines médiée par une lectine transmembranaire de l'hépatocyte : étude sur hépatocytes de rat à l'aide d'une pathologie in vivo (le diabète insulino-dépendant) et de drogues in vitro (la monensine et la vasopressine)." Paris 11, 1992. http://www.theses.fr/1992PA114809.

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Mbika-Binzangi, Jean-Pierre. "Etude du rôle de la sarcolectine dans le développement tissulaire et le système immunitaire." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05S008.

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Abstract:

La sarcolectine (SCL) a été isolée pour la première fois en 1968. C’est une protéine de 55 kDa composée de 469 acides aminés. Elle fut d’abord appelée TAI (Tissue Antagonist of Interferon) parce qu’elle lève l’activité antivirale établie de l’interféron. La sarcolectine se trouve en quantité anormalement élevée dans beaucoup des tumeurs et outre l’inhibition de l’activité antivirale établie de l’interféron, elle se fixe sur de nombreux sucres et maintient en culture des lignées cellulaires dans un milieu exempt de sérum de veau fœtal. La sarcolectine est donc un facteur de croissance qui active l’ADN cellulaire et induit la prolifération cellulaire. Dans ce travail, nous avons exploré le rôle qu’elle peut jouer dans le système immunitaire humain. Le traitement de 30 échantillons de cellules mononucléaires de sang périphérique avec la SCL montre que certains répondent faiblement et d’ autres fortement. Le pic d’activation qui survient entre 6 et 7 jours de culture de ces cellules nécessite la présence des monocytes/macrophages car en leur absence les lymphocytes T ne prolifèrent pas. La SCL augmente aussi l’expression membranaire du récepteur de l’IL-2 (CD25), du récepteur CD28 de co-stimulation des lymphocytes T4, et active les lymphocytes T4 mémoires de phénotype CD3+CD4+CD45RO+. Cette activation du récepteur CD25 de l’IL-2 ne s’accompagne pas de la sécrétion de l’IL-2 dans le milieu de culture. Le traitement des cellules mononucléaires du sang périphérique avec la SCL et les anticorps anti-CD3 et anti-CD28 montre une inhibition totale ou partielle de prolifération des lymphocytes T. Nous avons aussi constaté que la SCL est un bon inducteur des cytokines pro et anti-inflammatoires. Elle induit aussi l’augmentation des ARNm qui codent pour l’IFN- et l’IFN-, ainsi que la sécrétion de ces cytokines dans le milieu de culture des cellules mononucléaires de sang périphérique. Cette production des IFN dans le milieu de culture est précoce quand les cellules sont activées en présence de l’IL-2 exogène. ’autre part, nous avons aussi établi que la SCL active les récepteurs de la réponse immunitaire innée présents à la surface membranaire des cellules du système immunitaire, plus spécialement les récepteurs de type Toll ou TLRs et en l’occurrence TLR-3 et TLR-9. TLR-3 reconnaît les dsRNA viraux, tandis que TLR-9 reconnaît les motifs CpG non méthylés des ADN bactériens et viraux. Le traitement prolongé des cellules mononucléaires de sang périphérique montre également la sécrétion de novo de la SCL qui agit en feed-back contre l’interféron produit dans le milieu de culture, formant une boucle d’activation/inhibition du système immunitaire. En résumé, la SCL peut être considérée comme un immunomodulateur qui stimule les cellules immunitaires, active les TLRs 3 et 9 et produit des cytokines pro et anti-inflammatoires
Sarcolectin (SOL) is a 55 kDa protein with 469 aminoacids, isolated in the first time in 1968. Abnormally elevated in most tumors, SCL is a cell growth factor which activates cell DNA, induces cell proliferation, and antagonises antiviral effect of interferon. In this issue, we explored the SCL effects on the human immune system. The SCL treatment cf 30 peripheral blood mononuclear samples (PBMC) showed two types of celI stimulation: a low and a hight one. This cell stimulation picked up after 6 or 7 days of culture in the presence of monocytes/macrophages, because in the absence of these cells, no effect was observed. The SCL-stimulated PBMC exhibited CD3+CD4+CD45RO+ memory T4 lymphocytes proliferation with CD25 and CD28 celI surface receptor over-expression, and with pro and anti-inflammatory cytokines including IFN-α/β and TLR-3 and TLR-9 mRNA over-expression. TLR-3 recognises viral double-stranded RNA and TLR-9 senses un-methylated CpG DNA

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Renault, Nicolas. "Etude structurale in silico des récepteurs couplés aux protéines G appliquée au criblage virtuel de ligands mélatoninergiques, sérotoninergiques et cannabinergiques." Thesis, Lille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010LIL2S060.

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Abstract:

Appartenant à la sous-famille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPGs) apparentés àla rhodopsine et identifiés comme des cibles à fort potentiel thérapeutique, les récepteurs MT, et MT2à la mélatonine, 5-HT2C à la sérotonine et CB2 aux cannabinoïdes ont été étudiés par des approches insilico afin de mettre en évidence les déterminants structuraux critiques pour l'affinité, la sélectivité etl'activité pharmacologique de leurs ligands. Bénéficiant de données cristallographiques récentes,plusieurs états conformationnels de ces quatre récepteurs ont été modélisés en fonction du profilpharmacologique recherché. L'étude comparative de ces différents états conformationnels par dessimulations de dynamique moléculaire a permis de caractériser le rôle prépondérant joué par la boucleextracellulaire E2 et l'hélice 6 dans les mécanismes d'activation de ces RCPGs. Sur la base deméthodes chémoinformatiques, le criblage virtuel de ligands ciblant ces modèles tridimensionnels apermis de caractériser un modèle du récepteur 5-HT2C très spécifique de ligands agonistes inverses etd'identifier des touches pharmacologiques sur les récepteurs MTi et CB2
Identified as highly relevant therapeutical targets, the MT, and MT2 melatonin receptors, the5-HT2C serotonin and the CB2 cannabinoid receptors, which belong to the rhodopsin-like G proteincoupledreceptors (GPCRs) subfamily, have been studied by in silico approaches in order to identifycritical structural features for the binding, the selectivity and the pharmacological activity of theirligands. Gaining by sottie recent crystallographic data, various conformational states of these fourreceptors have been modeled according to the expected pharmacological profile. The comparativestudy of these various conformational states by molecular dynamics simulations has led to emphasizethe crucial rôle of the E2 extracellular loop and hélix 6 in the activation mechanisms of these GPCRs.On the basis of chemoinformatic methods, the virtual ligand screening targeting these threedimensionalmodels has promoted the characterization of a 5-HT2C receptor model able to bindspecifically inverse agonist ligands and the identification of pharmacological hits targeting the MTiand CB2 receptors

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Berthouze, Magali. "Étude structurale et fonctionnelle de la dimérisation du récepteur 5-HT 4 de la sérotonine." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114835.

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Abstract:

Serotonin 5-HT4 receptors (5-HT4R) are members of G protein-coupled receptors (GPCRs). Given the recent recognition that many GPCRs can dimerize, the present study was undertaken to determine whether 5-HT4R can form dimers and what are the molecular determinants involved in the dimerization process. Using co-immunoprecipitation and bioluminescence resonance energy transfer, we showed that the human 5-HT4R isoforms can form constitutive homodimers and heterodimers. In addition, we showed heterodimer formation between the 5-HT4(d)R and the beta2-adrenergic receptor. The 5-HT4(d)R dimer is sensible to dithiothreitol (reducing agent). Mutation of two cysteines in the 3 and 4 transmembrane domains, inhibits 5-HT4 receptor dimerization and brings about reticulum endoplasmic retention. Specific 5-HT4 receptor bivalent ligand do not have special affinity or efficacy for the 5-HT4 receptor but are able to stabilize receptor dimerization
Les récepteurs 5-HT4 de la sérotonine sont des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG). Les RCPGs peuvent se dimériser, ce qui influence leurs propriétés pharmacologiques. Les récepteurs 5-HT4 étant impliqués dans d'importants processus physiologiques, nous avons étudié leur processus de dimérisation. Nous avons montré par co-immunoprécipitation et Bioluminescence Resonnance Energy Transfert, que les isoformes 5-HT4 s'homodimérisent et s'hétérodimérisent constitutivement, entre elles et avec le récepteur β2-adrénergique. Le dimère de récepteur 5-HT4 est sensible au dithiothréitol (agent réducteur de ponts disulfures). La mutation de deux cystéines localisées dans les domaines transmembranaires 3 et 4, inhibe la dimérisation du récepteur 5-HT4 et entraîne sa rétention dans le réticulum endoplasmique. Des ligands bivalents spécifiques du récepteur 5-HT4 ne présentent pas d'affinité ou d'efficacité particulière pour le récepteur 5-HT4 mais peuvent stabiliser les dimères de récepteurs

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Kollen, Mélanie. "Etude du viellissement des mécanismes de la mémoire dans l'aire CA1 de l'hippocampe de rongeurs." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T025.

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Abstract:

Le vieillissement s'accompagne de troubles mnésiques. On pense aujourd'hui, que des modifications de la plasticité synoptique, sont à l'origine de ces troubles. Les récepteurs NMD A sont particulièrement important dans l'induction de cette plasticité, et notamment de la LTD (Long Term Dépression). Cette thèse montre le rôle de ces récepteurs en fonction (1) de leurs sous-unités (NR2A ou NR2B), (2) de leur localisation à la synapse (synaptique ou extrasynaptique), et (3) de l'âge des animaux (Smois vs 24mois). Nous avons aussi étudié les capacités mnésiques, la transmission et la plasticité synaptique de la souche de rats Lou/C/Jall, ayant un métabolisme et une longévité particuliers (restriction calorique continue et spontanée, et longévité moyenne de 28 mois), mais dont les capacités cognitives sont encore inconnues. Enfin, nous avons précisé le rôle de la protéine phosphatase 1 (PP1), activée en aval des récepteurs NMDA dans la modulation de la plasticité synaptique
Aging is associated with memory deficits. Alteration of synaptic plasticity is probably the basis of age-related memory deficits. NMDA receptors are particularly important in the induction of synaptic plasticity such as long term depression (LTD). The 1st aim of this PhD is to underline the role of these receptors according to (1) their subunit composition (NR2A or NR2B), (2) their localization at the synapse (synaptic or extrasynaptic), and (3) the age of the animals (3 or 24 month-old). The 2nd aim is to study mnesic capacities as well as hippocampal synaptic transmission and synaptic plasticity in the Lou/C/Jall rat strain, already studied for its specific metabolism and its longevity (rats of this strain show a natural and continuous caloric restriction, as well as a median lifespan of 28 month-old). However, their mnesic capacities are still unknown. The 3rd aim of this study is to precise the role of protein phosphatase 1 (PP1), activated downstream NMDA receptor during LTD

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Bonniaud, Philippe. "Transforming growth factor-β1, connective tissue growth factor et fibrose pulmonaire." Dijon, 2005. http://www.theses.fr/2005DIJOMU01.

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La fibrose pulmonaire (FP) est une maladie incurable. Nous nous sommes intéressés aux effets pathobiologiques de Transforming growth factor (TGF)βsur la FP. Par adénovecteurs, nous avons transféré à des poumons de rongeurs des cytokines susceptibles d'être impliqués dans la FP-TGF-β1, interleukine (IL)-1β, et connective tissue growth factor (CTGF)-. Nous démontrons que :1) TGFβ est essentiel pour l'initiation et la progression de la FP 2)CTGF est nécessaire mais incapable par lui seul d'induire la progression de la FP. CTGF pourrait être un cofacteur de TGFβ 3)FP et emphysème sont dépendants de Smad3, molécule de signal de TGFβ, démontrant l'importance de TGFβ dans l'équilibre entre accumulation et dégradation de matrice 4)la FP induite par IL-1β est dépendante de TGFβ 5)un inhibiteur spécifique du récepteur ALK5 de TGFβ bloque la FP induite par TGFβ. Conclusion : TGFβet ses voies de signal sont clés dans la FP. Ce travail est une ouverture à des possibilités thérapeutiques.

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Lardic, Morgane. "Synthèse et évaluation pharmacologique de 3,6-diaryl-2,5-dihydroxy-1,4-benzoquinones et de 2 (ou 3)-arylméthylènenaphtofuran-3 (ou 2)-ones modulateurs de protéines kinases." Nantes, 2004. http://www.theses.fr/2004NANT16VS.

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Abstract:

Ce mémoire présente la synthèse de deux familles de composés et leur évaluation pharmacologique sur l'activation ou l'inhibition de protéines kinases, cibles thérapeutiques potentielles dans de nombreuses pathologies comme le diabète ou le cancer. La première partie décrit la synthèse de 3,6-diaryl-2,5-dihydroxy-1,4-benzoquinones, analogues de la déméthylasterriquinione. Deux stratégies de synthèse ont été exploitées : la première via des 4-aryl-6-arylméthylène-3-hydroxypyrane-2,5-diones ; la seconde approche s'appuie sur des réactions d'arylation sélectives d'un noyau benzoquinone. Les benzoquinones finales ont été. Soumises à des tests de phosphorylation du récepteur à l'insuline et de la PKB, molécule clé dans le signal de transmission de l'insuline. La deuxième partie expose la synthèse d"aryiméthylènenaphtofuranones, obtenues par couplage de Knoevenagel entre une naphtofuranone et un aldéhyde. Ces structures ont été évaluées sur l'inhibition de la protéine kinase cytosolique Src
Protein kinases are often involved in many pathologies such as diabetes or cancer and thereby constitute new potential therapeutic targets. In this way, this work reports the synthesis of two familv of compounds and their protein kinase activation or inhibition evaluation. In a first part, numerous analogues of demethylasterriquinone. With a 3,6-diaryl-2. 5-dihydroxy-1. 4-benzoquinone core, were obtained. Two pathways have been investigated : via rearrangement of 4-aryl-6-arylmethylene-3-hydroxypyrane-2,5-diones or through selective arylation reactions of a benzoquinone unit. The targeted benzoquinones were evaluated in vitro, towards the phosphorylation of insulin receptor and protein kinase B, a key molecule in the transduction signal of insulin. The second part deals with the synthesis of a second class of compounds, arylmethylenenaphthofuranones, synthesised by Knoevenagel coupling between a naphthofuranone and a formyl derivative, and their evaluation on Src kinase inhibition

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Robert, Jessica. "Mécanismes moléculaires du trafic intracellulaire du récepteur V1b/V3 de la vasopressine." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N04S.

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Abstract:

Des mutations naturelles de récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) entrainent leur rétention dans le réticulum endoplasmique (RE) et leur absence à la membrane plasmique et sont responsables de maladies comme le dièbète insipide ou la rétinite pigmentaire. Au cours de ma thèse, j'ai identifié une courte séquence peptidique, FN(X)2LL(X)3L, dans le domaine carboxy-terminal cytosolique du récepteur hypophysaire V1b de la vasopressine (V1bR), mon modèle d'étude des RPCPGs, indispensable à sa sortie du RE. La mutation de ce motif entraine la rétention totale du V1bR dans le RE, qui est alors non fonctionnel. Puis j'ai découvert qu'un antagoniste sélectif du V1bR et perméable aux membranes biologiques, le SSR149415, se comporte comme un chaperon pharmacologique en restaurant l' expression à la membrane plasmique, la maturation et l' expression à la membrane plasmique, la maturation et la fonctionnalité de ce premier mutant V1bR d'export. Ces résultats laissent entrevoir une possible approche thérapeutique pharmacologique des défauts d'export
Natural mutations of several G-protein-coupled receptors (GPCR) cause retention of the receptors in the endoplasmic reticulum (ER) and are responsible for diseases. I identified a short sequence,FN(X)2LL(X)3L, in the C-terminus of the pituitary vasopressin V1b receptor (V1bR) our model to investigate the mechanisms of GPCR export, necessary for its ER exit. The mutation of this motif totally abolished the plasma membrane expression and functions of the receptor and retained it in the ER,Treatment with a specific non-peptide V1bR antagonist SSR149415 restored expression of the mutated receptor on the cell surface and its correct maturation, resulting into the functional recovery of its signaling properties. SSR149415 acts by stabilizing a native-like conformation of the V1bR, reducing its association with calnexin and thus favoring a secretory pathway rather than the proteasomal degradation pathway. These results highlight a promising pharmacological approach of the folding defects

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Gbahou, Florence. "Etude moléculaire et pharmacologique du récepteur H3 de l'histamine." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05S016.

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Abstract:

Identifiée dans notre laboratoire en 1983 en tant qu'autorécepteur régulant la libération et la synthèse de l'histamine cérébrale, le récepteur H3 (RH3) de l'histamine a finalement été cloné en 1999. Les études que nous avons menées sur le RH3 ont permis de beaucoup avancer dans sa connaissance moléculaire grâce à la mise en évidence de plusieurs sources de variation de sa pharmacologie telles que ses nombreuses isoformes fonctionnelles et non fonctionelles ainsi que l'existence d'un récepteur apparenté, le récepteur H4. Ces études nous ont également permis de démontrer l'existence physiologique de deux concepts pharmacologiques (activité constitutive et agonisme protée) qui remettent en cause le principe général d'activation des RCPG. En conclusion, le RH3 est un outil de choix pour l'étude moléculaire des RCPG pusqu'il permet d'étudier plusieurs aspects importants de leur hétérogénéité pharmacologique allant des formes apparentées, aux isoformes et aux états conformationnels multiples
The histamine H3 receptor (RH3) has been identified in 1983 by our group as a presynaptic autoreceptor regulating histamine release and synthesis in the brain. Following its cloning in 1999, the molecular studies initiated by our group allowed to progress in the RH3 molecular knowledge and pharmacological heterogeneity such as its various functional and non functional isoforms as well as the existence of RH3-like, the histamine receptor H4. These studies also allowed us to demonstrate the physiological existence of two pharmacological concepts (constitutive activity and protean agonism) which may be taken into account for the general principle of RCPGs activation. In conclusion, the RH3 is a target of choice for the molecular study of GPCRs since it allows studying several important aspects of their pharmacological heterogeneity such as the receptors-like, the isoforms as well as the multiple conformational states

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Varadaradjalou, Sonia. "Etudes des interactions moléculaires entre mastocytes et bactéries : rôle des récepteurs Toll-Like." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05P606.

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Nous avons montré d'une part, que des mastocytes humains (CBMC) expriment les ARNm des dix TLRs humains identifiés et sont activables par le LPS, le PGN et la flagelline, agonistes respectifs des TLR4, TLR2 et TLR5. L'activation des CBMC par le LPS, mais pas par le PGN, nécessite un pré-traitement des cellules par l'IL-4 et la présence de facteurs sériques, dont le CD14 soluble. Le LPS et le PGN induisent la libération de TNF-ALPHA ? D4il-5 ? d'IL-10 et d'IL-13 par les CBMC, de façon dépendante de TLR4 et de TLR2 respectivement, mais seul le PGN entraîne la libération d'histamines. De plus, la flagelline induit la dégranulation des CBMC sans libération de TNF-alpha. D'autre part, nous avons montré que les bactéries FimH+ induisent une libération d'IL-12 par les cellules dendritiques murines, qui est dépendante de TLR4, de MyD88 et indépendante du CD14, tandis que la réponse des MC murins à la lectine FimH purifée semble dépendre de l'expression du TLR4, et partiellement du TLR2
We show here the expression of various TLRs (from TLR1 to TLR10) by human cordblood derived mast cells (CBMC) at the mRNA level and that LPS and PGN induced the release of TNF-alpha, IL-5, IL-10 and IL-13 by CBMC, in a TLR4- and a TLR2-dependent manner respectively. However, the response of CBMC towards LPS, and not towards PGN, required the pre-treatment of the cells by IL-4 and the presence of soluble CD14 found in serum. Of not, PGN, but not LPS, induced the release of histamine by CBMC. Furthermore, flagellin, an agonist of TLR5, induced the degranulation of CBMC without any release of TNF-alpha. Besides, we demonstrated that FimH-expressing bacteria induce a significant release of IL-12 p40 by murine dendritic cells, which is serum- and CD14-independent, but MyD88 and TLR4-dependent. Finally, we demonstrated herein that purified lectin induces significant

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Vanderstraete, Mathieu. "Structure, Fonction et Evolution des Récepteurs Venus Kinase : rôles dans la reproduction du parasite Schistosoma mansoni." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01071348.

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Abstract:

Les récepteurs Venus Kinase ou VKR forment un nouvelle famille de récepteurs tyrosine kinase découverts au laboratoire. Ces récepteurs sont caractérisés par une organisation atypique associant un domaine extracellulaire de type Venus Flytrap (VFT) similaire à ceux des récepteurs couples aux protéines G de classe C à un domaine Tyrosine Kinase (TK) intracellulaire similaire à celui du récepteur à l'insuline (IR). Cette famille est présente uniquement chez les invertébrés dont notre modèle d'étude, le parasite plathelminthe Schistosoma mansoni. Les travaux réalisées à ce jour suggèrent que ces protéines jouent un rôle dans le développement des stades larvaires et la reproduction sexuée. Mon travail de thèse s'est intéressé à l'étude de cette famille de récepteurs et comporte trois axes principaux. Le premier concerne la mise à jour phylogénétique de la famille des VKR. Une analyse approfondie des données génomiques récentes nous a permis d'étendre la présence des VKR à près de 50 espèces dans cinq phyla invertébrés. La présence d'un VKR chez le cnidaire Nematostella vectensis suggère une émergence du récepteur avant l'apparition des bilatéraliens. Des analyses phylogénétiques ont mis en évidence la monophylie de l'ensemble des récepteurs ainsi que des importants niveaux de conservation des motifs fonctionnels VFT et TK. Des analyses de modélisation du domaine de fixation au ligand suggèrent que la majorité de ces récepteurs puissent être activables par des acides aminés de type L-Arginine. La découverte de VKR chez Nematostella vectensis, Lottia gigantea ou Capitella teleta s'avère prometteuse dans la mesure où ces modèles se prêtent parfaitement à l'embryologie moléculaire, et pourraient être utilisés pour étudier la fonction des VKR dans l'embryogenèse.La deuxième partie de mon travail s'est intéressée à la caractérisation fonctionnelle de SmVKR1 et SmVKR2, les deux VKR de Schistosoma mansoni. En utilisant le modèle d'expression ovocyte de Xénope, nous avons pu dans un premier temps déterminer que SmVKR1 et SmVKR2 sont activables par plusieurs et différents L-acides aminés. L'identification de partenaires intracellulaires par un criblage en double hybride de levure nous a permis de déterminer de nouveaux et inattendus partenaires d'interaction, suggérant des fonctions dans l'activation de voies TK conservées, mais également dans le remodelage du cytosquelette ou la synthèse protéique. Si les deux récepteurs activent les voies Akt, S6K et Erk1/2, seul SmVKR1 est capable d'activer la voie JNK. Les profils d'expression ont été déterminés par hybridation in situ et, si les deux gènes s'expriment dans l'ovaire, la localisation des transcrits est clairement distincte avec une expression de SmVKR2 au sein des ovocytes immatures et de SmVKR1 dans les ovocytes matures. Enfin des expériences d'ARN interférence sont venues confirmer un rôle de ces récepteurs au sein de l'ovogenèse, la diminution d'expression entraînant des phénotypes délétères sur la croissance et ovocytes et la ponte des oeufs. L'étude des voies de signalisation SmVKR1 a été également été entreprise au laboratoire, mettant en évidence l'importance de la protéine adaptatrice SmShb dans l'induction de la voie JNK par SmVKR1. L'ensemble de des résultats suggère que SmVKR1 aurait une fonction dans la migration des ovocytes et/ou dans la reprise de méiose par l'activation de la voie JNK, tandis que SmVKR2 aurait un rôle plus précoce, dans la croissance et/ou la prolifération des ovogonies. Enfin la dernière partie de mon travail de these visait à determiner si les VKR peuvent être considérés comme des cibles thérapeutiques intéressantes en vue du développement de nouvelles drogues anti parasitaires. [...]

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Verneuil, Laurence. "L' apoptose caspase-dépendante dans les interactions hôte / virus et en immunopathologie." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077200.

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Abstract:

L'apoptose est un processus physiologique actif de mort cellulaire impliquant un programme génétiquement contrôlé d'autodestruction de la cellule. Deux voies effectrices de l'apoptose sont décrites, la voie des récepteurs membranaires de mort cellulaire se liant à un ligand et la voie mitochondriale impliquant le relarguage de molécules effectrices pro-apoptotiques. Ces deux voies activent en aval les caspases effectrices de l'apoptose. Un dysfonctionnement des mécanismes régulateurs de l'apoptose peut engendrer des pathologies. Nos travaux ont exploré un rôle possible de l'induction de l'apoptose et les mécanismes moléculaires impliqués, dans l'infection par le cytomégalovirus (CMV) et la GVHD aiguë (maladie du greffon contre l'hôte). Des protéines anti-apoptotiques du CMV humain sont connues, en revanche aucune protéine pro-apoptotique n'a été décrite. Dans un modèle cellulaire, in vitro, nous avons montré que, l'expression du récepteur viral de chimiokines US28, produit d'un gène du CMV, induisait une apoptose caspase dépendante de manière constitutive (indépendante d'un ligand), et indépendante de la voie mitochondriale et de celle des récepteurs de mort. Dans le contexte de la greffe de moelle osseuse, la GVHD correspond à une réponse allogénique par les lymphocytes T d'un donneur contre des cellules cibles épithéliales d'un receveur. Dans un modèle murin de GVHD aiguë, in vivo, nous avons montré une apoptose des cellules endothéliales précédant l'induction de l'apoptose des cellules épithéliales dans la muqueuse orale, dépendante de l'expression de FasL (ligand du récepteur de mort Pas) par les lymphocytes T activés du donneur, sans conditionnement préalable
Apoptosis is an active physiological process involving a genetically regulated cell suicide process. Two effector cytolytic pathways of apoptosis are involved: one is triggered by the engagement of cell-surface death receptors of the Fas/tumor necrosis factor receptor (TNFR) family, and the other is the mitochondrial pathway, which involves released of pro-apoptotic effectors. These two pathways trigger the effector caspases activation. A deregulation of apoptosis control mechanisms can provide some pathologies. We investigate a possible implication of apoptosis induction and the molecular mechanisms involved in the cytomegalovirus infection and in the acute graft versus host disease (GVHD). HCMV (human cytomegalovirus) encodes proteins with antiapoptotic properties but no proapoptotic protein is known. Here we show, in vitro, that the G protein coupled receptor (GPCR), US28 encoded by HCMV, constitutively induced a caspase-dependent apoptosis but independent of the mitochondrial pathway activation and of cellular TNF family death receptor activation. In the context of allogeneic bone marrow grafting, the GVHD corresponds to an allogeneic response of donor effector cells against recipient epithelial target cells. In a murine model of acute GVHD, in vivo, our results shown that endothelial cell death precedes the induction of epithelial cell death in the oral mucosa and that FasL expression by allogeneic actived lymphocytes T is required, in the absence of any conditioning treatment

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Mousseaux, Delphine. "Etude pharmacologique de ligands de synthèse du récepteur des sécrétagogues de l'hormone de croissance (GHSR-1a) et voies de signalisation." Montpellier 1, 2005. http://www.theses.fr/2005MON13518.

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La ghréline est une hormone peptidique essentiellement d'origine gastrique. Elle a d'abord été identifiée comme un sécrétagogue de l'hormone de croissance (GHS) endogène qui lie le récepteur des GHSs de type la (GHSR-1a). Outre son activité sur la sécrétion de l'hormone de croissance, cette hormone stimule la prise alimentaire et la prise de poids. Cette thèse est consacrée d'une part, au criblage in vitro de nouveaux ligands du GHSR-1a et d'autre part, à l'étude des voies de signalisation du récepteur activé. Ce travail a abouti à la découverte d'une série originale d'agonistes et d'antagonistes de haute affinité également actifs in vivo chez le rat et qui fait actuellement l'objet d'un dépôt de brevet. De plus, l'étude de la voie de signalisation de ce récepteur suggère que son activation entraînerait des évènements transcriptionnels, impliquant notamment l'activation de la phospholipase C, de la protéine kinase C epsilon et des ERK1/2
Ghrelin is a predominantly gastric peptide hormone. It was first identified as a endogenous growth hormone secretagogue which binds to the GHS receptor type 1 a (GHSR-la). Apart from stimulating the secretion of growth hormone, ghrelin also stimulates appetite and causes weight gain. The work in this thesis firstly involved the in vitro study of new ligands for the GHSR-1a and secondly the study of the downstream signalling pathway through which the active GHSR-1a elicits its biological responses. This work has resulted in the discovery of a new series of ligands, which not only display high affinity for the GHSR-1a, but are equally active when tested in vivo in experiments using the rat. A patent application based on this series of ligands is currently under development. The work investigating the downstream signaling pathway of the active GHSR-la, suggests that Phospolipase C, Protein Kinase C (Epsilon) and ERK1/2 are involved. In addition, it appears that GHSR-1a signalling could play a role in the regulation of nuclear transcription factors

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Duplaquet, Leslie. "Implication du récepteur à activité tyrosine kinase (RTK) MET sur la balance survie/apoptose et identification de nouvelles mutations de RTKs dans les cancers colorectaux métastatiques." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S031/document.

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Abstract:

Les RTKs sont impliqués dans le dialogue au sein des tissus par la régulation de nombreuses réponses cellulaires dont la survie, la prolifération ou la mobilité. Dans les cancers, ces récepteurs sont fréquemment dérégulés notamment par des mutations activatrices. Ainsi, la suractivation des RTKs induit la transformation cellulaire et la tumorigenèse en favorisant par exemple la survie cellulaire. Depuis le début des années 2000, le développement de molécules inhibitrices de l’activité tyrosine kinase (TKI) et d’anticorps bloquant l’interaction ligand/récepteur ont montré que les RTKs représentent des cibles thérapeutiques majeures dans le traitement des cancers.MET est un RTK exprimé par les cellules épithéliales, dont le ligand est l’Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor (HGF/SF). En plus de son rôle pro-survie, MET peut également favoriser l’apoptose en absence de ligand et sous l’effet d’un stress. MET est alors clivé par les caspases et libère dans le cytosol un fragment de 40 kDa nommé p40MET. Ce fragment active la voie intrinsèque de l’apoptose en causant la perméabilisation des mitochondries. Cependant, les mécanismes moléculaires responsables de cette perméabilisation et l’impact physiologique de la fonction pro-apoptotique de MET étaient encore inconnus.Mon travail de thèse a permis de démontrer que le fragment p40MET se localise dans la région des MAMs, constituant l’interface entre le réticulum endoplasmique et les mitochondries, où il favorise un transfert de calcium entre les deux organites. Ce transfert déclenche une surcharge de calcium dans les mitochondries, responsable de leur perméabilisation. De plus, nous avons développé une lignée de souris transgéniques dans lesquelles MET est muté sur l’un des sites caspases. Ces souris sont incapables de produire le fragment p40MET pro-apoptotique. Ce modèle nous a permis de démontrer l'importance du clivage de MET dans l’amplification de l’apoptose in vivo. Ainsi, nos travaux apportent les premières preuves de la fonction de MET en tant que récepteur à dépendance au sein d’un organisme et décrivent un nouveau mécanisme de signalisation pro-apoptotique par la dérégulation des flux calciques.Ces dernières années, la découverte de mutations touchant les RTKs dans les cancers a augmenté de façon exponentielle. Toutefois, pour une grande majorité de mutations, leurs conséquences fonctionnelles sont totalement inconnues. Ainsi, en parallèle de mon principal sujet de thèse nous avons évalué la pertinence biologique et clinique des mutations de RTK identifiées par séquençage haut débit à partir d’échantillons de patients. Le séquençage de tissus sains, de tumeurs colorectales et de métastases hépatiques de 30 patients a permis d'identifier de nombreuses mutations somatiques. Parmi elles, certaines affectent le domaine kinase des récepteurs et sont présentes à la fois dans les tumeurs et les métastases. L’analyse fonctionnelle que j’ai menée sur 7 de ces mutations révèle qu’elles ne provoquent ni la suractivation de la kinase ni la transformation des fibroblastes NIH3T3. Au contraire, deux mutations de RTKs provoquent une inhibition drastique de leur activité kinase. Ces résultats démontrent que ces variants de RTK ne sont pas des cibles appropriées pour l’utilisation de TKI à des fins thérapeutiques et démontre l’intérêt de coupler la recherche de variants à des études fonctionnelles [...]
RTKs are involved in tissue dialogue by regulating many cellular mechanisms such as survival, proliferation or mobility. In cancers, these receptors are frequently deregulated, as a result of various molecular alterations leading to their activation. RTKs overactivation induces cell transformation and tumorigenesis notably by promoting survival. Since the early 2000s, the development of tyrosine kinase inhibitors (TKI) demonstrated that RTKs represent major therapeutic targets in cancer treatment.MET receptor and its ligand the Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor (HGF/SF) are known to promote survival of many epithelial structures during embryogenesis and later during adulthood. Besides pro-survival role of the ligand-activated MET, the receptor is also able to promote apoptosis, which has led to classify it within the dependence receptor family. Indeed, in absence of its ligand and under stress conditions, MET is cleaved by caspases leading to the production of an intracellular fragment of nearly 40 kDa named p40MET able to amplify apoptosis. This fragment activates the intrinsic pathway of apoptosis by causing mitochondrial permeabilization. However, the molecular mechanisms involved in this permeabilization and the physiological impact of the pro-apoptotic function of MET were still unknown.My PhD work has evidenced p40MET localization at the MAM microdomain and characterized a calcium transfer from the endoplasmic reticulum to the mitochondria triggered by p40MET. This calcium transfer triggers a calcium overload in mitochondria leading to their membrane permeabilization and apoptosis. In addition, we engineered a knock-in mouse model expressing mutated MET at the C-terminal caspase site. These mice are unable to produce the pro-apoptotic p40MET fragment. This model allowed us to assess the importance of MET cleavage in physiological apoptosis in vivo. Altogether, our work brings the first evidence for MET function as a dependence receptor in an organism and demonstrates a new signaling mechanism involved in apoptosis amplification by p40MET through calcium flux deregulation. This process may be relevant in the physio-pathology of organs where MET is expressed.In recent years, the discovery of mutations affecting RTKs in cancers has increased exponentially. However, for a large majority of mutations, their functional consequences are totally unknown. Thus, in parallel of my main thesis topic, we evaluated the biological and clinical relevance of RTKs mutations identified by high throughput sequencing from patient samples. Sequencing of healthy tissues, colorectal tumours and liver metastases of 30 patients has identified many somatic mutations. Some of them affect the receptor kinase domain and are present in both tumors and metastases. Functional analysis of 7 of these mutations shows that they do not cause neither kinase overactivation nor transformation of NIH3T3 fibroblasts. On the contrary, two RTK mutations cause drastic inhibition of the corresponding kinase activity. These findings indicate that these RTK variants are not suitable targets for TKI. Therefore, it appears important to set up reliable functional assays to interpret identified variants and classify them as pathogenic or neutral.In conclusion, my work opens up new perspectives on therapeutic strategies targeting RTKs in cancers. First of all, the pro-apoptotic capacities of some RTKs are undoubtedly a brake to tumorigenesis, and their stimulations could reinforce the effectiveness of anti-cancer therapies. On the other hand, we have shown that RTKs mutations in the kinase domain do not necessarily lead to overactivation of the receptor suggesting that they are probably not involved in tumorigenesis and that treatment with TKIs targeting them would be ineffective. This functional information could notably influence the choice of a suitable targeted therapy

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Dissertations / Theses on the topic 'Récepteurs des oestrogènes – Dissertations universitaires'

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