Academic literature on the topic 'Régulation de l'expression des gènes – Dissertations universitaires comme sujet'

Les sous-populations fonctionnellement distinctes de cellules T CD4+ sont essentielles pour orchestrer la réponse immune contre différents types de pathogènes. Les cellules Th1 (T helper type 1) sont impliquées dans le développement des réponses immunitaires cellulaires et protègent l'organisme contre des pathogènes intracellulaires. Par ailleurs les réponses Thl incontrôlées sont associées aux maladies inflammatoires chroniques et aux maladies auto-immunes. De ce fait, il est nécessaire de bien comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans le processus de différenciation des cellules Th1. Le facteur de transcription T-bet est spécifiquement exprimé par les cellules Th1 et joue un rôle important dans la différenciation de ces cellules. Il est impliqué dans le remodelage de la chromatine et dans l'expression du gène codant pour l'IFN-γ, spécifique des cellules Th1. L'objectif de ce projet est d'identifier les mécanismes impliqués dans la régulation de l'expression du gène T-bet pendant le développement des cellules Th1 humaines. Nous avons analysé les modifications de la structure de la chromatine au niveau du locus du gène T-bet dans ces cellules ce qui nous a permis d'identifier quatre sites hypersensibles à la DNase I (HS). Ces sites sont localisés dans les régions CNS. De plus, la chromatine associée aux sites HS est hyperacétylée au niveau de l'histone H3 dans les cellules Th1. L'ensemble de ces données indique que ces quatre régions peuvent être impliquées dans la régulation du gène T-bet chez l'homme. La stimulation du TCR induit une forte expression du gène T-bet et nous avons démontré que les protéines de la famille NF-AT sont impliquées dans ce processus
Functional distinct subsets of CD4+ T cells are essential to orchestrate efficient immune responses against different types of pathogens. T helper type 1 (Thl) cells promote cell-mediated immunity and are necessary to clear the organism from intracellular pathogens but are associated with autoimmune and chronic inflammatory diseases. This indicates that the development of Thl cells must be tightly controlled. The transcription factor T-bet is specifically expressed by Thl cells and plays an important role in the differentiation of this subset. T-bet is implicated in chromatin remodeling and control of Thl-specific expression of the IFN-f gene. The goal of this project is to identify the mechanisms that regulate T-bet expression during human Thl cell development. The analysis of changes of the chromatin structure at the T-bet locus in Thl cells allowed us to identify four DNAsel hypersensitive sites (HS). We found that the position of the HS identified in our experiments corresponds to the position of the CNS identified « in silico ». In addition, we found that chromatin associated with HS is hyperacetylated on histone H3 in Thl cells. Taken together, these data indicate that these four regions are implicated in the regulation of the human T-bet gene. We found that triggering of the T cell receptor (TCR) alone is sufficient to induce strong expression of T-bet. We demonstrated that NF-AT family members are implicated in this process

En phase stationnaire de croissance ou en réponse à certains stress, les Enterobactéries s'adaptent, notamment par la mise en place du régulon sigma S. La sous unité as (codé par le gène rpoS) de l'ARM polymérase est un facteur a dont l'expression et l'activité sont extrêmement régulées et qui joue un rôle majeur dans la résistance généralisée au stress, la formation de biofilms et la virulence de Salmonella enterica sérovar Typhimurium. Nous avons utilisé la technologie ProteinChip SELDI-TOF afin de caractériser le protéome de mutants de Salmonella, en particulier un mutant du gène yncC. Ce gène, de fonction inconnue, fait partie du régulon sigma S et code un régulateur potentiel de la famille GntR/FadR. Nous avons ainsi pu identifier des cibles potentielles de YncC, que nous avons validées par des études in vivo et in vitro. Ces cibles sont organisées en operon, yclGFEkatN, qui appartient au régulon sigma S et code pour une catalase et des protéines de fonctions inconnues. Cet operon est réprimé par H-NS, une protéine du nucléoïde connue pour éteindre l'expression de nombreux gènes, en particulier ceux acquis par transfert horizontaux. L'opéron est en partie présent chez Escherichia coli K-12 où il est également régulé par sigma S , YncC et H-NS. Cependant, les mécanismes de régulation de son expression dans les 2 espèces sont différents. L'acquisition de cet operon résulte très probablement d'un transfert horizontal mais cet événement semble plus récent dans le cas de E. Coli K-12 que dans le cas de Salmonella. L'acquisition ancestrale des gènes yclGFEkatN chez Salmonella a probablement permis d'intégrer cet operon, et de moduler la régulation de son expression, au sein du régulon sigma S
The a regulon is set up to allow Enterobacteria to adapt to stationary phase of growth or in response to some stresses. The RNA polymerase subunit sigma S (encoded by rpoS) is a a factor whose expression and activity are tightly regulated and it plays a major role in general stress resistance, biofilm formation and virulence of Salmonella enterica serovar Typhimurium. Our study deals with the functional characterization of the as regulon. We used the ProteinChip SELDI- TOF technology in order to characterize the proteome of Salmonella mutants, including the yncC mutant. The sigma S- dependent gene yncC is of unkown function and encodes a putative regulatory protein that belongs to the GntR/FadR family of transcriptional regulators. Potential targets for YncC regulation were identified and subsequently validated by in vivo and in vitro experiments. These belong to the sigma S-dependent operon yclGFEkatN, which encodes a catalase and proteins of unknown function. The yclGFEkatN operon is repressed by H-NS, an histone-like protein known to repress the expression of numerous genes, especially horizontally acquired genes. The operon is partially present in Escherichia coli K-12 where it is also regulated by sigma S, YncC and H-NS. However, levels of expression and mechanisms of regulation the operon are different in the two species. This operon has probably been acquired by horizontal gene transfer in both species, but more recently in E. Coli K-12 than in Salmonella. Presumably, the ancestral acquisition of the yciGFEkatN genes in Salmonella has allowed integration of this operon, and tight regulation of its expression, within the sigma S regulatory network

Le busulfan (Bu) est largement utilisé lors des régimes de conditionnement précédent une greffe de cellules souches hématopoïétiques. La complication majeure et la plus grave des conditionnements est la vaso- occlusion hépatique (HVOD). Le degré de bioexposition du Bu semble être le déterminant majeur de la pathogenèse des HVOD car il induirait l'endommagement des cellules sinusoïdales et des hépatocytes adjacents, événement déclencheur des HVOD. Nous avons ainsi étudié l'expression de différents gènes impliqués dans : le métabolisme du Bu (GSTs), la vasomotricité (ET-1), la coagulation (TF) et l'inflammation (ICAM-1 et PECAM-1). Nous avons montré que les cellules endothéliales (CE) n'exprimaient pas GSTA1, accentuant ainsi leur sensibilité aux toxicités du Bu. De plus, le Bu n'altère pas l'expression de GSTM1 mais diminue celle de GSTT1 dans ces cellules. Ainsi, GSTM1 serait le seul rempart de protection des CE. Les résultats obtenus concernant les facteurs hémostatiques et inflammatoires sont en contradiction avec leur implication dans la pathogenèse des HVOD. Ainsi, l'ensemble de ces résultats suggère que la toxicité du Bu ne se traduirait pas par l'endommagement primaire de l'endothélium mais plutôt par une desquamation endothéliale mettant ainsi à nu l'espace subendothélial, site favorisant l'inflammation et la coagulation. Ceci permettrait d'expliquer les bénéfices cliniques observés lors de l'administration prophylactique de défibrotide, molécule antithrombotique, antiinflammatoire et anticoagulante se liant fortement à l'endothélium. La meilleure compréhension des mécanismes physiopathologiques des HVOD permettra l'élaboration de nouvelles stratégies thérapeutiques
Busulfan (Bu) is commonly included in conditioning regimen prior to hematopoietic stem cell transplantation. Hepatic veno-occlusive disease (HVOD) is regarded as the major and lethal complication of conditioning. High Bu bioexposition is considered to be the major determinant of sinusoides endothelial cell and hepatocytes damage, the precipating event of HVOD. We analysed different gene expression status implicated in : Bu metabolism (GSTs), vasomotricity (ET-1), coagulation (TF) and inflammation (ICAM-1 and PECAM-1). We showed that endothelial cells (EC) do not express GSTA1 which may render ECs vulnerable to Bu-mediated toxicities. Furthermore, Bu do not modulate GSTM1 and down-regulate GSTT1 in these cells. Hence, GSTM1 seem to be the only protector of EC to Bu-mediated toxicities. Results concerning hemostatic and inflammatory factors are not in agreement with their involvment in HVOD pathogenesis. These results suggest that Bu is not directly implicated in primary EC damage but rather in endothelial desquamation leading to exposition of the subendothelial matrix, a coagulation and inflammatory-generating site. This is in line with the beneficial effect of defibrotide prophylaxis, an antithrombotic, antiinflammatory and anticoagulant molecule which adhere firmly to endothelium. A better understanding of HVOD mechanisms should lead to the emergence of appropriate and personnalized therapies

Les adénomes hépatocellulaires (AHC) sont des tumeurs bénignes rares, observés majoritairement chez la femme jeune et fortement associés à la prise de contraceptifs oraux. Environ 35% des AHC présentent une inactivation biallélique du gène HNF1A codant HNFla (Hepatocyte Nuclear Factor la). HNFla est un facteur de transcription à homéodomaine qui contrôle l'expression de nombreux gènes spécifiques du foie. Afin d'identifier les voies de tumorigenèses associées à l'inactivation d'HNFloc dans les hépatocytes, une analyse transcriptomique comparant des AHC mutés HNFla à des foies non tumoraux a été réalisée au laboratoire. L'analyse des gènes dérégulés a permis notamment de mettre en évidence une activation des voies de la glycolyse et de la lipogenèse concordant avec le phenotype stéatosique de ces tumeurs. Nous avons aussi mis en évidence la surexpression de plusieurs facteurs de croissances et d'oncogènes ainsi que l'activation de la voie mTOR dans les adénomes mutés HNFla. La plupart des dérégulations décrites dans les tumeurs mutées HNFla sont reproduites in vitro en transfectant des siRNA ciblant HNFla dans des lignées d'hépatocytes tumoraux (HepG2 et Hep3B), démontrant que ces dérégulations sont bien des conséquences de la perte d'HNFla. Par ailleurs, les lignées cellulaires transfectées avec des siRNA HNFla subissent d'importants changements phénotypiques, qui résultent en une transition épithélio-mésenchymateuse et une augmentation de la mobilité cellulaire. En conclusion, ces résultats permettent de mieux comprendre les mécanismes de tumorigenèse liés à F inactivation d'HNFla et révèlent un effet répresseur d'HNFla, qui peut notamment passer par des microARNs
Hepatocellular adenomas (HCA) are rare benign liver tumors usually developed in young women under oral contraceptives. Among these tumors, biallelic inactivating mutations of HNF1A gene coding HNFla (Hepatocyte Nuclear Factor la) have been identified in about 35% of HCA. HNFla is an atypical homeodomain-containing transcriptional factor that transactivates many liver-specific genes. In order to better understand the tumorigenic mechanisms related to HNFla inactivation in hepatocytes, we performed a transcriptomic analysis comparing HNFla-mutated HCA to non-tumor livers. This analysis identified an aberrant activation of glycolysis and lipogenesis that could explain the steatotic phenotype of these tumors. We also identified an over expression of several growth factors and oncogenes along with an activation of mTOR pathway in HNFla-mutated HCA. Most of the observed deregulations in HNFla-mutated tumors were also found in vitro by inhibiting HNFla expression in human liver cancer cell lines (HepG2 and Hep3B) using siRNA, demonstrating that these deregulations are consequences of HNFla loss. Moreover, the cell lines transfected with HNFla siRNA undergo important phenotypic remodelling, that results in an epithelial-mesenchymal transition and increased cell mobility. In conclusion, these results give new insights into the mechanisms of tumorigenesis related to loss of HNFla function and reveal a repressor function of HNFla, that could go through microRNA

Notre vision de la phylogénie des métazoaires a été profondément modifiée depuis une dizaine d'années : les espèces modèles actuelles en biologie du développement constituent un échantillonnage très imparfait des animaux, avec un manque notable de modèles chez les Lophotrochozoaires. Or un bon échantillonnage des espèces est crucial pour traiter toute question évolutive, telle que l'origine des plans d'organisation. Une façon d'aborder cette question est de s'intéresser aux aspects du développement animal dont résultent les plans d'organisation, comme par exemple la subdivision du mésoderme en territoires distincts à l'origine des différents organes issus de ce feuillet embryonnaire. Cette thèse présente l'étude du déterminisme génétique de la subdivision du mésoderme chez un modèle Lophotrochozoaire, l'annélide polychète Platynereis dumerilii. Chez la drosophile, les gènes du complexe NK sont connus pour leur implication dans la subdivision du mésoderme, tandis que chez les vertébrés, la situation est moins claire. Une analyse phylogénétique systématique de cette famille de facteur de transcription à homéodomaine a permis de montrer que sa diversification a eu lieu avant la séparation des lignées des Cnidaires et des Bilatériens. L'étude de ces gènes chez un annélide suggère que leurs fonctions étaient diverses et nombreuses chez le dernier ancêtre commun des Bilatériens, Urbilateria. Ils auraient été impliqués non seulement dans la subdivision du mésoderme, mais aussi, pour certains, dans l'ontogenèse du système nerveux ou le développement du pharynx. Ces résultats soutiennent l'idée d'un ancêtre Urbilateria plus complexe qu'on ne l'imaginait traditionnellement
Our vision of metazoan phylogeny was deeply modified since ten years: the current model species in developmental biology constitute a very imperfect sampling of animals, with a notable lack of models within Lophotrochozoans. However, a good sampling of the species is crucial to deal with any evolutionary question, such as the origin of body plans. A way of tackling this question is to study the aspects of the animal development from which body plans result, such as for example mesoderm subdivision in distinct territories that will give rise to the various mesodermal organs. This thesis presents the study of the genetic determinism of mesoderm subdivision in a Lophotrochozoan model, the polychaete annelid Platynereis dumerilii. In Drosophila, the NK complex genes are known for their implication in mesoderm subdivision, while the situation is less clear in the vertebrates. A systematic phylogenetic analysis of this family of homeodomain transcription factors showed that its diversification took place before the separation of the lines of Cnidarians and Bilaterians. The study of these genes in an annelid suggests that their functions were various and numerous in the last common ancestor of Bilaterians, Urbilateria. They would have been implied not only in mesoderm subdivision, but also, for some, in the ontogenesis of the nervous System or pharynx development. These results support the idea of an Urbilateria ancestor more complex than it traditionally was imagined

La formation de nouveaux virus VIH-1 infectieux requiert la rencontre de trois composants majeurs viraux : la glycoprotéine d'enveloppe (Env), le précurseur Gag et l'ARN génomique. L'incorporation de Env dans la particule virale Gag est une étape cruciale puisqu'elle confère aux virions néoformés la capacité d'infecter de nouvelles cellules cibles. Pourtant les mécanismes qui la président sont largement méconnus. La première partie de mon travail de thèse a permis d'identifier le premier cofacteur cellulaire, TIP47, requis pour l'incorporation de Env. TIP47 permet l'association entre Gag et Env en interagissant simultanément avec le domaine matrice de Gag et avec le domaine cytoplasmique de la sous-unité transmembranaire TMgp41 de Env. L'incorporation de Env VIH-1 est régulée par un mécanisme actif, dans lequel l'interaction entre Gag, TIP47 et Env joue un rôle central. TIP47 est essentiel pour l'incorporation de Env dans des virions produits par divers types cellulaires cibles du VIH-1 comme les lymphocytaires T CD4+ ou les macrophages primaires. La seconde partie de ma thèse a permis la caractérisation d'un nouveau groupe de partenaires du domaine cytoplasmique de la TMgp41 de Env VIH-1 : des facteurs de transcription ancrés dans le réticulum endoplasmique. Env peut ainsi participer à la régulation de diverses voies cellulaires. L'interaction de Env avec l'un de ces facteurs, Luman, inhibe son activation. Luman inhibe l'activité de transactivation des gènes du VIH-1 et Env semble contrecarrer cette inhibition. A l'inverse, ATF6 et SREBP, les deux autres facteurs, qui sont nécessaires pour la replication du virus, seraient quan à eux activés lors de l'infection du VIH-1
The formation of new infectious HIV-1 viruses requires the encounter between three major viral components: the envelope glycoprotein (Env), the Gag precursor and the genomic RNA. Env incorporation into the viral Gag particles is a crucial step since it confers to the newly formed virions the capacity to infect new target cells. Yet the mechanisms of Env incorporation are not well known. The first part of my thesis allowed us to identify the first cellular cofactor, TIP47, required for Env incorporation. TIP47 permits the association between Gag and Env by interacting simultaneously with the matrix domain of Gag and with the cytoplasmic domain of the transmembrane subunit TMgp41 of Env. HIV-1 Env incorporation is an active mechanism, in which the interaction between Gag, TIP47 and Env plays a central role. TIP47 is essential for Env incorporation into virions produced by différent target cells of HIV-1, as T CD4+ lymphocytes and primary macrophages. The second part of my thesis allowed the characterization of a new group of partners of the cytoplasmic domain of TMgp41 of HIV-1 Env: transcription factors anchored in the endoplasmic reticulum. Thus, Env can participate in the regulation of different cellular pathways. The interaction between Env and one of these factors, Luman, inhibits its activation. Luman inhibits the transcriptional activity of HIV-1 genes, and Env seems to counteract this inhibition. On the other hand, ATF6 and SREBP, the other factors we identified, are necessary for viral replication and might be activated during HIV-1 infection

Les cytopénies et pancytopénies régulièrement observées chez les individus infectés par les virus de l'immunodéficience humaine ou simienne suggèrent une atteinte centrale de l'hématopoïèse qui pourrait prendre part au déficit immunologique qui caractérise ces pathologies. Dans le modèle de l'infection expérimentale du macaque par le SIVmac251 nous montrons que l'atteinte clonogénique des progéniteurs CD34+, qui survient dès la primo-infection, est corrélée à une diminution des ARNm STAT5A et STATB. Ce défaut clonogénique des CSHs est complètement levé par une expression forcée de STAT5B. Nous montrons que la protéine virale Nef (HIV ou SIV) reproduit ex vivo l'atteinte clonogénique des cellules CD34+, que sa présence est nécessaire à l'altération de la clonogénicité des progéniteurs hématopoïétique in vivo et que cette action de la protéine Nef est dépendante du récepteur d'activation et de prolifération des peroxysomes gamma (PPAR-y). Ce travail apporte un nouvel éclairage sur le rôle primordial de la protéine Nef dans la pathologie des infections par le VIH ou le SIV et révèle un nouveau mécanisme de régulation de l'hématopoïèse précoce impliquant la voie de signalisation PPAR-y/STATS. Il ouvre des perspectives majeures sur l'utilisation thérapeutique de ligands de PPAR-y (antagonistes et agonistes) dans le cadre d'infections par le VIH ou le SIV mais également dans le domaine des hémopathies impliquant une dérégulation de STAT5. En ce sens, nous avons évalué le potentiel thérapeutique de l'activation de la voie de signalisation PPAR-y/STAT5 sur les CSLs associées à la maladie résiduelle de la LMC
Infection by HIV and SIV immunodeficiency virus induce multiple hematopoietic defects in Primates that reflect central hematopoietic disorders, which contribute to immunodeficiency in infected individuals. Here we show that CD34+ progenitor cells lost their clonogenic potential upon SIV infection, in parallel with down-regulation of STAT5A and STAT5B expression. This defect was entirely rescued by forced expression of STAT5B. We demonstrate that HIV/SIV Nef recapitulates SIV action on CD34+ progenitors ex vivo and is required for SIV action on hematopoietic progenitors in vivo. We further demonstrate that Nef activity strictly depends on thé presence of the peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR-y). Our findings extend the crucial role of Nef in HIV/SIV pathogenicity. They further reveal the pivotal role of PPAR-y/STAT5 pathway in regulating early hematopoiesis. They provide an avenue for exploration of the therapeutic benefits of PPAR-y antagonists in AIDS patients, and also of PPAR-y agonists in hematopoietic disorders. In this context, we particulary focused on therapeutic potential of PPAR-y/STAT5 pathway in Bcr/Abl leukemic stem cells

L'expression clinique de la drépanocytose est très variable et est modulée par des facteurs environnementaux et génétiques liés au locus α et/ou β globine. Cependant, d'autres facteurs génétiques modulateurs non liés aux loci globine sont mis en cause. Nous avons recherché l'existence d'une corrélation entre les polymorphismes de gènes candidats tels que : MBL2, RANTES, VCAM-1 et ET-1, et l'apparition des deux principales complications à savoir les crises vaso occlusives et les infections dans 2 populations : i) la population générale béninoise (adultes et enfants), ii) une cohorte d'enfants drépanocytaires homozygotes SS. Nous montrons : a) une sur-représentation du variant p. G57E du gène MBL2 à l'état hétérozygote chez les adultes non drépanocytaires versus les nouveaux nés contrôles (fréquence allélique, 30. 2% contre 25%, respectivement, p=0. 01). Ceci corrobore l'hypothèse d'un avantage sélectif conféré par ce variant en association avec un taux plasmatique abaissé de la protéine MBL ; b) un effet protecteur du variant g. Ln1. 1T>C de l'intron 1 du gène RANTES contre la susceptibilité aux infections chez les enfants SS. Il s'agit de la première étude mettant en évidence une association entre un variant de ce gène, codant pour une chimiokine pro inflammatoire et une atténuation d'une des complications de la drépanocytose. La mise en évidence de RANTES comme gène modulateur, contribue à améliorer la compréhension de la variabilité de l'expression clinique de la maladie. L'identification des patients susceptibles de développer des complications infectieuses permettrait de leur faire bénéficier d'une prise en charge préventive plus adaptée et plus ciblée
Clinical expression of sickle cell disease is quite variable. Interplay of both environmental and genetic factors, linked and unlinked to the globin loci (α and β clusters), indeed contribute to such variability. We focus our attention on the potential contribution of genetic modifiers unlinked to the two globin loci viz MBL2, RANTES, VCAM-1 and ET-1 to two major complications of sickle cell disease namely vaso occlusive crisis and susceptibility to severe infections in two population groups; an unselected benin general population and a clinically followed cohort of sickle cell children. We demonstrated a) an over representation of low MBL2 expressor p. G57E allele at heterozygote state in non sickle cell adults as compared to new born controls (30,2% versus 25% p=0. 01) suggesting a selective advantage ; b) protection against susceptibility to infections in sickle cell children by the variant g. Lnl. 1T>C allele of RANTES, highlighting, for the first time, an association between a pro inflammatory cytokine polymorphism and attenuation of one of the major complication of sickle cell disease. This surrogate marker may find clinical application in targeting susceptible patients eligible for efficacious anti infectious measures

La @glutathion S-transférase (GST) P1-1 est une enzyme associée à la carcinogenèse et au développement de résistance aux médicaments anticancéreux. Notre hypothèse de travail repose sur le fait que la différenciation cellulaire peut-être une approche thérapeutique dans le traitement des leucémies. Notre objectif est de savoir si l'expression du gène codant pour la GSTP1-1 est modulée au cours de la différenciation. Nos résultats montrent que l'expression de la GSTP1-1 est augmentée par des inducteurs de la différenciation érythroi͏̈de (anthracyclines, hémine) de la leucémie humaine K562, alors qu'elle est diminuée par le TPA qui induit la voie mégacaryocytaire dans ces cellules. L'induction de différenciation par le butyrate vers ces voies myéloi͏̈des s'accompagne d'une diminution de l'expression de l'ARNm de GSTP1-1. L'étude de la séquence promotrice du gène de la GSTP1-1 nous a permis de découvrir deux séquences GATA. La caractérisation des sites met en évidence un complexe résultant de l'interaction entre le site situé à -1208 et le facteur de transcription GATA-1, impliqué dans les processus de différenciation hématopoi͏̈étique. Avec les anthracyclines (aclarubicine et doxorubicine), le TPA et le butyrate, l'intensité de ce complexe est corrélée à l'expression de l'ARNm de GSTP1-1 et à la voie de différenciation induite. Dans le cas de l'hémine, c'est une stabilisation de l'ARNm de GSTP1-1 qui est à l'origine de l'accumulation d'ARNm observée. En conclusion, nous montrons que la GSTP1-1 est régulée au cours de la différenciation érythroi͏̈de et mégacaryocytaire de cellules leucémiques avec la participation probable de GATA-1
@Glutathione S-transferase (GST) P1-1 is an enzyme implicated in carcinogenesis and closely associated with the development of resistance to anti-cancer drugs. Our working hypothesis is based on the fact that the cellular differentiation can be used as a therapeutic approach in the treatment of leukaemias. We wanted to know if the GSTP1-1 expression is modulated during erythroid and megakaryocytic differentiation. Results show that its expression is increased during aclarubicine (acla), doxorubicin (dox) and hemin-induced erythroid differentiation of the human K562 cells (a pluripotent chronic myelogenous leukaemia). In contrast, GSTP1-1 expression is down-regulated during phorbol ester TPA-induced megakaryocytic differentiation of these cells. Moreover, time- and concentration-dependent activation of both erythroid and megakaryocytic differentiation pathways by butyric acid progressively inhibited GSTP1-1 expression. An analysis of the GSTP1-1 promoter sequence enabled us to discover two GATA sequences. By electrophoretic mobility shift assay, we determine the specificity of a GATA-1 binding on the site located at -1208. GATA-1 is known to be implicated in the process of hematopoietic differentiation and we show that GATA-1 promoter binding activity is correlated with the GSTP1-1 mRNA expression depending on the differentiation pathway induced by acla, dox, TPA and butyrate. A post-transcriptional stabilization of mRNA is involved in GSTP1-1 increase during hemin-induced erythroid differentiation. In conclusion, these results demonstrate the implication of GATA-1 transcription factor in differentiation-specific variations of GSTP1-1 expression

Notre programme de recherche est centre sur l'etude de l'organisation fonctionnelle du noyau de la cellule normale et de ses modifications induites par le developpement intranucleaire de virus a adn tels le virus herpes simplex type 1 (hsv-1) et l'adenovirus type 5 (ad5). Du fait de l'abondance des genomes viraux et de leurs intenses activites replicative transcriptionnelle, les cellules infectees par ces virus sont d'excellents modeles experimentaux pour l'etude du mode d'integration, au sein de la cellule, des diverses fonctions nucleaires directement liees a l'activite du genome, tels la replication, la transcription, la maturation des transcrits et leur transport nucleo-cytoplasmique. Cette etude a ete realisee au niveau ultrastructural et a necessite l'emploi de techniques variees, hautement specifiques et sensibles telle l'hybridation in situ. La maitrise des nombreuses techniques ultrastructurales, nous a permis de montrer que la replication et les diverses etapes de l'expression des genes cellulaires et viraux ont lieu dans des compartiments definis du noyau. Grace a l'utilisation d'une technique non radioactive, qui consiste en une incorporation breve de bromodesoxyuridine (brdu) par les cellules infectees, nous avons pu etudier la localisation precise des sites de replication des genomes d'adenovirus. Nous avons montre, d'une part, que les genomes en replication sont localises exclusivement dans un compartiment particulier du noyau infecte et, d'autre part, qu'un gradient d'intensite de la replication existe a l'interieur du foyer de replication. Par hybridation in situ a l'aide de sondes specifiques biotinylees, nous avons etudie la maturation des arn pre-messagers dans les cellules normales et infectees par hsv-1 et ad5. Ceci nous a permis de demontrer que les arn polyadenyles incluant les arn viraux s'accumulent dans les groupes de grains interchromatiniens, structures cellulaires connues pour leur role dans les etapes de pre- et post-epissage. Ces resu ltats suggerent que les groupes de grains interchromatiniens pourraient jouer egalement un role dans le transport intranucleaire des arn messagers cellulaires et viraux. L'etude des effets de l'infection sur le metabolisme du nucleole des cellules infectees par hsv-1 nous a permis de confirmer la localisation des genes ribosomiques dans les centres fibrillaires et a mis en evidence une retention anormale des arn ribosomiques dans le noyau infecte, ce qui suggere un ralentissement important de la vitesse de migration des sous-unites ribosomiques du noyau vers le cytoplasme. Nous avons demontre, en particulier, la presence d'arn ribosmiques dans les groupes de grains interchromatiniens, structures qui semblent impliquees egalement dans la migration intranucleaire des sous-unites ribosomiques. L'ensemble de nos travaux souligne la complexite du noyau dans lequel une compartimentation fonctionnelle peut neanmoins etre mise en evidence. Ils revelent, en particulier, que les groupes de grains interchromatiniens, en plus de leur role bien etabli dans la formation et/ou le recyclage des spiceosomes, pourraient etre des lieux de controle de la quantite d'arn messagers et d'arn ribosomiques devant quitter le noyau a un moment donne. Il n'est pas exclu toutefois que ces structures puissent etre impliquees egalement dans la degradation d'arns en surnombre ou defectueux. Nous envisageons de poursuivre l'etude de la compartimentation fonctionnelle du noyau dans la cellule infectee et, par comparaison, dans la cellule normale. Ceci afin de mieux connaitre la biogenese des ribosomes et les diverses etapes de la maturation et du transport des arn pre-messagers. L'accent sera mis sur la possibilite d'une coordination du transport des differentes especes d'arn (messagers, ribosomiques, arn de transfert, snrna). En outre, nous nous interesserons aux mecanismes de defense mis en place par la cellule pour resister a l'infection virale ainsi qu'aux mecanismes de resistance developpes par les virus.