Dissertations / Theses: 'Régulation négative du CD4'

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Helft, Julie. "Identification d'un nouveau mécanisme de régulation négative de la réponse lymphocytaire T CD4+." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05D037.

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Abstract:

Au cours de ma thèse, j'ai étudié les mécanismes de régulation de la phase d'expansion d'une réponse lymphocytaire T CD4+ in vivo. J'ai découvert un nouveau mécanisme de régulation qui s'intègre dans les données actuelles sur la régulation des réponses lymphocytaires T. Ce mécanisme permet l'adaptation de l'intensité de l'expansion à la quantité d'antigène par l'inhibition préférentielle de la prolifération des lymphocytes T activés, mais pas à celle des lymphocytes T naïfs. Cette inhibition est dominante et repose sur des interactions spécifiques entre les lymphocytes T activés. La spécificité antigénique de l'inhibition est liée à l'acquisition par les lymphocytes T des complexes CMH/peptide provenant des cellules dendritiques et dont ils sont spécifiques. Ce mécanisme d'inhibition permet d'expliquer que le nombre de lymphocytes T effecteur généré au cours d'une réponse immune soit proportionnel à la quantité d'antigène présente
Although T cells proliferate extensively during an immune response, they don't expand indefinitely. The mechanisms limiting the expansion are poorly understood, though the disappearance of antigen, or competition for limiting amounts of antigen, have been suggested. During my PhD, I studied the recruitment of antigen-experienced CD4 T cells into a localized immune response. We found that the recruitment of antigen experienced T cells is selectively inhibited compared to that of naïve T cells. This preferential inhibition begins as soon as day 2 of the immune response and takes place before antigen disappearance. Importantly, this inhibition is antigen specifie and relies on the presence of responding T cells that present MHCII/peptide complexes captured from their antigen presenting cells early in the response. This inhibition of antigen-experienced CD4 T cells proliferation by MHCII/peptide bearing T cells generates a negative feedback loop that regulates CD4 T cell proliferation

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Trucy, Maylis. "Evènements moléculaires impliqués dans la régulation négative de l'adhésion induite par CD4 : étude de leur localisation membranaire." Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066039.

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Lopez, Sébastien. "Etude de la régulation négative de l'expression des gènes interférons A." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05S001.

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Abstract:

Les interférons (IFN) constituent une famille de cytokines induites chez la plupart des vertébrés en réponse à une infection virale ou à un stimulus immunitaire. Ces protéines ont des propriétés antivirales, antiprolifératives, antitumorales et immunomodulatrices. Les différents membres de la famille multigénique des gènes IFN-a constituent un bon modèle pour étudier l'activation et la répression d'un gène eucaryote. Certains de ces gènes sont hautement inductibles par les virus alors que d'autres ne le sont pas. L'expression différentielle des gènes des IFN-a murins s'explique par des substitutions, d'une part dans les éléments proximaux de réponse aux virus (VRE) et, d'autre part dans des régions de régulation négative situées en amont du VRE. Nos études ont permis de déterminer dans le promoteur de L'IFN-a11 un élément silenceur désigné DNRE (distal négative regulatory element), nécessaire et suffisant pour la répression distale de l'expression du gène IFN-a11. Le même element est présent dans le promoteur de L'IFN-a4 hautement inductible. Cependant, dans le contexte du promoteur natif de L'IFN-a4. L'effet silenceur du DNRE est rendu inopérant par la présence d'une région antisilenceur centrale située entre l'element distal DNRE et l'element proximal VRE. Les mutations dans l'element DNRE, qui modifient la répression de l'activité transcriptionnelle du promoteur de L'IFN-a11 sont également capables de modifier la fixation des protéines sur l'element DNRE. Une de ces protéines est apparentée ou identique aux protéines hmg i(y) et ne semble pas être impliquée dans le mécanisme de répression étudié. Elle ne modifie pas la fixation sur le DNRE d'un facteur constitutif dont la masse moléculaire apparente est de 38 kda. Le clonage par le système simple hybride nous a permis d'isoler le facteur a homeodomaine humain backfoot/pituitary homeobox 1 (bft/ptx1) d'une masse moléculaire calculée voisine de 38 kda. Le facteur bft/ptx1 est capable de réprimer après induction virale les promoteurs proximaux des IFN-a11 et -a4 en présence de l'element DNRE. Nos résultats suggèrent que le facteur bft/ptx1 ou un facteur de la famille ptx est impliqué dans la répression des promoteurs des IFN-a.

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Nguyen, Nathalie. "Régulation négative de l'activité des canaux calciques : identification de deux nouveaux frins biologiques." Thèse, Université de Sherbrooke, 2013. http://hdl.handle.net/11143/6248.

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Abstract:

Le Ca[indice supérieur 2+] joue un rôle primordial dans plusieurs processus physiologiques comme la contraction, la sécrétion, la croissance et la prolifération cellulaire et même l’apoptose. Ainsi, une régulation adéquate des niveaux de Ca[indice supérieur 2+] dans la cellule est essentielle à son bon fonctionnement. Plusieurs protéines-clés sont impliquées dans cette homéostasie calcique. Cette étude a permis d’identifier deux mécanismes distincts responsables de friner la signalisation calcique dans un modèle de cellules non-excitables et dans un modèle de cellules excitables, en mettant l’emphase sur la régulation des canaux calciques par leur interaction avec des protéines clés. Le premier mécanisme implique la régulation du récepteur à l’inositol 1,4,5-trisphosphate (IP[indice inférieur 3]R) par la protéine chaperonne Hsp90 dans les cellules HEK293T. J’ai montré que Hsp90 interagit avec l'IP[indice inférieur 3]R dans le but de diminuer son activité. De plus, cette interaction dépend de la voie de signalisation de l’insuline, plus particulièrement des protéines kinases mTOR et Src, qui sont impliquées dans cette interaction. Ainsi, l’interaction entre Hsp90 et l'IP[indice inférieur 3]R fait partie d’un mécanisme de rétroaction négative de la voie de signalisation de l’insuline. Le second mécanisme implique la régulation des canaux calciques dépendants du voltage de type T (T-VDCC) par la protéine STIM1 dans les cardiomyocytes HL-1. J'ai montré que STIM1, qui est le principal senseur de Ca[indice supérieur 2+] du réticulum sarco/endoplasmique, interagit avec les T-VDCC afin de diminuer leur expression à la membrane cellulaire et ainsi atténuer leur activité. Cette interaction permet de prévenir une entrée excessive de Ca[indice supérieur 2+] dans la cellule menant à une surcharge de Ca[indice supérieur 2+] dans le réticulum sarcoplasmique et, par le fait même, à des événements arythmiques associés à la surcharge. Bien que ces deux études aient été effectuées dans des environnements différents, soit un modèle de cellules non-excitables et un modèle de cellules excitables, elles mettent en évidence deux mécanismes pouvant friner la signalisation calcique dans le but d’assurer une fonction normale à la cellule.

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Fournier, Emilie. "Régulation positive et négative de l'activation des lymphocytes B humains normaux et pathologiques." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066150.

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Abstract:

L’immunité humorale fournit à l’organisme des armes solubles et spécifiques permettant de combattre les infections et d’en conserver une mémoire immunologique. Les travaux de cette thèse ont porté sur l’étude de la régulation positive et négative de l’activation des lymphocytes B lors des réponses immunes humorales. En effet, les membres de la famille du TNF (Tumor Necrosis Factor) tels que le CD40L et BAFF, sont capables d'amplifier la prolifération et de renforcer la survie des cellules B activées par l’antigène. Inversement, le RFcIIB1 assure un rétro-contrôle négatif de l’activation des lymphocytes B. Tout d’abord, ce travail a permis de montrer que l’engagement unique du RFcIIB1 à la surface de lymphocytes B humains IgM+, sans co-agrégation avec le BCR (B-cell antigen receptor), active la phosphorylation du récepteur et permet le recrutement de la phosphatase SHIP1. Cette agrégation suffit à inhiber l’influx calcique et la prolifération des cellules B IgM+ de manière réversible sans induire d’apoptose. Ces résultats m’ont permis de suggérer que l’agrégation seule du RFcIIB1 pourrait réguler négativement l’activation des lymphocytes B humains naïfs IgM+ sans induire leur apoptose. Puis, en collaboration avec l’équipe du Dr. Srini Kaveri, nous avons montré que les anti-CD40 contenus dans les IVIg (Intavenous Immunoglobulin), utilisées en thérapie de remplacement chez les patients atteints de Déficit Immunitaire Commun Variable, induisent la prolifération et la sécrétion d’immunoglobulines par des cellules B issues de ces patients. Ces observations suggèrent que ces anticorps pourraient participer à l’efficacité des IVIg en compensant le défaut de signalisation via le CD40 observé chez ces patients. Enfin, en collaboration avec le Dr. Chris Mueller, cette étude a permis de mettre en évidence que les cellules CD14+ présentes dans le stroma tumoral des Lymphomes Diffus à Grandes Cellules B favorisent la survie et la prolifération des cellules B tumorales via la production de la molécule BAFF.

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Chouayekh, Hichem. "Caractérisation et élucidation de la fonction biologique de deux gènes sblA et ppk dont l'interruption a respectivement un effet sur la sporulation et la production d'antibiotiques chez Streptomyces lividans TK24." Paris 11, 2002. http://www.theses.fr/2002PA112006.

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Abstract:

Les Streptomyces sont des bactéries du sol à Gram+ caractérisées par une cycle de différenciation complexe commençant par la germination d'une spore qui donne naissance à un mycélium basal à partir duquel s'érigeront des hyphes aériens qui se différencieront en spores. Les phases tardives du développement du mycélium aérien s'accompagnent de la production de nombreux antibiotiques d'importance industrielle. Nous avons caractérisés deux nouveaux gènes ppk et sblA jouant respectivement un rôle dans la production d'antibiotiques et la sporulation. Une souche ppk est caractérisée par une production accrue des trois antibiotiques produits par S. Lividans (actinorhodine, undécylprodigiosine et antibiotique dépendant du calcium) qui est corrélée avec une forte augmentation de la transcription des activateurs spécifiques de ces voies de biosynthèse. Ppk code une polyphosphate kinase qui catalyse la polymérisation du phosphate de l'ATP en polymères de phosphate (polyP) ainsi que la régénération de l'ATP à partir d'ADP et de polyP. Ppk est transcrit de façon monocistronique à partir d'un promoteur unique et sa transcription est déclenchée par une carence en Pi. Une souche sblA ̄sporule beaucoup plus tôt qu'une souche sauvage. SblA code une protéine possédant une activité phosphoinositide hydrolase/phosphatase. L'expression de sblA est transitoire (durant 6 à 8 h), a lieu principalement durant le développement du mycélium basal et est régulée négativement par deux mécanismes différents. Le premier mécanisme implique une région opératrice, constituée de 9 répétitions directes de la séquence 5'C(C/G)GGAGG(C/T)3', localisée en amont de la région -35 du promoteur et constituant le site de fixation d'un répresseur. Le deuxième mécanisme implique une structure tige-boucle de 23 nt contenant une séquence 5' AGGAGG 3' de type RBS, localisée à 170 pb en deça du codon d'initiation de la traduction et sans doute impliquée dans la régulation de la dégradation spécifique du transcrit sblA
Streptomyces are Gram+ soil bacteria characterized by a complex differentiation cycle beginning by the germination of a spore developing in a substrate mycelium growing within the nourishing medium and giving raise, after a short pause in the growth, to an aerial mycelium that will differentiate into spores. The late stages of this development are accompanied by the biosynthesis of many antibiotics of industrial importance. We have characterized two new genes ppk and sblA affecting respectively antibiotic production and sporulation in S. Lividans. An sblA ̄strain sporulates much earlier than the wild type strain. SblA encodes a protein possessing a specific phosphoinositide hydrolase/phosphatase activity. The expression of sblA is transitory (lasting 6 to 8 hours), taking place mainly during the development of the substrate mycelium and being negatively regulated by two different regulatory mechanisms. The first one involves an operator region, constituted by 9 direct repeats of the sequence 5'C(C/G)GGAGG(C/T)3', located upstream of the promoter region and likely to constitute a binding site for a transcriptional repressor. The other one involves a 23nt stem-loop structure containing a RBS-like sequence 5'AGGAGG 3', located 170 bp downstream of the GTG start codon and is thought to play a role in the regulation of the specific degradation of the sblA transcript. A ppk- strain is characterized by an enhanced production of the three antibiotics produced by S. Lividans (actinorhodin, undecylprodigiosin and calcium-dependent antibiotic) that correlates with an increased transcription of the specific transcriptional activators of the corresponding biosynthetic pathways. Ppk encodes a polyphosphate kinase catalysing the polymerisation of the γ phosphate of ATP into polymers of phosphate (polyP) as well as the regeneration of ATP from ADP and polyP. Ppk is transcribed as a monocistronic mRNA from a unique promoter sequence and its transcription is triggered by Pi starvation

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Humblin, Etienne. "Étude de la régulation transcriptionnelle des lymphocytes Th9." Thesis, Bourgogne Franche-Comté, 2017. http://www.theses.fr/2017UBFCI006/document.

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Abstract:

Les lymphocytes T CD4+ auxiliaires ou T helper en anglais sont capables de soutenir une grande diversité de fonctions grâce à leur capacité à se différencier en différents sous-types effecteurs en fonction de l’antigène rencontré et de l’environnement cytokinique dans lequel ils se trouvent. Les connaissances actuelles sur la différenciation des cellules T helper mettent en avant l’existence de réseaux transcriptionnels particulièrement complexes et spécifiques à chaque sous-ensemble T helper. En 2008, les cellules T CD4 sécrétrices d’IL-9 (Th9) sont identifiées comme un nouveau sous-type de cellules T helper. Différenciées en présence d’IL-4 et TGF-β, les cellules Th9 sécrètent de l’IL-9 et de l’IL-21, et contribuent au développement de maladies auto-immunes et allergiques. Les lymphocytes Th9 présentent également des propriétés anti-tumorales particulièrement intéressantes.Le réseau transcriptionnel des cellules Th9 résulte d’un équilibre entre les voies de signalisation induites par les différentes cytokines nécessaires à sa polarisation. L’IL-4 permet l’activation de STAT6 et l’expression de GATA3 et IRF4, tandis que le TGF-β conduit à l’activation de la voie des Smad et l’expression du facteur PU.1. Le module transcriptionnel IRF4/BATF ainsi que le facteur PU.1 sont des messagers indispensables au développement des cellules Th9 et à la sécrétion d’IL-9.IRF8 est un facteur de transcription critique pour le développement des cellules myéloïdes et des lymphocytes B. Récemment, il est apparu qu’IRF8 était impliqué dans la polarisation de sous-ensembles T helper. En effet, IRF8 limite la sécrétion d’IL-17 par les cellules Th17, de même qu’il réprime l’expression de l’Il4 et l’Il17 dans les cellules Treg. Structurellement proche d’IRF4, IRF8 interagit avec des cofacteurs tels que PU.1 ou BATF afin de réguler l’activité transcriptionnelle.Ce travail présenté ici révèle que le facteur IRF8 participe à la polarisation des cellules Th9 in vitro et in vivo. Le TGF-β nécessaire à la différenciation des cellules Th9 régule directement l’expression d’Irf8 grâce à l’activation de Smad3. Comme dans d’autres types cellulaires, la fonction transcriptionnelle d’IRF8 est dépendante de ces partenaires d’interaction. Nous montrons qu’en présence des facteurs PU.1, IRF4 et BATF, IRF8 participe à un complexe multiprotéique nécessaire à l’induction des cytokines caractéristiques des cellules Th9, notamment l’Il9 et l’Il21. Nous démontrons également qu’en présence de la protéine ETV6, IRF8 est capable de former un complexe initiant la répression de l’activité transcriptionnelle de l’Il4. Nous soulignons ainsi le rôle bivalent joué par IRF8 dans le développement des cellules Th9 dépendamment de ses partenaires. Pour finir, l’expression d’Irf8 est nécessaire aux cellules Th9 pour exercer leurs fonctions anti-tumorales
CD4 helper T cells support a wide range of functions due to their ability to differentiate into different effector subsets depending on the antigen encountered and the cytokine environment in which they are. Current knowledge on the differentiation of helper T cells highlights the existence of complex transcriptional networks specific to each T helper subset. In 2008, IL-9 secreting CD4 T cells (Th9) are identified as a new helper T cell subtype. Differentiated in the presence of IL-4 and TGF-β, Th9 cells secrete IL-9 and IL-21, and contribute to the development of autoimmune and allergic diseases. Th9 lymphocytes also exhibit strong anti-tumor properties.The transcriptional network of the Th9 cells results from a balance between the signaling pathways induced by the different cytokines required for its polarization. IL-4 allows activation of STAT6 and expression of GATA3 and IRF4, whereas TGF-β leads to activation of the Smad pathway and expression of the transcription factor PU.1. The IRF4 / BATF transcriptional module and the PU.1 factor are essential messengers for the development of Th9 cells and IL-9 secretion.IRF8 is a crucial transcription factor for the development of myeloid cells and B lymphocytes. Recently it appeared that IRF8 was involved in helper T subset polarization. Indeed, IRF8 limits the secretion of IL-17 by Th17 cells, as well as repressing the expression of Il4 and Il17 in Treg cells. Structurally close to IRF4, IRF8 interacts with cofactors such as PU.1 or BATF in order to regulate transcriptional activity.This work reveals that the IRF8 transcription factor contributes to the polarization of Th9 cells in vitro and in vivo. The TGF-β needed for Th9 cell differentiation activate Smad3 pathway which directly modulates the Irf8 expression. As in many cellular subtypes, the transcriptional function of IRF8 is dependent on these interaction partners. We show that in the presence of the transcription factors PU.1, IRF4 and BATF, IRF8 participates in a multiprotein complex essential for the induction of the Th9 cytokines, Il9 and Il21. We also demonstrate that in the presence of the ETV6 protein, IRF8 is able to form a complex responsible for the repression of Il4 expression. We underline the bivalent role played by IRF8 in the development of Th9 cells depending on its partners. Finally, expression of Irf8 is crucial for Th9 cells to exercise their antitumor functions

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Bajénoff, Marc. "Etude de la régulation de la réponse T CD4+ in vivo." Aix-Marseille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003AIX22019.

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Binet, Bénédicte. "Régulation épigénétique de la programmation des lymphocytes T CD4 par SETDB1." Thesis, Toulouse 3, 2017. http://www.theses.fr/2017TOU30217.

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Abstract:

Chez les mammifères, les lymphocytes T CD4 sont essentiels à la défense de l’organisme contre des infections par des pathogènes ou le développement de tumeurs. Après activation, les lymphocytes T CD4 naïfs ont la capacité de se différencier en divers lymphocytes T helper (Th1, Th2, Th17…) en fonction des signaux reçus. Le choix du lignage permet d’adapter le phénotype et la fonction des cellules au type de danger détecté. Le processus de différenciation des lymphocytes T helper implique l’établissement de programmes d’expression des gènes distincts. La dynamique et la stabilité de ces programmes sont notamment régulées par l’activité d’éléments cis-régulateurs. Le but de ma thèse était de comprendre les mécanismes épigénétiques qui contrôlent la programmation des lymphocytes T CD4. Dans cet objectif, nous avons étudié le rôle de la H3K9 méthyl-transférase SETDB1 dans la différenciation des lymphocytes T CD4 en Th1 et Th2, deux lignages T helper fortement antagonistes. Nous avons découvert que SETDB1 réprime de manière critique le programme d’expression des gènes Th1. En effet, en l’absence d’expression de Setdb1, la différenciation Th1 est exacerbée. De plus, lorsqu’elles sont exposées à un signal pro-Th1, les cellules Th2 franchissent les barrières de lignage et se transdifférencient en Th1. De manière surprenante, SETDB1 ne cible pas directement les enhancers Th1. Au contraire, l’enzyme dépose de manière type cellulaire spécifique la marque répressive H3K9me3 au niveau d’un set restreint de rétrovirus endogènes (ERVs). Des analyses bio-informatiques ont indiqué que les rétrotransposons ciblés sont fortement associés à des gènes impliqués dans les processus immunitaires. La suite de ces analyses a indiqué que ces ERVs flanquent et répriment l’activité d’éléments cis-régulateurs des gènes Th1, ou agissent eux même comme des enhancers du lignage. En conclusion, la déposition de H3K9me3 par SETDB1 garantit l’intégrité des lymphocytes T helper en réprimant un panel d’ERVs qui ont été exaptés en modules cis-régulateurs pour façonner et contrôler le réseau de gènes Th1
CD4 T lymphocytes play a central role in the defense of mammal organisms against infections by pathogens and the development of tumors. Upon activation, naïve CD4 T cells differentiate into distinct helper cell subsets depending on environmental cues. T helper cells are key players of the immune system as they finely orchestrate immune responses in a danger-adapted manner. The process of T helper differentiation relies on the establishment of complex and lineage-specific gene expression programs. The dynamics and stability of these programs are regulated at the chromatin level through epigenetic control of cis-regulatory elements. My thesis objective was to investigate the epigenetic pathways involved in the regulation of enhancer activity in CD4 T cells. In this purpose, we studied the role of the H3K9 specific methyltransferase SETDB1 in the differentiation of Th1 and Th2 cells, which are strongly antagonistic. We report that SETDB1 critically represses the Th1 gene expression program. Indeed, Setdb1-deficient naïve T cells show exacerbated Th1 priming. Moreover, when exposed to a Th1-instructive signal, SETDB1-deficient Th2 cells cross lineage boundaries and transdifferentiate into Th1 cells. Surprisingly, SETDB1 does not directly target Th1 enhancers to heterochromatin. Instead, SETDB1 deposits the repressive H3K9me3 mark at a restricted and cell type specific set of endogenous retroviruses, strongly associated with genes involved in immune processes. Further bioinformatic analyses indicated that these retrotransposons flank and repress Th1 gene cis-regulatory elements or behave themselves as Th1 gene enhancers. Thus, H3K9me3 deposition by SETDB1 ensures T cell lineage integrity by repressing a repertoire of ERVs that have been exapted into cis-regulatory modules to shape and control the Th1 gene network

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Forget, Geneviève. "Étude des mécanismes de régulation négative utilisés par Leishmania pour contrer la réponse immunitaire innée." Thesis, Université Laval, 2004. http://www.theses.ulaval.ca/2004/21419/21419.pdf.

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Abstract:

Leishmania est un parasite intracellulaire reconnu pour sa capacité à inhiber sa cellule hôte, le macrophage, et ainsi favoriser sa survie. Il parvient principalement à altérer des fonctions impliquées dans l’action microbicide du phagocyte (dont le monoxyde d’azote (NO)) ou dans la réponse immunitaire. On a associé ce phénomène à l’altération de plusieurs voies de signalisation de la cellule telles celles dépendantes du Ca2+, de la PKC, de JAK2/STAT1α et de ERK1/2. Il a précédemment été démontré que le parasite pouvait, en outre, induire l’activité des phosphotyrosines phosphatases (PTP) et plus spécialement celle de la PTP SHP-1. On reconnaît cette dernière comme un puissant inhibiteur de la signalisation cellulaire dépendante des tyrosines kinases. De plus, l’usage d’inhibiteurs de PTP a démontré l’importance de ces dernières dans la survie du parasite in vivo et in vitro. C’est pourquoi l’objectif de la présente thèse était de vérifier le rôle de la SHP-1 dans la survie du parasite in vivo et in vitro mais également dans l’inactivation du macrophage provoquée par l’infection. Pour ce faire, des souris déficientes en SHP-1, les viable motheaten, et des macrophages dérivés de celles-ci ont été infectés par Leishmania. In vivo, l’infection et l’inflammation chez les souris déficientes en SHP-1 étaient quasi inexistantes, grâce à l’action des cellules inflammatoires, surtout les neutrophiles, et à l’augmentation de la production de NO. Ce recrutement inflammatoire accru était causé par l’élévation des taux de cytokines pro-inflammatoires et de chimiokines. In vitro, l’absence de la SHP-1 empêchait la survie du parasite selon des mécanismes dépendants et indépendants de la production de NO. Le rôle de la SHP-1 dans l’inhibition de cette production se situait au niveau de l’inactivation des kinases JAK2 et ERK1/2 et des facteurs de transcription NF-κB et AP-1. Par contre, l’inactivation spécifique du facteur de transcription STAT1α ne dépendait pas de l’activité de la SHP-1 mais plutôt de celle des protéasomes cellulaires. En définitive, cette thèse démontre que l’activation de la SHP-1 est essentielle à la survie de Leishmania et à sa propagation, mais qu’il parvient également à inactiver le macrophage en favorisant la dégradation de STAT1α par les protéasomes.
The intracellular protozoan parasite Leishmania has been known for its ability to evade its host immune response principally by inhibiting phagocyte functions. Indeed, infected macrophages show a loss of microbicidal (NO, oxygen intermediates) and immunological activities (IL-1, IL-12, MHC). This allows for its replication and invasion of the host. These dysfunctions are correlated by alterations in signalling cascades depending on Ca2+, PKC, JAK2/STAT1α and MAPK ERK1/2. It has also been reported that Leishmania infection could induce the macrophage phosphotyrosine phosphatase (PTP) activity and more specifically that of PTP SHP-1, a strong negative regulator of tyrosine kinase-dependent pathways. Moreover, the use of PTP inhibitors showed their essential role in parasite survival both in vivo and in vitro. These results suggested a potential role for SHP-1 in parasite survival and in the inhibition of macrophages. To address this issue, SHP-1-deficient mice, the viable motheaten mice, and their bone marrow-derived macrophages were infected with Leishmania. Results show that footpad inflammation was virtually absent in SHP-1-deficient mice and depended on inducible nitric oxide synthase increased activity as well as inflammatory cells recruitment, especially neutrophils. This recruitment seemed to be due to increases in pro-inflammatory cytokines expression and secretion and in chemokine gene expression. SHP-1-deficient mice had both more inflammatory cells numbers and a higher ratio of neutrophils, recognized for their microbicidal action against Leishmania. In vitro, SHP-1 activity seemed essential for parasite survival by allowing the attenuation of NO-dependent and -independent mechanisms. Furthermore, its alteration of NO generation in infected cells was due to the dephosphorylation of JAK2 and ERK1/2 as well as inhibition of transcription factors NF-κB and AP-1. However, SHP-1 was not responsible for the inhibition of transcription factor STAT1α seen in infected macrophages. This phenomenon seemed due to specific proteasomal degradation of the protein. Overall, the present thesis demonstrates that Leishmania is a versatile parasite able to use several strategies to alter its host responsiveness, two of them being the essential activation of SHP-1 and the targeting of STAT1α to the proteasomal degradation pathway.

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Martin, Bruno. "Auto-réactivité des lymphocytes T CD4+ périphériques : mise en évidence et régulation." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N02S.

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Abstract:

L'auto-immunité a souvent été considérée comme résultant de cellules ayant échappé à la sélection négative dans le thymus ou résultant de l'expression anormale d'auto-antigènes à la périphérie. Cependant, au cours de ma thèse, nous avons pu constater que l'autoréactivité n'était pas un accident. En effet, la reconnaissance du soi est généralisable à la majoritée du répertoire T périphérique et intervient dans la survie des cellules T périphériques. Ainsi, comme lors de leur génération dans le thymus, les lymphocytes T sont sélectionnés pour leur capacité à interagir avec le soi à la périphérie. Néanmoins, l'autoréactivité "naturelle" de ces cellules peut, dans un environnement lymphopénique, représenter un danger pour l'organisme. Danger se traduisant par la très forte prolifération d'une partie des cellules T. Enfin, nous avons montré que les cellules T régulatrices CD4+ CD25+ contrôlaient l'autoréactivité "naturelle" des cellules T pour maintenir en périphérie la tolérance vis à vis du soi.

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Bossennec, Marion. "Caractérisation et régulation des lymphocytes T CD4+CD73+ en contextes physiologique et pathologique." Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSE1159.

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Abstract:

L'étude des populations de lymphocytes T CD4+ effecteurs (Teff) chez l'Homme présente un intérêt croissant dans les enjeux actuels que constitue l'élaboration de nouvelles immunothérapies. Ces travaux détaillent la caractérisation et la régulation d'une population de Teff exprimant l'ecto-nucléotidase CD73 ayant pour fonction de dégrader l'AMP extracellulaire en adénosine (Ado) immunosuppresseur. Cette population, enrichie en lymphocytes T helper de type Th1.17, est très polyfonctionelle et pro-inflammatoire. Les Teff CD73+ expriment peu de points de contrôles immunitaires inhibiteurs mais sont régulés par leur production autocrine d'Ado qui limite leurs fonctions effectrices et leurs capacités prolifératives. Les Teff CD73+ expriment par ailleurs fortement le transporteur ABC multidrug-resistance 1 (MDR1), responsable de l'exclusion de nombreuses drogues du cytoplasme des cellules. L'étude de cette population dans différents contextes pathologiques a permis de détailler le fonctionnement de cette population. J'ai pu mettre en évidence que l'expression de CD73 est en effet dynamique. Elle est notamment diminuée dans des pathologies arthritiques auto-immunitaires (la polyarthrite rhumatoïde et le rhumatisme psoriasique) dans lesquelles les Th17 et les Th1.17 sont fortement activés. La diminution d'expression de CD73 sur ces cellules constitue la levée d'un frein qui leur permet de contribuer pleinement à l'inflammation chronique caractérisant ces pathologies. Les Teff CD73+, présents dans les tumeurs solides humaines de sein et d'ovaire, pourraient en revanche présenter un avantage sélectif en contexte tumoral de par leur expression de MDR1 leur permettant de résister aux traitements de chimiothérapie. Ces traitements substrats de MDR1, combinés à des thérapies inhibant la fonction enzymatique de CD73, pourrait permettre la restauration d'une réponse immunitaire anti-tumorale efficace médiée par cette population pro-inflammatoire
Requirement for CD4+ effector T lymphocytes (Teff) comprehensive study in human is increasing since it can contribute to the emergence of new immunotherapy strategies. This work brings up important information concerning the characterization and regulation of a Teff population expressing the CD73 ecto-nucleotidase, which is able to degrade extracellular AMP into immunosuppressive adenosine (Ado). This population, highly polyfunctional and pro-inflammatory, is enriched in Th1.17 cells. CD73+ Teff express low levels of inhibitory immune checkpoints but are negatively regulated by the autocrine Ado production that limits their pro-inflammatory function and proliferative capacities. In addition, CD73+ Teff express high levels of the ABC transporter multi-drug resistance 1 (MDR1), responsible for the exclusion of cellsâ€™ cytoplasm of many drugs. The study of this population in different pathological contexts enabled to decipher its functions. I could evidence that CD73 expression is dynamic. CD73 is notably decreased in autoimmune arthritic pathologies (rheumatoid arthritis (RA) and psoriatic arthritis (PsA)) in which Th1.17 and Th17 are highly activated. CD73 decreased expression by these cells is a mechanism that alleviates self-inhibition by autocrine Ado production and enables them to fully contribute to chronic inflammation characterizing these pathologies. In tumor context, CD73+ Teff present in breast and ovarian tumors could on the contrary bear a selective advantage due to their high MDR1 expression enabling them to resist MDR1 substrates-based chemotherapy treatments. These chemotherapy treatments combined to therapies blocking CD73 enzymatic function could allow the restauration of an efficient anti-tumor immune response

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Morissette, Audrey. "Caractérisation du mécanisme de régulation négative de l'ARNm hns par le petit ARN régulateur DsrA chez Escherichia coli." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2010. http://hdl.handle.net/11143/5572.

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Abstract:

DsrA est un petit ARN régulateur que l'on retrouve chez plusieurs espèces bactériennes, notamment Escherichia coli non-pathogène et pathogène. DsrA est exprimé principalement lorsque la bactérie est dans un environnement température suboptimale (<37 [degrés Celsius]). En conditions d'expression de DsrA, on retrouve une forme pleine longueur de 85 nucléotides et une forme tronquée de 60 nucléotides. Il a été montré que DsrA, dans sa forme pleine longueur ou tronquée, peut diminuer l'initiation de la traduction de l'ARNm hns , codant pour la protéine H-NS, un régulateur majeur de la transcription qui module près de 5% des gènes chez E. coli . Toutefois, les mécanismes impliqués dans la répression traductionnelle d'hns par DsrA n'ont pas été caractérisés. Les travaux présentés dans ce mémoire démontrent que DsrA bloque l'initiation de la traduction d'hns en s'appariant immédiatement en aval du codon d'initiation de la traduction. De plus, DsrA provoque la dégradation de l'ARNm hns en recrutant le complexe dégradosome ARN. La RNase E, qui fait partie de ce complexe, va cliver l'ARNm au nucléotide 131 dans la région codante du gène, soit 80 nucléotides en aval de l'appariement entre hns et DsrA. Ce clivage va provoquer la dégradation rapide de l'ARNm hns par les exoribonucléases de E. coli . Mes travaux de maîtrise ont abouti à un modèle d'action de DsrA sur hns qui pourrait inclure les autres cibles négatives de DsrA. De plus, ils suggèrent que les sRNA semblent partager le même mécanisme général de dégradation des ARNm. Ces travaux démontrent également que l'extrémité 5' de DsrA tronqué est monophosphate ce qui suggère un clivage par une ribonucléase. Toutefois aucune ribonucléase connue d' E. coli ne semble produire la forme tronquée de DsrA, bien que l'exoribonucléase PNPase semble influencer sa dégradation. Ces travaux démontrent également l'impact des protéines RppH et CsdA dans la dégradation de l'ARNm hns à 25 [degrés Celsius], c'est-à-dire lorsque DsrA est naturellement exprimé. Ces protéines sont importantes pour la stabilité de hns et pour sa dégradation en présence de DsrA. Toutefois, le mécanisme d'action de ces protéines n'a pas été déterminé.

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Vahlas, Zoï. "Régulation métabolique de l'infection des cellules T CD4 par VIH-1 : vers de nouvelles cibles thérapeutiques." Thesis, Montpellier, 2020. http://www.theses.fr/2020MONTT009.

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Abstract:

La susceptibilité des lymphocytes T CD4 (LT) à l'infection par VIH-1 est régulée par le métabolisme du glucose et de la glutamine. Cependant, les contributions relatives de ces nutriments à l'infection étaient peu connues lorsque j’ai débuté ma thèse. Au cours de mes travaux, j'ai identifié la glutaminolyse comme une voie majeure alimentant la phosphorylation oxydative (OXPHOS) dans les sous-populations de LT activés naïves et mémoires, et j'ai découvert que l'induction de ce réseau métabolique est nécessaire pour une infection optimale par VIH-1. J’ai constaté qu’en condition limitante en glutamine, l’α-kétoglutarate (α-KG), un intermédiaire du cycle TCA (TriCarboxylic Acid) issu de la glutaminolyse, constitue un facteur clé de l'infection des LT CD4 par VIH-1. L'ajout d’α-KG exogène induit une augmentation rapide du ratio OXPHOS/glycolyse et rend les LT naïfs et mémoires plus susceptibles à l’infection. Par ailleurs, l’inhibition du flux glycolytique du pyruvate vers le lactate induit une augmentation de l'OXPHOS et de l'infection des LT CD4 par VIH-1. En accord avec ces données, les LT CD4 infectés présentent une augmentation de la biomasse et de l'activité mitochondriale en comparaison à leurs homologues non infectés. Ces données identifient l'équilibre OXPHOS/glycolyse aérobie comme un élément clé de l'infection des LT par VIH-1.Afin de mieux appréhender les voies métaboliques régulant l'infection des LT par VIH-1, j'ai développé une approche complémentaire basée sur l’utilisation de shRNA ciblant spécifiquement les transporteurs de nutriments GLUT1, ASCT2 et CAT1, permettant notamment le transport du glucose, glutamine et arginine dans la cellule, respectivement. Ainsi, j’ai observé une diminution de la survie d’environ 80% des cellules shRNA+, témoignant ainsi de l’importance de ces transporteurs lors de l’activation de ces cellules. Cependant, la permissivité des LT CD4 à l’infection par VIH-1 est impactée différemment par la diminution de l’expression des transporteurs de nutriments. Conformément aux données présentées ci-dessus, l’inhibition de GLUT1 n'a pas eu d'impact significatif sur l'infection par VIH-1, tandis que l’inhibition de CAT1 a réduit de manière significative l’OXPHOS ainsi que l'infection par VIH-1 (de 35 %). Il est toutefois surprenant de constater que l’inhibition d’ASCT2 entraîne une augmentation de l'infection de 20 %. Cela était associé à une persistance significativement plus élevée des cellules T naïves dont l’expression d’ASCT2 était inhibée, par rapport aux LT mémoires. Ces données mettent ainsi en évidence l’importance relative de ces 3 transporteurs de nutriments dans la survie des LT naïfs par rapport aux LT mémoires et démontrent leur impact spécifique sur la permissivité de ces populations à l'infection par VIH-1.En conclusion, en utilisant deux approches complémentaires, mes travaux de thèse révèlent l'impact critique de l'état énergétique d'une cellule T CD4 sur sa susceptibilité à l'infection par VIH-1. Mes données mettent en évidence l'importance du métabolisme mitochondrial, avec un environnement riche en intermédiaires du cycle du TCA comme l’α-KG, dans la régulation de la sensibilité des LT à l'infection par VIH-1. En outre, l'expression des transporteurs de nutriments impacte différentiellement la sensibilité des LT naïfs et mémoires à l'infection par VIH-1. Ces études offrent donc de nouvelles perspectives utilisant le métabolisme pour le développement de stratégies thérapeutiques ciblées contre l'infection par VIH-1
The susceptibility of CD4 T cells to HIV-1 infection is regulated by glucose and glutamine metabolism, but the relative contributions of these nutrients to infection are not known. During my PhD, I identified glutaminolysis as a major pathway fueling oxidative phosphorylation (OXPHOS) in activated naïve as well as memory CD4 cell subsets, and found that induction of this metabolic network is required for optimal HIV-1 infection. Moreover, we determined that under conditions of attenuated glutaminolysis, the α-ketoglutarate (αKG) TCA (tricarboxylic acid) cycle intermediate is a rate-limiting step in infection; exogenous α-KG directly increased OXPHOS and rendered both naïve and memory CD4 T cells significantly more sensitive to infection. Furthermore, blocking the glycolytic flux of pyruvate to lactate resulted in an increased OXPHOS and a significantly augmented level of HIV-1 infection. In agreement with these data, infected CD4 T cells exhibited increased mitochondrial biomass and respiration as compared to their non-infected counterparts. These data identify the OXPHOS/ aerobic glycolysis balance as a major regulator of HIV-1 infection in CD4 T lymphocytes.In order to gain more insight into the metabolic pathways regulating HIV-1 infection in CD4 T cells, we developed a complementary approach to target upstream processes, specifically altering glucose (GLUT1), glutamine (ASCT2), and arginine (CAT1) transporter expression by lentiviral-mediated delivery of specific shRNAs. Testifying to the importance of these transporters, CD4 T cells with downregulated expression of either GLUT1, ASCT2 or CAT1 were negatively selected, resulting in a loss of approximately 80% of shRNA-transduced cells within 14 days. Notably, the permissivity of CD4 T cells to HIV-1 infection was differentially impacted by inhibition of specific nutrient transporters. Consistent with the data presented above, knockdown of GLUT1 did not significantly impact HIV-1 infection whereas knockdown of CAT1 significantly decreased both OXPHOS as well as HIV-1 infection (by 35%). Surprisingly though, ASCT2 knockdown resulted in a significantly augmented infection, by approximately 20%. Mechanistically, we found that this was associated with a markedly higher persistence of naïve, as compared to memory, T cells with downregulated ASCT2 levels. These data highlight differences in the relative importance of distinct nutrient transporters in the survival of naïve vs memory CD4 T cell subsets and demonstrate their specific impact on the sensitivity of these populations to HIV-1 infection.In conclusion, using two complementary approaches, my PhD research has revealed the critical impact of a CD4 T cell’s energetic state on its susceptibility to HIV-1 infection. My data identify the importance of mitochondrial metabolism, with an environment rich in TCA cycle intermediates such as α-KG, in regulating the susceptibility of CD4 T cells to HIV-1 infection. Furthermore, I find that nutrient transporter expression differentially impacts the sensitivity of naïve and memory CD4 T cells to HIV-1 infection. These studies therefore provide new prospects for the development of targeted metabolic therapeutic strategies against HIV-1 infection

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Le, Gall-Ianotto Christelle. "Régulation neuro-endocrine de l'hématopoïèse : rôle de la Substance P et de son dérivé, la Substance P(1-4), dans la régulation négative de l'érythropoïèse dans la polyglobulie de Vaquez." Brest, 2007. http://www.theses.fr/2007BRES3203.

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Abstract:

Il existe une communication bidirectionnelle entre les systèmes nerveux et hématopoïétique, médiée par des mécanismes complexes impliquant la libération de facteurs solubles et la présence de récepteurs spécifiques. La substance P (SP), tachykinine de li acides aminés, est un exemple type de neuropeptide synthétisé et libéré dans la moelle osseuse, capable d’agir sur l’hématopoïèse. Des métabolites comme la SP(l-4), issus de la dégradation de la SP par des peptidases présentes dans la moelle, sont également présents et actifs. Le but de ce travail a été de déterminer l’action de la SP et de la SP(l-4) dans un contexte d’érythropoïèse pathologique comme celle caractérisant la polyglobulie de Vaquez (PV). La PV est un syndrome myéloprolifératif chronique, secondaire à l’expansion clonale de cellules souches, qui peut être mise e évidence in vitro par une pousse spontanée, c’est-à-dire sans addition de facteurs de croissance, des progéniteurs érythroblastiques issus de moelle ou de sang. Les résultats montrent que ces deux molécules sont capables d’inhiber efficacement et à des concentrations physiologiques, la pousse spontanée, en agissant directement sur les progéniteurs érythroïdes par une voie dépendante d’un récepteur de type NK-1R pour la SP, et l’implication d’un autre récepteur couplé à des protéines G (RCPG) pour la SP(l-4). L’expression majoritaire de la forme tronquée du NK-lR sur les progéniteurs érythroïdes de PV suggère le rôle préférentiel de ce récepteur dans l’action de la SP. Ces différences de voies membranaires entre les deux molécules sont sans doute à l’origine de l’action différentielle sur la PKCɛ et sur les mouvements calciques intracellulaires. Pour la SP comme pour la SP( l-4), cette inhibition se traduit par une diminution de la différenciation érythroïde terminale et une augmentation de la mort cellulaire. L’implication du monoxyde d’azote ou NO (« nitric oxide ») dans la transduction du signal inhibiteur de la SP et de la SPU -4) constitue une étape importante dans l’analyse des mécanismes intracellulaires impliqués dans ces deux processus. L’adhésion cellulaire est un processus physiologique indispensable à la survie et à la prolifération des cellules in vitro et in vivo. Nous montrons que l’inhibition exercée par la SP et la SP(l-4) sur les cellules de PV, n’est pas la conséquence d’une rupture de cette adhésion. Outre, cette action in vitro, la SP est présente en quantité plus importante dans le sérum de patients atteints de PV, et n’ est pas corrélée avec la présence de fibrose. Nous pensons que ces données reflètent un mécanisme mis en place par l’organisme pour maintenir l’homéostasie chez ces patients. Ce travail s’inscrit dans l’optique d’identifier les molécules capables d’inhiber la pousse spontanée des progéniteurs érythroïdes de PV et de comprendre les mécanismes impliqués dans cet effet inhibiteur ainsi que ceux impliqués dans la pousse spontanée en général
The hematopoietic and nervous systems communicate bidirectionally through the release of soluble factors and specific receptors. Substance P (SP), an undecapeptide belonging to the tachykinin family, is an example 0f a neurotransmitter that could be synthetized and released in the bone marrow (BM). SP could act as a hematopoietic modulator and can be further digested by peptidases ubiquitously expressed in BM. SP fragments as SP(1 -4) could exert hematopoietic regulation too. The aim of this study was to determine effect of SP and its derivate, SP( 1-4), on pathologie erythropoiesis. Polycythemia vera (PV) is a chronic myeloproliferative disorder characterized by the abnormal proliferation of multipotent hematopoietic progenitor. Endogenous erythroid colonies (EEC) formation is the biological hallmark of the PV. Resuits obtained show that SP and SP(1-4), at physiological concentration, are potent inhibitors of EEC formation by direct action on erythroid progenitors. SP-induced inhibition is mediated by a NK-1R-type dependent mechanism and another G coupled-protein receptor (GPCR) for SP( 1-4) effect. High expression of the truncated form of NK-1 R on PV erythroid progenitor suggests preferential implication in the SP effect, Difference in membranar signaling pathway for SP and SP(l-4) could explain the differential implication of PKCɛ and intracellular calcium rise, However, for both molecules, inhibitory effect is characterized by inhibition of terminal erythroid differentiation and increase cell death. Nitric oxide (NO) implication in signal transduction constitutes an important information to explain these mechanisms. Furthermore, inhibitory effect of SP and SP(1-4) is independent of action on adhesion molecules and rupture of cell adhesion of PV progenitors. In addition to its role in vitro, high concentrations of SP were detected in PV patients sera and was not correlated with fibrosis. We propose that this phenomenon reflect a mechanism induces by the organism to maintain homeostasis in PV patients. This work participates to the identification of new molecules able to inhibit spontaneous growth of PV erythroid progenitor and in the understanding of mechanisms implicated in the EEC formation and inhibition of this phenomenon

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Berger, Hélène. "Etude de la régulation transcriptionnelle des lymphocytes T CD4 dans un contexte de cancer : application en immunothérapie anticancéreuse." Thesis, Dijon, 2015. http://www.theses.fr/2015DIJOS002/document.

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Abstract:

La surveillance immunologique des tumeurs repose sur la capacité des cellules effectrices du système immunitaire à détecter et à éliminer les cellules cancéreuses. Nonobstant ce constat, la régression complète et spontanée de cancers établis n’est observée que dans de très rares cas. L’échec de la résolution des cancers par le système immunitaire pourrait résulter de la conjonction de plusieurs facteurs : i) une réponse immune inadéquate liée au manque d’immunogénicité des tumeurs, ii) l’incompétence du système immunitaire consécutif à des immunodéficiences acquises ou induites et iii) la sélection de variants tumoraux résistants capables de déjouer la surveillance opérée par le système immunitaire ou de subvertir ses effets. Ainsi, le développement de stratégies visant à potentialiser les réponses antitumorales de l’hôte revêt un enjeu crucial en cancérologie.Au laboratoire, notre travail de recherche a pour objectif de mieux caractériser les liens entre réponse immunitaire et cancer. Mon travail de thèse vise précisément à comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans la différenciation des lymphocytes T CD4 et à déterminer le rôle de ces cellules dans l’immunité antitumorale. Au cours de ma thèse, nous nous sommes particulièrement attachés à explorer les mécanismes moléculaires qui sous tendent la différenciation des populations lymphocytaires Th17, Th9 et TFh pour mieux appréhender et moduler leurs fonctions effectrices afin d’optimiser les réponses antitumorales. Ces travaux s’inscrivent dans une démarche d’application potentielle en immunothérapie anticancéreuse, un domaine de recherches qui connaît actuellement des avancées spectaculaires.Nous avons tout d’abord étudié l’influence de l’acide docosahexaénoïque (DHA), un acide gras à longue chaîne de la série n 3, sur la différenciation des cellules Th17. Nous avons mis en évidence le mécanisme moléculaire responsable de l’inhibition directe de la polarisation cellulaire Th17 par le DHA. L’activation de PPARγ par le DHA induit l’expression de SOCS3 qui agit comme un répresseur intrinsèque de la différenciation Th17. Dans deux modèles de cancers murins, nous avons également montré que l’activité anticancéreuse du DHA était dépendante de sa capacité à inhiber la sécrétion d’IL 17 par les cellules T CD4 in vivo. Nous avons ainsi caractérisé l’un des mécanismes impliqués dans l’effet anticancéreux du DHA.Dans un deuxième travail, nous avons caractérisé les effets de l’interleukine 1β sur le programme moléculaire des cellules Th9. Nous avons montré que les cellules Th9 différenciées en présence d’IL-1β possédaient de puissantes propriétés anticancéreuses dépendantes de l’IL-21 reposant sur l’activation du facteur de transcription IRF1. Au niveau moléculaire, nous avons démontré que l’IL-1β induisait la phosphorylation de STAT1 elle même responsable de l’activation d’IRF1 qui est alors capable d’interagir sur les promoteurs de l’Il9 et de l’Il21 pour induire l’expression de ces gènes dans les cellules Th9.Le dernier projet porte sur la régulation transcriptionnelle du facteur de transcription IRF1 sur la réponse T folliculaire auxiliaire et cherche à en évaluer les retombées potentielles en immunothérapie anticancéreuse. Notre étude met en évidence l’activation précoce d’IRF1 dans la différenciation TFh et suggère que ce facteur de transcription semble initier le développement de ces cellules. Des approches de transfert adoptif révèlent que les TFh semblent posséder des propriétés anticancéreuses capables de limiter efficacement la croissance des tumeurs dans des modèles murins. Enfin, après caractérisation phénotypique nous montrons que les cellules TFh sont présentes dans des tumeurs mammaires chez l’Homme et validons la présence d’IRF1 dans ces lymphocytes
Immune surveillance of tumors is based on the ability of effector cells of the immune system to detect and eliminate the cancer cells. Notwithstanding, the complete and spontaneous regression of established cancers was observed only in very few cases. The failure of cancer resolution by the immune system could result from the combination of several factors: i) inadequate immune response related to a low tumor immunogenicity, ii) incompetent immune system consecutively to induced or acquired immunodeficiencies and iii) the selection of resistant tumor variants able to thwart immune surveillance or subverting immune responses. Developing novel cancer immunotherapy strategies leading to potentiation of the host antitumor responses is thus a key challenge in oncology.We aim to better characterize the relationships between immune response and cancer. My work is precisely to understand the molecular mechanisms involved in CD4 T cell differentiation and to determine the role of these cells in antitumor immunity. I am particularly committed to explore the molecular mechanisms underlying the Th17, Th9 and TFh cell differentiations. The goal is to better understand and adjust their effector functions to optimize antitumor responses. This work is part of a potential application in cancer immunotherapy approach, an area that is experiencing dramatic advances and is likely to grow in the years ahead.We first studied the influence of the n 3 polyunsaturated fatty acid docosahexaenoic acid (DHA) on Th17 cell differentiation. We unraveled the molecular mechanism responsible for the direct inhibition of Th17 cell polarization by DHA, explaining one way of DHA to exert its anticancer activity. TH17 cells induced in vitro displayed increased SOCS3 expression and diminished capacity to produce interleukin 17 following activation of PPARγ by DHA. In two different mouse cancer models, DHA prevented tumor outgrowth and angiogenesis in an IL 17 dependent manner. Altogether, our results uncover a novel molecular pathway by which PPARγ induced SOCS3 expression prevents IL 17 mediated cancer growth.Then, we characterized the effects of interleukin 1β (IL-1β) on Th9 cells molecular program. We found that the transcription factor IRF1 enhanced the effector functions of Th9 cells and dictated their anticancer properties. Under Th9 skewing conditions, IL-1β induced phosphorylation of the transcription factor STAT1 and subsequent expression of IRF1, which bound to Il9 and Il21 gene promoters and enhanced their secretion by Th9 cells. In addition, IL-1β induced Th9 cells exerted potent anticancer functions in an IRF1 and IL 21 dependent manner. Thus, our findings identify IRF1 as a target for controlling the function of Th9 cells.We are currently investigating the transcriptional regulation of IRF1 on follicular helper CD4 T (TFh) cell program. We address the question whether TFh cells could be beneficial in cancer immunotherapy. Our study highlights the early activation of IRF1 during the TFh cell polarization and suggests that IRF1 appears to initiate the development of these cells. Adoptive transfer approaches show that TFh lymphocytes seem to habor anticancer properties by limiting efficiently tumor outgrowth in mouse models of cancer. Finally, phenotypic characterization of TFh cells points out that they infiltrate human breast tumors and express IRF1

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Vendeville, Agnès. "Mode d'entrée de la protéine Tat de HIV-1 dans les lymphocytes T CD4+." Montpellier 2, 2002. http://www.theses.fr/2002MON20065.

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Tellier, Julie. "Contrôle génétique du développement thymique des lymphocytes T régulateurs CD4+CD25+Foxp3+C." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/262/.

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Abstract:

Les lymphocytes T régulateurs CD4+CD25+Foxp3+ (Treg) constituent une population de cellules suppressives naturelles essentielle au maintien de la tolérance et à l'inhibition de l'inflammation. Ces cellules se différencient dans le thymus avec les lymphocytes T conventionnels à partir d'un précurseur commun. Cependant le mécanisme sous-tendant le choix de lignage entre lymphocyte effecteur et régulateur reste peu défini. Nous avons démontré que la proportion de Treg qui se développent au sein de la population de thymocytes CD4+CD8- est génétiquement contrôlée chez la Souris et varie de manière significative entre les souches. Nous avons pu préciser que les gènes responsables, exprimés par les cellules T, modulent quantitativement la génération du compartiment régulateur, et identifier un locus d'intérêt sur le chromosome 17. En nous intéressant à un modèle spontané d'auto-immunité, la souris NOD, nous avons établi qu'un fort pourcentage de Treg se différencie dans cette souche et que la région identifiée co-localisait avec un locus de susceptibilité au diabète, Idd16. La sélection thymique ne semble pas être impliquée, ce qui suggère un mécanisme lié au choix de lignage. L'étude de nouvelles lignées congéniques nous a permis de réduire la région d'intérêt et de nous rapprocher de l'identification du (des) gène(s) responsable(s)
CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells (Treg) are essential to maintain self-tolerance and control inflammation. It is a natural population that develops in the thymus from CD4-CD8- cells like its conventional counterpart. However, fate decision made by CD4+ thymocytes between effector and regulatory lineage remains poorly understood. We showed that distinct proportions of Treg were found in thymi of common mouse strains and that a genetic control modulated quantitatively regulatory compartment generation. We demonstrated that it was a polygenic trait and identified a locus on chromosome 17. We next focused on the diabetes-prone NOD strain, and surprisingly found a high level of Treg among mature CD4+ thymocytes. Genetic control in this strain is dependent on a region that colocalizes with the diabetes susceptibility locus Idd16. Our preliminary results tend to show that thymic selection is not involved, which suggests a lineage commitment linked mechanism. Study of new congenic lines should help us to restrain our region of interest and our candidate gene number

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Ribot, Julie. "Etude du développement thymique des lymphocytes t régulateurs CD4+ CD25+ Foxp3+." Toulouse 3, 2006. http://www.theses.fr/2006TOU30221.

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Abstract:

Les lymphocytes T régulateurs (LTreg) et conventionnels (LTconv) sont sélectionnés dans le thymus à partir de précurseurs générés aléatoirement. Leur répertoire est très différent : contrairement à sa contrepartie conventionelle, la population régulatrice est enrichie en cellules autospécifiques. Afin d'expliquer ces différences de répertoire, nous avons cherché à mettre en évidence des différences dans la sélection thymique de ces populations. Nous avons d'abord montré que des ligands agonistes naturellement exprimés par les cellules épithéliales thymiques (TEC) favorisent la sélection positive des LTreg, alors qu'ils induisent partiellement la délétion des LTconv. Nous avons ensuite complété ces analyses dans des souris transgéniques pour un ligand unique, dont l'expression est restreinte aux TEC du cortex. Le répertoire des LTreg générés dans ces souris est enrichi en cellules spécifiques pour le ligand unique, contrairement à celui des LTconv. Dans ce modèle, alors que les précurseurs de LTreg spécifiques du ligand sont sélectionnés positivement, ceux des LT conventionnels sont partiellement sélectionnés négativement.

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Pariente, Benjamin. "Régulation de l'activation des lymphocytes T CD4 par les récepteurs Natural Killer au cours de la maladie de Crohn." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077195.

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Abstract:

La maladie de Crohn (MC) est caractérisée par une réponse immune non contrôlée vis-à-vis du microbiote intestinal dans laquelle le rôle des lymphocytes T (LT) effecteurs a été clairement établi. Nous avons récemment identifié une sous-population de LT CD4+ impliquée dans la réponse immune observée au cours de la MC, caractérisée par l'expression anormale du récepteur activateur NKG2D. Ces LT CD4+NKG2D+ présentent des propriétés cytotoxiques, produisent de PIFNy et du TNFa et sont activés via des interactions entre NKG2D et l'un des ses ligands, MICA qui surexprimé à la surface des cellules épithéliales intestinales chez les patients atteints de MC. L'objectif de ce travail était de mieux caractériser les propriétés phénotypiques et fonctionnelles des LT CD4+NKG2D+ dans la MC. Dans un premier travail, nous avons étudié les caractéristiques Thl7 des LT CD4+NKG2D+. Nous montrons que NKG2D est un marqueur fonctionnel des lymphocytes Thl7 et que la stimulation de NKG2D joue un rôle majeur dans la production d'IL-17 chez les patients atteints de MC. Ensuite, nous avons montré que les LT CD4+NKG2D+ ont des propriétés cytotoxiques et que l'activation de NKG2D est essentielle à l'exercice du pouvoir cytotoxique des LT CD4+ mais pas des LT CD8+. Enfin, nous nous sommes intéressés à la diversité du répertoire du récepteur T des LT chez des sujets atteints de MC. Nous montrons que la majorité des expansions oligoclonales des LT de la muqueuse inflammatoire des sujets atteints de MC est retrouvée parmi les LT CD4+ exprimant NKG2D. La voie d'activation impliquant NKG2D semble jouer un rôle majeur dans la production de cytokines Thl et Thl7 et dans la cytotoxicité exercée par les LT CD4+ au cours de la MC. Par ailleurs, les LT CD4+NKG2D+ contribuent fortement à l'oligoclonalité des LT de la muqueuse intestinale des sujets atteints de MC. L'ensemble de ces observations suggèrent que le blocage de la voie d'activation NKG2D/NKG2D ligand représente une cible thérapeutique potentielle dans la MC
Crohn's disease (CD) is characterized by an uncontrolled immune response toward the intestinal flora in which T cells involvement has been demonstrated. We have recently identified a subset of effector CD4+ T cells mediating inflammatory response in CD and expressing the NK activating receptor NKG2D. CD4+NKG2D+ T cells are functionally active through interactions with NKG2D ligands. CD4+NKG2D+ T cells exhibit specific cytotoxic activity and produce IFNy in the presence of MICA bearing cells. The purpose of our study was to further characterize the functional properties of CD4+NKG2D+ T cells. First we show that thé subset of CD4_ T cells expressing NKG2D in CD represents a major source of IL-17 and has typical features of Thl7 cells. Then, we report that CD4+NKG2D+ T cells exhibit cytotoxic proprieties and that NKG2D activation is necessary for CD4 T cells to have cytotoxic effect. Finally, we show that the presence of predominant, diffuse and persistent oligoclonal expansions of effector CD4+NKG2D+ T-cells in the mucosa may contribute to the uncontrolled inflammatory process of CD. Our data provide that NKG2D is a functional marker of CD4 T cells that produce IL-17 and IFNy in patients with CD, via costimulation of the TCR and NKG2D. Moreover we demonstrate that the greatest percentage of expanded oligoclonal T-cells found in the inflamed mucosa of CD patients corresponds to CD4+ T-cells expressing NKG2D. Our results suggest that the NKG2D pathway could represent a specific therapeutic target in CD

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Coudronnière, Nolwenn. "Régulation du cycle de réplication du virus de l'immunodéficience humaine de type (vih-1) par des signaux transmis par la molécule cd4." Montpellier 1, 1998. http://www.theses.fr/1998MON1T008.

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Beauregard, Vickie. "Attachement, émotions, et somatisation." Thèse, Université de Sherbrooke, 2012. http://hdl.handle.net/11143/6438.

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Abstract:

La somatisation a une prévalence élevée dans la population. Les médecins n'arrivant pas à bien comprendre les symptômes ni à les traiter, certains facteurs psychologiques sont mis en cause dans le développement et le maintien de cette problématique. Parmi ceux-ci, des déficits au niveau de la régulation émotionnelle et de la mentalisation des états affectifs sont identifiés. Le développement d'un attachement insécurisant (c.-à-d. caractérisé par une élévation à la dimension d'anxiété d'abandon ou d'évitement de l'intimité) est reconnu comme étant impliqué dans ces déficits. Un examen de la documentation scientifique permet de constater que les mécanismes affectifs susceptibles de contribuer à la somatisation n'ont étés explorés que partiellement. Afin de préciser ces mécanismes, nous proposons un modèle original qui distingue deux profils de personnes présentant des symptômes de somatisation en fonction de la dimension d'attachement. Il est postulé que l'évitement de l'intimité implique une inhibition émotionnelle et l'anxiété d'abandon une intensification émotionnelle, et que ces deux profils distinctifs engendrent une plus grande incidence de la somatisation. L'affectivité négative, des déficits au niveau de la mentalisation et l'affectivité positive sont aussi intégrés au modèle; il est attendu que les deux premiers facteurs accroissent la somatisation, alors qu'aucune hypothèse n'est formulée concernant l'affectivité positive. Afin de vérifier ces hypothèses, des questionnaires mesurant ces différentes variables ont étés administrés à des personnes présentant des symptômes qui ne sont pas complètement expliqués médicalement. Les résultats montrent que l'évitement de l'intimité va de pair avec une inhibition émotionnelle, mais contrairement à ce qui était prévu, il n'augmente pas la somatisation via ce style de régulation émotionnelle tel que mesuré dans cette étude. Plutôt, l'évitement de l'intimité accroit la somatisation par le mécanisme de l'anhédonie (faible affectivité positive). L'anxiété d'abandon favorise l'intensification émotionnelle. Elle accroit la somatisation par le biais de l'affectivité négative, qu'elle tend à augmenter directement ou indirectement via l'intensification émotionnelle. L'affectivité négative est le meilleur prédicteur de la somatisation dans le modèle, suivie de près par l'anhédonie. Un déficit au niveau de la capacité à envisager ses propres états mentaux est associé à une augmentation de la somatisation et prédit les préoccupations par rapport à la santé, mais pas les symptômes somatiques et leurs impacts. La capacité à envisager les états mentaux des autres n'ayant pas été mesurée adéquatement, ses relations avec la somatisation n'ont pu être convenablement mises à l'épreuve. Dans l'ensemble, les deux profils, soit évitement de l'intimité-inhibition et anxiété d'abandon-intensification, semblent contribuer à la somatisation. Le profil évitement de l'intimité-inhibition le fait principalement via l'anhédonie, possiblement associée à des mécanismes dépressifs, alors que l'action du profil anxiété d'abandon-intensification s'exerce via l'affectivité négative, sans doute affiliée à des mécanismes anxieux. La mentalisation semble également liée à la somatisation : cette dernière augmenterait en fonction des difficultés vécues sur le plan de la capacité à envisager ses propres états mentaux, en accord avec les hypothèses traditionnelles de la médecine psychosomatique. Mots clés : somatisation, symptômes physiques médicalement inexpliqués, attachement, mentalisation, régulation émotionnelle, affectivité positive, affectivité négative.

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Loiseau, Claire. "Régulation du trafic des lymphocytes T CD4+ vers la muqueuse intestinale au cours de la reconstitution immunitaire sous traitement antirétroviral." Thesis, Toulouse 3, 2015. http://www.theses.fr/2015TOU30277.

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Abstract:

Lors de l'infection par le VIH-1, l'intégrité de la barrière immunitaire muqueuse est altérée du fait d'une profonde déplétion des lymphocytes T CD4+ intestinaux, notamment des lymphocytes Th17, une sous population de lymphocytes exerçant un rôle majeur dans la lutte contre les bactéries et certains champignons. La translocation de produits microbiens de la lumière intestinale dans la circulation sanguine systémique, liée à la perte des lymphocytes Th17, est une source d'inflammation généralisée délétère. Malgré la mise en place d'un traitement antirétroviral, chez la plupart des patients, la reconstitution des lymphocytes T CD4+ de la lamina propria est différée et incomplète par rapport à celle du sang périphérique. Les travaux exposés dans ce manuscrit suggèrent que chez les patients VIH-1+ traités, une diminution de la production de la chimiokine CCL20 altère l'axe de chimiotactisme CCR6-CCL20, particulièrement important pour les lymphocytes Th17, affaiblissant ainsi l'adressage de ces cellules à la muqueuse intestinale. Les résultats obtenus ne sont pas en faveur d'un rôle direct du virus dans la diminution observée de CCL20. L'infection par différentes souches virales d'un système d'histocultures de tissu intestinal développé au laboratoire induit, au contraire, une augmentation de la production de la chimiokine CCL20. La stimulation de cultures de cellules épithéliales intestinales primaires, spécialement mises au point lors de ce projet, par différentes protéines virales ne montrent pas non plus d'effet négatif sur la production de la chimiokine CCL20. La stimulation des cellules épithéliales intestinales primaires par différents ligands des récepteurs de l'immunité innée aux pathogènes (PRR) a également permis d'écarter la potentielle responsabilité de la translocation résiduelle de produits microbiens observée chez les patients VIH-1+ dans la diminution de la production de CCL20. L'analyse de la distribution des différentes populations lymphocytaires dans les compartiments sanguin et intestinal des patients VIH-1+ traités a mis en évidence une augmentation d'une population de lymphocytes T régulateurs dans l'intestin grêle, qui n'expriment pas le récepteur CCR6 (Treg CCR6-). L'étude présentée souligne la persistance d'un déséquilibre du ratio lymphocytes Th17/Treg CCR6- malgré un traitement antirétroviral. La perturbation de l'environnement cytokinique, conséquence de la modification du ratio lymphocytes Th17/Treg CCR6- semble impliquée dans la diminution de la chimiokine CCL20 observée chez les patients VIH-1+ traités. La stimulation des cellules épithéliales intestinales primaires par l'IL-17A, synthétisée par les lymphocytes Th17, augmente la production de CCL20, alors que la stimulation par l'IL-10 et le TGF-ß1, produites par les lymphocytes Treg, diminue cette production. La co-culture de cellules épithéliales primaires avec différents ratio de lymphocytes T triés et stimulés, reproduisant ex vivo l'interaction entre l'épithélium intestinal et la lamina propria sous jacente, confirme l'influence du ratio lymphocytes Th17/Treg CCR6- sur la production de CCL20 par les cellules épithéliales intestinales. Ces travaux démontrent que l'axe de chimiotactisme CCR6-CCL20 est altéré chez les patients VIH-1+ malgré le traitement antirétroviral prolongé et que la persistance d'un déséquilibre du ratio lymphocytes Th17/Treg CCR6- dans la lamina proria pourrait contribuer à la diminution de la production de CCL20 par les entérocytes, soulignant l'existence d'un cercle vicieux entre la diminution de l'expression de CCL20 et le défaut d'adressage des lymphocytes Th17 à la muqueuse intestinale
During HIV-1 infection, the integrity of the intestinal immune barrier is disrupted due to a deep depletion of CD4+ T cells in the gut, especially Th17 cells, a T cell subset exerting a major role in antimicrobial immunity. The translocation of microbial products from the gut lumen into the bloodstream, associated with Th17 cells loss, has been linked to systemic inflammation. Despite effective cART, CD4+ T cells restoration in the lamina propria is postponed and incomplete compared with peripheral blood of most individuals. The works exposed in this manuscript suggest that treated HIV-1-infected individuals display a reduced CCL20 production altering the CCR6-CCL20 chemotactic axis, which drives Th17 cells trafficking to the gut. Our results do not support a direct role of the virus in the decreased production of the CCL20 chemokine. The infection of small bowel explants by various viral strains rather leads to an increase of CCL20 production. The stimulation of primary intestinal epithelial cells cultured ex vivo by a technique specially worked out during this project by various viral proteins do not show any negative effects on the production of CCL20. Stimulation of primary intestinal epithelial cells by several ligands of innate microbial sensors (PRR) also allows to rule out a potential responsibility of the residual microbial translocation observed in treated HIV-1-infected individuals in the decreased production of the CCL20 chemokine. The detailed analysis of various lymphocyte populations distribution in the blood and intestinal compartments of treated HIV-1-infected individuals highlights an increase of a regulatory T cell subset in the small intestine, which do not show the CCR6 chemokine receptor (CCR6- Treg). Despite antiretroviral therapy, the presented study underlines the persistence of an imbalanced Th17/CCR6- Treg ratio. The cytokinic microenvironment disruption, as a consequence of the modification of the Th17/CCR6- Treg ratio seems involved in the decrease of the CCL20 chemokine observed in treated HIV-1-infected individuals. Stimulation of primary intestinal epithelial cells with IL-17A produced by Th17 cells increases CCL20 production whereas Treg cytokines both IL-10 and TGF-ß1 decrease it. Ex vivo co-culture of primary small intestine epithelial cells with various proportions of T lymphocytes sorted by flow cytometry, activated and placed into the bottom chamber of the transwell to mimic lamina propria-epithelium interactions, confirms the influence of the Th17/CCR6- Treg ratio on the production of CCL20 by the intestinal epithelial cells. All together, our data demonstrate that the CCL20-CCR6 axis driving Th17 cells gut homing is altered in HIV-1-infected individuals despite antiretroviral therapy, and the persistence of an imbalanced Th17/CCR6- Treg ratio into the lamina propria could contribute to the decrease of the CCL20 chemokine production by enterocytes, highlighting the existence of a vicious circle between the decrease of the CCL20 expression and the defective gut homing of CD4+ T cells, notably Th17 cells

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Touvier, Thierry. "Les tétraspanes LEPROT et LEPROTL1 : 2 nouveaux régulateurs négatifs de la sensibilité cellulaire à l'hormone de croissance." Lille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009LIL2S006.

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Abstract:

L'hormone de croissance (« growth hormone », GH) a une importance capitale dans la promotion de la croissance post-natale et a une action sur le métabolisme tout au long de la vie. La GH agit soit directement sur les tissus portant son récepteur (GHR) soit indirectement en stimulant la synthèse de l'« insulin-like growth factor 1 » (IGF1). Lors des périodes physio(patho)logiques associées à un stress nutritionnel, le foie devient insensible à la GH, entraînant une baisse de la synthèse hépatique de l'IGF1 et, par absence de rétrocontrôle, une hausse des taux circulant de GH. Dans ces conditions, la GH favoriserait la survie en d'adaptant le métabolisme vers une utilisation accrue des lipides. Les causes de la résistance hépatique à la GH impliquent une baisse de la quantité de GHR totale et à la surface cellulaire mais les mécanismes et les effecteurs cellulaires ne sont pas connus. LEPROT (« leptin receptor overlapping transcript ») et LEPROTL1 (« LEPROT-like 1 ») sont des petites protéines à quatre domaines transmembranaires présentes dans l'ensemble des espèces qui dérivent d'un ancêtre commun. Chez la levure, l'homologue des LEPROTs participe à l'adressage des protéines vers la vacuole. Chez les mammifères, bien que ces protéines soient exprimées dans de nombreux tissus, au début de ma thèse leurs fonctions et leurs partenaires étaient largement inconnus. Afin d'appréhender la fonction physiologique des LEPROTs, nous avons généré des souris transgéniques exprimant de façon ubiquiste LEPROT ou LEPROTL1 humain. Ces 2 lignées de souris présentent une réduction modeste de la croissance postnatale associée à une diminution du niveau de l'IGF1 plasmatique. De plus, la signalisation induite par la GH et la fixation de la GH à la membrane plasmique sont réduites dans le foie des souris transgéniques. De manière intéressante, ce phénotype est accentué chez les souris exprimant simultanément LEPROT et LEPROTL1 par rapport aux fondateurs simples transgéniques. Au niveau cellulaire, le niveau d'expression des LEPROTs contrôle la sensibilité à la GH car l'augmentation ou la réduction d'expression des LEPROTs dans différents lignées cellulaires entraînent respectivement une diminution ou une augmentation de la signalisation de la GH (phosphorylation de STAT5 et expression des gènes cibles). En outre, nous montrons dans les cellules COS que l'expression des LEPROTs réduit l'abondance totale et de surface du GHR. Enfin, l'augmentation de l'expression des transcrits des LEPROTs observée dans le foie des souris lors d'un jeûne ou d'un diabète de type 1 suggère une fonction physiologique des LEPROTs dans les conditions associées à la résistance hépatique à la GH. L'ensemble de ces données montre que LEPROT et LEPROTL1 sont des régulateurs négatifs du système GH/IGF1 chez les mammifères. Par des régulations d'expression et une action additive, ils participeraient à la modulation de la sensibilité à la GH, probablement en modulant la dégradation lysosomale de GHR. Leur implication au niveau du foie et dans d'autres tissus métaboliques, dans l'induction de la résistance à la GH associée à l'état nutritionnel, pourrait être cruciale dans l'adaptation métabolique de l'organisme à son environnement et dans le développement de certaines pathologies cardiovasculaires

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Moulin, Stéphanie. "Mécanismes moléculaires impliqués dans la régulation négative du récepteur de l'hormone de croissance en réponse à une stimulation par le ligand : rôle potentiel des protéines SOCS." Paris 5, 2003. http://www.theses.fr/2003PA05N037.

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Abstract:

Nous nous sommes intéressés à la régulation du trafic du récepteur de l'hormone de croissance (GHR). Nous avons montré dans les cellules CHO exprimant de façon stable le GHR, qu'une faible partie de la quantité totale de récepteur est présente à la surface des cellules alors que la plus grande partie est stockée dans des compartiments intracellulaires. Sous l'effet de la GH, nous avons montré que non seulement les récepteurs de surface sont rapidement dégradés après internalisation mais que les récepteurs néo-synthétisés sont eux aussi dégradés. Ce phénomène est dépendant de Jak2 et du protéasome. Notre travail montre que la surexpression de SOCS-1 et à moindre degré celle de SOCS-2 conduit à une accumulation du GHR, contrairement à SOCS-3 qui n'a aucun effet
We analysed the down-regulation of the growth hormone receptor (GHR) in CHO cells stably expressing the GHR. We have shown that a low amount of GHR is present at the cell surface while most of the receptors are stored in intracellular compartments. Following GH exposure, we demonstrated that concomitantly with the degradation of cell surface receptors, GHR from the intracellular compartments are also degraded. Jak2 and proteasome activities control the degradation of GHR located inside the cell and thus the amount of new receptors available to the cell surface. Our work also shows that overexpression of SOCS-1 and to less extent SOCS-2 resulted in GHR accumulation in contrast to SOCS-3 wich had no effect

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Cassan, Cécile. "Lymphocytes T CD4+Foxp3+ régulateurs et auto-immunité du système nerveux central." Toulouse 3, 2006. http://www.theses.fr/2006TOU30184.

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Abstract:

Le système immunitaire nous défend contre les pathogènes, tandis que plusieurs mécanismes, notamment le contrôle exercé par les lymphocytes T CD4+CD25+Foxp3+ régulateurs (Tregs), concourent au maintien de la tolérance immunitaire vis-à-vis des antigènes de l'organisme. Une rupture de tolérance aboutit au développement de maladies auto-immunes, telles que la sclérose en plaques (SEP). Nous avons montré le rôle protecteur des Tregs contre le développement de l'encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE), modèle animal de SEP. Puis nous avons étudié le rôle du thymus et des antigènes du soi dans la génération de Tregs spécifiques d'antigènes du système nerveux central, et leur spécificité dans le cadre de l'EAE. A l'avenir, une meilleure connaissance des Tregs permettra de concevoir de nouvelles stratégies pour le traitement de la SEP
The immune system defends us against invasions of pathogens; meanwhile, several mechanisms, including the control exerted by CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes (Tregs), maintain an immune tolerance towards self-antigens. A disruption of this tolerance contributes to the development of auto-immune diseases, such as multiple sclerosis (MS). We have showed that Tregs protect mice against the development of experimental auto-immune encephalomyelitis (EAE), which is an animal model for MS. We have then investigated the role of the thymus and of self-antigens in the generation of Tregs specific for central nervous system antigens, as well as their specificity in EAE. A better knowledge on Tregs will allow the design of new therapeutic strategies for MS patients

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Yahia, Hanane. "Regulation of RORC2 expression during human CD4+T cell differentiation." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCC289.

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Abstract:

La différentiation des lymphocytes Th17 dépend fortement du facteur de transcription RORγt. RORγt a été identifié pour la première fois chez la souris comme un facteur spécifique des thymocytes, jouant un rôle important dans le développement du thymus. En effet, RORγt est exprimé sélectivement dans le stade double positif (DP) et il est ensuite réprimé dans le stade simple positif (SP) ainsi que dans les cellules CD4+ naïves périphériques. Les mécanismes moléculaires qui régulent l’expression transitoire de RORγt dans le thymus et en périphérie sont peu connus. Le but de ce projet est de définir les paramètres transcriptionnels et épigénétiques en corrélation avec l'expression de RORγt chez l’homme. Afin de caractériser les mécanismes moléculaires qui contrôlent l'expression de RORγt dans les thymocytes humains, nous avons effectué une analyse des modifications épigénétiques sur l’ensemble du locus RORC. Nos résultats montrent que le locus RORC subit un remodelage étendu, qui lui confère une conformation "permissive" lors de la transition du stade Double Négatif (DN) au stade DP (augmentation de H4ac et diminution de H3K27me3). Alors que, H3K4me3, qui est un marqueur de promoteurs actifs, est présente spécifiquement au niveau du promoteur RORC2, et uniquement dans les cellules qui expriment RORC2. Une analyse similaire des marqueurs épigénétiques pour les enhancers (H3K27ac) nous a permis d'identifier plusieurs régions avec une fonction potentiellement régulatrices de l'expression de RORC2. Nous avons démontré que certaines de ces régions avaient une fonction d'enhancer in vitro. Dans les cellules T humaines CD4+ naïves périphériques, nous avons observé que la stimulation du TCR en présence de TGFβ est suffisante pour induire RORγt et un remodelage du locus RORC. Nous avons également constaté que la cyclosporine A, un inhibiteur de la voie calcineurine/NFAT, inhibe fortement l'expression de RORC2. Cette inhibition est associée ˆ une diminution des marqueurs positifs de la chromatine. De plus, nous avons démontré que l’activation des cellules induit une activation de NFAT et sa liaison au promoteur RORC2 et aux enhancers. Cette liaison coïncide avec le recrutement de p300/CBP au promoteur qui est dépendant de la calcineurine, ce qui peut permettre le recrutement d'autres facteurs (tel que NFkB) importants pour la différenciation des Th17. Nous avons Également détecté la liaison de NFAT au locus RORC dans les thymocytes. Ces données démontrent un rôle central de NFAT dans la régulation Epigénétique et transcriptionnelle du locus RORC
Generation of inflammatory CD4+ Th17 cells is strongly dependent on the transcription factor retinoid-related orphan receptor, RORγt. RORγt was first identified in the mouse as a thymocyte-specific factor and was shown to play a critical role in the regulation of thymopoiesis. In the thymus RORγt is selectively expressed at the double positive stage (DP: CD4+ CD8+), and is down regulated in later stages of thymocyte development, as well as in naïve peripheral CD4+ T cells. The molecular mechanisms by which RORγt is transiently expressed during thymopoiesis and re-expressed in selected peripheral lymphocytes are poorly understood. The goal of this project is to define the transcriptional and epigenetic settings that correlate with RORγt expression. To start addressing the molecular mechanisms that control expression of human RORγt in thymocytes, we performed an analysis of epigenetic modifications at the RORC locus. Our findings show that the whole RORC locus undergoes extensive remodeling, assuming a more "permissive" conformation at the transition between the Double Negative and the DP stage (increase of H4ac and decrease of H3K27me3). However, H3K4me3, a mark of active promoters, is present specifically at the RORC2 promoter only at stages where RORC2 is expressed. A similar analysis of epigenetic marks for enhancers (H3K27ac) has allowed us to identify several regions with potential regulatory function on RORC2 expression, which displayed enhancer function in vitro. In human naïve peripheral CD4+ T cells we observed that TCR stimulation in the presence of TGFβ is sufficient to induce low levels of RORγt expression, and further remodeling of the RORC locus. We also found that cyclosporine A, an inhibitor of the calcineurin/NFAT pathway, strongly inhibited RORC2 expression, and was associated with a decrease in the positive chromatin marks at the RORC locus. Consistently, we demonstrated that cell stimulation induced NFAT activation, and binding to the RORC2 promoter and enhancers. This binding coincided with calcineurin-dependent p300/CBP recruitment and remodeling of the locus, which may allow binding of the transcriptional machinery and other factors (such as NFkB) important for Th17 differentiation. NFAT binding to the RORC locus could be also detected in thymocytes. These data demonstrate a central role for the NFAT pathway in the epigenetic priming the RORC locus for transcriptional competence

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Esquerré, Michael. "Influence des lymphocytes T CD4+ CD25+ régulateurs sur la dynamique de formation de la synapse immunologique entre un lymphocyte T CD4+ effecteur et une cellule présentatrice d'antigène." Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/51/.

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Abstract:

La rencontre entre un lymphocyte T et une cellule présentatrice d'antigène (CPA) est un évènement central dans l'initiation et le développement de la réponse immunitaire adaptative. L'interaction entre ces deux cellules entraîne de nombreuses réorganisations moléculaires au niveau de l'aire de contact intercellulaire conduisant à la formation d'une structure dynamique et spécialisée remplissant diverses fonctions biologiques : la Synapse Immunologique (SI). Cette interaction permet à un lymphocyte T CD4+ helper (TH) de s'activer et de mettre en place une signalisation intracellulaire nécessaire à la production de cytokines. Le second aspect crucial de cette interaction consiste en la polarisation de la machinerie sécrétoire du lymphocyte TH vers la CPA permettant ainsi une activation sélective de la CPA présentant l'antigène spécifique et donc une amplification sélective de la réponse immunitaire. Les lymphocytes T CD4+ CD25+ régulateurs naturels (Treg) jouent un rôle capital dans le maintien de la tolérance périphérique au soi, leur absence conduisant au développement de syndromes lymphoprolifératifs auto-immuns. Les Treg sont également impliqués dans le contrôle des réponses immunitaires anti-infectieuses et ont un rôle délétère lors des réponses immunitaires anti-tumorales. Différents mécanismes de régulation impliquant le contact cellulaire ou bien la sécrétion de molécules effectrices solubles ont à ce jour été décrits. Mon travail de thèse a été de déterminer si les Treg humains pourraient inhiber les réponses immunitaires en altérant la polarisation des lymphocytes TH vers les CPA. Afin de répondre à cette question, nous avons utilisé des approches de microscopie confocale afin de visualiser un Treg et un lymphocyte TH interagissant simultanément avec une même CPA. Nous avons pu observer que les Treg inhibent la polarisation de la machinerie sécrétoire des lymphocytes TH (appareil de Golgi et cytosquelette de tubuline) vers la CPA via la production locale de TGF-bêta. L'obtention de ces résultats nous a permis d'identifier un nouveau mécanisme de suppression, qui pourrait permettre de mieux appréhender l'incroyable potentiel des Treg à réguler finement les réponses immunitaires
The encounter between a T lymphocyte and an antigen presenting cell (APC) is a central event in the initiation and development of adaptative immune responses. Interaction between these two cells leads to multiple molecular reorganizations of the intercellular contact site leading to the formation of a dynamical and specialized structure filling diverse biological functions: the Immunological Synapse (IS). This interaction enables a CD4+ T helper lymphocyte (TH) to activate and to put into place an intracellular sustained signaling necessary for cytokine production. The second key feature of this interaction consists in TH lymphocyte secretory machinery polarization towards APC thereby allowing a selective activation of the APC presenting the specific antigen and thus a selective amplification of the immune response. CD4+ CD25+ natural regulatory T lymphocytes (Treg) play a pivotal role in the maintenance of peripheral self tolerance, their absence leading to the development of autoimmune lymphoproliferative disorders. Treg are also involved in controlling anti-infectious immune responses and have a deleterious role during anti-tumoral immune responses. To date, different regulation mechanisms involving cellular contact or the secretion of soluble effector molecules have been described. My thesis work was to determine if human Treg could inhibit immune responses by altering polarization of TH lymphocytes towards APC. In order to answer this question we used confocal microscopy approaches so as to visualize a Treg and a TH lymphocyte simultaneously interacting with a same APC. We were able to observe that Treg inhibit secretory machinery polarization of TH lymphocytes (Golgi apparatus and tubulin cytoskeleton) towards APC via local TGF- production. These results enabled us to identify a novel suppression mechanism that could allow to better apprehend the incredible potential of Treg to finely regulate immune responses

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Hippocrate, Aurélie. "Modulation de l'autophagie lors de la réactivation de l'EBV par le TGF β1." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077182.

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Abstract:

Le virus d'Epstein-Barr (EBV) est un virus ubiquitaire appartenant à la sousfamille des gamma-herpesvirinae et est le premier virus humain à avoir été associé à des tumeurs. L'EBV est associé à des lymphoproliférations malignes et des carcinomes. Des travaux ont montré que la réactivation du virus semble essentielle au développement tumoral mais les mécanismes impliqués sont mal connus. Il a été démontré in vitro que le Transforming Growth Factor bêta 1 (TGF-P1 pouvait déclencher la réactivation de TEBV. Il est essentiel de caractériser les effets de la réactivation de l'EBV sur la cellule hôte afin de comprendre son implication dans la lymphomagénèse. Nous avons observé lors de la réactivation de l'EBV par le TGF-pl une activation de signaux de survie inhibiteurs de l'apoptose, tels que la voie PI3K/Akt (régulateur négatif de l'autophagie). De plus, nous avons constaté une inhibition de la protéine kinase dépendante des ARN double brins (PKR), qui est une protéine virale clé de l'immunité induite par les interférons. La PKR est également un régulateur positif de l'autophagie et de l'apoptose. L'autophagie est un processus qui est associé au contrôle de l'instabilité génétique et à la progression tumorale. Nous avons observé lors de la réactivation virale une inhibition de l'autophagie et de l'apoptose. Ces résultats suggèrent que le virus semble moduler l'autophagie et l'apoptose et contrer la réponse immune lors de sa réactivation par le TGF-PL Ces modulations pourraient contribuer au développement et/ou à la progression des lymphomes malins
The Epstein-Barr virus (EBV) is a persistent gamma herpesvirus, which is associated with malignancies. The requirement of lytic gene expression for outgrowth of lymphoproliferations in a SCID mouse model, suggests the importance of reactivation for EBV pathogenesis. Transforming Growth Factor beta 1 (TGF-pl) induces EBV reactivation. During TGF-pl-mediated EBV reactivation, an autophagy inhibitor, PI3K/Akt, was activated, and an autophagy inducer, the interferon-inducible protein kinase activated by double-stranded RNA (PKR), was inactivated. This prompted us to investigate the effect of TGF-pl-mediated viral reactivation on the autophagy process. Autophagy markers were decreased after treatment by TGF-pl of EBV-infected Burkitt's lymphoma (BL) cell lines and not in EBV negative BL cells showing an EBV-dependent inhibition of autophagy during TGF-pl mediated EBV reactivation. The autophagic pathway is a cellular defence process involving the bulk degradation of cellular contents by autophagosomes/lysosomes during starvation or viral infection and autophagy is postulated to play a role in antiviral innate immunity. Inhibition of autophagy might prevent cellular antiviral defence. Elucidating the molecular mechanisms which lead to EBV reactivation (deregulation of autophagy, apoptosis and signals involved) will be important to understand its association with the development and / or progression of malignant lymphomas

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Braudeau, Cécile. "Etude du phénotype et de la fonction des cellules régulatrices T CD4+CD25+ dans le sang de patients tolérant spontanément une greffe de rein." Nantes, 2006. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=d6456dcd-1157-4700-bb4b-a3d05104c0d7.

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Un des objectifs en transplantation est d’induire un état de tolérance opérationnelle. Cet état, rare en transplantation rénale, se définit comme l’acceptation à long terme d’un greffon à fonction stable sans immunosuppresseur chez un hôte immunocompétent. Ce travail vise à comprendre les mécanismes impliqués dans le processus de tolérance opérationnelle chez les transplantés rénaux. L’étude d’une petite cohorte de patients tolérants a permis d’identifier un phénotype particulier de leurs lymphocytes T sanguins CD4+CD25+, différent de celui des patients en rejet chronique. Nous avons montré que les patients tolérants présentent un nombre plus important de cellules CD4+CD25+FOXP3+ que les patients en rejet chronique et semblable à celui des individus sains. Ces cellules présentent également une fonction régulatrice semblable à celle d’individus normaux et significativement supérieure à celle de patient en rejet chronique
Despite being efficient in preventing acute rejection, immunosuppressors have little effect on chronic rejection. A major goal in transplantation is therefore to induce a state of operational tolerance. This state, which is rare in kidney transplant recipients, is defined as long-term graft acceptance with a stable function, without immunosuppression in an immunocompetent recipient. Here we tried to understand the mechanisms implicated in operational tolerance to kidney transplants. The study of a small cohort of tolerant patients allowed us to identify a particular phenotypic profile of CD4+CD25+ blood lymphocytes that was different to that of patients with chronic rejection. Tolerant patients displayed an increased number of CD4+CD25+FOXP3+ T cells compared to patients with chronic rejection. These cells also displayed a regulatory function similar to that of healthy individuals and significantly higher than that of patients with chronic rejection

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Ratajczak, Céline. "Régulation de la fonction des cellules dendritiques par les bactéries lactiques : influence du statut allergique du donneur et de l'épithélium intestinal." Lille 2, 2006. http://www.theses.fr/2006LIL2S066.

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Abstract:

Les cellules dendritiques jouent un rôle déterminant dans l'initiation de la réponse immunitaire. Localisées au niveau de la peau et des différentes muqueuses de l'organisme, elles forment un véritable réseau d'immuno-surveillance qui est alerté lors d'un signal de danger. Dans l'allergie, la rencontre avec l'allergène et la présence d'un environnement tissulaire produisant des facteurs pro-Th2 conditionnent la cellule dendritique pour le développement d'une réponse allergique. Cependant, au niveau intestinal, les cellules dendritiques présentes semblent aussi participer au maintien de l'homéostasie immunitaire et donc à l'état de tolérance, en particulier sous l'influence de la flore microbienne endogène. Des études cliniques rapportent un effet bénéfique des bactéries commensales comme les bactéries lactiques sur le développement des manifestations allergiques. Ces données nous ont amené à évaluer les propriétés immuno-modulatrices des bactéries lactiques en analysant leur capacité à agir sur les mécanismes intervenant dans la balance Th1/Th2. Nous nous sommes d'abords intéressés à l'effet de deux souches de bactéries lactiques, Lactobacillus plantarum et Lactobacillus casei, sur les fonctions de la polarisation de la réponse immunitaire initiée par les cellules dendritiques. La stimulation de cellules dendritiques dérivées de monocytes (MD-DC) par ces bactéries lactiques induit leur maturation, caractérisée par une expression accrue de molécules de costimulation, et une production d'IL-12 et d'IL-10. L. Plantarum est également capable d'inhiber la production de cytokines Th2 (IL-4 et IL-5) par des lymphocytes T autologues cultivés avec des MD-DC, issues de sujets allergiques, stimulées avec l'allergène Der p 1. L'effet de L. Plantarum semble correspondre à une réorientation de la réponse immunitaire puisqu'une réexposition à l'allergène des lymphocytes T initialement cultivés en présence de cette bactérie n'aboutit pas à une nouvelle sécrétion de cytokines Th2. Peu d'études ont envisagé le rôle des bactéries lactiques sur les cellules dendritiques humaines dans un environnement intestinal. Dans cette optique, nous avons analysé l'effet de la souche de bactéries lactiques L. Casei sur la réactivité de MD-DC humaines, issues de sujets allergiques et non allergiques, dans un modèle in vitro (système Transwell®) constitué d'un épithélium intestinal obtenu à partir de la lignée Caco2. Les analyses réalisées en cytométrie en flux et en microscopie confocale montrent que des MD-DC immatures capturent efficacement des bactéries marquées par un fluorochrome à travers l'épithélium intestinal. Dans ces conditions, L. Casei induit une maturation partielle des MD-DC (augmentation des CD86 et CD54) issues des deux types de donneurs. Les MD-DC provenant de sujets sains, activées par L. Casei produisent plus d'IL-10 et d'IL-12 comparativement aux donneurs allergiques. Chez les donneurs allergiques, l'assise épithéliale accroît les productions d'IL-10 et d'IL-12 induites par la stimulation des MD-DC avec L. Casei. De plus, chez les deux types de donneurs, les MD-DC stimulées par L. Casei induisent les productions d'IL-10 et d'IFN- par des lymphocytes T autologues, productions qui sont accrues en présence de l'épithélium intestinal. Ce travail de thèse a permis de mettre en évidence que les bactéries lactiques sont capables d'affecter la réactivité de la cellule dendritique lui permettant de moduler le développement de la réponse immune lymphocytaire et la production de cytokines telles que les cytokines Th2 qui caractérisent l'allergie. L'épithélium intestinal participe à cet effet modulateur. L'ensemble des interactions entre bactéries lactiques, épithélium intestinal et cellule dendritique permettrait alors de contrôler le développement de la réaction allergique.

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Barlat, Isabelle. "Contrôle de la transition G1/S au cours du cycle cellulaire : Régulation négative de l'expression de la cycline A par le TGFBêta 1 (Transforming Growth Factor bêta 1)." Montpellier 2, 1995. http://www.theses.fr/1995MON20016.

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Abstract:

La division harmonieuse des cellules eucaryotes superieures suppose une coordination d'une part de la transmission et de l'integration des signaux exterieurs, et d'autre part du controle de la replication du materiel genetique. En effet, la stimulation de cellules quiescentes par des facteurs de croissance provoque l'activation de genes dont les produits participent a la division cellulaire. Parmi ceux-ci se trouvent les proteine-kinases de la famille cdk et leurs partenaires regulateurs, les cyclines. Ces deux composants s'associent pour former des complexes specifiques d'une phase du cycle cellulaire. Ces derniers sont les cibles de regulateurs negatifs du cycle cellulaire, tels que p53 ou rb, ou, positifs, tels que e2f1. Nous nous sommes interesses a la regulation de l'expression d'une cycline requise pour la transition g1/s, la cycline a. Dans notre modele cellulaire de fibroblastes de hamster chinois, l'expression de la cycline a au pied de la phase s est correlee a l'initiation de la synthese d'adn. Nos etudes realisees dans des variants de la lignee cc139 montrent que l'expression de la cycline a est d'autant plus precoce que le degre de transformation des cellules est eleve. Nous avons egalement montre que le tgfb1, qui empeche l'entree en phase s des cc139, inhibe l'expression de la cycline a sans affecter l'expression des genes de reponse primaire au serum, c-fos et c-jun. Cette inhibition est de nature transcriptionnelle et mobilise une sequence cre du promoteur cycline a. Celle-ci est capable de fixer, in vitro, dans des experiences de retard sur gel de multiples complexes auxquels participe la proteine atf1

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Honorat, Jean-François. "Rôle de la tyrosine phosphatase SHP1 dans la régulation de l'oncogène NPM-ALK des lymphomes anaplasiques à grandes cellules." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/449/.

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Abstract:

Les lymphomes anaplasiques à grandes cellules (LAGC) sont des proliférations lymphoïdes malignes qui affectent majoritairement les enfants et les jeunes adultes. Ils représentent 10 à 15% des lymphomes de l'enfant et sont caractérisés par la présence d'un oncogène à forte activité tyrosine kinase. Cet enzyme est codé par un ARNm hybride produit par différentes translocations chromosomiques dont la plus fréquente est la t(2 ;5) qui juxtapose le gène de la nucléophosmine (NPM) à celui de la tyrosine-kinase ALK (Anaplastic Lymphoma Kinase). Cette protéine chimère NPM-ALK active de façon constitutive les voies de signalisation pro-mitogènes et anti-apoptotiques qui conduisent à la transformation cellulaire. Plusieurs tyrosine-phosphatases modulant le niveau de phosphorylation des protéines, ont été décrites comme freinant les processus de cancérisation cellulaire. Parmi ces phosphatases, nous avons choisi d'étudier SHP1 qui est exprimée dans les cellules hématopoïétiques et impliquée dans les voies de régulation négative de l'activation lymphocytaire. Cette phosphatase, dont l'expression est souvent réprimée dans de nombreuses hémopathies, est considérée comme étant un suppresseur de tumeur. Dans un premier temps, nous avons démontré le rôle majeur joué par SHP1 dans la régulation négative du pouvoir oncogénique de NPM-ALK. Les tests d'activité phosphatase de SHP1 montrent que son activité est inversement proportionnelle à la phosphorylation sur tyrosine de NPM-ALK. Nous avons mis en évidence une association entre SHP1 et NPM-ALK et nous avons défini NPM-ALK comme étant un substrat de SHP1. Cette phosphatase régule négativement le pouvoir oncogénique de NPM-ALK en diminuant la prolifération cellulaire ainsi que la croissance tumorale. Une colocalisation entre les deux protéines a été observée au niveau de structures particulières granulaires présentes dans le cytoplasme. Ces structures, dont la nature et la fonction restent à définir, n'avaient à ce jour jamais été décrites. Enfin, nous avons montré à partir de 40 biopsies ganglionnaires de patients que l'expression de SHP1 est perdue dans 50% des cas. L'ensemble de ces travaux suggère que SHP1 pourrait être une nouvelle cible pharmacologique pour le traitement des LAGC ALK positifs. Dans la continuité de ces résultats, le deuxième objectif a été de stimuler l'activité de SHP1. .
Anaplastic Large Cell Lymphomas are a distinct subtype of non-Hodgkin's lymphomas that affect mostly children and young adults. They represent 10 to 15% of pediatrics' lymphomas and are characterized by the expression of an oncogene with a strong tyrosine kinase activity. This oncoprotein is encoded by hybrid mRNA resulting from different chromosomal translocations. The most frequent is the t(2 ;5) which induces the fusion of the nucleophosmin gene (NPM) and the Anaplastic Lymphoma Kinase (ALK) gene which encodes a tyrosine kinase receptor. The chimeric protein NPM-ALK is responsible for the constitutive activation of mitogenic and antiapoptotic pathways which lead to cellular transformation. Several proteins tyrosine-phosphatases that regulate the level of intracellular tyrosine phosphorylation, are described to downregulate the oncogenic potential. We chose to study SHP1 (Src homology protein tyrosine phosphatase 1) which is largely expressed in hematopoietic cells and implicated in pathways that negatively regulate lymphocyte activation. The expression of this phosphatase is often lost in hematopoietic diseases and SHP1 is proposed to be a candidate tumor suppressor gene. In a first part of this study, we have demonstrated the critical role played by SHP1 in the negative regulation of the oncogenic potential of NPM-ALK. Tyrosine phosphatase activity assays showed that SHP1 activity is inversely correlated with the NPM-ALK tyrosine phosphorylation level. Then, we show that SHP1 is associated with NPM-ALK, which is a SHP1 substrate. SHP1 is able to negatively regulate the oncogenic potential of NPM-ALK leading to a decrease of cellular proliferation and tumoral growth. A co-localisation of the two proteins has been observed in granular cytosplasmic structures. These granules had never been described before this work. Nevertheless, their structure and function are not known yet and have to be studied. Using tissue microarray including 40 cases of anaplastic large cell lymphomas from patients, we showed that SHP1 was expressed in 50% of cases. .

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Jacquet, Alexandra. "Etude de la réponse T CD4+ antitumorale : régulation de l'expansion et de l'accumulation intratumorale et établissement de nouveaux modèles de tumeurs transplantées et spontanées." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T010.

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Abstract:

La destruction de tumeurs par le système immunitaire est très rare chez l'Homme. Afin de mieux comprendre cette absence de rejet de nombreuses études ont été/sont menées chez la souris grâce à des modèles de tumeurs transplantées. Ces modèles présentent de nombreux inconvénients pour l'étude des réponses immunes anti-tumorales dus, en particulier, à la libération d'une grande quantité d'antigène par les cellules tumorales mourantes ou mortes dans un contexte traumatique lors de l'implantation des tumeurs. Nous avons établi un modèle de tumeur spontanée dans lequel il est possible de faire exprimer un antigène nominal uniquement par les cellules tumorales ainsi que des modèles de tumeurs transplantées dans lesquels l'expression de l'antigène peut être induite à distance de l'implantation évitant ainsi/les sources d'artefacts. Nous pouvons désormais étudier dans de meilleures conditions les relations entre tumeur et système immunitaire.

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Rahmoun, Massilva. "Études phénotypique et fonctionnelle de lymphocytes T CD4+ régulateurs humains : implication dans le contrôle de l'inflammation cutanée et bronchique." Montpellier 1, 2006. http://www.theses.fr/2006MON1T001.

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Abstract:

Afin de mieux caractériser le phénotype des cellules T régulatrices de type 1 (Tr1), nous avons cherché à identifier les molécules qu'elles expriment de façon différentielle. L'analyse du transcriptome de clones cellulaires T effecteurs et régulateurs humains a permis de mettre en évidence l'expression des intégrines CD18 et CD49b par les cellules Tr1. Nous montrons que leur co-expression identifie une population mineure de lymphocytes T périphériques, secréteurs d'IL-10. L'observation que la fréquence des cellules T CD18highCD49b+ est augmentée chez les patients atteints d'asthme sévère et non contrôlé indique que cette sur-expression pourrait constituer un outil diagnostique pour cette forme d'asthme. Nous avons ensuite évalué les effets des rayons ultra-violet solaires, connus pour leur activité suppressive, sur la fréquence des cellules T infiltrant des sites inflammatoires cutanés. Nous montrons, dans un modèle in vivo d'hypersensibilité de contact au nickel, qu'une seule irradiation solaire induit une immuno-suppression associée à une infiltration cutanée de cellules Tr1 productrices d'IL-10. Dans une troisième étude, nous montrons par une approche biochimique qu'un anticorps monoclonal, généré contre un clone lymphocytaire T cutané, est spécifique de CD66a. L'expression de Cd66a par les kératinocytes de patients psoriasiques, mais pas par ceux atteints de dermatite atopique, souligne le rôle de CD66a dans l'immunité anti-microbienne. Enfin, nous mettons en évidence que son expression sur les kératinocytes et les lymphocytes T est réciproquement induite par les cytokines produites par ces deux types cellulaires activés, à savoir l'IFN-γ et l'IL-7, respectivement.

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Defays, Axel. "Caractérisation de BAD-LAMP dans les cellules dendritiques plasmacyoïdes humaines." Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX22123/document.

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Abstract:

Les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDCs) font le lien entre l'immunité innée et l'immunité adaptative en produisant de l'interféron de type 1 en grandes quantités ainsi qu'en induisant l'activation et la prolifération des cellules T naïves de manière antigène-spécifique. Les pDCs expriment à haut niveau les récepteurs TLR7 et TLR9 et détectent ainsi les acides nucléiques d'origine virale. Les TLRs 7 et 9, localisés dans le réticulum endoplasmique (RE) à l'état basal, sont relocalisés vers les endosomes tardifs, lors de l'activation, pour initier la signalisation. Ce processus est dépendant de la protéine chaperon UNC93B1. Au cours de ma thèse, j'ai caractérisé une nouvelle molécule de la famille des protéines membranaires associées aux lysomes (LAMP), nommée BAD-LAMP. Cette protéine est, au sein du système immunitaire humain, exprimée spécifiquement dans les pDCs. Contrairement aux autres membres de la famille, BAD-LAMP n'est pas détectée dans les lysosomes mais est retenue dans le RE. J'ai également démontré que BAD-LAMP est régulée négativement lors de l'activation des pDCs induite par un ligand de TLR9. L'utilisation d'un système de cellules HeLa tranfectées et de différents mutants de BAD-LAMP avec des défauts de localisation m'ont permis d'établir que BAD-LAMP et UNC93B1 sont capables d'influencer mutuellement les adressage, par un mécanisme restant à identifier. BAD-LAMP pourrait aussi remplir un rôle de chaperon du complexe UNC93B1-TLR9 et moduler la réponse TLR9. L'étude d'un tel mécanisme de contrôle permettrait de mieux comprendre la régulation fine de la réponse immunitaire
Plasmacytoid dendritic cells (pDCs) link innate and adaptative immunity by producing large amounts of type-1 interferon and inducing naive T cell activation and proliferation in an antigen-specific manner. pDCs express high levels of TLR7 and TLR9 and thereby sense viral nucleic acids. TLRs 7 and 9, which rest in the endoplamic reticulum (ER) at steady-state, are re-localized to the late endosomal compartment upon activation for signaling. this process is dependent of the interaction between TLRs and the chaperone UNC93B1. During my thesis, I characterized a new molecule of the lysosome-associated membrane protein (LAMP) family, named BAD-LAMP. In the human immune system, this protein is exclusively expressed in pDCs. BAD-LAMP is not detected in lysosomes, as opposed to the other LAMP family members, but is retained in the ER compartment. I also demonstrated that BAD-LAMP is down-regulated after pDCs activation by a TLR9 ligand. Using trnasfered HeLa cells and several mutant forms of BAD-LAMP with localization defects, I etablished that BAD-LAMP and UNC93B1 can influence reciprocally their intercellular trafficking by a yet uncharacterize mechanism. BAD-LAMP could therefore act as a chaperone of UNC93B1-TLR9 complex and moduate the TLR9 response. The study of such a regulatory mechanism could help to understand better the fine tuning of the immune response

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Lhocine, Nouara. "Analyse de nouveaux régulateurs de la voie de transduction du signal IMD chez Drosophila melanogaster." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077104.

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Abstract:

L'immunité innée représente la première ligne de défense contre les infections et ses mécanismes ont été conservés au cours de l'évolution. Elle repose sur la reconnaissance de structures microbiennes conservées absentes des cellules de l'hôte (Microbe Associated Molecular Patterns) par des récepteurs spécifiques (Pattern Récognition Receptors). La drosophile est dépourvue de système immunitaire adaptatif et ne dispose que d'un système immunitaire inné pour lutter contre les infections microbiennes. Chez la drosophile, les facteurs NF-KappaB (Nuclear Factor-KappaB) sont activés au cours de la réponse immunitaire par les voies de signalisation Toll et IMD. La voie IMD est induite en réponse aux infections par des bacilles et régule l'expression de peptides antibactériens ; la voie Toll est principalement activée après infection par des coques et des champignons et régule l'expression de peptides antifongiques et d'un nombre restreint de peptides antibactériens. Des mutations inactivant ces deux voies bloquent l'expression de gènes codant les peptides antimicrobiens, causant une susceptibilité accrue aux infections microbiennes. Une comparaison des cascades gouvernant NF-KappaB chez la drosophile et les mammifères montre des parallèles saisissants entre la voie IMD et la voie TNF-R1 (Tumour Necrosis Factor receptor-1). Mon projet de thèse consiste en l'étude de la régulation des facteurs NF-KappaB chez la drosophile. Mon objectif était d'identifier de nouveaux régulateurs de la voie IMD par une approche génétique. Des données préliminaires obtenues lors de cribles effectués à partir de cellules en culture par ARN interférence (ARNi) avaient suggéré un rôle d'une protéine à domaine RING appelée DIAP2 (Drosophila Inhibitor of Apoptosis 2) dans la voie IMD. Nous avons montré qu'une délétion de diap2 induit chez la drosophile une susceptibilité accrue aux infections par des bactéries à Qram négatif associée à un défaut d'expression des gènes codant les peptides antibactériens. Des expériences d'épistasie ont démontré que DIAP2 est un régulateur positif de la voie IMD qui agit en aval de la protéine adaptatrice IMD. Pris dans son ensemble, mon travail a montré que DIAP2 est un nouveau composant de la voie IMD. Le laboratoire de Pascal Meier (Cancer Institute, Londres) a identifié une nouvelle protéine appelée PIMS (PGRP-LC-interacting Inhibitor of IMD Signaling) capable d'interagir en culture de cellules avec PGRP-LC, le récepteur de la voie IMD. J'ai étudié la fonction de PIMS à l'aide d'approches ARNi et génétique. Ainsi l'inactivation de PIMS in vivo provoque gne activation constitutive de la voie IMD dans l'intestin en absence d'infection et une suractivâtion de cette même voie après infection bactérienne orale. Mon travail établit que PIMS régule négativement la voie IMD, empêchant son activation inappropriée par la flore intestinale ou lors d'une infection. Nos collaborateurs anglais ont par ailleurs montré que PIMS pourrait agir dans le recyclage du récepteur à la membrane et réguler son interaction avec la protéine adaptatrice IMD/ou affecterait la stabilité ou la localisation du récepteur PGRP-LC à la membrane. Ce travail nous a permis d'identifier un nouveau régulateur négatif de la voie IMD qui participe à l'homéostasie du système immunitaire au niveau de l'intestin. Chez les vertébrés, la famille des facteurs de transcription de type NF-KappaB joue un rôle majeur lors des phénomènes d'immunité, d'inflammation, de prolifération cellulaire et d'apoptose. Bien que ces facteurs soient l'objet de nombreuses études, de nombreux aspects de leur fonction et de leur régulation chez les mammifères ne sont toujours pas élucidés. La réponse immunitaire de la drosophile présente de fortes analogies avec l'immunité innée des mammifères et la compréhension de ses mécanismes de régulation peut donc apporter un éclairage nouveau sur la régulation de l'inflammation chez l'homme
Drosophila represents an ideal model System in which to study host-pathogen interactions since insects have a particularly effective immune System that appears to be evolutionarily conserved. It relies solely on an innate immune response. NF-KappaB is a family of structurally related and evolutionarily conserved transcription factors. In response to microbial challenge, these factors are responsible for the antimicrobial response in drosophila. Indeed two NF-KappaB signalling pathways regulate the expression of antimicrobial peptides in response to bacterial infection. The Toll pathway is activated by gram-positive bacteria, while the IMD pathway responds to gram-negative bacteria. Activation of either Toll or IMD signalling results in the activation of distinct NF-KappaB-like transcription factors. Similarly in mammals, members of the NF-KappaB protein family play a central role in the regulation of inflammatory and innate immune responses. The IMD pathway of drosophila is highly similar to the mammalian TNF-R1 pathway. The conservation of the NF-KappaB regulatory mechanisms between organisms as diverse as insects and mammals indicate that the regulation of the innate immune response is evolutionarily conserved. The aim of my thesis was to study the regulation of the IMD pathway activation. Preliminary data in cultured cells suggested that DIAP2 protein may be involved in the IMD pathway activation. An in vivo genetic approach revealed that a loss of function of this gene is responsible for a higher susceptibility to infection and a decrease in antimicrobiel peptide production. Epistatic studies showed DIAP2 is a positive regulator of the IMD signalling that acts upstream or in parallel of TAK1. Therefore DIAP2 is a new component of this pathway. Secondly, Pascal Meier's team identified a new protein called PIMS (PGRP-LC-interacting Inhibitor of IMD Signalling) that interacts in cultured cells with the PGRP-LC receptor. Its inactivation induces the constitutive activation of the IMD signalling in vivo in the gut without an overt infection. After an oral infection it leads to the overactivation of the IMD signalling. This work shows that PIMS negatively régulates the IMD signalling. PIMS interacts with the peptidoglycane récognition protein (PGRP-LC), causing its depletion from the plasma membrane and shutdown of IMD signalling. Moreover, it also prevents the activation of this pathway by the commensal flora. Thus PIMS is required to establish immune tolerance to commensal bacteria and to maintain a balanced IMD response following exposure to bacterial infections

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Antoine, Pierre. "Etude de la réponse des lymphocytes T CD4+ au cours de l'infection primaire par le cytomégalovirus." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2014. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/209148.

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Abstract:

L’infection par le cytomégalovirus est le plus souvent asymptomatique chez les sujets immunocompétents mais entraine une morbidité et une mortalité importantes chez les patients immunocompromis et en cas d’infection congénitale.

Après l’infection primaire, le virus persiste tout au long de la vie à l’état latent mais peut se réactiver de manière intermittente. Ceci est associé à l’expansion de lymphocytes T CD4+ fortement différenciés ayant des fonctions auxiliaires et cytolytiques. L’infection primaire est, par contre, caractérisée par une réplication virale intense qui dure plusieurs mois. Il a été montré que l’exposition prolongée à des concentrations élevées d’antigènes entraine une perte progressive de fonction par les lymphocytes T appelée épuisement et caractérisée par l’expression de récepteurs inhibiteurs. L’impact de la réplication virale intense observée au cours de l’infection primaire par le CMV sur la fonction des lymphocytes T CD4+ n’est pas bien connu.

La fonctionnalité des lymphocytes T CD4+ a été explorée chez l’humain et le singe rhésus au cours de l’infection primaire et comparée à celle de sujets porteurs chroniques du virus.

Les résultats montrent que l’infection primaire par le CMV est associée à la détection de lymphocytes T CD4+ circulants ayant une faible capacité de prolifération et de production de cytokines et d’IL-2 en particulier.

L’impact de la différenciation sur la fonction des lymphocytes a été exploré en détail chez l’humain. Il a été observé qu’un degré de différenciation plus élevé des lymphocytes T CD4+ spécifiques du CMV joue un rôle dans la production réduite d’IL-2. Toutefois, la fraction moins différenciée (exprimant la molécule CD28) présente également une sécrétion d’IL-2 moindre au cours de l’infection primaire. Ceci fait partie d’une diminution globale de la production de cytokines au cours de l’infection primaire qui affecte également la sécrétion d’IFNγ et TNFα, entraine une polyfonctionnalité réduite et est indépendante de la différenciation. L’épuisement des lymphocytes T CD4+ spécifiques du CMV contribue à leur fonctionnalité moindre comme l’indique l’expression accrue du récepteur inhibiteur PD-1 et l’augmentation des réponses prolifératives en présence d’anticorps bloquant PD-1.

Le lien entre excrétion virale et fonction lymphocytaire a été étudié chez le macaque rhésus. L’infection par le CMV est observée chez les singes juvéniles et adultes mais pas chez les nourrissons. L’excrétion urinaire et salivaire est significativement plus fréquente et intense chez les singes juvéniles par rapport aux adultes. Comme chez l’humain au cours de l’infection primaire, les lymphocytes T CD4+ spécifiques du virus sont moins

polyfonctionnels et prolifèrent moins efficacement chez les singes juvéniles par rapport aux singes adultes. Ceci est associé à l’expression accrue du récepteur inhibiteur PD-1 chez les singes juvéniles. La réponse proliférative des lymphocytes T CD4+ est accrue en présence d’anticorps bloquant PD-1 ou d’IL-2 exogène. Enfin, une association inverse entre fonction lymphocytaire et excrétion urinaire a été mise en évidence chez les macaques adultes.

Ces résultats indiquent que l’infection par le CMV présente des caractéristiques semblables chez l’humain et le singe rhésus. L’infection primaire est associée à la détection de lymphocytes T CD4+ ayant une fonctionnalité moindre qu’au cours de l’infection chronique. L’expression du récepteur inhibiteur PD-1 typique des cellules épuisées est l’un des mécanismes impliqués et pourrait être la cible de stratégies immunomodulatrices visant à améliorer les fonctions lymphocytaires et le contrôle de la réplication virale. Les résultats présentés indiquent que l’infection naturelle chez le singe rhésus constitue un modèle potentiellement utile à l’étude de la réponse immune au CMV humain et à l’évaluation de stratégies immunomodulatrices.

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Cytomegalovirus infection is mostly asymptomatic in immunocompetent hosts but leads to severe morbidity and mortality in immunocompromised subjects and foetuses.

After primary infection, CMV establishes lifelong persistence but can reactivate intermittently. This is associated with the expansion of highly differentiated CD4+ T lymphocytes exhibiting helper functions and cytolytic activity.

Primary infection is characterised by an intense viral replication lasting several months. It has been shown that prolonged exposure to elevated antigen concentrations induces a progressive loss of function by T lymphocytes called exhaustion. This state of functional impairment is associated to the expression of inhibitory receptors. The consequence of the intense viral replication seen in primary CMV infection on CD4+ T cell function is unknown.

CD4+ T cell function has been studied in human and rhesus macaque during primary CMV infection. Chronic CMV carriers have been used as controls.

The results show that primary CMV infection is associated to the detection of circulating CD4+ T lymphocytes exhibiting weak proliferative capacities and reduced cytokine production affecting IL-2 in particular.

The impact of differentiation on lymphocyte function has been explored in detail in human. An increased proportion of terminally differentiated CD4+ T cells (CD28-) is observed during primary infection. These lymphocytes are unable to secrete IL-2 in response to CMV antigens. Interestingly, CD28+ CMV-specific CD4+ T cells also exhibit reduced IL-2 production during primary infection. This is part of a global reduction of cytokine production affecting IFNγ and TNFα as well. The impaired cytokine production is associated to reduced polyfunctionality and is independent of differentiation. Exhaustion of CMV-specific CD4+ T lymphocytes contributes to the reduced functionality as shown by an increased expression of the inhibitory receptor PD-1 and improved proliferative responses in the presence of PD-1 blocking antibodies.

The relationship between viral replication and lymphocyte function has been explored in rhesus macaques. CMV infection is observed in juvenile and adult monkeys but not in newborns. Excretion in urine and saliva is significantly more frequent and intense in juvenile monkeys than adults. As in primary infection in human, CMV-specific CD4+ T lymphocytes are less polyfunctional and have lower proliferative capacities in juveniles as compared to adults. This is associated with an increased expression of PD-1 in juvenile monkeys. CD4+ T cell proliferative responses are increased when PD-1 blocking antibodies or exogenous IL-2 are added to the culture medium. Finally, an inverse association between lymphocyte function and urinary excretion has been observed in adult macaques.

These results indicate that CMV infection shares common features in human and rhesus macaque. Primary infection is associated to the detection of CD4+ T lymphocyte displaying lower functional capacities as compared to chronic infection. Exhaustion contributes to the functional impairment and the inhibitory receptor PD-1 could be targeted by immunomodulatory strategies aiming at improving lymphocyte functions and controlling viral replication. Natural CMV infection in rhesus macaque might be useful as a model to evaluate the efficacy and safety of immunomodulatory approaches.
Doctorat en Sciences médicales
info:eu-repo/semantics/nonPublished

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Alawieh, Mohamad. "Etude des mécanismes de régulation après injection de cellules dendritiques allogéniques OX62+ associées à un anticorps anti-CD4 non déplétant dans un modèle de rejet chronique chez le rat." Phd thesis, Université de Bourgogne, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00938811.

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Abstract:

La manipulation du système immunitaire du receveur avant la transplantation pourrait permettre d'obtenir la tolérance de transplants allogéniques vascularisés en évitant la réaction de rejet à médiation lymphocytaire et humorale et l'utilisation permanente de traitement immunosuppresseur. Chez l'animal, l'injection au receveur, avant la transplantation, de cellules du donneur sous couvert d'anticorps bloquant le premier ou le second signal permet l'expansion périphérique d'une sous population de lymphocytes T CD4+CD25+FOXP3+, à activité suppressive (Treg).Dans ce travail de thèse, j'ai montré, dans un modèle murin utilisant des rats Fischer F344 comme donneur et des rats Lewis comme receveur, que l'injection au receveur avant la transplantation de cellules dendritiques spléniques OX62+ du donneur sous couvert d'anticorps monoclonal anti-CD4 W3/25 non dépletant permet d'obtenir la tolérance de transplants allogéniques cutanés et cardiaques à condition que ce protocole soit appliqué 28 jours avant la transplantation. La tolérance est due en partie à l'expansion de Treg inductibles spécifiques des alloantigènes. Elle n'est associée à aucune lésion d'artériopathie oblitérante observé au cours du rejet chronique de transplants vascularisés. Ces Treg ont aussi la capacité d'induire la tolérance de transplants allogéniques lorsqu'ils sont injectés au receveur la veille de la transplantation. Le blocage partiel de la production d'anticorps spécifiques du donneur chez les animaux tolérants suggère que les Treg interagissent avec les lymphocytes B en empêchant, soit la maturation des lymphocytes B en plasmocytes soit en favorisant l'expansion de lymphocytes B régulateurs. Ces résultats confirment que les Treg inductibles sont capables de prévenir les lésions vasculaires du rejet chronique. Ils soulignent également que les anticorps spécifiques du donneur apparaissant après la transplantation n'ont pas toujours un effet délétère.

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Gasparian, Sona. "Régulation de l'expression du gène T-bet pendant la différenciation des cellules th1 chez l'homme." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077213.

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Abstract:

Les sous-populations fonctionnellement distinctes de cellules T CD4+ sont essentielles pour orchestrer la réponse immune contre différents types de pathogènes. Les cellules Th1 (T helper type 1) sont impliquées dans le développement des réponses immunitaires cellulaires et protègent l'organisme contre des pathogènes intracellulaires. Par ailleurs les réponses Thl incontrôlées sont associées aux maladies inflammatoires chroniques et aux maladies auto-immunes. De ce fait, il est nécessaire de bien comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans le processus de différenciation des cellules Th1. Le facteur de transcription T-bet est spécifiquement exprimé par les cellules Th1 et joue un rôle important dans la différenciation de ces cellules. Il est impliqué dans le remodelage de la chromatine et dans l'expression du gène codant pour l'IFN-γ, spécifique des cellules Th1. L'objectif de ce projet est d'identifier les mécanismes impliqués dans la régulation de l'expression du gène T-bet pendant le développement des cellules Th1 humaines. Nous avons analysé les modifications de la structure de la chromatine au niveau du locus du gène T-bet dans ces cellules ce qui nous a permis d'identifier quatre sites hypersensibles à la DNase I (HS). Ces sites sont localisés dans les régions CNS. De plus, la chromatine associée aux sites HS est hyperacétylée au niveau de l'histone H3 dans les cellules Th1. L'ensemble de ces données indique que ces quatre régions peuvent être impliquées dans la régulation du gène T-bet chez l'homme. La stimulation du TCR induit une forte expression du gène T-bet et nous avons démontré que les protéines de la famille NF-AT sont impliquées dans ce processus
Functional distinct subsets of CD4+ T cells are essential to orchestrate efficient immune responses against different types of pathogens. T helper type 1 (Thl) cells promote cell-mediated immunity and are necessary to clear the organism from intracellular pathogens but are associated with autoimmune and chronic inflammatory diseases. This indicates that the development of Thl cells must be tightly controlled. The transcription factor T-bet is specifically expressed by Thl cells and plays an important role in the differentiation of this subset. T-bet is implicated in chromatin remodeling and control of Thl-specific expression of the IFN-f gene. The goal of this project is to identify the mechanisms that regulate T-bet expression during human Thl cell development. The analysis of changes of the chromatin structure at the T-bet locus in Thl cells allowed us to identify four DNAsel hypersensitive sites (HS). We found that the position of the HS identified in our experiments corresponds to the position of the CNS identified « in silico ». In addition, we found that chromatin associated with HS is hyperacetylated on histone H3 in Thl cells. Taken together, these data indicate that these four regions are implicated in the regulation of the human T-bet gene. We found that triggering of the T cell receptor (TCR) alone is sufficient to induce strong expression of T-bet. We demonstrated that NF-AT family members are implicated in this process

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Govender, Umeshree. "Study of transcription factors involved in the upregulation of IL-10 expression in human CD4 T cells costimulated by T cell receptor and type I interferon." Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066076.

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Abstract:

L'objectif de cette thèse a été d'étudier le mécanisme de la coopération entre les voies de signalisation du TCR et de l'interféron de type I qui est responsable de l'augmentation d'expression de la cytokine anti-inflammatoire IL-10 dans les lymphocytes T CD45RA+CD4+ humains. En utilisant une approche transcriptomique et d'interférence d'ARNm, j'ai observé que les voies IFN et TCR contrôlent différemment l'expression des STATs et que les BATFs sont induits par l'IFN et augmentés par la costimulation TCR/IFN. STAT3 a été identifié comme régulateur majeur de l'IL-10 et il est recruté à proximité d'un site de liaison pour BATF au locus IL-10. Sur la base d'essais de co-silencing des trois BATFs, nous avons proposé que les BATFs contrôlent l'amplitude de la réponse IFN en agissant comme facteurs de transcription " pionniers ". D'autres résultats obtenus par une étude transcriptomique d'environ 200 gènes, montrent des contributions uniques et combinées des voies TCR et de l'IFN dans le programme d'expression de gènes des lymphocytes CD45RA+CD4+ activés et indiquent que d'autres facteurs de transcription pourraient réguler l'IL-10. Cette étude est susceptible d'apporter une connaissance plus large de mécanismes impliqués dans la régulation croisée entre les voies TCR et IFN
In CD4 T cells several transcription factors (TFs) regulate expression of the anti-inflammatory cytokine IL-10. I investigated how type I interferon (IFN) cytokines and T cell receptor (TCR) pathways cooperate toward early upregulation of IL-10 in human CD45RA+ CD4+ T cells. I interrogated the role of the STAT and BATF family by transciptomics and RNAi-mediated gene-silencing. IFN and TCR induced STAT2 and STAT3 expression, respectively, while the BATFs were induced early by IFN and further enhanced by TCR/IFN together. STAT3 was the major regulator of TCR- and TCR/IFN-mediated IL-10 while STAT2 contributed to the latter. STAT3 was recruited adjacent to a BATF-binding site at the IL-10 locus early in response to TCR/IFN. Co-silencing of the three BATFs led to a marked decrease in TCR- and TCR/IFN-mediated IL-10. We propose that the BATFs control the magnitude of the IFN response as pioneer factors. Additional results of transcriptional profiling of ± 200 genes, including TFs downstream of TCR and IFN and TFs involved in IL-10 regulation, revealed that TCR and IFN provide unique and combined contributions to the early CD45RA+CD4+ T cell gene activation program and identified other potential TFs involved in TCR/IFN-mediated IL-10 transcription. This study may provide broad mechanistic bases for crosstalk between the TCR- and IFN-pathways

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Bresler, Priscillia. "Étude de la régulation des cellules lymphoïdes innées par les lymphocytes T chez la souris." Electronic Thesis or Diss., Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCB078.

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Abstract:

Plusieurs rapports de la littérature ont relaté que la composition, la fréquence et l'activité des ILC sont fortement impactées dans le contexte d'un déficit du système immunitaire adaptatif chez la souris. Cependant les mécanismes par lesquels l'immunité adaptative régule l'homéostasie des ILC restent en grande partie inconnus. L'objectif de ma thèse a été dans un premier temps d'évaluer l'implication des lymphocytes T dans cette régulation au sein de tissus lymphoïdes tels que les ganglions périphériques et mésentériques et dans l'intestin grêle. Dans un deuxième temps, j'ai entrepris d'identifier les mécanismes de régulation impliqués dans le dialogue entre ILC et lymphocytes T et de déterminer leur spécificité tissulaire. Au cours de ma thèse j'ai pu confirmer que la régulation des ILC3 NKp46+ sécrétrices d'IL-22 de la lamina propria de l'intestin par les lymphocytes T CD4+ repose sur la capacité de ces derniers à participer au confinement des bactéries commensales. Par ailleurs, j'ai également mis en évidence un rôle encore peu étudié des lymphocytes T CD4+ dans la régulation de la fréquence et de l'activité des ILC de type 2 dans les ganglions mésentériques. Ce dernier est indépendant de l'activation des lymphocytes T CD4+ par les antigènes du microbiote et repose en partie sur la régulation indirecte de l'expression de l'alarmine IL-33. En effet, j'ai montré que l'expression du gène codant l'IL-33 est augmentée dans les ganglions mésentériques en absence de lymphocytes T et que la neutralisation de l'IL-33 à court terme a pour effet de réduire significativement la fréquence des ILC2 et leur production de cytokines dans les ganglions mésentériques de souris dépourvues de lymphocytes T. Une collaboration avec le laboratoire de Lucie Peduto à l'Institut Pasteur a permis de montrer que les lymphocytes T pourraient indirectement réguler l'expression de l'IL-33 au sein du compartiment stromal des ganglions mésentériques. Il reste cependant à déterminer les mécanismes par lesquels les lymphocytes T régulent l'expression de l'IL-33 dans les cellules stromales des tissus lymphoïdes. Enfin, l'intervention d'autres facteurs environnementaux dépendants des lymphocytes T reste également à évaluer. Des expériences préliminaires indiquent que les lymphocytes B pourraient jouer un rôle non-redondant dans la régulation des ILC2 par les lymphocytes T dans un contexte de reconstitution du système immunitaire adaptatif
Many articles in the literature report that the composition, the frequency and the activity of ILCs are strongly affected when the adaptive immune system is deficient in mice. However, the mechanisms by which adaptive immunity regulates the homeostasis of ILCs remain largely unknown. The objective of my thesis was to address the role played by T cells in this regulation within lymphoid tissues such as peripheral and mesenteric lymph nodes and in the small intestine. I also characterised some of the regulatory mechanisms involved in this dialogue between ILCs and T cells and determined their tissue specificity. During my thesis, I confirmed that the regulation of gut resident ILC3 by CD4+ T cells is based on their ability to participate in the containment and diversification of bacterial communities colonizing the gut. In addition, I have also highlighted the role of CD4+ T cells in the regulation of the frequency and activity of type 2 ILCs in the mesenteric lymph nodes. The latter does not rely on the activation of CD4+ T cells by the gut microbiota. Indeed, I showed that the expression of the gene encoding IL-33 is increased in the mesenteric lymph nodes of T cell deficient mice and that the short-term neutralization of IL-33 signalling in vivo significantly reduces the frequency of type 2 ILCs in the mLNs of these mice. In collaboration with Lucie Peduto's team, we showed that T lymphocytes indirectly regulate the expression of IL-33 by mesenteric lymph nodes stromal cells. However, the mechanisms underlying these interactions remain to be elucidated. Finally, the role of other T-cell dependent environmental factors remains to be characterised. Indeed, our preliminary results indicate that T-B cooperation may be instrumental in the regulation of mesenteric lymph nodes resident ILC2 while it is redundant in the regulation of gut resident type 3 ILCs by CD4+ T cells

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Placek, Katarzyna. "Contrôle épigénétique de la différentiation des cellules Th humaines." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077212.

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Abstract:

Dans ce projet nous avons identifié les mécanismes impliqués dans la régulation de l'expression du gène TBET et les changements épigénétiques des locus codant pour les cytokines IL-22, IL-26 et IFN-γ pendant le développement des lymphocytes T auxiliaires (Th) humaines. TBET n'est pas exprimé dans les cellules T naives mais il est induit pendant la différentiation des cellules Thl. Nous avons montré que l'activation des cellules T CD4 induit deux sites hypersensibles à la Dnase I (HS) sur le locus TBET, l'acétylation des histones et l'expression du gène. NFAT activé par TCR est recruté au HS in vivo. IL-12 et IFN-γ ne sont pas suffisant pour induire TBET mais amplifient son expression dans les cellules stimulées par TCR. STAT4 activé par IL-12 est recruté au niveau du troisième HS trouvé dans les cellules Thl. Nous avons montré que les modifications des histones et l'expression du gène TBET sont initiées par NFAT activé en réponse à la stimulation par TCR et sont renforcées par STAT4 activé par IL-12. Ces deux facteurs sont recrutés au niveau de sites distincts sur le locus TBET. Les gènes codants pour les cytokines IL-22 et IL-26 sont localisés à proximité du gène IFNG suggérant leur corégulation. Nous avons trouvé que différentes conditions de stimulation induisent des niveaux d'expression et des niveaux de modifications épigénétiques différentes de ces trois gènes. Les modifications H4ac et H3K4me2 sur les régions régulatrices potentielles de locus IL22/IL26/IFNG sont induites par le TCR et la présence de cytokines peuvent les modifier. L'activation par le TCR n'affecte pas le niveau de PH3K27me3 sur les gènes IL22 et IL26 mais le diminue sur le locus de VIFNG
In this work we study of the factors determining the expression of the T-bet gene, the master regulator of Th type 1 (Thl) cell development and epigenetic changes at the IL22/IL26/IFNG locus during Th cell differentiation. T cell activation induced two strong DNAsel hypersensitive sites (HS) and rapid histone acetylation at these elements in CD4+ T cells. Histone acetylation and T-bet expression were strongly inhibited by CsA and NFAT bound to a HS in vivo. IL-12 and IFN-γ signaling alone were not sufficient to induce T-bet in naive CD4+ T cells, but enhanced T-bet expression in TCR-stimulated cells. A third HS 12kb upstream of the mRNA start site in developing Thl cells was bound by IL-12-activated STAT4. Our data suggest that TBET locus remodeling and gene expression are initiated by TCR-induced NFAT recruitment and amplified by IL-12-mediated STAT4 binding to two distinct distal regulatory elements during human Thl cell development. The IL22 and IL26 genes are located close to the Thl-specific IFNG gene, suggesting that these loci may be coregulated. We found that different stimulation conditions induced transcription and different histone modification pattern of these genes. Permissive H4ac and H3K4me2 were strongly induced by TCR during in vitro differentiation of T helper cells. Cytokines may influence the level of these modifications at potential regulatory elements of IL22/IL26/IFNG locus. In contrast, T cell activation by TCR does not influence the level of H3K27me3 at IL22 and IL26 genes but removes H3K27me3 from the INFG locus. These observations suggest that there are different modes regulating expression of these three genes

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Wolski, David. "Integrative analysis of CD8 T-cell responses in the context of adaptive immunity to acute Hepatitis C virus infection." Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ018/document.

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Abstract:

Le virus de l'hépatite C (VHC) établit généralement une infection chronique. Néanmoins, environ 20% des sujets vont résoudre spontanément l’infection. Il existe des preuves solides que les cellules T CD8 sont essentielles au contrôle du VHC. Dans la première partie de ma thèse, nous avons identifié un nouveau marqueur de la dysfonction des lymphocytes T, CD39, comme étant régulé positivement au cours de l'infection chronique par le VHC, le VIH et dans un modèle d’infection chronique par LCMV. Dans une deuxième partie, nous avons utilisé une approche d'analyse intégrative pour étudier la régulation transcriptionnelle des cellules T CD8 au cours de la phase aiguë de l'infection par le VHC. Nous avons identifié des changements précoces dans la régulation transcriptionelle d’importantes fonctions effectrices, de voies métaboliques et du nucléosome par les cellules T CD8 des patients souffrant d'une infection persistante. Certains de ces changements corrèlent avec l’absence des cellules T CD4 spécifiques du VHC et sont associés avec l’âge et le sexe du sujet infecté. Nos résultats suggèrent que la dysfonction des lymphocytes T CD8 au cours de l'infection par le VHC est liée à des événements précoces dans la régulation des gènes, non seulement amplifiés par une inflammation chronique et une absence des cellules T CD4 auxiliaires, mais qui pourraient également être influencés par des facteurs de l’hôte tels que l’âge et le sexe
Infection with Hepatitis C virus typically establishes chronic infection, but about 20% of subjects clear HCV spontaneously. There is strong evidence that functional CD8 T cells are critical for HCV control. In the first part of my thesis we identified a new marker for exhausted T cells, CD39, that we showed to be upregulated in chronic HCV infection, progressive HIV infection and in chronic infection with LCMV. In the second part we used an integrative analysis approach to study transcriptional regulation of CD8 T cells in the acute phase of HCV infection with different outcomes. We found early transcriptional changes in key immune effector pathways as well as metabolic and nucleosomal processes in CD8 T cells from patients with persistent infection. Some of these changes track with a lack of HCV-specific CD4 T cells exhibit associations with subject age and sex. Our findings suggest that CD8 T cell exhaustion in HCV infection is linked to early gene regulatory events that are not only amplified by chronic inflammation and a lack of CD4 help, but might also be influenced by disease-relevant host factors such as patient age and sex

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Delahaye, Laurent. "Régulation négative de l'interaction entre les sous-unités adaptatrices de la PI3-kinase et les protéines de signalisation de l'insuline et l'IGF-1, recherche de nouveau(x) partenaire(s) de la phosphotyrosine phosphatase SHP-2 ainsi que de gênes dont l'expression est régulée par la serine/threonine kinase PKB." Nice, 2001. http://www.theses.fr/2001NICE5658.

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Abstract:

Les récepteurs à activité tyrosine kinase de l'insuline et l'IGF-1 s'autophosphorylent sur des résidus tyrosine après fixation de leur ligand respectif, créant des sites d'ancrages pour les différents substrats de ces récepteurs comme les protéines IRS (Insulin Receptor Substrat) ou Shc. Ces protéines substrats sont ensuite phosphorylées par les récepteurs puis recrutent et activent les protéines de signalisation possédant des domaines SH2 comme la tyrosine phosphatase Shp-2 ou les sous-unités régulatrices de la PI 3-kinase. Ces protéines sont impliquées dans la transduction du message intracellulaire dont le résultat est le contrôle d'activités enzymatiques ou de l'expression de gènes impliqués dans l'homéostasie du glucose ou la croissance cellulaire par exemple. Dans un premier temps, nous nous sommes intéressés au rôle de la sous-unité régulatrice p55PIK de la PI 3-kinase dans la voie de signalisation de l'IGF-1. Nous avons déterminé les régions importantes de p55PIK qui interagissent avec la sous-unité catalytique p110 de la PI 3-kinase ainsi qu'avec le récepteur de l'IGF-1. Nous avons déterminé in vitro que p55PIK interagie avec le récepteur de l'IGF-1 purifié et que cette interaction dépend de l'état d'activation du récepteur. De plus, dans des cellules intactes stimulées par l'IGF-1, p55PIK interagie avec le récepteur de l'IGF-1 et IRS-1. Grâce à un mutant dominant négatif de p55PIK, nous avons mis en évidence une boucle de rétrocontrôle négatif de l'interaction de p55PIK avec ses partenaires, due à la production de D3-phosphoinositides par l'activité PI 3-kinase. Dans un deuxième temps, nous avons voulu caractériser le rôle de résidus sérine de IRS-1 qui jouxtent les tyrosines constituant les sites potentiels d'association de IRS-1 aux sous unités régulatrices de la PI 3-kinase. Pour cela, nous avons utilisé un système de double hybride modifié dans la levure et nous avons démontré que la mutation des sérines 662 et 731 en alanines de IRS-1 (IRS-1 S662A/S731A) augmente son interaction avec les sous-unités régulatrices p85 et p55PIK de la PI 3-kinase par rapport à IRS-1 sauvage. Dans des cellules intactes exprimant IRS-1 S662A/S731A, nous avons mis en évidence une augmentation de l'activité de la sérine/thréonine PKB en absence de toute stimulation par l'insuline comparé à des cellules qui expriment IRS-1 sauvage. Nous avons ensuite recherché de nouvelles molécules qui interagissent avec Shp-2 et qui pourraient jouer un rôle dans la signalisation de l'insuline. Pour cela nous avons criblé une banque d'ADNc de placenta humain à l'aide du système double hybride modifié dans la levure. Nous avons mis en évidence que la protéine FRS2 peut s'associer à Shp-2 lorsque FRS2 est phosphorylée par le récepteur de l'insuline. Nous avons démontré que FRS2 est phosphorylée in vitro par le récepteur de l'insuline. Dans des cellules surexprimant le récepteur de l'insuline, nous avons trouvé que FRS2 est phosphorylée en réponse à l'insuline et s'associe avec Shp-2. FRS2 serait donc un nouveaux substrat du récepteur et s'associerait avec Shp-2 après stimulation par l'insuline. Enfin, nous avons cherché à mettre en évidence des gènes dont l'expression est contrôlée par PKB. Pour cela, nous avons transfecté des cellules HepG2 avec un mutant constitutivement actif de PKB (Myr-PKB) puis nous avons trié les cellules par la technique de MACS pour ne récupérer que les cellules exprimant Myr-PKB. Nous avons préparé ensuite les ARN totaux de ces cellules et comparé le profil d'expression des ARNm de ces cellules par rapport à celui de cellules contrôle par hybridation soustractive par suppression (HSS). Après isolement de clones positifs, le séquençage des ADNc a révélé deux clones dont l'identité est à 98 % homologue au gène de la phospholipase du groupe IIA sécrétée (sPLA2). Ainsi dans nos conditions expérimentales, nous avons mis en évidence que la sPLA2 voit l'expression de son gène augmenter dans des cellules exprimant le mutant Myr-PKB par rapport aux cellules contrôles. PKB régulerait positivement l'expression de sPLA2 dans les cellules HepG2.

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Védrine, Mégane. "Rôle de l'antigène O dans la reconnaissance d'Escherichia coli par les cellules épithéliales mammaires bovines et modulation par le CD14 soluble." Thesis, Tours, 2019. http://www.theses.fr/2019TOUR4002.

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Abstract:

Les mammites constituent la première source de pertes financières des cheptels bovins laitiers en France et dans le monde. Parmi les agents pathogènes des infections mammaires, Escherichia coli (E. coli) représente la bactérie majeure impliquée dans les cas de mammites cliniques aigues. La part des facteurs de l’hôte dans la capacité à éliminer le pathogène causal est en partie avérée, tandis que le lien entre caractéristiques bactériennes et sévérité de l’infection est plus délicat à établir. Cette étude s’attache donc à déterminer les facteurs bactériens importants dans les interactions entre E. coli et la glande mammaire, et en particulier dans la reconnaissance des bactéries par les cellules épithéliales mammaires (CEM) qui constituent l'une des premières lignes de défense de la glande mammaire
Mastitis constitute the main source of financial losses for dairy herds in France and worldwide. Among major mastitis pathogens Escherichia coli (E. coli) is of great importance, especially in acute clinical mastitis. The role of host factors in the ability to eliminate the causative pathogen is well-known, but the implication of bacterial characteristics in the severity of the infection is more difficult to establish. This study aimed at deciphering the bacterial factors involved in the interactions between E. coli and the mammary gland, and in particular the recognition of E. coli by bovine mammary epithelial cells (MEC), which constitute one of the first defense lines of the mammary gland

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Belzile, Nathalye. "Capacité de rétention du récepteur CD4 par la protéine Vpu du VIH-1 chez des isolats primaires et implications au niveau de l'infectivité des particules virales." Thèse, 2007. http://hdl.handle.net/1866/15169.

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Bernier, Annie. "Mécanismes moléculaires de la réplication préférentielle du VIH-1 dans les cellules à polarisation Th1Th17 versus Th1 : rôle de PPARG dans la régulation négative de la réplication virale." Thèse, 2012. http://hdl.handle.net/1866/9136.

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Abstract:

Les cellules T CD4+ humaines sont hétérogènes du point de vue de la permissivité à l’infection par le virus de l’immunodéficience humaine de type 1 (VIH-1). Notre laboratoire a préalablement démontré que les cellules Th1 à phénotype CXCR3+CCR6- sont relativement résistantes à l’infection par le VIH-1 alors que les cellules Th1Th17 à phénotype CXCR3+CCR6+ y sont hautement permissives. La réplication du VIH dépend de plusieurs facteurs cellulaires de restriction ou de permissivité agissant à différentes étapes du cycle viral. Toutefois, malgré plusieurs avancées, la compréhension des voies de signalisation cellulaire impliquées dans la régulation de la réplication du VIH est encore limitée. L’objectif majeur de ce projet de maîtrise est de caractériser les mécanismes moléculaires de la permissivité et de la résistance au VIH respectivement dans les cellules Th1Th17 et Th1. Ce mémoire est divisé en quatre parties qui visent: (i) l’identification des voies canoniques et des fonctions biologiques différemment régulées dans les cellules Th1Th17 versus Th1 par l’analyse de leur transcriptome au niveau du génome entier; (ii) la validation de l’expression différentielle des gènes d’intérêt identifiés par biopuces au niveau des transcrits et des protéines; (iii) la caractérisation du rôle fonctionnel de certains de ces facteurs (i.e., PPARG, AhR) sur la réplication du VIH dans les cellules Th1Th17 versus Th1; et (iv) l’identification du niveau auquel ces facteurs interfèrent avec le cycle de réplication du VIH. Nos résultats d’analyse du transcriptome du génome entier par Gene Set Enrichment Analysis et Ingenuity Pathway Analysis indiquent que les cellules à profil Th1Th17 sont plus susceptibles à l’activation cellulaire et à l’apoptose, favorisent plus l’inflammation et expriment moins fortement les gènes liés à la dégradation protéosomale comparé aux cellules à profil Th1. Ces différences dans la régulation de diverses voies et fonctions biologiques permettent en partie d’expliquer la susceptibilité à l’infection par le VIH dans ces cellules. Nous avons ensuite confirmé l’expression différentielle de certains gènes d’intérêt dans les cellules Th1Th17 (CXCR6, PPARG, ARNTL, CTSH, PTPN13, MAP3K4) versus Th1 (SERPINB6, PTK2) au niveau de l’ARNm et des protéines. Finalement, nous avons démontré le rôle des facteurs de transcription PPARG et AhR dans la régulation de la réplication du VIH. L’activation de la voie PPARG par la rosiglitazone induit la diminution importante de la réplication du VIH dans les cellules T CD4+, alors que l’activation de la voie AhR par les ligands exogènes TCDD et FICZ augmente de façon significative la réplication virale. Nous proposons que la voie PPARG agit comme un régulateur négatif de la réplication du VIH dans ces cellules, en interférant avec la polarisation Th17 et probablement en inhibant l’activité transcriptionnelle du facteur NF-kB. Les rôles des formes nucléaires versus cytoplasmiques du récepteur Ahr semblent être diamétralement opposés, dans la mesure où l’interférence ARN contre AhR s’associe également à l’augmentation de la réplication virale. Il est ainsi possible que la forme cytoplasmique d’AhR, connue par son activité E3 ligase, participe à la dégradation protéosomale des particules virales. Le mécanisme par lequel le AhR nucléaire versus cytoplasmique interfère avec la réplication virale est en cours d’étude au laboratoire. Cette étude représente la première caractérisation de l’expression différentielle de gènes au niveau du génome entier de sous-populations T CD4+ permissives versus résistantes à l’infection par le VIH. Nos résultats identifient de nouvelles cibles moléculaires pour de nouvelles stratégies thérapeutiques visant à limiter la réplication du VIH dans les lymphocytes T CD4+ primaires.
Human CD4+ T cells are heterogeneous in terms of permissiveness to infection by the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1). Our laboratory previously demonstrated that Th1 cells (CXCR3+CCR6- phenotype) are relatively resistant to infection, whereas Th1Th17 cells (CXCR3+CCR6+ phenotype) are highly permissive to HIV-1. HIV replication depends on several cellular restriction or permissiveness factors acting at different stages of the viral life cycle. However, despite several advances, our knowledge on signaling pathways involved in HIV replication is still limited. The main objective of this MSc degree project is to characterize the molecular mechanisms of permissiveness and resistance to HIV in Th1Th17 and Th1 cells respectively. This thesis is divided into four parts, aiming at : (i) the identification of canonical pathways and biological functions differentially regulated in Th1Th17 vs Th1 cells through the analysis of their whole genome transcriptome; (ii) the validation of differential expression of relevant genes identified by microarrays at mRNA and protein levels; (iii) the characterization of the functional role of some of these factors (i.e. PPARG, AhR) on HIV replication in Th1Th17 versus Th1 cells; and (iv) the identification of the level at which these factors interfere with the HIV replication cycle. Our analysis of the large sets of microarray data by Gene Set Enrichment Analysis and Ingenuity Pathway Analysis indicate that Th1Th17 compared to Th1 cells are more susceptible to cell activation and apoptosis, promote superior inflammation and express at low levels genes related to the proteosomal degradation. These differences in the regulation of various biological functions and pathways can partly explain the susceptibility to HIV infection in these cells. We then confirmed the differential expression of some genes of interest in Th1Th17 (CXCR6, PPARG, ARNTL, CTSH, PTPN13, MAP3K4) versus Th1 (SERPINB6, PTK2) cells at mRNA and protein levels. Finally, we demonstrated the role of the transcription factors PPARG and AhR in the regulation of HIV replication. The activation of PPARG by rosiglitazone induces an important decrease in HIV replication in CD4+ T cells, while AhR activation by its exogenous ligands TCDD and FICZ promotes viral replication. We propose that the PPARG pathway acts as a negative regulator of HIV replication in these cells by interfering with Th17 polarization and probably by inhibiting the transcriptional activity of NF-kB. The role of nuclear versus cytoplasmic AhR appears diametrically opposed, since RNA interference against AhR is also associated with a significant increase in HIV replication. It is thus possible that the cytoplasmic form of AhR, known for its E3 ubiquitine ligase activity, is involved in proteasomal degradation of the viral particles. The mechanism by which the nuclear versus cytoplasmic form of AhR interferes with viral replication is being studied in the laboratory. This study represents the first characterization of the differential expression of genes in the entire genome of CD4+ T subpopulations permissive (Th1Th17) versus resistant (Th1) to infection by HIV. Ours results identify new molecular targets for therapeutic strategies to limit HIV replication in primary CD4+ T lymphocytes.

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De, Guire Vincent. "Conception de miARN artificiels basée sur la caractérisation de la boucle de régulation miR-20/E2F." Thèse, 2009. http://hdl.handle.net/1866/4141.

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Abstract:

La biologie moléculaire et, plus spécifiquement, la régulation de l’expression génique ont été révolutionnées par la découverte des microARN (miARN). Ces petits ARN d’une vingtaine de nucléotides sont impliqués dans la majorité des processus cellulaires et leur expression est dérégulée dans plusieurs maladies, comme le cancer. Un miARN reconnaît ses cibles principalement par son noyau, ce qui lui permet de réguler simultanément la traduction de centaines d’ARN messagers. Nos travaux ont montré l’existence d’une boucle de rétro-activation négative, entre deux miARN du polycistron miR-17-92 et trois facteurs de transcription de la famille E2F. E2F1, 2 et 3 induisent la transcription de miR-20 et miR-17 qui par la suite inhibent leur traduction. Nos résultats suggèrent l’implication de cette boucle dans la résistance à l’apoptose induite par E2F1 dans les cellules du cancer de la prostate, ce qui expliquerait en partie le potentiel oncogénique du polycistron miR-17-92. L’étude de ce motif de régulation nous a donc permis de réaliser le potentiel incroyable qu’ont les miARN à inhiber la traduction de plusieurs gènes. Basé sur les règles de reconnaissance des miARN, nous avons développé et validé MultiTar. Cet outil bioinformatique permet de trouver la séquence d’un miARN artificiel ayant le potentiel d’inhiber la traduction de gènes d’intérêts choisis par l’utilisateur. Afin de valider MultiTar, nous avons généré des multitargets pouvant inhiber l’expression des trois E2F, ce qui nous a permis de comparer leur efficacité à celle de miR-20. Nos miARN artificiels ont la capacité d’inhiber la traduction des E2F et de neutraliser leur fonction redondante de la progression du cycle cellulaire de façon similaire ou supérieur à miR-20. La fonctionnalité de notre programme, ouvre la voie à une stratégie flexible pouvant cibler le caractère multigénique de différents processus cellulaires ou maladies complexes, tel que le cancer. L’utilisation de miARN artificiels pourrait donc représenter une alternative intéressante aux stratégies déjà existantes, qui sont limitées à inhiber des cibles uniques. En plus d’élucider un réseau de régulation complexe impliquant les miARN, nous avons pu tirer profit de leur potentiel d’inhibition par la conception de miARN artificiels.
miRNAs are powerful regulators of gene expression in mammals. These small RNAs of around 20 nucleotides are involved in several cellular processes and diseases. MiRNAs recognize their targets mainly by a region comprising nucleotides 2-8, known as the seed. This characteristic gives them the potential to inhibit hundreds of messenger RNAs. Our first goal was to better characterize the complex network involving miRNAs in the regulation of gene expression. To achieve this, we studied the relation between a family of transcription factors, the E2Fs, and a family of miRNAs, the miR-17-92 cluster. Our results suggest a negative feedback loop involving miR-17, miR-20a, E2F1, E2F2 and E2F3. In this loop E2F1, 2 and 3 activate the transcription of the two miRNAs that inhibit their translation in return. The inhibition of the antiapoptotic function of E2F1 by miR-17 and miR-20 in a prostate cancer context, could explain the oncogenic potential of the miR-17-92 cluster that was previously reported. Studying the miR-20/E2F feedback loop made us realize how powerful was the ability of miRNAs to inhibit several targets. To overcome the lack of efficient tools able to inhibit simultaneously the expression of multiple genes, our second goal was to develop MultiTar, an algorithm able to design artificial miRNAs that target a set of predetermined genes. MultiTar was validated in silico, using known targets of endogenous miRNAs and in vivo, taking advantage of our experience with the E2F context. We designed artificial miRNAs against E2F1-3 and expressed them both in normal human fibroblasts and prostate cancer cells where they inhibited cell proliferation and induced cellular senescence. The observed phenotypes were precisely those known for inhibiting E2F activities. Hence, MultiTar can efficiently design artificial micro RNAs able to target multiple genes and is thus a flexible tool that can address the issue of multigenic diseases and complex cellular processes. The use of multitargets could be an alternative to overcome the limits of drugs or siRNAs that are designed generally to regulate only one target.

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Bouguermouh, Salim. "Rôle de la molécule CD47 sur le lymphocyte T dans la régulation de la réponse immunitaire." Thèse, 2009. http://hdl.handle.net/1866/3482.

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Abstract:

L’importance respective des lymphocytes T régulateurs naturels générés dans le thymus ou induits en périphérie dans la régulation immunitaire et la résolution de l’inflammation est désormais bien établie. Nous avons contribué à mettre en évidence une nouvelle voie d’induction de lymphocytes T régulateurs périphériques à partir de cellules T humaines CD4+CD25- naïves et mémoires. Nous avons montré que l’engagement de la molécule ubiquitaire transmembranaire CD47 sur la cellule T par un anticorps monoclonal ou par le peptide 4N1K (peptide dérivé du domaine carboxy-terminal de la thrombospondine-1 et spécifique du site de liaison à CD47) induisait des lymphocytes T CD4+ régulateurs exerçant une fonction suppressive sur les lymphocytes T effecteurs. Les propriétés suppressives induites par la thrombospondine-1 confortent les fonctions anti-inflammatoires de cette protéine de la matrice extracellulaire. L’inhibition exercée par les lymphocytes T régulateurs induits dépend du contact intercellulaire entre les cellules T régulatrices et leurs cibles, et est indépendante du TGF-. Nos résultats démontrent également le rôle de CD47 sur le lymphocyte T CD4+ dans la réponse immunitaire spécifique de l’antigène in vivo. En effet, les souris BALB/c déficientes pour CD47 présentent un biais de la sécrétion d’anticorps et de cytokines de type Th1, alors que les souris BALB/c sont décrites comme exprimant un profil de production de cytokines de type Th2. Nos travaux mettent en évidence le rôle de CD47 dans l’inhibition du développement d’une réponse cellulaire et humorale de type Th1 in vivo, confirmant de précédentes études in vitro réalisées avec des cellules T CD4+ humaines. Nous présentons également le rôle inhibiteur de l’engagement de CD28 in vitro sur la différenciation en cellules Th17 des lymphocytes T CD4+ naïfs isolés de souris BALB/c. Le mécanisme proposé est dépendant de la production de l’IL-2 et de l’IFN- et indépendant de la présence de lymphocytes T régulateurs. Notre étude du rôle de deux molécules transmembranaires CD47 et CD28 exprimées sur la cellule T CD4+, contribue à une meilleure connaissance des mécanismes impliqués dans la tolérance immunologique, la résolution de l’inflammation et la différenciation des cellules T "helper" CD4+.
Nowadays, the importance of natural regulatory T cells and adaptive regulatory T lymphocytes in immune regulation and resolution of inflammation are well established. We report a previously unknown pathway to generate adaptive regulatory T cells in the periphery from naive and memory human CD4+CD25- T cells. We show that the stimulation of the broadly expressed transmembrane proteins CD47 on T cells by a monoclonal antibody or by the 4NK1 peptide (carboxy-terminal peptide of thrombospondin-1 (TSP) specific of the binding site of CD47) induced regulatory T cells that exerted an inhibitory function on effector T cells. Our study on the suppressive proprieties of the TSP corroborates with reported anti-inflammatory activities of this extracellular matrix protein. The suppressive function of TSP induced regulatory T cells was contact-dependent and TGF--independent. Our data further demonstrate the role of CD47 expression on T cells in the antigenic-specific immune response in vivo. We report that the CD47-deficient BALB/c mice displayed a Th1-biased antibody and cytokine responses, instead of the Th2 cytokine profile observed in unmanipulated BALB/c mice. Our study outlines the role of CD47 as a self-control mechanism to negatively regulate type 1 cellular and humoral immune responses and most importantly confirm in vivo previous in vitro studies with human CD4+ T cells. We also report that soluble anti-CD28 monoclonal antibody suppressed in vitro differentiation of naïve CD4+ T cells isolated from BALB/c mice into IL-17-producing cells by mechanism that are IL-2 and IFN-γ-dependent but independent of the presence of regulatory T cells. Our studies highlight the suppressive function of two transmembrane molecules CD47 and CD28 expressed by CD4+ T cells in vitro and in vivo in human and mice. They thus may contribute to a better understanding of the mechanisms involved in the induction of immune tolerance, the resolution of inflammation and the differentiation of the T helper cells.

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Dissertations / Theses on the topic 'Régulation négative du CD4'

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