Dissertations / Theses on the topic 'Reprodução de equinos'

Este relatório contém a casuística das diferentes componentes do estágio fundamental realizado. São descritas as instalações dos locais de estágio e são desenvolvidos alguns temas abordados nos estágios: vacinação contra o tétano e contra a influenza equina, complicações mais comuns no pós-cirúrgico de cólicas, arterite séptica em cavalos adultos e em poldros, requisitos legais para um centro de recolha de sémen e para os garanhões doadores, vulvoplastia, colheita, avaliação e processamento de sémen. Assim como uma breve revisão da fisiologia reprodutiva da égua e do seu maneio reprodutivo. Contém ainda uma revisão mais aprofundada sobre transferência embrionária em equinos e um caso clinico acompanhado durante o estágio; ABSTRACT: Equine clinic, surgery and breeding This report contains a resume of the different components from the final externship. There are described the externship facilities and there are developed some of the discussed topics on it, such as: vaccination against tetanus and equine influenza, most common postoperative complications of colic surgery, septic arthritis in adult horses and foals, legal requirements to semen collection center and for the stallions donors, Caslick, collection, evaluation and semen processing. A brief review of the mare reproductive management. It also contains a most thorough review about embryo transfer and a clinical case followed during the externship.

Este relatório de estágio tem por base dois períodos de estágio distintos em duas espécies de grande porte: bovinos e equinos. O primeiro período de estágio foi efetuado na área de clínica e cirurgia de bovinos de aptidão leiteira, realizado no norte de Portugal e o segundo em clínica, cirurgia e reprodução de equinos, executado na Coudelaria de Alter Real. O relatório, dividido em duas partes, contém na primeira a exposição das atividades realizadas ao longo dos dois estágios, com breve revisão bibliográfica dos temas considerados mais pertinentes pela autora. A segunda parte, contém uma monografia com os resultados iniciais de um estudo retrospetivo dos efeitos ambientais e genéticos nas características seminais do garanhão Puro-sangue Lusitano; Abstract: Clinical Pathology and Reproduction in Cattle and Horses The present report is based on two distinct internship periods in two large species, cattle and horses. The first period of internship was carried out in heard health management, clinic and surgery of dairy cattle, carried out in the North of Portugal and, the second one took place in Royal Alter Stud farm, in Alter do Chão, in clinic, surgery and reproduction of horses. The report, divided in two parts, includes in the first the exposition of the activities performed during the two internships, with brief bibliographic reviews of subjects considered pertinent by the author. The second part contains a monograph with de preliminary results of a retrospective study about the genetic and environmental effects on the seminal traits, of the Lusitano stallion.

O presente relatório é baseado no estágio curricular realizado entre 1 de Março e 31 de Julho de 2014, co-orientado pela Dra. Marta Úson Olaso, focando-se principalmente no tema “reprodução equina”. É composto por 3 partes: casuística, monografia e análise de dados sobre o tema “reprodução no cio do poldro”. A primeira parte descreve a casuística que se acompanhou durante o estágio, diversas técnicas e casos reprodutivos assim como casos clínicos de diversas áreas. A monografia aborda o tema da reprodução no cio do poldro. A última parte, consiste num estudo retrospetivo referente aos dados das éguas acompanhadas pela Dra. Marta de 2009 a 2014, sobre a taxa de fertilidade no cio do poldro e diversos fatores que demonstraram afetar positiva ou negativamente esta taxa; ABSTRACT: Externship report - Breeding mares on foal heat The following document is the report of my externship that was realized from Mach 1st until July 31st, supervised by Drª Marta Úlson Olaso and with “Equine Reproduction” as the main focus. It is composed by three parts: casuistics, monography and data analysis on the subject “Breeding mares on foal heat”. The first part of the document describes the casuistics that I observed during the externship, namely a diversity of reproduction cases and other different clinical cases. The monograph is focused on the breeding of mares on Foal Heat and the last part of the document is data analysis of Drª. Marta Olaso clinical cases regarding this theme. The data comprises cases from 2009 until 2014 and relates fertility rate on foal heat with several external factor that were reported to influence this rate.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-04-01T14:05:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916458 bytes, checksum: 3ba31258a09fab456ccb755153420074 (MD5)
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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Esta tese compreende quatro capítulos. Todos os estudos aqui relatados foram executados na Colorado State University (CSU), em Fort Collins-CO/USA. Foram utilizados sêmen de seis garanhões com idade entre 15 e 21 anos, das raças Puro-Sangue Inglês, Quarto de Milha e Árabe; estabulados no Laboratório de Reprodução Equina da CSU. Capítulo 1: dividido em três experimentos. Experimento 1: objetivou-se avaliar efeito do tratamento com 2 mg de ciclodextrina carregada com colesterol e estigmastanol (CCC , CCE); 1, 2 e 3 mg de ciclodextrina carregada com óleo de salmão (S1, S2 e S3) e com óleo de semente de linho (L1, L2 e L3) nas motilidades total (MT) e progressiva (MP) dos espermatozóides após descongelamento. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos (p>0,05). Experimento 2: objetivou-se avaliar MT e MP do sêmen tratado com diferentes fontes de lipídeos sonicados em meio Whitten’s Modificado (MW), após congelamento convencional e congelamento precedido por choque pelo frio; e avaliar efeito do tratamento com 2 mg de CCC e CCE sobre motilidades após choque pelo frio. Os tratamentos usando lipídeos foram: 3 e 6 mg de óleo de salmão (S3 e S6), de óleo de semente de linho (L3 e L6), de gema de ovo de galinha (G3 e G6), de óleo fígado de bacalhau (B3 e B6) e de óleo de açafrão (A3 e A6). Nenhum dos tratamentos utilizando lipídeos melhorou motilidade após congelamento convencional (p>0,05). Para o sêmen submetido a 0 oC por 30 minutos, os tratamentos G6, CCC e CCE melhoraram MT e MP (p<0,05). Experimento 3: utilizou-se cromatografia gasosa para avaliar eficiência dos tratamentos em alterar o perfil de ácidos graxos da membrana espermática. Os tratamentos foram: 6 μg de óleo de semente de linho diluído em etanol (L1); 2 mg de ciclodextrina carregada com óleo de semente de linho (L2) e 6 mg de óleo de semente de linho sonicado em MW (L3). Nenhum dos tratamentos foi capaz de alterar o perfil de ácidos graxos da membrana espermática (p>0,05). Capítulo 2: objetivou-se mensurar quantidade de colesterol e estabelecer a relação colesterol:fosfolipídeos na membrana plasmática de células espermáticas tratadas com diferentes quantidades de CCC (0, 2, 4, 6 e 8 mg). Foram utilizados kit comercial (Cholesterol Liquicolor, Stanbio Laboratory, Boerne, TX, USA) para mensuração do colesterol e ensaio de ferrotiocianato de amônio para mensuração dos fosfolipídeos totais. A quantidade de colesterol encontrada nas células tratadas com 0, 2, 4, 6 e 8 mg de CCC foram respectivamente 0,22; 0,58; 0,77; 0,91 e 1,07 μg/10 6 de espermatozóides, e a relação colesterol:fosfolipídeos para os mesmos tratamentos foram 0,39; 0,72; 1,0; 1,16 e 1,36. A quantidade de colesterol na membrana foi maior a partir do uso de 2 mg de CCC (p<0,05), e a relação colesterol:fosfolipídeos a partir do tratamento com 4 mg de CCC (p<0,05). Capítulo 3: neste estudo o objetivo foi avaliar o comportamento do sêmen sem tratamento (CT) ou tratado com 20% de plasma seminal (PS) e 40 μM de PC-12 (PC) em eventos ligados à capacitação espermática durante incubação por 30 minutos (avaliações foram feitas no tempo 0 – T0, 5 – T5, 15 – T15 e 30 minutos – T30). Para isso cada um dos tratamentos foi submetido a quatro diferentes corantes: 1- CoroNa Green, que quantifica sódio intracelular (CG); 2- Fluo-3, que quantifica cálcio intracelular (Fluo); 3- FITC-PNA, que quantifica reação acrossômica (FP) e 4- Merocianina, que caracteriza fluidez/desorganização da membrana plasmática (Mero). Yo-Pro-1 ou iodeto de propídeo foram utilizados para avaliar integridade de membrana plasmática. As amostras foram lidas em citometria de fluxo. O tratamento com PC-12 aumentou o percentual de células com acrossoma reagido, detectada na avaliação aos 30 minutos. Este percentual, de 33%, foi maior que o dos demais tratamentos no mesmo tempo (CT: 13% e PS: 4%) e superior aos percentuais para o próprio PC-12 nos tempos 0 (7%), 5 (9%) e 15 minutos (16%). Com relação à fluidez da membrana plasmática não houve diferença no percentual de células com merocianina elevada entre os diferentes tratamentos, nem entre um mesmo tratamento ao longo do tempo (p>0,05). O estudo revelou efluxo de sódio das células espermáticas equinas viáveis após 15 minutos de incubação, sendo que nos tempos 15 e 30 minutos o percentual de celulas positivas para CG foram menores para tratamento com plasma seminal (8,8 e 4,8%) e maiores para tratamento com PC-12 (36 e 15,4%), em relação ao controle (23,6 e 11,8%, p<0,05). Após 15 minutos de incubação o sêmen dos três tratamentos apresentou percentual de células positivas para Fluo superior ao tempo 0, porém o plasma seminal retardou a entrada deste íon nas células, visto que, no T15 percentual de células Fluo+ foi menor que nos outros tratamentos (CT: 87%; PS: 59% e PC: 95%, p<0,05), voltando a se igualar no tempo 30 minutos (CT: 98%%; PS: 85% e PC: 97%, p>0,05). O meio MW utilizado foi capaz de induzir efluxo de sódio e influxo de cálcio, alterações que caracterizam capacitação espermática. Capítulo 4: os objetivos aqui foram avaliar eficiência de diluidores a base de gema de ovo (Lactose-EDTA) ou gema de ovo associada a leite em pó (FR5 modificado – FR5M) e eficiência do glicerol (GLI) ou da combinação deste com metilformamida (MF) em manter MT e MP dos espermatozóides após congelamento usando diferentes protocolos (0: congelamento sem resfriamento; 20: resfriamento em palhetas por 20 minutos a 5 oC antes do congelamento; 120T: resfriamento do sêmen em tubos por 120 minutos a 5 oC; 120P: resfriamento do sêmen em palhetas por 120 minutos a 5 oC). O FR5M preservou melhor a MP de células espermáticas em todos os protocolos de congelamento utilizados, mostrando benefício da combinação da gema de ovo com leite em pó no diluente de congelamento (15%, 21%, 26% e 25% para 0, 20, 120T e 120P, respectivamente, vs. 9%, 14%, 19% e 17%, para lactose-EDTA, p<0,05). A utilização de Lactose-EDTA 5%GLI apresentou resultados superiores para MT e MP se comparado ao mesmo diluidor com 3%MF + 2%GLI, o que mostra que o glicerol é um crioprotetor que pode ser utilizado em diferentes protocolos de congelamento (MT para Lactose-EDTA 5%GLI = 33%, 45%, 56% e 53% para 0, 20, 120T e 120P vs. 20%, 30% 35% e 36% para Lactose-EDTA 3%MF+ 2%GLI, p<0,05; MP para Lactose-EDTA 5%GLI = 19% e 17% para 120T e 120P vs. 11% e 10% para Lactose-EDTA 3%MF+ 2%GLI, p<0,05). O resfriamento do sêmen antes do congelamento pode ser realizado tanto em tubos quanto em palhetas de 0,5 mL, sem prejuízos às motilidades total e progressiva do sêmen após congelamento.
This thesis is compounded by four chapters. All work reported here were performed at Colorado State University (CSU), located in Fort Collins, CO / USA. Six stallions between 15 and 21 years old (Thoroughbred, Quarter Horse and Arabian breeds) and stabled at Equine Reproduction Laboratory at CSU were used in all experiments. Chapter 1: comprised by three experiments. Experiment 1: aimed to evaluate the effects on total motility (TM) and progressive motility (PM) after semen thawing from treatments with 2 mg of cyclodextrin-loaded-cholesterol and 2 mg of cyclodextrin-loaded-stigmastanol (CLC, CLS); 1, 2 and 3 mg of cyclodextrin-loaded-salmon oil (S1, S2 and S3); and 1, 2 and 3 mg of cyclodextrin- loaded-flax seed oil (F1, F2, and F3). No differences among treatments were detected (p>0.05). Experiment 2: aimed to evaluate TM and PM of semen treated with different sonicated lipids into Modified Whitten’s Medium (MW), after conventional freezing and freezing preceded by cold shock, and assess the effect of treatment with 2 mg of CLC and CLS on motility after cold shock. Treatments using lipids were: 3 and 6 mg of salmon oil (S3 and S6); 3 and 6 mg of flax seed oil (F3, F6); 3 and 6 mg of egg yolk (E3 and E6); 3 and 6 mg of cod liver oil (C3 and C6), 3 and 6 mg of safflower oil (SF3 and SF6). None of the lipid treatments improved motility after conventional freezing (p>0.05). For semen subjected to 0 °C for 30 minutes, TM and PM increased in semen treated with E6, CLC and CLS (p<0.05). Experiment 3: gas chromatography was used to evaluate effectiveness of treatments in altering the sperm membrane fatty acid profile. The treatments were: 6 μg of flax seed oil diluted with ethanol (F1); 2 mg of cyclodextrin-loaded- flax seed oil (F2) and 6 mg of flax seed oil sonicated in MW (F3). None of the treatments was able to change fatty acid profile in the sperm membrane (p>0.05). Chapter 2: aimed to measure the amount of cholesterol and to establish the cholesterol:phospholipids ratio in plasma membrane of fresh equine sperm cells treated with different amounts of CLC (0, 2, 4, 6 and 8 mg). A commercial kit was used to measure cholesterol (Cholesterol Liquicolor, Stanbio Laboratory, Boerne, TX, USA) and an ammonium ferrothiocyanate assay for total phospholipids measurement. Amount of cholesterol found for cells treated with 0, 2, 4, 6 and 8 mg CLC were, respectively, 0.22; 0.58; 0.77; 0.91 and 1.07 micrograms/10 6 sperm, and cholesterol:phospholipids ratios to the same treatments were 0.39; 0.72; 1.0; 1.16 and 1.36, respectively. Increase in cholesterol amount was observed when 2 mg of CLC was used (p<0.05), and cholesterol:phospholipids ratio was higher with 4 mg of CLC (p<0.05). Chapter 3: in this study the objective was to evaluate the response of fresh equine semen without treatment (CT) or treated with 20% of seminal plasma (SP) and 40 μM PC-12 (PC) in events related to sperm capacitation during incubation for 30 minutes (evaluations made at time 0 - T0, 5 - T5, 15 – T15 and 30 minutes - T30). Each treatment was subjected to four different dyes: 1- CoroNa Green, which measures intracellular sodium (CG); 2- Fluo-3, which measures intracellular calcium (Fluo); 3- FITC-PNA, which measures acrosome reaction (FP) and 4- Merocyanine, which characterizes plasma membrane fluidity/destabilization (Mero). Yo-Pro-1 or propidium iodide were used to assess cell membrane integrity. Samples were read in flow cytometry. An increased percentage of cells with reacted acrosome was observed in semen treated with PC-12 at T30. This proportion (33%) was higher than the other treatments at the same time (CT: 13% and SP: 4%) and higher than the proportion for PC-12 at T0 (7%), T5 (9%) and T15 (16%). There was no difference in the percentage of cells with high merocyanine between different treatments or between the same treatment over time (p>0.05). The study showed sodium efflux after 15 minutes incubation, and at times 15 and 30 minutes the percentage of positive cells for GC were lower in SP treatment (8.8 and 4.8%) and higher for PC-12 (36 and 15.4%) compared to the CT (23.6 and 11.8%, p <0.05). At T15 the semen of all treatments showed higher proportion of Fluo positive cells than T0, but seminal plasma delayed entry of the ion into the cells, since at T15 Fluo proportion of positive cells was lower than the other treatments (CT: 87%; SP: 59% and PC: 95%, p<0.05) and became similar at T30 (CT = 98%, SP= 85% and PC=97%, p> 0.05). The semen extender used was able to inducing sodium efflux and calcium influx, changes characterizing sperm capacitation. Chapter 4: the objectives were to evaluate efficiency of an egg yolk–based medium (lactose-EDTA) or egg yolk associated with powdered milk (modified FR5 - MFR5), and efficiency of glycerol (GLY) or a combination between GLY and dimethylformamide (MF) to maintain TM and PM sperm after freezing using different protocols (0: no cooling; 20: cooling straws for 20 minutes at 5 °C before freezing; 120T: cooling in tubes for 120 minutes at 5 °C; and 120P: cooling in straws for 120 minutes at 5 °C). MFR5 preserved PM in all freezing protocols, showing the benefit of the combination of egg yolk with powdered milk for freezing diluent (15%, 21%, 26% and 25% for 0, 20, 120T and 120P, respectively, vs. 9%, 14%, 19% and 17% for lactose-EDTA, p<0.05). The use of lactose-EDTA 5%GLY showed superior results for TM and PM if compared to the same medium with 3%MF + 2%GLY, indicating that glycerol is a cryoprotectant that can be used in several different freezing protocols (TM for Lactose-EDTA 5%GLY = 33%, 45%, 56% and 53% for 0, 20, 120T and 120P vs. 20% 30% 35% and 36% for LactoseEDTA 3%MF + 2%GLY, p <0.05; MP for Lactose-EDTA 5%GLY = 19% and 17% at 120T and 120P vs. 11% and 10% for Lactose-EDTA 3%MF + 2%GLY, p<0.05). The cooling before freezing can be performed either in tubes as in 0.5 mL straws for 120 minutes, without damage to total and progressive motility of thawed semen.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:19:18Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_cb_me_botfmvz.pdf: 1144823 bytes, checksum: be397bc7e946052ec01bc5ab32eeebc8 (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Este trabalho teve como objetivo avaliar a maturação nuclear e citoplasmática em duas condições experimentais. No experimento I (Exp I) comparou–se a utilização de três diferentes meios de cultivo TCM-199, SOFaa e HTF:BME na maturação in vitro de ovócitos eqüinos. No experimento II (Exp II) avaliou–se a habilidade dos ovócitos eqüinos maturados em meio HTF:BME suplementado com FSH homólogo e heterólogo e hormônio de crescimento eqüino (eGH), de serem fertilizados e passar pelo desenvolvimento embrionário e fetal após a transferência de ovócitos. Os ovários eqüinos foram obtidos de abatedouro e os ovócitos recuperados pela técnica de fatiamento. Em cada experimento foram realizadas cinco procedimentos com uma média de 30 ovócitos por grupo, estes foram maturados por 36 a 40 horas à 38,5ºC em atmosfera de 5% de CO2 em ar. A avaliação da maturação nuclear nos dois experimentos foi realizada em ovócitos desnudados, transferidos para gotas colocadas sobre lâmina histológica contendo 10μl Hoechst 33342 e examinados em microscópio invertido com luz fluorescente. A avaliação da morfologia citoplasmática foi realizada através de Microscopia Eletrônica de Transmissão. A análise estatística foi realizada através de ANOVA Para a transferência de ovócitos foram utilizadas receptoras não cíclicas, tratadas com Cipionato de Estradiol (ECP) por três dias (5, 3 e 2ml/dia IM). As receptoras foram inseminadas 12 horas pré e pós cirurgia, com 2x109 espermatozóides viáveis por inseminação. Foi realizada a transferência de 12,8 ovócitos maturados em média, nas condições do Exp II para cada égua, que após a cirurgia recebeu 200 mg/dia de progesterona... .
This study was designed to evaluate the nuclear and citoplasmatic oocyte maturation in two situations. Experiment I (ExpI) aimed to compare the use of TCM-199, SOFaa and HTF:BME media to mature equine oocytes in vitro. Experiment II (ExpII) evaluate the ability of equine oocytes matured in HTF:BME media containing homologous and heterologous FSH, associated with equine growth hormone (eGH), to undergo maturation and development after oocyte transfer. Equine ovaries were obtained in a slaughterhouse and the oocytes recovered after slicing the ovaries. For each experiment, five replicates were performed. After selection an average of 30 oocytes per group were matured during 36 to 40 hours at 38.5oC In an atmosphere with 5% CO2 in air. Nuclear maturation in both experiments was evaluated staining the oocytes with 10μl Hoechst 33342. Citoplasmatic maturation was analyzed in five oocytes per group using Transmission Electron Microscopy. All data was analyzed using ANOVA. For oocyte transfer, non-cycling recipient mares were treated with Estradiol Cipionate (ECP) during 3 days (5, 3 and 2ml/day IM). After transfer of an average of 12,8 oocytes matured in the Exp II conditions, each recipient mare was inseminated 12 hours pre- and post ovulation with 2x109 live sperm cells. After the surgery all recipient mares received 200 mg/day of progesterone... (Complete abstract, click electronic address below).

Resumo: Este trabalho teve como objetivo avaliar a maturação nuclear e citoplasmática em duas condições experimentais. No experimento I (Exp I) comparou-se a utilização de três diferentes meios de cultivo TCM-199, SOFaa e HTF:BME na maturação in vitro de ovócitos eqüinos. No experimento II (Exp II) avaliou-se a habilidade dos ovócitos eqüinos maturados em meio HTF:BME suplementado com FSH homólogo e heterólogo e hormônio de crescimento eqüino (eGH), de serem fertilizados e passar pelo desenvolvimento embrionário e fetal após a transferência de ovócitos. Os ovários eqüinos foram obtidos de abatedouro e os ovócitos recuperados pela técnica de fatiamento. Em cada experimento foram realizadas cinco procedimentos com uma média de 30 ovócitos por grupo, estes foram maturados por 36 a 40 horas à 38,5ºC em atmosfera de 5% de CO2 em ar. A avaliação da maturação nuclear nos dois experimentos foi realizada em ovócitos desnudados, transferidos para gotas colocadas sobre lâmina histológica contendo 10μl Hoechst 33342 e examinados em microscópio invertido com luz fluorescente. A avaliação da morfologia citoplasmática foi realizada através de Microscopia Eletrônica de Transmissão. A análise estatística foi realizada através de ANOVA Para a transferência de ovócitos foram utilizadas receptoras não cíclicas, tratadas com Cipionato de Estradiol (ECP) por três dias (5, 3 e 2ml/dia IM). As receptoras foram inseminadas 12 horas pré e pós cirurgia, com 2x109 espermatozóides viáveis por inseminação. Foi realizada a transferência de 12,8 ovócitos maturados em média, nas condições do Exp II para cada égua, que após a cirurgia recebeu 200 mg/dia de progesterona... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo).
Abstract: This study was designed to evaluate the nuclear and citoplasmatic oocyte maturation in two situations. Experiment I (ExpI) aimed to compare the use of TCM-199, SOFaa and HTF:BME media to mature equine oocytes in vitro. Experiment II (ExpII) evaluate the ability of equine oocytes matured in HTF:BME media containing homologous and heterologous FSH, associated with equine growth hormone (eGH), to undergo maturation and development after oocyte transfer. Equine ovaries were obtained in a slaughterhouse and the oocytes recovered after slicing the ovaries. For each experiment, five replicates were performed. After selection an average of 30 oocytes per group were matured during 36 to 40 hours at 38.5oC In an atmosphere with 5% CO2 in air. Nuclear maturation in both experiments was evaluated staining the oocytes with 10μl Hoechst 33342. Citoplasmatic maturation was analyzed in five oocytes per group using Transmission Electron Microscopy. All data was analyzed using ANOVA. For oocyte transfer, non-cycling recipient mares were treated with Estradiol Cipionate (ECP) during 3 days (5, 3 and 2ml/day IM). After transfer of an average of 12,8 oocytes matured in the Exp II conditions, each recipient mare was inseminated 12 hours pre- and post ovulation with 2x109 live sperm cells. After the surgery all recipient mares received 200 mg/day of progesterone... (Complete abstract, click electronic address below).
Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga
Coorientador: Marco Antonio Alvarenga
Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-04Bitstream added on 2014-06-13T20:59:35Z : No. of bitstreams: 1 blanco_idp_me_botfmvz.pdf: 957805 bytes, checksum: d8fe74b65ba19ca53f1ec69c651d4a0a (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Em éguas, o aprimoramento e a aplicação de técnicas como a ICSI, TO e transferência nuclear é restrita devido à dificuldade de obtenção de oócitos in vivo, atribuída a particularidades dos folículos ovarianos da espécie. Em folículos pré-ovulatórios, a expansão do cumulus que ocorre com a progressão da maturação folicular e deposição de ácido hialurônico aumenta os índices de recuperação de oócitos por folículo, enquanto o tratamento superovulatório, embora não seja eficiente em aumentar os índices de recuperação por folículo, melhora os índices de recuperação por égua. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da administração de hCG na expansão das células da granulosa e do cumulus e no índice de recuperação de oócitos a partir de folículos imaturos de éguas superovuladas. Para isso 10 éguas foram submetidas à OPU após três diferentes tratamentos hormonais (G1: EPE, G2: EPE/hCG e G3:controle). Cada égua foi submetida aos três tratamentos, tendo sido alternados um ciclo onde era permitido que houvesse ovulação, sem interferência, e um ciclo com OPU. No ciclo onde devia ocorrer aspiração, as éguas recebiam aplicações de prostaglandina no sétimo e oitavo dia após a ovulação. Para os grupos 1 e 2, iniciava-se o tratamento com EPE no D7. Quando a maioria dos folículos atingia entre 22 e 27 mm, somente o grupo 1 recebia hCG, a EPE era suspensa e efetuava-se OPU 24 horas depois para ambos os grupos. Para o grupo controle, após a aplicação de prostaglandina a OPU era efetuada 24 horas após o folículo dominante atingir 27-30 mm. Em todos os grupos foram aspirados folículos entre 10 e 35 mm. Não houve diferença entre os 3 grupos quanto aos índices de recuperação de oócitos por folículo, com médias de 15% a 16,7%. Entretanto, a hCG foi capaz de induzir uma expansão e luteinização precoce das células foliculares.
In mares, the use of artificial reproductive techniques (ART) such as intracitoplasmatic sperm injection (ICSI), oocyte transfer (OT), and cloning is limited by the low availability of oocytes obtained either in vitro or in vivo. The low recovery rate of oocytes from immature follicles seems to be linked with anatomical particularities of the follicular wall. In pre-ovulatory follicles (>35mm in diameter), final oocyte maturation is accompanied by the expansion of the cumulus, which releases the oocyte from the follicular wall resulting in increased recovery rates after follicular aspiration. The number of oocytes recovered in each OPU (Ovum Pick Up) section should be higher with superovulation. However, although the total number of oocytes recovered by each individual mare is increased, the recovery rate per follicle is still low. Treatment with hCG modifies the intra-follicular environment by inducing precocious expansion of the granulosa cells, leading to a higher recovery rate during OPU of pre-ovulatory follicles. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of hCG treatment on the recovery rate of oocytes obtained from immature follicles in mares superovulated with Equine Pituitary Extract (EPE). Ten mares were rotated in three different treatments: G1 – superovulated with EPE; G2 – Superovulated with EPE and treated with hCG, and G3 – Control. For all treatments, when the biggest follicle reached 27 – 30 mm, all follicles bigger than 10 mm were aspirated. Each OPU cycle was alternated with a rest cycle when a spontaneous ovulation occurred. Although treatment with hCG increased the number of follicles presenting expanded granulosa and high intra-follicular progesterone concentration, no statistically significant differences were observed between groups regarding oocyte recovery.

O presente trabalho retrata as atividades desenvolvidas ao longo do estágio curricular realizado na Luso Pecus, sob a orientação da Drª. Cristina Cosinha. A primeira parte consiste num relatório de estágio em que se encontra descrita e quantificada a casuística e procedimentos assistidos. Neste relatório, as várias áreas da clínica de equinos assistidas são categorizadas e é apresen-tada uma análise sucinta da distribuição dos casos/procedimentos, seguida do desenvolvimento de um caso relevante ou representativo, escolhido pela autora. A segunda parte é composta por uma monografia centrada numa revisão bibliográfica sobre o controlo reprodutivo da égua laminítica e pela apresentação de três casos clínicos, que levaram a autora a debruçar a atenção sobre o tema, de forma a retratar o impacto clínico e económico desta condição, bem como estratégias de melhor acompanhar os casos clínicos na prática diária; Equine clinics and surgery Abstract: This report describes the activities carried out during the externship at Luso Pecus, under the supervision of Drª. Cristina Cosinha. The first part of the report describes and quantifies all the cases and procedures observed. In this part, the multiple areas of the equine practice are orga-nized, and a synopsis of the distribution of the cases/procedures is presented, followed by a more detailed discussion of a relevant and representative case, of the authors choice. The second part is composed by a monography focused on a bibliographic review on the repro-ductive control of the laminitic mare, and by the presentation of three clinical cases that caught the attention of the author on the subject. Its purpose is to expose the clinical and economic impact of this condition, as well as develop strategies to best deal with the cases in the clinical practice.

A vitrificação de ovócitos pode ser de grande auxílio na manutenção genética após a morte e na pesquisa científica preservando ovócitos em diferentes estágios de maturação. Esta técnica é uma biotecnologia pouco utilizada na espécie equina devido às baixas taxas de viabilidade celular após a criopreservação. O objetivo deste estudo foi determinar a expressão de genes ligados a viabilidade celular e apoptose em complexos cúmulus ovócitos (CCOs) antes e após à vitrificação. Com este propósito, folículos entre 5 a 30 mm foram aspirados e 240 CCOs imaturos foram recuperados em abatedouro localizado em São Gabriel, RS, durante a estação reprodutiva. Os CCOs foram divididos em dois grupos: não vitrificados (n=120) e vitrificados (n=120). O protocolo de vitrificação foi realizado de acordo com método comercial EquiPro-VitKit (Minitube-Alemanha). Após vitrificação, CCOs foram mantidos em meio de maturação in vitro durante 6 horas e avaliados imediatamente. Os genes utilizados para análise de viabilidade dos CCOs foram: “bone morphogenetic protein” 15 (BMP 15); bcl-2- “like protein” 4 (BAX); Caspase 3 (CASP 3) e GAPDH (controle). A análise gênica foi realizada através do método de real-time PCR quantitativo (qRT-PCR). Foi observada diferença na expressão de mRNA do gene BAX (0.85 ± 0.08) em CCOs não vitrificados em comparação com vitrificados (2.05 ± 0.47; P = 0.03). Não foi observada diferença na expressão de mRNA do BMP15 (1.55 ± 0.73) em CCOs não vitrificados em comparação com vitrificados (2.84 ± 2.20; P > 0.05). Não foi observada diferença na expressão de mRNA do CASP3 (0.63 ± 0.20) em CCOs não vitrificados em comparação com vitrificados (0.64 ± 0.01; P > 0.05). Não foi observada diferença na expressão de mRNA do CASP3 (0.63 ± 0.20) em CCOs não vitrificados em comparação com vitrificados (0.64 ± 0.01; P > 0.05). Em conclusão, os resultados observados na expressão de BMP15 sugerem a permanência da viabilidade celular em CCOs equinos, porém, BAX sugere a ativação do processo de apoptose nas células expostas ao processo de vitrificação.
Oocyte vitrification is a modern technique that can be used to ensure genetic maintenance after animal death and to improve oocyte cryopreservation at different stages of maturation. Equine oocyte vitrification is a biotechnology rarely used in horses due to the low post-cryopreservation cell viability. The aim of this study was to determine the expression of genes linked to cell viability and apoptosis in equine cumulus-oocyte complexes (COCs) prior and after vitrification. With this purpose, 5 to 30 mm ovarian follicles were aspirated and 240 COCs were collected from a slaughterhouse in Southern Brazil during breeding season. The COCs were divided into two groups: non-vitrified control COCs (CON, n=120) and vitrified oocytes (VIT, n=120). Vitrification protocol was provided according to a commercially available method from EquiPro-VitKit. After vitrification, COCs were in vitro matured for 6 hours and immediately evaluated. Genes product abundance were: Bone morphogenetic protein 15 (Bmp 15); Bcl-2-associated X protein (Bax); Caspase 3 (Casp 3); and GAPDH (control). The gene expression analysis was performed by quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Difference was observed in COCs mRNA abundance for Bax gene from non-vitrified (0.85 ± 0.08) compared to vitrified (2.05 ± 0.47; P = 0.03). No difference was observed in the COCs mRNA abundance for Bmp 15 from non-vitrified (1.55 ± 0.73) compared to vitrified (2.84 ± 2.20; P > 0.05). There was no difference in mRNA abundance for Casp 3 in non-vitrified (0.63 ± 0.20) compared to vitrified (0.64 ± 0.01; P > 0.05). In conclusion, results demonstrate that Bmp 15 expression in vitrified COCs indicate cell viability; however, Bax suggest the activation of apoptosis cascade in cells exposed to vitrification process.

Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga
Banca: Cezinande de Meira
Banca: Marcelo Marcondes Seneda
Resumo: Em éguas, o aprimoramento e a aplicação de técnicas como a ICSI, TO e transferência nuclear é restrita devido à dificuldade de obtenção de oócitos in vivo, atribuída a particularidades dos folículos ovarianos da espécie. Em folículos pré-ovulatórios, a expansão do cumulus que ocorre com a progressão da maturação folicular e deposição de ácido hialurônico aumenta os índices de recuperação de oócitos por folículo, enquanto o tratamento superovulatório, embora não seja eficiente em aumentar os índices de recuperação por folículo, melhora os índices de recuperação por égua. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da administração de hCG na expansão das células da granulosa e do cumulus e no índice de recuperação de oócitos a partir de folículos imaturos de éguas superovuladas. Para isso 10 éguas foram submetidas à OPU após três diferentes tratamentos hormonais (G1: EPE, G2: EPE/hCG e G3:controle). Cada égua foi submetida aos três tratamentos, tendo sido alternados um ciclo onde era permitido que houvesse ovulação, sem interferência, e um ciclo com OPU. No ciclo onde devia ocorrer aspiração, as éguas recebiam aplicações de prostaglandina no sétimo e oitavo dia após a ovulação. Para os grupos 1 e 2, iniciava-se o tratamento com EPE no D7. Quando a maioria dos folículos atingia entre 22 e 27 mm, somente o grupo 1 recebia hCG, a EPE era suspensa e efetuava-se OPU 24 horas depois para ambos os grupos. Para o grupo controle, após a aplicação de prostaglandina a OPU era efetuada 24 horas após o folículo dominante atingir 27-30 mm. Em todos os grupos foram aspirados folículos entre 10 e 35 mm. Não houve diferença entre os 3 grupos quanto aos índices de recuperação de oócitos por folículo, com médias de 15% a 16,7%. Entretanto, a hCG foi capaz de induzir uma expansão e luteinização precoce das células foliculares.
Abstract: In mares, the use of artificial reproductive techniques (ART) such as intracitoplasmatic sperm injection (ICSI), oocyte transfer (OT), and cloning is limited by the low availability of oocytes obtained either in vitro or in vivo. The low recovery rate of oocytes from immature follicles seems to be linked with anatomical particularities of the follicular wall. In pre-ovulatory follicles (>35mm in diameter), final oocyte maturation is accompanied by the expansion of the cumulus, which releases the oocyte from the follicular wall resulting in increased recovery rates after follicular aspiration. The number of oocytes recovered in each OPU (Ovum Pick Up) section should be higher with superovulation. However, although the total number of oocytes recovered by each individual mare is increased, the recovery rate per follicle is still low. Treatment with hCG modifies the intra-follicular environment by inducing precocious expansion of the granulosa cells, leading to a higher recovery rate during OPU of pre-ovulatory follicles. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of hCG treatment on the recovery rate of oocytes obtained from immature follicles in mares superovulated with Equine Pituitary Extract (EPE). Ten mares were rotated in three different treatments: G1 - superovulated with EPE; G2 - Superovulated with EPE and treated with hCG, and G3 - Control. For all treatments, when the biggest follicle reached 27 - 30 mm, all follicles bigger than 10 mm were aspirated. Each OPU cycle was alternated with a rest cycle when a spontaneous ovulation occurred. Although treatment with hCG increased the number of follicles presenting expanded granulosa and high intra-follicular progesterone concentration, no statistically significant differences were observed between groups regarding oocyte recovery.
Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-30Bitstream added on 2014-06-13T19:38:27Z : No. of bitstreams: 1 cabrera_t_me_botfmvz.pdf: 238669 bytes, checksum: af95e99a0d314d942c43862f9ad27ccd (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Com o intuito de estender um aceitável intervalo entre a ovulação da receptora e dia da transferência de embrião (TE), o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ácido mefenâmico na capacidade de manutenção da função do corpo lúteo em receptoras que se encontravam no dia 10 do ciclo (D10), bem como verificar as taxas de prenhez após a transferência do embrião. Foram transferidos 48 embriões para receptoras no dia 10 do ciclo divididos em três grupos experimentais: Grupo 1 controle (n=18); Grupo 2 (n=15) receptoras tratadas com 1g de ácido mefenâmico por via oral desde o oitavo até o décimo sexto dia após a ovulação; Grupo 3 (n=15) receptoras tratadas com 1g de ácido mefenâmico por via oral no dia da transferência e por mais dois dias. Seis dias após a transferência dos embriões foi confirmada a gestação por ultrassonografia e repetida aos 30 dias. Para análise das porcentagens de gestação e classificação uterina no dia da TE foi utilizado o Teste de Fisher e para os valores obtidas da dosagem sérica de progesterona foi utilizado o teste de ANOVA seguido pelo teste de Tukey. O grupo controle apresentou 33,3% de taxa de gestação (6/18). Os grupos 2 e 3 apresentaram 40,0% (6/15) e 33,3% (5/15), respectivamente. Nas éguas não gestantes, os três grupos apresentaram queda progressiva na concentração média de progesterona, significativamente a partir do 12° dia pós ovulação, não havendo interferência no tempo da ocorrência da luteólise. As taxa de prenhez em receptoras D10 apresentaram índices satisfatórios em receptoras com bom tônus uterino e cervical no dia da TE. Conclui-se que o ácido mefenâmico não impediu a luteólise e não melhorou as taxas de prenhez das receptoras no dia 10 do ciclo estral
In order to extend an acceptable interval between ovulation of the recipient and the day of the embryo transfer (ET), the purpose of this study was to evaluate the effect of mefenamic acid in the ability to maintain corpus luteum function in recipient mares that were on Day 10 (D10) of the estrous cycle, and to verify the pregnancy rate after embryo transfer. 48 embryos were transferred into recipients on Day 10 of the cycle divided into three experimental groups: Group 1 control (n = 18); Group 2 (n = 15) recipients treated with 1g mefenamic acid orally since the eighth until the tenth sixth days after ovulation; Group 3 (n = 15) recipients treated with 1g mefenamic acid orally on day of transfer and for two more days. Six days after ET, pregnancy was confirmed by ultrasound and repeated at 30 days. For analysis of percentages of pregnancy and classification uterine on ET day was used Fisher's exact test and the values obtained from the serum progesterone was used ANOVA followed by Tukey test.The control group showed a 33.3% pregnancy rate (6/18). Groups 2 and 3 presented 40.0% (6/15) and 33.3% (5/15), respectively. In non-pregnant mares, all three groups showed a progressive decrease in the mean concentration of progesterone significantly from day 12 post ovulation, without interference in the time of the occurrence of luteolysis. The pregnancy rate in recipients on Day 10 showed satisfactory rates in recipients with good uterine tone and neck on the day of ET. It is concluded that mefenamic acid did not prevent luteolysis and did not improve pregnancy rates of recipients on day 10 of the estrous cycle

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Junior
Banca: Marco Antonio Alvarenga
Banca: Marcio Teoro do Carmo
Resumo: Com o intuito de estender um aceitável intervalo entre a ovulação da receptora e dia da transferência de embrião (TE), o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ácido mefenâmico na capacidade de manutenção da função do corpo lúteo em receptoras que se encontravam no dia 10 do ciclo (D10), bem como verificar as taxas de prenhez após a transferência do embrião. Foram transferidos 48 embriões para receptoras no dia 10 do ciclo divididos em três grupos experimentais: Grupo 1 controle (n=18); Grupo 2 (n=15) receptoras tratadas com 1g de ácido mefenâmico por via oral desde o oitavo até o décimo sexto dia após a ovulação; Grupo 3 (n=15) receptoras tratadas com 1g de ácido mefenâmico por via oral no dia da transferência e por mais dois dias. Seis dias após a transferência dos embriões foi confirmada a gestação por ultrassonografia e repetida aos 30 dias. Para análise das porcentagens de gestação e classificação uterina no dia da TE foi utilizado o Teste de Fisher e para os valores obtidas da dosagem sérica de progesterona foi utilizado o teste de ANOVA seguido pelo teste de Tukey. O grupo controle apresentou 33,3% de taxa de gestação (6/18). Os grupos 2 e 3 apresentaram 40,0% (6/15) e 33,3% (5/15), respectivamente. Nas éguas não gestantes, os três grupos apresentaram queda progressiva na concentração média de progesterona, significativamente a partir do 12° dia pós ovulação, não havendo interferência no tempo da ocorrência da luteólise. As taxa de prenhez em receptoras D10 apresentaram índices satisfatórios em receptoras com bom tônus uterino e cervical no dia da TE. Conclui-se que o ácido mefenâmico não impediu a luteólise e não melhorou as taxas de prenhez das receptoras no dia 10 do ciclo estral
Abstract: In order to extend an acceptable interval between ovulation of the recipient and the day of the embryo transfer (ET), the purpose of this study was to evaluate the effect of mefenamic acid in the ability to maintain corpus luteum function in recipient mares that were on Day 10 (D10) of the estrous cycle, and to verify the pregnancy rate after embryo transfer. 48 embryos were transferred into recipients on Day 10 of the cycle divided into three experimental groups: Group 1 control (n = 18); Group 2 (n = 15) recipients treated with 1g mefenamic acid orally since the eighth until the tenth sixth days after ovulation; Group 3 (n = 15) recipients treated with 1g mefenamic acid orally on day of transfer and for two more days. Six days after ET, pregnancy was confirmed by ultrasound and repeated at 30 days. For analysis of percentages of pregnancy and classification uterine on ET day was used Fisher's exact test and the values obtained from the serum progesterone was used ANOVA followed by Tukey test.The control group showed a 33.3% pregnancy rate (6/18). Groups 2 and 3 presented 40.0% (6/15) and 33.3% (5/15), respectively. In non-pregnant mares, all three groups showed a progressive decrease in the mean concentration of progesterone significantly from day 12 post ovulation, without interference in the time of the occurrence of luteolysis. The pregnancy rate in recipients on Day 10 showed satisfactory rates in recipients with good uterine tone and neck on the day of ET. It is concluded that mefenamic acid did not prevent luteolysis and did not improve pregnancy rates of recipients on day 10 of the estrous cycle
Mestre

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-19Bitstream added on 2014-11-10T11:57:44Z : No. of bitstreams: 1 000788398.pdf: 359564 bytes, checksum: 9f9d8433658bf4b20dc7fe6d641d8e84 (MD5)
Vários fatores influenciam no resultado da transferência de embrião (TE) em equinos, sendo que a sincronia entre a doadora e a receptora muitas vezes limita o uso da receptora, pois não há sincronia do ambiente uterino e com o estágio do embrião que será transferido. Éguas doadoras de embriões muitas vezes devido ao manejo distintos das receptoras tendem a apresentar ciclos ovulatórios por mais tempo durante a estação reprodutiva. Atualmente, muitos protocolos e terapias possibilitam uma maior recuperação de embriões por ciclo, mesmo de éguas idosas, dessa forma as receptoras desempenham um importante papel na cadeia da TE. Várias estratégias são utilizadas para maximizar o uso de éguas receptoras e com isso aumentar o número de produtos de TE por estação. Com a intenção de sincronizar ou aumentar o tempo de utilização das receptoras durante a estação de monta, pode-se utilizar progesterona e progestágenos, e estrógenos dessa forma, reduz a relação doadora/receptora, gerando uma redução de custo e tempo, além da utilização de éguas não ciclantes com índices de gestação satisfatórios. O presente estudo teve como objetivo estudar o efeito da utilização do estrógeno e progesterona no diestro para maximizar a utilização de receptoras de embrião. Onde foi observado a taxa de prenhez no grupo diestro de 40%, sendo uma alternativa estratégica em programas de TE quando poucas receptoras estiverem disponíveis
Several factors influence the outcome of embryo transfer (TE) in horses, and the synchrony between donor and recipient often limits the use of the recipient, because there is no synchronization of the uterine environment and the stage of the embryo to be transferred. Mares embryo donors often due to different handling of the recipients tend to have longer ovulatory cycles during the breeding season. Currently many protocols and therapies enable greater recovery of embryos per cycle, even old mares, so the receivers play an important point in the chain of TE. Several strategies are used to maximize the use of recipient mares and thereby increase the number of products per season TE. With the intention of increasing or synchronize the time of use of the receiver during the breeding season may be mentioned progesterone and progestins, estrogens and thus reduces the ratio donor / recipient, resulting in a reduction of cost and time, besides the use mares with ciclantes not satisfactory pregnancy rates. The present study aimed to study the effect of the use of estrogen and progesterone in diestrus to maximize the use of embryo recipients in TE programs

Orientador: José Antonio Dell'Aqua Junior
Banca: Frederico Ozanam Papa
Banca: Marcio Teoro do Carmo
Resumo: Vários fatores influenciam no resultado da transferência de embrião (TE) em equinos, sendo que a sincronia entre a doadora e a receptora muitas vezes limita o uso da receptora, pois não há sincronia do ambiente uterino e com o estágio do embrião que será transferido. Éguas doadoras de embriões muitas vezes devido ao manejo distintos das receptoras tendem a apresentar ciclos ovulatórios por mais tempo durante a estação reprodutiva. Atualmente, muitos protocolos e terapias possibilitam uma maior recuperação de embriões por ciclo, mesmo de éguas idosas, dessa forma as receptoras desempenham um importante papel na cadeia da TE. Várias estratégias são utilizadas para maximizar o uso de éguas receptoras e com isso aumentar o número de produtos de TE por estação. Com a intenção de sincronizar ou aumentar o tempo de utilização das receptoras durante a estação de monta, pode-se utilizar progesterona e progestágenos, e estrógenos dessa forma, reduz a relação doadora/receptora, gerando uma redução de custo e tempo, além da utilização de éguas não ciclantes com índices de gestação satisfatórios. O presente estudo teve como objetivo estudar o efeito da utilização do estrógeno e progesterona no diestro para maximizar a utilização de receptoras de embrião. Onde foi observado a taxa de prenhez no grupo diestro de 40%, sendo uma alternativa estratégica em programas de TE quando poucas receptoras estiverem disponíveis
Abstract: Several factors influence the outcome of embryo transfer (TE) in horses, and the synchrony between donor and recipient often limits the use of the recipient, because there is no synchronization of the uterine environment and the stage of the embryo to be transferred. Mares embryo donors often due to different handling of the recipients tend to have longer ovulatory cycles during the breeding season. Currently many protocols and therapies enable greater recovery of embryos per cycle, even old mares, so the receivers play an important point in the chain of TE. Several strategies are used to maximize the use of recipient mares and thereby increase the number of products per season TE. With the intention of increasing or synchronize the time of use of the receiver during the breeding season may be mentioned progesterone and progestins, estrogens and thus reduces the ratio donor / recipient, resulting in a reduction of cost and time, besides the use mares with ciclantes not satisfactory pregnancy rates. The present study aimed to study the effect of the use of estrogen and progesterone in diestrus to maximize the use of embryo recipients in TE programs
Mestre

Durante o processo de criopreservação de sêmen, os espermatozóides sofrem alguns danos que resultam na diminuição da fertilidade deste. O presente estudo foi realizado a fim de avaliar o efeito da utilização, combinada de duas curvas de congelamento com dois diluentes comerciais sobre a criopreservação de sêmen eqüino. Foram analisados 20 ejaculados. As amostras foram avaliadas, pela motilidade progressiva e total do sêmen pós-descongelamento e pela integridade e funcionalidade da membrana dos espermatozóides. A combinação entre curva automatizada e Botu- Crio® apresentou as maiores médias, nas análises de motilidade total (55,53%) e progressiva (17,25%), após o descongelamento. O diluente Botu-Crio® ,isoladamente, apresentou também os melhores resultados quando foram realizadas as análises de integridade (CFDA/PI) e funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico.
During semen cryopreservation, sperm cells were submitted to some deleterious events leading to membrane damage which result in fertility decrease. This study was designed to compare the effects of two freezing techniques (conventional and automated), their freezing rates and the use of two commercial extenders as cryoprotectants (FR-5® and Botu-Crio®) on the total and progressive motility, integrity and functionality of spermatic membranes during the cryopreservation of equine semen. Twenty ejaculates were analyzed. The total and progressive motility of fresh and postthawing semen samples were evaluated by the patterns assays. The function of plasmatic membrane was measured by the hipoosmotic swelling test. The integrity of plasmatic membrane was evaluated using CFDA/PI fluorescent probes. There were significant differences between the two freezing techniques and/or between cryoprotectants for all assessed parameters. The combined used between Botu-Crio® and automated curves showed better results in total and progressive post-thawing motility. The extender Botu-Crio®, alone, showed better results in order to preserve the membrane integrity and function.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-08Bitstream added on 2014-06-13T19:45:08Z : No. of bitstreams: 1 limaneto_jf_dr_botfmvz.pdf: 5509939 bytes, checksum: 6d585da226479576f95a5b051bde27a2 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A célula-tronco (CT) é definida como uma célula com capacidade de gerar diferentes tipos celulares e reconstituir diversos tecidos. Além disso, a CT apresenta propriedades de auto-renovação, gerando cópias idênticas a si mesma. De acordo com sua origem, as células-tronco podem ser chamadas de adultas e embrionárias. As células-tronco adultas (CTA) mais utilizadas nas clínicas de terapia celular são as células-tronco hematopoiéticas e as células tronco mesenquimais, encontradas principalmente na medula óssea, tecido adiposo e no sangue do cordão umbilical. As células-tronco embrionárias (CTE) são derivadas da massa celular interna de embriões no estágio de blastocisto. Desta maneira este trabalho teve como objetivo desenvolver uma metodologia adequada para o isolamento, cultivo e caracterização de células tronco embrionárias e mesenquimais de eqüinos, além de verificar a capacidade que as células possuem em se diferenciar in vitro em outros tipos célulares. Foi coletado sangue da medula óssea de eqüinos entre 8 e 15 anos de idade. As células tronco mesenquimais foram isoladas após a primeira e segunda passagem. As células foram caracterizadas com marcadores de superfície CD34 (mononucleares) e CD44 (mesenquimais). Após isolamento e caracterização, as células tronco mesenquimais foram diferenciadas para as linhagens osteogênica, adipogênica, condrogênica e neurogênica. A confirmação da diferenciação das células tronco foi realizada por marcadores teciduais específicos. Estas células também, foram capazes de expressarem marcadores neurais. Para o isolamento das células tronco embrionária eqüina, embriões com oito a nove dias foram coletado e a massa celular interna (MCI) isolada mecanicamente. Após o isolamento, a MCI foi transferida para a placa de cultivo previamente preparada com monocamada de fibroblastos para o desenvolvimento...
The stem cell (SC) is defined as cells with the capacity of generate different cellular types and rebuild various tissues. Moreover, the SC has a selfregenerate ability, generating identical copies of itself. According to its origins, the SC can be named as “adult” or “embryonic”. The adult stem cell (ASC) more often used in clinical trials and cellular therapy, are the hematopoietic stem cells and the mesenchymal stem cells, isolated mainly from the marrow bone, adipose tissue and umbilical cord blood. The embryonic stem cells (ESC) are obtained from the inner cell mass of embryos at the blastocyst stage. In this way the present study had as objective to develop an adequate methodology of isolation, culture and characterization of embryonic and mesechymal stem cells from horses, verifying the capacity of those cells to differentiate in vitro into different cells types. Bone marrow blood was collected from horses, aging from 8 to 15 years and filtered with a donation blood kit filter, to avoid clots. The mesenchymal stem cells were isolated after the first and the second passage. The SC were characterized using surface markers CD34 (monuclear) and CD44 (mesenchymal). After the isolation and characterization, the mesenchymal stem cells were differenced into osteogenic, adipogenic, condrogenic and neurogenic lineage. The cells differentiations were confirmed using specific tissue markers. To isolate the embryonic stem cells equine embryos with 8 to 9 days were used. The inner cell mass (ICM) were extract mechanically and transferred to a culture dish previously prepared with fibroblasts monolayer to colony formation and development. The colonies were characterized with pluripotency markers and then submitted to a differentiation process into neurogenic lineage, confirmed by specific neural tissue markers

Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga
Banca: Sony Dimas Bicudo
Banca: Nereu Carlos Prestes
Banca: José Antonio Visintin
Banca: Claudia Barbosa Fernandes
Resumo: A célula-tronco (CT) é definida como uma célula com capacidade de gerar diferentes tipos celulares e reconstituir diversos tecidos. Além disso, a CT apresenta propriedades de auto-renovação, gerando cópias idênticas a si mesma. De acordo com sua origem, as células-tronco podem ser chamadas de "adultas" e "embrionárias". As células-tronco adultas (CTA) mais utilizadas nas clínicas de terapia celular são as células-tronco hematopoiéticas e as células tronco mesenquimais, encontradas principalmente na medula óssea, tecido adiposo e no sangue do cordão umbilical. As células-tronco embrionárias (CTE) são derivadas da massa celular interna de embriões no estágio de blastocisto. Desta maneira este trabalho teve como objetivo desenvolver uma metodologia adequada para o isolamento, cultivo e caracterização de células tronco embrionárias e mesenquimais de eqüinos, além de verificar a capacidade que as células possuem em se diferenciar in vitro em outros tipos célulares. Foi coletado sangue da medula óssea de eqüinos entre 8 e 15 anos de idade. As células tronco mesenquimais foram isoladas após a primeira e segunda passagem. As células foram caracterizadas com marcadores de superfície CD34 (mononucleares) e CD44 (mesenquimais). Após isolamento e caracterização, as células tronco mesenquimais foram diferenciadas para as linhagens osteogênica, adipogênica, condrogênica e neurogênica. A confirmação da diferenciação das células tronco foi realizada por marcadores teciduais específicos. Estas células também, foram capazes de expressarem marcadores neurais. Para o isolamento das células tronco embrionária eqüina, embriões com oito a nove dias foram coletado e a massa celular interna (MCI) isolada mecanicamente. Após o isolamento, a MCI foi transferida para a placa de cultivo previamente preparada com monocamada de fibroblastos para o desenvolvimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The stem cell (SC) is defined as cells with the capacity of generate different cellular types and rebuild various tissues. Moreover, the SC has a selfregenerate ability, generating identical copies of itself. According to its origins, the SC can be named as "adult" or "embryonic". The adult stem cell (ASC) more often used in clinical trials and cellular therapy, are the hematopoietic stem cells and the mesenchymal stem cells, isolated mainly from the marrow bone, adipose tissue and umbilical cord blood. The embryonic stem cells (ESC) are obtained from the inner cell mass of embryos at the blastocyst stage. In this way the present study had as objective to develop an adequate methodology of isolation, culture and characterization of embryonic and mesechymal stem cells from horses, verifying the capacity of those cells to differentiate in vitro into different cells types. Bone marrow blood was collected from horses, aging from 8 to 15 years and filtered with a donation blood kit filter, to avoid clots. The mesenchymal stem cells were isolated after the first and the second passage. The SC were characterized using surface markers CD34 (monuclear) and CD44 (mesenchymal). After the isolation and characterization, the mesenchymal stem cells were differenced into osteogenic, adipogenic, condrogenic and neurogenic lineage. The cells differentiations were confirmed using specific tissue markers. To isolate the embryonic stem cells equine embryos with 8 to 9 days were used. The inner cell mass (ICM) were extract mechanically and transferred to a culture dish previously prepared with fibroblasts monolayer to colony formation and development. The colonies were characterized with pluripotency markers and then submitted to a differentiation process into neurogenic lineage, confirmed by specific neural tissue markers
Doutor

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-14T11:47:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1408671 bytes, checksum: 7703568ae2fd819b712c172d5c3330f8 (MD5)
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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
Objetivou-se verificar se a endometrite é a principal causa da retirada de éguas receptoras do programa de transferência de embriões, além de comparar métodos e técnicas de diagnóstico. Quarenta éguas receptoras mestiças oriundas de sete propriedades e que não ficaram gestantes ao final da estação reprodutiva, adicionado ao histórico de subfertilidade, foram selecionadas para exame ginecológico. O exame foi realizado através de (i) coleta de dados do animal, idade, escore de condição corporal (ECC) e histórico reprodutivo; (ii) exame clínico reprodutivo, conformação do períneo, palpação e ultrassonografia transretal dos órgãos reprodutivos, vaginoscopia e exame digital da cérvix; e (iii) exames laboratoriais, cultura e citologia, a partir de um coletor comercial (CC) duplamente protegidos, lavado intrauterino de baixo volume (LBV) e do lavado do fragmento resultante da biópsia endometrial (LFBE), e a avaliação histológica. A presença de polimorfonucleados (PMNs) no estrato compacto durante a avaliação histológica serviu de referência para o diagnóstico da endometrite e base para comparação entre os métodos de diagnóstico. A endometrite foi diagnosticada em 65% dos animais avaliados, sendo caracterizada pela presença de PMNs, distribuição das glândulas endometriais em aglomerações e a presença de fibrose no tecido endometrial e periglandular durante a avaliação histológica. No exame clínico reprodutivo, foram positivos 32,5% dos animais para a avaliação da conformação do períneo; 52,5% para exame de palpação e ultrassonografia; 25% para o exame de vaginoscopia; e 37,5% para o exame da cérvix. Nos exames laboratoriais, foram positivos 17,5% para avaliação do efluxo do LBV; 52,5% para o exame citológico uterino; e 62,5% para exame de cultura uterina, sendo a bactéria mais isolada a Staphylococcus spp., seguida de Escherichia coli, Enterobacter spp. e Citrobacter spp., todas susceptíveis a sulfa/trimetoprim, enrofloxacina e florfenicol. Comparando os exames para o diagnóstico da endometrite, a palpação e ultrassonografia apresentaram os melhores resultados entre os exames clínicos, entretanto, foi inferior aos exames laboratoriais de citologia e cultura uterina, sendo este último com maior sensibilidade e especificidade para endometrite. A utilização de múltiplos resultados de diferentes exames também se mostrou uma alternativa eficaz para o diagnóstico da endometrite. Nas condições em que o estudo foi realizado, a técnica de coleta de amostras mais prática e ao mesmo tempo eficaz para os exames de cultura e citologia uterina foi a do CC. A técnica de LFBE não demonstrou ser tão eficiente quanto às demais. Concluiu-se que a endometrite é a principal causa de éguas receptoras com problemas reprodutivos, e que o exame ginecológico é essencial para o diagnóstico destes animais, utilizando-se o maior número de exames possíveis ou o exame de palpação e ultrassonografia como triagem para a realização de exames laboratoriais, além disto, que o coletor comercial foi o método mais prático e eficaz para a coleta de amostras para os exames de cultura e citologia endometriais.
The objective was to verify if endometritis is the main cause of the withdrawal of recipient mares from the embryo transfer program, in addition to comparing methods and diagnostic techniques. Forty crossbred recipient mares from seven farms that did not become pregnant at the end of the reproductive season, added to the history of subfertility, were selected for gynecological examination. The examination was performed through (i) collection of animal data, age, body condition score (ECC) and examination, conformation reproductive of the history; perineum, (ii) reproductive palpation and clinical transrectal ultrasonography of the reproductive organs, vaginoscopy and digital examination of the cervix; and (iii) laboratory tests, culture and cytology, from a double-shielded commercial collector (CC), low-volume intrauterine flush (LBV) and wash of the fragment resulting from endometrial biopsy (LFBE), and histological evaluation. The presence of polymorphonucleate (PMNs) in the compact stratum during the histological evaluation served as a reference for the diagnosis of endometritis and basis for comparison between diagnostic methods. Endometritis was diagnosed in 65% of the evaluated animals, being characterized by the presence of PMNs, distribution of the endometrial glands in agglomerations and the presence of fibrosis in endometrial and periglandular tissue during the histological evaluation. In the reproductive clinical examination, 32.5% of the animals were positive for evaluation of the perineum conformation; 52.5% for examination of palpation and ultrasonography; 25% for vaginoscopy examination; and 37.5% for the examination of the cervix. In the laboratory tests, 17.5% were positive for evaluation of the efflux of the LGV; 52.5% for uterine cytology examination; and 62.5% for uterine culture, with Staphylococcus spp. being the most isolated bacteria, followed by Escherichia coli, Enterobacter spp. and Citrobacter spp., all susceptible to sulfa / trimethoprim, enrofloxacin and florfenicol. Comparing the exams for the diagnosis of endometritis, palpation and ultrasonography showed the best results among the clinical exams, however, it was inferior to the laboratory exams of cytology and uterine culture, the latter being with greater sensitivity and specificity for endometritis. The use of multiple results from different exams has also proved to be an effective alternative for the diagnosis of endometritis. Under the conditions under which the study was carried out, the most practical and efficient sampling technique for culture and uterine cytology examinations was CC. The LFBE technique did not prove to be as efficient as the others. It was concluded that endometritis is the main cause of recipient mares with reproductive problems, and that gynecological examination is essential for the diagnosis of these animals, using as many tests as possible or palpation and ultrasonography as screening for besides the fact that the commercial collector was the most practical and efficient method for the collection of samples for endometrial culture and cytology exams.

O Brasil é um dos países com o maior número de transferências de embriões de equinos do mundo, mas as éguas receptoras são escassas e caras. Uma alternativa é usar mulas acíclicas como receptoras de embriões equinos. O objetivo deste estudo foi comparar pela primeira vez o desenvolvimento embrionário e fetal precoce em mulas e éguas receptoras do 10º ao 60º dia de gestação. Este estudo foi realizado na Fazenda Experimental Gralha Azul da Pontifícia Universidade Católica do Paraná. Cinco éguas de doadores de embriões com idades entre 4 e 10 anos foram utilizadas. Foram utilizados dois grupos de receptores: 10 éguas cíclicas com idades entre 4 e 15 anos (grupo controle) e 7 mulas acíclicas com idades entre 6 e 12 anos. Os animais foram mantidos em piquetes e/ou estábulos e tiveram acesso a água e sal mineral ad libitum, bem como a uma fonte de volumoso e concentrado. As éguas doadoras foram monitoradas diariamente por ultrassonografia transretal (transdutor linear de 5 MHz, A6V Sonoscape, China) após o início do estro. As éguas foram inseminadas artificialmente usando sêmen fresco de um garanhão com fertilidade comprovada. A coleta de embriões das éguas foi realizada 8 dias após a ovulação. Antes da transferência do embrião, as éguas receptoras cíclicas eram examinadas diariamente por ultrassonografia para usar a melhor sincronia com a ovulação da doadora. As mulas acíclicas foram preparadas antes da transferência do embrião com a administração de 17 beta-estradiol (10 mg/mL, 1 mL, im) no dia da ovulação da doadora, e após 2 dias quando a presença de edema uterino foi confirmada, com a administração de Altrenogest (60 mg/mL, 5 mL, im). O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia, 10 dias após a ovulação da doadora. Quando o diagnóstico foi confirmado, a avaliação ultrassonográfica foi realizada diariamente até o 60º dia de gestação. O primeiro dia de detecção da vesícula embrionária foi o Dia 10 por ultrassonografia em ambas as espécies e Dia 20,9 ± 1,3 (Média ± DP) e 21,9 ± 0,9 por palpação transretal em mulas e éguas respectivamente. A fixação da vesícula ocorreu em média no dia 15,7 ± 1,1 em mulas e 16,6 ± 1,7 em éguas. O embrião propriamente dito foi detectado pela primeira vez em mulas (no dia 19,9 ± 1,1) em comparação com as éguas (20,4 ± 1,3). O batimento cardíaco foi observado posteriormente em muares (23,4 ± 1,4) do que em éguas (22,6 ± 0,8). O saco alantóide foi detectado pela primeira vez entre os dias 23 e 26 (25,3 ± 1,1 e 24,6 ± 1,0 em mulas e éguas, respectivamente) e o cordão umbilical foi detectado pela primeira vez no dia 39 (39,7 ± 2,1 x 39,6 ± 1,5 em mulas e éguas, respectivamente). Os diâmetros ovarianos para os ovários esquerdo e direito foram semelhantes para as mulas (21,4 ± 0,4 vs. 21,8 ± 0,4 mm) e para as éguas (45,1 ± 0,4 vs 46,0 ± 0,4). Entretanto, o diâmetro ovariano das éguas (45,5 ± 0,3 mm) foi duas vezes maior (P <0,0001) que as mulas (21,6 ± 0,3 mm). Apenas duas mulas apresentaram o CL acessório que foi observado pela primeira vez nos dias 49 e 51. Dentro dos grupos não houve diferenças entre os cornos esquerdo e direito, gravídicos e não-gravídicos. A média geral não foi diferente entre as mulas (24,6 ± 3,1 mm) e as éguas (25,4 ± 0,1 mm). Como conclusão, de acordo com o nosso conhecimento, este é o primeiro estudo comparativo sobre desenvolvimento embrionário e fetal precoce entre mulas acíclicas e éguas receptoras de embriões equinos. Numerosas semelhanças foram encontradas nos aspectos estudados. Tais achados, associados ao fato de que potros vivos e sadios foram produzidos, sugerem que o uso de mulas acíclicas pode ser considerado como uma alternativa para aumentar a disponibilidade de receptoras em programas equinos de TE.
Brazil is one of the countries with the largest number of equine embryo transfers in the world, but recipients mares are scarce and expensive. One alternative is to use acyclic mules as recipients for equine embryos. The aim of this study was to compare for the first time the embryonic and early fetal development in recipient mules and mares from day 10 to 60 of pregnancy. This study was conducted at the Experimental Farm Gralha Azul of the Pontifical Catholic University of Paraná. Five embryo donor mares aged 4 to 10 years were used. Two groups of recipients were used: 10 cyclic mares aged 4 to 15 years (control group), and 7 acyclic mules aged 6 to 12 years. Animals were kept in paddocks and/or stables and had access to water and mineral salt ad libitum, as well as to a source of roughage and concentrate. Donor mares were monitored daily by transrectal ultrasonography (5-MHz linear transducer, A6V Sonoscape, China) after the beginning of estrus. The mares were artificially inseminated using fresh semen from a stallion with proven fertility. Embryo collection from the mares was performed 8 days after ovulation. Before embryo transfer, cyclic recipient mares were examined daily by ultrasonography to use the most synchronous with the donor's ovulation and have not received any hormonal treatment. The acyclic mules were prepared before the embryo transfer with the administration of 17 beta-estradiol (10 mg/mL, 1 mL, i.m.) on the day of the donor's ovulation, and after 2 days when the presence of uterine edema was confirmed, with the administration of Altrenogest (60 mg/mL, 5 mL, i.m.). The pregnancy diagnosis was carried out by ultrasonography 10 days after ovulation in the donor. When the diagnosis was confirmed, ultrasonographic assessment was carried out daily until day 60 of pregnancy. The first day of detection of an embryonic vesicle was Day 10 by ultrasound in both species and day 20.9 ± 1.3 (Mean ±SD), and 21.9 ± 0.9 by transrectal palpation in mules and mares respectively. Fixation of the vesicle occurred on mean day 15.7 ± 1.1 in mules and 16.6 ± 1.7 in mares. The embryo proper was first detected in mules (on day 19.9 ± 1.1) compared to mares (20.4 ± 1.3) The heart beat was observed later in mules (23.4 ± 1.4) than in mares (22.6 ± 0.8). The allantoic sac was first detected between days 23 and 26 (25.3 ± 1.1 and 24.6 ± 1.0 in mules and mares, respectively) and the umbilical cord was first detected on day 39 (39.7 ± 2.1 x 39.6 ± 1.5 in mules and mares, respectively). The ovarian diameters for left and right ovaries were similar for mules (21.4 ± 0.4 vs. 21.8 ± 0.4 mm) and for mares (45.1 ± 0.4 vs. 46.0 ± 0.4). However, the ovarian diameter of the mares (45.5 ± 0.3 mm) was two times larger (P<0.0001) than the mules (21.6 ± 0.3 mm). Within groups there were no differences between left and right and gravid and non-gravid horns. Data were combined for comparison of the endometrial diameter between mules and mares. The overall mean was not different between mules (24.6 3.1 ± 0.1 mm) and mares (25.4 ± 0.1 mm). However, day (P<0.003) and group-by-day (P<0.0001) effects were detected. Only two mules presented accessory CL that was observed for the first time on days 49 e 51. In conclusion, to the best of our knowledge, this is the first comparative study on embryo and early fetal development between noncycling mules and mares used as ET recipients of horse-horse embryos. Numerous similarities in embryo and early fetal development, and endocrinology aspects were seen. The findings of this study in mules, associated with the fact that alive and healthy offspring were produced, the use of mules may be considered as an alternative to increase the availability of recipients in equine ET programs.

Resumo: O fator de transcrição Oct-4 é bem conservado entre as espécies e é conhecido por ser expresso em embriões e células-tronco embrionárias (CTE), sendo um importante marcador da pluripotência. Recentemente, foi relatado que a combinação de Oct-4 com três outros fatores de transcrição Klf-4, c-Myc e Sox2 foram capazes de reprogramar células somáticas a um estado indiferenciado pluripotente, chamadas células-tronco pluripotentes induzidas ("células iPS"), as quais apresentam várias das mesmas propriedades das CTE incluindo a pluripotência, auto-renovação e proliferação. O objetivo desse estudo foi avaliar a funcionalidade do promotor Oct-4 de eqüino em CTE de murinos. Três vetores plasmidiais expressando GFP ("green fluorescent protein") sob o controle do promotor Oct-4 de equinos, camundongo e quatro vetores lentivirais, também contendo o gene reporter GFP e os promotores Oct-4 de equinos, camundongo e humanos, pLZ2-ecOCT-EGFP (meq) (sequência equivalente de camundongos), pLZ2-ecOCT-EGFP (heq) (sequência equivalente de humanos), pLZ2-mOCT-EGFP e pLZ2-hOCT-EGFP, respectivamente, foram construídos. Todos os vetores também contêm um sítio de resistência à blasticidina que permite a seleção das células estáveis e das células transduzidas. Essas construções plasmidiais foram verificadas se funcionavam eficientemente, bem como o efeito do promotor Oct-4 em transfectar transientes e estáveis CTE. As construções com promotor Oct-4 de camundongo, humano e eqüino (sequência análoga à de camundongo) produziram somente 6% de células GFP positivas com intensidade de fluorescência (IF) >1000 pela análise em citômetro de fluxo, enquanto que o plasmídeo contendo o promotor Oct-4 de eqüino (sequência equivalente à de humanos) produziu menos células GFP positivas (>3%) com IF >1000, quando... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The pluripotency transcription factor Oct-4 is well conserved among species and is known to be expressed in embryos and embryonic stem (ES) cells; it is being an important pluripotency marker. It was recently demonstrated that the combination of Oct-4 with three other factors Klf-4, c-myc and Sox2 were able to reprogram somatic cells to a pluripotent and undifferentiated state. These cells known as induced pluripotent stem (iPS) cells share several properties with ES cells including self-renewal, proliferation and pluripotency. The aim of this study was to assess the functionality of the horse Oct-4 promoter in mouse ES cells. Three plasmids vectors expressing GFP (green fluorescent protein) under the control of the horse, mouse and four lentivirus vectors also containing reporter gene GFP and horse, mouse and human promoters, pLZ2-ecOCT-EGFP (mouse sequence equivalent), pLZ2-ecOCT-EGFP (human sequence equivalent), pLZ2-mOCT-EGFP and pLZ2-hOCT-EGFP, respectively, were built. All these vectors also contain a blasticidin resistance cassette to allow selection of transfected stable cells and transduced cells. Afterwards, to assess the functionality of the Oct-4 promoter all plasmids were tranfected the into transient and stable mouse ES cells. Constructs with mouse, human and horse (mouse analog sequence) Oct-4 promoter produced only 6% GFP positive cells with fluorescence intensity (FI)>1000 by 20 FACs assay, while plasmid horse (human analog sequence) Oct-4 promoter produced less GFP positive cells (>3%) with FI>1000, when compared with the positive control and among groups. However, GFP expression was not present in stable cells, whereas there were Blasticidin-resistant colonies-forming from 6 days post-transfection. To optimize the system in mouse ES cells, pLZ2-mOCT-EGFP and pLZ2-hOCT-EGFP lentivectors, were tested as controls. It was used HIV-1-derived... (Complete abstract click electronic access below)
Orientadora: Gisele Zoccal Mingoti
Coorientador: Joaquim Mansano Garcia
Banca: César Roberto Esper
Banca: Flávio Vieira Meirelles
Banca: Áureo Evangelista Santana
Banca: Simone Cristina Méo Niciura
Doutor

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
A produção de cavalos destinados ao segmento desportivo sofreu um grande aumento nas últimas décadas. Devido à importância do cavalo na prática de diversos desportos e em actividades de lazer, e não mais apenas no transporte ou tracção animal, é incontestável o crescimento mundial da indústria equina. A espécie equina foi considerada por muito tempo como a de menor fertilidade entre as espécies domésticas, o que foi atribuído a características de selecção e problemas relacionados com o maneio reprodutivo. Contudo, o desenvolvimento de novas técnicas reprodutivas veio possibilitar um maior desenvolvimento do sector através do ganho na eficiência reprodutiva e no melhoramento genético, favorecendo o aperfeiçoamento das raças e dos seus cruzamentos. Em resultado das incessantes pesquisas em biotecnologias aplicadas à reprodução equina, a Inseminação Artificial e a Transferência de Embriões têm-se destacado nas últimas décadas, em Portugal pelo seu avanço científico e aplicação comercial. O objectivo desta dissertação é assim, o de avaliar o impacto que as novas práticas de maneio e a aplicação das novas tecnologias da reprodução assistida tiveram na evolução do controlo reprodutivo equino em Portugal e na produtividade destes animais, discutindo-se as vantagens e desvantagens do seu uso e descrevendo casos acompanhados no decorrer do Estágio. A conclusão mais importante deste estudo é que garanhões e éguas bem geridas podem alcançar altos níveis de desempenhos reprodutivos e, logo, de produtividade, parâmetros decisivos no sucesso económico das explorações.
ABSTRACT - Evolution of equine reproductive control and their impact on productivity - Horse’s breeding for sports segment experienced a large increase in recent decades. Due to the importance of the horse in the practice of various sports and leisure activities, and not just as transport or animal traction, is undeniable the worldwide growth in the equine industry. The equine species was for long time considered to have the lowest fertility among the domestic species, which was attributed to selection and problems related to reproduction management. However, the development of new reproductive techniques is enabling a considerable development of the sector by increasing reproductive efficiency and breeding gains, favoring the improvement of breeds and their crosses. As a result of incessant research in equine reproductive biotechnology, Artificial Insemination (AI) and Embryos Transfer (ET) have emerged in the last decades in Portugal for its scientific and commercial advancement. The objective of this dissertation is to assess the impact that new management practices and application of new assisted reproductive technologies had on the equine reproductive control evolution in Portugal and productivity of these animals. The advantages and disadvantages of its use and some cases followed during the internship are discussed. The most important conclusion of this study is that stallions and mares well managed can achieve high levels of reproductive performance and therefore productivity, critical parameters in the economic success of farms.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-05Bitstream added on 2014-06-13T20:26:13Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_fs_dr_jabo.pdf: 3109118 bytes, checksum: 5a4b81536e1b9bd9d62a0e42796b675b (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
O fator de transcrição Oct-4 é bem conservado entre as espécies e é conhecido por ser expresso em embriões e células-tronco embrionárias (CTE), sendo um importante marcador da pluripotência. Recentemente, foi relatado que a combinação de Oct-4 com três outros fatores de transcrição Klf-4, c-Myc e Sox2 foram capazes de reprogramar células somáticas a um estado indiferenciado pluripotente, chamadas células-tronco pluripotentes induzidas (“células iPS”), as quais apresentam várias das mesmas propriedades das CTE incluindo a pluripotência, auto-renovação e proliferação. O objetivo desse estudo foi avaliar a funcionalidade do promotor Oct-4 de eqüino em CTE de murinos. Três vetores plasmidiais expressando GFP (“green fluorescent protein”) sob o controle do promotor Oct-4 de equinos, camundongo e quatro vetores lentivirais, também contendo o gene reporter GFP e os promotores Oct-4 de equinos, camundongo e humanos, pLZ2-ecOCT-EGFP (meq) (sequência equivalente de camundongos), pLZ2-ecOCT-EGFP (heq) (sequência equivalente de humanos), pLZ2-mOCT-EGFP e pLZ2-hOCT-EGFP, respectivamente, foram construídos. Todos os vetores também contêm um sítio de resistência à blasticidina que permite a seleção das células estáveis e das células transduzidas. Essas construções plasmidiais foram verificadas se funcionavam eficientemente, bem como o efeito do promotor Oct-4 em transfectar transientes e estáveis CTE. As construções com promotor Oct-4 de camundongo, humano e eqüino (sequência análoga à de camundongo) produziram somente 6% de células GFP positivas com intensidade de fluorescência (IF) >1000 pela análise em citômetro de fluxo, enquanto que o plasmídeo contendo o promotor Oct-4 de eqüino (sequência equivalente à de humanos) produziu menos células GFP positivas (>3%) com IF >1000, quando...
The pluripotency transcription factor Oct-4 is well conserved among species and is known to be expressed in embryos and embryonic stem (ES) cells; it is being an important pluripotency marker. It was recently demonstrated that the combination of Oct-4 with three other factors Klf-4, c-myc and Sox2 were able to reprogram somatic cells to a pluripotent and undifferentiated state. These cells known as induced pluripotent stem (iPS) cells share several properties with ES cells including self-renewal, proliferation and pluripotency. The aim of this study was to assess the functionality of the horse Oct-4 promoter in mouse ES cells. Three plasmids vectors expressing GFP (green fluorescent protein) under the control of the horse, mouse and four lentivirus vectors also containing reporter gene GFP and horse, mouse and human promoters, pLZ2-ecOCT-EGFP (mouse sequence equivalent), pLZ2-ecOCT-EGFP (human sequence equivalent), pLZ2-mOCT-EGFP and pLZ2-hOCT-EGFP, respectively, were built. All these vectors also contain a blasticidin resistance cassette to allow selection of transfected stable cells and transduced cells. Afterwards, to assess the functionality of the Oct-4 promoter all plasmids were tranfected the into transient and stable mouse ES cells. Constructs with mouse, human and horse (mouse analog sequence) Oct-4 promoter produced only 6% GFP positive cells with fluorescence intensity (FI)>1000 by 20 FACs assay, while plasmid horse (human analog sequence) Oct-4 promoter produced less GFP positive cells (>3%) with FI>1000, when compared with the positive control and among groups. However, GFP expression was not present in stable cells, whereas there were Blasticidin-resistant colonies-forming from 6 days post-transfection. To optimize the system in mouse ES cells, pLZ2-mOCT-EGFP and pLZ2-hOCT-EGFP lentivectors, were tested as controls. It was used HIV-1-derived... (Complete abstract click electronic access below)

A gestação inicial da égua é um período fascinante que abrange numerosas e intensas mudanças em seu desenvolvimento, muitas das quais são únicas para a espécie equina. Esse desenvolvimento depende da manutenção da função lútea, do estabelecimento de um ambiente uterino e de uma interação precisa e orquestrada entre o concepto e o ambiente uterino. O objetivo deste estudo foi verificar as alterações histológicas do endométrio e a produção histotrófica em éguas cíclicas e prenhes nos dias 7, 10 e 13 pós-ovulação. No primeiro ciclo, biópsias endometriais de 30 éguas foram coletadas no dia 7 (n = 10), 10 (n = 10) e 13 (n = 10) constituindo o grupo éguas cíclicas. No segundo ciclo, as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil, acompanhadas diariamente até detectar a ovulação, considerada o dia 0. Foram coletadas biópsias endometriais nos dias7 (n 10), 10 (n 10) e 13 (n 10). Imediatamente após a coleta, o útero foi lavado e as éguas em que foi obtido embrião, foram inseridas no grupo de éguas prenhes. Um maior calibre dos vasos sanguíneos foi observado em prenhez comparados às éguas cíclicas do dia 7 aos 13. No sétimo dia pós-ovulação, uma grande perda de células ciliadas foi evidente no grupo de éguas prenhes, comparadas ao grupo de éguas cíclicas, as células do epitélio endometrial estavam mais protusas e uma pequena quantidade de secreção histotrófica entre as dobras endometriais foi observada. No décimo dia de prenhez, secreção histotrófica glandular e do epitélio luminal estavam mais presentes comparadas às éguas do grupo cíclico. No dia 13 de prenhes, foi observado um grande conteúdo de histotrofo nas aberturas glandulares que estavam cercadas por células ciliares. Ocorreram alterações no ambiente uterino logo após a entrada do embrião no útero. No estroma e no lúmen, essas modificações parecem visar fornecer a nutrição necessária para o desenvolvimento inicial do embrião e estas mudanças nas estruturas celulares irão interagir na sinalização embrionária, futura fixação, implantação e placentação.
The early pregnancy of mare is a fascinating period that encompasses numerous and intense changes in its development, many of which are unique to the equine species. This development depends on the maintenance of the luteal function, the establishment of a favorable uterine environment and a precise and orchestrated interaction between the concept and the uterine environment. The aim of this study was to evaluate histological changes in the endometrium in days 7, 10 and 13 post-ovulation in pregnant and cyclic mares. In the first cycle, endometrial biopsies from 30 cyclic mares (Cyclic group) were collected on days 7, 10 and 13 post-ovulation. In the second cycle, the same mares were bred by a fertile stallion. At days 7, 10 and 13 post-ovulation intrauterine biopsies were collected. Immediately after sample collection, the mare‟s uteri were flushed, and those mares with embryo recovery were assigned to the Pregnant group. A larger blood vessel caliber was observed in pregnant mares than in cyclic from day 7 to 13. On the 7th day a large loss of ciliated cells was evident in the group of pregnant mares in comparison with the Cyclic group and the superficial cells of the endometrium were more protruded, and a small amount of histotrophic material between the folds was observed. On the 10th day of pregnancy, the glandular histotrophic secretion and the secretion of luminal epithelium became more intense than the secretion of cyclic mares. On the 13th day of pregnancy, a very large amount of histotroph was observed within large glandular openings surrounded by ciliated cells. Changes occurred in the uterine environment thereupon the entry of the embryo into the uterus. In the stroma and in the lumen, these modifications seem aim to provide the necessary nutrition for the initial development of the embryo and to promote changes at cellular structures that will interact in the embryonic signaling and future fixation, implantation and placentation.

As biotécnicas da reprodução na espécie equina avançaram na última década e os criadores de equinos começaram a questionar as possibilidades de interferência na determinação do sexo dos potros. A determinação do sexo é importante, pois o sexo do potro possui grande influência no valor comercial do mesmo. O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência do momento da cobertura em relação ao momento da ovulação no sexo dos potros e outros fatores como: idade da égua e garanhão; indutor da ovulação; ovário em que ocorreu a ovulação e o diâmetro do folículo pré-ovulatório também foram avaliados. O estudo foi realizado em Haras na região de Bagé e Aceguá (RS) – Brasil (31°24'06.1''S 54°07'47.5''W) e (31°30'16.0''S 54°07'45.5''W) nas estações de monta de 2011 a 2015. Utilizou-se 259 ciclos reprodutivos de 160 éguas e 22 garanhões da raça Puro Sangue de Corrida. Informações como agente indutor de ovulação utilizado (Deslorelina; n = 187 ou hCG; n = 72); data da cobertura (n = 259); momento da ovulação em relação a cobertura (+ 24 horas; n = 69 e - 24 horas; n = 190); idade da égua (G1: até 8 anos; n = 123, G2: 9 até 14 anos n = 110 e G3: >14 anos; n = 26); idade do garanhão (Até 14 anos; n = 11 e >15 anos; n = 11) ; ovário em que a ovulação ocorreu (Direito; n = 122 e Esquerdo; n = 137); foram registrados e avaliados No total de potros nascidos, 136 foram machos (52,51%) e 123 foram fêmeas (47,49%). O tempo decorrido após a cobertura não influenciou o sexo dos produtos, nas éguas que ovularam com – 24h após a indução da ovulação: 104 potros (54,74%) eram machos e 86 (45,26%) eram fêmeas, enquanto que nas éguas que ovularam com + 24h, 32 potros (46,38%) eram machos e 37 (53,62%) eram fêmeas. A porcentagem de fêmeas nascidas em relação a idade da égua foi de 46,34% (n=57), 47,27% (n=52) e 46,15% (n=12) nos grupos G1, G2 e G3 respectivamente. Garanhões com idade até 15 anos tiveram 44,14% (n=49) de fêmeas e com mais de 15 anos 49,66% (n=73) eram fêmeas. Não houve diferença no sexo dos produtos quanto ao agente indutor da ovulação (Deslorelina x hCG) e ovário em que ocorreu a ovulação. O presente estudo concluiu que nenhum dos fatores estudados alterou a proporção macho:fêmea dos potros nascidos.
The biotechnologies of reproduction in equine species have been improved in the last decade and the horse breeders started to inquire about the possibility of intervention regarding to the sex determination in foals. Sex determination is important because the sex of the foal has a great influence on the commercial value of the foal. The aim of the present study is was to evaluate the influence of the time of the breeding in relation to time of ovulation in the sex of the foals, besides analyzing other factors such as: the age of the mare and the stallion; ovulation inductor, ovary and the diameter of the preovulatory follicle. The study was accomplished in studs located Bagé/RS and Aceguá/RS – Brazil (31°24'06.1''S 54°07'47.5''W) and (31°30'16.0''S 54°07'45.5''W) during the breeding seasons from 2011 to 2015, using 259 reproductive cycles of 160 mares and 22 stallions of Thoroughbred breed. Information like the induction of ovulation agent that was used (Deslorelin; n = 187 or hCG; n = 72); date of breeding (n = 259); time of ovulation in relation to the breeding (+24 hours; n = 69 and -24 hours; n = 190); age of the mare (G1: up to the age of 8; n = 123 G2: from the age of 9 to the age of 14; n = 110 and G3: >14 years old; n = 26); age of the stallion (up to the age of 14; n = 11 and >15 years old; n = 11); ovary in which the ovulation occurred (Right; n = 122 and Left; n = 137) were catalogued and evaluated As result, 136 (52,51%) were born colts and 123 (47,49%) were born fillies. The elapsed time from breeding to ovulation did not influence on the sex of the product, on mares that ovulated in less than 24 hours after the ovulation induction: 104 foals (54,74%) were male and 86 (45,26%) were female, whereas in the mares that ovulated in more than 24 hours, 32 foals (46,38%) were male and 37 (53,62%) were female. The percentage of born females regarding to the age of the mare was 46,34% (n = 57), 47,27% (n = 52) and 46,15% (n = 12) in the groups G1, G2 and G3, respectively. From stallions up to the age of 15 years, 44,14% (n = 49) were females and from those which were older than 15 years old, 49,66% (n = 73) were females. There was no difference regarding the sex of the product in relation to the ovulation inducer agent (Deslorelin x hCG) and ovary in which the ovulation occurred. None of the factors studied modified the male:female proportion of the born foals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-31Bitstream added on 2014-06-13T20:19:21Z : No. of bitstreams: 1 araujo_ghm_me_botfmvz.pdf: 252944 bytes, checksum: 8bfe64297ba80536cb087534254b2f9b (MD5)
Estudos sobre a luteólise os fatores que a influenciam foram conduzidos em diferentes espécies de interesse econômico, recentemente, verificou-se a influência do LH sobre a luteólise ocorrida nas espécies suína e bovina, mostrando sua função nestas espécies. Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de se avaliar o efeito do LH sobre as concentrações plasmáticas de progesterona durante a luteólise induzida com dinoprost, usou diferentes tratamentos superovulatórios como modelos que simularam ambientes com concentrações plasmáticas de LH distintas. Sete éguas foram divididas e utilizadas uma vez em cada um dos seguintes 4 grupos: Grupo 01 (n=6): controle que recebeu a aplicação de 5 mg de dinoprost, IM no 7° dia após a ovulação (dia 0); Grupo 02 (n=7): recebeu aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e EPE doses constantes (25mg/IM/b.i.d.) do dia 0 até o dia 3; Grupo 03 (n=7): recebeu aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e EPE doses decrescentes (40 mg/IM. no dia 0, 35 mg/IM/b.i.d. no dia 1, 30 mg/IM/b.i.d no dia 2; e, no dia 3, 25 mg/IM/b.i.d); Grupo 04 (n=5): FSH purificado eqüino (eFSH), aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e eFSH (12,5 mg/IM/b.i.d.) até o dia 3. As coletas de sangue foram realizadas dia -1 ao dia 3 dos tratamentos para as dosagens hormonais de progesterona (P4) e LH por radioimunoensaio. No dia -1 não foi observada qualquer diferença entre os grupos, indicando iguais condições dos grupos no momento do início dos tratamentos. A luteólise (P4<1ng/mL) foi alcançada em todos os grupos em até 48 horas (dia 2) após o início dos tratamentos. Sendo observada diferenças nos valores plasmáticos de LH desde da primeira aplicação do EPE ou eFSH.
Researches has been conduced about luteolysis and other factors that affect in some away the lifespan of the corpus luteum in different species, recently, has been shown the effect of the LH on the luteolysis in swine and bovine specie, demonstrating its function in this species. The aim of the present study was to evaluate the effect of the LH concentrations on the progesterone levels during the induced luteolysis with dinoprost, using as a model for different LH concentrations environments the superovulatory treatment with EPE and purified equine FSH. Seven mares were divided and utilized once in all 4 groups: Group 01 (n=6): control, 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0); Group 02 (n=7): 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and EPE in constant doses till day 3; Group 03 (n=7): 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and EPE in decreased doses (40 mg/IM in day 0, 35 mg/IM/b.i.d. in day 1, 30 mg/IM/b.i.d. in day 2, and, 25 mg/IM/b.i.d. in day 3); Group 04 (n=5): equine purified FSH, 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and 12.5 mg/IM/b.i.d. of eFSH until day 3. The blood samples have been taken from the day -1 to day 3 daily with the objective of evaluated LH and progesterone levels. In the day -1, no differences were observed on hormones dosages among the groups, indicating the same conditions for all groups before the treatments. The luteolysis (P4<1ng/mL) was reached in all groups until 48 hours (day 2) after the beginning of the treatments. Differences were found among the plasmatic values of LH since the first treatment of EPE or eFSH. Differences were observed in P4 levels after day 2 with 0.61 ± 0.10a ng/mL in Group 01; 0.28 ± 0.09b ng/mL in Group 02; 0.25 ± 0.23b ng/mL in Group 03; and, 0.45 ± 0.42ab ng/mL in Group 04...(Complete abstract click electronic access below)

Comparações da dinâmica ovariana entre mais de duas raças equinas, sob condições padronizadas, não são encontradas na literatura. Objetivando comparar a dinâmica folicular e luteal, foram realizados exames diários de ultrassonografia durante um intervalo interovulatório contemporâneo, em éguas de pequeno porte (grupo Mini Pony – MP; n=10), médio porte (grupo Large Pony – LP; n=9) e grande porte (grupo Brasileiro de Hipismo – BH; n=12). Concluiu-se que os três grupos diferiram quanto ao máximo diâmetro do folículo pré-ovulatório (FPO) (mm) (MP=36,15; LP=40,95; BH=46,66), diâmetro do FPO um dia antes da ovulação (mm) (MP=35,8; LP=40,55; BH=46,48) e crescimento diário médio do FPO (mm/dia) (MP=2,6; LP=3,05; BH=3,51). O grupo MP diferiu dos demais quanto ao número de folículos por onda ovulatória (MP=4,8; LP=10,11; BH=9,75), número de folículos por dia (MP=4,19; LP=10,27; BH=10,63), número de folículos maiores ou iguais a 10mm (MP=2,98; LP=5,88; BH=5,98), diâmetro do FPO à divergência (mm) (MP=22,62; LP=24,81; BH=25,58), diâmetro do segundo maior folículo à divergência (SMF) (mm) (MP=15,56; LP=21,25; BH=21,83), diferença de diâmetro entre FPO e SMF à divergência (mm) (MP=7,25; LP=3,56; BH=3,75) e área do corpo lúteo (CL) (mm2) (MP=436,1; LP=674,4; BH=720,4). Não houve diferença entre os grupos quanto à duração do ciclo (dias) (MP=21,9; LP=20,22; BH=20,58), ocorrência de divergência (MP=80%; LP=88,89%; BH=100%), dias decorridos entre a emergência do FPO e SMF (MP=0,8; LP=0,89; BH=0,92) e diferença de diâmetro entre estes na emergência (mm) (MP=0,4; LP=0,44; BH=0,5) e na divergência (mm) (MP=7,25; LP=3,56; BH=3,75); dias entre emergência e divergência (MP=5,12; LP=5,5; BH=5,5) e divergência e ovulação (MP=7,12; LP=6,62; BH=6,8), número de ondas menores (MP=0,3; LP=0,33; BH=0,42) e duração do CL (dias) (MP=12,4; LP=14,67; BH=13,92).
Comparisons of ovarian dynamics between more than two equine breeds, under standardized conditions, are not found in the literature. The objective of this study was to compare follicular and luteal dynamics during one contemporary intervulatory interval by daily ultrasonography examinations in small size mares (Mini Pony group - MP; n=10), medium size (Large Pony group - LP; n=9) and large size (Brazilian Warmblood group - BH; n=12). It was concluded that all three groups differed regarding maximum diameter of the preovulatory follicle (POF) (mm) (MP=36.15; LP=40.95; BH=46.66), maximum diameter of POF one day before ovulation (mm) (MP=35.8; LP=40.55; BH=46.48) and the mean daily growth of POF (mm / day) (MP=2.6; LP=3.05; BH=3.51). The MP group differed from LP and BH groups regarding number of follicles per ovulatory wave (MP=4.8; LP=10.11; BH=9.75), number of follicles per day (MP=4.19; LP=10, 27; BH=10.63), number of follicles equal or greater than 10mm (MP=2.98; LP=5.88; BH=5.98), diameter of POF at deviation (mm) (MP=22.62; LP=24.81; BH=25.58), diameter of second largest follicle (SLF) at deviation (MP=15.56; LP=21.25; BH=21.83), diameter difference between FPO and SLF at deviation (mm) (MP=7.25; LP=3.56; BH=3.75), corpus luteum (CL) area (mm2) (MP=436.1; LP=674.4; BH=720.4). There was no difference between groups regarding cycle length (MP=21.9; LP=20.22; BH=20.58), occurrence of deviation (MP=80%; LP=88.89%; BH=100%), days between emergence of POF and SLF (MP=0.8, LP = 0.89, BH = 0.92), and diameter difference between POF and SLF at emergence (mm) (MP=0.4; LP=0.44; BH=0.5) and at deviation (mm) (MP=7.25; LP=3.56; BH=3.75); days between emergence and deviation (MP=5.12; LP=5.5; BH=5.5), deviation and ovulation (MP=5.12; LP=6.62; BH=6.8), number of minor waves (MP = 0.3; LP = 0.33; BH = 0.42) and CL lifespan (days) (MP=12.4; LP=14.67; BH=13.92).

O objetivo do presente estudo foi determinar a cinética e a integridade e funcionalidade da membrana plasmática após a seleção espermática com um filtro de membrana sintética em câmaras de PVC com dois diâmetros diferentes e dois tempos de filtração. Foram utilizados 12 ejaculados de três garanhões. Imediatamente após a coleta, o sêmen foi diluído com leite desnatado (T0) e analisado. Duas câmaras diferentes em PVC foram produzidas com dois joelhos conectados com um tubo dividido ao meio por um filtro de membrana sintética com poros de 5 μm. Uma câmara de 26 mm e a outra de 36 mm de diâmetro interno. Foi colocado leite desnatado a 37° C em um lado da câmara (A). No outro lado da câmara (B) depositou-se uma amostra do sêmen diluído, com um número conhecido de espermatozoides. Após 7 e 15 min, obteve-se uma amostra do lado "A" de cada câmara e calculou-se a concentração espermática e analisou-se o sêmen. A motilidade total, a motilidade progressiva e a integridade da membrana plasmática melhoraram (P <0,05) após a filtração em ambos os dispositivos e tempos de filtração. A concentração espermática foi menor (P <0,05) em ambas as câmaras nos dois tempos em relação ao T0. O dispositivo de filtração demonstra ser uma alternativa prática e fácil para a seleção espermática. A seleção usando as câmaras permite um aumento da cinética e da integridade da membrana e funcionalidade independente do tempo e do diâmetro do dispositivo.
The aim of the present study was to determine the kinetics and plasma membrane integrity and functionality after sperm selection with a synthetic membrane filter in PVC chambers with two different diameters and two filtrations times. A total of 12 ejaculates from three stallions was used. Immediately after collection semen was diluted with skim milk (T0) and analyzed. Two different chambers in PVC were made with two elbows connected with a pipe divided in half by a 5 μm pore synthetic membrane filter. One chamber had an inner diameter of 26 mm and the other 36 mm. Skim milk at 37° C was placed in a side of the chamber (A). In the other side of the chamber (B) a sample of the extended semen, with known number of spermatozoa was deposited. After 7 and 15 min a sample was obtained from the ‘A’ side of each chamber and sperm concentration was calculated and semen analyzed. Total motility, progressive motility and plasma membrane integrity were improved (P<0.05) after filtration in both devices and filtration times. Concentration was lower (P<0.05) in both chambers at all times in relation to T0 semen. The filtration device demonstrates to be a practical and easy alternative for sperm selection. Selection using the chambers allows an increase in kinetics and membrane integrity and functionality independent of time and device diameter.

Orientador: Cezinande de Meira
Banca: Marco Antonio Alvarenga
Banca: Rubens Paes de Arruda
Resumo: Estudos sobre a luteólise os fatores que a influenciam foram conduzidos em diferentes espécies de interesse econômico, recentemente, verificou-se a influência do LH sobre a luteólise ocorrida nas espécies suína e bovina, mostrando sua função nestas espécies. Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de se avaliar o efeito do LH sobre as concentrações plasmáticas de progesterona durante a luteólise induzida com dinoprost, usou diferentes tratamentos superovulatórios como modelos que simularam ambientes com concentrações plasmáticas de LH distintas. Sete éguas foram divididas e utilizadas uma vez em cada um dos seguintes 4 grupos: Grupo 01 (n=6): controle que recebeu a aplicação de 5 mg de dinoprost, IM no 7° dia após a ovulação (dia 0); Grupo 02 (n=7): recebeu aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e EPE doses constantes (25mg/IM/b.i.d.) do dia 0 até o dia 3; Grupo 03 (n=7): recebeu aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e EPE doses decrescentes (40 mg/IM. no dia 0, 35 mg/IM/b.i.d. no dia 1, 30 mg/IM/b.i.d no dia 2; e, no dia 3, 25 mg/IM/b.i.d); Grupo 04 (n=5): FSH purificado eqüino (eFSH), aplicação de 5 mg de dinoprost no dia 0 e eFSH (12,5 mg/IM/b.i.d.) até o dia 3. As coletas de sangue foram realizadas dia -1 ao dia 3 dos tratamentos para as dosagens hormonais de progesterona (P4) e LH por radioimunoensaio. No dia -1 não foi observada qualquer diferença entre os grupos, indicando iguais condições dos grupos no momento do início dos tratamentos. A luteólise (P4<1ng/mL) foi alcançada em todos os grupos em até 48 horas (dia 2) após o início dos tratamentos. Sendo observada diferenças nos valores plasmáticos de LH desde da primeira aplicação do EPE ou eFSH.
Abstract: Researches has been conduced about luteolysis and other factors that affect in some away the lifespan of the corpus luteum in different species, recently, has been shown the effect of the LH on the luteolysis in swine and bovine specie, demonstrating its function in this species. The aim of the present study was to evaluate the effect of the LH concentrations on the progesterone levels during the induced luteolysis with dinoprost, using as a model for different LH concentrations environments the superovulatory treatment with EPE and purified equine FSH. Seven mares were divided and utilized once in all 4 groups: Group 01 (n=6): control, 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0); Group 02 (n=7): 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and EPE in constant doses till day 3; Group 03 (n=7): 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and EPE in decreased doses (40 mg/IM in day 0, 35 mg/IM/b.i.d. in day 1, 30 mg/IM/b.i.d. in day 2, and, 25 mg/IM/b.i.d. in day 3); Group 04 (n=5): equine purified FSH, 5 mg of dinoprost, IM in the seventh day after the ovulation (day 0) and 12.5 mg/IM/b.i.d. of eFSH until day 3. The blood samples have been taken from the day -1 to day 3 daily with the objective of evaluated LH and progesterone levels. In the day -1, no differences were observed on hormones dosages among the groups, indicating the same conditions for all groups before the treatments. The luteolysis (P4<1ng/mL) was reached in all groups until 48 hours (day 2) after the beginning of the treatments. Differences were found among the plasmatic values of LH since the first treatment of EPE or eFSH. Differences were observed in P4 levels after day 2 with 0.61 ± 0.10a ng/mL in Group 01; 0.28 ± 0.09b ng/mL in Group 02; 0.25 ± 0.23b ng/mL in Group 03; and, 0.45 ± 0.42ab ng/mL in Group 04...(Complete abstract click electronic access below)
Mestre

O objetivo deste estudo foi analisar as concentrações do fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1 (IGF1) e insulina (INS) no fluido folicular durante foliculogênese em éguas, e localizar o receptor tipo 1 de IGF (IGF1R) nas paredes foliculares. Durante a estação reprodutiva, 40 éguas mestiças enviadas para abate em matadouro, com idades variando entre 6 e 16 anos foram utilizadas. As éguas foram abatidas de forma humanitária. Os tratos reprodutivos internos foram recuperados dentro de 10 min após o abate, ovários de éguas cíclicas foram separados do resto do aparelho. As éguas foram classificadas em quatro grupos: G1 – Folículo ≤ 13,5 mm e CL identificável; G2 – Folículo de 13,6 - 22,5 mm e CL identificável; G3 – Folículo de 22,6 - 31,5 mm e CL identificável; G4 – Folículo ≥ 31,6 mm e CL difícil de identificar. O fluido folicular (FF) foi aspirado e armazenado a -80 ° C até a sua utilização. Após a punção do FF, um fragmento da porção ventral da parede folicular foi removido para realizar a imunohistoquímica para localização de receptores IGF1R. O IGF1 livre foi determinado por ensaio imunoradiométrico. A INS foi determinada por um radioimunoensaio de fase líquida. A concentração de IGF1 livre e INS no FF aumentou com o crescimento folicular (P < 0,05). O escore imunohistoquímico de IGF1R nas células da granulosa e da teca interna da parede folicular equina em diferentes grupos aumentou (P < 0,05) com aumento folicular. Concluímos que as concentrações de IGF1 livre e INS no FF e de IGF1R em paredes foliculares de éguas aumentam com o crescimento folicular durante a foliculogênese, dando evidência do papel importante do IGF1 e INS no desenvolvimento folicular, e uma interação entre ambos hormônios na fisiologia reprodutiva ovariana. Sendo a égua um modelo de pesquisa para estudos comparativos na dinâmica folicular para consideração em mulheres, a conclusão deste estudo pode ser aplicada, também, a humanos.
The aim of this study was to analyze free type 1 insulin-like growth factor (IGF1) and insulin (INS) concentrations in follicular fluid during folliculogenesis in mares, and to localize type 1 IGF receptor (IGF1R) on follicular walls. During the breeding season, 40 mixed-breed mares sent to slaughter at an abattoir, with ages ranging between 6 to 16 years were used. Mares were humanely slaughtered. Internal reproductive tracts were recovered within 10 min after slaughter; ovaries of cyclic mares were separated from the rest of the tract. Mares were categorized into four groups: G1 – Follicle ≤ 13.5 mm and CL identifiable; G2 – Follicle of 13.6 to 22.5 mm and CL identifiable; G3 – Follicle of 22.6 to 31.5 mm and CL identifiable; G4 – Follicle ≥ 31.6 mm and CL difficult to identify. The follicular fluid (FF) was aspirated and stored at -80°C until use. After puncture of the FF, a fragment of the ventral portion of the follicular wall was removed to perform immunohistochemistry to localize IGF1R receptors. Free IGF1 was determined by immunoradiometric assay. INS was determined by a liquid phase radioimmunoassay. The concentration of free IGF1 and INS in FF increased with follicle growth (P < 0.05). Immunohistochemical score of IGF1R on granulosa and internal theca cells from equine follicular wall on different groups increase (P < 0.05) with follicular raise. We conclude that free IGF1 and INS concentrations in FF and IGF1R in follicular walls of mares increase with follicular growth during folliculogenesis, giving evidence of important role of IGF1 and INS in follicular development, and an interaction between both hormones in ovarian reproductive physiology. As the mare is a model research for comparative studies in follicular dynamics for consideration in women, the conclusion of this study can be applied to humans also.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-03Bitstream added on 2014-06-13T20:38:40Z : No. of bitstreams: 1 dores_cb_me_botfmvz.pdf: 3161670 bytes, checksum: a11ca3c4c2058df1d9e382287df9e6b5 (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
A característica inerente às células-tronco embrionárias de se manterem estáveis durante longos períodos de cultivo possibilita que um grande número de células indiferenciadas sejam utilizadas em procedimentos terapêuticos ou realização de pesquisas. Aproximadamente 97 doenças genéticas equinas têm alta homologia com defeitos genéticos de humanos. O estudo de CTE de animais ungulados é útil no estudo de biofarmacos, engenharia genética e elucidação da embriogênese. Trabalhos sobre o isolamento, cultivo e caracterização do perfil genético de CTE equinas são escassos na literatura. No presente estudo, três diferentes métodos do isolamento da MCI foram testados em blastocistos equinos, avaliando o potencial de derivação de linhagens e a expressão do gene Oct-4: 1) separação mecânica (n=26), 2) imunocirurgia (n=6), 3) aspiração por micromanipulação (n=4). Todas as MCI foram cultivadas nas mesmas condições: monocamada de fibroblastos inativadas, meio DMEM/F12 suplementado com LIF, soro fetal bovino, aminoácidos não essenciais, sódio piruvato, l-glutamina e 2-mercaptoetanol. A eficácia do isolamento da MCI e o estabelecimento de linhagens foram avaliados quanto à adesão, aspectos morfológicos dos agregados celulares e velocidade de crescimento. As linhagens estabelecidas foram caracterizadas pela expressão do gene Oct-4 e Nanog. Nenhuma das MCI isoladas do grupo 3 aderiram à placa, e todas morreram entre 48 e 72 horas de cultivo. No grupo 1, uma MCI apresentou crescimento satisfatório apenas durante o cultivo primário. Colônias foram estabelecidas no grupo 2 e, após a segunda passagem, as células foram avaliadas e congeladas. Utilizou-se a RT-PCR para a detecção da expressão dos genes Oct-4 e Nanog em amostras de CTE, anel coriônico e fibroblastos fetais equinos. Todas as amostras expressaram o gene Oct-4, mostrando que o gene é expresso...
The ability of Embryonic Stem cells to be maintained during extended culture periods would support the existence of large pools of undifferentiated stem cells for therapeutic and research applications. Approximately 97 equine genetic diseases have high homology to human genetic defects. ES cell lines from domestic ungulates would also be useful for disease resistance, for biopharming, and in genetic engineering. Studies of the isolation of equine embryonic stem cells and their genetic expression are quite limited. In the present study three different experimental approaches were used for ICM isolation from day 8 blastocysts and further ES cell line derivation and OCT-4 and Nanog expression: 1. Mechanical Process (26), 2. Immunosurgery (6) and 3. Aspiration of the ICM (4). All the ICM were maintained at the same conditions: under inactivated murine fibroblast feeder support in medium supplemented with Leukemia Inhibitor Factor, Fetal Calf Serum, Non essential amino acids, Sodium Pyruvate, L-Glutamine and 2-Mercaptoethanol changed every 24 hours. The colonies were evaluated by attachment, size and shape, type of cells and rate of growth. In addition, established ES cell colonies were characterized by OCT-4 expression. Only ICM outgrowths and colonies containing circular, small, and high ratio nucleo:cytoplasm cells were considered and passaged. None ICM from group 3 attached and all died after 48 to 72 hours after isolation. In group 1, one ICM had successful development but died after the first passage. Colonies were established from group 2. And after proliferation for 2 passages the cells were analyzed and frozen. RT-PCR was performed to evaluate the OCT-4 expression from ES cells, fetal fibroblast and day 32-34 chorionic girdle samples. All samples were positive for OCT-4 expression, showing that the OCT-4 is expressed in both ICM cells and the trophectoderm derived cells... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga
Banca: Rogério Martins Amorim
Banca: José Antonio Visintin
Resumo: A característica inerente às células-tronco embrionárias de se manterem estáveis durante longos períodos de cultivo possibilita que um grande número de células indiferenciadas sejam utilizadas em procedimentos terapêuticos ou realização de pesquisas. Aproximadamente 97 doenças genéticas equinas têm alta homologia com defeitos genéticos de humanos. O estudo de CTE de animais ungulados é útil no estudo de biofarmacos, engenharia genética e elucidação da embriogênese. Trabalhos sobre o isolamento, cultivo e caracterização do perfil genético de CTE equinas são escassos na literatura. No presente estudo, três diferentes métodos do isolamento da MCI foram testados em blastocistos equinos, avaliando o potencial de derivação de linhagens e a expressão do gene Oct-4: 1) separação mecânica (n=26), 2) imunocirurgia (n=6), 3) aspiração por micromanipulação (n=4). Todas as MCI foram cultivadas nas mesmas condições: monocamada de fibroblastos inativadas, meio DMEM/F12 suplementado com LIF, soro fetal bovino, aminoácidos não essenciais, sódio piruvato, l-glutamina e 2-mercaptoetanol. A eficácia do isolamento da MCI e o estabelecimento de linhagens foram avaliados quanto à adesão, aspectos morfológicos dos agregados celulares e velocidade de crescimento. As linhagens estabelecidas foram caracterizadas pela expressão do gene Oct-4 e Nanog. Nenhuma das MCI isoladas do grupo 3 aderiram à placa, e todas morreram entre 48 e 72 horas de cultivo. No grupo 1, uma MCI apresentou crescimento satisfatório apenas durante o cultivo primário. Colônias foram estabelecidas no grupo 2 e, após a segunda passagem, as células foram avaliadas e congeladas. Utilizou-se a RT-PCR para a detecção da expressão dos genes Oct-4 e Nanog em amostras de CTE, anel coriônico e fibroblastos fetais equinos. Todas as amostras expressaram o gene Oct-4, mostrando que o gene é expresso... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The ability of Embryonic Stem cells to be maintained during extended culture periods would support the existence of large pools of undifferentiated stem cells for therapeutic and research applications. Approximately 97 equine genetic diseases have high homology to human genetic defects. ES cell lines from domestic ungulates would also be useful for disease resistance, for biopharming, and in genetic engineering. Studies of the isolation of equine embryonic stem cells and their genetic expression are quite limited. In the present study three different experimental approaches were used for ICM isolation from day 8 blastocysts and further ES cell line derivation and OCT-4 and Nanog expression: 1. Mechanical Process (26), 2. Immunosurgery (6) and 3. Aspiration of the ICM (4). All the ICM were maintained at the same conditions: under inactivated murine fibroblast feeder support in medium supplemented with Leukemia Inhibitor Factor, Fetal Calf Serum, Non essential amino acids, Sodium Pyruvate, L-Glutamine and 2-Mercaptoethanol changed every 24 hours. The colonies were evaluated by attachment, size and shape, type of cells and rate of growth. In addition, established ES cell colonies were characterized by OCT-4 expression. Only ICM outgrowths and colonies containing circular, small, and high ratio nucleo:cytoplasm cells were considered and passaged. None ICM from group 3 attached and all died after 48 to 72 hours after isolation. In group 1, one ICM had successful development but died after the first passage. Colonies were established from group 2. And after proliferation for 2 passages the cells were analyzed and frozen. RT-PCR was performed to evaluate the OCT-4 expression from ES cells, fetal fibroblast and day 32-34 chorionic girdle samples. All samples were positive for OCT-4 expression, showing that the OCT-4 is expressed in both ICM cells and the trophectoderm derived cells... (Complete abstract click electronic access below)
Mestre

Na espécie equina, ao contrário do obtido com ruminantes, as técnicas de criopreservação de sêmen progridem lentamente, mas apesar das barreiras técnicas o emprego da inseminação artificial com sêmen congelado vem crescendo. Este experimento foi dividido em três etapas: na primeira comparou-se a utilização de diferentes diluentes e técnicas de congelação; determinação da eficiência do criotubo para envase do sêmen para a criopreservação; e na terceira determinou-se as taxas de prenhez das éguas artificialmente inseminadas com sêmen congelado envasado em criotubo. Seis garanhões foram submetidos à coleta do sêmen e doze éguas foram inseminadas artificialmente no primeiro estro da estação reprodutiva. As amostras foram diluídas em INRA82 ou Nagase, contendo 5% de glicerol, com concentração de 200 x 106 espermatozóides/ml. Parte do sêmen diluído foi envasado em palhetas (0,5ml), das quais uma parte foi imediatamente congelada. As palhetas restantes foram resfriadas previamente da temperatura ambiente (24ºC) até 5ºC antes do congelamento. As amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC por 30seg. O mesmo protocolo de congelamento com resfriamento prévio foi realizado com as amostras envasadas em criotubos, sendo estas amostras descongeladas a 50ºC por 100seg em banho-maria. A eficiência in vivo do sêmen criopreservado, foi determinada através da inseminação artificial. O diagnóstico de prenhez foi realizado 20 dias após a inseminação artificial através de exame ultrassonográfico. Após a análise dos dados verificou-se que não houve diferença significativa entre os diluentes testados na motilidade progressiva e vigor dos espermatozóides. As médias da motilidade espermática após o aquecimento das amostras foram de: 43,32% e 26,66%, para o sêmen diluído com INRA82 submetido ao resfriamento ou não antes do congelamento, respectivamente, e para o sêmen diluído com Nagase revelou motilidade espermática de 41,08% e 24,44%, respectivamente. De acordo com esses resultados, os grupos experimentais submetidos ao resfriamento prévio apresentaram taxas de motilidade espermática superiores aos grupos que foram congelados diretamente. Não se verificou diferenças quanto ao vigor, motilidade e defeitos espermáticos entre os diluentes testados e os tipos de envase. As éguas inseminadas com criotubo apresentaram taxa de prenhez de 50% (3/6), já com as éguas do grupo controle (palheta) observou-se 16,66% (1/6), provando a viabilidade do congelamento do sêmen envasado em criotubo.
In the horse industry, unlike obtained with catle, the development of sperm cryopreservation techniques are very slow but despite the technical barriers the artificial insemination with frozen semen is growing. This experiment was divided into three steps. The first one compared the use of different diluents and freezing techniques. The other two stages were the use of cryogenic tubes for filling the semen and the determination of mare pregnancy rates that were artificially inseminated with frozen semen packaged in cryogenic tubes. Six stallions were submitted to semen collection and twelve mares were artificially inseminated at first estrus of the breeding season. The samples were diluted in INRA82 or Nagase, containing 5% glycerol, with a concentration of 200 x 106 sperm / ml. A fraction of the diluted semen was stored in straws (0.5 ml), some of those straws were immediately frozen. The remaining straws were cooled from room temperature (24ºC) to 5º C before freezing. The samples were thawed in a water bath at 37° C during 30sec. The same protocol with cooling prior to freezing was performed with samples filled into cryogenic tubes, and these samples were thawed in a water bath at 50° C during 100seg. The in vivo efficiency of cryopreserved semen was determined through artificial insemination. The diagnosis of pregnancy was performed after 20 days by ultrasound examination. After analyzing the data it was found that there was no significant difference in sperm motility and vigor among the tested diluents. Motility was INRA82: 43.32% / 26.66% and Nagase: 41.08% / 24.44%, when the semen was previously cooled or frozen directly, respectively. According to these results, the experimental groups subjected to cooling prior freezing showed better motility rates than the groups that were frozen directly. There were no differences regarding the vigor, motility and sperm defects among the diluents and the semen containers. The mares inseminated with cryotubes showed 50% (3/6) pregnancy rate, and 16.66% (1/6) pregnancy rate was observed in the group of mares inseminated with straws.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T19:55:39Z : No. of bitstreams: 1 carmo_mt_me_botfmvz.pdf: 1897708 bytes, checksum: fa05c4ad728f9d308be62b06ac394c0f (MD5)
Vários estudos têm relatado que a égua é refratária a todas as drogas rotineiramente utilizadas, visando superovulação em outras espécies, como o FSH e o eCG (Mc Cue, 1996). O extrato de pituitária eqüina (EPE) é um preparado parcial de gonadotrofina eqüina, e o único composto que consistentemente induz ovulações múltiplas em éguas (Squires et al, 1999); contudo, a resposta superovulatória tem sido baixa (1-3 ovulações/égua) (Mc Cue, 1996). Estudos mais recentes demonstram uma melhora no percentual de ovulações múltiplas em éguas superovuladas com a administração do EPE duas vezes ao dia (4-7ovulações/égua), entretanto com baixa taxa de recuperação embrionária (Scoggin et al., 2002; Alvarenga et al., 2001). Este fato pode estar relacionado a produção de oócitos de baixa qualidade (anormalidade na maturação folicular e oocitária) (Dippert et al., 1994; Palmer et al., 1993), a falha do folículo em liberar o oócito e a dificuldade na captação do mesmo para o interior do oviduto, assim como o trânsito deste ou do embrião pelo oviduto (Dippert et al., 1994). O extrato de pituitária eqüina (EPE) foi preparado no laboratório do Departamento de Reprodução Animal e Radiologia Veterinária da Universidade Estadual Paulista (UNESP), campus de Botucatu - SP, através do método proposto por Guillon & Combarnous, (1983). Seis éguas em bom estado nutricional, com idade variando entre quatro e 15 anos e massa corpórea de 400 a 500 Kg, além de um bom histórico reprodutivo, foram monitoradas diariamente durante os períodos compreendidos entre os meses de novembro (2001) a março (2002). Foram utilizados dois ciclos estrais de cada égua subdivididos em dois grupos: doses constantes e doses decrescentes; porém entre os tratamentos esperou-se um intervalo de dois ciclos estrais. O experimento foi conduzido no posto de monta...
Several studies have reported the is unresponsive to all the routinely used drugs aiming the superovulation in other species, such as the FSH and the eCG. The equine pituitary extract (EPE) is a partial equine gonadotropin preparation, and the only compound which consintenty induces multiple ovulation in mares; however, the superovulatory response has been low (1-3 ovulations/mare). More recent studies demonstrate some improvement in the percentage of multiple ovulation in superovulated mares with the EPE administration twice a day (4-7 ovulations/mare), nevertheless with a low rate of embryo recovery. This fact can be related to the low quality oocyte production (abnormality in the follicular and oocytary maturation), the follicular failure in releasing the oocyte and its collection towards the inner part of the oviduct, as its or the embryo traffic through the oviduct. The improvement on embryo recovery rate has been shownin cows with the utilization of decreasing doses of FSH. The present experiment aimmed to compare the ovulatory answer and embryo production of mares treated twice daily with constant and decreasing doses of EPE. Six mares in good nutrition status, with ages ranging from four and 15 years old and weighing from 400 to 500 Kg, together with a good reproductive history, were monitored daily through the preiods between the months of november/2001 to march/2002. Two estrous cytrous cycles were used from each mare and subdivided into two groups: constant doses and decresing doses;however between the treatments na interval of two estrous cycles was given. The experiment was carried out in the riding station (UNESP), placed in Lageado, a farm in the city of Botucatu - SP. For both groups, the treatment was started in the seventh post-ovuatory day, presenting a very evident corpora lutea and follicles equal or under 25 mm of diameter in the... (Complete abstract, click electronic address below)

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_priscila_marques_moura_de_leon.pdf: 3035474 bytes, checksum: 1dfa2e910533e830f4c6c01d06ca37e6 (MD5) Previous issue date: 2011-11-07
In equine, the intersections between reproduction and genomics are numerous, however, little known about the genetic factors that acting on fertility. The conclusion of equine genome sequencing project, brings the oportunity to evaluate candidate genes and molecular biomarkers for specific reproductive characteristics. Based on this information, this PhD thesis aimed to develop genomic studies applied to equine reproduction. The first paper analyzed the expression of apoptotic-related genes (Bax, Bcl-2, survivin and p53) in equine cumulus-oocyte complex by qRT-PCR, comparing gene expression between morphologically distinct oocytes and cumulus cells during in vitro maturation. Results showed that survivin mRNA levels were higher (P<0.05) and p53 mRNA levels was lower (P<0.01) in oocytes compared to cumulus cells in morphologically healthy. On the other hand, expression of the Bax was significantly higher in morphologically healthy cumulus cells (P<0.02). The second paper analyzed a single nucleotide polymorphism (SNP) in the p53 gene, looking for associations with reproductive parameters in Thoroughbred mares. This is the first study demonstrating the Arginine/Proline SNP in equine exon 4 p53 gene. The heterozygous Arginine/Proline was found in 73.3% of Thoroughbreds compared to the homozygous Arg/Arg and Pro/Pro that was detected in 17.1% and 9.6% of mares, respectively. The Arginine/Proline genotype was significantly associated with abortion (P=0.02), while Proline/Proline mares had a lower probability of abortion (P<0.05). These results indicate that p53 may play a role in equine reproduction. The second paper analyzed a single nucleotide polymorphism (SNP) in the p53 gene, looking for associations with reproductive parameters in Thoroughbred mares. This is the first study demonstrating the Arginine/Proline SNP in equine exon 4 p53 gene. The heterozygous Arginine/Proline was found in 73.3% of Thoroughbreds compared to the homozygous Arg/Arg and Pro/Pro that was detected in 17.1% and 9.6% of mares, respectively. The Arginine/Proline genotype was significantly associated with abortion (P=0.02), while Proline/Proline mares had a lower probability of abortion (P<0.05). These results indicate that p53 may play a role in equine reproduction. The third article has determined the presence of circulating cell-free fetal DNA (ccffDNA) in pregnant mare s plasma, looking to develop a molecular test for the prenatal diagnosis of fetal sex determination using SRY gene amplification by PCR, reamplification by PCR (2nd-PCR) and real-time quantitative PCR (qPCR). This is the first report of ccffDNA in equine species. The molecular sexing test resulted in sensitivity of 72% and accuracy of 85% on the PCR. Using the 2nd-PCR and qPCR we obtained an increasing in the sexing sensitivity results (90.9%) and an accuracy of 95%. This study demonstrates for the first time the fetal sex determination in mares using ccffDNA. This PhD thesis resulted in the publication of three papers in international journals of reproduction and a patent application request. The results presented here collaborate to understand the equine reproductive biology, and indicate potential genetic markers to fertility parameters.
Em equinos, as intersecções entre a reprodução e a genômica são numerosas, no entanto, pouco se sabe sobre os fatores genéticos que atuam na fertilidade. Com o genoma equino completo, existe a possibilidade de análises moleculares e estudo de genes candidatos a biomarcadores para características reprodutivas específicas. Com base nestas informações, a presente tese teve como objetivo desenvolver estudos de genômica aplicada à reprodução equina. O primeiro artigo analisou a expressão de genes relacionados a apoptose (Bax, Bcl-2, survivin e p53) no complexo cumulus oócito equino através de qRT-PCR, comparando a expressão gênica entre oócitos e células do cumulus com diferentes características morfológicas durante a maturação in vitro. Como resultados, foi observada maior expressão do survivin (P<0.05) e menor expressão de p53 (P<0.01) em oócitos comparado a células do cumulus do grupo considerado morfologicamente saudável. Enquanto que a expressão de Bax foi maior (P<0.02) em células do cumulus do grupo saudável comparado ao grupo com características morfológicas não desejáveis. O segundo artigo analisou um polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) no gene p53, relacionando-o a parâmetros reprodutivos de éguas Puro Sangue Inglês. Foi relatado pela primeira vez um SNP Arginina/Prolina na região do exon 4 do gene p53 equino. A prevalência foi de 73,3% para o genótipo heterozigoto, 17,1% do genótipo Arginina/Arginina e 9,6% do Prolina/Prolina. O genótipo Arginina/Prolina foi associado (P=0.02) a ocorrência de aborto, enquanto que o genótipo Prolina/Prolina foi associado (P<0.05) a menor probabilidade de aborto, indicando um papel da p53 na reprodução equina. O terceiro artigo determinou a presença de DNA fetal livre e circulante (ccffDNA) no plasma de éguas prenhas, desenvolvendo um teste molecular de diagnóstico pré-natal na determinação do sexo fetal através da amplificação do gene SRY pelas técnicas de PCR, de re-amplificação por PCR (2º-PCR) e de PCR quantitativo em tempo real (qPCR). Este é o primeiro relato do DNA fetal livre e circulante em equinos. O teste de sexagem molecular resultou em 72% de sensibilidade e 85% de acurácia na técnica de PCR. Com o 2º-PCR e qPCR a sensibilidade foi de 90,9% e 95% de acurácia. Este estudo demonstra pela primeira vez a determinação do sexo fetal em éguas utilizando o ccffDNA. Os resultados apresentados colaboram para o entendimento da biologia reprodutiva da espécie equina, e indicam marcadores genéticos em potencial para parâmetros de fertilidade. Esta tese resultou na publicação de três artigos em periódicos internacionais da área de Reprodução e um pedido de Patente de Invenção.

A leptina é um hormônio peptídico multifuncional, produzido principalmente pelo tecido adiposo, possuindo receptores (Ob-Rs) nos órgãos reprodutivos, hipotálamo e hipófise. Os glicocorticóides, como o cortisol, também influenciam diretamente a produção de leptina. A importância desses dois hormônios na atividade reprodutiva tem sido descrita por diversos autores, que observaramo envolvimento de ambos, na melhoria dos índices reprodutivos, seja por sua influência direta no eixo hipotalâmico-hipofisário-gonadal, na maturação dos oócitos ou na preparação uterina para receber o concepto. No entanto, quando em excesso na circulação, podem influênciar negativamente o sistema reprodutivo. Marcadores como a leptina e seu receptor funcional de cadeia longa, estão sendo estudados no endométrio de espécies como humanos, bovinos e suínos, apresentando resultados que correlacionam a diminuição destes, com a infertilidade ou perda embrionária, porém até o momento não foi possível encontrar estudos que abordassem esse tema em equinos. Neste estudo foram avaliados: 1) a presença de leptina (Ob) e seu receptor (Ob-Rb) no endométrio de éguas, observando a influência da obesidade e do ciclo estral nesses marcadores e 2) em uma condição de manejo adverso e estressante, a influência do cortisol intrafolicular, nos níveis de leptina no fluido folicular (FF) e nos marcadores de Ob e Ob-Rb no endométrio durante as fases do ciclo estral. Os resultados demonstraram que existe a presença da leptina e seu receptor (Ob-Rb) no endométrio de equinos, com imunomarcação no epitélio luminal e glandular em todas as fases do ciclo estral avaliadas, apresentando, no entanto, uma marcação imunológica mais intensa nos Ob-Rb (142.68±4.97, P< 0,0001) no epitélio glandular durante o diestro em éguas de escore corporal moderado. Não foi possível observar a influência do aumento do cortisol intrafolicular (FF) nas variáveis avaliadas, pois o cortisol se manteve dentro dos valores fisiológicos para a espécie, no entanto pode-se verificar uma correlação positiva entre os níveis intrafoliculares de cortisol e leptina, estando o cortisol aumentado 8 (30.1±0.07ng/ml, P< 0,05) nos folículos mais próximos a ovulação. Pode-se perceber também, que a marcação imunológica do receptor de leptina no epitélio glandular foi mais intensa (144.52±3.17, P< 0,0001) nos animais que apresentavam folículos até 22 mm, estando a imunomarcação de ambos Ob e Ob-Rb correlacionado de forma negativa (r: -0.7836; P < 0.0001, r:- 0.7343; P < 0.0001), com os níveis de cortisol no FF.
Leptin is a multifunctional peptidic hormone, mainly produced by adipose tissue, having receptors (Ob-Rs) in the reproductive organs, hypothalamus and pituitary. Glucocorticoids, such as cortisol, also directly influence leptin production. The importance of these two hormones in reproductive activity has been described by several authors, who observed the involvement of both, in the improvement of reproductive indices, either by their direct influence on the hypothalamic-pituitary-gonadal axis, oocyte maturation or the uterine preparation to receive the concept. However, when in excess in circulation, they can negatively influence the reproductive system. Markers such as leptin and its long-chain functional receptor are being studied in the endometrium of species such as humans, cattle and pigs, presenting results that correlate the decrease of these with infertility or embryonic loss, but to date it has not been possible to find studies to address this issue in horses. In this study we evaluated: 1) the presence of leptin (Ob) and its receptor (Ob-Rb) in the endometrium of mares, observing the influence of obesity and estrous cycle on these markers and 2) in an adverse and stressful management condition, the influence of intrafollicular cortisol, leptin levels in the follicular fluid (FF), and the Ob and Ob-Rb markers in the endometrium during the estrous cycle phases. The results showed that leptin and its receptor (Ob-Rb) are present in the equine endometrium, with immunostaining in the luminal and glandular epithelium in all stages of the estrous cycle evaluated, however, showing a more intense immunological labeling in Ob -Rb (142.68 ± 4.97, P <0.0001) in the glandular epithelium during the diestrous in mares of moderate body score. It was not possible to observe the influence of intrafollicular cortisol (FF) on the variables evaluated, because cortisol remained within the physiological values for the species, however a positive correlation can be observed between intrafollicular cortisol and leptin levels, being the 10 cortisol increased (30.1 ± 0.07ng/ml, P <0.05) in the follicles closest to ovulation. It can also be noticed that the immunological labeling of the leptin receptor in the glandular epithelium was more intense (144.52 ± 3.17, P <0.0001) in the animals that presented follicles up to 22 mm, and the immunostaining of both Ob and Ob-Rb correlated negatively (r: -0.7836; P <0.0001, r: - 0.7343; P <0.0001), with cortisol levels in FF.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011Bitstream added on 2014-06-13T20:59:28Z : No. of bitstreams: 1 nagao_jf_me_botfmvz.pdf: 177144 bytes, checksum: a738c7652ea5de1e5d56171a8a953d99 (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
O presente estudo objetivou verificar a utilização do acetato de deslorelina indução de dupla ovulação em éguas. No experimento 1 as foram utilizados 16 ciclos de 8 éguas, que foram tratadas com 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina, partir do D8 do ciclo estral até no mínimo dois folículos atingirem 33 mm quando foi induzida a ovulação com 2500 UI de hCG. A inseminação artificial foi realizada 24 horas após a indução com 1x109 de espermatozóides viáveis e a colheita dos embriões foi realizada no oitavo dia após a primeira ovulação detectada. No experimento 2 foram utilizados 112 ciclos de 56 éguas, neste experimento o protocolo com o acetato de deslorelina foi iniciado somente quando foi detectado um folículo com diâmetro de 25 mm e pelo menos um segundo folículo com diâmetro ≥ 21 ±1 mm nesse momento foi efetuada a aplicação de 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina e os demais procedimentos foram semelhantes aos descritos no protocolo do experimento 1. Para as análises estatísticas das variáveis estudadas foram utilizados os testes “t de Student” e teste Exato de Fisher. No experimento 1 apenas duas éguas do grupo tratado com acetato de deslorelina responderam com dupla ovulação. Já no experimento 2 a porcentagem de animais que responderam com dupla ovulação foi de 82% e a recuperação embrionária por ciclo foi de 1,12 x 0,57 no grupo tratado com acetato de deslorelina e no grupo controle, respectivamente (p<0,05). O acetato de deslorelina é eficiente na indução de duplas ovulações em éguas desde que o protocolo seja iniciado com no mínimo dois folículos entre 20 e 25 mm de diâmetro nos ovários e permite uma recuperação embrionária de um embrião por lavado uterino em média
This study aimed to verify whether deslorelin acetate could induce double ovulation in equine mares. In Experiment 1, we studied 16 estrous cycles in eight mares treated with 100 μg of deslorelin acetate or saline intramuscularly (IM) every 12 hours from D8 of the estrous cycle until at least two follicles reached 33 mm. At this time, ovulation was induced with 2500 IU of hCG. Artificial insemination was performed using 1 x 109 viable sperm 24 hours after induction, and embryos were collected on the eighth day after ovulation was first detected. In Experiment 2, we studied 112 cycles in 56 mares. In this experiment, the deslorelin acetate protocol was initiated only after a follicle with a diameter of 25 mm and at least one second follicle with a diameter ≥ 21 ± 1 mm was detected, at which time 100 mg deslorelin acetate or saline was administered IM every 12 hours. The other procedures were similar to those described in Experiment 1. The variables studied were analyzed using Student’s t-test and Fisher's exact test. In the first experiment, only two mares in the group treated with deslorelin acetate responded with double ovulation. In the second experiment, 82% of animals per cycle responded with double ovulation, and the embryo recovery per cycle was 1.12 and 0.57 in the group treated with deslorelin acetate and the control group, respectively (p < 0.05). Deslorelin acetate is effective in inducing double ovulation in mares when the protocol is initiated when at least two follicles are between 20 and 25 mm in diameter. On average, it allows for the recovery of one embryo by uterine lavage

Orientador: Marco Antonio Alvarenga
Resumo: Vários estudos têm relatado que a égua é refratária a todas as drogas rotineiramente utilizadas, visando superovulação em outras espécies, como o FSH e o eCG (Mc Cue, 1996). O extrato de pituitária eqüina (EPE) é um preparado parcial de gonadotrofina eqüina, e o único composto que consistentemente induz ovulações múltiplas em éguas (Squires et al, 1999); contudo, a resposta superovulatória tem sido baixa (1-3 ovulações/égua) (Mc Cue, 1996). Estudos mais recentes demonstram uma melhora no percentual de ovulações múltiplas em éguas superovuladas com a administração do EPE duas vezes ao dia (4-7ovulações/égua), entretanto com baixa taxa de recuperação embrionária (Scoggin et al., 2002; Alvarenga et al., 2001). Este fato pode estar relacionado a produção de oócitos de baixa qualidade (anormalidade na maturação folicular e oocitária) (Dippert et al., 1994; Palmer et al., 1993), a falha do folículo em liberar o oócito e a dificuldade na captação do mesmo para o interior do oviduto, assim como o trânsito deste ou do embrião pelo oviduto (Dippert et al., 1994). O extrato de pituitária eqüina (EPE) foi preparado no laboratório do Departamento de Reprodução Animal e Radiologia Veterinária da Universidade Estadual Paulista (UNESP), campus de Botucatu - SP, através do método proposto por Guillon & Combarnous, (1983). Seis éguas em bom estado nutricional, com idade variando entre quatro e 15 anos e massa corpórea de 400 a 500 Kg, além de um bom histórico reprodutivo, foram monitoradas diariamente durante os períodos compreendidos entre os meses de novembro (2001) a março (2002). Foram utilizados dois ciclos estrais de cada égua subdivididos em dois grupos: doses constantes e doses decrescentes; porém entre os tratamentos esperou-se um intervalo de dois ciclos estrais. O experimento foi conduzido no posto de monta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Several studies have reported the is unresponsive to all the routinely used drugs aiming the superovulation in other species, such as the FSH and the eCG. The equine pituitary extract (EPE) is a partial equine gonadotropin preparation, and the only compound which consintenty induces multiple ovulation in mares; however, the superovulatory response has been low (1-3 ovulations/mare). More recent studies demonstrate some improvement in the percentage of multiple ovulation in superovulated mares with the EPE administration twice a day (4-7 ovulations/mare), nevertheless with a low rate of embryo recovery. This fact can be related to the low quality oocyte production (abnormality in the follicular and oocytary maturation), the follicular failure in releasing the oocyte and its collection towards the inner part of the oviduct, as its or the embryo traffic through the oviduct. The improvement on embryo recovery rate has been shownin cows with the utilization of decreasing doses of FSH. The present experiment aimmed to compare the ovulatory answer and embryo production of mares treated twice daily with constant and decreasing doses of EPE. Six mares in good nutrition status, with ages ranging from four and 15 years old and weighing from 400 to 500 Kg, together with a good reproductive history, were monitored daily through the preiods between the months of november/2001 to march/2002. Two estrous cytrous cycles were used from each mare and subdivided into two groups: constant doses and decresing doses;however between the treatments na interval of two estrous cycles was given. The experiment was carried out in the riding station (UNESP), placed in Lageado, a farm in the city of Botucatu - SP. For both groups, the treatment was started in the seventh post-ovuatory day, presenting a very evident corpora lutea and follicles equal or under 25 mm of diameter in the... (Complete abstract, click electronic address below)
Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-11Bitstream added on 2014-06-13T21:05:30Z : No. of bitstreams: 1 taveira_rz_dr_botfmvz.pdf: 263449 bytes, checksum: 25a9e90e6bbf0574c26236eb35b75feb (MD5)
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Poucas informações encontram-se disponíveis acerca dos parâmetros genéticos de características reprodutivas em eqüinos. Sendo assim, conduziu-se um estudo utilizando informações provenientes de 7.278 éguas da raça Puro-Sangue Inglês, sendo 6.327 informações sobre a idade à primeira cobertura (IPC), 5.400 relativas a idade à primeira parição (IPP), 5.473 referentes ao primeiro período de gestação (PPG) e 4.404 relativas ao primeiro intervalo de partos (PIEP). Os dados foram analisados pelo método da máxima verossimilhança restrita, com a utilização do aplicativo MTDFREML para estimação dos componentes de variância e covariância. A idade média à primeira cobertura foi de 4,93 anos, com desvio padrão de 1,45 anos, mínimo de 2,07,anos máximo de 11,94 anos e estimativa de herdabilidade (h2) de 0,19. A idade média à primeira parição foi de 6,01 anos, com desvio padrão de 1,53 anos, mínimo de 3,01anos, máximo de 12,9 anos e estimativa de herdabilidade de 0,38. O primeiro período de gestação médio foi de 337,83 dias, com desvio padrão de 9,47 dias, mínimo de 302 dias, máximo de 396 dias e estimativa de herdabilidade de 0,16. O primeiro intervalo de partos médio foi de 490,18 dias, com desvio padrão de 192,02 dias, mínimo de 303 dias, máximo de 1.095 dias e estimativa de herdabilidade de 0,01. As correlações genéticas encontradas entre a IPC e o IPP, PIEP e PPG foram 1, 0,55 e - 0,13, respectivamente. As correlações genéticas da IPP com PIEP e PPG foram 0,52 e 0,35, respectivamente, enquanto que a correlação genética entre o PIEP e PPG foi de - 0,54. Das características avaliadas a IPP mostrou-se mais interessante para incorporação em programas de seleção que visem melhorar aspectos reprodutivos de eqüinos da raça Puro-Sangue Inglês no Brasil.
There is very little information on the genetic parameters of reproductive traits in equine. With that in mind, a study was conducted using information from 7,278 Thoroughbred mares, of which 6,327 entries were about age at first covering (AFC), 5,400 relating to age at first foaling (AFF), 5,473 relating to first gestation period (FGP) and 4,404 relating to first foaling interval (FFI). The data were analyzed by Maximum Restricted Likelihood, with the application of MTDFREML, to estimate variance and covariance components. Average age at first covering was 4.93 years, with a standard deviation of 1.45 years, minimum of 2.07 years, maximum of 11.94 years and heritability estimate (h2) of 0.19. Average age at first foaling was 6.01 years, with a standard deviation of 1.53 years, minimum of 3.01 years, maximum of 12.9 years and estimative of heritability of 0.38. The first average gestation period was 337.83 days, with a standard deviation of 9.47 days, minimum of 302 days, maximum of 396 days and estimative of heritability of 0.16. First foaling interval was 490.18 days, with a standard deviation of 192.02 days and minimum of 303 days, maximum of 1,095 days and estimative of hereditability of 0.01. Genetic correlations found between AFC and AFF, FFI and FGP were 1, 0.55 and - 0.13, respectively. Genetic correlations of AFF with FFI and FGP were 0.52 and 0.35, respectively, whereas the genetic correlation between FFI and FGP was - 0. 54. Among the evaluated traits, AFF was shown to be the most interesting to incorporate in selection programs whose aim is to improve reproductive traits in Thoroughbred horses in Brazil.

Orientador: Marcílio Dias Silveira da Mota
Resumo: Poucas informações encontram-se disponíveis acerca dos parâmetros genéticos de características reprodutivas em eqüinos. Sendo assim, conduziu-se um estudo utilizando informações provenientes de 7.278 éguas da raça Puro-Sangue Inglês, sendo 6.327 informações sobre a idade à primeira cobertura (IPC), 5.400 relativas a idade à primeira parição (IPP), 5.473 referentes ao primeiro período de gestação (PPG) e 4.404 relativas ao primeiro intervalo de partos (PIEP). Os dados foram analisados pelo método da máxima verossimilhança restrita, com a utilização do aplicativo MTDFREML para estimação dos componentes de variância e covariância. A idade média à primeira cobertura foi de 4,93 anos, com desvio padrão de 1,45 anos, mínimo de 2,07,anos máximo de 11,94 anos e estimativa de herdabilidade (h2) de 0,19. A idade média à primeira parição foi de 6,01 anos, com desvio padrão de 1,53 anos, mínimo de 3,01anos, máximo de 12,9 anos e estimativa de herdabilidade de 0,38. O primeiro período de gestação médio foi de 337,83 dias, com desvio padrão de 9,47 dias, mínimo de 302 dias, máximo de 396 dias e estimativa de herdabilidade de 0,16. O primeiro intervalo de partos médio foi de 490,18 dias, com desvio padrão de 192,02 dias, mínimo de 303 dias, máximo de 1.095 dias e estimativa de herdabilidade de 0,01. As correlações genéticas encontradas entre a IPC e o IPP, PIEP e PPG foram 1, 0,55 e - 0,13, respectivamente. As correlações genéticas da IPP com PIEP e PPG foram 0,52 e 0,35, respectivamente, enquanto que a correlação genética entre o PIEP e PPG foi de - 0,54. Das características avaliadas a IPP mostrou-se mais interessante para incorporação em programas de seleção que visem melhorar aspectos reprodutivos de eqüinos da raça Puro-Sangue Inglês no Brasil.
Abstract: There is very little information on the genetic parameters of reproductive traits in equine. With that in mind, a study was conducted using information from 7,278 Thoroughbred mares, of which 6,327 entries were about age at first covering (AFC), 5,400 relating to age at first foaling (AFF), 5,473 relating to first gestation period (FGP) and 4,404 relating to first foaling interval (FFI). The data were analyzed by Maximum Restricted Likelihood, with the application of MTDFREML, to estimate variance and covariance components. Average age at first covering was 4.93 years, with a standard deviation of 1.45 years, minimum of 2.07 years, maximum of 11.94 years and heritability estimate (h2) of 0.19. Average age at first foaling was 6.01 years, with a standard deviation of 1.53 years, minimum of 3.01 years, maximum of 12.9 years and estimative of heritability of 0.38. The first average gestation period was 337.83 days, with a standard deviation of 9.47 days, minimum of 302 days, maximum of 396 days and estimative of heritability of 0.16. First foaling interval was 490.18 days, with a standard deviation of 192.02 days and minimum of 303 days, maximum of 1,095 days and estimative of hereditability of 0.01. Genetic correlations found between AFC and AFF, FFI and FGP were 1, 0.55 and - 0.13, respectively. Genetic correlations of AFF with FFI and FGP were 0.52 and 0.35, respectively, whereas the genetic correlation between FFI and FGP was - 0. 54. Among the evaluated traits, AFF was shown to be the most interesting to incorporate in selection programs whose aim is to improve reproductive traits in Thoroughbred horses in Brazil.
Doutor

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 121852 bytes, checksum: 95e74174c41e234507979d7c0f9223a2 (MD5) Previous issue date: 2004-12-17
It was objectified with this study to characterize and evaluate the reproductive efficiency in donor and recipient mares of Mangalarga Marchador race in commercial programs of Embryos Transfer (TE) and verify the relationship of some reproductive characteristics, zootechnics and methodology in the TE among conception rates in recipients. Data collected in four different farms, from 1998 to 2004, were analyzed where 1141 crops were accomplished with recovery of 830 embryos. The percentile of embryos recovery found because of the number of crops of the six reproductive seasons was 72.74%. Differences were not observed among the rates of embryonic recovery in the different reproductive seasons (P>0.05). Generally, 90% of the recovered embryos were 8 to 9 days of age. There was no difference among the embryonic recovery from the first to the ninth embryos crop of the reproductive season, as well as among mares inseminated during the colt heat and another subsequent heat (P>0.05). The size of the first follicle and the donor's artificial insemination in preovulatory phase were the characteristics that presented positive correlation with the embryonic recovery in donors (P<0.05). The conception rates observed in the sum of all of the seasons in 15, 30, 45 and 60 days were 73.4; 69.9; 66.7 and 64.46%, respectively. The early embryonic losses between 15-30; 15-45 and 15-60 days were 4.8; 9 and 12.15%, respectively, not differing among the seasons (P>0.05). Differences were not observed in the conception rate and early embryonic loss in the embryos transferred immediately after the crop (66.8 and 13.5%) and embryos transported at room temperature for periods inferior to 1 hour (62.9 and 14.4%) (P>0.05). A correlation was not observed between the studied variables and the conception rate in the recipients (P>0.05). Regarding the rate of early embryonic loss, there was no difference among the different intervals of ovulation s synchrony among the donors and recipients (P>0.05). Related to the conception rate, better results were verified in the intervals of -3 and -2 days regarding the ovulation s synchrony of donors and recipients (P <0.05) and the smallest rates in the intervals of -6 (P <0.05) with intermediary values in the intervals of -1, 0 and +1, although the last two didn't differ of the interval -6 (P>0.05). The use of that flexibility in the technique provides advantages for commercial programs of equine embryos transfer, making possible the optimization in the use of recipient mares, costs reduction and improvements in the farms management.
Objetivou-se com este estudo caracterizar e avaliar a eficiência reprodutiva de éguas doadoras e receptoras da raça Mangalarga Marchador em programas comerciais de transferência de Embriões (TE) e verificar a relação de algumas características reprodutivas, zootécnicas e metodologia na TE com taxas de prenhez em receptoras. Foram analisados dados coletados em quatro diferentes fazendas, de 1998 a 2004, onde foram realizadas 1141 colheitas com recuperação de 830 embriões. O percentual de recuperação de embriões observado em função do número de colheitas das seis estações reprodutivas foi de 72,74%. Não foi observada diferença entre as taxas de recuperação embrionária nas diferentes estações reprodutivas (P>0,05). No geral 90% dos embriões recuperados encontravam-se com 8 a 9 dias de idade. Não houve diferença entre a recuperação embrionária da primeira a nona colheita de embriões da estação reprodutiva, assim como entre éguas inseminadas durante o cio do potro e em outros cios subseqüentes (P>0,05). O tamanho do primeiro folículo e a inseminação artificial da doadora na fase pré-ovulatória foram as características que apresentaram correlação positiva com a recuperação embrionária em doadoras (P< 0,05). As taxas de prenhez observadas na soma de todas as estações aos 15, 30, 45 e 60 dias foram de 73,4; 69,9; 66,7 e 64,46% respectivamente. As perdas embrionárias precoces entre 15- 30; 15-45 e 15-60 dias foram de 4,8; 9 e 12,15%, respectivamente, não diferindo entre as estações (P>0,05). Não foi observada diferença na taxa de prenhez e perda embrionária precoce nos embriões transferidos imediatamente após a colheita (66,8 e 13,5%) e embriões transportados à temperatura ambiente por períodos inferiores a 1 hora (62,9 e 14,4%) (P>0,05). Não foi observada correlação entre as variáveis estudadas e a taxa de prenhez nas receptoras (P>0,05). Com relação à taxa de perda embrionária precoce, não houve diferença entre os diferentes intervalos de sincronia de ovulação entre as doadoras e receptoras (P>0,05). Com relação à taxa de gestação, melhores resultados foram verificados nos intervalos de 3 e 2 dias com relação à sincronia de ovulação das doadoras e receptoras (P<0,05) e as menores taxas nos intervalos de 6 (P<0,05) com valores intermediários nos intervalos de 1, 0 e +1, sendo que os dois últimos não diferiram do intervalo 6 (P>0,05). A utilização dessa flexibilização na técnica proporciona vantagens para programas comerciais de transferência de embriões eqüinos, possibilitando otimização no uso de receptoras, redução de custos e melhorias no manejo das fazendas.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2018-02-19T18:29:22Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Edmêe Aparecida Fleury Curado - 2017.pdf: 2300652 bytes, checksum: ae7a412a9c9e2fff2ee8706032b1b995 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)
Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-02-20T11:03:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Edmêe Aparecida Fleury Curado - 2017.pdf: 2300652 bytes, checksum: ae7a412a9c9e2fff2ee8706032b1b995 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)
Made available in DSpace on 2018-02-20T11:03:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Edmêe Aparecida Fleury Curado - 2017.pdf: 2300652 bytes, checksum: ae7a412a9c9e2fff2ee8706032b1b995 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-10-20
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
Due to the current trade and technology used in equine breeding, there is a search for effective reproductive methods, seeking to optimize the resources provided by the animal and the environment. Hormonal mare characteristics already known and used with a positive reproductive effect, such as the use of equine pituitary extract (EPE) to induce ovulation, may be better employed if we eliminate the heterogenicity of the samples at the moment of collection. This experiment was conducted with the objective of inducing estrus and ovulation in mares at the end of the mating season, with the use of EPE collected separately at different times of the year - summer and winter. The protocols were 14 cross bred mares, of which 7 were submitted to treatment with EPE collected in the summer and the others with EPE collected in the winter. All of these animals were initially treated as a control group, that is, being monitored daily for ovarian, uterine and behavioral changes from the start of the breending season. From the beginning of March 2017 (03/03/2017), these animals were randomly assigned to one of the treatments, which consisted of an intramuscular application of 125 IU EPE every 12 hours, until one or more more follicles with 34/35 mm, when each one received a single intravenous EPE application containing 500 IU to induce ovulation. The only difference between the groups was the EPE collection season. The results obtained in this experiment allowed to conclude that the reduction of the light incidence after the summer solstice reduces the diameter of the ovulatory follicle. In addition, EPE-summer was more effective when used with the objective of maintaining follicular growth in mares during the end of the breeding season, resulting in larger ovulatory follicles.
Devido ao atual comércio e tecnologia empregada na criação de equinos, existe procura por métodos reprodutivos efetivos, buscando a otimização dos recursos proporcionados pelo animal e pelo ambiente. Caracteristicas hormonais da égua já conhecidas e usadas com efeito reprodutivo positivo, como o uso do extrato de pituitária equina (EPE) para induzir ovulação, pode ser melhor empregado se eliminarmos a heterogenicidade das amostras no momento da coleta. Este experimento foi conduzido com o objetivo de induzir o estro e a ovulação em éguas no final da estação de monta, com o uso de EPE coletado separadamente em diferentes épocas do ano - verão e inverno. Foram submetidas aos protocolos, 14 éguas sem raça definida, sendo 7 delas submetidas ao tratamento com EPE coletado no verão e as outras com EPE coletado no inverno. Todos estes animais foram inicialmente tratados como grupo controle, isto é, sendo monitoradas diariamente quanto as modificações ovarianas, uterinas e comportamentais, desde o início da Estação de Monta. A partir do início de março de 2017 (03/03/2017), estes animais foram randomicamente dividos para um dos tratamentos, que consistiram em uma aplicação por via intramuscular de 125 UI de EPE a cada 12 horas, até a verificação de um ou mais folículos com 34/35 mm, quando então cada uma recebia uma única aplicação de EPE via endovenosa contendo 500 UI, para induzir a ovulação, sendo a única diferença entre os grupos a época de coleta do EPE. Os resultados obtidos neste experimento permitiram concluir que a redução da incidência luminosa após o solstício de verão reduz o diâmetro do folículo ovulatório. Além de que o EPE-verão foi mais eficaz quando utilizado com o objetivo de manter o crescimento folicular em éguas durante o final da estação reprodutiva, resultando em folículos ovulatórios maiores.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007Bitstream added on 2014-06-13T20:06:45Z : No. of bitstreams: 1 carmo_mt_dr_botfmvz.pdf: 1969502 bytes, checksum: 198972891441c6a64f8bf48146e2e8b1 (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
A fêmea da espécie eqüina é considerada monovulatória sazonal, o que é ator limitante a produção de embriões ao longo do ano. Esta limitação poderia inimizada se houvesse uma resposta superovulatória eficiente em melhorar a ção de embriões. Protocolos mais recentes desenvolvidos em nosso atório utilizando-se o Extrato de Pituitária Eqüina (EPE) têm permitido uma esposta superovulatória. Contudo o número de embriões recuperados ainda sido inferior ao das ovulações, em conseqüência de fatores ainda não inados. O presente estudo teve por objetivo: verificar se o tratamento com o - administrado duas vezes ao dia, altera a maturação nuclear e citoplasmática I ito, avaliar o ambiente folicular mensurando os níveis de 17(3-estradiol, E5~)tlerona, progesterona, inibina e óxido nítrico, bem como o perfil eletroforético eínas no fluido folicular entre éguas superovuladas e não superovuladas. amos também o transporte do oócito para o oviduto. Este trabalho foi o em quatro experimentos: Experimento I Estudo do transporte dos oócitos oviduto de éguas superovuladas com extrato de pituitária eqüina; ento II Efeito da superovulação na recuperação de oócitos quando da ~-es foliculares guiadas por ultra-sonografia; Experimento 111 Avaliação do e folicular de éguas superovuladas; Experimento IV Avaliação da ''ação oocitária de éguas superovuladas com extrato de pituitária equina. O ento I foi desenvolvido na Universidade de Rio Cuarto (Argentina), foram _za.:las 22 éguas de 3 - 12 anos, (09 éguas controles; 13 éguas tratadas _ . Estes animais foram...
The equine female is considered a seasonal mono-ovulatory specie, which is a restrictive factor in respect to embryo production throughout the year. This limitation could be minimized if an efficient superovulatory response and consequent improvement of embryo production were possible. More recent protocols developed in our lab using EPE (equine pituitary extract) have allowed a good superovulatory response. However, the number of embryos recovered has been inferior to the number of ovulations detected due to unknown factors. The present study has the following objectives: Verify if the EPE treatment administered twice daily would alter the oocyte cytoplasmic and nuclear maturation; and to evaluate the follicular environment by measuring estradiol 17-, testosterone, progesterone, inhibin and nitric oxide. The electrophoresis pattern of proteins in follicular fluid from superovulated and non- superovulated mares was determined. In addition, the oocyte transport through the oviduct was investigated. The present study was divided into four experiments. Experiment I: Study of oocyte transport to the oviduct in superovulated mares using equine pituitary extract. Experiment II: Effect of superovulation on oocyte recovery using transvaginal ultrasound guided follicular aspiration. Experiment III: Evaluation of follicular environment in superovulated mares. Experiment IV: Oocyte maturation in superovulated in mares using equine pituitary extract. Experiment I was performed at Rio Cuarto University, Argentina. In the related study, 22 mares aging from 3 to 12 years were used (9 control mares, 13 EPE treated mares). These mares were monitored daily by ultrasound until the presence of a follicle ≥ 30mm in diameter, being then examined twice daily. The superovulation protocol used consisted in 25mg of EPE twice a day, intramuscularly, starting at day 7 post- ovulation... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: José Antônio Dell'Aqua Júnior
Banca:
Resumo: O presente estudo objetivou verificar a utilização do acetato de deslorelina indução de dupla ovulação em éguas. No experimento 1 as foram utilizados 16 ciclos de 8 éguas, que foram tratadas com 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina, partir do D8 do ciclo estral até no mínimo dois folículos atingirem 33 mm quando foi induzida a ovulação com 2500 UI de hCG. A inseminação artificial foi realizada 24 horas após a indução com 1x109 de espermatozóides viáveis e a colheita dos embriões foi realizada no oitavo dia após a primeira ovulação detectada. No experimento 2 foram utilizados 112 ciclos de 56 éguas, neste experimento o protocolo com o acetato de deslorelina foi iniciado somente quando foi detectado um folículo com diâmetro de 25 mm e pelo menos um segundo folículo com diâmetro ≥ 21 ±1 mm nesse momento foi efetuada a aplicação de 100 μg de acetato de deslorelina (IM) a cada 12 horas ou solução salina e os demais procedimentos foram semelhantes aos descritos no protocolo do experimento 1. Para as análises estatísticas das variáveis estudadas foram utilizados os testes "t de Student" e teste Exato de Fisher. No experimento 1 apenas duas éguas do grupo tratado com acetato de deslorelina responderam com dupla ovulação. Já no experimento 2 a porcentagem de animais que responderam com dupla ovulação foi de 82% e a recuperação embrionária por ciclo foi de 1,12 x 0,57 no grupo tratado com acetato de deslorelina e no grupo controle, respectivamente (p<0,05). O acetato de deslorelina é eficiente na indução de duplas ovulações em éguas desde que o protocolo seja iniciado com no mínimo dois folículos entre 20 e 25 mm de diâmetro nos ovários e permite uma recuperação embrionária de um embrião por lavado uterino em média
Abstract: This study aimed to verify whether deslorelin acetate could induce double ovulation in equine mares. In Experiment 1, we studied 16 estrous cycles in eight mares treated with 100 μg of deslorelin acetate or saline intramuscularly (IM) every 12 hours from D8 of the estrous cycle until at least two follicles reached 33 mm. At this time, ovulation was induced with 2500 IU of hCG. Artificial insemination was performed using 1 x 109 viable sperm 24 hours after induction, and embryos were collected on the eighth day after ovulation was first detected. In Experiment 2, we studied 112 cycles in 56 mares. In this experiment, the deslorelin acetate protocol was initiated only after a follicle with a diameter of 25 mm and at least one second follicle with a diameter ≥ 21 ± 1 mm was detected, at which time 100 mg deslorelin acetate or saline was administered IM every 12 hours. The other procedures were similar to those described in Experiment 1. The variables studied were analyzed using Student's t-test and Fisher's exact test. In the first experiment, only two mares in the group treated with deslorelin acetate responded with double ovulation. In the second experiment, 82% of animals per cycle responded with double ovulation, and the embryo recovery per cycle was 1.12 and 0.57 in the group treated with deslorelin acetate and the control group, respectively (p < 0.05). Deslorelin acetate is effective in inducing double ovulation in mares when the protocol is initiated when at least two follicles are between 20 and 25 mm in diameter. On average, it allows for the recovery of one embryo by uterine lavage
Mestre

O objetivo deste trabalho foi comparar a utilização de diluentes comerciais à base de gema de ovo de galinha com os mesmos diluentes, nos quais se substituiu a gema de galinha pela de ovo de ema (Rhea americana). Foram utilizados Seis garanhões da raça Crioula, comprovadamente férteis e no período fora da estação de monta e utilizados seis ejaculados de cada garanhão. O sêmen foi avaliado macroscopicamente quanto ao volume, aspecto e coloração, a seguir avaliou-se a motilidade progressiva e total. Posteriormente o sêmen foi dividido em quatro alíquotas e diluído na proporção 1:1 com o diluente, Equimix (Nutricell Nutrientes Celulares) para centrifugação. Para adição do diluente de congelamento foram utilizados: diluente A (FR-5, Nutricell Nutrientes Celulares) e diluente B (Botu-crio, Biotech Botucatu S.A.) adicionados de 20 % de gema de ovo de ema, ou de 20 % de gema de ovo de galinha. As amostras foram envasadas, identificadas e submetidas a congelamento conforme o protocolo. As palhetas foram descongeladas, após um período mínimo de 7 dias e examinadas para os seguintes quesitos: motilidade total e progressiva, e integridade física e funcional da membrana plasmática do espermatozoide. Os diluentes comerciais com ou sem adição de gema de ovo de ema não apresentaram diferenças em relação à motilidade total e progressiva, porém observou-se diferença nos parâmetros quando comparados os diluentes comerciais. Houve diferença na funcionalidade da membrana apenas quando comparado diluente A e B com gema de ovo de ema. No quesito integridade de membrana não foi observado diferença estatística. Estes resultados demonstram que a gema de ovo de ema (Rhea americana) pode ser uma alternativa para produção de diluentes para congelamento de sêmen de equinos.
The aim of this study was to compare the use of two commercial extenders using chicken egg yolk with the same extenders, to which ema (Rhea americana) egg yolk was added. Six Criollo breed stallions were used during the off-breeding season period. Six collections per stallion were used. The ejaculate aspect, total and progressive motility were evaluated with a microscope; concentration was determined with a Neubauer counting chamber. After evaluation, semen samples were divided in two aliquots and diluted 1:1 in each of the centrifugation extender Equimix (Nutricell Nutrientes Celulares). For freeze that semen we used two commercial extenders: A (extender with glycerol) or B (extender with methylformamide) and was added 20% rhea egg yolk or 20% chicken egg yolk . Semen samples were examined at least 1 week after freezing, for total and progressive motility, physical and functional membrane integrity (HOST test and CFDA-PI fluorescence) (Lagares et al. 1998; Harrison & Vickers, 1990). The extenders of a given brand with or without rhea egg yolk had no significant difference according to total and progressive motility, although there was difference (p = 0,05) between extenders when different brands were compared, no matter if they were added Rhea egg yolk or not. Membrane functionality showed difference only when compared Extender A and B with Rhea egg yolk. Membrane integrity had no significant difference between all the treatments. These results show that Rhea egg yolk might be an alternative to making an equine semen extender.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2006.
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A baixa fertilidade é um dos fatores que restringe o uso da criopreservação de sêmen na espécie eqüina. Durante o congelamento, os espermatozóides sofrem vários danos, tais como alterações na membrana, capacitação prematura, alterações no DNA e estresse oxidativo. Os espermatozóides são suscetíveis ao estresse oxidativo devido, principalmente, à grande quantidade de ácidos graxos poliinsaturados presentes nas suas membranas e pela baixa concentração de enzimas antioxidantes no seu citoplasma. A reduzida fertilidade, muitas vezes, tem sido correlacionada com a baixa capacidade antioxidante do sêmen e tal fato pode se dar devido à retirada do plasma seminal durante o processo de criopreservação. Estudos recentes têm demonstrado efeito benéfico do plasma seminal no armazenamento dos espermatozóides eqüinos submetidos ao resfriamento ou congelamento. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de diferentes concentrações de plasma seminal na proteção contra o estresse oxidativo e danos na viabilidade da célula espermática. Foram utilizados 4 garanhões, sendo congeladas 4 partidas de cada animal. Após a colheita o plasma seminal foi retirado e os espermatozóides ressuspendidos em diluente contendo diferentes concentrações de plasma 0% (T1), 5% (T2), 25% (T3) e 50% (T4). As análises realizadas pós-descongelação foram motilidade, vigor, morfologia, integridade de membrana, integridade de acrossoma , integridade de DNA, peroxidação lipídica e proteína carbonilada. A adição de plasma seminal não afetou (p>0,05) a morfologia espermática e a integridade de DNA. Espermatozóides congelados com 5% de plasma seminal (T2) foram semelhantes ao controle (T1) em todas as variáveis estudadas (p>0,05), com exceção da peroxidação lipídica, que foi maior (p<0,05) no tratamento sem plasma (T1). O T4 apresentou menor (p<0,05) motilidade, vigor, percentagem de células com membrana íntegra e acrossoma intacto. Efeitos do plasma seminal na proteção contra oxidação de proteínas não foram observados(p>0,05). Em conclusão, o plasma seminal possui efeito antioxidante durante criopreservação, entretanto esse efeito não protege a viabilidade das células espermáticas de outros danos decorrentes da criopreservação, podendo , inclusive acentuar esses danos quando utilizado em concentrações de 25% ou mais. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT
One of the major limiting factors of equine frozen semen is the low fertility obtained. During freezing process spermatozoa undergoes a series of damages such as changes in membrane components, premature capacitation, chromatin damages and oxidative stress. Sperm cells are very susceptible to oxidative stress due to high concentration of polyunsaturated fatty acids in the membrane and low concentration of antioxidant enzymes in their cytoplasm. It has been shown that there is a correlation between low antioxidant capacity of semen and fertility of the animal and it may be due to seminal plasma removal during cooling or freezing process. Recent studies have shown a beneficial effect of seminal plasma in the storage of equine spermatozoa either by cooling or by cryopreservation. The objective of the present study was to evaluate the effect of different concentrations of seminal plasma in the protection against oxidative stress during cryopresenvation of equine spermatozoa, and to verify that effect in cell viability. In this experiment, four stallions were used and four ejaculates were obtained from each animal. After collection, seminal plasma was removed and spermatozoa ressuspended in extender with seminal plasma in different concentrations 0% (T1), 5% (T2), 25% (T3) e 50% (T4). Motility, vigor, morphology, membrane, acrossome and DNA integrity, lipid peroxidation and protein oxidation were analyzed after freezing and thawing. Seminal plasma did not affect (p>0,05) sperm morphology and DNA integrity. Frozen spermatozoa with 5% (T2) of seminal plasma were similar (p>0,05) to control (T1) in all variables studied, except in lipid peroxidation analysis, in which the results were higher (p<0,05) in control in comparison with the other treatments. T4 presented lower (p<0,05) motility, vigor, membrane and acrossome intact cells percentage. Effect of seminal plasma protection against protein oxidation was not observed (p>0,05). In conclusion, seminal plasma presented antioxidant effect during cryopreservation, however, this effect does not protect the spermatozoa viability from other cryopreservation damages and it may even exacerbate theses damages in concentrations of 25% or higher.

Resumo: O presente trabalho envolveu três experimentos: Influência da imunização passiva contra estradiol (E2) e a aspiração do maior folículo (F1) no momento do desvio folicular esperado, sobre a ocorrência do desvio folicular observado. Também foi objetivo verificar o efeito desses tratamentos sobre o perfil de hormônio folículo estimulante (FSH), hormônio luteinizante (LH) e inibina total circulante. Para tanto, os animais foram imunizados com dose única de soro anti-E2 (G anti-E2) ou o F1 foi aspirado no momento do desvio esperado (GAF1). O plasma sangüíneo foi obtido no período pré e póstratamento. O intervalo entre o dia da aplicação do soro (desvio esperado) e o dia da detecção do desvio foi em média o mesmo para o G anti-E2 e controle. No GAF1, a eliminação do maior folículo provocou atraso no momento da detecção do desvio folicular entre o segundo (F2) e o terceiro (F3) maior folículo, comparado ao controle. Em ambos os tratamentos o perfil de FSH, LH e inibina total foi similar ao controle. O experimento 2 tratou de um projeto piloto visando dominar a técnica de colheita de fluido dos grandes folículos ovarianos por meio de punção com agulha fina e o efeito desse procedimento sobre o folículo e às concentrações hormonais. Foram utilizados dois grupos de animais, G1 o folículo foi mantido intacto (controle) e G2 foi utilizada uma punção folicular quando o maior folículo atingiu diâmetro ~35 mm. Ultrasonografia ovariana foi realizada desde o ínicio da detecção de um folículo ~25mm, seguindo até a detecção da ovulação. O terceiro experimento objetivou verificar a influência de gonadotrofina coriônica humana (hCG) em folículos de 30 ou 35mm sobre as concentrações de hormônios esteróides e fatores intrafoliculares. A colheita do fluido folicular foi realizada imediatamente antes e 30 horas após a aplicação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The present study involved three experiments: The influence of passive immunization against estradiol (E2) and the largest follicle aspiration (F1) during the expected time of follicle deviation (F1~20mm) on observed follicle deviation occurrence. In addition, the study aimed to verify the related treatment effect on FSH, LH and total inhibin patterns in plasma. Therefore, the animais were immunized with a single dose of serum anti-E2 (G-anti E2) or the F1 was ablated at the expected time of deviation (GAF1). The blood samples were obtained at the pre and post treatment period. The interval between the day of anti-serum administration (expected time of deviation) and the day of deviation detection was similar for G-anti E2 and control groups. The GAF1 presented a delay on time detection of follicle deviation between the second (F2) and the third (F3) largest follicle upon elimination of the largest follicle when compared to control group. In both treatments, patterns of FSH, LH, and total inhibin were similar to control. The experiment 2 was a pilot project viewing training the technique to obtain follicular fluid from large ovarian follicles by puncture using a 25G needle, in addition to determine the effect of this procedure on follicle and hormonal concentrations. Two groups were used, G1 with the maintenance of intact follicle (control) and G2 with a follicle puncture when the largest follicle reached ~35mm in diameter. Ovarian ultrasonography was performed since the detection of a follicle 25mm and it remained until the detection of ovulation. The third experiment aimed to verify the influence of human chorionic gonadotrophin (hCG) on follicles measuring 30 or 35 mm, determining steroid hormone concentrations and intrafoJlicular factors. The follicular fluid collection was performed immediately before and 30 hours after hCG administration... (Complete abstract, click electronic access below)