Dissertations / Theses: 'Résistance aux substances – Dissertations universitaires'

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Delva, Laurent. "Rôle de la CRABPII dans la résistance secondaire de la leucémie aiguë promyélocytaire traitée par l'acide rétinoïque : Implication de la CRABPII dans son métabolisme et dans la transcription de gènes sensibles à son action." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05CD02.

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Abstract:

Ces dernières années, des progrès significatifs ont été effectués sur la structure, le métabolisme et le mécanisme d'action de la vitamine A et de ses dérivés métaboliques, tel que l'acide rétinoïque. Nous avons démontré d'induction d'une protéine spécifique de l'acide rétinoïque, la CRABPII (Cellular Retinoic Acid Binding Protein II), dans les cellules hématopoïétiques de patients atteint d'une leucémie aiguë promyélocytaire (LAM3) et traités par l'acide rétinoïque tout-trans (ATRA). La CRABPII fut tout d'abord caractérisée dans les cellules d'une ligue promyélocytaire (NB4). De plus, nous avons montré que les cellules leucémiques de patients en rechute après un traitement par l'ATRA fut observée. Nous avons pu suggérer que, chez les patients LAM3 en rechute yant des taux elevés de protéines impliquées dans la métabolisation de l'AR, l'impossibilité d'obtenir une concentration intranucléaire efficace d'AR puisse être un premier marqueur témoin de la résistance et de la rechute. Nous avons donc estimé nécessaire d'approfondir le rôle de la CRABPII dans le métabolisme de l'acide rétinoïque. Nous avons mis en evidence une fonction transactivatrice de la CRABPII dans les cellules hématopoïétiques myéloïdes sensibles à l'action de l'acide rétinoïque. C'est la première fois que la CRABPII est découverte impliquée dans un complexe protéïque nucléaire. La fonction transactivatrice de la CRABPII ne semble pas spécifique d'un système cellulaire particulier et est liée à la présence d'acide rétinoïque. Nous avons également montré une localisation nucléaire de la CRABPII de façon endogène dans des cellules myéloïdes et après transfection dans les cellules COS. En outre, nous avons établi un rôle éminent de la CRABPII dans la granulopoïèse normale. Cette observation permet d'associer la CRABPII avec la RARα dans l'engagement granulocytaire de la cellule souche hématopoïétique. Nos recherches nous ont permis de découvrir un rôle spécifique de marqueur de résistance pour la CRABPII dans le traitement de la LAM3 par l'ATRA. De plus, une nouvelle fonction de la CRABPII au sein du mécanisme d'action des rétinoïdes fut établie.

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Aouali, Nasséra. "Rôle du métabolisme du céramide et de la dynamique des compartiments acides dans la résistance multiple." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMP209.

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Abstract:

@Un des obstacles de la chimiothérapie est la résistance multiple, du en partie à la surexpression de protéines membranaires appartenant à la famille des ABC transporteurs (ATP Binding Cassette). Les protéines, P-glycoprotéine (Pgp), multidrug resistance associated protein (MRP1) et breast resistance cancer protein (BCRP) sont des pompes responsables de l'efflux des agents anticancéreux. D'autres caractéristiques ont été observées telles que l'augmentation du gradient de pH et une modification du métabolisme des sphingolipides. Nos résultats montrent que le tamoxifène, inhibe la synthèse du GlcCer et sensibilise les cellules résistantes surexprimant la Pgp aux agents anticancéreux. De plus, celui-ci inhibe l'acidification du trans-Golgi. Ces résultats mettent en avant la relation entre le maintien du gradient de pH et la synthèse du GlcCer dans les cellules résistantes. Des études récentes ont montré une localisation de la Pgp dans des microdomaines membranaires, appelés rafts. Ceux-ci sont constitués de glycosphingolipides sphingomyéline, et cholestérol. Nos résultats montrent aussi l'importance des sphingolipides sur la structure des microdomaines et par conséquent sur l'activité de transport de la protéine Pgp
@One form of resistance termed Multidrug Resistance has been most studied and seems to be mediated by overexpression of membrane proteins belonging to the ABC transporters family. These proteins are P-glycoprotein (Pgp), multidrug-resistance associated protein (MRP1) and breast cancer resistance protein. Other alterations have been observed like sphingolipid metabolism modification and increased pH gradient. Ours results have demonstrated that tamoxifen decreased the sphingolipid level in MDR cells overexpressing Pgp. Tamoxifen treatment sensitive to daunorubicine the resistance cells. Moreover, tamoxifen treatment decreased the pH gradient in resistance cells. This result shows the relationship with the rise pH gradient and the elevation of GlcCer in resistance cells. Recently, studies have been demonstrated the Pgp location in membrane microdomains, called raft. DIMs are rich in glycosphingolipids, cholesterol, sphingomyeline. Our data suggest that sphingolipid could play a role in the structure of DIMs and thus the conformation of Pgp

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Chauvier, David. "Camptothécine versus homocamptothécine : approche moleculaire et cellulaire. Induction de l'apoptose et modulation de la résistance multiple." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMP206.

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Abstract:

La spectrofluorimètrie a permis de suivre l'hydrolyse de l'homocamptothécine (hCPT), en absence et présence de topoisomérase I (top1) et/ou ADN. La stabilisation du complexe de clivage par hCPT impliquerait un système de complémentarité stérique de son cycle E avec un site du complexe ADN-top1, plutôt qu'une réaction d'ouverture du cycle E comme pour les camptothécines (CPTs). HCPT/CPT ont été détectées dans le cytoplasme des cellules MCF7 et HT29 par microspectrofluorimètrie confocale laser en excitation bi-photonique. L'induction de l'apoptose par hCPT dans les cellules HT29 implique la dissipation du Djm, acidification du cytosol, production d'espèces réactives de l'oxygène, libération du cytochrome C, activation de la caspase-3, régulation transcriptionelle, une production de novo de céramide. Enfin, hCPT/CPT sont des substrats de MRP1 mais pas de Pgp. Utilisées à des concentrations sub-toxiques en association avec la daunorubicine (DNR), hCPT/CPT potentialisent la cytotoxicité de la DNR en inhibant l'activité d'efflux de MRP1, restaurant l'accumulation nucléaire de DNR dans des lignées K562 et MCF7 résistantes aux anthracyclines
Homocamptothecin (hCPT), a topoisomerase I (top1) inhibitor, combines higher cytotoxicity and lactone stability in aqueous buffer than camptothecin (hCPT). Spectrofluorometry has allowed the real-time investigation of its hydrolysis kinetic in absence and presence of top1 and/or ADN. The stabilisation of the cleavable complex by hCPT implies steric contacts of the b-hydroxylactone ring with the DNA-top1 complex, rather than opening of the lactone ring, as observed for CPTs. HCPT/CPT have been detected in the cytoplasm of MCF7 and HT29 cancer cells by 2-photon laser confocal microspectrofluorometry,. The induction of apoptosis by hCPT is mediated in HT29 cells by DYm disruption, cytosolic acidification, reactive oxygen species, cytochrome C release, caspase-3 activation, gene expression, de novo synthesis of ceramide. HCPT/CPT have been identified to be substrates of MRP1 but not Pgp proteins. Sub-toxic doses of hCPT/CPT potentiated daunorubicin (DNR) cytotoxicity by inhibition of MRP1 activity, in correlation with increase of the nuclear accumulation of DNR in anthracyclins-resistant K562 and MCF7 cells

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Abedini, Amin. "Evaluation biologique et phytochimique des substances naturelles d’Hyptis atrorubens Poit. (Lamiaceae), sélectionnée par un criblage d'extraits de 42 plantes." Thesis, Lille 2, 2013. http://www.theses.fr/2013LIL2S025/document.

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Abstract:

La présente étude porte tout d’abord sur la mesure de l’activité antimicrobienne de 42 plantes médicinales qui sont utilisées traditionnellement en Iran et en Guadeloupe, contre 36 souches microbiennes résistantes à de multiples drogues afin de sélectionner la plante la plus intéressante. Les résultats obtenus révèlent la présence des principes actifs antimicrobiens dans chacune des plantes.Nous avons finalement sélectionné Hyptis atrorubens Poit. qui présente une forte activité antimicrobienne. De plus, cette plante n’a jamais été étudiée dans la littérature. Des analyses phytochimiques et biologiques sur l’extrait hydro-méthanolique des tiges, nous ont permis de trouver pour la première fois les quatre principaux composés actifs de cette plante : acide rosmarinique, rosmarinate de méthyle, quercétine-3-glucoside (isoquercétine) et quercétine-3-galactoside (hyperoside). L’activité antibactérienne de ces composés a été évaluée par différentes valeurs microbiologiques (CMI, CMB, synergie, dénombrement bactérien et courbes de croissance). La meilleure activité inhibitrice et bactéricide a été trouvée pour le rosmarinate de méthyle (0,3 mg/ml). Cette recherche suggère la forte potentialité d’activité antimicrobienne pour la combinaison de quatre composés avec une CMI de 70 µg/ml, qui s’approche de la CMI des antibiotiques.Ce travail présente les composés d’Hyptis atrorubens Poit. comme étant de nouveaux agents antimicrobiens et comme étant une source potentielle de lutte contre les bactéries, de plus en plus résistantes aux antibiotiques
This study focuses firstly on the extent of the antimicrobial activity of 42 medicinal plants that are traditionally used in Iran and Guadeloupe, against a panel of 36 pathogenic and multi-resistant bacteria and fungi. The results show presence of the antimicrobial agents in all plants.We finally selected Hyptis atrorubens Poit. which has a strong antimicrobial activity. In addition, this plant has never been studied in the literature. Phytochemical and biological analysis of the hydro-methanolic extract of stems, enabled us to find for the first time the four main active compounds of this plant: rosmarinic acid, methyl rosmarinate, quercetin-3-glucoside (isoquercetin) and quercetin-3-galactoside (hyperoside).The antibacterial activity of these compounds was evaluated by various microbiological values (MIC, MBC, synergy, kill-time and growth curves).The best inhibitory and bactericidal activity was found for methyl rosmarinate (0.3 mg/ml).This research suggests the high potential of antimicrobial activity for a combination of all four compounds (MIC = 70 µg/ml), which is very close to MICs of antibiotics.This work presents the main compounds of Hyptis atrorubens Poit. as new antimicrobial agents and as potentially useful tools against bacteria that are more and more resistant to antibiotics

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Doliwa, Christelle. "Caractérisation par protéomique et transcriptomique des mécanismes de résistance à la sulfadiazine chez Toxoplasma gondii." Thesis, Reims, 2012. http://www.theses.fr/2012REIMM203/document.

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Abstract:

Toxoplasma gondii est un parasite protozoaire intracellulaire obligatoire, responsable d'une infection cosmopolite très répandue, la toxoplasmose. Les différents schémas de traitement de la toxoplasmose reposent sur l'association de la pyriméthamine et d'un sulfamide qui agissent en synergie pour bloquer la voie de synthèse des folates. Cependant des échecs thérapeutiques ont été rapportés dans la littérature, et trois souches naturellement résistantes à la sulfadiazine, TgA 103001 (Type I), TgH 32006 (Type II) et TgH 32045 (Type II variant), ont été décrites. Notre travail a porté sur l'étude des mécanismes de résistance à la sulfadiazine chez T. gondii. Nous nous sommes intéressés dans un premier temps à l'implication des gènes cibles, dhps et dhfr, ainsi que les ABC transporteurs TgABC.B1, TgABC.B2, TgABC.C1 et TgABC.C2 dans la résistance à la sulfadiazine chez T. gondii. Cependant aucun polymorphisme ni surexpression de ces gènes n'a pu être relié aux mécanismes de résistance. Nous avons ensuite comparé les protéomes des souches naturellement résistantes aux protéomes des souches sensibles RH (Type I) et ME-49 (Type II) par DIGE. Parmi les 31 protéines différentiellement exprimées entre souches sensibles et résistantes, quatre protéines, ROP2, MIC2, ENO2 et IMC1, nous ont semblé intéressantes. Afin de s'affranchir des variations liées aux différences de fond génétique des souches, les souches sensibles RH et ME-49 ont été rendues résistantes in vitro à la sulfadiazine par pression médicamenteuse croissante, résistance validée in vitro grâce à la mise au point d'un nouveau test de chimiosensibilité. Nous avons ensuite, par 2-DE, comparé les protéomes des souches de type II sensible (ME-49), et résistantes (ME-49-RSDZ et TgH 32006) sans identifier le ou les candidat(s) impliqué(s) dans la résistance médicamenteuse. Cependant, l'analyse des souches ME-49 sensible et ME-49-RSDZ résistante, par microarrays, nous a permis d'identifier une cible appartenant à la voie de synthèse des folates : la folylpolyglutamate synthase
Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan parasite responsible of a widespread infection, toxoplasmosis. Treatment options for toxoplasmosis are generally limited to combinations of sulfonamide and pyrimethamine which have a synergistic action on T. gondii folate synthesis by inhibiting two major enzymes: dihydropteroate synthase (DHPS) and dihydrofolate reductase (DHFR). However treatment failures have been reported, and three naturally sulfadiazine resistant strains, TgA 103001 (Type I), TgH 32006 (Type II) and TgH 32045 (Type II variant), have been described. In this work, we studied resistance mechanisms to sulfadiazine on T. gondii. We are interested, in a first time, on the involvement of target genes, dhps and dhfr, and ABC transporters, TgABC.B1, TgABC.B2, TgABC.C1 and TgABC.C2, in the sulfadiazine resistance on T. gondii. However, neither polymorphisms nor overexpression of these genes has been linked to resistance mechanisms. Then, we compared proteomes of naturally resistant strains to sensitive strains RH (Type I) and ME-49 (Type II) by DIGE. Among the 31 proteins differentially expressed between sensitive and resistant strains, four proteins, ROP2, MIC2, ENO2 and IMC1, seemed to be interesting. In order to avoid variations due to differences from genetic background, sensitive strains RH and ME-49 have been made resistant in vitro by gradual increase in sulfadiazine concentration. This resistance was checked in vitro by the development of a new chemosensitivity assay. We compared then, by 2-DE, proteomes of the type II strains, sensitive (ME-49) and resistant (ME-49-RSDZ and TgH 32006), without identifying candidates implicated in sulfadiazine resistance mechanisms. However, analysis of the sensitive strain ME-49 and the resistant strain ME-49-RSDZ, by microarrays, allowed us to identify a candidate belonging to folate synthesis pathways: folylpolyglutamate synthase

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Gallien, Sébastien. "Mutations secondaires lors des traitements antirétroviraux des patients infectés par le VIH-1 du groupe M : significations cliniques de l'échappement viral." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077219.

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Abstract:

L'échappement virologique, défini par la persistance d'une virémie détectable sous traitement, est principalement lié à l'émergence de mutations de résistance sur les gènes cibles des antirétroviraux. L'identification de ces mutations requiert un niveau de virémie suffisant, aussi les données de résistance lors des faibles virémies (<1000 copies/ml) persistantes sont peu nombreuses alors que cette situation clinique concerne 5 à 10% des patients. Dans ce travail, nous avons étudié l'émergence des mutations de résistance du VIH-1 à partir de 3 cohortes de patients présentant des faibles virémies (< 500 à 1000 copies/ml) sous traitement antirétroviral, puis tenté d'identifier les facteurs cliniques et virologiques qui lui étaient associés. Chez des patients recevant une première ligne traitement de nouvelles mutations de résistance sont détectées dans 37% des cas, essentiellement dans le gène de la transcriptase inverse, alors que le niveau de virémie s'associe significativement à leur émergence. Des mutations de résistance aux inhibiteurs d'intégrase sont nouvellement détectées chez 7,7% de patients avec des souches virales multi-résistantes sous traitement contenant du raltegravir sans qu'aucun facteur associé à leur émergence n'ait été identifié. Enfin dans un groupe de patients hétérogènes en histoire thérapeutique et en population virale mutée de nouvelles mutations de résistance sont détectées chez 30% et ce pour les inhibiteurs de la transcriptase inverse, de la protéase et de l’intégrase, sans facteur associé à leur apparition. Ainsi, il existe une émergence significative de la résistance virale lors des faibles virémies sous traitement antirétroviral, dont le type et la fréquence varient en fonction des antirétroviraux reçus et des mutations virales préexistantes. Ces données soulignent l'intérêt potentiel du génotypage dans ce contexte, pour aider une optimisation thérapeutique précoce, dont l'utilité sera à évaluer dans le futur
Virologic failure, defined as a persistent detectable viremia under antiretroviral therapy, is mainly driven by the emergence of antiretroviral Drug Resistance-Associated Mutations (DRAM) in the target genes of antiretroviral drugs. Identifying these mutations usually requires viremia above 1000 copies/mL, explaining why resistance data in persistent HIV-1 low-level viremia (LLV) (< 1000 copies / ml) are scarce in spite of the fact that this clinical situation concerns 5 to 10 % of treated HIV-infected individuals. In this work, we studied DRAM in 3 cohorts of HIV-1 infected patients, who experienced LLV (< 500 to 1000 copies/ml) under antirétroviral therapy, and then attempted to identify clinical and virologic factors associated to their emergence. For patients receiving first-line antiretroviral therapy, new DRAM are detected during LLV in 37% subjects, all in the reverse transcriptase gene except in the protease gene in one participant, and detection of new DRAM is associated with higher HIV-1 RNA levels during LLV. Integrase inhibitors resistance-associated mutations are newly detected in 7,7 % of pretreated patients with multi-resistant virus strains who experienced LLV while receiving raltegravir-containing therapy, with no factors significantly associated with their emergence identified. Finally in a third cohort of patients, heterogeneous according to their antiretroviral history and their viral population, new DRAM are detected in 30 % of subjects for both reverse transcriptase, protease and integrase inhibitors, without any factor associated to their emergence. So, new DRAM can be detected during LLV under antiretroviral therapy, whereas their type and their frequency vary according to the current antiretroviral regimen and the previous archived viral mutations. These data underline the potential interest of drug résistance genotyping in this setting, in order to be able to provide an early therapeutic optimization, the utility of which should be assessed in the future

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Tréhoux, Solange. "Identification de nouveaux miARN régulateurs de la mucine MUC1, détermination de leurs rôles fonctionnels dans la cancérogenèse pancréatique et dans la chimiorésistance." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S003/document.

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Abstract:

La mucine MUC1 est une oncoprotéine transmembranaire dont la surexpression dans 90% des adénocarcinomes pancréatiques a été associée à un mauvais pronostic. MUC1 est impliquée dans la transduction des signaux intracellulaires et dans les interactions cellulaires permettant de conférer aux cellules tumorales des propriétés accrues en termes de prolifération et d’invasion cellulaire. De plus il a été montré un rôle important de MUC1 dans la chimiorésistance à la gemcitabine, et dans la transition épithélio-mésenchymateuse des cellules cancéreuses pancréatiques. De manière intéressante il a pu être montré que MUC1 pouvait être internalisée et localisée dans le compartiment nucléaire afin d’agir comme un co-activateur transcriptionnel permettant de moduler l’expression de nombreux gènes comme ceux de la voie Wnt/β-caténine, les cibles de Stat1/3 ou le cluster miR-200c/miR141. De plus, il a été démontré que MUC1 pouvait être régulé de façon épigénétique, par méthylation de son promoteur, par acétylation des histones et par les miARN.Notre objectif a été d’étudier l'inhibition de MUC1 par des miARN dérégulés dans le cancer pancréatique, afin de proposer une nouvelle stratégie thérapeutique innovante dans le but de ralentir la progression de ce cancer. Nous avons sélectionné des miARN pouvant cibler la mucine MUC1 aussi bien au niveau de son 3’UTR, de son 5’UTR ou de sa région codante par l'utilisation des bases de données miRanda, miRWalk et TargetScan. Afin d’affiner cette sélection, nous avons ensuite retenu seulement ceux étant dérégulés dans le cancer pancréatique en étudiant leur expression dans des lignées cellulaires cancéreuses pancréatiques humaines ainsi que dans un modèle murin transgénique de cancérogenèse pancréatique et dans les tissus de patients atteints d'adénocarcinome pancréatique.Nous avons dans un premier temps mis en évidence que parmi les miARN sélectionnés, la surexpression de miR-29a, miR-183, miR-200a, miR-330-5p, miR-876-3p et miR-939 entraînait une diminution de l'expression protéique de MUC1. En établissant le profil d'expression des miARN dans les trois modèles de cancer pancréatique dont nous disposions, nous avons pu mettre en évidence une dérégulation globale de miR-29a et miR-330-5p dans les lignées cellulaires cancéreuses pancréatiques humaines ainsi que chez les patients atteints d'adénocarcinome pancréatique, et une dérégulation plus spécifique pour les autres miARN. Nous avons alors pu mettre en évidence que parmi l'ensemble des miARN sélectionnés, seuls les miARN miR-29a et miR-330-5p avaient la capacité d’interagir avec l'ARNm de MUC1 au niveau de son 3’UTR. Nous avons donc entrepris dans un second temps d’étudier le rôle de miR-29a et miR-330-5p dans le cancer du pancréas. Pour cela, nous avons utilisé une stratégie transitoire de surexpression et d'inhibition des miARN et une stratégie stable en réalisant des lignées surexprimant les miARN ainsi qu’une lignée déficiente en MUC1. Nous avons pu mettre en évidence que la surexpression de miR-29a et miR-330-5p, permettait de ralentir la prolifération cellulaire, la migration, l'invasion cellulaire, la croissance tumorale et augmentait la chimiosensibilité des cellules cancéreuses pancréatiques à la gemcitabine. En conclusion, l'ensemble de ces données a permis de mettre en évidence un ensemble de miARN dérégulés dans le cancer du pancréas ayant la capacité de réguler négativement l'expression protéique de la mucine MUC1. Nous avons également montré que miR-29a et miR-330-5p étaient les seuls à réguler directement l'expression de MUC1 et qu’ils agissaient comme des suppresseurs de tumeurs en altérant les propriétés biologiques des cellules cancéreuses pancréatiques, in vitro et in vivo. Ces données nous permettent de proposer ces deux miARN comme une nouvelle piste thérapeutique potentielle pour le traitement de ce cancer
The mucin MUC1 is a transmembrane oncoprotein overexpressed in 90% of pancreatic adenocarcinoma and associated with a poor prognosis. MUC1 is involved in cell signaling and cell interaction to enhanced tumor cell properties like cell proliferation and invasion. Furthermore it has been shown an important role of MUC1 in chemoresistance to gemcitabine, the basic treatment of pancreatic cancer, and in the epithelial-mesenchymal transition of pancreatic cancer cells. Interestingly it has been shown that MUC1 could be internalized and localized in the nuclear compartment to act as a transcriptional coactivator to modulate the expression of many genes such as the Wnt/β-catenin, the targets of Stat1/3 or the miR-200c/miR141 cluster. Furthermore, it has been shown that MUC1 is regulated by epigenetics: by methylation of the promoter, histone acetylation and by miRNAs in breast and ovarian cancer.Our aim was to study the inhibition of MUC1 by miRNAs deregulated in pancreatic cancer, to propose a new innovative therapeutic strategy to slow down progression of this cancer.We selected miRNAs targeting the mucin MUC1, in its 3\\\'UTR, its 5\\\'UTR or its coding region by using databases such as Miranda, miRWalk and TargetScan. To refine this selection, we then selected only those being deregulated in pancreatic cancer by studying their expression in human pancreatic cancer cell lines, tissues from patients with pancreatic adenocarcinoma and transgenic mouse model of early pancreatic carcinogenesis.We initially demonstrated that among the selected miRNAs, overexpression of miR-29a, miR-183, miR-200a, miR-330-5p, miR-and miR-939 876-3p led to a decrease of MUC1 protein expression. By establishing the miRNA expression profile in the three models of pancreatic cancer that we had, we were able to demonstrate an overall deregulation of miR-29a and miR-330-5p in human pancreatic cancer cell lines and in patients with a pancreatic adenocarcinoma, and a more specifically deregulation for the other miRNAs.We were then able to show that among the selected miRNAs, only miRNAs miR-29a and miR-330-5p had the ability to interact with MUC1 mRNA on its 3\\\'UTR. We therefore undertook to study the role of miR-29a and miR-330-5p in pancreatic cancer. For this, we used a transient strategy to overexpress or inhibit miRNAs and stable cell lines overexpressing the miRNA as well as a deficient cell line for MUC1. We were able to show that overexpression of miR-29a and miR-330-5p slowed down cell proliferation, migration, cell invasion, tumor growth and increased chemosensitivity of pancreatic cancer cells to gemcitabine.In conclusion, all these data allowed us to identify a set of deregulated miRNAs in pancreatic cancer which have the ability to decrease the mucin MUC1 protein expression level. We also showed that miR-29a and miR-330-5p were the only ones that can regulate the expression of MUC1 directly and act as tumor suppressors by altering the biological properties of pancreatic cancer cells in vitro and in vivo. These data allow us to propose these two miRNAs as a new potential therapeutic approach for the treatment of this cancer

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Mekki, Meriem Sarah. "Conséquences de l'hypoxie sur la régulation de la signalisation HGF/SF-MET." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S047/document.

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Abstract:

Le récepteur à activité tyrosine kinase MET et son ligand le facteur de croissance des hepatocytes (Hepatocyte Growth Factor/Scattor Factor (HGF/SF)) sont essentiels pour la migration, la morphogenèse et la survie des cellules épithéliales. En plus de son implication et son importance physiologiques, la dérégulation de la signalisation de MET favorise la progression et l’invasion tumorales dans plusieurs types de cancers. Au sein des tumeurs, l’hypoxie est également un phénomène crucial qui induit une réponse adaptative menant à l’invasion, la métastase cancéreuses et la résistance aux traitements.Nous avons démontré que dans des conditions hypoxiques, la phosphorylation de MET induite par sa liaison au ligand, des mutations activatrices ou sa surexpression, est diminuée de manière importante in vitro et in vivo dans des modèles de tumeurs expérimentales chez la souris. Cette baisse de phosphorylation est très rapide et est réversible quand les cellules sont replacées en normoxie. Alors que la phosphorylation de GAB1, principal partenaire de MET, est également diminuée en hypoxie, l’activation des voies de signalisation en aval AKT et ERK n’est pas affectée et reste bien dépendante de l’activité du récepteur et du recrutement de GAB1. De la même façon, l’HGF/SF induit des réponses de motilité, de dispersion, de morphogenèse et de survie similaires en normoxie et en hypoxie. De manière intéressante, le traitement par deux inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK) ciblant MET (PHA-665752 et SU11274) est moins efficace en hypoxie pour inhiber les voies de signalisation AKT et ERK ainsi les réponses cellulaires induites par MET. Comme pour la phosphorylation de MET, la résistance à ces ITK est un phénomène réversible. Ainsi, alors que l’hypoxie n’affecte pas les voies de signalisation en aval ni les effets biologiques, elle diminue la sensibilité de MET aux ITK induisant donc une résistance immédiate. L’ensemble de ces données pourrait fournir de nouvelles perspectives dans l’utilisation des thérapies ciblant MET dans les tumeurs solides
The receptor tyrosine kinase MET and its ligand the Hepatocyte Growth Factor/Scattor Factor (HGF/SF) are essential for migration, morphogenesis and survival of epithelial cells. Beside its physiological involvement, deregulation of MET signaling has been shown to promote tumor progression and invasion in many cancers. Inside the tumors, hypoxia is also a crucial phenomenon promoting an adaptive response able to induce invasion, metastasis and resistance to treatment.We show that under hypoxia, MET phosphorylation induced by ligand-stimulation, activating mutation or overexpression, is drastically decreased both in cell culture and in experimental tumors. This decrease in MET phosphorylation occurs within minutes and is reversible when cells are returned to normoxia. While phosphorylation of the proximal signaling adaptor GAB1 is also decreased in hypoxia, activation of the downstream kinases ERK and AKT is not affected, but is still dependent on MET receptor activity. Consistently, several cellular responses induced by HGF/SF, including motility, morphogenesis or survival, are still efficiently induced. Interestingly, treatment with two tyrosine kinase inhibitors targeting MET (PHA-665752 and SU11274) are less efficient to inhibit the downstream kinases ERK and AKT and cellular responses induced by MET in hypoxia compared to normoxia. Similarly to MET phosphorylation, this resistance to TKI is a reversible phenomenon. Therefore, while hypoxia does not affect downstream signaling and cellular responses, it decreases MET sensitivity to TKIs targeting the receptor thus providing an immediate resistance. This may provide new insights in the use of MET targeted therapies in solid tumors

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Wackenaer-Descleves, Estelle. "Les β-lactamases chromosomiques des Raoultella spp : support pour la résistance aux antibiotiques et outils de diagnostic étiologique." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T037.

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Abstract:

Les espèces de Raoultella (anciennement Klebsiella). R. Planticola (Rp), R. Ornithinolytica (Ro) et R. Terrigena (Rt) sont difficilement différentiables phénotypiquement des espèces de Klebsiella en routine. Après avoir (i) clone les p-Iactamases des Raoultella (PLA, ORN et TER), (ii) déterminé le niveau d'identité entre elles (94% entre PLA et ORN et 78 % avec TER) et avec les autres p-lactamases de la classe A (70% avec TEM-1, 68% avec SHV-1 et 38% avec KOXY) et (iii) démontré des différences notables entre les activités enzymatiques de PLA et de TER tant entre elles qu'avec TEM-1, la place du gène bla pour l'identification de Rp et Ro a été évaluée sur une large collection d'isolats en comparaison aux gènes rpoB et ADNr 16S. Cette approche diagnostique a permis de découvrir que 70% des isolats Ro sont négatifs pour le test sur lequel a été fondé l'espèce Ro à savoir l'ornithine décarboxylase et que le gène bla via son analyse par RFLP permet de distinguer Ro de Rp sans ambiguïté
The three species of Raouliellu (formerly Klebsiella). R. Planticola (Rp), R. Ornithinolytica (Ro) and R. Terrigena (Rt) cannot be distinguished from the species of Klebsiella spp. By the tests used in the routine by microbiological laboratories. After having (i) cloned the p-lactamases of the 3 Raoultella species (PLA, ORN and TER), (ii) evaluated the percentage of identity between each other (94% between PLA and ORN, and 78% with TER) and with other class A P-lactamases (70% with TEM-1, 68% with SHV-1 and 38% with KOXY), and (iii) studied the p-lactamase activity of PLA and TER, the reliability of the bla gene for Rp and Ro identification was determined in comparison with that of the 16S rDNA and rpoB genes in 35 Raoultella spp. Isolates. This study allowed us to discover that 70% of the isolates identified as Ro were negative for the ornithine decarboxylase test, meaning negative for the biochemical character on which Ro definition was based, and to develop a new test, bla RFLP. To unambiguously identify Ro and Rp

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Papadopoulou, Barbara. "Dissémination des gènes de résistance aux antibiotiques chez les entérobactéries et Campylobacter." Paris 11, 1988. http://www.theses.fr/1988PA114815.

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Lavollay, Marie. "Rôle de la L,D-transpeptidation dans biosynthèse du peptidoglycane et la résistance aux bêta-lactamines chez les Actinomycetales." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T022.

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Abstract:

Les PLP qui assurent la polymérisation finale du peptidoglycane sont les cibles des β-lactamines. Un nouveau mécanisme de résistance à ces antibiotiques par activation d'une autre voie de synthèse (L,D-transpeptidation) a été récemment caractérisé. L'existence et l'impact de la voie de L,D-transpeptidation ont éte�� étudiés chez C. Jeikeium et M. Tuberculosis. Leur L,D-transpeptidases utilisent un substrat tétrapeptidique et sont inhibées par les carbapénèmes. Chez C. Jeikeium la voie des PLP est prédominante. La disponibilité du substrat tétrapeptidique généré par la Pbp4 est le facteur limitant la L,D-transpeptidation. La Pbp2C a été identifiée comme responsable de la résistance aux β-lactamines. Chez M. Tuberculosis, le peptidoglycane des formes non réplicatives comporte très majoritairement des ponts générés par L,D-transpeptidation suggérant que les L,D-transpeptidases et les carbapénèmes représentent une cible et une famille d'antibiotiques pour le traitement de la tuberculose
The PBP that catalyze the last cross-linking step of peptidoglycan synthesis are the targets of β-lactams. A novel mechanism of β-lactam resistance due to activation of another pathway (L,D-transpeptidation) has been recently characterized. The aim of the study was to investigate the impact of the L,D-transpeptidation pathway in C. Jeikeium and M. Tuberculosis. Their L,D-transpeptidases use substrates containing a tetrapeptide stem and are inhibited by carbapenems. In C. Jeikeium, the PBP pathway is predominant. The supply in tetrapeptide substrate generated by Pbp4 is the limiting factor for L,D-transpeptidation pathway. Pbp2C was identified as the cross-linking enzyme responsible for β-lactam resistance in C. Jeikeium. In M. Tuberculosis, the peptidoglycan of non-replicating cells predominantly contains crosslinks generated by L,D-transpeptidation. L,D-transpeptidases and carbapenems may represent a target and a drug family relevant to the eradication of persistent M. Tuberculosis

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Lescat, Mathilde. "Structure des populations naturelles de Escherichia coli : relation avec la virulence et la résistance aux antibiotiques." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T052.

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Abstract:

L'objectif de ce travail est de préciser à différentes échelles les liens qui existent entre phylogénie, virulence et résistance aux antibiotiques dans l'espèce Escherichia coll. Dans un premier temps, l'étude à porté sur l'estérase B la caractérisant comme un excellent marqueur de phylogénie. L'étude de l'évolution de souches par le séquençage de génomes entiers a ensuite été rélaisé par génomique comparative. Nous avons à cette occasion identifié un module chromosomique de résistance chez une souche responsable d'infections urinaires et multirésistante. La troisième partie du travail a concerné des populations d'isolats naturels provenant d'humains, de leurs animaux domestiques et d'animaux sauvages, caractérisées comme très distinctes. Ces 3 niveaux d'étude de l'évolution de souches nous ont permis de préciser les facteurs qui régissent leur adaptation à différents environnements, les rapports entre leur génome, leurs habitats écologiques et les pressions de sélection subies
The aim of this work was to precise relations between phylogney, virulence and resistance to antibiotics in the species Escherichia coli. At first, we characterized the esterase B, as a perfomant marker of phylogeny. The study of the evolution of strains was then realised using whole genome sequencing. This allowed also us to identify a chromosomic module of resistance in a virulent and multiresistant strain. At least, we characterized 3 distinct populations of strains issued from humans, their domesticated animals and wild animals These 3 levels of study of the evolution of strains allowed to go further into the determination of the factors involved in the adapation of the strains of E. Coli to their environments in one side, and their relations between their genome, their habitats and their selective pressure, in the other side

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Dridi, Larbi. "Rôle de l'efflux dans la résistance de Clostridium difficile aux fluoroquinolones et aux composés toxiques." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114822.

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Abstract:

Clostridium difficile est un bacille à Gram positif anaérobie strict, sporulé et producteur des toxines A et B. Il représente la principale étiologie des diarrhées nosocomiales de l'adulte. Le taux de résistance acquise aux quinolones en France était de 7 % entre 1991 et 1997. Cette résistance était toujours associée à la présence d'une mutation dans les gènes de l'ADN gyrase. C. Difficile ne possède qu'une seule cible des quinolones, l'ADN gyrase, et est dénué d'ADN topoisomérase IV. Nous avons cloné une protéine d'efflux appelée CdeA appartenant au cluster 3 de la famille MATE. Elle est capable de conférer une résistance aux fluoroquinolones lorsqu'elle est surexprimée chez E. Coli. L'exposition au bromure d'éthidium augmente la transcription du gène cdeA. Nous avons réussi à introduire par conjugaison un nouveau plasmide réplicatif exprimant un ARN antisens chez C. Difficile. Cependant, le rôle de CdeA dans la résistance aux fluoroquinolones et aux toxiques n'a pu être démontré
C. Difficile represents the main cause of nosocomial diarrhea in adults. The prevalence of acquired resistance to quinolones in France was 7% and identical for the years 1991 and 1997. All isolates with decreased susceptibility carried a mutation in the DNA gyrase gyrA or gyrB genes. We found that C. Difficile lacks the genes coding for DNA topoisomerase IV. CdeA is the first multidrug efflux transporter identified in C. Difficile. CdeA belongs to the cluster 3 of the MATE family. It was responsible for quinolone resistance in E. Coli when overexpressed. The presence of subinhibitory concentration of ethidium bromide significantly increased the transcription of cdeA. We have successfully introduced by conjugation between E. Coli and C. Difficile a new replicative vector which was used to introduce antisens RNA for cdeA. However, there was no significant difference in the susceptibility to quinolones or toxics between the recombinant and the parental strain

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Dewaeles, Edmonde. "Identification et caractérisation de nouveaux déterminants moléculaires à l’origine de la résistance des tumeurs pulmonaires au cisplatine et de ses effets néphrotoxiques." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S025.

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Abstract:

Le cancer du poumon est l’une des principales causes de décès par cancer dans le monde. Le cancer du poumon non à petites cellules est la forme la plus fréquente puisqu’elle représente 80% des cancers pulmonaires. Le traitement de référence pour cette pathologie est la chimiothérapie à base de dérivés du platine, en particulier le cisplatine. Malheureusement, l’utilisation de cette molécule peut être limitée par l’apparition de deux inconvénients majeurs : une chimiorésistance et des effets secondaires notamment néphrotoxiques.Dans ce travail de thèse, nous avons cherché à identifier et caractériser de nouveaux déterminants moléculaires impliqués dans la chimiorésistance et/ou la toxicité rénale du cisplatine. Dans un premier temps, à l’aide d’un criblage fonctionnel dans la lignée cellulaire d’adénocarcinome pulmonaire humaine A549, nous avons identifié un miARN dont la surexpression diminue la sensibilité des cellules au cisplatine. Puis, nous avons étudié le mécanisme moléculaire à l’origine de ce phénomène de chimiorésistance et démontré son implication dans la régulation de voies de signalisation associées au processus apoptotique et au métabolisme de la vitamine B 6. Dans un second temps, nous avons évalué le rôle du récepteur à l’adénosine A2A dans la toxicité rénale induite par le cisplatine. Nos résultats montrent en particulier que l’expression rénale de ce récepteur est augmentée dans un modèle murin de néphrotoxicité induite par le cisplatine et que sa modulation pharmacologique, à l’aide d’antagonistes sélectifs, diminue ses effets néphrotoxiques. De plus, dans un modèle de greffes syngéniques, nous avons montré que l’utilisation d’un antagoniste sélectif du récepteur à l’adénosine A2A n’atténuait pas les propriétés anti-tumorales du cisplatine.Au total, ce travail nous a permis d’identifier de nouvelles stratégies thérapeutiques qui pourraient augmenter la sensibilité des adénocarcinomes pulmonaires au cisplatine et limiter ses effets néphrotoxiques
Lung cancer is one of the leading causes of cancer death worldwide. Non-small cell lung cancer (NSCLC) is the most common form of cancer, accounting for 80% of lung cancer. Cisplatin combination therapy represents the cornerstone of NSCLC treatment. Unfortunately, its clinical use is limited by two major issues: chemoresistance and the occurrence of serious adverse side effects, such as renal toxicity. In this thesis work, we have sought to identify and characterize new molecular determinants involved in the chemoresistance and/or renal toxicity of cisplatin. First, using a functional screening in the human lung adenocarcinoma cell line A549, we identified a miRNA whose overexpression decreases cell sensitivity to cisplatin. Then, we studied the molecular mechanisms underlying chemoresistance and demonstrated involvement of this miRNA in the regulation of signaling pathways associated with the apoptotic process and the metabolism of vitamin B 6. Secondly, we evaluated the role of the adenosine A2A receptor in cisplatin-induced renal toxicity. Our results showed that renal expression of this receptor is increased in a mouse model of cisplatin-induced nephrotoxicity and that pharmacological modulation of A2AR, using selective antagonists, reduced cisplatin nephrotoxic effects. Lastly, using syngenic graft model, we showed that the administration of the selective A2AR antagonist did not compromise the anti-tumor properties of cisplatin; Overall, this work uncovered new therapeutic strategies that could either increase the sensitivity of lung adenocarcinoma to cisplatin or limit its nephrotoxic effects

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Philippart, François. "Résistance des macrophages alvéolaires à la tolérance aux agonistes des Toll-like receptors : implication et origine du microenvironnement cytokinique." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T041.

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Abstract:

La tolérance aux endotoxines et plus généralement aux agonistes des Toll-like receptors (TLR), des monocytes et macrophages est un phénomène correspondant à une modification de la réponse fonctionnelle (en particulier une altération de la production de cytokines proinflammatoires) au cours de stimulation itératives par ces agonistes, notamment le lipopolysaccharide (LPS). La tolérance est observée avec les monocytes ainsi que les macrophages de nombreux tissus (cavité péritonéale, rate, moelle osseuse), mais elle n’est pas retrouvée avec les macrophages alvéolaires (MA). Notre étude s’est intéressée aux particularités cellulaires et cytokiniques du microenvironnement pulmonaire pouvant participer à cette singularité fonctionnelle des MA. Nous avons confirmé l’absence de tolérance des MA tant ex vivo qu’in vitro. Alors qu’une homotolérance et une tolérance croisée est retrouvée in vitro avec les macrophages péritonéaux en réponse aux agonistes TLR2 (Pam3CSK4), TLR3 (poly I:C), TLR4 (LPS) et TLR9 (CpG), aucune tolérance n’est observée avec les MA. Au contraire, un phénomène de « priming » a été mis en évidence dans la majorité des situations de stimulation croisée à l’exception des stimulations par le LPS et CpG. L’inhibition systémique in vivo du granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) produit en grande quantité par les pneumocytes II (PCII), est responsable d’une modification de la seconde réponse des MA au LPS. De même la réponse des MA issus de souris déficientes pour le récepteur de l’interféron- (IFN-) ou l’inhibition de cette cytokine in vivo aboutit à des résultats semblables. L’étude de la réponse des MA issus de lignées de souris déficientes en différentes lignées leucocytaires (rag2-/-, rag2/c -/-, cd3 -/-, -/-, il-15 -/-, Jα18 -/-) nous permet de démontrer l’implication des cellules NK (NK) et des lymphocytes B (LB) dans la production de l’IFN- au niveau du microenvironnement pulmonaire. En conclusion, les MA sont résistants à la tolérance aux agonistes TLR. Cette singularité fonctionnelle est sous-tendue par la présence de GM-CSF (produit par les PCII) et d’IFN- (dont la production est sous la dépendance des NK et des LB) dans le microenvironnement alvéolaire
Monocytes and macrophages endotoxin tolerance, and more widely Toll-like receptors (TLR) agonists tolerance is a phenomenon corresponding to a modification of functional response of these cells (particularly an alteration of proinflammatory cytokines) during iterative stimulation by theses agonists, notably the lipopolysaccharide (LPS). Tolerance is observed with monocytes and macrophages from many tissue (peritoneal cavity, spleen, bone marrow), but is not detected with alveolar macrophages (AM). We investigated the cytokine and cell specificities of lung microenvironment possibly involved in that singular behavior of AM. We confirmed the absence of tolerization of AM either ex vivo, or in vitro. While an homotolérance and a cross-tolerance was observed in vitro with peritoneal macrophages in response to TLR2 (Pam3CSK4), TLR3 (poly I:C), TLR4 (LPS) and TLR9 (CpG) ligand, no such tolerance was observed with AM. In contrast, the majority of cross stimulations gave rise to a priming effect. In vivo systemic inhibition of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) (produce in large amounts by type II pneumocytes, IIPC) led to a modification of the second response of AM to LPS. Similarly, AM obtained from interferon-gamma (IFN-gamma) receptor KO mice, or after in vivo inhibition of this cytokine, allowed the observation of tolerance. The responses of AM isolated from different KO mice (rag2-/-, rag2/gammac -/-, cd3epsilon -/-, mu-/-, il-15 -/-, Jα18 -/-) lacking various leukocytes lineages led us to demonstrate the involvement of NK cells and B cells in the IFN-gamma production within the lung microenvironment. In summary, AM are resistant to tolerance to TLR agonists. This functional singularity is underlined by the presence of GM-CSF (produced by IIPC) and of IFN-gamma of which production is depending of NK and B cells) within lung microenvironment

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Weill, François-Xavier. "La résistance aux antibiotiques chez les Salmonella non-Typhi : prévalence, mécanismes et épidémiologie moléculaire." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T005.

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Abstract:

Nous avons mis en évidence que le clone DT104 possédant l'ilôt chromosomique « Salmonella genomic island 1 » (SGI1) était la principale cause de la multirésistance depuis 1997 chez Salmonella enterica sérotype Typhimurium. Deux types de populations multirésistantes aux antibiotiques ont émergé à partir 2001 dans le sérotype Paratyphi B. La première, majoritaire, était constituée de souches possédant le SGI1 et dont la transmission à l'homme était probablement liée à des contacts avec des poissons exotiques; l'autre population était similaire à un clone précédemment décrit chez la volaille en Europe. La prévalence de la résistance aux céphalosporines de 3eme génération était faible (<1%) dans l'ensemble de la population de Salmonella, mais certains sérotypes comme Virchow et Newport étaient plus affectés. Différentes p-lactamases (SHV-12, TEM-52, CTX-M-2, CTX-M-9) transférées par des plasmides de différents groupes d'incompatibilité (HI2, I1) ont été identifiées chez ces souches
The DT104 clone harboring Salmonella genomic island 1 (SGI1), or variants of it ,was identified as the main cause of multidrug resistance (MDR) after 1997 in Salmonella enterica serotype Typhimurium. Two MDR populations emerged in serotype Paratyphi B after 2001. The most prevalent one contained strains harboring SOIL It caused human infections probably through contacts with exotic fish. The second population was similar to one described in poultry in Europe. The prevalence of resistance to third generation cephalosporins (3GC) was low (<1%) in Salmonella in France. However, several serotypes such as Virchow or Newport, were more resistant. Different (3-lactamases (SHV-12, TEM-52, CTX-M-2, CTX-M-9) encoded by plasmids belonging to various incompatibility groups (HI2, I1) were identified. Salmonella strains resistant to ciprofloxacin were very rare in France (prevalence <1%). However, several strains belonging to serotype Kentucky were identified in travelers returning from Africa

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Haggoud, Abdellatif. "Aspects épidémiologique génétique et moléculaire de la résistance aux 5-nitroimidazoles chez les bactéroi͏̈des du groupe Fragilis." Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA114841.

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Gonzales, Fanny. "Etude fonctionnelle des marqueurs pronostiques CD81 et ABCB1 dans les leucémies aiguës myéloïdes." Thesis, Lille 2, 2020. http://www.theses.fr/2020LIL2S001.

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Abstract:

La leucémie aiguë myéloïde (LAM) est une hémopathie hétérogène. La stratification thérapeutique repose sur les anomalies cytogénétiques et moléculaires. Les rechutes, probablement liées aux cellules souches leucémiques (CSL) sont dans la majorité des cas difficiles à prédire. Mon travail de thèse a consisté en l’étude de deux marqueurs de mauvais pronostic, liés aux CSL :1/ ABCB1, membre de la famille des transporteurs ATP Binding Cassette, connu pour son implication dans la chimiorésistance et2/ CD81, une tétraspanine, pour laquelle nous avons démontré l’impact pronostique dans les LAM. Méthodes1/ ABCB1 : nous avons évalué la relation entre l’activité d’ABCB1 et les caractéristiques cliniques, ainsi que la réponse aux chimiothérapies dans une cohorte de 321 patients atteints de LAM. Nous avons exploré l’association entre l’activité d’ABCB1 et la chimiorésistance ex vivo, l’expression génique et évalué l’effet d’un inhibiteur d’ABCB1.2/ CD81 : l’élaboration de lignées cellulaires ayant une expression différentielle de CD81, soit par surexpression de l’ADNc ; soit par sous-expression via des shARN nous a permis d’étudier la chimiorésistance, la prolifération, l’adhésion, la migration et l’invasion cellulaires. Par microscopie confocale, nous avons étudié la morphologie cellulaire.Des souris NSG ont été injectées avec ces modèles pour étudier la prise de greffe, le homing et l’invasion tumorale.D’autre part, nous avons xénogreffé des cellules de patients (PDX) pour étudier l’association entre l’expression de CD81 sur les blastes et la prise de greffe.Résultats1/ L’activité d’ABCB1, observée dans 58% des LAM était associée à une moindre leucocytose, une plus forte expression de CD34, une absence de mutations FLT3-ITD ou NPM1 et à une moindre survie globale et sans événement. Néanmoins, l’activité ABCB1 n’aboutissait pas directement à une chimiorésistance aux anthracyclines ex vivo. La corrélation entre l’expression d’ABCB1 et celle des gènes de BAALC, CD34, CD200 et CD7, suggère que l’expression d’ABCB1 pourrait être un indicateur indirect des LAM de haut risque. De plus, l’expression d’ABCB1 était inversement corrélée à celle des gènes de cluster HOX et à CD33.2/ Dans les PDX, la prise de greffe était associée à une plus forte expression de CD81 et le temps de prise de greffe était corrélé négativement au niveau d’expression de CD81.Les PDX avec les lignées modifiées avaient une invasion tumorale augmentée lorsque CD81 était surexprimé.Aussi, une forte expression de CD81 induisait in vitro une plus forte 1) adhésion à la fibronectine et aux fibroblastes, 2) migration et 3) invasion tumorale dans une matrice de gel semi-liquide.En microscopie confocale, les cellules exprimant plus le CD81 avaient plus de lamellipodes, impliqués dans la migration cellulaire. La chimiorésistance à la daunorubicine était corrélée positivement à l’expression de CD81.Conclusions1/ Nous avons démontré l’impact pronostique de l’expression génique, protéique et de l’activité d’ABCB1. De plus, ABCB1 ne serait pas directement impliqué dans la chimiorésistance, son inhibition n’améliorant pas la survie des patients mais plutôt un reflet indirect des formes de LAM de haut risque. Enfin, les patients avec faible expression d’ABCB1 pourraient bénéficier d’un traitement anti-CD33 par gemtuzumab ozogamicin associé à la chimiothérapie conventionnelle.2/ Une forte expression de CD81 est associée à un moins bon pronostic chez les patients atteints de LAM et dans notre modèle PDX. L’expression de CD81 sur les blastes au diagnostic est associée à une prise de greffe chez les souris NSG, suggérant qu’il pourrait être un marqueur souche. A présent, nous testons un anticorps anti-CD81 comme traitement dans un modèle murin. Une forte expression de CD81 augmente les capacités d’adhésion, de migration et d’invasion, médiées par la formation de lamellipodes et nous nous intéressons à l’implication des voies de signalisation Rac-RhoGTPase
Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous disease. Currently, therapeutic stratification relies on cytogenetics and molecular markers. In the majority of cases, relapses, probably due to leukemic stem cells (LSC), are challenging to predict.My thesis encompasses the clinical and functional study of two poor prognostic factors related to LSC:1/ ABCB1, a member of the ATP binding cassette transporter family, known for its implication in drug resistance, although the mechanism remains unclear and2/ CD81, a protein belonging to the tetraspanin family, for which we were the first to uncover its prognostic role in adult AML and for which the underlying mechanisms are presently unknown.Methods1/ For ABCB1, we evaluated its activity in relation to clinical parameters and treatment response to standard chemotherapy in 321 patients with AML. We assessed multiple clinical relationships of ABCB1 activity—ex vivo drug resistance, gene expression, and evaluated an ABCB1 inhibitor.2/ For CD81, we established AML cell lines with varying degrees of CD81 expression, either by cDNA over-expression or by shRNA mediated knock-down. On these models, we tested chemotherapy resistance, cellular proliferation, adhesion, migration and invasion. We performed confocal microscopy to study morphologic cell features.We injected NSG mice with different modified AML cells to study engraftment, homing and tumor invasion. We performed patient-derived-xenografts (PDX) to study the association between blasts CD81 expression and AML engraftment.Results1/ ABCB1 activity was observed in 58% of AML and was linked to low white blood cell count, high expression of CD34, absence of FLT3-ITD and absence of mutant NPM1. Moreover, ABCB1 activity was associated with worse overall- and event-free survival. However, ABCB1 activity did not directly lead to ex vivo drug resistance to anthracyclines. We found that ABCB1 expression was highly correlated with gene expressions of BAALC, CD34, CD200, and CD7, indicating that ABCB1 expression may be a passenger characteristic of high-risk AML. Furthermore, ABCB1 expression was inversely correlated to HOX cluster genes and CD33.2/ In PDX, engraftment rate was associated with higher CD81 expression and time-to engraftment was inversely correlated to the level of CD81 expression. The PDX with modified cell lines revealed increased tumor invasion in association with higher CD81 expression.Furthermore, we showed that high CD81 expression induced in vitro 1) adhesion to fibronectin and fibroblasts cells, 2) migration towards fibroblasts and 3) tumor invasion into a semisolid gel matrix. Using confocal microscopy, we observed that high CD81 cells form lamellipods implicated in cellular motility. We also established an association between CD81 expression and chemotherapy resistance, notably to daunorubicin.Conclusions1/ We showed prognostic importance of ABCB1 gene expression, protein expression, and activity. Furthermore, ABCB1 was not directly linked to drug resistance, as ABCB1 inhibition did not improve outcome of high ABCB1 AML patients. High ABCB1 may represent a passenger characteristic of high-risk AML. Finally, low ABCB1 AML patients could benefit specifically from anti-CD33 treatment by gemtuzumab ozogamicin in addition to standard chemotherapy.2/ High CD81 expression is linked to dismal prognosis in AML patients and in our PDX model. CD81 expression on blasts at diagnosis promotes engraftment in NSG mice; which may thus be a marker of stemness. Currently, we are testing CD81 antibody as a potential treatment using a murine xenograft model. Higher CD81 leads to enhanced capacity of adhesion, migration and invasion mediated by the formation of lamellipods and we are now investigating the implication of the Rac-RhoGTPases signaling pathways as an underlying mechanism

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Fardeau, Sylvain. "Synthèse et étude de nouveaux antibactériens vectorisés par des complexants du fer, analogues de sidérophores." Amiens, 2011. http://www.theses.fr/2011AMIED011.

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Abstract:

A l'heure actuelle, les systèmes de santé moderne doivent faire face au problème des maladies nosocomiales dues à une résistance accrue des bactéries aux antibiotiques actuels. Il y a donc un besoin crucial de disposer de nouveaux antibiotiques. La bactérie a développé de nombreuses stratégies pour diminuer sa sensibilité aux antibiotiques telles que la diminution de la concentration cytoplasmique du médicament, de rendre moins perméable sa membrane ou d'excréter l'antibiotique par un système d'efflux renforcé. Pour combattre ces résistances, une piste intéressante est d'exploiter les besoins vitaux en fer des bactéries. En effet, le fer, peu présent sous forme libre dans les milieux biologiques, est puisé par les espèces microbiennes via des molécules chélatrices appelées sidérophores. Le complexe ainsi formé est alors reconnu spécifiquement par les récepteurs bactériens puis transporté à l'intérieur de la bactérie. En greffant un motif chélateur du fer reconnu comme un sidérophore à un antibiotique, nous pourrons ainsi vectoriser l'antibiotique via ce système d'absorption spécifique ( stratégie "Cheval de Troie"). Ce qui devrait permette de rétablir une sensibilité de la bactérie à l'antibiothérapie.

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Bentorcha, Faïrouze. "Identification de gènes de résistance et d'éléments génétiques mobiles chez les entérocoques." Université de Paris-Sud. Faculté de pharmacie (Châtenay-Malabry, Hauts-de-Seine), 1993. http://www.theses.fr/1993PA114802.

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Yatouji, Sonia. "Structure de la chromatine et régulation transcriptionnelle du géne mdr 1 dans des cellules tumorales humaines à la chimiothérapie." Reims, 2000. http://www.theses.fr/2000REIMP203.

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Loncle, Véronique. "Analyse de la résistance aux composants A et B des virginiamycines chez les staphylocoques." Paris 11, 1992. http://www.theses.fr/1992PA114830.

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Guillon, Jordan. "Caractérisation moléculaire de mécanismes d’échappement à la sénescence : définition d'une hétérogénéité de la sénescence Regulation of senescence escape by TSP1 and CD47 following chemotherapy treatment Regulation of senescence escape by the cdk4–EZH2–AP2M1 pathway in response to chemotherapy tRNA biogenesis and specific aminoacyl-tRNA synthetases regulate senescence stability under the control of mTOR. Proteomics approaches to define senescence heterogeneity and chemotherapy response Chemotherapy-induced senescence, an adaptive mechanism driving resistance and tumor heterogeneity." Thesis, Angers, 2020. http://www.theses.fr/2020ANGE0005.

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Abstract:

La sénescence est induite suite à l’érosion télomérique, l’activation d’oncogènes ou en réponse à la chimiothérapie. Ce mécanisme de suppression tumorale empêche la prolifération de cellules anormales et la transformation. Cependant, certains travaux ont montré qu’en réponse à la chimiothérapie la sénescence constitue davantage un mécanisme d’adaptation permettant aux cellules tumorales d'échapper. Ainsi, nous avons caractérisé de nouveaux mécanismes d’échappement permettant de définir une hétérogénéité de sénescence. Lors de nos études, nous avons observé que la stabilité de ce mécanisme suppressif est régulée épigénétiquement par EZH2. Cette méthylase module l’expression d’AP2M1, une protéine d’endocytose nécessaire à l’échappement. La pérennité de la sénescence est également modulée par les facteurs sécrétés du SASP tels que la TSP1. Cette glycoprotéine limite, par interaction avec son récepteur CD47, l’émergence de cellules persistantes. La réduction de l’expression de ce récepteur favorise alors l'échappement à la sénescence. Enfin, la biosynthèse des ARNt module également la stabilité de ce mécanisme suppressif. Lors de l’émergence de cellules persistantes, mTOR favorise l’expression d’ARNt spécifiques et la résolution du stress protéique. L’expression des ARNt-ligases correspondantes est alors nécessaire à l’échappement. Ainsi, la sénescence est plus hétérogène que ce qui était initialement décrit. Sa stabilité est perturbée par l’expression de régulateurs épigénétiques, de protéines de l’endocytose, de récepteurs spécifiques et par la dérégulation de la biosynthèse d’ARNt
Senescence is induced as a result of telomeric shortening, activation of oncogenes or in response to chemotherapy. This tumour suppression mechanism prevents the proliferation of abnormal cells and transformation. However, some studies have shown that in response to chemotherapy, senescence is more of an adaptation mechanism allowing tumour cells to escape. Thus, we have characterized new escape mechanisms allowing to define senescence heterogeneity. During our studies, we observed that the stability of this suppressive mechanism is epigenetically regulated by EZH2. This methylase modulates the expression of AP2M1, an endocytosis protein required for escape. The stability of senescence is also modulated by secreted SASP factors such as TSP1. By interaction with its receptor CD47, this glycoprotein limits the emergence of persistent cells. The reduction in the expression of this receptor then favours the escape of senescence. Finally, tRNA biosynthesis also modulates the stability of this suppressive mechanism. During the emergence of persistent cells, mTOR promotes the expression of specific tRNAs and the resolution of protein stress. The expression of the corresponding tRNA ligases is then required for escape. Thus, senescence is more heterogeneous than initially described. Its stability is disturbed by the expression of epigenetic regulators, endocytosis proteins, specific receptors and by the deregulation of tRNA biosynthesis

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Gourdier, Isabelle. "Exploration de la résistance à l'oxaliplatine dans les cancers colorectaux : implication de la voie apoptotique mitochondriale." Montpellier 1, 2002. http://www.theses.fr/2002MON13520.

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Abstract:

La résistance tumorale à la chimiothérapie constitue un obstacle majeur au traitement des cancers colorectaux. Celle thèse a pour objectif l'identification de mécanismes cellulaires-clés conduisant à la résistance à l'oxaliplatine des cancers colorectaux. Pour cela, nous avons développé des modèles cellulaires de résistance, par exposition de plusieurs lignées cellulaires humaines de cancer colorectal, à des concentrations croissantes d'oxaliplatine. Ces travaux ont permis de mettre en évidence une association entre résistance à l'oxaliplatine et résistance à l'apoptose de type mitochondrial, d’abord dans le modèle HCT116 puis dans le modèle SW620. L’état de résistance à l’oxaliplatine a ainsi pu être associé à des altérations fonctionnelles de la voie apoptotique mitochondriale (résistance croisée à des inducteurs apoptotiques agissant directement au niveau de la mitochondrie). Dans certain nombre de cas, les altérations de l'apoptose ont pu être associées à une dérégulation de la protéine pro-apoptotique Bax au niveau génétique (mutation de Bax), transcriptionnel (sous-expression des transcrits de Bax) et/ou protéique (sous expression ou perte totale d'expression de la protéine Bax). L'identification de telles altérations de l'apoptose en relation avec l'acquisition de résistance à l'oxaliplatine ouvre deux champs d'application clinique qui sont : (i) la mise en œuvre d 'une méthode de diagnostic de la résistance à l'oxaliplatine basée sur la définition de marqueurs d’altérations de l 'apoptose de type mitochondrial des cellules tumorales, (ii) la conception d'une stratégie visant à augmenter l'efficacité de l'oxaliplatine par l'association à une substance modulatrice des phénomènes de résistance à l 'apoptose de type mitochondrial
Tumor resistance to chemotherapy limits considerably the efficacy of colorectal cancer treatment. The aim of this thesis was to identify major cellular mechanisms leading to oxaliplatin resistance of colorectal cancers. For this purpose, we developed cellular models to study resistance, submitting several human colorectal cell lines to increasing concentrations of oxaliplatin. In this study, oxaliplatin resistance was found to be associated with a mitochondrial apoptosis defect, first in the HCT116 cellular model and then in a second cellular model: SW620. Indeed, oxaliplatin resistance was found to be associated with functional alterations in the mitochondrial apoptotic pathway (cross-resistance to apoptosis inducers acting directly on the mitochondria). In some cases, apoptosis alterations were found to be associated with a dysregulation of the pro-apoptotic protein Bax at several levels: genetic (Bax mutation), transcriptional (over-expression of Bax transcripts) and/or proteomic ( dawn-expression or complete loss of expression of Bax protein). Identification of these alterations in the mitochondrial apoptotic pathway in relation to acquisition of oxaliplatin resistance opens new clinical horizons among which are:(i) the development of a method to predict oxaliplatin resistance, based on the identification of tumor markers of mitochondrial apoptosis defects, and (ii) the conception of a therapeutic strategy designed to increase oxaliplatin efficacy by addition of a substance able to modulate phenomena of mitochondria-mediated apoptosis resistance

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Nicolas-Chanoine, Marie-Hélène. "Étude génétique de la résistance aux céphalosporines de troisième génération chez "Enterobacter cloacae" et "Klebsiella pneumoniae"." Paris 11, 1990. http://www.theses.fr/1990PA114818.

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Struski, Stéphanie. "Intérêt de l'hybridation génomique comparative pour la caractérisation de déséquilibres chromosomiques tumoraux : application à des lignées cellulaires chimiorésistantes." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMM204.

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Abstract:

Le problème majeur de la chimiothérapie est l'émergence de cellules tumorales résistantes aux traitements. Ce processus est difficile à aborder car les mécanismes de résistance impliquent souvent une panoplie de gènes. L'Hybridation Génomique Comparative identifie des anomalies quantitatives présentes dans un génome. Son intérêt est donc évident pour le ciblage de gènes amplifiés ou délétés et la revue de la littérature présentée ici en témoigne. Après son optimisation, nous avons appliqué la CGH à des lignées cellulaires tumorales chimiorésistantes : une lignée LAL-T résistante à la vinblastine, impliquant la voie P-gp/MDR1; 3 lignées d'adénocarcinomes pulmonaires résistantes à l'étoposide, impliquant des processus indépendants de la voie P-gp; et enfin, 4 lignées d'adénocarcinome ovarien présentant une résistance à la vincristine et une perte de leurs propriétés malignes. La CGH a révélé de nouveaux loci chromosomiques dans ces génomes tumoraux chimiorésistants
Acquired chemotherapy resistance is a major problem in the treatment of many human cancers. This process is difficult to assess because mechanisms of resistance often implicate a panoply of genes. The Comparative Genomic Hybridization identifies quantitative abnormalities present in a genome. CGH interest is thus evident for the targeting of amplified or deleted genes, as testify the review of literature presented in this work. After the optimization of the CGH, we applied it to different chemoresistant tumor cell lines: a ALL-T cell line resistant to vinblastine, mediated by the classical way of P-gp/MDR1; 3 lung adenocarcinoma cell lines resistant to increasing concentrations of etoposide, implicating some process independent to the P-gp way; and finally, 4 ovarian adenocarcinoma cell lines presenting a resistance to various concentrations of vincristine, and a loss of tumorigenicity properties. The CGH reveals new chromosomal loci in these tumor chemoresistant genomes

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Guillon, Hélène. "Activité carbapénémase des β-lactamases de type AmpC." Amiens, 2013. http://www.theses.fr/2013AMIED003.

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Abstract:

Les β-lactamases de type AmpC (céphalosporinases) semblent fréquemment responsables de la résistance aux carbapénèmes chez les entérobactéries, ce que permettent d’évoquer de nombreuses descriptions cliniques. L’objectif de cette thèse était d’effectuer une caractérisation phénotypique, biochimique et moléculaire de l’activité carbapénémase des AmpC. Tout d’abord, les gènes des cinq principales céphalosporinases plasmidiques ont été clonés puis transformés dans la souche imperméable Escherichia coli HB4. Les comparaisons phénotypiques et structurales des clones recombinants ont montré que les céphalosporinases CMY-2, ACT-1, et DHA-1 se distinguent des autres enzymes par leur capacité à conférer une résistance aux carbapénèmes et par la présence d’une asparagine en position 346 (Asn 346), située à proximité du site catalytique. Des expériences de mutagénèse dirigée, consistant à substituer l'Asn 346 par des résidus de taille, de charge et de polarité différentes dans la céphalosporinase CMY-2, ont démontré le rôle de cet acide aminé dans l’activité carbapénémase des céphalosporinases. La caractérisation biochimique de trois variants a révélé que l'Asn 346 contribue à l’affinité de CMY-2 pour l'imipénème. L'étude de l’activité carbapénémase des AmpC chromosomiques à spectre étendu (ACSE) a constitué le second volet de la thèse. Le séquençage, le clonage et la caractérisation biochimique d'une nouvelle ACSE produite par une souche clinique de E. Coli résistante à l'ertapénème ont démontré que l'extension du spectre d'hydrolyse des céphalosporinases, qui est due à une augmentation de leur affinité, peut être aussi responsable d'une résistance aux carbapénèmes
Owing to several clinical reports, it appears that AmpC-type β-lactamases (cephalosporinases) account frequently for carbapenem resistance in Enterobacteriaceae. The aim of this study was to perform a phenotypic, biochemical, and molecular characterization of the carbapenem-hydrolyzing activity of AmpC-type β-lactamases. First of all, the genes encoding the five main plasmid-mediated AmpC β-lactamases were cloned and transferred into the porin-deficient Escherichia coli HB4 strain. Phenotypic and molecular comparison of the recombinant strains revealed that only CMY-2, ACT-1, and DHA-1 conferred resistance to carbapenems and had an asparagine residue at position 346 (Asn 346), located in the vicinity of the active site. Site-directed mutagenesis experiments were performed to replace the Asn 346 residue of CMY-2 β-lactamase by amino acids differing in size, charge, and polarity. It confirmed the contribution of Asn 346 to the carbapenem-hydrolysing activity of cephalosporinases. Biochemical characterization of three variants revealed that Asn 346 assisted the binding of imipenem. The analysis of the carbapenem-hydrolyzing activity of chromosomal extended-spectrum AmpC β-lactamases (ESAC) constitutes the second part of this thesis. Sequencing, cloning and biochemical characterization of a novel ESAC produced by an ertapenem-resistant E. Coli clinical isolate demonstrated that the extension of the hydrolysis spectrum of cephalosporinases, which was due to increased affinity, may also contribute to carbapenem resistance

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Tyagi, Rajeev Kumar. "Etude de l'immunité innée et de la chimiorésistance aux anti-paludéens dans un modèle de souris immunodéficiente humanisée infectée par plasmodium falciparum." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T006.

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Abstract:

Le paludisme causé par Plasmodium falciparum demeure un important problème de santé publique au niveau mondial. Une des nombreuses difficultés de la recherche dans ce domaine est l’impossibilité d’infecter des rongeurs de laboratoire par P. Falciparum, en raison de la spécificité d’espèce. Un modèle expérimental chez le rongeur serait pourtant d’une grande utilité, pour des études de physiopathologie, de chimiothérapie, et pour la recherche vaccinale. Des travaux précédents du laboratoire ont mis au point un modèle murin reposant sur l’injection intrapéritonéale de globules rouges humains (GRh) normaux et infectés par P. Falciparum dans des souris génétiquement immunodéficientes qui recevaient en outre un traitement immunosuppresseur visant l’immunité innée résiduelle (modèle IP). Cependant, seule une faible minorité des souris développaient une parasitémie stable. Nos efforts se sont donc concentrés sur l’optimisation de ce modèle. La première partie du présent travail est l’étude des paramètres affectant le passage trans-péritonéal et la survie des GRh, avec une particulière attention pour les cellules impliquées dans l’immunité innée, que nous avons cherché à contrôler par divers agents immunomodulateurs. Cependant nos efforts ont été limités par le faible taux de succès de passage trans-péritonéal des globules rouges vers le sang périphérique, ce qui nous a amené à utiliser l’injection intraveineuse (modèle IV). Nous avons montré que l’altération de l’immunité innée résiduelle chez les souris immunodéficientes âgées, et le traitement immunomodulateur par l’inosine, entraînaient une diminution significative des réponses inflammatoires, et un accroissement significatif du nombre de souris ayant une parasitémie stable et durable. Un progrès majeur est venu de l’utilisation de la souris NOD/SCID/IL2Rγ-null (NSG), qui présente un déficit profond de l’immunité naturelle et de l’immunité acquise. La seconde partie du travail montre que ce modèle NSG-IV permet d’obtenir de façon reproductible une parasitémie stable de P. Falciparum chez la souris. Ceci nous a permis de sélectionner, par exposition prolongée à des doses croissantes d’artésunate, des souches de P. Falciparum résistantes à cet antipaludique majeur, et grâce à elles d’étudier, in vitro et in vivo, la résistance croisée à l’artésunate, à la quinine et à l’amodiaquine
Malaria remains a major public health problem; among the many hurdles of research in this field, a major one is the lack of experimental mouse models to study in vivo the infection by Plasmodium falciparum, the species responsible for severe malaria, hence for almost all of the mortality. Such models would be most helpful to study new anti-malarial drugs, new drug combinations, and to evaluate candidate vaccines. Recent progress has been made to obtain a long-lasting graft of human red blood cells (hu- RBCs, the natural hosts of asexual blood forms of P. Falciparum) in immunodeficient mice. Previous works in the laboratory have shown that combining an additional immunosuppression of the residual innate immunity of these mice with the intraperitoneal injection of parasitized hu-RBCs, allowed to obtain long-lasting parasitemias, but only in a small percentage of mice. Thus, our efforts were aimed at improving this “intraperitoneal” model. The first part of the work deals mainly with the parameters enabling a better engraftment of hu-RBCs and with the study of different cellular populations involved in innate immunity. We then performed a systematic analysis of various protocols of modulation of residual innate immunity. However, limited success rate and chronic problem of transperitoneal passage of hu-RBCs into the blood stream in this model prompted us to shift to intravenous injections (IV model). The impaired innate immunity of aged mice and the immunosuppressive effect of inosine brought significant control over inflammatory reactions and therefore improved the development of P. Falciparum in vivo. The second part validates the stability, reproducibility and long-standing tendency of parasitaemia in the IV model using the NOD/SCID/IL2Rγ-null mouse (NSG), a mous strain with profoundly deficient adaptive and innate immunity (NSG-IV model). We took advantage of this model to select artesunate resistant mutants of P. Falciparum through prolonged exposure of the parasite to increasing levels (step wise) of the drug, and to examine in vitro and in vivo the cross-resistance to quinine and amodiaquine in these artesunate resistant strains

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Pillon, Marine. "Ligands des ions fer(III) de structure pipérazinique : synthèse, étude physico-chimique et évaluation de leurs propriétés antibactériennes." Amiens, 2014. http://www.theses.fr/2014AMIED005.

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Abstract:

La résistance aux antibiotiques devient un problème majeur de santé. La recherche de nouvelles stratégies est importante pour contrer cette résistance bactérienne. Le Fe(III) est un nutriment essentiel pour les bactéries puisqu’il intervient dans de nombreuses réactions métaboliques. Les milieux biologiques sont appauvris en fer, les bactéries ont donc développé des méthodes pour acquérir ce Fe(III). L’une de ces stratégies est de synthétiser des molécules de faible poids moléculaire appelées sidérophores ayant une haute affinité pour le Fe(III) et reconnues spécifiquement par des récepteurs présents sur les membranes des bactéries. Dans la littérature, plusieurs stratégies ont été développées en utilisant la voie des sidérophores pour lutter contre la résistance bactérienne notamment la méthode du « Cheval de Troie » avec la formation de conjugué chélateur du fer-antibiotique ou l’utilisation de complexes chélateur du fer-Ga(III). L’objectif de cette thèse est de synthétiser des ligands originaux, analogues de l’acide rhodorulique (sidérophore de structure pipérazinique), d’étudier leur pouvoir complexant vis-à-vis du Fe(III) et d’évaluer leur activité antibactérienne. Dans un premier temps, nous avons synthétisé des pipérazines 1,4-di-substituée par des groupements chélateur du fer pour étudier leurs propriétés physico-chimiques et leurs activités antibactériennes. Puis, nous avons développé la synthèse d’intermédiaires-clés de 2,5-di-oxopipérazines et de 2-oxopipérazines. Par la suite, ces analogues pourront être couplés à des antibiotiques ou complexés à du Gallium pour pouvoir contrer les phénomènes de résistance bactérienne
Antibiotic resistance is becoming a major health problem. The research for new strategies is important to counter the bacterial resistance. Fe(III) is an essential nutrient for bacteria as involved in many metabolic reactions. Biological environments are depleted in iron, bacteria have therefore developed methods to acquire the Fe(III). One of these strategies is to synthesize low molecular weight molecules called Siderophores having a high affinity for Fe(III) and recognized by specific receptors on the membranes of bacteria. In literature, several strategies have been developped using Siderophores way to fight against bacterial resistance including the method of the “Trojan horse” with the formation of iron chelator-antibiotic conjugates or the use of iron chelator-Ga(III) complex. The objective of this thesis is to synthesize the original ligands, rhodotorulic analogues (siderophore of piperazine structure), to study their complexing power towards the Fe(III) and to evaluate their antibacterial activity. In the first place, we have synthesized piperazine-1,4-di-substituted with iron chelator groups to study their physicochemical properties and their antibacterial activities. Then, we have developped the synthesis of key intermediates of 2,5-di-oxopiperazines and 2-oxopiperazines. Thereafter, these analogues may be coupled to antibiotics or complexed to Gallium to counter the bacterial resistance phenomena

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Nora, Tamara. "La diversité génétique et phénotypique des populations virales issues de patients infectés par VIH - 1." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077187.

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Abstract:

Au cours de mon travail de thèse, nous avons développé une méthode originale d'étude de la diversité génétique du VIH. Cette méthode est fondée sur l'isolement de virus clonaux issus d'événements d'infection uniques à partir du plasma de patients infectés. L'analyse des séquences génomiques issues des virus clonaux nous a permis de quantifier in vivo un taux de recombinaison élevé chez les six patients étudiés, de démontrer le rôle de la recombinaison dans l'échappement du VIH aux traitements antirétroviraux, via un rôle dans la génération et la préservation de la diversité génétique du VIH. Nous avons aussi étudié les propriétés fonctionnelles des protéines Env provenant de virus clonaux isolés chez cinq patients. L'étude d'Env distinctes issues d'un même patient a révélée une extraordinaire diversité fonctionnelle, même parmi les virus utilisant le même co-récepteur. Cette diversité fonctionnelle se traduit par un large spectre d'infectivités sur un type cellulaire donné, des différences dans leur capacité relative à infecter différentes cellules cibles et des différences de sensibilités à certains inhibiteurs d'entrée. Aucune corrélation entre l'infectivité de ces virus clonaux et la sensibilité aux inhibiteurs d'entrée n'est observée, ce qui indique que ces propriétés fonctionnelles peuvent être, dans une certaine mesure, dissociées
During my thesis, we developed a new technique for study the genetic diversity of HIV. This method is based on the isolation of infectious clonal viruses directly resulting from single plasma-derived infections events. A comparison of the genomic sequences of clonal viruses from six patients demonstrated strong evidence for extensive recombinaison in vivo, showed that recombination could increase the diversity of drug resistant genotypes and reveals that recombination contributes to the generation and preservation of the HIV-1 diversity. The isolation of clonal viral populations from five different patients permits to evaluate the phenotypic properties of Env proteins exprimed by clonal viruses. Even when comparaisons were restricted to viruses from a same patient with similar tropism, genetically diverses Env proteins exhibited a remarkable fonctionnal diversity, included a wide range of infectivities for a given target cell, differences in their relative ability to infect different target cells and differences in sensibility to inhibition by some entry inhibitors. No correlation was observed between viral infectivity and inhibition by entry inhibitors, indicating that theses properties can be dissociated

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Méar, Jean-Baptiste. "Etude de la modulation de la virulence de Pseudomonas aeruginosa par Candida albicans dans un modèle de pneumonie." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S013/document.

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Abstract:

Pseudomonas aeruginosa et Candida albicans sont deux pathogènes fréquemment isolés dans les communautés microbiennes des unités de soins intensif. Nous avons auparavant montré que la colonisation des voies aériennes par C. albicans protégeait contre les lésions pulmonaires induites par P. aeruginosa. Le but de cette étude était de caractériser les mécanismes cellulaires et moléculaires responsables de la protection des voies aériennes induite par C. albicans. La colonisation des voies aériennes par C. albicans permet le recrutement et l'activation de cellules NK, de cellules lymphoïdes innées, de macrophages et de cellules dendritiques. Ce recrutement est associé à la sécrétion d'IL-22. L'inhibition de l'IL-22 est responsable d'une perte de la protection conférée par C. albicans. Nous avons identifié par cytométrie en flux que les cellules lymphoïdes innées étaient la seule source cellulaire d'IL-22. La déplétion spécifique des cellules lymphoïdes innées par des anticorps anti-CD90.2 était responsable d'une diminution de la sécrétion d'IL-22 et d'une diminution de la survie lors de la pneumonie à P. aeruginosa. Nos résultats démontrent que la production d'IL-22, principalement par les cellules lymphoïdes innées, est une étape inductible majeure dans la protection contre les lésions pulmonaires induites par P. aeruginosa. Cette cytokine pourrait ainsi représenter une cible thérapeutique pour prévenir les lésions pulmonaires induites par P. aeruginosa
Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are two pathogens frequently encountered in the intensive care unit microbial community. We have demonstrated that C. albicans airway exposure protected against P. aeruginosa-induced lung injury. The goal of this study was to characterize the cellular and molecular mechanisms associated to C. albicans-induced protection. Airway exposure by C. albicans led to the recruitment and activation of NK cells, innate lymphoid cells (ILC), macrophages and dendritic cells. This recruitment was associated with the secretion of IL-22 whose neutralization abolished C. albicans-induced protection. We identified, by flow cytometry, ILCs as the only cellular source of IL-22. Depletion of ILCs by anti-CD90.2 antibodies was associated with a decreased IL-22 secretion and an impaired survival after P. aeruginosa challenge. Our results demonstrate that production of IL-22, mainly by ILCs, is a major and inducible step in protection against P. aeruginosa-induced lung injury. This cytokine may represent a clinical target in Pseudomonas aeruginosa induced lung injury

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Skrypek, Nicolas. "Rôles de la mucine membranaire MUC4 et de son partenaire ErbB2 sur les propriétés biologiques des cellules humaines d'adénocarcinomes pancréatiques : implication dans la chimio-résistance à la gemcitabine et aux drogues du protocole FOLFIRINOX." Thesis, Lille 2, 2012. http://www.theses.fr/2012LIL2S017.

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Abstract:

Le complexe formé par la mucine membranaire MUC4 et le récepteur oncogénique ErbB2 pourrait participer à la progression tumorale pancréatique et à la chimio-résistance des tumeurs. La néo-expression de MUC4 dès les stades précoces de la cancérogenèse pancréatique associée à la surexpression d’ErbB2 en font des marqueurs et des cibles d’intérêt dans ce cancer. Le but de ce travail a été d’étudier les rôles respectifs de ces deux partenaires sur les propriétés biologiques et de chimio-résistance des cellules cancéreuses pancréatiques humaines.Nous avons dans un premier temps montré in vitro l’interaction entre les domaines de type Epidermal Growth Factor (EGF) de la mucine humaine MUC4 et ErbB2. Nous avons ensuite montré que la perte de MUC4 dans les cellules CAPAN-2 (MUC4-KD) entraîne une diminution de la prolifération cellulaire ainsi qu’une diminution de la migration et une augmentation de l’invasion cellulaires. La perte d’ErbB2 (ErbB2-KD) sensibilise les cellules à l’apoptose et entraîne une diminution de la prolifération, sans modification des propriétés de migration ni d’invasion (Jonchkeere N., Skrypek N., et al., PLoS One, 2012).Nous avons ensuite montré que les clones cellulaires déficients en MUC4 sont plus sensibles à la gemcitabine, avec une altération de marqueurs apoptotiques, que les cellules exprimant MUC4. Ceci est corrélé à l’augmentation de l’expression des transporteurs de nucléoside Concentrative Nucleoside Transporter 1 (hCNT1) et hCNT3 et du canal Multidrug Resistance Related-Protein 3 (MRP3/ABCC3) avec une diminution de MRP4 (ABCC4). L’étude mécanistique indique que ces effets sont médiés par la voie de signalisation du Nuclear Factor-kB (NF-kB). Enfin, nous avons observé une corrélation inverse entre l’expression de MUC4 et hCNT1 sur une petite cohorte de patients atteints d’adénocarcinome pancréatique. (Skrypek N. et al., Oncogene, 2012).L’étude de l’implication de MUC4 dans la chimio-résistance a été ensuite étendue aux drogues du protocole FOLFIRINOX (5-fluorouracile (5-FU), Oxaliplatine, Irinotecan/SN-38). Nous observons que la perte de MUC4 sensibilise les cellules au 5-FU et augmente leur résistance à l’oxaliplatine. La perte de MUC4 s’accompagne de l’augmentation de l’expression de la dihydropyrimidine déshydrogénase (DPYD) et de la diminution du transporteur Copper Transporter 1 (CTR1). De plus, la diminution de la voie NF-kB augmente la sensibilité au 5-FU alors que la voie c-Jun N-terminal Kinase (JNK), diminuée dans les clones MUC4-KD diminue la sensibilité à l’oxaliplatine.En conclusion, ces travaux indiquent que la mucine MUC4 module les propriétés biologiques des cellules cancéreuses pancréatiques humaines et est une actrice de la résistance aux chimiothérapies. Ceci nous permet de proposer MUC4, ainsi que les marqueurs ErbB2, hCNT1, CTR1, et les voies NF-kB et JNK, comme des cibles thérapeutiques potentielles et/ou des marqueurs prédictifs afin d’améliorer la réponse aux chimiothérapies et le pronostic des patients atteints de cancer pancréatique
The membrane-bound mucin MUC4/oncogenic receptor ErbB2 complex is thought to participate in pancreatic cancer progression and in tumor cell resistance to chemo-therapeutic drugs. MUC4 and ErbB2 appear as markers and targets of interest in this cancer as MUC4 is neo-expressed in the early stages of pancreatic carcinogenesis and ErbB2 is overexpressed. The aim of this work was to study the respective roles of the two partners on the biological and chemo-resistance properties of human pancreatic cancer cells.We first showed in vitro the interaction between the Epidermal Growth Factor (EGF)-like domains of the human mucin MUC4 and ErbB2. The loss of MUC4 in CAPAN-2 cells (MUC4-KD) induces the decrease of proliferation, a reduction of migration properties and an increase of invasive properties. The loss of ErbB2 (ErbB2-KD) sensitizes cells to apoptosis and decreases proliferation rate, while migration and invasive properties are not altered (Jonchkeere N., Skrypek N., et al., PLoS One, 2012).We then showed that MUC4-KD clones were more sensitive to gemcitabine, with alteration of apoptotic markers, than cells expressing MUC4. This was correlated to the increase of the Concentrative Nucleoside Transporter 1 (hCNT1) and hCNT3 and the Multidrug Resistance Related-Protein 3 (MRP3/ABCC3) channel while MRP4 (ABCC4) was decreased. Mechanistic studies indicate that these effects are mediated by the Nuclear Factor-kB (NF-kB) pathway. Finally, we observed a converse correlation between the expression of MUC4 and hCNT1 in a small cohort of patients with pancreatic adenocarcinoma (Skrypek N. et al., Oncogene, 2012).The implication of MUC4 in chemo-resistance was then extended to FOLFIRINOX drugs (5-fluorouracile (5-FU), Oxaliplatin and Irinotecan/SN-38). We showed that the loss of MUC4 sensitizes pancreatic cancer cells to 5-FU and increases their resistance to oxaliplatin. The loss of MUC4 increases the expression of the dyhidropyrimidine dehydrogenase (DPYD) and decreases Copper Transporter 1 (CTR1). Moreover, the decrease of NF-kB pathway increases 5-FU sensitivity while the c-Jun N-terminal kinase (JNK) pathway, decreased in MUC4-KD clones, decreases oxaliplatin sensitivity.In conclusion, this work indicates that the MUC4 mucin is a modulator of the biological properties of human pancreatic cancer cells and is an actor of resistance to chemo-therapies. All together, these findings allow us to propose MUC4, as well as ErbB2, hCNT1, CTR1 markers and NF-kB and JNK pathways, as potential therapeutic targets and/or predictive markers to improve response to chemo-therapies and prognostic of patients with pancreatic cancer

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Toubiana, Julie. "Signalisation de TLR2, organisation et variabilité de la réponse immunitaire innée." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T016.

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Abstract:

L'invasion de l'hôte par un pathogène induit une réponse immunitaire innée qui aboutit à l'activation cellulaire, à une réaction inflammatoire et parfois à l'initiation d'une immunité acquise. Des différences fondamentales existent dans l'organisation de la réponse immune innée à un pathogène, d'une cellule , d'un organe, ou d'un individu à l'autre. L'organisation de la réponse immune innée en réponse à l'invasion bactérienne, parasitaire ou fongique nécessitent la coopération du récepteur de type Toll 2 (TLR2) avec TLR1 ou TLR6 et la formation de complexes d'activation dans les radeaux lipidiques, qui déterminent une réponse spécifique et adaptée au pathogène. Cependant, les mécanismes de rapprochement moléculaire et la régulation des voies de signalisation impliqués dans la réponse inflammatoire sont encore mal compris. L'objectif de ce travail était d'investiguer les mécanismes impliqués dans la reconnaissance et la signalisation via TLR2, ainsi que dans la variabilité du phénotype inflammatoire. Par une méthode d'analyse protéomique différentielle, nous avons étudié la composition moléculaire du complexe d'activation et les modifications post-traductionnelles en fonction du dimère de TLR2 engagé. Cette approche a permis d'identifier et caractériser le rôle de la tyrosine kinase Lyn et d'IMPDHII dans la régulation de la signalisation de TLR2. Enfin, dans une approche translationnelle nous avons étudié le rôle d'un polymorphisme du gène IRAK1, dont la protéine est en aval de la majorité des TLRs, dans la variabilité du phénotype chez des patients septiques. Ce travail introduit des perspectives nouvelles sur l'organisation, la régulation et la variabilité de la réponse immunitaire innée
Host invasion by micro-organisms induces an innate immune response that leads to cell activation, inflammation and potentially to the initiation of an adaptative response. Major differences are found within the organisation of innate immune responses depending on the pathogen, the invaded cell-type and the host itself. Initiation and organisation of innate immune responses facing bacteria, parasites, or fungi need the cooperation of Toll-like receptor 2 (TLR2) with TLR1 or TLR6, and multimolecular complexes in lipid rafts that determine a specific response. However, our understanding of molecular interactions within lipid rafts remains cryptic. Specifically, little is known regarding the composition of signaling complexes induced by distinct pathogens and the activation mechanisms involved in the initiation and regulation of a potent inflammatory response. The aim of this research project was to investigate the mechanisms involved in recognition and signaling downstream TLR2, and factors that account for variability of the inflammatory phenotype. For this purpose, we established a differential proteomic strategy to identiy the composition of TLR2 activation cluster and post-translationnal modifications of proteins after the recruitment of TLR2 dimers to lipid rafts. This approach enabled us to identify tyrosine-kinase Lyn and IMPDHII as essential regulators of TLR2 signaling. In a translational approach, we studied the effect of an haplotype of IRAKI gene, which codes for a key signaling protein downstream TLRs, on clinical variability in patients with septic shock. Our results provide new insights in ogranisation, regulation and variability of innate imune response

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Everaere, Laëtitia. "Rôle des cellules lymphoïdes dans l’exacerbation de l’asthme par des co-facteurs environnementaux." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S001.

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Abstract:

La prévalence de l’asthme a doublé dans les pays occidentaux depuis environ 1980. Une croissance alarmante qui fait face aux changements de mode de vie : hygiène (l’exposition à des agents infectieux), alimentation, ou encore pollution. Ces éléments sont des co-facteurs de risque, potentiellement responsables de l’installation de l’asthme ou de son aggravation. Cependant aucun mécanisme clair n’est déterminé à ce jour. Ce travail de thèse s’est focalisé sur le rôle des protagonistes centraux de la réponse immune, les populations lymphoïdes innées et adaptatives, dans l’exacerbation de l’asthme par ces différents co-facteurs. L’obésité est associée à une prévalence accrue d’asthme. Récemment, les cellules lymphoïdes innées (ILC) ont été impliquées dans ces pathologies. L’axe principal de mon travail a été de caractériser la contribution des lymphocytes T comparativement aux ILC dans un modèle murin d’exacerbation de l’asthme induit par des allergènes d’acariens liée à l'obésité. Un régime riche en graisse aboutit à l’exacerbation des caractéristiques de l’asthme, incluant l’hyperréactivité bronchique, la réponse humorale, le recrutement des éosinophiles circulants et tissulaires. Parallèlement à une exacerbation des profils pulmonaires Th2 et Th17, la quantité des ILC2 et ILC3 activées est amplifiée chez les souris asthmatiques obèses et associée à une augmentation de l’expression de l’IL-33, l’IL-1β et une diminution des marqueurs des ILC dans le tissu adipeux viscéral. La déplétion des ILC dans ce modèle a confirmé leur implication dans l’exacerbation de l’asthme chez les souris obèses, notamment via une activation des profils Th2 et Th17. Parallèlement, nous avons évalué l’incidence des HAP, polluants provenant d’échappement diesel, en mesurant les caractéristiques moléculaires de l’asthme sévère. Parmi les cellules mononucléaires du sang activées, les particules d’échappement du diesel (DEP)-HAP et celles du benzo[a]pyrène (B[a]P) induisent une augmentation de la production d’IL-22 plus élevée chez les sujets allergiques asthmatiques (AA), et une diminution de l’IL-17A. Cette production d’IL-22 est majoritairement issue des cellules Th22, et son mécanisme d’induction est principalement dépendant de l’AhR sous l’effet des DEP-HAP contrairement au B[a]P. Enfin, nous avons étudié l’impact des infections. L’activation de NOD1 des cellules dendritiques (DC) humaines, indépendamment de l’allergène, promeut un profil Th2, induit préférentiellement la production de CCL17 chez un patient asthmatique, leur maturation et perturbe la production de CCL22 et de l’IL-10. Chez la souris, l’activation systémique de NOD1 exacerbe l’asthme allergique, via l’augmentation de la réponse pulmonaire de type Th2 dépendamment de CCL17.Dans une autre étude, la costimulation de DC immatures humaines par un allergène de chien et le ligand de TLR3 ou TLR9 accentue la différentiation, l’expression de marqueurs d’activation et la production cytokinique des DC, avec l’induction d’un profil Th22/Th1 chez les sujets saints, contrairement à un profil Th22/Th17/Th2 chez les patients AA. Cette activation spécifique des DC, induite par la costimulation chez un patient AA, provoque la sécrétion d’IL-17A, IL-17F et d’IL-13, ainsi qu’une amplification de la production d’IL-22 par les lymphocytes Th22. Tout ceci suggère que la costimulation par certains allergènes et/ou pathogènes peut induire une réponse Th22 et Th17 chez les sujets asthmatiques, et contribuerait à la sévérité de certains asthmes.L'ensemble de ces travaux ont permis d’établir de nouvelles appréhensions des déterminants potentiels dans l’asthme ainsi que de nouvelles notions des mécanismes moléculaires et cellulaires gouvernant la réponse immune
The prevalence of asthma has increased twice in Western countries since about 1980. An alarming growth which correlates with lifestyle changes: sanitary conditions (exposure to infectious agents), nutrition, or pollution. These elements are risk co-factors, involved in asthma development or aggravation. However, no clear mechanism is determined to date. This work focused on the role of central players in the immune response, the innate and adaptive lymphoid populations in asthma exacerbation by these different cofactors.Obesity is associated with an increased prevalence of asthma. Recently, the innate lymphoid cells (ILC) were involved in these 2 pathologies. The main focus of my work was to characterize the T cells compared to ILC contribution in a murine model of asthma exacerbation induced by mite allergens linked to obesity. A high fat diet leads to the exacerbation of the main asthma features, including bronchial hyperresponsiveness, humoral response, recruitment of circulating and tissue eosinophils. In parallel to the exacerbation of Th2 and Th17 profiles, the amount of activated ILC2 and ILC3 is amplified in the lung of obese asthmatic mice and associated with increased expression of IL-33, IL-1β and reduced ILC markers in visceral adipose tissue. ILC depletion in this model confirmed their involvement in asthma exacerbation in obese mice, especially through Th2 and Th17 profiles activation.On the other hand, we evaluated the impact of PAH, pollutants from diesel exhaust, by monitoring the molecular characteristics of severe asthma. Among the activated blood mononuclear cells, diesel exhaust particles (DEP)-PAH and those of benzo[a]pyrene (B[a]P) enhance IL-22 production in asthmatic allergic patients (AA), and decrease IL-17A. Th22 cells are the major source of this IL-22 production and its induction mechanism is mainly dependent on AhR under the effect of DEP-PAH contrary to B[a]P.Finally, we investigated the impact of infections. NOD1 priming of human dendritic cells (DC), independently of the allergen presentation, promoted a Th2 polarization profile which involved the production of both CCL17 and CCL22 in nonallergic subjects but only CCL17 in allergic patients. Moreover, NOD1-primed DC from allergic donors exhibited enhanced maturation that led to abnormal CCL22 and IL-10. In mice, systemic NOD1 activation exacerbates allergic asthma, via the increase in pulmonary Th2 response depending on CCL17.In another study, the costimulation of human immature DC, by dog allergen and TLR3 or TLR9 ligands, increases the DC differentiation, expression of activation markers and cytokine production, with the induction of a Th22/Th1 profile in healthy subjects, unlike a Th22/Th17/Th2 profile in AA patients. This specific DC activation, induced by costimulation in AA patients, leads to the IL-17A, IL-17F and IL-13 secretion, as well as the amplification of IL-22 production by Th22 cells. All this suggests that costimulation by certain allergens and/or pathogens can induce Th22 and Th17 response in asthmatic subjects, and may contribute to the severity of some asthma cases.Taken together, the results presented in this work establish new apprehensions of potential asthma determinants, as well as new concepts of molecular and cellular mechanisms underlying the immune response

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Endougou, Effa Anne Marie. "Neoboutonia melleri var velutina (Prain) Pax & K. Hoffm (Euphorbiaceae) : évaluation des propriétés hépatoprotectrice et antioxydante." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S050/document.

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Abstract:

L’hépatite est une inflammation du foie pouvant être causée par divers agents. Elle reste un problème de santé publique majeur dans le monde, compte tenu du coût de plus en plus élevé des médicaments. Une meilleure compréhension des mécanismes d’action des plantes médicinales apparaît intéressante pour développer des traitements alternatifs. L’objectif de cette étude était donc d’évaluer les propriétés hépatoprotectrice, puis d’identifier les mécanismes qui pourraient soutendre l’action de Neoboutonia velutina (NV), une plante médicinale camerounaise.Les extraits aqueux (NVH) et éthanolique (NVE) de NV ont été préparés, se référant à la préparation traditionnelle. Les analyses phytochimique et toxicologique ont été effectuées et le potentiel antioxydant évalué in vitro et in vivo. De même, l’effet antiinflammatoire des deux extraits a été évalué sur les cellules et chez la souris. L’hépatite aiguë a été induite par le tétrachlorure de carbone (CCl4) ou la Concanavalin A (ConA), chez la souris qui recevait ou non différentes doses d’extrait par gavage. De plus, l’extrait aqueux a été fractionné pour l’identification des composés bioactifs.NVE contiendrait ainsi des stérols et polyterpènes. Cet extrait a présenté une capacité anti-radicalaire meilleure que celle de NVH. Mais, il s’est avéré plus toxique que NVH; ce qui a limité nos investigations sur cet extrait. En revanche, NVH contiendrait des saponines et glycosides et a révélé une très faible toxicité. De plus, un remarquable effet protecteur de NVH a été noté contre les dommages causés par le CCl4. Cet effet protecteur s’est traduit par une diminution dose-dépendante et significative des transaminases sériques et une importante diminution des lésions hépatiques. Ceci, associé à la capacité antiinflammatoire in vitro et in vivo. En outre, un composé anti-radicalaire a été isolé de NVH. Par ailleurs, dans le modèle ConA, NVH n’a présenté qu’un faible effet protecteur. Ce qui suggère une efficacité sélective de cet extrait.En conclusion, nous avons démontré dans notre étude, un effet hépatoprotecteur de NV à travers l’extrait aqueux qui a présenté un effet hépatoprotecteur modèle dépendant. Cet effet, semble être médié au moins, par la capacité anti-radicalaire de la plante. Nos résultats présentent ainsi les premiers arguments en faveur de l’utilisation traditionnelle de NV contre les hépatites. Des études plus poussées permettraient de mieux comprendre les mécanismes d’action de cette plante et d’exploiter au mieux son potentiel thérapeutique, sans risque de toxicité. Ainsi, bien que présentant une toxicité, l’extrait éthanolique qui mime la préparation traditionnelle, a révélé un potentiel thérapeutique qui pourrait être très intéressant à très faibles doses
Hepatitis is a liver inflammation caused by different agents. It remains a public health problem worldwide since current treatment methods are increasingly expensive. Medicinal plants are known as an important source of new molecules. A better knowledge of these natural resources appears interesting to develop alternative treatments. The aim of this study was then to evaluate the hepatoprotective effect of Neoboutonia velutina (NV), a Cameroonian medicinal plant, and decipher underlying mechanisms.NV aqueous (NVH) and ethanol (NVE) extracts have been prepared referring to the traditional use. Phytochemical and toxicological analyses were performed in vitro and in vivo. Similarly, extracts antioxidant and antiinflammatory potential was assessed on cells (or not) and in mice. Acute hepatitis was induced with carbon tetrachloride (CCl4) or Concanavalin A (ConA), in mice receiving or not different extracts doses by gavage. NVH fractionation was done to identify active compounds.NVE was containing sterols and polyterpens. Though it displayed a high radical scavenging capacity compared to NVH, it appeared more toxic. Thus, for assays, priority was given to NVH, containing saponins and glycosides. NVH showed a radical scavenging capacity with a very low toxicity. It remarkably protected mice from CCl4-induced liver injuries. As shown by significant dose dependent transaminases serum level decrease and liver injury important limitation. These, associated with NVH anti-inflammatory capacity. Furthermore, NVH fractionation led to a radical scavenging compound isolation. Otherwise, in ConA model NVH displayed weak effects. These findings suggested a selective NVH efficacy. In summary, we showed that NVH presents a model dependent hepatoprotective effect that may be mediated at least, through its radical scavenging property. Our findings are in line with Neoboutonia velutina traditional use and provide the first scientific arguments in favor of the traditional use of NV against hepatitis. Additional studies are needed to better understand NV mechanisms of action and then ensured its safe use. NVE mimics the traditional preparation. Even though that extract appeared toxic, it exhibited a therapeutic potential that could be interesting at very low doses

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Raynal, Caroline. "Etude du rôle du récepteur des xénobiotiques PXR dans la réponse à la chimiothérapie du cancer colorectal." Montpellier 1, 2009. http://www.theses.fr/2009MON13523.

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Abstract:

Malgré de nombreuses études pharmacogénétiques, l’efficacité de la chimiothérapie du cancer colorectal est sujette à une grande variabilité interindividuelle rendant la prédiction de la réponse thérapeutique et toxique difficile. Les fluoropyrimidines associées à l’oxaliplatine ou à l'irinotécan constituent le traitement de première ligne des cancers colorectaux métastatiques et subissent un métabolisme périphérique et tumoral auquel participent différentes enzymes et protéines de transport membranaire. Considérant leurs profils métaboliques et la distribution tissulaire du récepteur des xénobiotiques PXR, nous avons émis l’hypothèse que PXR pouvait jouer un rôle prépondérant dans la réponse des cellules tumorales coliques à ces agents cytotoxiques. PXR est un xénorécepteur activé par de nombreux médicaments et composés environnementaux et régulant l’expression de gènes du métabolisme et du transport cellulaire des médicaments dans des organes clés de la détoxication tels que le foie et le tractus gastro-intestinal. La transfection stable de PXR dans les cellules tumorales coliques humaines LS174T, SW480 et SW620 a conduit à une augmentation de leur chimiorésistance au SN38, métabolite actif de l’irinotécan, corrélée au niveau d’expression de PXR. L’étude du profil métabolique du SN38 a permis de montrer une forte augmentation de sa glucuronidation en SN38G inactif dans les cellules LS174T exprimant PXR, associée à l’augmentation des niveaux d’expression des ARNm des UDP-glucuronosyl transférases UGT1A1, UGT1A9 et UGT1A10. L’inhibition de l’expression de PXR par une stratégie siRNA a permis de restaurer la sensibilité des cellules concomitamment à une diminution de l’expression de l’UGT1A1 et de la glucuronidation du SN38. Nous avons également montré que PXR était exprimé dans les tissus coliques sains et tumoraux avec une grande variabilité et mis en évidence une forte corrélation entre l’expression de PXR et de l’UGT1A1 dans le tissu tumoral. Nos résultats suggèrent que le métabolisme tumoral du SN38 est affecté par PXR et que ces nouvelles données devraient être prises en compte dans la prédiction de la réponse à l’irinotécan dès lors que des composés environnementaux ou le régime alimentaire affectent l’expression et/ou l’activité de PXR
Despite numerous pharmacogenetic studies, clinical efficacy of chemotherapy in colorectal cancer is subjected to broad inter-individual variations leading to the inability to predict outcome and toxicity. Fluoropyrimidines, oxaliplatine and irinotecan are worldwide approved for the treatment of metastatic colorectal cancer and undergoe extensive peripheral and tumoral metabolism. Considering their metabolic profiles and the tissue distribution of Pregnane X Receptor (PXR), we hypothesized that PXR could play a key role in colon cancer cell response to those cytotoxic agents. PXR is a xenoreceptor activated by many drugs and environmental compounds regulating the expression of drug metabolism and transport genes in detoxification organs such as liver and gastrointestinal tract. Stable transfection of hPXR cDNA in human colorectal cancer cells LS174T, SW480 and SW620 led to a marked chemoresistance to the active metabolite SN38 correlated with PXR expression level. Metabolic profile of SN38 showed a strong enhancement of SN38 glucuronidation to the inactive SN38G metabolite in PXR-expressing cells, related to an increase of UDP-glucuronosyl transferases UGT1A1, UGT1A9 and UGT1A10 mRNAs. Inhibition of PXR expression by lentivirus-mediated shRNA, led to SN38 chemoresistance reversion concomitantly to a decrease of UGT1A1 expression and SN38 glucuronidation. We also showed that PXR was expressed with a strong variability in both normal and neoplastic human colon tissues and highlighted a strong correlation between PXR and UGT1A1 in tumors. Our results suggest that tumoral metabolism of SN38 is affected by PXR and that this should be taken into account in the prediction of irinotecan response as environmental compounds, nutrition and diet affect PXR expression and/or activity

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Faure, Emmanuel. "Implications de la reconnaissance de Pseudomonas aeruginosa par le NLRC4-Inflammasome." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01060187.

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Abstract:

L'inflammasome est complexe protéique intracellulaire de l'immunité innée permettant la reconnaissance de pathogènes intracellulaires. NLRC4, un Nod-like récepteur permettant l'activation de l'inflammasome est impliqué dans la reconnaissance du flagelle ainsi que du système de sécrétion de type 3 (SST3) de Pseudomonas aeruginosa, une bactérie majoritairement extracellulaire. Nous avons donc déterminer l'impact de la reconnaissance de P. aeruginosa par le NLRC4-inflammasome in vivo dans un modèle murin de pneumonie aiguë. De façon surprenante, l'activation du NLRC4-inflammasome par le SST3 de P. aeruginosa contribue à diminuer la survie de l'hôte en diminuant la clairance bactérienne pulmonaire et en augmentant la lésion pulmonaire induite. En effet, la perte de l'activation de l'inflammasome chez les souris NLRC4/- permet d'une part, une réponse précoce méfiée par l'IL-17A. Cette réponse dépendant de l'IL-17A conduit à une expression majeure de peptides antimicrobiens par l'épithélium pulmonaire et diminue la lésion pulmonaire en diminuant le recrutement des cellules immunitaires inflammatoires. L'administration d'IL-18 recombinante murine ou l'inhibition de cette voie par un anticorps anti-IL-17A inhibe cette réponse IL-17A dépendante. Ces résultats mettent en évidence un nouveau rôle du SST3 de P. aeruginosa, qui en plus de son effet cytotoxique et de la translocation d'exotoxines, permet d'activer l'inflammasome pour échapper à la réponse immunitaire innée de l'hôte en inhibant une voie IL-17 dépendante.

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Porte, Rémi. "Caractérisation des propriétés anti-infectieuses de la flagelline, agoniste du Toll-like receptor 5." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S065/document.

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Abstract:

De par sa capacité à détecter les microorganismes et à mettre en place une défense anti-infectieuse rapide, l’immunité innée représente la première ligne de défense de l’hôte. La réponse immunitaire innée est déclenchée par des motifs microbiens moléculaires universels et conservés reconnus par des récepteurs innés parmi lesquels les "Toll-like Receptors" (TLR). L’activation de ces récepteurs induit une inflammation locale et une réponse antimicrobienne adaptée au pathogène. Ces propriétés biologiques ont permis de d’envisager l’utilisation des TLR comme cible thérapeutique antiinfectieuse. Dans ce contexte il a été montré que la flagelline, le composant majeur des flagelles bactériens et le seul agoniste de TLR5 décrit à ce jour, possédait des propriétés anti-infectieuses. Des études chez la souris ont montré que la flagelline induisait une forte production, par des cellules lymphoïdes innées, d’IL-22, une cytokine impliquées dans la protection des muqueuses. Par ailleurs, la forte expression de TLR5 par les cellules épithéliales laisse présager un rôle de ces cellules dans les propriétés anti-infectieuses de la flagelline. Toutefois, les mécanismes moléculaires et cellulaires effecteurs responsables des effets antimicrobiens de l’agoniste de TLR5 restent à définir.Au cours de ce travail de thèse, nous avons étudié les capacités anti-infectieuses de la flagelline dans deux modèles infectieux chez la souris. Nous avons tout d’abord montré que l’administration systémique de flagelline, en prophylaxie c’est-à-dire préalablement au challenge infectieux, permettait de protéger d’une infection intestinale par Yersinia pseudotuberculosis. La protection induite par la flagelline est observable lors d’une infection par la voie muqueuse mais est absente lors d’un challenge infectieux par la voie systémique, démontrant ainsi le caractère muqueux de la protection. L’effet protecteur de la flagelline dans notre modèle est dépendant de l’expression de TLR5 et indépendant de l’IL-22. Cette étude suggère donc un mécanisme original de protection médié par la flagelline, indépendant de l’IL-22.Nous avons également analysé la capacité anti-infectieuse de la flagelline dans un modèle murin d’infection respiratoire à Streptococcus pneumoniae. Nous avons notamment montré que la flagelline pouvait être utilisée en thérapeutique lorsqu’elle était associée à un antibiotique. En effet, l’association d’amoxicilline ou de co-trimoxazole avec la flagelline (voie intranasale) a permis de protéger des souris infectées par une dose létale de S. pneumoniae comparativement à l’antibiotique seul. L’efficacité de cette thérapie est dépendante de l’activation de TLR5 et est associée à une infiltration pulmonaire importante de polynucléaires neutrophiles. Ce traitement combinatoire améliore également la protection dans un modèle de surinfection pneumococcique post-grippale. Ces résultats montrent que la combinaison agoniste de TLR5/antibiotique améliore la réponse anti-infectieuse pulmonaire et permettent d’envisager de nouvelles stratégies antibactériennes dans le cas d’infections où les antibiotiques montrent leurs limites (infections nosocomiales, bactéries multirésistantes…)
With its ability to sense micro-organisms and to induce a rapid defense against infections, innate immunity represents the first line of host’s defense. The innate immune response is triggered by universal and conserved microbial molecular patterns recognized by innate receptors including the Toll-like receptors (TLRs). Activation of these receptors induces local inflammation and antimicrobial response against pathogens. These biological properties have allowed considering the use of TLR as anti-infective therapeutic target. In this context it has been shown that flagellin, the major component of bacterial flagella and the agonist of TLR5, had anti-infectious properties. It was shown that flagellin induces a strong production by innate lymphoid cells of IL-22, a cytokine involved in the protection of mucosa. Furthermore, the strong expression of TLR5 by epithelial cells suggests a role for these cells in the anti-infectious properties of flagellin. However, the molecular and cellular mechanisms responsible for the antimicrobial effects of the TLR5 agonist remained to be defined.In this thesis, we studied the anti-infectious properties of flagellin in two infectious murine models. We first showed that systemic administration of flagellin, prior to infectious challenge, protect against an intestinal infection with Yersinia pseudotuberculosis. The protection induced by flagellin is observable upon infection by mucosal route but is absent during a challenge by the systemic route, thus demonstrating the role of the mucosa for the protection. The anti-bacterial effect in this model is dependent on the expression of TLR5 and independent of the innate lymphoid cells’ IL-22 production. This study suggests a novel mechanism of flagellin-mediated protection, independent of the IL-22.We also analyzed the anti-infectious abilities of flagellin in a murine model of respiratory infection by Streptococcus pneumoniae. In particular, we showed that flagellin could be used in therapy when combined to an antibiotic. Indeed, the combination of amoxicillin or co-trimoxazole with flagellin protected mice infected with a lethal dose of S. pneumoniae compared to antibiotic standalone. The effectiveness of this therapy was dependent on the activation of TLR5 and was associated with pulmonary infiltration of neutrophils. This combinatory treatment also improved the protection in a model of post-influenza pneumococcal superinfection. These results show that the combination of TLR5 agonist / antibiotic ameliorates pulmonary anti-infectious response and allow to consider new antibacterial strategies against infections when antibiotics reach their limits (nosocomial infections, multiresistant bacteria ...)

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Blandin, Anne-Florence. "Rôle de l'intégrine α5β1 dans la biologie du glioblastome et dans la résistance aux thérapies anti-EGFR." Thesis, Strasbourg, 2015. http://www.theses.fr/2015STRAJ066/document.

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Abstract:

Le glioblastome multiforme (GBM) est la tumeur cérébrale primaire la plus fréquente. Une dérégulation des voies de signalisation de l’EGFR et un fort potentiel invasif sont les caractéristiques principales du GBM. Malheureusement, les essais cliniques impliquant des thérapies anti-EGFR dans le traitement des GBM demeurent inefficaces. Nous avons précédemment montré que le récepteur de la fibronectine, l’intégrine α5β1, est associé avec un mauvais pronostic et une résistance des patients au temodal. Les intégrines peuvent coopérer avec les récepteurs aux facteurs de croissance et ainsi amplifier leur potentiel oncogénique. Ici, nous avons cherché à déterminer le rôle de l’intégrine α5 dans la résistance aux thérapies anti-EGFR. Utilisant la lignée U87 de GBM, on a dans un premier temps confirmé que l’activation de l’intégrine sous l’influence de la fibronectine, potentialisait la signalisation de l’EGFR. La perte d’expression d’α5 sensibilise les cellules U87 aux anti-EGFR (cetuximab, gefitinib) dans des essais de clonogénicité en soft agar. L’expression d’ α5 favorise la résistance aux 2 drogues lors de la migration cellulaire. Pour aller plus loin, nous avons développé un nouveau test basé sur la quantification de l’évasion cellulaire à partir d’une sphère tumorale. La perte d’ α5 augmente la sensibilité des cellules U87 à 2 TKI réversibles spécifiques de l’EGFR, gefitinib et erlotinib, mais n’a pas d’effet sur l’efficacité du lapatinib, un TKI irréversible ciblant EGFR, ErbB2, ErbB3 et ErbB4. Grâce à la microscopie confocale, nous avons montré l’effet important du gefitinib sur l’endocytose de l’intégrine et de l’EGFR. Ces résultats suggèrent que l’expression d’ α5 favorise la résistance aux TKI par l’activation des voies de signalisation des récepteurs ErbB ou en contrôlant le trafic membranaire de l’EGFR. On a aussi montré que pour favoriser l’adhésion cellulaire, l’intégrine α5 stimulait la fibrillogénèse. Dans les cellules migrant à distance de la sphère, l’intégrine α5 est strictement engagée dans des adhésions cellule-substrat contenant la protéine FAK activée. Nos résultats soulignent le rôle central du couple fibronectine/ intégrine α5 dans l’invasivité du GBM et la résistance aux thérapies anti-EGFR
Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common primary brain tumor. Alteration of the EGFR pathway and high invasive potential are hallmarks of GBM. Unfortunately, trials using anti-EGFR therapies for the treatment of GBM reveal limited efficacy. We previously showed that overexpression of the fibronectin receptor, α5β1 integrin, is associated with a poor prognosis for patients and is responsible for chemoresistance to temodal. Integrins can cross-talk with growth factor receptors and amplified their oncogenic activity. Here, we sought to determine the potential role of α5 integrin in resistance to anti-EGFR therapy. Using U87 GBM cell line, we first confirmed that fibronectin-mediated integrin activation potentiated EGFR signaling. Loss of α5 integrin expression sensitized U87 cells to anti-EGFR drugs (cetuximab, gefitinib) in soft agar clonogenic assay. α5 expression can trigger resistance to both drugs on cell migration. To go further, we developed a new assay based on the quantification of cell evasion from tumor spheroids. α5 depletion increased U87 cell sensitivity to gefitinib and erlotinib, 2 EGFR-selective reversible TKI, but had not effect on lapatinib efficacy, an irreversible TKI that target EGFR, ErbB2, ErbB3 and ErbB4. Confocal microscopy revealed a strong impact of gefitinib on EGFR and integrin endocytosis. These results suggested that α5 expression may trigger resistance to TKI either by activating ErbB pathways or by controlling EGFR membrane trafficking. We also showed that to promote cell adhesion, α5 integrin stimulated fibronectin fibrillogenesis. As cells moved away from the spheroids, α5 became strictly engaged in cell-substratum adhesion sites where it recruited activated FAK. Our work highlights the pivotal role of fibronectin/α5β1 integrin in invasivity of GBM and resistance to anti-EGFR drugs

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Reboul, Angéline. "Rôle des systèmes à deux composants dans le cycle de la peste." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S038.

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Le bacille de la peste, Yersinia pestis, a une vie parasitaire au cours de laquelle il oscille le plus souvent d’un hôte mammifère à l’autre par l’intermédiaire des puces, et plus rarement par voie aéroportée. Comme tel, Yersinia pestis doit rapidement ressentir et répondre aux variations brutales de son environnement afin se maintenir dans la nature. C’est pourquoi, nous avons étudié le rôle des systèmes de régulation à deux composants dans la peste compte tenu que ces systèmes sont connus pour avoir un rôle clef dans l’adaptation des bactéries aux changements environnementaux. En plus du système PhoP-PhoQ dont l’importance chez le mammifère et la puce a été précédemment révélée, nous avons découvert que quatre systèmes sont requis pour le cycle de la peste. Plus particulièrement, l'un d'entre eux permet une colonisation optimale du tube digestif de la puce alors que les 3 autres systèmes sont impliqués dans la production de biofilm, un processus indispensable à une transmission optimale du bacille par les puces. Nous avons aussi découvert que le système OmpR-EnvZ est l’unique système, en plus du système PhoP-PhoQ, requis pour la production de la peste bubonique, septicémique et pulmonaire. Nos travaux, menés in vitro, ex-vivo et in vivo suggèrent que le rôle du système OmpR-EnvZ serait de protéger la bactérie contre les effecteurs toxiques sécrétés par les polynucléaires neutrophiles dans les tissus et, ceci tout au long du processus infectieux
Plague bacillus, Yersinia pestis has a parasitic lifestyle in which it is mainly transmitted between mammilian hosts through the bite of infected fleas, and in rare cases through infected droplets. Thus, Yersinia pestis must rapidly sense and respond to wide and brutal changes of its environment in order to survive. We aimed at decipher the role of two component regulatory systems in plague, as they are known to be key players in bacterial adaptation to the environment. In addition to the already described PhoP-PhoQ system, we found out that four systems are required for plague cycle. We showed that one of these systems is important for an optimal colonization of the flea's digestive tract, while the three others are required for biofilm production, an essential step in the bacillus transmission by the fleas. We also found out that OmpR-EnvZ, in addition to PhoP-PhoQ, is the only one to be important to produce bubonic, septicemic and pulmonary plague. Our in vitro, ex-vivo and in vivo works suggest that the OmpR-EnvZ system would be to protect bacterial against toxic effectors that are produced by polymorphonuclear leukocytes all along the infectious process

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Richeval, Camille. "Développement d’outils analytiques de mise en évidence de biomarqueurs d’une exposition aux nouvelles substances psychoactives (NPS) : approches in vivo, in silico, in vitro." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S024/document.

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Abstract:

En raison de leur diffusion sauvage sur le e-commerce, leur soi-disant sécurité d’usage et l’alternative légale aux stupéfiants habituels qu’ils constituent, les nouvelles substances psychoactives (NPS) sont un phénomène mondial émergeant. Au-delà de différents défis dans nos sociétés (législation, prévention,... ), la capacité d'identifier les NPS dans des échantillons biologiques présente de nombreux challenges analytiques : ces nouvelles substances ne sont pas référencées dans les bibliothèques habituelles de spectrométrie de masse commerciales, leur métabolisme est inconnu (avec parfois des métabolites actifs), les doses actives sont parfois très faibles et par conséquent, les concentrations dans le sang ou l'urine sont également faibles. Dans ce contexte, notre laboratoire effectue régulièrement des analyses toxicologiques dans un contexte clinique, et pour les forces de l’ordre, dans des échantillons biologiques à l'aide de deux principaux types d’analyseurs : la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse tandem (CL-SM/SM) pour le criblage ciblé et la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse haute résolution (CL-SMHR) pour le criblage non ciblé. Cette dernière technique est basée sur la masse exacte (mais également, le profil isotopique et le temps de rétention) des composés de l’échantillon à partir de laquelle la formule chimique est déterminée et recherchée dans une base de données spectrales en utilisant un logiciel dédié. L’objectif de ma thèse est de caractériser des NPS et leurs métabolites (afin d’alimenter cette base de données) en utilisant une stratégie combinant des approches in vitro, in silico et in vivo. Il s’agit, en particulier, d’augmenter la sensibilité de détection de la prise de NPS en se focalisant sur les métabolites qui sont le plus souvent les produits majeurs d’élimination des NPS.A cet effet, une méthode in vitro destinée à produire les métabolites des NPS et utilisant des microsomes hépatiques humains a été mise en oeuvre. Les métabolites obtenus, comparés aux prédictions in silico, ont été enregistrés dans la base de données. Cette approche a été confrontée à l’analyses de comprimés et d’autres produits non biologiques contenant des NPS, mais également, à des données in vivo d’exposition aux NPS : cas d’intoxications, études expérimentales et études épidémiologiques prospectives et rétrospectives dans des populations ciblées, ou non…Au total, ce travail basé sur cette stratégie in vitro, in silico, in vivo m’a permis d’enrichir notre base de données de spectres de masse haute résolution (SMHR) pour le criblage non ciblé et également notre base de données de criblage ciblé (SM/SM). Notre méthode en haute résolution, qui s’est enrichie au cours de ces 3 années de thèse de 83 nouveaux NPS et 281 métabolites, constitue aujourd’hui un outil analytique efficient pour la détection d’une exposition aux NPS
Owing to wild e-commerce diffusion, alleging safety and legal alternative to usual drugs of abuse arguments, the new psychoactive substances (NPS) are emerging phenomenon in the world. In our societies, through various consecutive challenges (legislation, prevention, …), the ability to identify NPS in biological samples exhibits numerous analytical pitfalls: new substances which are not referenced in the usual commercial mass spectrometric libraries, unknown metabolism (with sometimes active metabolites), sometimes very low active dosages and consecutively low concentrations in blood or urine. In this context, clinical and forensic toxicological analyses in biological samples are routinely performed in our laboratory using two main analytical devices: liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) for targeted screening and liquid chromatography-high resolution mass spectrometry (LC-HRMS) for non-targeted screening. This last technique is based on the accurate mass (together with isotopic pattern and retention time) of sample components, from which the chemical formula is calculated and searched against a database of mass spectra using dedicated software. The aim of my thesis is to characterize NPS and metabolites (in order to increase the spectral database) using a strategy combining in vitro, in silico, and in vivo approaches. Therefore, the main goal is to increase the detection sensitivity of the NPS use by focusing on the metabolites that are most often the major products of NPS elimination. For this purpose, an in vitro method designed to produce NPS metabolites using human liver microsomes incubations was applied. Obtained metabolites, after confrontation with metabolites in silico predicted, were saved in database. This approach was subsequently confronted with analysis of tablets or other non-biological product containing NPS, but also, with in vivo observed data from NPS exposure: intoxication cases, experimental studies and prospective and retrospective epidemiological studies in targeted population or not … All in all, this work based on this in vitro, in silico and in vivo strategy allowed me to enhance our high resolution spectra database (HRMS) for non-targeted screening and also our spectra database for targeted screening (MS/MS). Today, our HRMS device, with a database that was increased with 83 new NPS and 281 metabolites for the duration of my thesis, is an efficient analytical tool for NPS use detection

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Negrel, Lise. "Analyse intégrée de la réponse de la vigne à l'infection par Plasmopara viticola : par l'étude d'un cas de contournement de résistance." Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ021/document.

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Abstract:

Un déploiement optimal de variétés résistantes nécessite une excellente connaissance des relations entre la vigne et P. viticola. Ces connaissances fondamentales pourront ensuite alimenter les stratégies pour le développement de variétés durablement résistantes au vignoble. Bianca est une variété de vigne résistante au mildiou qui possède le gène résistance Rpv3. Cette variété est résistante à la plupart des souches de P. viticola. Cependant, une souche virulente capable de l’infecter a été isolée. Dans ce projet, un pathosystème original, fondé sur la variété Bianca confrontée à une souche avirulente et à une souche virulente de P. viticola, a été utilisé pour obtenir une image complète de l'impact sur la vigne de l'infection par P. viticola en situation compatible et incompatible, en combinant des études de physiopathologie avec des analyses métabolomiques par spectrométrie de masse à haute résolution et par résonance magnétique nucléaire. Parallèlement, l'identification de métabolites et de séquences géniques spécifiques de P. viticola a permis le développement de méthodes de suivi dynamique de l'infection, grâce à la PCR quantitative et à la quantification de lipides caractéristiques de l'agent pathogène
Optimal deployment of resistant varieties requires an excellent knowledge of the relationship between grapevine and P. viticola. This fundamental knowledge can then feed the strategies for the development of grapevine varieties with sustainable resistance. Bianca is a downy mildew-resistant grapevine variety, due its Rpv3 resistance gene. This variety is resistant to most strains of P. viticola. However, a virulent strain capable of infecting Bianca has recently been isolated. In this project, we use this original pathosystem to obtain a complete picture of the impact P. viticola infection on grapevine, by combining physiopathological studies with metabolomic analyses. In addition, the identification of specific metabolites and gene sequences from P. viticola has allowed the development of original methods for dynamic monitoring of the infection process, through quantitative PCR and quantification of specific lipids

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Gouju, Julien. "Importance de la voie Cdk4-EZH2 dans l'échappement à la sénescence induite par la chimiothérapie." Thesis, Angers, 2016. http://www.theses.fr/2016ANGE0056/document.

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Abstract:

La sénescence induite par chimiothérapie permet l’arrêt pérenne de la division des cellules tumorales. Néanmoins, ce mécanisme de suppression tumorale peut être neutralisé par certaines cellules traitées, ce qui se traduit généralement par une rechute des patients. Récemment, nous avons décrit dans des cellules colorectales un mécanisme d’échappement à la sénescence induite par le SN-38 dépendant de la protéine de survie MCL1. Cette étude montre que les cellules sénescentes (PLS) favorisent la prolifération des cellules non-sénescentes (PLD) par l’intermédiaire de signaux mitogéniques activant la kinase Cdk4 et par conséquent la reprise de la division. Nous démontrons que Cdk4 inhibe Rb par phosphorylation de la sérine 780, permettant l’activation des fonctions transcriptionnelles des facteurs E2F sur les gènes du cycle cellulaire. La perte d’activité de Cdk4 par ARN interférence ou par le Palbociclib réduit l’émergence de clones proliférants. La méthyltransférase EZH2 est une cible de E2F exclusivement exprimée par les PLD et son expression dépend de l’activité de Cdk4. Par ailleurs, l’utilisation d’ARN interférence dirigé contre EZH2 ou des inhibiteurs chimiques DNZepA et GSK343 réduit également l’émergence de clones proliférants. Enfin, son inhibition potentialise à la fois l’arrêt de la division et la sénescence en réponse au Palbociclib dans les cellules ayant échappé au SN-38. Ainsi, ces travaux ont permis de mettre en évidence un rôle important de EZH2 en tant qu’effecteur de Cdk4 dans le mécanisme d’échappement au SN-38, une voie susceptible d’apporter des nouvelles cibles thérapeutiques dans le traitement du cancer
Chemotherapy-induced senescence enables to trigger a durable division arrest of tumor cells. However, this tumor suppressor mechanism is neutralized in some treated cells leading mostly to cancer relapse in patients. Recently, we have described a MCL1-dependent mechanism of escape in SN-38-induced senescence from colorectal cell lines. In this study, we showed that senescent cells (PLS cells) promoted the non senescent cells (PLD cells) proliferation through mitogenic signals stimulating Cdk4 kinase activity and subsequently the cell cycle. We demonstrated that Cdk4 phosphorylated Rb on the serine 780 to inhibit its activity, allowing E2F- family transcriptional functions activation on cell cycle targets. Loss of Cdk4 expression or activity induced by RNA interference or Palbociclib reduced the emergence of proliferating clones. TheEZH2-methyltransferase, a E2F transcriptional target, is only expressed by PLD cells and this expression depends on Cdk4 activity. Moreover, loss of EZH2 expression or activity, by RNA interference or by DZNepA and GSK343 inhibitors, reduced the emergence of proliferating cells. Finally, EZH2 inhibition promotes both cell division arrest and senescence in response to Palbociclibin the SN-38-escaped cells. To conclude, this study enabled to highlight a major role of EZH2 as effector of Cdk4 in the escape mechanism induced by SN-38 a signaling pathway offering newtargeted cancer therapies

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Kovalenko, Lesia. "Sélection et caractérisation de molécules ciblant la protéine de la nucléocapside de VIH-1." Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ086.

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Abstract:

La tri-thérapie utilisée pour le traitement du VIH-1 est efficace mais limitée par l'apparition de résistances. Par conséquent, des cibles virales alternatives sont nécessaires. Une des cibles les plus prometteuses est la protéine nucléocapside (NC), qui est hautement conservée et qui joue un rôle essentiel dans le cycle viral. Dans ce contexte, le projet européen THINPAD a eu pour but de développer des inhibiteurs de la NC en combinant plusieurs approches : criblage virtuel, criblage secondaire in vitro, tests antiviraux et de toxicité. Pour le criblage in vitro, nous avons utilisé le test de déstabilisation de cTAR, hautement spécifique de l’activité chaperonne de NC. Cinq séries de molécules ont été sélectionnées par les premiers criblages et tests antiviraux. Après des études de relation structure-activité, une seule des cinq séries a été poursuivie jusqu’aux tests d'efficacité chez les souris. Les composés de cette série présentent une activité antivirale à des concentrations nanomolaires, mais ne sont pas actifs dans le modèle murin. Les études de mécanisme d'action ont révélés que leur activité antivirale était bien consécutive au ciblage de la NC
Highly Active Anti-Retroviral Therapy (HAART) is successfully used for HIV-1 treatment, but is hampered by the appearance of drug resistance. Thereby, alternative drug targets are required. One of the most promising target is the nucleocapsid protein (NC), which is highly conserved and plays essential role in HIV life cycle. In this context, the European project THINPAD was organized with the aim to develop NC inhibitors. To fulfil this objective, several approaches were used, including virtual screening, in vitro secondary screening, in cellulo antivirals tests, and toxicity evaluation. For in vitro screening, the specific NC-promoted cTAR destabilization assay was used. Five series of molecules were selected by the first screenings and antiviral tests. After structure-activity relationship studies, only one series was continued until efficacy testing in mice. The compounds of this series exhibit antiviral activity at nanomolar concentrations but are not active in the murine model. The mechanisms of action studies revealed that their antiviral activity was indeed consecutive to the targeting of the NC

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Vittu, Anaïs. "Outils bioinformatiques pour l'analyse génétique de la résistance du moustique Anopheles gambiae vis-à-vis des parasites du paludisme." Thesis, Strasbourg, 2015. http://www.theses.fr/2015STRAJ096/document.

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Abstract:

Au cours de ma thèse, j’ai développé et mis en place de nouvelles méthodes utilisant les récentes technologies du séquençage à très haut débit, des outils bioinformatiques et du «reciprocal allele-specifique RNA interference » (rasRNAi) dans l’objectif d’identifier les facteurs génétiques et non génétiques responsables de la résistance du moustique Anopheles gambiae aux parasites du paludisme murin Plasmodium berghei. J’ai mis en place une stratégie d’identification des polymorphismes dans les lignées résistantes et sensibles afin de sélectionner des marqueurs génétiques pour de futures analyses génétiques et lister les gènes polymorphiques. J’ai contribué à l’élaboration de nouvelles sondes ARN double-brin (dsRNAs) allèle spécifique pour la méthode du rasRNAi en identifiant le processus de découpage du dsRNA injecté chez des moustiques par l’analyse des petits ARNs séquencés issus du dsRNA injecté. J’ai élaboré un pipeline pour identifier la composition du microbiote des lignées sensibles et résistantes dans le but de les comparer
During my PhD, I developed and implemented new methods and tools using the latest technologies of the Next Generation Sequencing, bioinformatics tools and the « reciprocal allele-specific RNA interference » (rasRNAi) method with the aim of identifying genetic and non-genetic factors responsible for the resistance of the mosquito Anopheles gambiae to the mouse malaria parasites Plasmodium berghei. I have implemented a strategy for identifying polymorphisms in the resistant and susceptible lines to (1) select genetic markers for future genetic analysis and (2) list the polymorphicgenes. I contributed to the development of a new allele-specific dsRNA probe for the rasRNAi method by identifying how mosquitoes process the injected dsRNA by the analysis of sequenced small RNAs from the injected dsRNA. I developed a pipeline to identify the microbiota composition in susceptible and resistant lines in order to compare them

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Moreau, Marie. "Les cellules sénecentes comme niche de survie : rôle de la voie TSP1-CD47." Thesis, Angers, 2017. http://www.theses.fr/2017ANGE0078.

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Abstract:

Activée par la chimiothérapie, la sénescence est un mécanisme suppresseur de tumeur qui bloque la progression tumorale. Cependant, des cellules cancéreuses sont capables d’échapper à cette pression ce qui provoque une rechute clinique. Nous avons récemment décrit que les cellules émergentes acquièrent la capacité de résister à l’anoïkis et dépendent de Mcl-1. Cette voie de survie est activée par la kinase Akt qui inhibe la protéine Noxa et l’apoptose. L’une des caractéristiques de la sénescence est l’apparition d’un phénotype sécrétoire appelé SASP qui peut induire des effets délétères aux cellules voisines. Dans cette étude nous avons observé que le sécrétome des cellules persistantes induit la résistance à l’anoïkis, la migration et l’invasion des cellules parentales. Des études de protéomique réalisées au laboratoire ont montré que laTSP-1 est surexprimée dans les stades avancés de tumeurs de patients du sein et du colon. Lors de la persistance, la TSP-1 et son récepteur CD47 sont exprimés plus fortement par les cellules sénescentes. Le blocage de la TSP-1 ou de sa liaison à CD47 augmente l’émergence et induit la formation de sphéroïdes traduisant une augmentation de la proportion de cellules souches. Les facteurs d’auto-renouvellement Nanog etKlf4 sont induits précocement en réponse au traitement. Suite à l’inactivation de CD47 ou à une stimulation avec laTSP-1, l’expression de Nanog est bloquée. L’inhibition de Nanog ou de Klf4 diminue l’émergence. Ainsi, dans les cellules sénescentes, CD47 activerait le mécanisme d’auto-renouvellement et favoriserait l’émergence. En seliant, la TSP-1 bloquerait ces mécanismes et agirait comme un suppresseur de tumeur
Activated by chemotherapy, senescence is a suppressive mechanism that prevents tumor progression. However some cancer cells can emerge and induce clinical relapse. We have recently described that emergent cells resist toanoikis and depend on Mcl-1. This survival pathway is activated by Akt kinase that inhibits Noxa and apoptosis. One of the caracteristics of senescence is the appearance of the secretory phenotype called SASP that can induce deleterious effects to neighboring cells. In this study, we observed that the secretome of persistant cells induces anoïkis resistance, migration and invasion of parental cells. Proteomics analysis performed at laboratory showed that TSP-1 is over expressed in advanced stages of colon and breast tumors. During persistance, TSP-1 and its receptor CD47 are more expressed by senescent cells. Blockade of TSP-1 or its binding on CD47 increases persistence and induces spheroïds generation showing an increase in the proportion of stem cells. Self-renewal factors Nanog and Klf4 are early expressed following treatment. Following CD47 inactivation or stimulation withTSP-1, the expression of Nanog is blocked. The inhibition of Nanog or Klf4 reduces emergence. So, in senescent cells, CD47 could activate self-renewal and could promote emergence. By linking to its receptor, TSP-1 could block these processes et coud act as a tumor suppressor

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Vetillard, Alexandra. "Rôle de la kinase Akt dans la chimiorésistance : Régulation de l’équilibre Apoptose-Sénescence." Thesis, Angers, 2015. http://www.theses.fr/2015ANGE0078.

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Abstract:

Activée par la chimiothérapie, la sénescence est un mécanisme suppresseur de tumeur qui empêche la progression tumorale. Cependant, certaines cellules cancéreuses sont capables d’émerger et de provoquer une rechute clinique. Les mécanismes mis en place par les cellules pour échapper à la sénescence ne sont pas encore clairement connus. Nous avons récemment décrit que les cellules qui échappent à la sénescence résistent à l’anoïkis et sont dépendantes de Mcl-1. Dans cette étude, nous caractérisons plus en détail cette émergence en réponse à l'irinotécan, un traitement de première ligne utilisé dans le cancer colorectal. Nos résultats indiquent que la kinase Aktest activée comme une voie de survie lors de l'étape précoce de la sénescence et qu’elle est également réactivée lors de l’émergence. L'inhibition de la kinase avec le GSK690693 empêche l’émergence et améliore l’efficacité du traitement, à la fois in vitro et in vivo. Cette amélioration a été corrélée à l'inhibition de la sénescence et l’activation concomitante de l'apoptose via l’inactivation de Mcl-1 par Noxa. De plus, en utilisant des cellules p21Waf1 déficientes, nous avons confirmé que la voie p53-p21, principal régulateur de la sénescence, favorise l’émergence. A l’inverse, son inhibition améliore l'efficacité du traitement par induction de l'apoptose. Ces résultats mettent en évidence que l'inhibition d’Akt améliore l’efficacité de l’irinotécan et empêche l'émergence de cellules persistantes en diminuant la sénescence au profit de la réponse apoptotique. Par conséquent, nous proposons que l’utilisation d’inhibiteurs d’Akt en thérapies séquentielles devrait être considérée dans le futur pour améliorer le traitement des cancers colorectaux réfractaires à l’irinotécan
Activated by chemotherapy, senescence is a tumor suppressive mechanism that prevents tumor progression. However, some cancer cells can emerge to induce clinical relapse. The mechanisms set up by cells to escape senescence are not yet clearly known. We have recently described that cells that escape senescence are more transformed than non treated parental cells ; they resist anoikis and depend on Mcl-1. In this study, we further characterize this emergence in response to irinotecan, a first line treatment used in colorectal cancer. Our results indicate that the Akt kinase was activated as a feedback pathway during the early step of senescence and also during emergence. Inhibition of the kinase with GSK690693 prevented cell emergence and improved treatment efficacy, both in vitro and in vivo. This improvement was correlated with senescence inhibition, p21waf1 down regulation and a concomitant activation of apoptosis due to Noxa upregulation and Mcl-1 inactivation. Indeed, Noxa inactivation prevented apoptosis and increased the number of emergent cells. Moreover, using p21waf1-deficient cells, we further confirmed that an intact p53-p21-senescence pathway favored cell emergence and that its down regulation improved treatment efficacy through apoptosis induction. These results highlight that Akt inhibition improves irinotecan treatment and prevent cell emergence by switching the senescence response to apoptosis. Therefore, we propose that use of Akt inhibitors in sequential therapies should be considered in future to improve the treatment of irinotecan-refractory colorectal cancers

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Mezher, Joelle. "Immunité innée et contre-mesures virales : études structurales et biophysiques du complexe formé entre la cytidine désaminase humaine APOBEC3G et le facteur d'infectivité virale du VIH-1." Thesis, Strasbourg, 2015. http://www.theses.fr/2015STRAJ053/document.

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Abstract:

La protéine Vif (Viral infectivity factor) joue un rôle essentiel dans la réplication virale et dans le pouvoir infectieux du VIH-1. Elle est aussi qualifiée de « protéine de contre-défense » car elle neutralise un facteur cellulaire à action antivirale, APOBEC3 en recrutant le complexe de la E3 ubiquitine ligase formé de CBFβ/EloB/EloC/Cul5/Rbx2, qui va entrainer sa polyubiquitinilation et sa dégradation. APOBEC3 comprend une famille de protéines présentes dans les mammifères et capable d'induire des mutations dans l'ADN viral.La structure tridimensionnelle des molécules et complexes macromoléculaires étant intimement liée à la fonction, il est primordial de connaître la place d’A3G/F dans le complexe Vif-CBFβ-EloB-EloC ainsi que les détails des interactions entre Vif et A3G/F, ceci dans une perspective thérapeutique.La co-expression des différentes protéines de ce complexe a été réalisée dans deux systèmes d’expression : bactérien (E. coli) et eucaryote (BHK21) dû au manque de solubilité d’APOBEC et de la difficulté de sa cristallisation. Une fois les protéines exprimées et le complexe Vif-CBFβ-EloB-EloC-A3G/F formé dans les deux systèmes, des tests de cristallisation et des études structurales seront réalisés pour caractériser la structure et la fonction des protéines.Dans E. coli, j’ai réussi à obtenir le complexe Vif/CBFβ/EloB/EloC/Cul5 in vivo et in vitro de manière soluble, pure, monodisperse ainsi qu’en quantité adéquate avec les études biophysiques envisagées. Par contre, je n’ai pas réussi à surexprimer A3G. En passant dans les cellules de hamster BHK21 et en appliquant la technique du virus de la vaccine, nous avons réussi à obtenir le complexe Vif-CBFβ-EloB-EloC-A3G/F mais en quantité insuffisante pour la cristallisation.Les perspectives de ce projet seront d’améliorer : (1) les rendements du complexe pour des tests de cristallisation et (2) la pureté du complexe pour réaliser la cryo-microscopie électronique
APOBEC3 are human antiviral cytidine deaminase and RNA/DNA-editing enzymes that belong to the innate immune defense system, targeting retroviruses or retrotransposons. Among all APOBEC3 proteins, hA3B, hA3C, hA3DE, hA3F and hA3G are able to interfere negatively with HIV-1 infectivity: they induce a deamination of dC to dU in the minus strand DNA, resulting in G to A hypermutation in the plus strand DNA. This hypermutation results either into a degradation of U-rich DNA strands by the uracyl-DNA glycosylase or into the production of aberrant viral protein. In addition, a deaminase-independent mechanism is able to inhibit the HIV-1 reverse transcription through a yet unknown mechanism.To evade the host defense system, HIV expresses the virion infectivity factor, Vif, which causes the degradation of APOBEC3G by the proteasome by recruiting the E3 ubiquitin ligase complex composed of the CBFβ, EloB, EloC, Cullin5, Rbx2 proteins. The goal of this study will be the determination of the X-ray structure of the Vif/APOBEC-3 complex. Understanding this molecular recognition might be useful to direct structure-based design of anti-HIV drugs that act by inhibiting the action of Vif and lead to new anti-HIV drugs.To overcome the solubility problems of Vif and APOBEC3G/F, a co-expression strategy had been applied with the different E3 ubiquitin ligase proteins both in prokaryotic (E. coli) and eukaryotic (BHK21) systems. Once the complex obtained, we will perform several structural and biophysical studies as well as crystallization trials.In E. coli, I managed to obtain the Vif/CBFβ/EloB/EloC/Cul5 complex in vivo and in vitro, soluble, monodisperse and in good quantities for structural studies. The protein A3G was not obtained in E. coli even by co-expression with the complex.On the other side, I succeeded in obtaining the polyprotein Vif-CBFβ-EloB-EloC-A3G/F complex in the hamster cells (BHK21) by applying the vaccinia virus strategy. Optimizing the yield and the purity is necessary for crystallization and more structural studies

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Lepiller, Quentin. "Rôle de l'indoléamine-2,3-dioxygénase dans la persistance des infections virales." Thesis, Strasbourg, 2015. http://www.theses.fr/2015STRAJ008/document.

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Abstract:

L’indoléamine-2,3-dioxygénase (IDO) est une enzyme du catabolisme du tryptophane suspectée de jouer un double rôle lors des infections en contribuant aux défenses innées de l’hôte et en régulant la réponse immunitaire. IDO est exprimée au cours de l’infection par le virus de l’hépatite C (VHC). Cependant, les mécanismes moléculaires conduisant à l’expression de IDO lors de l’hépatite C et l’impact de IDO sur la réplication virale et sur la réponse immunitaire ne sont pas connus. Dans ce travail de thèse, nous avons montré que le VHC stimule l’expression de IDO dans les hépatocytes.L’expression de IDO était transitoire et coïncidait avec l’expression des interférons (IFNs) de types I et III et avec la transcription de gènes stimulés par les IFNs. L’expression de IDO était également augmentée dans les hépatocytes exposés à la présence de lymphocytes T CD4+ activés et producteurs d’IFN-γ. L’expression hépatique de IDO diminuait la réplication virale, ce qui suggère que IDO limite la diffusion du VHC dans le foie au cours de l’hépatite C. Grâce à des expériences de silencing, nous avons montré que IDO contribue à l’effet antiviral de l’IFN-α sur le VHC. L’expression de IDO était régulée par l’activation des facteurs de transcription IRF-1 et STAT-1 dans les hépatocytes infectés par le VHC. En plus de son effet antiviral sur le VHC, l’expression hépatique de IDO inhibait significativement la prolifération des lymphocytes T CD4+ activés, suggérant un rôle immunorégulateur de IDO au cours de l’hépatite C. Nos données suggèrent donc que IDO joue un double jeu lors de l’hépatite C, en limitant la réplication virale et en régulant la réponse immunitaire adaptative de l’hôte. Notre travail ouvre la voie à des expérimentations in vivo et à des études cliniques visant à préciser la place des inhibiteurs pharmacologiques de IDO dans l’arsenal thérapeutique contre le VHC
Indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO) is a tryptophan-catabolizing enzyme that plays a dual role during infectious diseases by contributing to the innate defenses against pathogens and by regulating the immune response. IDO is expressed in patients with hepatitis C virus (HCV) infection. However, the molecular mechanism of IDO induction in HCV infection and its role in the antiviral immune response remain unknown. Using primary human hepatocytes, we have shown that HCV infection stimulates IDO expression. IDO gene induction was transient and coincided with the expression of type I and type III interferons (IFNs) and IFN-stimulated genes (ISGs) in HCV-infected hepatocytes. IDO expression was also stimulated when the hepatocytes were incubated with IFN-γ-secreting CD4+ T cells. Expression of IDO prior to HCV infection significantly impaired HCV replication in hepatocytes, suggesting that IDO limits the spread of HCV in the liver. By using siRNA-mediated IDO knockdown experiments, we have shown that IDO contributes to the IFN-α-antiviral effect on HCV replication. IDO expression was regulated by IRF-1 and STAT-1 in HCV-infected hepatocytes. Hepatic IDO expression also had a significant inhibitory effect on CD4+ T cell proliferation, suggesting an immunoregulatory role of IDO during HCV infection. Our data suggest that hepatic IDO plays a dual role during HCV infection by retarding viral replication and also regulating host immune responses. This work paves the way for in vivo experiments and clinical studies aiming to determine the relevance of pharmacological inhibition of IDO during HCV infection

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Tanguy, Schmidt Aline. "Les leucémies aiguës lymphoblastiques en 2015 : contribution des facteurs de risque cytogénétiques et moléculaires à une thérapeutique adaptée." Thesis, Angers, 2015. http://www.theses.fr/2015ANGE0041/document.

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Abstract:

Les leucémies aiguës (LA) sont un groupe hétérogène d'hémopathies malignes dues à latransformation oncogénique clonale des cellules souches hématopoïétiques (CSH). On distingue les LA myéloblastiques etlymphoblastiques (LAL). Les LAL sont classées selon le type de précurseur lymphoïde atteint, leur degré de maturité et leurs anomalies cytogénétiques.Le traitement permettant d'obtenir 80 à 90 % de rémission complète (RC) comporte une chimiothérapie d'induction, une consolidation et une intensification(intensification retardée ou allogreffe de CSH selon la situation pronostique). Néanmoins la survie globale à long terme n'est que de 40 à 50 %, du fait de la survenue de rechutes et de la toxicité des traitements. Différents groupes pronostiques basés sur la cytogénétique et la biologie moléculaire se dégagent,pouvant bénéficier de thérapeutiques adaptées. Dans les LAL à chromosome philadelphie (LAL à Ph),antérieurement de mauvais pronostic, les inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK) permettent d'obtenir 80% de RCavec cependant un taux de rechute non négligeable. Nous avons démontré qu'une intensification thérapeutique par autogreffe chez des patients avec une maladie résiduelle indétectable permettait une survie à long terme prolongée avec une toxicité moindre que celle de l'allogreffe. En montrant l'implication de l'autotaxine dans les mécanismes de résistance aux ITK dans les LAL à Ph, nous ouvrons la voie à l'utilisation potentielle de nouvelles thérapeutiques. Dans les LAL T, groupe considéré de bon pronostic, un tiers des patients rechute. Nous avons démontré que l'absence de mutation de Notch et/ou FBXW7 ou la présence de mutations de RAS ou PTEN était de mauvais pronostic identifiant un sous-groupe de LAL T dont le traitement devait être renforcé. Nos travaux ont ainsi contribué à l'identification des groupes pronostiques dans les LAL et à l'adaptation des traitements afin d'améliorer les chances de survie
Acute leukemias are a heterogeneous groups of malignant hematological diseases due to the clonaloncogenic transformation of hematopoietic stem cells(HSTs). We distinguish acute myeloblastic leukaemiafrom acute lymphoblastic leukemia (ALL). ALLs are classified according to the type of lymphoid precursoraffected, its degree of maturity, and with associated cytogenetic abnormalities.Treatment incorporating induction therapy,consolidation, and intensification – delayedintensification or allogeneic stem cell transplantation(SCT) according to prognostic factors – enable 80 to 90% of complete remission (CR). Nevertheless, long-termoverall survival is only 40 to 50% because of relapseand treatment-related toxicity. Different prognosticgroups based on cytogenetic abnormalities andmolecular biology are emerging and patients from eachprognostic group can benefit from adapted therapies.In chromosome Philadelphia-positive ALL (Ph+ ALL) which used to be of particular bad prognosis, tyrosinekinase inhibitors (TKIs) enables 80% of CR but with ahigh-relapse risk. We demonstrated that high-dosetherapy followed by autologous SCT enables prolongedlong-term survival with less drug-related toxicity ascompared to allogeneic SCT in patients with undetectable minimal residual disease. By showing the implication of autotaxine in the resistance to TKIs inPh+ LAL, we enable the use of novel therapeutics inclinical practice.T-cell ALL is considered of poor prognosis as one thirdof patients relapse. In this group of patients we showedthat the absence of a Notch and/or a FBXW7 mutation or the presence of mutations in RAS or PTEN identified a subgroup of patients in whom the treatmentmust be intensified. Our research has contributed to the identification of prognostic groups in ALL and to theadjustment of treatment according to potential survival

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Dissertations / Theses on the topic 'Résistance aux substances – Dissertations universitaires'

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