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Dissertations / Theses on the topic 'Respiration – Régulation – Modèles animaux'
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Genest, Sophie-Emmanuelle. "Conséquence de la séparation maternelle néonatale sur le développement du système de contrôle respiratoire : étude des chémoréflexes et de la neurotransmission GABAergique." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24411/24411.pdf.
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Fournier, Stéphanie. "Développement de la modulation noradrénergique du système de contrôle de la respiration chez Rana Catesbeiana." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24454/24454.pdf.
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Niane, Lalah Malika. "Neurotransmission par l'acétylcholine et l'adénosine tri-phosphate dans le contrôle périphérique de la respiration chez le rat en développement : rôle des récepteurs nicotiniques et P2X." Thesis, Université Laval, 2012. http://www.theses.ulaval.ca/2012/29191/29191.pdf.
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Poulin, Anne-Marie. "Rôle du thalamus médian dorsal dans la régulation de l'axe hypophyso-cortico-surrénalien et le comportement alimentaire." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25474/25474.pdf.
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Tremblay, Frédéric. "Régulation nutritionnelle de l'action de l'insuline sur le métabolisme du glucose : implication de la voie de signalisation mTOR." Thesis, Université Laval, 2004. http://www.theses.ulaval.ca/2004/21816/21816.pdf.
Full textAbstract:
L’insuline est une hormone sécrétée par les cellules β du pancréas qui maintient l’homéostasie glucidique en stimulant, notamment, l’entrée du glucose dans le muscle squelettique et le tissu adipeux en situation postprandiale. Elle exerce ces effets en enclanchant une cascade de signaux intracellulaires médiés via son interaction avec le récepteur de l’insuline et culminant vers la translocation des transporteurs de glucose GLUT4 à la surface cellulaire. La régulation de l’action de l’insuline sur le transport du glucose peut être affectée de façon importante par les nutriments, tels que les glucides, lipides et protéines. Les diverses études présentées dans cette thèse montreront le rôle important des facteurs nutritionnels dans la modulation de la signalisation insulinique et de la translocation de GLUT4 dans le muscle squelettique de rats, ainsi que dans des cellules musculaires et adipeuses in vitro.
La première étude fut réalisée chez des rats nourris avec une diète riche en lipides où nous avons montré, chez ces derniers, des défauts d’activation de la phophatidylinositol (PI) 3- kinase ainsi que de ses effecteurs proximaux, l’Akt et les protéines kinases C atypiques, par l’insuline. Cette défectuosité de la signalisation insulinique s’accompagnait d’une diminution de la translocation de GLUT4 autant à la membrane plasmique qu’aux tubules transversaux (T) comparativement à celle observée chez des animaux nourris avec une diète de type chow. Lors de notre deuxième étude, nous nous sommes intéressés à élucider les mécanismes cellulaires par lesquels les protéines issues de la morue prévenaient le développement de la résistance à l’insuline chez des rats rendus obèses suite à l’ingestion d’une diète hyperlipidique. Nous avons en effet observé que ces protéines, comparativement à la caséine et à la protéine de soya, normalisaient l’action de l’insuline sur l’activation de la voie PI 3-kinase/Akt et rétablissaient presqu’entièrement la translocation de GLUT4 au niveau des tubules T. Dans notre troisième étude, nous nous sommes intéressés au rôle des acides aminés sur l’action de l’insuline dans les cellules musculaires L6 en culture. Nous avons montré que l’ajout d’acides aminés au milieu d’incubation réduisait la stimulation du transport du glucose par l’insuline, un phénomène complètement bloqué par la rapamycine, un inhibiteur hautement spécifique de la mammalian target of rapamycin (mTOR). En effet, nous avons observé que les acides aminés potentialisaient l’activation de la voie mTOR, telle que mesurée par la phosphorylation de la p70 S6 kinase, par l’insuline. Finalement, le rôle de la voie mTOR fut étudié dans les adipocytes 3T3-L1 en culture lors de notre quatrième étude. Nous avons observé que l’activation de cette voie par l’insuline seule ou par les acides aminés en conjonction avec l’insuline menait à une diminution très rapide de l’action de l’insuline sur le transport du glucose en découplant l’activation de la PI 3-kinase à celle de l’Akt.
L’ensemble de ces études montre le rôle important que jouent les nutriments, plus particulièrement les protéines et les acides aminés, sur l’action de l’insuline dans les cellules musculaires et adipeuses.Inscrit au Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures
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Kodjo, Magloire K. "Contribution à l'étude du mécanisme d'action des tachykinines dans la régulation de la stéroïdogénèse surrénalienne chez les amphibiens." Rouen, 1996. http://www.theses.fr/1996ROUES048.
Full textAbstract:
La surrénale de la grenouille Rana ridibunda est richement innervée par un réseau de fibres contenant deux tachykinines, i. E. La ranakinine et la [Leu3, Ile7]neurokinine A. Ces deux tachykinines stimulent la sécrétion des corticostéroïdes in vitro. L'objectif du présent travail était de déterminer le mode d'action de la ranakinine sur la surrénale de grenouille et d'analyser les mécanismes de transduction associés à son effet corticotrope. Les observations en microscopie optique et électronique ont montré que les fibres A tachykinines sont étroitement associées aux seules cellules chromaffines. Par ailleurs, la ranakinine stimule la sécrétion de stéroïdes par des tranches de surrénale mais non par des cellules dissociées. Le marquage cytoautoradiographique des cellules surrénaliennes en culture primaire indique que les sites de liaison aux tachykinines sont exclusivement localisés sur les cellules chromaffines. Enfin, la mesure des concentrations cytosoliques de calcium [Ca2+]i par la technique de microfluorimétrie a montré que les tachykinines sont dépourvues d'effet sur les cellules stéroïdogènes alors qu'elles provoquent une augmentation massive, transitoire et dose-dépendante de la [Ca2+]i dans les cellules chromaffines. L'ensemble de ces résultats suggère que, chez les amphibiens, les tachykinines exercent une stimulation indirecte de la stéroïdogénèse surrénalienne par activation des cellules chromaffines. L'effet des tachykinines met en jeu des récepteurs spécifiques, couplés positivement à une phospholipase C, dont les caractéristiques pharmacologiques sont intermédiaires entre celles des récepteurs NK-1 et NK-2 des mammifères. L'activation de ces récepteurs se traduit par une production d'IP3 qui provoque une mobilisation de calcium a partir des pools intracellulaires. Le calcium ainsi libéré va vraisemblablement favoriser l'exocytose des granules chromaffines contenant divers facteurs capables de stimuler l'activité des cellules corticosurrénaliennes adjacentes.
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Roy, Christian. "Les mécanismes de dépense énergétique associés avec l'ASP et son récepteur C5L2." Thesis, Université Laval, 2009. http://www.theses.ulaval.ca/2009/25928/25928.pdf.
Full textAbstract:
L’obésité est un problème de santé majeur qui se traduit par un débalancement du métabolisme énergétique. Il est maintenant connu que le tissu adipeux, en tant qu’organe endocrinien, joue un rôle important dans le métabolisme énergétique. La protéine stimulant l’acylation (ASP, C3adesArg) est une protéine produite par le tissu adipeux qui stimule la synthèse des triglycérides (TG) et le transport du glucose en se liant à son récepteur C5L2. Les souris avec le gène invalidé C3 (C3KO) sont ASP-déficientes, hyperphagiques et de poids normal, démontrant une dépense énergétique plus élevée que les souris sauvages. En chambre calorimétrique, ceci ce traduit par une augmentation de la consommation d’oxygène ainsi qu’une diminution du quotient respiratoire, suggérant une préférence pour les lipides comme substrat énergétique. Il est maintenant notre objectif de déterminer si la régulation par l’ASP de la dépense énergétique pourrait nous amener vers un traitement de l’obésité.Obesity is a well established problem in North America and studying the mechanisms of fat storage may be key in understanding and treating this problem. Acylation Stimulating Protein (ASP) is an adipose tissue derived hormone that acts through its receptor, C5L2, to stimulate triglyceride (TG) synthesis and glucose transport. C3 is the precursor for ASP; therefore, C3 knockout (KO) mice are ASP-deficient. These mice display hyperphagia yet normal body weight due to increased energy expenditure. Calorimetric chamber studies demonstrated that C3KO have increased oxygen consumption and lowered respiratory quotient, indicating that deficiency of ASP alters substrate preference for energy metabolism in C3KO mice. It still remains to be determined whether the alterations in skeletal muscle energy metabolism are a direct or indirect consequence of ASP deficiency, but in vivo data suggest targeting ASP may provide insights toward treatment of obesity.
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Roy, Christian. "La voie ASP/C5L2 dans le métabolisme énergétique." Thesis, Université Laval, 2014. http://www.theses.ulaval.ca/2014/30270/30270.pdf.
Full textAbstract:
L’obésité est un problème de santé majeur qui se traduit par un déséquilibre du métabolisme énergétique. La protéine stimulant l’acylation (ASP, C3adesArg) est une protéine produite par le tissu adipeux qui stimule la synthèse des triglycérides (TG) et le transport du glucose en se liant à son récepteur C5L2. Nos études précédentes ont établi que les souris avec le gène C3 invalidé (C3KO) sont des souris déficientes en ASP, hyperphagiques, mais de poids normal, affichant une dépense énergétique plus élevée que les souris sauvages. C’est à partir de ces résultats que nous avons basé notre objectif de déterminer le rôle de la voie ASP-C5L2 dans le métabolisme énergétique et cela autant au niveau du cerveau que des organes périphériques. Lors de notre première étude, nous avons observé qu’une injection centrale d’ASP au niveau du troisième ventricule chez des rats Wistar, amenait une diminution de la prise alimentaire et du poids corporel ainsi qu’une augmentation de l’expression d’ARNm du neuropeptide anorexigène pro-opiomélanocortine (POMC) dans la région du noyau arqué. Nos études révèlent également que les niveaux de lipides intramyocellulaires (IMCL) sont augmentés de six fois chez les souris déficientes en C5L2 (C5L2KO) par rapport aux souris sauvages (WT) suite à un régime riche en graisse. De plus, chez les sujets humains, l’expression protéique de C5L2 est réduite chez les patients diabétiques de type 2 par rapport aux témoins obèses. L'entraînement physique a augmenté l’expression protéique de C5L2 et la production d’ASP chez les hommes obèses insulino-résistants. Enfin, nos travaux avec les souris déficientes pour le récepteur du C5a (C5aRKO) montrent qu’après 12 semaines de diète riche en graisse et en sucre (DIO), les souris C5aRKO présentent une diminution du poids corporel ainsi que des dépôts adipeux gonadiques et inguinaux plus petits que leurs homologues WT. Des taux de triglycérides et d'acides gras non-estérifiés plasmatiques plus faibles et une clairance postprandiale plus rapide des triglycérides ont aussi été constatés. Nous avons donc démontré que la voie ASP/C5L2 représente une cible intéressante autant dans le contrôle de la prise alimentaire que dans le métabolisme des acides gras du muscle squelettique.Obesity is a major health problem that results in an imbalanced energy metabolism. Acylation Stimulating Protein (ASP, C3adesArg) is a protein produced by the adipose tissue, which stimulates triglycerides (TG) synthesis and glucose transport by binding to its receptor C5L2. Our previous studies have shown that mice with a disabled C3 gene (C3KO) are ASP deficient, hyperphagic but of normal weight and demonstrate greater energy expenditure than wild-type mice. From these results, our goal was to determine the role of the ASP-C5L2 pathway in energy metabolism. In our first study, we observed that a central injection of ASP in the third ventricle of Wistar rats brought a reduction in food intake and body weight gain and an increased mRNA expression of the anorexigenic neuropeptide POMC in the region of the arcuate nucleus. Our studies also showed that the levels of intramyocellular lipids (IMCL) were increased six-fold in C5L2-deficient mice (C5L2KO) compared to wild mice (WT) after a high-fat diet. Furthermore, in humans, the protein expression of C5L2 is reduced in patients with type 2 diabetes compared with obese controls. Physical training increased protein expression of C5L2 and ASP output in obese insulin-resistant men. Finally, our work with C5a receptor-deficient mice (C5aRKO) showed that after 12 weeks of a high-fat and high-sugar diet (DIO), the C5aRKO mice exhibited reduced body weight and smaller gonadal and inguinal fat mass than their WT counterparts. This was accompanied with lower plasma levels of non-esterified fatty acids and triglycerides and faster postprandial triglyceride clearance. Our studies have demonstrated that the ASP/C5L2 pathway represents an attractive target in the control of food intake and skeletal muscle fatty acid metabolism.
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Gingras, Andrée-Anne. "Implication des acides gras oméga-3 à longue chaîne dans la régulation de la sensibilité musculaire à l'insuline des métabolismes du glucose et des acides aminés chez les bouvillons en croissance." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25386/25386.pdf.
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Montandon, Gaspard. "Conséquences à long terme de la caféine administrée en période néonatale sur le développement du contrôle respiratoire du rat : étude des plasticités du contrôle respiratoire, de la fonction cardiovasculaire et de la régulation du sommeil." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25709/25709.pdf.
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Pagé, Julie. "Régulation et fonctions du récepteur GPR84 dans le cerveau dans des conditions inflamatoires." Master's thesis, Université Laval, 2009. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20739.
Full textAbstract:
Lors d'études antérieures, l'analyse du transcriptome des cellules micro gliales à l'aide de micropuces à ADN nous a permis d'identifier le récepteur transmembranaire GPR84. Dans la présente étude, nous avons testé l 'hypothèse que la transcription du GPR84 est augmentée dans la microglie durant l'inflammation. Plus précisément, nous avons étudié la régulation du GPR84 dans le cerveau durant une endotoxinémie et une encéphalomyélite autoimmune expérimentale (EAB) . Nos résultats ont montré une augmentation de l'expression du GPR84 au cours de ces deux conditions inflammatoires, et ce uniquement dans la microglie. Nous avons ensuite tenté d'identifier le rôle du GPR84 en testant l 'hypothèse selon laquelle ce récepteur modulerait le développement des symptômes dûs à l'inflammation. À l'aide de souris déficientes en GPR84, nous avons évalué l'influence de ce récepteur durant une EAB, une endotoxinémie et une encéphalite induite par le virus de l 'herpès simplex de type 1. Nous n'avons observé aucune influence du GPR84 dans ces modèles. Nous concluons que le GPR84 est exprimé non spécifiquement dans plusieurs conditions neuroinflammatoires, mais qu'il n'y exerce pas toujours un effet significatif et que son rôle reste inconnu.
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Nadeau, Mélanie. "Effet de l'érythropoïétine sur la fonction endothéliale en insuffisance rénale." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24393/24393.pdf.
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Côté, Éric. "Contrôle de la respiration chez la préparation du tronc cérébral isolé du poisson rouge (Carassius auratus; Linnaeus)." Thesis, Université Laval, 2013. http://www.theses.ulaval.ca/2013/30021/30021.pdf.
Full textAbstract:
Nous avons mené une étude à deux volets sur la préparation du tronc cérébral isolé du poisson rouge (Carassius auratus; Linnaeus). Le premier volet porte sur la chémosensibilité centrale du poisson rouge. Nos résultats nous révèlent qu’une diminution de la PO2 dans le superfusat engendre une augmentation de la fréquence des décharges respiratoires tandis qu’une diminution du pH du superfusat, suite à l’augmentation de sa PCO2, n’influence pas le rythme respiratoire. Le deuxième volet porte sur l’importance relative de l’inhibition réciproque chlore-dépendante dans la rythmogenèse respiratoire. Ici, nos résultats nous indique que la perturbation de ce mécanisme via 1) la superfusion du tronc cérébral isolé avec un superfusat sans ion chlorure aboli le rythme respiratoire, 2) l’activation des récepteurs GABAergiques avec du GABA exogène diminue la fréquence des décharges respiratoires et 3) l’inactivation simultanée des récepteurs GABAergiques et glycinergiques à l’aide d’antagonistes augmente la fréquence et l’amplitude des décharges respiratoires.We conducted a two-part in vitro study on the isolated brainstem preparation of the goldfish (Carassius auratus; Linnaeus). In the first part, we investigated the central chemosensibility of the goldfish. Our results indicate that decreasing the PO2 of the superfusate increases the frequency of the fictive respiratory bursts. However, decreasing the pH of the superfusate by increasing its PCO2 had no effect on the respiratory rhythm. In the second part, we investigated the relative importance of GABA- or glycine-mediated Cl--dependent reciprocal inhibition for respiratory rhythmogenesis by disrupting this mechanism with three different treatments. Here, our results indicate that 1) bathing the brainstem in a Cl--free superfusate abolishes the respiratory rhythm, 2) activating GABA receptors with exogenous GABA decreases the frequency of the fictive respiratory bursts and 3) simultaneously inactivating GABA receptors and glycine receptors with antagonists increases both the frequency and the amplitude of the fictive respiratory bursts.
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Santiquet, Nicolas. "Régulation des jonctions communicantes chez les complexes ovocyte-cumulus de porc au cours de la maturation in vitro." Thesis, Université Laval, 2013. http://www.theses.ulaval.ca/2013/30338/30338.pdf.
Full textAbstract:
Les jonctions communicantes (JCs) sont particulièrement importantes au sein du follicule ovarien puisque qu’elles vont participer à la régulation de la maturation ovocytaire. Les JCs vont contrôler le flux de molécules tels que l’AMPc et le GMPc qui passent entre les cellules du cumulus et l’ovocyte et qui inhibent la reprise de la méiose. La fermeture de ces canaux, tant in vivo qu’in vitro, va entrainer la reprise de la méiose en empêchant le passage de ces molécules. Dans les études que nous avons réalisées, nous avons tout d’abord développé une méthode d’analyse fonctionnelle des jonctions communicantes (le FRAP : Fluorescence Recovery After Photobleaching) dans la structure tridimensionnelle du complexe ovocyte-cumulus. Cette technique nous a permis de déterminer que les gonadotrophines et le liquide folliculaire présent dans le milieu de maturation pouvaient moduler la dynamique de transfert entre les cellules du cumulus pendant les premières heures de maturation in vitro (MIV). Par la suite, nous avons étudié la régulation des connexines (Cx), qui sont les protéines composant la JC. Nous avons identifié les principales connexines présentes dans le COC porcin, la Cx43, la Cx45 et la Cx60. Nous avons déterminé que les gonadotrophines régulaient l’expression, la dégradation ainsi que la localisation de la connexine 43 (la principale connexine présente dans les cellules du cumulus porcin). Enfin, nous nous sommes intéressés à la régulation de la reprise de la méiose par le peptide natriurétique de type C (CNP). En effet, le CNP a été proposé pour inhiber la reprise de la méiose en se liant à son récepteur NPR-B sur les cellules du cumulus, ce qui stimule la production de GMPc. Il est ensuite transféré dans l’ovocyte, via les JCs, où il va inhiber la reprise de la méiose. Nous avons montré que le CNP et un analogue du GMPc avaient un impact différent sur la dynamique de transfert entre les cellules du cumulus. De plus, le CNP agirait sur un autre récepteur (le récepteur NPR-C) pour promouvoir l’arrêt méiotique. En conclusion, ces résultats ajoutent un niveau de compréhension supplémentaire des mécanismes régulant les JCs et la reprise de la méiose durant la MIV chez le porc.Intercellular gap-junctional communication (GJC) plays an important role in ovarian cell physiology. Closure of GJC has been proposed to be involved in oocyte maturation, particularly in the resumption of meiosis, both in vivo and in vitro, by controlling the flow of meiosis inhibitors, such as cAMP and cGMP. In the present study, we have first developed an assay based on recovery of calcein fluorescence in photobleached cumulus cells (FRAP: Fluorescent Recovery After Photobleaching) in the three-dimensional cumulus-oocyte complex (COC), during the first hours of porcine in vitro maturation (IVM). Results obtained using FRAP technology provide evidence that the composition of the IVM medium in terms of hormones and follicular fluid clearly affects cumulus-cumulus cell GJC. We then turned our attention to the effect of gonadotropins on connexins regulation. Indeed, GJC are composed of connexins proteins. We indentified Cx43, Cx45 and Cx60 as the main connexins expressed in swine COC. We show that gonadotropins regulate Cx43 protein level, degradation and localisation in the COC during the first hours of IVM. We finally turned our attention on the effect of natriuretic peptide C (CNP) on GJC regulation and meiotic resumption during porcine IVM. Indeed, CNP has been proposed to bind to receptor natriuretic peptide receptor B (NPR-B) where it triggers the production of cyclic guanosine monophosphate (cGMP). The cGMP produced is then transferred to the oocyte through gap junctions where it promotes meiotic arrest. Here we show that CNP and a cGMP analogue have different effects on GJC and Cx43 regulation suggesting that cGMP signaling may not be the only signaling pathway involving CNP. Moreover, we found that CNP is likely to bind to receptor natriuretic peptide receptor C (NPR-C) to play a role in maintaining meiotic arrest during porcine IVM, when activated in addition to NPR-B. In conclusion, we describe new mechanisms involved in the complex regulation of dynamic changes in GJCs and meiotic resumption. A better understanding of GJC regulation during IVM may in turn provide a powerful tool to improve assisted reproduction technologies and their efficacy in mammals.
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Benahmed, Fairouz. "Régulation de l'expression du gène homéotique Cdx2 au cours du développement et dans les cellules cancéreuses coliques humaines." Strasbourg 1, 2007. http://www.theses.fr/2007STR13124.
Full textAbstract:
Le gène homéotique Cdx2 a de nombreuses fonctions au cours du développement et son expression dans l’intestin adulte est altérée dans les cancers colorectaux. Le but de ce travail était d’étudier la régulation de l’expression de Cdx2 au cours du développement et dans les cellules cancéreuses coliques. L’étude du profil d’expression, dans des souris transgéniques, du gène rapporteur LacZ placé sous le contrôle de différentes tailles du promoteur de Cdx2 a permis d’identifier un élément régulateur impliqué dans la persistance de l’expression du gène dans l’intestin adulte. L’expression de Cdx2 a été comparée dans des xénogreffes orthotopiques et hétérotopiques de cellules cancéreuses coliques humaines chez la souris ‘nue’. Il en résulte que l’expression de Cdx2 dépend du microenvironnement et qu’elle peut être réversible. Cette étude a mis en évidence des éléments de régulation impliqués dans l’expression de Cdx2 dans l’intestin et dans sa dérégulation dans les cellules tumoralesThe Cdx2 homeobox gene plays crucial roles during embryonic development. In addition, its intestine-specific expression at the adult stage is altered in colorectal cancers. The aim of this study was to investigate the regulation of Cdx2 expression in vivo during development and in colon cancers cells. The pattern of the LacZ reporter gene under the control of different lengths of the murine Cdx2 promoter was investigated in transgenic mice. This led to identify a regulatory element required for specific persistence of Cdx2 in the gut throughout life. The expression of Cdx2 was analyzed in human colon cancer cells grafted in nude mice. It came out that the level of Cdx2 was dependent on the microenvironment at the site of implantation. This study identified important regulatory elements involved in the intestinal expression of Cdx2 and in its deregulation in colon cancer cells
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Rachalski, Adeline. "Rôle des interactions entre hypocrétines et sérotonine dans la régulation des états de vigilance : modèles animaux et pharmacologie." Paris 6, 2009. http://www.theses.fr/2009PA066295.
Full textAbstract:
Plusieurs facteurs sont connus pour réguler le sommeil. Par exemple, le stress d'immobilisation est suivi d'un rebond de sommeil paradoxal (SP) auquel la sérotonine (5-HT) contribue, et les hypocrétines (hcrt) sont impliquées dans une pathologie du sommeil: la narcolepsie. Ces deux neuromodulateurs jouent un rôle clé dans les régulations veille-sommeil et notre but est de déterminer l'influence de leurs interactions sur la régulation du SP après un stress en utilisant différentes approches (physiologiques, pharmacologiques, anatomiques et moléculaires) chez des souris mutantes dépourvues du transporteur de la 5-HT (5-HTT-/-) ou du précurseur des hcrt (preproHcrt-/-). Nos résultats obtenus chez les 5-HTT-/- et preproHcrt-/- ont démontré l’importance des hypocrétines et de leur interaction avec la 5-HT pour une bonne homéostasie du SP après un stress.
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Bouftila, Bouchra. "Contribution à l'étude de la régulation par un anti-progestérone (RU 486) de la motricité utérine chez la rate en milieu de gestation." Rouen, 1998. http://www.theses.fr/1998ROUES091.
Full textAbstract:
Cette recherche est focalisée sur l'étude des régulations de l'activité myométriale de la rate à mi-gestation, en particulier sur les interactions de la progestérone avec l'oestradiol-17, l'AMP cyclique et la PGF 2α. L'activité myométriale spontanée est recueillie au moyen de deux paires d'électrodes bipolaires insérées à demeure dans le myomètre. Les électromyogrammes enregistrés avant et après administration de RU 486 (anti-progestérone ; 10 mg. Kg -1, per os) montrent un effet relaxant non génomique précoce 1 heure après traitement, puis un effet génomique plus tardif (dès la 3ème heure), l'activité électrique spontanée du myomètre augmente, les trains de potentiels d'action deviennent progressivement synchrones de la 3ème à la 24ème heure. De plus, le dosage des hormones stéroïdiennes sexuelles nous a permis de mettre en évidence une corrélation entre l'accroissement de l'activité myométriale et la chute des concentrations myométriales et utérines en progestérone (P4). Les taux respectifs d'oestradiol-17β (E2) ne variant pas après ce traitement, l'augmentation du rapport E2/P4 qui en résulte rend le myomètre gestant plus sensible à l'effet myostimulant de la PGF 2α. Une diminution des taux intracellulaires d'AMP cyclique, un second messager myorelaxant, semble contribuer au renforcement des contractions myométriales. Le blocage des sites de liaison de la progestérone après administration de RU 486 induit une diminution du nombre de récepteurs de la progestérone, alors que le nombre de récepteurs de l'oestradiol-17β augmente. Ces résultats mettent en évidence la relation directe entre l'hypercontractilité myométriale, cause précoce et probable d'avortement, et la diminution du nombre des récepteurs de la progestérone dans l'organe cible. Ainsi, la présence d'un nombre suffisant des récepteurs à la progestérone est nécessaire pour exercer son action physiologique sur le myomètre. En effet, la progestérone permet le maintien de gestation et favorise la croissance embryonnaire.
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Dumas, Jean-François. "Métabolisme énergétique mitochondrial dans des situations de perte de poids." Angers, 2004. http://www.theses.fr/2004ANGE0510.
Full textAbstract:
Une perte de poids est une situation fréquemment rencontrée en médecine. Paradoxalement quand elle est involontaire (dénutrition, hypercatabolisme), la consommation d'oxygène du corps entier est augmentée. Cependant, les mécanismes biochimiques restent discutés. Nos résultats montrent que la restriction calorique s'accompagne d'une diminution de l'activité de la chaîne respiratoire et de la respiration de mitochondries hépatiques, proportionnelle à l'intensité de la restriction calorique et fortement corrélée au taux plasmatique de leptine. A l'inverse, chez le rat traité par dexaméthasone (modèle de dénutrition) il y a une augmentation de la fuite de protons des mitochondries hépatiques et une anomalie in vivo de la phosphorylation oxydative du muscle squelettique. Si ces modifications peuvent expliquer les variations du métabolisme de base, l'adaptation à la restriction calorique semble aussi capable de limiter la production de radicaux libres oxygénésWeight loss is frequently observed in clinical practice. When weight loss is unwanted (undernutrition, hypercatabolism), whole body oxygen consumption is often increased, which is paradoxical in face of anorexia. Our results show that food restriction induces a decrease in liver mitochondrial respiration and respiratory chain activity, which is proportional to the intensity of the food restriction, and may be mediated by leptin concentrations. Conversely, an increase in liver basal proton leak and an impairment of in vivo oxidative phosphorylation in the skeletal muscle are observed in rats treated with dexamethasone, which is a model of acute undernutrition. These changes are likely to impact on resting metabolic rate, while adaptation to food restriction probably limits ROS production
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Bandaru, Sirisha. "Découverte des mécanismes moléculaires de régulation de la morphologie mitochondriale chez les mammifères : le rôle contrôleur de la protéase rhomboide PARL." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/25048/25048.pdf.
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Milligan, Laura. "Régulation et fonction d'un ARN non traduit transcrit d'un gène soumis à empreinte génomique parentale : l'ARN H19." Montpellier 2, 2000. http://www.theses.fr/2000MON20186.
Full textAbstract:
L'arn h19, bien qu'associe aux polysomes, n'est pas traduit. Sa fonction n'est pas connue. Nous faisons ici la proposition que la stabilisation de l'arn h19 qui se produit au moment de la differenciation de la cellule musculaire de souris est l'un des evenements majeurs de l'expression du gene. Cette conclusion est basee sur l'observation que l'inhibition de la synthese proteique induit une importante destabilisation de l'arn h19 dans des cellules myoblastiques en train de proliferer, mais pas dans des cellules differenciees. Cette conclusion est egalement basee sur des experiences de run-on qui ont montre que la vitesse de transcription de l'arn h19 reste constante pendant la differenciation de la cellule musculaire. Des experiences de transfection du gene h19 dans des cellules h19-, derivees de souris knock out pour h19, nous amenent a envisager l'hypothese que le produit de ce gene, l'arn h19, pourrait s'opposer a la proliferation cellulaire en agissant comme un regulateur negatif de la traduction. En effet, outre le fait que l'arn h19 est associe aux polysomes, nous constatons que l'expression d'un gene rapporteur luciferase transfecte dans des myoblastes qui expriment l'arn h19 est reduite par rapport a celle constatee dans des myoblastes h19-. Nous avons egalement note que la resistance a l'infection virale par les virus emc, mengo et vsv, qui procedent par une inhibition de la synthese proteique coiffe-dependante, est plus elevee lorsqu'il s'agit de myoblastes h19- que lorsqu'il s'agit de myoblastes h19+. Enfin nous decrivons une forme d'association de l'arn h19 avec l'arn ribosomique 18s.
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Mouton-Liger, François. "Fonction, régulation de PCP4 et trisomie 21 : analyse de modèles murins de surexpression." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077062.
Full textAbstract:
La Trisomie 21 est la plus fréquente anomalie chromosomique et se caractérise par un tableau clinique complexe avec notamment un retard mental constant. Les déficiences cognitives dont l'origine demeure mal connue, pourraient être la conséquence d'altérations du développement précoce du système nerveux. PCP4/PEP-19 (Purkinje Cell Protein 4) est une protéine, dont le gène est localisé sur le chromosome 21, impliquée dans la transduction du signal calcique et modulant l'activation des cibles du complexe Ca2+-Calmoduline, dont la CaMKII. PCP4 possède une expression précoce dans le neuroectoderme, suggérant un rôle dans le développement des différentes structures du système nerveux. Pour confirmer cette hypothèse, un modèle de surexpression de PCP4 a été construit par transgénèse : les souris TgPCP4. Notre étude à plusieurs stades de développement, au niveau du transcrit et de la protéine, montre chez les TgPCP4 la présence de PCP4 dans des régions du système nerveux, où il est normalement observé plus tard au cours de l'embryogenèse. L'analyse par des marqueurs de différenciation neuronale montre que la surexpression de PCP4 induit une maturation neuronale précoce au niveau des ganglions nerveux et du rhombencéphale. Dans ces régions, nous avons mis en évidence une modulation de l'activité de la CaMKIIô, suggérant son implication dans ce mécanisme. Des résultats similaires ont été obtenus sur les souris TslCje, trisomiques pour une région du chromosome 16 murin orthologues du 21 humain pour 85 gènes (dont pcp4\ indiquant que les conséquences de cette surexpression peuvent être maintenues dans le contexte multigénique de la Trisomie 21Pcp4/pepl9 is a modulator of Ca2+-CaM, a key molecule for calcium signaling, expressed in postmitotic neuroectoderm cells during mouse embryogenesis. PCP4 gene is located on human chromosome 21, and present in three copies in Down syndrome (DS). To evaluate the consequences of 3 copies of this gene on the development of these cells in the nervous System, we constructed a transgenic (TgPCP4) mouse model, with one copy of human PCP4, and investigated the effects in this model. We showed that pcp4 overexpression is present at transcript and protein levels, and overexpression induced precocious neuronal differentiation, as shown by the distribution and levels of early neuronal markers. We also demonstrated that pcp4 overexpression was associated with an increase in CaMKIIdelta activation, TgPCP4 and TslCje, a mouse model of DS, developed similar modifications, demonstrating that these mechanisms may account for abnormal neuronal development in DS
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Baroukh, Nadine. "Les gènes humains des apolipoprotéines AI, CIII et AIV : modèles d'animaux transgéniques pour l'étude de l'athérosclérose." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T048.
Full textAbstract:
Les gènes codant pour les apolipoprotéines (apos) AI, CIII et AIV sont organisés en tandem dans un groupement de 17kb sur le chromosome 11 humain. Nous avons généré des souris et des lapins trangéniques avec un transgène de 33kb contenant le groupement humain, ainsi que 8kb et 7kb des régions non codantes en 5' et 3' respectivement. Les animaux transgéniques expriment les trois apolipoprotéines humaines et développent une hyperlipidémie. Malgré ce profil, les souris transgéniques AI-CIII-AIV sont protégées contre l 'athérosclérose induite par l'absence d'apoE ou par un régime athérogène. Nos travaux ont aussi permis d'obtenir une correction phénotypique de l'hyperlipidémie chez les souris trtlnsgéniques AI-CIII-AIV par l'expression transitoire d'apoE humaine médiée par un adénovirus recombinant. La caractérisation des souris transgéniques a montré pour la première fois que le gène de l'apoAI humaine est exprimé dans le cœur et que la protéine est sécrétée sous forme de particules migrant électrophorétiquement en position pré-β. Chez les souris transgéniques AI-CIII-AIV, l'expression des trois gènes est corrélée positivement dans le foie et l'intestin indiquant une co-régulation des gènes du groupement. Sur les souris transgéniques pour le gène de l'apoAIV humaine, nous avons défini que l'expression de cette apolipoprotéine diminue la sécrétion gastrique acide et protège contre l'ulcération. Cette expression diminue également le développement des lésions d'athérosclérose dans un fond déficient en apoE ou après un régime athérogène. L'analyse des paramètres d'oxydation au niveau des plaques d'athéromes et du plasma, montre un rôle antioxydant de l'apoAIV. Par cet effet, l'apolipoprotéine AIV participe aux mécanismes de protection contre l'athéroscléroseThe three genes encoding the apolipoproteins (apos) AI, CIII and AIV are tandemly grouped in a cluster of 17kb on human chromosome 11. We have generated transgenic mice and rabbits with a 33kb human genomic fragment containing the cluster, as well as 8kb and 7kb of 5' and 3' flanking regions respectively. The transgenic animais express the three human genes and this expression is positively co-regulated in liver and intestine. In spite of a hyperlipidemic profile, transgenic mice are protected against atherosclerosis both in an apoE deficient background and after an atherogenic diet. We have also obtained a phenotypic correction of the hyperlipidemia after a transient overexpression of the human apoE mediated by adenovirus gene transfer. In addition, we have demonstrated for the first time that the human apoAI gene is expressed in the heart. The protein, once secreted seems to form particles analogous to the pré-β HDL. In human apoAIV transgenic mice, we have observed a diminution of gastric acid secretion and a protection against the formation of indomethacin induced ulceration. The human apoAIV expression in transgenic mice prevents the development of atherosclerotic lesions in apoE deficient mice or after an atherogenic diet. The analysis of both plasmatic and lesion parameters of oxidation showed that apoAIV may participate as an in vivo antioxidant in the protective mechanism against atherosclerosis
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Meisse, Delphine. "Glutamine, gonflement cellulaire et régulation de l'expression du gène de l'alpha 2-macroglobuline dans le foie de rat." Rouen, 1999. http://www.theses.fr/1999ROUES076.
Full textAbstract:
La glutamine est l'acide aminé dont la concentration sanguine est la plus élevée. Bien que la glutamine ne soit pas classée parmi les acides aminés essentiels, cet acide aminé exerce des effets régulateurs sur l'expression de certains gènes hépatiques. Ces effets régulateurs de la glutamine sont liés, au moins en partie, au gonflement cellulaire induit par l'entrée de cet acide aminé dans la cellule hépatique. Nos travaux montrent que la glutamine peut exercer des effets régulateurs dans des situations physiopathologiques ; en effet, la glutamine induit l'expression du gène codant l'α2M, une protéine sécrétée par le foie lors d'un processus inflammatoire. De plus, la glutamine renforce l'effet de l'IL-6 qui est l'inducteur majeur de l'expression de ce gène. Ces effets de la glutamine sur l'expression du gène de l'α2M pourraient impliquer, au moins en partie, le gonflement cellulaire induit par cet acide aminé. La consommation de glutamine ainsi que le volume hépatiques étant augmentés au cours d'un processus inflammatoire, nos résultats mettent en évidence l'implication de deux nouveaux facteurs, la glutamine et le gonflement cellulaire, dans la réponse inflammatoire. Concernant le mécanisme moléculaire impliqué dans l'influence du gonflement cellulaire sur l'expression du gène de l'α2M, nos résultats montrent que cet effet est lié à une activation des facteurs de transcription STAT1 et STAT3, facteurs majeurs impliqués dans l'effet inducteur de l'IL-6 sur l'expression de ce gène. Cette activation est due à une phosphorylation de ces facteurs sur les mêmes résidus tyrosyle que ceux phosphorylés sous l'influence de l'IL-6. De plus, l'effet du gonflement cellulaire sur la phosphorylation de ces résidus tyrosyle est additif à celui de l'IL-6. Le gonflement cellulaire n'ayant aucun effet sur l'activité des protéines JAKs, protéine tyrosine kinases impliquées dans l'effet de l'IL-6 sur l'activation des protéines STAT1 et STAT3, nos résultats permettent de proposer les mécanismes d'action suivants pour expliquer l'effet du gonflement cellulaire : le gonflement cellulaire pourrait activer soit une autre protéine tyrosine kinase de type Src par exemple, soit inhiber une protéine tyrosine phosphatase. En conclusion, cette étude démontre l'implication d'un nutriment, la glutamine, dans la réponse hépatique au cours d'un processus inflammatoire. De plus, ces travaux ouvrent de nouvelles perspectives quant à l'implication de protéine tyrosine kinase et phosphatase dans la signalisation du gonflement cellulaire.
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Annicotte, Jean-Sébastien. "Etude de fonctions pancréatiques du récepteur nucléaire orphelin Liver Receptor Homolog-1 (LRH-1) et du facteur de transcription E2F1." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2004. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2004/ANNICOTTE_Jean-Sebastien_2004.pdf.
Full textAbstract:
Le pancréas est un organe essentiel à la digestion et à l'homéostasie du glucose. Un dysfonctionnement du pancréas résulte en de nombreuses pathologies comme le diabète, la pancréatite et le cancer. De nombreuses avancées ont été effectuées dans l'étude du développement du pancréas, identifiant de nombreux facteurs de transcription et des voies de signalisation primordiales pour la différenciation des différents types cellulaires pancréatiques. Le pancréas possède une fonction exocrine, impliquée dans la libération d'enzymes au niveau du tube digestif, et une fonction endocrine, permettant la synthèse d'hormones libérées dans le sang et régulant l'utilisation du glucose par les tissus. Le pancréas exocrine est constitué par les cellules acineuses qui produisent des enzymes de digestion (amylase, elastase, protease, nuclease, etc) et les cellules ductales qui transportent ces enzymes vers l'intestin. L'unité fonctionnelle du pancréas endocrine est représentée par les îlots de Langerhans, disséminés dans le pancréas exocrine, et constituée de 4 types cellulaires, les cellules a, b, d et PP. Les cellules b productrices d'insuline représentent la majorité de la population des cellules endocrine, et constituent le noyau de l'îlot, alors que les cellules a, d et PP sécrètent le glucagon, la somatostatine et le polypeptide pancréatique, respectivement, et sont localisées à la périphérie de l'îlot. L'organogénèse du pancréas implique l'induction d'une cascade de signaux extra-cellulaire ainsi que l'activation de facteurs de transcription spécifiques du pancréas. Au cours du développement, le pancréas prend naissance au niveau de l'endoderme après invagination de cellules épithéliales, formant d'abord un bourgeon dorsal, puis un bourgeon ventral. Ces bourgeons vont ensuite proliférer et fusionner pour former un organe pleinement fonctionnel. Au cours de ce processus, il semble que les cellules endocrines et exocrines proviennent de cellules progénitrices pluripotentes dérivant de l'endoderme. Ainsi, la détermination des mécanismes impliqués dans la différenciation pancréatique pourrait constituer une voie thérapeutique dans le traitement de maladies liées au dysfonctionnement pancréatique. Le LRH-1 (Liver Receptor Homolog-1) est un récepteur nucléaire orphelin de la sous-famille Ftz-F1. Chez l'adulte, cette protéine est fortement exprimée dans le pancréas exocrine et plus faiblement dans le foie et l'intestin, et joue un rôle crucial dans le métabolisme du cholestérol. De plus, LRH-1 semble posséder des fonctions importantes dans le contrôle de l'expression de gènes impliqués dans le développement hépatique et pancréatique. Cependant, la contribution et la fonction de LRH-1 dans le pancréas reste inconnue. Le but de ce travail était donc d'étudier la régulation transcriptionnelle de LRH-1 au cours du développement pancréatique. [. . . ]The liver receptor homolog 1 (LRH-1) and the pancreatic-duodenal homeobox-1 (PDX-1) are coexpressed in the pancreas during mouse embryonic development. Analysis of the regulatory region of the human LRH-1 gene demonstrates the presence of three functional binding sites for PDX-1. Electromobility shift assays and chromatin immunoprecipitation analysis show that PDX-1 binds to the LRH-1 promoter, both in cultured cells in vitro and during pancreatic development in vivo. Retroviral expression of PDX-1 in pancreatic cells induces the transcription of LRH-1, whereas reduced PDX-1 levels by RNA interference attenuate its expression. Consistent with a direct regulation of LRH-1 expression by PDX-1, PDX-1-/- mice expressed lower amounts of LRH-1 mRNA in the embryonic pancreas. Taken together, our data indicate that PDX-1 controls LRH-1 expression and identify LRH-1 as a novel downstream target in the PDX-1 regulatory cascade governing pancreatic development, differentiation and function. We evaluated the effects of E2F1 on glucose homeostasis using E2F1-/- mice. E2F1-/- mice show an overall reduction in pancreatic size, as the result of impaired postnatal pancreatic growth. These animals furthermore have dysfunctional b-cells, linked to impaired PDX-1 activity. Because of the disproportionate small pancreas and dysfunctional islets, E2F1-/- mice secrete insufficient amounts of insulin in response to a glucose load, resulting in glucose intolerance. Despite this glucose intolerance, E2F1-/- mice do not develop overt diabetes mellitus because they are insulin hypersensitive, secondary to a diminished adipose tissue mass and altered adipocytokine levels, which compensates for the defect in insulin secretion. These data demonstrate that factors controlling cell proliferation, such as E2F1, determine pancreatic growth and function, subsequently affecting metabolic homeostasis
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Grosse, Laurent. "Étude de la régulation de la glucuronidation des androgènes par UGT2B15 et UGT2B17 dans la prostate et dans des modèles animaux." Thesis, Université Laval, 2013. http://www.theses.ulaval.ca/2013/30096/30096.pdf.
Full textAbstract:
Une dérégulation du métabolisme des androgènes peut induire de graves pathologies comme le CaP (CaP). Pour le traiter, on utilise la thérapie de déprivation en androgène (ADTh). Néanmoins, le CaP s’adaptant, les traitements deviennent inefficaces. Trouver de nouvelles cibles thérapeutiques est donc essentiel. Nous sommes intéressés par la glucuronidation via les enzymes UGT2B15 et UGT2B17, la voie majeure d’inactivation des androgènes. Ce projet de recherche avait deux objectifs. 1) déterminer comment l’expression des UGT2B15 et UGT2B17 est régulée in vivo et in vitro avec ou sans ADTh, 2) créer une souris transgénique confirmant in vivo le rôle d’UGT2B15 dans la biodisponibilité des androgènes. Nous avons donc étudié la glucuronidation des androgènes par les Ugt2bs de souris, avant d’y insérer le gène UGT2B15 avec son promoteur endogène. Nous montrons qu’UGT2B15, et non UGT2B17, est inhibée dans les CaP les plus avancés tandis que l’ADTh induit les 2 UGT2Bs. In vitro, cette induction contribue à l’efficacité de l’ADTh, mais in vivo seule l’augmentation d’UGT2B15 est durable alors que celle d’UGT2B17 est transitoire. Nous constatons que la glucuronidation murine des androgènes est due aux Ugt2bs hépatiques et rénales, moins importante chez les femelles et régulée par les androgènes. La souris est donc un bon modèle pour induire une UGT2B humaine dans la prostate murine. Notre souris transgénique montre une expression d’UGT2B15 exclusivement dans le foie mâle et contrôlée par les androgènes. UGT2B15 augmente la LH plasmatique tandis que dans les souris transgéniques castrées et traitées à la DHT, le poids global et celui des muscles sont altérés. En conclusion, UGT2B15 est une cible thérapeutique pour traiter le CaP. Avec UGT2B17, elle participerait déjà à l’efficacité de l’ADTh, bien que les 2 enzymes aient une régulation différentielle. Ainsi, l’induction transitoire d’UGT2B17 serait un biomarqueur pour la résistance à l’ADTh. L’importance d’UGT2B15 est démontrée avec nos souris transgéniques où une expression hépatique a un effet systémique sur le système endocrinien. Notre modèle constitue un modèle pour étudier in vivo les régulations d’UGT2B15 et son impact sur les androgènes et pourrait servir à tester des inducteurs de cet enzyme afin d'améliorer l’ADTh.Disregulation of androgen metabolism leads to serious diseases such as prostate cancer (PCa). Androgen déprivation (ADTh) is a common approach to treat PCa. Although most patients initialy respond to the treatment, up to 80% will develop resistant tumors (CRPC). New therapeutic approaches are therefore urgently needed. Our work focused is glucuronidation by the human UGT2B15 and UGT2B17 enzymes, a major inactivation pathway for androgens. Two parallel strategies were devepopped. First, we analyzed how UGT2B15 and UGT2B17 expression regulated in vitro and in vivo, in PCa from patient treated or not with ADTh. Second, we have engineered mouse strain expressing the UGT2B15 human gene. These animals were used to study the role of UGT2B15 in vivo, in particularly how this enzyme affects androgen biodisponibility. Before establishing the transgenic models, we investigated the Ugt2b enzyme implicated in androgen glucuronidation in mice. We observed that UGT2B15, and not UGT2B17, is down-regulated in advanced and metastatic PCa and CRPC, while using ADTh up-regulated the 2 proteins in vivo. In vitro, this increase contributed to the anti-proliferative effect of ADTh but in vivo, UGT2B15 is stably induced while UGT2B17 was only transiently up-regulated. In mice, androgen glucuronidation is mainly observed with hepatic and renal tissues, while Ugt2b peripheral expression is almost undetectable. Moreover this Ugt2b expression is lower in female and controlled by androgen. In our transgenic mouse, human UGT2B15 is also expressed in male liver only, and likewise controlled by androgen. Its expression significantly increases LH plasma concentration, while castrated transgenic mice treated with DHT display altered body and muscle weight. In conclusion we demonstrated that UGT2B15 is a pharmacological target for PCa treatment. With UGT2B17, UGT2B15 contributes to improve ADTh but the 2 enzymes have a differential expression. So, UGT2B17 is a potential biomarker for the emergence of ADTh resistance. The important UGT2B15 function is demonstrated using our transgenic mice: a liver limited expression is enough to alter the endocrine regulation with a hepatic limited expression. Also, our mouse constitutes a model to study in vivo the UGT2B15 regulation and function, in example to identify a UGT2B15 inductor to improve ADTh.
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Poitelon, Yannick. "Explorations de modèles animaux et cellulaires de la maladie de Charcot-Marie-Tooth de type AR-CMT2A." Aix-Marseille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX20710.
Full text
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El-Asmar, Bassam. "Mécanisme d'action de l'IL-1 dans la régulation de l'expression du gène Nur77 au niveau des celllules de Leydig chez la souris." Master's thesis, Université Laval, 2008. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20366.
Full textAbstract:
La fonction et la différenciation des cellules de Leydig sont connues pour être régulées par différents stimuli incluant 1' hormone lutéinisante (LB) et autres facteurs paracrines et autocrines comme les cytokines dont 1 ' IL-1. NUR 77 est un facteur de transcription présent au niveau des cellules de Leydig et impliqué dans la régulation de la stéroïdogenèse. Malgré que Nur77 soit connu pour être régulé par les cytokines dans différents types cellulaires, cette régulation n 'est pas encore bien caractérisée au niveau des cellules de Leydig. Afin de mieux comprendre la régulation de Nur77 par les cytokines, j ' ai décidé d'étudier l' effet de deux facteurs de transcription, C/EBP~ et NF -KB, connus pour être impliqués dans les voies de signalisation des cytokines, sur le promoteur Nur77. J'ai trouvé que les facteurs de transcription C/EBP~ et NF -KB coopèrent ensemble dans l'activation du promoteur Nur77. Cette coopération nécessite la présènce d'au moins un des deux éléments nouvellement identifiés dans cette étude : C/EBP~ (à -110 pb en fonction du site d'initiation de la transcription) ou p50 (KB à -18 pb). L'activation du promoteur Nur77 par ces facteurs de transcription appuie mon hypothèse selon laquelle NUR 77 peut être un effecteur dans la voie de signalisation des cytokines comme 1 'IL-l.
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Chever, Oana. "Implication du canal glial Kir4.1 dans la régulation du potassium extracellulaire : étude in vivo chez la souris knock-out Kir4.1 sous anesthésie." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25879/25879.pdf.
Full text
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Kammoun, Hélène. "Implication directe du stress du réticulum endoplasmique dans l'activation du facteur de transcription SREBP-1c et le développement de la stéatose hépatique chez le rongeur." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066192.
Full textAbstract:
La stéatose hépatique, caractérisée par l’accumulation de triglycérides dans le foie, est une pathologie associée à l’obésité et l’insulinorésistance. Les mécanismes du développement de la stéatose hépatique ne sont pas complètement caractérisés mais il a été montré que la lipogénèse joue un rôle majeur dans sa pathogénèse. Nous avons cherché à comprendre comment la lipogénèse, physiologiquement contrôlée par l’insuline, est activée dans les foies stéatosés des rongeurs insulinorésistants. Dans un premier temps, nous avons montré que la voie du stress du réticulum endoplasmique (RE) participe directement à l’activation de la lipogénèse dans le foie des souris ob/ob, obèses et insulinorésistantes. Nous avons mis en évidence que l’activation du stress du RE conduit à la maturation du facteur de transcription SREBP-1c, impliqué dans le contrôle de la lipogénèse. Nous montrons que le stress du RE contribue ainsi fortement au développement de la stéatose hépatique et à l’installation de l’insulinorésistance chez la souris ob/ob. Par la suite, nous nous sommes interrogés sur les facteurs déclenchants de l’activation du stress du RE dans le foie des souris ob/ob. Nous avons fait l’hypothèse que l’hyperinsulinémie pourraient être responsable de l’activation du stress du RE dans cette situation. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons montré chez la souris que la réalimentation hyperglucidique conduit rapidement à l’activation du stress du RE dans le foie. Nos travaux ont mis en évidence que l’insuline active partiellement le stress du RE in vitro dans l’hépatocyte suggérant que cette hormone participe à l’induction du stress du RE dans le foie des rongeurs réalimentés
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Normand, Sylvain. "Étude des profils cytokiniques et des mécanismes moléculaires induisant l'inflammation dans un modèle mimant les déficits en mévalonate kinase : un rôle central pour l'IL-1 et la caspase-1 dans les fièvres périodiques héréditaires." Poitiers, 2009. http://www.theses.fr/2009POIT1405.
Full text
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Martin, Cédric Bernard Pierre. "Etude des mécanismes de régulation des récepteurs 5-HT2C dans des modèles murins de troubles émotionnels." Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05P611/document.
Full text
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Bouchard, Caroline. "Régulation transcriptionnelle du GPR84, un nouveau récepteur couplé aux protéines G exprimé par la microglie dans des conditions inflammatoires." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24392/24392.pdf.
Full text
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St-Amand, Emmanuelle. "La régulation du transport du glucose dans le muscle squelettique : l'implication des protéines AMPK et iNOS." Doctoral thesis, Université Laval, 2015. http://hdl.handle.net/20.500.11794/25783.
Full textAbstract:
Le tissu musculaire squelettique contribue considérablement au maintien de l’homéostasie du glucose chez l’humain. Que ce soit en situation postprandiale ou lors d’un travail musculaire, le muscle squelettique capte de grandes quantités de glucose sanguin à des fins d’entreposage ou de production d’énergie. Les voies de signalisation cellulaire impliquées dans la régulation du transport du glucose à l’intérieur de la cellule musculaire sont nombreuses et complexes. En présence de désordres physiologiques et/ou métaboliques, de nombreux médiateurs chimiques et enzymatiques peuvent interagir avec les différentes protéines de ces voies de signalisation et entraîner des perturbations importantes au niveau de l’homéostasie du glucose. Notre première étude nous a permis de confirmer l’implication de la protéine AMPK dans le transport du glucose induit par la contraction musculaire. L’AMPK est un senseur énergétique important activé dans le muscle squelettique au cours d’un effort physique. Toutefois, son rôle dans le transport du glucose induit par la contraction musculaire demeure controversé. Grâce à un modèle murin d’invalidation génétique de l’AMPK spécifique au tissu musculaire et à l’élaboration d’un protocole de contraction ex vivo approprié, nous avons établi l’importance de l’AMPK dans la régulation du transport du glucose. Notre seconde étude nous a permis de démontrer que l’incubation ex vivo prolongée du muscle épitrochléen modifie l’expression du transporteur de glucose GLUT1. Nous avons également observé l’induction de la protéine iNOS et la production du NO. Parallèlement, nous avons mesuré une augmentation de l’expression de GLUT1 à la suite d’une exposition au NO dans un modèle de cellules musculaires ainsi qu’une augmentation du transport basal du glucose. L’ensemble de nos résultats nous permet de consolider le lien causal entre la production du NO et la modulation de l’expression de GLUT1 et potentiellement, le développement de perturbations au niveau du métabolisme du glucose musculaire.
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Dumortier, Alexis. "Analyse des dérégulations d'expression génique associées au développement de lymphomes T chez des souris déficientes pour le gène Ikaros." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2003. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2003/DUMORTIER_Alexis_2003.pdf.
Full textAbstract:
Ikaros est un facteur de transcription à doigts de zinc qui est un régulateur essentiel de la lymphopoi͏̈èse. Différentes mutations du locus Ikaros, produites chez la souris, conduisent au développement de lymphomes T, suggérant qu'Ikaros est un gène suppresseur de tumeurs. Les souris homozygotes IkL/L (mutation hypomorphe d'Ikaros) développent des lymphomes T entre l'âge de 3 et 6 mois. Cependant, les mécanismes moléculaires impliqués dans la formation de ces tumeurs restent encore peu connus. L'analyse du transcriptome des tumeurs IkL/L montre une augmentation de l'expression de plusieurs gènes de la voie de signalisation Notch, qui est également observée dans des tumeurs en cours d'expansion, suggérant qu'une altération de la voie Notch constitue un événement précoce dans l'établissement des tumeurs IkL/L. D'autre part, la ré-expression d'une forme normale de la protéine Ikaros dans des lignées cellulaires établies à partir de cellules tumorales conduit à une diminution du niveau d'expression de plusieurs gènes cibles de Notch, suggèrant également qu'Ikaros régule directement l'expression de certains de ces gènes. Par ailleurs, la ré-expression d'Ikaros dans ces lignées inhibe l'amplification des cellules tumorales in vitro. Ces résultats montrent qu'une réduction de l'activité d'Ikaros dans les thymocytes peut être favorable à l'initiation du développement tumoral, et qu'il pourrait exister une convergence fonctionnelle entre Ikaros et Notch dans le processus de transformation des lymphocytes TIkaros is a zinc finger transcription factor which is an essential regulator of lymphopoiesis. Different mutations in the Ikaros locus lead to T lymphoma development, suggesting that Ikaros is a tumor suppressor gene. Homozygote IkL/L mice expressing a hypomorphic mutation of Ikaros develop T lymphomas between 3 and 6 months of age. However, the molecular mechanisms involved in the formation of these tumors are still ill-defined. Transcriptome analyses of IkL/L tumors show an up-regulation of several genes of the Notch signaling pathway. This deregulation is also observed in early tumors, suggesting that deregulation of the Notch pathway is an early event in IkL/L tumor development. Re-expression of a normal Ikaros protein in IkL/L tumor-derived cell lines downregulates several Notch genes, suggesting that Ikaros directly modulates the expression of some Notch genes. Moreover, the re-expression of Ikaros in the cell lines triggers an arrest in tumor cell growth in vitro. These results show that thymocytes with a reduction in Ikaros activity are more susceptible T lymphoma development, and that Ikaros and Notch could cooperate during T lymphocyte transformation
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Mathon, Denis. "Comparaison des approches bio-informatiques utilisées dans l'analyse de la régulation du transcriptome de la glande mammaire de souris." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25463/25463.pdf.
Full text
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Hamel, Frédéric. "Régulation transcriptionnelle du gène SRY humain et porcin par le facteur de transcription GATA-4." Thesis, Université Laval, 2004. http://www.theses.ulaval.ca/2004/22130/22130.pdf.
Full textAbstract:
Chez les mammifères euthériens, la détermination du sexe est étroitement contrôlée par l’expression d’un gène clé, appelé SRY, présent sur le chromosome Y. Une étude d’inactivation génique chez la souris a démontré que la protéine Gata-4, un membre de la famille de facteurs de transcription GATA, est essentielle pour la différentiation testiculaire ainsi qu’à l’expression de Sry. Ceci suggère que GATA-4 régule le développement testiculaire via l’activation de SRY. En accord avec cette hypothèse, les promoteurs SRY de porc, de souris et d’humain arborent tous plusieurs sites de liaison pour les facteurs GATA. Le but de mon étude est de vérifier le rôle de GATA-4 dans la régulation transcriptionnelle de SRY du porc et de l’humain par transfections transitoires de différentes constructions promotrices SRY délétées ou mutées dans les sites GATA. Mes résultats démontrent que GATA-4 active le promoteur SRY porcin mais pas celui de l’humain. Donc, malgré la conservation de fonction de SRY entre les espèces, sa régulation génique diffère.
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Palma, Rigo Kesia. "Implication du récepteur AT1 central dans la régulation de la pression artérielle de la souris." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05P606.
Full textAbstract:
Le contrôle central de la pression artérielle (PA) dépend des récepteurs de l’angiotensine II du type 1 (AT1R). La modulation des AT1R centraux a été évaluée à l’aide du système de télémétrie pour l’enregistrement de la PA et de modèles génétiques d’hypertension. Les souris exprimant un gain de fonction du AT1R du sous-type A (AT1AMUT) expriment une PA élevée et une sensibilité du baroréflexe cardiaque réduite, avec cependant un rythme circadien similaire à celui des souris dites contrôles. Chez des souris génétiquement hypertendues (BPH/2J) il est observé que le rôle des AT1R sur le niveau de PA est similaire aux souris dites contrôles. Les AT1R interviennent cependant dans la fonction baroréflexe et la réponse tensionnelle au stress des souris BPH/2J. Ces résultats ont conduit à analyser ces récepteurs de façon plus ciblée, dans la partie caudale du bulbe ventro-latéral (CVLM), connu pour son rôle dans le contrôle baroréflexe. Chez des souris invalidées pour le gène codant pour le AT1R, l’expression des AT1R du sous-type A, obtenue par transgénèse virale dans le CVLM, réduit la réponse pressive au stress émotionnel et réduit la sensibilité du baroréflexe cardiaque durant la période diurne. Ce travail précise ainsi l’importance du système rénine angiotensine central lequel, via les AT1R, module la contribution sympathique de la PA, au niveau du système nerveux central et particulièrement du CVLMThe central regulation of arterial pressure (AP) involves activation of angiotensin II receptors type 1 (AT1R) in specific brain area of the hypothalamus and brainstem. The thesis studies involve modulation of brain AT1R using genetic and hypertensive mice combined with a telemetry system to record AP. The mouse model expressing a gain of function of the AT1R subtype A (AT1AMUT) showed high AP and reduced cardiac baroreflex sensitivity, but a normal circadian cardiovascular rhythm. The role of AT1R in the AP level of the genetic hypertensive mouse (BPH/2J) was examined and found to be similar to normotensive mice. However, in BPH/2J mice AT1R are important for the cardiac baroreflex and pressor responses to stress. These findings led to a targeted analyse of this receptor in the caudal ventrolateral medulla (CVLM) which is known for its role in baroreflex control. In the mice lacking the gene coding the AT1R, the expression of its subtype A, obtained by viral transgenesis in the CVLM, reduced the pressor response to an emotional stress and reduced the baroreflex sensitivity during the day period. These findings indicate the importance of the brain renin angiotensin system through activation of AT1R which modulates the sympathetic contribution to blood pressure control at a number of levels within the central nervous system. Of particular importance is the modulation of baroreflex control and the sympatho-inhibitory actions during emotional stress both of which occur within the ventral medulla
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Aimond, Franck. "Rôle et régulation des canaux potassiques au cours de la pathologie cardiaque." Montpellier 2, 2000. http://www.theses.fr/2000MON20085.
Full textAbstract:
Les courants potassiques (k +) ventriculaires participent a l'equilibre de la subtile balance electrique de la repolarisation du potentiel d'action cardiaque et au maintien du potentiel de repos cellulaire. Les pathologies cardiaques congenitales ou acquises sont caracterisees par une diminution de certains de ces courants, favorisant le risque d'apparition de troubles du rythme. La comprehension des mecanismes de regulation des sous-unites proteiques formant les canaux k + devient donc un enjeu majeur dans la decouverte de nouvelles therapies geniques ou medicamenteuses a visee antiarythmique. Au cours de notre travail, nous avons pu demontre differents modes de regulation des canaux k + suite a l'infarctus du myocarde chez le rat, par l'association de plusieurs techniques d'electrophysiologie, de biologie cellulaire et moleculaire. A court terme, l'ischemie induite entraine, entre autre, une stimulation purinergique accrue, responsable de l'activation de multiples cascades intracellulaires. L'adenosine triphosphate (atp) extracellulaire active un courant k + appartenant a la nouvelle famille des canaux k + a 2 pores, trek-1. Cet effet passerait par l'acide arachidonique produit par l'activation simultanee de la phospholipase a 2 par les p 3 8mapk et p 4 2 / 4 4mapk, elles-meme respectivement activees par les cascades intracellulaires impliquant l'adenylate cyclase et les tyrosine kinases. A long terme, l'insuffisance cardiaque, est caracterisee par des changements morphologiques et electriques favorisant l'apparition d'arythmies. Sur ce modele animal, nous avons pu mettre en evidence une diminution du courant k + transitoire sortant, i t o, associee a une diminution de l'expression des sous-unites proteiques kv4. X responsables de la formation du canal natif. Nos resultats ont permis de confirmer l'effet de certaines pathologies sur l'expression genique de certains canaux k + et de mettre en evidence un nouveau mode de regulation des canaux k + par la stimulation purinergique.
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Trochon, Véronique. "Apport du système de l'acide hyaluronique et des protéases de la famille des adamalysines à la régulation physiopatologique et pharmacologique de l'angiogénèse." Rouen, 1998. http://www.theses.fr/1998ROUE03NR.
Full textAbstract:
L'angiogénèse est un processus indispensable à la croissance et au développement d'une tumeur. Afin d'analyser les facteurs qui contribuent à l'angiogénèse et d'essayer par la suite de les contrôler, nous nous sommes intéressés : - aux facteurs de l'environnement, principalement au système de l'acide hyaluronique (AH) et plus accessoirement aux cytokines sécrétées par les monocytes activés qui peuvent infiltrer une tumeur - à une nouvelle classe de métalloprotéinases transmembranaires (ADAM/MDC(s) ou adamalysines) associées aux cellules endothéliales (CEs). L'AH est un glycosaminoglycanne de haut poids moléculaire, particulièrement abondant dans le tissus conjonctif ainsi que dans les matrices des tumeurs. II a été décrit que les fragments d'AH issus de la dégradation de l'AH par l'hyaluronidase, enzyme sécrétée par des cellules cancéreuses à fort potentiel métastatique, étaient capables de stimuler la cicatrisation in vivo. Dans notre premier travail, nous nous sommes intéressés au mécanisme d'action de ces fragments d'AH sur les cellules endothéliales. Nous avons montré que ces fragments, dont le nombre d'unités saccharidiques est de 12, en se liant au récepteur CD44 qui est exprimé à la surface des CEs, induisent leur prolifération, leur migration et favorisent la formation des structures de type capillaire dans un gel tridimensionnel de fibrine. Ceci suggère que la fixation des fragments d'AH sur le CD44 est responsable d'une signalisation intracellulaire aboutissant à l'angiogénèse. Dans notre deuxième travail, nous avons étudié le rôle de l'hyaluronectine (HN), fragment N-terminal du versican et hyaladhérine matricielle, présente dans les tumeurs, sur l'angiogénèse induite par les fragments angiogéniques d'AH. Nos résultats mettent en évidence que l'HN empêche la liaison des fragments d'AH sur les récepteurs endothéliaux et entraîne la neutralisation de l'effet stimulateur des fragments d'AH sur l'angiogénèse in vitro. L'HN représente un inhibiteur physiologique de l'axe AH-CD44 et donc de l'angiogénèse. Nos résultats permettent ainsi d'expliquer pourquoi l'augmentation du rapport AH/HN, au sein d'une tumeur vascularisée, est un facteur de mauvais pronostic. Dans notre troisième travail, nous avons redéfini une nouvelle stratégie anti-angiogénique visant à inhiber l'hyaluronidase par l'apigénine, un flavonoide présent dans de nombreuses plantes comestibles. Les expériences in vitro ont mis en évidence que l'apigénine, en plus de son activité anti-hyaluronidase, exerçait un effet inhibiteur direct sur l'angiogénèse, principalement dû à une inhibition puissante de la prolifération des CEs par un arrêt du cycle de ces cellules en phase G2/M. Cet effet semble spécifique de certaines cellules, car l'apigénine induit au contraire une prolifération des cellules musculaires lisses. Ce résultat pourrait expliquer, en partie, pourquoi l'apigénine ne s'est pas révélée être une agent anti-angiogénique in vivo. Les résultats de notre quatrième travail suggèrent que les adamalysines, dont au moins deux membres sont présents à la surface des CEs, jouent un rôle important dans l'angiogénèse in vitro. Cette étude a pu être réalisée grâce à la disponibilité d'un inhibiteur synthétique de leur activité enzymatique. Ces adamalysines pourraient constituer une nouvelle cible pour une thérapie anti-angiogénique. Enfin, j'ai collaboré à l'étude de l'oncostatine M sur l'angiogénèse. Cette cytokine, sécrétée par les monocytes activés, s'est révélée être un stimulateur direct de l'angiogénèse plus puissant que le bFGF et le VEGF, dans un modèle tridimensionnel in vitro et, in vivo, dans un modèle de cornée de lapin.
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Aubert, Magali. "Mise en évidence, rôle et régulation de l'expression d'un phénotype de nature catécholaminergique par des neurones d'hippocampe de rat en culture primaire." Montpellier 2, 2001. http://www.theses.fr/2001MON20159.
Full text
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Fisette, Alexandre. "La voie ASP-C5L2 : un pont entre l'homéostasie métabolique et l'inflammation." Thesis, Université Laval, 2013. http://www.theses.ulaval.ca/2013/30372/30372.pdf.
Full textAbstract:
Les récents développements de la recherche ont permis de caractériser le tissu adipeux en tant qu’organe endocrine majeur et à associer l’obésité à un phénotype d’inflammation chronique, surnommé métaflammation. Cette thèse de doctorat s’attarde spécifiquement à une adipokine et son récepteur, la protéine stimulant l’acylation (ASP) et le récepteur C5L2, ainsi qu’à leur relation avec le métabolisme énergétique et la métaflammation. L’ASP dérive du système du complément et ses principaux effets sont liés à la stimulation de l’absorption des acides gras et du glucose par les adipocytes, avec comme résultat net l’entreposage accentué de lipides. L’invalidation génétique de la voie ASP–C5L2 crée un phénotype de résistance à l’obésité et d’hyperphagie, lui conférant un potentiel thérapeutique intéressant. Les travaux décrits dans cette thèse évaluent premièrement chez la souris, de manière successive, (i) les conséquences d’une stimulation aigüe par l’ASP, (ii) le métabolisme des animaux déficients en C5L2 lorsque soumis à une diète diabétogène, (iii) ainsi que la dynamique de signalisation de la voie ASP–C5L2 dans le développement de l’obésité. L’ASP agit de manière aigüe en tant qu’hormone anabolique, stimulant l’absorption de glucose dans les tissus à transport actif. De manière paradoxale, l’ASP crée aussi un état pro-inflammatoire ponctuel, stimulant la synthèse de cytokines ainsi que la migration et l’activation classique des macrophages. La délétion du récepteur C5L2 dans un modèle murin sous diète diabétogène induit des effets énergétiques contraires, poussant le développement de l’insulinorésistance et redirigeant le glucose vers le foie. Un phénotype exacerbé de métaflammation est aussi mesurable, probablement lié à la perte de la seconde fonction du récepteur C5L2, celle de la séquestration de l’anaphylatoxine C5a. Par la suite, dans un modèle d’obésité induite par la diète, le développement d’une résistance à l’ASP est démontré et semble être lié à la diminution de l’expression du récepteur C5L2. L’étude finale de cette thèse (iv) évalue la contribution clinique de l’ASP et du système du complément dans une intervention visant à moduler l’interaction entre le métabolisme énergétique et l’inflammation dans le cadre d’une chirurgie de résection hépatique. Les résultats avancés dans cette thèse permettent de mieux situer la voie ASP–C5L2 à la frontière du métabolisme énergétique et de l’immunité et de clarifier son potentiel thérapeutique.Recent research findings have characterized adipose tissue as en endocrine organ and have shown that obesity triggers the development of low-grade inflammation, termed metaflammation. This thesis focuses on one adipokine and its receptor, acylation stimulating protein (ASP) and C5L2 receptor, and their relationship with energy metabolism and metaflammation. ASP derives from the complement system and acts on adipocytes by upregulating fatty acid and glucose absorption, resulting in a net increase in lipid storage. Mice genetically deficient in components of the ASP–C5L2 pathway are obesity-resistant but hyperphagic, suggesting that the disruption of this pathway could hold a therapeutical value. This thesis sequentially evaluates in mouse models (i) the consequences of an acute ASP stimulation, (ii) metabolism in C5L2-deficient animals treated with a diabetogenic diet, (iii) and the dynamics of the ASP–C5L2 pathway in diet-induced obesity. ASP acts acutely as an anabolic hormone, stimulating glucose absorption in tissues with active glucose transport. Paradoxically, ASP also generates an acute proinflammatory response with increased cytokine release, macrophage migration and classical activation. The disruption of C5L2 receptor in a murine model treated with a diabetogenic diet induced the opposite effects on energy metabolism, aggravating the development of insulin resistance and rerouting glucose to the liver. A more pronounced phenotype of metaflammation is also measurable in C5L2 knockout mice, probably linked to the second function of the C5L2 receptor, the sequestration of the anaphylatoxin C5a. In a model of diet-induced obesity, the proof-of-concept of ASP resistance is demonstrated and possibly linked with a reduction in C5L2 expression. The final study in this thesis (iv) evaluates the clinical contribution of ASP and the complement system in the outcome of an intervention designed to modulate the interaction between metabolism and immunity in a surgical context of hepatic resection. The results shown in the present work clarify the role and the therapeutical potential of the ASP–C5L2 pathway and describe it as a bridge between inflammation and metabolic homeostasis.
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Ezzeddine, Nader. "De la conservation de la répression traductionnelle dépendante de l'élément EDEN à la drosophile comme modèle potentiel pour la dystrophie myotonique de Steinert (DM1) : un même facteur de régulation des ARNm fixe l'élément EDEN et les répétitions CUG." Montpellier 1, 2003. http://www.theses.fr/2003MON1T003.
Full textAbstract:
MON TRAVAIL DE THESE A PORTE SUR UNE ANALYSE DE LA REGULATION POST-TRANSCRIPTIONNELLE CHEZ LA DROSOPHILE. IL COMPORTE ESSENTIELLEMENT DEUX PARTIES. J'AI MONTRE, DANS UN PREMIER TEMPS, QU'IL Y A CONSERVATION ENTRE LA DROSIPHILE ET LE XENOPE DU MECANISME DE REPRESSION TRADUCTIONNELLE DES ARNm MATERNELS DEPENDANT DE L'ELEMENT EDEN (CONSTITUE DE REPETITIONS UG/UA). J'AI, DANS UNE DEUXIEME PARTIE DE CE TRAVAIL, IDENTIFIE UN FACTEUR DE DROSOPHILE QUI FIXE L'ELEMENT EDEN. CE FACTEUR, COMME LE FACTEUR DE XENOPE EDEN-BP ET LE FACTEUR HUMAIN CUG-BP AVEC LESQUELS IL PARTAGE UNE FORTE HOMOLOGIE, FIXE EGALEMENT DES REPETITIONS CUG. COMPTE-TENU DE LA CONSERVATION DE LA CUG-BP ET DE SON ROLE DANS LA DYSTROPHIE MYOTONIQUE DE STEINERT (DM1) NOUS NOUS SOMMES PROPOSES D'ETABLIR LA DROSOPHILE COMME MODELE POUR LA DM1. DANS LE CADRE DE CETTE THESE, SEULES LES EXPERIENCES PRELIMINAIRES ONT PU ETRE REALISEES.
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Girousse, Amandine. "Régulation de la protéine découplante UCP3 et inhibition génique ou pharmacologique de la lipase hormono-sensible." Toulouse 3, 2010. http://thesesups.ups-tlse.fr/1029/.
Full textAbstract:
Ce manuscrit est premièrement axé sur la régulation de l'expression de la protéine découplante 3 (UCP3). UCP3 est une protéine découplante de la membrane interne mitochondriale exclusivement exprimée ou presque dans les muscles squelettiques chez l'Homme et potentiellement impliquée dans le métabolisme des acides gras. Des souris portant le gène UCP3 humain entier ou en partie ont été créés par transgenèse additive dans le but de délimiter les séquences responsables de la spécificité musculaire d'expression. Nous avons identifié une séquence intronique de 600 pb qui confère l'expression musculaire in vivo. Dans une deuxième partie, une étude des conséquences fonctionnelles d'une altération des capacités lipolytiques du tissu adipeux a été réalisée chez la souris. La lipolyse adipocytaire est en partie assurée par la lipase hormono-sensible (LHS). L'expression et l'activité de la LHS sont diminuées dans le tissu adipeux du sujet obèse et/ou insulino-résistant. Nous avons développé des modèles animaux d'inhibition génique et pharmacologique de la LHS chez lesquels nous avons caractérisé le métabolisme énergétique, l'insulino-sensibilité et l'inflammation du tissu adipeux. La diminution des capacités lipolytiques est accompagnée d'une amélioration de la sensibilité à l'insuline et d'une modification du métabolisme des acides gras dans ces deux modèles. L'inflammation du tissu adipeux, reconnue comme facteur modulateur de l'insulino-sensibilité, ne semble pas être impliquée dans ce phénotypeIn a first part, this study focuses on the regulation of the expression of the uncoupling protein-3 (UCP3). UCP3 is an inner mitochondrial protein almost exclusively expressed in skeletal muscle in human which could be implicated in fatty acid metabolism. A transgenesis approach has been used to create animal bearing all or part of the UCP3 gene in order to delineate the sequences responsible for the muscle specific expression. A 600 bp sequence of the human UCP3 intron 1 gene has been identified which confers the muscular expression in vivo. The second part of this study is dedicated to the functional consequences of the alteration of lipolytic capacities in mouse adipose tissue. Adipocyte lipolysis is partly achieved by the hormone sensitive-lipase (HSL). HSL expression and activity is altered in adipose tissue of obese and/or insulin resistant subjects. We developed mouse models of genetic and pharmacological inhibition of HSL. Reduction of lipolytic capacity was associated with an improvement of insulin sensitivity and fatty acid metabolism in both animal models. Adipose tissue inflammation, that is a well known modulator of insulin sensitivity, did not seem to be involved in this phenotype
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Barraud, Perrine. "Les gènes nm23 dans le système nerveux périphérique de la souris : expression et régulation chez l'adulte et au cours du développement." Bordeaux 2, 2001. http://www.theses.fr/2001BOR28860.
Full textAbstract:
Les isoformes A et B de la nucléoside diphosphate kinase (NDPK) sont des enzymes qui sous forme hétérohexamérique catalysent la conversion des nucléosides diphosphates en nucléosides triphosphates à l'exception de l'ATP. Au cours du développement, les gènes nm23-M1,M2 et -M3 codant respectivement pour la NDPK A, la NDPK B et la NDPK C, sont exprimées par les cellules des crêtes neurales de la souris. Cette expression est maintenue tout au long de la formation des ganglions rachidiens et persiste chez l'adulte. Dans des modèles de cultures primaires, les NDPK B et C sont exprimées au cours de la prolifération neuronale, puis avec la NDPK A au cours de la différenciation neuronale. Les précurseurs du système nerveux périphérique expriment différentes isoformes en fonction de leur phénotype, identifié sur des cultures d'explants de tube neural. LES NDPK A et C sont ainsi majoritairement détectées dans des précurseurs sensoriels et cholinergiques alors que la NDPK B caractérise les précurseurs adrénergiques. Dans les neurones sensoriels de ganglions rachidiens de la souris adulte, la NDPK A est détectée dans le cytosol. La NDPK B est également visualisée dans le noyau et la NDPK C est fréquemment associée à la membrane plasmique. La co-détection des NDPK A et B avec la C suggèrent que ces 3 isoformes pourraient être associées pour former un hétérohexamère. La NDPK C serait responsable d'un ancrage de ces hexamères au niveau des membranes cellulaires. La NDPK A pourrait ainsi agir en collaboration avec des protéines à activité GTPasique. La localisation nucléaire de la NDPK B pourrait s'expliquer par ses fonctions de facteur de transcription du proto-oncogène c-myc et dans les mécanismes de réparation de l'ADN. Enfin, la NDPK C semblerait impliquée dans la signalisation cellulaire via les récepteurs couplés aux protéines G ou encore dans l'adhésion par des interactions avec les intégrines. Le traitement de cultures primaires par le NGF entraîne une augmentation du niveau d'expression des NDPK B et C. En revanche, les neurones sensoriels de souris knock-out pour le LIF, présentent un faible niveau d'expression des NDPKs par rapport aux neurones sensoriels de souris normales. Enfin, les neurones sensoriels de souris knock-out pour la NDPK A sont caractérisés par une arborescence neutitique très ramifiée qui témoigne d'une croissance axonale perturbéeA and B nucleoside diphosphate kinase (NDPK) isoforms are heterohexameric enzymes that catalyze phosphoryl-group transfer between nucleoside di-and tri-phosphates. During development, nm23-M1,-M2 and -M3 genes encoding for NDPK A, B and C, respectively, are expressed by mouse neural crest cells. This expression is long-lasting and is detected in adult dorsal root ganglia (DRG). In neuroblast primary cultures, NDPK B and C are detected in dividing neurons, and then with NDPK A during neuronal differentiation. The precursors of the peripheral nervous system express different isoforms, depending on their phenotype as assessed by primary cultures of neural tube explants. Thus, NDPK A and C are mainly detected in sensory and cholinergic precursors whereas NDPK B is generally found in adrenergic neuroblasts. In adult DRG sensory neurons, NDPK A is visualized in the cytosol. NDPK B is also detected in the nucleus and NDPK C is often associated with plasma membrane. NDPKs co-localizations suggested that the three isoforms may be associated in vivo to form heterohexamers. Moreover, NDPK C could be responsible for anchoring the whole complex on the plasma membrane. NDPK A could act in association with GTPase proteins. The nuclear localization of NDPK B could be related to its functions as c-myc proto-oncogene transcription factor and in DNA repair. Finally, NDPK C may participate in cell transduction via receptor-coupled G proteins or in cell adhesion by interacting with integrins. NGF treated primary cultures of sensory neurons increased NDPK A expression level without affecting those of NDPK B and C. In contrast, LIF knock-out had a low expression level of NDPKs compared with wild mouse sensory neurons. Finally, sensory neurons of NDPK A knock-out mouse are characterized by a highly branched neuritic arborescence that revealed a disturbed axonal outgrowth
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Moulin, Julie-Alexandra. "Développement d'outils permettant l'évaluation quantitative de la maturité pulmonaire foetale à un temps gestationnel précis chez la souris." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24783/24783.pdf.
Full text
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Sood, Aditi. "Wiring the adaptive response of mitochondria to metabolic transitions : a Mitofusin-2- dependent proteolytic elimination of OPA1 accompanies cristae and mitochondria-ER contacts remodelling in the postprandial mouse liver." Doctoral thesis, Université Laval, 2015. http://hdl.handle.net/20.500.11794/25772.
Full textAbstract:
Il est bien accepté dans des modèles en culture que les dynamiques mitochondriales et le remodelage des crêtes régulent le fonctionnement mitochondrial sous diverses conditions de stress, particulièrement l’apoptose et la famine. Malgré la quantité impressionnante de recherche effectuée dans ce domaine, on en connait encore très peu au sujet de l’importance des dynamiques mitochondriales et du remodelage de la structure mitochondriale sous des conditions physiologiques. Dans les années 1960, Hackenbrock a démontré que des mitochondries isolées adoptent des conformations internes distinctes selon l’état métabolique. D’après ses observations, il a prédit que les changements ultrastructurels de la mitochondrie régulent la production fonctionnelle de l’organite. Cependant, il n’est pas évident que ces changements ultrastructuraux suivent bien les changements métaboliques in vivo dans des conditions physiologiques. De plus, le métabolisme hépatique nécessite une adaptation constante de la production bioénergétique et biosynthétique de la mitochondrie suite aux changements de l’état anabolique/catabolique de la cellule hépatique. Toutefois, le fonctionnement de ce processus est encore largement inconnu. Dans cette étude, nous apportons les premières descriptions quantitatives in vivo de la réponse adaptative du réticulum mitochondrial aux transitions métaboliques du foie. Grâce à un modèle hépatique de souris postprandiale et une analyse cryo- microscopie électronique (cryo-EM) quantitative, nous montrons que, 5 heures après un repas, la voie mTORC1 est bloquée, le réseau mitochondrial se fragmente, la densité des crêtes diminue et la capacité respiratoire des mitochondries chute. Ces changements sont accompagnés d’une augmentation parallèle de la longueur des contacts mitochondrie-réticulum endoplasmique (MERCs), qui contrôle les échanges de calcium et de phospholipides entre les deux organites. De plus, ces évènements sont associés à l’expression transitoire de deux fragments C-terminaux (CTFs) inconnus jusqu’à présent provenant de la protéine Optic atrophy-1 (OPA1), une GTPase qui régule les dynamiques des crêtes mitochondriales et des mitochondries. Grâce à un protocole in vitro, nous montrons que ces CTFs proviennent d’un nouveau clivage d’OPA1, appellé clivage-C, qui élimine l’activité d’OPA1 en la coupant. Plus important encore, nous montrons que le clivage-C nécessite la présence de Mitofusin-2 (MFN2), une protéine clé dans la régulation de la fusion mitochondriale et dans la génèse des MERCs, mais pas la présence de l’homologue Mitofusin-1 (MFN1), ce qui confirme le lien entre le remodelage des crêtes et l’assemblage des MERCs.It is well established in cultured models that mitochondrial dynamics and cristae remodeling regulate mitochondrial function under different stress conditions, such as starvation and apoptosis. Despite the tremendous amount of research in this field, relatively little is known about the significance of mitochondrial dynamics and ultrastructure remodeling under normal physiological conditions in vivo. In the 1960’s, Hackenbrock demonstrated that isolated mitochondria adopt distinct internal conformations under different metabolic states. Based on these observations, he predicted that mitochondrial ultrastructural changes regulate the organelles functional output. However, whether these ultrastructural changes also accompany metabolic transitions in vivo, under physiological conditions, is not known. Further, hepatic metabolism requires mitochondria to adapt their bioenergetic and biosynthetic output to the ever-changing anabolic/catabolic state of the liver cell, but the wiring of this process is still largely elusive. In this study, we provide the first in vivo quantitative description of the adaptive response of the mitochondrial reticulum to hepatic metabolic transitions. Using a postprandial mouse liver model and quantitative cryo-EM analysis we show that at 5 hours after feeding the mTORC1 signaling is blocked, the mitochondria network fragments, the cristae density decreases and the mitochondrial respiratory capacity drops. These changes are accompanied with a parallel increase in the mitochondria-ER contact (MERCs) lengths, which control calcium and phospholipids fluxes between the two organelles. Further, these events are associated with the transient expression of two previously unidentified C-terminal fragments (CTFs) of Optic atrophy-1 (OPA1), a mitochondrial GTPase that regulates cristae and mitochondrial dynamics. Using an in vitro assay, we show that these CTFs originate from a novel OPA1 processing, termed C-cleavage that eliminates OPA1 activity by breaking off the GTPase. Importantly, we show that C-cleavage requires the presence of Mitofusin-2 (MFN2), a key regulator of mitochondria fusion and MERCs biogenesis, but not that of its homolog Mitofusin-1 (MFN1), thereby linking cristae remodeling to MERCs assembly.
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Latreche, Sabrina. "Agtr1, Wnk1, Cul3 : nouveaux acteurs dans la signalisation et la régulation de la pression artérielle." Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05T062.
Full textAbstract:
L’hypertension artérielle est une maladie induite par de multiples facteurs génétiques et environnementaux. De nombreuses pathologies y sont associées. A travers ce travail, j’ai abordé trois aspects de la régulation de la pression artérielle in vivo et in vitro. Dans une première partie, j’ai étudié le rôle de l’activation du récepteur AT1 de l’angiotensine II dans le développement de la fibrose, indépendamment de l’hypertension artérielle. Un modèle animal exprimant un récepteur constitutivement actif et des modèles cellulaires (MEF, HEK293, H295) exprimant le récepteur constitutivement actif de façon inductible ont été utilisés. Contrairement aux souris sur fond mixte, les souris mutées sur fond pur C57Bl6 ne développent pas de fibrose cardiaque et rénale et ont une hypertension modérée, qui est difficile à réduire par les anti-hypertenseurs. De plus, les cellules fibroblastiques MEF ne sont pas un bon modèle pour étudier la fibrose induite par l’angiotensine II. Seule l’ostéopontine est un marqueur induit par l’expression du récepteur AT1 contitutivement actif. Ces différents modèles, étudiés extensivement, ne sont donc pas adaptés pour répondre aux questions posées. Dans la seconde partie de ma thèse, un travail collaboratif a permis de mettre en évidence le rôle majeur de Wnk1 au cours de l’hypertension et du remodelage cardiovasculaire induits par une infusion chronique d’angiotensine II. En effet, les souris Wnk1+/- (haplo-insuffisantes pour le gène Wnk1) présentent une résistance transitoire à l’hypertension induite par l’angiotensine II, particulièrement au cours de la première semaine d’infusion. Cette résistance est associée à une altération du remodelage hypertrophique cardiovasculaire mais la fonction rénale et la sécrétion d’aldostérone sont préservées. Au niveau mécanistique, nos résultats ont identifié Wnk1 comme un activateur important de la phosphorylation de Mypt1, un marqueur connu de l’activité de la voie Rho-kinase. Les aortes de souris Wnk1+/- présentent une diminution transitoire de la phosphorylation de Mypt1 après une semaine d’infusion d’angiotensine II. De façon importante, nous montrons aussi que l’infusion chronique d’angiotensine II induit une activation de l’expression du gène Wnk1 au niveau aortique, et la surexpression de Wnk1 in vitro active de façon importante et reproductible la phosphorylation de Mypt1, indépendamment de l’activation de Spak (substrat bien caractérisé de Wnk1). En conclusion, ce travail a permis d’identifier Wnk1 comme un nouveau gène cible de l’angiotensine II au niveau vasculaire et a révélé un nouveau mécanisme mis en jeu au cours de l’hypertension et du remodelage cardiovasculaire qui lui est associé. Cette étude fait l’objet d’un article que je signe en premier auteur et qui est actuellement soumis pour publication. Dans une dernière partie, j’ai étudié le rôle de la culline3 dans la régulationde la voie RhoKinase. Les mutations du gène Cul3 ont très récemment été identifiées comme responsables du syndrome de Gordon. Ce gène code une protéine d’échafaudage d’un complexe d’ubiquitination important et ubiquitaire (CRL3) conduisant à la dégradation protéique. La voie des Rho-kinases joue un rôle majeur dans le tonus vasculaire et sa régulation par les agents relaxants ou constricteurs. Des travauxrécents suggèrent que la dégradation de RhoA implique le complexe culline3-ring-ligase (CRL3). Nous avons voulu établir les liens structuraux et fonctionnels entre ce complexe d’ubiquitination et la voie Rho-kinase dans des modèles cellulaires, pour ainsi expliquer tout ou partie du mécanisme moléculaire conduisant des mutations constitutionnelles du gène Cul3 à produire une hypertension artérielle. Les interactions protéiques entre deux adaptateurs différents et la culline3 nous ont permis de montrer que la culline3 mutée entraine une modification d’affinité spécifique selon ses partenaires. Les interactions entre RhoA et le CRL3 n’ont pas pu être démontré. (...)Hypertension is a disease due to multiple genetic and environmental factors. Many cardiovascular diseases are associated. During my PhD thesis, I addressed three aspects of the regulation of blood pressure in vivo and in vitro. In the first part, I studied the role of angiotensin II AT1 receptor activation in the development of fibrosis, independently of hypertension. I used animal and cellular models (MEF, HEK293, H295) expressing a constitutively active receptor. The results show that the mutant mice did not develop cardiac or renal fibrosis in a pure C57Bl6 strain. Furthermore, their moderate hypertension has not been normalized with two antihypertensives. The pure C57BL6 genetic background seems to be the cause of this moderate phenotype. Furthermore, MEF cells are not a good model to study fibrosis induced by angiotensin II. Only osteopontin is a marker induced by expression of the mutant receptor. As the mouse models and despite of their originality, these cellular models appear to be inappropriate to study AngII-dependent fibrosis. These limitations together with the weakness of the AT1 mutant phenotype lead to us to stop this project. In the second part of my thesis, a collaborative study allows us to show that Wnk1-haploinsufficiency in mice is responsible for a strong and transitory resistance to angiotensin II (AngII)-induced hypertension associated with a significant reduction of cardiovascular remodeling and a preservation of renal function and aldosterone release. Mechanistically, we unravel a critical role for Wnk1 in the activation of the phosphorylation of Mypt1, a known marker of the Rho-kinase pathway activity. Wnk1-haploinsufficient mice display a significant and transitory decrease of AngII-induced phospho- Mypt1 in the aorta, concomitant to the hypertension-resistance. Importantly, we further evidence that, in the vasculature, AngII chronic infusion induces a significant upregulation in Wnk1 gene expression which causes in vitro a significant increase in Mypt1 phosphorylation independently of spak activation. Our results provide new insight into the downstream vascular signaling pathway of AngII and unravel a previously unsuspected mechanism linking Wnk1 to hypertension and vascular remodeling. In the last part, I studied the role of vascular Cullin3 (Cul3) in the development of hypertension. Mutations in this gene have been recently identified as responsible for a familial hypertension with hyperkalaemia, FHHt. The Cul3 gene encodes an important and ubiquitous ubiquitin scaffold protein participating to a protein degradation complex (CRL3). The Rho-kinase pathway plays a major role in vascular tone and its regulation by relaxing or vasoconstricting agents. Recent studies suggest that the degradation of RhoA involves the CRL3 complex. I started to analyze the structural and functional links between this ubiquitination complex and the Rho kinase pathway in cellular models to explain all or part of the molecular mechanisms leading constitutional mutations of Cul3 gene to produce hypertension. I have shown that the Cul3Δ9 mutant presents an increased neddylation compared to the wild form and mofications of its affinity for some adaptors. However, in this preliminary work, its interactions with and its role in the degradation of RhoA have not been demonstrated yet. This PhD thesis has helped to address several aspects of the pathophysiology of the vessels and the role of angiotensin II in these regulations using modern tools, original mouse and cell line models. This has particularly highlighted a new target of angiotensin II and a new WNK1 vascular role
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Audoy, Julie. "Mécanismes de régulation des macrophages cérébraux dans des maladies du système nerveux central." Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27079/27079.pdf.
Full text
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Gabory, Anne. "Etude de la fonction de l'ARN non codant H19 et de la régulation de l'Empreinte Parentale au locus H19/lgf2 dans des modèles murins transgéniques." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077106.
Full textAbstract:
Le gène H19 a été découvert il y a un vingtaine d'années et sa fonction reste encore inconnue. Ce gène est soumis à l'Empreinte Parentale, son expression est monoallélique maternelle. Par ailleurs le transcrit produit à partir de ce gène est un ARN non codant de 2,3 kb. Il est fortement exprimé au cours de l'embryogenèse dans tous les tissus issus du mésoderme et de l'endoderme et est réprimé après la naissance. Le seul organe où il reste fortement exprimé chez l'adulte est le muscle squelettique. Le gène H19 est lié au niveau de sa localisation chromosomique et de la régulation transcriptionnelle au gène /g/2, qui code un facteur de croissance embryonnaire exprimé de façon monoallélique paternelle. L'invalidation du gène H19 chez la souris entraîne un phénotype de surcroissance attribué à la perte d'Empreinte du gène /g/2. Nous avons voulu adresser deux questions portant d'une part sur la fonction de l'ARN H19 au cours de l'embryogenèse et d'autre part sur la régulation de ce locus dans le muscle adulte. L'originalité de notre approche réside dans l'étude in vivo de modèles murins transgéniques. Nos résultats montrent, à partir de trois modèles murins de tumorigenèse induite, que le gène H19 a une fonction de gène suppresseur de tumeur in vivo. Par ailleurs nous avons montré à partir de souris exprimant le gène H19 de façon ectopique que cet ARN est un trans régulateur d'un réseau de gènes soumis à l'Empreinte, impliqué dans la régulation de la croissance. Enfin, nous avons observé une expression biallélique des gènes H19 et /g/2 dans les cellules satellites, qui sont les cellules souches musculaires, ainsi que dans les cellules souches hématopoïétiques, suggérant qu'un relâchement de l'Empreinte puisse être une caractéristique des cellules souches adultesThe H19 gene was first described twenty years ago and its function remains unknown. This gene is imprinted; it is expressed only from the maternal allele. The product of the gene is a 2. 3 kb non-coding RNA abundantly expressed in mesoderm and endoderm derived tissues during embryogenesis. After birth, the expression is repressed in ail tissues except skeletal muscle where it remains strongly expressed at adult stage. The H19 gene is linked genetically to the paternally expressed /g/2 gene, which encodes an embryonic growth factor, and they share the mechanism of transcriptional regulation. The deletion of the H19 gene in mice leads to an overgrowth phenotype, which is attributed to a loss of imprinting of the Igf2 gene. We addressed the questions of the role of the H19 RNA during embryogenesis and of the regulation of this imprinted locus in adult muscle tissue. The particularity of our approach is the use of in vivo transgenic mouse models. We showed in three independent models of induced tumorigenesis that the H19 gene acts as a tumour suppressor in vivo. We then analysed transgenic animals which ectopically expressed the H19 gene and found that this RNA is a trans regulator of a recently described imprinted gene network, implicated in growth regulation. Finally we observed a biallelic expression of the H19 and /g/2 genes in satellites cells, which are muscle stem cells, as well as in haematopoietic stem cells, suggesting that a relaxation of imprinting could be a characteristic of adult stem cells
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Tabouy, Laure. "Mise au point d'un dosage de l'activité kinase de la protéine DYRK1A et Régulation épigénétique de l'expression du gène codant le facteur de transcription ISL1." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077169.
Full textAbstract:
Le Syndrome de Down, aneuploïdie la plus courante, a pour cause première la présence d'un chromosome 21 Numéraire. L'établissement de cartes de corrélation génotypes/phénotypes chez les patients atteints du Syndrome de Down a permis de mettre en évidence la kinase DYRKIA, codée par le gène DYRKIA localisé dans la région DCR-1 du chromosome 21, comme candidat pouvant être impliqué dans l'apparition d'un retard mental. Comprendre le rôle et la régulation de DYRKIA est donc essentiel et pour cela, utiliser un test fiable de mesure d'activité de l'enzyme est indispensable. Nous avons développé une nouvelle méthode de dosage de l'activité kinase de DYRKIA utilisant la chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC). Cette méthode s'est révélée très sensible et peu coûteuse. En utilisant cette nouvelle méthode, nous avons confirmé les principales données obtenues in vitro sur l'activité de DYRKIA. Nous avons également caractérisé le comportement d'inhibiteurs connus de DYRKIA (harmine) et confirmé les résultats rapportés dans la littérature. En collaboration avec l'équipe du Dr. Dodd nous avons criblé des dérivés hétérocycliques azotés de faible poids moléculaire, inhibiteurs potentiels de DYRKIA. Enfin, le test d'activité a été utilisé ex vivo sur des extraits de cerveau de souris. Nos résultats indiquent que cette nouvelle méthode de dosage d'activité kinase est spécifique, reproductible et rapide. Elle peut potentiellement s'appliquer à d'autres kinases, phosphatases et plus largement à d'autres enzymes catalysant une réaction de modification de protéinesLa GnRH joue un rôle essentiel en régulant la sécrétion et la synthèse de LH et de FSH via des récepteurs spécifiques (GnRHR) exprimés à la surface des cellules gonadotropes hypophysaires. L'expression tissulaire spécifique du Gnrhr est contrôlée par une combinatoire bien définie de facteurs de transcription comportant trois acteurs majeurs, SF1, LHX3 et ISL1. Au contraire du Gnrhr, nous montrons que les séquences régulatrices d'M7 en amont du site d'initiation de transcription (TSS) sont insuffisantes pour diriger l'expression hypophysaire spécifique, suggérant l'existence de mécanismes additionnels. De fait, les régions régulatrices (ou promoteurs) ainsi que les "corps" des gènes sont altérés par des modifications épigénétiques. Les résultats, obtenus par immunoprécipitation de la chromatine, montrent que dans les lignées cellulaires exprimant Isl1, notamment les cellules gonadotropes, Isl1 est complexé avec des histones H3 triméthylées sur la Lys4 (H3K4Me3) au niveau du TSS, une marque d'histones corrélée avec les gènes actifs. En revanche, dans les lignées cellulaires où Isll est silencieux, il est complexé avec des histones H3 triméthylées sur la Lys27, marque liée à la répression des gènes. On observe cette même corrélation au niveau du TSS du Gnrhr. De plus, notre étude suggère que la méthylation de F ADN, en amont de l'îlot CpG est inversement corrélée à l'activité de ce gène. Ces données suggèrent que les modifications épigénétiques sont essentiellement responsables de l'expression hypophysaire spécifique d'/s/ycontrairement à l'expression du Gnrhr qui semble principalement dépendante de la présence de facteurs de transcription tissulaires spécifiques majeurs
Down syndrome is the most common aneuploidy, it originates from the presence of an extra 21st chromosome. The establishment of genotype/phenotype correlations in patients with Down's syndrome made it possible to highlight the DYRKIA kinase, encoded by the DYRKIA gene localized in the region DCR-1 on 21st chromosome, as a good candidate in the onset of mental retardation. Understandïng the role and regulation of DYRKIA is thus necessary and for that, to get a reliable kinase activity assay is essential. First, we focused on the establishment of a new method of DYRKIA kinase activity assay using High Pressure Liquid Chromatography (HPLC). This method proved to be highly sensitive and affordable. Second, we sought to confirm previous data on in vitro activity of DYRKIA by using this new method. We also characterized the behavior of known inhibitors of DYRKIA (harmine) and the results obtained are in agreement with the literature. In collaboration with Dr. Dodd's team, we screened various molecules as potential inhibitors of DYRKIA. Finally, the activity assay was tested ex vivo, in mice brain extracts. Our results indicate that this new method of kinase activity assay is specific, reproducible and fast. This method can be potentially applied to other kinases, phosphatases and more broadly to other enzyme catalyzing a reaction of protein modification
GnRH plays a critical role by regulating LH and FSH secretion and synthesis via specific receptors (GnRHR) expressed at the surface of gonadotrope cells. Tissue-specific expression of Gnrhr is arbitrated by a combinatorial code of transcription factors that involves SF1, LHX3 and ISLL Unlike for Gnrhr, we showed that Ml regulatory sequences upstream of the transcription start site (TSS) were not sufficient to direct pituitary-specific expression, suggesting the existence of additional regulatory mechanisms. Indeed regulatory regions (or promoters) as well as gene bodies, are altered by epigenetic modifications. Results of chromatin immunoprecipitation reveal that in cell lines expressing Isll, namely gonadotrope cells, Isll was linked to histone H3 tri-methylated on Lys4 (H3K4Me3) at thé TSS, an histone mark correlated with gène activity. In contrast, in cell Unes where Isll was silent, Isll was bound by histone H3 tri-methylated on Lys27, a histone mark linked to gene repression. Similar correlation between histone modifications and gene activities where observed at the Gnrhr TSS. Our study further suggests that DNA methylation upstream of the CpG Island of Isll was inversely correlated with gene activity. Together, these data suggest that epigenetic modifications predominantly direct Isll tissue-specific expression whereas Gnrhr expression is primarily dependent on the presence of master tissue-specific transcription factors