Dissertations / Theses on the topic 'RNA recognition motif'

Cette thèse a été réalisée dans le cadre d'un projet Européen plus vaste (ITN RNAct) dans lequel des approches informatiques et biologiques étaient combinées pour progresser vers la synthèse de nouveaux domaines protéiques capables de se fixer sur des séquences spécifiques d'ARN. L'objectif spécifique de cette thèse était de concevoir et développer des outils informatiques pour mieux exploiter les connaissances existantes sur les domaines à Motif de Reconnaissance de l'ARN (RRM) lors de la modélisation 3D des complexes RRM-ARN. Les domaines RRMs représentent 50% de toutes les protéines fixant l'ARN et sont trouvées dans environ 2% de toutes les régions codantes du génome humain. Cependant, du fait de la grande diversité des domaines RRMs, il n'y a eu jusqu'à présent que très peu de succès rapportés dans la conception de nouveaux domaines RRMs. La contribution centrale de cette thèse est la construction d'une base de données relationnelle appelée (InteR3M) qui intègre des informations de séquence, de structure et de fonction sur les domaines RRMs. La base de données InteR3M (href{https://inter3mdb.loria.fr/}{https://inter3mdb.loria.fr/}) contient 400,892 instances de domaines RRM (dérivées d'entrées UniProt) et 1,456 structures 3D déterminées expérimentalement (dérivées d'entrées PDB), qui correspondent à seulement 303 instances distinctes de domaines RRM. De plus, InteR3M contient 459,859 interactions atomiques entre RRM et acides nucléiques, dérivées de 656 structures 3D dans lesquelles le domaine RRM forme un complexe avec un ARN ou un ADN. Au cours du processus de collecte de données, des incohérences ont été détectées dans la classification de plusieurs instances de domaines RRMs dans les bases de données de domaines protéiques populaires CATH et Pfam. Ceci m'a conduit à proposer une approche originale (CroMaSt) pour résoudre ce problème, à partir de la mise en correspondance des instances structurales de domaines RRMs entre ces deux bases de données et de l'alignement structural des domaines sans correspondance avec une structure prototype du domaine RRM. Le workflow CroMast est disponible sur le Workflow Hub Européen (href{https://workflowhub.eu/workflows/390}{https://workflowhub.eu/workflows/390}). Les informations de séquence et de structure intégrées dans la base de données InteR3M ont ensuite été utilisées pour aligner entre eux tous les domaines RRM et cartographier toutes les interactions RRM-ARN sur cet alignement en vue d'identifier les différents modes de liaison de l'ARN aux domaines RRM. Ceci a conduit au développement, avec nos partenaires RNAct de VUB (Vrije Universiteit Brussel), de l'outil `RRMScorer'. Cet outil contribue au déchiffrage du code de reconnaissance RRM-ARN en calculant les probabilités de liaison entre les nucléotides de l'ARN et les acides aminés des domaines RRM à certaines positions de l'alignement. Les contacts atomiques entre RRMs et ARN ont aussi été utilisés pour identifier des motifs d'ancrage, c'est-à-dire des prototypes des positions 3D atomiques (relatives au squelette protéique) d'un nucléotide interagissant par empilement (`stacking') avec un acide aminé aromatique conservé. Ces ancres peuvent être utilisées comme des contraintes dans un protocole d'amarrage ancré (`anchored docking'). Le pipeline `RRM-RNA dock' est présenté ici et il intègre à la fois les motifs d'ancrage extraits de la base de données InteR3M et les scores de liaison de RRMScorer. Finalement, la simulation en dynamique moléculaire (MD) est un autre outil informatique testé dans cette thèse pour contribuer à la modélisation 3D des complexes RRM-ARN. Des protocoles MD préliminaires mais prometteurs sont décrits au titre d'essais visant à distinguer entre les complexes RRM-ARN à liaison forte ou faible<br>This thesis was carried out in the frame of a larger European project (ITN RNAct) in which computer science and biology approaches were combined to make progress towards the synthesis of new protein domains able to bind to specific RNA sequences. The specific goal of this thesis was to design and develop computational tools to better exploit existing knowledge on RNA Recognition Motif (RRM) domains using 3D modeling of RRM-RNA complexes. RRMs account for 50% of all RNA binding proteins and are present in about 2% of the protein-coding regions of the human genome. However, due to the large diversity of RRMs, there have been very few successful examples of new RRM design so far. A central achievement of this thesis is the construction of a relational database called `InteR3M' that integrates sequence, structural and functional information about RRM domains. InteR3M database (href{https://inter3mdb.loria.fr/}{https://inter3mdb.loria.fr/}) contains 400,892 RRM domain instances (derived from UniProt entries) and 1,456 experimentally solved 3D structure (derived from PDB entries) corresponding to only 303 distinct RRM instances. In addition, InteR3M stores 459,859 atom-atom interactions between RRM and nucleic acids, retrieved from 656 3D structures in which the RRM domain is complexed with RNA or DNA. During the data collection procedure, inconsistencies were detected in the classification of several RRM instances in the popular domain databases CATH and Pfam. This led me to propose an original approach (CroMaSt) to solve this issue, based on cross-mapping of structural instances of RRMs between these two domain databases and on the structural alignment of unmapped instances with an RRM structural prototype. The CroMaSt CWL workflow is available on the European Workflow hub at href{https://workflowhub.eu/workflows/390}{https://workflowhub.eu/workflows/390}. Sequence and structural information stored in InteR3M database was then used to align RRM domains and map all RRM-RNA interactions onto this alignment to identify the different binding modes of RNA to RRM domains. This led to the development, with RNAct partners at VUB (Vrije Universiteit Brussel), of the `RRMScorer' tool. This tool contributes to decipher the RRM-RNA code by computing binding probabilities between RNA nucleotides and RRM amino acids at certain positions of the alignment. Atomic contacts between RRMs and RNA were also used to identify anchoring patterns, i.e. prototypes of 3D atomic positions (relative to the protein backbone) of a nucleotide stacked on a conserved aromatic amino acid. These anchors can be used as constraints in anchored docking protocols. The `RRM-RNA dock' docking pipeline is presented here and integrates both anchoring patterns extracted from InteR3M and binding scores from RRMScorer. Finally, molecular dynamic (MD) simulation is another computational tool tested in this thesis to contribute to the 3D modeling of RRM-RNA complexes. Promising preliminary MD protocols are described as attempts to distinguish between strongly and weakly binding RRM-RNA complexes

Alternative splicing provides the cell the ability to generate, from a single gene, multiple protein isoforms, sometimes with different or even antagonistic functions. This process is tightly regulated and alterations in the accurate balance of alternatively spliced mRNAs are a common cause of disease. The main objective of this thesis has been to understand the molecular mechanisms underlying disease-causing defective splicing. Skipping of Fas death receptor exon 6 leads to decreased Fas-ligand induced apoptosis. We have studied how this event is promoted by a mutation at the 3’ splice site and by the proto-oncogene SF2, leading to Autoimmune Lymphoproliferative Syndrome and possibly contributing to tumor progression, respectively. Moreover, we have determined the mechanism by which an antitumor drug, Spliceostatin A, alters 3’ splice site recognition and affects alternative splicing. This thesis underscores the importance of pre-mRNA splicing in disease and how the study of disease-causing aberrant splicing can be used as a tool to understand splicing mechanisms and vice versa.<br>El processament alternatiu del pre-ARNm proporciona a la cèl•lula l’habilitat de generar, a partir d’un únic gen, proteïnes amb funcions diferents i, fins i tot, antagòniques. Aquest procés està altament regulat i desequilibris en l’abundància de les diferent isoformes són causes comunes de malaltia. L’objectiu principal d’aquesta tesi ha estat entendre el mecanisme molecular a través del qual problemes en el processament del pre-ARNm causen malalties. L’exclusió de l’exó 6 del receptor de mort cel•lular Fas condueix a una disminució de l’apoptosi en resposta al lligand de Fas. Hem estudiat com una mutació al lloc de processament 3’ d’aquest exó i el proto-oncogén SF2 promouen aquest patró, causant el síndrome autoimmune lifoproliferatiu i possiblement contribuint a la progressió tumorogènica, respectivament. A més, hem estudiat el mecanisme pel qual la droga antitumoral Spliceostatin A altera el reconeixement del lloc de processament 3’ i causa canvis en el processament alternatiu de diversos gens. Aquesta tesi posa en evidència la importancia del processament del pre-ARNm en malalties i com l’estudi de mutacions que alteren aquest procés i són causa de malaties pot ser utilitzat con una eina per entendre el mecanisme d’aquest processament i viceversa.