Academic literature on the topic 'Sang – Maladies – Aspect immunologique'

Les lymphocytes NK (Tueurs Naturels) sont des cellules clés dans la réponse immunitaire innée grâce à leurs fonctions cytotoxiques et régulatrices. Ces lymphocytes peuvent être à l'origine d'hémopathies souvent très agressives et à mauvais pronostic vital, notamment en cas d'infection par le virus d'Epstein-Barr. Les mécanismes de leur physiopathologie sont encore mal connus, d'où des thérapeutiques souvent peu efficaces à long terme. C'est dans ce contexte que nous avons entrepris nos recherches pour améliorer les connaissances sur la physiologie des lymphocytes NK et de leurs équivalents néoplasiques. Notre premier objectif a été d'identifier de nouveaux marqueurs de ces cellules. La production de l'anticorps AY19 dirigé contre la lignée leucémique NK humaine YT nous a permis de mettre en évidence par approche protéomique, une nouvelle isoforme de la protocadhérine 15 (PCDH15) jusqu'ici décrite comme non hématopoïétique. Nous avons démontré après clonage de son cDNA, que cette nouvelle isoforme, la PCDH15C, est une protéine sécrétée. De plus lors de l'étude de lignées cellulaires, nous avons constaté que les transcrits de cette isoforme soluble et de la forme longue transmembranaire, la PCDH15A, sont restreints aux lymphomes NK/T extraganglionnaires de type nasal, aux leucémies NK ainsi qu'aux infections chroniques actives à l'EBV (CAEBV). Les premières investigations sur les prélèvements de lymphomes NK/T extraganglionnaires ont permis de mettre en évidence le transcrit de la PCDH15A et doivent être étendues aux pathologies dont les lignées dérivées sont positives. L'étude de prélèvements de sujets sains a également révélé pour la première fois, une expression du transcrit de la forme longue de la PCDH15 dans les organes lymphoïdes secondaires alors que les cellules du sang sont négatives. Ceci nous indique que la PCDH15A doit également avoir un rôle dans la régulation du système immunitaire en situation physiologique normale. La mise au point d'anticorps dirigés contre les deux isoformes, nous a permis de confirmer leur présence dans certaines lignées dérivées de lymphoproliférations NK et T. L'existence de motifs riches en proline dans la région cytosolique de la PCDH15A, le caractère sécrété de la PCDH15C et le rôle maintenant bien établi des protocadhérines et plus généralement des cadhérines dans la physiopathologie tumorale suggère un rôle essentiel de la PCDH15 dans ces désordres lymphoprolifératifs. Au vue de nos connaissances sur la PCDH15A, nous pensons que cette protéine pourrait induire des signaux par action en trans sur les cellules adjacentes PCDH15A positives voir être un marqueur de résidence. La PCDH15C pourrait quant à elle, être un facteur d'échappement au système immunitaire à l'image du rôle des cadhérines classiques qui agissent via la molécule KLRG1 exprimée sur les lymphocytes NK. Pour mieux comprendre la physiopathologie de ces désordres lymphoprolifératifs, nous avons entrepris de déterminer le profil des récepteurs lymphoïdes exprimés sur des lignées cellulaires dérivées de patients atteints de lymphomes NK/T extraganglionnaire de type nasal, ainsi que de CAEBV, qui évoluent fréquemment en lymphomes. Ces investigations nous ont permis de révéler un déficit d'expression des récepteurs KIR sur la lignée lymphoïdes NK de lymphome NK/T. Ce phénotype serait un des facteurs à l'origine de ces hémopathies puisqu'il autorise la prolifération des cellules en cas de signal activateur. La lignée NK issue de CAEBV présente quant à elle un phénotype KIR- NKG2A-. Nous avons également démontré une absence de cytotoxicité de ces lignées NK contre les cellules K562 malgré un phénotype NKp30+, ce qui confirme les données récentes de la littérature quant à l'incapacité des lymphocytes NK KIR- NKG2A- à lyser des cellules cibles. Ceci suggère de nouvelles voies de physiopathologie de ces désordres lymphoprolifératifs, indépendantes des processus de cytotoxicité granzyme/perforine dépendants<br>Natural Killer (NK) cells are key cells of the innate immune response thanks to their cytotoxic and regulatory functions. These lymphocytes can give rise to hemopathies which are often aggressive and with a bad vital prognosis, notably after Epstein-Barr virus infection. Their physiopathological mechanisms are still poorly known and treatments are often not efficient. It's in this context that we started our investigations to improve knowledge about NK cells and their neoplasic counterparts. Our first purpose was to identify new marker of these cells. AY19 antibody, which recognises YT NK cell line derived from human leukemia, allowed us to discover by a proteomic approach, a new protocadherin (PCDH) 15's isoforme. Until now, PCDH15 was described as a protein whose expression pattern was non-hematopoietic. We demonstrated after cDNA cloning, that this new isoforme, the PCDH15C, was secreted. Furthermore, we discovered that transcripts of PCDH15C and of the transmembrane form PCDH15A, were expressed in cell lines derived from nasal NK/T cell lymphomas, leukemic NK and chronic active EBV infections. First investigations on NK/T lymphoma biopsies, allowed us to show the presence of the PCDH15A transcript and must be extended to other pathologies whose derived cell lines were positive. Normal secondary lymphoid tissue's study also revealed for the first time, the presence of the PCDH15's long form transcript whereas peripheral blood cells are negative. This protein may therefore have a function in normal physiologic conditions. Production of antibody against these two PCDH15 form, allowed us to confirm their expression in some cell lines derived from NK and T cell lymphoproliferative disorders which were positive in RT-PCR. The PCDH15A's prolin-rich domains, the soluble property of PCDH15C and the now well established role of protocadherins and cadherins in tumoral physiopathology, suggest an essential role for PCDH15 in lymphoproliferatives disorders. We believe that PCDH15A could induce a positive signal delivered in trans to nearby cells expressing PCDH15A, or be a resident marker. The PCDH15C could be an escaping factor in immune response, such as classical cadherins which inhibit NK cells through KLRG1. To better understand the physiopathology of these lymphoproliferative disorders, we determined the receptor pattern in derived cell lines. Our investigations showed a lack of KIR receptor expression in the nasal NK/T lymphoma cell lines, which would be a factor allowing beginning of these hemopathies, since it allows proliferation in case of activating signal. The CAEBV derived cell line display a KIR- NKG2A- phenotype. We also demonstrated a lack of cytotoxicity of these NK cell lines against K562, which confirms the inability of KIRNKG2A- NK cells to lyse these target cells. These results suggest new physiopathological pathways in these lymphoproliferative disorders, which are independent of granzyme/perforine cytotxicity

Nous présentons dans ce mémoire l'élaboration d'un biocapteur à finalité immuno-hématologique. Après avoir étudié les protagonistes de la réaction immunologique et les différents composants (biorécepteur et transducteur) des biocapteurs, nous avons entrepris la conception d'un nouveau type de biorécepteur. La première étape a été l'optimisation de supports inorganiques verre et silicium par traitement à l'aide du détergent alcalin Hellmanex ou par oxydation à l'ozone engendré par l'oxygène sous U. V. Ces supports ont été ensuite fonctionnalisés par hydrosilylation à l'aide de deux composés organosiliciés péalablement synthétisés. L'un de ces composés, amphiliphie va être capable de fixer un peptide fusiogène issu de l'extrémité NH2(bas) de la protéine Gp41 du VIH préalablement synthétisé en phase solide selon la stratégie FMOC. Afin de valider la conservation de l'intégrité des propriétés de reconnaissance du peptide lors du greffage, nous avons synthétisé selon la même méthodologie en phase solide, un peptide issu de la protéine Gp46 du virus HTLV-1 reconnu par un anticorps spécifique et un peptide témoin ne comportant pas l'épitope. Ces peptides ont été ensuite utilisés pour vérifier la spécificité de reconnaissance peptide-anticorps après greffage par technique ELISA. Les différentes étapes de fonctionnalisation par greffage des molécules organosiliciées ou peptidiques ont pu être suivies par Spectrométrie Infra-Rouge en transmission ou par réflectivité en modulation de polarisation. Nous avons ainsi, au cours de ce travail valider la spectrométrie Infra-Rouge en transmission comme mode de transduction d'un biorécepteur modèle créé par immobilisation directe d'antigène. Cette technique permet de visualiser l'interaction antigène-anticorps à la surface de matériaux. Enfin, nous avons utilisé le peptide fusiogène préalablement greffé pour immobiliser des hématies par insertion dans les membranes phospholipidiques. Cet ancrage de cellules sur support chimiquement modifié par peptides fusiogènes a pu être confirmé par microscopie photonique et microscopie électroniques à balayage.

En opposition avec la vision classique selon laquelle les anticorps maternels sont immunosuppesseurs, Zinkernagel (2001) a proposé qu’ils ne bloquent pas les infections mais servent uniquement à les atténuer, activant ainsi le système immunitaire de l’hôte à moindre coût. Je me suis appuyé sur le système lapin-myxomatose pour, à l’aide de modèles mathématiques, formaliser l’atténuation des maladies par les anticorps maternels, en comprendre les causes évolutives et les conséquences épidémiologiques. En effet, dans un tel système, les jeunes se trouvent face à deux situations. D’un côté, ils peuvent s’infecter tôt, développer une maladie atténuée et ainsi s’immuniser contre une éventuelle réinfection. De l’autre, ils peuvent grandir sans jamais être infectés, mais ils deviennent alors sensibles à la forme la plus sévère de la maladie. Un fort niveau de circulation du pathogène peut donc en réduire l’impact en permettant aux jeunes de s’immuniser à faible coût

Un des problèmes majeurs de la conservation prolongée en milieu liquide des hématies tests appliquées à la sérologie des groupes sanguins est la perte progressive de leur réactivité antigénique. Nous avons étudié la possibilité de stabiliser la membrane érythrocytaire au moyen de réactifs bifonctionnels clivables ou sensibles à l'action de protéases. Les résultats obtenus, en particulier avec les dimidoesters, ont été appliqués à la lyophilisation de ces globules rouges modifiés avec un certain succès qui laisse entrevoir la possibilité d'obtenir à moyen terme des hématies tests sous forme lyophilisée.

Les infections fongiques sont une complication fréquente des patients d’hématologie et en particulier des patients ayant reçu un greffe de cellules souches hématopoïétiques (CSH). L’objectif de ce travail était d’identifier les facteurs de risque d’infections fongiques intrinsèques et la transmission.Nous avons d’abord étudié l’aspergillose invasive (AI) qui est l’infection fongique la plus fréquente chez les greffés de CSH en croisant les données du registre européen des greffés ProMise et la base de données de l’étude prospective SAIF. Nous avons mené une étude cas-témoins nichée dans une cohorte de 185 cas et 651 témoins appariés. Les facteurs associés à la survenue d’une aspergillose étaient l’irradiation corporelle totale, une GvH aiguë de grade ≥2 et la rechute de l’hémopathie. Trente-cinq cas étaient précoces (J100). Le facteur associé à la survenue d’une AI précoce était l’absence de prise de greffe. Le facteur associé à la survenue d’une AI tardive était la GvH aiguë de grade 3-4. Les facteurs associés à la survenue d’une AI très tardive étaient la GvH aiguë de grade ≥2, la rechute et la neutropénie secondaire. Tous les facteurs pré-greffe étaient effacés par les facteurs post-greffe.Puis nous avons étudié la transmission d’infection fongique par l’étude d’une épidémie de pneumocystose survenue dans le service. Douze cas de pneumocystose sont survenus en 7 mois dans le service soir beaucoup plus qu’au cours des années précédentes. L’analyse moléculaire a permis de montrer que 4 cas appartenaient au même génotype, qui est un génotype rare jamais décrit dans une série de plus de 300 génotypes en Europe. La carte de transmission a permis de constater que ces 4 patients se sont rencontrés uniquement en hôpital de jour. Cette étude est la première démonstration moléculaire d’une épidémie de pneumocystose dans un service d’hématologie<br>Fungal infections are a common complication of hematology patients and especially in hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) recipients. The objective of this work was to identify intrinsic risk factors for fungal infections and transmission.We first studied invasive aspergillosis (IA), which is the most common fungal infection after HSCT by crossing data from the European HSCT registry ProMise and the prospective study database SAIF. We conducted a nested case-control study in a cohort of 185 cases and 651 matched controls. Factors associated with onset of aspergillosis were total body irradiation, acute GVHD grade ≥2, and relapse of the underlying disease. Thirty-five IA were early ( D100). The factor associated with the occurrence of an early IA was the absence of engraftment. The factor associated with the occurrence of late IA was acute grade 3-4 GvH. Factors associated with the occurrence of very late IA were acute GVHD grade ≥2, relapse, and secondary neutropenia. All pre-transplant factors were supplanted by post-transplant factors.Then we studied the transmission of fungal infection by studying a pneumocystosis outbreak occurring in the hematology department. Twelve cases occurred within 7 months. Molecular analysis showed that 4 of them belonged to the same genotype, which is a rare genotype never described in a series of more than 300 genotypes in Europe. The transmission map permitted to identify that these 4 patients met only in the daycare center. This study is the first molecular demonstration of a pneumocystis outbreak in a hematology ward

L'étude principale décrite ici concerne les anticorps anti-histone. Pour expliquer le dépôt des complexes immuns (ci) aux membranes basales glomérulaires (GBM) chez les patients atteints de lupus (LED), l'hypothèse de l'antigène plante a été développée. Selon ce modèle, les histones (ou nucléosomes) se lient aux GBM, suivies par la liaison d’ADN et d'anticorps anti-ADN. Nous nous sommes demande si le dépôt des ci aux GBM peut être le résultat d'une liaison directe des ci avec les histones. Par des techniques de digestion des IGG par la pepsine et d'inhibition compétitive de la liaison, nous avons établi les caractéristiques de l'interaction des histones avec les IGG agrégées, les anticorps anti-histone véritables et les IG du sérum de patients atteints de LED et de polyarthrite rhumatoïde. Nous concluons que les CI se lient aux histones sur la phase solide grâce à leur portion FC. De plus, les facteurs rhumatoïdes IGM, IGG ET IGA peuvent se lier aux histones indirectement, en utilisant comme ligand les IGG ainsi attaches aux histones. Nous avons aussi porte notre attention sur la topoisomérase i. Dans notre étude portant sur 128 patients atteints de LED, nous montrons par Elisa, western blot, immuno-diffusion et immuno-absorption que des anticorps anti-topo i sont présents chez 25% de ces patients, et que leurs niveaux sont lies à l'activité de la maladie. Enfin, nous avons comparé la sensibilité clinique des tests Elisa pour les anticorps antinucléaires réalisés avec des antigènes d'origine humaine et d'origine bovine. Nous avons extrait dans les mêmes conditions les antigènes SSA, SSB ET NRNP/SM, humains et bovins, avec lesquels nous avons réalisés des tests Elisa sur lesquels nous avons dose une centaine de sérums. Nous concluons que les antigènes d'origine humaine offrent une sensibilité supérieure aux antigènes d'origine bovine. Toutefois, pour les niveaux d'autoanticorps modérés et élevés, les antigènes d'origine bovine présentent une sensibilité acceptable