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Dissertations / Theses on the topic 'Sciences biomédicales'
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Hello, Eric. "Les néomalthusiens français et les sciences biomédicales (1880-1940)." Thesis, Bordeaux, 2016. http://www.theses.fr/2016BORD0199/document.
Full textAbstract:
Le néomalthusianisme est un courant de pensée qui réunit des pédagogues, des médecins, des anthropologues et des militants féministes et anarchistes. Sa réflexion et son action ont une dimension politique, économique et scientifique. Son projet est une transformation profonde des sociétés humaines par la limitation des naissances afin d'aboutir à une meilleure organisation sociale, capable de répondre à l'aspiration légitime des êtres humains au bonheur. Les moyens pour atteindre cet objectif sont la généralisation de la prophylaxie anticonceptionnelle qui comprend les techniques contraceptives et l'avortement. Le mouvement néomalthusien a été particulièrement actif en France, des années 1890 à la veille de la Seconde Guerre mondiale. Il a également soulevé de nombreuses oppositions et a été activement combattu, notamment après la Première Guerre mondiale. S'intéressant au nombre des naissances, le néomalthusianisme souligne l'incompatibilité entre l'augmentation exponentielle de ce dernier et la possibilité pour les membres composant une collectivité de disposer du nécessaire afin d'atteindre le bonheur.De ce fait, le néomalthusianisme français est inséparable de l'eugénisme, thème central dans l'histoire de ce mouvement, de son émergence à ses derniers développements dans les années 1930. Le présent travail a pour objectif de tracer un portrait synthétique inédit du néomalthusianisme français en privilégiant son rapport aux sciences biomédicales et à la culture scientifique. [...]Neo-Malthusianism is a line of thought which gathers education specialists,doctors, anthropologists and women's and anarchist activists. Its reflexion and its actionhave a political, economic and scientific dimension. Its project is to deeply transformhuman societies through birth control in order to reach a better social organisation, likelyto meet human beings’ legitimate aspiration for happiness. The means implemented toreach this goal are the generalisation of contraceptive prophylaxis, which includescontraceptive methods and abortion. The neo-Malthusian movement was particularlyactive in France, from the 1890ies to the eve of World War II. It has also met with strongopposition and was actively fought, noticeably after World War I. Observing the number ofbirths, neo-Malthusianism points how incompatible the exponential increase of births iswith the possibility for the members of a given community to have what they need to reachhappiness. Hence, French neo-Malthusianism is inseparable from eugenics, which is acentral theme in the history of this movement, from its emergence to its last developmentsin the 1930ies. The objective of the present work is to draw a new and previouslyunpublished synthetic portrait of this movement, focussing on its link to bio-medicalsciences and scientific culture. [...]
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BARRA, Vincent. "Modélisation, classification et fusion de données biomédicales." Habilitation à diriger des recherches, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2004. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00005998.
Full textAbstract:
Ce mémoire synthétise les travaux que j'ai menés de 2000 à 2004, au sein de deux laboratoires des facultés de Clermont-Ferrand : l'Equipe de Recherche en Imagerie Médicale (ERIM, Université d'Auvergne), où j'ai effectué ma thèse, et le Laboratoire d'Informatique, de Modélisation et d'Optimisation des Systèmes (LIMOS, Université Blaise Pascal) dans lequel j'ai été accueilli suite à mon recrutement en tant que maître de conférences dans cette même université. Ce changement de laboratoire s'est accompagné d'une modification de mon thème principal de recherche, passant du traitement d'images médicales multimodales par des techniques de fusion d'informations, au domaine de la bioinformatique en général, et de l'étude des puces à ADN en particulier. Plutôt que d'essayer de regrouper artificiellement ces deux thèmes au sein d'un même plan, j'ai préféré diviser ce mémoire en deux parties distinctes et cohérentes, chacune traitant d'un des deux aspects de recherche que je mène actuellement de front. Ainsi, la première partie résume les travaux que j'ai effectués depuis 2001 dans le domaine de la fusion de données appliquée au traitement d'images 3D du cerveau, soit directement soit dans le cadre du co-encadrement de deux doctorants. Le dernier chapitre de cette partie met en particulier en perspective les nouveaux développements espérés sur la stimulation magnétique transcrânienne, à travers l'encadrement d'une thèse CIFRE que j'assure par délégation à temps plein. La seconde partie se concentre sur les recherches que je mène depuis septembre 2001 au LIMOS, concernant l'étude des images de puces à ADN. J'expose dans cette partie au travers de trois chapitres mon projet de recherche dans ce domaine, et je présente pour chaque choix retenu ma contribution sous la forme d'un simulateur d'images de biopuces transcriptome et de nouvelles méthodes d'analyse de ces images. Si les deux parties sont clairement décorrélées, j'ai néanmoins essayé de dégager une problématique générale commune à mes travaux, que j'ai nommée sans forfanterie modélisation, classification et fusion de données biomédicales, et qui constitue le titre de ce manuscrit.
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Hage, Charles-Henri. "Sources optiques fibrées pour applications biomédicales." Phd thesis, Université de Bourgogne, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00907642.
Full textAbstract:
Ce mémoire présente les travaux effectués sur le développement d'une source optique servant à des applications d'imagerie biomédicale en général et de diffusion Raman cohérente en particulier. En effet la diffusion de ces dernières est freinée par le verrou technologique que constitue la nécessité de deux impulsions synchronisées et décalées en longueur d'onde. La praticité et les possibilités de conversions de fréquences offertes par l'optique non-linéaire fibrée sont ainsi utilisées pour adresser ce verrou technologique. Tout d'abord, une source simplement réglable en longueur d'onde est générée par l'effet d'auto-décalage en fréquence optique d'un soliton par effet Raman. Une étude des principaux paramètres de fibre aboutit à des décalages de 320 à plus de 500 nm, permettant une imagerie des résonances d'intérêt (≈ 1000-4000 cm-1). Deux applications de ce décalage sont présentées. Ensuite, l'autre impulsion voit sa largeur spectrale réduite de 70 à 10 cm-1 par compression spectrale, qui consiste en un "regroupement non-linéaire de fréquences sans pertes", afin de bénéficier de la résolution spectrale nécessaire. Enfin, la source développée est validée par l'acquisition de spectres CARS de différents échantillons de référence, pour différentes résonances (850 à 1750 cm-1). Une extension de la source à d'autres types d'imagerie est proposée, ainsi qu'une architecture de source quasiment entièrement fibrée exploitant les principes développés au cours de cette thèse
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Toth, Kalman. "Fonctionnalisation d' (endo)fullerène : de la science des matériaux aux applications biomédicales." Phd thesis, Université de Strasbourg, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00862768.
Full textAbstract:
Nous avons synthétisé différentes dyades donneurs-accepteurs (D-A) π-conjuguées à base de fullerène pour des applications photovoltaïques dans lesquelles les unités D étaient soit des oligophenylenevinylenes (OPV) soit des oligophenyleneethynylene (OPE) et les unités A étaient le C60 ou un endofullerène du type Y3N@C80. Il y avait une exigence supplémentaire pour nos matériaux, à savoir qu'ils devaient s'auto-organiser en phases liquides-cristallines. Pour ce faire, toutes les unités D contenaient un promoteur mésogène afin d'induire le mésomorphisme de la dyade D- et donc de contrôler la morphologie des couches minces nécessaires à l'élaboraiton des cellules photovoltaïques grâce à une organisation supramoléculaire. En dehors de cela, nous avons étudié l'influence de la nature chimique du donneur (par exemple lyophile ou amphiphile), de la longueur des oligomères et de la multiaddition sur les propriétés photophysiques et sur l'auto-assemblage. Nous avons synthétisé une dyade OPE-Y3N@C80 qui est le premier dérive mésomorphe et photosensible de ce type de métallofullerène endohédral.
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Salette, Arnaud. "Développement de capteurs intégrés pour micropompes MEMS : applications biomédicales." Phd thesis, Université de Grenoble, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00952312.
Full textAbstract:
Les Dispositifs Médicaux d'Injection (DMI) se développent de plus en plus. De nouveaux dispositifs apportent des innovations en terme de performances et d'utilisation par rapport aux seringues classiques. Le DMI développé par Eveon est un dispositif bio-inspiré possédant des capteurs, une micropompe, un flacon et une aiguille. Il permet une injection automatique, précise au microlitre garantissant une faible perte de liquide médicamenteux grâce aux techniques de miniaturisation utilisées dans la fabrication des microsystèmes. En effet, une micropompe à membrane en silicium intégrant des capteurs a été réalisée par des procédés issus de la microélectronique. Deux types d'actionneurs ont été couplés à la membrane : un actionneur bimétallique intégré et un actionneur piezoélectrique externe. Dans le cas de l'actionneur bimétallique, des thermo-résistances ont été conçues, fabriquées et caractérisées pour permettre de mesurer le profil thermique de la membrane lors de l'actionnement avec une erreur de 5%. Dans le cas de l'actionneur piezoélectrique externe, des piezorésistances ont été intégrées selon l'axe radial de la membrane afin de contrôler le profil de contraintes dans la membrane, asservir l'actionneur en fonction de la contre-pression et maximiser les caractéristiques de la pompe. Afin d'assurer la délivrance d'une dose précise de médicament, un capteur de débit est intégré dans les canaux microfluidiques de la micropompe. Ce capteur innovant permet de détecter des débits de liquide dans la gamme spécifiée par les dispositifs médicaux d'injection, à savoir une plage de débit allant de 0.5mL/min à 4mL/min.
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Javaux, Cédric. "Isolation d’une sérine protéase thiol-dépendante dans l’arachide et investigation de son rôle sur le complément et la réaction allergique." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2017. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/253031.
Full textAbstract:
La prévalence de l’allergie à l’arachide semble s’élever entre 0.6 et 1.9% de la population générale. Elle se caractérise par des doses déclenchantes particulièrement faibles. Des doses de l’ordre du milligramme sont suffisantes pour déclencher une réaction objectivable. Les valeurs de ED05 et de ED50 sont respectivement estimables à 7.3 mg, et de 100mg jusqu’à 1000 mg. Les réactions cliniques peuvent s’avérer très sévères et mener à des chocs anaphylactiques létaux. Or, l’examen du contenu et des différents allergènes qui ont été décrits ne permettent pas de pointer des caractéristiques qui pourraient expliquer ces éléments. Dix-sept allergènes ont été décrits dans l’arachide (Ara h 1 à 17). Ils appartiennent à des familles largement présentes parmi les protéines alimentaires végétales (Viciline, conglutine, …). Si l’on examine les raisons usuellement invoquées pour expliquer l’allergénicité des protéines (nombres d’épitopes, résistance à la protéolyse et aux traitements physico-chimiques, glycosylation, …) on constate que les allergènes de l’arachide, dans leur ensemble, possèdent ces propriétés sauf l’activité enzymatique qui n’avait pas été décrite jusqu’alors. Dès lors les deux premiers objectifs de ce travail ont consisté d’une part à mettre en évidence la présence d’activité protéolytique dans les graines, et d’autre part de tenter de purifier la protéase par des techniques de chromatographie, de la caractériser par des tests d’inhibition et de l’identifier. Le troisième objectif fut de déterminer si l’activité protéolytique pouvait avoir un rôle dans la sévérité de la réaction allergique. A cette fin nous avons mesuré les productions d’anaphylatoxine C3a et C5a et évalué le rôle de l’activité protéolytique dans l’activation du système du complément par la mesure de la production du complexe d’attaque membranaire SC5b-9. Le quatrième objectif consistait déterminer si l’activité protéolytique avait une influence sur la perméabilité tissulaire via la mesure de la lyse des jonctions serrées à l’aide d’un modèle de culture cellulaires MDCK.Partie Expérimentale-RésultatsLes extractions de protéines et les différentes chromatographies effectuées nous ont fourni une séquence de purification (IEX, Benzamidine et Thiopropyl) qui nous a permis d’isoler, de façon répétable, une protéine active d’un poids de 30-35 kDa dont l’activité est de type thiol-sérine protéase. En effet, l’activité protéolytique n’est pas inhibée par des inhibiteurs d’aspartique protéase (pepstatine) ni de métallo-protéase (EGTA, EDTA, O-phénanthroline), mais elle est totalement inhibée par les inhibiteurs de sérine protéase (PEFABLOC, TLCK, Benzamidine), partiellement par les inhibiteurs de cystéine protéases (MMTS, iodoacétamide, E64) et qu’elle interagit avec le thiopropyl et le PEG. Son séquençage n’a pas permis de l’identifier de façon certaine mais révèle qu’elle présente des homologies avec la conglutine-7 (Ara h 2), et des analogies avec la conglutine-γ du lupin, décrite comme sérine protéase. Concernant la réaction allergique, l’activité protéolytique de l’arachide induit clairement une production d’anaphylatoxines C3a et C5a dans les sérums et plasmas in vitro. De plus, les dosages du SC5b-9 ont démontré la production du complexe d’attaque membranaire. Cette activation du complément se fait de manière totalement indépendante des voies classique, alterne, ou des lectines. En effet, nous n’avons pas décelé de production de C3 convertase (tests d’hémolyse nuls et dosage de Bb) alterne et nous avons extrait et vérifier l’inactivité protéolytique des lectines de l’arahide. Enfin, les tests réalisés sur cultures cellulaires ont montré que l’activité protéolytique de l’arachide induit la lyse de l’occludine au sein des jonctions serrées, induisant de ce fait une augmentation de la perméabilité pouvant favoriser la pénétration des allergènes. Conclusions et PerspectivesNotre travail met en évidence la présence d’une activité protéolytique de type thiol-sérine protéase qui est d’une part responsable de la production d’anaphylatoxine C3a et C5a de façon totalement indépendante des voies d’activation du complément, et qui mène à la formation du MAC et d’autre part, d’affecter la perméabilité cellulaire en lysant l’occludine au sein des jonctions serrées. Nous émettons également l’hypothèse de l’influence de l’activité protéolytique de l’arachide en tant que « facilitateur » de la réaction allergique au vu des quantités d’anaphylatoxine produites et de son influence sur la perméabilité tissulaire, ainsi que de la sensibilisation à l’allergie via la potentialité d’une action sur les CD23, les PARs, et du C3a et C5a produits sur leurs récepteurs en surface des APCs.PublicationIsolation of a thiol-dependent serine protease in peanut and investigation of its role in the complement and the allergic reaction. Cédric Javaux, Patrick Stordeur, Mohamed Azarkan, Françoise Mascart, Danielle Baeyens-Volant. Molecular Immunology 75 (2016) 133–143.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Choquet, Rémy. "Partage de données biomédicales : modèles, sémantique et qualité." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00824931.
Full textAbstract:
Le volume de données disponibles dans les systèmes d'information est de plus en plus important et pour autant, nous n'avons jamais autant essayer d'interconnecter cette information pour en extraire de la connaissance sans véritable succès généralisable. L'origine du problème est multiple. Tout d'abord, l'information est représentée dans des structures différentes. Ensuite, les vocabulaires utilisés pour exprimer les données sont hétérogènes. Enfin, la qualité de l'information est souvent trop mauvaise pour utiliser une information et en déduire des connaissances. Ce diagnostic est d'autant plus vrai dans le cadre du partage d'information dans le domaine biomédical où il reste difficile de s'entendre sur des représentations (structures et vocabulaires) pivots d'un domaine de la médecine, et donc où il apparaît difficile de résoudre le problème du partage d'information par l'imposition de standard de codage et de structuration de l'information. Plus récemment, l'introduction de la sémantique dans des processus de partage d'information, nous offre la possibilité de mettre en oeuvre des représentations pivots indépendantes de la structuration ou du nommage d'une donnée. Cette thèse s'inscrit dans cette problématique de partage de données biomédicales dans le cadre de l'évaluation de l'évolution de la résistance des bactéries aux antibiotiques en Europe. L'hypothèse générale de travail que nous proposons est la suivante: comment partager de l'information biomédicale de manière non ambigüe, en temps réel, et à la demande en Europe. Cette hypothèse pose diverses problématiques que nous abordons dans ce mémoire. La problématique de la qualité des données. Celle de la représentation des données à travers leur structure, leur vocabulaire et de leur sémantique. Nous aborderons aussi les problèmes d'alignement de données aux ontologies de domaine et de la fédération de données aidée d'ontologie. Enfin, nous présenterons un système d'interopérabilité sémantique basé sur des règles qui aborde le problème d'alignement sémantique de systèmes hétérogènes appliqué à notre domaine. Nous discuterons finalement de l'apport de la sémantique pour le partage d'information et des limites des outils et méthodes actuels.
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Piumatti, Matteo. "The interactome of the microcephaly gene ASPM in human cortical cells." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2021. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/322985/8/Table2.xlsx.
Full textAbstract:
Mutations in the Abnormal Spindle-like Microcephaly-associated (ASPM) gene are the most common cause of primary microcephaly, a rare condition characterized by a severe reduction of brain size at birth. Several studies allowed to identify ASPM as a centrosome and mitotic spindle protein that regulates cell division and spindle orientation. However, little is known about ASPM molecular mechanisms, especially in human neural cells relevant to the disease. In order to decipher the molecular mechanisms of action of ASPM in human corticogenesis, we used co-immunoprecipitation (coIP) followed by mass spectrometry to identify the interactors of ASPM in human HEK cells and human cortical progenitors differentiated from pluripotent stem cells engineered to tag the endogenous ASPM protein. We thus identified and validated 14 ASPM interactors of which 12 are newly reported, and seven are found specifically in neural cells, including the important spindle pole regulator Nuclear mitotic apparatus (NUMA). We then characterized the expression and localization of the identified proteins in human cortical progenitors differentiated from control and isogenic ASPM mutant cells. This revealed that many of the identified proteins are selectively located at the spindle pole, and that this selective localization is disrupted in mutant cells for several of the interactors, in particular the MAP7 domain-containing protein 1 (MAP7D1) and DnaJ homolog subfamily B member 6 (DNAJB6). Our data uncover some of the complex ASPM interactome relevant and specific to human brain development and microcephaly, and suggest that ASPM acts as a major molecular hub at the centrosome and mitotic spindle to control the patterns of cell division of cortical progenitors.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Garcia, Apac Coralith. "Antimicrobial resistance in Peruvian hospital settings." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2016. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/225245.
Full textAbstract:
Antimicrobial resistance and antimicrobial misuse are of global concern but affect more the resource-constrained settings. Limited research has been done in Peru in order to address these topics. We interviewed 256 physicians of two hospitals of Lima in order to assess the knowledge, attitudes, and practices about antimicrobial resistance and antimicrobials use. Most of them agreed that antimicrobial resistance is a problem worldwide and within Peru, but only 20% correctly estimated the level of resistance of Klebsiella pneumoniae to third generation cephalosporins. We also developed a network of nine hospitals in Lima to perform a resistance surveillance of key isolates causing bacteremia. We found during a one-year period that Staphylococcus aureus was the most frequently Gram positive isolated (22%). K. pneumoniae and Escherichia coli were the most frequent Gram-negative bacilli, >75% of both produced extended-spectrum β-lactamases (ESBLs). ESBL-producers microorganisms had also higher level of co-resistance to ciprofloxacin and gentamicin. Finally, to explore the antimicrobial resistance and molecular characteristics of methicillin-resistant S. aureus, we analyzed isolates from patients and healthcare workers (HCWs). Fifty percent of 338 blood isolates were methicillin-resistant (MRSA); one predominant multidrug-resistant MRSA strain was found in all hospitals (ST 5 spa t149-SCCmec I-, the Cordobes-Chilean clone. MRSA nasal carriage rate of 8.7%, was found among HCWs. The two most common clones circulating among HCWs were also the two predominant among patients with bacteremia. There is a need to implement cost-effective infection control policies to reduce the transmission of multidrug resistant microorganisms in these settings.La résistance aux antibiotiques et leur utilisation inappropriée constituent un problème majeur de santé publique qui affecte particulièrement les pays à revenus faibles et intermédiaires. Les données concernant cette problématique sont très limitées au Pérou. Nous avons interrogé 256 médecins de deux hôpitaux à Lima afin d’évaluer leurs connaissances et leurs pratiques vis-à-vis de l’utilisation des antibiotiques et de la résistance aux antibiotiques. La plupart des médecins étaient conscientisés à la problématique de la multirésistance chez les entérobactéries, mais seulement 20% d’entre eux estimaient correctement le taux résistance de Klebsiella pneumoniae aux céphalosporines à large spectre au sein de leurs institutions. Au cours de ce travail, un réseau entre neuf hôpitaux de Lima a été implémenté afin de suivre la résistance aux antimicrobiens des souches isolées d’hémocultures. Au cours des années 2008-2009, le Staphylococcus aureus était la bactérie Gram-positive la plus fréquente (22%) ;K. pneumoniae et Escherichia coli représentaient les bactéries Gram-négatives les plus souvent isolées d’hémocultures. Parmi ces dernières entérobactéries, 75% produisaient des β-lactamases à spectre étendu (BLSE) avec un taux élevé de co- résistance à la ciprofloxacine et à la gentamicine. Les souches de S. aureus isolées d’hémocultures chez les patients hospitalisés et de dépistage chez les professionnels de santé (PS) ont été caractérisées pour leur profil de résistance aux antibiotiques et génotypées par biologie moléculaire. La moitié des 338 souches isolées d’hémocultures étaient résistantes à la méticilline (« MRSA ») et appartenaient à un clone prédominant disséminés dans ces différents hôpitaux, appelé le ST 5- spa t149-SCCmec I, ou le clone Cordobes-Chilien. Le taux de portage nasal de MRSA parmi les PS était à 8,7% ;les deux génotypes les plus fréquemment observés chez les PS appartenaient aux mêmes clones que ceux retrouvés majoritairement chez les patients hospitalisés. Cette observation suggère une transmission horizontale. L’implémentation de politiques de contrôle de l'infection est primordiale dans les établissements de santé au Pérou afin de réduire la transmission de micro-organismes multi-résistants.
Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Yang, Dong. "Structural and Functional Characterization of Proteins involved in PDIM biosynthesis in Mycobacterium tuberculosis." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/304846/3/Table.pdf.
Full textAbstract:
Tuberculosis is an infectious disease caused by the pathogen Mycobacterium tuberculosis which is still a public health threat. Due to the appearance of multidrug-resistant M. tuberculosis strains, it is urgent to find new drugs to fight against tuberculosis, especially against the extensively drug resistant tuberculosis. The unique impermeable mycobacteria cell wall, rich in lipids, is a key barrier to anti-tuberculosis drug uptake. One of these lipids, the phthiocerol dimycocerosate (PDIM), is related to mycobacteria virulence, drug resistance and mycobacteria cell wall integrity. Therefore, research focusing on PDIM biosynthesis potentially provides a new route for the development of new anti-tuberculosis drugs.In this context, we investigated two proteins, the thioesterase TesA and the chaperonin GroEL1, that are involved in the PDIM biosynthesis, and studied their structural and functional properties. Firstly, using various substrates, we demonstrated that TesA displays thioesterase and esterase activities and showed that TesA undergoes substrate-dimerization. A new TesA inhibitor, methyl arachidonyl fluorophosphonate (MAFP), was identified that irreversibly binds to the TesA catalytic serine residue. Furthermore, MAFP can increase the susceptibility to vancomycin in a TesA inhibition dependent manner while it can also affect the M. bovis BCG biofilm formation through broader action mechanisms. Secondly, we observed that the mycobacterial GroEL1, unlike the other chaperonins, E. coli GroEL and mycobacteria GroEL2, increases copper tolerance. We demonstrated that the copper can specifically bind to the GroEL1 with a strong affinity for its natural carboxyl terminal histidine-rich region. The classical feature of chaperonins is also increased in the presence of copper. These results suggest that GroEL1 could help mycobacteria to tolerate high bactericidal metal concentrations during macrophage infection, potentially through a metal storage mechanism. Last but not the least, we identified new mycobacterial GroEL1 and GroEL2 activities. In one word, the biochemical properties of two essential proteins, GroEL1 and TesA, involved in PDIM biosynthesis in M. tuberculosis have been further elucidated. The implications of these results are important not only to develop new antituberculous drugs but also to fight drug resistance.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie)
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Dufour, Damien. "Résolvine D1, cause ou conséquence des interactions entre macrophages et cellules endothéliales ?" Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2018. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/271730/3/TM.docx.
Full textAbstract:
L’importance de la prévalence des maladies cardio-vasculaires dans les pays industrialisés fait de l’amélioration de nos connaissances par rapport à leur physiopathologie, un des challenges les plus importants des années à venir. Même si les traitements actuels visent à une amélioration du pronostic, des études approfondies des multiples mécanismes inhérents à l’instauration de l’athérosclérose apportent de nouvelles pistes de cures.L’importance des low density lipoproteins (LDLs), et plus spécifiquement des LDLs oxydées par la myeloperoxydase (MPO) dans la mise en place de la pathologie, nous a poussé à investiguer leur rôle dans l’athérosclérose et en particulier la réponse des cellules endothéliales soumises à cet inducteur de dysfonction endothéliale.Nous avons voulu étudier l’importance des dérivés d’oméga-3 de type acide docosahexaénoïque (DHA) et plus particulièrement de la résolvine D1 (RvD1) récemment découverte comme étant un inducteur de résolution inflammatoire.Afin de pouvoir évaluer les modulations de la RvD1 et de ses précurseurs DHA et 17S-HDHA, nous avons mis au point une méthode de purification des matrices biologiques complexes, suivie d’une quantification par spectrométrie de masse couplée à la chromatographie liquide (LC/MS-MS).La littérature n’offrant que des méthodes difficilement reproductibles et aux résultats parfois discutables, nous avons opté pour une purification par extraction liquide/liquide qui a montré de très bons résultats lors de sa validation.Par l’utilisation de cette méthode, nous avons pu apprécier les effets de la MPO, et plus particulièrement des LDLs oxydées par la MPO sur les cellules endothéliales, dans l’induction d’une réponse pro-résolutive caractérisée par une augmentation de la RvD1. Cet effet favorable induit par la MPO a été comparé à un autre modèle d’oxydation des LDLs par le cuivre (Ox-LDLs), sans résultat, attestant par-là le caractère spécial des Mox-LDLs dans une initiation de résolution.Nous avons également mis en évidence un effet synergique de ces Mox-LDLs qui, une fois associées aux LDLs-natives, permettent une réponse physiologique plus forte avec des taux de RvD1 produits encore plus importants. Encore une fois, les Ox-LDLs semblent dépourvues d’effets.Par la mise en place d’autres tests, nous avons essayé de mettre en lumière le mécanisme permettant l’induction d’un processus pro-résolutif par la libération de RvD1. Nous avons donc testé différents inhibiteurs jugés intéressants ainsi que l’inhibition de différents récepteurs aux LDLs (natives et oxydées) exprimés au niveau des cellules endothéliales. Par l’analyse d’échantillons de plasma issus de souris d’âges différents, nous avons établi une corrélation négative entre l’âge de l’individu et le taux de RvD1 mesuré. Ceci exprime le fait que les défenses mises en place par l’organisme pour un retour plus rapide à l’homéostasie lors d’un processus inflammatoire ont tendance à s’amenuiser avec l’âge. De plus, l’analyse de plasmas de patients soumis à hémodialyse et comparés aux plasmas de volontaires sains nous a permis de mettre en évidence une corrélation négative entre le taux de RvD1 et le nombre de macrophages M1 chez les patients sous hémodialyse, ainsi qu’entre les taux de RvD1 et le ratio chloro-tyrosine/tyrosine chez les volontaires sains.Nous avons donc constaté que la MPO, bien qu’étant un inducteur important de dysfonction endothéliale par son rôle d’oxydation au niveau des LDLs, est aussi un inducteur d’une réponse physiologique favorable à une résolution du phénomène inflammatoire. De plus, les LDLs oxydées par la MPO semblent agir de manière synergique avec les LDLs-nat pour induire cette réponse pro-résolutive sous forme d’une augmentation accrue de résolvine D1. Ce métabolite actif du DHA a la capacité de réduire l’influx de neutrophiles au niveau de la plaque et de favoriser l’expression phénotypique M2 des macrophages, bien connus comme étant les macrophages de la résolution.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie)
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Donfack, Guefack Sidoine Pierre V. "Modélisation des signes dans les ontologies biomédicales pour l'aide au diagnostic." Phd thesis, Université Rennes 1, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01057310.
Full textAbstract:
Introduction : Établir un diagnostic médical fiable requiert l'identification de la maladie d'un patient sur la base de l'observation de ses signes et symptômes. Par ailleurs, les ontologies constituent un formalisme adéquat et performant de représentation des connaissances biomédicales. Cependant, les ontologies classiques ne permettent pas de représenter les connaissances liées au processus du diagnostic médical : connaissances probabilistes et connaissances imprécises et vagues. Matériel et méthodes : Nous proposons des méthodes générales de représentation des connaissances afin de construire des ontologies adaptées au diagnostic médical. Ces méthodes permettent de représenter : (a) Les connaissances imprécises et vagues par la discrétisation des concepts (définition de plusieurs catégories distinctes à l'aide de valeurs seuils ou en représentant les différentes modalités possibles). (b) Les connaissances probabilistes (les sensibilités et les spécificités des signes pour les maladies, et les prévalences des maladies pour une population donnée) par la réification des relations ayant des arités supérieures à 2. (c) Les signes absents par des relations et (d) les connaissances liées au processus du diagnostic médical par des règles SWRL. Un moteur d'inférences abductif et probabiliste a été conçu et développé. Ces méthodes ont été testées à l'aide de dossiers patients réels. Résultats : Ces méthodes ont été appliquées à trois domaines (les maladies plasmocytaires, les urgences odontologiques et les lésions traumatiques du genou) pour lesquels des modèles ontologiques ont été élaborés. L'évaluation a permis de mesurer un taux moyen de 89,34% de résultats corrects. Discussion-Conclusion : Ces méthodes permettent d'avoir un modèle unique utilisable dans le cadre des raisonnements abductif et probabiliste, contrairement aux modèles proposés par : (a) Fenz qui n'intègre que le mode de raisonnement probabiliste et (b) García-crespo qui exprime les probabilités hors du modèle ontologique. L'utilisation d'un tel système nécessitera au préalable son intégration dans le système d'information hospitalier pour exploiter automatiquement les informations du dossier patient électronique. Cette intégration pourrait être facilitée par l'utilisation de l'ontologie du système.
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Poncelet, Louise. "Développement et caractérisation d'un nouveau modèle cellulaire permettant l'étude de la maturation de la NADPH oxydase Duox en association avec son activateur DuoxA." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2019. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/288456/3/Manuscrit.pdf.
Full textAbstract:
Ce travail de thèse consiste en l’étude de deux membres de la famille des NADPH oxydases :Duox1 et Duox2, et leurs partenaires DuoxA1 et DuoxA2. Exprimées dans la thyroïde, ces deux enzymes sont essentielles à la synthèse des hormones thyroïdiennes, puisqu’elles produisent du peroxyde d’hydrogène (H2O2), indispensable à l’organification de l’iodure par la thyroperoxydase. Duox1 et Duox2 sont également exprimées dans de nombreux autres tissus, comme les voies respiratoires et le tractus digestif, au sein desquels elles jouent un rôle primordial dans la défense de l’organisme contre les pathogènes. Afin d’être exprimées à la surface des cellules où elles sont actives, les protéines Duox nécessitent la présence de facteurs de maturation, appelés DuoxA1 et DuoxA2. Initialement identifiées comme des protéines résidentes du réticulum endoplasmique lors de leur découverte en 2006, les protéines DuoxA ont été détectées à la surface des cellules et pourraient dès lors former un complexe membranaire avec les protéines Duox. Les mécanismes d’activation des Duox par leurs facteurs de maturation DuoxA ne sont pas encore complètement connus à ce jour et la preuve formelle d’une interaction entre les deux partenaires à la surface des cellules était encore manquante lorsque ce travail de thèse a débuté. Nous avons généré des clones de cellules HEK293 Tet-On3G exprimant de manière constitutive les protéines Duox1 ou Duox2, ainsi que les protéines DuoxA1 ou DuoxA2 sous le contrôle d’un promoteur inductible à la doxycycline, et ce pour les 4 combinaisons suivantes :D1DA1, D2DA2, D1DA2 et D2DA1. Ces cellules ont permis d’étudier l’expression, la stabilité et l’activité des enzymes Duox en fonction de l’expression modulée de DuoxA. De plus, la présence d’étiquettes HA et V5 au niveau de l’extrémité NH2-terminale des protéines Duox et DuoxA, respectivement, a permis de comparer de manière fiable l’expression des protéines dans les différents types de clones et de mettre en évidence une interaction entre les deux partenaires. Nous avons confirmé l’efficacité de ce système cellulaire pour reconstituer l’expression des protéines DuoxA1 et DuoxA2, ainsi que la maturation et l’activité concomitantes des protéines Duox1 et Duox2. Lorsqu’elles sont exprimées seules, ni les protéines Duox ni les protéines DuoxA ne sont exprimées à la surface des cellules. Dans les cellules exprimant les partenaires non pairés (Duox1/DuoxA2 et Duox2/DuoxA1), l’expression des protéines à la surface des cellules est plus faible, tout comme la production d’H2O2 ionomycine-dépendante qui y est associée. En normalisant cette production d’H2O2 à l’expression des protéines Duox et DuoxA à la surface des cellules, nous avons montré que l'association Duox2/DuoxA2 était plus active que le partenariat Duox1/DuoxA1, ce qui justifie que Duox2/DuoxA2 constitue le système générateur majeur de peroxyde d’hydrogène dans la thyroïde. Par ailleurs, nous avons montré que l’H2O2 produit par les cellules exprimant le couple Duox2/DuoxA2 induisait des cassures double brins à l’ADN, après stimulation de l’activité de Duox2 par l’ionomycine et le PMA. Enfin, nous avons montré que les protéines Duox et DuoxA stabilisent leur partenaire respectif. Lorsqu’elles sont associées à leur partenaire pairé (D1DA1 et D2DA2), les protéines Duox et DuoxA sont plus stables et leur temps de demi-vie est augmenté, par rapport aux couples non pairés (D1DA2 et D2DA1). Nous avons montré une interaction spécifique entre les protéines Duox et DuoxA à la surface des 4 types de clones HEK293 Tet-On3G, à l’aide de la technique de Duolink®. Les complexes formés par les couples pairés se sont avérés encore une fois plus stables au cours du temps que les complexes non pairés. Finalement, nous avons démontré l’importance de la glycosylation des facteurs de maturation dans leur expression à la surface, ainsi que dans la maturation et l’activité des enzymes Duox. Ce travail de thèse a permis de démontrer que le système générateur d’H2O2 tel qu’il est retrouvé au pôle apical des thyrocytes est un complexe enzymatique membranaire constitué de la NADPH oxydase DUOX1/2 qui interagit avec les DUOXA1/2 respectivement. Le complexe DUOX2/DUOXA2 est le plus actif et des mutations dans l’un des partenaires sont fréquemment responsables d’hypothyroïdies congénitales.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Peyrassol, Xavier. "Développement et caractérisation d’anticorps de camélidés dirigés contre des récepteurs couplés aux protéines G et leur utilisation dans des approches structurales." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2018. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/270870.
Full textAbstract:
Les camélidés possèdent une caractéristique immunologique particulière parmi les mammifères. En plus des anticorps conventionnels tétramériques composés de 2 chaînes lourdes et de 2 chaînes légères, on retrouve dans des proportions variant de 25 à 50% des anticorps dépourvus de chaînes légères. Le paratope de ces anticorps est dès lors constitué de la partie variable monomérique des chaînes lourdes. Ce domaine d’environ 15 kDa représente le plus petit fragment capable de lier un antigène et est communément appelé nanobody de par sa petite taille. Les nanobodies possèdent des propriétés uniques considérables comparés aux anticorps conventionnels, comme leur capacité à reconnaître des épitopes cryptiques mais aussi la possibilité de les modifier et les assembler facilement afin d’améliorer leurs propriétés. Ces dernières années, les nanobodies ont connu un intérêt grandissant tant au niveau de la recherche fondamentale qu’au niveau du développement de nouvelles solutions diagnostiques et thérapeutiques. Grâce à leur utilisation, la biologie structurale des RCPGs a connu des avancées significatives avec notamment l’obtention de la structure du récepteur β2-adrénergique dans une conformation active et complexé à une protéine G hétérotrimérique. Les RCPGs représentent la plus grande famille de récepteurs membranaires avec près de 800 récepteurs différents. Ils sont exprimés dans toutes les cellules de l’organisme et répondent à une large variété de ligands, les rendant indispensables dans la régulation de nombreux processus physiologiques. Ce rôle central dans la modulation des fonctions biologiques fait des RCPGs des cibles thérapeutiques de premier choix, comme en atteste le pourcentage élevé (30 à 40%) de médicaments dirigés contre cette classe de récepteurs et actuellement sur le marché. Depuis quelques années maintenant, la biologie structurale des RCPGs a connu un essor sans précédent avec à ce jour, près de 190 structures tridimensionnelles expérimentales résolues. Ces avancées ont permis de mieux comprendre les mécanismes d’action de ces récepteurs ainsi que le mode de liaison de ligands, ouvrant notamment de nouvelles perspectives thérapeutiques par le développement rationnel de nouvelles molécules.Au cours de ce travail, nous nous sommes efforcés de développer des outils et une méthodologie nous permettant de résoudre la structure expérimentale de 2 récepteurs :ChemR23 et VPAC1. Pour cela, nous avons développé et caractérisé des nanobodies dirigés contre ces 2 récepteurs. Nous avons montré que les nanobodies dirigés contre le récepteur ChemR23 possèdent des propriétés antagonistes en inhibant partiellement la libération calcique de cellules CHO surexprimant ChemR23 ainsi que le chimiotactisme de cellules dendritiques induit par la chémérine. Profitant de la modularité offerte par les nanobodies, nous avons conçu un nanobody bivalent, dont les propriétés antagonistes sont significativement améliorées. Concernant le récepteur VPAC1, nous avons identifié que les nanobodies générés reconnaissent un épitope présent au niveau du large domaine amino-terminal et distinct du site orthostérique du peptide VIP. Bien que dépourvu de propriétés fonctionnelles, 2 de ces nanobodies voient leur affinité augmentée en présence d’un agoniste, et diminué en présence d’un agoniste inverse. Enfin, nous montrons qu’ils sont utilisables pour la détection du récepteur endogène présent à la surface de leucocytes mais également au niveau de coupes de tissus gastro-intestinaux sains.En parallèle, nous avons mis au point la production de ces récepteurs dans des cellules d’insecte, permettant de produire les quantités nécessaires à des études structurales. Nous avons également apporté et validé diverses modifications à la structure de ces récepteurs, en vue d’augmenter leur stabilité une fois extraits de leur environnement natif. Un processus itératif nous a permis de déterminer les conditions optimales de solubilisation de ces récepteurs afin de maximiser l’obtention d’une forme monomérique et de minimiser la présence de formes multimériques ou dégradées. Nos premiers essais de purification par chromatographie d’affinité sur colonnes de nickel, ainsi que par chromatographie d’exclusion de taille, nous ont permis d’isoler des récepteurs entiers. Cependant, les chromatogrammes issus des purifications par chromatographie d’exclusion de taille suggèrent la présence de récepteurs en partie agrégés. De plus, nous n’avons pu déterminer précisément à ce jour si les récepteurs purifiés maintenaient une conformation native, prérequis indispensable pour réaliser des études cristallographiques.Bien que nous n’ayons pas résolu la structure expérimentale de ces 2 récepteurs, le travail réalisé dans le cadre de notre thèse de doctorat a permis de développer des nanobodies qui représentent des outils innovants pour l’études des RCPGs ainsi que de mettre au point des protocoles de production et de purification préliminaire des récepteurs ChemR23 et VPAC1 en vue de leur étude cristallographique.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Saiselet, Manuel. "Analyse des microARNs sous-exprimés dans le cancer papillaire thyroïdien :caractérisation fonctionnelle et implication diagnostique." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2017. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/249207.
Full textAbstract:
Notre travail s’inscrit dans un projet de recherche dont l’objectif global est de mieux caractériser les modifications moléculaires impliquées dans les cancers thyroïdiens et de déterminer des signatures diagnostiques et pronostiques mais également des cibles moléculaires potentielles pour améliorer leur traitement. Le cancer papillaire thyroïdien (PTC) est le plus fréquent des cancers endocriniens, avec une incidence qui augmente en continu depuis des décennies. Il est de bon pronostic mais peut présenter des récidives et des métastases distantes et lymphatiques qui diminuent les chances de survie des patients. Les nodules thyroïdiens sont fréquents mais seulement 5% sont cancéreux. Cependant, jusqu’à 30% des ponctions de nodules thyroïdiens ne donnent pas de certitude sur le diagnostic. Cela conduit à des opérations qui se révèlent à postériori inutiles chez un nombre conséquent de patients. Les microARNs sont une famille de petits ARNs simple brin (18 à 24 nucléotides) très conservés dans l’évolution et qui régulent de façon négative l’expression génique.Ils agissent de façon post-transcriptionnelle en empêchant la traduction d’ARNm cibles et/ou en provoquant leur dégradation. Cette famille d’ARNs joue un rôle dans de nombreux processus physiologiques et pathologiques dont la tumorigenèse. Les microARNs ont montré leur implication dans la tumorigenèse thyroïdienne et leur potentielle utilité dans des signatures diagnostiques des cancers thyroïdiens. Néanmoins, aucune étude n’avait encore analysé le transcriptome global des microARNs dans les PTC et leurs métastases ganglionnaires lymphatiques. Dans un premier temps, nous avons montré que la sous-expression de microARNs dans les PTC et dans leurs métastases ganglionnaires lymphatiques est un phénomène tout aussi présent que la surexpression de microARNs qui était déjà connue. De plus, ces microARNs sous-exprimés montrent une expression différentielle entre des tumeurs de sous-types histopathologiques différents et ils montrent une diminution accrue de leur expression dans les tumeurs décrites comme agressives, ce qui semble principalement associé au taux de mutation BRAF V600E, qui est plus élevé dans les tumeurs agressives. Ensuite, nous avons caractérisé in vitro la fonction cellulaire de 3 microARNs très conservés dans l’évolution des espèces, fortement sous-exprimés dans les PTC par rapport aux tissus normaux adjacents mais également sous-exprimés dans les métastases ganglionnaires par rapport aux tumeurs primaires de PTC :miR-7-5p, miR-204-5p et miR-204-3p. Nous avons montré que ces microARNs ont un rôle de suppresseur de tumeur dans les thyrocytes. Le miR-7-5p inhibe la prolifération cellulaire, le miR-204-5p inhibe l’invasion et la migration cellulaires et le miR-204-3p inhibe l’invasion dans des lignées cellulaires thyroïdiennes humaines (TPC-1 et HTori). Le croisement de nos données avec celles de la littérature nous a montré que la diminution de l’expression de nos microARNs d’intérêt semble s’exercer principalement via une réduction de leur transcription suite à des délétions génomiques ou via l’action répressive de facteurs de transcription. Nos données indiquent que ces microARNs pourraient être utilisés comme agents thérapeutiques pour le traitement des PTC. Enfin, nous avons montré que les microARNs sous-exprimés dans les PTC sont d’aussi bons, voire de meilleurs marqueurs moléculaires diagnostiques que les microARNs surexprimés dans ces mêmes tumeurs. En analysant, dans des ponctions nodulaires, l’expression de 5 microARNs surexprimés et 9 microARNs sous-exprimés dans les PTC par rapport aux tissus normaux,nous avons déterminé 2 listes de microARNs qui maximalisent l’efficacité d’une prédiction du statut histopathologique (bénin ou malin) du nodule. Nos données suggèrent que le niveau d’expression du miR-7-5p combiné à ceux d’autres microARNs sur et sous-exprimés pourraient être utilisés dans un futur test diagnostique des nodules malins.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Meziou, Leïla. "Segmentation par contours actifs basés alpha-divergences : application à la segmentation d'images médicales et biomédicales." Phd thesis, Université de Cergy Pontoise, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00920443.
Full textAbstract:
La segmentation de régions d'intérêt dans le cadre de l'analyse d'images médicales et biomédicales reste encore à ce jour un challenge en raison notamment de la variété des modalités d'acquisition et des caractéristiques associées (bruit par exemple).Dans ce contexte particulier, cet exposé présente une méthode de segmentation de type contour actif dont l 'énergie associée à l'obtention de l'équation d'évolution s'appuie sur une mesure de similarité entre les densités de probabilités (en niveau de gris) des régions intérieure et extérieure au contour au cours du processus itératif de segmentation. En particulier, nous nous intéressons à la famille particulière des alpha-divergences. L'intérêt principal de cette méthode réside (i) dans la flexibilité des alpha-divergences dont la métrique intrinsèque peut être paramétrisée via la valeur du paramètre alpha et donc adaptée aux distributions statistiques des régions de l'image à segmenter ; et (ii) dans la capacité unificatrice de cette mesure statistique vis-à-vis des distances classiquement utilisées dans ce contexte (Kullback- Leibler, Hellinger...). Nous abordons l'étude de cette mesure statistique tout d'abord d'un point de vue supervisé pour lequel le processus itératif de segmentation se déduit de la minimisation de l'alpha-divergence (au sens variationnel) entre la densité de probabilité courante et une référence définie a priori. Puis nous nous intéressons au point de vue non supervisé qui permet de s'affranchir de l'étape de définition des références par le biais d'une maximisation de distance entre les densités de probabilités intérieure et extérieure au contour. Par ailleurs, nous proposons une démarche d'optimisation de l'évolution du paramètre alpha conjointe au processus de minimisation ou de maximisation de la divergence permettant d'adapter itérativement la divergence à la statistique des données considérées. Au niveau expérimental, nous proposons une étude comparée des différentes approches de segmentation : en premier lieu, sur des images synthétiques bruitées et texturées, puis, sur des images naturelles. Enfin, nous focalisons notre étude sur différentes applications issues des domaines biomédicaux (microscopie confocale cellulaire) et médicaux (radiographie X, IRM) dans le contexte de l'aide au diagnotic. Dans chacun des cas, une discussion sur l'apport des alpha-divergences est proposée.
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Larsimont, Jean-Christophe. "Identification of the molecular mechanisms involved in the initiation, invasion and maintenance of basal cell carcinoma." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2018. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/271467.
Full textAbstract:
Le carcinome basocellulaire (CBC) est le cancer le plus fréquent chez l’homme et est à lui seulresponsable de plus de cas que l’incidence cumulée de tous les autres cancers réunis. Des travauxrécents qui se sont intéressés aux étapes précoces de la tumorigenèse ont fourni un supportprécieux pour l’analyse du développement tumoral précoce. Ils ont mis en évidence le rôlecentral de gènes impliqués dans les progéniteurs embryonnaires des cellules souches du folliculepileux. Dans ce travail, nous avons étudié le rôle du facteur de transcription Sox9, un gène connupour être crucial dans la spécification de ces progéniteurs et dans les cellules souches du folliculepileux. Nous avons montré que Sox9 est requis pour la progression des lésions paranéoplasiquesvers les CBC et qu’il était également requis pour la maintenance des cellules cancéreuses. Enutilisant des méthodes d’analyse génomique de pointe, nous avons montré que Sox9 agit tantcomme un activateur que comme un répresseur de la transcription. Nous avons montré qu’ilpromeut directement le renouvellement cellulaire, l’invasion ainsi que la quiescence des cellulescancéreuses.Dans la seconde partie de ce travail, nous avons découvert le mécanisme d’action de l’inhibiteurd’Hedgehog Vismodegib sur les cellules cancéreuses. En utilisant des modèles génétiques desouris, nous avons montré que l’inhibiteur empêche la reprogrammation embryonnaire qui anormalement lieu durant la formation du CBC et qu’il promeut la différentiation des cellulescancéreuses vers une identité interfolliculaire, d’infundibulum ou sébacée suivant l’origine de cescellules. Nous avons également observé qu’une population caractérisée par l’expression du gèneLgr5 ainsi que par une activation de la voie de signalisation Wnt est plus résistante au Vismodegibchez la souris et nous avons trouvé des indices suggérant qu’il pourrait en être de même chezl’humain. Enfin, nous avons pu montrer que l’inhibition combinée des voies de signalisation Wntet Hedgehog annihile cette résistance et résulte en la disparition complète des CBCs.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Bojilova, Dimitrova Ekaterina. "Impact of Histone Deacetylase Inhibitors on the HPV-16 Transcriptional Activity and Genomic Integration." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2019. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/286799.
Full textAbstract:
SUMMARYHuman papillomaviruses (HPV) are small, non-enveloped viruses with a dsDNA genome. About 40 HPV types infect the mucosa and skin of the anogenital tract, and they are further subdivided into low-risk HPV (LR-HPV) and high-risk HPV (HR-HPV). Long-term, persistent infections with the latter type could result in the development of cervical cancer. Cervical cancer is the second most prevalent cancer worldwide, and the third leading cause of cancer-related deaths in women. HR-HPV DNA is frequently found integrated in cervical carcinoma tissue. Thus, HR-HPV integration is considered to be mechanistically linked to virus-promoted malignancy. Several complex and sometimes inter-linked signal transduction pathways, collectively termed as the DNA Damage Response (DDR), act to sense damage incurred to DNA and ultimately promote its repair. The central players of the DDR are three proteins of the phosphatidylinositol 3-kinase-like protein kinase (PIKK) family, ataxia telangiectasia mutated (ATM), ataxia telangiectasia and Rad3-related (ATR) and DNA protein kinase catalytic subunit (DNA-PKcs). Also crucial to the DDR are members of the poly(ADP)ribose polymerase family (PARP). Interactions between histones modified by PARP enzymes, the PARP enzymes themselves and the X-ray repair cross-complementing protein (XRCC-1), are important for efficient DNA repair. Reversible acetylation of histones plays a key role in the regulation of gene expression and in the DDR. The acetylation of histones, as well as that of numerous other cellular proteins, is carried out by histone acetyl transferases (HAT). This enzymatic process exists in a tightly-regulated equilibrium with lysine deacetylation, which is catalyzed by histone deacetylases (HDAC). HDAC modulate the expression and/or function of key proteins implicated in cancer. In addition, many HDAC are overexpressed in most cancers. Various small-molecule inhibitors of HDAC have been developed. HDAC inhibitors (HDACi) have been shown to promote cancer cell cycle arrest, differentiation and apoptosis. In addition, HDACi are well-documented for their synergistic or additive effects on DNA-damaging agents used in cancer therapy. In spite of a growing body of research however, the cellular and molecular mechanisms behind this phenomenon have not yet been fully uncovered. We evaluated the impact of several pan-HDACi and HDACi analogues on the extrachromosomal and genomically-integrated HPV-16 LCR-driven transcription in various cell lines. Using a classical reporter construct strategy, we report that the pan-HDACi Trichostatin A (TSA), valproate (VPA) and sodium butyrate (NaB) are potent inducers of transcription from the HPV-16 long control region (LCR) in its extrachromosomal form. This effect of HDACi was at least in part mediated by three binding sites of members of the AP-1 family of transcription factors within the viral LCR. HDACi analogues 1 through 6 did not modulate extrachromosomal HPV-16 LCR transcription in a statistically-significant way.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie)
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Grino, Claire. "Corps, genre et nouvelles technologies biomédicales : reconfigurations antinaturalistes au sein des théories féministes." Doctoral thesis, Université Laval, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.11794/26834.
Full textAbstract:
La matérialité biologique du corps humain est devenue l'objet d'interventions inédites au moyen de nouvelles technologies biomédicales, comme la procréation médicalement assistée, les tests génétiques, la contraception hormonale. Cette thèse part des difficultés inhérentes à une approche antinaturaliste pour aborder la dimension biologique des corps sexués. “On ne naît pas femme, on le devient” : mais qu'en est-il des corps ? Les technologies biomédicales investissent la chair selon des modalités qui échappent aux grilles d'analyses matérialiste et butlérienne. Faut-il y voir une réfutation du constructivisme, la revanche d'un socle biologique – hormonal, génétique, moléculaire – primant sur les effets anatomiques de la socialisation, comme le suggèrent les partisan·e·s d'un material turn féministe ? À partir d'une analyse de l'évolution de la notion de nature, définie comme "vie elle-même" depuis la révolution moléculaire de la biologie, cette thèse propose une autre interprétation, en définissant les technologies biomédicales comme des technologies de pouvoir relevant d’une biopolitique moléculaire de genre. Sans infirmer la perspective constructiviste, ces médiations sociales originales (adossées au nouveau paradigme épistémique) permettent de comprendre comment les frontières et limites du genre sont déplacées, tout en produisant des identités, des expériences et des subjectivités genrées inédites. En dégageant les coordonnées d'un véritable dispositif biomédical, notre étude comparative entre techniques disciplinaires et biopolitique moléculaire de genre plaide pour une critique antinaturaliste renouvelée, s’articulant à une critique de la technique qui permette d'inventer collectivement des moyens pour se réapproprier démocratiquement les technologies biomédicales.The biological materiality of the human body has become an object of unprecedented interventions through “new biomedical technologies” as medically assisted procreation, genetic tests, or hormonal contraception. This thesis interrogates the difficulties inherent to anti-naturalist approaches in order to address the biological dimension of sexed bodies. “One is not born a woman, one becomes one”, but is this also true for the body? The analytical frames of materialist or deconstructivist feminism cannot cease the modalities through which biomedical technologies invest the flesh. Do biomedical technologies make constructivist approaches obsolete through the revenge of a biological – hormonal, genetic, molecular – ground that tops the anatomical effects of socialization? Partisans of a feminist “material turn” seem to think so. After analyzing how the molecular biology revolution changes the very concept of nature in defining it as “life itself”, I offer an alternative interpretation by defining biomedical technologies as technologies of power that stem from a molecular biopolitics of gender. Instead of overturning constructivist perspectives, these new social mediations (residing on a new epistemic paradigm) help understanding a shift in what has been seen as the limits of gender. This shift creates unprecedented identities, experiences and subjectivities of gender. In exposing the coordinates of the biomedical apparatus, this comparative study between disciplinary techniques and molecular biopolitics of gender pleads for a renewed anti-naturalist critique that takes the form of a critique of technology in order to allow for a collective appropriation of biomedical technologies.
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Lambertini, Matteo. "Unmet fertility and pregnancy-related issues in young breast cancer patients." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2018. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/278746.
Full textAbstract:
Survival from breast cancer has significantly improved over the past years. Therefore, survivorship issues are an area of crucial importance to be addressed as early as possible by all health care providers dealing with breast cancer patients. Fertility and pregnancy-related issues represent a priority area of concern for young women with breast cancer. Despite a growing attention towards these issues has been given over the past years and is currently provided to young breast cancer patients, several grey zones persist in many domains of this field and some physicians are still uncomfortable to deal with this topic. In this thesis, we aimed at providing evidence on several unmet fertility and pregnancy-related issues faced by young breast cancer patients with the ultimate goals to further improve their quality of life and to help physicians during the oncofertility counseling of these women.In Chapter 1 of this thesis, we addressed questions related to the factors with a potential negative or protective impact on the ovarian function of young breast cancer patients. First, we assessed the influence of carrying a germline BRCA mutation on the reproductive potential of young breast cancer patients and the performance of fertility preservation strategies in this setting. We conducted a retrospective analysis within two prospective studies that involved young women with newly diagnosed breast cancer who underwent oocyte cryopreservation or ovarian tissue cryopreservation for fertility preservation at CUB-Hôpital Erasme in Brussels (Belgium) between January 2006 and December 2016. A total of 101 patients were included, of whom 29 had germline deleterious BRCA mutations. We observed a consistent trend for reduced reproductive potential and performance of both oocyte and ovarian tissue cryopreservation in BRCA-mutated patients.Second, we evaluated the gonadotoxicity of anticancer treatments focusing particulary on the risk of treatment-related amenorrhea (TRA) with the addition of taxanes to anthracycline-based chemotherapy and with the administration of chemotherapy plus the anti-human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) agents trastuzumab and/or lapatinib. This analysis was conducted in 2,862 premenopausal patients with early-stage HER2-positive breast cancer enrolled in the ALTTO randomized trial (NCT00490139) by assessing menopausal status at week 37 visit following the initiation of anti-HER2 treatment. Addition of taxanes to anthracycline-based chemotherapy led to a statistically significantly higher risk of TRA. No difference in TRA rates was observed between the four anti-HER2 treatment arms (trastuzumab alone, lapatinib alone, their sequence or their combination); the absence of higher TRA rates in the dual blockade arm as compared to single agent arms may suggest the gonadal safety of these agents. TRA was associated with statistically significant improved disease-free survival (DFS) and overall survival (OS) in patients with hormone receptor-positive/HER2-positive disease. Third, we provided evidence on the efficacy and safety of temporary ovarian suppression with gonadotropin-releasing hormone agonists (GnRHa) during chemotherapy as an option for ovarian function preservation in young breast cancer patients undergoing (neo)adjuvant chemotherapy. We performed a meta-analysis including individual patient-level data from the 5 major trials (PROMISE-GIM6, POEMS/SWOG S0230, Anglo Celtic Group OPTION, GBG-37 ZORO, Moffitt-led trial) that investigated the role of this strategy. A total of 873 breast cancer patients were included. Concurrent administration of GnRHa and chemotherapy significantly reduced the risk of developing chemotherapy-induced premature ovarian insufficiency (POI), and was associated with a higher number of subsequent pregnancies. Similar DFS and OS were observed between groups irrespective of the estrogen receptor (ER) status of the disease suggesting the safety of administering GnRHa concurrently with chemotherapy.In Chapter 2 of this thesis, we aimed to address questions related to the safety of pregnancy following prior history of breast cancer including the impact of timing of pregnancy, induction of abortion or breastfeeding, as well as to investigate the pregnancy outcomes in these patients. First, we assessed if there were differences in survival outcomes between patients who conceived following breast cancer diagnosis as compared to those who did not have a subsequent pregnancy with a particular focus to women with ER-positive tumors. In addition, we investigated the potential impact of timing of pregnancy, induction of abortion and breastfeeding on patients’ prognosis. For this purpose, a multicenter retrospective case-control study was conducted. A total of 1,207 breast cancer patients with known ER status were included in the analysis, of whom 333 conceived after prior breast cancer and 874 had no subsequent pregnancies. Long-term results from this study confirmed that pregnancy after breast cancer can be considered safe irrespectively of ER status and should not be discouraged. This was observed independently of pregnancy outcome, pregnancy interval, and breastfeeding status. Second, we assessed the safety of pregnancy following prior history of HER2-positive breast cancer, and the pregnancy outcomes in women who conceived during or after chemotherapy plus anti-HER2 treatment. We collected all the pregnancy events that occurred in the NeoALTTO (NCT00553358) and ALTTO (NCT00490139) trials. These are two randomized studies that explored the role of trastuzumab and/or lapatinib in patients with HER2-positive early breast cancer as neoadjuvant and adjuvant treatment, respectively. A total of 92 patients had at least one pregnancy after inclusion in the two trials, of whom 12 patients conceived during anti-HER2 targeted therapy (exposed group) while 80 after the end of treatment (unexposed group). We observed that having a pregnancy after prior history of HER2-positive early breast cancer did not appear to impact on DFS. A high rate of induced abortion was observed among women in the exposed group; nevertheless, despite only 5 live births being described in this group, unintentional exposure to trastuzumab and/or lapatinib during gestation did not seem to affect newborn outcomes. Patients in the unexposed group appeared to have normal pregnancy outcomes. Therefore, overall, having a pregnancy following completion of chemotherapy plus anti-HER2 therapy showed to be safe without compromising fetal outcome or maternal prognosis.In conclusion, taken together, we believe that our findings can serve as a rational basis to improve the oncofertility counseling of young breast cancer patients facing concerns related to TRA risk, preservation of ovarian function and/or fertility as well as for those willing to consider a future pregnancy. Several ongoing and upcoming projects from our group have been started based on the results presented in this thesis and are expected to provide further evidence on these crucial topics.Doctorat en Sciences médicales (Médecine)
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Wagner, Antoine. "Clinical implementation of a Monte Carlo-based platform for the validation of stereotactic and intensity-modulated radiation therapy." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/312015/3/ToC.pdf.
Full textAbstract:
En radiothérapie, le niveau de précision de la dose délivrée au patient au cours de son traitement est d’une importance essentielle dans l’évolution vers une amélioration de la qualité et de la cohérence des données de suivi. L’une des premières étapes vers un système de support à la décision clinique (Clinical-Decision Support System CDSS) est la reconstruction précise de cette dose délivrée, en prenant en compte les nombreux facteurs pouvant générer des déviations significatives entre la dose planifiée visualisée à l’écran par l’utilisateur et la dose réellement accumulée lors des séances de traitement. Ces facteurs incluent les variations de débit de l’accélérateur, les incertitudes d’étalonnage, de calcul de dose, les mouvements du patient et des organes, etc.L’objectif de cette étude est d’implémenter et tester une plate-forme de calcul Monte Carlo pour la validation des systèmes Cyberknife et Tomothérapie installés au Centre Oscar Lambret. L’étude d’un détecteur dédié aux petits faisceaux (la chambre d’ionisation microLion) est également incluse, ce détecteur étant particulièrement adapté aux mesures sur le système Cyberknife.Le contexte et les concepts théoriques sont introduits dans les deux premiers chapitres. Dans le troisième chapitre, la modélisation Monte Carlo du Cyberknife et du détecteur microLion est détaillée. La quatrième partie inclut la description de la plate-forme Moderato et de son module d’évaluation. Dans le dernier chapitre, la modélisation du dernier modèle de Cyberknife (M6) équipé d’un collimateur multi-lames est décrite. Une nouvelle technique est également introduite dans le but d’accélérer la recherche des paramètres du faisceau d’électrons pour un modèle Monte Carlo, permettant une intégration plus simple et automatisée de nouveaux appareils dans Moderato.In radiation therapy, the accuracy of the dose delivered to the patient during the course of treatment is of great importance to progress towards improved quality and coherence of the outcome data. One of the first steps to evolve towards a Clinical-Decision Support System (CDSS) is to be able to accurately reconstruct that delivered dose, taking into account the range of factors that can potentially generate significant differences between the planned dose visualized on the screen of the dosimetrist, and the actually delivered dose accumulated during the treatment sessions. These factors include accelerator output variations, commissioning uncertainties, dose computation errors, patient and organ movement, etc.The objective of this work is to implement and test a Monte Carlo platform for the validation of the Cyberknife and Tomotherapy systems installed at Centre Oscar Lambret. A study of a small field-dedicated detector (the microLion ionization chamber) is also included, this detector being particularly suited for measurements on the Cyberknife system.The context and theoretical concepts are introduced in the first two chapters. In the third chapter, the Monte Carlo modelling of the Cyberknife and microLion detector is detailed. The fourth part includes the description of the Monte Carlo platform Moderato and its evaluation module. In the final chapter, the modelling of the latest MLC-equipped Cyberknife model (the M6) is described. A new technique is also introduced to accelerate the optimization of the beam electron parameters of a Monte Carlo model, thus allowing for an easier and more automated use of the Moderato system.
Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Dressen, Cindy. "Caractérisation et rôles potentiels des "Calcium-Binding Proteins" dans l’acquisition du pouvoir fécondant des spermatozoïdes." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/311948.
Full textAbstract:
La fécondation dépend de la capacité de deux cellules uniques à s’unir :l’ovocyte et le spermatozoïde. Alors que le stock d’ovocytes est établi dès la puberté, les spermatozoïdes sont produits de façon continue à partir d’une réserve de cellules germinales souches (spermatogonies). Immobile et inapte à la fécondation, le spermatozoïde testiculaire doit subir un processus de maturation qui débute dans l’épididyme et se poursuit dans les voies génitales femelles. Bien qu’une première forme de mobilité soit acquise au contact du fluide épididymaire, le spermatozoïde subit, tout au long de son parcours dans le tractus femelle, de nombreuses modifications structurelles et biochimiques appelées « capacitation » et qui s’avèrent indispensables à l’acquisition de son pouvoir fécondant. La production de spermatozoïdes fertiles est un processus hautement régulé, notamment via l’ion calcium ;second messager crucial de nombreux processus de signalisation intracellulaire. Les modifications de la concentration intracellulaire de calcium sont indispensables pour le développement du potentiel de fécondation du sperme via la modification du profil de mobilité vers l’hyperactivation ou encore la réalisation de la réaction acrosomiale. Différents mécanismes de régulation de la concentration intracellulaire calcique ont déjà été mis en évidence dans les spermatozoïdes :canaux calciques, réserves intracellulaires de calcium… Toutefois, peu d’informations relatent la présence et/ou l’implication de protéines liant le calcium (Calcium-Binding Proteins - CaBP) au sein de ce type cellulaire.Notre étude a pour but de caractériser la présence et l’implication potentielle de EF-Hand CaBP dans l’acquisition du pouvoir fécondant des spermatozoïdes murins. Nous nous sommes principalement focalisés sur l’étude de trois membres de cette famille protéique :la calrétinine, la calbindine D-28k et la parvalbumine. Nos investigations ont été menées de manière comparative entre des spermatozoïdes de type Wild-type (WT) et des spermatozoïdes n’exprimant pas une ou plusieurs CaBP (calrétinine knock-out - CR-/-, calbindine D-28k - knock-out CB-/-, triple knock-out pour la calrétinine, la calbindine D-28k et la parvalbumine - CR-/-CB-/-PV-/-). La première partie de notre projet décrit la localisation et l’expression de la calrétinine, la calbindine D-28k et la parvalbumine dans les spermatozoïdes de souris et de rats par immunofluorescence et Western blotting. Ces protéines ont été localisées au niveau de la pièce principale du flagelle et au niveau de la Redundant Nuclear Envelope dans le cas de la parvalbumine. Au cours de la seconde partie du projet, des études de mobilité ainsi que des quantifications du taux de réaction acrosomiale ont été menées en comparant les spermatozoïdes WT aux cellules CR-/- et CR-/-CB-/-PV-/-. Alors qu’aucune différence n’a été constatée entre les taux de réaction acrosomiale WT versus knock-out tant en condition basale qu’induite, l’absence d’une ou plusieurs protéines apparaît influencer certains paramètres de mobilité des spermatozoïdes. En effet, les spermatozoïdes CR-/- et CR-/-CB-/-PV-/- ont présenté une fréquence du battement de flagelle (BCF) plus élevée par rapport à la fréquence mesurée chez les spermatozoïdes WT, paramètre modifié notamment au cours de l’hyperactivation. Cette différence pourrait être liée à une modification du tamponnage calcique ou à une régulation différente du canal calcique CatSper, acteur majeur du développement de l’hyperactivation. Les résultats préliminaires des mesures électrophysiologiques suggèrent un rôle potentiel de la calrétinine dans la régulation de l’activité de ce canal. Par ailleurs, la comparaison entre le nombre de petits par portées WT par rapport aux portées CR-/- ou CR-/-CB-/-PV-/- a indiqué que l’absence d’expression d’une ou plusieurs EF-Hand CaBP réduisait le nombre de naissances par portée au sein des génotypes knock-out.En conclusion, l’ensemble de nos résultats expérimentaux ont démontré la présence de trois EF-Hand CaBP au niveau des spermatozoïdes murins et permis d’apporter de nouvelles informations quant à l’implication potentielle de celles-ci dans l’acquisition du pouvoir fécondant des spermatozoïdes.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Mollier, Henri. "Synthèse de polyamines et de polyphosphonates : complexation d'ions paramagnétiques et d'émetteurs [gamma] : applications biomédicales." Grenoble 1, 1990. http://www.theses.fr/1990GRE10144.
Full textAbstract:
La synthese et l'etude physicochimique de complexes techneties et d'ions paramagnetiques par des ligands phosphoniques et phosphiniques constituent l'objet essentiel de ce travail. Les complexes techneties tc(sn)ttmp et tc(sn)btmp de ces ligands sont des vecteurs osteotropes qui se sont reveles d'excellents marqueurs lors des essais sur l'animal. L'extension a l'homme a revele qu'ils sont cependant moins performants que ceux actuellement commercialises. Les complexes ferriques fe ttmp et fe#3btmp sont des agents de contraste, pour l'imagerie par rmn a tropisme hepatobiliaire, augmentant la visualisation de tumeurs implantees. Les stchiometries et la stabilite en fonction du ph ont ete precisees. La determination des constantes de stabilite par une methode originale, la rmn #3#1p, conduit a des valeurs elevees. La rmn #3#1p a egalement permis de mettre en evidence leur grande stabilite au ph physiologique. La relaxivite spin reseau des protons de l'eau induite par fe ttmp et fe#3 btmp (230 s##1 mol##1 l et 580 s##1 mol##1 l) indique qu'aucune molecule d'eau n'est coordonnee a l'ion paramagnetique. La cinetique de decomplexation par les ions cn# de complexes phosphoniques, etudiee en uv, visible est compatible avec un mecanisme voisin de celui propose pour une serie d'acides carboxyliques amines homologues
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Gazan, Adeline. "Rôle des interneurones somatostatine dans la physiologie striatale :une approche morphologique, électrophysiologique et comportementale." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2019. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/283380/4/these.pdf.
Full textAbstract:
Le système des noyaux de la base possède un rôle essentiel dans de nombreuses fonctions telles que le contrôle et l’apprentissage moteur ainsi que les processus motivationnels et cognitifs. Le striatum constitue la principale structure d’entrée de ce système et peut être subdivisé en une région dorsale, impliquée dans cet apprentissage et ce contrôle moteur, et une partie ventrale, impliquée dans le système de la récompense et donc les processus motivationnels. Le striatum est composé de deux principales catégories de neurones :les neurones épineux de projection (ou « medium-sized spiny neurons », MSN) qui composent la majorité de la structure, et des interneurones. Les interneurones du striatum participent à la modulation de l’activité des neurones épineux, selon un modus operandi propre à chaque population. Les interneurones exprimant la somatostatine, le neuropeptide Y (NPY) et l’enzyme de synthèse de l’oxyde nitrique (nNOS) constituent l’une de ces populations d’interneurones et n’a encore été que brièvement caractérisée d’un point de vue fonctionnel. Notre travail de thèse s’est donc focalisé sur l’étude de la fonction des interneurones somatostatine du striatum par une approche basée sur la perte de fonction. Cette étude fonctionnelle a été réalisée à l’aide d’un modèle de souris ayant subi une ablation spécifique des interneurones somatostatine dans le striatum. Trois principaux types d’analyses ont été réalisés. La première partie du travail s’est intéressée aux fonctions de ces interneurones à l’échelle cellulaire et, plus particulièrement à l’effet de la perte de ces interneurones sur l’activité électrique des MSNs. Nous avons ainsi observé que l’ablation des interneurones somatostatine induit une dépolarisation du potentiel membranaire de repos des MSNs et une augmentation de leur excitabilité, suggérant que de par les différents neurotransmetteurs que ces interneurones libèrent, ceux-ci participent au contrôle de leurs propriétés électrophysiologiques. Le second chapitre, toujours à l’échelle cellulaire et dans ce même contexte de connexion interneurone-MSN, a visé à étudier l’effet de la perte des interneurones somatostatine du striatum sur la morphologie des neurones de projection et ce, au moyen d’une reconstruction 3D. Celle-ci a mis en évidence que les MSNs présentent une réduction de leur densité d’épines dendritiques dans la portion distale, pouvant être le résultat d’un mécanisme d’homéostasie synaptique, alors que l’arborisation dendritique-même n’est pas modifiée. Finalement, la dernière partie a considéré le rôle des interneurones à une échelle systémique, en étudiant l’effet de l’ablation sur le comportement de la souris. Nous avons observé que l’ablation des interneurones somatostatine striataux n’altère pas le comportement moteur, le comportement nociceptif ou les comportements modélisant l’anxiété ou la dépression mais résulte en une augmentation de l’hyperlocomotion induite par la cocaïne. Il s’est également avéré que le rôle des interneurones somatostatine du striatum dans la réponse à la cocaïne se limite exclusivement à l’aspect locomoteur de la cocaïne et non à l’aspect motivationnel, comme montré par un test de préférence de place conditionné. Des analyses d’expression de différents marqueurs dopaminergiques ont, de plus, permis de suggérer que le phénotype hyperlocomoteur observé impliquerait une augmentation de l’expression du transporteur de la dopamine. Enfin, une étude électrophysiologique et morphologique des MSNs, chez des souris dépourvues d’interneurones somatostatine dans le striatum et sensibilisées à la cocaïne, a permis de mettre en évidence une occlusion des effets de la cocaïne sur les propriétés membranaires passives et l’excitabilité des MSNs. De plus, l’addition de dopamine au milieu extracellulaire induit une augmentation de l’excitabilité des MSNs des souris ayant subi une ablation des interneurones somatostatine striataux, compatible avec l’expression accrue de transporteur de la dopamine. D’autre part, l’étude morphologique a mis en évidence un effet de la sensibilisation à la cocaïne sur la densité des épines proximales des MSNs des souris dépourvues d’interneurones somatostatine.En conclusion, ce travail de thèse a permis de fournir, à l’aide d’un modèle d’ablation spécifique, des données substantielles quant au rôle des interneurones somatostatine du striatum dans la physiologie striatale et, en particulier leur fonction inhibitrice des MSNs, ainsi que leur rôle dans les comportements impliquant le striatum, dont la réponse induite par la cocaïne.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Dang, Chi Vu Luan. "Identification of predictive markers of immunosenescence, particularly, the study of BACH2 and PRDM1 gene expression." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2018. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/271524.
Full textAbstract:
BACKGROUND Aging is characterized by a progressive decline in immune surveillance that favors tumor development in older patients. One of the mechanisms used by malignant cells to escape immune surveillance is genetic or epigenetic modifications of tumor suppressor genes. Studies in B-cells and our previous report on the correlation between 6q deletion and progression into a T cell lymphoproliferative disease, identifying the BACH2 gene as a candidate tumor suppressor gene. Together, BACH2 and PRDM1 are described as having a fundamental role in oncogenesis, differentiation and apoptosis control of B and T lymphocytes during oxidative stress. Furthermore, several studies in mice model suggested that BACH2 gene is sensitive to DNA damage during aging and plays a role in the cellular senescence process. The impact of these genes in the immune response of the older adult is unclear. OUR HYPOTHESIS 1. Recent reports (including our previous study) on the transcription factor BACH2 and PRDM1 have highlighted their impact on immunological changes. It has been shown that BACH2 is highly sensitive to transcription-blocking DNA lesions in aged mice. Despite the growing interest in BACH's role, there have been many studies in mice models, studies on BACH2 in humans are still limited. This concept prompted us to investigate the variation of BACH2 and PRDM1 expression with age in major lymphocyte subsets from healthy individuals. 2. Apoptosis and senescence are two types of cellular response affected by cancer and aging processes, albeit through different mechanisms. Carcinogenesis is associated with a progressive reduction in the ability of the cells to trigger apoptosis and senescence. The lymphocytes apoptosis process and the markers of cell senescence were thus studied in both populations. 3. Chronic lymphocytic leukemia, one of the aging-related diseases, is characterized by the accumulation of “anergic” phenotypes in both B-cells and T-cells. In chronic lymphocytic leukemia, malignant cell anergy is associated with failure of inducing PRDM1 (BLIMP1), a critical regulator of differentiation into plasma cells, and that epigenetic modification account for such failure. We thus examined the expression of specific transcription factors BACH2 and PRDM1 in the leukemic lymphocytes subsets and compared the results with age-matched normal population. POPULATION & METHODS Blood samples were obtained from 60 healthy donors, aged from 20 to 90 years, and 41 untreated chronic lymphocytic leukemia were studied. Lymphocyte subsets (CD19+ B-cells, CD8 T-cells, CD4 T-cells, CD4 naïve T-cells, CD4 effector memory T-cells) were isolated for subsequent molecular analyses using the MACS Technology (Miltenyi), with the purity of each lymphocyte subpopulation between 95%-99%. BACH2, PRDM1, IL-4, IFNG, TP53, CDKN2A (p16INK4A), PDCD1 (PD-1) and CD274 (PD-L1) mRNA transcripts were quantified using qRT-PCR. BACH2 protein expression was examined by Western blotting. To investigate BACH2-target genes in apoptosis, we performed a “Human Apoptosis EpiTect ChIP qPCR Array” profiles including 84 key genes involved in programmed cell death. Etoposide was used to induce intracellular oxidative stress followed by cell apoptosis. Apoptotic cells were identified with the annexin-V-FITC apoptosis detection kit (BD Pharmingen). To measure ß-galactosidase by flow cytometry, we used Fluorescein-di-beta-D-galactopyranoside as a substrate for beta-galactosidase (Molecular Probes).RESULTS 1. BACH2 and PRDM1 gene expression were strongly correlated with age in healthy donor’s major lymphocyte subsets. BACH2 mRNA expression declined by age, with statistically significant differences observed in all lymphocyte subsets: CD4+, CD4+ naïve, CD4+ memory, CD8+ T-cells and CD19+ B-cells (p<0.0001, <0.0001, 0.0118, <0.0001 and 0.0004 respectively). In contrast, PRDM1 gene expression significantly increased with age in the same subpopulations. The phenotypic changes of immune lymphocytes are related to the BACH2 and PRDM1 gene expression. Along with the decline of BACH2, the older group had a severe decrease in number and quality of cytotoxic T-cells (p=0.0005 and <0.0001), while increasing the rate exhausted T-cells that highly expressed of PD-1 and PD-L1. Both PCCD1 (PD-1) and CD274 (PD-L1) gene expression had inversely correlated with BACH2 in the same lymphocyte subsets (p=0.0342; 0.0254 and 0.0429 respectively). Western blotting analysis demonstrated that BACH2 protein expressions in the T and B cell subpopulations significantly correlated with transcript expression. 2. Age-related BACH2 down-regulation enhanced the increasing of senescent cells and the resistance to apoptosis in the major lymphocyte subsets. We, further, found the correlation of BACH2 with senescence markers, such as p16INK4A (CDKN2A) and SA-β-GAL along with loss of CD28+ on T-lymphocytes. ChIP-qPCR Array demonstrated that BACH2 bound directly several genes involved in programmed cell death. A reduction in apoptosis was observed with age in CD4+ T-cells and CD19+ B-cells (p=0.03 in both subpopulations). As recently reported for BACH2-deficient mice, our data show that BACH2 down-regulation is strongly correlated with a decrease in CD4+ T-cell and CD19+ B-cell apoptosis (r=0.57 and 0.61). 3. Decreases in BACH2 mRNA expression were greater in CD4+ and CD8+ T-cells, as well as leukemic B-cell subpopulations from untreated CLL patients, compared with age-matched healthy donors (p=0.0006; 0.0003 and 0.0083, respectively). As expected, PRDM1 was significantly upregulated in the CD4+ and CD8+ T-cell subpopulations (p=0.003 and 0.001, respectively) from CLL patients but not their leukemic B-cells. CONCLUSION In this research work, we examined BACH2 and PRDM1 gene expression to investigate its potential as a predictive marker of aging. Our data suggest BACH2 and PRDM1 mRNA expression, in the inverse correlation, associated with the phenotypic changes of immune lymphocytes in aging. Age-related BACH2 down-regulation enhanced the increasing of exhausted phenotypes, senescent cells and resistance to cell apoptosis. BACH2 and PRDM1 could involve in cellular and immunological functions deterioration of the immunosenescence process. Further investigations on BACH2 and PRDM1 genetic mutations provide a better understanding of the role of the unbalanced expression of those genes in lymphocytes functions and survival according to age.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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D'Aria, Stefania. "Role of the Monocarboxylate transporter 1 (MCT1) in T lymphocytes." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/303141/3/table.pdf.
Full textAbstract:
Upon activation, T cells shift towards a metabolic program characterized by increased glucose metabolism in order to sustain proliferation and effector function. Surprisingly, while resting T lymphocytes degrade glucose aerobically to CO2, proliferating T cells metabolize glucose almostentirely to lactate in the presence of oxygen through aerobic glycolysis (the Warburg effect). This metabolic switch comprises the upregulation of glycolytic enzymes and glucose transporters to the cell membrane, leading to an increase of glycolytic flux and the concomitant production of lactate. Despite many decades of research, we still do not fully understand the mechanisms that make proliferating T cells choose glycolysis rather than oxidation of glucose to produce energy. Since activated T lymphocytes depend on a glycolytic metabolism, they must release lactate, which inthese cells is facilitated by the proton-linked monocarboxylate transporter MCT1. The transporter is part of a protein family of 14 members among which MCT1–4 facilitate the passive transmembrane transport of monocarboxylates such as lactate, pyruvate and ketone bodies. The observation that pharmacological MCT1 inhibition has shown anti-proliferative effect on T cells suggests that lactate transport is essential to T cell expansion triggered after antigen recognition. The aim of our research is to investigate the importance of MCT1-dependent regulation in T cellmetabolism. Following TCR stimulation, MCT1 was expressed early in T cells unlike MCT4 whose significant expression was detected at later time point. To investigate the role played by MCT1 in the early steps of T cell activation, we generated a transgenic mouse model where conditional deletion of the MCT1 gene was achieved specifically in T cells. Phenotype and T cell distribution in thymus and peripheral organs were normal in MCT1fl/fl CD4Cre mice. However, lack of MCT1 expression decreased the proliferative capacity of in vitro activated CD4+ or CD8+ T cells without altering their viability. We observed that the IL-2 production was also affected by the lack of MCT1 expression, in line with decreased proliferative ability. Moreover, in vivo, T cell expansion that followed antigenic stimulation as well as T cell-mediated immune response to infection were deficient in MCT1fl/flCD4Cre mice. Our data indicate that this situation resulted from a cellular energy shortage caused by reduced glycolytic activity soon after activation. Moreover, energy crisis was amplified by the necessity to use ATP-consuming mechanisms for excluding H+ protons from the cytosol of activated MCT1-deficient T cells. Thus, in T cells, early MCT1 expression after activation ensures an energy saving mechanism for regulating cytoplasm acidification. Our observations also indicate that a high glycolytic flux is required in dividing T cells to maintain pH homeostasis.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Dreesman, Alexandra. "Development and evaluation of new diagnostic markers of tuberculosis in children." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/312223.
Full textAbstract:
Tuberculosis in the number one infectious cause of death worldwide, but remains underappreciated as a cause of mortality in children and difficult to diagnose. Diagnostic difficulties of TB in children are a consequence of the non-specific clinical presentation, the different spectrum of disease in children and the paucibacillary nature of disease making microbiological confirmation challenging in many cases. Moreover, existing immunodiagnostic tests have important limitations, especially with regard to childhood TB: they lack sensitivity to rule out TB, and are unable to offer discrimination between contained infection and active stages of disease. Their limitations are emphasized in the youngest children that are at greatest risk of developing severe disseminated forms of TB. For that reason we developed, at the Laboratory of Vaccinology and Mucosal Immunity (LoVMI), several non-sputum based tests, that offer excellent diagnostic accuracy compared to commercialy available tests, for all forms of TB in children, in an early stage of infection. This research also provided insight in TB pathogenesis. The main results are summarized in a table (chapter General Discussion) and two algoritms (chapter Conclusions and Perspectives).Doctorat en Sciences médicales (Médecine)
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Cornil, Amandine. "Caractérisation anatomique des projections des noyaux thalamiques intralaminaires sur le striatum dorsal et implication de l'intralaminaire rostral sur la locomotion spontanée." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/312812/4/TheseAC.pdf.
Full textAbstract:
Le système des noyaux de la base est principalement impliqué dans le contrôle et l'apprentissage moteur.Le rôle de la voie cortico-striatale a été et est toujours fortement étudié mais le striatum reçoit aussides afférences excitatrices du thalamus, souvent considéré comme un simple relais entre les noyaux dela base et le cortex, formant ainsi des boucles de structures sous-corticales. Les principales afférencesthalamostriatales glutamatergiques proviennent des noyaux thalamiques intralaminaires et forment descontacts synaptiques avec les deux types de neurones efférents GABAergiques du striatum (i- et d-MSNs) et les interneurones cholinergiques (INCs). Le complexe thalamique intralaminaire peut sedistinguer en une partie rostrale (ILTr) contenant les noyaux centrolatéral (CL), paracentral (PC) etcentral médial (CeM) et une partie caudale (ILTc) formée du noyau parafasciculaire (Pf) chez lerongeur (équivalent du complexe parafasciculaire-centromedian chez le primate). Le complexe thalamiqueintralaminaire est souvent considéré comme une structure fonctionnelle homogène, cependant de plus enplus d’études mettent en évidence des différences anatomiques, électrophysiologiques et fonctionnelles desparties rostrales et caudales de l’intralaminaire. Le noyau intralaminaire caudal est de mieux en mieuxdécrit et sa projection striatale se montre impliquée principalement dans la réponse aux stimuli sensorielsainsi que dans la flexibilité motrice. Des données obtenues par Marco Diana et collaborateurs à l’EcoleNationale Supérieure (Paris) apportent un éclairage nouveau sur l'importance du noyau intralaminairerostral, en particulier le noyau centrolatéral, dans le contrôle du mouvement, en montrant que la stimulationoptogénétique de la projection glycinergique/GABAergique ponto-intralaminaire thalamique inhibe les neu-rones thalamiques et provoque une hypolocomotion. Ces résultats indiquent que la suppression de laprojection thalamique sur le striatum mène à une perturbation de la fonction des ganglions de la base.Cette dernière décennie se caractérise par une explosion de nouvelles techniques aussi bien dans lesdomaines d’imagerie que dans les techniques de manipulation génique d’animaux permettant de répondreà certaines questions qui ne pouvaient techniquement pas trouver de réponse jusqu’ici. Ce travail dethèse a pour but de mieux comprendre l’importance des afférences du thalamus intralaminaire sur lestriatum, en particulier sa partie rostrale, qui, de manière surprenante, sont très mal caractérisées. Deplus, les noyaux thalamiques intralaminaires sont un relais entre le cervelet et le striatum, par conséquent,l'analyse de ces connexions pourrait améliorer notre compréhension des maladies neurodégénératives tellesque la maladie de Parkinson impliquant à la fois les noyaux gris centraux et le cervelet, mais dont lesinteractions fonctionnelles n'ont pas encore été décryptées.La première partie de ce travail de thèse consiste en une étude anatomique détaillée des projections duthalamus intralaminaire sur le striatum, en particulier sur ses principales sous-populations (d- et i-MSNs,INCs) et sous-régions (dorso-latéral=DLS, dorso-médian=DMS), par l’utilisation combinée d’un marquagerétrograde monosynaptique et d’une technique de transparisation (« clearing ») permettant par la suitede réaliser une imagerie complète du cerveau à l’aide d’un microscope à feuille de lumière. Les analysesanatomiques réalisées ont permis de confirmer l’existence de projections directes des noyaux thalamiquesintralaminaires sur le striatum dorsal, celles-ci présentant un pattern d’innervation préférentiel pour lesINCs (DMS>DLS) suivi par les dMSNs (DLS>DMS). Les cibles postsynaptiques des projectionsthalamostriatales sont similaires aux projections dopaminergiques, suggérant une interaction étroite entreces afférences.La seconde partie de cette thèse, vise a mieux comprendre l’importance fonctionnelle des connexionsthalamostriatales mises en évidence précédemment dans la locomotion spontanée. Pour cela deux ap-proches seront utilisées: une approche modifiant l’activité de ces neurones par l’utilisation de techniquescomme l’optogénétique et la chémogénétique et une approche descriptive par une technique d’imageriecalcique permettant d’enregistrer l’activité neuronale en temps réel sur des animaux libres de se mouvoir.Les résultats obtenus montrent que l’inhibition de l’ensemble des neurones de l’ILTr est nécessaire pourobserver un phénotype moteur d’hypolocomotion. La mise en place d’un système de détection de motricitéfine et l’enregistrement de l’activité calcique des neurones striataux, nous permettront, à l’avenir, de mieux identifier le type de comportement moteur impliqué dans cette hypolocomotion ainsi que d’évaluer l’impactde cette inhibition thalamique sur l’activité des neurones striataux.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Crompot, Emerence. "Caractérisation phénotypique et impact fonctionnel des vésicules extracellulaires issues de cellules stromales mésenchymateuses sur les lymphocytes B de Leucémie Lymphoïde Chronique." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2017. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/245872.
Full textAbstract:
La Leucémie Lymphoïde Chronique (LLC) est la leucémie la plus fréquente des pays occidentaux. Cette maladie est caractérisée par l’accumulation de lymphocytes B (LB) monoclonaux (CD5+/CD19+/CD23+) dans le sang, la moelle et les organes lymphoïdes secondaires. Malgré d’importants progrès durant cette dernière décennie, la LLC reste incurable avec les traitements classiques. De manière intéressante, son évolution clinique est hétérogène :certains patients ne présenteront aucun symptôme alors que d’autres évolueront rapidement nécessitant une intervention thérapeutique. De nombreuses interactions entre les cellules leucémiques et le microenvironnement (ME) médullaire, composé entre autres de cellules stromales mésenchymateuses (CSM) sécrétant une matrice extracellulaire, jouent un rôle important dans la survie cellulaire et la résistance à la chimiothérapie. Actuellement la nature des communications entre le clone leucémique et son ME n’est pas encore complétement élucidée. Notre objectif est d’étudier l’impact des vésicules extracellulaires (VEs abréviées ici EVs) (microparticules et exosomes) du ME, spécifiquement des CSM, sur les LB de LLC. Dans la 1ère partie de ce travail, nous nous sommes intéressés à la caractérisation des microparticules (MPs) par cytométrie en flux (CMF). Cette technique est un des meilleurs moyens de déterminer le phénotype des MPs, elle permet d’étudier les vésicules de 300 nm à 1 µm, excluant donc les exosomes, dont la taille est inférieure à 100 nm. Nous avons ainsi pu caractériser les MPs provenant de plaquettes et d’érythrocytes grâce à la présence respective des antigènes CD41/61 et du CD235a. Par contre, concernant les antigènes classiques des cellules mononucléées (CD3-14-19-20-56), aucun antigène n’a pu être détecté sur les MPs provenant des lymphocytes T (LT), des monocytes, des LB normaux et leucémiques et des cellules ‘’natural killer’’ (NK). Le signal positif obtenu dans certains cas était la conséquence d’un marquage aspécifique. Nous avons dès lors proposé un contrôle négatif supplémentaire qui ne se limite pas à l’utilisation d’isotypes mais qui se base sur des marquages croisés. Grâce à ce travail, nous avons démontré que les MPs dérivant de cellules positives pour un antigène donné n’étaient pas automatiquement positives pour ce dernier. Dans la seconde partie du travail, nous avons étudié les MPs et les exosomes provenant du ME médullaire, regroupés sous le terme EVs. Nous avons démontré que leur intégration dans les LB de LLC est très rapide et qu’elle permet une diminution de l’apoptose ainsi qu’une augmentation de la viabilité et de la migration des cellules leucémiques. Les EVs augmentent leur chimiorésistance vis-à-vis de différents agents leucémiques. A l’aide de la technologie Affymetrix, nous avons comparé les profils d’expression génique des LB leucémiques, ayant reçu ou non des EVs du ME. Ces analyses ont mis en évidence 805 gènes différentiellement exprimés entre les deux conditions. Une grande partie de la signature obtenue suite à l’intégration des EVs, partage de nombreuses similitudes avec des signatures de LB de LLC ayant eu un contact avec des cellules nourricières ou ayant reçu différents stimuli. Le point commun parmi ces différentes signatures est l’activation de la voie du ‘’B-cell receptor’’ (BCR) ;les EVs de CSM semblent en effet avoir la capacité d’induire dans les LB de LLC une réponse semblable à celle d’une activation BCR. Dans cette étude, nous avons démontré que le ME médullaire, en plus d’interagir par contact direct avec les LB de LLC et par la production de facteurs solubles, est également capable d’influencer le comportement des cellules leucémiques via la production d’EVs. Nos données suggèrent un rôle important des EVs dans la survie cellulaire et l’évolution de la LLC et ouvrent donc la porte à de nouvelles cibles thérapeutiques.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Detraux, Bérangère. "Implication des neurones striatopallidaux et striatonigraux dans le comportement sexuel et les troubles du spectre autistique." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2017. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/253930.
Full textAbstract:
Les noyaux de la base forment un système de noyaux sous-corticaux interconnectés jouant un rôle majeur dans le contrôle moteur, les processus motivationnels et l’interaction sociale. La principale structure d’entrée de ce système est le striatum. Celui-ci se compose d’une partie ventrale, appelée aussi Nucleus Accumbens (NAc), et d’une partie dorsale. Le striatum ventral joue un rôle essentiel dans les processus motivationnels et de récompense. Cette structure a été intensément étudiée pour ses fonctions dans la récompense et le renforcement associés aux drogues mais elle est également impliquée dans le phénomène de récompense à des éléments naturels tels que la nourriture, le sexe ou les interactions sociales. Le striatum dorsal se divise en plus en une partie latérale, appelée striatum dorso-latéral (DLS) et impliquée dans la formation d’habitudes, et en une partie médiale, appelée striatum dorso-médian (DMS), impliquée dans l’apprentissage moteur et les actions dirigées vers un but. Le striatum est principalement composé des neurones GABAergiques épineux de taille moyenne striatopallidaux (iMSNs) et striatonigraux (dMSNs) qui se caractérisent par des sites de projection spécifiques et l’expression de récepteurs différents. Ces deux populations donnent naissance respectivement à la voie indirecte ou inhibitrice et la voie directe ou activatrice. De nombreuses recherches ont eu pour objectif d’étudier l’implication du striatum, et en particulier du NAc, dans un comportement social primordial, le comportement sexuel. L’implication du NAc dans la facilitation de ce comportement a ainsi pu être mise en évidence mais aucune étude n’a encore abordé le rôle des deux voies. Le but de ce travail de thèse a donc été de mettre en évidence le rôle respectif des iMSNs et dMSNs des différentes régions du striatum dans le comportement sexuel, ainsi que le rôle de la voie directe dans le syndrome autistique. Dans ce but, nous avons utilisé des souris transgéniques exprimant le récepteur simien à la toxine diphtérique (DT) spécifiquement dans l’une ou l’autre des deux populations du striatum. Après injection stéréotaxique de DT dans la région du striatum ciblée chez ces lignées, une ablation spécifique de la population visée a été induite. Grâce à cette approche, nous avons ainsi pu démontrer que les dMSNs du NAc jouent un rôle majeur dans la motivation sexuelle. En effet, les différents paramètres permettant de mesurer cette motivation ont montré une détérioration importante de celle-ci suite à leur ablation. Cette approche nous a également permis de mettre en évidence le rôle des dMSNs du DMS dans la phase d’initiation du comportement sexuel et celui des dMSNs du DLS dans la phase plus tardive de ce comportement. De plus, l’ablation des iMSNs dans le NAc et le DLS nous a permis de montrer le rôle opposé de ces deux régions du striatum dans les performances sexuelles. En effet, l’ablation de ces neurones dans le NAc a induit une amélioration des performances sexuelles chez les mâles, contrairement à l’ablation réalisée dans le DLS. La seconde partie de cette thèse avait pour but de comprende le rôle des dMSNs dans les troubles du spectre autistique (TSA) par l’utilisation de tests comportementaux spécifiques, nous permettant de démontrer l’importance des dMSNs du NAc dans le développement de ces troubles. En effet, les tests comportementaux réalisés chez les souris présentant une ablation des dMSNs dans le NAc ont montré une réduction significative des interactions et des capacités sociales chez ces animaux. De plus, nous avons mis en évidence le rôle de ces neurones dans un autre comportement caractéristique des TSA, le développement de comportements répétitifs. Ces comportements se sont, effectivement, vus augmentés suite à cette ablation neuronale. Enfin, une augmentation de l’anxiété, un symptôme fréquemment associé aux TSA, a pu être démontré chez les animaux lésés. Les souris présentant une ablation des dMSNs du NAc récapitulent donc certaines des caractéristiques d’un modèle murin de TSA.En conclusion, les données obtenues au cours de cette thèse ont démontré l’importance des deux populations neuronales du striatum dans des comportements sociaux physiologiques, tels que le sexe ou les interactions sociales, mais également dans des pathologies telles que les troubles du spectre autistique.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Berehab, Mimoune. "Cell-killing profile of thymoquinone toward malignant B lymphocytes from diffuse large B cell lymphoma and underpinning mechanisms." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2017. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/258433.
Full textAbstract:
Une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires impliqués dans la malignité des lymphome B diffus à grande cellules (LBDGC) et dans leur résistance aux traitements devraient permettre de développer de nouvelles opportunités thérapeutiques innovantes et d’envisager dans un futur proche de nouveaux agents de thérapie ciblée. Jusqu’à ce jour, le traitement standard se solde encore par un échec chez un nombre significatif de patients. Les rechutes post traitement et les cas réfractaires restent le défi majeur pour améliorer le taux de survie global. Plusieurs méchanismes ont été décrits comme responsables de ces échecs, dont, pour une grande part, le dysfonctionnement de la machinerie apoptotique. Dès lors, des stratégies thérapeutiques activant des voies non-apoptotiques plus sélectivement dans les cellules malignes sont absolument nécessaires. La Thymoquinone (TQ), un principe actif isolé de la plante médicinale Nigell a Sativa, a démontré des propiétés anticancéreuses in vitro ainsi que dans des modèles animaux, en agissant via plusieurs mécanismes incluant principalement des effets antiprolifératifs et pro-apoptotiques. Malgré les nombreuses investigations, les mécanismes de destruction cellulaire sous-jacents à l’effet anti-cancéreux de la TQ restent ambigus et peu élucidés, notament sur les voies de mort cellulaire non-apoptotiques. L’objectif de notre travail vise l’évaluation de la sélectivité de la TQ vis-à-vis des lignées cellulaires de lymphomes B diffus à grandes cellules (LBDGC), et l’élucidation des méchanismes critiques responsables de la destruction cellulaire. Dans une première partie, nous avons démontré la capacité de la TQ à produire un effet cytotoxique plus prononcé dans des lignées cellulaires lymphomateuses (LBDGC) par rapport aux cellules normales provenant de donneurs sains. Le profil de sélectivité de la TQ s’est avéré intéressant par rapport aux agents de chimiothérapie conventionnelle dans le LBDGC. A l’échelle moléculaire, on a mis en évidence l’implication de voies de mort cellulaire non-apoptotiques, en supplément des voies apoptotiques, dans l’effet cytotoxique de la TQ dans la plupart des lignées étudiées. Nos investigations ont d’abord révélé un effet pro-apoptotique vraisemblablement sous-jacent à l’effet génotoxique de la TQ. L’importance de cette modalité de mort cellulaire dans l’effet cytotoxique de la TQ est toutefois limitée aux lignées les moins sensibles. Nos observations ont révélé la capacité de la TQ à activer la voix mitochondriale des caspases suite à la libération du cytochrome c. La mort cellulaire produite par la TQ n’est toutefois pas freinée par l’inhibition des caspases, et nos investigations ont également exclu l’implication des voies apoptotiques caspases-indépendantes. Paradoxalement, ces investigations ont montré le rôle critique des voies de mort cellulaire non-apoptotiques, en particulier dans les lignées sensibles à l’effet de la TQ. En étudiant l'origine de cette voie alternative de mort cellulaire, on a constaté que la TQ provoque le dysfonctionnement réticulaire qui se manifeste par l’activation des voies de transduction UPR et se produit de façon plus significative dans les lignées sensibles. En effet, dans cette dernière catégorie nos investigations ont démontré que la TQ produit un effet important par l’augmentation du calcium cytosolique principalement via la dépletion de celui-ci à partir des compartiments réticulaires. En accord avec ces observations, nous avons demontré que l’augmentation du calcium cytosolique joue un rôle critique, plus particulièrement dans l’effet non-apoptotique de la TQ opérant principalement dans les lignées fort sensibles aux effets de la TQ. Afin de mieux caractériser les mécanismes de susceptibilité et de résistance des lignées LBDGC, la deuxième partie de ce travail a été consacrée à l’évaluation de l'implication de l’histone déacétylase SIRT1 ( silent information regulator 1) dans la sensibilité des lignées aux effets de la TQ. SIRT1 intervient notament dans la résistance au stress oxydatif et à l’apoptose. SIRT1 serait également protectrice contre les dommages à l'ADN. Rappelons que l’expression de SIRT1 est considérée comme un facteur de mauvais pronostic pour les patients atteints de LBDGC. En focalisant nos investigations sur les lignées résistantes aux traitementx standard et moins sensibles à la TQ, nous avons démontré l'effet protecteur de SIRT1 vis-à-vis de l'effet pro-apoptotique et génotoxique de la TQ. En résumé, la capacité de la TQ à déclencher des modalités de mort cellulaire non apoptotiques pourrait constituer une stratégie prometteuse pour surmonter les mécanismes anti-apoptotiques responsables en partie de l’échec du traitement standard. Tenant compte du rôle critique de l’effet génotoxique dans le traitement des LBDGC, notre travail suggère que l'inhibition de SIRT1 pourrait être une stratégie préventive pour surmonter la résistance native ou acquise. D’autre part, nos résultats contribuent à une compréhension plus précise des mécanismes critiques responsables de l’effet cytotoxique de la TQ. Nos travaux pourraient d’autre part permettre l’étude de combinaisons innovantes de médicaments incluant la TQ in vivo.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Sakira, Abdoul. "Contribution au développement d’électrodes miniaturisées pour le dosage de métaux lourds à l’état de trace dans les eaux de consommation." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2016. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/230664.
Full textAbstract:
La problématique de l’accès potable est très aiguë dans plusieurs pays en développement. Entre les années 1999 et 2004, un programme d’approvisionnement en eau de consommation a été mis en œuvre au profit des populations de la région Nord du Burkina Faso à travers la réalisation de forages. Au cours de son application, ce programme a malheureusement rencontré un problème, lié à la contamination des eaux souterraines par l’arsenic, naturellement relargué à partir des roches en contact avec la nappe aquifère. Dans le cadre de ce travail, nos études conduites par la suite dans la zone nous ont permis de mettre en évidence des teneurs élevées et parfois excessives dans certaines eaux souterraines. Le contrôle chimique et microbiologique régulier de la qualité de l’eau apparaît comme un moyen primordial de prévention des risques sanitaires liés à la consommation de ces eaux. A cet effet, deux outils électroanalytiques de suivi des teneurs en arsenic et en mercure dans les eaux souterraines ont été développé. La méthode conçue sur la base du premier dispositif utilise une électrode de pâte de carbone modifiée par des nanoparticules d’or et recouverte d’une monocouche auto-assemblée de glutathion. Elle est caractérisée par une large gamme de travail comprise entre 3 et 1498 µg/L, une répétabilité de l’ordre de 5%, une exactitude de 3,5 % et une limite de détection estimée à 0,9 µg/L. Cette méthode a été appliquée avec succès à une étude de spéciation sur site. Il ressort de ces investigations que 40% des échantillons d’eaux analysés ont une prévalence relative en arsenic (III) supérieure à 50%, et 60% des échantillons ont une prévalence relative en arsenic (V) supérieure à 50%. Le second dispositif électroanalytique, développé pour la surveillance des teneurs en ions mercuriques dans les eaux souterraines, est basé sur une électrode sérigraphiée de carbone modifiée par des nanoparticules d’or. La méthode mise en œuvre à l’aide de ce transducteur est caractérisée par une gamme de travail comprise entre 1 et 100 µg/L, une répétabilité de 5%, une exactitude de 0,4% et une limite de détection estimé à 1 µg/L. L’application à l’analyse d’une série d’échantillons d’eau souterraine a révélé une teneur cinq fois supérieure à la norme pour un échantillon d’eau et des teneurs proches de la limite de quantification pour 2 échantillons. Les méthodes développées sont aisées à mettre en œuvre, elles offrent des caractéristiques de performances comparables à celles des méthodes de références pour un coût d’investissement très abordable. Elles sont bien adaptées aux mesures de suivi et des analyses sur terrain. Elles pourraient constituer pour un pays comme le Burkina Faso, une alternative très intéressante aux méthodes de spectrophotométrie atomique coûteuses et difficilement accessibles.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie)
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Coppens, Sandra. "Identification of genetic causes of early-onset myopathies through an integrated approach with a comprehensive phenotypic analysis, exome sequencing and zebrafish mutants." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2021. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/323000.
Full textAbstract:
Early-onset myopathies are genetically heterogeneous mendelian diseases. We have performed solo or trio whole exome sequencing (WES) in a cohort of 24 individuals with genetically undiagnosed early-onset myopathies from 21 families. We have identified single nucleotide variant (SNV) or copy number variants (CNV) in known genes in 52% of the patients. We contributed to the expansion of the phenotypic spectrum for two genes (TTN, TRIP4). In particular, through international collaborative efforts, we described the severe end of the phenotypic spectrum of congenital titinopathy. Fifteen cases, with biallelic TTN truncating or canonical splice site mutations, presented with severe in utero features and/or severe weakness and respiratory compromise at birth, leading to termination of pregnancy, neonatal death or survival with long term respiratory support. The presence of multiple congenital limb contractures, congenital long bone fracture and/or complete absence of muscle groups can be diagnostic clues. All severely affected patients that survived until birth had at least one mutation predicted to result in the production of at least some near-normal-length titin, a finding that seems to be essential for human in utero survival.WES also allowed us to identify three novel candidate genes (JAG2, R. U.). Through Matchmaker Exchange, we assembled a cohort of 23 individuals with undiagnosed muscular dystrophy from 13 unrelated families with rare homozygous or compound heterozygous variants in JAG2. Individuals with JAG2 variants had a wide spectrum of phenotypes and disease severity but the muscle MRI findings appear to be the unifying feature that helps to identify these patients. Transcriptome analysis in the muscle of two affected individuals suggests satellite cell depletion, a finding that is also present in other muscular dystrophies linked to the Notch pathway like POGLUT1 or MEGF10 related muscular dystrophies. If the implication of our three novel candidate genes is confirmed, the diagnostic yield in the cohort would increase to 67%. The zebrafish has been widely used to validate the implication of novel genes of myopathy, mostly with morpholino or mutated mRNA injections. As the specificity of morpholinos and mutated mRNA injections had been questioned, we have decided to use CRISPR-Cas9 to model loss-of-function or gain-of-function by creating knockout or knockin lines. We generated a knockout line for mtm1 and a knockin line for the S619L gain-of-function mutation in dnm2a because these mutations were associated with severe myopathic phenotypes in humans and had already been modeled in zebrafish with morpholino or mutated mRNA injections. In contrast to the severe phenotype of morpholino/mRNA injected fish, we did not observe any structural or functional defect in the muscle of mtm1 mutants and dnm2a mutants. Off-target effects of morpholino or mRNA injections as well as genetic compensation mechanisms in mutant lines are possible mechanisms explaining these discrepancies. The absence of phenotype in a zebrafish mutant line is not sufficient to rule out the implication of a gene in a human phenotype.Doctorat en Sciences médicales (Médecine)
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Rodriguez, Maria Patricia. "Capacité de Trypanosoma cruzi à activer les cellules dendritiques néonatales et adultes et ses conséquences sur la réponse lymphocytaire T." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/305206.
Full textAbstract:
Les réponses immunitaires en début de vie sont d’une efficacité limitée vis-à-vis de certains pathogènes en raison de particularités physiologiques du système immunitaire fœtal/néonatal. Elles justifient la logistique de l'administration tardive des vaccins, plutôt dans l'enfance que pendant la période néonatale, ce qui retarde la protection contre les maladies infectieuses, principale cause de morbi-mortalité chez les jeunes enfants. Le système immunitaire néonatal est initialement polarisé vers des réponses régulatrices et le développement de réponses Th2 afin de limiter les réponses inflammatoires trop intenses et délétères associées à une réponse de type Th1 qui pourrait être induite par « l’assaut microbien » qu’il subit dès sa naissance (colonisation par le microbiome). Pour cette raison, les cellules dendritiques néonatales, centrales dans l’activation des lymphocytes T naïfs, sont moins performantes que les adultes, et le gène de l’IFN-g est hyperméthylé dans les lymphocytes T CD4+. Cela limite le développement des lymphocytes Th1, essentiels pour la lutte contre les pathogènes intracellulaires. Cependant, dans des travaux précédents, nous avons montré que les nouveau-nés congénitalement infectés par Trypanosoma cruzi développent une réponse immunitaire T spécifique de type 1 (une forte réponse CD8+ et une plus faible réponse CD4+) avec production d’IFN-g. Afin de mieux cerner les mécanismes impliqués dans l’initiation de la réponse immunitaire néonatale chez ces nouveau-nés, nous nous sommes intéressés aux cellules dendritiques (DCs), essentielles à l’initiation de la réponse immunitaire. Nous résultats montrent qu’in vitro, les trypomastigotes vivants de T. cruzi activent les cellules dendritiques myéloïdes (mDC) de sang de cordon provenant de nouveau-nés sains. Ils induisent l'expression des molécules CD40, CD80 et CD83 à leur surface, les rendant aptes à stimuler la prolifération des LT CD4+ et CD8+ (avec une réponse CD8+ dominante) associée à la production d’IFN-g, témoignant d’une réponse de type 1. Nous montrons également que les IgG spécifiques de T. cruzi d’origine maternelle augmentent l'expression des molécules de co-stimulation induite par les parasites sur les mDCs néonatales, renforçant ainsi le développement des DCs compétentes. D’autre part nous avons mis en évidence que l’infection intracellulaire des mDCs n'est pas nécessaire à leur activation. Les proportions de cellules exprimant CD40 et CD80 ainsi que le niveau d'expression de ces molécules, étaient similaires parmi les cellules infectées et non infectées. Un lysat de T. cruzi induit également l'expression de ces molécules de co-stimulation. Ces données indiquent que la viabilité des trypomastigotes n'est pas indispensable à l’activation des mDCs. Nous avons aussi remarqué que la susceptibilité des leucocytes à l'infection par T. cruzi varie suivant le type cellulaire. Les DCs sont nettement moins susceptibles à l’infection que les monocytes et les granulocytes, laissant entrer un nombre plus limité de parasites. L’ensemble de ces résultats indique que T. cruzi est capable d’activer des DCs myéloïdes néonatales qui favorisent une réponse de type 1 et, fait intéressant, que les Ac maternels spécifiques du parasite accroissent leur activation, contribuant ainsi avec le parasite à surmonter « l’immaturité » du système immunitaire néonatal.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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De, Oliveira Alvelos Maria. "Alternative splicing in type 1 diabetes: The role of the splicing factor SRSF6 in pancreatic β-cell function and survival." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/313254.
Full textAbstract:
Type 1 diabetes (T1D) is an autoimmune disease characterized by the selective destruction of pancreatic β-cells, mediated by autoreactive T cells.The resulting inflammatory response takes place in the context of a dialogue between invading immune cells and the targeted β-cells, and it is modulated by genetic susceptibility, acting on both immune and β-cells, and by inflammatory cytokines and chemokines. Stress pathways triggered within β-cells may potentiate autoimmunity, and T1D susceptibility genes shape β-cell responses to “danger signals”, innate immunity, and activation of apoptosis. However, the molecular mechanisms linking genetic variation, environmental triggers, and the signaling events promoting β-cell dysfunction and loss remain poorly clarified. Pre-mRNA splicing is a crucial mechanism for gene expression regulation, and more than 95% of the human multi-exonic primary transcripts undergo alternative splicing. Splicing dysregulation have been increasingly recognized to play a pivotal role in multiple pathologies, including autoimmune diseases. More than 15% of the mutations described in the Human Gene Mutation Database are predicted to affect splicing. Our group has shown that exposure to pro-inflammatory cytokines induces major changes on the β-cell transcriptome, affecting the splicing of genes that are key for β-cell function and survival. Importantly, our group identified that GLIS3, a susceptibility gene for both T1D and type 2 diabetes (T2D), modulates β-cell apoptosis via regulation of the splicing factor SRSF6, linking T1D genetic susceptibility and alternative splicing. The downregulation of GLIS3, either by germline mutations associated with monogenic forms of diabetes or risk single nucleotide polymorphisms, contribute to SRSF6 splicing factor downregulation. Splicing factors are the primary regulators of splicing and orchestrate functionally related transcripts into regulatory networks, therefore, oscillations of splicing factors’ expression levels have a major impact on splicing decisions. In the present study we aimed: 1. To evaluate the functional impact of SRSF6 downregulation in human pancreatic β-cells; 2. To identify the SRSF6-regulated splicing networks and to decode the SRSF6 cis-regulatory RNA binding elements.To fulfil these aims, human insulin-producing EndoC-βH1 cells were subjected to RNA sequencing (under control conditions or following SRSF6 knock down for 48h) to identify transcriptome-wide alternative splicing events regulated by SRSF6, and to individual-nucleotide resolution UV crosslinking and immunoprecipitation followed by high-throughput sequencing (iCLIP) to determine the SRSF6 mechanistic model of splicing regulation, its associated cis-regulatory elements and directly bound transcripts in human β-cells. We observed that SRSF6 depletion has a major impact on human pancreatic β-cell function and survival, leading to β-cell apoptosis and impaired insulin secretion. SRSF6 downregulation affects the splicing of transcripts involved in central pathways for β-cell function and survival, such as insulin secretion (e.g. INSR, SNAP25), apoptotic regulators (e.g. BCL2L11 (or BIM), BAX), and the mitogen-activated protein kinases (MAPKs) signaling pathway (e.g. MAPK8, MAPK9, MAP3K7). SRSF6 silencing potentiates the generation of constitutively active isoforms of pro-apoptotic inducers – BAX-β, and BIM-Small - leading to apoptosis activation, and also of different members of the MAPK signaling pathway contributing to the hyper-phosphorylation of the pathway, leading to activation of down-stream transcription factors and consequent β-cell apoptosis. These data indicate that specific splicing networks, regulated through diabetes susceptibility genes, control key pathways and processes involved in the function and survival of β-cells. The iCLIP analysis has shown that SRSF6 recognizes more than 100,000 of RNA binding sites in protein coding sequences, and it regulates splicing by preferentially binding into exons through a purine-rich consensus motif consisting of GAA triplets. The number of triplets in direct sequence correlates with increasing binding site strength. The SRSF6 binding position affects the splicing outcome, possibly resulting from the competition between alternative exons and their flanking constitutive exons for SRSF6 tethering. We identified SRSF6 binding sites on SRSF6-regulated cassette exons of several susceptibility genes for both T1D and T2D, and as a proof-of-concept, modulated the splicing of the LMO7 susceptibility gene using antisense oligonucleotides.In conclusion, our data suggest that SRSF6 is a master splicing regulator in pancreatic β-cells, downstream of the diabetes susceptibility gene GLIS3. SRSF6 silencing potentiates the splicing of constitutively active pro-apoptotic variants (BAX-β and BIM-Small), and exacerbates the MAPK signalling pathway. SRSF6 recognizes specific purine-rich RNA binding motifs, with important implications for the interpretation of sequence variants. This work unveiled a novel regulatory layer for β-cell demise and diabetes genetic susceptibility, namely through splicing mis-regulation. These observations raise the possibility that splicing networks regulated by candidate genes for diabetes contribute to β-cell dysfunction and death in diabetes.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Horicks, Florence. "INVESTIGATION OF POTENTIAL ACTION MECHANISMS OF GONADOTROPIN-RELEASING HORMONE ANALOGUES TO PREVENT OVARIAN DAMAGE DURING CHEMOTHERAPY." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2017. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/256747.
Full textAbstract:
De nombreux agents chimiothérapeutiques sont gonadotoxiques et peuvent donc induire une insuffisance ovarienne précoce chez les jeunes patientes traitées. La protection pharmacologique de l'ovaire pendant la chimiothérapie à l'aide d'analogues de la Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRHa) est une option intéressante de préservation de la fertilité de par son caractère non-invasif et la possibilité d’une récupération spontanée de la fonction ovarienne. Ces molécules sont des inhibiteurs bien connus de l'axe hypothalamo-hypophyso-gonadique, mais leur efficacité dans cette indication est, cependant, controversée et leurs mécanismes d'action sont mal compris. Par conséquent, nous avons investigué les mécanismes potentiels de protection ovarienne des GnRHa pendant la chimiothérapie sur modèle murin. Nous avons montré que le cyclophosphamide (Cy) induit une déplétion folliculaire aiguë et proportionnelle à la dose affectant à la fois les follicules quiescents et en croissance. Lorsqu'ils sont administrés seuls à différentes doses et sites, l'agoniste et l'antagoniste de la GnRH altèrent les cycles oestraux, mais ne bloquent ni la folliculogenèse ni la sécrétion de la Follicle-Stimulating Hormone (FSH) chez la souris. De plus, le Cy atteint les follicules primordiaux, que les souris aient été traitées avec les GnRHa ou non. Ces résultats suggèrent que les GnRHa n'inhibent pas l'axe hypophyso-gonadique aussi efficacement chez la souris que chez la femme. Par conséquent, nous avons développé de nouveaux modèles pour étudier les mécanismes potentiels de protection ovarienne des GnRHa. Afin de différencier les effets directs des GnRHa via leurs récepteurs ovariens ou indirects par inhibition de la sécrétion de gonadotrophines, l'effet de l'agent alkylant sur le développement folliculaire et la réserve ovarienne a été testé sur des follicules cultivés in vitro avec ou sans GnRHa et in vivo chez des souris déficientes en FSHb (Fshb-/-). Pour imiter la profonde inhibition de FSH observée chez la femme après traitement aux GnRHa, nous avons étudié la toxicité de la chimiothérapie chez les souris Fshb-/-. L’administration de gonadotrophines exogènes (pregnant mare serum gonadotropin, PMSG) induit une croissance folliculaire jusqu’au stade antral mais n’influence pas le nombre total de follicules au sein de l’ovaire. Le Cy induit une perte folliculaire significative dans le groupe contrôle et dans le groupe traité au PMSG. Aucune différence concernant la prolifération ni l'apoptose n'a été observée entre les groupes traités à la chimiothérapie. A ce jour, ce modèle murin représente le meilleur modèle pour étudier l'inhibition gonadotrope induite par les GnRHa observée chez la femme. Ces résultats suggèrent que la FSH n'est pas impliquée dans la protection ovarienne potentielle des GnRHa pendant la chimiothérapie. Afin d’évaluer les effets directs des GnRHa sur les follicules en croissance et quiescents, des follicules préantraux ou des ovaires de nouveau-nés (PND4) ont été cultivés avec ou sans GnRHa avant l'exposition au métabolite actif du Cy, le 4-hydroperoxycyclophosphamide (4HC). Nous avons d'abord montré que l'exposition in vitro aux GnRHa n'affectait ni la survie et le développement folliculaire, ni la maturation ovocytaire. Dans les follicules en croissance, le 4HC diminue significativement les taux de survie et de maturation; et retarde le développement folliculaire, indépendamment du traitement aux GnRHa. La chimiothérapie diminue le nombre de cellules de la granulosa par follicule tandis que la production d’adénosine monophosphate cyclique (AMPc) par million de cellules de la granulosa n'est pas modifiée, ni par le 4HC, ni par les GnRHa. La sécrétion d'oestradiol tend à être retardée dans le groupe traité à l’agoniste mais pas dans le groupe antagoniste. De même, dans les ovaires PND4, le 4HC induit une perte folliculaire importante et atteint directement les cellules de la granulosa des follicules ovariens. Aucune différence dans la distribution folliculaire, la prolifération ou l'apoptose n'a été observée entre les groupes traités avec le 4HC, peu importe la présence des GnRHa ou non. Pour conclure, en se basant sur des modèles murins robustes et originaux, notre travail remet en question l'efficacité des GnRHa pour préserver l'ovaire contre les dommages causés par la chimiothérapie que ce soit par une action directe sur l'ovaire, ou indirectement par l'absence de FSH. D'autres investigations seront nécessaires pour comprendre les mécanismes d'action potentiels des GnRHa sur l'ovaire et les voies impliquées. Des preuves expérimentales sont encore indispensables pour clore le débat sur cette option attrayante de préservation de la fertilité.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Wimana, Léna. "ImmunoPet imaging using Zirconium-89 radiolabeled trastuzumab to explore resistance in HER2+/MUC4+ breast cancer." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2015. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/221750.
Full textAbstract:
Notre travail s’est focalisé sur l’utilisation du trastuzumab‐immunoPET afin d’étudier et deguider une approche nouvelle visant à surmonter la résistance au médicament trastuzumab,causée par la surexpression de MUC4 dans le cancer du sein.Pour ce faire, nous avons préparé et utilisé du 89Zr‐trastuzumab dans le but de suivresa capacité de liaison au récepteur HER2 ainsi que son accumulation dans des cellulescancéreuses mammaires. Ensuite, nous avons formulé l’hypothèse que des agentsmucolytiques, tels que la N‐Acétylcystéine (NAC), en démêlant les réseaux formés par lesmucines, permettent l’amélioration de la captation du radiotraceur in vitro et in vivo. Eneffet, l’addition du NAC a occasionné une accumulation significative de 89Zr‐trastuzumab,sans altération ni changement de l’affinité de liaison au récepteur. Ceci semble égalementproduire une meilleure sensibilité des imageries PET dans le modèle animal choisi.Dans une seconde étape, nous avons évalué, dans un modèle murin de cancer du seinrésistant au trastuzumab et surexprimant la MUC4, si cette captation accrue se traduit parun bénéfice thérapeutique en utilisant le NAC combiné au trastuzumab. Nous avons obtenuun effet inhibiteur qui réduit de moitié la croissance tumorale, comparable à celui observépour la tumeur mammaire sensible au trastuzumab (implantée dans le même animal).En conclusion, notre étude démontre l’efficacité de l’utilisation de traceurs PETsurtout à visée théranostique, comme c’est le cas du 89Zr‐trastuzumab, pour étudier etévaluer la résistance aux médicaments ciblés apparentés au radiotraceur lui‐même. Ellepropose l’utilisation du NAC pour améliorer l’accessibilité du récepteur pour le radiotraceurainsi que pour le médicament « froid » ouvrant, de ce fait, une perspective vers uneutilisation clinique chez un sous‐type de patientes atteintes d’un cancer du sein.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie)
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Vandergheynst, Frederic. "Contribution à la description phénotypique du syndrôme d'antidiurese inappropriée nephrogénique et à l'étude de la morbidité: Mortalité de l'hyponatrémie." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2016. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/232473.
Full textAbstract:
La première partie de ce travail porte sur la description phénotypique du syndrome d’antidiurèse inappropriée néphrogénique associé à la mutation faux-sens R137C du gène (situé sur le chromosome X) codant pour le récepteur V2 à l’arginine vasopressine (AVPR2), conférant une activité constitutive au récepteur muté. Nous avons identifié deux familles porteuses de cette mutation R137C - AVPR2 et avons décrit de nouveaux aspects phénotypiques, en particulier le fait que la maladie puisse s’exprimer aussi bien chez les patients masculins hémizygotes que chez les patientes féminines hémizygotes. L’âge au diagnostic variait dans notre série de 23 jours à 74 ans. La seule patiente de notre série de 10 sujets ne présentant pas de défaut d’élimination de l’eau s’est avérée bénéficier d’un biais d’inactivation du chromosome X avec inactivation préférentielle de l’allèle muté. In vitro, le R137C - AVPR2 est résistant à son agoniste (AVP) et à un agoniste inverse du récepteur sauvage, le satavaptan. Nous avons étudié chez trois patients la sensibilité à un agoniste synthétique - la 1-déamino-8d-arginine vasopressine - du R137C - AVPR2 au niveau de ses sites physiologiques d’expression, les cellules principales du tube collecteur rénal et les cellules endothéliales vasculaires et avons ainsi pu confirmer in vivo la résistance à l’agoniste observée in vitro. La résistance aux vaptans s’est également confirmée chez le patient index de notre série. Le traitement par restriction hydrique associé ou non à une diurèse osmotique par administration d’urée était à la fois bien toléré et efficace, chez nos patients ainsi que dans les cas de la littérature.La deuxième partie du travail consiste en une contribution à l’étude de la morbidité-mortalité de l’hyponatrémie. Au sein d’une cohorte multicentrique de plus de 13 000 patients de Soins Intensifs (SI), nous avons montré que les dysnatrémies aux SI constituaient un facteur prédictif indépendant de mortalité hospitalière accrue, quel que soit le niveau d’hypo ou d’hypernatrémie et quel que soit le moment où cette dysnatrémie a été documentée (à l’admission ou pendant le séjour SI). La relation entre la sévérité de l’hyponatrémie - hypernatrémie et la mortalité hospitalière suit une courbe en U. L’hyponatrémie s’est également avérée être un facteur prédictif indépendant de mortalité hospitalière dans notre série monocentrique de patients du service des Urgences, dont l’originalité réside dans le design cas-contrôle. Outre la mortalité hospitalière, l’analyse multivariée révélait également que l’hyponatrémie était associée de façon indépendante avec les tumeurs solides. Par rapport à la controverse sur la réalité d’un lien causal dans l’association hyponatrémie - mortalité, l’impact neurologique au sens large du terme de l’hyponatrémie a suscité ces dernières années un intérêt dans la littérature, en particulier l’incidence des chutes. Dans ce cadre, nous avons abordé pour la première fois de façon prospective l’impact de l’hyponatrémie sur le système nerveux périphérique, en évaluant différents paramètres chez des patients hyponatrémiques - présentant pour la plupart un SIADH - avant et après la correction de la natrémie. L’hyponatrémie modérée n’a pas d’impact sur la force musculaire mais bien sur le timed up-and-go test, test corrélé à l’incidence des chutes chez les patients âgés. Enfin, l’hyponatrémie profonde a un impact sur les vitesses de conduction nerveuse et la latence de l’onde F. En termes de perspectives, ces observations renforcent le concept qu’une étude prospective interventionnelle est nécessaire dans l’étude de la relation hyponatrémie - mortalité.Doctorat en Sciences médicales (Médecine)
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Mornet, Stéphane. "Synthèse et modification chimique de la surface de nanoparticules de maghémite à des fins d'applications biomédicales." Phd thesis, Université Sciences et Technologies - Bordeaux I, 2002. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00128139.
Full textAbstract:
Ce travail porte sur le développement de nanovecteurs magnétiques à base de nanoparticules, destinés à des applications biomédicales in vivo. Les études se sont dirigées vers l'optimisation du couplage de macromolécules de dextran et de dérivés de polyoxyde d'éthylène à la surface des nanoparticules magnétiques afin de les rendre biocompatibles. Des nanoparticules de maghémite, préalablement synthétisées, ont étémodifiées en surface par des agents de couplage silaniques organofonctionnels suivi du greffage covalent des macromolécules. Les nanovecteurs, ont ensuite été marqués par des sondes fluorescentes pour réaliser des
tests in vitro de double marquage (IRM, fluorescence) de microglies humaines (HEMC5).
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Tieppo, Paola. "The development of human fetal γδ thymocytes." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/303402.
Full textAbstract:
γδ T cells are unconventional T cells that that can recognize infected and transformed cells via their γẟ TCR, thus promoting different immune responses. In addition, several studies showed that γδ T cells are important in the protection against different pathogens in early life, such as human cytomegalovirus (CMV). The diversity of the γδ TCR repertoire is mainly generated in the complementarity determining region 3 (CDR3) where V(D)J recombination takes place. One of the main players in the junctional diversity is the terminal-deoxynucleotidyl-transferase (TdT) enzyme responsible for the random template-independent nucleotide addition at the junction of the joining gene segments.In the mouse model it is established that during development, especially before birth, innate γδ T cell subsets are generated in waves and their generation depends on the type of hematopoietic stem and precursor cells (HSPC). These γδ T cells express a semi-invariant γδ TCR and can acquire a functional program already in the thymus. In human, in contrast, the idea of γδ T cells as innate-like lymphocytes is questioned by recent works showing that the γδ TCR repertoire of human pediatric thymuses and of term-delivery cord blood is highly diverse. Here, by analyzing in detail human fetal and post-natal thymi, we observed striking differences between fetal and post-natal γδ thymocytes at the γδ TCR repertoire and functional level. In contrast to post-natal γδ thymocytes, fetal γδ thymocytes were functionally programmed, expressed low levels of TdT and were highly enriched for invariant/public CMV-reactive CDR3 sequences (TRGV8-TRJP1-CATWDTTGWFKIF, TRDV2-TRDD3-CACDTGGY, and TRDV1-TRDD3-CALGELGD). The rearrangements of these invariant sequences were driven by short-homology repeats at the end of the involved gene segments, as it was observed in the mouse. In addition, we investigated the role of HSPC in the generation of this invariant γδ thymocytes by using an in vitro T cell development system and we showed that only fetal HSPC could generate γδ T cells enriched for the same specific features that were found in the ex-vivo fetal γδ thymocytes. Moreover, we showed that the RNA-binding protein Lin28b, highly expressed in fetal γδ T cells, reprogrammed the term delivery HSPC towards the generation of γδ T cells resembling to their fetal counterpart.In conclusion, we show that the human fetal thymus generates, in a HSPC- and Lin28b-dependent manner, innate invariant γδ T cells with programmed effector functions that might provide protection to the fetus during congenital infections, such as against CMV.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie)
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Vanorle, Marion. "Rôle des nucléotides extracellulaires dans le potentiel angiogénique et cardioprotecteur des cellules souches issues du tissu adipeux cardiaque." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2018. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/271471.
Full textAbstract:
Les cellules souches du tissu adipeux (ASC pour Adipose-derived Stem Cells) constituentaujourd’hui une source de cellules souches particulièrement prometteuses dans le domaine dela thérapie cellulaire. Considérée comme une alternative sérieuse aux cellules souches de lamoëlle osseuse, cette source de cellules souches multipotentes fait depuis quelques annéesl’objet de nombreuses recherches et essais cliniques dans le domaine des thérapiesrégénératrices. La compréhension des mécanismes moléculaires et l’identification derégulateurs associés à la différenciation des cellules souches permettent de mieux comprendrel’implication de ces cellules dans l’homéostasie et la réparation tissulaire. Ceci représente unenjeu considérable dans le développement de stratégies thérapeutiques pour de nombreusesmaladies humaines.De précédentes études ont démontré que les récepteurs aux nucléotides P2Y jouent un rôleprécoce dans le devenir adipogénique et ostéogénique des cellules souches mésenchymateuseshumaines de la moëlle osseuse et du follicule dentaire. L’implication des récepteurs P2Y a étépeu étudiée dans les processus de différenciation des ASC. Ceci nous a amené à investiguer lerôle potentiel des récepteurs P2Y4 et P2Y2 dans la voie de différenciation adipocytaire et dansla voie de différenciation endothéliale.Dans un premier temps, nous avons étudié l’impact de la perte du récepteur P2Y4 dans leprocessus de différenciation adipogénique des celles souches du tissu adipeux cardiaque(cASC) et dans la formation du tissu adipeux cardiaque (TAC). Nous avons montré une forteexpression du récepteur P2Y4 tout au long du processus de différenciation des cASC enadipocytes matures. Ces premiers résultats ont été corrélé à une précédente observation faitepar notre laboratoire démontrant l’augmentation de la masse de ce tissu graisseux entourant lecoeur chez les souris déficientes pour le récepteur P2Y4. Nous avons ensuite identifié un effetnégatif de l’UTP, ligand des récepteurs P2Y4 et P2Y2, sur la différenciation et la maturationadipogénique des cASC. Par ailleurs, l’utilisation d’agonistes spécifiques aux deux récepteursa permis de démontrer que cet effet négatif de l’UTP observé sur la différenciation adipocytaireétait lié à l’activation du récepteur P2Y4. Ces effets ont rapidement été corrélés à une diminutiond’expression de facteurs adipogéniques (PPARy, SCD1 et THRSP) identifiant ainsi le P2Y4comme un régulateur négatif du processus adipogénique.Cette première étude a également permis d’évaluer la fonction cardioprotectrice du TAC enl’absence du récepteur P2Y4. Des études in vivo réalisées sur un modèle murin d’infarctus dumyocarde (LAD) a permis d’expliquer l’effet cardioprotecteur précédemment observé enl’absence du récepteur P2Y4. Il semblerait que la cardioprotection observée dans les sourisdéficientes pour le récepteur P2Y4 serait dépendant de la surexpression d’une adipokinecardioprotectrice, l’adiponectine. La réalisation du modèle LAD sur des souris double knockoutpour le récepteur P2Y4 et l’adiponectine a en effet permis de démontrer la corrélation entrela cardioprotection et l’augmentation d’adiponectine dans les souris déficientes pour lerécepteur P2Y4. Enfin, la mise en évidence d’adipocytes de type beige dans le TAC de sourisP2Y4 knockout est venue étayer la dimension cardioprotectrice du TAC.Dans la seconde partie de ce travail, nous nous sommes intéressés au rôle du récepteur P2Y2,dans la différenciation des cASC en cellules endothéliales et leurs propriétés angiogéniquesdans un modèle in vivo de revascularisation post-ischémique.Des expériences d’angiogenèse in vitro réalisées au moyen de cASC prédifférenciées encellules endothéliales ont démontré la formation de réseaux plus développés après unestimulation à l’UTP (100μM) au cours de la différenciation des cASC. L’effet positif de l’UTPdans la formation des réseaux vasculaires, conservé dans les cASC issues de souris déficientespour le P2Y4, était cependant inhibé en l’absence du récepteur P2Y2. Ces résultats, associés àl’expression forte du récepteur P2Y2 observée dans les cultures de cASC (comparée à celle duP2Y4), sont venus confirmer le rôle de ce récepteur dans le processus de différenciationendothéliale des cASC et dans la formation de tubes vasculaires. Des expériences de RNAsequencing nous ont permis d’identifier des protéines cibles de l’UTP dans les cASC possédantdes propriétés pro-angiogéniques.Enfin, la dernière partie de ce travail fut la mise en place d’un modèle in vivo conséquentpermettant d’étudier l’effet de l’UTP sur le potentiel de revascularisation post-ischémique descASC différenciées. L’injection post-infarctus des cASC préstimulées à l’UTP a démontré uneffet positif sur la densité capillaire dans la périphérie de la zone ischémique. Enfin, cet effetpro-angiogénique d’un prétraitement des cASC à l’UTP pendant leur différenciation était perduen cas d’injection de cASC issues de souris déficientes pour le récepteur P2Y2.Cette seconde étude a donc permis de mettre en évidence le rôle régulateur de l’UTP, parl’activation du récepteur P2Y2, dans le potentiel pro-angiogénique des ASC après leur injectiondans un modèle d’infarctus. L’identification de régulateurs, permettant d’améliorer l’efficacitéthérapeutique des ASC en agissant notamment sur leurs effets pro-angiogéniques paracrines etdonc leur capacité de revascularisation, représente un enjeu majeur dans l’optimisation desthérapies cardiaques.L’ensemble de nos travaux suggère que les récepteurs aux nucléotides présentent un potentielrégulateur majeur dans des processus physiologiques tels que la différenciation adipocytaire etendothéliale des ASC. Ces récepteurs pourraient ainsi constituer des cibles thérapeutiquesintéressantes dans la régulation de la fonction cardioprotectrice du TAC et dans le potentiel proangiogéniquedes ASC dans un processus de revascularisation post-ischémique.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Kehagias, Pashalina. "Sensitivity and Resistance to Regorafenib Therapy in Advanced Colorectal Cancer: ctDNA Monitoring and Molecular Mechanisms." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2020. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/312523.
Full textAbstract:
Résumé en Français:Le régorafénib est une des dernières options thérapeutiques pour les patients atteints d’un cancer colorectal chimio-réfractaire de stade avancé (CCRa). Cet inhibiteur de multiples tyrosine kinases n’est pas dépourvu de toxicité ce qui limite son utilisation en dernière ligne chez ces patients dont l’état général est dégradé, alors même que son efficacité n’est pas certaine chez tous les patients. Son mécanisme d'action reste largement inconnu, ce qui rend difficile l'identification de biomarqueurs prédictifs cliniquement utiles. C’est dans ce contexte que se situe ce projet de thèse, dont l’objectif est d’identifier les patients qui pourraient ou pas bénéficier du regorafenib. Pour atteindre cet objectif, nous avons développé à la fois nous avons entamé des projets de recherche translationnelle et mécanistiques.Nos études translationnelles se sont portées sur le monitoring de la réponse thérapeutique dans des biopsies liquides récoltées dans le cadre d’un essai clinique prospectif incluant des patients souffrant d’un CCRa et traités au régorafénib (RegARd-C). Nous avons d’abord confirmé la valeur pronostique de l’ADN libre circulant (ADNlc) avant traitement. De même, nous avons démontré qu'un haut volume tumoral métaboliquement actif avant traitement était associé à un mauvais pronostic. Combinés, ces marqueurs sont restés des prédicteurs de la survie sans progression (SSP) et globale (SG) des patients. Par la suite, nous avons mesuré l’ADN tumoral circulant (ADNtc) en suivant les mutations tumorales pré-identifiées dans le tissu tumoral des patients par séquençage. Nous avons démontré qu’une augmentation de plus de 50% de l’ADNtc après seulement 14 jours de traitement quel que soit le nombre de mutations suivies, indiquait un moins bon pronostic en termes SSP et SG. En outre, nos données suggèrent que ADNtc et ADNlc sont indépendants mais complémentaires dans leur valeur prédictive. Aussi, nous avons mis en évidence le rôle important de l’antigène carbohydrate 19-9 en tant que marqueur pronostique et prédictif précoce de la survie de ces patients.Ayant observé un profil général de résistance chez les patients, nous avons investigué les mécanismes potentiels de résistance intrinsèque et acquise au régorafénib dans des lignées cellulaires représentatives de CCR et avons trouvé différents degrés de résistance intrinsèque dans ces lignées. Nous avons dès lors exploré les mécanismes de résistance au régorafénib dans des cellules que nous avons rendues plus résistantes que les lignées parentales. L’investigation des voies de signalisation des MAPK et de PI3K/AKT a montré que cette dernière est un acteur majeur dans la résistance acquise dans la lignée HCT-116. Une autre observation basée sur des changements morphologiques particuliers des cellules nous a conduits à investiguer en détail un phénotype sénescent induit par le régorafénib, la sénescence étant reconnue comme causant la résistance aux médicaments. A cet égard, le comportement des deux lignées était différent. Les cellules SW480 étaient capables d'acquérir des propriétés de sénescence stables suite à la sécrétion de facteurs favorisant celle-ci ainsi qu’un arrêt du cycle cellulaire. En accord avec le fait que ces cellules tumorales dormantes peuvent avoir un effet positif sur le devenir du patient, tant que celui-ci reste sous traitement, elles pourraient contribuer à la rechute de la maladie dès l’arrêt du traitement. Les cellules HCT-116 quant à elles présentent des propriétés de sénescence à court terme et développent une résistance acquise sous traitement au régorafénib continu via une transition épithélio-mésenchymateuse (TEM), également associée à une résistance aux médicaments. Ce dernier mécanisme pourrait avoir un effet délétère sur le patient comme l’apparition de sous-clones plus agressifs qui induise la progression de la maladie et assombrit le pronostic.Nous avons également investigué la p-glycoprotéine comme un possible mécanisme de résistance additionnel et avons montré que dans les cellules SW480 traitées au régorafénib, ce dernier serait capable de surmonter la résistance induite par cette protéine. Cependant, une augmentation de l'expression de la p-glycoprotéine n’est observée dans les cellules HCT-116 qu'après une courte exposition au régorafénib et plus dans les cellules traitées en continu.En conclusion, nous avons contribué à une meilleure compréhension des différents mécanismes de résistance au régorafénib dans le CCR. Nous avons indiqué la sénescence, la TEM et probablement la p-glycoprotéine comme acteurs majeurs potentiels; et avons souligné l’hétérogénéité de cette maladie. Est-ce que le régorafénib gagnera-t-il une meilleure place comme traitement efficace dans le CCR ?Notre travail propose plusieurs pistes pour répondre à cette question.Abstract:Regorafenib is one of the last treatment options for patients with chemo-refractory metastatic colorectal cancer (mCRC), associated with some efficacy but with important toxicities impairing its use in patients with poor general condition. As a multi-targeted tyrosine kinase inhibitor, its mechanism of action remains largely unknown, challenging the identification of clinically useful predictive biomarkers. The ultimate aim of our work was to contribute to the identification of mCRC patients unlikely to benefit from regorafenib. To achieve this objective, we moved from translational to mechanistic studies.Our translational studies focused on therapy response monitoring using liquid biopsies obtained from a prospective clinical trial in mCRC patients treated with regorafenib (RegARd-C trial). We first, confirmed the prognostic value of cell-free DNA (cfDNA) level before treatment. Similarly, we found that high level of pre-treatment metabolically active tumor volume was associated with poor prognosis. When combined, these markers remained predictors of patients’ progression-free (PFS) and overall survival (OS).Then, we measured circulating tumor DNA (ctDNA) based on tumor-specific mutations already identified in patients’ tumor tissue by NGS. We demonstrated that an increasing ctDNA level more than 50% after 14 days of treatment, either based on one or on multiple mutations, is correlated with patients’ clinical outcome in terms of PFS and OS. Furthermore, our data strongly suggested that both baseline cfDNA and ctDNA dynamics are strong complementary predictors of both PFS and OS. Also, we highlighted the leading role of Carbohydrate Antigen 19-9 as a prognostic and early predictive biomarker of mCRC patients’ outcome.Having observed an overall resistance to regorafenib in the majority of patients, we investigated the potential related intrinsic and acquired resistance mechanisms in representative CRC cell lines and found rather different degrees of intrinsic resistance to regorafenib in these cell lines. We then explored potential mechanisms of resistance after short and long-term exposure to regorafenib. The investigation of MAPK and PI3K/AKT pathways pointed to the latter as a major player in acquired resistance.Another observation based on particular cell morphological changes led us to investigate in deep a drug-initiated senescence-like phenotype that is also known to cause drug resistance. SW480 cells were able to acquire stable senescent-like properties, also promoted by a specific senescence-associated secretome, and cell cycle arrest. In line with tumor cell dormancy this phenotype may have a positive impact on patient’s outcome as long as he is under treatment. However, dormant cells contribute to disease recurrence after drug withdrawal. In contrast, HCT-116 cells undergo senescent properties after short exposure and develop acquired resistance triggering EMT, which is also associated with drug resistance. This latter mechanism could be deleterious for the patient as the appearance of more aggressive tumor subclones may induce disease progression and worsen clinical outcome.We also investigated Multi-Drug Resistant protein 1 (MDR1) as a possible additional mechanism of resistance and we found that regorafenib seems to overcome MDR in SW480 treated cells while in HCT-116, an increase of MDR1 expression was observed after short and long exposure compared to parental cells.In conclusion, we contributed to a better understanding of different mechanisms of resistance to regorafenib in CRC. We pointed to cell plasticity such as senescence and EMT in addition to possible MDR as major players; and certainly highlighted the high heterogeneity of the disease. Will regorafenib gain a better place as an efficient drug in CRC? Our work provides some insights for answering this question.
Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Meyerovich, Kira. "Ubiquitin editing enzymes and beta cell fate in type 1 diabetes." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2016. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/234965.
Full textAbstract:
Type 1 Diabetes (T1D) is an autoimmune disease affecting around 0.1-0.8% of the population worldwide and is characterized by a progressive destruction of insulin-producing beta cells. Pro-inflammatory cytokines released by immune cells around the islets contribute for the “first wave” of beta cell apoptosis. Cytokine-mediated activation of the transcription factor nuclear factor kappa (NF-κB) contributes to beta cell demise in T1D. This is unusual, since NF-κB has anti-apoptotic effects in other cells. NF-κB is activated in most cells via the canonical pathway, while its activation via the non-canonical NF-κB pathway is restricted to few cell types, such as maturing/differentiating immune cell and osteoclasts. We have now observed that IL-1β+IFN-γ induces an atypical activation of the non-canonical NF-κB pathway in beta cells. This activation depends on different crosstalk mechanisms between the canonical and non-canonical NF-κB pathways, including the down-regulation of the E3 ligase Fbw7, which targets the p100 for proteasomal degradation, and up-regulation of another E3 ligase, βTrCP, which in turn induces cleavage of p100 to p52, a hallmark step in the non-canonical NF-κB activation. Importantly, cytokine-mediated activation of the non-canonical pathway regulates the expression of late NF-κB dependent genes, such as Ccl5, Ccl19, Ccl12, Fas that regulate both pro-inflammatory and pro-apoptotic responses and are implicated in beta cell loss in T1D. This atypical activation of the non-canonical NF-κB pathway by pro-inflammatory cytokines in beta cells constitutes a novel “feed-forward” mechanism that may explain the particular pro-apoptotic effect of this transcription factor in beta cells. Besides regulation of pro-death responses, NF-κB activation in beta cells triggers the expression of the ubiquitin-editing protein A20, encoded by TNFAIP3. A20 restricts NF-κB signalling and possess anti-apoptotic activities in beta cells. Importantly, genome-wide association studies have identified TNFAIP3 as a candidate gene for T1D. We presently demonstrated that A20 effects in beta cells are not restricted to inhibition of NF-κB. Thus, A20 also suppresses the pro-apoptotic mitogen-activated protein kinase c-Jun N-terminal kinase (JNK), and activates the survival signaling mediated via the v-akt murine thymoma viral oncogene homolog (Akt), thus inhibiting the intrinsic pathway of apoptosis. Finally, a cohort study of T1D children indicated that the risk allele of the rs2327832 single nucleotide polymorphism of TNFAIP3 predict lower C-peptide and higher hemoglobin A1c (HbA1c) levels 12 months after disease onset, indicating that this candidate gene contributes for reduced residual beta-cell function and impaired glycemic control in early T1D. In conclusion, our results indicate a critical role for A20 in the regulation of beta cell survival and unveil novel mechanisms by which A20 controls beta-cell fate. Moreover, we identified the single nucleotide polymorphism rs2327832 of TNFAIP3 as a prognostic marker for diabetes outcome in children with T1D.We have also observed that A20 protects beta cells against the pro-apoptotic effects of cytokines by preventing the degradation of the anti-apoptotic protein Mcl-1. Mcl-1 belongs to the Bcl-2 family of proteins that regulate the intrinsic apoptotic pathway. It was previously shown that Mcl-1 depletion contributes to apoptosis in rat beta cells and that its expression is downregulated in islets from T1D individuals infected by enteroviruses. We have now confirmed in human beta cells that decreased Mcl-1 expression contributes to cytokine-mediated beta cell death. We generated a beta cell specific Mcl-1 knockout mouse line (βMcl-1 KO) and observed that islets derived from these mice were more susceptible to pro-apoptotic stimuli exposure ex vivo. Of note, βMcl-1 KO mice were more vulnerable to multiple low dose streptozotocin-induced diabetes than their wild type littermates. One of the mechanisms by which cytokines mediate Mcl-1 degradation is via its phosphorylation by GSK3β. Overexpression of A20 increased AKT phosphorylation, providing a negative feedback on GSK3β activity and preventing Mcl-1 degradation. Cytokines also increase Mcl-1 ubiquitination, a process regulated by the E3 ligases Mule and βTrCP and the deubiquitinase USP9X. The present findings indicate that pro-inflammatory cytokines trigger post-translational modifications of Mcl-1 leading to its degradation. This contributes to exacerbation of pro-death responses and beta cell demise in T1D, but it can be prevented, at least in part, by A20. As a whole, our data unveil novel post-translational mechanisms and different ubiquitin editing proteins that regulate beta cell fate in T1D and are modulated by pro-inflammatory cytokines.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Van, Woensel Matthias. "Sensitization of glioblastoma tumor micro-environment to chemo- and immunotherapy by Galectin-1 reduction after intranasal anti-Gal-1 siRNA administration." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2016. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/240945.
Full textAbstract:
High grade gliomas remain a devastating disease, for which a curative therapy is virtually absent. The high medical need is unmet by novel treatment strategies and advances in chemo-and radiotherapy. Patients diagnosed for GBM face a median survival of 15 months after maximal standard-of-care therapy, and relapse is often observed due to micro-metastasis in the direct environment of resection. In part, current treatment modalities such as chemo-and immunotherapy are hampered in their efficacy due to the specialized TME. This area is adequately equipped to withstand the cytotoxic attack of chemo- and immunotherapy. Therefore, we hypothesized that modulation of the TME could decrease these defense mechanisms, and increase susceptibility to tumor lysis.In this respect, we focused on Gal-1 as an ideal target to modulate the TME in the context of GBM. Gal-1 exerts multiple tumor promoting functions. From pre-clinical research, we have learned that Gal-1 is an important mediator for the proliferation and migration of tumor cells, moreover Gal-1 could also promote angiogenesis in the TME, providing nutrients and oxygen for GBM to grow. Gal-1 also maintains the inherent defense mechanisms to chemo and immunotherapy. Gal-1 is crucial for the resistance mechanisms to TMZ by altering the EPR stress response. Moreover, and most important for our purposes, Gal-1 is also a crucial immune suppressor in the TME, which can induce apoptosis in activated T cells, and recruit Tregs. To target Gal-1 in the TME would be clinically most relevant if this could be performed via a non-invasive treatment modality. Therefore, we developed a nanoparticle complex that could deliver siGal-1 from the nasal cavity directly to the CNS, and even the TME. This nose-to-brain delivery bypasses systemic routes, with a higher (and more selective) local bioavailability in the CNS. The major pharmaceutical excipient in this nanoparticle complex consists of chitosan polymers. These polymers are highly interesting agents to promote nose-to-brain delivery due their muco-adhesive and epithelial barrier modulation properties. When applying these particles in vitro on GBM cells, a solid decrease of Gal-1 was noted, and the epithelial modulatory properties were confirmed. Furthermore, we observed a rapid transport from the nasal cavity to the brain upon intranasal administration of a highly-concentrated chitosan nanoparticle siGal-1 suspension and we could even observe the sequence-specific cleavage of Gal-1 mRNA, and a decrease of Gal-1 in the TME. This Gal-1 reduction could modulate the TME from immune suppression to immune activation, as demonstrated by decrease in suppressor cells, and increased stage of activation in rejective immune cells. Moreover, due to decreased Gal-1, also angiogenesis was alleviated, and a reduced size in vasculature was observed, mimicking a morphological vessel normalisation. Reversing the immune and vascular contexture of the TME by Gal-1 reduction seemed a prerequisite to increase the efficacy of TMZ, DC vaccination and PD-1 blocking. In combination experiments, we noticed that siGal-1 on top of these treatments, could further increase the efficiency of chemo and immunotherapy. The findings presented in this thesis can serve as a proof of concept for the feasibility to modulate and re-orchestrate the TME of GBM via intranasal administration. The intranasal administration of siGal-1 could represent a valuable clinically translational treatment to increase the efficiency of chemo- and immunotherapy for GBM patients. In our research facilities, a phase 0 as a first-in-human trial is actively pursued.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie)
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Najem, Ahmad. "Drug combination strategies to abrogate resistance in NRAS mutant melanoma." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2017. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/258096.
Full textAbstract:
Melanoma is the deadliest form of skin cancer and one of the most difficult cancers to treat. Gene alterations identified in melanoma pointed to distinct molecular subsets of tumors with direct implications in therapeutic strategies. Activating mutations in NRAS, found in 20-30% of melanomas have been associated with aggressive clinical behavior and a poor prognosis. Nevertheless, there is lack of effective targeted therapies for NRAS mutant melanoma.Out of the few MEK inhibitors, pimasertib, a potent inhibitor of both MEK1 and MEK2 has showed promising results in NRAS mutant advanced melanoma. However, as a single agent and similar to other MEK inhibitors, it showed a limited clinical benefit due to its rather cytostatic effect and high toxicity. Our and other preliminary studies clearly indicated a stimulation of MITF (Microphthalmia associated transcription factor), the master transcription factor regulating cell growth and differentiation in the melanocyte, under MEK inhibition challenge. Thus, in a context where the tumor suppressor p53 is largely inactivated in melanoma, the stimulation of MITF may be the cause of the restraint cytotoxic effects of MEK inhibitors. Therefore, we aimed to further investigate the downstream MITF targets that can explain the resistance to the drugs.First, we showed that, MEK inhibition (by Pimasertib) led to a significant inhibition of cell proliferation but with a very limited effect on apoptosis that may be explained by the systematic MITF upregulation in all lines tested. Indeed, Mimicking MITF activation of expression by stimulating cAMP conferred resistance to MEK inhibition and interestingly up-regulated Bcl-2 expression. Further evidence was provided by the fact that, acquired resistance to MEK inhibition is associated with substantial upregulation of the anti-apoptotic signaling MITF/Bcl-2. More importantly, selective Bcl-2 inhibition by ABT-199 or Bcl-2 knock out using CRISPER/Cas9 system restores the sensitivity of NRAS mutant melanoma cells to MEK inhibition and breaks the acquired resistance.Given the known p53 regulating effect on Bcl-2, we evaluated p53 reactivation by PRIMA-1Met (APR-246) under MEK inhibition on the promotion of apoptosis in a panel of Q61NRAS mutant melanoma cells. Strikingly and similarly, this combination not only resulted in a synergistic effect to induce massive apoptosis but also broke resistance to MEK inhibitors both in cells with wild type or mutant p53 alike.In conclusion, we showed that the activation of cAMP/MITF/Bcl-2 pathway is a main anti-apoptotic mechanism associated with resistance to MEK inhibition in NRAS mutant melanoma. We propose drug combinations cotargeting MEK and other proteins regulating apoptosis -p53/Bcl-2- as a promising and clinically relevant therapeutic strategy to not only act in synergy to cause massive apoptosis but also to overcome resistance to MEK inhibitors in NRAS mutant melanomaDoctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie)
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Vandeput, Marie. "Développement d’un dispositif en flux intégrant un générateur et un détecteur ampérométrique pour l’étude de composés pharmaceutiques et agro-alimentaires." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2018. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/268509.
Full textAbstract:
Ce travail décrit les performances d’un système d’analyse par injection dans un flux (FIA) qui comprend en bout de ligne une mini-cellule de détection de type « générateur-détecteur électrochimique (ECD) ». Cette mini-cellule, compacte et originale, a été développée au sein du laboratoire de Chimie analytique instrumentale et Bioélectrochimie. Plusieurs dispositifs en flux intégrant un « générateur » et un détecteur ampérométrique ont été évalués. Le composé à analyser subit dans la mini-cellule de détection une transformation au contact d’un générateur et le produit formé est détecté in situ. L’espèce produite au niveau du générateur, soit par voie enzymatique dans un réacteur avec une enzyme immobilisée (IMER), soit par voie électrochimique, doit être électroactive afin de pouvoir être détectée. La détection s’opère in situ, en aval, grâce à une électrode positionnée au proche contact du générateur. Cette thèse contribue au développement de méthodes analytiques simples et rapides utiles dans le domaine de la santé. Il démontre la versatilité de la technique FIA, avec ou sans immobilisation d’un biocomposé, pour l’étude de molécules pharmacologiquement actives.La première partie du travail est consacrée au criblage de molécules inhibitrices thérapeutiques. Dans ce contexte un nouveau dispositif FIA comprenant un IMER et une détection ampérométrique a été développé. L’IMER est constitué d’une enzyme immobilisée de manière covalente sur un disque d’or qui est positionné en amont de l’électrode de mesure. Deux systèmes enzymatiques ont été étudiés :(i) l’acétylcholinestérase (AChE) avec détection du produit enzymatique sur une électrode d’argent et, (ii) la tyrosinase (TYR) avec une détection du produit formé sur une électrode de carbone vitreux (GCE). L’AChE est une enzyme cible pour l’étude d’inhibiteurs d’intérêt dans le traitement de la maladie d’Alzheimer (MA), tandis que les inhibiteurs de la TYR sont utilisés pour le traitement de l’hyperpigmentation de la peau. Ces systèmes enzymatiques permettent non seulement de déterminer la force d’inhibition (IC50), mais aussi la cinétique de réactivation de l’enzyme après inhibition, ainsi que le mécanisme d’inhibition des inhibiteurs étudiés. Ces paramètres sont essentiels pour la recherche in vitro de nouvelles molécules inhibitrices prometteuses.La deuxième partie du travail est consacrée au développement d’un dispositif en mode FIA comprenant de manière intégrée un générateur électrochimique et un détecteur ampérométrique. Ce concept a été appliqué au dosage d’un additif alimentaire potentiellement à risque pour l’homme :l’éthoxyquine (EQ). Des résultats préliminaires par voltampérométrie cyclique (VC) et par microélectrolyse « off-line », suivie d’une chromatographie liquide (LC) couplée à la spectrométrie de masse (MS), ont permis de mettre en évidence la formation de l’éthoxyquine quinone imine (EQI) comme un des produits d’oxydation de l’EQ. Nous avons démontré la forte réactivité de l’EQI vis-à-vis de molécules biologiques à fonction thiol. Sur base de ces résultats, le dosage de l’EQ a été réalisé par FIA avec un support d’électrodes sérigraphiées doubles. Le potentiel de la première électrode a été sélectionné pour générer par voie électrochimique l’EQI qui est ensuite détectée par ampérométrie et de manière sélective au niveau de la seconde électrode. Ce dispositif a été appliqué avec succès au dosage de l’EQ dans du saumon alimentaire, avec une limite de détection (LOD) de 8,2 mg/kg de saumon.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Pharmacie)
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Berlier, Jessica. "Identification de facteurs favorisant la survie des cellules souches mésenchymateuses humaines carencées en sérum." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2016. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/235574.
Full textAbstract:
La thérapie cellulaire régénératrice permet de soigner un organe ou un tissu lésé par la transplantation de cellules saines isolées chez le patient ou un donneur sain. Les cellules transplantées se substitueront aux cellules défaillantes et régénéreront le tissu endommagé.Les cellules stromales mésenchymateuses (MSC) utilisées dans le cadre de la thérapie cellulaire sont amplifiées par culture ex vivo avant leur implantation chez le patient. Cette étape requiert la présence de facteurs de croissance généralement apportés par l’ajout de sérum, souvent d’origine animale (sérum fœtal bovin [FBS]), au milieu de culture. L’origine animale du FBS pose de nombreux problèmes de biosécurité. En effet, le risque de contamination du FBS par des virus et/ou des prions n’est pas négligeable et des anticorps dirigés contre les protéines animales ont été mis en évidence dans le sérum de certains patients transplantés. La mise au point de milieux de culture dépourvus de sérum mais préservant la viabilité et les fonctions des cellules représente dès lors un enjeu important.Au cours de ce travail, nous avons étudié les effets de la privation en sérum sur la viabilité de MSC isolées à partir de moelle osseuse humaine et des cellules SaOS-2, une lignée cellulaire ostéoblastique. Dans ces cellules, la carence en sérum inhibe les voies de signalisation MAPK ERK1/2, p38 MAPK ainsi que la voie de la PKB et favorise l’expression et l’activation des membres pro-apoptotiques de la famille des Bcl-2. In fine, elle conduit à l’activation des caspases-3/7 et à l’apoptose. Les MSC présentent toutefois une certaine tolérance à la privation en sérum.Nous avons ensuite évalué l’action de deux facteurs, le Glucose-dependent Insulinotropic Peptide (GIP) et l’adénosine triphosphate (ATP) sur les effets délétères et la mortalité induits par la carence en sérum. En effet, dans d’autres types cellulaires, le GIP et l’ATP exercent une action anti-apoptotique en réponse à différents stress cellulaires dont la privation en sérum.Après avoir vérifié la présence et la fonctionnalité du récepteur au GIP (GIPR) dans les MSC humaines ainsi que dans les cellules SaOS-2, nous avons montré que le GIP diminue de moitié la mortalité cellulaire et l’activation des caspases-3/7 observées dans les MSC carencées en sérum. L’utilisation de la forskoline et d’un inhibiteur spécifique de l’adénylate cyclase nous a permis de montrer que l’effet protecteur du GIP nécessite l’activation de la voie de l’adénylate cyclase et l’accumulation d’AMPc intracellulaire. Le GIP est cependant sans effet sur les voies de signalisation MAPK ERK1/2, p38 MAPK et PKB.L’expression des différents membres de la famille des récepteurs purinergiques avait déjà été documentée dans les MSC humaines. Nos résultats ont montré que l’ATP protège partiellement les MSC et les cellules SaOS-2 de la mort cellulaire provoquée par la culture en absence de sérum. De manière intéressante, nous avons observé que le nucléotide abolit l’activation des caspases-3/7. La présence d’ATP permet également de restaurer l’activité des MAPK ERK1/2 et p38 MAPK. Le nucléotide ne module pas la voie de signalisation de la PKB. Ensuite, nous avons confirmé l’implication des différentes voies de signalisation MAPK ERK1/2 et p38 MAPK grâce à l’utilisation de PD0325901, un inhibiteur des MEK1/2, et de SB203580, un inhibiteur de l’activité de la p38 MAPK. Ces deux inhibiteurs contrecarrent l’effet protecteur de l’ATP sur la viabilité des MSC. En outre, à l’instar du GIP, l’ATP entraine une augmentation de l’AMPc intracellulaire, probablement via l’activation du récepteur P2Y11. Cette accumulation d’AMPc participe à l’effet protecteur de l’ATP. L’ajout d’ATP dans le milieu de culture sans sérum module également l’expression des membres de la famille des Bcl-2 dont, notamment, mcl-1 qui code pour une protéine anti-apoptotique, et puma et bmf, deux gènes codant pour des protéines pro-apoptotiques. L’ATP inhibe l’activité de la protéine pro-apoptotique Bad en prévenant sa déphosphorylation.Enfin, nous avons montré que les MSC carencées en sérum libèrent de l’ATP dans le milieu extracellulaire à des concentrations 10 fois supérieures à celles mesurées dans des conditions de culture standards (10% FBS). Ceci pourrait représenter un mécanisme intrinsèque de protection contre la mort cellulaire. En conclusion, nous avons montré que le GIP et l’ATP protègent les MSC humaines et les cellules SaOS-2 de la mort cellulaire induite par la privation en sérum. Nous avons déterminé que la voie de l’adénylate cyclase-AMPc est impliquée dans cet effet protecteur. De même, l’ATP préserve l’activité des voies de signalisation MAPK ERK1/2 et p38 MAPK. Le facteur de transcription CREB pourrait être l’élément central de l’action protectrice du GIP et de l’ATP. Enfin, nos résultats suggèrent que, lorsqu’elles sont carencées en sérum, les MSC seraient capables d’activer un processus intrinsèque de survie via la libération de facteurs tels que l’ATP dans le milieu extracellulaire.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Gazzo, Andrea. "Beyond monogenic diseases: a first collection and analysis of digenic diseases." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2018. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/272617.
Full textAbstract:
In the next generation sequencing era many bioinformatics tools have been developed for assisting scientists in their studies on the molecular basis of genetic diseases, often with the aim of identifying the pathogenic variants. As a consequence, in the last decades more than one hundred new disease-gene associations have been discovered. Nevertheless, the genetic basis of many genetic diseases yet remains undisclosed. It has been shown that many diseases considered as monogenic with an imperfect genotype-phenotype correlation or incomplete penetrance are, on the contrary, caused or modulated by more than one mutated gene, meaning that they are in fact oligogenic. Current bioinformatics methods used for identifying pathogenic variants are trained and fine-tuned for identifying a single variant responsible of a disease. This monogenic-oriented approach cannot be used to explore the impact of combinations of variants in different genes on the complexity and genetic heterogeneity of rare diseases. Digenic diseases are the simplest form of oligogenic disease and thus they can provide a conceptual bridge between monogenic and the poorly understood polygenic diseases.The ambition of this thesis is to collect and analyse digenic data, introducing this topic in the bioinformatics field where digenic diseases are still an unexplored branch. This can be divided in two steps: the first consists in the creation of a central repository containing detailed information on digenic diseases; the second is an analysis of their peculiarities, using machine learning methods for studying subclasses of digenic effects.In the first step we developed DIDA (DIgenic diseases DAtabase), a novel database that provides for the first time a curated collection of genes and associated variants involved in digenic diseases. Detailed information related to the digenic mechanism have been manually mined from the medical literature. All instances in DIDA were also assigned to two sub classes of digenic effects, annotated as true digenic (both genes are required for developing the disease) and composite classes (one gene is sufficient to produce the disease phenotype, the second one alters it or change significantly the age of onset).In the second step, we hypothesized that the digenic effect may be related to some biological properties characterizing digenic combinations. Using machine learning methods, we show that a set of variant, gene and higher-level features can differentiate between the true digenic and composite classes with high accuracy. Moreover, we show that a digenic effect decision profile, extracted from the predictive model, motivates why an instance is assigned to either of the two classes.Together, our results show that digenic disease data generates novel insights, providing a glimpse into the oligogenic realm.Doctorat en Sciences
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Nguyen, Bastien. "Impact of reproductive history and pregnancy on breast cancer biology." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2018. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/278388.
Full textAbstract:
It is estimated that four in five women will give birth while one in eight women will be diagnosed with breast cancer at some point in her lifetime. It is also known that pregnancy at a young age is associated with a marked decrease in the risk of breast cancer and that this protection is different according to breast cancer subtypes. This thesis explores the impact of reproductive history on breast cancer biology and provides the molecular characterization of breast cancer diagnosed during pregnancy. The last part investigates the effect of RANKL inhibition on the biology of breast cancer in young women. In the first study, we investigated the impact of parity and age at first pregnancy on the clinicopathological features, the genomic and transcriptomic landscape, and the immune microenvironment of 313 breast cancers. For the first time, we highlighted a link between reproductive history and the genomic landscape of subsequent breast cancer. We demonstrated that, independently of clinicopathological features, age at first birth is associated with specific genomic alterations that could explain the differences in risk reduction associated with pregnancy according to breast cancer subtypes. This study represents a first step toward the recognition that reproductive factors matter in order to fully understand breast cancer biology and advocates that reproductive history should be routinely collected in future studies addressing the biology of breast cancer but also of other female cancers. The second study is focused on the molecular characterization of breast cancer diagnosed during pregnancy (BCP). We conducted a comparative analysis of a unique cohort of BCP patients and non-pregnant control patients by integrating gene expression, copy number alterations, and whole-genome sequencing data. We showed that BCP has unique molecular characteristics including an enrichment of non-silent mutations, a higher frequency of mutations in mucin gene family and an enrichment of mismatch repair deficiency mutational signature. This provides important insights into the biology of BCP and suggests that these features may be implicated in promoting tumor progression during pregnancy. In addition, it provides an unprecedented resource for further understanding of the biology of breast cancer in young women and how pregnancy could modulate tumor biology. In a previous study, the laboratory had reported up-regulation of RANKL in young and pregnant breast cancer patients. Therefore, in the last chapter, we investigated the biological effect of denosumab, a RANKL inhibitor, in a preoperative study including 27 young primary breast cancer patients. We demonstrated evidence that denosumab induces modulation of the tumor immune microenvironment with an increased level of tumor-infiltrating lymphocytes. This effect was likely due to upregulation of inflammatory cytokines and depletion of immunosuppressive regulatory T cells within the tumor microenvironment. These findings suggest a role for denosumab in reshaping the tumor immune microenvironment of breast cancer and that its use in combination could improve immunotherapy efficacy.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
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Martinez, Chanza Maria. "CYTOTOXIC AGENTS AND MOLECULAR TARGETED THERAPIES IN GENITOURINARY TRACT TUMORS." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2021. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/323785.
Full textAbstract:
Les agents cytotoxiques et les thérapies moléculaires ciblées sont l’un des piliers du traitement des patients atteints de tumeurs génito-urinaires. Cependant, il existe de nombreuses situations médicales pour lesquelles l’on manque d’options thérapeutiques standards dans la pratique clinique. Ce travail de recherche clinique vise à identifier et comprendre de telles situations ainsi qu'à essayer d'améliorer les résultats cliniques de ces sous-groupes de patients. Afin d'atteindre cet objectif, différents projets cliniques ont été développés.La première partie de cette thèse est consacrée à l'évaluation de l'efficacité et de l'innocuité du cabozantinib, un puissant multi-inhibiteur de la tyrosine kinase approuvé dans le carcinome rénal avancé, ceci dans deux entités cliniques associes aux besoins médicaux non satisfaits :les patients avec un diagnostic de carcinome rénal pas à cellules claires métastatique et les patients avec un cancer du rein et métastases cérébrales.La deuxième partie de la thèse est consacrée au cancer de la vessie musculo invasif non métastatique pour lequel un traitement néoadjuvant et une résection chirurgicale sont recommandés. Nos projets évaluent les facteurs prédictifs potentiels de réponse à la chimiothérapie néoadjuvant standard à base de platine, l'efficacité et l'innocuité de l'ajout d'un agent immunothérapeutique à la chimiothérapie néoadjuvante ainsi que le rôle de l’ajout d’une chimiothérapie adjuvante chez les patients présentant une maladie résiduelle malgré une chimiothérapie néoadjuvante.Doctorat en Sciences médicales (Médecine)
info:eu-repo/semantics/nonPublished