Dissertations / Theses: 'Sensibilisation de lymphocytes T in vitro'

1

Garrigue, Jean-Luc. "Méthodes alternatives et sensibilisation cutanée : développement d'un modèle murin d'eczéma de contact aux haptènes forts et faibles in vivo et in vitro." Lyon 1, 1994. http://www.theses.fr/1994LYO1T102.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

2

Huppert, Cécile. "Développement d’un modèle de coculture cellules dendritiques lymphocytes T pour l’évaluation du danger des substances sensibilisantes." Thesis, Université de Lorraine, 2018. http://www.theses.fr/2018LORR0195/document.

Full text

Abstract:

Les allergies représentent un problème majeur dans le domaine des maladies professionnelles et ont un impact sérieux sur la vie des travailleurs. Les allergies professionnelles sont principalement cutanées et respiratoires ; elles peuvent être causées par des produits chimiques de bas poids moléculaire. Dans le passé, les tests destinés à identifier les produits susceptibles d’entraîner des allergies étaient réalisés sur l’animal. Or, la législation européenne engage à limiter le recours à l’expérimentation animale pour évaluer le pouvoir sensibilisant des substances chimiques, incitant à développer des tests in vitro de substitution. C’est dans ce contexte que nous avons cherché à développer des modèles de cultures cellulaires destinés à identifier les substances sensibilisantes. Un premier modèle utilisant des cellules dendritiques dérivées de moelle osseuse (BMDC) de souris BALB/c a été développé et a donné des résultats prometteurs pour l’identification des produits sensibilisants et leur catégorisation selon leur puissance sensibilisante. De plus, la voie de signalisation Nrf2/Keap1 semble être impliquée dans la réponse de ce modèle cellulaire aux sensibilisants. Dans le but de compléter ce modèle et d’évaluer la capacité des BMDC à activer les lymphocytes T (LT), un modèle de coculture de BMDC et LT a été mis au point avec un sensibilisant de référence avant d’être testé sur un ensemble de produits de référence (sensibilisants cutanés et respiratoires, irritants et non sensibilisants). Les BMDC de notre modèle, exposées à des sensibilisants, se sont révélées capables d’activer les LT en coculture. Enfin, des essais préliminaires utilisant des cellules de souris de souche C57BL6/J dans notre modèle de coculture ont donné des résultats comparables à ceux obtenus avec des cellules issues de la souche BALB/c. Les modèles de cultures cellulaires BMDC et de coculture BMDC-LT sont prometteurs dans le cadre du développement de méthodes de substitution à l’expérimentation animale pour l’évaluation du pouvoir sensibilisant de substances chimiques
Allergies constitute an important issue in the field of occupational health and have a serious impact on the lives of workers. Occupational allergies are mainly contact and respiratory allergies and can be caused by low molecular weight chemicals. In the past, the tests that were used to identify the potential allergens were carried out on animals. However, European legislation has provided the impetus for reducing the use of animal testing to assess the sensitization potential of chemicals and promoted the development of alternative in vitro tests. In this context, we aimed to develop cell culture models to identify sensitizers. A first model using bone marrow derived dendritic cells (BMDC) from BALB/c mice was developed and showed promising results for identifying sensitizers and classify them according to their allergenic potency. Moreover, the Nrf2/Keap1 pathway seems to be involved in the response of this cell model to sensitizers. In order to supplement this model and to assess the functionality of BMDC, a BMDC-T cell (TC) coculture model was developed with a reference sensitizer before being tested on a range of reference sensitizers (cutaneous and respiratory sensitizers, irritants and non-sensitizers). The BMDC of our model, while exposed to sensitizers, were able to activate TC in coculture. Finally, preliminary tests using the cells of C57BL6/J mice in our coculture model showed that similar results to those obtained with cells from the BALB/c strain. The models of BMDC cultures and BMDC-TC coculture are promising for the development of alternative methods to animal experimentation assessing the sensitizing potential of chemicals

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

3

Conche, Claire. "Mécanismes Moléculaires impliqués dans la sensibilisation des lymphocytes T par l'adhérence." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077092.

Full text

Abstract:

Les lymphocytes T constituent des acteurs importants du système immunitaire qui nous défend contre les pathogènes et les cancers. Les lymphocytes T naïfs oscillent au sein de l'organisme entre un état de cellule en suspension dans la circulation et un état de cellule adhérente à l'intérieur des organes lymphoïdes, lieu de rencontre avec les cellules dendritiques (DC). La multiplication des contacts T/DC met les lymphocytes T dans un état de réactivité optimale. L'augmentation de réactivité, appelé sensibilisation des lymphocytes T par l'adhérence, découverte dans l'équipe, se traduit par une amplification de la réponse calcique à une stimulation du TCR. L'objectif de cette étude a été de déterminer les mécanismes moléculaires permettant cette sensibilisation. Nous avons montré que l'adhésion sur de la fibronectine ou sur une DC induisait une augmentation transitoire d'AMPc dans le lymphocyte T et que celle-ci joue un rôle clé dans l'AITCP. Ce résultat est très surprenant car une augmentation soutenue d'AMPc est connue pour avoir un effet inhibiteur. L'effet potentialisateur du transitoire d'AMPc passe par une activation indirecte de la kinase ERK via l'inhibition de la phosphatase HePTP. Une deuxième partie de l'étude démontre que l'l'adhérence induit une augmentation de PIP2 et que celle-ci est la conséquence d'une part de l'activation de la PIP5K et d'autre part de l'inhibition des phospholipases PLCp. De plus, l'inhibition des PLCp est responsable de l'augmentation des réserves calciques induite par l'adhérence. Le rôle exact du PIP2 dans l'AITCP est encore à l'étude
T cells are major effector of immune System that defend us against pathogens and cancer. Naive T cells navigate from blood and lymph vessels where they are in suspension, to lymph node where they are adherent and encounter dendritics cells (DC). The multiplicity of the T/DC contacts decreases the threshold of T celKactivation. This phenomenon called adhesion-induced T cell priming (AITCP) was discovered in the team. AITCP is associated with a larger calcium response to TCR-stimulation in adherent cells. The aim of the work presented here, was to investigate molecular mechanisms involved in this priming. We demonstrated that adhesion on fibronectin or DC induces a transient cAMP increase which is crucial for AITCP. The fînding was unexpected as a sustained cAMP rise is well known for its inhibitory effect on T cell activation. The priming effect of cAMP was due to an indirect activation of ERK after HePTP phosphatase inhibition. The second part of this work is focused on the PIP2 increase upon adhesion. We showed that PIP2 increase resulted from an activation of PIP5K that produces PIP2 and from an inhibition of PLCp that hydrolyses the PIP2. PLCp inhibition leads to an increase of calcium stores content. The exact functions of in AITCP are still under investigation

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

4

Luo, Xuan. "In vitro quantitative study of T cell adhesive haptotaxis." Thesis, Aix-Marseille, 2019. http://www.theses.fr/2019AIXM0151/document.

Full text

Abstract:

Une réponse immunitaire efficace repose sur un recrutement rapide de leucocytes du sang au tissu enflammé ou endommagé. Pendant ce processus, les leucocytes sont capturés par l'endothélium et migrent le long de la paroi pour atteindre les sites de transmigration. Ces processus sont médiés par des signaux externes parmi lesquels le rôle des molécules d’adhésion reste flou. L’haptotaxie adhésive a été décrite pour les cellules mésenchymateuses qui s’orientent via un mécanisme de tir à la corde - une compétition entre les bords adhérents des cellules. Pour les cellules amiboïdes, l'existence d'une haptotaxie adhésif n'a jamais été observée. Ici, nous avons étudié la migration des lymphocytes T humains sur des substrats dont l’adhérence est spatialement modulée et avons observé une haptotaxie robuste. Mécanistiquement, nous montrons que l'haptotaxie adhésive diffère à la fois de la chimiotaxie, car aucune mécanotransduction n'a été détectée, et du mécanisme de tir à la corde passif, car différentes intégrines induisent des phénotypes opposés. Les cellules ont favorisé des zones plus adhérentes avec VLA-4 et, contre-intuitivement, des zones moins adhérentes avec LFA-1. Ces résultats révèlent que les intégrines contrôlent les comportements différentiels d'haptotaxie adhésive sans mécanotransduction. Nous avons également étudié le mécanisme à l'origine de ce phénotype induit par LFA-1 et avons découvert que la dynamique du lamellipode plutôt que le niveau d'expression de l'intégrine, était impliquée. Les résultats préliminaires avec des lymphocytes T déficients en VASP indiquent également que la protéine VASP pourrait jouer un rôle important dans l'haptotaxie adhésive
An efficient immune response relies on a rapid recruitment of leukocytes from blood to the inflamed or damaged tissue. During this process, leukocytes are captured by the endothelium and migrate along the vessel wall to reach permissive transmigration sites. These processes are mediated by multiple external cues among which the role of adhesion molecules remains unclear. Adhesive haptotaxis has been described for mesenchymal cells that develop strong pulling forces with their substrates and orient via a tug of war mechanism – a competition between cells’ adherent pulling edges. In the case of amoeboid cells that migrate with minimal interaction with their substrate, the existence of adhesive haptotaxis has yet to be evidenced. Here, we studied the crawling of human T lymphocytes on substrates with spatially modulated adhesion. and observed robust adhesive haptotaxis. Mechanistically, we show that integrin-mediated adhesive haptotaxis of lymphocytes differs both from active chemotaxis, because no mechanotransduction was detected, and from the passive tug of war mechanism, because different integrins support opposite phenotypes. Cells favored more adherent zones with VLA-4 and, counterintuitively, less adherent zones with LFA-1. These results reveal that integrins control differential adhesive haptotaxis behaviors without mechanotransduction. We further investigated the mechanism behind this specific haptotactic phenotype mediated by LFA-1 and find that the lamellipodial dynamics, rather than the integrin expression level, is involved. Preliminary findings with VASP deficient T cells indicate also that VASP protein may play an important role in T cell adhesive haptotaxis

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

5

Renard, Nathalie. "Étude in vitro du rôle des lymphocytes T sur la lymphopoïèse B humaine." Lyon 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LYO1T008.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

6

Serre, Karine. "Présentation d'antigènes exogènes par les cellules dendritiques, aux lymphocytes T CD4 et aux lymphocytes T CD8, in vitro et in vivo." Aix-Marseille 2, 2002. http://www.theses.fr/2002AIX22003.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

7

Montpellier, Claire. "Transformation in vitro de lymphocytes t humains par le virus d'epstein barr." Paris 6, 1997. http://www.theses.fr/1997PA066141.

Full text

Abstract:

Nous avons montre pour la premiere fois qu'il etait possible de transformer des cellules t peripheriques in vitro par le virus d'epstein-barr ou ebv. Les lignees cellulaires obtenues ont un phenotype de cellules t naives et, bien qu'elles ne produisent pas de cytokines a l'etat constitutif, elles secretent de l'il-2 en reponse a differents mitogenes. Dans ces cellules, seuls les genes ebna1 et lmp1 sont exprimes a partir du genome viral sous forme episomique circulaire. L'etude plus poussee d'une de ces lignees t, la lignee nc5, et des cellules issues d'une tumeur solide induite apres injection de cette lignee a une souris immunodeprimee rag2, les cellules tc, a mis en evidence le caractere clonal des nc5 et des tc. Une etude cytogenetique des clones nc5 et tc a montre dans ces deux types cellulaires deux translocations (t(2;15)(p22;q21) et t(9;12)(q12;p23)) et une deletion (en 10q24). L'etude de l'expression d'un certain nombre de genes connus pour etre la cible d'evenements d'activation cellulaire t ou dependante d'ebv a permis de mettre en evidence une expression de bcl-x#l et du gene de la thioredoxine dans les nc5 et les tc. Enfin, l'analyse de l'activation de complexes transcriptionnels specifiques des cellules t ou connus pour etre actives par ebv (nf-kappab, stat a montre qu'aucun de ces deux types de complexes n'est active de facon constitutive dans les nc5 et les tc alors que la voie nf-kappab est toujours inductible dans ces cellules et est bien activee dans les cellules b du meme donneur transformees par ebv. Ce resultat montre pour la premiere fois un decouplage entre l'expression de l'oncogene viral lmp1 et l'activation du complexe transcriptionnel nf-kappab.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

8

Woods, Margaret Annaliese. "Molecular mechanisms of action of therapeutic monoclonal antibodies on T lymphocytes in vitro." Thesis, University of Cambridge, 1997. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.627301.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

9

Cognot, Chantal. "Structures particulières engendrant des lymphocytes T cytotoxiques : étude de la réponse primaire in vitro." Montpellier 1, 1986. http://www.theses.fr/1986MON13511.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

10

Liamin, Marie. "Exposition in vitro de lymphocytes T humains aux hydrocarbures aromatiques polycycliques : étude des effets immunotoxiques." Thesis, Rennes 1, 2017. http://www.theses.fr/2017REN1B060/document.

Full text

Abstract:

Les hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAPs), tels que le benzo(a)pyrène (B[a]P), sont des contaminants environnementaux ubiquistes générés lors de la combustion de matière organique. Ces composés ont été associés au développement d'effets toxiques sur la santé humaine, notamment des effets cancérigènes et immunotoxiques, principalement liés à l'activation du récepteur aux hydrocarbures aromatiques (RAh). Parmi les cellules du système immunitaire, les lymphocytes T apparaissent comme des cibles majeures des HAPs. Des résultats antérieurs, obtenus au laboratoire, ont montré que l'activation des lymphocytes T humains en culture primaire conduit à l’augmentation de l'expression et de la fonction du RAh, suggérant la capacité accrue de ces cellules à répondre à une exposition aux HAPs. Nos objectifs sont : (1) de déterminer les effets du B[a]P sur les profils d'expression génique dans les lymphocytes humains normaux en utilisant des approches à haut débit telle que l'analyse transcriptomique sur puce à ADN, (2) d’évaluer les effets génotoxiques et immunotoxiques du B[a]P en mesurant respectivement les dommages à l'ADN induits et leurs actions immunosuppressives et (3) d’analyser la modulation de ces effets en présence d'autres HAPs. Notre travail identifie les lymphocytes T humains normaux comme un bon modèle pour étudier les effets génotoxiques et immunotoxiques des HAPs, et pour prédire les problèmes de santé humaine liés à l’exposition à ces contaminants. Il permet également de mieux comprendre la régulation par les HAPs de la réponse immune et propose de nouveaux biomarqueurs potentiels de l'exposition à ces contaminants environnementaux
Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), such as benzo(a)pyrene (B[a]P), are ubiquitous environmental contaminants generated during organic matter combustion. These compounds have been associated with the development of toxic effects on human health, including carcinogenic and immunotoxic effects, mainly related to Aryl hydrocarbon Receptor (AhR) activation. Among the immune system cells, T lymphocytes appear as major targets of PAHs. Previous results, obtained in the laboratory, have shown that activation of primary human T lymphocytes leads to a functional AhR expression increase, suggesting their ability to respond to PAH exposure. Our specific aims are: (1) to determine the effects of B[a]P on gene expression profiles in human normal lymphocytes by using large-scale approaches such as microarray-based transcriptome analysis, (2) to monitor the genotoxic and immunotoxic effects of B[a]P by measuring DNA damage and immunosuppressive actions, respectively and, (3) to analyze the modulation of these effects by the presence of other PAHs. Our work propose primary cultures of activated human T lymphocytes as a good model for studying both genotoxic and immunotoxic effects of environmental contaminants such as PAHs and predicting human health issues. It also gains a comprehensive insight into the immune response regulation after PAH exposure and provides potential new biomarkers of exposure to these environmental contaminants

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

11

Labalette, Myriam. "La dynamique des lymphocytes T CD8+ humains du compartiment lymphocytaire périphérique : de l'in-vivo, l'infection à cytomégalovirus chez les receveurs d'organes, à l'in-vitro, la différenciation des cellules T CD8+CD28+ nai͏̈ves." Lille 2, 2000. http://www.theses.fr/2000LIL2MT12.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

12

Denépoux, Stéphane. "Induction de mutations somatiques des gènes d'immunoglobuline dans les lymphocytes B humain in vitro." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T045.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

13

Mainou-Fowler, T. "The importannce of transferin-bound iron for the proliferation of mouse T-lymphocytes in vitro." Thesis, University of Glasgow, 1985. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.379295.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

14

Bonnamain, Virginie. "Interactions cellules souches/progénitrices neurales – lymphocytes T : étude in vitro et perspectives pour la transplantation." Nantes, 2009. http://www.theses.fr/2009NANT36VS.

Full text

Abstract:

Malgré son statut immunologique particulier, le système nerveux central (SNC) entretient une communication bidirectionnelle étroite avec le système immunitaire. Ce paramètre doit donc être pris en compte pour optimiser les stratégies thérapeutiques restauratrices du SNC. En effet, en l'absence de traitement immunosuppresseur, les xénogreffes de cellules neurales porcines dans le SNC sont systématiquement rejetées, ce rejet étant principalement médié par les lymphocytes T (LT). Dans ce contexte, les cellules souches/progénitrices neurales (CSPN) décrites comme ayant une immunogénicité réduite et un pouvoir suppresseur de la réponse cellulaire T, pourraient être une alternative intéressante à la greffe de neuroblastes fœtaux. La survie prolongée du greffon et la faible infiltration lymphocytaire T après xénogreffe de CSPN dans le cerveau de rat en l’absence d'immunosuppression nous ont conduit à étudier les interactions in vitro entre les CSPN et les LT. Nous avons montré, par des expériences de co-culture, que les CSPN de porc et de rat inhibent la prolifération des LT de rat, par la libération de facteurs solubles. Les mécanismes à la base de l’effet immunorégulateur des CSPN porcines restent à déterminer, mais nos analyses ont clairement mis en évidence un rôle de l'hème oxygénase 1 (HO-1) dans l'activité suppressive des CSPN de rat. Nous avons également montré que l’interleukine-2 (IL-2), une cytokine proinflammatoire sécrétée par les LT activés, oriente le devenir des CSPN de rat vers un phénotype neuronal, in vitro. Ces résultats confirment l'importance de la communication entre le SNC et le système immunitaire et soulignent l'intérêt des CSPN en transplantation
Despite its status of immune privileged organ, the central nervous system (CNS) maintains a close bidirectional communication with the immune system. This parameter must be taken into account to optimize the therapeutic strategies aiming at restoring the neuronal loss in case of lesions or degenerative diseases in the CNS. Indeed, in the absence of immunosuppression, pig neural cells xenografted into the CNS are systematically rejected, this rejection being primarily mediated by T lymphocytes (TL). In this context, neural stem/progenitor cells (NSPC) described as having reduced immunogenicity and a potent suppressive effect on T cell responses appear as a suitable alternative cell source to fetal neuroblasts. The prolonged survival of xenografts and the low T cell infiltration following the transplantation of NSPC in the brain of non-immunosuppressed rats prompted us to study the in vitro interactions between NSPC and TL. We showed by co-culture experiments that pig and rat NSPC inhibit the proliferation of rat TL through the release of soluble factors. The mechanisms triggering the immunoregulatory effects of porcine NSPC remain to be determined, but we clearly demonstrated a role for the heme oxygenase 1 (HO-1) in the suppressive activity of rat NSPC. Interestingly, we also found that Interleukin-2 (IL-2), a proinflammatory cytokine secreted by activated TL, directs the in vitro fate of NSPC rat towards a neuronal phenotype. These results confirm the bidirectional communication between the CNS and the immune system, and highlight the interest of NSPC for cell transplantation

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

15

Lehtimaki, Mari. "Staphylococcus aureus as a source of antigens stimulating bovine dendritic cells and lymphocytes in vitro." Diss., Virginia Tech, 2017. http://hdl.handle.net/10919/75153.

Full text

Abstract:

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a gram-positive bacterium that causes mastitis in bovines and leads to financial losses to the dairy industry. Although antibody response plays a role in immune defense against S. aureus, cellular responses are of interest for vaccine development. A vaccine that stimulates both antibody and cellular responses could promote memory cell formation and provide effective protection against S. aureus. The superantigens and virulence factors secreted by live S. aureus (LSA) can interfere with immune responses and memory cell formation. Because irradiation reduces the metabolic activity and secretion of proteins, including S. aureus superantigens and hemolysins, we hypothesized the irradiated S. aureus (ISA) could drive immune cell responses. Dendritic cells (DC) were co-cultured with lymphocytes to study the cellular responses to ISA and LSA. Dendritic cells present antigens and polarize lymphocytes into different helper T (Th) cell types that drive cellular immune responses. The DC loaded with either ISA or LSA induced increased mRNA transcription of Th17-related cytokines and cytotoxic effector memory cell formation during antigen recall experiments. Lymphocytes co-cultured with LSA-loaded DC exhibited a higher fold-change in interferon (IFN) γ mRNA compared to ISA-loaded DC, suggesting the secreted antigens and the metabolic activity of S. aureus play a role in Th1 polarization. Th1 polarization can drive excessive inflammation and suppress beneficial Th17 responses. Bovine DC were stimulated with a mutant α-toxin deletion S. aureus strain to evaluate if α-toxin-mediated NOD2 receptor signaling activates Th1 polarization in response to S. aureus, which revealed that NOD2 mRNA transcription in DC was independent of α-toxin and that the deletion of α-toxin had no effect on the transcription of the cytokine IL-12 or the production of IFNγ by lymphocytes, events that drive Th1 polarization, in co-cultures. The deletion of accessory gene regulator (agr), which controls α-toxin production, reduced IFNγ production in lymphocytes co-cultured with the S. aureus-loaded DC, indicating that agr controlled the ability of S. aureus antigens to drive the Th1 polarization of lymphocytes. Overall, this thesis demonstrates that ISA is a promising source of antigens that stimulate memory cells formation and Th17 polarization in bovine immune cells. The reduced Th1 cytokine response to S. aureus was not dependent on α-toxin, but other virulence factors controlled by agr should be screened to determine the source of Th1 stimulation.
Ph. D.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

16

Gabert, Jean. "Analyse par transfert génétique et mutagénèse in vitro des relations fonctionnelles existant entre le récepteur pour l'antigène des lymphocytes et la molécule CD8." Aix-Marseille 2, 1988. http://www.theses.fr/1988AIX22017.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

17

Moulon, Corinne. "Modèle in vitro d'hypersensibilité de contact : activation de lymphocytes T humains par des cellules de Langerhans couplées à un haptène." Lyon 1, 1993. http://www.theses.fr/1993LYO1T257.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

18

Massinga, Loembé Marguerite. "La lymphocytose polyclonale chronique B, étude in vitro des propriétés biologiques des lymphocytes T et B." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1999. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk1/tape7/PQDD_0012/MQ41959.pdf.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

19

Khalil, Georges. "Etude des cytokines exprimées, après stimulation in vitro par amoxicilline, par des lymphocytes T humains sensibilisés." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077134.

Full text

Abstract:

Depuis que les firmes pharmaceutiques ont arrêté la production des déterminants pénicilliniques, l'utilisation des tests cutanés comme méthode de diagnostic est devenue moins standardisée. De plus, les tests cutanés peuvent parfois exposer le malade au risque d'une allergie sévère. Les tests de transformation lymphocytaire (TTL) pour le diagnostic d'une allergie aux pénicillines se basent sur l'utilisation des éléments radioactifs et présentent une sensibilité insuffisante. Le but de notre étude est d'établir une méthode de laboratoire fiable pour le diagnostic des allergies aux pénicillines et qui soit simple et sans danger pour le patient. L'étude a inclus 18 sujets allergiques à l'amoxicilline et 11 témoins. Suite à un prélèvement sanguin, les cellules mononucléaires périphériques sanguines (PBMC) sont isolées par la méthode Ficoll-Hypaque. Les cellules ainsi obtenues sont alors stimulées in vitro avec de l'amoxicilline libre à la concentration de Img/ml. La stimulation par la Phytohemaglutinnine A (PHA) est utilisée pour un contrôle ^positif. Les cytokines IL-2, IL-5 et IFN- y, sécrétées dans le surnageant des cultures lymphocytaires, sont dosées par la méthode ELISA. L'expression au niveau de la transcription des gènes de certaines cytokines (IL- 2, 4, 5, 13, TGF-J3, TNF- a et l'INF- y) est étudiée par RT-PCR. La technique ELISPOT est utilisée pour la détection de ITNF- y seulement. Pour toutes les techniques employées, l'étude des cytokines exprimées en réponse à la stimulation est faite aux 2eme et 5eme jours. À ce jour, notre étude contient le plus grand nombre de patients et de sujets contrôles, en comparaison avec d'autres études publiées qui ont utilisé la méthode ELISA pour le diagnostic de l'allergie à la pénicilline. La comparaison entre patients et témoins a porté sur les valeurs A qui représentent la différence des concentrations des cytokines après et avant stimulation par amoxicilline. Les tests statistiques t de Student et de Mann-Whitney Rank sont utilisés. Les méthodes RT-PCR et ELISPOT n'ont pas été concluantes. Par contre, l'étude par ELISA des différentes cytokines dans le surnageant des cultures lymphocytaires est la méthode la plus sensible et la plus spécifique (respectivement 80% et 100%). L'ensemble des résultats montre clairement que le dosage des cytokines par ELISA, après stimulation in vitro de lymphocytes humains sensibilisés, reste un excellent moyen diagnostic sans aucun danger pour le malade. Outre le fait que les kits ELISA sont disponibles sur le marché, cette méthode peut être réalisée dans de nombreux laboratoires sans avoir recours à un équipement très spécialisé
Since the withdrawal of penicillin determinants from the market, in addition to the hazard of re-exposing the patient to the drug, skin testing for the diagnosis of penicillin allergy has become less accurate and less standardized. The assay currently used, the lymphocyte transformation test (LTT), lacks sufficient sensitivity, and requires the use of radioactive material. The objective of this study was to establish an accessible and reliable method for the safe diagnosis of penicillin allergy. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from 18 patients who were allergic to penicillin and 12 control subjects using the Ficoll-Hypaque method. The isolated, sensitized cells were stimulated in vitro with amoxicillin (1 mg/mL). Stimulation with phytohemagglutinin A (PHA) was used as the positive control. Transcriptional expression of specific cytokines (IL-2, -4, -5 and -13, TGF-p, TNF-a and IFN-y) was assessed by RT-PCR. IFN-c expression was also evaluated by ELISPOT. Secreted levels of IL-2, -5 and IFN- y were measured by ELISA. All of these assays were performed two or five days, post-stimulation. This study of the in vitro diagnosis of penicillin allergy by the measurement of cytokine concentration in the supernatants of sensitized lymphocytes cultures involved the largest number of patients to-date. The A values (difference in cytokine concentration in the supernatants before and after stimulation) were compared between cases and controls using different statistical tests (Student's t test and the Mann-Whitney rank test). Of the various tests performed in this study, measurement of secreted cytokines using ELISA was the most sensitive and specific (80% and 100% respectively). In vitro stimulation of human lymphocytes sensitized to amoxicillin is a safe and useful test for the diagnosis of penicillin allergy if the ELISA is used to measure cytokine expression. The advantages are that it can be performed by many laboratories since kits to determine cytokines are widely available, and it can be done without the need for particularly specialized equipment

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

20

Guérard, Simon. "Kératinocytes : cellules instigatrices de l'inflammation dans le psoriasis : étude sur la capacité des kératinocytes psoriasiques à activer in vitro les lymphocytes T et les neutrophiles." Master's thesis, Université Laval, 2011. http://hdl.handle.net/20.500.11794/23652.

Full text

Abstract:

Le rôle primordial des cellules de la peau dans la réponse immunitaire est désormais bien établi. Cependant, pourraient-elles également être responsables de l'activation du système immunitaire observée dans le psoriasis, une maladie inflammatoire chronique de la peau? Cette étude vise à comprendre la capacité des kératinocytes psoriasiques à activer in vitro les leucocytes. Le profil de sécrétion de lymphocytes sains co-cultivés avec des kératinocytes (sains ou psoriasiques) a été évalué pour 22 analytes. Les taux élevés de diverses cytokines dans les cultures avec kératinocytes psoriasiques démontrent leur capacité à induire une sécrétion de médiateurs pro-inflammatoires. Les cytokines surexprimées suggèrent également un potentiel d'activation des neutrophiles. L'altération in vitro de plusieurs fonctions des neutrophiles (survie, adhérence cellulaire et production d'anion superoxyde) par les kératinocytes a permis de confirmer ce potentiel. En conclusion, cette étude présente le kératinocyte psoriasique comme étant un instigateur probable de l'inflammation dans la pathogenèse de cette maladie.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

21

Bernardeau, Karine. "Caractérisation de la réponse T cytotoxique à l'aide d'anticorps spécifiques de complexes HLA-A2/Mage3 de tumeur et ciblage des cellules cancéreuses en radioimmunothérapie alpha in vitro." Nantes, 2005. http://www.theses.fr/2005NANT26VS.

Full text

Abstract:

Les lymphocytes T de patients atteints de cancers sont capables de reconnaître les cellules tumorales et de les détruire lorsqu'ils sont stimulés de façon appropriée. Une activité importante de recherche vise à établir les conditions optimales de cette activation et à caractériser les complexes CMH/peptides reconnus. Parmi ces complexes, ceux issus de la famille des " cancer testis antigenes " ont une expression strictement restreinte aux cellules tumorales. Nous avons isolé des anticorps monoclonaux de souris dirigés contre le complexe HLA-A2/Mage3. Ces anticorps nous ont permis de mesurer les densités de complexes exprimées à la surface des cellules, permettant de définir le nombre d'antigènes nécessaires à la réponse cytotoxique de lymphocytes T CD8 spécifiques. D'autre part nous avons évalué la possibilité de cibler ces complexes en radioimmunothérapie à l'aide de radio émetteur alpha dont le fort potentiel radiotoxique permet de compenser la faible expression de surface des complexes CMH/peptide
When stimulated appropriately, the T lymphocytes of cancer patients are able to recognise and destroy tumor cells. A major goal of research in this field is to establish optimal conditions for this T cell response and to characterise the MHC/peptide complexes recognised. Among these complexes, those derived from the family of cancer testis antigens have an expression that is restricted to tumoral cells. We have identified murine monoclonal antibodies directed against the HLA-A2/Mage3 complex. Using these antibodies, we have been able to measure the density of complexes expressed at the cell surface, thus enabling definition of the number of antigens necessary to initiate a cytotoxic response by specific CD8 T lymphocytes. We have additionally evaluated the possibility of targeting these complexes by radioimmunotherapy using an alpha radio emitter whose powerful radiotoxic potential compensates the weak surface expression of MHC/peptide complexes

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

22

Saadawi, Ahmed Majed. "La transformation in vitro des lymphocytes T humains par Herpes virus sai͏̈miri (HVS): une source permanente pour l'étude des sous-populations T." Toulouse 3, 1997. http://www.theses.fr/1997TOU30099.

Full text

Abstract:

Herpesvirus saimiri (hvs) est capable de transformer efficacement les cellules t humaines in vitro en croissance permanente. Les cellules t transformees conservent les proprietes essentielles des lymphocytes t normaux y compris la specificite antigenique. Dans ce travail des lignees t transformees exprimant cd4#+ ou cd8#+ ont ete etablies apres infection de cellules mononucleees du sang peripherique ou de lignees t de donneurs sains. Les cellules t peuvent egalement etre transformees par hvs. Une clone t exprimant le tcr a ete transforme et maintenu en culture continue pendant 9 mois. La presence de l'adn episomal d'hvs dans les cellules t transformees a ete mise en evidence par la technique d'hybridation in situ. Des particules virales infectieuses ne sont pas relargees dans le surnageant de culture. Nous avons montre que les cellules t extraites de membranes synoviales de malades atteints de polyarthrite rhumatoide (pr) peuvent etre transformees. Quatre lignees t rhumatoides transformees ont ete comparees a leurs progeniteurs pour la presence des clones dominants impliques dans la pr. La distribution des differentes familles v peut etre modifiee plusieurs mois apres transformation, tout en conservant la presence des clones dominants. Des cellules cd8#+ cd57#+ provenant d'un malade apres une greffe de moelle allogenique ont ete pour la premiere fois transformees. Des lignees t transformees ont ete utilisees pour etudier l'effet de ldl oxyde sur l'activation lymphocytaire t afin d'expliquer certains mecanismes immunopathologiques de l'atherosclerose.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

23

Mesri, Mehdi. "T lymphocytes-blood retina barrier cells interactions in vitro : the role of adhesion molecules and inflammatory mediators." Thesis, University of Aberdeen, 1995. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.320782.

Full text

Abstract:

The BRB consists of both capillary endothelial cells (REC) and retinal pigment epithelial cells (RPE). Both cell types have been suggested as potential activators of circulating T cells. In this study, an in vitro model using cultured rat REC and syngeneic T cells was developed. Furthermore RPE and for the purpose of comparative studies, AEC were also successfully cultured. It was demonstrated that activation of T lymphocyte LFA-1 is a critical event governing the adhesion of T cells to RPE and REC as IFN-γ induced up-regulation of RPE and REC ICAM-1 expression did not increase binding of resting T lymphocytes. The enhanced adhesion of activated lymphocytes (but not resting lymphocytes) to normal and IFN-γ treated RPE and REC was inhibited by LFA-1 mAb and to a lesser extent by ICAM-1 mAb but not OX34 (CD2). Treatment of lymphocytes with the anti-VLA-4 mAb resulted in differential effects on binding to AEC and REC. MAb to VLA-4 significantly blocked enhanced adhesion of activated T cells to AEC but not to REC. The results also demonstrated that VLA-4 mAb significantly inhibited unactivated T cell binding to IFNγ+TNFα+LPS stimulated AEC but not REC, suggesting that VLA-4 may also function in an activation-independent manner. It was shown that activation of T cells can enhance their migratory activity across cultured REC monolayers. Migration was decreased by both adhesion receptor-dependent mechanisms i.e., mAb to LFA-1 (but not ICAM-1) and adhesion receptor-independent mechanisms by means of PGE₂. The results of this thesis have shown that activation of LFA-1 is required for functioning of the LFA-1/ICAM-1-mediated lymphocyte adhesion and migration. In addition to the role of adhesion molecules, inflammatory mediator PGE₂, but not NO^o, was found to be important in regulation of T cell adhesion and migration across REC.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

24

Durrieu, Christèle. "Activité immunomodulatrice d'extraits hydrosolubles de fromages affinés de la région Rhône-Alpes : développement d'une méthodologie et évaluation in vitro." Lyon 1, 2005. http://www.theses.fr/2005LYO10171.

Full text

Abstract:

L'activité immunomodulatrice d'extraits hydrosolubles de 4 fromages affinés à pâte pressée (Emmental, Beaufort, Abondance, Tomme de Savoie) a été évaluée par la mise en œuvre d'une méthodologie in vitro qui repose sur l'utilisation de 2 lignées cellulaires (hybridomes et lymphocytes T humains) et l'optimisation de 2 tests de criblage in vitro permettant d'évaluer l'impact des extraits fromagers sur la synthèse d'ADN et l'activité métabolique des cellules. Les extraits de Tomme de Savoie et d'Abondance ont présenté l'activité immunomodulatrice in vitro la plus importante. L'extrait d'Abondance a conduit à l'amélioration de la densité cellulaire maximale des 2 lignées cellulaires et à l'augmentation de 50% de la production d'anticorps par les hydridomes. Enfin, le fractionnement de cet extrait a permis de suggérer que les peptides sont en partie responsables de l'activité immunomodulatrice et d'identifier un fragment peptidique de la caséine b (f29-39) dont l'activité reste à confirmer

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

25

Fisson, Sylvain. "Etude in vitro et in vivo des mécanismes moléculaires d'activation lymphocitaire T et microgliale : identification de nouveaux marqueurs de sous-populations microgliales et de discrimination macrophagique." Angers, 2001. http://www.theses.fr/2001ANGE0038.

Full text

Abstract:

La voie costimulatrice B7/CD28, indispensable à l'activation optimale des lymphocytes T (LT) et à la prévention de leur anergie, peut être manipulée pour augmenter ou diminuer les réponses immunitaires et ainsi concevoir des nouvelles approches thérapeutiques pour le traitement respectif des cancers ou des maladies autoimmunes. L'obtention de tels traitements nécessite une meilleure compréhension des mécanismes de transduction associés à la molécule CD28, ainsi que leur relation avec le complexe TCR/CD3. Aussi, l'ADNc de la molécule CD28 humaine a été transfectée dans des thymomes murins exprimant ou non le complexe TCR/CD3. La caractérisation des transfectants obtenus démontre que la production d'IL2 induite via CD28 nécessite l'expression du complexe TCR/TD3 mais que l'association de la PI3-kinase et la mobilisation calcique qui en découle est indépendante de ce complexe. Au sein du système nerveux central (SNC), les cellules microgliales (principales cellules immunocompétentes résidentes) sont des partenaires privilégiés des LT pour leurs actions effectrices. Dans le but de mieux caractériser leurs mécanismes moléculaires d'activation et de présentation antigénique, les messagers différentiellement exprimés dans 2 clones de cellules microgliales murines activées, potentialisant différemment l'activation lymphocytaire T auxiliaire et cytoxique, ont été isolés par hybridation soustractive (technique RDA). Seize messagers ont ainsi été obtenus dont 15 n'avaient jamais été décrits dans la microglie. Certaines de ces molécules semblent pouvoir servir de marqueurs d'activation et/ou de distinction de certaines ou de toutes les sous-populations microgliales. De plus, trois messagers permettent de discriminer les cellules microgliales des monocytes/macrophages in vitro, ainsi que de distinguer ces cellules dans le modèle animal de la Sclérose en Plaques, l'EAE.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

26

Gärtner, Dagmar. "In vivo und in vitro Immunregulation durch T- und B-Lymphozyten." Doctoral thesis, Humboldt-Universität zu Berlin, Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät I, 2006. http://dx.doi.org/10.18452/15538.

Full text

Abstract:

Die adaptive Immunantwort wird von T-und B-Lymphozyten realisiert. Nachdem der Antigenrezeptor auf T-Zellen durch die Interaktion mit einem MHC-Peptid Komplex auf APZ getriggert wurde, sind kostimulatorische Moleküle ein zweiter Kontrollpunkt für die Immunantworten interagierender Zellen. Für das Abschalten von ungewollten Immunantworten, z.B. Autoimmunantworten, sind Moleküle der kostimulatorischen Molekülfamilien auf den T- und B-Zellen von außerordentlicher Bedeutung. Ein zentrales kostimulatorisches Molekül ist das Molekül CTLA-4. Wir untersuchten den Einfluss von regulatorischen Zellen auf den Verlauf einer EAE, die durch einen Wechsel von Remission und Rezidiv gekennzeichnet ist. Neben den CD4+CD25+Foxp3+CTLA-4+ T-Zellen konnten wir ebenfalls CD4+CD25-Foxp3+CTLA-4+ T-Zellen in den das Gehirn infiltrierenden Lymphozyten sichtbar machen. Wir fanden gleiche Zahlen an CD4+CD25+ Zellen, die auch intrazellulär CTLA-4 exprimierten, während der akuten Phase und ersten Remission, wobei aber Oberflächen CTLA-4+CD4+ Zellen während der akuten Phase deutlich erhöht waren. Eine Depletion der natürlich vorkommenden CD4+CD25+ Treg Zellen vor dem Auslösen einer EAE führte zu einem schnelleren Krankheitsausbruch und schwererem sekundär progressivem Krankheitsverlauf. Obwohl die erste Remission von der CD4+CD25+ Treg Zelldepletion unbeeinflußt blieb, konnten bereits im ersten Krankheitsschub signifikant erhöhte Antigen spezifische proinflammatorische Zytokine der T-Zellen detektiert werden. Damit wird deutlich, dass der sekundär progressive Verlauf durch CD4+CD25+ Treg Zelldepletion bereits zeitig während des Krankheitsverlaufes eingeleitet wird. Wir konnten CTLA-4 ebenfalls in B-Zellen nachweisen. Die Expression von intrazellulärem und Oberflächen CTLA-4 in aktivierten B-Zellen ist strikt T-Zellen abhängig und hat ihr Maximum 48-72h nach Stimulation in vitro. Durch den Einsatz hochsensitiver Zellanreicherungsverfahren konnte der Nachweis der mRNA für CTLA-4 in den B-Zellen aus T-Zellabhängigen Zellkultursystemen erbracht werden. Die Induktion der mRNA für CTLA-4 kann unter bestimmten Umständen durch CD19 Kreuzvernetzung in B-Zellen erfolgen. Durch den Einsatz von Knochenmarkschimären, in denen CTLA-4 spezifisch nur in B-Zellen deletiert wird, konnte gezeigt werden, dass CTLA-4 in B-Zellen die primäre IgE und IgM und die sekundäre IgM Produktion in Thymus abhängigen Immunantworten steuert. Diese Daten implizieren für alle Thymus abhängigen Immunantworten eine noch komplexere Regulation, bei der CTLA4 in B-Zellen deren Effektorfunktion intrinsisch modulieren kann.
T and B lymphocytes carry out the adaptive immune response. After the antigen receptor on T cells is triggered through interaction with an MHC:peptide complex on APCs, costimulatory molecules are a second checkpoint for immune responses of interacting cells. To terminate unwanted immune responses, such as autoimmune responses, molecules of the costimulatory molecule family on T and B cells are of great importance. A central costimulatory molecule is CTLA-4 (CD152). We investigated the influence of regulatory cells on the course of an EAE, a disease marked through alterations of remission and relapses. Apart from the CD4+CD25+Foxp3+CTLA-4+ T cells we also detected CD4+CD25-Foxp3+CTLA-4+ T cells within the brain-infiltrating lymphocyte population. Furthermore we found similar numbers of CD4+CD25+ cells that also expressed intracellular CTLA-4, during the acute phase and first remission from EAE, whereas surface CTLA-4+CD4+ cells were clearly elevated during the acute phase. The depletion of the natural occurring CD4+CD25+ Treg cells before EAE induction leads to an accelerated disease onset and an increase in disease severity combined with a secondary progressive disease course. Even though the first remission was unaffected by the depletion of CD4+CD25+ Treg cells before disease induction, the antigen specific proinflammatory cytokine production of T cells during the acute phase was already significantly increased. The data show, that the secondary progressive disease course after CD4+CD25+ Treg cell depletion is already determined early during the course of EAE. On a second approach we found CTLA-4 expression as well on B lymphocytes. The expression of intracellular and surface CTLA-4 on activated B cells is strictly T cell dependent and the expression is maximal 48-72h after stimulation in vitro. Through the use of highly sensitive cell sorting strategies we were able to detect the mRNA for CTLA-4 in B cells cultured with activated T cells. CTLA-4 mRNA in B cells is inducible in isolated B cells via crosslinking of CD19 in vitro. We generated bone marrow chimeric mice, in which only B cells were CTLA-4 deficient. With these mice we could show, that CTLA-4 on B cells controls the primary IgE and IgM, as well as the secondary IgM production in thymus dependent immune responses. These data imply a more complex regulation of thymus dependent immune responses, in which CTLA-4 on B cells can modulate B cell effector functions.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

27

Paliard, Xavier. "Modalités de secrétion de l'interleukine-4 et effets de l'interleukine-4 sur les lymphocytes T humains in vitro." Lyon 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LYO1T161.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

28

Schandené, Liliane. "Production de cytokine au cours de l'activation des lymphocytes T chez l'homme: études in vitro et in vivo." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1993. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/212753.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

29

Fayette, Jérôme. "Effet des cellules dendritiques humaines générées in vitro sur la réponse immunitaire humorale." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T259.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

30

Wallon, Christine. "Étude des mécanismes d'activation des lymphocytes T au cours d'une réponse anticorps in vitro chez l'homme vis-a-vis de l'antigène TNP-PAA." Paris 11, 1986. http://www.theses.fr/1986PA112094.

Full text

Abstract:

Dans un modèle de réponse anticorps spécifique in vitro chez l'homme, induite par un antigène synthétique particulaire le TNP-PAA, nous avons étudié le rôle et les mécanismes d'activation des lymphocytes T. La réponse anti-TNP est de type IgM, spécifique de l'haptène TNP. Les monocytes ne jouent pas le rôle de cellules présentant l'antigène. Cette réponse est T-dépendante, sans restriction allogénique apparente pour la coopération monocytes-cellules T et cellules T-B. Seuls les lymphocytes T4 ont un effet amplificateur. Dans ce modèle, il existe une prolifération T mais nos résultats n'apportent aucun argument en faveur d'une activation T antigène induite, antigène-spécifique. Le rôle de différentes molécules de surface a été étudié de façon indirecte à l'aide d'anticorps monoclonaux, en analysant leur effet fonctionnel dans l'activation T. Les anticorps OKT4A et anti-DR inhibent de façon parallèle la réponse anti-TNP, la prolifération T non induite par l'antigène et la RML autologue, mais sont sans effet sur une prolifération T induite par les mitogènes. Ces résultats montrent que l'activation T non spécifique est dépendante d'une interaction entre la molécule T4A portée par les lymphocytes T et les cellules non T DR+ et proche de celle observée au cours d'une RML autologue. Nous montrons également que des anticorps dirigés contre la chaine Œ de la molécule LFA1 inhibent la réponse anti-TNP et plusieurs arguments suggèrent que cette molécule joue un rôle non spécifique dans l'interaction cellulaire directe T-B. Enfin l'effet amplificateur des lymphocytes T peut être donné aux lymphocytes B par des lymphokines non spécifiques, indépendamment du signal spécifique donné directement par l'antigène aux lymphocytes B.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

31

Duffaud, Florence. "Applications "in vitro" et "in vivo", en cancérologie clinique, du test de numération des micronoyaux dans les lymphocytes T binucléés en culture." Aix-Marseille 2, 1997. http://www.theses.fr/1997AIX20651.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

32

Digue, Laurence. "Contribution à la prévention de cancers secondaires : étude de la génotoxicité in vitro du Paclitaxel sur lymphocytes T humains." Aix-Marseille 2, 2002. http://www.theses.fr/2002AIX20676.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

33

Mascarell, Laurent. "La cyclosporine A, un immunosuppresseur inducteur de gène : analyse protéomique in vitro et effets in vivo sur les lymphocytes T." Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066250.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

34

Nalet-Lande, Véronique. "Cellules formant les autorosettes chez l'homme : caractérisation phénotypique, spécificité et rôle fonctionnel in vitro." Paris 7, 1985. http://www.theses.fr/1985PA077138.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

35

Roux, Clémence. "Activité immunosuppressive des cellules stromales mésenchymateuses dérivées de cellules souches pluripotentes induites humaines : induction de lymphocytes T régulateurs in vitro et in vivo et expression de PD-L1." Thesis, Université Côte d'Azur (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018AZUR4226/document.

Full text

Abstract:

La grande originalité de mon projet réside dans la génération de cellules stromales mésenchymateuses (MSCs) à partir de cellules souches pluripotentes induites humaines (iPS). Je rappellerai les propriétés phénotypiques, de multipotence et immunosuppressives des MSCs et m’attarderai sur leurs différents mécanismes immunomodulateurs. Cependant, leur nombre limité et leur isolation difficile limitent leur utilisation thérapeutique nécessitant une autre source de cellules.Mon travail a donc été de générer et de caractériser des MSCs issues d’iPS (huiPS-MSCs). L'avantage des huiPS-MSCs réside dans leur plus grande disponibilité et la possibilité d'en avoir à volonté. Encore faut-il valider l’intérêt thérapeutique potentiel de ces huiPS-MSCs. Premièrement, mes résultats in vitro montrent que les huiPS-MSCs présentent une activité immunosuppressive sur les lymphocytes T (LT) activés conduisant à une induction de LT régulateurs FoxP3+ fonctionnels. Deuxièmement, dans une approche plus axée sur la thérapie, j’ai analysé in vivo l’activité́ immunosuppressive des huiPS-MSCs dans un modèle de réaction xénogénique de greffon contre l'hôte (souris immunodéficientes NSG injectées avec des LT humains). Je montre clairement, après traitement avec les huiPS-MSCs, une réduction de la proportion de LT humains producteurs de cytokines inflammatoires (IFNγ et TNFα) typiques de la pathologie et l’apparition concomitante de LT présentant un phénotype régulateur (production d’IL10 et expression de FoxP3). La fin de mon travail a été de caractériser moléculairement la régulation de l’expression de PD-L1, une molécule immuno-régulatrice puissante, entre les MSCs issues de la moelle osseuse (BM-MSCs) de donneurs sains et nos huiPS- MSCs. Les huiPS-MSCs ont une expression constitutive de PD-L1, qui est absente sur les BM-MSCs. J’ai analysé les microARNs susceptibles de limiter l’expression de PD-L1, j’ai pu en identifier plusieurs. En mesurant leur expression dans les différentes MSCs à notre disposition, je montre que cette expression est inverse par rapport à celle de PD-L1. J’ai ainsi pu démontrer l’activité immunosuppressive de nos huiPS-MSCs in vitro et in vivo avec une perspective d’induction de tolérance immune, et caractériser la régulation de l’expression de PD-L1, molécule immunosuppressive exprimée par les huiPS-MSCs
The mesenchymal stromal cells (MSCs) present many features that render attractive as therapeutic cells. Their phenotype, multipotency and immunosuppressive properties are well described. Nevertheless, major restriction for their clinical use is due to the limited in vitro expansion and low quantity of cells that can be collected from adult tissues. The originality of my project consisted in the generation of mesenchymal stromal cells (MSCs) from human induced pluripotent stem cells (iPS). These huiPS-MSCs could fulfill some of the specification required to improve MSCs use in therapeutic approaches: welldefined and unlimited number of cells with reproducible functional characteristics. In a first approach, I characterized the huiPS-MSCs generated in the laboratory. My results highlight the immunosuppressive activity in vitro of the huiPS-MSCs on T-cell stimulation that induces a switch in T-cell cytokine polarization toward the generation of Treg cells. Secondly, in a more therapy-oriented approach, I analyzed in vivo immunosuppressive activity of huiPS-MSCs in a xenogeneic graft versus host model (NSG immunodeficient mice injected with human T lymphocytes). My data showed significantly reduced percentages of human-differentiated T cells producing Th1 inflammatory cytokines (IFNγ and TNFα). By contrast, T cells producing IL-10 and FoxP3+ Treg cells, absent in nontreated animals, were detected in huiPS-MSCs treated mice, confirming the in vitro results of a tolerizing process. The end of my work was to characterize the molecular regulation of the expression of PDL1, an immunoregulatory molecule expressed by the MSCs. Comparing bone marrow MSCs (BM-MSCs) from healthy donors and our huiPS-MSCs, I showed that the huiPSMSCs have a constitutive expression of PD-L1, which is absent on BM-MSCs. Analysing microRNAs that could limit the expression of PD-L1, I could identify several microRNAs which expression is inverse to the expression of PD-L1. For the first time, my results highlight the immunosuppressive activity of huiPS-MSCs on human T-cell stimulation with a concomitant generation of human Treg cells in vivo and characterize the regulation of PD-L1 expression, an immunosuppressive molecule expressed by the MSCs. They may favor the development of new tools and strategies based on the use of huiPS cells and their derivatives for the induction of immune tolerance

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

36

Othmane, Omar. "Mécanisme d'action d'un immunomodulateur, le LF 1695 effets in vitro et in vivo sur les lymphocytes T et sur l'autoimmunité." Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37600157m.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

37

Othmane, Omar. "Mecanisme d'action d'un immunomodulateur, le lf 1695 : effets in vitro et in vivo sur les lymphocytes t et sur l'autoimmunite." Limoges, 1986. http://www.theses.fr/1986LIMO0027.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

38

Pannetier, Delphine. "Étude in vitro des réponses lymphocytaires T humaines induites par les virus Lassa et Mopeia." Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10353.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

39

Groux, Hervé. "Régulation de l'activation des lymphocytes T : de la prolifération à la mort cellulaire par apoptose : application à l'étude physiopathologique du sida." Lille 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LIL10149.

Full text

Abstract:

L'activation du lymphocyte T est régulée par l'intermédiaire de ses molécules de surface. Certaines de ces molécules sont pluripotentes et servent aussi bien à l'adhésion qu'à l'activation de la cellule. Nous avons étudié trois d'entre-elles: la molécule CD59 qui semble être un deuxième ligand (avec la molécule CD58, LFA-3) pour la molécule CD2, la molécule CD44, un récepteur du «homing» humain impliqué dans les mécanismes de régulation de l'activation des lymphocytes T et de la molécule VLA-4, une molécule de la famille des intégrines servant à fixer la fibronectine mais aussi la molécule de surface V-CAM et possédant un rôle de régulation de l'activation des lymphocytes T. Si l'activation des lymphocytes conduit le plus souvent à leur prolifération, une activation inadéquate peut entraîner leur mort par un mécanisme de suicide actif: l'apoptose. Nous avons étudié les mécanismes permettant d'entraîner cette mort cellulaire et nous avons pu mettre en évidence un mécanisme assez général dans le cas des lymphocytes T où une sécrétion d'IE gamma en l'absence de sécrétion d'IL2 sur une cellule activée entraîne la mort de cette dernière
D'autre part, nous avons proposé que la inappropriée dans la population lymphocytaire T CD4 adulte d'un programme de suicide cellulaire pourrait expliquer à la fois le dysfonctionnement précoce et la déplétion tardive des lymphocytes T CD4 chez les sujets infectés par le VIH. Nous montrons que la perte sélective de la capacité des lymphocytes T CD4 de sujets infectés par le VIH à proliférer in vitro est due à l'induction par les stimuli de la mort des lymphocytes T CD4. Ce processus de mort cellulaire présente toutes les caractéristiques de l'apoptose (nécessité d'une synthèse protéique et condensation de la chromatine et fragmentation de l'ADN). Ces résultats suggèrent que le suicide des lymphocytes T CD4 en réponse à l'activation pourrait aussi se produire in vitro et être responsable, indépendamment de tout effet cytopathogène du virus, de la réduction progressive du nombre de lymphocytes T CD4 qui aboutit au SIDA

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

40

Mossalayi, Mohammad. "Caractérisation des précurseurs sanguins et médullaires des lymphocytes T humains leur purification et les conditions in-vitro requises à leur différenciation /." Grenoble 2 : ANRT, 1988. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37616705p.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

41

Mossalayi, Mohammad. "Caractérisation des précurseurs sanguins et médullaires des lymphocytes T humains : leur purification et les conditions in-vitro requises pour leur différenciation." Poitiers, 1988. http://www.theses.fr/1988POIT2015.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

42

BOUCHER, NATHALIE. "Vieillissement des lymphocytes t humains etudes in vitro et ex-vivo de cellules d'adultes jeunes, de personnes agees et de centenaires." Paris 7, 1998. http://www.theses.fr/1998PA077187.

Full text

Abstract:

Dans ce memoire, nous avons aborde le vieillissement des lymphocytes t humains sous 2 aspects : le vieillissement in vivo en etudiant des cellules provenant d'adultes jeunes, de personnes agees de 70 a 90 ans et de centenaires et le vieillissement in vitro en etablissant un systeme de culture a long terme similaire au systeme de hayflick utilise pour etudier la senescence des fibroblastes. Grace a la creation de banques de cellules et d'adn de centenaires dans le cadre du projet chronos, nous avons l'opportunite de comparer les lymphocytes t peripheriques de centenaires aux cellules provenant de personnes non selectionnees pour leur longevite extreme. Nous avons montre que la proportion de lymphocytes t cd28 + diminue au cours du vieillissement in vivo ; cette diminution est plus prononcee dans les lymphocytes t cytotoxiques que dans les lymphocytes t auxiliaires. Elle est correlee avec une proliferation a court terme moindre des lymphocytes t de centenaires. Nous avons confirme que les lymphocytes t possedent une capacite de proliferation limitee in vitro grace a l'etablissement d'un systeme de culture a long terme. Ces cellules cessent de se diviser apres 57 doublements en moyenne. Toutes les cultures deviennent progressivement oligoclonales et quelques une presentent des anomalies chromosomiques : trisomies 2, fusions telomeriques ou tetraploidies. La presence de ces anomalies n'est pas correlee avec la fin de la phase replicative des lymphocytes t. L'expression de cd28 varie au cours du vieillissement in vitro selon 2 profils : dans la majorite des cultures, la fraction de lymphocytes t cd28 + diminue pendant toute la duree de la culture ; dans 5 des 11 cultures, la proportion de lymphocytes t cd28 + diminue pendant la premiere moitie de la culture puis elle retourne a son niveau de depart. Ce second profil est preferentiellement associe avec la presence de cellules trisomiques pour le chromosome 2, sur lequel est situe le gene codant pour le cd28.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

43

Montcuquet, Nicolas. "Diminution de l'alloréactivité de cellules T cultivées ex vivo : étude in vitro des mécanismes et effet sur la reconstitution immunitaire in vivo dans un modèle de greffe allogénique de cellules souches hématopoïétiques." Besançon, 2008. http://www.theses.fr/2008BESA3004.

Full text

Abstract:

Une modulation de l'alloréactivité des cellules T présentes dans un greffon de cellules souches hématopoïétiques (CSH) peut être obtenue par transfert par voie rétrovirale d'un gène "suicide" dans les lymphocytes T (LT) du donneur. Le transfert de gène nécessite notamment une période de 12 jours de culture ex vivo de cellules mononucléées (CMN) activées par des anticorps (Acs) CD3 solubles en présence d'Interleukine (IL)-2 qui est en partie responsable d'une diminution de l'alloréactivité des cellules cultivées (appelées Co). Les hypothèses d'induction d'anergie, de délétion des cellules alloréactives au cours de l'expansion ex vivo ou de mort induite par activation au cours de la reconnaissance de l'allo-antigène, testées pour expliquer cette diminution d'alloréactivité, ont été invalidées (résultats non publiés). L'augmentation d'expression de marqueurs des cellules T régulatrices au cours de l'expansion ex vivo nous a incités à tester l'hypothèse selon laquelle une expansion préférentielle des cellules T régulatrices pourrait être à l'origine de la diminution d'alloréactivité des Co. Les résultats obtenus n'ont pas permis de mettre en évidence une activité suppressive liés à la présence de cellules T régulatrices (Montcuquet N et al. Immunology 2008) et suggèrent que la diminution d'alloréactivité résulte d'un épuisement fonctionnel des LT. - Dans un second temps nous avons cherché à améliorer les conditions de culture afin de maintenir cette alloréactivité. L'activation des CMN a été réalisée par des Acs soluble CD3 ou par des Acs CD3 et CD28 co-immobilisés sur billes, puis les cellules ont été cultivées en présence d'IL-2, d'IL-7 ou d'IL-15. Nous avons observé que le fait de remplacer la stimulation CD3 par une co-stimulation CD3/CD28 conduit à une alloréactivité similaire in vitro mais augmente la prolifération cellulaire et l'alloréactivité testée in vivo dans un modèle xénogénique de réaction du greffon contre l'hôte (GvH). Par ailleurs, le fait de remplacer l'IL-2 par l'IL-7 mais pas par l'IL-15, ou de diminuer les concentrations d'IL-2 et d'IL-7 utilisées lors de la culture, améliore l'alloréactivité des Co, au détriment cependant d'une expansion cellulaire plus faible (Mercier-Letondal P et al. Cytotherapy 2008). Ces résultats posent les bases de futurs protocoles de production de cellules T génétiquement modifiées conservant leur alloréactivité en vue d'obtenir un effet anti-leucémique maximal en situation d'allogreffe hématopoïétique. - La culture ex vivo de CMN entraîne non seulement une diminution d'alloréactivité, mais aussi des modifications phénotypiques se traduisant par l'acquisition par les Co d'un phénotype de LT mémoires. Or, les LT mémoires ont une alloréactivité plus faible que des LT naïfs en termes d'induction de GvH mais sont capables d'accélérer la reconstitution immunitaire. Nous avons pu montrer que, de façon similaire, des LT cultivés issus de splénocytes murins étaient capables d'améliorer la reconstitution immunitaire au même titre que des LT mémoires frais dans un modèle murin d'allogreffe de CSH par un effet indépendant de l'alloréactivité. - Ces résultats posent les bases d'un possible développement des LT cultivés comme nouvel outil de thérapie cellulaire permettant d'accélérer la reconstitution immunitaire dans des contextes de greffe où celle-ci est lente (greffe de sang de cordon, greffe haplo-identique. . . )
We have demonstrated previously that retroviral-mediated transfer of a suicide gene into bone marrow (BM) donor T cells allows an efficient control of graft-versus-host disease (GvHD) after allogeneic BM transplantation. However, 12 days of ex vivo culture is required for the production of sufficient gene-modified cells (GMC). This process requires both CD3 monoclonal antibody (MAb) activation and interleukin-2 (IL-2) expansion resulting in a diminution of expanded cells alloreactivity (termed Co). This phenomena is independent of anergy, clonaI deletion during expansion or apoptosis inducing cell death during mixed lymphocyte reaction. - Here, we demonstrate that this phenomena is the result of T-cell functional exhaustion and not due to anypreferential expansion of regulatory T cells in the culture (Montcuquet N et al. Immunology 2008). - Our approach was then to try to improve the ex vivo culture conditions in order to maintain alloreactivity. Peripheral blood mononuclear cells were activated with soluble CD3 MAb or CD3 and CD28 MAb co-immobilized on beads and expanded for 12 days in the presence of IL-2, IL- 7 or IL-15 before analysis of alloreactivity and phenotype. Replacing the CD3 MAb by CD3/CD28 beads led to similar in vitro alloreactivity but improved also expansion and in vivo alloreactivity of GMC. Replacing the IL-2 with IL- 7, but not IL-15, or decreasing IL-2 or IL- 7 concentrations, improved the in vitro alloreactivity of expanded cells but with lower expansion. Indeed, the alloreactivity of expanded cells was negatively correlated with cell expansion and positively correlated with CD4/CD8 ratio and CD8 expression levels (Mercier-Letondal P, Montcuquet N et al. Cytotherapy 2008). - ln a mouse model of Graft-versus-host Disease (GvHD) induction, memory T-cells are less allogeneic than naïve T cells. Memory T-cells also improve immune reconstitution. We examined the potential of expanded T-cells to improve immune reconstitution in the absence of GvHD. Indeed, expanded splenocytes can have the same effects as fresh memory T-cells. - Taken together these results should be useful in designing GMC therapy protocols where alloreactivity is maintained and co-administrated expanded T-cells offer a new cell therapy product

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

44

Finazzo, Claudia. "Geração in vitro de células T efetoras e células T reguladoras mediada por células dendríticas pulsadas com vírus autólogo de pacientes infectados pelo HIV-1." Universidade de São Paulo, 2012. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-27072012-110639/.

Full text

Abstract:

Imunização terapêutica utilizando células dendríticas derivadas de monócitos (MoDCs) pulsadas com antígenos de HIV constitui um meio promissor de potencializar a resposta imune específica anti-HIV em pacientes infectados. Neste contexto, é importante ressaltar que células dendríticas além de estimular a resposta imune específica, podem ser capazes de promover a tolerância periférica em linfócitos T CD4+ e T CD8+ ao induzir deleção, anergia ou através da expansão de células T reguladoras (T regs). Experimentos in vitro foram conduzidos para avaliar a capacidade de MoDCs pulsadas com HIV autólogo inativado em induzir apoptose celular, respostas celulares específicas e a geração de T regs. Os pacientes avaliados neste estudo foram indivíduos infectados pelo HIV, sem uso de tratamento antirretroviral (n = 14) com número de células T CD4+ acima de 350 células/L. MoDCs foram geradas a partir de células mononucleares de sangue periférico e em seguida foram pulsadas com vírus autólogo inativado por Aldrithiol-2, tratadas com estímulo para maturação e então cultivadas com linfócitos autólogos. A apoptose de linfócitos T e MoDCs e a frequência de células efetoras e reguladoras foram avaliadas por citometria de fluxo. Os resultados obtidos mostraram que não houve diferença nos níveis de apoptose de células T CD4+, T CD8+ ou MoDCs entre os grupos pulsadas e não pulsadas com HIV inativado. Foi observado que tanto MoDCs pulsadas quanto aquelas não pulsadas com o vírus autólogo inativado foram capazes de induzir células T CD4+ secretoras de IFN-, enquanto que apenas MoDCs pulsadas levou a um aumento no percentual de células T CD8+ efetoras. Pacientes com contagem de células T CD4+ acima de 500 células/L apresentaram um percentual maior de células T CD4+ secretoras de IFN após estimulo de MoDCs pulsadas. Esta diferença não foi observada em células T CD8 +. T regs também foram induzidas in vitro após cocultivo com MoDCs. Níveis basais mais elevados de T regs foram encontrados em pacientes com carga viral plasmática baixa. Em conjunto, os resultados indicam que MoDCs pulsadas com HIV-1 são capazes de induzir linfócitos T efetores, mas também aumentam a frequência de T regs in vitro. Além disto, pacientes com maior contagem de células T CD4 + foram capazes de responder de forma mais eficiente ao estímulo com MoDCs pulsadas. Viremia persistente na infecção crônica pelo HIV pode estar associada significativamente à perda de T reg
Therapeutic immunization using inactivated autologous HIVpulsed dendritic cells (DCs) is a promising strategy to enhance specific anti-HIV immune responses in infected patients. In this context, it is important to note that DC besides stimulate a specific immune response, may be able to promote tolerance in peripheral CD4 + and CD8 + T cells inducing deletion, anergy or through expansion of regulatory T cells (T reg). In vitro experiments were conducted to evaluate the capacity of autologous HIVstimulated DC to induce apoptosis, effector cellular T cell responses and T reg generation. For these purposes, we used peripheral blood from HAARTnaïve HIVinfected patients (n=14) with CD4+ T cell counts above 350 cell/L for generation of monocytederived DC (MoDC). MoDC were pulsed with aldrithiol-2 (AT-2)-inactivated autologous virus and matured. MoDC were then cocultured with autologous lymphocytes and the apoptosis, production of IFN- and T reg cell frequency were evaluated by flow cytometry. There was no difference in the rate of apoptosis of CD4, CD8 T cells or MoDC between the groups pulsed and not pulsed with inactivated HIV. MoDC pulsed or not with inactivated autologous virus induced IFN- +CD4+ T cells, whereas only pulsed MoDC were able to increase effector CD8+ T cells percentage along the time culture. Patients with CD4+ T cell counts above 500 had an increased percentage of CD4 + T cells secreting IFN- upon DC pulsed with HIV. This difference was not observed in CD8 + T cells. Interestingly, T reg were also induced in vitro after MoDC cocultivation. Higher baseline T reg counts were found in patients with lower plasma viral loads. These results show that MoDC pulsed with HIV-1 are able to induce effector lymphocyte but also elevate the frequency of T reg in vitro. Patients with higher CD4+ T cell counts are able to respond more efficiently to the stimulation with pulsed MoDC, and persistent viremia in chronic HIV infection is associated with significant loss of T reg

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

45

Ma, Kuiying. "Regulation of early human T cell development Generation of adult human T-cell progenitors for immunotherapeutic applications TNFα enhances in vitro generation of T-cell precursors from human hematopoietic stem and progenitor cells." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCB040.

Full text

Abstract:

La première étape du développement lymphocytaire T se caractérise par la migration de progéniteurs hématopoïétiques dans le thymus et l'initiation du programme de différenciation T. La régulation du développement des lymphocytes T est étroitement associée au micro-environnement du thymus. Cependant, en raison de modèles d'étude limités, les mécanismes régulant le développement des lymphocytes T humains sont encore peu compris. Nous avons donc développé un système de culture in vitro sans stroma qui soutient le développement précoce des cellules T humaines à partir de cellules souches / progénitrices hématopoïétiques humaines néonatales et adultes. Ce système est basé sur un composant principal, le ligand de Notch DL-4. Les progéniteurs de cellules T générés dans le système de culture DL-4 présentent des caractéristiques similaires à ceux des thymocytes T immatures humains. De plus, ces cellules ont un potentiel de différenciation T puisqu'ils produisent des lymphocytes T matures avec un répertoire TCR très diversifié après transplantation à des souris NOD/SCID/gamma(c)- / - . Au cours de mon travail de thèse, j'ai optimisé le système de culture en ajoutant du TNFa, une cytokine naturellement exprimée dans le thymus et qui améliore considérablement la génération in vitro de progéniteurs T grâce à une augmentation de la survie et de la prolifération des précurseurs T, ainsi qu'en inhibant la différenciation myéloïde. J'ai également démontré que la régulation du TNFa sur les progéniteurs des lymphocytes T était principalement basée sur l'activation de la signalisation NFkB, ainsi que la régulation de l'expression d'un inhibiteur de l'apoptose. Dans l'ensemble, cette thèse décrit une stratégie basée sur la signalisation Notch et NFkB pour la génération in vitro de progéniteurs de cellules T humaines à partir de cellules souches / progénitrices hématopoïétiques. Cette stratégie fournit un modèle efficace pour l'étude fondamentale des régulateurs essentiels au cours du développement précoce des cellules T humaines. En outre, il fournit un modèle sûr pour fournir rapidement et abondamment des progéniteurs de cellules T humaines pour des applications cliniques
Thymus seeding progenitors migrate into the thymus and initiate T cell differentiation program. The regulation of T cell development is tightly associated with the thymus microenvironment. However, due to the limited model, the mechanism of human T cell development has not been deeply clarified. Thus, we developed an in vitro stroma-free system to support human early T cell development from both neonate and adult human hematopoietic stem / progenitor cells based on Notch ligand DL-4. These T cell progenitors generated in DL-4 system exhibit similar characters as human immature T thymocytes. Moreover, they were proved to have T cell reconstruct potential when transplanted to NOD/SCID/gamma(c)- / - mice, which could differentiate into mature T cell with highly diverse TCR repertoire. Furthermore, we optimized the system by involving TNFa cytokine, which could dramatically enhance the in vitro generation of T-cell progenitors through ameliorating cell survival and proliferation of T-cell precursors, as well as fastening early T lineage differentiation. We demonstrate the regulation of TNFa on T cell progenitors is mainly based on the activation of NFkB signaling, as well as its regulation on inhibitor of apoptosis protein. Overall, this thesis describes a strategy for in vitro generation of human T-cell progenitors from hematopoietic stem/ progenitor cells based on Notch signaling. This strategy provides an effective model for fundamental study to explore essential regulators during human early T cell development. Moreover, it provides a safe model to rapidly supply abundant human T-cell progenitors for clinical applications

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

46

Fickinger, Andira Michele da Cruz. "Papel dos receptores de glutamato tipo NMDA em macrófagos, células dendríticas e células T CD4 ativadas in vitro." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-11072014-091556/.

Full text

Abstract:

A neuroimunologia é o ramo da imunologia que estuda a relação entre sistema imune e o sistema nervoso. Muitos estudos têm demonstrado a capacidade direta de neurotransmissores em modular a resposta imune, assim como de citocinas em influenciar funções cognitivas. Neste contexto, o glutamato possui papel de destaque, por se tratar do neurotransmissor excitatório mais importante e mais abundante no sistema nervoso central dos mamíferos. Sua função é exercida através de dois tipos de receptores principais: i) os receptores ionotrópicos (iGluR) e ii) os receptores metabotrópicos (mGluR). A descoberta da expressão de receptores de glutamato em células do sistema imune tem despertado interesse científico, levantando questões acerca de sua expressão e função. No presente trabalho, avaliamos parâmetros como viabilidade celular, linfoproliferação e ativação de MAP quinase pelo receptor NMDAR esplenócitos totais e linfócitos cultivados in vitro. Nossos resultados demonstram que linfócitos em repouso e ativados apresentam diferentes perfis de expressão do receptor NMDAR. O uso do antagonista deste receptor, o MK801, foi capaz de reduzir a proliferação de linfócitos T CD4 e T CD8 estimulados com anti-CD3 em cultura de esplenócitos. Tal redução pode ser explicada por um aumento na taxa de morte celular, o que foi avaliado através de marcação com anexina-V, indicador de apoptose, ou 7-AAD, indicador de necrose. Para entendermos um pouco a respeito da sinalização do receptor NMDAR no sistema imune, avaliamos a fosforilação da MAP quinase ERK 1,2 em linfócitos T CD4 ativados na presença do agonista (NMDA) ou do antagonista (MK801) do receptor. Observamos um aumento na ativação desta quinase na presença de NMDA, o que é revertido na presença do MK801. Ao avaliar o papel do receptor NMDAR in vivo, verificamos uma redução significativa na gravidade da encefalomielite experimental auto-imune em animais tratados com MK801. Mais interessante, esta redução se correlaciona também com uma redução na fosforilação de ERK 1,2 em esplenócitos totais obtidos ao dia 7 pós-imunização. Em resumo, nossos dados sugerem que o receptor NMDA possui o papel de ativador de vias intracelulares importantes, como as da MAP quinase ERK 1,2; e que o seu bloqueio resulta em morte celular in vitro. Logo, isso indica a importância do glutamato como modulador da intensidade da resposta e viabilidade de linfócitos T CD4 e T CD8 in vitro e in vivo. Sendo assim, nossos resultados contribuem para um melhor entendimento dos fenômenos de imunoregulação, especialmente aqueles no campo da neuroimunologia ou neuroimunomodulação.
Neuroimmunology is a field within immunology which studies the relationship between the nervous system and the immune system. Several studies have demonstrated the direct ability of neurotransmitters in modulating the immune response, as for cytokines in influencing cognitive functions. In this context, glutamate stands out for being the most important and abundant neurotransmitter in the mammal central nervous system. Its role is exerted through two main types of receptor: i) ionotropic receptors (iGluR) and ii) metabotropic receptors (mGluR). The discovery of glutamate receptor expression in immune cells has led to scientific interest, raising issues concerning its expression and function. In the present study, we evaluated parameters such as cell viability, lymphoproliferation, and activation of the MAP quinase pathway by the NMDA receptor on total splenocytes and lymphocytes cultured in vitro. Our results demonstrate that naive and activated lymphocytes present different profiles of NMDA receptor expression. The use of MK801, an antagonist for this receptor, was able to reduce the T CD4 and T CD8 lymphocyte proliferation stimulated with anti-CD3 in splenocyte culture. Such reduction may be explained by the increase of the cellular death rate, evaluated by annexin-V staining, indicator of apoptosis or 7-AAD, indicator of necrosis. With the intent of understanding part of the NMDA receptor signaling in the immune system, we evaluated the ERK 1,2 MAP quinase phosphorylation in T CD4 lymphocytes activated in the presence of the agonist (NMDA) or the antagonist (MK801) of the receptor. We observed an increase in this quinase activation in the presence of NMDA, which is reversed by the MK801. When evaluating the role of the NMDA receptor in vivo, we verified a significant reduction in the degree of experimental auto-immune encephalomyelitis in animals treated with MK801. More interesting, this reduction also correlates to a reduction on the phosphorilation of ERK 1,2 in total splenocytes obtained at the seventh day post-immunization. In sum, our data suggest that the NMDA receptor has the role of activating important intracellular pathways, such as the MAP quinases ERK 1,2; and that its blockage results in cellular death in vitro. As so, this indicates the importance of glutamate as a modulator of the intensity of response and the viability of T CD4 e T CD8 lymphocytes in vitro e in vivo. Thus, our result contribute for a better understanding of the immunoregulation phenomena, especially those in the neuroimmunology ou neuroimmunomodulation field.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

47

Trichot, Coline. "Regulation of Human T Helper Cell Diversity : From In Vitro Dendritic Cell-Based Mechanisms to Candidate Biomarkers in Atopic Dermatitis." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS423.

Full text

Abstract:

Le système immunitaire humain est majoritairement commandé par les cellules dendritiques et les lymphocytes T auxiliaires. Lorsque les cellules dendritiques détectent un pathogène, elles vont instruire les lymphocytes T auxiliaires afin qu’ils adoptent le phénotype approprié à la menace rencontrée. Les lymphocytes T auxiliaires peuvent être divisés en plusieurs sous-populations, caractérisées par la production de cytokines spécifiques. Chaque sous-population de lymphocyte T auxiliaire possède des fonctions propres et est impliquée dans l’élimination de pathogènes distincts. Si les réponses des lymphocytes T auxiliaires ne sont pas finement régulées, ils peuvent devenir pathogéniques, et dans ce cas, considérés comme cibles potentielles pour des thérapies. Dans ce contexte, j’ai concentré mon travail de doctorat sur l’étude de la diversité des sous- populations de lymphocytes T auxiliaires et de leur régulation. Premièrement, j’ai démontré que les cellules dendritiques activées par la TSLP sont capables d’induire la polarisation de lymphocytes T folliculaires. Ensuite, j’ai participé à la construction d’un modèle mathématique capable de prédire la réponse lymphocytaire T auxiliaire en fonction de signaux dérivés des cellules dendritiques. Ce modèle nous a permis d’identifier un rôle spécifique pour l’IL-12p70, dépendant du contexte IL-1, dans l’induction d’IL-17F sans IL-17A. Enfin, j’ai monitoré huit populations de lymphocytes T auxiliaires et folliculaires dans le sang périphérique de patients atteints de dermatite atopique traités par Dupilumab, une immunothérapie ciblant la sous-unité alpha du récepteur de l’IL-4 et j’ai pu montré que la diminution du pourcentage de lymphocytes Th17 correlait avec l’amélioration du score clinique EASI. Globalement, mon travail sur la diversité de phénotypes Th apporte une ressource mécanistique importante, avec une potentielle application en immunothérapie
Human immunity is essentially driven by dendritic cells and T helper cells. When dendritic cells detect a pathogen, they will instruct T helper cells to adopt the adapted phenotype for the specific threat encountered. T helper cells are subdivided in multiple subsets, characterized by particular sets of cytokines. Each T helper subset has specific functions and is involved in the clearance of distinct pathogens. If T helper responses are not precisely regulated, they can become pathogenic, in this case T helper pathways can be considered as potential targets for therapy. In this context, I focused my PhD work on studying T helper cell subset diversity and regulation. First, I demonstrated the ability of TSLP-activated dendritic cell to induce T follicular helper cell polarization. Then I participated in building a mathematical model capable of predicting T helper cell response to dendritic-cell derived signals. This model allowed us to identify the specific role of IL-12p70, in an IL-1 context, to induce IL-17F without IL-17A. Finally, I monitered eight T helper and T follicular helper cell populations in peripheral blood from atopic dermatitis patients treated with Dupilumab, an immunotherapy targeting the IL-4 receptor alpha subunit, and was able to show a correlation between decrease of Th17 cell percentage and improvement of EASI clinical score. Overall, my work on Th phenotype diversity provides key mechanistic insight with potential application in immunotherapy

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

48

Chiarella, Andressa de Paiva. "Caracterização da função das células TCD4+ e TCD8+ na Paracoccidioidomicose pulmonar de camundongos isogênicos." Universidade de São Paulo, 2003. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-05032015-150715/.

Full text

Abstract:

Para investigar o papel dos linfócitos T no modelo de Paracoccidioidomicose pulmonar, depletamos in vivo os linfócitos TCD4+ e TCD8+ de camundongos resistentes (A/J) e susceptíveis (B10.A) infectados intratraquealmerite com um milhão de leveduras de isolado virulento do Paracoccidioides brasiliensis. Quando comparados ao grupo não depletado de linfócitos TCD4+, após 4 semanas de infecção, camundongos A/J apresentaram aumento da disseminação de leveduras ao fígado; na 8ª semana, contudo, houve redução na carga fúngica pulmonar destes animais. Ao contrário, a depleção de células TCD4+ não alterou a gravidade da doença de animais B10.A em ambos os períodos de infecção. O tratamento com o AcM anti-CD4, em ambos os tempos de infecção, diminuiu as reações de HTT dos animais A/J, mas não alterou a anergia cutânea dos camundongos B10.A. Em adição, ambas as linhagens depletadas tiveram a produção específica de anticorpos diminuída na 4ª e 8ª semanas. Quanto às citocinas pulmonares, após 4 semanas de infecção, os animais A/J depletados apresentaram redução nos níveis de IL-12 pulmonar e na 8ª semana da infecção, esta linhagem apresentou redução nos níveis de IL-10, IL-4, IL-5,IL-2 e GM-CSF pulmonar, e os animais B10.A mostraram aumento nos níveis de IL-12. Por outro lado, verificamos que ambas as linhagens depletadas com o AcM anti-CD8, apresentaram aumento da gravidade da doença após a semanas de infecção, pois camundongos A/J tratados apresentaram aumento da carga fúngica pulmonar, e animais B10.A apresentaram aumento do crescimento fúngico no pulmão e fígado. Animais B10.A depletados de células TCD8+ apresentaram ainda um incremento nas suas reações de HTT específicas. Esses dados sugerem que na linhagem susceptível há a presença de duas subpopulações celulares de TCD8+, uma subpopulação protetora que controla o crescimento fúngico e outra inibidora de reações de HTT. A depleção dos linfócitos TCD8+ não levou a grandes alterações na produção de anticorpos específicos em ambas as linhagens; no entanto, levou a alterações significativas nos níveis das citocinas pulmonares; os animais A/J apresentaram aumento de IL-4, IL-12, IL-3 e GM-CSF, e diminuição de IL-2. Por outro lado, os animais B10.A apresentaram aumento nos níveis de IL-10, IL-12, IL-3 e IFN-γ. Estes resultados demonstraram que nos animais B10.A as células TCD4+ têm pouca ou nenhuma participação no controle da infecção. No entanto, nos animais A/J há duas subpopulações, uma protetora (4ª semana) e outra exacerbadora (8ª semana) dependendo do estágio da doença. Contudo, em ambas as linhagens a subpopulação TCD8+ apresentou-se importante no controle da doença. Além disso, na PCM experimental, tanto as respostas de HTT como a produção de anticorpos específicos, são mecanismos que dependem de células TCD4+ e na linhagem B10.A há uma subpopulação TCD8+ que regula negativamente as reações de HTT.
To investigate the role of T lymphocytes in the pulmonary model of Paracoccidioidomycosis (PCM), resistant and susceptible mice were in vivo depleted of T CD4+ and T CD8+ cells by intraperitoneal injection of specific monoclonal (mAb) antibodies and infected intratracheally with one million yeast cells of a virulent isolate of Paracoccidioides brasiliensis. When compared with the non-depleted group, at week 4 after infection A/J mice presented increased dissemination of yeasts to liver; however, at week 8 A/J-depleted mice showed decreased fungal loads in the lungs. In contrast, depletion of TCD4+ cells of B10.A mice did not alter the severity of disease at any periods of infection assayed. Treatment with anti-CD4 mAb diminished the delayed-type hypersensitivity reactions (DTH) of resistant mice but the cutaneous anergy of B10.A mice was not modified. In addition, CD4-depleted A/Sn and B10.A mice presented decreased titers of P.brasiliensis specific antibodies at both the 4th and 8th week postinfection. Regarding pulmonary cytokines, at week 4 of infection A/J-depleted mice presented diminished levels of IL-12 but at week 8 IL-10, IL-4, IL-S, IL-2 and GM-CSF appeared in lower levels. Only IL-12 was detected in lower levels in the lungs of B10.A-depleted mice at week 8 after infection. Depletion of CD8+ cells led to a more severe disease in both mouse strains. A/J-treated mice presented increased fungal burdens in the lungs whereas in the B10.A strain increased number of yeast cells was detected in the lungs and liver. Importantly, neutralization of CD8+ cells reverted the DTH anergy of susceptible mice. These data suggest the existence of two T CD8+ subpopulations in B10.A mice, a protective that controls fungal growth and another one that suppresses DTH reactions. The production of P.brasiliensis specific antibodies by resistant and susceptible mice depleted of CD8+ T cells was similar to that of mice given control antibody. Neutralization of CD8+ cells, however, induced significant alterations in the concentrations of pulmonary cytokines. In A/J-treated mice, higher levels of IL-4, IL-12, IL-3 and GM-CSF were concomitant with reduced amounts of IL-2. B10.A mice depleted of CD8+ cells presented higher levels of pulmonary IL-10, IL-12, IL-3 and IFN-γ than their controls. As a whole, our results demonstrate that CD4+ T cells have no influence on the control of disease severity of B10.A mice. Depending on the period of the infection, A/J mice develop two subpopulations of CD4+ T cells: one protective subset which appeared early in the infection, followed by a subpopulation that lead to disease exacerbation. Moreover, in both mouse strains CD8+ T cells are protective and able to control fungal growth. It was also verified that DTH reactions and antibody production in murine PCM are CD4+ T cells mediated. Finally, only in B10.A mice a regulatory CD8+ T cell subpopulation was characterized by its ability to suppress DTH reactions

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

49

Frasnelli, Sabrina Cruz Tfaile [UNESP]. "Papel de RAGE e TLR4 na modulação da resposta imune inflamatoria em PBMC de pacientes diabéticos e não diabéticos: (estudo in vitro)." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2012. http://hdl.handle.net/11449/96189.

Full text

Abstract:

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-26Bitstream added on 2014-06-13T19:15:56Z : No. of bitstreams: 1 frasnelli_sct_me_arafo.pdf: 758242 bytes, checksum: fc10d5e79dcb4b386aacc5d2776f572c (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Diabetes mellitus se caracteriza pelo acúmulo de produtos finais da glicação avançada (AGEs) que ativam seu receptor RAGE. Entre as complicações associadas ao diabetes está a modulação da resposta imune, evidenciada pela maior susceptibilidade à infecção em diabéticos. O sistema imune percebe e reaje aos microrganismos por meio de receptores de padrões moleculares (receptores semelhantes à Toll, TLRs). Lipopolissacarídeo da parede celular (LPS) é um dos principais fatores de virulência de microrganismos Gramnegativos e é reconhecido principalmente por TLR4. A hipótese deste trabalho é que a ativação de RAGE e TLR4 por seus ligantes pode resultar em efeito sinérgico na modulação da proliferação, morte celular e expressão de citocinas inflamatórias por células mononucleares do sangue periférico (PBMC). Foram selecionados 7 indivíduos não diabéticos e 6 indivíduos portadores de diabetes tipo 2 para coleta de PBMCs. Estas células foram estimuladas com LPS bacteriano e BSA glicado, isoladamente e combinados, na presença e na ausência de inibidores dos receptores RAGE e TLR4. Proliferação e morte celular foram avaliadas por contagem direta em hemocitômetro e citometria de fluxo, respectivamente. A expressão de citocinas e quimiocinas inflamatórias foi avaliada por RT-qPCR, enquanto a modulação do padrão de resposta imune adaptativa foi estudada por meio de citometria de fluxo. Os resultados mostram 18 18 que PBMCs de pacientes portadores de diabetes tendem a ser mais resistentes à indução de morte celular. De um modo geral, a inibição dos receptores RAGE e TLR4 não interfere na atividade metabólica e viabilidade celular em diabéticos e não diabéticos. A expressão gênica de CCL3 e CCR5 não foi regulada pelos receptores RAGE e TLR, sendo discretamente mais elevada em pacientes não diabéticos. A expressão de TNF-α e IL-10 foi regulada...
Diabetes mellitus is characterized by the progressive accumulation of advanced glycation end-products (AGEs), which bind and activate their membrane-bound receptor (RAGE) on a variety of target cells. Modulation of the immune response is one of the diabetes-associated complications and is reflected on the increased susceptibility of diabetes patients to infections and sepsis. The immune system senses and reacts to microorganisms by pattern-recognition receptors, such as Toll-like receptors (TLRs). Bacterial lipopolysaccharide (LPS) is a major virulence factor of Gram-negative microorganisms, which is recognized mainly by TLR4. The hypothesis of this study is that of a synergism between activated TLR4 and RAGE that modulates the response of cells of innate and adaptive immunity in the circulation (peripheral blood monocytic cells, PBMCs). PBMCs were collected from 13 volunteers (7 with type 2 diabetes and 6 systemically-healthy controls). The cells were stimulated with bacterial LPS and glycated bovine serum albumin (AGE-BSA), both independently and in association. To study the role of TLR4 and RAGE signaling, these stimulations were performed in the presence and absence of specific inhibitors of RAGE and TLR4. We used direct counting in a hemocytometer and flow cytometry, respectively, to assess cell proliferation and 20 20 death. The expression of selected cytokines and receptors was studied by RTqPCR, whereas the effect of these stimuli on the modulation of T helper-type response was determined by flow cytometry. We observed increased cell survival in PBMCs from diabetic patients. Inhibition of RAGE and TLR4 had no marked effect on cell proliferation, metabolic activity and survival. Gene expression of CCL3 (MIP-1alpha) and CCR5 was discretely higher in PBMCs from non-diabetic patients and was not affected by RAGE or TLR4 signaling... (Complete abstract click electronic access below)

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

50

Gabert, Jean. "Analyse par transfert génique et mutagenèse in vitro des relations fonctionnelles existant entre le récepteur pour l'antigène des lymphocytes T et la molécule CD8." Grenoble 2 : ANRT, 1988. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37613728m.

Full text

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

Dissertations / Theses on the topic 'Sensibilisation de lymphocytes T in vitro'

Create a spot-on reference in APA, MLA, Chicago, Harvard, and other styles