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Dissertations / Theses on the topic 'Serpientes venenosas'
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1
Lazo, Manrique Fanny Elizabeth. "Purificación, caracterización y actividad biológica de una L-aminoácido oxidasa presente en el veneno de la serpiente Bothrops atrox "Jergón"." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2005. https://hdl.handle.net/20.500.12672/2102.
Full textAbstract:
Se ha purificado y caracterizado la L-Aminoácido oxidasa del veneno de la serpiente Bothrops atrox, empleando dos pasos cromatográficos, una columna de filtración molecular sobre Sephadex G-100 y otra de intercambio catiónico sobre CM-Sephadex C-50 equilibrada con buffer acetato de amonio 0,05M pH 6. El grado de purificación fue de 12,14 veces con una actividad específica de 4,13 U/mg. Esta enzima es una glicoproteína ácida (17 % de carbohidratos asociados), homodimérica de 127,879 daltons de peso molecular, formada por dos subunidades de 63,128 daltons y posee por lo menos un enlace disulfuro intracatenario, que es importante para su actividad. La enzima mostró un pH óptimo de 8,3 usando L-leucina como substrato, es inestable en el rango de pH alcalino a partir de 9,0; pierde actividad en presencia de Zn2+ y tolera tamperaturas hasta los 55ºC. Se demostró la pureza y antigenicidad de la enzima mediante inmunodifusión e inmunoelectroforesis, empleando suero antibotrópico polivalente. Así mismo el efecto antibacteriano tanto del veneno crudo como de la enzima purificada se evidenció utilizando la técnica de Grove sobre cultivos de Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Vibrio cholerae y Escherichia coli observándose que las bacterias Gram positivas son más susceptibles que las Gram negativas. Además el veneno crudo de B. atrox y LAO presentaron un efecto in vitro contra promastigotes de Leishmania braziliensis braziliensis con una CE50 de 7,82 y 1,33 μg/ml respectivamente y contra epimastigotes de Trypanosoma cruzi, con una CE50 de 7,95 μg/ml para el veneno crudo y 1,38 μg/ml para la enzima purificada. La enzima L-aminoácido oxidasa no tiene actividad hemorrágica sobre piel de ratones albinos, ni hemolítica sobre eritrocitos humanos lavados. Sin embargo produce edema, habiéndose calculado la DEM en 15,18 μg de proteína.
Palabras clave: L-aminoácido oxidasa, serpiente, enzima, Bothrops atrox, veneno.A L-Aminoacid oxidase enzyme was purified and characterized from Bothrops atrox snake venom by two steps. It used a Sephadex G-100 column and ion exchange on CM-Sephadex C-50 at pH 6. The purification grade was 12,14 folds with a specific activity of 4,13 U/mg. This enzyme with a molecular weight of 127,879 daltons as determined by gel filtration is a noncovalent dimmer consisting of two subunits with a molecular weight each of 63,128 daltons as determined by SDS-PAGE, with at least one intrachain disulfide bond that is important for its activity. The enzyme exhibited a optimun pH of 8,3 using L- leucine as substrate. It is an acid glicoprotein containing 17% carbohydrate, being thermoestable till 55 ºC, labil to alkaline pH and susceptible to presence of Zn 2+. The antigenicity and homogeneity of enzyme was demonstrated by inmunodiffusion and inmunoelectrophoresis using polivalent antibothropic antivenom. Beside antibacterial effect of whole venom as well as purified enzyme was demonstrated by Grove’s method on Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Vibrio cholerae and Escherichia coli grown cultures, being Gram positive bacterials, more susceptible than Gram-negative bacterials. Moreover B. atrox crude venom and its purified enzyme LAO, presented an in vitro effect against Leishmania braziliensis braziliensis promastigotes with an EC50 of 7,82 and 1,33 μg/ml respectively, and Trypanosoma cruzi epimastigotes with an EC50 of 7,95 ug/ml for whole venom and 1,38 μg/ml for purified enzyme. LAO does not have haemorragic nor hemolytic activities on mouse skin (20-22 g body weight) and human red blood cells respectively. However LAO produces edema with a DEM of 15,18 μg of protein. Key words: L-amino acid oxidase, snake, enzyme, Bothrops atrox, venom
Tesis
2
González, Kozlova Edgar Ernesto. "Purificación parcial y caracterización bioquímica de un factor de difusión del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox (Jergón)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2011. https://hdl.handle.net/20.500.12672/1421.
Full textAbstract:
Se aisló parcialmente una hialuronidasa del veneno de Bothrops atrox mediante dos pasos cromatograficos sobre DEAE Sephadex A-50 y Sephadex G-50, utilizando en ambos casos acetato de amonio 0,05M y pH 5,0. La enzima fue purificada 145 veces con un rendimiento de 72 % y por PAGE-SDS se obtuvo una banda proteica con un peso molecular de 110 kDa en condiciones reductoras y no reductoras. Se determinó la estabilidad de la actividad de esta enzima en distintos valores de pH en el tiempo, así como la neutralización de sueros anti-ofídicos de tipo IgG e IgY producidos en el Instituto Nacional de Salud-Perú y en el Laboratorio de Biología Molecular – UNMSM respectivamente.
La enzima revelo ser sensible a la temperatura, con un pH óptimo de 6,0 y encontrarse en cantidades bajas en el veneno. La actividad enzimática fue inhibida en mayor proporción por sueros anti-lachesicos que por sueros anti-botropicos, ensayos “in vitro” mostraron que incrementa la difusión del veneno en 50 %. Es inhibida totalmente por suero humano y dexametasona mientras que los ensayos con inhibidores demostraron que los residuos de Tyr y Cys son importantes para la actividad de esta enzima.
Palabras clave: Veneno, serpiente, Bothrops atrox, hialuronidasa, glicano hidrolasa.--- A hialuronidase was partially isolated from the venom of Bothrops atrox using DEAE Sephadex A-50 and Sephadex G-50, in both cases using ammonium acetate 0,05M pH 5,0 as buffer. The enzyme was purified with 145 fold, a yield of 72 % and a molecular weight of 110 kDa with and without 2-Mercaptoetanol by PAGE-SDS. The stability of the hialuronidase activity from the venom of the snake Bothrops atrox was defined at different pH values, as well the effect of anti-snakes serums of the IgG and IgY types produced by the National Institute of Health - Perú and the Laboratory of Molecular Biology-UNMSM respectively using the turbidimetric test Di Ferrante. This enzyme elucidate been sensitive to the temperature, optimum pH 6,0 and found at very low concentrations in the venom. The enzyme activity was inhibited in more proportion by the anti-lachesis-serums rather than anti-botropics-serums, also show to increase the venom diffusion in 50 %, besides of been inhibited totally by human-serum and dexametasona while the inhibitors assays showed that Tyr and Cys are important to the active site. Key words: Venom, snake, Bothrops atrox, hialuronidase, glycano hidrolase.
Tesis
3
Vivas, Ruíz Dan Erick. "Purificación y caracterización bioquímica de una enzima similar a trombina aislada del veneno de la serpiente peruana Bothrops barnetti (Viperidae) "sacarranca"." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2008. https://hdl.handle.net/20.500.12672/895.
Full textAbstract:
Se ha aislado una enzima similar a trombina del veneno de la serpiente peruana Bothrops barnetti mediante dos pasos cromatográficos sobre CM Sephadex C-50 y Sephadex G-100, en ambos casos utilizando Acetato de Amonio 0,05 M a pH 5,0. La enzima fue purificada 45 veces con un rendimiento de 14% y por PAGE-SDS se obtuvo una sola banda proteíca de 52 kDa en condiciones reductoras con 2β-Mercaptoetanol y de 48 kDa en condiciones no reductoras, determinándose que la enzima es de una sola cadena polipeptidica con al menos un enlace disulfuro. El tratamiento con N- glicosidasa (PNGasa F) determinó que es una glicoproteína con un 45% de contenido total de carbohidratos. La enzima mostró tener actividad coagulante sobre plasma citratado y fibrinógeno y actividad amidásica sobre BApNA y Chromozym TH, La potencia coagulante sobre fibrinógeno bovino fue equivalente a 131 unidades NIH de trombina/mg. La enzima es inhibida por PMSF y por el inhibidor de tripsina de soya calificándola como una serinoproteasa; el pH óptimo para la actividad amidolítica fue de 8,0 y es estable hasta los 40 ºC. Se demostró mediante inmunoelectroforesis e inmunodifusión la antigenicidad de la enzima frente al suero antibotrópico polivalente sobre plasma citratado (DE: 250 µl de antiveneno/ mg de enzima).
Palabras clave: Veneno, serpiente, enzima similar a trombina, Bothrops barnetti, coagulante.--- A thrombin- like enzyme was purified from Bothrops barnetti peruvian snake venom using CM Sephadex C-50 followed by Sephadex G-100, in both two cases with 0,05 M Amonium Acetate buffer pH 5,0. The enzyme was purified 45 fold with 14% of yield and the PAGE-SDS showed only protein band of 52 kDa under reducing condition with 2β-Mercaptoetanol and 48 kDa under non reducing condition indicating that the enzyme has a single polypeptide chain with disulfide bond. The PNGase treatment showed that it is a basic glycoprotein containing 45% total carbohydrates. The enzyme has coagulant activity on fibrinogen and citrated plasma and amidolytic activity on BApNA and Chromozym TH. The coagulant potency was equivalent to 131 NIH thrombin Units/ mg. In addition the enzyme is inhibited by PMSF and soybean trypsin inhibitor suggesting that is a serine proteinase. The enzyme had optimal amidolytic activity pH was 8,0 and is stable until 40 ºC. The antigenicity and neutralization of enzyme was demonstrated by inmunodiffusion and inmunoelectrophoresis with the polyvalent antibothropic serum on citrated plasma (ED: 250 µl of antivenom/ mg of enzyme). Key words: Venom, snake, enzyme, thrombin like, Bothrops barnetti, coagulant.
Tesis
4
Lerma, Romero Luis Mario. "Evaluación bioquímica y biológica de una hialuronidasa del veneno de la serpiente peruana Lachesis muta." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2006. https://hdl.handle.net/20.500.12672/820.
Full textAbstract:
En el presente estudio se han evaluado algunas características bioquímicas y biológicas de una hialuronidasa previamente encontrada en el veneno de Lachesis muta, para lo cual fue necesario optimizar el método de purificación.
Usando 50 mg de veneno disueltos en búfer acetato de amonio 0,05 M pH 5,0, la hialuronidasa fue separada empleando una cromatografía en Sephadex G-100 seguida de una columna de intercambio catiónico en CM Sephadex C-50, utilizando el mismo bufer como eluyente. En este sistema, la enzima se recuperó usando una gradiente de NaCl de 0 a 0,7 M, con un rendimiento de 39.02% y una purificación de 51,4 veces. El análisis de pureza por PAGE-SDS reveló una sola banda proteica con peso molecular de 65 kDa.
La enzima mostró un pH óptimo de 5,0, un Km de 34,4 µg de ácido hialurónico/ml y un Vmax de 40,9 µg de ácido hialurónico hidrolizado/minuto/mg. Así mismo, la hialuronidasa demostró una dependencia absoluta por los iones Cl- y Br-.
En cuanto a la actividad biológica, los ensayos realizados en placas de agar- sangre mostraron que la enzima actúa como un factor difusor que permite la hemólisis por acción de la fosfolipasa del propio veneno. Así también, se ha observado que la inyección por vía subcutánea de la enzima purificada en ratones, no causó ningún efecto hasta las 6 horas usando cantidades de 0,4 hasta 1,6 mg.--- In the present research some biochemical and biological characteristics of a hyaluronidase from the venom of Lachesis muta snake were evaluated. In this way the method for purification of this enzyme was improved. 50 mg of whole venom was disolved in 0.05 M amoniun acetate buffer pH 5.0 and applied to Sephadex G-100 gel filtration chromatography followed by CM Sephadex C-50 exchange chromatography using the same buffer. In the last system, the enzyme was recovered after a gradient of NaCl from 0 to 0,7 M with 51,4 folds and 39,02% of yield. The hyaluronidase was achieved as homogeneus band of protein by PAGE-SDS with 65 kDa of molecular weigth. The enzyme registered 5,0 as optimus pH, Km: 34,4 µg of hyaluronic acid/ml and Vmax: 40.9 µg hidrolizade hyaluronic acid/minute/mg. The enzyme showed a total dependence for Cl- and Br- ions. The biological activity assays using agar-blood plates showed the hyaluronidase was a spreading factor, because of hemolisis by phospholipase A2 ocurred using the total venom. In addition, any biological effect was observed after inoculation of 0,4 to 1,6 mg of the hyaluronidase on mice.
Tesis
5
Ruiz, Guevara Nora Cecilia. "Algunas propiedades catalíticas de la L-aminoácido oxidasa del veneno de la serpiente Bothrops atrox "jergón"." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2009. https://hdl.handle.net/20.500.12672/898.
Full textAbstract:
Se purificó la enzima L-aminoácido oxidasa (LAO) del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox “Jergón” y se determinaron sus propiedades cinéticas. La LAO fue purificada mediante dos pasos cromatográficos, una columna de filtración molecular empleando Sephadex G-75 y otra de intercambio catiónico con CM-Sephadex C-50. La enzima tuvo un peso molecular de 54.6 kDa calculado por PAGE-SDS. Entre los sustratos ensayados a pH 8.5, la LAO presentó mayor actividad específica sobre L-fenilalanina, y luego sobre L-leucina, L-metionina y L-arginina, estando su actividad máxima en un rango de pH de 6.9 a 9.6. Para cada sustrato se determinaron los valores de pH óptimo obteniéndose 8.1 con L-metionina, 8.9 con L-arginina, y 8.2 con L-fenilalanina. Para estos aminoácidos, se determinaron los parámetros cinéticos de Km, Vmax, Kcat y Kcat/Km a pH 7.5 y 8.5. De acuerdo a la eficiencia catalítica, la L-leucina fue el mejor sustrato a pH 8.5 (Kcat/km igual a 71.213 x 104 s-1 M-1) y a 7.5 (Kcat/km igual a 40.903 x 104 s-1 M-1). Asimismo se evaluó la inhibición enzimática a pH 8.5 utilizando ácido antranílico, ácido benzoico, ácido salicílico y ácido sulfanílico, determinándose el modelo de inhibición y los valores de Ki. Se encontró que el ácido antranílico tuvo el menor valor de Ki (0.0082 mM), ajustándose al modelo de inhibición no competitiva, el ácido benzoico fue considerado un inhibidor competitivo y los ácidos salicílico y sulfanílico fueron inhibidores de tipo mixto.An L-amino acid oxidase from Bothrops atrox venom was purified and its kinetic properties determinated. Purification procedure was carried out through two chromatography steps: a size exclusion chromatography on Sephadex G-75, followed by an ion exchange chromatography on CM-Sephadex C-50. This enzyme had a molecular weight of 54.6 kDa calculated by SDS-PAGE. Between substrates assayed to pH 8.5, LAO had higher specific activity on L-phenilalanine followed by L-leucine, L-metionine and L-arginine. These were in a range of pH 6.9 to 9.6 being optimum values of 8.1 for L-metionine, 8.9 for L-arginine, and 8.2 for L-fenilalanine. Kinetics parameters (Km, Vmax, Kcat and Kcat/Km) for these L-amino acids were determinated at pH 7.5 and 8.5. According to catalytic efficiency, we found that L-leucine was the best substrate at pH 7.5 (Kcat/km same to 40.903 x 104 s-1 M-1) and 8.5 (Kcat/km same to 71.213 x 104 s-1 M-1). By the way, we evaluated enzyme inhibition at pH 8.5 using anthranilic, benzoic, salicylic and sulphanylic acid, determinating the best model of enzyme inhibition as well as Ki values. The minimal Ki value was for anthranilic acid Ki (0.0082 mM), fitting it to a non-competitive model. Benzoic acid was considered a competitive inhibitor, while salicylic and sulphanylic acid showed mixed-type inhibition.
Tesis
6
Sandoval, Peña Gustavo Adolfo. "Propiedades bioquímicas e inmunológicas de una enzima similar a trombina aislada del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox ("jergón")." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2009. https://hdl.handle.net/20.500.12672/965.
Full textAbstract:
Se han determinado las principales propiedades bioquímicas e inmunológicas de la enzima similar a trombina (EST) de la serpiente peruana Bothrops atrox (“jergón”). Para este fin, la enzima fue purificada hasta la homogeneidad utilizando tres pasos cromatrográficos en Sephadex G-75, CM-Sephadex C-50 y Agarosa-PAB. Asimismo, se determinó el peso molecular por PAGE-SDS y el porcentaje de carbohidratos asociados mediante hidrólisis y análisis de hexosas, hexosaminas y ácido siálico. Luego se ensayaron las actividades fibrinocoagulante, amidolítica y esterásica, sobre fibrinógeno bovino, BApNA y BAEE, respectivamente, así como la hidrólisis sobre los sustratos cromogénicos S-2238, S-2251 y S-2266 y finalmente se realizó la identificación de la enzima aislada mediante la técnica de peptide mass fingerprinting. Para el análisis inmunoquímico, se inmunizaron conejos albinos con 150 µg de la enzima purificada a fin de obtener un suero hiperinmune anti-EST de B. atrox. Posteriormente se analizaron los patrones de reactividad inmunológica del suero contra la enzima purificada y los venenos de Bothrops atrox, Bothrops brazili, Lachesis muta y Crotalus durissus mediante la técnica de ELISA.
Como resultado del análisis bioquímico se determinó que la enzima constituye el 1.7% del veneno completo, siendo purificada 25.5 veces y con un rendimiento del 43.3% utilizando BApNA como sustrato. La enzima presenta un peso molecular de 29.6 kDa, del cual el 14.2% lo constituyen los carbohidratos asociados, asimismo la EST de B. atrox produjo coagulación del fibrinógeno bovino y presentó actividad sobre BAEE, BApNA, S-2238 y S-2266, siendo incapaz de hidrolizar el sustrato S-2251. El análisis mediante espectrometría de masas de los péptidos obtenidos por la hidrólisis de la EST de B. atrox permitieron relacionarla con la proteína venombina A, presentando una homología en secuencia del 75% con esta proteína. Al finalizar el protocolo de inmunización se obtuvo un suero hiperinmune anti-EST de B. atrox con un título de 64000, siendo evidencia del potencial inmunogénico de esta proteína. Por otro lado, los anticuerpos producidos reaccionaron de forma cruzada con los venenos completos de B. atrox (9.9%) y B. brazili (9.6%) y en menor intensidad con los de L. muta y C. durissus, con valores de 5.1% y 4.8%, respectivamente.We have determinated the main biochemical and immunological properties of a thrombin-like enzyme (TLE) isolated from Bothrops atrox Peruvian snake venom (“jergón”). In this concern, TLE was purified until homogeneity using three chromatographical steps on Sephadex G-75, CM-Sephadex C-50 and Agarose-PAB. Furthermore, molecular weight was determinate by PAGE-SDS and associated carbohydrates by hydrolysis and analysis of hexoses, hexosamines and sialic acid. Then, fibrinocoagulant, amidolytic and sterasic activities were measured on bovine fibrinogen, BApNA and BAEE, respectively, hydrolysis on S-2238, S-2251 and S-2266 chromogenic substrates, and finally molecular identity of this enzyme was determinated by peptide mass fingerprinting technique. For the immunochemical analyses, white rabbits were immunized with 150 µg of EST and a hyperimmune serum anti-TLE was obtained. Patterns of immunological reactivity were determined between this serum against TLE and venoms of Bothrops atrox, Bothrops brazili, Lachesis muta y Crotalus durissus using ELISA technique. As a result of biochemical analysis, we determined that this enzyme represents 1.7% of total venom and was 25.5-fold purified with a 43.3% yield, using BApNA as substrate. This enzyme had 29.6 kDa, where 14.2% was associated carbohydrates. The TLE of B. atrox produced coagulation of bovine fibrinogen and had enzymatic activity on BAEE, BApNA, S-2238 and S-2266, being unable to act on S-2251. Mass spectrometry analysis of hydrolyzed EST of B. atrox results on a 75% sequence homology with venombin A protein. At the final of immunization protocol, we obtained an anti-TLE hyperimmune serum with a title of 64000, which showed the potential immunogenicity of this protein. On the other hand, raised antibodies cross-reacted with total venoms of B. atrox (9.9%) y B. brazili (9.6%) and with less intensity with those from L. muta and C. durissus (5.1% and 4.8%, respectively).
Tesis
7
Agurto, Arteaga Andres Alonso. "Identificación de tres especies de serpientes venenosas peruanas responsables de accidentes ofídicos mediante amplificación isotérmica mediada por bucle múltiple (mLAMP-PCR)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2021. https://hdl.handle.net/20.500.12672/17325.
Full textAbstract:
Los accidentes ofídicos forman parte de las enfermedades tropicales desatendidas que
en ocasiones producen la muerte de las personas afectadas en un corto periodo de
tiempo. La primera línea de tratamiento lo constituyen los antivenenos, que neutralizan
la ponzoña en base en una reacción de reconocimiento específica, y considerando la
variabilidad de los componentes de las ponzoñas, se hace necesario identificar a la
serpiente involucrada en el accidente, con la finalidad de administrar el tratamiento
adecuado. En este trabajo, se buscó desarrollar un método molecular para la
identificación de algunas víboras involucradas en accidentes ofídicos en el Perú:
Bothrops atrox, Lachesis muta y Crotalus durissus, por medio de una amplificación
isotérmica mediada por bucle múltiple (mLAMP). Para ello, se extrajo ADN genómico a
partir de las mudas de las pieles de las serpientes consideradas en el estudio y se
amplificaron los genes mitocondriales Cytb, COI y 12S rRNA. Los productos fueron
secuenciados, analizados y utilizados para el diseño de los cebadores de la reacción
mLAMP, obteniendo para cada especie de serpiente los cebadores directo e inverso,
directo interno e inverso interno, y los cebadores del bucle, portando estos últimos
distintos fluoróforos para la identificación del producto. Finalmente, se estandarizó la
reacción en presencia de todos los conjuntos de cebadores, y 0,2 µM de polietilenimina
de bajo peso molecular. Los productos precipitados se observaron en un transiluminador
de luz UV, encontrando una fluorescencia diferencial según el ADN utilizado, con un
límite de detección a simple vista en el rango de 0,2 a 25 ng de ADN, en un tiempo de
reacción de 30 minutos. Tomando estos resultados, el presente método presenta un
gran potencial para la identificación de las principales especies de serpientes venenosas
peruanas en el contexto de un accidente ofídico.
8
Vivas, Ruíz Dan Erick. "Caracterización molecular de la enzima similar a trombina del veneno de la serpiente Bothrops barnetti y el rol de la N-glicosilación en su actividad enzimática." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/1588.
Full textAbstract:
Bothrops barnetti es una serpiente venenosa que habita las regiones de costa sierra y selva de la zona norte de Perú. La enzima similar a trombina de esta especie, denominada barnetobina, fue estudiada a partir de la purificación de los ácidos nucleicos así como de la proteína misma para determinar sus características moleculares y funcionales. La secuencia del cDNA de la barnetobina de 750 pb codifica 233 residuos aminoacídicos, los cuales conservan dominios comunes con las serinoproteasas. La barnetobina muestra homología con otras enzimas similares a trombina de veneno de serpientes donde fueron identificados los aminoácidos correspondientes al sitio catalítico y también los subsitios de unión a sustrato S1, S2 y S3. Además, se encontró tres motivos para N-glicosilación. La enzima nativa purificada es una glicoproteína monomérica que bajo condiciones reductoras y no reductoras presenta las dimensiones de 52 kDa y 48 kDa respectivamente, las cuales decrecen a 27 kDa después de la deglicosilación con PNGasa F. La barnetobina mostró actividad catalítica sobre fibrinógeno bovino, plasma y fibrinógeno humano, BApNA, TAME, BAEE y Chromozym TH; asimismo, produjo desfibrinación cuando fue suministrada a ratones por vía subcaudal. La proteasa logró liberar rápidamente el fibrinopéptido A del fibrinógeno humano. La actividad coagulante específica de la enzima fue equivalente a 251,7 NIH U/mg de trombina sobre fibrinógeno bovino. Las actividades amidásica y coagulante fueron inhibidas por el PMSF, el inhibidor de tripsina de soya y el DTT; en contraste, el 2β- mercaptoetanol, TLCK, EDTA y la heparina tuvieron poco o ningún efecto sobre la actividad amidásica. En este estudio se demostró la importancia de los carbohidratos N-ligados sobre la actividad similar a trombina de la barnetobina, la cual perdió su actividad biológica y enzimática cuando los carbohidratos fueron removidos. Se concluye que la barnetobina es una serinoproteasa coagulante del fibrinógeno cuyos azúcares asociados estarían involucrados en la estabilidad enzimática y la unión a sus sustratos.Tesis
9
Inga, Arellano Rosalina Rosio. "Caracterización biológica y acción de inhibidores de una fosfolipasa A2 del veneno de la serpiente peruana Lachesis muta." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2009. https://hdl.handle.net/20.500.12672/896.
Full textAbstract:
El envenenamiento por la serpiente Lachesis muta presenta una fisiopatología compleja debido a la presencia de un numeroso grupo de enzimas como la fosfolipasa A2 (FLA2). Por ello, en el presente estudio se ha investigado algunas propiedades bioquímicas de la FLA2 y sus efectos biológicos in vitro e in vivo. Inicialmente la enzima fue purificada mediante dos pasos cromatográficos un CM-Sephadex C-50 seguido por un Sephadex G-50, obteniéndose un factor de purificación de 55.3 veces con un rendimiento de 34.1% y se obtuvo una única banda proteica de 18749 Da, empleando la técnica de PAGE-SDS en condiciones reductoras y no reductoras, demostrándose que la FLA2 es una proteína monomérica. La enzima es termoestable manteniendo su actividad total a 100°C por 10 minutos, es además una enzima dependiente del ion calcio y es fuertemente inhibida por glutation, cisteína, EDTA y PMSF reduciendo su actividad hasta más del 50%.
En cuanto a su acción biológica, se obtuvo que la Dosis hemolítica media (DH50) es 4.35µg y de 67.6µg para la enzima pura y el veneno respectivamente por lo que FLA2 es 15.5 veces más hemolítica que el veneno total. Así mismo se ha demostrado que la dosis miotóxica mínima (DMM) fue muy baja con un valor de 125, 89 μg/ml mientras que para el veneno crudo fue de 144,21 μg/ml. Además, la dosis edemática mínima (DEM) de la enzima fue 91.5 μg. Por otra parte la enzima no mostró actividad hemorrágica usando hasta 30 μg pero en cambio, si mostró tener acción anticoagulante retardando el tiempo de coagulación del plasma citratado a medida que se incremento la concentración de FLA2.
Adicionalmente las pruebas de inmunodifusión e inmunoelectroforésis revelaron que FLA2 tuvo reactividad inmunogénica contra el antiveneno lachésico monovalente (INS-Perú), así como una neutralización parcial de la actividad enzimática y hemolítica por acción de dicho suero antiofídico.The Lachesis muta’s envenomations induce a complex physiopathology due to the presence of numerous enzymes group such as Phospholipase A2 (PLA2). For this reason, in the present study have been investigated some biochemistries’ properties of PLA2 and its in vitro and in vivo biologics effect. Initially, the enzyme was purified in two chromatographics steps, CM-Sephadex C-50 followed by Sephadex G-50, obtaining a purification factor of 55.3 times and with a yield of 34.1% and a unique protein band of 18749 Da was obtained by SDS-PAGE analysis under reducing and non-reducing conditions, indicating that PLA2 is a monomeric protein. The protein is thermostable maintaining its total activity until 100ºC per 10 minutes, so, it is a Calcium ion depending protein and the activity was strongly inhibited by glutation, cistein, ESTA and PMSF which reduce until more 50% of PLA2 activity. As far as its biologic activity was obtain that Media Hemolytic Doses (DH50) was 4.35µg and 67.6µg to pure enzyme and crude venom respectively, this indicate that PLA2 is 15,5 times more hemolytic than crude venom. Likewise, had demonstrated that Minimum Miotoxic Doses (MMD) is very low to PLA2 (125. 89 μg/ml) while to crude venom was 144,21 μg/ml. The enzyme’s Minimum Edematic Doses (MED) was 91.5 μg. For another hand, the PLA2 didn´t show any hemorrhagic activity until 30 μg but it showed has anticoagulant activity on citrated plasma when the PLA2 concentration was increasing. Additionally, the inmunodiffusion and inmunoelectrophoresis probes showed PLA2 had inmunogenic reactivity against anti lachesic nonovalent serum (INS-Perú), as well as a partial enzymatic activity and hemolytic neutralization.
Tesis
10
Mendoza, Fernández Julio César. "Producción de anticuerpos policlonales inmunoglobulina y, en huevos de gallinas inmunizadas con el veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox (jergón)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2010. https://hdl.handle.net/20.500.12672/871.
Full textAbstract:
El ofidismo como problemática de salud en el Perú, requiere ser atendido con estudios dirigidos a optimizar la acción de los antivenenos producidos comercialmente y además, desarrollar nuevas tecnologías destinadas a este propósito. En este aspecto, la producción de inmunoglobulina Y específica (IgY) de origen aviar es una alternativa frente a los antivenenos equinos, y es el tema en la presente investigación. Se inmunizaron gallinas ponedoras de la raza Light Brown Leghorn con 500 µg del veneno de Bothrops atrox, emulsificado con adyuvante de Freund, siguiendo la aparición de anticuerpos en suero con la técnica de inmuno difusión doble. Los anticuerpos aviares fueron aislados de la yema de huevos que contenían los niveles más altos de IgY específica, determinados previamente por la técnica de ELISA, utilizando precipitación negativa con ácido caprílico y un paso adicional de precipitación positiva con sulfato de amonio.
La masa de anticuerpos recuperados fue de 8,5 ± 1,35 mg/mL de yema habiéndose determinado en 8,3% la cantidad de IgY específica mediante cromatografía de afinidad en una columna de Sepharosa 4B-veneno. El antiveneno aviar tuvo una DE50 de 575 µL de antiveneno/mg de veneno y una potencia de 1,74 mg de veneno/mL de antiveneno aviar. Asimismo, los ensayos de reactividad cruzada mostraron que el veneno de Bothrops brazili comparte más epítopes comunes con el veneno de Bothrops atrox ya que se obtuvo un valor de 46% de reactividad cruzada en tanto que los venenos de Bothrops pictus y Bothrops barnetti tuvieron valores de 41% y 37% respectivamente; se encontró además que los venenos de Crotalus durissus (12%) y Lachesis muta (19%) tuvieron una baja reactividad cruzada con el veneno en estudio.Ofidism as a health problem in Perú requires to be attended either optimizing commercial antivenom potency and developing news technologist on this. Production of specific avian immunoglobulin Y is an alternative in relationship IgG horse antibodies, which is the main point of this research. Laying Light Brow Leghorn chickens were immunizated with 500 µg of Bothrops atrox snake venom emulsificated with Complete Freund’s adjuvant, and the IgY antibodies production was evaluated with the double immunodiffusion method. The avian antibodies were isolated from egg yolk which contained high level of specific IgY, calculated by ELISA method. Using caprylic acid negative precipitation and ammonium sulfate positive precipitation, mass antibodies recovery was 8,5 ± 1,35 mg/ml of yolk and after step on sepharosa 4B-venom affinity chromatographic, specific IgY recovery was 8,3% . The avian antivenom had a ED50: 575 µL antivenom/mg of venom and potency was 1,74 mg of venom/ml of avian antivenom. In addition, the crossing reactivity assays showed that Bothrops brazili venom share more common epitope with Bothrops atrox venom with a value of 46% of crossing reactivity whilest the Bothrops pictus and Bothrops barnetti venoms had values of 41% and 37% respectly; in contrast the venoms of Crotalus durissus (12%) and Lachesis muta (19%) had low crossing reactivity with Bothrops atrox venom.
Tesis
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Bellido, More Candy Christie. "Purificación y caracterización de una metaloproteasa hemorrágica del veneno de la serpiente del Perú Bothrops pictus (Tschudi, 1845) "Jergón de la Costa"." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2014. https://hdl.handle.net/20.500.12672/3751.
Full textAbstract:
Los venenos de serpientes del género Bothrops tienen como característica la presencia de enzimas proteolíticas, cuya acción biológica es muy variada y que contribuye con la aparición de hemorragias, desórdenes en la coagulación y necrosis. El objetivo de este trabajo fue purificar y caracterizar una de las enzimas proteolíticas presentes en el veneno de la serpiente peruana Bothrops pictus (Serpentario “Oswaldo Meneses”-UNMSM). El veneno fue resuspendido en buffer Acetato de amonio 0,1 M pH 5 y se purificó mediante dos pasos cromatográficos sobre Sephadex G-75 y DEAE Sephadex A-50. La enzima fue purificada 1,73 veces con un rendimiento del 1,2% y por PAGE-SDS se obtuvo una sola banda proteíca de 62 kDa en condiciones no reductoras. Asimismo, con el mismo peso molecular se observó una banda de digestión sobre los geles de poliacrilamida con gelatina. En relación a la actividad biológica, se determinó que la dosis hemorrágica mínima (DHM) para la enzima purificada fue de 0,226 μg, es decir con un aumento de 2,4 veces la actividad hemorrágica del veneno crudo. La enzima fue termoestable hasta los 55 ºC y presentó un pH óptimo de 7,5. Además, se mostró que la enzima fue fuertemente inhibida por EDTA, 2-mercaptoetanol y DTT siendo dependiente de los iones zinc y magnesio. La enzima fue totalmente neutralizada por el suero botrópico polivalente (INS–Perú) y mostró antigenicidad mediante el ensayo de inmunodifusión.Tesis
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Seifert, Dávila Wolfram Heinrich. "Caracterización bioquímica y estructural de una enzima fosfolipasa A2 del veneno de la serpiente peruana Bothrops pictus “Jergón de costa”." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017. http://cybertesis.unmsm.edu.pe/handle/cybertesis/6078.
Full textAbstract:
Purifica la isoforma ácida presente en el veneno de Bothrops pictus mediante el uso de dos pasos cromatográficos: CM Sephadex C-50 seguido de Superdex 75 10/300 GL, lográndose un rendimiento de 7.5% y un factor de purificación de 19.8 veces. Se obtiene una sola banda con un peso molecular de 16.6 kDa en condiciones reductoras y 15.2 kDa en condiciones no reductoras empleando la técnica de PAGE-SDS. Se determina el peso molecular en solución mediante la técnica de dynamic light scattering obteniéndose una única población de proteínas monodispersa de radio hidrodinámico de 4.254 ± 0.778 (nm) correspondiente a un peso molecular de 19.7 ± 3.7 kDa. La enzima BpicPLA2ácida es altamente termoestable debido a que mantiene casi intacta su actividad incluso después de incubarla por 10 min a 100 ⁰C. El ion que incrementa en mayor medida su actividad es el calcio y el agente con mayor inhibición es el ditiotreitol. Los estudios de dicroísmo circular demostraron que la estructura secundaria predominante en la BpicPLA2ácida son las α hélices. La secuencia de aminoácidos de BpicPLA2ácida tomada del GenBank muestra la presencia de un sitio catalítico (His48, Asp49, Tyr52 y Asp99) conservado, mientras que el sitio de unión a calcio no es completamente conservado, debido a una mutación en la posición 28 de la tirosina por fenilalanina. El modelo de la estructura tridimensional reportado, demuestra que la isoforma BpicPLA2ácida es una enzima que pertenece a la familia de las fosfolipasas A2 de la clase II y que además presenta una mayor relación evolutiva con otras PLA2 ácidas.Tesis
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Lazo, Manrique Fanny Elizabeth. "Caracterización bioquímica, biológica y molecular de la L-aminoácido oxidasa del veneno de la serpiente peruana Bothrops pictus "Jergón de Costa"." Doctoral thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2014. https://hdl.handle.net/20.500.12672/3898.
Full textAbstract:
Se ha purificado y caracterizado la L-Aminoácido oxidasa del veneno de la serpiente Bothrops pictus “Jergón de costa” (BpicLAAO), mediante cromatografía de filtración molecular sobre Sephadex G-100, seguida de una cromatografía de intercambio catiónico sobre CM Sephadex C-50, ambas equilibradas con buffer acetato de amonio 0,05M pH 6.
El grado de purificación fue de 22,02 veces con una actividad específica de 4,25 U/mg. La pureza de la proteína fue evaluada por HPLC en fase reversa y mediante PAGE-SDS. Es una proteína ácida conteniendo 18,7 % de carbohidratos asociados, con un peso molecular de 132,27 kDa, por cromatografía de filtración y de 65,2 y 58,6 kDa por PAGESDS bajo condiciones reductoras y no reductoras respectivamente, evidenciando que se trata de una enzima homodimérica con al menos un puente disulfuro intracatenario, el cual es importante para su actividad. El peso de la enzima disminuyó a 47 kDa después del tratamiento con PNGasa F. La enzima mostró un pH óptimo de 8,5 usando L-leucina como substrato, es inestable en el rango de pH alcalino a partir de 9,0; tolera hasta los 55 ºC. La actividad enzimática disminuyó considerablemente en presencia de Zn2+, glutatión y 2-mercaptoetanol, lo que sugiere la presencia de por lo menos un puente disulfuro intracatenario para su actividad. BpicLAAO presenta actividad hemorrágica sobre piel de ratones albinos siendo la dosis hemorrágica mínima de 2,79 μg de proteína, produce edema, habiéndose calculado la dosis edemática mínima en 7,80 μg de proteína; también inhibe la agregación plaquetaria inducida por ADP de una manera dosis dependiente. El efecto antibacteriano tanto del veneno crudo como de la enzima purificada se evidenció sobre cultivos de bacterias Gram positivas y Gram negativas, observándose que las Gram positivas son más susceptibles que las Gram negativas. Se demostró la antigenicidad de la enzima por inmunodifusión e inmunoelectroforesis, usando suero antibotrópico polivalente. Asímismo mediante el análisis molecular a partir de las secuencias de cDNA de LAAO de B. pictus se obtuvo una secuencia de 1494 pb que codifica un péptido señal y una proteína madura de 487 residuos aminoacìdicos. BpicLAAO, muestra homología con otras enzimas similares de venenos de serpientes habiéndose identificado los aminoácidos correspondientes a los dominios de unión al FAD, de unión al substrato y el dominio helicoidal. Encontrándose además dos motivos para N-glicosilación.
Palabras clave: enzima, flavoproteína, N-glicosilación, secuencia nucleotídica, serpiente, veneno.Tesis
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Inga, Arellano Rosalina Rosio. "Caracterización estructural, biológica y molecular de una isoenzima básica de Fosfolipasa A2 del veneno de la serpiente peruana Lachesis muta (Linnaeus, 1766)." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2010. https://hdl.handle.net/20.500.12672/2120.
Full textAbstract:
En la presente investigación se estudian las propiedades, bioquímicas, biológicas, inmunológicas y moleculares de una isoforma básica de Fosfolipasa A2 presente en el veneno de la serpiente peruana Lachesis muta(PLA2básicaL.muta). La purificación se realizó mediante cromatografía de intercambio iónico, filtración y de alta performance; la enzima fue purificada 41,2 veces con un rendimiento de 64%. Se obtuvo una única banda proteica de 14,7 kDa por PAGE-SDS en condiciones reductoras y no reductoras, demostrando ser una proteína monomérica. Su pH óptimo es de 7,8 y es fuertemente inhibida por el PMSF, EDTA y glutatión. En cuanto a su acción biológica, se obtuvo la dosis hemolítica media (DH50) en 4,35µg, la dosis miotóxica mínima (DMM) en 18,96µg/ml y la dosis edemática mínima (DEM) 23,56μg. La enzima no mostró actividad hemorrágica ni acción anticoagulante. Adicionalmente las pruebas de inmunodifusión e inmunoelectroforesis revelaron que PLA2básicaL.muta es reconocida e inhibida parcialmente por el suero monovalente antilachésico (INSPerú).
Empleando la metodología de RT-PCR se obtuvo la secuencia completa del cDNA de PLA2básicaL.muta, con 445 pb; análisis bioinformáticos indican que la secuencia posee un marco de lectura abierta de 414 nucleótidos que codifica un péptido señal de 16 aminoácidos y una proteína madura de 122 residuos, el peso molecular fue de 13,86 kDa y un pI de 8,316. La secuencia aminoacídica, contiene residuos conservados para el sitio catalítico, His48, Asp49, Tyr52 así como para unión al Ca+2, Tyr18, Gly30 y Gly32. El modelaje tridimensional de la PLA2, muestra que está formada por tres hélices-, una lámina- y un lazo de unión al Ca+2. PLA2básicaL.muta mostró alta homología estructural con otras sPLA2 de venenos de serpientes. Finalmente, los estudios revelan que la PLA2básicaL.muta pertenece al grupo sPLA2 [Asp49] básicas de bajo peso molecular. Este es el primer estudio que correlaciona la estructura y función de una enzima proveniente del veneno de una serpiente peruana.
Palabras claves: Fosfolipasa A2, Isoenzima, Lachesis muta, sitio farmacológico, transcrito.--- In the present research the biochemical, biological, immunological, as well as molecular properties of a basic isoform of Phospholipase A2 from venom of peruvian snake Lachesis muta (PLA2BasicL.muta), were studied. This enzyme was purified using ion exchange, filtration and high performance chromatographical steps, respectively. The enzyme was purified 41,2 times with a yield of 64%. SDA-PAGE analysis showed a unique protein band of 14,7 kDa under reducing and no reducing conditions indicating that the enzyme is a single polypeptide chain. Furthermore, the enzyme had a optimal pH of 7,8 and was inhibited by PMSF, EDTA and glutation. In relation to its biologic activity, a Medium Hemolytic Doses (DH50) of 4,35µg/tube, Minimum Miotoxic Doses (MMD) of 18,96µg/ml and the Minimum Edematic Doses (MED) of 91,5μg were obtained. For another hand, the PLA2 didn´t show either hemorrhagic or anticoagulant activities, and was recognized and partially inhibited by monovalent antilachesic serum (INS-Perú) by immunodiffusion and immunoelectrophoresis. Using RT-PCR methodology and bioinformátics analysis the complete cDNA sequence of PLA2basicL.muta with 445 bp and an open reading frames of 414 nucleotides, were obtained, which encodes a peptide signal of 16 amino acids and a matured protein of 122 residues with 13, 86 kDa and a pI value of 8,3, calculated by in silico analysis. The amino acidic sequence contains conserved residues of His48, Asp49, Tyr52 in the catalytic site, as well as Tyr18, Gly30 y Gly32 in the Ca+2 -binding site. Three-dimensional model of PLA2basicL.muta showed that was conformed by three α-helix, one β-sheet and one Ca+2 -binding ribbon. PLA2basicL.muta shows a high structural homology with other snake venom phospholipases. Finally, studies reveal that PLA2basicL.muta belongs to the group of lower molecular weigh basic sPLA2 [asp49]. This work is the first study that correlate the structure and function of a Peruvian snake venom enzyme. Key words: Phospholipase A2, Isoenzyme, Lachesis muta, pharmacologic site, transcript.
Tesis
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Delgadillo, Arone Julio César. "Caracterización bioquímica y biológica de una hialuronato glicanohidrolasa del veneno de la serpiente peruana Bothrops brazili “Jergón shushupe”." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/15637.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autorBothrops brazili conocida como “jergón shushupe” es una serpiente que habita en la selva amazónica del Perú y países vecinos. En el veneno de esta serpiente se ha encontrado una proteína con actividad hialuronato glicanohidrolasa o hialuronidasa. La purificación se realizó en dos pasos cromatográficos utilizando columnas de Sephadex G-75 y DEAE Sephadex A-50. Se obtuvo una purificación de 33 veces con un rendimiento de 54,5 % y una recuperación de proteína activa equivalente a 1,66 %. Esta enzima es una proteína básica monocatenaria con un peso molecular de 110 kDa y pH óptimo fue de 5,5. La actividad enzimática a temperatura ambiente, después de 72 horas, se mantuvo en 50 % y fue completamente inactivada a las 192 horas. La actividad de la hialuronidasa se incrementó un 38,9 % por la adición de iones magnesio (150 mM), en tanto que el EDTA, el iodoacetato y el aminoácido glicina produjeron fuertes inhibiciones. La hialuronidasa de B.brazili (HBra) es muy antigénica formando una sola línea de precipitación frente al antiveneno polivalente (INS-Perú). Se concluye que esta enzima es un factor difusor del veneno por su acción en los procesos hemolíticos y hemorrágicos ensayados in vitro e in vivo. La proteína carece de toxicidad y fue neutralizada tanto por el antiveneno botrópico polivalente como el lachésico monovalente.
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Chavez, Paredes Karen Marleni, and Luna Renatto Roberto Morillo. "Plan de marketing para el lanzamiento de un centro especializado en animales silvestres." Master's thesis, Universidad del Pacífico, 2018. http://hdl.handle.net/11354/2157.
Full textAbstract:
La presente propuesta para el lanzamiento del Centro Especializado en Animales Silvestres identifica la demanda latente e insatisfecha de un espacio académico–científico de animales silvestres para el desarrollo integral de los programas de medicina veterinaria, zootecnia, biología, ecoturismo, ingeniería ambiental, ingeniería forestal, ciencias ambientales, salud pública y demás carreras que incluyan el estudio de fauna silvestre en sus planes de estudio. El centro iniciará sus operaciones con el estudio de una especie muy exótica, los ofidios (serpientes venenosas y no venenosas). A mediano y largo plazo, se buscará crecer a través del desarrollo de productos. A partir del segundo año, se incluirá el estudio de otros reptiles, tales como las iguanas y las tortugas. Para el tercer año, se ampliará al estudio de ranas y lagartos de la selva amazónica peruana.
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Proleón, Torres Alex Daniel. "Caracterización funcional e inmunológica de una fosfolipasa A2 básica miotóxica del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2020. https://hdl.handle.net/20.500.12672/15681.
Full textAbstract:
La serpiente Bothrops atrox, la mayor responsable de los accidentes ofídicos en el
Perú, desencadena una fisiopatología por envenenamiento que se ve caracterizada en
gran parte por la miotoxicidad. Por ello, en la presente tesis se ha aislado al
componente responsable de la miotoxicidad del veneno de B. atrox para estudiar sus
principales características biológicas e inmunológicas. La proteína fue purificada en un
paso cromatográfico, empleando una resina CM-Sephadex C-25, mediante una
gradiente de NaCl 0.6 M. El análisis por SDS-PAGE, mostró una sola banda de
aproximadamente 13 kDa bajo condiciones reductoras, mientras que una banda ancha
de 24 kDa fue observada bajo condiciones no reductoras. La proteína aislada mostró
actividad enzimática de fosfolipasa A2, tanto para retardo de coagulación de yema de
huevo como para el ensayo espectrofotométrico de fosfatidilcolina. En cuanto a su
dosis miotóxica mínima, esta fue 12.30±0.95 µg, mientras que para el veneno total, el
valor fue 23.50±1.09 µg. La dosis edemática mínima fue de 26.00±1.15 µg. Además, la
enzima presento actividad anticoagulante. Por otro lado, se logró obtener un suero
anti-miotoxina de B. atrox, producido en conejos, con un título de 16 000. Al realizar
los ensayos de neutralización del suero anti-miotoxina, un suero anti-B.atrox y el suero
antibotrópico del INS, se obtuvieron como dosis efectiva media 0.34 mL de suero/mg
de miotoxina, 0.93 mL de suero/mg de miotoxina y 0.1 mL de suero/mg de miotoxina,
respectivamente. Finalmente, los anticuerpos anti-miotoxina reaccionaron de forma
cruzada con los venenos de B. atrox (1:8000), Bothrops brazili (1:10 000), Bothrops
pictus (1:4000) Lachesis muta (1:2000) y Crotalus durissus (1:1000). De esta forma, se
logró purificar y caracterizar funcionalmente una fosfolipasa miotóxica del veneno de
B. atrox, así como obtener anticuerpos a partir de esta para obtener más información
acerca de su inmunogenicidad.Perú. Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado. PCONFIGIB-17101271.
Perú. Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado. PCONFIGI-B18100081
Perú. Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología Fondo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico (Fondecyt). N°168-FONDECYT-2017
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Electo, Oshiyama Jorge Alejandro. "Evaluación de reactividad cruzada de los venenos de las serpientes Crotalus atrox y Trimeresurus puniceus frente al antiveneno botrópico peruano mediante ensayos de inmunoafinidad." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2021. https://hdl.handle.net/20.500.12672/17388.
Full textAbstract:
El accidente ofídico u ofidismo, es considerado una enfermedad tropical
desatendida que afecta a las poblaciones rurales de los continentes de Asia, África
y América. El único tratamiento científicamente válido para combatir el ofidismo es
la administración de un antiveneno, el cual es una mezcla de anticuerpos
producidos mediante la inmunización de animales con venenos de serpientes
relevantes en la región y este posee la capacidad de neutralizar la actividad tóxica
de los venenos con alta eficacia; sin embargo, existe poca disponibilidad de
antivenenos en múltiples regiones del mundo, lo cual afecta principalmente a las
poblaciones más vulnerables de Asia y África. Frente a esto, diversos estudios
reportan que los antivenenos poseen la capacidad de reconocer componentes
proteicos de venenos de especies que no han sido utilizadas en su producción,
fenómeno conocido como reactividad cruzada y este proceso puede ser
aprovechado para extender el alcance de los venenos disponibles, a regiones
carentes de antivenenos. El Instituto Nacional de Salud (INS) produce tres
antivenenos comerciales los cuales son utilizados para los géneros de serpientes
más importantes del Perú. En el presente informe se presenta la utilización del
antiveneno botrópico polivalente para la realización de ensayos de reactividad
cruzada de los venenos de las serpientes foráneas Crotalus atrox y Trimeresurus
puniceus mediante el diseño y aplicación de una metodología de cromatografía de
afinidad, con el fin de crear una matriz de inmunoafinidad para estudiar la
interacción entre los venenos y sus respectivos antivenenos.Perú. Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología. Fondo Nacional de Desarrollo Científico, Tecnológico y de Innovación (FONDECYT). Contrato N° 101-2018-FONDECYT-BM-IADT-AV
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Seifert, Dávila Wolfram Heinrich. "Caracterización bioquímica y estructural de una enzima fosfolipasa A2 del veneno de la serpiente peruana Bothrops pictus “Jergón de costa”." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017. https://hdl.handle.net/20.500.12672/6078.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autorPurifica la isoforma ácida presente en el veneno de Bothrops pictus mediante el uso de dos pasos cromatográficos: CM Sephadex C-50 seguido de Superdex 75 10/300 GL, lográndose un rendimiento de 7.5% y un factor de purificación de 19.8 veces. Se obtiene una sola banda con un peso molecular de 16.6 kDa en condiciones reductoras y 15.2 kDa en condiciones no reductoras empleando la técnica de PAGE-SDS. Se determina el peso molecular en solución mediante la técnica de dynamic light scattering obteniéndose una única población de proteínas monodispersa de radio hidrodinámico de 4.254 ± 0.778 (nm) correspondiente a un peso molecular de 19.7 ± 3.7 kDa. La enzima BpicPLA2ácida es altamente termoestable debido a que mantiene casi intacta su actividad incluso después de incubarla por 10 min a 100 ⁰C. El ion que incrementa en mayor medida su actividad es el calcio y el agente con mayor inhibición es el ditiotreitol. Los estudios de dicroísmo circular demostraron que la estructura secundaria predominante en la BpicPLA2ácida son las α hélices. La secuencia de aminoácidos de BpicPLA2ácida tomada del GenBank muestra la presencia de un sitio catalítico (His48, Asp49, Tyr52 y Asp99) conservado, mientras que el sitio de unión a calcio no es completamente conservado, debido a una mutación en la posición 28 de la tirosina por fenilalanina. El modelo de la estructura tridimensional reportado, demuestra que la isoforma BpicPLA2ácida es una enzima que pertenece a la familia de las fosfolipasas A2 de la clase II y que además presenta una mayor relación evolutiva con otras PLA2 ácidas.
Tesis
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Mestas, Valdivia Bertha Roxana. "Estructura primaria de una PLA2 básica, miotóxica local y sistémica, deducida a partir de mRNA extraído de veneno total de Crotalus durissus terrificus." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2013. https://hdl.handle.net/20.500.12672/14124.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autorLogra aislar el mRNA que codifica la proteína PLA 2, utilizando una técnica simple. Esto es, amplificando el cDNA que codifica la PLA 2 D49 a través de RT-PCR. El análisis del cDNA codificador de PLA 2 muestra que esta tiene un marco de lectura abierto de 414 pares de bases que codifican un polipéptido de 138 aminoácidos, con un péptido señal de 16 residuos de aminoácidos, seguido de una secuencia polipeptídica de 122 aminoácidos que corresponden a la PLA 2. El análisis también muestra que la proteína está compuesta por 33 aminoácidos con carga: 11 aminoácidos ácidos, 22 aminoácidos básicos, 44 aminoácidos polares y 28 aminoácidos hidrofóbicos, con un punto isoeléctrico de 8.58 y una masa molecular de 14312.52 Da. El análisis de homología y árbol filogenético muestran que esta PLA 2 presenta un alto grado de homología y forma parte de las PLA 2 básicas N6F24D49. Además, se logró purificar dos isoformas de PLA 2 (fracciones V y VI) empleando cromatografía en HPLC de fase reversa con un alto grado de pureza, según lo revelado por la SDS-PAGE. Al realizar la repurificación de la fracción V, esta se muestra como un monómero, pues el espectro revela la presencia de una sola cadena polipeptídica con una masa molecular de 14238.71 Da. Según el análisis biológico, la PLA 2 V es capaz de elevar los niveles de CK plasmáticos cuando es inyectada por vía intramuscular y por vía intravenosa.
Tesis
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Delgadillo, Arone Julio César. "Caracterización bioquímica, biológica, molecular y funcional de la enzima hialuronidasa del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox “Jergon de la Selva”." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2019. https://hdl.handle.net/20.500.12672/10844.
Full textAbstract:
Reporta un estudio a nivel bioquímico, biológico, funcional y estructural de la enzima hialuronidasa del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox “Jergon de la selva”, denominada, Hyal-Ba. Se utilizaron tres pasos cromatográficos para purificar esta enzima, empleando como primer paso una columna de intercambio iónico sobre DEAE Sephadex A-50 seguido de una columna de exclusión molecular sobre Sephadex G-100 y finalmente una columna de Sephadex G-75, ambas equilibradas con buffer acetato de amonio 0.05 M pH 5. El rendimiento de la actividad de Hyal-Ba fue de 29.59 % con un incremento de 36 veces la actividad específica. La enzima representa el 0.86% del contenido total de proteínas en el veneno de B. atrox. Los análisis de SDSPAGE, HPLC y N- Terminal confirman el alto grado de pureza de la enzima. Mediante PAGE-SDS esta enzima mostró 1 banda principal de 69 kDa de peso molecular y su pH óptimo fue de 6.0. A temperatura ambiente la actividad enzimática llega ser nula a las 144 horas. La actividad enzimática se incrementó un 40 % por la adición del ion magnesio (150 mM) y fue inhibida en un 97 y 88 % por EDTA y TLCK (12 mM) respectivamente. En las pruebas biológicas de toxicidad, hemorrágica y edemática se observa que la enzima carece de actividad tóxica, pero incrementa la acción hemorrágica del veneno total sobre la piel de los ratones albinos, no obstante, Hyal-Ba bajo la actividad edemática al disminuir significativamente el edema cuando fue agregada junto con la LAAO. También se midió su inmunoreactividad frente al antiveneno botrópico polivalente por inmunodifusión. Para el análisis de la secuencia nucleotídica de Hyal-Ba se realizaron protocolos de extracción, purificación y obtención de mRNA a partir de veneno fresco, luego su conversión en cDNA y su posterior amplificación por PCR. Los estudios moleculares in silico identificaron una secuencia de 2020 pb que codifica una proteína madura de 429 aminoácidos. Adicionalmente el análisis de su estructura primaria reveló 50 kDa como peso molecular y 9.19 como punto isoeléctrico. Se encontró además 6 probables sitios de N-glicosilación (Asn67, Asn103, Asn111, Asn153, Asn357y Asn401).Perú. Ministerio de la Producción. Programa Nacional de Innovación para la Competitividad y Productividad (Innóvate Perú), según contrato N° 131-FINCyT-IB-2013. Perú. Vicerrectorado de Investigación y Posgrado de la UNMSM - Código de proyecto: B18100531
Tesis
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Palomino, García Mercedes del Pilar. "Purificación y caracterización de una lectina tipo C del veneno de la serpiente peruana Lachesis muta "Shushupe"." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2011. https://hdl.handle.net/20.500.12672/15169.
Full textAbstract:
Expone que se ha purificado la lectina verdadera aislada del veneno de Lachesis muta y se han determinado sus propiedades bioquímicas y biológicas. La purificación se logró utilizando como único paso cromatográfico una columna de DEAE-Sephadex A-50. La proteína no enzimática fue reconocida debido a su capacidad para aglutinar glóbulos rojos humanos. La purificación obtenida fue de 3,6 veces y la lectina representó el 3,5 % respecto a la proteína total. El análisis por PAGE-SDS, demostró que la lectina de L. muta tiene un peso molecular de 27,5 kDa en su forma dimérica y 14,3 kDa en su forma monomérica. La lectina tuvo mayor afinidad por la lactosa, seguida de galactosa, arabinosa, sacarosa y glucosa. Por otro lado, no puede reconocer residuos de maltosa, manosa ni fructosa. La lectina de L. muta ha sido clasificada dentro de las lectinas tipo C debido a que fue inhibida por EDTA, DTT y 2β-ME y la inhibición causada por 0,125 - 0,5 mM de EDTA fue anulada por los iones calcio, magnesio y manganeso. Se trata de una proteína estable al pH y a la temperatura, ya que se une a los glóbulos rojos a diferentes valores de pH (4 a 9) y tolera temperatura desde 30 hasta 70 °C. Por último, se trata de un componente no tóxico para ratones albinos, no interviene en la coagulación sanguínea, pero es reconocida por el antiveneno lachésico monovalente (INS, Lima-Perú) y por lo tanto, antigénica.Tesis
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Ortíz, Rojas César Alexander. "Variación de las actividades biológicas y enzimáticas del veneno de la serpiente Bothrops atrox "jergón" de tres zonas geográficas del Perú." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/16277.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autorEstudia la variabilidad en las características bioquímicas y biológicas de venenos de ejemplares de B. atrox procedentes de los departamentos de Amazonas, Ucayali y Junín. A los venenos se les realizó el análisis del contenido proteico y el número de bandas por PAGE-SDS, así como las actividades de fosfolipasa A2, hemolítica indirecta, amidolítica, coagulante, hemorrágica y proteolítica sobre caseína y mediante zimografía; además se hicieron ensayos de inmunodifusión y neutralización in vitro con el suero antibotrópico polivalente del INS-Perú. Las actividades amidolítica, coagulante, y proteolítica mediante zimograma, evidenciaron variabilidad tanto entre muestras de diferentes regiones como dentro de una misma región. La actividad fosfolipasa A2 y hemolítica indirecta evidenciaron una mayor actividad en los venenos de Amazonas y una menor en los venenos de Junín. En los demás ensayos no se observaron diferencias resaltantes en las características del veneno. Con respecto a las pruebas de neutralización, ½ dosis del antiveneno fue suficiente para neutralizar con eficacia las actividades coagulante y fosfolipasa A2 de todos los venenos. Nuestros resultados indican que algunas de las propiedades del veneno de la serpiente B. atrox son variables, sin que ello afecte la capacidad neutralizante del suero antibotrópico polivalente producido por el INS.
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Torrejón, Maldonado Daniel Alcibiades. "Caracterización molecular y clonación de la fosfolipasa A2 homóloga de los venenos de Bothrops pictus, Bothrops brazili y Bothrops atrox." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2021. https://hdl.handle.net/20.500.12672/16686.
Full textAbstract:
Las PLA2s homólogas (también conocidas como miotoxinas Lys49 o PLA2s K49) son las
principales miotoxinas en los venenos de las serpientes del género Bothrops a pesar de
presentar nula o ínfima actividad catalítica. En este trabajo, se identificaron tres nuevos
transcritos codificantes de las PLA2s homólogas K49 en venenos de las especies
Bothrops pictus (“jergón de la costa”), Bothrops brazili (“jergónshushupe”) y Bothrops
atrox (“jergón de la selva”) que habitan en el Perú y se clonaron en células de Escherichia
coli. Como primer paso, el RNA total fue aislado de venenos frescos y liofilizados, así
como de tejido glandular. El rendimiento del RNA obtenido fue aproximadamente 5.0
ng/mg de veneno y 40.0 ng/mg de glándula. La cantidad y calidad de los transcritos
fueron suficientes para la eficiente síntesis y amplificación del cDNA. La secuencia
aminoacídica deducida de los transcritos se compone de 121/122 residuos de ~ 14.0 kDa
y posee un punto isoeléctrico teórico (pI) de ~ 9.0. Los homólogos de PLA2 identificados
en B. pictus, B. brazili y B. atrox se nombraron como pictoxina, brazilixina y batroxina,
respectivamente, los cuales fueron clonados en células deE. coli TOP10 dentro del vector
pCR2.1-TOPO con una eficiencia de transformación de 2.9 x 109 UFC/µg de DNA
plasmídico. En relación con estudios transcriptómicos, la batroxina es una variante
poblacional en venenos peruanos de una miotoxina encontrada en venenos brasileños
con una única mutación nucleotídica que origina la sustitución D13E. La pictoxina
corresponde a la PLA2 básica detectada previamente en el veneno de B. pictus. La
brazilixina se diferencia considerablemente de otras miotoxinas encontradas en el
veneno de B. brazili; por lo que es propuesta como una nueva proteoforma. Asimismo,
las tres miotoxinas presentan mutaciones peculiares a nivel de la región C- terminal,
loop de unión a calcio e interfaces proteína-membrana y proteína-proteína. Este es el
primer estudio de clonación de las PLA2 básicas del género Bothrops de Perú y constituye
el cimiento para dar inicio a las actividades de la tecnología recombinante para una
caracterización funcional con miras a su aplicabilidad.Perú. Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología. Fondo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico (Fondecyt). N° 168-FONDECYT-2017
Perú. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Vicerrectorado de Investigación y Posgrado. B17100041, 19100184
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Leiva, Duran Walter Jhon. "Expresión de anticuerpos recombinantes de un solo dominio de llama (Lama glama) y análisis de su capacidad neutralizante de la actividad hemorrágica de una fracción del veneno de la serpiente Bothrops atrox." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2019. https://hdl.handle.net/20.500.12672/10718.
Full textAbstract:
Expresa y purifica anticuerpos recombinantes de un solo dominio de llama (Lama glama) en Escherichia coli y evaluar su capacidad para neutralizar la actividad hemorrágica de una fracción pesada del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox, en ratones de laboratorio. Se analizaron 18 Nb expresados y purificados en E. coli para determinar su capacidad neutralizante de la actividad hemorrágica empleando ratones de laboratorio. Para esto se realizó un fraccionamiento del veneno de serpiente Bothrops atrox por cromatografía de exclusión molecular sobre resina Sephadex G-100 y se seleccionó una fracción de alto peso molecular con actividad hemorrágica. Se evaluó la dosis hemorrágica mínima (DHM) en el veneno crudo (0.810
μg) y en la fracción (0.433 μg) la cual representó 1.87 veces superior a la del veneno crudo; luego se evaluó la dosis eficaz 50% (DE 50) para cada Nb usando como dosis reto 4 DHM. Se encontró que 6 Nb tienen capacidad neutralizante además uno de ellos tiene una dosis eficaz 50% contra el efecto hemorrágico muy efectivo de 2247 μL de antiveneno/mg de veneno. También se evaluó la neutralización de la citotoxicidad de algunos Nb. Se concluye que algunos de los anticuerpos recombinantes de un solo dominio de llama (Lama glama) obtenidos en este estudio, son capaces de neutralizar la actividad hemorrágica de una fracción del veneno de la serpiente peruana B. atrox. Hay Nb que pueden ser usados para la formulación de un antídoto recombinante efectivo y económico.Tesis
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Vivas, Ruiz Dan Erick. "Caracterización estructural y funcional de la pictobina, una enzima similar a trombina del veneno de la serpiente peruana Bothrops pictus “jergón de la costa”." Doctoral thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2016. https://hdl.handle.net/20.500.12672/5567.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autorDescribe la purificación y caracterización bioquímica, estructural y funcional del principio coagulante del veneno de la serpiente endémica del Perú Bothrops pictus, denominada pictobina. La enzima es purificada por la combinación de tres pasos cromatográficos, empleando intercambio catiónico CM-Sephadex C-50 seguida de dos pasos de filtración molecular en Sephadex G-100 y Sephadex G-75 respectivamente. La Pictobina es una glicoproteína monomérica con una masa molecular de 49 kDa medida por PAGE-SDS bajo condiciones reductoras y de 41 kDa por MALDI-TOF-TOF. El contenido de carbohidratos es de aproximadamente 45% de la masa y pueden ser removidos por deglicosilación con PNGasa F. Los carbohidratos asociados detectados fueron hexosas (25.76%), hexosaminas (13.12%) y ácido siálico (0.76%). La secuencia N-terminal (VIGGDECNINEHRFLAFTYS) muestra semejanza con las enzimas similares a trombina. La Pictobina tiene actividad coagulante sobre plasma humano y fibrinógeno humano y bovino. La actividad coagulante específica de la enzima es equivalente a 131.1 NIH U/mg de trombina liberando solo el fibrinopéptido A del fibrinógeno humano y tuvo un efecto defibrinogenante en roedores. La enzima produce una malla de fibrina porosa visualizada por microscopía electrónica de barrido, así como agregación plaquetaria. La Pictobina posee actividad catalítica sobre los sustratos sintéticos BApNA, S-2266, S-2302, S-2160 y S-2238. El tripéptido sintético D-Val-Leu-Arg-pNa el cual es considerado como el mejor sustrato. La actividad amidolítica es inhibida por PMSF, DTT y 2-β mercaptoetanol. La enzima muestra estabilidad a diferentes temperaturas (25 a 55°C), valores de pH (5.0 a 11.0) o en presencia de iones (Mg+2, Mn+2, Ca+2, Na+ y K+) pero es inhibida por el Zn+2. La enzima interacciona con el inhibidor endógeno α:2-macroglobulina y con el suero antibotrópico polivalente. La deglicosilación de la enzima produjo alteración en la actividad y el reconocimiento del antiveneno. El cDNA de la Pictobina (760 pb) codifica una proteína madura de 233 aminoácidos que conserva dominios estructurales con otras enzimas similares a trombina como el sitio catalítico (His40, Asp89 y Ser179) y los sitios de unión a sustrato S1, S2 y S3. Se identifican tres motivos para la N glicosilación. El modelamiento de la Pictobina revela un plegamiento tipo quimotripsina presentando un bolsillo hidrofóbico sobre su superficie, involucrado en el reconocimiento del sustrato y un importante bucle 90’s clave en la restricción del sitio catalítico. Los análisis de interacción molecular revelan que los residuos Phe194 y Trp195 de la Pictobina forman una interacción estable con los residuos Gly13, Gly14 y Val15 del fibrinopéptido A posicionando el puente de los residuos Arg16 y Gly17 del sustrato para el clivaje en el sitio catalítico. Tomando en conjunto estos resultados, se concluye que Pictobina es una enzima similar a trombina presente en el veneno de la serpiente Bothrops pictus.
Tesis
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Rodríguez, Colín Jesús. "Panorama epidemiológico de accidente ofídico en el Estado de Hidalgo." Tesis de Licenciatura, Universidad Autónoma del Estado de México, 2019. http://hdl.handle.net/20.500.11799/105991.
Full textAbstract:
El estudio del comportamiento del accidente ofídico en México, es de importancia,
debido a que el país, contiene una diversidad importante de serpientes venenosas
de amplia distribución. El estado de Hidalgo, es uno de los primeros 5 estados de la
república mexicana que presenta, una alta frecuencia de mordedura de serpiente,
el tercero de acuerdo a las tasas de frecuencia cada 100,000 personas. El presente
trabajo, muestra el comportamiento de este padecimiento a lo largo de 14 años
(2003-2016). El cual indica que existen meses del año, en los cuales la mordedura
de serpiente es más frecuente (Abril-Septiembre), siendo del género masculino, el
que más mordeduras de serpiente reporta. Existen municipios del estado como:
Atlapexco, San Bartolo Tutotepec, Tlanchinol, Tinaguistengo, Jacala de Ledezma,
Xochicoatlán, Calnalli, Huehuetla, Pisaflores, Huzalingo, Huejutla de Reyes,
Zacultipan de ángeles, Huautla, Juárez Hidalgo, que reportan altas tasas de
mordedura de serpiente. Varios de estos municipios, dedican alto porcentaje de su
territorio a la agricultura y la mayoría de ellas son de ámbito rural. Por lo tanto estas
dos variables, pueden estar estrechamente relacionadas con los reportes de
mordedura de serpiente en estos municipios. Teniendo una relación entre la alta
frecuencia de mordedura, con la distribución de las serpientes venenosas en el
estado, favoreciendo su diagnóstico en relación con los posibles signos clínicos,
derivados del tipo de venenos de cada serpiente. Además se ubicaron las unidades
médicas de segundo nivel, las únicas que pueden brindar, atención médica
adecuada, para este tipo factor de riesgo, donde se pudo determinar que la parte
del noreste del estado, es donde los servicios médicos son de difícil acceso.
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Quispe, Cerón Edwin. "Caracterización molecular y clonamiento de una fosfolipasa A2 ácida del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox y su relación en la miotoxicidad." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2020. https://hdl.handle.net/20.500.12672/16107.
Full textAbstract:
Las fosfolipasas A2 (PLA2) del veneno de las serpientes, son enzimas con una
variedad de efectos biológicos, los cuales son atribuídos a sus diferentes isoformas
ácidas y básicas. Algunas son: anticoagulantes, miotóxicas o neurotóxicas, siendo
la miotoxicidad uno de los efectos más graves. Además, el clonamiento y expresión
de una proteína recombinante es una herramienta importante para entender la
estructura-función de una proteína, por ello, el objetivo de la presente investigación
fue purificar, caracterizar y evaluar la actividad miotóxica de una isoforma nativa de
PLA2 ácida (denominado BaPer-PLA2a) de B. atrox así como clonar y expresar su
forma recombinante. Para ello, se purificó la proteína nativa en tres pasos
cromatográficos usando DEAE-Sephadex-A50, Sephadex-G75 y un sistema
cromatográfico automatizado líquido de presión media (MPLC). La enzima BaPerPLA2a tuvo una actividad específica de 34.1 U/mg y un peso molecular de ~14.5
kDa por SDS-PAGE en condiciones no reductoras. Asimismo, se aisló el RNA total
para la síntesis de cDNA y se obtuvo una longitud de 372 pb. Se dedujo de la
secuencia de cDNA una proteína madura de 124 aminoácidos con un pI teórico de
4.41, evidenciando una isoforma ácida. La estructura primaria de esta proteína
presenta regiones conservadas en el centro catalítico His48, Asp99, Tyr73 y Tyr52,
en el loop de unión al Ca2+ Tyr28, Gly30, Gly32 y Asp49 y la presencia de siete
enlaces disulfuro, perteneciendo por tanto a la clase D49PLA2. El modelo teórico
estructural de la isoforma tiene una homología del 76.5 % con la PLA2 ácida de B.
jararacussu (PDB: 1U73.1A). Asimismo, la BaPer-PLA2a no presenta actividad
miotóxica, no obstante, al combinarla con la isoforma de PLA2 básica incrementó la
actividad de esta última en 21.58 %. Adicionalmente, el gen fue insertado en el
vector pPicZαA y se usó para la transformación y propagación a Escherichia coli,
cepa Top10F´, llegando a obtener un inserto de rPLA2a de ~500 pb lo que indica
que el clonamiento fue exitoso. Por otro lado, se usó a Pichia pastoris cepa GS115
en los ensayos de expresión de la proteína recombinante, lo cual no se evidenció
debido a la optimización en algunos parámetros.Perú. Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología. Fondo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico (Fondecyt). Proyecto de investigación básica y aplicada. N° 168-2017-FONDECYT
Perú. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Vicerrectorado de Investigación y Posgrado. Programa de Proyectos de Investigación para Grupos de Investigación. B18100081
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Zavaleta, Martínez-Vargas Alfonso. "Química y farmacología del veneno de serpientes. (I parte)." Revista de Química, 2013. http://repositorio.pucp.edu.pe/index/handle/123456789/101351.
Full textAbstract:
A multidisciplinary revision of snake venom includes its chemical, pharmacological and toxicological aspects. In the first part, the chemical composition of venoms, and local effects, with special atenttion to the venom of Lachesis muta muta snake are revisited. The acute toxic effects, citotoxicity, miotoxicity and the chemical basis for the production of edema, hemorrhagic and myonecrotic effects are discussed. KEYWORDS: SNAKE VENOM, CHEMISTRY, PHARMACOLOGY, ACUTE TOXICITY, CITOTOXICITY, HAEMORHAGE, MYONECROSIS, OEDEMA
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Collantes, Hugo G., Martínez-Vargas Alfonso Zavaleta, and Maria Salas. "Actividad fibrinolitica en venenos de serpientes peruanas de los géneros bothrops, lachesis y crotalus." Revista de Química, 2013. http://repositorio.pucp.edu.pe/index/handle/123456789/99570.
Full textAbstract:
Se estudia la presencia de actividad fibrinolítica en los venenos de cinco serpientes peruanas empleando coágulos de fibrina formados a partir de fibrinógeno bovino y una enzima semejante a trombina de L. muta muta parcialmente purificada Los cinco venenos estudiados presentaron actividad fibrinolítica en ausencia de plasmina (rango: 16,3 a 57,5 U/h mg protefua), lo que demuestra la existencia de enzimas proteolíticas en los venenos de vipéridos peruanos, que actúan directamente sobre la fibrina. El veneno de L. muta muta presentó la mayor actividad enzimática específica (57 ,5), seguido en orden decreciente por B. barnetti (45,2),B.pictus (29,4), C. durisus terrificus (22,5) y B. brazilü (16,3).We studied the presence of fibrinolytic activity in five dried peruvian snake venoms using fibrin clots formed by one partially purified fraction of Thrombin-like enzyme from L. muta muta. In all venoms studied, fibrinolysis were detected in absence of plasmin in the range from 16,3 to 57,5 U/h mgprotein. This results demonstrate the existence of proteolytic enzymes in Peruvian Viperid snake venoms that act upon fibrin. The L. muta muta venom showed the higher activity (57 ,5), followed in down order by B. barnetti (45,2) B. pictus (29,4), C. durisus terrificus (22,5) and B. brazilü venom (16,3).
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Zavaleta, Martínez-Vargas Alfonso. "Química y farmacología del veneno de serpientes (II parte): efectos sobre el sistema nervioso y cardiovascular." Revista de Química, 2013. http://repositorio.pucp.edu.pe/index/handle/123456789/100123.
Full text