Dissertations / Theses on the topic 'Sheep Sheep Artificial insemination. Semen'

Includes bibliographical references (leaves 274-316) Examines several aspects of male reproduction in the sheep, and how these are related to fertility in the female when semen is introduced by natural mating or artificial insemination.

O melhoramento genético ovino carece de uma maior conexão genética entre os rebanhos, o que pode solucionado pelo uso mais intensivo do sêmen congelado. Entretanto, com os níveis tecnológicos atualmente disponíveis o sêmen congelado apenas pode ser empregado com eficácia diretamente no útero, dependendo de sincronização de estros e mão de obra especializada para as inseminações via laparoscopia. Uma outra alternativa é o uso de sêmen congelado com 200 milhões de espermatozóides por dose com inseminações efetuadas cerca de doze horas após a identificação do estro, preconizado para a inseminação artificial dos ovinos na Noruega pelos próprios produtores. O presente ensaio consta de uma adaptação local deste modelo com o objetivo geral de verificar a viabilidade de uso da inseminação cervical superficial com sêmen ovino congelado numa dose de 0,25 ml contendo 200 x 106 de espermatozóides em palhetas de 0,50 ml após cio natural, empregando baixo uso de insumos e mão de obra semi-qualificada. As observações foram procedidas em duas propriedades no Rio Grande do Sul, incluindo 1419 ovelhas das raças Merino, Ideal e Texel. Os resultados obtidos indicaram que as diferenças nas taxas de não retorno entre carneiros poderá ser minimizada através da utilização de outros métodos de análise e seleção de carneiros mais férteis após os procedimentos de congelamento/descongelamento, e, adicionalmente que a constatação de uma taxa de não retorno entre 25-35% nas distintas condições investigadas, permitem inferir que os sistemas investigados podem ser utilizados para interligar geneticamente rebanhos via uso de sêmen congelado.
A sheep improvement program depends on genetic connexion among flocks, which could be done by extensive use of frozen semen. However, nowadays-available technology just recommends the employment of frozen semen directly inside the uterine ambient through laparoscopy. Alternatively, there is a model recommended for Norway producers including frozen semen with 200 millions of sperms used in cervical superficial inseminations up to twelve hours from oestrus detection. The present essay is an local adaption of this system aiming to verify the viability of the employment of frozen semen for sheep reproduction in a volume of 0,25 ml, with 200 x 106 sperms in 0,50 ml straws, after natural oestrus, using low input resource and semi-qualified artificial insemination technicians. The observations were done in the two properties located at Rio Grande do Sul, including 1419 ewes from Merino, Ideal and Texel breeds. The results obtained indicate that the differences in non return rates among rams could be minimized by the employment of other methods of ram selection before the freezing procedures, and additionally the observed 25-35% non return rates in the distinct conditions investigated, permits to infer that the tested system could be useful to connect genetically the flocks using frozen semen.

Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos de dois diluentes comerciais, Dilutris® (SEMENCON – Produtos Agropecuários Ltda., Porto Alegre, RS, Brasil) e TQC Holding Plus® (Nutricell – Nutrientes Celulares Ltda., Campinas, SP, Brasil), na qualidade do sêmen, nas taxas de concepção utilizando inseminação artificial cervical (IAC) e por laparoscopia (IAL) e na reação inflamatória uterina após a inseminação laparoscópica. Para os testes in vitro do sêmen foram coletados seis ejaculados de dois carneiros. Cada ejaculado foi dividido em cinco frações de 0,20 mL, e acrescentado a cada fração o volume de diluidor equivalente a concentração da dose inseminante: para IAC (100x106 espermatozóides) e para IAL (40x106 espermatozóides), formando quatro tratamentos T1, T2, T3 e T4, respectivamente: Dilutris®/cervical; Dilutris®/laparoscopia; Holding®/cervical; Holding®/laparoscopia. Foram avaliadas a motilidade/ vigor, testes de termo-resistência e hiposmótico de cada fração. A motilidade e o vigor não diferiram entre os tratamentos e foram semelhantes aos verificados no sêmen fresco. No teste hiposmótico, os valores verificados no T4 e T1 foram semelhantes e não diferiram dos observados no sêmen fresco. Os valores observados nos tratamentos T2 e T3 não diferiram entre si, mas foram significativamente inferiores (P<0,05) aos verificados no T4. Os resultados do teste de TTR verificados em todos os tratamentos utilizados, foram superiores ao valor mínimo de 30% preconizado pelo CBRA. O T1 apresentou valor significativamente inferior (P<0,05) ao dos demais tratamentos. Para a inseminação artificial, 208 fêmeas tiveram o estro sincronizado com esponjas vaginais contendo 60 mg de MAP por 13 dias e aplicação de 400 UI de eCG no momento da retirada. Foram inseminadas pela via cervical (IAC) ou por laparoscopia (IAL), 54 horas e 60 horas, respectivamente, após a retirada do dispositivo intra-vaginal, com sêmen diluído com Dilutris®, Holding® ou solução fisiológica (Grupo controle). Independentemente do diluente utilizado, os índices obtidos na IAL foram superiores (P<0,05) aos obtidos pela IAC. Na IAC a taxa de gestação obtida no grupo inseminado com o diluente TQC Holding Plus® (45,6%), foi semelhante à verificada no grupo controle (48,9%). Já no grupo que foi inseminado com Dilutris®, a taxa de gestação (29%) foi inferior à obtida no grupo controle (P<0,05). Com relação aos aspectos histológicos, verificou-se um infiltrado inflamatório de neutrófilos de grau discreto a acentuado nos úteros inseminados por laparoscopia com Dilutris®, de ausente a moderado nos úteros inseminados com TQC Holding Plus®, e no grupo controle não houve presença de infiltrado inflamatório de neutrófilos. Podese concluir que na avaliação in vitro, o meio de manutenção de embriões TQC Holding Plus® não causou efeitos negativos na qualidade do sêmen, enquanto que o meio diluidor Dilutris® foi menos efetivo na manutenção da qualidade do sêmen. O local de deposição do sêmen teve influência significativa no índice de fertilidade (P<0,05). Por laparoscopia as taxas de gestação foram semelhantes independentemente do diluidor utilizado. Um maior número de avaliações uterinas são necessárias para um melhor conhecimento da reação inflamatória intra-uterina em ovinos inseminados por laparoscopia.
This study aims to assess the effects of two commercial diluents, Dilutris® (SEMENCON – Produtos Agropecuários Ltda., Porto Alegre, RS, Brazil) and TQC Holding Plus® (Nutricell – Nutrientes Celulares Ltda., Campinas, SP, Brazil), on semen quality, conception rates using Cervical Artificial Insemination (CAI) and Laparoscopic Artificial Insemination (LAI), and uterine inflammatory reactions after the laparoscopic insemination. For the in vitro tests with the semen, six ejaculates of two rams were collected. Each ejaculate was divided into five fractions of 0.20 mL, and we added to each fraction the volume of extender equivalent to the concentration of the inseminant dose: for CAI (100x106 spermatozoa) and for LAI (40x106 spermatozoa), forming four treatments T1, T2, T3, and T4, respectively: Dilutris®/cervical; Dilutris®/laparoscopy; Holding®/cervical; Holding®/laparoscopy. The motility/vigor, thermo-resistance and hypoosmotic tests of each fraction was evaluated. The motility and vigor were not different between the treatments and were similar to those verified in fresh semen. In the hypoosmotic test, the values verified in T4 and T1 were similar and were not different from those observed in fresh semen. The values observed in T2 and T3 treatments have not differed between them, but were significantly lower (P<0.05) to those verified in T4. Results of the TTR test verified in all used treatments were superior to the minimum value of 30% preconized by CBRA. T1 presented a significantly lower value (P<0.05) compared to the other treatments. For artificial insemination, 208 female had their estrus synchronized with vaginal sponges containing 60 mg of MAP for 13 days and the application of 400 UI of eCG at the moment of removal. They were inseminated by cervical via (CAI) or by laparoscopy (LAI), 54 and 60 hours, respectively, after the removal of the intravaginal device, with semen diluted with Dilutris®, Holding® or physiological solution (control group). Independently of the extender used, the obtained rates in the LAI were superior (P<0.05) to those obtained with the CAI. In CAI the pregnancy rate obtained in the inseminated group with the TQC Holding Plus® diluent (45.6%) was similar to the one verified in the control group (48.9%). In the group inseminated with Dilutris®, the pregnancy rate (29%) was inferior to the obtained in the control group (P<0.05). Related to the histological aspects, we verified a discreet to accentuated degree of neutrophils inflammatory infiltrate in the uterus inseminated by laparoscopy with Dilutris®, from absent to moderate in uterus inseminated with TQC Holding Plus®, and in the control group there was not inflammatory infiltrate of neutrophils. We can conclude that in the in vitro evaluation, the embryos maintenance means TQC Holding Plus® has not caused negative effects in the quality of the semen, while the Dilutris® extender was less effective to maintain the quality of the semen. The semen deposition site has a significant impact in the fertility rate (P<0.05). By laparoscopy the pregnancy rates were similar independently of the extender used. A larger number of uterine analyses are required for a better knowledge of the intrauterine inflammatory reaction in sheep inseminated by laparoscopy.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-18Bitstream added on 2014-06-13T20:46:13Z : No. of bitstreams: 1 maia_ms_dr_botfmvz.pdf: 678528 bytes, checksum: 3bcfd108f831025fba94f0aefc916387 (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
O Objetivo deste estudo foi determinar o efeito da adição do surfactante lauril sulfato de sódio (Orvus es Paste OEP) e dos antioxidantes Trolox-C (6- hidroxi-2, 5,7,8-tetrametilcroman-2-acido carboxílico) e catalase ao meio diluidor, na motilidade espermática, integridade de membrana plasmática, acrossomal e mitocondrial, estádio de capacitação e geração de radicais livres no espermatozóide ovino pós-descongelação. Para isso, foram realizados dois experimentos. No Experimento 1, avaliou-se o efeito da adição do surfactante ao diluidor. O sêmen de 10 carneiros foi coletado por meio de vagina artificial e diluído para uma concentração final de 400x106 espermatozóides/mL no meio Tris-gema contendo OEP (0; 0,5 e 1%) ou no diluidor glicina-gema-leite (controle). A motilidade foi determinada pelo sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA), a integridade de membrana pela combinação dos corantes fluorescente iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína (IP+DIC) e o estádio de capacitação pela técnica da CTC. Houve efeito significativo do tratamento em todos os parâmetros da motilidade, na integridade de membranas e na capacitação espermática. A adição de 0,5% ou 1% de OEP ao diluidor TRIS-gema aumentou significativamente (P<0,05) a motilidade, a integridade de membranas e o percentual de espermatozóides não capacitados, comparado ao controle. O diluidor TRIS 1 foi selecionado para utilização como meio base para o experimento 2. No Experimento 2, foi determinado o efeito da adição dos antioxidantes ao diluidor. O sêmen foi coletado e os seguintes tratamentos foram aplicados: T1- TRIS (controle), T2- TRO+ (diluidor T1 + Trolox, 50mM/108 espermatozóides), T3-CAT+ (diluidor T1 + catalase, 50mg/mL), T4- TRO/CAT+ (diluidor T1 + Trolox e Catalase, nas mesmas concentrações utilizadas no T2 e T3)...(Rsumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
The aim of this study was to determine the effect of addition of surfactant sodium lauryl sulfate (Orvus es Paste OEP), and antioxidants, Trolox-C (6- hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxilic acid) and catalase to an extender on the motility, plasmatic and acrosomal and mitochondrial membrane integrity, capacitation status and free radicals generation of post thaw ram spermatozoa. Two experiments were performed. In Experiment 1, the effect of addition of surfactant was evaluated. The semen was collected from ten rams by artificial vagina and it was diluted to a final concentration of 400x 106 sperm/mL in egg yolk-Tris extender containing OEP (0, 0.5 and 1%) or glycinegg yolk-milk extender (control). The sperm motility was evaluated using a computer-assisted sperm analysis (CASA); the membrane integrity was verified using the fluorescent stains (propidium iodide and carboxyfluorescein diacetate) and the capacitation status determined by CTC technique. There was a significant treatment effect in all parameters involving sperm motility, membrane integrity and spermatic capacitation. The addition of OEP 0.5% or 1% to the egg yolk-Tris extender improved (P<0.05) the motility and membrane integrity and the percentage of uncapacited spermatozoa compared to the control. Then, the TRIS 1 extender was selected to be used at experiment 2. Experiment 2: the Exp 2 aimmed to determine the effect of antioxidants addition to the extender. Semen was collected and these treatments were applied: T1 - egg yolk-Tris extender (control), T2- TRO+ (T1 extender +Trolox, 50mM/108 spermatozoa), T3- CAT+ (T1 extender + catalase, 50mg/mL) and T4 TRO/CAT+ (T1 extender + trolox and catalase on the concentrations used in T2 and T3). Motility was determined by CASA system, plasmatic and acrosomal 4 membrane integrity and mitochondrial function were evaluated with PI, FITCPSA and JC-1 association...(Complete abstract, click electronic address below)

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-11T13:50:55Z No. of bitstreams: 1 Bartira Pastor Andrade Sousa.pdf: 687607 bytes, checksum: 33d9827ebaf5d1b383b9c07059174be5 (MD5)
Made available in DSpace on 2016-08-11T13:50:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bartira Pastor Andrade Sousa.pdf: 687607 bytes, checksum: 33d9827ebaf5d1b383b9c07059174be5 (MD5) Previous issue date: 2008-08-29
The aim of the present study was to assess the in vitro and in vivo viability of sperm cells following the addition of diluent in the refrigeration process of sheep semen and the fertilization of oocytes following the insemination of superovulated ewes. In Experiment I, three ejaculates from each of three Dorper breeders were used, collected with an artificial vagina during three repetitions with three-day intervals. The macroscopic and microscopic characteristics of the semen were analyzed before and after the pooling, analyzing sperm concentration, DNA integrity and acrosome integrity as well. The pooled semen was divided into five equal parts. Dilution was performed (1:3, semen:diluent) to establish the diluent groups: Equimix (DI), Laiciphos Green Ovine (DII), FR 4 (DIII), Equimix-Yolk [Equimix with 20% egg yolk (DIV)] and Tris-Yolk (DV; control). Each group was subdivided in quadruplicate, refrigerated and kept at 4 °C until the evaluations (MIP, vigor, DNA integrity and acrosome integrity), corresponding to 0, 12, 24, 36 and 48 hours. In the in vitro assessments, DI exhibited the greatest drop in MIP at 12 h in comparison to the other groups (p<0.05). At 24 h, DII, DIV and DV exhibited the highest MIP (p<0.05), with no significant differences between one another (p>0.05). At 48 h, DII and DV were superior to the other groups (p<0.05). Regarding vigor, DII and DV had higher values (p<0.05) than DI and DIII at 12 hours and DIV had the highest values at 24 hours (p<0.05). In all groups, there was total preservation of DNA integrity and a high number of spermatozoids with intact acrosomes for all the intervals studied. In Experiment II, the same collection method and processing of the ejaculates from the three Dorper breeders were performed. A pool was formed of the threeejaculates of each animal, divided into two equal parts at a 1:3 proportion in order to establish the experimental groups: Equimix-Yolk (DI) and Tris-Yolk (DII; control). Each group was subdivided into two aliquots: fresh – F (F-DI and F-DII), which was used immediately; and refrigerated – R (R-DI and R-DII), which was kept at 4 °C for a storage time of 24 hours. Laparoscopic inseminations were preformed with an inseminate volume of 0.25 mL per uterine horn, which was when the ovary evaluations were performed. Thirty-nine embryo harvesting procedures were performed, 19 using refrigerated semen and (R-DI and R-DII) and 20 using fresh semen (F-DI and F-DII). In the in vivo test, a general rate of 71.0% (237/334) of fertilized structures was obtained, 59.3% (198/334) of which were viable embryos. There was no significant variation (p>0.05) between the types of semen and diluents. Among the total number of embryos, 86.4% exhibited quality Grades I and II, with the refrigerated semen of R-DI obtaining the best percentage (100%)(p<0.05). The ovarian status at the time of insemination affected fertilization, as better results were obtained for the fresh semen of F-DI when the ovary was ovulating. For F-DII, this status exhibited a smaller number of fertilized structures (p<0.05). At the end of the experiments, it was concluded that both the Laiciphos Green Ovine and Tris-Yolk can be used in the conservation of semen at 4 °C for 48 hours, whereas Equimix added with 20% egg yolk is recommended for use in semen storage (4 °C) of up to 24 hours. The refrigeration of ovine semen at 4 °C for 24 hours is viable for use inembryo transference programs. Equimix added with 20% egg yolk resulted in a fertilization rate and embryo quality similar to the traditional Tris-Yolk.
Neste estudo objetivou-se avaliar a viabilidade in vitro e in vivo das células espermáticas após a adição de diluente no processo de refrigeração do sêmen ovino, e na fertilização de oócitos após inseminação de fêmeas ovinas superovuladas. No Experimento I foram utilizados três ejaculados de cada um dos três reprodutores Dorper, coletados com vagina artificial a intervalo de 3 dias, em três repetições. As características macro e microscópicas do sêmen foram analisadas antes e após a formação de um pool, além da concentração espermática, integridade do DNA e do acrossoma. O pool foi dividido em cinco partes iguais, procedeu-se com a diluição (1:3, sêmen:diluente) para constituir os respectivos grupos de diluentes: Equimix (DI), Laiciphos Green Ovine (DII), FR 4 (DIII), Equimix-Gema – Equimix com 20% gema de ovo (DIV) e Tris-Gema (DV; controle). Cada grupo foi subdividido em quadruplicata, refrigerado e mantido a 4 °C até as avaliações (MIP, vigor, integridade do DNA e do acrossoma) correspondendo a 0, 12, 24, 36 e 48 horas. Nas avaliações in vitro do sêmen o DI apresentou maior queda de MIP às 12 h em relação aos demais grupos (p<0,05). Às 24 h os grupos DII, DIV e DV apresentaram a melhor MIP (p<0,05), não divergindo (p>0,05) entre si, enquanto que às 48 h o DII e o DV foram superiores (p<0.05) aos demais. Com relação ao vigor, os grupos DII e o DV apresentaram valores superiores (p<0,05) ao DI e DIII a partir das 12 horas e ao DIV a partir das 24 horas (p<0,05). Em todos os grupos de diluentes houve a preservação total da integridade do DNA e alto índice de espermatozóides com acrossoma intacto, para todos os intervalos avaliados.Para o Experimento II foi utilizada a mesma técnica para colheita e processamento dos ejaculados de três reprodutores Dorper. Formou-se um pool com três ejaculados de cada animal, dividiu-se em duas partes iguais diluídas na proporção 1:3 para constituir os respectivos grupos experimentais: Equimix-Gema (DI) e Tris-Gema (DII; controle). Cada grupo foi subdividido em outras duas alíquotas: fresco – F (F-DI e F-DII), que foi usado imediatamente, e refrigerado – R (R-DI e R-DII), mantido a 4 °C por 24 horas de armazenamento. Foram realizadas inseminações laparoscópicas, com volume inseminante de 0,25 mL por corno uterino, momento em que foram realizadas as avaliações dos ovários. Foram realizados 39 procedimentos de colheitas de embriões, em 19 foram utilizados sêmen refrigerado (R-DI e R-DII) e em 20 sêmen fresco (F-DI e F-DII). No teste in vivo obteve-se uma taxa geral de estruturas fertilizadas de 71,0% (237/334), sendo 59,3% (198/334) de embriões viáveis, o que não variou significativamente (p>0,05) entre os tipos de sêmen e de diluentes. No total dos embriões, 86,4% apresentaram qualidade de grau I e II, sendo o sêmen refrigerado do R-DI o de melhor percentual (100%) (p<0,05). O “status” ovariano no momento da inseminação interferiu na fertilização, observado-se melhores resultados para o sêmen fresco do F-DI quando o ovário se encontrava em ovulação. Para o F-DII, este status foi o que apresentou menor quantidade de estruturas fertilizadas (p<0,05). Ao final dos experimentos pode-se concluir que: o diluente Laiciphos Green Ovine, da mesma forma que o Tris-gema, pode ser utilizado na conservação do sêmen a 4 °C por 48 horas; enquanto o Equimix, acrescido de 20% de gema de ovo, recomenda-se que seja utilizado no armazenamento do sêmen (4 °C) por até 24 horas. É viável a refrigeração do sêmen ovino a 4°C por 24 horas para a utilização em programas de transferência de embriões; e que o diluidor Equimix, acrescido de 20% gema de ovo, resultou em taxa de fertilização e qualidade embrionária similares ao tradicional Tris-Gema.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-06T14:22:08Z No. of bitstreams: 1 Espedito Vieira do Nascimento FIlho.pdf: 496869 bytes, checksum: 403721a22853dfcd934160ced2fc9b81 (MD5)
Made available in DSpace on 2016-10-06T14:22:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Espedito Vieira do Nascimento FIlho.pdf: 496869 bytes, checksum: 403721a22853dfcd934160ced2fc9b81 (MD5) Previous issue date: 2009-02-26
Two experiments were conducted to evaluate the use of Eazi-Breed CIDR® new and reused in long and short protocols in synchronization of estrus and ovulation in ewes. The first study evaluated the reproductive performance of ewes in the program of fixed-time artificial insemination protocol with progesterone protocol on short (five days) and long (twelve days) of progesterone in the synchronization of estrus and ovulation. 48 sheep were used randomly in two experimental groups and GC GL. Ewes were treated with Eazi- Breed CIDR®, for twelve days in the CG (n = 24) and five days in GL (n = 24). Upon removal of the device all the females of the groups received, by intramuscular 12.5 mg dinoprost tromethamine and 300 IU of eCG. All females were inseminated at fixed time by transcervical 50 hours after removal of the device. The synchronization of estrus occurred in 100% of the sheep and the diagnosis of pregnancy was performed at 30 days after insemination, however, the pregnancy rate was 33.3% and 41.7% in the GC% in the GL, not being observed statistical difference (P> 0.05). The results show that the protocols using short-and long Eazi-Breed CIDR® are satisfactory in synchronization of estrus inewes for artificial insemination in fixed time, but low rate of pregnancy. the second experiment, has been to evaluate the effect of re-use of intravaginal implants on the pregnancy of sheep. 55 sheep were used in Santa Inês breed. These were distributed randomly into three experimental groups and GI (Eazi-Breed CIDR® in the first use) and GII (Eazi-Breed CIDR® in the second use) for five and 12 days and GIII (Eazi-Breed CIDR® in the third use) for five days. Ewes were treated with an progesterone Eazi Breed CIDR® inserted in the anterior portion of the vagina and after implant removal was applied 300UI of equine chorionic gonadotropin, and 12.5 mg of tromethamine dinoprost, both through intramuscularly. Synchronization of estrus occurred in 100% of ewes in all groups GI, GII and GIII. The diagnosis of pregnancy by ultrasound was performed at 30 days after the coverage and rate of pregnancy of the GI was 82 and 91%, GII 91% for both treatments and in GIII 82% not being observed differences statistics (P> 0.05). The results show thatthe protocols with short and long Eazi-Breed CIDR® reused is satisfactory in the reproductive performance of crossbred sheep of Santa Inês.
Foram conduzidos dois experimentos para avaliar a utilização do Eazi-Breed CIDR® novo e reutilizado em protocolos longos e curtos na sincronização do estro e da ovulação em ovelhas. No primeiro estudo avaliou-se o desempenho reprodutivo de ovelhas em programa de inseminação artificial em tempo fixo com protocolo curto (cinco dias) e longo (doze dias) de progesterona na sincronização do estro e da ovulação. Foram utilizadas 48 ovelhas distribuídas aleatoriamente em dois grupos experimentais GC e GL. As ovelhas foram tratadas com Eazi-Breed CIDR®, por cinco dias no GC (n=24) e por 12 dias no GL (n=24). No momento da retirada do dispositivo todas as fêmeas dos grupos receberam, por via intramuscular 12,5 mg Dinoprost Trometamina e 300 UI de eCG. Todas as fêmeas foram inseminadas em tempo fixo por via transcervical 50 horas após a retirada do dispositivo. As sincronizações do estro ocorreram em 100,0% das ovelhas e o diagnóstico de gestação foi realizado no 30º dia após a inseminação, no entanto, a taxa de prenhez foi de 33,30% no GC e 41,70%% no GL, não sendo observado diferença estatística (P>0,05). Os resultados permitem concluir que os protocolos curtos e longos utilizando Eazi-BreedCIDR® são satisfatórios na sincronização do estro em ovelhas para inseminação artificial em tempo fixo, porém, baixa taxa de prenhez. No segundo experimento, teve-se o objetivo de avaliar o efeito da reutilização de implantes intravaginais sobre a prenhez de ovelhas. Foram utilizadas 55 ovelhas da raça Santa Inês. Estas foram distribuídas aleatoriamente em três grupos experimentais sendo GI (Eazi-Breed CIDR® em primeiro uso) e GII (Eazi- Breed CIDR® em segundo uso) por um período de cinco e 12 dias e GIII (Eazi-Breed CIDR® em terceiro uso), durante cinco dias. As ovelhas foram tratadas com um dispositivo de progesterona Eazi Breed CIDR® inserido na porção anterior da vagina e após a retirada do implante, aplicou-se Gonadotrofina Coriônica Eqüina, na dose de 300UI e 12,5 mg de Dinoprost Trometamina, ambos pela via intramuscular. A sincronização do estro ocorreu em 100,0% das ovelhas em todos os grupos GI, GII e GIII. O diagnóstico de gestação através da ultra-sonografia foi realizado aos 30 dias após a cobertura e a taxa de prenhezdos grupos GI foi de 82,0 e 91,0%, GII 91,00% para os dois tratamentos e no GIII de 82,00% não sendo observado diferenças estatísticas (P>0,05). Os resultados permitem concluir que os protocolos curtos e longo com Eazi-Breed CIDR® reutilizado é satisfatório no desempenho reprodutivo de ovelhas mestiças da raça Santa Inês.

A inseminação artificial intracervical superficial em ovinos é uma técnica simples, de baixo custo e eficiente no emprego do sêmen fresco. Por outro lado, particularidades do aparelho reprodutivo da fêmea ovina, a quantidade de células espermáticas que sobrevivem ao pós-congelamento bem como a capacitação precoce de espermatozóides durante o processo de criopreservação, impedem o emprego desta técnica com sêmen criopreservado, fazendo-se necessária a deposição intrauterina, com auxílio da laparoscopia. Desconhece-se a eficiência da inseminação artificial intracervical superficial em ovinos, empregando-se sêmen criopreservado e capacitado in vitro. O experimento foi realizado com objetivo de determinar as taxas de prenhez com o sêmen criopreservado e capacitado in vitro. Os animais foram divididos aleatoriamente em 5 grupos: sêmen fresco (SF); sêmen congelado cervical (SCC); sêmen congelado laparoscopia (SCL); sêmen congelado capacitado cervical (SCCC); e sêmen congelado capacitado laparoscopia (SCCL). Todas as fêmeas receberam doses inseminantes com concentração de 200x106 sptz. As inseminações ocorreram em um período de 52 a 60 horas após a retirada dos dispositivos de progesterona. Os diagnósticos de prenhez foram realizados com auxílio da ultrassonografia 30 dias após as inseminações. As taxas de prenhez observadas foram: No grupo SF 42,30% (11/26), SCC 23,07% (6/26), SCL 54,16% (13/24), SCCC 25,92% (7/27), SCCL 48,14% (13/27), não existindo diferença estatística entre os grupos experimentais. O experimento realizado mostrou que é possível obter prenhez, empregando sêmen criopreservado e capacitado in vitro, na inseminação artificial pela via cervical em ovinos.
The superficial intracervical insemination in sheep is a simple, low cost and efficient technique using fresh semen. Still, the particularities of the female tract, the amount of sperm cells wich survive and the early capacitation during the cryopreservation process, difficult the use of this technique with cryopreserved semen, maaing it's necessary to intrauterine with the aid of laparoscopy. It's unanown the efficiency of superficial intracervical insemination in ovine, using cryopreserved and in vitro capacitated semen. The experiment was carried out with the objective to determine the pregnancy rate of ewes inseminated with cryopreserved and in vitro capacitated semen. The females were randomly distributed among five experimental groups: fresh semen (SF), frozen semen cervical (SCC), frozen semen laparoscopy (SCL), frozen semen in vitro capacitated cervical (SCCC), frozen semen in vitro capacitated laparoscopy (SCCL). All females received dosis with 00x106sptz per insemination. The inseminations were performed from to 60 hours after the withdrawal of progesterone implants. The pregnancy diagnosis was conducted by ultrasongraphy 30 days after inseminations. The observed pregnancy rates was: SF ,30% (113 6), SCC 3,07% (63 6), SCL ,16% (133 ) SCCC %, SCCL 4,1 % (133 7). our experiment showed that in sheep it's viable the superficial cervical artificial insemination using cryopreserved and in vitro capacitated semen.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_viviane_rabassa.pdf: 236038 bytes, checksum: 5cfc0f0e2ed580d8304a3d1d8257390c (MD5) Previous issue date: 2007-02-05
The artificial insemination (AI) with frozen semen in sheep is limited by the high costs of the laparoscopic technique and the variability of the results obtained from transcervical technique. This technique requires attachment of cervix, a procedure that can cause located injuries, further, the extensive uterine manipulation, which can lead to an exacerbated endometrial prostaglandin synthesis, could modify the uterine environment at the moment of conception. The objective of this study was to compare the efficiency of transcervical AI, through the technique of cervix attachment and retraction, in comparison to laparoscopic AI, as well as, to determine the effect of flunixin meglumine application at the moment of AI, on pregnancy rate of ewes, using frozen semen. In fixed-time inseminated ewes, during seasonal anestrous, there was no difference in the pregnancy rate between the transcervical and laparoscopic techniques, which was 40%. In respect to flunixin meglumine, the experiment was carried out during the breeding season and was performed using AI with estrus detection. There was no difference in the pregnancy rate between ewes receiving or not flunixin meglumine (p>0.05), which was 68.9% for the control group and 60.0% for the group that received flunixin meglumine at the moment of transcervical AI. These results were probably due to the minimum manipulation exerted on the cervix of these females, which don t cause injuries that could lead to exacerbated production of embryotoxic substances. Thus, when the transcervical AI technique is carried out through trained inseminators and without extreme manipulation of cervix, it becomes a good alternative for costs reduction in sheep AI, allowing the use of frozen semen in commercial applications.
A inseminação artificial (IA) com sêmen congelado em ovinos é limitada pelos altos custos da técnica por laparoscopia e pelos resultados variáveis obtidos com a IA transcervical. A IA por via transcervical requer pinçamento da cérvix, um procedimento que pode causar lesões localizadas, além de extensa manipulação uterina, podendo levar a uma síntese exagerada de prostaglandina pelo endométrio, alterando o ambiente uterino no momento da concepção. O objetivo deste estudo foi comparar a eficiência da IA transcervical, através da técnica de fixação e tracionamento da cérvix, em relação a IA por laparoscopia, bem como, determinar o efeito da aplicação de flunixin meglumine sobre a taxa de prenhez de ovelhas, inseminadas com sêmen congelado. Em ovelhas inseminadas em tempo-fixo, durante o período de anestro estacional, não houve diferença entre as técnicas transcervical e laparoscópica, quanto à taxa de prenhez (40%). Com relação ao uso de flunixin meglumine, o experimento foi realizado durante a estação reprodutiva da espécie ovina, efetuando-se a IA com observação de cio. Neste estudo não observou-se diferença quanto à taxa de prenhez entre ovelhas recebendo ou não flunixin meglumine (p>0,05), sendo de 68,9% no grupo controle e 60,0% no grupo em que foi aplicado flunixin meglumine uma hora antes da IA transcervical. Estes resultados se devem, provavelmente, à manipulação mínima exercida sobre a cérvix destas fêmeas, não causando lesões que pudessem levar à produção exacerbada de substâncias embriotóxicas. Assim, quando a técnica de IA transcervical é realizada por inseminadores treinados e sem manipulação excessiva da cérvix, esta se torna uma adequada alternativa de redução de custos na IA de ovinos, permitindo a utilização de sêmen congelado na ovinocultura.

Abstract Birth of offspring of a pre-determined sex using flow cytometrically sorted fresh spermatozoa was first achieved in rabbits by Johnson et al. (1989). Since then offspring have been produced using sex-sorted spermatozoa from several different species (reviewed by Johnson, 2000). Initially, efficiency of the sex-sorting technology was poor with only low numbers of spermatozoa sorted per hour. Thus, the offspring derived from flow cytometrically sorted spermatozoa were produced with the use of artificial reproductive technologies (ART) such as in vitro fertilisation (IVF) and culture (IVC), intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and deep artificial insemination (AI) which facilitated low dose insemination of potentially compromised spermatozoa. More recently, the development of high-speed sorters (Johnson and Welch, 1999) has facilitated the production of offspring using conventional AI techniques with low dose inseminates (Seidel et al., 1999) and successful cryopreservation of sorted spermatozoa (Schenk et al., 1999; Johnson et al., 2000; Lindsey et al., 2002; Schenk and DeGrofft, 2003). Increased efficiency of sorting bull spermatozoa has evolved through significant instrumentation and biological developments which have enabled the commercialization of the sperm sexing technology in the dairy industry, although conception rates in cows after low dose AI with sexed frozen-thawed spermatozoa are still lower than after standard frozen semen AI (Seidel et al., 1999). Subsequently, over 20 000 calves of pre-determined sex have been produced from commercially available sex-sorted frozen-thawed bull spermatozoa (Seidel, 2003). However, similar developments have not been made in the sheep industry and were examined in this thesis. In this study, successful cryopreservation of sex-sorted ram spermatozoa and production of offspring of the pre-determined sex (X: 94.4 %; Y: 100 %) was achieved after low dose (2-4 x 106 total) insemination using conventional laparoscopic intrauterine (IU) AI. However, the overall pregnancy rate for ewes inseminated with sex-sorted frozen-thawed spermatozoa was low (25 %) compared to ewes inseminated with a commercial dose (140 x 106 total) of non-sorted frozen-thawed spermatozoa (54 %). Cryopreservation has been found to not only reduce the proportion of motile spermatozoa, but cause the remaining spermatozoa to undergo changes that advance membrane maturation thereby shortening their lifespan, especially after in vivo fertilisation (Gillan and Maxwell, 1999). It was found that sorting prior to cryopreservation accelerated the maturation of sperm membranes and after co-incubation with oviducal cells in vitro, sorted frozen-thawed spermatozoa were released more rapidly than non-sorted (control) frozen-thawed spermatozoa. The potentially reduced lifespan of sorted frozen-thawed spermatozoa, and practical constraints on the number of spermatozoa that can be sorted for an insemination dose, makes insemination close to the site of fertilisation and time of ovulation critical for successful fertilisation. After treatment of ewes with GnRH to increase the precision of insemination in respect to the time of ovulation, there was no difference in pregnancy rate between ewes inseminated before, during or after the assumed time of ovulation. Furthermore, there was no difference in pregnancy rate after IU AI with similar doses of sorted frozen-thawed and non-sorted frozen-thawed spermatozoa in GnRH-treated ewes. The minimum dose of sorted frozen-thawed spermatozoa required for commercially acceptable pregnancy rates determined after IU AI was high (20 x 106 motile). Consequently, alternative methods for efficiently producing large numbers of offspring of a pre-determined sex using flow cytometrically sorted ram spermatozoa were investigated. Ram spermatozoa can be stored for short periods of time in a chilled state (liquid storage) or for an indefinite period of time in a frozen state (frozen storage; Salamon and Maxwell, 2000). The fixed location of the sperm sorter requires the need for transport of semen from the point of collection to the site of sorting and processing, but also from the sperm sorter site to the recipient females under artificial conditions. In this study, ram spermatozoa liquid stored for 24 h prior to sorting were efficiently sorted, frozen, thawed and after in vitro fertilisation and culture produced a high proportion of grade 1 blastocysts. Similarly, spermatozoa stored at reduced temperatures after sorting maintained high sperm quality for up to 6 days. Furthermore, frozen-thawed spermatozoa from rams and some non-human primates were successfully prepared for sorting and efficiently sorted producing spermatozoa with high quality in vitro parameters. The quality of frozen-thawed ram spermatozoa after sorting was such that successful re-cryopreservation after sorting was possible. Low numbers of frozen-thawed sorted and re-frozen and thawed spermatozoa were optimal for IVF and a high proportion of grade 1 in vitro embryos of a pre-determined sex were produced. These embryos were either transferred immediately or vitrified prior to transfer, extending the application of the sperm sexing technology further. The birth of lambs of pre-determined sex after transfer of both fresh and vitrified embryos derived from frozen-thawed sorted spermatozoa was achieved. The findings in this thesis suggest that sorted frozen-thawed ram spermatozoa may have more advanced membrane maturation state than non-sorted frozen-thawed spermatozoa, resulting in a decreased fertilizing lifespan in the female reproductive tract. Despite this, the use of sexed ram spermatozoa in a number of physiological states (fresh, liquid, frozen) with several different ARTs is possible in producing significant numbers of offspring of a pre-determined sex. Improved efficiency in both sperm sexing and associated reproductive technologies is required for commercialization to be achieved in the sheep industry.

Orientador: Sony Dimas Bicudo
Banca: Eunice Oba
Banca: Paulo Henrique Franceschini
Banca: Valquíria Hypólito Barnabé
Banca: Maria Madalena Pessoa Guerra
Resumo: O Objetivo deste estudo foi determinar o efeito da adição do surfactante lauril sulfato de sódio (Orvus es Paste OEP) e dos antioxidantes Trolox-C (6- hidroxi-2, 5,7,8-tetrametilcroman-2-acido carboxílico) e catalase ao meio diluidor, na motilidade espermática, integridade de membrana plasmática, acrossomal e mitocondrial, estádio de capacitação e geração de radicais livres no espermatozóide ovino pós-descongelação. Para isso, foram realizados dois experimentos. No Experimento 1, avaliou-se o efeito da adição do surfactante ao diluidor. O sêmen de 10 carneiros foi coletado por meio de vagina artificial e diluído para uma concentração final de 400x106 espermatozóides/mL no meio Tris-gema contendo OEP (0; 0,5 e 1%) ou no diluidor glicina-gema-leite (controle). A motilidade foi determinada pelo sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA), a integridade de membrana pela combinação dos corantes fluorescente iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína (IP+DIC) e o estádio de capacitação pela técnica da CTC. Houve efeito significativo do tratamento em todos os parâmetros da motilidade, na integridade de membranas e na capacitação espermática. A adição de 0,5% ou 1% de OEP ao diluidor TRIS-gema aumentou significativamente (P<0,05) a motilidade, a integridade de membranas e o percentual de espermatozóides não capacitados, comparado ao controle. O diluidor TRIS 1 foi selecionado para utilização como meio base para o experimento 2. No Experimento 2, foi determinado o efeito da adição dos antioxidantes ao diluidor. O sêmen foi coletado e os seguintes tratamentos foram aplicados: T1- TRIS (controle), T2- TRO+ (diluidor T1 + Trolox, 50mM/108 espermatozóides), T3-CAT+ (diluidor T1 + catalase, 50mg/mL), T4- TRO/CAT+ (diluidor T1 + Trolox e Catalase, nas mesmas concentrações utilizadas no T2 e T3)...(Rsumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The aim of this study was to determine the effect of addition of surfactant sodium lauryl sulfate (Orvus es Paste OEP), and antioxidants, Trolox-C (6- hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxilic acid) and catalase to an extender on the motility, plasmatic and acrosomal and mitochondrial membrane integrity, capacitation status and free radicals generation of post thaw ram spermatozoa. Two experiments were performed. In Experiment 1, the effect of addition of surfactant was evaluated. The semen was collected from ten rams by artificial vagina and it was diluted to a final concentration of 400x 106 sperm/mL in egg yolk-Tris extender containing OEP (0, 0.5 and 1%) or glycinegg yolk-milk extender (control). The sperm motility was evaluated using a computer-assisted sperm analysis (CASA); the membrane integrity was verified using the fluorescent stains (propidium iodide and carboxyfluorescein diacetate) and the capacitation status determined by CTC technique. There was a significant treatment effect in all parameters involving sperm motility, membrane integrity and spermatic capacitation. The addition of OEP 0.5% or 1% to the egg yolk-Tris extender improved (P<0.05) the motility and membrane integrity and the percentage of uncapacited spermatozoa compared to the control. Then, the TRIS 1 extender was selected to be used at experiment 2. Experiment 2: the Exp 2 aimmed to determine the effect of antioxidants addition to the extender. Semen was collected and these treatments were applied: T1 - egg yolk-Tris extender (control), T2- TRO+ (T1 extender +Trolox, 50mM/108 spermatozoa), T3- CAT+ (T1 extender + catalase, 50mg/mL) and T4 TRO/CAT+ (T1 extender + trolox and catalase on the concentrations used in T2 and T3). Motility was determined by CASA system, plasmatic and acrosomal 4 membrane integrity and mitochondrial function were evaluated with PI, FITCPSA and JC-1 association...(Complete abstract, click electronic address below)
Doutor

Aimed to evaluate the antioxidant potential of freeze-dried pulp of the Noni (Morindacitrifolia) in addition to a diluent for semen freezing, the concentrations of 2,35mg / mL; 4,70mg / mL and 4,70mg / mL on the in vitro viability of sheep sperm. A total of five ejaculates from two breeding race Santa Inês aged 1 and 2 years, the technique of artificial vagina were collected. Semen was divided into equal volumes, diluted in the means corresponding to each treatment, stored in straws of 0.25 ml, followed by cooling to - 0.25 ° C / min to 5 ° C, a time of stabilization of an hour and freezing at - 20 º C / min up to - 140 º C, when they were submerged in liquid nitrogen at - 196 ° C. the samples were thawed (37 ° C / 30 seconds) and evaluated for feasibility, computerized sperm kinetics, plasma membrane integrity, status of training and acrosome reaction and applied the test of slow thermoresistance test for parameters like motility, vigor and integrity of the plasma membrane by hypoosmotic test. The addition of the freeze-dried noni fruit pulp concentration of 4.70 mg / mL reduced lipid peroxidation of the means (p <0.5). However, after dilution of the semen, followed by freeze / thawing media containing higher concentrations 2,35mg / mL harmful (p <0.5) the total motility, progressive motility, average path velocity, progressive velocity, curvilinear velocity, amplitude of lateral head displacement, beat cross cross and concentration 4,70mg / mL on the straightness of ram spermatozoa, without affecting the integrity of the plasma membrane and the status of capacitation and acrosome reaction. At the concentrations used, the use of freeze-dried Noni pulp is recommended as an antioxidant ingredient in diluent for freezing ram semen.
Objetivou-se avaliar o potencial antioxidante da polpa liofilizada do fruto do Noni (Morindacitrifolia) em adição a diluente para congelação de sêmen, nas concentrações de 2,35mg/mL; 4,70mg/mL e 4,70mg/mL sobre a viabilidade in vitro de espermatozoides ovinos.Foram coletados um total de cinco ejaculados, provenientes de dois reprodutoresda raça Sant Inês com idade entre 1 e 2 anos, pela técnica da vagina artificial. O sêmen foi dividido em volumes iguais, diluído nos meios correspondentes a cada tratamento, armazenado em palhetas de 0,25mL, seguidoda refrigeração à 0,25 ºC/min até 5ºC, um tempo de estabilização de uma hora e, congelação à 20 º C/min até atingir 140 º C, quando foram submersas em nitrogênio líquido à 196 º C. As amostras foram descongeladas (37°C/30segundos) e avaliadas quanto a viabilidade, cinética espermática computadorizada, integridade de membrana plasmática, status de capacitação e reação acrossomal e aplicou-se o teste de teste de termorresistência lento quanto aos parâmetros motilidade, vigor e integridade da membrana plasmática pelo teste hiposmótico. A adição da polpa liofilizada do fruto do noni na concentração de 4,70mg/mL reduziu a peroxidação lipídica do meios (p<0,5). Entretanto após diluição do sêmen, seguida da congelação/descongelação, os meios contendo concentrações superiores a 2,35mg/mL foram prejudiciais (p<0,5) a motilidade total, motilidade progressiva, velocidade de percurso médio, velocidade progressiva, velocidade curvilinear, amplitude de deslocamento lateral da cabeça, batimento flagelar cruzado e na concentração 4,70mg/mL sobre a retilinearidade de espermatozóides ovinos, sem no entanto afetar a integridade da membrana plasmática e o status de capacitação e reação acrossomal. Nas concentrações utilizadas, não recomenda-se a utilização da polpa do Noni liofilizada, como ingrediente antioxidante em diluente para congelação de sêmen ovino.

Includes bibliographical references (leaves 232-257).
xv, 257 leaves : ill. ; 30 cm.
Title page, contents and abstract only. The complete thesis in print form is available from the University Library.
Aims to determine if the compatible solutes (proline, glycine betaine, and trehalose), the epididymal compounds (taurine, hypotaurine and inositol) or the antioxidants (carnosine and ascorbic acid) in tris-citrate based diluents could improve the post-thaw survival and/or fertility of ram spermatazoa.
Thesis (Ph.D.)--University of Adelaide, Dept. of Animal Science, 1996?

Orientação : Carlos Bettencourt
A criopreservação de sémen e a inseminação artificial (IA) em pequenos ruminantes tem vindo a ser uma prática crescente nos últimos anos como uma estratégia de conservação genética. A criopreservação induz alterações estruturais e funcionais na membrana dos espermatozóides (spz) reduzindo a fertilidade após a IA. Vários protocolos de congelação e diluidores foram desenvolvidos para reduzir estes danos e melhorar a sua capacidade fertilizante. O objetivo do estudo 1 foi comparar três protocolos de congelação de sémen de carneiro e bode utilizando distintos diluidores, através da avaliação da viabilidade dos spz, após a descongelação, em termos de motilidade individual progressiva (MIP) e da sua utilização na IA. O diluidor EZN mostrou-se mais eficiente que os diluidores Bioxcell® e Ovixcell® na criopreservação de sémen de ambas as espécies, apesar de estatisticamente não existirem diferenças significativas na MIP antes da congelação e após a descongelação (caprinos: p> 0,05 MIP congelação: Bioxcell®-70,0%, EZN-62,5%, MIP descongelação: Bioxcell®-25,0%, EZN-27,5%; ovinos: p> 0,05 MIP congelação: Ovixcell®-69,2%, EZN- 80,0%, MIP descongelação: Ovixcell®-35%, EZN-63,8%). O estudo 2 teve como objetivo a testagem de sémen de ovino criopreservado no Centro de Reprodução Animal da Herdade da Abóbada (CRAHA) recorrendo a dois protocolos de congelação através da fertilidade à IA por laparoscopia. A taxa de fertilidade foi de 32%. O protocolo de congelação com EZN mostrou-se mas eficiente que o diluidor Ovixcell® na criopreservação de spz ovinos para IA com sémen congelado. O estudo 3 teve como objetivo a testagem da fertilidade de sémen de caprino criopreservado no CRAHA recorrendo a dois protocolos de congelação através da fertilidade à IA por via cervical. A taxa de fertilidade foi de 27,9%. O diluidor Bioxcell® mostrou-se mais eficiente que o diluidor EZN na criopreservação de spz ovinos para IA com sémen congelado, pois nasceram um maior número de crias provenientes da congelação de sémen com Bioxcell® (n=15) do que com EZN (n=5).
The cryopreservation of semen and the artificial insemination (AI) in small ruminants has become an increasing practice as a strategy for the implementation of genetic conservation programs in the last few years. The cryopreservation process results in structural and functional changes in membrane sperm cells (spz) reducing the fertility after AI. Several semen extenders have been developed to lessen the damage and improve the fertilizing capacity. The aim of study 1 was to compare three protocols in terms of their effects on the conservation of ram and buck sperm cells using different semen extenders after the freezing process, evaluated through their individual progressive motility (IPM) with the purpose of using it in AI programs. The EZN protocol has proved to be more effective than the Bioxcell® and Ovixcell® in the cryopreservation of the semen of both species, although statistically there were no major differences in the IPM before freezing and after thawing (caprine: p> 0,05 MIP freezing: Bioxcell®-70,0%, EZN-62,5%, MIP thawning: Bioxcell®-25,0%, EZN- 27,5%; ovine: p> 0,05 MIP freezing: Ovixcell®-69,2%, EZN-80,0%, MIP thawning: Ovixcell®- 35%, EZN-63,8%). The purpose of study 2 was testing cryopreserved ovine semen in the Herdade da Abóbada Breeding Center (CRAHA) using two freezing semen protocols through the fertility in the laparoscopic insemination. The fertility rate was 32%. The EZN semen protocol has proved to be more effective than the Ovixcell® semen protocol in the cryopreservation of ovine spz for AI with frozen semen. The aim of study 3 was to test the fertility of caprine semen cryopreserved in CRAHA, using two semen protocols through the fertility in cervical AI. The fertility rate was 27,9%. The Bioxcell® protocol proved to be more effective than EZN in the cryopreservation of ovine spz for AI with frozen semen, since there was a bigger number of offspring coming from the semen freezing with Bioxcell® (n=15) than from EZN (n=5).

Orientação: Carlos Bettencourt
A inseminação artificial (IA) é a tecnologia reprodutiva com maior impacto na produção animal em todo o mundo. Em ovinos, a IA contribuiu, significativamente, para o melhoramento da genética dos rebanhos a nível mundial. No entanto, esta técnica é limitada, em comparação com outras espécies domésticas, por estar associada a resultados de fertilidade baixos e irregulares. Com o presente trabalho, pretendeu-se avaliar quais os fatores com maior impacto no sucesso da IA com sémen refrigerado em ovinos das raças Merina Preta (MP) e Merina Branca (MB), com o objetivo de, futuramente, melhorar os resultados da técnica e ajudar em planos de melhoramento animal nesta espécie. Os fatores avaliados foram: raça, exploração, idade das fémeas, local de deposição do sémen, e condição corporal (CC). Para a realização do nosso estudo, procedeu-se à inseminação de 419 ovinos pertencentes ao esquema de seleção da Associação Nacional de Criadores de Ovinos da Raça Merina (ANCORME). Os dados recolhidos foram registados aquando da inseminação. Os fatores exploração, idade da fémea e local de deposição do sémen demonstraram ser fatores com um impacto significativo no sucesso do nosso estudo. O fator raça e a CC não entraram para o modelo estatístico. Em relação ao fator exploração este demonstrou-se significativo no sucesso da IA, sendo que as variáveis Dg+ e a fertilidade influenciaram positivamente (p <0.05), a prolificidade demonstrou ser significativa em relação ao fator idade (p <0.05) e a fertilidade demonstrou ter efeito significativo (p <0.05) perante o local de deposição do sémen. Estes fatores devem ser tidos em conta de forma a avaliar a performance da técnica sendo pontos importantes a calcular, na realização de programas de melhoramento animal em ovinos.
Artificial insemination (AI) is the reproductive technology with the greatest impact on livestock production worldwide. In sheep AI has contributed significantly to the improvement of herd genetics worldwide. However, this technique is limited compared to other domestic species because it is associated with low and irregular fertility results. The present work aimed to evaluate which factors have the greatest impact on the success of AI with refrigerated semen in Merina Preta (MP) and Merina Branca (MB) sheep in order to improve the results of the technique in the future, and assist in animal breeding plans in this species. The factors evaluated were breed, farm, age of the female, place of semen deposition, and body condition score. To carry out our study, 419 sheep were inseminated in the selection scheme of the National Association of Merine Sheep Breeders (ANCORME). These sheep were inseminated and data were recorded at insemination time. The factors farm, female age and place of semen deposition proved to be factors with a significant impact on the success of our study. The breed factor and body condition score did not enter the statistical model. The variables Dg+ and fertility showed to be significant in the farm factor in the success of AI (p <0.05), prolificacy was significant in the age factor (p <0.05) and fertility showed significant effect (p <0.05) in semen deposition site. These factors should be taken into account in order to evaluate the performance of the technique and important points to calculate when conducting animal breeding programs in sheep.

Orientação: Carlos Manuel Varela Bettencourt
Este estudo pretendeu: I- Descrever o procedimento do exame andrológico em carneiros e relaciona-lo com a qualidade do sémen; II- Demonstrar as alterações induzidas pela criopreservação e descongelação no sémen de carneiro; III- Comparar a eficácia de dois extensores de sémen (OVIXCellÒ e Glucose-Citrato-Gema de ovo); IV– Determinar os Índices de Fertilidade, Natalidade e número médio de borregos por parto resultantes da inseminação artificial com sémen refrigerado e descongelado. Através da estatística de Pearson, determinou-se uma correlação positiva entre os vários parâmetros do exame andrológico e a qualidade do sémen. A concentração apresentou uma correlação forte (r=0,8), A circunferência escrotal (r=0,59), motilidade (r=0,59), volume (r=0,58) e morfologia (r=0,46) apresentaram correlações médias. Os resultados permitem afirmar com alguma segurança que um carneiro “Apto para Reprodução” produzirá um ejaculado de boa qualidade. Foram feitas 13 sessões de colheitas de sémen. O sémen obtido foi submetido a um protocolo de congelação com dois extensores diferentes; OVIXCellÒ e Glucose- Citrato-Gema de ovo. Todas as amostras de sémen foram avaliadas antes da criopreservação e após a descongelação, quanto á motilidade, vitalidade e morfologia. A criopreservação e descongelação têm um impacto bastante negativo na viabilidade do sémen, independentemente do extensor utilizado. Registou-se um decréscimo de 50% na motilidade progressiva; de 40% na vitalidade espermática e um aumento de 20% de espermatozoides com morfologia anormal. A utilização de Glucose- Citrato-Gema de ovo mostrou-se vantajosa relativamente à utilização de OVIXCellÒ por apresentar um perfil de alterações menos significativo à descongelação. O sémen diluído com OVIXCellÒ teve uma perda de motilidade 10% superior, de vitalidade 7% superior e uma contagem de espermatozoides com morfologia anormal 23% superior quando comparado com o sémen diluído com Glucose-Citrato-Gema de ovo. Relativamente ao índice de Fertilidade e Natalidade, a preparação de doses de inseminação artificial com 50x106spz viáveis/dose poderá compensar a fraca viabilidade do sémen descongelado aplicado por laparoscopia. A utilização desta concentração permitiu obter índices de fertilidade de 34% e de natalidade de 42%, ambos satisfatórios relativamente aos índices descritos na bibliografia. Os resultados não foram conclusivos quanto á média de borregos por parto.
This study aimed to: I- Describe the procedure of the breeding soundness evaluation in rams and relate it to the quality of semen; II– Demonstrate the changes induced by cryopreservation and thawing in ram semen; III - Compare the change profile induced by freezing and thawing in semen extended with OVIXCellÒ and with Glucose- Citrate-Egg yolk); IV– Determine the Fertility and Birth rates and average of lambs per lambing resulting from artificial insemination with refrigerated and thawed semen. Using Pearson’s statistics, determined a positive correlation between the various parameters of the breeding soundness evaluation and the quality of semen. Concentration had a strong correlation (r = 0.8); scrotal circumference (r = 0.59), motility (r = 0.59), volume (r = 0.58) and morphology (r = 0.46) had medium correlations. This analysis allows us to assert, that a "Suitable for Reproduction" ram will produce a good quality ejaculate. Thirteen semen collection sessions were carried out. Collected semen was submitted to a freezing protocol with two different extenders; OVIXCellÒ and Glucose- Citrate-Egg Yolk. All semen samples were evaluated before freezing and after thawing for motility, vitality and morphology. Cryopreservation and thawing had a very negative impact on semen viability, regardless of the used extender. It was noted, a 50% decrease in progressive motility, a 40% decrease in sperm vitality and a 20% increase in abnormal morphology count. The use of the Glucose-Citrate-Egg Yolk Extender was advantageous over the use of OVIXCell® because it presented a less significant change profile after thawing. Semen extended with OVIXCellÒ had 10% higher motility loss, 7% higher vitality loss and a 23% higher abnormal sperm morphology count when compared to semen diluted with Glucose-Citrate-egg yolk. Regarding the Fertility and Birth rates, artificial insemination with a concentration of 50x106 viable spz/dose may compensate for the poor viability of thawed semen when applied by intrauterine laparoscopy. Insemination of sheep with these concentrations resulted on a fertility rate of 34% and a 42% birth rate. These rates are satisfactory relative to those described in literature. Results were not conclusive regarding the average number of lambs per lambing.

Two trials were conducted to quantify the effects of GnRH and prostaglandin in conjunction with a 7-d CIDR on estrus and on pregnancy rate in comparison with a traditional synchronization protocol. In trial 1, ewes (n=12) were randomly allotted to one of three treatments: CIDR (7 d) with administration of GnRH (Cystorelin®, 50μg, im) at CIDR insertion and PGF2α (Lutalyse®, 20 mg, im) on d 6.5 (GnRH1); the GnRH1 protocol with a second injection of GnRH 30 h after CIDR removal (GnRH2); and CIDR (11 d) with administration of PGF2α at CIDR insertion and PMSG (400 iu) at CIDR removal (PMSG). A blood sample was obtained every 2 h for 42 h after CIDR removal for serum LH analysis. On d 8 after CIDR removal, blood samples were obtained at 12 h intervals for 36 h for serum P4 analysis. One ewe in the GnRH1 group did not retain the CIDR device and was excluded from the analysis. Mean LH concentration did not differ (P = 0.48) among groups. Time and time x treatment affected (P < 0.001) mean LH concentration. Mean P4 concentration was not affected (P = 0.26) by time, treatment or their interaction. In trial 2, ewes (n=72) were randomly allotted to one of the three treatments described in trial 1. At CIDR removal, three ewes per treatment were joined with a single ram fitted with a marking harness in each of 8 pens. Ewes were monitored every hour for estrus activity and ultrasounded transabdominally 60 d after CIDR removal for pregnancy. Estrus activity did not differ (P > 0.05) among the groups. Marking frequency was 92 percent, 75 percent, and 88 percent for GnRH1, GnRH2, and PMSG groups, respectively. Mean interval to estrus was shorter (P < 0.05) for the GnRH2 than for the PMSG group and tended to be reduced (P < 0.10) compared with the GnRH1 group. Pregnancy rate differed (P < 0.05) among treatments (79 percent, 58 percent and 38 percent for GnRH1, GnRH2, and PMSG groups, respectively). These results indicate that synchrony of estrus and pregnancy rate to natural service can be increased in response to a CIDR protocol when combined with administration of GnRH rather than PMSG.