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Dissertations / Theses on the topic 'Signalisations intracellulaires'
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Rémy, Ingrid. "Visualisation des voies de signalisation intracellulaires dans les cellules vivantes." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 2000. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk1/tape2/PQDD_0032/NQ62104.pdf.
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2
LeBrun, Michel. "Signalisation intracellulaire et mécanismes de néphrotoxicité de la gentamicine." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 2001. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk3/ftp04/NQ60775.pdf.
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3
Girardin, Stephen. "Régulation de la voie de signalisation intracellulaire JNK/SAPK." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2001. http://www.theses.fr/2001STR13179.
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4
Grützmacher-Frêche, Barbara. "Rafts et signalisation intracellulaire, le modèle du proto oncogène RET." Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10077.
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RET est un récepteur transmembranaire à activité tyrosine kinase qui a pour ligand un facteur neurotrophique, le GDNF. Les effets biologiques du GDNF nécessitent l'association de RET avec des microdomaines lipidiques des membranes cellulaires appelés rafts. D'autres part, des mutations germinales activatrrices de RET sont responsables du développement des néoplasies endocriniennes multiples de type 2A (NEM2A), et nous avons montré que ces formes oncogéniques de RET ne s'associent pas aux rafts. Nous avons alors développé un système d'acitivation inductible de RET, qui mime une activation de type NEM2A. Ce modèle nous a permis de démontrer que la signalisation intracellulaire NEM2A échappe à un contrôle étroit imposé par les rafts et conduit spécifiquement à une activation dérégulée de la kinase AKT. Ces résultats offrent de nouvelles perspectives pour comprendre les altérations des signalisations oncogéniques NEM2A et révèlent un rôle pour les rafts dans le contrôle qualitatif de l'activation d'AKTThe tyrosine kinase RET is a receptor for the neurotrophic factor GDNF. The association of RET with membrane microdomains called lipid rafts is mandatory for the biological effects of GDNF. On the other hand, dominant activating mutations of RET are causally associated with the development of the multiple endocrine neoplasia type 2A (MEN2A) sydrome and we have shown that oncogenic RET does not associate with lipid rafts. Using an inducible dimerization system of the RET protein that mimics oncogenic RET MEN2A activation, we showed that specific temporal adjustment of ligand-induced AKT activation, but not ERK activation, is dependent upon a lipid raft environment and that this control step is bypassed by RET mutants. The results provide new insights in the understanding of RET oncogenic signalling pathway and unravel a role for lipid rafts in the temporal regulation of AKT activation
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Willaime-Morawek, Sandrine. "Apoptose neuronale et second messager céramide : étude des voies de signalisation intracellulaires." Paris 6, 2003. http://www.theses.fr/2003PA066339.
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6
Ichas, François. "La mitochondrie, organelle excitable : participation active à la signalisation calcique intracellulaire." Bordeaux 2, 1997. http://www.theses.fr/1997BOR28475.
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7
Faisy, Christophe. "Hyperréactivité bronchique provoquée par les β2-agonistes : mécanismes de signalisation intracellulaire." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05S006.
Full textAbstract:
Ce travail montre qu'une incubation prolongée des bronches humaines isolées en présence de fénotérol à dose pharmacologique induit une hyperréactivité bronchique à l'endotheline-1. Ce phénomène intéresse trois éléments clés de l'hyperréactivité bronchique : la cellule musculaire lisse, les fibres neurosensorielles et la cellule épithéliale. Nous avons mis en évidence, en utilisant des techniques d'immuno-histochimie et de biologie moléculaire, que l'exposition prolongée au fénotérol induit la synthèse des récepteurs de l'endothéline-1 et celle de leur ARN méssager au niveau de l'épithélium du tonus musculaire bronchique. Nous avons également montré que l'hyperréactivité dépend d'une cascade d'évènements intracellulaires impliquant la stimulation des récepteurs vanilloïdes présents sur les fibres neurosensorielles ainsi que l'activation du NF-kB, du système des MAP-kinases et des protéines kinases COur result show that chronic fenoterol exposure induces hyperresponsiveness top endothelin-1 in human isolated bronchi. This effect involves three crucial factors implied in airways responsiveness : the epithelial cells, the sensory nerves, and the airway smooth muscle cells. Our immunohistochemical and biomolecular findings reveal that fenoterol-induced sensitisation of human isolated bronchi involves epithelial endothelin-1 receptors synthesis, which suggests perturbation of the epithelial regulation of airway smooth muscle contraction in response to endothelin-1. In addition, we highlighted the intracellular signalling pathways implied in fenoterol-sensitisation including sensory nerves by vanniloid receptors stimulation, and NF-kB, MAP-Kinases and protein kinases C activation
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Carpier, Jean-Marie. "Rôle du traffic intracellulaire dans la signalisation et la réponse lymphocytaire T." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCB242/document.
Full textAbstract:
Une réponse immunitaire efficace contre un large spectre de pathogènes ou contre des cellules tumorales nécessite l’activation des lymphocytes T CD4+. L’engagement du récepteur T par un peptide antigénique apprêté sur les produits de classe-II du complexe majeur d’histocompatibilité (peptide-CMH, pCMH) portés par une cellules présentatrices d’antigène (CPAg), conduit à de nombreux remaniements du lymphocyte T. Il s’établit notamment à l’interface entre le lymphocyte T et la CPAg, une structure spécialisée qui est la synapse immunologique (ou synapse immune). La synapse est le siège d’événements de signalisation intenses où diverses molécules de signalisation nécessaires l’amplification et la diversification du signal provenant du TCR sont recrutées. Ces évènements de signalisation sont régulés par l’adaptateur transmembranaire LAT (« Linker for Activation of T cells ») qui est présent à la membrane plasmique ainsi que dans des compartiments intracellulaires. La fraction intracellulaire de LAT est recrutée à la synapse immune et il est proposé que ces compartiments vésiculaires participent à la signalisation lymphocytaire T. L’objectif de ce travail de thèse a été de déterminer les voies de trafic intracellulaire nécessaires au recrutement de la fraction intracellulaire de LAT à la synapse immunologique et de comprendre le rôle de ce transport dans l’activation et la réponse lymphocytaire T. Par des approches d’extinction de l’expression de différentes molécules de transport intracellulaires dans les cellules T Jurkat ou des lymphocytes T CD4+ primaires humains ou par l’utilisation de souris Knock-Out (KO), nous avons mis en évidence plusieurs voies de transport impliquées dans le transport de LAT. Nous avons ainsi mis en évidence que le recrutement de LAT à la synapse immunologique nécessite une voie de sécrétion dépendante de la protéine SNARE vésiculaire VAMP7. L’analyse plus avant du transport de LAT a par ailleurs permis de montrer que LAT est présente dans des compartiments de recyclage alors que VAMP7 est principalement localisée dans l’appareil de Golgi. L’étude de la petite GTPase Rab6 et de la protéine t-SNARE syntaxine-16 qui sont impliquées dans des voies de transport rétrograde entre les endosomes de recyclage et l’appareil de Golgi, a permis de dévoiler que cette voie de transport est requise dans le recrutement de LAT à la synapse immunologique, ainsi qu’à la réponse lymphocytaire T in vitro, ex vivo et in vivo. Enfin, le rôle de la protéine de transport intraflagellaire IFT20, qui a déjà été mis en cause dans le transport du TCR, a été analysé chez la souris et a également montré des défauts de recrutement de LAT à la synapse et dans l’activation lymphocytaire T ex vivo et in vivo. Nos résultats mettent ainsi en évidence que la régulation du transport intracellulaire dans les lymphocytes T joue un rôle crucial dans l’activation lymphocytaire T. Nous proposons ainsi un modèle dans lequel LAT est constitutivement internalisé depuis la membrane plasmique et poursuit une voie de recyclage dépendante de l’appareil de Golgi qui contient la machinerie de sécrétion associé à VAMP7. Cette voie de transport intracellulaire, conditionnerait la resécrétion polarisée de LAT à la synapse immunologique dans les conditions d’activation et une réponse lymphocytaire T robusteThe immune response against a broad spectrum of pathogens or against tumor cells requires the CD4 + T lymphocytes activation. The triggering of T Cell Receptor (TCR) by peptide-MHC through antigen-presenting cells (APC) leads to numerous T-cell remodeling and the establishment of a specialized structure at the interface between the T lymphocyte and the APC: the immunological synapse. The synapse is the site of intense signaling events where various signaling molecules are recruited in order to amplify and diversify the signal initiated by the TCR. These signaling events are regulated by the transmembrane adapter LAT ("Linker for activation of T cells") which is present at the plasma membrane as well as in intracellular compartments. The intracellular fraction of LAT is recruited at the immune synapse and it is proposed that these vesicular compartments participate in T lymphocyte signaling. The objective of this thesis work was to determine the intracellular trafficking pathways required for the recruitment of the intracellular pool of LAT to the immunological synapse and understand the role of this transport in T cell activation and response. By silencing the expression of different intracellular transport molecules in Jurkat T cells or primary human CD4 + T lymphocytes, or by using Knock-Out (KO) mice, we have highlighted several trafficking pathways involved in the transport of LAT to the immune synapse. We have demonstrated that the recruitment of LAT to TCR activation sites requires a secretion pathway dependent on the vesicular SNARE protein VAMP7. Further analysis of the transport of LAT showed that LAT is present in recycling compartments whereas VAMP7 is mainly located in the Golgi apparatus. The study of the small GTPase Rab6 and the t-SNARE syntaxin-16 protein that are involved in the retrograde transport pathways between the recycling endosomes and the Golgi apparatus, demonstrated that this route of transport is required for the recruitment of LAT to the immunological synapse and for T lymphocyte response in vitro, ex vivo and in vivo as well. Finally, the role of intraflagellar transport protein IFT20, which has already been implicated in the transport of TCR, was analyzed in mice and also showed defects in LAT recruitment to synapse and T lymphocyte activation ex vivo and in vivo. Our results thus show that the regulation of intracellular transport plays a crucial role in T lymphocyte activation. We thus propose a model in which LAT is constitutively internalized from the plasma membrane and pursues a Golgi-dependent recycling pathway that contains the secretion machinery associated with VAMP7. This intracellular transport pathway would thus allow the polarized LAT re-secretion to the immunological synapse under activation conditions and a robust T lymphocyte response
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Dugourd, Céline. "Rôle des interactions des voies PI3-K et ERK dans la régulation de la réponse proliférative de l'angiotensine II via le récepteur AT1." Paris 11, 2003. http://www.theses.fr/2003PA112200.
Full textAbstract:
L'angiotensine II (AngII) contribue à la prolifération des cellules musculaires lisses (CML) en stimulant les voies des phosphatidylinositol 3-kinases (PI3-K) et des extracellular signal-regulated kinases (ERK). Les cibles de PI3-K ainsi que la régulation des interactions des voies PI3-K/Akt et ERK impliquées dans cette réponse ne sont pas clairement déterminées. Parmi les mécanismes moléculaires pouvant intervenir, la protéine PEA-15 (phosphoprotein enriched in astrocytes), capable de moduler la localisation nucléaire d'ERK et décrite comme substrat d'Akt, est un candidat potentiel. Nos objectifs ont été: 1) d'identifier les cibles des PI3-K impliquées dans l'effet prolifératif de l'AngII et 2) dans un contexte de suractivation d'Akt d'identifier les interactions moléculaires existant entre les voies PI3-K et ERK et d'évaluer leurs conséquences fonctionnelles sur la réponse proliférative de l'AngII. Dans des CML d'aorte de rat et dans des CHO surexprimant le récepteur AT(lA) (CHO-AT(lA)), les voies PI3-K et ERK sont activées indépendamment mais sont toutes deux nécessaires à la réponse mitogénique de l'AngII, bloquée par un inhibiteur spécifique d'Akt ou l'expression d'un mutant dominant négatif d'Akt. De façon inattendue, la surexpression d'Akt en CHO-AT(lA) inhibe la réponse proliférative de l'AngII. Cet effet est associé à une diminution de l'activité transcriptionnelle d'ERK consécutive à la rétention cytosolique de ces kinases, sans modification des niveaux de phosphorylation. La surexpression de PEA-15 en CHO-AT(lA) entraîne aussi une relocalisation cytoplasmique d'ERK et une inhibition de la réponse proliférative. De plus, l'activation d'Akt augmente la demi-vie de PEA-15. Nos résultats montrent que 1) l'activation spécifique d' Akt endogène est nécessaire à la réponse proliférative de l'AngII et 2) la suractivation d'Akt régule négativement ERK, par stabilisation de la protéine PEA-15 et rétention d'ERK au cytoplasme, abolissant l'effet prolifératif de l'AngIIAngiotensin II (AngII) takes part to vascular smooth muscle cells (SMC) proliferation by stimulating the phosphatidylinositol 3-kinases (PI3-K) and extracellular signal-regulated kinases 1/2 (ERK) pathways. The targets of PI3-K and the regulation of the interactions possibly involved between the PI3-K/Akt and ERK pathways are not clearly defined in this cellular response. Among the molecular mechanisms, the PEA-15 (phosphoprotein enriched in astrocytes) protein, which modulates ERK nuclear localization and is an Akt substrate, seemed a good candidate. Our aims have been : 1) to identify the PI3-K targets implicated in the proliferative effect of AngII and 2) to precise the molecular interactions between the PI3-K and ERK pathways and to assess their functional consequences on the AngII proliferative response when modifying the balance between the two pathways. In rat aortic SMC and in CHO cells overexpressing the AT(lA) receptor (CHO-AT (lA)), the PI3-K and ERK pathways are independently activated but both necessary for the mitogenic response, blocked by a specific Akt inhibitor or by the expression of a dominant negative Akt mutant. Unexpectedly, Akt overexpression in CHO-AT(lA) inhibits the proliferative response of AngII. This effect is associated with a decrease of ERK transcriptional activity without modification of its phosphorylation levels. Furthermore, Akt overexpression leads to the down-regulation of the AngII-induced ERK nuclear translocation. PEA-15 overexpression also leads to ERK cytosolic relocalization and inhibition of the proliferative response in CHO-AT(lA). Moreover, Akt activation increases PEA-15 half-life. Our results show that 1) the specific activation of endogenous Akt is necessary to the proliferative response of AngII and 2) the overactivation of Akt negatively regulates ERK by stabilizing PEA-15 and retaining ERK in the cytosol, abrogating the proliferative effect of AngII
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Steinckwich, Natacha Nüsse Olivier. "La régulation du calcium intracellulaire et son rôle dans la signalisation des phagocytes." [S.l.] : [s.n.], 2007. http://www.scd.uhp-nancy.fr/docnum/SCD_T_2007_0074_STEINCKWICH.pdf.
Full text
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Steinckwich, Natacha. "La régulation du calcium intracellulaire et son rôle dans la signalisation des phagocytes." Nancy 1, 2007. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_2007_0074_STEINCKWICH.pdf.
Full textAbstract:
Le contrôle des fonctions des neutrophiles humains dépend de plusieurs voies de signalisation où la signalisation calcique joue un rôle prépondérant. Celle-ci est basée sur une entrée de calcium extracellulaire consécutive à une déplétion des réservoirs calciques intracellulaires (SOCE). Ces entrées calciques dites capacitives sont régulées par des canaux ioniques (SOC) qui constituent des cibles thérapeutiques potentielles. Un nouvel inhibiteur des influx calciques a été développé chez les lymphocytes: le BTP2 (3,5-bistrifluomethyle pyrazole). Nous avons cherché à savoir si le BTP2 agissait sur des cellules HL60 différenciées et sur des neutrophiles humains. Nos résultats montrent que le BTP2 réduit significativement les entrées SOCE. De plus, le BTP2 inhibe l'exocytose d'enzymes microbicides, ainsi que la libération d'espèces oxygénées réactives (ROS). Par contre, le BTP2 n'affecte pas significativement les fonctions bactéricides importantes des granulocytes : la production intra-phagosomale de ROS, la phagocytose et la destruction de bactéries Pseudomonas aeruginosa. Certaines études suggèrent que le BTP2 agirait sur les canaux SOC constitués en particulier de protéines TRPC. Nous avons donc étudié chez les granulocytes l'expression des ARNm des protéines TRPC. Une expression différentielle a pu être corrélée à des changements de sensibilité au BTP2. Ce dernier est donc un nouvel outil qui pourrait permettre de mettre en évidence le rôle de la signalisation calcique chez les granulocytes afin de développer de nouvelles stratégies thérapeutiques dans le cadre de maladies inflammatoires chroniquesStore operated calcium entry (SOCE) is a key regulator in the activation of leukocytes. This calcium entry is regulated by SOC channels. A new inhibitor of SOCE, the BTP2 (3,5-bistrifluoromethyl pyrazole) has been identified in T lymphocytes. We therefore investigated the effect of BTP2 on calcium homeostasis and functional responses of human neutrophils. BTP2 significantly inhibited the calcium influx after stimulation with thapsigargin or fMLF. BTP2 reduced microbicidal enzyme release and superoxide anion production. On the contrary, phagocytosis, intraphagosomal radical production and bacterial killing by neutrophils were not significantly reduced. We studied TRPC mRNA expression during granulocyte differentiation; their presence changes during myelocyte differentiation. We also investigated whether these changes of gene expression are correlated with a change of BTP2 impact on store operated calcium influx. Our results suggest that differentiated HL60 cells and neutrophils are more sensitive to BTP2 than undifferentiated HL60 cells. This work suggests that BTP2 could become an important tool to characterize calcium signaling in neutrophils. Furthermore, BTP2 or related compounds could constitute a new approach to the down regulation of neutrophils in chronic inflammatory disease without compromising antibacterial host defense
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Gernez, Yaël. "Mécanismes fonctionnels et signalisation intracellulaire dans les maladies allergiques et inflammatoires chez l'homme." Thesis, Aix-Marseille 2, 2011. http://www.theses.fr/2011AIX20689/document.
Full textAbstract:
La première partie de ce travail se centre sur la recherche de tests sanguins (reposant sur les granulocytes) de dépistage, de suivi et d’efficacité thérapeutique dans différentes maladies allergiques. Elle débute par un travail réalisé dans la maladie asthmatique. Elle se poursuit par l’étude du rôle des granulocytes (polynucléaires neutrophiles et/ou polynucléaires éosinophiles et/ou basophiles) dans deux maladies allergiques : l’oesophagite à éosinophiles et les allergies alimentaires. Chez des patients atteints d’oesophagite à éosinophiles, nous avons étudier le profil d’activation des éosinophiles sanguins et de l’œsophage. Nous nous sommes focalisés sur certains marqueurs d’activation de surface (CD66b) et sur certains phosphoépitopes d’intérêt (Ph-STAT1 et Ph-STAT6). Nous avons démontré que les éosinophiles sanguins avaient un profil spécifique dans cette maladie. Enfin, cette première partie s’achève par deux études portant sur les basophiles sanguins dans les allergies alimentaires, plus précisément, dans les allergies aux fruits à coques ; Nous avons développé de nouveaux potentiels tests de dépistage de patients atteints d’allergies alimentaires, d’identification des allergènes responsables ainsi que de potentiels marqueurs d’évaluation d’efficacité de nouvelles thérapeutiques dans les allergies alimentaires par l’utilisation des marqueurs d’activation de surface des basophiles.La deuxième partie se centre principalement sur le rôle des polynucléaires neutrophiles (PNN) du sang et des voies aériennes des patients atteints de mucoviscidose. La mucoviscidose est la maladie génétique autosomique récessive la plus fréquente dans l’Europe du nord. Son pronostic est étroitement lié à l’atteinte pulmonaire, qui se caractérise par des infections à répétition, une obstruction et une inflammation à PNN. Notre équipe a tout d’abord démontré que les PNN sanguins de patients atteints de mucoviscidose présentaient un déficit en glutathion. Nous avons donc réaliser un essai clinique de phase IIa ou, N-acétyl-cystéine (précurseur du glutathion) était donné, à forte dose et par voie orale à des patients atteints de mucoviscidose. Ce traitement par N-acétyl-cystéine pendant douze semaines a permis une correction du déficit des PNN sanguins en glutathion. Cette correction de l’excès de stress oxydatif au sein des PNN a permis une diminution significative du nombre d’exacerbation chez les patients atteints de mucoviscidose. En revanche, possiblement en raison de la courte durée de ce traitement, aucune différence significative ne fut observée au niveau des paramètres de fonction respiratoire, tels que le VEMS. De plus, nous avons démontré que les PNN des voies aériennes des patients atteints de mucoviscidose dysfonctionnaient. En effet, alors qu’il était rapporté dans la littérature que les PNN nécrotiques des voies aériennes larguaient de manière passive l’élastase et la myélopéroxidase, nous avons démontré que les PNN vivants larguaient de manière active ces deux enzymes, dont la présence est en étroite corrélation avec le déclin de la fonction pulmonaire.. Nous avons alors émis l’hypothèse que les PNN, lors de leur migration du sang vers les voies aériennes, s’activaient anormalement. Nous avons donc décider d’étudier leurs cascade d’activations intracellulaire. Nous avons ainsi démontré que les PNN des voies aériennes des patients atteints de mucoviscidose présentaient une régulation positive de la voie mTOR. mTOR étaient possiblement activé par la pléthore d’acides aminés présents dans le poumon mucoviscidosique. mTOR pourrait refléter une possible survie prolongée des PNN des voies aériennes du poumon mucoviscidosique. Ces PNN pourraient aussi secréter de nouvelles protéines, alors même qu’ils sont « conventionnellement » définis comme cellules terminallement différenciées. [...]Summary of the first part. We hypothesized that granulocytes were not only playing an effector role in atopic diseases, but also a regulatory role. Furthermore, we proposed that granulocytes, due to their rapid activation response, could be used in rapid non-invasive whole blood assays for Allergic Asthma (AA), Food Allergy (FA) and Eosinophillic Esophagitis (EoE), three allergic diseases. We first studied asthma. Then, we explored the profil of activation of blood eosinophils in patients with EoE. We explored some activation surface markers (CD66b) and some intracellular phosphoepitopes of interest (Ph-STAT1 and Ph-STAT6). We then focused our attention on blood basophils in food allergy. We developped a potential blood basophil assay (based on two basophil activation surface markers, CD203c and CD63), which could discriminate a patient with food allergy, which could also identify the offending allergen and, which could monitor the effect of new therapy.Summary of the second part. We focused our attention on the role of the blood and sputum neutrophils in cystic fibrosis (CF). Cystic fibrosis is the most frequent disease in Caucasians. While CF affects all exocrine organs throughout the body, its lung manifestation represents the main cause of morbidity and mortality. We first discovered that blood neutrophils were deficient in glutathion. We therefore started a clinical phase IIa, where N-acetyl-cystein were given orally in high dose to patients with CF for twelve weeks. Thanks to this regimen, the deficit in glutathion in blood PNN disappeared. The number of exacerbations significantly decreased, however, no positive effect were observerd on the lung function. Furthermore, we demonstrated that profound functional and signaling changes readily occur within viable PNN recruited to CF airways, compared to their blood counterparts. For a long time, neutrophil dysfunction in CF airways has been equated with necrosis and passive release of elastase, DNA and, actin. However, we established recently by direct ex vivo analysis of airway neutrophils from CF patients that a large fraction of these cells are viable and appear to actively release these enzymes-containing granules. We also show that neutrophils that entered CF airways have increased phosphorylation of key effectors in the amino acid-regulated mammalian target of rapamycin (mTOR) pathway. An upregulation of the mTOR pathway might reflect an increase of the survival of the neutrophils in the airways. Another common view of peripheral neutrophils is that of terminally differentiated population, with little if any ability to become anabolic. However, we outlined the ability of human neutrophils to modify their transcriptional profile upon migration to the lung in CF. The last part of these thesis is a combination of knowledge that we acquired on the blood basophils in food allergy and on the neutrophils from the airways of patients with CF. We are currently trying to develop an unmet need blood (basophil) test which could discrimate the CF patients with allergic bronchopulmonary aspergillosis. We are also trying to understand the role of airways neutrophils and eosinophils in the pathogenese of these disease
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Fahem, Abdelaziz Guenounou Moncef Bellon Georges. "Elastokines et angiogenése : rôle de la MT1-MMP et signalisation intracellulaire mediée par Titre." S.n. : S.l, 2007. http://scdurca.univ-reims.fr/exl-doc/GED00000518.pdf.
Full text
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Boxio, Rachel. "Signalisation intracellulaire dans la régulation des fonctions bactéricides chez les polynucléaires neutrophiles de souris." Nancy 1, 2005. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_2005_0006_BOXIO.pdf.
Full textAbstract:
Depuis la création des souris transgéniques, l'étude de l'immunité innée de cet animal a connu un regain d'intérêt. Pour exploiter au mieux ce modèle expérimental, il fallait d'abord connaître son fonctionnement normal afin de comparer les connaissances ainsi acquises chez la souris aux données connues chez l'Homme. Ceci dans le but d'appréhender et de définir les limites du modèle murin. Nous avons isolé des neutrophiles du sang et de la moelle osseuse de souris et comparé leurs fonctions bactéricides. Nous avons montré que la moelle osseuse des souris contient une grande population de neutrophiles morphologiquement et fonctionnellement aussi matures que ceux issus du sang. D'autre part, la découverte de nouvelles molécules visant à stimuler l'activité microbicide des neutrophiles ainsi que l'étude des voies de signalisation intracellulaire aboutissant soit à l'activation de ces cellules, à leur survie ou à leur mort accélérée, nous ont permis de mieux comprendre leur fonctionnementSince the creation of the transgenic mice, the study of the innate immunity of this animal has received renewed interest. To exploit this experimental model as well as possible, it was initially necessary to know its normal function in order to compare to our current knowledge of the human immune system. The aim is to apprehend and define the limits of the murine model. We isolated neutrophils from mouse blood and bone marrow and compared their bactericidal functions. We have shown that mouse bone marrow contains a large population of neutrophils which are morphologically and functionally as mature as blood neutrophils. In addition, the discovery of new molecules aiming at stimulating the microbicidal activity of neutrophils as well as the study of intracellular signalling pathways leading to either the activation of these cells, their survival or their accelerated death, allowed us to better understand their regulation
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CASSARD, SYLVANIE. "Signalisation intracellulaire et internalisation par les composants du recepteur a l'antigene des lymphocytes b." Paris 7, 1996. http://www.theses.fr/1996PA077307.
Full textAbstract:
Le role des composants du recepteur a l'antigene des lymphocytes b (bcr), ig-alpha et ig-beta, a ete etudie dans deux fonctions du bcr : la transduction de signaux et l'internalisation d'antigenes, en utilisant des molecules chimeriques contenant les regions intracytoplasmiques de ig-alpha et ig-beta. Nous avons montre que ces chaines activent differentes voies de signalisation. Les chimeres ig-beta declenchent des oscillations calciques, alors que les chimeres ig-alpha declenchent un influx de calcium, comme les bcr de ces lymphocytes b. De plus, alors que les deux chimeres induisent la phosphorylation de nombreux substrats intracellulaires, seule ig-alpha induit une secretion de cytokine apres stimulation. Une analyse mutationnelle a permis de determiner que les capacites de transduction de ces chaines sont basees sur la presence d'un motif appele itam pour immuno-receptor tyrosine-based activation motif. Nous avons montre que l'activite de transduction de l'itam de ig-beta peut etre regulee par des sequences peptidiques localisees a l'interieur et a l'exterieur du motif. Ig-alpha et ig-beta contiennent aussi un signal d'internalisation constitutive base sur la presence d'un residu tyrosine present dans leur region cytoplasmique, mais ce signal est inactive par des sequences peptidiques specifiques de ig-beta, suggerant que la capacite du bcr a internaliser des antigenes monovalents est base sur les capacites d'internalisation constitutive et de recyclage a la membrane de ig-alpha.
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FLORES, JULLIEN VIVIANA. "Caracterisation de rlip76, un effecteur des gtpases ral. De la signalisation intracellulaire a l'endocytose." Paris 11, 1998. http://www.theses.fr/1998PA112357.
Full textAbstract:
Rala et ralb sont des gtpases presentant 85 pourcent de similarite entre elles et 50 pourcent de similarite avec les produits des protooncogenes ras. Les facteurs d'echange des proteines ral sont des effecteurs de ras, ce qui suggere que les proteines ral font partie d'une voie de signalisation intracellulaire controlee par ras. Afin de connaitre le role biologique de ral, nous avons recherche des proteines capables d'interagir avec la forme dite activee de ces proteines, par la methode du double hybride. Nous avons ainsi identifie une nouvelle proteine que nous avons appele rlip76. Des mutants du domaine effecteur ou des mutants dominants negatifs de rala n'interagissent pas avec rlip76 ce qui suggere que cette proteine pourrait etre un effecteur de ral. En plus du domaine de liaison a ral, rlip76 possede un domaine gap (gtpase activating protein) caracteristique des proteines capables de stimuler l'activite gtpase des membres de la famille rho. Nous avons montre que in vitro rlip76 stimule l'activite gtpase de cdc42 et rac1 mais pas celle de rhoa. Rlip76 possede en outre un domaine carboxyterminal predit pour adopter une structure en coiled-coil et contenant un leucine zipper, et un domaine aminoterminal de fonction inconnue. Un crible par la methode du double hybride nous a permis d'identifier 2, la chaine moyenne du complexe ap2, comme un partenaire moleculaire du domaine aminoterminal de rlip76. Ap2 joue un role d'adaptateur dans les vesicules d'endocytose entre le cote cytoplasmique de proteines transmembranaires et le manteau de clathrine. Nous avons montre que rlip76 interagit in vivo avec les complexes ap2 et que cette interaction ne semble pas etre regulee par la stimulation des cellules par l'egf (epidermal growth factor). Ral et rlip76 pourraient permettre de coordonner la signalisation controlee par ras avec l'endocytose de recepteurs membranaires impliques dans cette signalisation.
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Kiefer, Céline. "Mécanisme cinétique et moléculaire de CD38/NAD+glycohydrolase en relation avec la signalisation intracellulaire." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2002. http://www.theses.fr/2002STR13048.
Full textAbstract:
Le CD38/NAD+glycohydrolase (EC 3. 2. 2. 5 et 3. 2. 2. 6), conservé dans l'évolution, est à la fois une glycoprotéine transmembranaire de type II qui possède des propriétés de signalisation notamment chez les lymphocytes et d'adhésion cellulaire et une ectoenzyme qui transforme le nicotinamide adénine dinucléotide (NAD+) en ADP-ribose cyclique (ADPRc), un second messager impliqué dans la mobilisation du calcium intracellulaire dans une variété de cellules aussi bien chez les mammifères que chez les plantes et les invertébrés. La question posée était de savoir si l'activité catalytique du CD38/NADase est directement responsable de la signalisation intracellulaire induite par son activation. Selon notre hypothèse, seul un changement conformationnel de l'enzyme, conduisant à une interaction avec des partenaires de surface cellulaire, serait responsable de son implication dans la signalisation intracellulaire et indépendamment des produits de la réaction enzymatique. Ce travail de thèse consistait donc à éclaircir cette problématique selon deux approches complémentaires : 1) après avoir établi un schéma cinétique unificateur pour les enzymes de mammifères et d'invertébrés impliqués dans la biosynthèse de l'ADPRc, il s'agissait d'étudier le mécanisme cinétique et moléculaire en modulant les différentes constantes cinétiques et vérifier l'implication de l'ADPRc complexé à l'enzyme dans la signalisation 2) dans une deuxième partie, il s'agissait d'étudier la relation entre la structure du CD38/NADase et ses fonctions catalytiques et de signalisation en effectuant différentes mutations à des endroits de l'enzyme susceptibles d'être impliqués dans la catalyse et/ou la liaison du substrat. Ce travail a permis de conclure que seule la fixation de ligands (substrat, anticorps) serait responsable d'un changement conformationnel du CD38/NADase, conduisant à un dialogue avec les partenaires de signalisationCD38/NAD+glycohydrolase (EC 3. 2. 2. 5 et 3. 2. 2. 6) is at the same time an evolutionarily conserved type II transmembrane glycoprotein, which has signalling (e. G. In lymphocytes) and adhesion functions and also a multifunctional enzyme that catalyses the conversion of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) into cyclic adenosine diphophoribose (cADPR), a second messenger involved in intracellular calcium mobilisation in a variety of cells from mammals to plants and invertebrates. The question raised was the following: is the catalytic activity of CD38/NADase directly responsible for the intracellular signalling triggered by its activation ? According to our hypothesis, only a conformational change of the enzyme that is followed by a cross talk with partner's proteins is responsible for its implication in intracellular signalling events and independently of its reaction products. This thesis aimed to elucidate this problem according to two complementary approaches : 1) after we established an unifying kinetic scheme for the mammalian and invertebrate enzymes involved in cADPR biosynthesis, we studied the kinetic and molecular mechanism by modulating the different kinetic constants, we thus want to verify the implication of cADPR complexed to the enzyme in the signalling events 2) in a second part, we studied the relationship between the structure of CD38/NADase and its catalytic and signalling functions by mutating different putative residues involved in catalysis and/or substrate binding. This work concludes that only ligand binding (substrate, antibody) could be responsible for conformational changes of CD38/NADase, which trigger a cross talk with signalling partners
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Courilleau, Delphine. "Modulation de l'expression génique par le butyrate de sodium." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T027.
Full textAbstract:
Le butyrate de sodium, acide gras à quatre carbones, exerce à la fois une action antiproliférative et différenciatrice sur de nombreuses lignées cellulaires. Cette drogue agit par l'inhibition des histones désacétylases, aboutissant à des changements spécifiques de l'expression génique. Des travaux antérieurs au laboratoire ont montré que dans la lignée fibroblastique BP-A31, l’arrêt du cycle cellulaire en G1 induit par le butyrate est dépendant de la transcription. Dans ce contexte, nous avons cherché à identifier des cibles moléculaires du butyrate de sodium, impliquées dans ses effets antiprolifératifs. Par la technique de differential display, nous avons identifié l'ADNe B-indl (pour Butyrate induced 1) correspondant à un transcrit de 3 kb induit par le butyrate dans la lignée BP-A31. A l'aide de ce transcrit, en criblant une banque d'ADNe provenant de cerveau humain, nous avons obtenu l'homologue humain de B-indl qui code pour une nouvelle protéine de 370 acides aminés, nommée hB-indl. Nous avons observé que le butyrate active fortement le facteur transcriptionnel NF-kB, et que la surexpression de la protéine hB-indl augmente cette activation. Le facteur transcriptionnel NF-kB est également activé par les protéines de la famille Rho (RhoA, Racl et Cdc42). Nous avons exploré l'hypothèse selon laquelle B-indl interviendrait dans la voie de signalisation empruntée par ces GTPases. Nos résultats démontrent que hB-indl potentialise l'activité transcriptionnelle de NF-kB induite par la protéine Racl ainsi que l'activation de la kinase JNK (c-Jun N-terminal kinase) également induite par Racl. Nous concluons donc que la protéine hB-indl est un nouveau médiateur impliqué dans les voies de signalisation médiées par la protéine Racl. De plus, nous avons étudié l'effet du butyrate sur la progression cellulaire. D'une part, nous avons montré que dans la lignée BP-A31, le butyrate induit un arrêt du cycle cellulaire en phase Gl par une inhibition de la transcription du gène codant pour la cycline D1. D'autre part, nous avons observé que le butyrate de sodium inhibe la progression en phase G2 des cellules de cancer de sein MDA-MB-231. Cet arrêt en phase G2 est corrélé avec une augmentation du contenu cellulaire de la protéine P21Waf1 libre ou liée à la cycline A, avec une hypophosphorylation de la protéine de rétinoblastome, ainsi qu'avec une inhibition de l'expression des cyclines A et B1 et de la POLO-like kinase. Après l'élimination du butyrate, les cellules sont compétentes pour une nouvelle phase de synthèse d'ADN sans avoir au préalable accompli la mitose. Le butyrate de sodium est donc capable de perturber l'alternance de la réplication de l'ADN et de la mitose dans certains types cellulaires.
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Desquiret, Valérie. "Mitochondrie et stress énergetique : voies de signalisation et adaptations cellulaires." Phd thesis, Université d'Angers, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00433520.
Full textAbstract:
La mitochondrie est un centre de régulation métabolique à la fois intégrateur de signaux (visant à ajuster son fonctionnement selon les besoins énergétiques cellulaires) et initiateur de voies rétrogrades (permettant une réponse cellulaire à des changements d'états fonctionneles de la mitochondrie). Ce travail s'intéresse plus particulièrement au métabolisme oxydatif mitochondrial et aux voies de signalisation activées, dans les cellules HepG2, lors de deux situations de stress énergétique : le découplage mitochondrial constitue un signal conduisant les cellules à développer leur métabolisme oxydatif sans modifier la glycolyse (notamment par activation de la transcription de gènes codant pour des protéines mitochondriales). La mitochondrie est également une des cibles du traitement par glucocorticoïdes, ces hormones induisant à la fois des effets à court terme et à long terme. les effets rapides (modification de l'activité des complexes I, II et III de la chaîne respiratoire mitochondriale) sont non génomiques et impliquent la fixation de la dexamethasone sur un récepteur membranaire. Ces effets sont médiés par l'activation calcium-dépendante de la protéine p38MAPK. Les effets à long terme (augmentation de la capacité de la chaîne respiratoire) sont transcriptionnels et nécessitent le recrutement du récepteur intracellulaire classique aux glucocorticoïdes. Les modifications du fonctionnement de la chaîne respiratoire mitochondriale par les glucocorticoïdes sont induites par le recrutement graduel de différents sites de liaison aux glucocorticîdes (membranaire et intracellulaire).
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Fahem, Abdelaziz. "Elastokines et angiogenése : rôle de la MT1-MMP et signalisation intracellulaire mediée par S-GAL." Reims, 2007. http://theses.univ-reims.fr/exl-doc/GED00000518.pdf.
Full textAbstract:
La @néoangiogenèse est un des processus essentiel à la progression tumorale et la dissémination métastatique et met en jeu l’expression de métalloprotéinases matricielles pouvant dégrader la matrice extracellulaire et générer des fragments doués d’activités biologiques comme les élastokines, issues de la protéolyse de l’élastine. Par des méthodes in vivo et in vitro, nous montrons que les peptides issus de la dégradation de l'élastine et contenant la séquence VGVAPG étaient capables d’induire la néoangiogenèse. L’utilisation d’inhibiteurs nous a permis de démontrer que la MT1-MMP était la principale enzyme impliquée dans l’angiogenèse induite par les peptides d’élastine. Nous avons confirmé son rôle en développant une technique d’interférence par l’ARN visant à invalider son expression de façon stable et transitoire. Afin de compléter notre étude, les voies de signalisations induites par la fixation des peptides d’élastine sur S-Gal ont été ensuite étudiées. Tout d’abord, nous avons montré que les peptides d’élastine stimulent de façon concentration- et temps-dépendant la production de monoxyde d’azote (NO) par les cellules endothéliales. L’utilisation d’inhibiteurs de PI3-kinase, de Akt et de NO synthase nous a permis ensuite de montrer l’implication de la voie PI3Kinase/Akt/eNOS sur la production de NO et l’expression de MT1-MMP et de proMMP-2. Nous démontrons ainsi que les peptides d’élastine sont capables d’induire l’angiogenèse via l’expression et l’activation de la MT1-MMP. Le mécanisme met en jeu 2 voies de signalisation qui agissent en synergie : la voie PI3Kinase/Akt/eNOS et la voie GCs/Raf / MEK1/2 / Erk1/2 conduisant à l’induction de l’expression de la MT1-MMPNeoangiogenesis is an essence process in the tumoral progression and metastatic dissemination, and involved matrix metalloproteinase which can degrade the extracellular matrix and generate fragments with biological effects, the Matrikines. Among them, the elastokines, resulting from the proteolysis of elastin, can amplify tumoral invasion. Using in vivo and in vitro methods, we demonstrated that peptides from elastin (EDP) degradation and containing the peptides sequence VGVAPG were able to induce neoangiogenesis. The use of specific inhibitors enabled us to demonstrate that MT1-MMP was the main enzyme implied during the angiogenesis induced by elastin peptides. We confirmed its role by developing the technique of interference by small RNA (RNAi) directed against MT1-MMP expression. In order to complete our study, the signal transduction pathway induced by the fixation of elastin peptides on their receptor S-GAL was studied. Firstly, we showed that EDP induce nitric oxide production in a time- and concentration-dependent manner. We further show that EDP-mediated membrane-type I matrix metalloproteinase expression, at both the mRNA and protein levels, involves PI3-kinase/Akt/NOS and nitric oxide/cGMP/MAP kinase/Erk1,2 pathways in human microvascular endothelial cell-1 line. EDP mediated a time- and -concentration-dependent increase of cGMP that suggested a link between nitric oxide and membrane-type I matrix metalloproteinase expression. This was validated by the use of a nitric oxide donor (DEA-NOate) and a cGMP analog (8-bromo-cGMP). Inversely, the cGMP analog, mimicked the effect of both kappa elastin and nitric oxide donor in a concentration- and time-dependent manner
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Lagoudakis, Laura. "Ca2+ et régénération du foie : impact de la signalisation calcique intracellulaire sur la prolifération hépatocytaire." Paris 6, 2009. http://www.theses.fr/2009PA066471.
Full textAbstract:
LE FOIE possède une capacité exceptionnelle à régénérer à la suite d’une lésion induite soit chirurgicalement soit par des agents toxiques. Parmi les agonistes impliqués dans le processus régénératif, nombreux sont ceux qui mobilisent le calcium (Ca2+) intracellulaire, sans que l’impact physiologique de cette voie de signalisation soit déterminé. Pour l’étudier, nous avons interféré in vivo avec la signalisation calcique par transfert de gène grâce à un vecteur adénoviral. La parvalbumine (PV), une protéine tamponnant le Ca2+, a été adressée sélectivement dans le cytosol ou le noyau des hépatocytes, et la régénération du foie a été analysée après hépatectomie partielle (Hx) chez le rat. Nous avons ainsi mis en évidence un ralentissement de la régénération hépatique chez les animaux exprimant la PV cytosolique (PV-NES-DsR). En effet, nous avons observé, après Hx, un retard dans la prise de poids du foie ainsi que dans la progression des hépatocytes dans le cycle cellulaire. Ce retard était associé à une transcription altérée du gène précoce c-fos, fortement impliqué dans le démarrage du processus régénératif, ainsi que des gènes des cyclines E et A et la kinase associée cdk2. Nous avons également observé un retard d’activation de la voie ERK 1/2, impliquée dans la prolifération hépatocytaire au cours de la régénération, et connue pour sa dépendance vis-à-vis du Ca2+. Une moindre activation de la réponse cytokinique a également été observée après Hx chez les animaux PV-NES-DsR, dont les mécanismes restent à préciser. Par ailleurs, nous avons observé in vitro, sur des cultures primaires d’hépatocytes exprimant PV-NES-DsR, un retard de prolifération et mis en évidence une altération de la phosphorylation de CREB, un facteur de transcription activé par le Ca2+. Ces résultats nous indiquent que le calcium cytosolique régule de manière positive la régénération hépatique. Des résultats préliminaires après expression nucléaire de la PV (PV-NLS-DsR) dans les hépatocytes, in vivo et in vitro, indiquent que le tamponnement du Ca2+ dans ce compartiment conduit à l’apoptose des hépatocytes. L’ensemble de ces données indiquent que la signalisation calcique contribue à réguler les processus de croissance et de survie hépatocytaire.
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Ben-Mahdi, Meriem-Hind. "Régulation par le stress oxydant de la signalisation intracellulaire de la cellule endothéliale : conséquences fonctionnelles." Paris 7, 2002. http://www.theses.fr/2002PA077019.
Full text
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Muselet-Charlier, Céline. "Rôle des voies de signalisation intracellulaire dans la régulation de l'inflammation pulmonaire dans la mucoviscidose." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066490.
Full textAbstract:
L’inflammation précoce et excessive des voies respiratoires joue un rôle prépondérant dans la progression de l’atteinte pulmonaire dans la mucoviscidose. Cette inflammation est caractérisée par la production exagérée de médiateurs inflammatoires par les cellules épithéliales des voies aériennes CF (pour Cystic Fibrosis signifiant Mucoviscidose, en terminologie anglo-saxonne). Afin de mieux évaluer les mécanismes cellulaires et moléculaires impliqués dans la réponse inflammatoire pulmonaire, nous avons étudié le rôle des voies de signalisation intracellulaire dans la régulation de l’expression de cytokines pro-inflammatoires, telles que l’interleukine-8 (IL-8), par des cellules épithéliales pulmonaires CF sous différentes conditions de stimulation. Nous avons ainsi montré que :la surexpression de l’IL-8 par les cellules épithéliales pulmonaires CF stimulées par l’IL-1 est liée à l’activation rapide et exagérée des voies ERK1/2 et p38 des MAP kinases, associées à l’activation du facteur NF-B, la présence de variants alléliques dans le promoteur du gène codant IB- influence son taux de transcription, des solutions salines issues de l’eau de mer réduisent in vitro l’expression de l’IL-8 comparé au sérum physiologique par les cellules épithéliales des voies aériennes, la nébulisation quotidienne de ces solutions salines, même si aucun effet anti-inflammatoire n’a pu être mis en évidence, est cliniquement tolérée par les patients atteints de mucoviscidose. Nos résultats confirment l’intérêt de l’étude des mécanismes moléculaires intracellulaires responsables de l’inflammatoire pulmonaire excessive dans la mucoviscidose, afin de mieux définir les cibles thérapeutiques qui permettraient de réduire l’inflammation pulmonaire des patients atteints de mucoviscidose.
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Dinerstein-Cali, Hélène. "Etude des molecules impliquees dans la transduction du signal du recepteur de l'hormone de croissance (doctorat : endocrinologie et interactions cellulaires)." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T005.
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Kasus, Jacobi Anne. "Etude des premieres etapes des voies de signalisation de l'insuline : clonage d'un nouvel effecteur de l'insuline : la proteine rgrb14." Paris 11, 1998. http://www.theses.fr/1998PA11T035.
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Rajotte, Daniel. "Étude sur la signalisation intracellulaire et la relation structure fonction du récepteur pour le GM-CSF." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1996. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk3/ftp04/nq21506.pdf.
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Benhra, Najate. "Étude du rôle du trafic intracellulaire dans la régulation de la signalisation Notch chez Drosophila melanogaster." Rennes 1, 2010. http://www.theses.fr/2010REN1S061.
Full textAbstract:
La voie Notch est une voie de communication intercellulaire qui régule de nombreux processus développementaux chez les métazoaires, notamment la spécification des organes sensoriels chez la Drosophile. La voie est activée lorsque les ligands DSL présents à la surface de la cellule émettrice interagissent avec le récepteur Notch présent à la surface des cellules réceptrices. Le trafic membranaire et l’endocytose jouent un rôle essentiel dans la régulation de la voie Notch. En particulier, l’endocytose et le recyclage des ligands sont nécessaires à leur activation. L’E3 Ubiquitine ligase Neuralized (Neur) régule l’activité des ligands en promouvant leur ubiquitination et leur endocytose, toutefois le rôle exact de l’ubiquitination et de l’endocytose demeure mal compris. Nos résultats indiquent que Neur promeut la transcytose du ligand Delta depuis la membrane basolatérale vers la membrane apicale où réside Notch dans les cellules des organes sensoriels de Drosophile. Nous avons également identifié le complexe adaptateur-Clathrine AP-1 de Drosophile comme un nouveau régulateur négatif de la voie Notch. Chez les mammifères, AP-1 régule le recyclage basolatéral et le transport intracellulaire entre le réseau trans-golgien et les endosomes. Nous montrons que dans les organes sensoriels de Drosophile, AP-1 prévient l’accumulation apicale du co-activateur de Notch, Sanpodo, et régule la stabilisation de Notch et Sanpodo au niveau des complexes jonctionnels riches en DE-Cadhérine, à l’interface entre les cellules émettrice et réceptrice. L’ensemble de nos résultats suggèrent que ce domaine jonctionnel pourrait être le site d’interaction productif entre ligand et récepteurNotch is a cell-cell communication pathway that regulates numerous developmental processes in metazoans. In Drosophila, sensory organ specification is governed by Notch signaling. Notch pathway is activated when DSL ligands from the signal-sending cell surface interact with Notch present at the signal-receiving cell surface. Membrane trafficking and endocytosis play a key role in the regulation of Notch signaling. In particular, ligands need to be endocytosed and recycled to be active. The E3 Ubiquitine ligase Neuralized (Neur) regulates ligands activity by promoting their ubiquitination and endocytosis. However, how ubiquitination and endocytosis contribute to ligands activation remains unknown. Our data show that Neur promotes the Delta ligand transcytosis from a basolateral to an apical membrane where Notch is enriched in Drosophila sensory organ cells. We also identified the Clathrin-adaptor complex AP-1 as a novel regulator of Notch signaling. Mammalian AP-1 complex regulates basolateral recycling and intracellular trafficking between trans-golgi network and endosomes. We show that in Drosophila sensory organ cells, AP-1 prevents the apical accumulation of the Notch co-activator Sanpodo, and regulates Notch and Sanpodo stabilization at the level of DE-Cadherin, at the interface between the sending-cell and the receiving-cell. Altogether, our results suggest that this junctional domain could be the site for productive interaction between the ligand and the receptor
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Pelletier, Nadine. "Régulation des gènes C/EBPS par des voies de signalisation intracellulaire dans les cellules épithéliales intestinales." Mémoire, Université de Sherbrooke, 1996. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3110.
Full textAbstract:
Nous avons utilisé la lignée épithéliale intestinale de crypte de rat IEC-6 afin de mieux comprendre le rôle des C/EBPs dans la différenciation et la prolifération de l'intestin. Nous avons vérifié l'expression des ARNm de C/EBP$\alpha$, C/EBP$\beta$ et C/EBP$\delta$ suite à la stimulation des cellules IEC-6 par la forskoline et l'IBMX qui stimulent la PKA, le TPA qui stimule la PKC et la thapsigargine qui augmente la concentration de Ca$\sp{2+}$ cytoplasmique. La forskoline et l'IBMX induisent les niveaux d'ARNm des trois C/EBPs avec différentes cinétiques tandis que le TPA induit seulement les niveaux d'ARNm de C/EBP$\alpha$ et de C/EBP$\beta.$ La thapsigargine induit les niveaux d'ARNm des trois isoformes par un mécanisme de régulation post-transcriptionnel sans affecter les niveaux de protéines. Les variations des niveaux d'ARNm, induits par les trois voies de signalisation, étaient indépendantes d'une synthèse nouvelle de protéines. Les analyses des niveaux de protéine par Western nous ont permis de constater une induction des trois isoformes en accord avec celle des ARNm suite à une stimulation par la forskoline et l'IBMX. Nous avons observé que le patron d'expression des protéines C/EBP$\alpha$ et C/EBP$\beta$ concorde avec celui des ARNm après une stimulation par le TPA. La capacité de liaison à l'ADN des C/EBPs n'est pas affectée significativement par les voies de la PKA, de la PKC et du Ca$\sp{2+}.$ Les voies de la PKA et de la PKC peuvent moduler l'expression de certains gènes de la réponse inflammatoire comme l'haptoglobine et le thiostatin. La stimulation de ces différentes voies inhibe la prolifération cellulaire des cellules IEC-6 en absence et en présence de sérum. Finalement, nous avons observé que ces différentes voies pouvaient induire à des niveaux variables l'ARNm de p21, un gène très important dans l'arrêt de la prolifération cellulaire. [Résumé abrégé par UMI] [Symboles non conformes]
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PAPIN, CATHERINE. "Etude biochimique et fonctionnelle des isoformes de l'oncoproteine b-raf (doctorat : bases fondamentales de l'oncogenese)." Paris 11, 1998. http://www.theses.fr/1998PA11T026.
Full text
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Gouedard, Lucile. "Identification des voies de signalisation de l'hormone anti-Müllerienne." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T035.
Full textAbstract:
L'action principale de l'hormone anti-Müllérienne (AMH) est la régression des canaux de Müller, ébauches de l'utérus, chez le fœtus mâle. L'AMH est un facteur appartenant à la famille du TGF-p. Les membres de cette famille, comprenant les bone morphogenetic proteins (BMPs) et l'activine, transduisent leur signal via un complexe de deux récepteurs distincts : un récepteur de type II, liant l'hormone, et un récepteur de type I recruté par le type II, qui transduit le signal en activant une protéine Smad. Smad 1 et ses homologues Smad5 et 8 sont activées par les BMP, alors que Smad2 et 3 sont stimulées par le TGF-P ou l'activine. Dans le cas de l'AMH, seul son récepteur de type II (AMHR-II) était identifié au début de ma thèse. Après une caractérisation biochimique de celui-ci, nous avons étudié plusieurs récepteurs AMHR-II mutants, identifiés chez des malades atteints du syndrome de persistance des canaux de Müller. Certaines protéines mutantes ne sont pas exprimées à la surface cellulaire, ce qui explique qu'elles ne puissent lier l'AMH. D'autres formes mutantes d'AMHR-II présentent un défaut plus fonctionnel de blocage de la transduction du signal, dû à une action dominante négative de ces récepteurs. Afin de visualiser le récepteur de l'AMH endogène, nous avons produit un anticorps anti AMHR-II. Cet outil a permis à une équipe du laboratoire de démontrer l'apparition progressive d'AMHR-II le long du canal de Müller. Cette vague d'expression correspond strictement à la vague de régression du canal. Mon projet principal était l'identification du récepteur de type I de l'AMH, parmi six. Récepteurs de type I déjà clonés. Nous avons démontré que le récepteur BMPR-IB 1 ALK-6 co précipite avec AMHR-II, de manière ligand-dépendante. De plus, Smad 1 est activée spécifiquement par l'AMH, dans des lignées cellulaires testiculaires et ovariennes. En conclusion, il semble donc que l'une des voies de transduction de l'AMH utilise le même récepteur de type I et la même Smad que les BMPsAnti-Müllerian hormone induces the regression of Müllerian ducts in male fetuses. It belongs to the transforming growth factor-P family, which includes bone morphogenetic proteins (BMPs) and activin. Members ofthe family signal through two distinct receptors denoted type I and II. The ligand binding induces the assembly of a receptor complex in which the specifie type II receptor activates the type I receptor, which phosphorylates Smad proteins. Smad 1, 5 and 8 participate in BMP pathways and Smad2 and 3 transduce TGF-P and activin signals. A novel member of the type II receptor family was identified as the AMH type II receptor (AMHR-II). After biochemical characterization of this receptor, we have studied mutations of AMHR-II, observed in patients with persistent Müllerian duct syndrome. Sorne of them induce protein retention in the reticulum endoplasmic, leading to a binding defect. Other mutants can block signal propagation because they are dominant-negative. Another goal of my work was to visualize endogenous AMHR-II in AMH target cells. We produced a specifie antibody against AMHR-II. With this antibody, another mean of the laboratory demonstrated a cranial to caudal expression of AMHR-II protein in the Müllerian ducts, strictly correlated with the regression phenomenon. My main project was to identify the AMH type I receptor, among six type I receptors already cloned. We demonstrate that BMPR-IB 1 ALK-6 co-precipitates with AMHR-II in a ligand dependent manner. Moreover, Smad 1 is specifically activated by AMH, in testicular and ovarian celllines. In conclusion, it means that AMH and BMP share same type I receptor and Smad
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Henaff, Morgana. "Etude in vitro des voies de signalisation intracellulaires impliquées dans la modulation de l'apoptose des myocytes cardiaques adultes." Paris 6, 2001. http://www.theses.fr/2001PA066313.
Full text
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Nissen, Johan. "Fonction de coactivateur in vivo et in vitro : lien entre la signalisation intracellulaire et la régulation génique." Montpellier 2, 2001. http://www.theses.fr/2001MON20048.
Full text
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Cottin, Vincent. "Signalisation intracellulaire par le récepteur CD120a pour le TNFα : rôle de la phosphorylation du domaine intracellulaire de CD120a dans la régulation des effets biologiques cellulaires du TNFα." Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO1T026.
Full text
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Zanin, Natacha. "Role de STAM dans la régulation endosomale de la signalisation JAK/STAT induite par les IFNs." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015SACLS047.
Full textAbstract:
La première implication des récepteurs aux interférons de type 1 (IFNAR1) dans le contrôle de la voie Jak/STAT induite par les IFNs a été établie par mon laboratoire il y a une dizaine d'années (Marchetti et al., 2006). Une des questions fondamentales était alors de déterminer comment et pourquoi l'endocytose des IFNARs pouvait contrôler la voie Jak/STAT. Deux acteurs clés du tri endosomal ont attiré notre attention : Hrs (Hepatocyte growth factor-Regulated tyrosine kinase Substrate) et STAM (Signal Transducing Adaptor Molecule). Ces deux protéines constituent le complexe ESCRT-0 (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport-0) les localisant, de manière idéale, à l'interface entre signalisation cellulaire et trafic membranaire.La combinaison de la biologie moléculaire et cellulaire, de la biochimie et de la microscopie à fluorescence, nous a permis d'établir que STAM s'associe au complexe IFNAR1 à la membrane plasmique afin d'y exercer son effet inhibiteur sur la signalisation Jak/STAT. Cette inhibition est levée lorsqu'IFNAR est libéré dans l'endosome et qu'il peut ainsi être recruté par Hrs sous la dépendance de l'IFN-α. En nous basant sur des expériences de déplétion par shRNA ou d'inhibition pharmacologique, nous avons identifié PTP1B (Protein Tyrosine Phosphatase 1B) en tant qu'activateur de la voie Jak/STAT induite par les IFNs. Le blocage sélectif de l'endocytose d'IFNAR par déplétion de clathrin, nous a permis de montrer que l'activation de PTP1B est inhibée à la membrane plasmique. Cela a été confirmé par des expériences d'interaction protéine-protéine (Proximity Ligation Assay) indiquant que STAM est constitutivement associé à IFNAR1, tandis que l'interaction entre IFNAR1 et Hrs a seulement lieu à l'endosome.Ainsi, nos résultats permettent d'établir un modèle dans lequel, à la membrane plasmique, STAM est un frein permanent à la signalisation Jak/STAT, qui est levé après l'endocytose d'IFNAR et sa libération dans l'endosome de tri. De plus, nous avons montré que l'interaction Hrs/STAM dans l'endosome précoce permet de différencier, de manière sélective, l'activation de la signalisation Jak/STAT médiée par l'IFN-α ou l'IFN-βA decade ago, my laboratory established the first role of type I IFNs receptor (IFNAR) endocytosis in the control of Jak/STAT signaling induced by type 1 IFNs (Marchetti et al., 2006). A salient question is now to elucidate why and how IFNAR endocytosis could control the Jak/STAT pathway. Two key players of endosomal sorting retained our interest: Hrs (Hepatocyte growth factor-Regulated tyrosine kinase Substrate) and STAM (Signal Transducing Adaptor Molecule). These two classical components of the ESCRT-0 (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport-0) complex were ideally placed at the interface between signaling and membrane trafficking. By using a combination of molecular and cellular biology, biochemistry, and fluorescent microscopy, we could establish that STAM binds to the IFNAR complex at the plasma membrane to exert an inhibitory effect on Jak/STAT signaling. This inhibition is removed when IFNAR is delivered to the sorting endosome by interacting with Hrs upon IFN-α stimulation. Based on shRNA down-expression and pharmacological inhibition, we further involve the PTP1B (Protein Tyrosine Phosphatase 1B) as it activates Jak/STAT signaling upon IFN stimulation. We could also show that PTP1B activation is inhibited by STAM at the plasma membrane from experiments where IFNAR endocytosis was blocked by siRNA-mediated clathrin down-expression. This was further confirmed by protein-protein interaction experiments (Proximity Ligation Assay) showing that STAM was constitutively associated with IFNAR1, whereas the interaction between IFNAR1 and Hrs occured only at the sorting endosome. Our results therefore allow to draw a model where STAM is a constitutive handbrake on Jak/STAT signaling at the plasma membrane that is released after IFNAR endocytosis and delivery to the sorting endosome. We further show that Hrs/STAM interaction at the early endosome allows to selectively distinguish the activation of Jak/STAT signaling mediated by IFN-α or IFN-β
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Salsmann, Alexandre Kieffer Nelly. "Etude fonctionnelle de la signalisation intracellulaire médiée par l'intégrine alphaIIbbeta3 au cours de l'interaction avec le fibrinogène immobilisé." [S.l.] : [s.n.], 2006. http://www.scd.uhp-nancy.fr/docnum/SCD_T_2006_0001_SALSMANN.pdf.
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Salsmann, Alexandre. "Etude fonctionnelle de la signalisation intracellulaire médiée par l'intégrine alphaIIbbeta3 au cours de l'interaction avec le fibrinogène immobilisé." Nancy 1, 2006. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_2006_0001_SALSMANN.pdf.
Full textAbstract:
L'intégrine alphaIIbbeta3 des plaquettes, principal récepteur du fibrinogène (fg), joue un rôle prépondérant dans l'adhésion et l'agrégation plaquettaires, en établissant un lien physique et dynamique entre le fg sanguin et les protéines plaquettaires intracellulaires de la signalisation et du cytosquelette. Le processus de reconnaissance du fg par l'intégrine alphaIIbbeta3 est complexe puisqu'au moins 2 sites distincts d'interaction sont connus: le site universel RGD et une séquence dodécapeptide HHLGGAKQAGDV. Cependant, il n'est pas encore clair si ces 2 sites fonctionnent indépendamment, de façon synergique ou par compétition. Nous avons donc examiné le rôle respectif des motifs dodécapeptide et RGD du fg au cours de l'étalement cellulaire médié par alphaIIbbeta3, au niveau de plaquettes sanguines humaines et de cellules CHO exprimant soit le recepteur sauvage, soit le récepteur constitutivement actif ou non-fonctionnel, et en utilisant le fg entier ou des fragments de fg, le fragment D ne contenant que le dodécapeptide, et le fragment C ne présentant que le motif RGD. Nos résultats mettent pour la première fois en évidence 2 voies de signalisation indépendantes mais synergiques, la première voie initiée par le dodécapeptide reconnu par alphaIIb, et conduisant à un attachement cellulaire, à la formation de complexes focaux, à la phosphorylation de FAK et à l'activation de Rac1, et la seconde voie impliquant le motif RGD qui joue un rôle de commutateur moléculaire au niveau de beta3, entraînant l'activation maximale de RhoA, la polymérisation et l'organisation de l'actine en fibres de stress, la formation d'adhérences focales matures et l'étalement cellulaire completThe platelet fibrinogen (fg) receptor integrin alphaIIbbeta3 plays a major role in platelet adhesion and platelet aggregation. Fibrinogen binding to integrin alphaIIbbeta3 is complicated since 2 recognition sites have been described: the universal tripeptide RGD site and a HHLGGAKQAGDV dodecapeptide sequence. However, it is still unclear whether these 2 recognition sites function independently, synergistically, or competitively. Here we have investigated the respective role of the dodecapeptide sequence and the RGD motif in the molecular events leading to ligand-induced alphaIIbbeta3-dependent CHO cell or human platelet spreading, by using intact fg, and well-characterized plasmin-generated fg fragments containing either the RGD motif (fragment C) or the dodecapeptide site (fragment D), and CHO cells expressing resting wt, constitutively active or non-functional receptors. Our data provide evidence that alphaIIbbeta3-dependent cell adhesion to immobilized fg is a two-step process: the dodecapeptide site by itself is first able to promote cell attachment by initiating alphaIIbbeta3 clustering, FAK phosphorylation and Rac1 activation while the RGD motif subsequently acts as a molecular switch on the beta3 subunit leading to mature focal adhesion formation, maximal RhoA activation, actin cytoskeleton organization and full cell spreading
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Boutet, Marie. "Etude de l'activation et de la signalisation intracellulaire de l'intégrine αE (CD103)β7 dans les lymphocytes T CD8+." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077277.
Full textAbstract:
Un des obstacles majeurs dans la lutte contre le cancer est l'échec des traitements proposés. L'amélioration de l'activation des effecteurs cytotoxiques dans la tumeur est un enjeu majeur pour optimiser les thérapies anticancéreuses. Ainsi mon laboratoire d'accueil s'est intéressé à l'étude de deux populations lymphocytaires — l'une issue de la tumeur (TIL), l'autre issue du sang périphérique (PBL) —, populations isolées à partir d'un patient atteint d'un cancer bronchique. Les travaux réalisés ont montré que les TIL tuent plus efficacement la lignée tumorale issue d'une tumeur bronchique, grâce à l'engagement de l'intégrine aE(CD103)137 avec le marqueur des cellules épithéliale, la E-cadhérine, en association avec l'engagement du TCR. De plus, un microenvironnement riche en TGF-(31 induit l'expression de CD103 à la surface des PBL, suite à la reconnaissance de l'antigène, et améliore sa capacité de lyse. Nos résultats indiquent que l'intégrine est impliquée dans la migration et le recrutement des CTL au site tumoral. Outre sa fonction d'adhérence CD103 participe à la formation de la synapse immunologique (SI) cytotoxique mais n'est pas nécessaire à la formation de la SI sécrétoire. La SI cytotoxique est essentielle la libération des granules cytotoxiques et également au passage des vésicules de la chimiokine CCL5 dans la SI. L'activation et les fonctions de CD103 sont régies par des voies de signalisation induite suite à l'interaction avec son ligand et à l'engagement du TCR. Nos travaux montrent que dans ce cas, la protéine ILK est activée et joue un rôle clé dans les fonctions de l'intégrine. Un environnement riche en TGF431, active fortement ILK, induisant une meilleure adhérence et fonction de l'intégrine CD103 dans la tumeurA major obstacle in the fight against cancer is the failure of proposed treatments. Improving the activation of cytotoxic effectors in the tumor is a major challenge to optimize anticancer therapies. S( my host laboratory has focused on the study of two lymphocyte populations - one after the tumor (TIL), the other end of the peripheral blood (PBL) - isolated populations from a patient suffering from lung cancer. The work carried out showed that TIL kill more efficiently the tumor cell line fron a lung tumor, thanks to the link of integrin alpha e (CD103) beta7 with the marker of epithelial cells, E-cadherin, in association with TCR engagement. In addition, a rich microenvironment in TGF-I31 induced the expression of CD103 on the surface of PBL, following recognition of the antigen, and improves its ability lysis. Our results indicate that integrin is involved in the migration and recruitment of CTL at the tumor site. Furthermore CD103, besides adhesion function, participates in the formation of the immunological synapse (SI) cytotoxic but is not necessary for the formation of the secretory SI. Cytotoxic SI is essential for the release of cytotoxic granules and also the passage oi the vesicles of the chemokine CCL5 in the SI. Activation and CD103 functions are regulated by signaling pathways induced following the interaction with its ligand and TCR engagement. Our work shows that in this case, the ILK protein is activated and plays a key role in the functions of the integrin. An environment rich in TGF-betal strongly ILK active, leading to a better grip and function of integrin CD103 in the tumor
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Sonnier, Laure. "Un nouveau mode de signalisation par transfert intercellulaire de facteurs de transcription : du concept aux applications : l'exemple d'Engrailed." Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066319.
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Béliveau, Éric. "Organisation de la réponse calcique intracellulaire dépendante du récepteur à l'inositol 1,4,5-trisphosphate dans les cellules endothéliales." Thèse, Université de Sherbrooke, 2011. http://hdl.handle.net/11143/5812.
Full textAbstract:
L'endothélium constitue un véritable organe qui sécrète de nombreuses substances vasoactives régissant des fonctions cardiovasculaires vitales telles que le tonus et la croissance vasculaires. Ce tissu requiert la polyvalence de la signalisation calcique puisque plusieurs de ses fonctions dépendent de la modulation de la concentration intracellulaire de Ca[indice supérieur 2+].L'un des moyens utilisés par les cellules endothéliales pour assurer une réponse calcique efficace et spécifique est la propagation des signaux sous forme de vagues. Dans ce travail, nous avons décortiqué les mécanismes de mobilisation du Ca[indice supérieur 2+] intracellulaire menant à la propagation de vagues de Ca[indice supérieur 2+]. Nous avons recueilli des données qui aideront à mieux comprendre à la fois l'organisation et la propagation de vagues de Ca[indice supérieur 2+] dans les cellules endothéliales d'aorte de boeuf (BAEC). Nous montrons par vidéomicroscopie, que la stimulation des BAEC avec l'ATP ou avec la bradykinine (BIC) induit une réponse calcique oscillatoire finement régulée dans le temps et dans l'espace. En fait, le Ca[indice supérieur 2+] se propage d'une extrémité à l'autre de la cellule sous la forme d'une vague qui se produit en présence ou en absence de Ca[indice supérieur 2+] extracellulaire. Bien que les vagues de Ca[indice supérieur 2+] soient initiées à un endroit très précis près de la membrane plasmique, les cavéoles ne sont pas essentielles à leur propagation dans les BAEC, contrairement à ce qui a été observé dans certains autres types cellulaires. Toutefois, la dépolymérisation des microfilaments avec la latrunculine B et des microtubules avec la colchicine empêche la propagation de la vague de Ca[indice supérieur 2+]. Dans ces conditions, les BAEC présentent plutôt une augmentation calcique uniforme dans toute la cellule. Ces résultats suggèrent que, dans les BAEC, les cavéoles ne sont pas impliquées dans l'organisation de la réponse calcique sous forme de vague, mais que l'organisation du cytosquelette est essentielle. Nous montrons aussi que la vitesse de propagation de la vague de Ca[indice supérieur 2+] est constante d'un bout à l'autre d'une BAEC, ce qui est incompatible avec un mécanisme impliquant uniquement la diffusion de l'IP[indice inférieur 3] ou du Ca[indice supérieur 2+]. Nous montrons également que la vitesse de propagation de la vague de Ca[indice supérieur 2+] dépend de l'intensité de la stimulation et aussi de l'état fonctionnel de l'IP[indice inférieur 3]R qui peut être modulé par des kinases endogènes comme la PKA, la PKC et mTOR. Enfin, nous montrons que la vitesse de propagation de la vague de Ca[indice supérieur 2+] n'est pas directement reliée à l'amplitude de la relâche de Ca[indice supérieur 2+]. La vitesse de propagation des vagues de Ca[indice supérieur 2+] est un paramètre relativement nouveau dans le domaine de la signalisation calcique intracellulaire. Il reste à définir jusqu'à quel point ce paramètre peut être utile dans l'interprétation des différentes activités cellulaires.
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Marquette, Amélie. "Signalisation et oncogenèse dans le mélanome." Thesis, Paris Est, 2009. http://www.theses.fr/2009PEST0079.
Full textAbstract:
Le mélanome, la tumeur cutanée la plus agressive, est devenu un problème majeur de santé publique dans de nombreux pays. Diagnostiqué précocement, il peut être traité par excision chirurgicale, mais le pronostic pour les mélanomes plus avancés est très mauvais car cette tumeur est résistante à toutes les thérapies utilisées à ce jour. Dans le but de développer de nouvelles thérapies pour traiter cette tumeur, nous étudions les voies de signalisation qui jouent un rôle prépondérant dans la prolifération, la survie et la différenciation des mélanocytes et des mélanomes. Il s’agit de la voie des MAPK, la voie PI3K et la voie de l’AMP cyclique (AMPc). Nous avons tout d’abord démontré que certaines phosphodiestérases (PDE ; les inhibiteurs physiologiques de la voie de l’AMPc) sont surexprimées dans les lignées de mélanomes et inhibent ainsi la différenciation de ces cellules. La surexpression des PDEs est nécessaire à la transformation des mélanocytes par l’oncogène Ras alors que la réactivation de la voie de l’AMPc dans les lignées de mélanome inhibe leur prolifération. Ces données suggèrent qu’une stratégie thérapeutique qui aurait pour objectif de stimuler la différenciation des mélanomes en réactivant la voie de l’AMPc pourrait permettre d’inhiber leur prolifération. Nous avons par ailleurs montré que la protéine kinase B-Raf, qui est fréquemment mutée dans les mélanomes, était cependant inactivée dans les mélanomes contenant une mutation de Ras. Nous avons démontré que cette inhibition était due à une régulation négative de B-Raf par son substrat Erk. En effet, Erk phosphoryle B-Raf sur sa partie amino-terminale pour empêcher son interaction avec Ras. Ce mécanisme de régulation négative de B-Raf force ces lignées de mélanomes à utiliser l’isoforme C-Raf. Ce travail a des conséquences sur le traitement du mélanome. En effet, si B-Raf n’est pas utilisé pour l’activation de la voie des MAPK dans les mélanomes mutés N-Ras, les inhibiteurs de B-Raf en développement clinique seront inefficaces dans ces cancers. Nous avons par ailleurs démontré qu‘un inhibiteur des kinases B-Raf et C-Raf, en développement clinique (Sorafenib), induisait l’activation de ces kinases par hétérodimérisation en régulant leur phosphorylation. Ces résultats mettent en évidence de nouveaux mécanismes de régulation des proto-oncogènes B-Raf et C-Raf qui pourraient jouer un rôle important dans la résistance des mélanomes aux inhibiteurs de Raf qui sont actuellement en développement cliniqueMelanoma, the most aggressive skin tumor, has become a major public health problem in many countries. Diagnosed early, it can be treated by surgical excision, but the prognosis for advanced melanoma is very poor because the tumor is resistant to all therapies used today. In order to develop new therapies to treat this tumor, we study the signaling pathways that play a major role in the proliferation, survival and differentiation of melanocytes and melanoma. These are the MAPK, PI3K pathway and the cyclic AMP (cAMP). We first demonstrated that some phosphodiesterases (PDEs; physiological inhibitors of cAMP pathway) are overexpressed in melanoma lines and thus inhibit the differentiation of these cells. Overexpression of PDEs is necessary for melanocyte transformation by oncogenic Ras when the reactivation of the cAMP pathway in melanoma lines inhibits their proliferation. These data suggest a therapeutic strategy that would aim to stimulate the differentiation of melanoma by reactivating the cAMP pathway could help to inhibit their proliferation. We have also shown that the protein kinase B-Raf, which is frequently mutated in melanoma, however, was inactivated in melanomas containing a mutation of Ras. We demonstrated that this inhibition was due to a downregulation of B-Raf by Erk substrate. Indeed, Erk phosphorylates B-Raf on its amino-terminal to prevent its interaction with Ras. This negative regulatory mechanism of B-Raf melanoma is forcing these lines to use isoform C-Raf. This work has implications for the treatment of melanoma. Indeed, if B-Raf is not used for the activation of MAPK in N-Ras mutated melanoma, the B-Raf inhibitors in clinical development will be ineffective in these cancers. We also demonstrated that a kinase inhibitor of B-Raf and C-Raf, which is in clinical development (Sorafenib), induces the activation of these kinases by heterodimerization in regulating their phosphorylation. These results reveal new mechanisms of regulation of proto-oncogene B-Raf and C-Raf, which could play an important role in the resistance of melanoma to Raf inhibitors, which are currently in clinical development
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Reutenauer, Bertoli Sarah. "Régulation et fonctions de CDC25A dans les leucémies aiguës myéloïdes avec mutation FLT3-ITD." Thesis, Toulouse 3, 2015. http://www.theses.fr/2015TOU30112.
Full textAbstract:
Nous avons étudié la régulation et les fonctions de Cell division cycle 25A (CDC25A), phosphatase impliquée dans l'activation des cyclin-dependent kinases durant le cycle cellulaire, dans les leucémies aiguës myéloïdes portant la mutation de la tyrosine kinase Fms-Like Tyrosine kinase 3 (FLT3) FLT3-ITD, de mauvais pronostic. Nous montrons que CDC25A est une cible précoce en aval de FLT3-ITD, contrairement aux autres protéines du cycle cellulaire, par un mécanisme impliquant STAT5. L'inhibition de CDC25A était à l'origine d'une inhibition de la prolifération et d'une réinduction de la différenciation des cellules primaires ou de lignées FLT3-ITD, in vitro et in vivo, en faisant une cible prometteuse dans les LAM avec la mutation FLT3-ITD. Enfin, nous avons évalué la valeur pronostique de l'expression de CDC25A au niveau ARN messager et protéique sur une série de patients traités au CHU de Toulouse par chimiothérapie intensiveWe studied the regulation and functions of Cell division cycle 25A (CDC25A), a phosphatase involved in the activation of the cyclin-dependent kinases during the cell cycle, in acute myeloid leukemia baring the mutation of the tyrosine kinase Fms-Like Tyrosine kinase 3 (FLT3) FLT3-ITD, which confers adverse prognosis. We show that CDC25A is an early target downstream of FLT3-ITD, contrarily to other cell cycle proteins, by a mechanism involving STAT5. CDC25A inhibition gives rise to inhibition of proliferation and reinduction of differentiation in FLT3-ITD primary cells and FLT3-ITD cell lines, in vitro and in vivo. CDC25A appears as a promising target in FLT3-ITD acute myeloid leukemia. We finally evaluated the prognostic value of CDC25A expression, at the mRNA and proteic level in a series of patients treated by intensive chemotherapy at Toulouse University Hospital
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Ducas, Éric. "Étude de la signalisation intracellulaire suite à la variation du niveau d'interaction CD40-CD154 chez les lymphocytes B humains." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24814/24814.pdf.
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TERNISIEN, CATHERINE. "Etude des voies de signalisation intracellulaire impliquees dans l'expression du facteur tissulaire par les monocytes en reponse a l'endotoxine." Paris 7, 1994. http://www.theses.fr/1994PA077307.
Full textAbstract:
Le facteur tissulaire (ft) est une glycoproteine transmembranaire qui est le recepteur cellulaire des facteurs vii et viia et le cofacteur du viia. Les monocytes sanguins humains, quand ils sont stimules de facon appropriee, synthetisent et expriment a leur surface le ft. Cette expression est responsable de l'activation de la coagulation conduisant a la production de thrombine puis de fibrine dont le role deletere est implique dans les maladies infectieuses et inflammatoires. Nous avons montre que les monocytes de sujets atteints de lupus erythemateux dissemine presentaient une expression anormale du ft et que le serum des patients stimulait la production du ft par des monocytes normaux. Cette expression anormale du ft pourrait en partie rendre compte de la frequence elevee des accidents thrombotiques chez ces patients. Au cours du choc septique endotoxinique, le lps entraine la synthese du ft responsable de la coagulation intravasculaire qui joue un role determinant dans l'issue souvent fatale de la maladie. Nous avons montre que deux familles de proteine kinases, la proteine kinase c (pkc) et les proteines tyrosine kinases (ptk) etaient impliquees dans cette synthese et que l'expression du gene du ft etait regulee probablement au niveau transcriptionnel par ces enzymes. Ce travail a aussi montre que l'amp cyclique et un medicament, la pentoxifylline, regulaient de maniere negative la synthese du ft et l'expression de son gene. La connaissance des mecanismes transductionnels impliques dans la synthese du ft devrait permettre a plus long terme de la reguler et d'en controler ainsi les effets
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RIVA, LAURENCE. "Caracterisation pharmacologique des recepteurs de l'angiotensine iv dans les cellules endotheliales d'aorte de porc et voies de signalisation intracellulaire." Paris 6, 1998. http://www.theses.fr/1998PA066309.
Full textAbstract:
Le systeme renine-angiotensine, present dans de nombreux tissus joue un role important dans la regulation de l'equilibre hemodynamique. L'angiotensine ii a longtemps ete decrit comme le principal peptide actif de ce systeme, agissant via ses recepteurs at 1 et at 2. Cependant, l'angiotensine ii (3-8) (angiotensine iv), produit du metabolisme de l'angiotensine ii jouerait un role au niveau vasculaire et plus particulierement au niveau de l'endothelium via un recepteur dont la signalisation intracellulaire est inconnue. Dans des cellules endotheliales d'aorte de porc, nous avons mis en evidence un site de liaison de l' 1 2 5i-aiv de haute affinite (k d = 3,87 0,60 nm), saturable et abondant (b m a x = 9,64 1,44 pmol/mg de proteine). Son profil pharmacologique le distingue clairement des recepteurs at 1 et at 2 de l'angiotensine ii. La liaison du peptide sur son recepteur n'est pas modifiee en presence de gtps. L'angiotensine iv ne module pas l'activite ni des guanylate et adenylate cyclases, ni de la phospholipase a 2. Ces resultats indiquent que le site de liaison de l'angiotensine iv n'appartient pas a la famille des recepteurs a sept domaines transmembranaires couple aux proteines g. L'angiotensine iv phosphoryle et active erk2 (extracellular signal-regulated kinase 2). L'activation d'erk2 passe par le recrutement des proteines shc, phosphorylees apres stimulation par l'angiotensine iv qui pourrait ainsi activer la cascade shc/grb2-sos/ras/raf/meks/erk2. Malgre l'activation d'erk2, l'angiotensine iv n'induit pas de proliferation, mais stimule la phosphorylation d'autres proteines p125, p115, p110, p95 et p90 qui seraient mises en jeu dans d'autres voies de signalisation. En conclusion, le site de liaison de l'angiotensine iv dans les cellules endotheliales d'aorte de porc est identifie comme le recepteur at 4 couple a une voie de signalisation incluant l'activation d'erk2 et de tyrosines kinases. Le role de ces activations dans des phenomenes cellulaires (differentiation, adherence) reste a explorer.
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Descamps, Simon. "Mise en évidence du rôle du Nerve Growth Factor dans le cancer du sein : effets biologiques et signalisation intracellulaire." Lille 1, 2000. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2000/50376-2000-129.pdf.
Full textAbstract:
Le Nerve Growth Factor (ngf) est le facteur de croissance neurotrophique par excellence. Nous avons démontré que le ngf est un puissant mitogène pour les cellules de cancer du sein mais qu'il n'a pas d'effet sur la croissance des cellules épithéliales normales. Nous avons également mis en évidence l'activité anti-apoptotique du ngf sur les cellules mammaires cancéreuses. Nous avons ensuite étudié les mécanismes de signalisations responsables de l'effet mitogène et de l'effet anti-apoptotique du ngf. Nos résultats démontrent que le ngf active les récepteurs trka et les map-kinases pour stimuler la prolifération et active p75 et le facteur de transcription nf-b pour inhiber l'apoptose. Nous avons donc démontré que le ngf emprunte deux voies de signalisation bien distinctes pour aboutir à ces deux effets biologiques. Nous avons enfin mesuré par rt-pcr quantitative en temps réel, l'expression des ARNm des récepteurs du ngf, trka et p75, sur une série de biopsies de cancers du sein. Nos résultats montrent que l'expression importante du récepteur trka est associée a une survie prolongée des patientes. L'ensemble de notre travail montre pour la première fois que le ngf est impliqué dans le développement du cancer du sein et ouvre de nouvelles perspectives pour le pronostic et le traitement de cette pathologie.
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Baranek, Thomas Le Naour Richard. "Régulation des monocytes et des cellules dendritiques par les produits de dégradation de l'élastine chez l'Homme." S.n. : S.l, 2007. http://scdurca.univ-reims.fr/exl-doc/GED00000693.pdf.
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Ortica, Sara. "Notch pathway in liver progenitors." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077175.
Full textAbstract:
La voie de signalisation Notch intervient dans la communication intercellulaire. Chez les mammifères, quatre récepteurs Notch (Notch 1-4) sont exprimés. Ils sont présents sous forme hétérodimérique à la surface cellulaire. Après l'interaction avec un ligand, Notch est activé par une cascade de clivages. La forme activée du récepteur (Nie, pour "Notch intracellulaire") est alors transportée dans le noyau, où elle active la transcription des gènes cibles. Pour mieux comprendre l'influence de Notch sur les progéniteurs hépatiques nous avons utilisé un système in vitro basé sur des cellules bipotentielles issues d'un foie murin embryonnaire (BMEL : Bipotential Mouse Embryonic Liver cells). Ces cellules peuvent être cultivées à l'état indifférencié, ou orientées vers un lignage hépatocytaire ou cholangiocytaire. Notch est actif à l'état indifférencié, et nous avons démontré que son inhibition induit une diminution dose-dépendante de la prolifération des BMEL, en réduisant l'entrée dans la phase S du cycle. Nic2 et Nic4 peuvent complémenter cet effet sur la prolifération, alors que Nic3 réduit la prolifération et augmente la polyploïdie. En outre, Nic3 permet la différenciation hépatocytaire, alors que les autres récepteurs doivent être inhibés pour permettre ce processus. En conclusion, nous avons montré que les quatre récepteurs Notch ont des rôles non redondants au cours du développement hépatique. Nous avons également testé les effets de Num. B, un inhibiteur de Notch, exprimé dans les hépatocytes. L'expression de Numb réduit la prolifération des BMEL, augmente leur volume et leur polyploïdie, avec une expression de marqueurs hépatocytaireNotch signalling is a highly conserved pathway that mediates short-range communications inter-cells. In mammals, four Notch receptors (Notch 1-4) are present. The receptor stands as a transmembrane heterodimer at the cell surface and it is activated after the interaction with a ligand. After a series of cleavages the activated form of the receptor (Nie) is translocated into the nucleus, where it activates target gene transcription. To get a better insight into the mechanisms of Notch function in liver progenitors we chose to use an in vitro System based on Bipotential Mouse Embryonic Liver (BMEL) cells. These progenitors can be maintained in the undifferentiated state or differentiated into hepatocytes or cholangiocytes. Our results show that Notch is active in undifferentiated BMEL cells, and that its inhibition decreases BMEL cell proliferation in a dose-dependent manner, through inhibition of S phase entry. Nic2 and Nic4 can complement the inhibition on proliferation, while Nic3 impairs proliferation and increases multinucleation. Moreover, we find that Nic3 is conducive of hepatocytic specification, while the other Notch receptors inhibit this fate. In conclusion, we show that the four Notch receptors have non-redundant roles during liver development, and that the type of the receptor involved can be more important than the overall pathway activation. Finally, we tested the effects of Numb, a Notch inhibitor upregulated upon hepatocytic commitment. Expression of Numb in undifferentiated progenitors reduces their proliferation rate, and induces a hepatocyte-like phenotype with large and multinucleated cells expressing hepatocytic markers
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Ducret, Thomas. "Etude de la signalisation intracellulaire associée au recepteur de la prolactine dans une lignée d'astrocytes tumoraux humains (cellules U87-MG)." Bordeaux 2, 2003. http://www.theses.fr/2003BOR21037.
Full textAbstract:
En dépit de la multiplicité des effets physiologiques de la prolactine (PRL) et de ses tissus cibles, les mécanismes intracellulaires à l'origine de ses effets sont méconnus. Nous avons donc recherché les effets de la PRL sur les conductances ioniques et la [Ca2+]i, ainsi que les voies de signalisation impliquées, sur la lignée U87-MG d'astrocytes tumoraux humains. En utilisant la microspectrofluorimétrie, la microscopie confocale de fluorescence et l'electrophysiologie (patch-clamp), nous montrons que la PRL induit l'activation d'une conductance K+ Ca2+ -dépendante, associée à une entrée de Ca2+ via des canaux Ca2+ voltage-indépendants activés par des seconds messagers. Nous mopntrons également que la PRL exerce des effets prolifératif et anti-apoptotique sur les cellules U87-MG. L'établissement du lien entre ces différents phénomènes devrait permettre de mieux comprendre le mécanisme d'action de la PRL en général ainsi que son éventuelle implication dans la tumorisation des cellulesIn spite of the multiplicity of prolactin (PRL) physiological effects and its target tissues, the intracellular mechanisms mediating these effects are not clearly understood. So we have studied the effects of PRL on ionic conductances and [Ca2+]i, as well as the intracellular pathways, in the human malignant astrocytoma cell line U87-MG. Using microspectrofluorimetry, fluorescence confocal microscopy and electrophysiology (patch-clamp), we show that PRL induces the activation of a Ca2+ -dependant K+ conductance, associated with a Ca2+ entry through second messenger-operated and voltage-independent Ca2+ channels. We also show that PRL exerts proliferative and anti-apoptotique effects in the U87-MG cells. The establishment of the link between these different phenomenons should allow a better understanding of PRL action mechanisms, but also its possible implication in cell tumorisation
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Ibarz, Géraldine. "Etude pharmacologique de la signalisation intracellulaire d'un récepteur couplé aux protéines G : le récepteur de la cholécystokinine de type I." Montpellier 1, 2003. http://www.theses.fr/2003MON13503.
Full textAbstract:
Le récepteur de la cholécystokinine de type 1 (R-CCK1) est un récepteur à sept domaines trans-membranaires couplé aux protéines G dont la structure primaire varie légèrement entre les espèces. Nous avons pu montrer que les R-CCK1 murin et humain, contrairement au R-CCK1 de rat, induisent une inhibition de l'activation transcriptionnelle de c-Jun, en présence d'une sur-expression de MEKK1. A l'aide d'expériences complémentaires, il a pu être déterminé que cet effet serait indépendant de l'état de phosphorylation de la SAPK/JNK et de c-Jun, et de l'activité kinase de la SAPK/JNK, principale kinase connue jusqu'à présent comme activant c-Jun. Par ailleurs, les expériences menées sur des mutants du R-CCK1 murin tendent à prouver que la troisième boucle intracellulaire ne serait pas impliquée dans cette différence de signalisation intracellulaire, et que, par contre, le premier domaine trans-membranaires et l'extrémité C-terminale des R-CCK1 pourraient jouer un rôle dans ce phénomène.
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Pommier, Blandine. "Récepteur à la cholécystokinine de type 2 : étude des voies de signalisation intracellulaires et rôle sans la régulation du système opioi͏̈de endogène." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05P603.
Full textAbstract:
Nous avons montré que la stimulation des récepteurs CCK2 entraîne la libération d'acide arachidonique par l'intermédiaire d'une phospholipase C couplée à un protéine Gq et d'une phospholipase A2 couplée à une protéine G sensible à la toxine pertussique. Nous avons également montré que certains antagonistes spécifiques des récepteurs CCK2 étaient vraisemblalement capables de stabiliser le récepteur dans une conformation donnée, entraînant un blocage préférentiel d'une voie de signalisation par rapport à l'autre. Nous avons observé que la mutation de certains acides aminés hautement conservés dans les récepteurs à sept domaines transmembranaires (F347A et K334M/K334T/R335L) entraînait une perte de l'activation de la phospholipase C sans inhiber totalement la libération d'acide arachidonique. Nous avons par la suite étudié le système opioi͏̈de endogène de souris transgéniques déficientes en récepteur CCK2. . .