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Dissertations / Theses on the topic 'Souches transgéniques'
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Zhadanovskaya, Ekaterina. "Modélisation de la dynamique spatio-temporelle de la pyrale du maïs en présence de maïs transgénique." Paris, AgroParisTech, 2007. http://pastel.paristech.org/3107/01/ThesisZhadanovskaya.pdf.
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Chabannes, Matthieu. "Modifications des profils en lignines par transformations multiples chez le tabac." Toulouse 3, 2001. http://www.theses.fr/2001TOU30086.
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Lacroix, Benoit. "Etude de la transformation génétique de Beta Vulgaris L. , via Agrobacterium tumefaciens : aspects fondamentaux et appliqués." Amiens, 2001. http://www.theses.fr/2001AMIE0026.
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Abomoelak, Bassam. "Développement et immunogénicité de souches recombinantes de BCG produisant des antigènes bactériens chimériques." Lille 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LIL10220.
Full textAbstract:
Deux souches recombinantes de bcg exprimant une fusion protéique entre s1, la sous-unité enzymatique de la toxine pertussique et le tetc, le fragment cc de la toxine tétanique ont été développées sous deux promoteurs différents (85a, hsp60). L'immunisation des souris avec la première souche n'a pas induit de réponse immunitaire, tandis que l'immunisation des souris avec la deuxième souche a induit une réponse immunitaire humorale et cellulaire. Une autre souche recombinante de bcg capable d'exprimer une fusion protéique entre s1, tetc et le fragment b de la toxine diphtérique a été développée.
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Tian, Lu. "Isolement et caractérisation de cellules souches cancéreuses dans un modèle murin de tumorigénèse mammaire." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S001/document.
Full textAbstract:
Le cancer du sein est le cancer est le plus fréquent chez la femme. Les patientes traitées par chirurgie, radiothérapie et/ou chimiothérapie peuvent souffrir de rechute et de métastases à plus ou moins long terme. Il est à présent admis qu’une sous-population de cellules particulières dénommées cellules souches cancéreuses (CSC) jouent un rôle important dans ces événements. Il est donc crucial d’isoler et de caractériser ces cellules pour comprendre leurs propriétés particulières d’autorenouvellement et de résistance aux traitements, ce qui permettra de les cibler pour obtenir des traitements plus efficaces. C’est dans ce contexte que s’inscrit ma thèse. Au laboratoire, j’ai mis en place un modèle de souris bi-transgéniques (bi-Tg) en croisant les souris C3(1)-Tag qui est un modèle de tumorigenèse mammaire (et prostatique) bien établi, avec les souris Tg s-SHIP-GFP qui ont déjà permis l’isolement de CS normales mammaires (et prostatiques). Dans ces souris, le promoteur de s-SHIP contrôle l’expression de la protéine fluorescente GFP ce qui permet de marquer et d’isoler les cellules. Dans les tumeurs mammaires développées par ces souris biTg, j’ai isolé une population rare de cellules s-SHIP/GFP+ possédant des propriétés de CSC, surtout une capacité à former des sphères en culture non adhérente et à générer des tumeurs par transplantation en série très supérieure à celle des autres cellules de la tumeur. Une analyse transcriptomique globale qui compare les gènes dérégulés dans les cellules GFP+ et GFP- a mise en évidence le rôle d’un composant de la voie Notch dans le maintien de la pluripotence.Nous avons également dérivé plusieurs lignées cellulaires dénommées MAM (pour mammary) à partir des tumeurs mammaires. L’une d’entre, MAM326 est une lignée de cellules épithéliales cancéreuses avec environ 10 % de cellules GFP+ et j’ai démontré que les cellules GFP+ sont plus résistantes à différentes drogues anti-cancéreuses ainsi qu’à l’irradiation. Une analyse transcriptomique a été réalisée pour déterminer la signature moléculaire de cette résistance. Cette analyse a mis en évidence une vingtaine de gènes significativement surexprimés dans les cellules GFP+, et dont la nature et/ou la fonction est pertinente dans le contexte d’une résistance aux traitements antitumoraux. L'un de ces gènes est la synucléine-gamma dont le rôle dans la radiorésistance du cancer du sein a été suggéré mais non démontré expérimentalement. Par la surexpression ectopique et l’inhibition par siRNA, nous avons démontré que la synucléine gamma peut induire la radiorésistance dans plusieurs lignées cellulaires de cancer du sein. En conclusion, ces résultats démontrent que l’expression de s-SHIP est un marqueur de CSC mammaires chez la souris et son intérêt dans l’étude du cancer du sein<br>Breast cancer is the most common cancer in women worldwide. The isolation and characterization of breast cancer stem cells (CSC) are crucial for understanding cancer biology and revealing potential therapeutic targets. One of the major issues in the study of CSC is the lack of reliable markers. A transgenic mouse model (Tg 11.5kb–GFP) was generated using the 11.5kb s-SHIP (stem-SH2-containing 5’-Inositol Phosphatase) promoter that specifically expressed enhanced green fluorescent protein (GFP) in embryonic and various tissue stem cells. In the mammary gland, previous experiments showed that GFP labels puberty cap cells and pregnancy basal alveolar bud cells, and it has been demonstrated that these mammary GFP+ cells are activated tissue stem cells. In order to determine if s-SHIP promoter expression could also mark mammary cancer stem cells, we generated a bi-transgenic mouse model by crossing Tg 11.5kb-GFP mice with Tg C3(1)/Tag mice. Tg C3(1)/Tag mice express SV40 T antigen under the regulatory control of the rat prostatic steroid binding protein C3(1) gene. In female mice, the transgene is expressed primarily in the mammary gland. Mice develop mammary hyperplasia by 3 months of age with subsequent development of mammary adenocarcinoma by 6 months of age.Here we show the presence of a rare population of GFP+ cells, which are also CD24+/CD49f+/CD29+ in mammary tumors of female bi-transgenic mice. As compared to GFP- cells, GFP+ cells exhibit both a higher tumor sphere-forming potential, and a higher tumorigenicity when transplanted into SCID and FVB recipient mice. Moreover, upon subsequent transplantation, the GFP+ cells generated heterogeneous tumors that displayed properties similar to the primary tumor. Transcriptomic analysis of these GFP+ vs GFP- cells revealed several differentially expressed genes including one protein implicated in the Notch pathway. In addition, from the murine mammary tumor, I have derived a cell line containing a s-SHIP/GFP+ subpopulation that shows resistance to chemotherapy and radiation. I have further studied this subpopulation and found that synuclein gamma could confer radiation resistance to breast cancer cells. Altogether, these results demonstrate that s-SHIP promoter expression is a marker of mammary CSC that enables their identification and isolation via a single consistent parameter
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Recorbet, Ghislaine. "Régulation d'une population d'Escherichia coli modifiée génétiquement et devenir de son ADN dans le sol." Lyon 1, 1993. http://www.theses.fr/1993LYO10118.
Full textAbstract:
Le devenir d'une population d'escherichia coli (souche el1003) modifiee genetiquement par l'insertion chromosomique de dix copies du gene wptii a ete evalue en microcosmes. Une approche comparative de dynamiques de population a mis en evidence une regulation de sa densite par predation et competition nutritive. Le gene smib conferant une sensibilite au saccharose a ete insere dans le chromosome d'e. Coli el1003 pour inhiber son developpement sur les milieux selecteurs des potentiels exconjugants l'extraction d'adn du sol et de la pcr a montre une persistance d'une sequence d'adn specifique d'e. Coli el1003 alors que la population n'etait plus detectable sur milieux geloses et par immunofluorescence
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Guéritaine, Gaëlle. "Aptitude des ravenelles à l'hybridation avec le colza et valeur adaptative des hybrides : implication pour l'utilisation de variétés transgéniques." Dijon, 2002. http://www.theses.fr/2002DIJOS022.
Full textAbstract:
Nous étudions le flux de gènes entre du colza OGM (Brassica napus) résistant à un herbicide et de la ravenelle (Raphanus raphanistrum). L'observation en microscopie de croisements manuels réciproques met en évidence une variabilité entre les différentes variétés de colza quant à leur aptitude à former des hybrides interspécifiques, ainsi qu'entre les individus d'une population de ravenelles. Ces résultats suggèrent des possibilités de renforcer ces barrières chez le colza et amènent à discuter les conséquences évolutives et adaptatives pour les populations de ravenelles. Les études sur la valeur adaptative montrent que les hybrides F1 se reproduisent très peu par rapport aux parents. A la sixième génération de rétrocroisement, nous observons un important effet du cytoplasme, ainsi qu'un coût reproductif engendré par le chromosome de colza portant le transgène. Un scénario de développement de ravenelles résistantes aux herbicides dans les champs est proposé<br>We analyse the gene flow between a GMO herbicide-resistant oilseed rape (Brassica napus) and wild radish (Raphanus raphanistrum). Microscopy analysis of reciprocal hand pollination shows existence of variability among the different cultivars and within a wild radish population for the ability to produce interspecific hybrids. These results indicate the possibility to improve these barriers in oilseed rape and allow to anticipate the evolutionary and adaptive consequences on wild radish populations. Fitness studies show that the F1 hybrids have much lower reproduction compared to parents. At the sixth generation of backcross, an important cytoplasm effect is observed, as well as a reproductive cost caused by the chromosome of oilseed rape marked by the transgene. A scenario of development of herbicide resistant wild radish in the field is proposed
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Pambo-Pambo, Arnaud Brice. "Etude du développement postnatal des motoneurones lombaires de deux souches de souris transgéniques, modèles de la sclérose latérale amyotrophique." Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX20716.
Full textAbstract:
Les modèles murins de la Sclérose Latérale Amyotrophique (SLA) ont permis des avancées dans la compréhension des mécanismes pouvant conduire à la mort sélective et progressive des motoneurones (Mns) mais ils présentent des disparités dans la sévérité et le décours temporel de la maladie. Parmi les hypothèses avancées figurent des modifications des propriétés intrinsèques des motoneurones conduisant à des modifications de l’excitabilité et de l’homéostasie du calcium intracellulaire et à la mort du motoneurone.Nous avons donc étudié les propriétés électrophysiologiques des Mns lombaires de souris SOD1G85R et SOD1G93A, deux modèles à faible nombre de copies du gène humain muté, durant les deux premières semaines postnatales afin d’identifier d’éventuelles anomalies pré-symptomatiques précoces. Nos travaux ont été réalisés sur deux préparations in vitro de moelle entière isolée et de tranches de moelle épinière. Les Mns mutants présentent, sur les deux types de préparations, une altération des propriétés du potentiel d’action se traduisant par un allongement de la durée associée à une diminution des vitesses maximales de dépolarisation et repolarisation et une réduction d’amplitude. Ces altérations apparaissent entre P2-P5 dans les Mns SOD1G85R et entre P6-P10 dans les Mns SOD1G93A et suggèrent une diminution de la densité des canaux sodiques et potassiques associés au potentiel d’action. Nous avons aussi observé sur des tranches de moelle épinière entre P6-P10 que le gain de fréquence des Mns SOD1G85R diminue et celui des SOD1G93A augmente sans aucune modification des densités des courants entrants persistants sodiques et calciques. On note également que, sur tranches de moelle épinière, les Mns SOD1G93A présentent un potentiel de repos diminué. En présence d’une surcharge calcique extracellulaire, les propriétés membranaires des Mns SOD1G85R entre P6-P10 sont moins affectées que celles des Mns témoins. Les effets différentiels de cette surcharge peuvent être dus à des modifications différentes de la dépendance au voltage des canaux voltage-dépendants et/ou à la modulation de certains types de canaux activés par le calcium extracellulaire. Une arborisation dendritique plus ramifiée que celle de Mns témoins, comparable à celle précédemment décrite dans les Mns SOD1G85R, a été observée dans les Mns SOD1G93A à P8-P9 avec des altérations du potentiel d’action citées plus haut et une réduction de la rhéobase. Ces altérations morphologiques et électriques pourraient indiquer des modifications de cinétiques et/ou de densités de canaux sur des sites différents dans ces Mns. Nos travaux montrent donc, d’une part que les mutations SOD1G85R et SOD1G93A induisent dans ces deux modèles murins des altérations des propriétés des Mns lombaires comparables mais décalées dans le temps et d’autre part que certaines altérations semblent être spécifiques à une mutation SOD1 donnée<br>The SOD1 murine models of Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) allowed major progress in the understanding of mechanisms which could lead to a selective loss of motoneurons (Mns), but these models display differences in the severity and time course of the disease. Changes in intrinsic properties of motoneurons may induce changes in excitability and intracellular calcium homeostasis leading to motoneuron death.Therefore, we studied electrophysiological properties of lumbar Mns from SOD1G85R and SOD1G93A mice, low expressor lines, during the first two postnatal weeks in order to identify possible early presymptomatic abnormalities. Our studies were carried out on two in vitro preparations: the whole isolated spinal cord and acute spinal cord slices. Mutant Mns display, in the two preparations, a modified action potential characterized by an increased duration due to a decrease of the maximal speeds of depolarisation and repolarisation and a reduction of the spike amplitude. These alterations appeared between P2-P5 in SOD1G85R Mns and between P6-P10 in SOD1G93A Mns and suggest a decrease of the density of sodium and potassium channels related to action potential. We also showed on spinal cord slices between P6-P10 that the gain of frequency decreases for SOD1G85R Mns and increases for SOD1G93A Mns without any change in the density of persistent inward sodium or calcium currents in these different mutant Mns. We observed also that the resting membrane potential of SOD1G93A Mns on spinal cord slices is decreased. The membrane properties of SOD1G85R Mns between P6-P10 were less susceptible to changes in presence of an extracellular calcium overload. Differential effects of this extracellular calcium overload on membrane properties of WT and SOD1G85R Mns could be due to different alterations of the potential dependence of voltage-gated channels and/or to the modulation of some types of channels sensitive to extracellular calcium. An over-branching of dendritic arborization, similar to that previously described in SOD1G85R Mns, was observed in SOD1G93A at P8-P9 with the above-mentioned action potential alterations and a weak rheobasic current. These morphogical and electrical changes could indicate together alterations of kinetics and/or density of channels on different sites on these Mns. In conclusion, our work shows on one hand that SOD1G85R and SOD1G93A mutations induce similar alterations of lumbar Mns properties but time-shifted in these two murine models and on the other hand that some alterations seem to be specific to a given SOD1 mutation
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Revol, Valérie. "Obtention et caractérisation d'une lignée de progéniteurs hématopoïétiques à partir de souris transgéniques pour le récepteur au CSF-1 humain." Lyon 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LYO10273.
Full textAbstract:
Des travaux menes au laboratoire ont montre que des cellules hematopoietiques murines multipotentes de la lignee fdcp-mix exprimant le recepteur au csf-1 humain (csf-1r) de maniere ectopique, ne proliferent que si ce dernier est exprime sous sa forme membranaire a la surface de cellules stromales. Selon un procede similaire, une strategie visant a isoler des lignees de cellules hematopoietiques non transformees a partir de la moelle osseuse de souris a ete elaboree. Nous avons choisi de realiser des souris transgeniques pour le gene c-fms humain, qui code pour le csf-1r, afin de disposer, par simple prelevement de moelle osseuse, d'une source permanente de cellules hematopoietiques exprimant le csf-1r humain. Deux approches ont ete utilisees : l'infection retrovirale de cellules es et la microinjection de l'adnc c-fms dans des ovocytes fecondes. La seconde approche nous a permis d'etablir une lignee de souris transgeniques c-fms humain. Il nous a alors ete possible, apres ensemencement de cellules medullaires de souris transgeniques c-fms humain sur des cellules stromales ms-5 exprimant la forme membranaire du csf-1 humain (cellules 2m-1), d'isoler une lignee hematopoietique, denommee 47. 10. Cette lignee 47. 10 est heterogene et composee de cellules myeloides exprimant divers marqueurs immunologiques de differenciation myelomonocytaire (cellules lin+). Des cellules blastiques lin - peuvent etre enrichies par tri cellulaire et sont capables de regenerer la population initiale une semaine apres reensemencement sur cellules 2m-1. Des progeniteurs a tres fort potentiel de proliferation, ont egalement ete detectes et leur maintien depend du systeme csf-1r/csf-1 membranaire. La lignee 47. 10 apparait donc composee de progeniteurs immatures capables de differenciation myelomonocytaire spontanee et dont l'autorenouvellement est dependant de la presentation du csf-1 humain par les cellules stromales 2m-1.
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Bertolla, Franck. "Validation du modèle plantes transgéniques-Ralstonia solanacearum pour l'étude des transferts de gènes inter-règnes dans l'environnement." Lyon 1, 1999. http://www.theses.fr/1999LYO10146.
Full textAbstract:
Les mecanismes de transfert de genes horizontaux contribuent aux processus d'evolution et d'adaptation des micro-organismes. Notre objectif a ete d'etudier in vitro et in situ le mecanisme de transformation naturelle de la bacterie phytopathogene r. Solanacearum afin d'estimer son role dans ces processus et les potentialites des transferts de genes entre plantes transgeniques et bacteries. La transformation naturelle in vitro de r. Solanacearum est correlee au developpement d'un stade de competence, induit pendant la phase exponentielle de croissance et influence par les conditions nutritionnelles du milieu. Afin d'integrer l'adn exogene par recombinaison homologue dans le genome hote, des similitudes de sequences sont indispensables excluant tout transfert d'adn d'autres bacteries et d'organismes de regnes differents. La competence a ete egalement detectee dans des plants de tomates infectes qui se sont averes d'excellentes niches ecologiques, favorisant l'echange d'informations genetiques entre souches infectieuses. Des observations de microscopie photonique et electronique de tissus de plantes infectees ont montre que des bacteries etaient potentiellement en contact avec de l'adn vegetal. Cependant, en depit des conditions moleculaires de similarite crees pour favoriser la recombinaison homologue, aucun transfert d'adn n'a ete detecte. Ces experiences ont toutefois permis d'analyser certains facteurs pouvant affecter l'efficacite du transfert, tels que la dilution du transgene dans un genome de grande taille et son nombre de copies present dans les plantes transgeniques. Enfin, une derniere etape a consiste a construire un mutant isogenique r. Solanacearum muts - dont l'activite antirecombinogene attenuee pourrait augmenter les potentialites de transfert inter-regnes.
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Nepote, Virginie. "Mécanismes moléculaires de la détermination catécholaminergique des cellules souches du sytème nerveux périphérique et central." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077224.
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L'Hostis-Guidet, Anne. "Des xénopes transgéniques pour l’étude de la neurogénèse : analyse et propriétés fonctionnelles de neuroblastes exprimant un gène rapporteur sous contrôle du promoteur de NeuroD." Rennes 1, 2007. http://www.theses.fr/2007REN1S139.
Full textAbstract:
L’activité électrique impliquée dans la neurogenèse au cours du développement embryonnaire chez les vertébrés est sous le contrôle de perméabilités calciques dont la caractérisation nécessite de pouvoir repérer les neuroblastes. Des lignées transgéniques exprimant la protéine EGFP sous contrôle de promoteurs de facteur de différenciation neuronale (NeuroD) ou de marqueur neuronal (Neuro β-tubuline) ont été produites chez l’amphibien Xenopus laevis. Chez ces animaux, l’expression du transgène est restreinte aux neurones et à des cellules indifférenciées du système nerveux. Des analyses par imagerie calcique en microscopie confocale suggèrent que les cellules exprimant l'EGFP sous contrôle du promoteur de NeuroD ont des propriétés fonctionnelles différentes des cellules ne l'exprimant pas. La combinaison de la transgenèse et de l'imagerie fonctionnelle permet d'envisager d’étudier et de caractériser les neuroblastes exprimant le facteur bHLH NeuroD<br>Electrical activity involved in neurogenesis during embryonic development of vertebrates is dependant of calcium permeabilities whose characterization requires the ability to locate neuroblasts. Transgenic lines expressing EGFP under the control of the NeuroD (neuronal differentiation factor) and the Neuro β-tubulin (neuronal marker) promoters were produced in Xenopus laevis. The transgene expression is restricted to neurons and non differentiated cells exclusively in nervous system in these transgenic animals. Confocal calcium imaging suggests that EGFP expressing cells with the NeuroD promoter would have different functional properties compared to cells without transgene expression. The combination of transgenesis and functional cellular imaging is a promising tool for characterization of neuroblasts expressing bHLH NeuroD factor
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Paget, Eric. "Etude de la transformation naturelle comme mécanisme de transfert d'informations génétiques dans l'environnement." Lyon 1, 1994. http://www.theses.fr/1994LYO10119.
Full textAbstract:
Dans le cadre des etudes sur le transfert de genes entre organismes, le role de la transformation naturelle dans l'environnement reste indetermine. Son processus exige de nombreuses etapes sensibles aux facteurs naturels, et demeure un evenement sans doute tres rare dans le sol. Pourtant devant le developpement des organismes genetiquement modifies et les risques potentiels de dissemination de leurs genes recombines, les differents aspects impliques dans la transformation naturelle ont ete etudies. L'observation des interactions entre adn libre extracellulaire et argile montmorillonite a montre que l'adn pouvait s'adsorber sur les mineraux, et qu'il etait alors partiellement protege contre des attaques nucleasiques. L'adn produit physiologiquement par certaines bacteries peut ainsi persister dans les sols. Cet adn bien qu'adsorbe sur argile ou dans les sols, reste cependant capable de transformer in vitro des bacteries possedant un stade naturel de competence (p. Stutzeri). Mais a ce jour, aucune preuve du phenomene de transformation n'a encore ete apportee dans des etudes en microcosmes de sol. Nos travaux ont enfin cherche a detecter un possible transfert de genes via la transformation, entre des tabacs transgeniques et la microflore indigene du sol cultive. La presence de l'adn vegetal dans le sol a pu etre mis en evidence plus d'un an apres la recolte des plantes, mais aucun transfert du gene recombine aux bacteries du sol n'a ete observe. Ces travaux ont necessite la mise au point de techniques de detection sensibles comme les isothermes d'adsorption, la microscopie electronique, l'extraction et la purification d'adn du sol ou la p. C. R. Il ressort de ces etudes que le processus de transformation naturelle, bien que non demontre dans le sol, peut trouver dans l'environnement toutes les conditions necessaires a son deroulement
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Hassani, Zahra. "Vectorisation de siRNas dans le cerveau de la souris : application à l'étude du rôle des hormones thyroïdiennes." Paris, Muséum national d'histoire naturelle, 2007. http://www.theses.fr/2007MNHN0035.
Full textAbstract:
Une meilleure connaissance des cellules souches neurales (CSN) constitue un enjeu thérapeutique majeur pour le traitement des maladies neurodégénératives ou de maladies congénitales affectant le système nerveux central. Aujourd’hui, la biologie fondamentale des cellules souches est très largement étudiée. L’un des moyens possibles pour étudier la fonction d’un gène dans un contexte physiologique donné est l’utilisation de l’ARN interférence (ARNi). Nous avons mis au point différentes méthodes pour véhiculer des petits ARNs interférents (siRNAs) dans les zones neurogéniques de souriceaux et de souris adultes. Nous montrons que dans le cerveau de souriceaux l’utilisation de lipides cationiques combinés à des lipides neutres (JetSI/DOPE) constitue le moyen le plus efficace de délivrer des siRNAs. En revanche chez l’adulte, l’injection de plasmides codant pour des petits ARNs en épingle à cheveux (shRNAs) à l’aide de polyethylenimine de 22 kDa s’est montrée plus efficace. Les hormones thyroïdiennes (HT) jouent un rôle majeur dans la neurogenèse et les étapes terminales de la formation du cerveau de mammifère. Récemment il a été montré qu’elles sont impliquées dans le potentiel prolifératif des cellules souches neurales adultes. Nous avons utilisé les outils de transfert de siRNAs mis au point dans la première partie de ce travail pour identifier des gènes cibles potentiels relayant les effets des HT sur la prolifération des CSN. Deux gènes candidats ont été étudiés : la Cycline D1, qui est un gène cible connu des HT, et Sox2, qui est un marqueur de cellules souches indispensable au cours de l’embryogenèse et de la neurogenèse. Nous montrons tout d’abord que l’inhibition du récepteur aux hormones thyroïdiennes alpha 1 (TR1) active de façon dose-dépendante l’expression d’un gène rapporteur Cycline D1-luciférase co-transfecté dans les ventricules latéraux de souriceaux. Nous montrons également par immunomarquage que les cellules Sox2-positives n’ont pas la même identité chez le nouveau-né et chez l’adulte, puisqu’elles expriment des niveaux différents en récepteurs aux HT. Enfin, des expériences de transfert de gènes somatique nous ont permis d’observer une activation de la transcription d’une région régulatrice de Sox2 en présence de T3. La poursuite de ce travail est en cours. Par réaction de polymérisation en chaîne quantitative (QPCR) et immunoprécipitation de chromatine (ChIP) in vivo chez des animaux sauvages ainsi que chez des animaux transgéniques TRa°/° nous chercherons à déterminer si les régulations de la Cycline D1 et de Sox2 observées en présence d’HT sont des effets directs ou indirects<br>A better understanding of the biology of neural stem cells is needed for progress to made on their use in neurodegenerative diseases. Much research is currently directed to identifying key genes implicated in neural stem cell renewal and maintenance. One means of defining the function of a gene in a given physiogical process is to use a small interference RNA (siRNA) approach to knock-down its expression in a defined cell population. With this aim in mind we chose to optimise different methods to deliver siRNA in the neurogenic zones of newborn and adult mice. We show that in the newborn mouse brain the most efficient delivery method is a combination of cationic and neutral lipids (JETsi/DOPE) wherease in the adult brain delivery is optimised by using a cationic lipid (22kD linear Polyethylenimine) to complex plasmids encoding small hairpinRNA (shRNA). In the latter case we show that a hybrid CMV-H1 promoter is more efficient than either a CMV or H1 promoter used alone. Thyroid hormones have been long known to be required for post-embryonic brain development and more recently have been shown to be required for the full proliferative capacity of the adult neural stem cell niche. We used the siRNA delivery methods optimised in the first part of the work to investigate potential target genes relaying the effects of thryoid hormone on neural stem cycling. Two candidate genes where investigated, cyclin D1, a known thyroid hormone responsive gene, and sox2, which is required for normal embryogenesis and neurogenesis and is a neural stem cell marker. First, we show that the introduction of siRNA against the alpha thyroid hormone receptor (TR1) activates, in a dose-dependent manner, transcription from the cyclin D1 promoter cotransfected into the neurogenic zone of newborn mice, demonstrating that this gene is indeed a target of thyroid hormone in this context. Second, using various combinations of antibodies we show that Sox2 and TR1 are colocalised in the neurogenic zones of both newborn and adult mice. Moreover, in vivo gene transfer experiments show that Sox2 transcription is regulated by thyroid hormone. Current work is directed to examining, with real time PCR and with chromatin immunopreciipitation in vivo, the effect of thyroid status on the regulation of the endogenous genes, Sox 2 and Cyclin D1 in both wild type mice and mice that lack all TR isoforms ( TRo/o)
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Maire, Cecile. "Fonction des facteurs de transcription Olig1 et Olig2 dans les cellules souches neurales du système nerveux central : Etude d'un modèle de souris transgéniques d'expression inductible." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05D030.
Full textAbstract:
L'objectif de ma thèse a été de définir l'impact de la sur-expression des facteurs de transcription Olig sur la différenciation des cellules souches neurales en oligodendrocyte dans un modèle de souris transgénique. L'expression des transgènes est induite par la doxycycline dans les cellules souches nestine+. Au cours du développement, l'expression forcée de Olig1 ou Olig2 induit une genèse ectopique d'oligodendrocytes. De plus, la sur-expression de Olig2 bloque la spécification des interneurones V3. En post-natal, la sur-expression de Olig2 dans les zones germinatives provoque une myélinisation précoce et une augmentation du nombre d'astrocytes dans le corps calleux. L'ensemble de mes résultats indique que la sur-expression des facteurs Olig pourrait constituer une stratégie thérapeutique intéressante pour promouvoir la régénération de la myéline dans des pathologies démyélinisantes, telle que la scérose en plaques<br>Olig1 and Olig2 are b-HLH transcription factors involved in oligodendrocyte development in the central nervous system. My project aims to analyse the effect of Olig gene over-expression in neural stem cells. Therefore, I designed and analyzed transgenic mice models with inducible expression of Olig genes in nestin+ neural stem/progenitor cells (Tet-On system). At embryonic stages, forced expression of Olig1 and Olig2 leads to ectopic expression of oligodendrocyte markers. Moreover, Olig2 over-expression decreased V3 interneuron specification. At postnatal stage Olig2 over-expression in germinative area induced earlier myelination and astrocyte specification in corpus callosum. These transgenic mice provide a useful model to test whether forced expression of Olig genes represents a possible strategy to enhance remyelination in demyelinating disease such as multiple sclerosis
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Robert, Isabelle. "Le gène humain de la Choline Acétyltransférase (ChATh) : différents mécanismes de régulation et de transcription dans des cellules neuronales et non neuronales. Etude de l'expression de ChATh dans des cellules ES génétiquement modifiées et différenciées en neurones." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2001. http://www.theses.fr/2001STR13137.
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Debeer, Sabine. "Contribution au diagnostic et à la caractérisation des encéphalopathies spongiformes subaiguës transmissibles des bovins et ovins en France." Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO10176.
Full textAbstract:
Les encéphalopathies spongiformes subaiguës transmissibles (ESST) sont des maladies neurodégénératives fatales, de l'homme (maladie de Creutzfeldt-Jakob) et de l'animal (encéphalopathie spongiforme bovine (ESB), tremblante du mouton). La nature exacte de l'agent infectieux demeurant inconnu, l'unique marqueur spécifique des ESST disponible est la protéine prion pathologique (Pr Psc), isoforme anormale d'une protéine prion de l'hôte. Afin de renforcer le diagnostic histologique, nous avons développé, au cours de ce travail, un protocole de détection immunohistochimique (IHC) de la Pr Psc chez les bovins et les petits ruminants. Dans le diagnostic des ESST, nous avons montré que ce protocole est applicable y compris dans les conditions extrêmes telles que l'autolyse et/ou la congélation préalable des tissus. Aujourd'hui, l'IHC permet d'élucider les cas difficiles détectés par les tests biochimiques de détection de la protéine prion pathologique. L'analyse topographique de la Pr Psc dans l'encéphale complet de 2 bovins et dans l'obex de plus de 100 bovins atteints d'ESB nous donne des éléments de caractérisation de la neuropathologie de l'ESB en France, qui apparaît d'ores et déjà semblable à celle décrite en Grande-Bretagne. Ainsi, ce travail apporte une contribution non seulement dans le cadre du diagnostic, mais aussi de l'étude de la pathologie des ESST.
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Poujol, Christel. "Etude immuno-ultrastructurale de la lignée mégacaryocyto-plaquettaire dans des souris transgéniques et chez des patients recevant du c7E3, un traitement anti-agrégant." Bordeaux 2, 1998. http://www.theses.fr/1998BOR28581.
Full text
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Péant, Cécile. "Caractérisation in vivo et in vitro de la dégénérescence rétinienne de la souris transgénique NSE-Hu-Bcl-2 (lignée 71) : étude des interactions entre un tissu rétinien en dégénérescence et les cellules souches neurales." Dijon, 2007. http://www.theses.fr/2007DIJOS076.
Full textAbstract:
L’objectif de cette thèse a été de caractériser in vivo et in vitro la dégénérescence rétinienne de la souris transgénique NSE-Hu-Bcl-2 (lignée 71) et d’étudier les interactions entre un tissu rétinien en dégénérescence et les cellules souches neurales dans un système in vitro. La souris transgénique NSE-Hu-Bcl-2 (lignée 71) présente une dystrophie rétinienne caractérisée par la mort initiale des cellules gliales de Müller (CGM). Des études récentes utilisant des cellules souches neurales transplantées dans le système nerveux central et la moelle épinière lésés ou dystrophiques ont montré un effet réciproque entre les cellules greffées et le tissu hôte en terme de survie, de différenciation et de plasticité. Nous avons donc recherché dans un système in vitro si de telles interactions existaient entre des cellules souches neurales, issues des éminences ganglionnaires d’embryons de souris, et les rétines dégénérescentes issues des souris NSE-Hu-Bcl-2. Notre étude a mis en exergue d’une part la nécessité d’évaluer le comportement tissulaire d’un explant après sa mise en culture et d’autre part un effet réciproque entre les cellules souches neurales et l’explant rétinien en terme de survie, de différenciation et de plasticité. Ces résultats nous permettent d’envisager la transplantation de ces cellules souches neurales dans des modèles animaux présentant une dystrophie rétinienne<br>The aim of this work was to characterize the retinal degeneration of the NSE-Hu-Bcl-2 transgenic mouse (line 71) both in vivo and in vitro and to study interactions between degenerating retinae and neural stem cells in an in vitro system. The NSE-Hu-Bcl-2 transgenic mouse (line 71) shows a retinal dystrophy initiated by Müller glial cell (MGC) death. Recent studies using neural stem cells transplanted in injured or dystrophic brains or spinal cords showed a reciprocal effect between the transplanted cells and the host tissue in term of survival, differentiation and plasticity. We thus assessed in culture if such interactions were existing between neural stem cells isolated from ganglionic eminences of mouse embryos and degenerating retinae of NSE-Hu-Bcl-2 transgenic mice. Our study highlighted first the necessity of assessing the behaviour of explants in culture and secondly the reciprocal effect between neural stem cells and retinae in term of survival, differentiation and plasticity. These results allow us to envisage the transplantation of these neural stem cells in animal models with retina dystrophy
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Marrache, Frédéric. "Physiopathologie de la pancréatite chronique et carcinogénèse pancréatique." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077125.
Full textAbstract:
Le lien entre inflammation chronique et carcinogénèse est bien établi dans de nombreux organes. C'est notamment le cas pour le pancréas. Il a été démontré que la pancréatite chronique est un facteur de risque de survenue de radénocarcinome pancréatique. Cependant, les bases physiopathologiques de cette association ne sont que mal connues. Des travaux récents ont mis en lumière un aspect original de la carcinogénèse associée à l'inflammation chronique : dans un modèle de gastrite chronique induite par l'infection par Helicobacter, il a été démontré que des cellules d'origine médullaire sont capables de se différencier en cellules épithéliales et que leurs descendantes contribuent significativement aux différentes lésions observées au cours de la carcinogénèse gastrique (métaplasie, dysplasie de bas grade, dysplasie de haut grade, adénocarcinome invasif). L'objectif de nos travaux était de mieux comprendre le lien entre pancréatite chronique et adénocarcinome pancréatique. Pour cela, nous avons eu deux approches distinctes. La première partie de notre travail a été de créer un modèle animal de pancréatite chronique reposant sur l'expression transgénique d'une cytokine proinflammatoire, l'interleukine 1beta. Ce modèle pourra être utilisé à l'avenir pour établir un modèle de carcinogénèse pancréatique liée à l'inflammation chronique. La deuxième partie de notre travail avait pour objectif d'étudier la capacité des cellules d'origine médullaire à se différencier en cellules pancréatiques au cours de la pancréatite chronique. Nous avons pu montrer qu'au cours de la pancréatite chronique les cellules d'origine médullaire peuvent se différencier en cellules étoilées du pancréas, et plus rarement en cellules canalaires<br>The association between chronic inflammation and carcinogenesis is well established in numerous organs. This is especially the case for the pancreas, where chronic pancreatitis is a demonstrated risk factor of pancreatic adenocarcinoma. However, the pathophysiology of this association is unknown. A recent study highlighted an original aspect of inflammation associated carcinogenesis: The authors showed that in a chronic gastritis model, bone marrow derived cells can differentiate into epithelial cells and that their progeny contributes significantly to the various lesions observed during gastric carcinogenesis (metaplasia, dysplasia, invasive tumor). The aim of our work was to better understand the link between chronic pancreatitis and pancreatic adenocarcinoma. To do so, we had two different approaches: The first part of our work aimed at creating an animal model of chronic pancreatitis based on the transgenic expression of a pro-inflammatory cytokine, interleukin 1beta. This model constitutes a good base to establish in the future a model of pancreatic carcinogenesis associated with chronic inflammation. The second part of our work aimed at investigating the possibility that bone marrow derived cells differentiate into pancreatic cells'during chronic pancreatitis. We showed that during chronic pancreatitis, bone marrow derived cells can differentiate into pancreatic stellate cells, and more rarely, into ductal cells
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Gabory, Anne. "Etude de la fonction de l'ARN non codant H19 et de la régulation de l'Empreinte Parentale au locus H19/lgf2 dans des modèles murins transgéniques." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077106.
Full textAbstract:
Le gène H19 a été découvert il y a un vingtaine d'années et sa fonction reste encore inconnue. Ce gène est soumis à l'Empreinte Parentale, son expression est monoallélique maternelle. Par ailleurs le transcrit produit à partir de ce gène est un ARN non codant de 2,3 kb. Il est fortement exprimé au cours de l'embryogenèse dans tous les tissus issus du mésoderme et de l'endoderme et est réprimé après la naissance. Le seul organe où il reste fortement exprimé chez l'adulte est le muscle squelettique. Le gène H19 est lié au niveau de sa localisation chromosomique et de la régulation transcriptionnelle au gène /g/2, qui code un facteur de croissance embryonnaire exprimé de façon monoallélique paternelle. L'invalidation du gène H19 chez la souris entraîne un phénotype de surcroissance attribué à la perte d'Empreinte du gène /g/2. Nous avons voulu adresser deux questions portant d'une part sur la fonction de l'ARN H19 au cours de l'embryogenèse et d'autre part sur la régulation de ce locus dans le muscle adulte. L'originalité de notre approche réside dans l'étude in vivo de modèles murins transgéniques. Nos résultats montrent, à partir de trois modèles murins de tumorigenèse induite, que le gène H19 a une fonction de gène suppresseur de tumeur in vivo. Par ailleurs nous avons montré à partir de souris exprimant le gène H19 de façon ectopique que cet ARN est un trans régulateur d'un réseau de gènes soumis à l'Empreinte, impliqué dans la régulation de la croissance. Enfin, nous avons observé une expression biallélique des gènes H19 et /g/2 dans les cellules satellites, qui sont les cellules souches musculaires, ainsi que dans les cellules souches hématopoïétiques, suggérant qu'un relâchement de l'Empreinte puisse être une caractéristique des cellules souches adultes<br>The H19 gene was first described twenty years ago and its function remains unknown. This gene is imprinted; it is expressed only from the maternal allele. The product of the gene is a 2. 3 kb non-coding RNA abundantly expressed in mesoderm and endoderm derived tissues during embryogenesis. After birth, the expression is repressed in ail tissues except skeletal muscle where it remains strongly expressed at adult stage. The H19 gene is linked genetically to the paternally expressed /g/2 gene, which encodes an embryonic growth factor, and they share the mechanism of transcriptional regulation. The deletion of the H19 gene in mice leads to an overgrowth phenotype, which is attributed to a loss of imprinting of the Igf2 gene. We addressed the questions of the role of the H19 RNA during embryogenesis and of the regulation of this imprinted locus in adult muscle tissue. The particularity of our approach is the use of in vivo transgenic mouse models. We showed in three independent models of induced tumorigenesis that the H19 gene acts as a tumour suppressor in vivo. We then analysed transgenic animals which ectopically expressed the H19 gene and found that this RNA is a trans regulator of a recently described imprinted gene network, implicated in growth regulation. Finally we observed a biallelic expression of the H19 and /g/2 genes in satellites cells, which are muscle stem cells, as well as in haematopoietic stem cells, suggesting that a relaxation of imprinting could be a characteristic of adult stem cells
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De, oliveira Julie. "Utilisation de poissons zèbres génétiquement modifiés pour l'étude des mécanismes et des effets des perturbateurs endocriniens." Thesis, Paris, Institut agronomique, vétérinaire et forestier de France, 2020. http://www.theses.fr/2020IAVF0018.
Full textAbstract:
Les perturbateurs endocriniens (PE), présents dans les milieux aquatiques, constituent un risque pour les organismes aquatiques. Il parait donc nécessaire de développer et de mettre en œuvre des tests permettant d’évaluer les effets PE des substances. Dans ce contexte, les objectifs de cette thèse étaient d’étudier les effets et les mécanismes d’action de PE d’intérêt environnemental tant d’un point de vue moléculaire (stéroïdogenèse, vitellogenèse) que physiologique (fonction de reproduction). Pour cela, des lignées de poissons zèbres transgéniques (cyp11c1-eGFP, cyp11c1-eGFP-casper, cyp19a1a-eGFP, cyp19a1a-eGFP-casper) exprimant une protéine fluorescente sous le contrôle de promoteurs de gènes cibles des PE (gènes de la stéroidogenèse) ont été utilisés.Ce travail a permis de montrer qu’il n’y avait pas de différence entre les lignées transgéniques et la lignée sauvage (AB) que ce soit en termes de comportement (socialité, anxiété) ou de reproduction. Les différentes expositions à des fongicides azolés (clotrimazole, prochloraze, imazalil) ont mis en évidence l’absence de biais lié à l’insertion des transgènes, nos modèles transgéniques répondant aux substances de manière similaire aux poissons zèbres sauvages. Enfin, les différentes expositions ont permis d’évaluer les effets de fongicides azolés ainsi que de progestatifs de synthèse (norethindrone) sur la reproduction et l’expression de l’aromatase gonadique chez le poisson.Dans l’ensemble, ce travail de thèse a permis (i) d’évaluer en partie la sensibilité de chaque modèle transgénique par rapport aux lignées sauvages, (ii) de déterminer les avantages et les limites de chaque modèle, afin d’en proposer une utilisation fiable et pertinente pour l’étude des PE ; (iii) d’apporter des connaissances sur les effets PE de fongicides azolés et de progestatifs, notamment sur la reproduction des poissons zèbres<br>Endocrine disrupters (EDs) are widespread aquatic environment contaminants that are at risk for aquatic organisms. In this regards, development and implementation of tests to identify EDs and quantify their effects is still a challenge. In this context, the objectives of this thesis were to study the effects and mechanisms of action of EDs of environmental interest both at the molecular (steroidogenesis, vitellogenesis) and physiological (reproductive function) levels. For that, transgenic zebrafish lines (cyp11c1-eGFP, cyp11c1-eGFP-casper, cyp19a1a-eGFP, cyp19a1a-eGFP-casper) expressing a fluorescent protein under the control of promoters of genes known to be targets of Eds (steroidogenic genes) were used.The present work showed that there exist no behavioral (sociality, anxiety) or reproductive differences between our transgenic lines and the wild type AB zebrafish. Exposures to azole fungicides (clotrimazole, prochloraz, imazalil) highlighted the absence of bias induced by the transgene insertions, our transgenic lines responding to substances like the wild-type zebrafish. Finally, the different exposures allowed us to evaluate the effects of azole fungicides and synthetic progestins (norethindrone) on reproduction and gonadal aromatase expression in fish.Overall, this thesis allowed (i) to evaluate the sensitivity of each transgenic model compared to wild-type zebrafish, (ii) to determine the strengths and weaknesses of each model to propose a reliable and relevant use for the study of EDs; (iii) to provide knowledge on the endocrine disrupting effects of azole fungicides and progestins, especially on zebrafish reproduction
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Ral, Jean-Philippe. "Multiplicité et redondance des enzymes du métabolisme de l'amidon dans la lignée verte." Lille 1, 2004. https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/Th_Num/2004/50376-2004-23.pdf.
Full textAbstract:
Les ADP-glucose α-1,4 glucane α-4-glucosyltransférases ou amidon-synthétases catalysent le transfert du glucose libre de l'ADP-glucose vers les extrémités non réductrices des chaînes glucaniques en élongation créant ainsi une liaison O-glucosidique de type α-l,4. Une souche mutante au locus STA3 de l'algue verte Chlamydomonas reinhardtii présente une diminution forte de la quantité d'amidon couplée à une perturbation de la structure de l'amylopectine. Nos travaux font la démonstration que le locus STA3 correspond au gène de structure de l'amidon synthétase soluble III (SSIII). L'étude de l'activité SSIII en culture nycthémérale révèle l'existence de multiples niveaux de régulation le long du cycle. L'étude du mutant sta3 dans ces conditions révèle le rôle palliatif de la GBSSI en culture synchronisée. La mise à disposition concomitante des génomes de C. Reinhardtii mais également d'Ostreococcus tauri, une algue verte unicellulaire de la famille des prasinophyceae, a permis la création d'une première annotation des gènes. Impliqués dans la biosynthèse de l'amidon chez ces deux espèces. Cette approche génomique établit que toute la complexité et la redondance des enzymes du métabolisme de l'amidon sont apparues à la base de la ligne verte chez les végétaux. Chez les plantes et bactéries, les mécanismes d'initiation et de nucléation des grains lors de la synthèse du polysaccharide restent mal définis. Faisant suite à une caractérisation complète de l'amidon produit par O. Tauri, nous avons observé un phénomène original de scission et de fractionnement du grain en deux structures filles. Ce phénomène suggère la transmission d'une matrice polysaccharidique responsable de l'initiation du grain d'amidon.
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Beurlet, Stéphanie. "Etude de modèles murins de la transformation des syndromes myélodysplasiques en leucémies aigues myéloïdes : application à l'étude d'ABT-737 un inhibiteur de BCL-2." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077152.
Full textAbstract:
Les syndromes myélodysplasiques sont un groupe hétérogène de maladies clonales de la cellule souche hématopoïëtique caractérisé par une dysplasie de la lignée myéloïde. Ces syndromes évoluent dans environ 30% des cas en leucémie aiguë myéloïde. L'étude des modèles animaux de ces maladies représente une opportunité unique pour mieux comprendre la leucémogénèse myéloïde. C'est le point de départ du développement de nouvelles thérapies pour traiter les patients. En utilisant deux transgènes humains impliqués dans les syndromes myélodysplasiques et les leucémies aiguës myéloïdes, NRASD12 et BCL-2, nous avons mis au point deux modèles de souris différents: - un modèle de syndrome myélodysplasique associant dysplasie myéloïde, excès de blastes dans la moelle et augmentation de l'apoptose lorsque hBCL2 s'exprime sous contrôle du promoteur viral MMTV-LTR ; - un modèle de leucémie aiguë myéloïde associant infiltration médullaire massive et un profil anti-apoptotique lorsque hBCL-2 est exprimé sous le contrôle du promoteur MRP8. Nous avons montré que les interactions fonctionnelles et physiques des protéines NRASD12 et BCL-2 sont déterminantes dans la progression leucémique. Nous avons évalué l'efficacité sur ces modèles murins d'ABT-737, un inhibiteur fonctionnel de BCL-2. Nous avons démontré un effet anti-leucémique d'ABT-737 sur les souris traitées associé à une diminution très nette de l'infiltration blastique médullaire, hépatique et splénique par induction de la mort cellulaire par apoptose. Ces résultats montrent également qu'ABT-737 dans ces modèles régule les voies de signalisation impliquant RAS et BCL-2 et augmente la survie des souris traitées<br>Myelodysplastic syndromes represent particularly challenging hematologic malignancies comprising of a large spectrum of genetic events resulting in a disease of diverse presentations and outcomes. About 30% of MDS progress to AML. Animal models represent powerful tools to model human diseases and are useful preclinical platforms. We create two distinct models using the cross of NRASD12 and hBCL-2 transgenic mice. Mice develop a MDS-like disease or an AML with MDS-related changes-like disease, depending on the promoter driving BCL-2 expression: - when the expression of the MRP8-driven-NRASD12 transgene is associated with the expression of hBCL-2 via the MMTV-LTR promoter, mice develop a disease resembling human MDS with excess BM blasts and increased apoptosis. However when both transgenes NRAS and hBCL2, are driven by the same promoter MRP8, mice develop a disease with characteristics of human AML with MDS related changes with high BM blasts count, the persistence of MDS features in myeloid cells and an apoptosis résistance profile. Taking advantage of the double transgenic MRP8[NRASD12-hBCL2], in which the NRASD12-BCL2 complex at the mitochondria induces AML with MDS related changes, we studied the beneficial therapeutic potential of a BCL-2 homology domain 3 (BH3) mimetic inhibitor, ABT-737. ABT-737 treatment significantly extended lifespan. Survival correlates with a reduction of bone marrow blasts and LSK cells and increased spleen and liver blast cell apoptosis measured by TUNEL and in vivo SPECT imaging using Tc-99m-labelled AnnexinV. These results strongly support the hypothesis that in AML with MDS related-changes, ABT-737 specifïcally targets the leukemic clone
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Cassard, Hervé. "Contribution à l'étude de la diversité biochimique et biologique des agents des encéphalopathies spongiformes transmissibles." Toulouse 3, 2012. http://thesesups.ups-tlse.fr/1982/.
Full textAbstract:
Les encéphalopathies spongiformes transmissibles (EST) sont caractérisées par l'accumulation d'une protéine, la PrPSc, dans le système nerveux central des individus malades. Selon le concept du prion, la PrPSc serait l'agent infectieux responsable des EST. La capacité des typages biologique (in vivo) et biochimique (étude des propriétés de la PrPSc) des souches de prion à refléter la réelle diversité des agents des EST reste incertaine. La première partie de notre travail a consisté à étudier le phénotype biochimique de la PrPSc au sein d'un panel d'isolats de maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ) préalablement classés sur la base de critères génétiques et clinico-lésionnels. Nous avons pu définir quatre groupes biochimiques distincts ne correspondant que partiellement aux catégories de la classification pré-établie et pouvant potentiellement correspondre à différentes souches de prion. Dans le deuxième volet de nos travaux, nous avons étudié la capacité d'isolats de tremblante à se propager dans divers modèles de souris transgéniques exprimant une PrP hétérologue ainsi que les conséquences de ces transmissions interspécifiques sur leurs propriétés biologiques et biochimiques. Nous avons pu démontrer que le franchissement des barrières d'espèces porcine et bovine par l'agent de la tremblante atypique entraînait l'émergence de nouveaux prions, dont celui responsable de l'encéphalopathie spongiforme bovine. Par ailleurs, nous avons réussi à transmettre plusieurs isolats de tremblante classique à deux lignées de souris transgéniques exprimant la PrP humaine. Dans l'une de ces lignées, la signature biochimique de l'agent propagé était similaire à celle d'isolats de MCJ sporadique<br>Transmissible spongiform encephalopathies (TSE) are characterized by the accumulation of a protein called PrPSc in the central nervous system of affected individuals. According to the prion hypothesis, PrPSc itself is the infectious agent in TSE. Whether biological (in vivo) and biochemical (study of the properties of PrPSc) prion strain typing can reflect the whole diversity of TSE agents remains doubtful. Within this context, the first part of our work consisted of establishing the biochemical phenotype of PrPSc in a large panel of Creutzfeldt-Jakob disease (CJD) isolates that had been previously classified according to genetic and clinico-pathological criteria. We identified four biochemical subgroups that only partially correlated with the pre-established subclassification and could therefore represent different prion strains. In the second part of our work we looked into the ability of scrapie isolates to propagate into murine transgenic models expressing PrPC of various species. We demonstrated that passage across the porcine and bovine species barriers by the atypical scrapie agent led to the emergence of new prions, including the agent of the bovine spongiform encephalopathy. Furthermore, we managed to transmit several classical scrapie isolates to two different transgenic mice strains expressing human PrP. In one of these models, the biochemical signature of the propagated agent was similar to that of sporadic CJD isolates
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Bally, Julia. "Synthèse et repliement des protéines dans les chloroplastes : effets collatéraux de l'expression massive d'un transgène." Thesis, Lille University of Science and Technology, 2008. https://ori-nuxeo.univ-lille1.fr/nuxeo/site/esupversions/112079bf-330d-489a-bfba-85ebc0c2c48c.
Full textAbstract:
Plastid genome engineering is an emerging technology which is being considered for the improvement of plant agronomic traits as well as for the molecular farming of biomaterials and therapeutic proteins. In the first part of this work, the potential of these organelles of prokaryotic origin to correctly fold and accumulate a disulfide bond containing enzyme has been investigated. Unlike a normal bacterial cytosol, the stroma of tobacco chloroplasts was found to support the formation of a recombinant alkaline phosphatase from Escherichia coli, whose activity and stability depend on the presence of two intra-molecular disulfide bonds. Targeting this enzyme to the thylakoid lumen via the Sec pathway resulted in stronger accumulation levels and higher specific activity. Complementary approaches have been initiated in tobacco using bacterial chaperones involved in the catalysis of disulfide bond formation, and a redox sensitive green fluorescent protein. These findings shed some light on the folding properties within chloroplasts, and have important biotechnological implications for the production in plants of many therapeutic proteins. Recombinant chloroplasts have the capacity to accumulate massive amounts of recombinant protein. The second part of this work focused on the consequences on the plant fitness and physiology of such extreme expression levels. We have analyzed tobacco plastid transformants accumulating alkaline phosphatase, a green fluorescent protein, and a bacterial hydroxyphenyl pyruvate dioxygenase. These lines exhibited a normal wild-type growth rate, and no significant perturbation of the chloroplast transcriptome was observed. In contrast, a proteomic approach on leaves revealed some differences, in particular a massive drop in the amount of Rubisco. The impact of recombinant protein expression on plant metabolism is discussed.
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Sester, Mathilde. "Modélisation de l'effet des systèmes de cultures sur les flux de gènes entre culture transgénique et adventice apparentée : cas de la betterave sucrière (Beta vulgaris L.)." Phd thesis, Université de Bourgogne, 2004. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00080792.
Full textAbstract:
L'autorisation de mise en culture de plantes transgéniques en Europe est suspendue à l'étude de ses conséquences et de ses moyens de gestion. C'est le cas pour la betterave sucrière tolérante à un herbicide non sélectif. Il existe en effet un risque de flux des transgènes de la culture vers des mauvaises herbes apparentées, les betteraves adventices, fréquentes dans les champs de betterave sucrière. Ce flux permettrait la transmission de la résistance à l'herbicide aux adventices et donc un retour à la situation actuelle, voire à une situation pire si le transgène confère un avantage à l'adventice dans d'autres cultures de la rotation. Pour déterminer les pratiques agricoles propres à éviter ou limiter l'apparition de betteraves mauvaises herbes transgéniques, il faut identifier les éléments des systèmes de culture qui influencent la démographie et la génétique des populations de betterave dans une région et à long terme. <br />À cause des dimensions spatiales et temporelles du flux de gène ainsi que de la large gamme de variabilité des systèmes de culture, il est impossible d'étudier le phénomène exclusivement en expérimentation. Par conséquent, nous avons développé un modèle (GENESYS-BETTERAVE) qui quantifie les effets des systèmes de culture sur ce flux de gènes. Il est centré sur le cycle de développement des betteraves cultivées et adventices dans chaque parcelle basé sur une succession de stades clé (plantules, montées, plantes en fleurs, production semencière, stock semencier). Pour chaque stade est calculée la densité d'individus dans la parcelle ainsi que les proportions génotypiques, principalement celles des individus transgéniques. Les relations entre les stades dépendent des cultures en place dans les parcelles, des techniques utilisées pour gérer ces cultures ainsi que du génotype des betteraves. Pendant la floraison, du pollen est échangé entre les parcelles et l'importance de cette dispersion dépend du parcellaire. Une partie des informations nécessaires à la réalisation du modèle, est tirée de la littérature. <br />Des expérimentations sont ensuite réalisées pour étudier et quantifier les parties encore peu connues du cycle de développement. Elles ont permis de décrire et de modéliser le devenir des semences enfouies de betteraves adventices, en mesurant la mortalité in situ, les capacités de germination des semences et de croissance pré-levée des plantules en fonction des saisons. D'autres essais ont permis de modéliser toutes les étapes clé du développement des betteraves adventices et des traînantes (dynamique et taux de montaison, dynamique de floraison, production de pollen...) dans les cultures les plus fréquentes de la rotation betteravière. <br />Après avoir été programmé sous forme de logiciel, le modèle est alors utilisé pour des simulations simples qui montrent qu'il prend bien en compte les éléments caractéristiques des systèmes de cultures, en attendant une validation pour vérifier à plus grande échelle le réalisme de la prédiction.
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Bally, Julia. "Synthèse et repliement des protéines dans les chloroplastes : effets collatéraux de l'expression massive d'un transgène." Thesis, Lille 1, 2008. http://www.theses.fr/2008LIL10008/document.
Full textAbstract:
L'ingénierie génétique des plastes est une technologie émergente considérée tant pour l'amélioration de certains caractères d'intérêt agronomiques, que pour la production de biomatériaux et de protéines thérapeutiques. Dans la première partie de nos travaux, nous nous sommes intéressés au potentiel de ces organites, d'origine procaryotique, à replier correctement et accumuler une enzyme contenant des ponts disulfures. Nous avons montré qu'à l'inverse du cytoplasme bactérien, le stroma des chloroplastes de tabac permet la formation d'une phosphatase alcaline recombinante dont l'activité et la stabilité dépendent de la présence de ses deux ponts disulfures intramoléculaires. L'adressage de cette enzyme au Iumen des thylacoides via le système Sec résulte en un niveau d'expression plus élevé et une plus grande activité spécifique de la protéine. Des approches complémentaires ont été initiées dans le tabac, avec des protéines chaperonnes impliquées dans la formation des ponts disulfures, et d'une protéine fluorescente verte (GFP) sensible aux variations redox. Ces résultats nous informent sur les propriétés de repliement au sein des chloroplastes et ont des implications biotechnologiques importantes pour la production de nombreuses protéines thérapeutiques dans les plantes. Les chloroplastes recombinants ont la capacité d'accumuler une quantité massive de protéines recombinantes. Pour la seconde partie de nos travaux, nous nous sommes attardés sur les conséquences d'un niveau d'expression extrême. Nous avons analysé les plastes transformés de tabac accumulant la pbosphatase alcaline, une GFP, ainsi qu'une hydroxyphényl pyruvate dioxygénase bactérienne. Ces lignées ont une croissance normale et aucune perturbation significative du transcriptome n'a été observée. En revanche, l'analyse du protéome des feuilles a révélé des différences et en particulier une diminution drastique de l'accumulation de la Rubisco. L'impact de l'accumnlation massive de la protéine recombinante sur le métabolisme de la plante est discuté<br>Plastid genome engineering is an emerging technology which is being considered for the improvement of plant agronomic traits as well as for the molecular farming of biomaterials and therapeutic proteins. In the first part of this work, the potential of these organelles of prokaryotic origin to correctly fold and accumulate a disulfide bond containing enzyme has been investigated. Unlike a normal bacterial cytosol, the stroma of tobacco chloroplasts was found to support the formation of a recombinant alkaline phosphatase from Escherichia coli, whose activity and stability depend on the presence of two intra-molecular disulfide bonds. Targeting this enzyme to the thylakoid lumen via the Sec pathway resulted in stronger accumulation levels and higher specific activity. Complementary approaches have been initiated in tobacco using bacterial chaperones involved in the catalysis of disulfide bond formation, and a redox sensitive green fluorescent protein. These findings shed some light on the folding properties within chloroplasts, and have important biotechnological implications for the production in plants of many therapeutic proteins. Recombinant chloroplasts have the capacity to accumulate massive amounts of recombinant protein. The second part of this work focused on the consequences on the plant fitness and physiology of such extreme expression levels. We have analyzed tobacco plastid transformants accumulating alkaline phosphatase, a green fluorescent protein, and a bacterial hydroxyphenyl pyruvate dioxygenase. These lines exhibited a normal wild-type growth rate, and no significant perturbation of the chloroplast transcriptome was observed. In contrast, a proteomic approach on leaves revealed some differences, in particular a massive drop in the amount of Rubisco. The impact of recombinant protein expression on plant metabolism is discussed
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Tirou, Linda. "Rôle de la voie de signalisation Sonic Hedgehog dans les cellules Glast positives du cerveau de souris adulte C9C5 Positive Mature Oligodendrocytes are a Source of Sonic Hedgehog in the Mouse Brain Hedgehog Controls Quiescence and Activation of Neural Stem Cells in the Adult Ventricular-Subventricular Zone." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL022.
Full textAbstract:
La voie Sonic Hedgehog (Shh) est active dans le cerveau de rongeur adulte où elle participe au maintien des cellules souches neurales (CSNs), aux interactions entre neurones et astrocytes et à la réparation des tissus. Chez l’adulte, les astrocytes régulent l’apport énergétique et l’activité des neurones et seraient les principales cellules répondant au signal Shh. Cependant, l’implication de la voie Shh dans les fonctions astrocytaires est mal connue. Au cours de ma thèse, j’ai étudié le rôle de la voie Shh dans les astrocytes à l’aide de diverses approches génétiques, moléculaires, biochimiques et pharmacologiques. J’ai notamment utilisé la lignée de souris transgéniques Glast-CreERT2-YFP-Ptc-/- (YFP-Ptc-/-), un modèle de délétion conditionnelle du récepteur Patched (Ptc) dans les cellules Glast+, et les contrôles YFP-Ptc+/+. La recombinaison par tamoxifène des souris YFP-Ptc-/- à l’âge adulte a conduit à la délétion de Ptc et à l’expression du rapporteur YFP dans les cellules Glast+, à savoir les astrocytes, les CSNs et leur descendance. J’ai effectué la première analyse détaillée par smFISH (single molecule fluorescent in situ hybridization) des transcrits de la voie Shh dans les astrocytes de plusieurs régions cérébrales dont l’hypothalamus. De plus, j’ai identifié une sous-population d’oligodendrocytes (OLs) matures, exprimant CC1, Olig2 et Sox10, comme source potentielle de ligand Shh pour les astrocytes et les neurones Ptc+ du cerveau postnatal. J’ai démontré la présence de la protéine et des transcrits de Shh dans ces OLs avec l’anticorps monoclonal C9C5 ciblant spécifiquement Shh et par smFISH, respectivement.La caractérisation du phénotype métabolique des souris YFP-Ptc+/+ et YFP-Ptc-/- à différents âges a révélé l’implication de la voie Shh astrocytaire dans la régulation de l’homéostasie énergétique (HE). En effet, l’activation de la voie Shh dans les astrocytes Glast+ est associée à une sensibilité plus importante au glucose démontrée par des tests de tolérance au glucose et à l’insuline. Cet effet est maintenu au cours du temps et est associé à des niveaux sanguins d’insuline plus faibles. De plus, les souris YFP-Ptc-/- sont caractérisées par une absence de prise de poids. Elles présentent une réduction des tissus adipeux s’accompagnant d’une augmentation de l’oxydation des acides gras mesurée par cage métabolique. A l’inverse, la prise alimentaire, l’activité locomotrice et la température corporelle ne sont pas modifiées. Ainsi, l’activation de la signalisation Shh astrocytaire bloque les altérations métaboliques associées à l’âge ou induites par l’obésité. Au niveau cellulaire, la délétion de Ptc n’affecte pas l’entrée de glucose dans des cultures primaires d’astrocytes suggérant que les effets observés sont médiés par un autre mécanisme. Dans l’hypothalamus, une région clé pour le contrôle de l’HE, l’activation de la voie Shh astrocytaire a entraîné une augmentation de l’expression des gènes de la voie de l’insuline. L’ensemble de ces données suggère l’idée d’une nouvelle fonction de la voie Shh dans les astrocytes, importante pour la régulation hypothalamique de l’HE. L’analyse du phénotype des souris YFP-Ptc+/+ et YFP-Ptc-/- a également révélé un rôle clé de la voie Shh dans la balance entre quiescence et activation des CSNs au sein de la zone ventriculaire-sous ventriculaire des ventricules latéraux, une des principales niches neurogéniques chez l’adulte. L’activation de cette voie dans les CSNs induit, à long terme, une hausse du nombre de CSNs quiescentes tandis que les CSNs activées et leur descendance sont très diminuées, affectant la neurogénèse dans cette région. Dans l’ensemble, ce travail met en avant de nouvelles propriétés de la signalisation Shh qui vont permettre d’approfondir la compréhension des fonctions de la voie dans le cerveau adulte, et élargir le potentiel thérapeutique de ses modulateurs pharmacologiques aux maladies neurodégénératives, démyélinisantes et métaboliques<br>During embryogenesis, the Sonic Hedgehog (Shh) signaling pathway plays a key role in neural patterning. The pathway is still active in the adult rodent brain where it participates to the maintenance of neural stem cells (NSCs), to neuronal and glial circuitry and to tissue repair (Ruat et al, Top. Med. Chem., 2015). In the adult brain, the astrocytes, glial cells regulating trophic support and activity of neurons, are proposed as the main Shh-responsive cells (Garcia et al, J. Neurosci., 2018). However, the implication of Shh signaling in these astrocytic functions is still poorly characterized. Here, I investigated the role of Shh signaling in astrocytes using various genetic, molecular, biochemical and pharmacological approaches. I used the transgenic mouse line Glast-CreERT2-YFP-Ptc-/- (YFP-Ptc-/-), a model of conditional deletion of the Shh receptor Patched (Ptc) in Glast-expressing cells, and their control littermates, YFP-Ptc+/+ mice. Tamoxifen-mediated recombination in YFP-Ptc-/- mice during adulthood led to Ptc deletion and YFP reporter expression specifically in Glast+ cells, namely astrocytes, NSCs and their progeny. I provided the first detailed analysis of Shh pathway transcripts expression (Ptc, Gli1, Gli2, Gli3) in astrocytes using single-molecule fluorescent in situ hybridization (smFISH) combined to immunohistofluorescence in various brain regions, including the hypothalamus. Moreover, I identified a subpopulation of mature oligodendrocytes (OLs), expressing the OLs markers CC1, Olig2 and Sox10, as a potential source of Shh ligand for these astrocytes and for neurons expressing Ptc in the postnatal brain. I demonstrated the presence of Shh protein and transcripts in these cells using the specific Shh monoclonal antibody C9C5 and smFISH, respectively. The characterization of YFP-Ptc+/+ and YFP-Ptc-/- mice metabolic phenotype at different timepoints revealed the implication of astrocytic Shh pathway in the regulation of whole body energy insulin tolerance tests. This effect was maintained over time and associated to lower blood insulin levels. YFP-Ptc-/- mice also exhibited a strong lean phenotype related to the absence of body weight gain. They presented a reduction of white and brown adipose tissues accompanied by an increase of fatty acid oxidation evaluated in metabolic cage, while food intake, locomotor activity and body temperature were not altered. Thus, the activation of astrocytic Shh signaling counteracted age-associated but also diet-induced metabolic alterations. At the cellular level, Ptc deletion did not affect glucose uptake in primary astrocyte cultures suggesting that these effects are mediated by another mechanism. In the hypothalamus, a key region in the control of energy homeostasis, the activation of astrocytic Shh pathway led to an increase of insulin signaling genes expression. Altogether, these data argue for a novel important role of Shh signaling in astrocytes for hypothalamic regulation of energy metabolism. The phenotype analysis of YFP-Ptc+/+ and YFP-Ptc-/- mice also revealed a key role of Shh signaling in orchestrating the quiescence and activation of NSCs in the ventricular-subventricular zone of the lateral ventricles, one of the main adult neurogenic niche. Long term activation of Shh pathway in NSCs induced an increase of quiescent NSCs number while activated NSCs and their progeny were strongly depleted affecting neurogenesis in this region. Overall, this work highlights novel properties of Shh signaling that will allow deeper understanding of its functions in the adult brain, and widens the therapeutic potential of pharmacological modulators of this pathway to neurodegenerative, demyelinating and metabolic disorders
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Delavalle, Pierre-Yves. "Adaptation de chimères intergénotypiques 1a/2a du virus de l'hépatite C et caractérisation d'un clone cellulaire d'hépatocyte présentant un corps intracytoplasmique." Thesis, Lille 1, 2011. http://www.theses.fr/2011LIL10166/document.
Full textAbstract:
Le virus de l’hépatite C (HCV) est un problème majeur de santé publique. On estime en effet que près de 3% de la population mondiale est infectée par ce pathogène qui se caractérise entre autre par sa grande variabilité génotypique. Les différentes souches de HCV ont été classées parmi six génotypes majeurs, eux même subdivisés en de nombreux sous-types. Toutes les souches de HCV n’ont pas la même capacité, comme JFH1 (génotype 2a), à se propager efficacement en culture cellulaire ce qui limite l’analyse des particules virales.Pour pallier la difficulté d’étudier le HCV de génotype 1a, des chimères inter génotypiques présentant les caractéristiques structurales du HCV de génotype 1a mais possédant le pouvoir réplicatif exceptionnel de l’isolat JFH1 (génotype 2a) ont été produites. Celles ci ont été adaptées à la culture cellulaire et plusieurs mutations d’adaptation ont été identifiées. L’importance de la protéine NS5 dans la formation des particules virales infectieuses ayant été également prouvée, cela nous a conduit à générer d’autres chimères pour lesquelles les séquences codant la protéine NS5A de JFH1 étaient substituées par celles de la souche H77, nous rapprochant ainsi du HCV de génotype 1a. Cela nous a permis d’identifier d’autres mutations d’adaptation pour ces chimères, permettant ainsi d’améliorer leur infectiosité en culture cellulaire. Par ailleurs, nous avons caractérisé une structure inédite présente au sein d’un clone de cellules d’hépatocytes (Huh-7w7.3) qui avait été sélectionné au cours d’une étude pour analyser le passage cellule à cellule des particules virales. Cette structure que nous avons dénommé SB pour « spheroid body » présente un enroulement des kératines 8 et 18 (K8/K18) emprisonné dans une cage de vimentine. Cette structure pouvant être assimilée à des inclusions cytoplasmiques, nous avons cherché alors à mieux la caractériser. Au cours de la division cellulaire nous avons remarqué que cette structure se désassemble et se réassemble pour ne recréer qu’un seul SB par cellule. Toutes nos analyses ont démontré que le SB n’est pas assimilable aux corps de Mallory (MDB) qui représentent des agrégats dans les hépatocytes. Par ailleurs, aucune mutation n’a été identifiée dans la séquence primaire des protéines K8, K18 et vimentine provenant des cellules Huh-7 et Huh-7w7.3. Cependant l’expression d’une GFP-K18 dans ces dernières conduisait à l’enroulement des filaments de kératines, contrairement à ce qui était observé dans les cellules Huh-7. En conclusion, nous avons isolé un clone cellulaire présentant un corps intra cytoplasmique tout à fait inédit impliquant des facteurs cellulaires présents dans la cellule Huh-7w7.3 et non dans celle de Huh-7<br>Hepatitis C Virus is a major public health problem, around 3% of the world population is estimated to be infected by this pathogen which is characterized by a great genotypic variability. The HCV strains have been classified within six major genotypes, subdivided in numerous subtypes. However all HCV genotypes are not able to spread efficiently in cell culture as JFH1 (HCV genotype 2a).In order to analyse the HCV viral particles of genotype 1a, inter genotypic chimeras having the structural characteristics of HCV genotype 1a but the replicative power of JFH 1 (genotype 2a) were produced. These chimeric viruses were adapted to the cell culture and several mutations have been identified. Furthermore, the NS5A protein has been described to be important for infectious viral particle formation. This lead us to generate chimeric viruses where the sequence coding for JFH1 NS5A protein was replaced by the corresponding sequence of H77 strain. We identified a new group of mutations in the adapted viruses, allowing to increase their infectivity in cell culture. Furthermore, a cellular clone containing an intracytoplasmic body was isolated from hepatocyte cell culture (Huh-7w7.3). This structure was named SB for “spheroid body”, and the keratins 8 and 18 (K8/K18), which formed the central core of the SB were surrounded by a vimentin cage-like structure. We examined whether this body could be related to some intracytoplasmic inclusions. During cytokinesis, the SB was disassembled and reassembled in a way to reconstitute a unique SB in each progeny cell. All our analyses indicate the SB is not related to Mallory Denk body, a well characterized intracytoplasmic inclusion. Moreover, the structure of SB was not due to mutations in the primary sequence of K8/K18 and vimentin. However GFP K18 expression leads to typical cytoplasmic whorls of intermediate filaments only in Huh-7w7.3 cells. In the present study, we have isolated a cellular hepatocytic clone containing an unusual cytoplasmic keratin-rich spheroid body involving cellular factors in the process of spheroid body formation
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Guerci, Aline. "Etude des mécanismes impliqués dans la mise en place et le contrôle de l'expression du gène neurogénine 3 dans le système nerveux central et le pancréas." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2006. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00466806.
Full textAbstract:
Relax chez le rat ou Neurogénine 3 (ngn3) chez la souris est un facteur de transcription de la famille basique Hélice Boucle Hélice (bHLH). Le profil d'expression de ce gène au cours du développement embryonnaire indique qu'il pourrait jouer un rôle fondamental dans la détermination du devenir nerveux ou endocrine des précurseurs neuronaux et pancréatiques respectivement. Le premier objectif de mon projet vise à élucider, les mécanismes moléculaires permettant de rendre compte de la mise en place et du contrôle de l'expression tissulaire restreinte du gène ngn3. Cette étude réalisée par transgenèse, a été possible grâce à l'installation au laboratoire d'une plate-forme de transgenèse, qui m'a permis de générer des modèles de souris transgéniques de façon autonome. J'ai donc réalisé différentes constructions permettant d'exprimer le gène β-galactosidase sous le contrôle d'éléments potentiellement « enhancer » du promoteur ngn3. J'ai caractérisé un élément de 3,85kb permettant de diriger l'expression du gène rapporteur exclusivement dans les territoires d'expression du gène endogène ngn3. L'étude de fragment plus restreints se poursuit actuellement mais nous disposons l'un fragment de 2,2kb dirigeant en transgenèse l'expression du gène LacZ dans l'hypothalamus ventral et les épithéliums pancréatiques et intestinaux. Le second objectif de cette thèse est d'obtenir un marquage in vivo, par transfert de gène, de la population des cellules souches du pancréas endocrine exprimant ngn3 dans des explants de pancréas embryonnaires murins puis humains. En effet, nous disposons d'un système in vivo unique capable de récapituler le développement du pancréas endocrine par xénogreffe d'ébauches pancréatiques. Jai démontré, dans ce modèle expérimental, la capacité de lentivirus recombinants à infecter efficacement des cellules progénitrices du pancréas, en ciblant à l'aide de promoteurs spécifiques l'expression du gène rapporteur dans les différentes populations cellulaires qui se sont différenciées. La construction et la production d'un vecteur lentiviral assurant l'expression du gène rapporteur de la GFP (Green Fluorescent protein) sous le contrôle de l'élément de 2,2kb du promoteur du gène ngn3, permet actuellement de transduire des explants de pancréas embryonnaires murins. La transposition de ces modèles à du tissu embryonnaire humain est actuellement validée. Ce travail nous donne accès, chez l'homme, au réservoir des cellules souches du pancréas endocrine. L'amplification et la sélection de telles cellules souches constituent un défi majeur pour le développement de nouvelles thérapies du diabète de type I. La fonction proendocrine de ngn3 étant déjà clairement établie au niveau du pancréas, le troisième objectif consiste à démontrer la fonction de détermination neuronale de ce facteur dans la moelle épinière. Dans le cadre d'une fonction de détermination, l'absence de différenciation d'une population de neurones est attendue suite à l'inactivation du gène ngn3. Nous avons pu démontrer que la mutation nulle ngn3 induit l'expression ectopique du facteur de détermination Mash1 dans la région ventrale de la moelle épinière exprimant normalement ngn3, assurant ainsi, une compensation fonctionnelle. Afin d'appréhender directement la fonction de détermination de ngn3 et cela en absence de compensation, nous avons généré des souris doubles mutant nulles Mash1-Ngn3. L'analyse phénotypique des mutants perte de fonction ngn3 et Mash1/ngn3 dans la moelle épinière ventral nous a permis de démontrer la fonction de ngn3 dans la détermination du devenir neuronal. De plus nous avons, pour la première fois, établi que les neurones matures dont la différenciation est déterminée par ngn3 présentent un phénotype glutamatergique. Mots clés : Ngn3, bHLH, expression tissu-spécifique, régions régulatrices, embryons transgéniques et fondateurs, ciblage progéniteurs/souches, transfert de gène, fonctions proneurale et proendocrine
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Couteau, Jérôme. "Construction d'une souche de levure transgénique pour la mesure de la génotoxicité environnementale." Le Havre, 2005. http://www.theses.fr/2006LEHA0006.
Full textAbstract:
De nombreuses molécules chimiques naturelles ou de synthèse sont potentiellement cancérogènes et peuvent se retrouver en quantité non négligeable dans l'alimentation humaine et l'environnement. Afin d'évaluer le risque mutagène associé à ces substances et mieux comprendre l'importance des facteurs environnementaux dans l'étiologie des cancers, nous avons développé une levure transgénique capable de bioactiver les procancérogènes et de mesurer leur potentiel mutagène. La levure Saccharomyces cerevisiae a été modifiée par génie génétique afin de lui faire exprimer de façon stable le gène TP53 humain, servant de cible moléculaire aux génotoxiques, ainsi que l'époxyde hydrolase et les enzymes nécessaires au fonctionnement des cytochromes P450s. Les principales isoformes de cytochromes P450s impliquées dans la bioactivation des procancérogènes environnementaux, CYP450-1A1, 1A2 et 3A4 ont été clonées et exprimées dans la levure à partir d'une construction vectorielle. Enfin un système rapporteur permettant de mesurer spécifiquement la fonctionnalité de la protéine TP53 a été intégré également dans le génome de la levure. Dans cette construction les mutations du gène TP53 se traduisent par le changement de couleur des colonies de levures du blanc au rouge. L'exposition, aux rayonnements UV et au NQO, de cette souche diploïde baptisée yJC2 montre qu'elle est capable de détecter leur effet mutagène sur le gène TP53. Enfin un accroissement dose-dépendant du taux de mutants a été mis en évidence lors de l'exposition de cette souche au B(a)P et au DMBA. Les différents résultats obtenus montrent que la souche yJC2 peut permettre la détection des mutagènes directs comme des promutagènes sans apport supplémentaire d'une fraction microsomale S9. Cette souche a permis par ailleurs la caractérisation du spectre des mutations induites par les UV et le B(a)P. Elle constitue donc un nouvel outil adéquat pour l'évaluation du potentiel mutagène de nouvelles molécules chimiques ou d'échantillons environnementaux<br>Many chemical molecules natural or synthesis are potentially carcinogenic and can be found in considerable quantity in the human consumption and the environment. So to evaluate the associated mutagenic risk of these substances and better understand the importance of the environmental factors in the aetiology of cancers, we developed a transgenic yeast able to bioactivate the procarcinogenes compound and to measure their genotoxic potential. The yeast Saccharomyces cerevisiae was modified by genetic engineering in order to express human TP53 gene, used as molecular target for genotoxic compounds, as well as the epoxyde hydrolase and the enzymes necessary to P450 cytochrome activity. Principal cytochrome P450 isoforms implied in the bioactivation of environmental procarcinogens, P450-1A1, 1A2 and 3A4 were cloned and expressed in yeast from a vectorial construction. Finally a reporting system measuring specifically the functionality of protein TP53 was also integrated in the genome of the yeast. In this construction, mutation of TP53 gene induce a white to red coloration of yeast colonies. Exposure with UV and NQO, of this yJC2 diploid yeast strain shows that it is able to detect their mutagen effect on TP53 gene. An increase amount-depend of mutants was highlighted during the exposure of this yeast to B(a)P and DMBA. This results show that the yJC2 yeast strain can allow the detection of mutagen and promutagenes without additional contribution of a S9 microsomal fraction. This yeast allowed the characterization of the induced mutation by UV and B(a)P. The yJC2 yeast constitutes a new tool for the evaluation of the mutagen potential of new chemical molecules or environnemental samples
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Gschaedler, Anne. "Études cinétiques et physiologiques d'une souche d'Escherichia coli recombinée surproductrice de glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1994. http://www.theses.fr/1994INPL049N.
Full textAbstract:
L’objectif général de ce travail est l'étude du comportement en fermenteur d'une souche d'E. Coli recombinée surproductrice d'une enzyme homologue, la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase. Dans une première partie, les performances de la souche ont été testées en culture discontinue et semi-continue en fermenteur de 2 litres. Une concentration optimum de glucose pour l'expression de l'enzyme et l'action inhibitrice de l'acétate ont été mis en évidence. Dans une deuxième partie, un milieu simplifié riche en acides aminés a été utilisé. Une étude de l'utilisation de ces derniers a été réalisée en culture discontinue et continue. Les transporteurs des différents acides aminés semblent jouer un grand rôle dans leur mode d'utilisation. Les acides aminés ont été classés en plusieurs catégories et l'influence du glucose sur leur importation a été dégagée. En utilisant ce même milieu de culture nous avons montré qu'il était possible d'augmenter fortement et de façon transitoire la production de l'enzyme recombinante par des ajouts pulsés, soit de glucose, soit de serine. Ce phénomène a été étudié en détail et en particulier la transcription et l'utilisation des promoteurs. La quatrième partie est consacrée à l'étude de la stabilité plasmidique. Nous avons mis en évidence une instabilité plasmidique transitoire en culture discontinue. En culture continue, la stabilité est meilleure à de faibles taux de dilution. Enfin, dans une dernière partie, nous avons étudié l'influence du plasmide et de la production de la protéine recombinante sur le comportement de la souche hôte en culture discontinue, semi-continue et continue
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Mathieu, Mélanie. "Expression de gènes "germin-like" au cours de l'embryogenèse somatique et du développement précoce chez les conifères." Lille 1, 2004. https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/Th_Num/2004/50376-2004-79.pdf.
Full textAbstract:
Les mécanismes moléculaires de l'embryogenèse somatique chez les gymnospermes ne sont pas complètement compris. Parmi les nombreuses études réalisées visant à améliorer les connaissances sur ce phénomène particulier de développement, certaines ont été menées sur l'implication et le rôle des protéines extracellulaires. Parmi elles, certaines sont des germines et GLPs dont les fonctions ne sont pas totalement connues. Elles appartiennent à une superfamille de protéines apoplastiques exprimées à des stades spécifiques de développement ou lors de stress. Dans les rares cas où une fonction enzymatique a pu être associée à ces protéines, il a été montré qu'elle entraînait la production d'H2O2 au niveau pariétal. PcGER1, un gène GLP avait déjà été isolé chez les conifères. Ses homologues chez le mélèze hybride (LmGER1) et le pin sylvestre (PsGER1) ont été caractérisés. Ces gènes GLPs ont une structure très proche et nous avons montré que les protéines correspondantes ont probablement une activité SOD générant du H2O2. Leurs séquences promotrices, conservées ont été soumises à une analyse bioinformatique révélant qu'elles possédaient dans leur partie distale de nombreux éléments cis retrouvés ans les promoteurs de gènes répondant aux hormones et/ou exprimés dans les tissus embryonnaires, ans la graine ou encore lors de la germination. L'activité du promoteur PcGER1 a été évaluée au cours de la culture de cellules BY-2. Celle-ci s'est révélée maximale en présence de 2,4-D et de BA à la fin de phase exponentielle de croissance<br>Une analyse par cytométrie en flux a montré que 70 à 80 % des cellules avaient un contenu en ADN en 2C. Les cellules dans lesquelles le promoteur était activé étaient en phase G1. Par ailleurs, la comparaison de l'activité du promoteur pleine longueur et de deux fragments délétés dans la partie distale montre que l'activité décroît avec la longueur du promoteur. Enfin, nous avons mis en évidence une corrélation significative entre le taux de parois et l'activité du promoteur. L'activité du promoteur LmGER1 a été évâluée en système homologue à l'aide d'un gène rapporteur au cours du développement. Nous avons pu montré que l'expression du gène était tissu-spécifique et avait lieu tout au long de l'embryogenèse somatique. Cette expression est localisée au niveau de la coiffe racinaire et des procambia vasculaires de l'hypocotyle et des cotylédons de l'embryon somatique. Au niveau des jeunes plants, l'expression de LmGER1 est située dans la nervure centrale des euphylles au niveau du système vasculaire et précisément dans le procambium vasculaire mais nous avons également pu constater une expression au niveau des cellules de garde des stomates. Enfin, une construction provoquant de l'IR-PTGS a été introduite dans des masses embryogènes de mélèze hybride afin d'évaluer l'impact de l'extinction de ces GLPs sur le phénotype embryonnaire. Les lignées embryogènes montrant une forte sous expression du gène se sont montrées incapables de maturer. Nous avons ainsi émis des hypothèses quand au rôle des GLPs dans le contrôle de l'expansion pariétale au sein d'un certain nombre de tissus
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Girault, Guillaume. "Développement d'outils de typage moléculaire de haute résolution pour la détection et la différenciation de Bacillus anthracis." Thesis, Paris, AgroParisTech, 2015. http://www.theses.fr/2015AGPT0007.
Full textAbstract:
Bacillus anthracis est une bactérie pathogène de répartition mondiale qui est responsable d’une zoonose, le charbon bactéridien. Appartenant au genre Bacillus, elle possède la capacité de sporuler : cette particularité lui permet de rester en dormance dans les sols et de résister à de nombreux stress (UV, chaleur…). Infectant principalement les mammifères, cette bactérie est responsable de foyers animaux et humains recensés annuellement à travers le monde. Certaines régions sont endémiques, d’autres, comme la France, ne connaissent que quelques cas sporadiques par an. Malgré l’incidence décroissante de la maladie à travers le monde, B. anthracis reste néanmoins d’un intérêt majeur pour de nombreux pays étant donné son usage potentiel en tant qu’arme biologique. L’étude de cette bactérie a une finalité duale, d’une part pour la mortalité qu’elle cause au sein des cheptels bovins et de la faune sauvage, et d’autre part, pour son potentiel en tant qu’arme de destruction massive. Cette espèce bactérienne est considérée comme très clonale : toutes les souches sont extrêmement proches d’un point de vue génétique. Afin de pouvoir identifier précisément les souches et remonter à la source d’infection, diverses méthodes de diagnostic et de typage moléculaire sont disponibles. Cependant, toutes ne possèdent pas le pouvoir de résolution souhaité, la robustesse ou la simplicité d’utilisation. Mon travail a consisté à étudier la diversité des souches de B. anthracis disponibles en Europe. Pour cela, un séquençage du génome complet a été réalisé sur un panel d’environ 250 souches (France, Europe) afin de disposer d’une très grande diversité. Une analyse bioinformatique comparative a permis de reconstruire les génomes des isolats européens et l’identification de polymorphismes de séquence spécifiques à ces souches (ici, les Single Nucleotide Polymorphims = SNP). Ces marqueurs ont conduit à établir avec précision la phylogénie de 292 souches de B. anthracis au niveau mondial. Plusieurs hypothèses concernant les origines et l’évolution de ce pathogène ont été proposées. Une proposition d’une nouvelle sous-lignée a également été faite. Enfin, un panel de soixante nouveaux marqueurs de type SNP a été identifié et validé pour génotyper les groupes et lignées phylogénétiquement apparentés présents en Europe. Deux méthodes de biologie moléculaire basées sur l’amplification PCR de ces marqueurs SNP ont été mises au point. La première permet une analyse rapide à faible coût (PCR HRM) alors que la seconde permet un multiplexage des tests (Luminex). Mon travail a permis un accroissement significatif de la connaissance de ce pathogène qu’est B. anthracis. Les outils de typage mis en place permettront à la France de disposer d’un outil de diagnostic performant, assurant la traçabilité et l’identification rapide des souches impliquées lors de foyers de fièvre charbonneuse ou lors de cas importés<br>Bacillus anthracis is a pathogenic bacterium with a worldwide repartition. It is the causative agent of a zoonosis named Anthrax. Belonging to the Bacillus genus, B. anthracis has the ability to sporulate: this particularity allows the bacterium to stay as quiescent spores into the soils and to resist against different kind of stresses (UV, heat treatment…). Mammals are principally infected and human or animal outbreaks are reported annually in the world. Several regions are endemic while some others, like France, report more sporadic cases. Even if Anthrax incidence is in constant decrease all over the world, B. anthracis is still a pathogen of interest for many countries because of its potential use as a biological weapon. The study of this bacterium has a two-tier purpose: first, it is the cause of a relative mortality in livestock and wildlife, and second it is potentially used as a weapon of mass destruction. This bacterial species is considered highly monomorphic and all strains are extremely closed genetically. In order to precisely identify strains during outbreaks or bioterrorism attempt and track the source of infection, several diagnosis and typing methods are available. However, not all of these methods have the discrimination power, the robustness or the ease of use that is required in the laboratory. During this work, I have studied the diversity of European isolates of B. anthracis. A whole genome sequencing approach for approximately 250 strains has been done with a great diversity into strains (France, Europe). A comparative bioinformatic analysis allowed genomes reconstruction and polymorphisms identification among European isolates (Single Nucleotide Polymorphism = SNP). These markers leaded to establish a precise phylogeny among 292 B. anthracis isolates at a world level. Several hypotheses concerning the origins and the evolution of this pathogen have been proposed. A new sublineage has been potentially discovered. A panel of sixty SNPs has been identified and confirmed to genotype the major groups and lineages phylogenetically related in Europe. Two molecular typing approaches based on PCR amplification have been developed. Using the identified SNP, they can be used to discriminate strains between each others. The first one is a quick and low cost approach (PCR HRM) whereas the second can be used to multiplex a lot of analyses (Luminex). My work allowed a significative increase into B. anthracis knowledge. The typing tools developed will allow traceability and quick identification of the strains involved in an Anthrax outbreak or in a suspected bioterrorist attempt in France
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Gnahoui-David, Audrey. "Vaccination néonatale avec un toxoplasme attenué : propriétés immunostimulantes et contrôle de la cryptosporidiose." Thesis, Tours, 2015. http://www.theses.fr/2015TOUR4015.
Full textAbstract:
La cryptosporidiose est une zoonose intestinale qui affecte les ruminants nouveau-nés et les individus immunodéficients (enfants, immunodéprimés) et pour laquelle les traitements sont limités et ne sont pas totalement efficaces. Le développement du parasite peut être contrôlé par une réponse immunitaire protectrice dans laquelle les productions d’IL-12 et d’IFNγ sont prépondérantes. Les laboratoires AIM, IPV et la société VitamFero ont décidé de mettre leurs compétences en commun pour évaluer si l’administration d’une souche vaccinale de Toxoplasma gondii atténuée (Toxo Mic1-3KO) pouvait permettre de stimuler efficacement le système immunitaire des nouveau-nés et favoriser le contrôle de la cryptosporidiose. La première partie des travaux de ma thèse Cifre a permis d’obtenir une preuve de concept. En effet, des expérimentations préliminaires sur souriceaux et agneaux dans lesquelles la souche Toxo Mic1-3KO s’était développée suffisamment montraient une diminution de la charge parasitaire suite à une infection d’épreuve par C. parvum. Fort de ces résultats, nous avons souhaité développer deux axes complémentaires pour nous aider à améliorer la souche vaccinale et son utilisation chez les nouveau-nés<br>Cryptosporidiosis is a zoonotic disease that affects newborn ruminants and young or immunocompromised individuals and for which treatments are limited and are not fully effective. Parasite development can be controlled by a protective immune response in which IL-12 and IFN-gamma productions are essentials. Laboratories AIM, IPV and VitamFero Start-up Company decided to pool their skills to evaluate whether the administration of an attenuated vaccine strain of Toxoplasma gondii (MIC1-3KO) could stimulate the immune system of neonates and favor the control of cryptosporidiosis. The first part of the work of my Cifre thesis was performed to obtain a proof of concept. Indeed, preliminary experiments on mice and lambs in which MIC1-3KO strain had developed sufficiently showed a decrease in parasite burden following an infectious challenge with C. parvum. Based on these encouraging results we decided to develop two complementary approaches to further improve the vaccine strain and our knowledge on newborn immune response to T
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Huby, Anne-Cécile. "Régression et progression de l'insuffisance rénale chronique chez une nouvelle souche de souris hypertendues : rôles et régulations de la balance endogène du TGFβ/BMP-7". Paris 6, 2009. http://www.theses.fr/2009PA066175.
Full textAbstract:
Pour comprendre les mécanismes mis en jeu dans l’évolution de l’insuffisance rénale chronique (IRC) une nouvelle souche de souris transgénique est utilisée. Elle présente une hypertension associée à une IRC progressive. Les phases de progression de l’IRC et la régulation de la voie du TGFβ/BMPs sont étudiées dans le rein et le cœur afin de mettre en évidence un parallélisme de régulation. Puis un traitement bloquant l’action de l’angiotensine II est donné sans faire diminuer la pression artérielle systémique. A 12 mois, les lésions tubulaires et glomérulaires sont importantes. Le traitement permet une récupération de la fonction rénale et une régression partielle des lésions. Cette amélioration est accompagnée par des variations de l’expression des membres de la famille TGFβ/BMPs. Ces données montrent que la protéinurie et les modifications d’expression des protéines impliquées dans l’intégrité et la fonction rénale sont réversibles quand l’action locale de l’ang II est bloquée. Ces changements sont associés à des altérations de l’expression de la famille des TGFβ/BMPs ouvrant de nouvelles voies thérapeutiques, à la fois au niveau rénal et cardiaque.
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Kheraief, Naceur. "Impacts socio-économiques des organismes génétiquement modifiés : cas des suicides des agriculteurs du coton 'Bacilus Thuringiensis' en Inde." Phd thesis, Université Nice Sophia Antipolis, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00956172.
Full textAbstract:
L'Inde est le deuxième producteur mondial de coton ; après la Chine, avec environ 12,1 millions d'hectares en 2011, soit le quart de la superficie cotonnière mondiale. Après l'avènement des biotechnologies agricoles, le gouvernement indien, sous l'égide du premier ministre Atal Bihari Vajpayee, a encouragé l'utilisation de coton génétiquement modifié, dénommé coton Bacillus thuringiensis (Bt). Les variétés de coton Bt permettent de lutter contre les pertes de rendement causées par les parasites lépidoptères. Toutefois, leur implantation n'a pas été sans difficulté (la résistance des insectes, la pollution des sols, l'utilisation massive d'eau et d'engrais, le déséquilibre de l'écosystème et l'appauvrissement des fermiers). Aujourd'hui, l'Inde connaît un débat majeur autour de son expérience en matière d'adoption de coton transgénique, débat où plusieurs arguments d'impacts sur le bien-être des petits agriculteurs sont avancés. Depuis sa commercialisation en 2002, le coton Bt a provoqué les mécontentements et les suicides des fermiers appauvris. En moyenne un paysan se donne la mort toutes les 30 minutes. Les victimes sont principalement les petits fermiers qui cultivaient les semences génétiquement modifiés dans les Etats indiens : Andhra Pradesh, Karnataka, Madhya Pradesh et Maharashtra. Ces agriculteurs étaient pour la plupart endettés auprès de la compagnie semencière Mahyco-Monsanto Biotech (MMB), qui leur fournissait à crédit les semences Bt ainsi que les pesticides. Faut-il y déceler une corrélation entre le coton génétiquement modifié et ces suicides atypiques ? Ainsi, l'objectif de cette thèse est d'explorer, tant sur le plan théorique qu'empirique, la relation entre l'utilisation du coton Bt et le suicide des agriculteurs en Inde...
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Maury, Sébastien. "Thérapie génique de la maladie du greffon contre l'hôte par gène suicide : du modèle expérimental aux essais cliniques." Paris 6, 2003. http://www.theses.fr/2003PA066212.
Full text
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Angevin, Frédérique. "Modélisation de l’impact des systèmes de culture sur la pollinisation croisée chez le maïs dans le cadre de l’établissement de règles de coexistence." Thesis, Paris, AgroParisTech, 2012. http://www.theses.fr/2012AGPT0062/document.
Full textAbstract:
La perspective de la culture de variétés transgéniques pose, pour de multiples raisons, le problème de la ségrégation de filières de production basées sur la même espèce dans les paysages agricoles : demande d'une filière « sans OGM » ; coexistence de productions alimentaires et non alimentaires… La réglementation européenne fixe un seuil de présence fortuite d'OGM au-delà duquel un produit, même issu d'une variété non-OGM, doit être étiqueté comme contenant des OGM. La Commission européenne a émis des recommandations sur l'adoption de pratiques favorisant la coexistence entre cultures OGM et non-OGM de façon à ce que les agriculteurs puissent garder la liberté de choisir le mode de production qu'ils souhaitent. Dans ce contexte, il est important de pouvoir estimer a priori le taux d'impuretés OGM dans les récoltes de parcelles non-OGM, en fonction de leur organisation spatiale et du climat, mais aussi de comprendre et prédire l'effet de modifications de pratiques agricoles sur ce taux. L'expérimentation peut apporter des éléments de connaissances des phénomènes, la modélisation s'avère cependant plus pertinente pour répondre aux demandes d'aide à la décision (principalement publique) pour des situations agricoles et climatiques diversifiées. L'objectif de la thèse est donc de dégager un cadre méthodologique générique pour le développement de modèles de flux biologiques combinant de façon dynamique modélisation, évaluation et expérimentation. Le travail de thèse a consisté en la conception et l'évaluation du modèle MAPOD qui simule les flux de gènes chez le maïs à l'échelle du paysage. Ce modèle est basé sur une fonction de dispersion individuelle qui dépend de paramètres biologiques et climatiques et qui calcule une probabilité de fécondation en un point (x, y) en fonction de la distance à la source émettrice de pollen (pollinisation efficace). Il comporte un module de dynamique de floraison qui rend compte des conséquences des synchronismes ou asynchronismes de floraison entre champs sur les taux d'OGM dans les récoltes. Le modèle permet de déterminer l'effet de la distribution spatiale des parcelles de maïs, des caractéristiques variétales, du climat et des itinéraires techniques sur les taux de pollinisation croisée. MAPOD a été mis au point à partir de données de la littérature et d'expérimentations menées par le GEVES. Cette première version a été évaluée grâce à un second jeu de données provenant du GEVES. Elle a aussi fait l'objet d'une analyse de sensibilité. Les résultats obtenus ont permis de définir les pistes d'amélioration de l'algorithme. La qualité prédictive de MAPOD a ensuite été estimée grâce à des données issues de suivis effectués pendant 5 ans dans des parcelles d'agriculteurs en Catalogne, région où le maïs Bt est cultivé à grande échelle. La pertinence des décisions prises grâce aux sorties du modèle a aussi été caractérisée. MAPOD a été utilisé pour simuler différents scénarios d'introduction de variétés OGM dans les systèmes de culture européens. L'efficacité de mesures individuelles de coexistence a été testée. Ensuite, c'est l'effet de combinaison de pratiques qui a été simulé, aboutissant à l'établissement de tables de décision en fonction du contexte de culture. À l'échelle du bassin de collecte, l'efficience des stratégies de ségrégation (spatiale, temporelle) pouvant être mises en place par les organismes de collecte-stockage a aussi été étudiée grâce au modèle. Enfin, les sorties de MAPOD ont servi comme support pour la mise au point d'un outil d'aide à la décision à destination des agriculteurs et de leurs conseillers<br>Consumer demand for food free of GMOs is growing and if production standards are to be met, food and non-food chains must be separated. Indeed, European Commission regulations 1829/2003 and 1830/2003 stipulate that food and feed thought to be GMO-free but found to be containing more than a 0.9% portion of an adventitious presence of authorized GMOs have to be distinguished, traced and labelled as such. Moreover, to ensure that producers have a choice a choice among differing types of production, the European Commission has issued recommendations that permit the coexistence of non-GM and GM crops. This poses the problem of how to deal with coexistence in an agricultural supply chain dedicated to handling a single crop species. To help in the elaboration of coexistence rules, and then assess their feasibility and their consequences as well as for setting up monitoring and control schemes, specific field experiments, even if necessary, are not sufficient as their predictive value remains restricted to a given context. It is necessary to be able to forecast the fate of GM crops at the landscape level taking into account the various cropping systems and agricultural practices that may occur across Europe. The key to forecasting spread and behaviour of GM plants and seeds as well as their impacts under a wide range of agro-ecosystems is modelling. Models reproduce the functioning of agro-systems and take into account the relevant factors and processes as well as their interactions. They thus make it possible to simulate the behaviour of agro-systems in non-observed situations and on a long term basis.This doctoral thesis establishes a methodological framework for the development of biological flow models thanks to the dynamic interactions of modelling, evaluation and experimentation. In a first phase, the work involved the design of the MAPOD® model developed in relationship to literature and varietal experiments carried out by GEVES. MAPOD® simulates gene flow between maize crops at the landscape scale. It is based on an individual dispersal function which depends on biological and climatic parameters. It calculates the probability of fecundation at a (x, y) point as a function of distance from the pollen emitter (efficient pollination). Its flowering dynamics module makes it possible to take into account of the consequences of flowering time - lags on GM adventitious presence in harvests. MAPOD® evaluates the effect of the spatial distribution of maize plots, varietal characteristics, and climate as well as agricultural practices on cross-pollination. In this investigation, in a second phase the initial version of MAPOD® was evaluated with another dataset provided by GEVES. Ways to improve the algorithm were thereby defined. In a third phase, the predictive quality of MAPOD® was estimated by comparing model outputs to cross-pollination rates which were obtained by monitoring farmers' fields in Catalonia (Spain) over a 5-year period. The relevance of decisions made according to model output was also evaluated.In a fourth phase, MAPOD® was used to simulate different scenarios involving the introduction of GM varieties into European cropping systems. The efficiency of individual coexistence measures was tested. Afterwards, the effect of combining different types of practices was simulated, leading to a set of decision-support tables elaborated according to the cropping context. At the scale of the collecting basin, with the enhanced version of MAPOD®, the efficiency of segregation strategies (spatial or temporal) that could be implemented by collecting and storing organisations was also studied. Lastly, model outputs were used as a basis for the design of a decision-support tool for use by farmers and extension workers
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Castaño, Maria Soledad. "Hétérogénéité dans des processus de développement cachés : inférence et analyse de populations structurées en environnements fluctuants." Thesis, Antilles, 2017. http://www.theses.fr/2017ANTI0124/document.
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Codakia orbicularis est un mollusque bivalve appartenant à la famille des Lucinidae et établissant des symbioses avec des bactéries sulfo-oxydantes (symbiotes) au sein de ses branchies. Dans l’hypothèse où toute symbiose nécessite une régulation par des molécules de dialogue, une étude chimique exhaustive pourrait aboutir à la mise en évidence des métabolites impliqués. Le travail de ce manuscrit porte donc sur l'isolement de métabolites secondaires à partir des branchies de ce bivalve et sur l'évaluation de l'activité antibactérienne des molécules isolées. Douze composés ont été isolés des branchies de Codakia orbicularis et leurs structures ont été déterminées par les méthodes spectroscopiques usuelles. Parmi ces molécules, une seule est nouvelle et a été nommée orbicularisine. Elle présente un squelette indolone spirotetracyclique inédit. Parmi les molécules isolées, seules quatre d’entre elles présentent une activité antibactérienne à savoir le soufre S8, la 4-hydroxybenzaldéhyde et deux monoglycérolipides. L'orbicularisine est inactive contre un panel de lignées cellulaires cancéreuses et de kinases. Le nouveau squelette de l’orbicularisine pourrait permettre d'aboutir à une nouvelle famille de molécules par synthèse organique et ainsi d'accroître la diversité moléculaire autour de ce motif inédit. Il sera également intéressant de déterminer l'origine des molécules isolées (procaryote ou eucaryote), particulièrement pour l’orbicularisine, et leurs rôles dans le cadre de la symbiose. Les résultats chimiques obtenus sur C. orbicularis et sur les Lucinidae en général sont intéressants puisque les espèces côtières appartenant aux bivalves ont été peu exploitées en chimie jusqu’à ce jour<br>Codakia orbicularis is a bivalve mollusk belonging to the family Lucinidae harboring sulfur-oxidizing bacterial endosymbionts within its gills. Considering that any symbiosis is most likely regulated by dialogue molecules, an exhaustive chemical study could lead to identify the involved metabolites. Thus, the aim of this thesis focuses on the isolation of secondary metabolites from the gills of this bivalve and the evaluation of the antibacterial activity of the isolated molecules. Twelve compounds were isolated from the gills of Codakia orbicularis and their structures were determined by usual spectroscopic methods. Among these molecules, only one presented a new structure and has been named orbicularisine. The latter presents an undescribed spirotetracyclic indolone skeleton. Regarding the biological activities, among the isolated molecules, only four of them identified as S8 sulfur, 4-hydroxybenzaldehyde and two monoglycerolipids presented an antibacterial activity. Orbicularisine was inactive against a panel of cell lines and kinase. The orbicularisine new skeleton is an interesting start for the synthesis of new family of molecules, thus enhancing its molecular diversity. It will be interesting to determine the origin of the isolated molecules (prokaryotic or eukaryotic), especially for the new orbicularisine, and their roles in the frame of the symbiosis. The chemical results obtained on C. orbicularis and on lucinids in general are interesting since the coastal species belonging to Bivalves have not been chemically explored
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Beaudoin, Mélissa. "BP1, un gène homéotique distal-less et son rôle dans l'érythropoïèse murine définitive." Thèse, 2003. http://hdl.handle.net/1866/14649.
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Giono, Chiang Gloria E. "Expansion of the CD8 memory T cells : implications for the self-renewal gene Hoxb4." Thèse, 2016. http://hdl.handle.net/1866/20521.
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Tardif, Magalie. "Les oncogènes NUP98-PHF23 et NUP98-HOXD13 confèrent un potentiel aberrant d’auto-renouvellement aux progéniteurs thymiques." Thèse, 2015. http://hdl.handle.net/1866/13858.
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