Dissertations / Theses: 'Spectroscopie de masse – Chromatographie en phase liquide à haute performance'

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Roy, Sylvie. "Couplage de la chromatographie liquide haute performance et de la spectrométrie de masse." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05P035.

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Guichardant, Michel. "Analyse à haute performance des acides gras polyinsaturés et de leurs métabolites oxygénés (CLHP - CPV et CPV - SM) : application à deux modèles biologiques, la plaquette sanguine et la cellule endothéliale vasculaire." Lyon 1, 1985. http://www.theses.fr/1985LYO10043.

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Deslandes, Guillaume Dailly Eric. "Comparaison de méthodes de dosage des médicaments immunosuppresseurs (ciclosporine, tacrolimus, sirolimus et évérolimus) sur sang total chromatographie liquide haute performance couplée à la spectrométrie de masse en tandem versus immunodosage /." [S.l.] : [s.n.], 2008. http://castore.univ-nantes.fr/castore/GetOAIRef?idDoc=46861.

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Giusti, Pierre. "Développement de l’interface entre la chromatographie liquide à nano-débits (nanoHPLC) et le spectromètre de masse à source d’ionisation par plasma à couplage inductif (ICP MS)." Pau, 2006. http://www.theses.fr/2006PAUU3052.

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Abstract:

Des millions d’années d’évolution ont débouchées sur des biomolécules spécifiques capables de complexer ou d’intégrer dans leur structure des hétéroatomes ou des métaux. Leur présence est indispensable pour le bon déroulement de certains processus biochimiques fondamentaux et leur absence peut être à l’origine de maladies ou de dysfonctionnements. L’architecture moléculaire déployée est souvent très complexe et l’étude des biomolécules a énormément progressé depuis le développement des sources d’ionisation electrospray et MALDI en complément des techniques de résonances magnétiques nucléaire (RMN). Cependant ces techniques ne permettent pas toujours d’analyser les composés minoritaires que sont les metallobiomolécules, ou celles dont l’hétéroatome qu’elles contiennent jouent un rôle biochimique clé. Le travail de recherche présenté a pour objet l’identification de ces biomolécules et surtout leur quantification par le biais de l’hétéroatome ou du métal qu’elles contiennent. Outre le grand nombre de molécules qu’ils comportent, les échantillons d’origine biologique ont la particularité d’être souvent réduits à des volumes inférieurs au microlitre. L’utilisation de techniques séparatives miniaturisées telles que les systèmes nanoHPLC furent donc requises. Le développement du couplage nanoHPLC - ICP MS, point focal de cette thèse, a nécessité la mise au point d’une nouvelle interface brevetée, et a permis la détection et la quantification des hétéroatomes contenus dans les biomolécules ciblées. L’utilisation du couplage parallèle utilisant cette fois un spectromètre de masse moléculaire permis ensuite de déterminer leur structure As a result of millions of years of evolution, biomolecules and biological complexes have incorporated heteroelements or metals in their chemical structure. Their presence can be essential to the functioning of fundamental biochemical processes or alternatively their absence can be responsible for causing illnesses and dysfunctions. The molecular structure of these biomolecules is often very complex and their characterization has progressed substantially with the development of NMR, MALDI and electrospray techniques. Nevertheless, these techniques show limitations for the analysis of minor compounds, which are often the target hetero- or metallo- containing molecules, key to the biochemical role under investigation. The researches presented here aim at identifying and quantifying these biomolecules through the heteroatom or metal present in the structure. In addition to the large number of molecules that biological sample can contain, the sample volume is often limited to the microlitre range. The use of miniaturized separation techniques, such as nanoHPLC systems was therefore required. The instrumental development of a patented nanoHPLC - ICP MS interface, principal objective of this thesis, has enabled a series of advances in the identification and quantification of the heteroatoms contained in the targeted biomolecules. The parallel coupling using a molecular mass spectrometer was then used to determine the biomolecule structure

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Far, Johann. "Contribution à la caractérisation du sélénométabolome de levures enrichies en sélénium de la chromatographie liquide multidimensionnelle et la spectrométrie de masse ICP MS (Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry), ICP MS multicollecteur et électrospray MS/MS." Pau, 2010. http://www.theses.fr/2010PAUU3004.

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Abstract:

La levure enrichie en sélénium (Saccharomyces cerevisiae) est l’une des formes de supplémentation alimentaire les plus appréciée chez l’homme et l’animal, notamment pour ses propriétés anti-cancérigènes potentielles. Les travaux de cette thèse ont contribué principalement à la caractérisation globale du selenométabolome (l’ensemble des métabolites de faibles poids moléculaires contenant du sélénium). C’est grâce aux développements et à l’utilisation de chromatographies liquides multidimensionnelles orthogonales couplées à l’ICP MS et à l’ESI MSn à haute résolution que ce travail de recherche a été rendu possible. L’approche méthodologique ainsi mise au point a permis de réaliser des empreintes moléculaires du sélénométabolome et de compléter la liste des composés identifiés (plus de 50, représentant la liste la plus complète à ce jour). Ces résultats ont également permis d’améliorer la compréhension des voies métaboliques utilisées lors de l’utilisation du sélénium par la levure. De plus, l’utilisation de la signature isotopique du sélénium déterminée par ICP MS multicollecteur en association avec les empreintes moléculaires du sélénométabolome représente ici un outil original et de choix permettant la discrimination des levures enrichies en fonction de leurs origines Selenium-rich yeast (Saccharomyces cerevisiae) is the most popular form of supplemented selenium because of its putative anticancer properties. This thesis offers a contribution to the characterization of selenometabolome (the entirety of the low molecular weight selenium-containing metabolites) owing to the development of multidimensional liquid chromatography with parallel detection by ICP MS and electrospray high-resolution MSn. The developed methods permitted to obtain a selenometabolome’s fingerprint including the identity of over 50 selenium metabolites, the most exhaustive list so far, and to obtain a deeper insight into the Se metabolic pathways in yeast. Besides, isotopic signatures obtained by multicollector ICP MS associated with the selenometabolome fingerprint allowed the discrimination of Se-rich yeast samples according to their origin

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Lacroix, Marlène. "Optimisation d'une méthode de dosage de neurotransmetteurs par le couplage LC/Fluo/MS : études théoriques du marquage au NDA par spectrométrie de masse haute résolution, modélisation moléculaire et étude quantitative de relations structure-temps de rétention (3D-QSRR)." Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/47/.

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Abstract:

Certains acides aminés et peptides sont des neurotransmetteurs impliqués dans les maladies neurologiques. Présents en très faible quantité dans les échantillons biologiques, une HPLC couplée à un détecteur de fluorescence et un spectromètre de masse est utilisée pour identifier et doser ces molécules. Les acides aminés sont marqués avec un agent fluorogène : le naphtalène-2, 3-dicarboxaldéhyde (NDA) et un nucléophile (CN-). Pour l'analyse des peptides enképhalines, le marquage est modifié afin de faciliter l'analyse en spectrométrie de masse : le nucléophile CN- est remplacé par un aminothiol facilement ionisable en mode positif, le N,N-diméthylaminoéthanethiol (MeAT). Des études théoriques en modélisation moléculaire, spectrométrie de masse haute résolution et sur l'échange H/D ont été réalisées pour interpréter les résultats obtenus avec chaque marquage Some amino acids and peptides are neurotransmitters involved in neurological diseases. As they are very low concentration in biological samples, HPLC coupled with a fluorescence detector and a mass spectrometer is performed for the identification and the quantification of these molecules. As amino acids are not fluorescent natively, they are labelled with a fluorogenic dye: the naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde (NDA) and a nucleophile (CN-). The labelling for the peptides (enkephalins) is slightly modified in order to facilitate the ionisation in positive mode in mass spectrometry: the nucleophile CN- is substituted by an aminothiol easily ionisable, the N,N-dimethylaminoethanethiol (MeAT). Some theoretical studies are investigated in molecular modelling, high resolution mass spectrometry and H/D exchange studies in order to explain the results obtained on each labelling

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Blinova, Olga. "Spéciation de l'arsenic et du plomb : Application aux boues de station d'épuration." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2001. http://www.theses.fr/2001STR13189.

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Abstract:

Notre étude avait pour objectif la spéciation de l'arsenic et du plomb dans la boue de station d'épuration d'Achères. La séparation des composés de chacun des éléments a été effectuée par HPLC et la détection à l'aide de l'ICP-MS. La QFAAS après dérivatisation post-colonne par génération d'hydrures a été utilisée pour l'arsenic. D'abord, nous avons caractérisé la composition de la boue: sa teneur en matière organique est de 67,5% et les concentrations en arsenic et en plomb total sont respectivement de 5,4æg/g et 261æg/g de boue sèche. Pour la spéciation de l'arsenic dans cette boue, nous avons sélectionné l'eau, l'acide phosphorique, l'EDTA et le pyrophosphate de sodium. La meilleure extractibilité de l'arsenic total est obtenue avec une solution de pyrophosphate de sodium 0,1M (62 à 72% de l'As total). Nous avons démontré que l'arsenic était présent sous quatre formes : AsIII, DMA, MMA et AsV. Les formes inorganiques, les plus toxiques, constituent la majeure partie de l'arsenic total (au moins de 63 à 75%). L'étude de l'influence des différent réactifs sur l'extractibilité de l'arsenic a permis de montrer que plus d'un tiers de l'arsenic mobilisable est soluble dans l'eau. Si l'AsIII, le DMA et le MMA se trouvent essentiellement dans la phase liquide de la boue, une partie considérable de l'AsV (de l'ordre de 40% de l'As total) est retenue par la matière organique. Pour le plomb, nous avons testé l'eau, l'EDTA et l'acide sulfosalicylique. D'après nos expériences, la boue contient essentiellement du plomb inorganique qui est mobilisable par l'EDTA et donc piégé en partie sur la matière organique de la boue. En revanche, l'eau ne permet pas la mise en solution du plomb. Si la boue contient du triméthyleplomb, il se trouve présent à des concentrations inférieures à la limite de détection de notre méthode, à savoir 0,24 ng.

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Bierla, Katarzyna. "Approches analytiques pour la quantification par spectrométrie de masse élémentaire et moléculaire du sélénium total, des acides aminés et métabolites séléniés dans les matériaux biologiques." Pau, 2008. http://www.theses.fr/2008PAUU3003.

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Abstract:

La thèse présente des solutions et des développements concernant l'analyse d'échantillons biologiques pour la détermination du sélénium total et de ses formes chimiques. Concernant la détermination du sélénium total, l'utilisation du xénon comme gaz de collision non réactif a été proposée pour éliminer les interférences polyatomiques pour la détection en ICP MS. Ceci a permis une détermination précise des rapports isotopiques du sélénium sans correction mathématique des interférences. Une méthode utilisant la dilution isotopique a été développée pour la détermination précise du sélénium dans le sérum sanguin. La partie principale de la thèse concerne le développement de méthodes pour la détermination quantitative des sélénométhionine et sélénocystéine dans le sang animal, les tissus mous et le lait. Les méthodes développées sont basées sur la carbamidométhylation quantitative de la sélénocystéine (SeCys) et de la sélénométhionine (SeMet) dans les protéines suivie par la protéolyse. La fraction contenant les deux acides aminés séléniés dérivatisés a été isolée par chromatographie d'exclusion stérique et analysée par HPLC en phase inverse avec appariement d'ions couplée à l'ICP MS. La limite de détection a été de 0. 02µg g-1 (matière sèche) pour chacun des deux acides aminés. Quant à la contribution à l'analyse en spéciation des plantes enrichies en sélénium, le travail propose le développement d'un schéma de l'extraction séquentielle permettant le recouvrement du sélénium de l'ail et une stratégie analytique générique pour l'identification de métabolites séléniés de faibles poids moléculaires sans étalon dans l'analyse d'un extrait aqueux de noix riches en sélénium The thesis presents methodological developments and solutions to several problems concerning the analysis of biological samples for the concentration of the total selenium and its species. As a contribution to the methodology for the total Se determination, the use of Xe as a non-reactive collision gas was proposed to eliminate the polyatomic interferences in Se detection by ICP MS. This allowed anaccurate determination of Se isotope ratios without mathematical correction. The principal part of the thesis concerns the development of methods for the quantitative determination of the Se-aminoacids (selenomethionine (SeMet), selenocysteine (Secys)) in animal blood, soft tissues and milk. The methods developed are based on the quantitative carbamidomethylation of SeCys and SeMet followed by their proteolytic release from proteins. The fraction isolated by size-exclusion chromatography was submitted to ion-paring HPLC - ICP MS analysis. In terms of contribution to speciation analysis of Se-rich plants, the work proposes a sequential extraction scheme allowing the recovery of Se from garlic. Se in Se-enriched garlic was fractionated by a sequential procedure including leaching with water, lysis, proteolysis, leaching with HCI, sulfite and CS and, finally, digestion of the residue. A strategy for the standardless identification of unknown water-soluble low-molecular weight Se metabolites by molecular mass spectrometry is pursued for monkeypot nuts. The use of size-exclusion, cation-exchange and ion-paring reversed-phase HPLC allowed the purification of selenocystathionine and its y-glutamyl-derivatives to a degree allowing their formal identification by organic mass spectrometry

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Calu, Guillaume. "Contribution à l'étude de la toxicité de Pseudo-nitzschia : régulation de la production d'acide domoïque et synthèse d'analogues chimiques." Nantes, 2011. https://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show/show?id=96e64355-e925-443b-8e7c-7058523aba11.

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Abstract:

Ce travail de thèse propose une contribution à l’étude des diatomées toxiques du genre Pseudo-nitzschia sp. , responsables de contaminations de fruits de mer de type ASP (Amnesic Shellfish Poisoning). L’influence des nutriments silicium et azotés sur la croissance et la production toxinique de trois espèces toxiques – P. Multiseries, P. Australis et P. Pungens – a été étudiée. La synthèse chimique d’analogues aux toxines ASP a également été explorée, en vue de développer de nouveaux biocapteurs de détection. Les travaux menés sur l’influence du silicium montrent que cet élément présent dans le milieu influe sur la teneur toxinique intracellulaire, mais sans être directement impliqué dans cette production toxinique. De nouvelles sources azotées organiques assimilables par P. Multiseries et P. Australis ont été mises en évidence, montrant une corrélation négative entre taux de croissance et production toxinique. La diversité des réponses physiologiques rapportées souligne une très forte variation intra- et inter-spécifique chez Pseudo-nitzschia sp. Les dynamiques de production toxinique démontrent la possibilité d’une production d’acide domoïque dès la phase de croissance des diatomées selon la source azotée étudiée. Les études menées lors de cultures en continu sur les espèces P. Multiseries et P. Pungens ont enfin mis en évidence une plus forte production toxinique à l’équilibre en présence d’urée qu’en présence de nitrates. Ces résultats laissent supposer une influence significative des déversements d’azote organique in situ (anthropiques ou naturels) sur les dynamiques naturelles d’efflorescences de Pseudo-nitzschia This work purpose a contribution to the study of toxic diatoms from the genus Pseudo-nitzschia sp. , responsibles for shellfish contaminations by ASP (Amnesic Shellfish Poisoning). Influence of silicium and nitrogen nutriments on growth and toxinic production by tree species �� P. Multiseries, P. Australis et P. Pungens – has been studied. Chemical synthesis of ASP toxinic analogues has been investigated too, in order to develop new biocaptors. Experiments on silicium showed that this element influenced the intracellular toxins content, but was not directly implicated in this toxinic production. New organic nitrogen species assimilated by P. Multiseries and P. Australis has been identified, showing a negative correlation between growth rate and toxins production. Diversity of physiological responses showed an high intra- and interspecific variation by Pseudo-nitzschia sp. Toxins production dynamics showed a possible production of domoic acid during growth phase. Studies on continuous cultures on P. Multiseries and P. Pungens indicated an higher toxinic production at steady state in presence of urea and nitrates. Theses results gaves clues to a significative influence of organic nitrogen in situ (anthropic or natural) on Pseudo-nitzschia bloomings

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Fall, Djibril. "Étude chimique et biologique d'Annonaceae du Sénégal : étude particulière des racines d'Annona senegalensis Pers., des racines et des graines d'Uvaria chamae P. Beauv." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2004PA114829.

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Abstract:

Les études chimiques et biologiques de deux Annonaceae récoltées au Sénégal et largement utilisées en médecine traditionnelle, Uvaria chamae (racines et graines) et Annona senegalensis (racines ont été effectuées. Vingt-sept acétogénines ont été isolées dont cinq de structure originale ainsi que deux alcaloïdes isoquinoleiques et un diterpène de type kaurane. Différentes techniques chromatographiques ont été mises en œuvre pour la purification et l'isolement des molécules : chromatographie sur colonne sur différents supports. L'identification des molécules a été réalisée à l'aide de différentes méthodes spectroscopiques : résonnance magnétique nucléaire du proton et du carbone treize, spectrométrie de mase, infrarouge et ultraviolette. Les tests d'activité biologiques ont révélé des propriétés cytotoxiques, acaricides, leishmanicides et anthelminthiques des extraits et de molécules isolées Chemical and biological studies of two Annonaceous plants collected in Senegal and widely use in traditional medicine, Uvaria chamae (roots and seeds) and Annona senegalensis (roots) is done. Twenty seven acetogenins, two alkaloïds and a kauran diterpen were isolated. Five of the acetogenins have an original structure. Differents chromatographic methods are used for the purification and isolation of the molecules : high performance liquid chromatography, column chromatography on differents supports. Theidentification of the molecules is realised by differents spectroscopic methods : nuclear magnetic resonance; mass spectrometry, infrared, ultraviolet. Activities essay show cytotoxic, acaricid, leishmanicid and anthelminthic properties of some extracts and molecules isolated

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Barakat, Hala. "Effet de la stérilisation par électrons accélérés sur les COC et sur l'impact des interactions avec des molécules actives." Thesis, Paris 11, 2013. http://www.theses.fr/2013PA114802/document.

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Abstract:

L’objectif de ce travail de thèse était d’étudier l’effet de la stérilisation par électrons accélérés sur les copolymères d’oléfines cycliques (COC), utilisés comme conditionnement de produits pharmaceutiques, ainsi que son impact sur les interactions avec des formulations pharmaceutiques. Grâce à la méthodologie analytique adoptée qui a fait appel à différentes techniques de caractérisation, telles que la chromatographie d’exclusion stérique, la chromatographie liquide haute performance à polarité de phases inversée, la spectroscopie infra rouge à transformée de Fourier, la microscopie à force atomique et les mesures d’angles de contact, nous avons pu mettre en évidence différents types de modifications dans le volume et sur la surface du matériau après stérilisation ainsi qu’après vieillissement. La modification principale du dans la masse du matériau, observée à la dose réglementaire de stérilisation (25 kGy), est la scission des chaînes du polymère, qui s’accompagne de la création de composés de faible masse molaire, donc de migrants potentiels risquant d’influencer la sécurité d’emploi des COC. En effet, certains de ces composés ont été retrouvés avec une concentration relativement importante dans les solutions de mise en contact avec les COC stérilisés, et notamment en solution aqueuse. Toutefois, l’étude préliminaire de toxicité a montré l’absence de cytotoxicité des extractibles obtenus à la dose de la stérilisation.Les modifications relatives à la surface des COC radio-stérilisés sont, quant à elles, de deux natures : physique avec une augmentation de la rugosité de surface et chimique avec la formation de produits d’oxydation polaires ; ces deux types de modifications conduisent à l’augmentation de la mouillabilité de surface. Cependant dans certains cas, notamment après vieillissement, ces modifications sont relativement faibles, même à des doses supérieures à celle préconisée pour la stérilisation, ce qui peut être corrélé à l’absence de l’effet de l’irradiation sur le comportement des COC vis-à-vis des solutions médicamenteuses. En effet, aucune variation de la sorption des principes actifs choisis n’a été montrée entre les COC irradiés et non irradiés vieillis The aim of this work was to study the effect of electron beam radio-sterilization on cyclo olefins copolymers (COC) used as pharmaceutical storage materials, as well as to investigate its impact on the interaction with pharmaceuticals formulations. Due to the analytical methodology used which dealt with different techniques of characterization such as size exclusion chromatography, reversed phase high performance liquid chromatography, Fourier transformed infrared spectroscopy, atomic force microscopy and contact angle measurements, we have been able to put into evidence different kinds of modifications both in the bulk and on the surface of the sterilized material and also after ageing.The principal modification of material’s bulk, observed at the recommended dose for sterilization (25 kGy), was polymer chains scissions, accompanied with creation of low molecular weight compounds, that are potentials migrants that risk to affect the safe use of COC. Indeed, some of these compounds have been found with a relatively important concentration in the solutions where sterilized COC was stored, especially in aqueous solutions. However, the preliminary study of toxicity has shown the absence of cytotoxicity of the extractables obtained at the sterilization dose.Surface modifications of radio-sterilized COC are of two types: a physical one, with an increase of the surface’s roughness and a chemical one with the formation of polar oxidation products; these two modifications result in an increase of surface’s wettability that may be important. However, in some cases such as for aged samples, these modifications are relatively weak even at doses higher than the one recommended for sterilization, which can explain the absence of the effect of radiation on the behavior of COC towards drug solutions. Indeed, no variation of drug sorption has been observed between aged COC irradiated and none irradiated

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Gorny, Josselin. "Régulation des réactions d’oxydo-réduction d’espèces chimiques (arsenic et chrome) dans les sédiments fluviaux de la Marque : de l’expérimentation à la modélisation." Thesis, Lille 1, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL10175/document.

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Abstract:

L’acquisition de connaissances sur le devenir des éléments traces sensibles aux variations redox dans les sols et les sédiments est une composante clé pour améliorer la gestion du stockage des déchets radioactifs par l’Andra (Agence nationale pour la gestion des déchets radioactifs), ainsi que celle des sédiments pollués dans la région Nord-Pas de Calais (NPdC). Pour contribuer à répondre à cette problématique, des sédiments fluviaux ont été choisis comme proxy, notamment en raison de l’existence de gradients redox importants. Des méthodes de spéciation ont été développées : (i) techniques chromatographiques couplées à un ICP-MS (Inductively Coupled Plasma – Mass Spectrometry) pour séparer et quantifier les espèces arséniées [As(III), As(V), DMMAV and MMAAV] et chromées [Cr(III) and Cr(VI)] ; et (ii) déploiement combiné de sondes DGT (Diffusive Gradient in Thin film) contenant des gels chélatants spécifiques à certaines espèces arséniées [As(III) et As total]. Ces méthodes ont ensuite été appliquées au cours d’un suivi saisonnier sur la Marque, rivière péri-urbanisée, où les sédiments sont faiblement contaminés en As et en Cr. Les résultats obtenus montrent que le chrome est uniquement présent sous forme réduite Cr(III), rendant difficile l’évaluation des paramètres forçant les inter-conversions redox entre Cr(III) et Cr(VI). L’arsenic est présent uniquement sous formes inorganiques dans les eaux interstitielles : As(III), As(V) et espèces thioarséniées (non caractérisées). L’évolution saisonnière de la spéciation en phase dissoute de l’arsenic dépend essentiellement de la production en S(-II) dissous par les bactéries sulfato-réductrices. Ces avancées montrent l’attention particulière à porter sur le niveau de production en S(-II) dissous dans les environnements de sub-surface puisque la réduction de d’As(V) en As(III) accroit la mobilité et la toxicité de l’arsenic The French national radioactive waste management agency (Andra) and the Nord-Pas de Calais (NPDC) Region aim to better understand the fate of the redox sensitive trace elements in soils and river sediments to ameliorate the management of polluted sediments and of the storage of radioactive wastes. To address this problematic, some river sediments were selected as proxies, as strong redox gradients can be observed. Two methods have been developed to study the speciation of As and Cr: (i) HPIC-ICP-MS (High Performance Ionic Performance – Inductively Coupled Plasma – Mass Spectrometry) coupling in order to separate and quantify As [As(III), As(V), DMMAV and MMAAV] and Cr species [Cr(III) and Cr(VI)], and (ii) DGT probes (Diffusive Gradient in Thin Film) containing specific chelating binding gels to quantify As species [As(III) and total As]. These methods have been implemented to monitor the low contaminated porewaters of the Marque river during 9months. The results demonstrated that chromium is present only under its reduced form Cr(III), which makes difficult to assess the parameters that force redox inter-conversions between Cr(III) and Cr(VI). Arsenic is present only under its inorganic forms: As(III), As(V), and thio-arsenical species. Seasonal changes of As speciation in the dissolved phase depends mainly of S(-II) production by sulfate-reducing bacteria, which makes the amount of dissolved S(-II) an important parameter to follow through time since the As reduction increases its mobility and toxicity

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Roux, Aurélie. "Analyse du métabolome urinaire humain par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse à haute résolution." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066575.

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Abstract:

L’objectif de ce travail de thèse est de développer une base de données spectrale pour faciliter l’annotation et l’interprétation biologique des jeux de données d’analyse métabolomique obtenus en utilisant la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. Deux approches ont été utilisées : l’identification par comparaison aux spectres de masse de composés de références et l’identification directement à partir des données biologiques. Pour la première approche une chiomiothèque de métabolite a été constituée et analysée. L’identification à partir de données biologiques a été réalisée sur une cohorte de volontaires de 227 individus travaillant au CEA. 244 métabolites ont ainsi été identifiés dans les urines humaines, donc 78 jamais été décrits comme faisant parti du métabolome urinaire. 139 métabolites ont également était caractérisés sur la base de leur masse précise mais sans identification formelle. Ces 383 métabolites représentent environ 1000 ions dans chacun des modes d’ionisation. Les variations physiologiques au sein de la cohorte, en fonction de l’âge, du poids et du genre, de ces différents métabolites ont été étudiées afin de construire une base de données relationnelle. Enfin, le métabolome urinaire pouvant être affecté par les conditions de prélèvement des échantillons d’urines, nous avons réalisé des études de stabilité dans les conditions de prélèvement des métabolites précédemment caractérisés. Ces études nous ont permis de proposer des recommandations en termes de conditions de prélèvement et de stockage à court terme des urines et de mesurer l’impact de la contamination bactérienne sur les concentrations de différents métabolites urinaires

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Wolters, Cédric. "Caractérisation moléculaire d’échantillons organiques complexes par spectrométrie de masse et chromatographie en phase liquide." Thesis, Université Grenoble Alpes, 2021. http://www.theses.fr/2021GRALU009.

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Abstract:

Comment analyser un échantillon organique complexe ? Cette question générale semble simple de prime abord, mais requiert de s’intéresser de plus près à la notion de complexité afin de pouvoir comprendre et justifier les moyens utilisés pour la caractériser. En planétologie, et plus largement en astrophysique, l’ensemble des observations et observables indiquent que la matière qui compose les objets extraterrestres est composée d’un mélange de diverses molécules, et ce mélange est plus ou moins divers en fonction de l’objet. Observations et modélisations sont effectuées couramment pour tenter de comprendre ces objets et de contraindre leurs processus évolutifs.Caractériser la complexité moléculaire de tels objets nécessite des instruments de pointe, qui sont difficilement adaptables aux contraintes spatiales pour être placés sur une sonde, et cela requiert que l’objet étudié puisse être échantillonné. Or, la très grande majorité des objets d’intérêt ne peuvent pas être atteints dans un temps raisonnable. Dès lors, il faut un autre moyen d’étudier ces objets : c’est l’astrophysique de laboratoire. De nombreuses expériences tentent de simuler les objets et environnements dans lequel ils évoluent, et analysent l’évolution de la matière soumise à ces contraintes. Une partie des défis de ces expériences réside dans la caractérisation chimique des échantillons, et plus particulièrement dans leur caractérisation moléculaire.Dans le cadre de cette thèse, nous proposons d’utiliser la spectrométrie de masse haute résolution (HRMS) et la chromatographie en phase liquide haute performance (HPLC) pour caractériser des échantillons organiques complexes. Pour se faire, l’ensemble de la chaine analytique a été étudiée, depuis l’acquisition des données jusqu’à leur exploitation. Ainsi, nous proposons une optimisation de l’acquisition des données en Orbitrap, ainsi que des systématiques de traitement des données issues des analyses effectuées ESI-HRMS ainsi que pour des analyses effectuées en LDI-ICR. La chromatographie couplée à la spectrométrie de masse est un outil puissant pour accéder à la structure moléculaire des échantillons, et nécessite de développer des méthodes qui soient adaptés aux échantillons analysés. Nous proposons ainsi deux méthodes HPLC pour l’analyse des échantillons, qui ont été développées et validées pour l’analyse d’échantillons complexes. Cependant, aucun logiciel commercial ne permet l’analyse non supervisée de tels échantillons : un logiciel qui permette le traitement de ces données a ainsi été développé et permet de révéler la diversité moléculaire des échantillons sans supervision. Mais l’identification des molécules ainsi détectées n’est pas un processus aisé puisqu’il nécessite alors de posséder l’ensemble des isomères possibles pour chaque molécule détectée. Pour réduire cet espace des possibles, un outil de prédiction des temps de rétention est proposé qui se base sur la connaissance des propriétés physico-chimiques de composés connus afin de prédire, pour ces mêmes composés, leur temps de rétention théorique sur les méthodes utilisées.Ce travail présente dans une dernière partie l’application de l’ensemble des développements effectués au cours de ces trois années sur un jeu d’échantillons d’analogue d’aérosols atmosphériques de synthèse modélisant des exoplanètes de type super-Terres et mini-Neptunes. Depuis l’analyse de leur matière soluble, jusqu’à la comparaison entre phase soluble, insoluble et totale, l’analyse par spectrométrie de masse indique une grande diversité et des différences importantes entre échantillons, indiquant des processus de formation et d’évolution directement liés à la composition du mélange réactif. Enfin, l’analyse par chromatographie d’un de ces échantillons indique de multiples isomères, dont certains pouvant être annotés comme étant des molécules biologiques, potentiellement impliquées dans le processus de l’origine de la vie How to analyse a complex organic sample? This general question seems simple at first glance but requires a closer look at the notion of complexity to be able to understand and justify the means used to characterise it. In planetology, and more widely in astrophysics, all the observations and observables indicate that the matter that makes up extraterrestrial objects is composed of a mixture of various molecules, and this mixture is more or less diverse and dense depending on the object. Observations and models are routinely done to try to understand these objects and to constrain their evolutionary processes, or to try to investigate their origin.Characterising the molecular complexity of such objects requires state-of-the-art instruments, which are difficult to adapt to space industry constraints in order to be placed on a probe, and this requires that the object under study can be sampled. However, most objects of interest cannot be reached in a reasonable time. Therefore, another way to study these objects is needed: laboratory astrophysics. Many experiments attempt to simulate the objects and environments in which they evolve and analyse the evolution of matter subjected to these constraints. Part of the challenges of these experiments lies in the chemical characterisation of the samples, and more particularly in their molecular characterisation.As part of this thesis, we proposed to use high-resolution mass spectrometry (HRMS) and high-performance liquid chromatography (HPLC) to characterise complex organic samples. To do so, the entire analytical chain was studied, from the data acquisition to its use. Thus, we proposed an optimisation of the data acquisition in Orbitrap, as well as the systematic processing of the data resulting from the analysis done by ESI-HRMS as well as for the analysis done by LDI-ICR. Chromatography coupled with mass spectrometry is a powerful tool for accessing the molecular structure of samples and requires developing methods that are suited to the samples analysed. Therefore we offered two HPLC methods for sample analysis, which have been developed and validated for the analysis of complex samples. However, no currently available commercial software allowed for the unsupervised analysis of such samples. Software to allow the processing of this data has now been developed and allows the molecular diversity of samples to be revealed without supervision. The identification of the detected molecules is not an easy process since it then requires having all the possible isomers for each molecule detected as standards for reference. To reduce the number of possibilities, a tool for predicting retention times was proposed. This was based on knowledge of the physico-chemical properties of known compounds to predict their theoretical retention time on the methods used.Lastly, this work presents the application of all the developments carried out during these three years on a set of samples of synthetic atmospheric aerosol analogues modelling exoplanets of the super-Earth and mini-Neptunes type. From the analysis of their soluble matter to the comparison between soluble, insoluble, and total phase, analysis by mass spectrometry indicates a great diversity and important differences between samples. This indicates processes of formation and evolution related to the composition of the reactive mixture. Finally, chromatographic analysis of one of these samples indicates multiple isomers, some of which may be labelled as biological molecules, potentially involved in the process of the origin of life

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Holste, Angela Sarah. "Développement des méthodes bio analytique pour l’analyse quantitative et qualitative des peptides et protéines marqués par le couplage de la chromatographie et la spectrométrie de masse." Thesis, Pau, 2014. http://www.theses.fr/2014PAUU3004/document.

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Abstract:

Cette thèse est le résultat d’une cotutelle entre l'Université de Pau et des Pays de l'Adour (UPPA) à Pau, en France et l'Université Christian Albrecht (CAU) à Kiel, en Allemagne. Dans le cadre de cette collaboration internationale, des méthodes bio-analytiques sont développées pour analyser quantitativement et qualitativement des peptides et protéines marquées par le couplage de la chromatographie avec la spectrométrie de masse. Les peptides et les digestats des protéines sont marquées selon un protocole optimisé par des lanthanides en utilisant des composés à base de DOTA. La séparation des peptides est réalisée par IP-RP-nanoHPLC. Des données complémentaires sont acquises par MALDI-MS pour l'identification et par ICP-MS pour la quantification. Dans ce contexte, une étape de pré-nettoyage en ligne est développée et mise en œuvre dans le protocole de séparation par nanoHPLC. Cette étape permet l'élimination efficace des réactifs appliqués en excès et ainsi la diminution du bruit de fond lié à la présence de métaux lors des analyses par ICP-MS. Les données obtenues sont alors plus facile à interpréter, la sensibilité des signaux des peptides n’étant par ailleurs pas modifié. L'extraction en phase solide (SPE) appliquée comme alternative entraîne des pertes importantes de peptides et peut être considérée comme inadaptée pour l'analyse quantitative. Des additifs pour éluants de nanoHPLC, tels que l'EDTA et le HFBA sont testés et jugés non bénéfiques pour l'analyse des échantillons peptidiques normaux. HFBA peut être reconsidéré pour une application spéciale sur des peptides très hydrophiles. Des peptides marqués sont développés. Leur utilisation en quantité connue pourrait permettre la quantification rapide et simple d'un échantillon de digestat à faible complexité. De plus, cet ensemble de peptides permet la superposition fiable des chromatogrammes, et ainsi de comparer des données complémentaires obtenues par l’analyse d’échantillon par ICP-MS et MALDI-MS. Expériences d'application avec le couplage laser femtoseconde avec ICP-MS sont effectuées sur des plaques métalliques de MALDI MS et montrent des résultats très prometteurs. Pour cela, les échantillons préalablement identifiés par MALDI-MS sont analysés par fsLA-ICP-MS. Les premières tentatives de quantification sur la plaque en acier modifiée sont satisfaisantes et donnent des résultats répondant aux attentes. L’optimisation des paramètres de MALDI-MS facilite l’identification des peptides This PhD thesis was a Cotutelle between the Université de Pau et des Pays de l’Adour (UPPA) in Pau, France and the Christian-Albrechts University (CAU) in Kiel, Germany. In the course of this international collaboration, bio-analytical methods for the quantitative and qualitative analysis of labelled peptides and proteins were developed, which were based on the hyphenation of chromatography with mass spectrometry. Peptides and protein digests were lanthanide labelled using DOTA-based compounds according to an optimised protocol. Separation on the peptide level was performed using IP-RP-nanoHPLC. Complementary data sets were acquired using MALDI-MS for identification and ICP-MS for quantification. In this context, an online precleaning step was developed and implemented in the nanoHPLC separation routine, which allowed for effective removal of excess reagents. This lead to lowered metal backgrounds during ICP-MS measurements and thus better data interpretability, while guarding peptide recovery at a maximum level. An alternative offline purification using solid phase extraction (SPE) resulted in important peptide losses and can be considered unsuitable for quantitative analysis. Additives to the nanoHPLC eluents, such as HFBA and EDTA were tested and not deemed beneficial for the analysis of normal peptide samples. HFBA can be reconsidered for special application on very hydrophilic peptide species. A set of labelled peptides was developed, which due to application of known quantities could be employed for quick and simple quantification of a low complexity digest sample. In addition this peptide set allowed for the reliable superposition of chromatograms, enabling sample comparability especially for complementary ICP-MS and MALDI-MS data. Experiments for application of fsLA-ICP-MS on MALDI-MS target plates were conducted and showed very promising results. For this purpose, samples that were already identified using MALDI-MS were supposed to be remeasured using fsLA-ICP-MS. First quantification attempts on the modified steel target plate were successful and in the range of expectance. Adjusted parameters for MALDI-MS allowed for proper peptide identifications

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Dubin, Guy-Marie. "Isolement et identification de métabolites secondaires phytotoxiques de Stereum hirsutum, un des champignons responsables d'une maladie de la vigne, l'esca." Poitiers, 1998. http://www.theses.fr/1998POIT2285.

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Abstract:

L'esca est l'une des maladies les plus destructives de la vigne, car, en l'absence de traitements (arsenite de sodium), les souches atteintes meurent, entrainant une diminution progressive de l'encepagement du vignoble. Cette maladie se manifeste sous deux formes, l'une lente, l'autre apoplexique. Cinq champignons sont infeodes au syndrome de l'esca : stereum hirsutum, phellinus punctatus, eutypa lata, phaeoacremonium aleophilum et phaeoacremonium chlamydosporum. Cette etude avait pour objectif d'isoler et d'identifier les composes phytotoxiques de stereum hirsutum. L'investigation de l'extrait brut de la culture de ce champignon sur milieu liquide a permis l'identification de huit metabolites secondaires dont la moitie sont de nouveaux produits. La plupart de ces composes possedent une ou deux unites acetyleniques, tels l'hirsutine et l'hirsutinol. Des bioessais realises sur plantules de tomate ont prouve la toxicite de plusieurs de ces metabolites et en particulier de l'hirsutine. Nous avons recherche ensuite la presence de ces metabolites toxiques par lc-esi-ms/ms dans le materiel vegetal. De tous les metabolites identifies seul, l'hirsutine a ete retrouvee dans le bois malade. Elle n'est presente ni dans le bois sain ni dans la seve infectee. Ce travail fournit une connaissance plus approfondie du metabolisme secondaire de stereum hirsutum. Des voies de biosyntheses de ses metabolites ont ete proposees. L'hirsutine semble impliquee dans le syndrome de l'esca.

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Gervais, Gaël. "Rôle des paramètres opératoires sur la fiabilité d’une analyse multi-résidus de micropolluants dans l’eau : extraction sur phase solide, séparation par chromatographie liquide à très haute pression et détection par spectrométrie de masse en tandem." Rennes 1, 2010. http://www.theses.fr/2010REN1S057.

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Abstract:

La présence de micropolluants est un aspect majeur pour évaluer la qualité des eaux. Depuis quelques années les méthodes analytiques combinant l’extraction sur phase solide et la séparation par chromatographie liquide couplée à la détection par spectrométrie de masse en tandem se sont imposées pour mesurer une large gamme de micropolluants. A partir d’un exemple d’analyse multi-résidus de pesticides et de composés perturbateurs endocriniens dans les eaux, il a été recherché l’influence des différents paramètres de l’extraction, de la séparation, de la détection et du retraitement des données sur la qualité de l’analyse (répétabilité, fiabilité, stabilité, reproductibilité…). Chacune des étapes de la méthode d’analyse ont été optimisées et tous les paramètres qui influencent le signal des substances détectées avec ce type d’appareillage ont été discutés. Une réflexion globale sur l’origine des variations des signaux observées et sur la pertinence des solutions qui peuvent être apportées a été menée. Des exemples d’applications en milieu réel et en analyse inter-laboratoire des protocoles développés pour la mesure des pesticides valideront les solutions adoptées. Les clés et les outils permettant de maîtriser les résultats d’analyse des micropolluants dans l’eau par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse sont ainsi présentés dans ce travail The occurrence of micropollutants is a major aspect in water quality assessment. For the last few years, analytical methods combining solid-phase extraction, liquid chromatography and tandem mass spectrometry has become the main technique for the analysis of a broad range of micropollutants. On the basis of some pesticides and endocrine disruptor compounds in water analysis, impacts of the parameters: extraction, separation, detection and data processing, on the analysis reliability (repeatability, accuracy, stability, reproducibility…) have been studied. Each step of the analytical method has been optimized and the parameters, affecting substance signals have been discussed. A global reflection upon the cause of signal variations and the possible answers to apply has been conducted. Proposed answers were validated by real matrix analysis and inter-laboratory studies. This work presents the tools and the key-points to ensure the results obtained by liquid chromatography/tandem mass spectrometry analysis

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Ayouni, Linda. "Développement de couplages chromatographie liquide -ICP-MS pour la spéciation de composés séléniés dans les compléments allimentaires." Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10259.

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Abstract:

Le sélénium est un élément à la fois toxique et essentiel. Ses effets dépendent de sa teneur et de la forme chimique sous laquelle il est absorbé. Depuis des études démontrant ses bienfaits, la consommation de compléments alimentaires au sélénium a augmenté. Nous avons procédé à la spéciation des espèces séléniées dans ces produits par couplage HPLC-ICP-MS. Sept espèces séléniées, organiques et inorganiques, ont été séparées par couplage de la chromatographie échangeuse d’anions à l’ICP-MS. Deux types de méthodes d’extraction ont été développés : l’extraction en une seule étape et séquentielle. Les composés organiques, plus biodisponibles, ont été retrouvés en majorité : la sélénométhionine principalement et, à des teneurs plus faibles la sélénométhylcystéine et l’acide méthaneséléninique qui ont des propriétés anticancéreuses. Parmi les espèces non identifiées, le MALDI-TOF-MS a permis de détecter des composés séléniés à m/z = 333 et m/z = 485 probablement des peptides Selenium is both a toxic and essential element for organism. Its effects depend on the dose and the chemical form absorbed. The intake of selenium nutritional supplements has become important since a clinical study showing selenium positive effects. We develop selenium speciation analysis in nutritional supplements by coupling HPLC with ICP-MS. Seven selenized species, inorganic and organic, have been separated by coupling anion exchange chromatography with ICP-MS. Two kinds of extraction methods have been developed : the one step and the sequential protocols. Organic compounds, known to be more bioavailable, have been found in majority. Selenomethionine was the principal one and, at weaker contents, selenomethylcysteine and methanseleninic acid, which have anti-cancer properties, were found too. Among unidentified species, MALDI-TOF-MS enabled to detect selenized compounds at m/z = 333 and m/z = 485 which are propably peptides

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Caumette, Guilhem. "Analyse de spéciation des métaux dans les produits lourds du pétrole par couplage LC-ICP MS (Chromatographie liquide – Spectromètre de masse à plasma induit)." Pau, 2009. http://www.theses.fr/2009PAUU3029.

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L’exploitation des pétroles lourds, devenue populaire en raison des pénuries en réserves d’énergie, est rendue difficile par la présence de métaux lourds comme le nickel ou le vanadium, qui affectent les procédés de raffinage. L’objectif de cette thèse était de développer de nouvelles méthodes analytiques afin d’étudier la distribution de ces métaux dans le pétrole et ses fractions. Les principaux développements sont : (i) une méthode sensible permettant l’analyse directe de matrices organiques en ICP MS (ii) un couplage ente la chromatographie liquide à perméation de gel avec l’ICP MS, et (iii) un couplage ente la chromatographie de phase normale et l’ICP MS qui permet l’analyse 2D perméation de gel – phase normale de la distribution des métaux dans des fractions pétrolières par ICP MS. Les méthodes développées ont été appliquées pour l’analyse de plusieurs pétroles et de leurs fractions The use of heavy petroleum, increasingly popular because of the shortage of energy supplies, is hampered by the presence of heavy metals, such as nickel and vanadium, which negatively affect refining processes. The objective of the thesis was to develop novel analytical methods able to study the metal distribution in petroleum, its fractions and related products. The principal developments include: (i) a high-throughput sensitive method for the analysis of organic matrices based on flow-injection total consumption micronebulisation ICP MS; (ii) a coupling of gel-permeation LC with ICP MS; and (iii) a coupling of normal phase LC – ICP MS allowing the 2D gel-permeation – normal phase characterization of the metal distribution by ICP MS. The methods developed were applied to the analysis of a number of crude oils and their fractions

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Barakat, Hala. "Effet de la stérilisation par éléctrons accélérés sur les COC et sur l'impact des interactions avec des molécules actives." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00936342.

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L'objectif de ce travail de thèse était d'étudier l'effet de la stérilisation par électrons accélérés sur les copolymères d'oléfines cycliques (COC), utilisés comme conditionnement de produits pharmaceutiques, ainsi que son impact sur les interactions avec des formulations pharmaceutiques. Grâce à la méthodologie analytique adoptée qui a fait appel à différentes techniques de caractérisation, telles que la chromatographie d'exclusion stérique, la chromatographie liquide haute performance à polarité de phases inversée, la spectroscopie infra rouge à transformée de Fourier, la microscopie à force atomique et les mesures d'angles de contact, nous avons pu mettre en évidence différents types de modifications dans le volume et sur la surface du matériau après stérilisation ainsi qu'après vieillissement. La modification principale du dans la masse du matériau, observée à la dose réglementaire de stérilisation (25 kGy), est la scission des chaînes du polymère, qui s'accompagne de la création de composés de faible masse molaire, donc de migrants potentiels risquant d'influencer la sécurité d'emploi des COC. En effet, certains de ces composés ont été retrouvés avec une concentration relativement importante dans les solutions de mise en contact avec les COC stérilisés, et notamment en solution aqueuse. Toutefois, l'étude préliminaire de toxicité a montré l'absence de cytotoxicité des extractibles obtenus à la dose de la stérilisation.Les modifications relatives à la surface des COC radio-stérilisés sont, quant à elles, de deux natures : physique avec une augmentation de la rugosité de surface et chimique avec la formation de produits d'oxydation polaires ; ces deux types de modifications conduisent à l'augmentation de la mouillabilité de surface. Cependant dans certains cas, notamment après vieillissement, ces modifications sont relativement faibles, même à des doses supérieures à celle préconisée pour la stérilisation, ce qui peut être corrélé à l'absence de l'effet de l'irradiation sur le comportement des COC vis-à-vis des solutions médicamenteuses. En effet, aucune variation de la sorption des principes actifs choisis n'a été montrée entre les COC irradiés et non irradiés vieillis.

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Hazotte, Aurélie. "La micro chromatographie liquide à haute température pour l'analyse rapide et hautement discriminante des lipides d'intérêt biologique." Paris 11, 2007. http://www.theses.fr/2007PA114818.

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Abstract:

La complexité structurale des lipides et leur absence de chromophores rendent difficiles leur séparation et leur détection en chromatographie liquide. L’objectif de cette thèse est le développement d’une technique d’analyse qui soit à la fois discriminante, sensible, rapide et efficace. La micro chromatographie liquide à haute température (µHTLC) couplée à un détecteur évaporatif à diffusion de la lumière (DEDL) adapté aux micros débits, a été mise en place sur carbone graphite poreux (PGC). Une étude cinétique a mis en évidence le réel gain d’efficacité obtenu en µHTLC à des températures d’analyses et des débits élevés. Cette technique permet de diminuer fortement les temps d’analyses et d’améliorer la forme des pics d’élution. Une échelle de force éluante a été établie en se basant sur l’étude de la sélectivité méthylène sur PGC : l’augmentation de la température modifie la force éluante des solvants organiques, permettant ainsi l’utilisation de solvants alcools, moins toxiques que ceux classiquement utilisés dans l’analyse des lipides. Une application a été réalisée sur des mélanges lipidiques complexes pour illustrer le potentiel de la µHTLC et du PGC dans la séparation de ces espèces moléculaires. D’autre part, la µHTLC a été couplée au DEDL, à la spectrométrie de masse et au détecteur à aérosol chargé (CAD), afin de positionner ce dernier en terme de performances par rapport aux deux autres et d’étudier les effets de la µHTLC sur la réponse des détecteurs. Enfin, concernant la modulation de la sélectivité par la température, une étude a été réalisée sur l’analyse des triglycérides en mode isotherme et gradient de température The structural complexity of lipids and their lack of chromophores make their separation and their detection difficult in liquid chromatography. The aim of this thesis is the development of an analysis technique which is at the same time discriminating, sensitive, fast and efficient. The micro high-temperature liquid chromatography (µHTLC) coupled with an evaporative light scattering detector (ELSD) adapted to micro flow rates, was implemented on porous graphitized carbon (PGC). A kinetic study has highlighted the real enhancement of efficiency obtained in µHTLC at elevated temperatures and flow rates. This technique allows to strongly decrease analysis times and to improve peaks shape. A scale of eluotropic strength was established on the basis of methylene selectivity on PGC: increasing emperatures modify the eluotropic strength of organic solvents which allows the use of alcohols solvents, less toxic that those classically used in lipids analysis. An application was realized on complex mixtures of lipids to illustrate the potential of the µHTLC and PGC in separation of these molecular species. In addition, µHTLC was coupled with DEDL, mass spectrometer and aerosol charged detector (CAD), in order to position this latter in term of performance compared to the two others detectors and to study effects of µHTLC on detectors response. Finally, concerning the modulation of the selectivity by temperature, a study was realized based on analysis of triacylglycerols in isotherm and temperature gradient mode

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Valette, Gilles. "Biotransformation et détermination du caractère lipophile de pronucléotides à visée antivirale : étude par chromatographie liquide hautes performances (C.L.H.P.) et couplage C.L.H.P./spectrométrie de masse." Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20027.

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Abstract:

Le manuscrit comporte six chapitres, une partie experimentale et des annexes qui comprennent les tires a part de 3 articles. L'introduction et le chapitre 1 situent le contexte de l'etude dans un essai de rationalisation de la conception d'antiviraux. Le chapitre 2 relate une compilation de donnees de la litterature relatives aux enzymes susceptibles de catalyser la biotransformation de pronucleotides. Le chapitre 3 decrit les outils d'analyse concus pour etudier ces biotransformations (couplage hplc/masse) ainsi que les outils mathematiques permettant de determiner les parametres cinetiques. Les trois chapitres suivants rapportent les resultats des etudes effectuees : comparaison de deux types de groupements protecteurs, influence de l'enantiomerie du nucleoside, identification de metabolites inconnus, parametres utiles au choix d'un animal pour experimentation in vivo ; comparaison de l'activite de phosphodiesterases selon leur provenance ; determination du coefficient de partage octanol-eau et de la solubilite aqueuse. Une discussion ouvre des perspectives pour ameliorer la conception de nouveaux medicaments antiviraux.

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Ambid, Lacombe Claire. "Contribution à l'étude des hémoglobines anormales : caractérisation rapide des variants de l'hémoglobine et miniaturisation de la détermination de structure primaire de la protéine." Paris 12, 1990. http://www.theses.fr/1990PA120056.

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Abstract:

Deux aspects de l'etude contemporaine de l'hemoglobine ont ete abordes: 1) nous avons mis au point une methode d'identification rapide et precise des differents variants deja decrits de l'hemoglobine par des techniques d'electrophoreses et de chromatographie liquide a haute performance. Nous avons pu mettre en evidence un comportement electrophoretique unique pour 92% des 206 variants testes. 2) nous avons cherche a miniaturiser les techniques d'etude de la structure primaire des proteines, l'hemoblogine etant alors consideree comme proteine modele. L'utilisation de la chromatographie liquide a haute performance, d'un microsequenceur proteique automatique et de la spectrometrie de masse ont ete des evenements clefs de l'evolution des techniques. Les quantites de materiel necessaire et les delais d'obtention d'un resultat par ces techniques utilisees isolement ou en association en font des outils d'analyse tout a faire competitifs en regard des techniques de biologie moleculaire

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Martinat-Caire, Christine. "Mise en évidence des métabolites urinaires de l'amopyroquine chez l'homme." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05P205.

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Benramdane, Larbi. "Dosage des espèces arseniées d'intérêt toxicologique (arsenic minéral et métabolites) par spectrométrie d'absorption atomique après séparation par extraction liquide-liquide ou par CLHP : application à un cas d'intoxication mortelle." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T210.

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Lanier, Caroline. "Caractérisation fongique, analytique et toxicologique de matrices végétales et de bioaérosols en milieu agricole." Caen, 2010. http://www.theses.fr/2010CAEN4069.

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Abstract:

Au cours des activités pratiquées en élevage bovin, la manipulation de matrices végétales telles que les tourteaux d’oléagineux et les ensilages de maïs est quotidienne. Dans 11 exploitations agricoles du Calvados, ces matrices végétales et les bioaérosols générés au cours de leur manipulation ont fait l’objet d’une caractérisation fongique (étude de la mycoflore), analytique (recherche multi-mycotoxines) et toxicologique (évaluation de la génotoxicité), ceci afin d’établir un premier descriptif de l’exposition des agriculteurs aux spores fongiques et aux mycotoxines. L’étude des tourteaux d’oléagineux montre une contamination majoritairement aspergillaire, dominée par Aspergillus fumigatus. La gliotoxine, une mycotoxine produite par cette espèce pathogène et présentant des effets immunosuppresseurs, a été régulièrement identifiée dans cette matrice. Lors du suivi d’activités agricoles, les bioaérosols collectés montrent des profils fongiques variés avec la présence récurrente d’Aspergillus fumigatus. Les tâches les plus génératrices de spores fongiques sont la préparation et la distribution de la ration alimentaire et le pressage du foin ou de la paille de blé. Les bioaérosols prélevés en stabulation se caractérisent par l'apparition d'une moisissure toxinogène uniquement observée dans l’air intérieur d’habitations : Stachybotrys chartarum. Les tourteaux d’oléagineux, les ensilages de maïs et les bioaérosols ont montré un impact faible en termes de mutagénicité et de génotoxicité. Cependant, certains isolats fongiques, collectés à partir des matrices végétales et des bioaérosols, se sont révélés capables de produire in vitro des composés fortement mutagènes Breeding activities involve the daily use of feedstuffs like oilseed cakes and corn silages. In order to assess the famers’ exposure to fungal spores and mycotoxins during handling, oilseed cakes, corn silages and bioaerosols were collected from 11 farms in Normandy (France). Molds and mycotoxins contents were monitored and the genotoxicity was evaluated. In oilseed cakes, Aspergillus fumigatus was the dominant species. Gliotoxin, an immunosuppressive mycotoxin, was associated with the presence of Aspergillus fumigatus isolates. Although various fungal profiles of bioaerosols were observed according to the agricultural activities, Aspergillus fumigatus was a recurrent strain. Cattle feeding, hay or straw baling generated the highest levels of airborne fungal spores. The bioaerosols collected in barn showed the presence of Stachybotrys chartarum, a toxigenic mold usually found in damp houses. Oilseed cakes, corn silages and bioaerosols exhibited low mutagenic and genotoxic properties. However, several fungal isolates collected from vegetal matrices and bioaerosols were able to produce in vitro compounds with a strong mutagenic activity

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Camont, Laurent. "Etude radiolytique du trans-resvératrol et d'un dérivé hydroxylé, le picéatannol : action des espèces réactives de l'oxygène en solution aqueuse et dans différents modèles lipidiques." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05P635.

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Abstract:

Le resvératrol (3,5,4’-trihydroxystilbène) est une molécule d’intérêt majeur depuis de nombreuses années de par sa contribution au «French Paradox » qui correspond à une faible prévalence des maladies cardio-vasculaires dans les populations du Sud de la France, malgré un régime riche en acides gras insaturés et en cholestérol. Le resvératrol se présente sous deux formes isomères, trans- et cis-, qui présentent des activités physico-chimiques et biologiques différentes. La forme trans- semble être plus efficace en termes d’activité. Il a été montré que le trans-resvératrol était un bon piégeur des radicaux hydroxyles produits par la réaction de Fenton, mais il est difficile de faire la part de l’activité chélatrice et de l’activité piégeur d’espèces réactives de l’oxygène (ERO). En outre, il semble être aussi capable de réagir avec des radicaux peroxyles intervenant dans la peroxydation lipidique. Dans la perspective de trouver des molécules possédant des capacités antioxydantes accrues, nous nous sommes également intéressés à l’un de ses dérivés, le picéatannol (trans-3,5,3’,4’-tétrahydroxystilbène). La première partie du travail a consisté à développer une méthode reposant sur la spectrophotométrie UV-visible nous permettant de déterminer le rapport trans-/cis-resvératrol en solution aqueuse. Nous avons ainsi proposé des formules mathématiques en vue de calculer ce rapport ce qui nous a permis pour nos études ultérieures de nousassurer que seul le trans-resvératrol, notre molécule d’étude, était présent en solution aqueuse. La suite du travail a permis d’étudier les propriétés antioxydantes du trans-resvératrol et du picéatannol, in vitro, vis-à-vis des radicaux HO·, O2·- et RO2· qui caractérisent les phénomènes de stress oxydant. Pour mener à bien ces travaux, nous avons utilisé la méthode de la radiolyse g (de l’eau ou de l’éthanol) qui permet de produire sélectivement et quantitativement ces espèces radicalaires. La seconde partie de notre travail a ainsi été consacrée à l’étude des radicaux HO· et/ou O2·- sur le trans-resvératrol. Si la réactivité des radicaux hydroxyles (HO·) s’est avérée être importante, il n’en a pas été de même de celle des radicaux superoxydes (O2·-) qui est restée faible. Dans le cas des radicaux HO·, nous avons identifié et caractérisé les produits formés, par chromatographie liquide haute performance couplée à la spectrométrie de masse (CLHP/SM). C’est ainsi que nous avons montré que le produit d’oxydation majoritaire du trans-resvératrol est l’acide 3,5-dihydroxybenzoïque, et que se forment en moindre quantité le picéatannol, le 3,5-dihydroxybenzaldéhyde, et le 4-hydroxybenzaldéhyde. Les mécanismes réactionnels correspondants ont été discutés. Le picéatannol semble présenter une réactivité similaire à celle du trans-resvératrol vis-à-vis des radicaux HO·/O2·-. La troisième partie de notre travail porte sur l’étude des radicaux peroxyles (RO2·) issus de différents systèmes modèles : radiolyse de l’éthanol, peroxydation de l’acide linoléique en milieu micellaire et peroxydation de lipoprotéines de faible densité humaines (LDL). Nous avons montré que dans le système des micelles d’acide linoléique et dans celui des LDL, le picéatannol est un meilleur protecteur vis-à-vis de la peroxydation lipidique que ne l’est le trans-resvératrol, probablement en relation avec la présence d’un groupement hydroxyle supplémentaire comparativement au resvératrol. L’interprétation des résultats fait appel à des réactions en compétition impliquant les radicaux peroxyles Resveratrol (3,5-4’-trihydroxystilbene) has been studied for a long time to explain the « French paradox » associated with a low incidence of cardiovascular diseases in the South of France, despite a diet relatively rich in saturated fats and cholesterol. Resveratrol occurs in both trans and cis isoforms, which may have different physico-chemical and biological effects. The trans- isoform seems to exhibit a greater activity. Trans-resveratrol was shown to be especially able to scavenge hydroxyl radicals produced by a Fenton reaction but it is difficult to distinguish between a chelating effect towards transition metals and a direct scavenging of reactive oxygen species (ROS). Furthermore, resveratrol seems also able to scavenge peroxyl radicals involved in lipid peroxidation. In order to find molecules with higher antioxidant effects, one derivative has been studied, called piceatannol (trans-3,5,3’,4’-tetrahydroxystilbene). The first part of our work was the development of a simple and reliable UV-visible spectrophotometric method to assess the trans-/cis-resveratrol ratio in aqueous solutions. Thus, we proposed formulae to calculate this ratio, which allowed us for our later studies to make sure that trans-resveratrol, our studied molecule, was the only molecule present in aqueous solutions. Next, we have studied the antioxidant properties of trans-resveratrol and piceatannol, in vitro, towards HO·, O2·- and RO2· radicals that contribute to oxidative stress phenomena. This has been achieved by using water gamma radiolysis (or ethanol gamma radiolysis) which allows to selectively and quantitatively produce these radical species. The second part of our work aimed at studying the reactivity of HO·and/or O2·- radicals on trans-resveratrol. It has been shown that HO· radicals initiate trans-resveratrol oxidation, whereas O2·- radicals react weakly with trans-resveratrol. We have characterized and identified the oxidation products by high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (HPLC/MS). It has been shown that the major oxidation product of trans-resveratrol is the 3,5-dihydroxybenzoic acid, whereas piceatannol, 3,5-dihydroxybenzaldehyde and 4-hydroxybenzaldehyde were produced in lower amounts. The mechanisms of the one-oxidation electron oxidation of trans-resveratrol by HO· radicals have been discussed. Piceatannol seems to exhibit a similar reactivity as that of trans-resveratrol towards HO·and O2·- radicals. The third part of our work has focused on the study of peroxyl radicals (RO2·) by means of three different models, i. E. , ethanol gamma radiolysis, peroxidation of linoleic acid micelles and peroxidation of low density human lipoproteins (LDL). We have demonstrated in micelles of linoleic acid and in LDL that piceatannol showed a higher ability to inhibit radiation-induced lipid peroxidation as compared to resveratrol, partly due to the presence of an additional hydroxyl group. These results could be explained by competitive reactions with peroxyl radicals

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Ballihaut, Guillaume. "Détection et identification de sélénoprotéines par électrophorèse sur gel associée aux spectrométries de masse atomique et moléculaire." Phd thesis, Université de Pau et des Pays de l'Adour, 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00656273.

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Abstract:

Le sélénium est un élément trace connu pour son caractère essentiel au développement de nombreux organismes vivants mais également pour ses effets bénéfiques sur la santé humaine. Les recherches effectuées ces cinq dernières années ont renforcé l'idée que ces propriétés seraient dues à la synthèse de sélénoprotéines chez les êtres vivants. Les méthodes classiques d'analyse protéomique ne sont pas adaptées à l'identification ciblée de ces sélénoprotéines très minoritaires. Les travaux de cette thèse ont consisté à développer des méthodes complémentaires plus spécifiques et sensibles en vue de leur détection et de leur identification. Un étalon protéique sélénié stable a été produit pour développer ces méthodes. Le couplage de l'ablation laser et de la spectrométrie de masse couplée à un plasma induit (LA-ICP-MS) a été mis en oeuvre pour la détection des sélénoprotéines après une séparation par électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE). Le dispositif d'ablation laser conventionnel a ici été amélioré avec un laser femtoseconde à balayage très rapide permettant une détection plus sensible des sélénoprotéines dans les échantillons biologiques. Une fois détectées, les sélénoprotéines ont été identifiées en spectrométrie de masse moléculaire. Pour cela les sélénopeptides issus de la digestion enzymatique des sélénoprotéines sont d'abord repérés en nanochromatographie couplée à l'ICP-MS puis séquencés en nanochromatographie couplée à la spectrométrie de masse en tandem à ionisation électrospray (nanoHPLC-ESI-MS/MS). La procédure en LA-ICP-MS développée a notamment permis la détection de nouvelles sélénoprotéines chez la bactérie Desulfococcus multivorans. La procédure d'identification a été validée sur deux sélénoprotéines purifiées thiorédoxine réductase et glutathione peroxydase carboxyméthylée. La méthodologie développée contribuera à l'identification de nouvelles sélénoprotéines pour une meilleure compréhension des rôles physiologiques de ces molécules chez de nombreux êtres vivants.

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Roy, Sandrine. "Analyse des bio-marqueurs de la maladie de Fabry par techniques séparatives couplées et spectrométrie de masse." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114841.

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Abstract:

La maladie de Fabry est une maladie orpheline de transmission récessive qui se caratérise par l'accumulation des certains glycosphingolipides (GSls) (le digalactosylcéramide, Ga2, et le globotriaosylcéramide, Gb3) suite à la mutation du gène codant pour l'α-galactosidase A. Différentes techniques ont été développées pour analyser les classes lipides et les espèces moléculaires de chaque classe. Tout d'abord, les principaux GSLs ont été séparés. Une technique de CLHP couplée à un detecteur évaporatif à diffusion de la lumière a permis de détecter le Gb3 contenu dans des sédiments urinaires de patients. Puis, nous avons analysés les différentes espèces moléculaires du Gb3 et du Ga2 dans des sédiments urinaires par spectrométrie de masse en tandem (MALDI Q-TOF et CHLP APPI MS-MS). Environ vingt espèces moléculaires ont été identifiées pour leGb3 et le Ga2. Enfin, ces lipides ont été analysés directement sur la surface de coupes de tissus. Des approches d'imagerie par spectrométrie de masse, comme le MALDI-TOF et TOF-SIMS ont été utilisées pour localiser ces GSLs sur des coupes de peau et de rein de patients atteints de la maladie de Fabry Fabry disease in an X-linked inborn error of neutral glycosphingolipids (GSLs) metabolism, caused by a deficiency of the lysomal α-galactosidase A, wich results in high levels of globotriaosylceramide (Gb3) and galabiosylceramide (Ga2). Different techniques are developed to analyse lipid classes and molecular species in each lipid class. First, we optimised the separation of four major neutral GSLs. An HPLC separation combined with evaporative light-scattering detection allowed the detection of urinary globotriaosylceramide in urinary sediments of patients. Second, we analysed the different molecular species of Gb3 and Ga2 in urinary sediments with tandem mass spectrometry (MALDI Q-TOF and HPLC APPI MS-MS). About twenty molecular species are identified for Gaé and Gb3. Third, these lipids were analysed directly on the surface of tissue sections. MALDI-TOF ond cluster-TOF-SIMS imaging approaches were used to obtain the localization of GSLs on skin and kidney sections of patients affected by the Fabry disease

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Aussenac, Jérôme. "Les nucléotides du vin de Champagne : isolement, identification et aspect sensoriel." Dijon, 2001. http://www.theses.fr/2001DIJOS013.

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Abstract:

Les objectifs de cette étude étaient de développer une méthodologie permettant d'identifier les nucléotides du vin de Champagne, de connaître leur évolution pendant le vieillissement au contact des levures et d'apprécier leur importance organoleptique. Ce travail a débuté par l'étude du matériel nucléique relargué par Saccharomyces cerevisiae au cours d'une autolyse à 30ʿC dans un vin modèle (11,5% d'éthanol, pH 3). Dans ces conditions, les nucléotides issus de la dégradation de l'ARN ont été libérés dès le premier jour d'autolyse et ont été ensuite hydrolysés en leur nucléoside respectif durant les sept jours suivants. A cette occasion, trois méthodes d'élution en CLHP sur phase inverse ont été mises au point pour identifier et quantifier les nucléotides ainsi que les nucléosides. Toutefois, en raison de la complexité du vin de Champagne, d'autres procédures ont dues êtres développées : d'une part, une méthode de purification, qui a permis d'isoler la fraction nucléotidique du vin, et d'autre part, le couplage de la spectrométrie de masse (source électrospray) avec la CLHP, qui a rendu possible l'identification des nucléotides. L'application de ces techniques à des vins de Champagne (conservés au contact des levures pendant des durées variant de 0 à 14 années) a permis de démontrer que les nucléotides issus de l'autolyse des levures résultaient uniquement de la dégradation de l'ARN. Il a également été découvert que la libération dans le vin des 5'-ribonucléotides précédait celle des isomères 3'. Enfin, parmi les nucléotides identifiés dans le champagne, nous avons calculé les seuils de perception de 5'-GMP, 5'-IMP et 5'-UMP. Les résultats ont démontré que ces composés n'intervenaient pas de manière individuelle dans la modification de la flaveur du vin de Champagne car les valeurs de seuils étaient plus de vingt fois supérieures aux concentrations présentes dans le vin.

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Alem, Fatima-Zahra. "Extraction and analysis by liquid chromatography coupled with mass spectrometry of Lawsonia inermis and the study of its anti-melanoma effect." Thesis, Bordeaux, 2021. http://www.theses.fr/2021BORD0044.

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Abstract:

Lawsonia inermis L. communément appelée Henné appartient à la famille des Lythraceae. Elle est connue pour son importance traditionnelle à la fois comme agent cosmétique et médicinal, en particulier dans les régions indigènes de l’Afrique du Nord, de l'Asie du Sud et des pays du Moyen-Orient. Les différentes parties de cet arbuste ; les feuilles, les tiges, les graines et les racines comportent différents constituants chimiques comme les naphtoquinones, les polyphénols, les flavonoïdes, les tanins, etc, qui ont des activités biologiques diverses.L’intérêt de cette plante méditerranéenne en plus de son utilisation cosmétique, c’est son activité biologique antimicrobienne, antiinflammatoire, anticancéreuse et plusieurs d’autres.Ce travail de recherche s’est intéressé particulièrement à l’étude de son effet anticancéreux de plus particulièrement son potentiel anti-mélanome métastatique vue son utilisation traditionnelle souvent comme traitement topique de la peau irritée.Ce travail de recherche a permis, en premier lieu, la mise au point d’un plan d’expérience pour l’optimisation du rendement global d’extraction des molécules actives à partir du Henné (Lawsonia inermis L.). En seconde étape, l’identification et la quantification des composés actifs par chromatographie liquide à haute performance couplé à la spectrométrie de masse. Une cartographie géographie des cultures du henné au sud du Maroc, utilisant l’analyse en composantes principales et basée sur la nature du climat de chaque région.Par la suite, l’effet de la plumbagin sur le mélanome métastatique a été étudié. L’étude de cette activité a été évaluée in-vitro sur des cellules murines et humaine respectivement B16F10 et SKMEL-28. La plumbagin s'est avérée inhiber de manière significative trois processus métastatiques importants : la migration, l'adhésion et l'invasion des cellules B16F10. Ces résultats ont été confirmés dans la lignée cellulaire humaine SK-MEL-28 Lawsonia inermis L. commonly called Henna belongs to the family Lythraceae. It is known for its traditional importance both as a cosmetic and medicinal agent, especially in the indigenous regions of North Africa, South Asia and Middle East countries. The different parts of this shrub; leaves, stems, seeds and roots have different chemical constituents such as naphthoquinones, polyphenols, flavonoids, tannins, etc, which have various biological activities.The interest of this Mediterranean plant, in addition to its cosmetic use, is its biological activity antimicrobial, anti-inflammatory, anticancer and many others.This research work has been particularly interested in studying its anticancerous effect and more particularly its potential anti-melanoma metastasis given its traditional use often as a topical treatment for irritated skin.This research work allowed, first of all, the development of an experimental plan for the optimization of the global yield of extraction of active molecules from Henna (Lawsonia inermis L.). In the second stage, the identification and quantification of active compounds by high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry. A geographical mapping of henna crops in southern Morocco, using principal component analysis and based on the nature of the climate of each region was carried out.Subsequently, the effect of plumbagin on metastatic melanoma was studied. The study of this activity was evaluated in-vitro on murine and human cells respectively B16F10 and SKMEL-28. Plumbagin was found to significantly inhibit three important metastatic processes: migration, adhesion and invasion of B16F10 cells. These results were confirmed in the human cell line SK-MEL-28

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Perchet, Geoffrey-Thibault Pinelli Eric Revel Jean-Claude. "Etude de bioremédiation de sédiments contaminés par des composés organiques nitrés persistants." Toulouse : INP Toulouse, 2008. http://ethesis.inp-toulouse.fr/archive/00000623.

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Berton, Thierry. "Evaluation de l'exposition du fœtus picard et de sa mère aux pesticides, et identification des principales voies d'exposition." Amiens, 2013. http://www.theses.fr/2013AMIED009.

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Abstract:

Les pesticides sont des contaminants chimiques utilisés dans l’agriculture dans l’industrie ou comme produits ménagers. Ils sont désormais présents dans l’ensemble des compartiments environnementaux et contaminent donc l’ensemble de la chaîne alimentaire jusqu’à l’homme. Plusieurs études menées sur la santé animale ou humaine ont mis en cause ces composés dans l’apparition de cancers, de troubles neurologiques ou de troubles sur la reproduction ou le développement. L’impact de ces composés sur le fœtus qui est dans une phase de développement et est donc très vulnérable, est désormais un sujet d’inquiétude majeur. Il est donc indispensable de disposer de données d’exposition et d’imprégnation du fœtus aux pesticides, ainsi que de mieux comprendre les mécanismes et les principales voies d’exposition de la population à ces composés. C’est dans ce contexte que ce projet MecoExpo s’est proposé de développer une méthode analytique permettant de caractériser l’imprégnation du fœtus aux pesticides, et de fournir ainsi les premières données d’occurrences françaises dans ce domaine. Cette stratégie s’est appuyée sur la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem, afin de mesurer simultanément 18 composés, pesticides parents et métabolites, dans des échantillons de cheveux maternels et de méconium (premières selles du nouveau-né), qui est un biomarqueur d’exposition relativement nouveau et encore peu utilisé à l’heure actuelle. Les deux matrices sélectionnées sont représentatives d’une grande fenêtre temporelle d’exposition puisqu’elles permettent de caractériser l’exposition du fœtus pendant les 6 derniers mois de la grossesse. La stratégie ainsi développée a été appliquée à la cohorte MecoExpo recrutée pendant l’année 2011 en Picardie (462 méconiums et 268 cheveux maternels). Les analyses ont permis d’identifier 4 principaux contaminants auxquels l’homme et le fœtus sont exposés en Picardie : deux métabolites issus de la famille des organophosphates (DMTP et DEP), ainsi que deux métabolites de la famille des carbamates (EU et ETU). Les concentrations moyennes mesurées peuvent être de plusieurs dizaines de ng. G-1 pour le DEP, jusqu’à plusieurs centaines de ng. G-1. Lors de ce projet, différentes informations comportementales ont également été recueillies sur le mode de vie des familles incluses dans cette étude, afin de rechercher les principales voies d’exposition du fœtus et de l’homme en général, à ce type de composés. Les concentrations mesurées dans les échantillons biologiques ont pu être corrélées avec des facteurs comportementaux comme l’alimentation ou l’exposition aux pesticides au domicile ou sur le lieu de travail. Les données générées lors de ce projet constituent aujourd’hui la première source d’information concernant l’imprégnation du fœtus aux pesticides en France.

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Perchet, Geoffrey-Thibault. "Étude de bioremédiation de sédiments contaminés par des composés organiques nitrés persistants." Toulouse, INPT, 2008. http://ethesis.inp-toulouse.fr/archive/00000623/.

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Abstract:

Pendant plusieurs décennies, des industries chimiques ont traité leurs effluents de synthèse en utilisant des systèmes de lagunage. La plupart du temps, les sédiments de ces lagunes sont constitués de molécules organiques de synthèse diverses et complexes. Compte tenu de la persistance des composés nitrés, ces derniers sont aujourd'hui à l'origine de la contamination potentielle des sols, des nappes phréatiques ainsi que des eaux de surface. Ce travail présente une étude de bioremédiation d'une boue issue d'une lagune ayant reçu des effluents de synthèse d'explosifs et d'herbicides durant plusieurs décennies. Les explosifs appartiennent principalement à la famille des nitramines (RDX et HMX) et des nitro-aromatiques (TNT) tandis que les herbicides appartiennent à la famille des dinitrophénols (Dinosèbe et Dinoterbe). Tout d'abord, une caractérisation physico chimique du sédiment a permis d'évaluer les propriétés de la boue à décontaminer (pH, teneurs en carbone, en azote, …) et d'apporter d'éventuels compléments nutritifs nécessaires à la croissance des microorganismes. Par la suite, une caractérisation microbiologique a permis d'identifier les espèces microbiennes présentes dans le sédiment et orienter ainsi les essais de bioremédiation. Ainsi des espèces répertoriées pour avoir un potentiel de dégradation (Leclercia adecarboxylata, Pseudomonas citronellolis et Pseudomonas putida) ont été identifiées. De plus, plusieurs nouvelles espèces ont été découvertes, dont les séquences ont été déposées sur Genebank. La mise au point d'un protocole d'extraction et d'analyse simultanées des explosifs et des herbicides ont permis d'évaluer leurs concentrations dans le sédiment et d'effectuer un suivi cinétique de ces composés sur différentes méthodes de bioremédiation. Ainsi, un premier essai de fermentation anaérobie a permis la disparition dans le réacteur de deux molécules de la famille des nitrophénols, le Dinosèbe et le Dinoterbe tandis que le RDX et le HMX n'ont pas été dégradés. Par ailleurs, des cultures pures de Leclercia adecarboxylata, Pseudomonas citronellolis et Pseudomonas putida ont révélé leur pouvoir de dégradation du DNTB en 5 jours. Un second procédé de réacteur mixte aéro-anaérobie a été mis au point dans le même objectif. En plus de favoriser l'alternance entre phase aérobie et anaérobie, ce réacteur a permis d'avoir une phase en anaérobie en lit fixé. L'utilisation de ce réacteur a permis de dégrader les nitrophénols et les nitramines après 105 jours de fonctionnement. L'identification des microorganismes dans le sédiment et dans les essais de bioremédiation a permis d'établir des corrélations entre les espèces bactériennes et leur rôle de dégradation de certains produits This work presents a bioremediation study of a sludge resulting from a lagoon having received explosive (Hexogen and Octogène) and herbicide (Dinoseb and Dinoterb) wastewater during several decades. First of all, a physico chemical characterization of the sludge made it possible to evaluate the properties of sludge to be decontaminated (pH, carbon %, nitrogen %. . . ). Thereafter, a microbiological characterization of the sludge let us to identify the microbial species present in the sediment (in particular Leclercia adecarboxylata, Pseudomonas citronellolis and Pseudomonas putida). A mixed process of aero-anaerobic reactor was developed and made it possible to degrade nitrophenols and nitramines after 105 days of study. Microorganisms identification in the sludge and in the bioremediation tests made it possible to establish correlations between the bacterial species and their role of degradation of some products

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Leriche, Emma-Dune. "Dendrimères polyamidoamines : synthèse, caractérisation structurale et étude de complexes non covalents polyamidoamines / ADN." Rouen, 2013. http://www.theses.fr/2013ROUES044.

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Abstract:

Ces travaux de thèse s’articulent autour de trois grands axes de recherche : snthèse et modification chimique des deux classes de PAMAMs : la synthèse des PAMAMs a été réalisée selon l’approche divergente de Tomalia. Les modifications chimiques des fonctions de surface ont impliqué le greffage d’acides aminés - phénylalanine, histidine et glycine- ou de groupements phényle, de telles modifications pouvant moduler leur bioactivité et biocompatibilité. Les PAMAMs synthétisés et modifiés ont été caractérisés par spectrométrie de masse (MS), spectrométrie de mobilité ionique couplée à la MS (IM-MS) ainsi que par résonance magnétique nucléaire. Etude des structures défectueuses des PAMAMs : la voie de synthèse choisie génère, outre les produits attendus, divers produits secondaires. La séparation, l’identification et la quantification de ces structures défectueuses ont été appréhendées par couplage de la MS avec diverses techniques séparatives dont l’électrophorèse capillaire, la chromatographie liquide à interaction hydrophile, la chromatographie sur couche mince et la spectrométrie de mobilité ionique. L’apport, la complémentarité et les limites de chaque approche sont discutés. Etude des complexes non-covalents PAMAM/ADN : les stœchiométries, stabilités, constantes de dissociation des complexes ainsi que l’affinité des ligands pour l’ADN ont été déterminées pour divers dendriplexes par ESI-MS et IM-MS. L’intérêt de l’IM-MS est ici démontré pour séparer, mettre en évidence les différentes espèces présentes dans les échantillons (dendriplexes, simple-brin, duplexe et quadruplexe d’ADN, etc…), diminuer la complexité des spectres et améliorer la qualité spectrale This thesis is composed of three main research areas: Synthesis and chemical modification of PAMAMs: PAMAMs were synthetized according to the divergent approach of Tomalia. In order to modulate their bioactivity and biocompatibility, chemical modifications of the surface end-groups were carried out by grafting amino acids - phenylalanine, histidine and glycine- or phenyl groups. Native and modified-PAMAMs were characterized by mass spectrometry (MS), ion mobility spectrometry coupled to MS (IM-MS) and nuclear magnetic resonance (NMR). Study of defective structures of PAMAMs: the divergent synthesis generated, in addition to the expected products, various byproducts that needed to be identified and characterized. The separation, identification and quantification of these defective structures were achieved by coupling MS with various separation techniques: capillary electrophoresis, hydrophilic interaction liquid chromatography, thin layer chromatography or the ion mobility spectrometry. The contribution, complementarity and limits of each approach are discussed. Study of non-covalent complexes PAMAM/DNA: the stoichiometries, stabilities, dissociation constants of complexes were determined by ESI-MS and IM-MS for various dendriplexes. IM-MS was found particularly useful to separate and highlight the different species present in the samples (dendriplexes, DNA duplex and quadruplex, single-stranded DNA, etc. . . ), reduce the complexity of the spectra and improve spectral quality

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Hmida, Dorra. "Recherche de conditions alternatives à l’utilisation de solvants chlorés en Chromatographie Liquide Non-Aqueuse à Polarité Inversée de Phases. Application à l’analyse des lipides présents dans les milieux complexes." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLS189/document.

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Abstract:

Déterminer la composition en triacylglycérols des huiles végétales est un défi important à relever aussi bien en biologie végétale que dans le domaine médical ou celui de l’industrie agro-alimentaire. La chromatographie en phase liquide à polarité inversée de phases en milieu non aqueux (NARP-LC) est la méthode la plus utilisée, avec cependant une utilisation récurrente de solvants chlorés. Le premier objectif de ce travail a été de proposer des conditions analytiques alternatives n’utilisant pas de solvants chlorés. Pour ce faire, nous avons établi le diagramme de force éluante sur phases stationnaires en C18 des phases mobiles binaires constituées d’acétonitrile comme solvant faible et de divers solvants forts (acétone, iso-propanol, acétate d’éthyle, butanol) à quatre températures différentes (25, 43, 63 et 85°C). La comparaison dans des conditions iso-éluantes de l’analyse de 9 huiles de graines contenant une large gamme de TAG nous a permis de montrer que le mélange MeCN/BuOH 74/26 à 25°C est le meilleur choix, en terme de sélectivité pour l’analyse des TAG. Ce qui répond à notre premier objectif. Dans un second temps, nous avons comparé le potentiel séparatif des phases stationnaires de nouvelle génération à petit diamètre de particules, partiellement ou totalement poreuses. L’optimisation des conditions chromatographiques nous a permis de décrire deux systèmes chromatographiques, très performants, en termes d’efficacité et de rapidité. Le premier permet la séparation de TAG contenant des acides gras polyinsaturés isomères de position en C18 : 3 et C18 : 2. L’identification de ces isomères particuliers a été réalisée grâce à la synthèse d’informations complémentaires, obtenues en GC/MS, LC/MS ainsi que l’utilisation de lois de rétention chromatographiques. En outre, ce travail nous a permis de proposer un tableau récapitulatif regroupant un très grand nombre de TAG, qui n’ont jamais été décrits à notre connaissance. Le second permet une analyse rapide de l’huile d’olive, en moins de 5 min, tout en respectant les consignes qualitatives imposées par l’organisme «Conseil Oléique International (COI)». Comparée aux méthodes officielles couramment utilisées, elle mérite d’être proposée comme méthode de référence pour le contrôle de qualité de l’appellation de ces huiles The determination of triacylglycerols in vegetable oils is an important challenge in plant biology, in the medical field, and in food industry. Nowadays, non-Aqueous Reversed Phase Liquid Chromatography (NARP-LC) using chlorinated solvents is commonly used for this purpose. The first objective of this work was to develop alternative analytical conditions that can avoid using chlorinated solvents. In a first step, by using C18 stationary phases, we have established the eluotropic solvent strength scale as a function of temperature of several binary mobile phases consisting of acetonitrile as weak solvent and various strong solvents including acetone, isopropanol, ethyl acetate, and butanol. The comparison of the results obtained under iso-eluotropic conditions for nine seed oils containing a wide range of TAG enabled us to show that the MeCN/BuOH (74/26, v/V) mixture operating at 25 °C are the best mobile phase conditions for TAG analysis, in terms of selectivity, thus avoiding the use of chlorinated solvents. In a second step, we compared the separation of TAGs on new generation of fully or partially porous stationary phase particles of small diameter. After optimizing the separating conditions, the obtained data allowed us to propose two highly efficient chromatographic systems. The first system enables the efficient separation of C18:3 and C18:2 positional isomers of C18 polyunsaturated fatty acids containing TAG. For the identification of these TAG isomers, it was necessary to combine the data obtained by GC-MS and LC -MS as well as the data obtained by the application of some chromatographic retention laws. Taken together, these results allowed us to provide a list containing a large number of TAG unknown to date. The second system allows rapid analysis of olive oil in less than 5 min. This system obeying the guidelines of the International Olive Council can be proposed as a candidate reference method for rapid quality control of olive oils

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Pailleux, Floriane. "Étude des tachykinines et de leurs dérivés peptidiques associés à la douleur neuropathique grâce à l'utilisation de modèles animaux et de la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01070204.

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Abstract:

La gestion de la douleur neuropathique reste un challenge en médecine, malgré le nombre de traitements actuellement disponible. L'expérimentation animale a généré beaucoup d'informations concernant la douleur, mais ces connaissances demeurent insuffisantes pour développer de nouveaux analgésiques plus efficaces tout en restant sécuritaires. La douleur est un symptôme clinique complexe avec de multiples origines, et les mécanismes de douleur centraux et périphériques dépendent de l'évolution de la pathologie. Il est donc essentiel d'investiguer plus profondément les mécanismes moléculaires responsables de l'initiation et du maintien de la douleur, afin de cibler de nouvelles voies de transmission de la nociception plus prometteuses pour soulager la neuropathie et développer de meilleures stratégies thérapeutiques. Ce projet s'est donc intéressé plus particulièrement à la famille des tachykinines issues du gène TAC1 (substance P, ses précurseurs et métabolites, et neurokinine A sont les peptides ciblés pour ce projet de recherche), une famille de neuropeptides qui joue un rôle critique dans la transmission nociceptive. Pour réaliser cette étude, nous avons d'abord développé une stratégie de quantification afin de quantifier les expressions des différents neuropeptides bioactifs cibles, par HPLCMS/ MS. Puisqu'il existe différentes stratégies de quantification des peptides par HPLCMS/ MS, une méthode analytique fiable et robuste était nécessaire pour répondre aux objectifs de recherche. Nous avons développé une méthode utilisant la quantification relative avec un étalon interne stable marqué isotopiquement. En effet, pour quantifier les neuropeptides d'intérêt de l'étude, c'est la stratégie qui s'est avérée la plus reproductible et précise. Suite à la mise au point de la stratégie de quantification, nous avons utilisé des modèles animaux, souvent nécessaires pour faire progresser la recherche scientifique sur la compréhension de la douleur

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Khalil, Ali. "Caractérisation de nouveaux polyphénols extraits de Sorghum." Strasbourg, 2010. http://www.theses.fr/2010STRA6193.

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Abstract:

Cette thèse porte sur la caractérisation structurale de nouveaux polyphénols présents dans le Sorghum. A partir d’un extrait, nous avons mis au point un protocole conduisant à leur fractionnement, à leur séparation et à leur détection. L’utilisation de techniques analytiques comme la chromatographie liquide haute performance (HPLC) couplée à la spectroscopie UV-visible et à la spectrométrie de masse (MS) nous a ainsi permis de détecter de nombreux flavonoïdes, dont certains sont connus mais dont la plupart ont des structures nouvelles. L’isolement par HPLC, puis l'identification par MS et RMN 1D et 2D ont permis de caractériser trois composés avec une structure rétrodihydrochalcone. De la même manière, une série de trois pigments phénoliques appartenant à la classe des pyrano-3-déoxyanthocyanidines a été structuralement caractérisée, ainsi qu’un hétéromère coloré à deux unités. Ces composés colorés ont comme unité de base l’apigéninidine, une 3-déoxyanthocyanidine spécifique du Sorghum. L’ensemble de ces polyphénols a été identifié pour la première fois non seulement dans le Sorghum, mais plus généralement dans le monde végétal. Sur la base des informations issues des fragments caractéristiques obtenus par MSn pour les flavonoïdes élucidés, et ensuite, à partir des fragments de composés inconnus obtenus par LC/MSn, il nous a été possible de proposer des structures précises pour neuf nouveaux flavonoïdes présents dans l’extrait de Sorghum. Par ailleurs, la détection d’une nouvelle série d’hétéromères de flavonoïdes de trois à six unités a pu être réalisée grâce à l’utilisation de la spectrométrie de masse par MALDI/TOF. La grande diversité des polyphénols dans le Sorghum et l’identification structurale de ces nouveaux flavonoïdes pourraient éventuellement servir de base pour une utilisation accrue du Sorghum dans les industries alimentaire, cosmétique et pharmaceutique This thesis is centred on the structural characterization of new polyphenols in Sorghum plant. From an extract, we have developed a protocol leading to their fractionation, separation and detection. The use of analytical techniques such as high performance liquid chromatography (HPLC) coupled with UV-Visible spectroscopy and with mass spectrometry (MS), allowed us to discern numerous flavonoids, most of them unknown. The isolation by HPLC, the identification by MS and RMN 1D and 2D allowed the characterisation of a series of retrodihydrochalcones. In the same way, a series of three phenolic pigments, belonging to the pyrano-3-deoxyanthocyanidins class, have being structurally characterized along with a two units coloured heteromer. These coloured compounds have as basic unit apigeninidin, a 3-deoxyanthocyanidin specific of the Sorghum plants. All these polyphenols have been identified for the first time in Sorghum and in plant in general. The information obtained from MSn fragmentation of identified compound, along with the data obtained from analysis of the Sorghum extract by LC/MSn, have allowed a precise structural determination for nine novel flavonoids. Moreover, the analysis by MALDI/TOF mass spectrometry has led to the detection of a new series of flavonoids heteromers. The wide diversity of polyphenols in Sorghum and the structural identification of new products could eventually lead to an improve use of Sorghum in food, cosmetic and pharmaceutical industries

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Piot, Jean-Marie. "Contribution à l'étude de la production et de la résolution d'un hydrolysat d'hémoglobine bovine : applications." Compiègne, 1989. http://www.theses.fr/1989COMPDE84.

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Abstract:

Ce travail, présenté sous la forme de publications, concerne, l'étude de la production et de la résolution d'un hydrolysat enzymatique d'hémoglobine bovine. La première partie décrit la préparation en batch d'un hydrolysat pepsique décoloré en utilisant soit de l'alumine, soit de la magnésie. Ensuite une production en continu, au stade pilote, d'un hydrolysat pepsique incolore et reproductible a été mise au point. L'hydrolyse enzymatique de l'hémoglobine est réalisée dans un réacteur à ultrafiltration équipé de membranes minérales. La reproductibilité de l'hydrolysat ainsi produit a été démontrée. La seconde partie du travail concerne l'étude analytique de l'hydrolysat peptidique. Des méthodes chromatographiques associant dans un premier temps la basse pression et la HPLC, puis, utilisant la HPLC seule, ont été mises en œuvre pour résoudre ces hydrolysats complexes. Ces méthodes ont permis d'obtenir des peptides purs. La spectrométrie de masse (FAB) et l'analyse d'amino-acides ont été ensuite utilisées pour caractériser et identifier n'importe quel peptide ainsi purifié. Enfin, un exemple d'application de l'hydrolysat, dans le domaine de la réalisation de milieux de culture pour la recherche, a été présenté This work, presented in publications form, concerns the study of production and resolution of an enzymatic hydrolysate from bovine haemoglobin. The first part describes the batch preparation of a peptic decolorized hydrolysate using either alumina or magnesia. Then a continuous production, at the pilot-plant scale, of a reproductible and decolorized peptic hydrolysate was perfected. Enzymatic hydrolysis of haemoglobin was performed in an ultrafiltration reactor equipped with mineral membranes. The reproductibility of the hydrolysate was demonstrated. The second part of this work concerns the analytical study of the peptidic hydrolysate. Chromatographic methods, first associating low pressure and HPLC, and then using HPLC alone, were performed in order to resolve these complex hydrolysates. These methods allowed us to obtain pure peptides. Mass spectrometry (FAB) and amino acid analysis were then performed in order to characterise and identify any purified peptide. Finally, an application of the hydrolysate, in the area of culture media for research, was presented

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Sabil, Samia. "Stratégies dans l'élaboration et la cyclisation de précurseurs de cyclodepsipeptides naturels de la famille des destruxines." Montpellier 2, 1990. http://www.theses.fr/1990MON20032.

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Abstract:

Le present travail concerne la mise au point d'une strategie dans l'elaboration et la cyclisation de precurseurs de cyclodepsipeptides naturels de la famille des destruxines. Cette strategie fait intervenir l'obtention d'un tetrapeptide pouvant servir de plateforme aux divers precurseurs souhaitables pour la synthese de ces cyclodepsipeptides. Les conditions de synthese de ce tetrapeptide ont ete realise par hplc, spectrometrie de masse et de rmn. A partir de ce tetrapeptide, deux des trois precurseurs possibles du modele choisi (la(d)lac-6 destruxine e) ont ete synthetises; si la cyclisation du premier n'a pu etre realisee avec succes, le second compose, ile-nme, val-nme ala-ala-(d)lac-pro, nous a conduit au produit cyclique attendu

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Dadi, Hala. "Analyse par spectrométrie de masse des tubulines et de l'hormone de croissance." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS582.

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Abstract:

Les tubulines sont des protéines impliquées dans des processus biologiques essentiels à la vie cellulaire. Elles sont polymodifiées en leurs extrémités C-terminales. Différentes techniques ont été utilisées pour caractériser les polymodifications des tubulines. Mais certaines difficultés persistent concernant l’indentification fine de plusieurs structures. Le couplage de spectrométrie de masse à la mobilité ionique représente une avancée technique plus pertinente pour la séparation d’isomères de structures. En effet, la mobilité ionique peut séparer des ions de même rapport m/z en fonction de leur conformation. Dans la première partie de cette thèse, une analyse par mobilité ionique et spectrométrie de masse en tandem a permis la séparation de deux peptides de synthèse mimant des peptides C-terminaux de tubuline α diglycylés. L’hormone de croissance (GH) est une hormone anabolique et un agent dopant pour les sportifs. La disponibilité de la hGH recombinante (rhGH) dans le marché noir a augmenté la fréquence du dopage à la GH. Les tests antidopage approuvés par l’agence mondiale d’antidopage sont confrontés à certaines limites. Dans la deuxième partie de ma thèse, des analyses comparatives de la hGH naturelle et la rhGH ont été réalisées par spectrométrie de masse couplée à la chromatographie liquide en phase inverse pour trouver une différence chimique entre la hGH naturelle et la rhGH. La hGH naturelle extraite des glandes pituitaires de cadavres est glycosylée alors que la rhGH n’est pas modifiée. De manière intéressante, cette glycosylation se trouve sur un peptide protéospécifique de la hGH. Ce travail ouvre une piste pour le développement d’une nouvelle méthodologie pour les tests anti-dopage à la GH The tubulins are proteins involved in cellular processes that are essential for cell life. The tubulins are polymodified at their C-terminal extremities. Different techniques have been used to characterize the polymodifications of tubulins. However, some challenges remain in the fine identification of some structures. In fact, mass spectrometry ion mobility can separate ions of the same m/z ratio depending on their conformations. In the first part of this thesis, an ion mobility mass spectrometry analysis allowed the separation of two synthetic peptides that mimic the structure of C-terminal peptides of biglycylated α-tubulins. In order to extrapolate this type of experiment to the C-terminal peptides purified from biological tubulins, we employed an analytical process to analyze these peptides from purified brain tubulins. Growth hormone (GH) is an anabolic hormone and a doping agent used by athletes. The availability of rhGH in the black-market has continuously increased because of doping in sports. The natural and the biosynthetic hGH have identical peptidic sequences. So far, the valid hGH anti-doping tests by the world antidoping agency are based on immunological recognition. However, Immunoassays have their own limitations. Therefore, the next generation analysis of GH has to be more specific and accurate. In the second part of this thesis, mass spectrometry coupled to reversed phase chromatography was used to find chemical differences between the pituitary hGH and the rhGH. The pituitary extracted hGH is glycosylated whereas the biotech product is sugar free. The present work represents an opening towards a novel methodology for a novel hGH anti-doping test

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Khoury, Spiro. "Aspects théoriques et pratiques de la quantification des classes lipidiques par usage des détecteurs universels et de la spectrométrie de masse." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015SACLS191.

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Abstract:

Le lipidome désigne la sous-fraction lipidique du métabolome d’une cellule, d’un tissu ou d’un organisme. Cependant, bien qu’appartenant au cadre général de la métabolomique, la lipidomique représente un champ d’investigation particulier en raison des spécificités fonctionnelles et métaboliques des lipides de même que de leurs propriétés physico-chimiques. L’analyse lipidomique représente un changement majeur d’échelle par rapport à l’analyse des lipides telle que pratiquée classiquement. L’objectif est ici d’atteindre l’échelle de l’espèce moléculaire lipidique en termes d’identification et de quantification afin de décrire l’ensemble des perturbations d’un réseau métabolique liées à un état physiologique ou pathologique. L’identification des classes et espèces repose sur principalement sur l’utilisation du couplage de la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. La quantification peut faire appel à la spectrométrie de masse quand la spécificité et des faibles limites de détection sont requises ou à l’utilisation de détecteurs « universels » ou détecteurs par nébulisation que sont le détecteur évaporatif à diffusion de la lumière (DEDL) ou le détecteur d’aérosol chargé (Corona®-CAD) quand l’objectif est de quantifier l’ensemble de la classe lipidique The lipidome means the lipid subfraction of a metabolome, of a cell, a tissue or an organism. Lipidomics represents a particular field of investigation because of the functional and metabolic specificities of lipids as well as their physico-chemical properties. Lipidomics analysis represents a major change of scale with respect to lipid analysis as practiced conventionally. The aim of this work is to reach across the lipid molecular species in terms of identification and quantification in order to describe all the perturbations of a metabolic network related to a physiological or pathological state. The identification of the classes and the specie is based mainly on the use of liquid chromatography coupled to mass spectrometry. Quantification may use mass spectrometry when the specificity and low detection limits are required or the use of "universal" detectors that are nebulized detectors:evaporative detector light scattering (ELSD) or charged aerosol detector (CAD-Corona®) when the aim is to quantify the total lipid classes

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Dubois, Véronique. "Préparation de peptides antimicrobiens à partir de l'hydrolyse enzymatique de deux protéines : l'hémoglobine bovine et l'α-lactalbumine bovine". Lille 1, 2006. https://ori-nuxeo.univ-lille1.fr/nuxeo/site/esupversions/5e3ef719-2eae-45e3-8aa5-e9c719abc31b.

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Abstract:

Vingt quatre peptides antimicrobiens ont été isolés par CLHP à partir d'un hydrolysat pepsique d'hémoglobine bovine à 3% de degré d'hydrolyse. Cinq peptides antimicrobiens : α 107141, α 107-136, α 133-141, α 137-141 et β 126-145 ont été purifiés en une seule étape de CLHP. Leurs CMI, effet hémolytique ainsi que quelques propriétés structurales ont pu être déterminés. L'amélioration des méthodes de préparation de ces peptides antimicrobiens a montré que: l'augmentation de la température d'incubation permettait d'augmenter les concentrations des peptides antimicrobiens, et que le pH d'incubation avait un effet sur la sélectivité de l'enzyme en favorisant les coupures en Cterminal de la Leucine lors de l'hydrolyse en conditions dénaturantes. En conditions natives, le pH 3,5 a permis l'obtention de peptides antimicrobiens absents lors de l'hydrolyse menée à pH 4,5. La mise en place d'un système biphasique eau/butan-2-ol a permis d'extraire sélectivement plusieurs peptides antimicrobiens. Un nouveau modèle d'étude a été mis en place à partir de l'α-Lactalbumine. Après avoir étudié différents paramètres d'hydrolyse, le choix s'est porté sur l'hydrolyse chymotrypsique de l'apoforme de l'α-Lactalbumine dans le tampon phosphate de sodium 100 mM pH 7,4 pour rechercher des peptides antimicrobiens. La population peptidique au cours de cette cinétique d'hydrolyse. A été établie par différentes techniques de spectrométrie de masse. Une activité antimicrobienne a été mise en évidence au sein de plusieurs hydrolysats chymotrypsique de l'α-Lactalbumine. Deux hydrolysats se sont montrés particulièrement actifs: l'hydrolysat de 30 minutes et celui de 12H.

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Klein, Marlène. "Identification et quantification de métabolites séléniés dans l’urine humaine." Pau, 2010. http://www.theses.fr/2010PAUU3034.

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Abstract:

La barrière entre l’aspect bénéfique du sélénium (Se) et son aspect toxique est étroite. Afin de mieux contrôler les apports de cet élément dans l’alimentation, de nombreux travaux s’intéressent à la compréhension de son métabolisme. Cette thèse présente le développement et l’optimisation de méthodes d’analyse des espèces séléniées dissoutes et volatiles présentes dans l’urine de sujets non supplémentés. Le couplage entre la chromatographie liquide et la spectrométrie de masse atomique précédé d’un prétraitement de l’échantillon par extraction sur phase solide a permis non seulement de confirmer la présence de métabolites séléniés précédemment détectés dans l’urine de sujets supplémentés mais également, de mettre en évidence des composés inconnus. Un de ces composés a été identifié par spectrométrie de masse moléculaire. Les couplages entre la chromatographie gazeuse et les spectrométries de masse atomique et moléculaire, précédés d’une micro-extraction sur phase solide ont été utilisés pour l’analyse des formes volatiles de Se. Ces méthodes ont permis de confirmer la présence de composés séléniés et mixtes Se/S dans les urines de sujets non supplémentés et, de définir des conditions de stockage permettant de préserver la spéciation originelle dans l’échantillon The concentration range between beneficial and toxic effects for selenium (Se) is very narrow. In order to monitor selenium intake and to improve knowledge of Se metabolism, studies on selenium species ingested and excreted are performed. This report presents the development and the optimization of speciation analysis of dissolved and volatile Se species in urine of non supplemented subjects by coupling liquid chromatography or gas chromatography to inductively coupled plasma mass spectrometry. In the case of dissolved species, solid phase extraction of the sample as sample pretreatment allowed us to confirm the presence of known selenium compounds and to highlight unknown selenium species. One of these new species was further identified by molecular mass spectrometry. The analysis of volatile selenium compounds was performed by gas chromatography coupled to ICP-MS after sample extraction by SPME. This method led to the identification of some selenium and mixed selenium/sulphur species in urine from non supplemented subjects and allowed us to define suitable storage conditions to maintain original speciation

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Boireau-Adamezyk, Elise. "Spectroscopies vibrationnelles (MCR et ATR-FTIR) et Chromatographie Liquide couplée à la Spectrométrie de Masse Haute Résolution (LC-HR-MS) : Outils d’investigation in vivo de l’impact du vieillissement cutané sur le Stratum Corneum aux niveaux tissulaire, supra-moléculaire et moléculaire." Thesis, Paris 11, 2015. http://www.theses.fr/2015PA112070/document.

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Abstract:

La peau est l’organe le plus étendu du corps humain. Doté d’une membrane biologique fine appelée la couche cornée, celle-ci le protège du desséchement et des agressions extérieures chimiques ou mécaniques auxquelles le corps humain doit faire face. Ce travail de thèse a consisté, dans un premier temps, à décrire via la littérature existante les effets de l’âge,dûs au vieillissement intrinsèque et extrinsèque,sur la physiologie cutanée du Stratum Corneum (SC).La partie expérimentale basée sur la microscopie vibrationnelle traitera des variations de la fonction barrière et de l’hydratation du SC lors du vieillissement chronologique et photo-vieillissement. D’autres méthodes ont également été utilisées comme la chromatographie liquide en phase normale couplée à la spectrométrie de masse haute résolution dotée d’une source APCI et d’un détecteur Orbitrap pour l’étude de la composition détaillée des lipides du SC ainsi que des méthodes plus globales comme la PIE ou la cornéométrie. Le caractère non invasif de toutes ces méthodes a permis de réaliser ces études in vivo. L’évolution de la fonction barrière a été étudiée aux niveaux tissulaire, moléculaire et supramoléculaire par micro-spectroscopie confocale Raman et spectroscopie Infrarouge. Puis le lien moléculaire a été fait entre le vieillissement intrinsèque et les céramides de la matrice lipidique intercornéocytaires par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse. Les molécules discriminantes entre population jeune et âgée ont été déterminées par analyse chimiométrique. L’évolution de l’hydratation cutanée aux niveaux tissulaire, moléculaire et supramoléculaire a également été l’objet d’une investigation approfondie. Les variations de la composition des NMF et la teneur en eau dans le SC lors du vieillissement cutané ont été mises en lumière en utilisant des descripteurs spectraux Raman. Les variations structurelles des molécules d’eau impactant l’organisation supramoléculaire des édifices lipidiques ont également été évaluées. Au cours du vieillissement, la fonction barrière cutanée et hydratation sont conservées Skin is the external surface defining the human body in space. Its outer-most layer is a thin biological membrane, called Stratum Corneum(SC), that protects the internal organs from desiccation as well as chemical or mechanical external aggressions. The present thesis aimsin a first step, to summarize the current knowledge regarding the effects of intrinsic and extrinsic aging on SCphysiology,based on available literature. The experimental part addresses the gaps in our understanding of the effects of chronological aging and photoaging on the SC barrier function and hydration, using traditional methods (such as trans epidermal water loss and skin conductance) as well as more advanced ones (vibrational spectroscopies, liquid chromatography in normal phase tandem mass spectrometry high resolution with an APCI source and an Orbitrap detector. As these methods are non-invasive, all studies have been carried out in vivo. The evolution of the barrier function has been studied at the tissular, molecular and supramolecular levels using confocal Raman micro-spectroscopy and infrared spectroscopy. Then the link between the intrinsic aging and the ceramides of the intercorneocytary lipid matrix has been studied by liquid chromatography tandem mass spectrometry. The discriminant molecules between young and old population have been identified by a chemometric analysis. The evolution of cutaneous hydration at the tissular, molecular and supramolecular level has also been investigated. The variations in the NMF composition and the SC water content have been studied by Raman spectral descriptors. Moreover, the structural variations of water molecules impacting the supramolecular organization of the lipid structures have been evaluated. Chronological aging and chronic exposure to environmental factors mildly affect SC barrier function and hydration levels. However, the processes controlling these properties are affected by aging in a site-dependent fashion

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Desbans, Coraline. "Analyse physico-chimique de mélange complexe d’oligosaccharides d’héparine, par couplage chromatographie liquide haute performance d’appariement d’ions en phase inverse et spectrométrie de masse de type hybride Q-TOF et FT-ICR : Compréhension des mécanismes d’interactions des oligosaccharides polysulfatés avec des dérivés ammonium." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066710.

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Tlili, Inès. "Développement analytique et suivi dans l’environnement des traces des antibiotiques à usage humain et vétérinaire." Thesis, Lille 1, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL10208.

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Abstract:

En raison de leur utilisation répandue dans les soins de santé humaine et animale, les antibiotiques et autres résidus de médicaments sont omniprésents dans l’environnement en général et le milieu aquatique particulièrement. Compte tenu de leurs impacts potentiels sur le fonctionnement de l'écosystème et la santé publique, la quantification des résidus de médicaments sur l'environnement est devenue une nécessité. Diverses techniques d'analyse se sont avérées être appropriées pour la détection fiable de tels composés. Cependant, la quantification peut être difficile car ces contaminants émergents sont présents à l’état de traces ou d'ultra-traces. Par conséquent, l'exactitude des analyses environnementales dépend à la fois de l'efficacité et de la robustesse de la méthode d'extraction et de quantification. Des procédures d’analyse de traces de ces contaminants émergents, ont été donc mise au point et des méthodes basées sur des analyses LC-MS/MS ont été développées. Pour les échantillons aqueux, l’extraction est menée sur phase solide (SPE, OASIS HLB). Les MLOQ sont comprises entre 0.2 et 3 ng/L. Pour la matrice solide, la procédure d’extraction à haute température et pression a été utilisée suivie d’une purification SPE. Afin d’évaluer le contexte de la pollution totale, la méthodologique analytique validée a été appliquée à des échantillons d’eaux potables et usées provenant de la France et de la Tunisie. Les résidus de médicament associés à la matière solide en suspension (MES) ont également été quantifiés pour compléter l’évaluation du degré de pollution environnementale Due to their widespread use in human and animal health care, antibiotics and other drug residues are ubiquitous in the environment in general and the aquatic environment in particular. Given their potential impacts on the functioning of the ecosystem and public health, the quantification of drug residues on the environment has become a necessity. Various assay techniques have been found to be suitable for the reliable detection of such compounds. However, quantification can be difficult because these emerging contaminants are present in the trace or ultra-trace state. Therefore, the accuracy of environmental analyzes depends on both the effectiveness and the robustness of the extraction and quantification method. Trace analysis procedures for these emerging contaminants were therefore developed and methods based on LC-MS / MS analyzes were also developed. For aqueous samples, extraction is carried out on solid phase (SPE, OASIS HLB). MLOQs range from 0.2 to 3 ng / L. For the solid matrix, the extraction procedure at high temperature and pressure was used followed by SPE purification. To assess the context of total pollution, the validated analytical methodology was applied to drinking and wastewater samples from France and Tunisia. Drug residues associated with suspended solid matter (SSM) were also quantified to complete the assessment of the degree of environmental pollution

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Yuan, Ye. "Mise au point d'un système chromatographique permettant de détecter en ligne la présence d’inhibiteurs de l’acétylcholinestérase et de comparer qualitativement leurs activités inhibitrices." Thesis, Strasbourg, 2019. http://www.theses.fr/2019STRAF016.

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Abstract:

Notre projet porte sur la mise au point d’un système chromatographique couplant la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP), un réacteur d’enzyme immobilisée (IMER) et une détection par spectrométrie de masse (SM) destiné à détecter les inhibiteurs de l’acétylcholinestérase (AChE) et de comparer leurs activités inhibitrices respectives. En utilisant ce couplage, les inhibiteurs d’AChE peuvent être séparés en ligne et leurs activités inhibitrices comparées directement par la simple mesure, par SM, de la surface des pics chromatographiques de l’acétylcholine (ACh) résiduelle, dont l’hydrolyse a été inhibée par les composés recherchés. 3 étalons connus d’inhibiteurs d’AChE (la galanthamine-GL, l’huperzine A-HuA et la tacrine-TA), ont été sélectionnés pour mettre au point les conditions analytiques de ce couplage original. Après avoir validé cette méthode avec les 3 étalons inhibiteurs de l’AChE, les extraits alcaloïdiques de différentes plantes ont été injectés dans le dispositif afin de cribler les nouveaux candidats inhibiteurs de l’AChE. Parmi les extraits injectés, il y des inhibiteurs d’AChE ont pu être découvert grâce à la présence des pics d’ACh. Pour compenser la dérive de la ligne de base chromatographique (m/z 146), due au gradient de phase organique (MeOH), une pompe de contre-gradient a été ajoutée à la sortie de la colonne de CLHP. Les résultats montrent que cet ajout d’une pompe de contre-gradient améliore considérablement l’horizontalité de la ligne de base mais relève celle-ci à des valeurs trop importantes et réduit d’autant la sensibilité du dispositif par rapport à la méthode chromatographique réalisée sans contre-gradient. Cette étude a permis la mise au point d’une méthode innovante en couplant la CLHP, un IMER et une détection par SM destinée au criblage les inhibiteurs de l’AChE. Grace à cette méthode, l’activité des différents inhibiteurs peut être facilement évaluée en mesurant l’aire des pics d’ACh correspondant aux composés recherchés. 3 inhibiteurs connus de l’AChE ont été choisis pour valider cette méthode. Cette dernière a permis de mettre clairement en évidence une relation dose-effet croissante qui lie des pics des inhibiteurs de l’ACh en fonction de leurs quantités injectées. Cette méthode CLHP-IMER-SM a été appliquée au criblage les inhibiteurs de l’AChE dans des extraits de plante. Grâce à cette méthode, un nouvel inhibiteur de l’AChE a été découvert dans l’extrait de Lycoris Radiata The project focuses on the development of a chromatographic system coupling high-performance liquid chromatography (HPLC), immobilized enzyme reactor (IMER) and mass spectrometry (MS) detection to detect acetylcholinesterase (AChE) inhibitors and compare their respective inhibitory activities. Using this device, the AChE inhibitors can be separated on-line and their inhibitory activities can be compared directly by the simple measurement of the chromatographic peaks of the residual acetylcholine (ACh) on MS whose hydrolysis was inhibited by the desired compounds. 3 wildly known standards of AChE inhibitors (Galanthamine-GL, Huperzine A-HuA and Tacrine-TA), were selected to develop the analytical conditions of this coupling. After having validated this method with the 3 AChE inhibiting standards, the alkaloid extracts of different plants were injected into the device in order to screen the new AChE inhibitor candidates. Among the injected extracts, some AChE inhibitors could be discovered thanks to the presence of ACh peaks. To compensate for the drift of the chromatographic baseline (m/z 146), due to the organic phase gradient (MeOH), a counter-gradient pump was added to the outlet of the HPLC column. The results show that this addition of a counter-gradient pump considerably improves the horizontality of the baseline but raises it to high values and reduces correspondingly the sensitivity of the device compared to the chromatographic method performed without counter-gradient. This study led to the development of an innovative method by coupling HPLC, IMER and MS detection for AChE inhibitor screening. Thanks to this method, the activity of the various inhibitors can be easily evaluated by measuring the area of the ACh peaks corresponding to the desired compounds. 3 known AChE inhibitors were chosen to validate this method and have clearly demonstrated a growing dose-response relationship that binds peaks of ACh according to the injected AChE inhibitor amounts. This method CLHP-IMER-SM was applied to screening for AChE inhibitors in plant extracts. Thanks to this method, a new AChE inhibitor has possibily been discovered in the Lycoris Radiata extract

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Habibi, Azza. "Analyse rapide des actinides par couplage chromatographie liquide/ICP-MS et de 90Sr par compteur proportionnel à gaz, dans les échantillons de l'environnement, en situation post-accidentelle." Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066610/document.

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Abstract:

La présente étude s’inscrit dans le contexte post-Fukushima et avait pour objectif la mise en place d’une méthode d’analyse pour identifier et quantifier, rapidement, des radionucléides émetteurs alpha et bêta, en situation post-accidentelle, dans les échantillons de l’environnement. La première étape de l’étude a permis de dresser la liste des radio-isotopes émetteurs alpha et bêta susceptibles d’être rejetés dans l’environnement suite à un accident nucléaire. Dans une deuxième étape, un protocole d’analyse rapide a été développé pour 17 radio-isotopes de U, Th, Pu, Am, Np et Sr. L’objectif était d’automatiser l’étape de séparation radiochimique et de la coupler à la mesure. La séparation est réalisée en employant des colonnes contenant les résines d’extraction, TEVA®, TRU et Sr. La mesure est effectuée par ICP-MS (spectrométrie de masse à plasma induit) et dans certains cas par compteur proportionnel à gaz pour quantifier le radiostrontium (89Sr et 90Sr). D’excellentes performances analytiques ont été obtenues, lors de la mesure hors-ligne, pour des échantillons d’eaux (robinet, rivière et mer) et solides (sols et filtres d’aérosols), après une minéralisation par four à micro-ondes ou par fusion alcaline suivie d’une co-précipitation avec Ca3(PO4)2. Ces performances sont caractérisées par des rendements de récupération compris entre 70 % et 100 % et des écarts types entre 5 % et 10 %. Le protocole de séparation a été ensuite automatisé et transposé en mode couplage en ligne avec l’ICP-MS. Les paramètres opératoires ont été optimisés avec un plan d’expériences, défini et exploité avec le logiciel Minitab®. Après optimisation du protocole, l’automatisation et le couplage de la séparation permettent de quantifier rapidement, en 1,5 h par échantillon, U, Th, Pu, Am, Np et Sr et de gagner un facteur 20 sur les limites de détection des radio-isotopes artificiels The present study follows the Fukushima power plant accident and aimed to develop an analytical method to achieve, during an emergency situation, a rapid identification and quantification of alpha and beta emitters in environmental samples. The first step of this study allowed us to list the alpha and beta emitters which can be released in the environment in case of a nuclear accident. The second step aimed towards the development of a rapid analysis method to quantify 17 radionuclides of U, Th, Pu, Am, Np and Sr. The main objective was the automation of the radiochemical separation step and its coupling for the measurement. The separation is performed using columns containing extraction resins, namely TEVA®, TRU and Sr. The measurement is performed using an ICP-MS (inductively coupled plasma mass spectrometry) and in some cases a gas proportional counter to quantify radiostrontium (89Sr and 90Sr). Excellent figures of merit were obtained, off line, with water (tap, river and sea water) and solid matrices (soil and aerosol filters), after a micro-wave digestion or an alkaline fusion dissolution followed by a Ca3(PO4)2 coprecipitation. The proposed analytical strategy showed yields between 70 % and 100 % and standard deviations between 5 % and 10 %. The newly developed separation method was then automated and coupled on-line to ICP-MS. The operating parameters were optimized using a design of experiments and the results were processed with Minitab®. The optimized automated separation coupled on-line to the ICP-MS allows the rapid quantification, in 1.5 h per sample, of U, Th, Pu, Am, Np and Sr with detection limits gain as high as 20 times for artificial radionuclides

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Chipeaux, Caroline. "Recherche et validation de biomarqueurs lipidiques du globule rouge par chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse. Application au diagnostic et au suivi thérapeutique de la maladie de Gaucher." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS419.

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Abstract:

Chez l’homme, les erreurs innées du métabolisme des lipides sont dues à des déficits enzymatiques, entraînant une accumulation intracellulaire de substrats lipidiques. Il en résulte un large éventail de symptômes tels que des atteintes viscérales, osseuses et dans certains cas neurologiques. En outre, de nombreux patients atteints de ce type de maladie présentent des anomalies hématologiques et vasculaires attribuées à des anomalies rhéologiques du globule rouge (GR). Ces observations ont conduit à l’hypothèse de l’existence d’un lien entre les propriétés anormales du GR et sa composition lipidique. Or actuellement, le profil lipidique du GR normal reste méconnu. Cependant, le diagnostic précoce de ces troubles est d’une importance capitale pour la prise en charge des patients, notamment dans les cas où un traitement correctif est disponible. La maladie de Gaucher (MG) de type 1, qui est une maladie lysosomale caractérisée par un déficit en β-glucocérébrosidase et pour laquelle un traitement enzymatique substitutif (ERT) est proposé, en est le meilleur exemple. D’où l’intérêt de disposer d’un outil simple et rapide de diagnostic de ce type de maladie.Dans le cas de la MG, le diagnostic repose encore sur la mise en évidence, laborieuse, du déficit enzymatique. Néanmoins, des travaux récents suggèrent que les anomalies rhéologiques du GR pourraient être dues à l’accumulation de quatre sphingolipides, le glucosylcéramide, la glucosylsphingosine, la sphingosine et la sphingosine-1-phosphate, qui seraient de bons candidats biomarqueurs. Or, les méthodes actuelles de dosage de ces sphingolipides nécessitent au moins deux étapes chromatographiques, avec pour chacune une étape longue et fastidieuse de préparation de l’échantillon, ce qui ne facilite guère une approche lipidomique de ce sujet. En outre, seul le glucosylcéramide a été dosé dans le GR tandis que les trois autres sphingolipides n’ont été dosés que dans le plasma. Ces candidats biomarqueurs restent donc à valider.Dans cette thèse, nous avons développé et validé une méthode simple et rapide, par UHPLC-MS/MS, de dosage simultané des 4 sphingolipides impliqués dans la MG. L’application de cette méthode à des GR provenant de patients atteints de la MG, en collaboration avec l’Institut National de Transfusion Sanguine et la société Shire, nous a permis de : 1- valider un biomarqueur parmi les quatre proposés et de montrer que les trois autres n’étaient pas suffisamment spécifiques ; 2- vérifier l’efficacité du traitement ERT actuellement proposé et 3- confirmer l’hypothèse de départ reliant les anomalies rhéologiques du GR à sa composition lipidique.De même, une étude systématique des conditions opératoires nous a permis de généraliser la méthode proposée à l’identification et au dosage de l’ensemble des sphingolipides présents dans un GR ainsi que des phospholipides, constituants majoritaires de sa membrane. Appliquée à la quantification simultanée d’une trentaine de sphingolipides et de phospholipides dans le GR normal et celui de la MG, cette méthode nous a permis de mettre en évidence l’implication d’autres lipides polaires dans la maladie de Gaucher, outre les 4 sphingolipides jusqu’alors proposés. De même, il est prévu de l’adapter à moyen terme pour le profilage total, par classe, de tous les lipides présents dans le GR.Enfin, nous avons évalué d’autres techniques de SM telles que la haute résolution et la mobilité ionique (TWIMS et DIMS) dans le but d’affiner la recherche de nouveaux biomarqueurs, notamment par l’identification des lipides isomères non discriminables par les techniques de MS conventionnelles. Grâce à une collaboration avec le Laboratoire de Chimie Physique (LCP, CNRS UMR 8000) nous avons montré la faisabilité de cette approche en séparant en DIMS deux isomères : la galactosylsphingosine 18:1 et la glucosylsphingosine 18:1 et nous poursuivons actuellement cette étude pour séparer d’autres couples d’isomères In humans, hereditary disorders of lipid metabolism are due to enzyme deficiencies, resulting in intracellular accumulation of lipid substrates. This results in a wide range of symptoms such as visceral, bone and in some cases neurological disorders. Furthermore, many patients suffering such diseases have hematologic and vascular symptoms attributed to red blood cell (RBC) rheological abnormalities. These observations led to a hypothesis linking RBC abnormal properties to its lipid composition. However, the lipid profile of normal RBC remains unknown to date. Early diagnosis of these conditions is of importance notably when a therapy is available. This is the case for Gaucher disease (GD) type 1, a lysosomal disorder characterized by β-glucocerebrosidase deficiency, where an enzyme replacement therapy (ERT) is proposed. Hence, the availability of a simple and rapid tool of diagnosis of such a disorder is of great importance, notably for a better patient care and monitoring.To the best of our knowledge, standard diagnosis procedures and monitoring of GD patients are still based on the tedious evaluation of enzyme deficiency. Nevertheless, recent works suggest that these rheological disorders may be due to the accumulation of four sphingolipids, glucosylceramide, glucosylsphingosine, sphingosine and sphingosine-1-phosphate, which could be considered as relevant biomarkers. However, most of current determination methods of these sphingolipids require at least two liquid chromatographic runs, each with a time-consuming sample preparation step that does not facilitate a lipidomic approach. In addition, only glucosylceramide was quantified in RBC while the other three sphingolipids were quantified only in plasma. Thus, these biomarker candidates remain to be validated.In this PhD, we describe a simple and rapid UHPLC-MS/MS method of simultaneous determination of the 4 sphingolipids involved in GD in both plasma and RBC. The application of this method to RBC from GD patients, in collaboration with the Institut National de Transfusion Sanguine and Shire (USA), allowed us: 1- to validate one biomarker among the four proposed candidates and to show that the other three candidates are not specific; 2- to check the efficiency of the proposed ERT and 3- to confirm the initial hypothesis linking the RBC rheological abnormalities to its lipid composition.Also, a systematic study of the operating conditions allowed us to generalize the proposed method to the determination of not only all the sphingolipids present in RBC but also all phospholipids, which are the major constituents of its membrane. The application of the later method to the simultaneous quantification of thirty sphingolipids and phospholipids in normal and GD RBCs, allowed us to validate it and to unravel the involvement of other candidate biomarkers of GD, different from the 4 previous sphingolipids. Providing appropriate modifications, this method is intended to be used for the profiling of all lipid classes in plasma and RBC. This is our main objective in the medium-term.Finally, we evaluated other modern MS techniques such as high resolution (HRMS) and ion mobility (TWIMS and DIMS) in order to refine the investigation of new biomarker candidates, including the separation of lipid isomers that cannot be discriminated by conventional MS techniques. Indeed, in collaboration with the Laboratoire de Chimie Physique (LCP, CNRS UMR 8000), we here show the feasibility of this approach by achieving the separation of two isomers, by the DIMS technique: galactosylsphingosine 18:1 and glucosylsphingosine 18:1, which cannot be separated by conventional methods. We are currently pursuing these investigations in order to separate other isomers

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Dissertations / Theses on the topic 'Spectroscopie de masse – Chromatographie en phase liquide à haute performance'

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