Dissertations / Theses: 'Spermatogenèse – effets des médicaments et substances chimiques'

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Ali, Muhammed Wali Sazan. "Effect of environmental factors on spermatogenesis. : Ex-vivo assessment of low level of cadmium or bisphenol A on testicular meiotic cells. : Dosage of metals in semen and in DNA of spermatozoa." Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM5050.

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Abstract:

Nous avons fait l'analyse des flux cytométrie nous a permis d'évaluer les changements dans le nombre de cellules de Sertoli et germinales par le cadmium. Seulement cellules germinales ont diminué dans le temps et de manière dose-dépendante. CS fragmenté, asynapsis et "mitée" CS ont été observés. Cd induit modifications ex-vivo en cours de la méiose. BPA changé chronologie de la méiose et active le point de contrôle de pachytène. Asynapsis et la fragmentation ont été induites. Noyaux leptotène anormaux, et zygotène asynapsed, observées. CS pulvérisé indiqué les anomalies de recombinaison et / ou d'appariement génétique.BPA modifie principales fonctions biologiques et les voies canoniques. Le nombre de gènes affectés par BPA a augmenté au cours du temps d'exposition. Changement Fold augmenté. Quatre fonctions altérées étaient le cancer, la mort cellulaire, le développement cellulaire et la cellule de cellulaire signalisation. Nous insistons sur le fait que les gènes liés à l'ADN interagi ORD réparation perturbés.la mesure des métaux dans le plasma séminal et de l'ADN du sperme des hommes normaux et anormaux. Nous avons utilisé ICP / MS pour mesurer la concentration de métal dans l'ADN de le sperme et plasma séminal. Tous les métaux analysés ont été détectés dans le plasma séminal. De l'ADN de sperme, As, Hg, Sb et Se, ont été non détecté par cette méthode. Aucune correlation des concentrations de métaux entre le plasma séminal et d'ADN de sperme ont été observées. Les concentrations de métaux, dans le sperme normaux et anormaux, visualiser une augmentation significative de Sb dans le plasma séminal et de Al dans l'ADN des spermatozoïdes dans le sperme de groupe anormal
We did Flow cytometric analysis enabled us to evaluate changes in the number of Sertoli cells and germ cells by cadmium. Only germ cells were decreased in a time and dose dependent manner. Fragmented SC, asynapsis and "motheaten" SC were observed. Cd induced ex-vivo modifications in meiotic process. BPA changed meiotic chronology and activates the pachytene checkpoint. Asynapsis and fragmentation were induced. Abnormal leptotene nuclei, and asynapsed zygotene, observed. Pulverized SC indicated the abnormalities of genetic recombination and/or pairing. Transcriptomic analysis showed that BPA alters main biological functions and canonical pathways. The number of genes affected by BPA increased over the exposure time. Fold change increased. Four impaired functions were cancer, cell death, cellular development and cell to cell signaling. We emphasize that interacted genes linked to DNA DSB repair disturbed.The other part of this thesis is including the measurement of metals in seminal plasma and in sperm DNA of normal and abnormal men. We used ICP/MS to measure the metal concentration in the seminal plasma and sperm DNA. All metals analyzed were detected in seminal plasma. In sperm DNA, As, Hg, Sb and Se, were undetected with this method. No correlation between the seminal plasma and sperm DNA metal concentrations were observed. The metal concentrations, in normal and abnormal semen, visualized a significant increase of Sb in the seminal plasma and of Al in the sperm DNA in the abnormal semen group

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Gallet, Sébastien. "Conception, synthèse et évaluation pharmacologique de thiadiazépines et oxathiazépines potentiellement anticancéreuses." Lille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003LIL2P002.

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Safi, Malak. "Nanoparticules inorganiques et nanofils magnétiques : toxicité et étude physique des interactions avec les cellules vivantes." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077029.

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Abstract:

Les nanoparticules inorganiques, grâce à leur taille nanométrique (< 100 nm) sont utilisées dans de nombreuses applications industrielles (cosmétiques, automobiles. . . ) et en biomédecine (traitements anti-cancéreux, vectorisation des médicaments. . . ). Cependant, une des grandes questions à ce jour concerne la toxicité de ces nanoparticules et leur impact sur la santé et l'environnement. L'évaluation de la toxicité s'avère néanmoins une tâche difficile, étant donné le grand nombre de paramètres en jeu dans ce problème dont la nature chimique des particules, leur taille, leur état de surface, leurs morphologies, leur mode d'internalisation et le type de cellules ou d'organes ciblés etc. L'objectif de notre travail est l'étude de la toxicité de ces nanoparticules et leurs interactions avec des cellules vivantes. Nous étudions plus particulièrement les effets de la nature, de l'enrobage et de la forme des nanoparticules d'oxydes de cérium (CeO₂), des oxydes de Fer (y-Fe₂O₃) et des matériaux nanostructurés faits à partir de celles-ci. Les tests de viabilité cellulaire ont montré que l'internalisation dans les cellules de mammifères et la toxicité dépendent de la nature de la particule, mais aussi de son enrobage. En effet, des polymères de faible poids moléculaire, adsorbés en surface des nanoparticules étaient plus stables que les ligands classiques et rendaient les nanomatériaux plus furtifs. De manière étonante, malgré leur forme et leur taille, les nanofils magnétiques synthétisés à partir des γ-Fe₂O₃ sont internalisés par les cellules. Leur biocompatibilité et leur biodégradabilité pourraient ouvrir la voie à des applications en biophysique et en nanomédecine
The inorganic nanoparticles, due to their size (< 100 nm) are being used in a wide range of applications including industries (cosmetics, automotive. . . ) and biomedicine (cancer therapy, drug delivery. . . ). However, the toxicity of these nanoparticles and their impact on the environment and possible health risks have not yet been fully evaluated. The evaluation of the toxicity appears to be difficult, considering the existence of different parameters such as the chemical composition of the nanoparticles, their size, their surface, their morphology, their uptake, and the type of targeted cells. The objective of our work is the study of the toxicity of these nanoparticles, and their interactions with living cells. We especially study the effects of the chemical composition, the coating, and the shape of the cerium oxide (CeO₂), iron oxide (y-Fe₂O₃), and the nanostructured materials synthesized from these particles. The cellular viability assays showed that the uptake inside mammalian cells and the toxicity depend on the nature of the particle, and also on the type of coating. Indeed, the polymers of weak molecular weight, adsorbed on the surface of the nanoparticles are more stable than the classic ligands and make them stealth. Surprisingly, despite their shape and length, the magnetic nanowires synthesized from y-Fe₂O₃), are taken up by the cells. Their biocompatibility and their biodegradability pave the way for applications in biophysics and nanomedicine

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Debbabi, Haythem. "Hypertension artérielle et microcirculation." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077085.

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Abstract:

De nombreux travaux relient aujourd'hui les complications de la maladie hypertensive à un défaut de perfusion des organes cibles. Ces anomalies sont essentiellement représentées par une raréfaction artériolo-capillaire, et une dysfonction endothéliale. La correction efficace du niveau de la pression artérielle reste un objectif essentiel qui pourrait cependant être complété par l'objectif de préserver ou de restaurer les perfusions tissulaires. Dans un premier travail nous avons validé la mesure de la réactivité de la circulation cutanée mesurée par vélocimétrie laser Doppler après administration locale de doses cumulatives d'acétylcholine par iontophorèse. La réponse cutanée à Pacetylcholine a été comparée à la dilatation flux-dépendante de l'artère humérale après hyperémie post-occlusive de la main. Nous avons retrouvé une très bonne corrélation entre réactivité cutanée et réponse humérale (r = 0. 910, PO. 000001). Nous avons ensuite démontré que la densité capillaire cutanée peut être normalisée par un traitement anti-hypertenseur. Il semble que, malgré un contrôle tensionnel équivalent, toutes les classes de médicaments n'ont pas le même effet sur la microcirculation. Nous avons notamment démontré la supériorité d'une association fixe périndopril-indapamide dans ce domaine. La relation de causalité entre l'atteinte microcirculatoire et l'hypertension artérielle reste toujours en suspens. Nous avon démontré que l'augmentation de la pression artérielle observée sous traitement par le bevacizumab, un anti-VEGF utilisé en carcinologie, pourrait être, au moins partiellement, expliquée par la raréfaction capillaire et la dysfonction endothéliale dans la microcirculation
Many works link the complications of the hypertensive disease to a defect of perfusion of the target organes. These anomalies are primarily represented by an arteriolo-capillary rarefaction, and an endothelial dysfonction. The effective adjustment of the level of blood pressure remains a crucial objective, although preserving or restoring the tissue perfusions should not be neglected. In the first work, we have validated the measurement of the reactivity of the cutaneous circulation using laser Doppler flowmetry after local deliverance of cumulative amounts of acetylcholine by iontophoresis. The cutaneous response to acetylcholine was compared with the flow mediated vasodilation of the brachial artery. We found a very significant corrélation between cutaneous reactivity and brachial answer (r = 0. 91, P<0. 000001). We then showed that the cutaneous capillary density rarefaction can be reversed by an antihypertensive treatment. Moreover, in spite of a blood pressure control equivalent, all the classes of drugs do not have the same effect on the microcirculation. We in particular showed the superiority of fixed association of périndopril-indapamide in this field. The relationship between the microcirculatory damage and arterial hypertension is not yet clearly established. We showed that the increase of the blood pressure under treatment by the bevacizumab, an anti-VEGF used in oncology, could be, at least partially, explained by capillary rarefaction and endothelial dysfonction in the microcirculation

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Lassurguère-Labbé, Julie. "Xénobiotiques, perturbateurs endocriniens et la fonction testiculaire." Rennes 1, 2003. http://www.theses.fr/2003REN1B060.

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Abstract:

A l'heure actuelle, un très grand intérêt est porté aux problèmes de dégradation de l'environnement et aux perturbations qu'ils occasionnent au niveau de la santé. En effet, de nombreux agents présents dans notre environnement sont connus pour être nocifs vis-à-vis de la fonction de reproduction mâle; parmi eux, les xénobiotiques font l'objet d'une attention particulière. Nous avons donc voulu dans un premier temps approfondir nos connaissances sur l'effet des xénobiotiques sur le testicule fœtal en utilisant un test de culture organotypique nous permettant de rechercher les cibles cellulaires, moléculaires et fonctionnelles du DES, de l'E2 et du BPA dans le testicule fœtal de rat. Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés aux mécanismes de défense anti-xénobiotique testiculaire en utilisant les souris invalidées pour les gènes Mdr1a, Mdr1b, Mrp1 et en faisant l'inventaire des transporteurs ABC dans le testicule, par une approche de PCR dégénérée.

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Khawaja, Naeem Raza Shaheen. "Role of mitochondrial ROS in patupilone induced apoptosis in neuroblastoma cells." Aix-Marseille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX22954.

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Abstract:

Les microtubules sont une des cibles les plus établies dans le traitement contre le cancer. Les taxanes, paclitaxel et docetaxel, stabilisent les microtubules et ont montré une activité clinique significative mais des facteurs tels que le développement d’une résistance à ces agents limite leur utilisation clinique. Les épothilones sont des macrolides, et ont une activité in vitro et in vivo sur différents types cellulaires résistants aux taxanes. Plusieurs épothilones dont l'ixabepilone, le patupilone, BMS-310705, KOS-862, KOS-1584, et ZK-EPO sont en développement clinique. Le patupilone (épothilone B, EPO906) est un composé très actif et est actuellement en essais cliniques de phase III pour les cancers péritonéaux et ovariens. Le patupilone a la propriété de facilement passer la barrière hématoméningée et n'est pas substrat pour la P-glycoprotéine. Il a également montré des effets antitumoraux dans le système nerveux central (CNS) dans les modèles animaux. En raison de ces avantages, nous avons réalisé pour la première fois une étude in vitro de cette drogue sur les cellules de neuroblastome (SK-N-SH) afin d’en étudier le mécanisme d’action qui s’avère plus efficace que le paclitaxel (IC50 = 1. 8 nM comparé à 100 nM). La perméabilisation de la membrane mitochondriale, les changements morphologiques et la libération du cytochrome c après traitement au patupilone sont des phénomènes précoces aboutissant à l'apoptose. Le patupilone augmente la génération des espèces réactives de l'oxygène (ROS) de façon précoce et spécifique des mitochondries. Nous avons également pu montrer une accumulation des protéines pro-apoptotiques Bim et p53 au niveau des mitochondries à 6 heures et 12 heures de traitement respectivement. En revanche, les niveaux de Bax et de Bcl-2 mitochondriaux n'ont pas été changés pendant le traitement. Le balayage de ROS ou délétion partielle de l'ADN mitochondrial a protégé de manière significative les cellules reflétant l'importance cruciale des ROS mitochondriaux pour l'activité du patupilone. L'accumulation des protéines pro-apoptotiques aux mitochondries, des changements morphologiques des mitochondries et le relargage du cytochrome c ont été nettement diminués quand les ROS mitochondriales ont été empêchées. Nos résultats montrent donc l'importance cruciale des ROS produits par les mitochondries pendant le traitement au patupilone pour le déclenchement de la voie intrinsèque en induisant l'accumulation de Bim aux mitochondries. Ces résultats pourraient expliquer l'activité supérieure du patupilone sur des cellules tumorales comparé au paclitaxel. En outre, le rôle important des mitochondries pour le déclenchement et l'exécution des signaux apoptotiques, déclenchés par le patupilone, est démêlé par nos données. Ces résultats suggèrent fortement de poursuivre la recherche clinique sur le patupilone contre le neuroblastome.

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Che, Thi Cam Ha. "Effets des cellules souches mésenchymateuses sur la cancérogenèse colique chimio-induite chez le rat." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077147.

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Abstract:

Le but de ce travail était de montrer dans un modèle animal l'innocuité d'un traitement de thérapie cellulaire pour la réparation des tissus dans un contexte de cancer. Nous avons choisi le modèle de carcinogénèse colique induite chez le rat par instillations intra-rectales de MNNG (N-Méthyl-N'-Nitro-N-Nitrosoguanidine). Dans le côlon, la MNNG induit une augmentation de l'épaisseur de la muqueuse ainsi que des taux de MCP-1, de l'IL-6 et de la fibronectine. Nous avons caractérisé les tumeurs obtenues (1) in vivo par endoscopie et tomographie à émission de positrons (TEP) (2) après autopsie par histologie immunohistologie et dosage ELIS A. Dans ce modèle, nous avons étudié l'influence de CSM-GFP (purifiées à partir de moelle osseuse de rats transgéniques pour la GFP) injectées par voie veineuse 4 et 6 semaines après le début du traitement à la MNNG. Les CSM-GFP ont été identifiées par immunofluorescence dans le chorion des côlons 6 jours après injection, mais pas aux temps tardifs. Trente-deux semaines après traitement à la MNNG, le nombre de rats porteurs de tumeurs était significativement plus faible dans le lot de rats injectés avec des CSM-GFP. Ce résultat était confirmé après 52 semaines. Par ailleurs, les CSM accentuent l'effet de la MNNG sur l'épaisseur du côlon, et en particulier de l'épithélium, suggérant une intensification du processus de réparation et de prolifération après agression par le carcinogène. Les résultats suggèrent une action précoce mais durable des CSM, Notre hypothèse est que les CSM favorisent le rétablissement d'un micro-environnement favorable après l'agression de la muqueuse par le carcinogène, freinant ainsi le processus de cancérisation
The aim of this work was to evaluate in an animal model the harmlessness of cell therapy for tissue repair in a cancer environment. For that purpose, we induced colon carcinogenesis by intrarectal instillations of MNNG (N-Methyl-N'-Nitro-N-Nitrosoguanidine) in the rat. The MNNG induce an increase in the thickness of colon mucosa, as well as of the content in MCP-1, IL-6 and flbronectin. We have characterized the tumors (1) in vivo by endoscopy and PET scanning, (2) after autopsy by histology and immunohistology and ELIS A assay of proteins. In this model, we studied the influence of mesenchymal stem cells (MSC) obtained from bone marrow of rats transgenic for fluorescent protein GFP. MSC were injected intraveinously 4 and 6 weeks after initiating MNNG treatment of rats. The MSC-GFP were traced by immunofluorescence and identified in the chorion of colonic epithelium 6 days after injection, but not thereafter. Thirty-two weeks after MNNG treatment, the number of rats bearing tumors was significatively lower in the MSC-treated batch, as compared to MNNG alone. This resuit was confirmed after 52 weeks. On the other hand, MSC injections increased the effect of MNNG on the thickness of mucosa, especially epithelium, suggesting an intensification of tissue repair process after the attack by the carcinogen. The results suggest an early but ongoing action of MSC. Our hypothesis is that MSC contribute to thé restoration of a favourable micro-environment after mucosa lesion by MNNG therefore slowing cancer development

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Lehraiki, Abdelali. "Effets et mécanismes d'action du Mono (2-ethylhexyl) phtalate (MEHP) sur le développement du testicule foetal et neonatal de souris in vitro." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077100.

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Abstract:

Les phtalates sont des produits chimiques largement distribués dans l'environnement. Plusieurs études expérimentales réalisées presque exclusivement chez le rat in utero ont montré une altération des fonctions testiculaires pendant la vie fœtale. Quelques études ont montré un effet délétère des phtalates sur le testicule fœtal humain in vitro mais les résultats sont différents de ceux obtenus chez le rat et les mécanismes d'action reprotoxiques de ces substances sont encore inconnus. Dans un premier temps, nous avons étudié l'effet des phtalates au cours du développement testiculaire fœtal murin Nous avons ainsi mis en évidence des fenêtres temporelles de sensibilité aux phtalates des cellules germinales et des cellules de Leydig. L'induction par le MEHP d'une importante apoptose pendant les phases de prolifération/apoptose des gonocytes, peut être rapprochée des effets observés chez le rat et l'humain. En revanche, les effets sur la stéroïdogenèse se sont révélés différents de ceux décrits dans ces deux espèces. Ainsi, les effets délétères induits par les phtalates sur les cellules germinales sont communs chez différentes espèces de mammifères alors que les effets sur la stéroïdogenèse dépendent de l'âge et de l'espèce. Nos travaux permettent également de penser que les effets des phtalates sur la stéroïdogenèse et sur les cellules germinales sont dissociés. Dans un deuxième temps, l'étude de souris invalidées pour les récepteurs ERo; ER/5 et AR (souris Tfm) a permis d'invalider l'hypothèse selon laquelle les phtalates agiraient directement ou indirectement via les voies œstrogénique ou androgénique. Finalement, nous avons mis en évidence pour la première fois une implication de la voie de l'acide rétinoïque dans les mécanismes d'apoptose des phtalates dans le testicule fœtal. Ce résultat ouvre de nouvelles perspectives pour la compréhension des mécanismes d'action des phtalates sur le testicule
Phthalate esters are a class of endocrine disrupting chemicals widely distributed in the environment. Numerous studies, conducted almost exclusively in the rat have shown that in utero exposure to phthalates results in deleterious effects on fetal testis. A few recent studies reported that phthalates also have deleterious effects on human fetal testis in vitro but the alterations described do not exactly match those in the rat and the mechanisms of action of these chemicals are largely unkhown. We defined specific periods of sensitivity of the mouse fetal testis to MEHP for steroidogenesis and gametogenesis. MEHP induced a severe and early decrease in the number of gonocytes due to massive apoptosis. Similar effects have recently been observed in vitro in the rat and in the human fetal testis. In contrast, effects on steroidogenesis were different from that described in both rat and human species. Therefore our work show that the deleterious effects of phthalates on steroidogenesis vary according to species and developmental stage, while the effects on gerrn cell development are similar in various mammalian species. Therefore, the effects bf phthalates on steroidogenesis are unrelated to those on gametogenesis. Using mouse deficient for ERo; ER/3 and AR (Tfm mouse) we defînitively eliminated the hypothesis of direct or indirect effect of MEHP on gametogenesis and steroidogenesis through antiandrogenic/estrogenic pathways. Finally, we demonstrated for the first time the implication of retinoic acid pathway in MEHP induced germ cells apoptosis. These results offer new clues to understand the mechanisms of action of phthalates in the fetal

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Dumoux, Maud. "Etudes des effets de la pénicilline G sur les infections à chlamydia trachomatis." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077009.

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Abstract:

Les chlamydioses sont à l'origine de trachome oculaire, de pneumopathies et de maladies sexuellement transmissibles. Les infections à Chlamydia trachomatis sont fréquemment asymptomatiques et présentent des formes persistantes. Cette combinaison est à l'origine de troubles graves tels que la cécité, la stérilité et les grossesses extra-utérines. Elle est également à l'origine de la dissémination de la bactérie dans l'organisme à l'origine de cardiopathie et d'arthrite faisant des chlamydioses un problème majeur de santé publique. Ces travaux démontrent que la Pénicilline G n'est pas un inducteur de persistance, comme décrit dans la littérature, mais un puissant inducteur de dégradation de Chlamydia, y compris des formes persistantes in vitro, ce dont sont incapables les antibiotiques actuels. Nous avons cherché à déterminer les mécanismes cellulaires de cette dégradation et avons mis en évidence l'inhibition par la Pénicilline G d'un facteur de virulence de Chlamydia. Ces travaux proposent de réintroduire la Pénicilline G dans l'antibiothérapie des chlamydioses particulièrement lorsque la persistance est attestée. Ce travail examine également les-relations hôte-pathogènes et tentent d'expliquer le paradoxe de Chlamydia
Chlamydia trachomatis infections lead to ocular trachoma, pneumopathy and sexually transmitted diseases. These infections are mostly not symptomatic and present persistent forms. This combination brings about severe consequences: cecity, sterility, extra uterine pregnancy. . . Moreover, it can allow bacterial dissemination in the organism leading to cardiopathy and arthritis. Consequently, chlamydiosis must be considered as a main public health problem. This work presents Penicillin G not as a persistence inducer, like literature proposes, but as a trigger of Chlamydia death, including persistent forms, which antibiotics in current use are unable to do. We tried to determine cellular mechanisms that sustain this degradation and demonstrate Penicillin G inhibition on a virulence factor secreted by Chlamydia. This study proposes to reintroduce Penicillin G in therapeutic protocols, especially in the persistence stages of the disease. This work also explores host-pathogen interactions and proposes a hypothesis to elucidate the Chlamydia paradox

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Khemiri, Hanan. "Caractérisation des effets périphériques et centraux de l'érythropoïétine sur la sensibilité chimique à l'O2 et au CO2." Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM5034.

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Abstract:

L'érythropoïétine (EPO) est une cytokine ayant un rôle important dans l'homéostasie de l'oxygène (O2). Lors d'une hypoxie chronique, l'EPO stimule la maturation des progéniteurs érythroïdes en globules rouges augmentant ainsi le transport de l'O2 aux tissus. Outre cet effet érythropoïétique, l'EPO module la réponse ventilatoire à l'hypoxie (RVH) par une action directe sur la commande centrale respiratoire (CCR) et les chémorécepteurs périphériques. Cet effet a été principalement caractérisé chez des souris mutantes surexprimant l'EPO. Cependant, plusieurs aspects de l'effet de l'EPO sur l'activité du réseau respiratoire demeurent inconnus. Nos résultats montrent qu'une application aigüe d'EPO diminue la dépression centrale hypoxique mesurée in vitro chez le nouveau-né. En revanche, elle n'affecte pas la RVH mesurée in vivo au cours du développement postnatal mais diminue la fréquence des apnées survenant en hypoxie sévère à 6% d'O2. Aussi, chez la souris adulte, l'administration chronique d'EPO et de C-EPO augmente la sensibilité des chémorécepteurs périphériques à l'O2 et maintient la ventilation durant la phase tardive de la RVH. Enfin, l'EPO diminue la sensibilité ventilatoire à l'hypercapnie grâce à des effets périphériques et centraux. L'ensemble de nos résultats montrent que l'EPO module la respiration et contribue à l'homéostasie de l'O2 et du CO2 grâce à ses effets plasmatiques et centraux. Elle représente un candidat à fort potentiel thérapeutique pour les pathologies respiratoires où la sensibilité chimique à l'O2 et au CO2 sont altérés telles que l'apnée du nouveau-né ou le mal chronique des montagnes
Erythropoietin (EPO) is a cytokine that plays a major role in O2 homeostasis. Upon chronic hypoxia, EPO stimulates the maturation of erythroid progenitors into red blood cells, contributing to increased O2 carrying to tissues. Besides this well-known erythropoietic effect, EPO also modulates the respiratory response to hypoxia by interacting with the central respiratory network in the brainstem and the peripheral chemoreceptors. This effect was mainly characterized in adult mutant mice that overexpress EPO. Several aspects regarding EPO's effect on breathing regulation remain unknown. Our results show that acute EPO treatment increases the O2 sensitivity of the central respiratory network in newborn mice in vitro. However, EPO does not impact the hypoxic ventilatory response to hypoxia in vivo, but decreases the apneic events during severe hypoxia in mice at postnatal day 7. In WT adults, chronic but not acute EPO and C-EPO treatment increases the O2 sensitivity by stimulating both peripheral chemoreceptor and central respiratory network. Finally, both cerebral and plasmatic EPO blunt the ventilatory response to increased CO2 levels in adult mice. Taken together, these results imply that EPO, by acting on the ventilatory system, plays a key role in the modulation of the chemical sensitivity to O2 and CO2

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Igoudjil, Anissa. "Effets métaboliques de la stavudine chez la souris : mise en évidence de mécanismes indépendants d'une altération de la chaîne respiratoire mitochondriale." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077226.

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Abstract:

Les analogues nucléosidiques (NUC) tels que la zidovudine (AZT) et la stavudine (d4T) sont des médicaments importants dans le traitement de l'infection par le VIH. Malheureusement, leur utilisation est assombrie par l'existence d'effets secondaires tels que stéatose hépatique, myopathie et lipodystrophie. Ces effets secondaires pourraient être liés à une toxicité mitochondriale des NUC, par inhibition de la réplication de l'ADN mitochondrial (ADNmt). Cependant, les NUC semblent également avoir des effets mitochondriaux et métaboliques indépendamment d'une depletion de l'ADNmt. Des travaux antérieurs réalisés au laboratoire ont montré de façon inattendue que l'administration de 100 mg/kg/j de d4T ou d'AZT chez la souris était susceptible de stimuler l'oxydation des acides gras (OAG) dans le foie. Mes travaux de thèse ont visé à poursuivre les investigations sur l'AZT et le d4T. Dans une 1ere étude, la stimulation de l'OAG hépatique était associée à une diminution de la masse grasse (MG) chez la souris. Dans une 2ème étude, nous avons observé qu'une augmentation de la-dose de d4T (500 mg/kg/j) pouvait aggraver la perte de MG, alors que l'OAG hépatique était inhibée. Nos résultats indiquent que les effets métaboliques des analogues de la thymidine sont complexes et peuvent être indépendants d'une depletion de l'ADNmt. Ils suggèrent aussi que la toxicité précoce du d4T est dépendante de la dose, et que la lipoatrophie pourrait avoir indirectement des effets délétères sur le foie. Nous espérons que nos travaux participeront à une meilleure compréhension de la physiopathologie des lipoatrophies et des stéatoses induites par les NUC
Nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NRTI) such as stavudine (d4T) and zidovudine (AZT) are antiretroviral drugs frequently used in HIV-infected patients. In some patients these drugs can unfortunately induce different side effects as hepatic steatosis, myopathy and lipodystrophy. Although it is widely acknowledged that NRTI are toxic for the mitochondrial DNA (mtDNA) and the respiratory chain, other mechanisms seem to be involved. Recently, we reported that 100 mg/kg/d of d4T and AZT (two thymidine analogs) stimulated fatty acid oxidation (PAO) in mouse liver. The aim of the investigations was to complete the study on AZT and d4T, in order to study the consequences of this PAO stimulation. In a first study, hepatic PAO stimulation was associated with fat wasting in mice treated with d4T and AZT 100mg/kg/j. In a second study, higher d4T doses (500 mg/kg/j) reduced further adiposity, while hepatic PAO was inhibited. Our results indicate that metabolic effects of thymidine analogues are difficult to understand and can be independent of mtDNA depletion. Moreover, d4T effects are dependent of the dose, and fat wasting could have indirect liver toxic effects. We hope that our results will help to prevent some NRTI-induced side effects and will prove useful to gain an insight into the physiopathology of these drug-induced mitochondrial diseases

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Picard, Nathalie. "Effet de l'exposition in utero au diazépam sur la fonction respiratoire et la réponse à l'hypoxie du rat nouveau-né : impact sur les systémes GABAergiques et adénosinergiques." Amiens, 2007. http://www.theses.fr/2007AMIED013.

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Abstract:

Le diazépam (DZP) est une benzodiazépine thérapeutique qui potentialise l’effet inhibiteur du GABA endogène lié aux récepteurs GABAA et qui peut être administrée à la femme enceinte. Le comportement du nouveau-né est perturbé par l’exposition in utero au DZP. Notre objectif a été d’apprécier les conséquences de cette exposition sur la fonction respiratoire et de déterminer les mécanismes impliqués chez le rat âgé de 0-2 jours. Des enregistrements in vivo par pléthysmographie chez l’animal non contraint montrent que l’exposition in utero au DZP modifie le pattern respiratoire en eupnée (diminution de la fréquence et augmentation du volume courant) mais pas la ventilation. Elle majore l’effet dépresseur de l’hypoxie alvéolaire sur le volume courant. Elle induit une augmentation de la fréquence de la commande respiratoire centrale, évaluée in vitro sur des préparations de tronc cérébral. Elle atténue les effets dépresseurs de l’hypoxie tissulaire sur cette commande. La PCR quantitative en temps réel et une étude pharmacologique montrent selon les régions une régulation négative de l’expression des gènes codant pour les sous-unités α1 et α2 du récepteur GABAA et/ou à une diminution de la réponse de ces récepteurs au DZP. De plus, l’expression des récepteurs de l’adénosine de type A1 et A2A et la réponse à leurs agonistes sont modifiées par l’exposition au DZP. Enfin, l’HPLC suggère une altération de la biosynthèse du glutamate et du GABA dans le tronc cérébral. Ces données montrent que l’exposition prénatale au diazépam affecte des systèmes de neuromodulation qui ont un rôle majeur dans le contrôle respiratoire et que ses conséquences à plus long terme méritent d’être évaluées
Diazepam (DZP) is a therapeutic benzodiazepine which acts at GABAA receptor to enhance the inhibitory action of endogenous GABA on neuronal function and may be prescribed to pregnant women. Neonatal behavior is altered by prenatal exposure to DZP. The purpose of the present work was to assess the consequences of prenatal DZP on breathing function and to analyze the mechanisms involved in newborn rats (P0-P2). In vivo plethysmographic recordings on unrestrained newborns showed that prenatal DZP altered the eupneic breathing pattern by reducing respiratory frequency and increasing tidal volume. Moreover, prenatal DZP enhanced the drop of tidal volume induced by sustained alveolar hypoxia. In vitro, prenatal DZP induced an acceleration of the rhythmic bursts generated by the central respiratory drive in isolated preparations. It attenuated the depressant effects of tissue hypoxia on this drive. Real time PCR and pharmacological analysis indicated that prenatal DZP may induce a down-regulation of the genes encoding for the α1 and α2 subunits of GABAA receptors or an attenuation of their response to the acute application of DZP, depending of the region studied. Furthermore, the levels of expression of genes encoding for A1 et A2A adenosine receptors, together with their response to specific agonists were altered by prenatal DZP. Finally, preliminary HPLC data suggested that glutamate and GABA biosynthesis may be deregulated in the pons and the medulla. In conclusion, prenatal diazepam affects the development of neurotransmitter and neuromodulator systems which are crucial for breathing control and its long-term consequences deserve further studies in mature animals

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Ragunathan, Nilusha. "Effet du cadmium sur la biotransformation d'amines aromatiques pré-cancérogènes par les arylamine N-acétyltransférases (NAT) : capproches moléculaires, cellulaires et in vivo." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077090.

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Abstract:

Le Cd est un polluant carcinogène considérable. L'exposition au Cd est généralement associée à l'exposition d'autres composés organiques cancérogènes tel que les hydrocarbones polycycliques aromatiques ou les aminés aromatiques. Les Arylamine N-acetyltransférases sont des enzymes du métabolisme des xénobiotiques (EMX) impliquées dans la biotransformation des aminés aromatiques cancérigènes tels que le 4-aminobiphenyl (4-ABP) et le 2-aminofluorène (2-AF). Une modulation de l'activité NAT a longtemps été associé au risque des cancers en relation avec l'exposition à certaines aminés aromatiques. Nos travaux démontrent que des doses physiologiques de Cd sont susceptibles d'altérer l'acétylation des aminés aromatiques cancérigènes tel que le 2-AF ou le 4-ABP dans les cellules épithéliales pulmonaires Clara. De plus l'activité NAT est égalemment altérée dans les tissus murins exposés au Cd. Ces résultats ont été confirmés par des expériences de pharmacocinétique du 2-AF. Les analyses biochimiques et cinétiques ont montré que la NAT1 est une cible rapidement et irréversiblement inhibé par le Cd (IC5o~0. 075 |uM, kf=5. 104 M"1, s"1) via la formation d'un adduit Cd avec la cystéine catalytique de l'enzyme. Au final, ces données suggèrent que le Cd peut altérer le métabolisme des aminés aromatiques cancérigènes via une inhibition des NATs, avec d'éventuelles implications toxicologiques
Cadmium (Cd) is a carcinogenic heavy metal of great environmental concern. Exposure to both Cd and carcinogenic organic compounds such as polycyclic aromatic hydrocarbons or aromatic amines is a common environmental problem with toxicological consequences. Arylamine 7V-acetyltransferases (NAT) are xenobiotic-metabolizing enzymes (XME) that play a key role in the biotransformation of aromatic amine carcinogens such as 4-aminobiphenyl (4-ABP) and 2-aminofluorene (2-AF). Changes in human NAT activity have been long associated with susceptibility to different cancers in relation with exposure to certain aromatic amines. We found that Cd at biologically-relevant concentrations impairs the NAT-dependent acetylation of carcinogenic aromatic amines such as 2-AF or 4-ABP in lung epithelial Clara cells. Moreover, NAT activity was found to be strongly impaired in the tissues of mice exposed to Cd. Accordingly, mice exposed to Cd and 2-AF displayed altered in vivo pharmacokinetics with a significant decrease in acetylated-2-AF in plasma thus confirming the functional impairment of NAT enzymes by Cd. Further kinetic and molecular experiments using recombinant enzyme showed that NAT1 was rapidly and irreversibly inhibited by Cd (IC5o~0. 075 |uM, kpS. LO4 M"1, s"1) through the formation of a Cd adduct with the active-site cysteine residue of the enzyme. Overall, our data suggest that Cd can aller the metabolism of carcinogenic aromatic amines through the impairment of the NAT-dependent pathway which may have important toxicological consequences

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Récalde, Alice. "Régulateurs de l'homéostasie des cellules médullaires et revascularisation post-ischémique." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077035.

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Abstract:

Ischémique. Leur mobilisation ainsi que leur recrutement dans le tissu ischémique constituent des étapes importantes de ce processus angiogénique. La dopamine (DA) et la norépinephrine (NE), catécholamines du système nerveux sympathique (SNS), contrôlent la mobilisation des cellules de la MO. Nous avons ainsi montré que le SNS est activé par l'ischémie et induit la mobilisation des cellules de la MO via l'activation de la eNOS. La DA et la NE augmentent le recrutement dans le tissu ischémique et la différenciation des cellules de la MO en cellules à phénotype inflammatoire et endothéliale, et activent la revascularisation post-ischémique. Le recrutement des cellules de la MO est dépendant, de l'effet chimioattractant de la protéine CXCL-12 dont l'isoforme γ présente une meilleure capacité d'accrochage aux heparan-sulfates (HS) de la matrice extracellulaire que les isoformes α et ß. Nous avons ainsi montré que l' isoforme γ est l'isoforme qui induit la plus efficacement le recrutement des cellules de la MO, que sa surexpression dans le tissu ischémique active plus efficacement la revascularisation post-ischémique et que son activité reste dépendante de l'expression de ses domaines d'accrochage aux HS. Ce processus de revascularisation est dépendant de la eNOS et est altéré dans un contexte diabétique. Nous avons alors analysé les effets d'une thérapie cellulaire basée sur la surexpression de la eNOS dans les cellules de MO chez les souris diabétiques. Ce type de thérapie restaure efficacement la revascularisation post-ischémique dans un contexte diabétique
Bone Marrow cells (BMC) play a crucial role in post-ischemic revascularization. Their mobilization and recruitment to ischemic tissue are important steps in this angiogenic proces. Dopamine (DA) and norepinephrin (NE), catechilamines of the sympathetic nervous System (SNS) have been shown to control BMC egress. We showed that SNS is activated by ischemia and promote BMC egress through eNOS activation. DA and NE increase BMC recruitment and differentiation into ischemic muscle in cells with endothelial and inflammatory phenotype and then activate post-ischemic revascularisation. BMC recruitment to ischemic tissue depend on the chimioattractiv effect of CXC-12 protein whose γ isoform had better capacity to bind heparan-sulfates (HS) of the extracellular matrix than α and ß isoforms. We showed that γ is the isoform that induce the best BMC recruitment and that its up regulation in ischemic tissue activate post-ischemic revascularisation with the best efficiency. However, its activity depends on HS bonding domain expression. This process of revascularization depend on eNOS which is affected during diabetes. We then analyzed the effect of cellular therapy based on eNOS up regulation in BMC in diabetic mice. This kind of therapy restore post-ischemic revascularization during diabetes

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Flusin, Olivier. "Stratégies de lutte contre des virus du risque infectieux : perspectives thérapeutiques contre les nairovirus et les orthopoxvirus." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077054.

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Abstract:

Les infections au virus de la fièvre hémorragique de Crimée-Congo (CCHFV) et au virus de la variole (VARV), pour lesquelles aucun traitement n'est officiellement approuvé, constituent un risque réel pour les armées françaises en raison de la spécificité de leurs missions. Les travaux réalisés au cours de cette thèse décrivent l'utilisation de deux stratégies permettant l'identification de molécules inhibant des protéines et complexes moléculaires impliqués dans la réplication du génome du nairovirus Hazara (HAZV) et de l'orthopoxvirus de la vaccine (VACV), modèles substitutifs respectifs du CCHFV et du VARV. Dans une première étude, l'activité de plusieurs petits ARN interférents (siRNAs) ciblant les ARN messagers du HAZV a été évaluée en culture cellulaire. Nous avons montré que deux siRNAs dirigés contre les transcrits codant la nucléoprotéine permettent de réduire de plus de 90% la production des particules virales infectieuses. L'association de la ribavirine avec chacun des deux siRNAs induit un effet synergique ou additif sur l'inhibition de la réplication du HAZV. Dans une seconde étude, nous avons adapté la technique du double hybride en levure afin de réaliser un criblage haut débit permettant la sélection de modulateurs d'interactions protéine-protéine au sein du complexe de réplication du VACV. Nous avons identifié deux molécules dont l'activité antivirale in vitro est spécifique des OPV. Leur action est associée également à une inhibition de la synthèse du génome viral. Nos travaux suggèrent que les deux stratégies mises en place peuvent contribuer au développement de futurs traitements contre les infections à nairovirus et à OPV
Crimean-Congo hemorrhagic fever virus (CCHFV) and smallpox virus (VARV) infections, for which there are no licensed antiviral therapeutics, represent a significant threat to the strategic and operational missions of the French armed forces. Here, we reported two strategies used to identity novel antiviral compounds that are specifically effective in inhibiting proteins and molecular complexes involved in genome replication of Hazara nairovirus (HAZV) and vaccinia orthopoxvirus (VACV), respective surrogate models of CCHFV and VARV. In a first study, the activity of small interfering RNA (siRNAs) targeting the HAZV mRNA was evaluated in cell culture. We were able to identify two siRNAs directed against the transcripts encoding the nucleoprotein that reduced the production of infectious HAZV particles by over 90%. The combination of ribavirin with siRNAs induced an additive, or synergistic, effect on HAZV replication inhibition. In a second study, we adapted the yeast two-hybrid technique in order to perform a high throughput screening for the selection of protein-protein interaction modulators within the VACV replication complex. We identified two molecules that specifically inhibit orthopoxvirus (OPV) replication in vitro. Furthermore, we showed that both compounds interfere with the VACV genome synthesis. The initial results of this work indicate the potential of these two strategies to be applied for the development of future treatments against nairovirus and OPV infections

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Burckle, Céline. "Le Récepteur de la prorénine/rénine-RR/ATP6AP2 : données de biologie cellulaire : poids moléculaire, topologie, localisation subcellulaire : approche fonctionnelle." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077227.

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Abstract:

In vivo, la fonction du récepteur de la rénine (RR/ATP6AP2) n'est pas connue. Des résultats divergents concernant sa localisation sub-cellulaire fragilisent l'hypothèse d'un récepteur de surface. Ainsi, nous avons repris la question de la localisation cellulaire du RR/ATP6AP2 endogène. Afin d'étudier la fonction de RR/ATP6AP2 in vivo, nous avons transitoirement supprimer son expression chez le poisson zèbre, et avons généré des rats surexprimant RR/ATP6AP2 dans les cellules musculaires lisses. Nos résultats suggèrent une double fonction pour RR/ATP6AP2, reflétant une possible divergence au cours de l'évolution. La partie C-terminale de la protéine, correspondant au fragment "m 8-9", est très conservée chez les vertébrés et les invertébrés. Ce domaine "ancestral" pourrait être responsable des anomalies du développement précoce observé chez le poisson zèbre et suspecté chez la souris. Cette fonction est clairement indépendante de celle du SRA et pourrait être lié à la fonction de pompe H+ATPase vacuolaire. Le domaine N-terminal de protéine pourrait avoir acquis la capacité de lier la rénine chez les vertébrés
The function of RR/ATP6AP2, described as a new receptor for prorenin/renin, is elusive in vivo. Controversies concerning its subcellular localization are confusing considering the proposed function of vascular cell surface receptor. Here, we readdressed the question of the sub cellular localization of RR/ATP6AP2, focusing on the detection of the endogenous protein. Then we used animal models of gene invalidation and gene overexpression to approach the in vivo function of RR/ATP6AP2. Our results underline that RR/ATP6AP2 might have a dual function possibly reflecting an evolutionary divergence. The RR/ATP6AP2 C-terminal part of the protein, corresponding to the m8-9 fragment, is highly conserved in vertebrates and invertebrates. This "ancestral" domain might account for the early developmental defect observed in zebrafish and suspected in mouse. This function is clearly not related to the renin angiotensin System, and might be linked to the vacuolar H+-ATPase. The N-terminal part of the protein might have acquire a prorenin/renin binding capacity in vertebrates

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Nguyen, Thu Thuy. "Developpement de la matrice d'information de Fisher pour des modèles non linéaires à effets mixtes : application à la pharmacocinétique des antibiotiques et l'impact sur l'émergence de la résistance." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077029.

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Abstract:

Les modèles non linéaires à effets mixtes (MNLEM) permettent d'analyser les données longitudinales, par exemple dans les études pharmacocinétique/pharmacodynamique, avec peu de prélèvements par patient. Une méthode pour planifier ces études est d'utiliser la matrice d'information de Fisher (MF) attendue, approximée par linéarisation. Nous avons étendu MF pour prendre en compte la variabilité intra-sujet et les covariables discrètes dans les essais en crossover. Ces développements ont été évalués par simulation, implémentés dans le logiciel PFIM, dédiée à l'évaluation et l'optimisation des protocoles. Nous avons utilisé PFIM pour planifier une étude en crossover, montrant l'absence d'interaction d'un composant sur la pharmacocinétique de l'amoxicilline. Nous avons ensuite proposé et évalué par simulations une alternative pour évaluer la MF, basée sur la quadrature de Gauss et l'intégration stochastique. Cette approche donne des prédictions plus correctes que la linéarisation mais elle est coûteuse en temps de calcul ; son utilisation n'est alors adaptée que pour des MNLEM avec peu d'effets aléatoires. Nous avons aussi étudié l'émergence de la résistance des entérobactéries aux fluoroquinolones dans la flore intestinale. Dans un essai chez le porc, nous avons montré, d'abord par l'approche non-compartimentale, une corrélation entre les concentrations fécales de la ciprofloxacine et les comptes de bactéries résistantes. Nous avons également développé un modèle mécanistique pour mieux caractériser la cinétique des entérobactéries. A notre connaissance, c'est la première modélisation in vivo pour étudier la résistance bactérienne aux fluoroquinolones dans la flore intestinale
Nonlinear mixed effect models (NLMEM) can be used to analyse longitudinal data in patients, for example in pharmacokinetic/pharmacodynamic studies, with fewer samples than the classical non-compartmental approach. A method for designing these studies is to use the Fisher information matrix (MF), approximated by first order linearization of the model. We extended this expression of MF to take into account the within subject variability and the discrete covariates. These developments were evaluated by simulations, implemented in PFIM 3. 2 dedicated to design evaluation and optimisation. We also applied PFIM to design a crossover study, showing absence of interaction of a compound on the pharmacokinetic of amoxicillin. We also proposed and evaluated by simulations an alternative approach to compute MF without linearization, based on Gaussian quadrature and stochastic integration. This approach gave more correct predictions than linearization when the model becomes very nonlinear but it is very time consuming; consequently its use is limited to NLMEM with only few random effects. Next, we studied the expansion of résistance to fluoroquinolones in intestinal flora. In a trial in piglets, we found, by non-compartmental approach, a significant correlation between fecal concentrations of ciprofloxacin and counts of resistant enterobacteria. Then we developed a mechanistic model to more precisely characterize the pharmacokinetic of fecal ciprofloxacin as well as the kinetics of susceptible and resistant enterobacteria. To our knowledge, this is the first in vivo modelling to study the bacterial résistance to fluoroquinolones in intestinal flora

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El, Khoury Diala. "Etude du mécanisme d'action antitumorale du pseudopeptide HB-19 qui cible la nucléoline de surface." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077041.

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Abstract:

La nucléoline est une des protéines majeures du nucléole, mais elle est également présente à la surface des cellules où elle joue le rôle de récepteur pour différents ligands impliqués dans la prolifération cellulaire, la différentiation, l'adhésion et l'angiogénèse suggérant ainsi qu'elle représente une cible prometteuse pour le développement d'une thérapie anticancéreuse. Par des études in vitro et in vivo, nous avons démontré que l'on pouvait interférer avec la croissance tumorale et l'angiogénèse en ciblant la nucléoline de surface avec le pseudopeptide HB-19, un antagoniste spécifique qui fixe le domaine RGG situé à l'extrémité C-terminale de la nucléoline. Contrairement à la nucléoline du noyau, nous avons démontré que la nucléoline présente à la surface et dans le cytosol est une protéine constamment induite dans les cellules tumorales et endothéliales,avec une demi-vie de l'ARN messager et de la protéine de 90 et 45 minutes, respectivement. Nos travaux mettent en évidence que la nucléoline de surface est exclusivement N-glycosylée et que sa glycosylation est nécessaire à son expression à la surface cellulaire où elle peut être impliquée dans l'activation de voies de signalisation intracellulaire, en promouvant l'entrée d'ions calcium dans les cellules. Nos données démontrent qu'HB-19 est un puissant agent potentiel anticancéreux qui exerce une action différentielle et spécifique selon le type des cellules tumorales. De plus, elles démontrent l'intérêt que représente la nucléoline de surface comme cible à prendre en considération pour une nouvelle approche thérapeutique anticancéreuse
Nucleolin is one of the major proteins of the nucleolus but it is also expressed at the cell surface where it serves as a binding protein for several ligands implicated in cell proliferation, differentiation, adhesion and angiogenesis; thus suggesting that it may serve as an interesting target for cancer therapy. By using a specific antagonist that binds the C-terminal of nucleolin, the HB-19 pseudopeptide, we show that the growth of tumor cells and angiogenesis are suppressed in various in vitro and in vivo experimental models. Unlike the nuclear nucleolin, we show for the first time that surface-nucleolin is a de novo synthesized protein, which is constantly induced in tumor and endothelial cells, with a half life of 90 and 45 minutes respectively for the mRNA and protein. We also show that that surface nucleolin is exclusively N-glycosylated and that its N-glycosylation is a requirement for its expression on the cell surface where it can induce signalling pathways via inducing calcium entry into the cells. Our results show that HB-19 represents a unique multi-action drug that exerts a differential and specific action according to tumor cell type. Moreover, we show thé relevance of considering surface nucleoline for innovative cancer therapy

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Phan, Duy An. "Impact du NO inhalé sur les progéniteurs neuraux chez le rat nouveau né." Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077206.

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Abstract:

Cette thèse montre pour la première fois qu'un traitement couramment utilisé en unités de soins intensifs néonataux, le NOi, est capable d'induire une neuroprotection dans un modèle de lésions diffuse de la substance blanche d'origine anté-périnatale. Le NOi est associé à une augmentation significative de la prolifération de progéniteurs neuraux viables et qui se différencient préférentiellement en cellules oligodendrocytaires. Ces travaux donnent des bases physiologiques et mécanistiques de l'effet neuroprotecteur observé expérimentalement avec l'exposition au NOi. Les phénomènes hémodynamiques et/ou cellulaires responsables de ce phénomène sont en cours d'exploration
This thesis shows for the first time a treatment commonly used in neonatal intensive care units, iNO is capable of inducing neuroprotection in a model of diffuse lesions in the white matter of ante- perinatal origin. INO is associated with a significant increase in the proliferation of neural progenitors and viable which preferentially differentiate into oligodendrocyte cells. These works provide physiological and mechanistic basis of the neuroprotective effect experimentally observed with exposure to iNO. Hemodynamic phenomena and / or cellular responsible for this are being explored

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Lansiaux, Pauline. "Mécanismes d'action moléculaires de l'hydroxycarbamide dans les cellules endothéliales dans le contexte de la drépanocytose." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077209.

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Abstract:

L'hydroxycarbamide (HC) est le seul médicament ayant montré une action bénéfique chez les patients drépanocytaires en diminuant la fréquence des crises vaso-occlusives. Il est maintenant reconnu que l'HC possède d'autres cibles cellulaires que les globules rouges et notre équipe se focalise sur son action dans les cellules endothéliales vasculaires (CEV). Elle a ainsi montré que l'HC augmentait l'expression de nombreuses molécules inflammatoires et diminuait l'expression de la molécule d'adhérence VCAM-1 et du vaso-constricteur ET-1. L'objectif de cette thèse était dans un premier temps d'identifier de nouvelles molécules d'adhérence cibles de l'HC et dans un second temps de rechercher les intermédiaires moléculaires à l'origine de son action. Nous avons ainsi montré qu'en plus de VCAM-1, l'expression de TSP-1, de vWF'et de PECAM-1 était diminuée par l'HC dans les CEV. Guidés par nos données transcriptomiques, nous avons ensuite testé l'implication des facteurs de transcription GATA comme intermédiaires moléculaires à l'HC dans les CEV. Les résultats montrent que L'HC diminue l'expression de GATA-2 et GATA-6, et que cette répression est en partie à l'origine de l'action de l'HC sur VCAM-1, PECAM-1 et vWF. Enfin, nous avons démontré que la voie NO-GCs-GMPc était un intermédiaire de la réponse à l'HC d'IL-8, de PECAM-1 et de vWF. La compréhension du mécanisme d'action de l'HC est indispensable pour identifier de nouvelles cibles thérapeutiques plus spécifiques et plus sures. Nous démontrons ici l'implication des facteurs GATA et de la voie NO-GCs-GMPc dans la modulation par l'HC de plusieurs molécules engagées dans la physiopathologie de la drépanocytose
Hydroxycarbamide (HC) is the only effective drug by reducing vaso-occlusive crisis in sicle cell disease patients. It is now admitted that HC acts on additional target cells than red cells and our team focuses on its mechanism of action in vascular endothelial cells (VEC). We showed that HC increases the expression of mimerons inflammatory molecules and decreases the expression of the adhesion molecule VCAM-1 and the vasoconstrictor ET-1. The aim of this thesis is: firstly to identify new adhesion molecules targeted by HC and secondly to find out molecular intermediates controlling HC action. We found that besides VCAM-1, the expression of TSP-1, vWF and PECAM-1 was decreased by HC in VEC. Guided by our transcriptomic data, we tested the involvement of GATA transcription factors as molecular intermediates of HC action in VEC. Results show that HC reduces the expression of GATA-2 and GATA-6, and that this decrease is partly responsible of VCAM-1, PECAM-1 and vWF response to HC. Finally, we found that NO-sGC-cGMP pathway was an intermediate of IL-8, PECAM-1 and vWF modulation by HC. Understanding HC mechanism of action is necessary to identify more specific and safer therapeutic targets. We demonstrate here the involvement of GATA transcription factors and NO-sGC-cGMP pathway in HG-response of several molecules involved in the pathophysiology of sickle cell disease

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Bonnin, Rémy. "Mécanismes émergents de résistances aux antibiotiques dans le genre Acinetobacter." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077072.

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Abstract:

Le genre Acimtobacter groupe des bacilles à coloration de Gram négatif, aérobie strict et oxydase négatif responsable principalement d'infections nosocomiales sévères chez des patients immunodéprimés. La récente émergence d'acquisition de résistances aux antibiotiques notamment aux p-lactamines au sein de ce genre complique énormément la gestion des infections qui lui sont liées. Ce travail a, tout d'abord, abordé la caractérisation structurale et fonctionnelle des îlots de résistance génomiques de type AbaR chez A. Baumannii. Une structure conservée de type transposon de classe II de ces îlots de type AbaR dont un module de transposition complexe a été mise en évidence. Cette partie du travail a permis une meilleure compréhension de la genèse de cette structure génétique. L'analyse des mécanismes de résistances émergents aux ß-lactamines chez A. Baumannii a permis d'identifier les propriétés biochimiques de même que les mécanismes génétiques d'acquisition de la première p-lactamase à spectre étendue de type GES (GES-14) hydrolysant de toutes les ß-lactamines. L'étude de son environnement génétique a mis en évidence que les gènes blaNDM ₋₁/₋₂ sont mobilisé par une structure de type transposon (Tn125). Ce transposon de 10,099 pb est encadré par deux copies de la séquence d'insertion lSAba125. Afin de déterminer si l'émergence de ces gènes chez A. Baumannii était la conséquence de la diffusion d'un clone, d'un plasmide ou d'une structure génétique, nous avons étudié une collection de souches possédant le gène blaNDM ₋₁/₋₂ d'origine géographique variée. Dans le cadre de la recherche de progéniteur de p-lactamase, quatre nouvelles carbapénèmases de classe D intrinsèque aux espèces Acinetobacter calcoaceticus, Acinetohacter haemolyticus, Acinetobacter johnsonii et Acinetobacter bereziniae. De manière générale, ce travail contribue à préciser les mécanismes d'acquisition de la résistance aux antibiotiques chez un pathogène humain d'importance grandissante
The genus Acinetobacter corresponds to Gram-negative aerobes responsible for severe nosocomial infections in immunocompromised patient. The recent emergence of acquisition of antibiotic résistance in this species greatly complicates the management of infections associated with it. The objectives of our work have included on the one hand in a study of structural and functional of AbaR-type genomic islands in A. Baumannii. A conserved structure of AbaR-type genomic islands has been demonstrated including a complex transposition module. On the other hand, our job consisted in to analyze the emerging mechanisms of résistance to ß-lactams in A. Baumannii. In this context, we determined the biochemical properties and mechanisms of acquisition of a extended-spectrum P-lactamase (ESBL) GES-14 with carbapenemase properties showing hydrolysis of all ß-lactam antibiotics and a peculiar genetic environment leading to resistance to carbapenems. This was the first report of a p-lactamase able to hydrolyze significantly all- ß-lactams. The dissemination of the worrisome NDM-type gene in A. Baumannii has been evidenced. This transposon of 10,099 bp in size was bracketed by two copies of lSAba125. In order to determine if the emergence of the blaNDM ₋₁/₋₂ genes was linked to a clone, a plasmid or a genetic structure, a collection of NDM-producing A. Baumannii from wolrdwide origin was studied. Four new class D carbapenemases intrinsic to Acinetobacter calcoaceticus, Acinetobacter haemolytiens, Acinetobacter johnsonii and Acinetobacter bereziniae were characterized. In the latest species, a carbapenem-resistant isolate was identified. The résistance to carbapenems was mediated by mutations in promoter sequences leading to overexpression. This finding was verified by qRT-PCR. Overall, this work helps to clarify the mechanisms of acquisition of antibiotic resistances in a increasingly important pathogen

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Coyne, Sébastien. "Génétique de la multi-résistance aux antibiotiques chez Acinetobacter baumannii et Pseudomonas aeruginosa." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077025.

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Abstract:

Acinetobacter baumannii et Pseudomonas aeruginosa sont des bactéries nosocomiales majeures ayant une grande capacité à développer des multi-résistances aux antibiotiques. Nous avons mis au point une puce permettant à la fois de quantifier l'expression des gènes d'efflux et de détecter des gènes de résistance acquis chez A. Baumannii. L'étude de mutants spontanés a montré : (i) la surexpression de AdeABC dans un mutant, probablement due à une nouvelle mutation dans AdeS, le senseur d'un système de régulation à deux composantes ; (ii) la surexpression de AdelJK dans plusieurs mutants, suggérant que cette pompe peut participer à l'acquisition de résistances ; (iii) la surexpression dans deux mutants d'une nouvelle pompe RND, AdeFGH, conférant une multi-résistance et due à des mutations dans adeL, le gène d'un régulateur transcriptionnel de type LysR. L'étude de l'environnement génétique de Vant(4')-IIb dans sept isolats cliniques de P. Aeruginosa a permis de caractériser Tn6061, un élément de 26,5 kb conférant la résistance à six classes d'antibiotiques. La présence de Yant(4')-IIb dans toutes les souches sauf une implique la mobilisation du gène par une ISCR6. La localisation chromosomique de Tn6061 dans six souches et plasmidique dans une septième suggère son transfert horizontal. De plus, la duplication-insertion &IS6100, présente en partie terminale de Tn6061, est responsable de larges inversions du chromosome. Ce travail démontre que la multi-résistance chez A. Baumannii et P. Aeruginosa peut être le résultat d'un événement génétique unique, une mutation à l'origine d'une surexpression d'un système d'efflux ou l'acquisiton d'un élément portant des gènes de résistance
Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa are two major nosocomial pathogens with a high propensity to develop resistance to antibiotics. We have designed a microarray that allows to both quantify the expression of efflux Systems and detect acquired résistance genes in A. Baumannii. Study of spontaneous mutants showed (i) overexpression of the AdeABC efflux System in one mutant, likely due to a new mutation in AdeS, the sensor of a two-component regulatory System ; (ii) overexpression of AdelJK in several mutants suggesting that this pump can contribute to acquired résistance ; (iii) overexpression of a new RND pump, AdeFGH, in two mutants, conferring multidrug résistance and likely due to due to mutations in adeL encoding a LysR-type transcriptional regulator. Study of the genetic environment of the ant(4')-IIb gene in P. Aeruginosa clinical isolates led to the characterization of Tn6061, a 26. 5-kb element conferring résistance to six unrelated drug classes. Ant(4')-Hb was present and flanked by directly repeated copies of ISCR6 in ail but one of the strains studied, consistent with ISCR6-mediated gene acquisition. Tn6061 was chromosomally located in six strains and plasmid-borne in the remaining isolate, suggesting horizontal acquisition. Furthermore, an IS6100 element, that ended Tn6061, was found to be responsible for large chromosomal inversions by duplication-insertion. This work indicates that multidrug resistance in A. Baumannii and P. Aeruginosa can result from one-step genetic events, either mutations leading to overexpression of an efflux System or acquisition of foreign elements carrying resistance determinants

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Brillet, Thomas. "Relations structure-fonction de l'alpha-hémoglobine et de sa protéine chaperon l'AHSP : octamères d'hémoglobine recombinante : application à la mise au point d'un transporteur d'oxygène artificiel." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077097.

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Abstract:

Ces travaux concernent l'étude de deux molécules d'hémoglobine (Hb) candidates à l'élaboration d'un transporteur artificiel d'oxygène et l'étude des relations structure-fonction de l'α-Hb et de sa protéine chaperon AHSP dans la cadre d'un mutant de l'AHSP décrit chez un patient présentant un syndrome thalassémique. La première partie du travail concerne le mutant α-HbH⁵⁸L, résidu clé de la poche de Thème, en vue de réduire l'auto-oxydation dans l'Hb. Celui-ci présente les mêmes caractéristiques spectrales quel que soit le ligand externe ajouté, contrairement à la protéine native. Dans ce mutant Thème semble être hexacoordonné avec un ligand endogène avec une forte affinité. La deuxième partie concerne les études d'octamères recombinants d'Hb réalisés par pontage intermoléculaire soit au niveau des sous-unités ß (ß octamère) ou a (α octamère). Ces octamères ont des propriétés fonctionnelles proches de THbA, mais avec une interaction avec l'haptoglobine (Hp) très diminuée. L'Hp et l'α octamère forment en quelques heures de grands complexes alors que le p octamère réagit nettement moins vite avec l'Hp, reflétant une plus grande stabilité de ce dernier La troisième partie concerne la caractérisation du complexe AHSP/α-Hb. Les constantes d'association, de dissociation de Tα-Hb vis à vis de son chaperon ont été déterminées. Pour le mutant AHSPV⁵⁶G, la constante de dissociation du complexe AHSP/α-Hb est diminuée 4 fois. L'AHSPV⁶⁵G seule est partiellement repliée à 37°C avec une stabilité thermique fortement diminuée alors que le complexe AHSPV⁵⁶G/α-Hb a une stabilité thermique proche de la normale. Au sein du complexe AHSPV⁵⁶G/α- Hb, l'α-Hb a également une fonction normale
This work concerns the study of two candidate molecules of hemoglobin (Hb) in the development of an artificial oxygen carriers and the study of structure-function relationships of α-Hb and its chaperone AHSP in the context of a mutant AHSP described in a patient with thalassemia syndromes. The first part of the work concerns the mutant α-HbH⁵⁸L, a key residue of the heme pocket in order to reduce auto-oxidation in Hb. This mutant has the same spectral characteristics regardless of the external ligand added, unlike the native protein. This mutant appears to have a hexacoordinated heme with a high affinity endogenous ligand. The second part concerns the study of recombinant Hb octamers Hb, obtained by intermolecular disulfide bond of ß-Hb (ß octamer) or α-Hb (α octamer). These octamers have functional properties similar to HbA, but with a decreased interaction with haptoglobin (Hp). Hp and a octamer form within a few hours a large complex while the ß octamer reacts much more slowly with Hp, reflecting its greater stability. The third part concerns the characterization of the complex AHSP/α-Hb. Both association and dissociation rates of the α-Hb with its chaperone were determined. For the mutant AHSPV⁵⁶G, the dissociation rate of the complex AHSP/α-Hb is 4 times reduced. The AHSPV⁵⁶G appears to be partially folded at 37 ° C with a progressive thermal unfolding curve. However the complex AHSPV⁵⁶G/α-Hb has a thermal stability close to normal. Within the complex AHSPV⁵⁶G/α-Hb, the α-Hb displays a normal function

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Nguyen, Thi Huyen Tram. "Handling data below the quantification limit in viral kinetic modeling for model evaluation and prediction of treatment outcome." Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077224.

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Abstract:

Les modèles de cinétique virale (VK) aident à comprendre le cycle de vie du virus de l'hépatite C et les mécanismes d'action des antiviraux. Inclure des informations pharmacocinétiques (PK) dans ces modèles permet de mieux comprendre la réponse virologique. Ces modèles pourraient aider à prédire l'issue du traitement pour chaque patient et personnaliser le traitement. Les données sous la limite de quantification (LOQ) sont très fréquentes dans la modélisation VK. L'impact de ces données et la méthode pour en tenir compte dans l'évaluation de modèle et la prédiction de la réponse thérapeutique sont encore en question. On a étendu l'erreur de prédiction de distribution (pd) et l'erreur de prédiction de distribution décorrélée normalisée (npde) pour tenir compte des données sous LOQ. Les métriques étendues ont de meilleurs comportements, avec de satisfaisantes erreurs de type I et puissances, que les méthodes omettant les données sous LOQ. On a construit un modèle PK¬VK pour caractériser la VK sous l'alisporivir donné avec ou sans peg-IFN. Le modèle a fourni de bonnes prédictions pour les réponses virologiques sous différentes combinaisons et doses de l'alisporivir dans une autre étude. On a aussi étudié plusieurs facteurs qui peuvent influer la prédiction de la réponse thérapeutique individuelle tels que les méthodes de traitement des données BQL, le protocole de prélèvement et l'information a priori sur les paramètres de population. On a montré que l'approche bayésienne pouvait donner de bonnes prédictions à partir de quelques premières réponses, à condition que les données sous LOQ soient correctement prises en compte et l'information a priori soit disponible
Viral kinetic (VK) models are useful tools to understand the lifecycle of hepatitis C virus and the mechanisms of action of antiviral agents. The understanding of virologic response can be improved by including pharmacokinetic (PK) information. VK model might also be useful to predict individual treatment outcome and support treatment personalization. One common problem in VK modeling is data below the quantification limit (BQL). However the impact of these data on model evaluation and treatment response prediction and how to properly handle them in these steps are still in question. We extended prediction discrepancies (pd) and normalized prediction distribution errors (npde) to handle BQL data and evaluated them in a simulation study. The extended metrics have better performance with satisfactory type I errors and powers, compared to the methods omitting BQL data. We developed a PK-VK model to characterize the VK to alisporivir, a cyclophillin inhibitor, given in with or without peg-IFN. The model provided good predictions for the virologic responses (BQL data fraction and SVR rate) for different combinations and doses of alisporivir in another study. We also studied by simulation the use of VK model to predict individual treatment outcome and evaluated several factors that can impact this prediction: methods for handling BQL data, design and a priori information on population parameters. We showed that Bayesian estimation of individual parameters can give good predictions for treatment outcome from only few early responses, provided that BQL data are correctly handled and correct a,priori information is available

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Hussain, Salik. "Toxicité in vitro et in vivo des nanoparticules manufacturées : rôle de la composition chimique, de la surface et de la taille." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077225.

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Abstract:

Les nanomatériaux sont de plus en plus utilisés dans de nombreux secteurs industriels et dans des produits de consommation courante, mais leurs effets sanitaires et environnementaux ne sont toujours pas bien compris. Ce travail de thèse a été réalisé dans le but d'étudier les relations entre les caractéristiques physico-chimiques des nanoparticules (NP) de noir de carbone (NC), de dioxyde de titane (TiOi) et d'or (Au) et leurs effets toxiques, en particulier au niveau de l'appareil respiratoire, voie entrée principale des nanoparticules manufacturées. Des études in vitro ont été réalisées sur des cellules épithéliales bronchiques humaines (cultures primaires et la lignée bronchique humaine 16HBE14o-) alors que, dans les études in vivo, des modèles de souris BALB/c chez lesquelles on a induit l'asthme et la sensibilisation dermique par le diisocyanate, ont été utilisées. Les études in vitro et in vivo ont montré que les NPs sont facilement internalisées par les cellules épithéliales bronchiques ainsi que par les macrophages alvéolaires. Cette internalisation est dépendante de la dose et de la taille dans le cas des cellules épithéliales et un pourcentage plus élevé de macrophages avec des NPs internalisées a été noté dans le cas d'animaux sensibilisés au diisocyanate. Une translocation des NP d'or a été observée après une exposition oropharyngée. Les NPs produisent des espèces activées de l'oxygène (EAO) en condition acellulaire selon la nature chimique, la surface spécifique et la taille des NPs (avec les NC plus réactif que le TiO₂), de plus le type d'EAO intracellulaire produit dépend aussi de la nature chimique des NPs. Les voies d'apoptose induites dépendent de la nature chimique des NPs puisque le NC induit l'apoptose par une voie mitochondriale dépendante des EAO alors que le TiO₂ induit l'apoptose par la voie lysosomale et une peroxydation lipidique. La réponse transcriptomique globale évaluée par microarray, montre que des fonctions biologiques diverses sont induites par le NC et le TiO₂ impliquant de nombreux gènes. Les effets proinflammatoires, dans les cellules épithéliales bronchiques en culture, dépendent de la surface de la particule et se traduisent par l'expression des mARN de plusieurs cytokines ainsi qu'à la sécrétion de GM-CSF, IL-6 et TNFoc. Dans des conditions in vivo, les NPs modulent sensiblement les réponses inflammatoires et l'hyperréactivité bronchique induites par le diisocyanate. Le LLNA a révélé un effet adjuvant du TiO₂ et de l'or à de faibles concentrations. En conclusion, nos résultats montrent l'importance de la surface des particules primaires, de la nature chimique et de la taille dans les effets proinflammatoires, oxydatifs et pro-apoptotiques induits par les NPs. De plus, elles montrent un effet adjuvant dans les souris BALB/c
Nanomaterials are gaining increasing utilizations in every sector of life but their health and environmental effects are still lacking complete understanding. The present study was designed to investigate the role of carbon black (CB), titanium dioxide (TiO₂) and gold (Au) nanoparticle (NP) physicochemical characteristics in the toxic effects on the respiratory System. In vitro studies were done on bronchial epithelial cells (primary as well as 16HBE14o- cell Une) while in vivo studies on diisocyanate induced asthma and dermal sensitization were performed using BALB/c mice. Both in vitro and in vivo results indicated that NPs are readily internalized by bronchial epithelial cells as well as by alveolar macrophages. This internalization was dose and NP size dependent in case of epithelial cells and a higher percentage of macrophages with engulfed NPs was noted in case of chemical sensitized animals. Translocation of Au NPs was observed after oropharyngeal exposure and targeting of distinct organs was noted in case of inflammation. Reactive oxygen species (ROS) production by NPs under cell free conditions depend upon the chemical nature, surface area anc size of the NPs (with CB being more reactive than TiO₂) while the type of intracellular ROS produced also depends upon the chemical nature of NPs. NPs induced apoptotic pathways depend upon the chemical nature of NPs as CB NPs induced apoptosis through a ROS dependent mitochondrial pathway while TiO₂ induced apoptosis through lysosomal pathway and lipid peroxidation. The global transcriptome response evaluated by microarray showed that different biological fonctions are induced by CB and TiO2 NPs involving different genes. NPs showed strong primary particle surface area dependent proinflammatory effects in bronchial epithelial cells under in vitro conditions leading to mRNA expression and secretion of GM-CSF, IL-6 and TNFa whereas under in vivo conditions NPs significantly modulated the asthmatic and inflammatory responses induced by diisocyanates. The LLNA revealed adjuvant effect of Au and TiO₂ NPs at low concentrations. In conclusion our results demonstrate the significance of primary particle surface area, chemical nature and size in proinflammatory, oxidative and apoptotic effects of NPs

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Cras, Audrey. "Résistance des cellules tumorales aux rétinoïdes : paramètres moléculaires prédictifs d'une réponse thérapeutique aux rexinoïdes et aux drogues épigénétiques." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077087.

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Abstract:

Les rétinoïdes participent à la régulation de processus biologiques essentiels tels que la croissance cellulaire, la différenciation et l'apoptose. Les effets de l'acide rétinoïque s'exercent par l'intermédiaire de récepteurs nucléaires - les récepteurs de l'acide rétinoïque (RAR) et les récepteurs X aux rétinoïdes (RXR) - qui agissent en tant que facteurs de transcription dépendants du ligand. Malgré le succès de l'acide rétinoïque tout-trans (ATRA) en tant qu'agent différenciant dans la leucémie aiguë promyélocytaire, l'utilisation des rétinoïdes en clinique reste limitée. Dans ce travail, nous avons étudié l'action des rétinoïdes dans des modèles cellulaires de tumeurs résistantes aux rétinoïdes, les cancers différenciés de la thyroïde et les leucémies aiguës myéloïdes. Nos résultats soulignent l'importance du profil d'expression des RAR et des RXR, ainsi que de leur induction dans la sensibilité des cellules aux rétinoïdes. Le bexarotène, un agoniste RXR, inhibe la croissance cellulaire et la capacité d'invasion de cellules tumorales résistantes à l'ATRA par répression transcriptionnelle de la voie de signalisation NF-kB. En outre, la résistance aux rétinoïdes est associée à un défaut de fonctionnalité du complexe transcriptionnel des RAR suite à des modifications épigénétiques. Cependant, la combinaison de l'ATRA avec des molécules modifiant la structure de la chromatine permet de lever la répression transcriptionnelle et d'induire l'expression des RAR dans des lignées résistantes à l'ATRA seul. L'analyse du profil de méthylation de l'ADN confirme que la modulation épigénétique peut expliquer l'efficacité de cette combinaison thérapeutique. Ces travaux nous ont permis, d'une part de définir des paramètres moléculaires prédictifs d'une réponse aux rétinoïdes et, d'autre part d'identifier des moyens thérapeutiques pour contourner la résistance et/ou pour restaurer la sensibilité à l'ATRA
Retinoids are involved in the regulation of key biological processes such as cell growth, differentiation and apoptosis. The effects of retinoic acid are mediated through nuclear receptors - retinoic acid receptors (RAR) and retinoid X receptors (RXR) - which act as ligand-dependent transcription factors. Despite the success of retinoic acid all-trans (ATRA) as differentiating agent in acute promyelocytic leukemia, the clinical use of retinoid remains limited. In this work, we studied retinoid actions in retinoid-resistant tumors cellular models, differentiated thyroid cancers and acute myeloid leukemia. Our results highlight the importance of RAR and RXR expression profile, and their induction in the retinoid sensitivity of cells. Bexarotene, a RXR agonist, inhibits cell growth and invasion ability of tumor cells resistant to ATRA by transcriptional repression of NF-kB signaling pathway. In addition, retinoid résistance is associated with lack of functionality of RAR transcriptional complex by epigenetic modifications. However, combination of ATRA with molecules modifying chromatin structure removes the transcriptional repression and induces the expression of RAR in ATRA-resistant cells. DMA methylation pattern analysis confirms that epigenetic modulation may be linked to drug efficacy. This work has enabled us, first, to define molecular parameters predictive of retinoid response, and secondly to identify therapeutic ways to bypass resistance and/or to restore ATRA sensitivity

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Ambolet-Camoit, Ariane. "Effets de mélanges de xénobiotiques agissant par des voies de signalisation différentes : conséquences moléculaires dans des modèles hépatiques humains." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05P617.

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Abstract:

Nous sommes exposés en permanence à des mélanges de xénobiotiques (composés étrangers à l’organisme) qui peuvent être des médicaments, des additifs alimentaires, des polluants, … Les études de toxicologie portent souvent sur un composé isolé et les combinaisons de produits sont rarement évaluées. En parallèle de la directive REACH, la commission européenne, en décembre 2009, a publié une note informative dans laquelle elle incite au développement d’outils pour prédire les effets toxiques d’une exposition simultanée à différents xénobiotiques et les conséquences au niveau de la santé humaine. Objectifs de l’étude : ce travail a pour but d’analyser les différences de l’expression des gènes après traitement par un composé seul, ou en mélange avec d’autres produits chimiques, dans des lignées cellulaires hépatiques humaines. Résultats : dans une première étude, nous avons étudié l’interaction de la dioxine, un polluant organique, qui lie le récepteur Ah (« Aryl hydrocarbon Receptor ») et de l’étoposide, une molécule anti-cancéreuse et génotoxique, qui active p53, un gène suppresseur de tumeur. Un prétraitement par la dioxine inhibe partiellement les effets de l’étoposide en diminuant l’activation de p53 et la mort cellulaire (diminution de l’activité des caspases-3 et 7). Cette interaction entre les deux xénobiotiques fait intervenir un marqueur métastatique, AGR2 (Anterior Gradient 2) qui est surexprimé dans de nombreux cancers. La dioxine augmente la quantité d’ARNm et de protéine de AGR2, après activation du AhR. Un site de fixation du récepteur a été mis en évidence dans le promoteur du gène AGR2. Grâce à des expériences d’invalidation de gène (siAGR2), nous avons validé l’ implication de AGR2 dans l’inhibition par la dioxine de l’effet cellulaire de l’étoposide. Dans une seconde étude, par une technique à grande échelle (Transcriptome) nous avons évalué les interactions entre la dioxine et l’alpha-endosulfan, un isomère d’un pesticide organochloré qui se lie aux récepteurs aux oestrogènes (ER) et au PXR (« Pregnane X Receptor »). L’expression des gènes du métabolisme des lipides est fortement diminuée après traitement par le mélange, tandis que les gènes liés au mécanisme de cancérogénèse ou à la protection contre les stress sont surexprimés. Conclusion : ces deux études ont mis en évidence des interactions entre différentes voies de signalisation cellulaires et les effets délétères pour la cellule suite à l’exposition à des mélanges des xénobiotiques

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Lasocki, Sigismond. "Métabolisme du fer dans l'anémie de réanimation." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077088.

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Abstract:

L'anémie est très fréquente en réanimation. Elle est le fruit de l'inflammation mais également de spoliations sanguines répétées. Classiquement, il est retenu que les patients de réanimation ont un profil martial inflammatoire, c'est à dire avec un stockage du fer au sein des macrophages tissulaires. Cependant, ces deux processus ont un impact opposé sur l'hormone au centre de la régulation du métabolisme du fer: l'hepcidine. Au cours de ce travail nous avons développé un modèle murin d'anémie de réanimation, combinant une péritonite inflammatoire et des spoliations sanguines répétées. Nous avons observé dans ce modèle que la stimulation de l'érythropoïèse prédominait sur l'inflammation, en réprimant la synthèse d'hepcidine et en permettant la mobilisation du fer splénique. Dans un travail préliminaire, nous avons constaté que le fer injecté à doses physiologiques n'était pas plus toxique chez les animaux malades (ayant une péritonite inflammatoire) que chez les contrôles sains. Enfin, dans une étude prospective humaine, nous avons confirmé que l'hepcidine pouvait être réprimée malgré l'inflammation, chez des patients de réanimation Ces résultats, aussi bien expérimentaux murins, qu'humains, suggèrent que le traitement martial pourrait être proposé chez certains patients de réanimation
Anemia is frequent among critically ill patients. It results from both inflammation and blood losses. It is usually considered that these critically ill patients have an inflammatory iron profile, with iron being stored in tissue macrophages. However, these two mechanisms exert opposite effects on iron metabolism regulation by the master regulator: hepcidin. During this work, we have developed and characterized a mice model of critical care anemia, associating an inflammatory peritonitis and repeated phlebotomies. We observed that erythropoiesis stimulation dominates over inflammation, with decreased hepcidin expression. This allowed the mobilization of spleen iron, despite the inflammation. In a preliminary study, we observed that intravenous iron toxicity was not enhanced in mice with peritonitis compared to control animals. Furthermore, we confirmed. In a prospective observational study in critically ill patients, that hepcidin may be repressed, even in the presence of inflammation. Taken together, these data suggest that iron may be proposed to treat some anemic critically ill patients

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Lamotte, Suzanne. "Analyses pharmacologiques et génétiques de la régulation épigénétique dans le pathogène humain Leishmania." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCC319.

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Abstract:

L’incidence des leishmanioses est en progression constante et les principales raisons en sont le manque de mesures préventives, un arsenal thérapeutique spécifique restreint, ou encore l’apparition de parasites résistants aux principes actifs des anti-leishmaniens courants. Mes travaux de thèse ont consisté, d’une part à développer de nouvelles techniques de criblages de molécules à visée anti-Leishmania et de les appliquer sur plusieurs banques de composés et, d’autre part, de déterminer si des mécanismes épigénétiques pouvaient être impliqués dans la régulation de l’expression des gènes chez les leishmanies et dans la subversion de la cellule hôte et la survie intramacrophagique de Leishmania. L’approche pharmacologique a été basée sur l’utilisation de tests mesurant l’activité anti leishmanie à la fois sur la forme cliniquement pertinente c’est-à-dire l’amastigote intramacrophagique et sur la forme libre présente chez le phlébotome, le promastigote. La combinaison des tests effectués sur les différents stades de développement et sur deux espèces de leishmanie, l’une dermotrope et l’autre viscérotrope, a permis de proposer une nouvelle procédure permettant de mieux appréhender l’activité anti-leishmanienne et la toxicité vis-à-vis des cellules hôtes des composés testés. Sur 722 composés testés, 225 ont montré une activité anti-parasitaire intéressante selon l’espèce, le stade et la concentration, dont certains étaient classés comme inhibiteurs épigénétiques. Cette approche pharmacologique a permis de mettre en évidence un rôle potentiel de l’épigénétique dans deux aspects de la biologie de Leishmania, que j’ai étudié par la suite. Tout d’abord, par une approche phylogénétique, j’ai révélé l’importance potentielle de l’épigénétique dans la biologie de Leishmania. J’ai analysé les génomes de 4 espèces de Leishmania et trouvé des gènes présumés codant pour des enzymes modifiant les histones, régulant la méthylationet l’acétylation. Je me suis ensuite intéressée aux modifications post-transcriptionnelles potentielles de l’histone H3. Un alignement de séquences multiples des histones H3 de différents mammifères et de Leishmania montre 60% d’homologie, avec d’importantes différences dans la queue N-terminale, suggérant une compaction de l’ADN et une régulation de l’expression des gènes spécifiques au parasite. En revanche, certaines modifications d’acides aminés de H3 sont conservées et ont été révélées dans des analyses d’immunofluorescence chez le promastigote en utilisant des anticorps commerciaux ciblant la méthylation de H3K4, H3K23, H3K27 et H3K36. Les modifications épigénétiques spécifiques ou conservées du parasite pourraient être des cibles thérapeutiques intéressantes chez Leishmania, et j’ai d’ailleurs étudié le mode d’action de deux catégories d’inhibiteurs épigénétiques. Par ailleurs, par le criblage de librairies d’inhibiteurs épigénétiques, j’ai découvert des composés ayant uniquement une activité sur les amastigotes intracellulaires, suggérant une implication des mécanismes épigénétiques dans la survie intracellulaire du parasite. J’ai révélé par des analyses d’immunofluorescence et de western blot différents niveaux de méthylation des histones entre les macrophages non infectés et infectés, montrant une possible modulation de la régulation épigénétique de la cellule hôte par Leishmania afin de promouvoir sa survie intracellulaire. Pour évaluer cette hypothèse, j’ai conduit une analyse de séquençage de l’ARN pour étudier le mode d’action des inhibiteurs des déméthylases des histones, qui pourraient agir sur les mécanismes de régulation épigénétique du macrophage afin de restaurer ses propriétés leishmanicides. Ce travail pourrait permettre la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques dans l’interaction hôte pathogène, dont certaines pourraient avoir un mode d’action via l’hôte, ce qui aurait l’avantage d’éviter la génération de parasites résistants
The incidence of leishmaniases is steadily increasing, mainly due to the lack of preventive measures, a limited therapeutic arsenal, and appearance of resistant parasites to all current treatments. My thesis research consisted, on one hand, to develop new techniques for selecting efficient anti-leishmanial molecules and screening various compounds libraries, and on the other hand, to determine if epigenetic mechanisms are involved in the regulation of Leishmania gene expression and Leishmania host cell subversion and intracellular survival. The pharmacological approach was based on assays measuring anti-leishmanial activity on the clinically relevant stage, the intramacrophagic amastigote, and on the extracellular stage present in the phlebotome, the promastigote. Combination of assays applied on different stages and different species, one dermotropic and one viscerotropic, allowed the identification of pan-active compounds without toxicity against the host cell. Among 722 tested compounds, 225 showed interesting anti-parasitic activity depending on Leishmania species and stages at different concentrations between 4 and 10 µM, some of which were classified as epigenetic inhibitors. This pharmacological approach highlighted a possible role of epigenetics in two aspects of Leishmania biology that I have investigated in the following. First, applying a phylogenetic approach, I revealed a potential role of epigenetics in Leishmania biology. I analyzed genomes of 4 Leishmania species and found genes encoding for putative histone modifying enzymes, regulating the level of methylation (5 demethylases and 48-49 methyltransferases, depending on species) and acetylation (7 deacetylases and 15-17 acetyltransferases, depending on species). I next focused on potential post-transcriptional modifications of histone H3. The multiple sequence alignment of H3 from different mammals and Leishmania showed 60% homology, with important differences in the N-terminal tail, suggesting parasite specific DNA compaction and gene expression regulation in Leishmania. In contrast, some amino acid modifications of H3 were conserved and revealed in immunofluorescence analyses in promastigotes using commercially available antibodies against methylation of H3K4, H3K23, H3K27 and H3K36. Parasite-specific and conserved epigenetic modifications could be interesting drug targets in Leishmania, a possibility I investigated by studying the mode of action of two selected categories of epigenetic inhibitors (i.e. DNA and histone methylation inhibitors). Second, screening epigenetic inhibitor libraries, I discovered compounds that show activity only against intracellular amastigotes, suggesting an implication of epigenetic mechanisms in the intramacrophagic survival of Leishmania. I revealed by immunofluorescence and western blot analyses different histone methylation levels between non-infected and infected macrophages, suggesting that intracellular Leishmania can modulate host cell epigenetic regulation to promote its intramacrophagic survival. To assess this hypothesis, I conducted RNAseq analyses to address the mode of action of histone demethylases inhibitors, which could act on macrophage epigenetic regulation mechanisms restoring its leishmanicidal properties. This work should allow the discovery of new therapeutic targets in host-Leishmania interaction, some of which may have a host-directed mode of action, which may incite the development of new treatment options that are more refractory to the emergence of drug-resistant parasites

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Simonin, Marie-Agnès. "Etude expérimentale de la toxicité articulaire des fluoroquinolones chez le rongeur : arguments physiopathologiques en faveur d'un stress oxydant." Nancy 1, 1999. http://www.theses.fr/1999NAN19921.

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Abstract:

Malgré une incidence relativement faible d'effets secondaires sérieux, les fluoroquinolones sont responsables d'atteintes du cartilage articulaire et du tendon. Les objectifs de notre étude ont été de déterminer les mécanismes physiopathologiques impliqués dans ces effets indésirables, notamment de savoir si chacune de ces manifestations relevait d'un même mécanisme de type stress oxydant. L'étude du handicap, évalué par biotélémétrie, a montré une phase d'hypomobilité transitoire. Nous avons observé une inhibition de la synthèse des protéoglycanes 24 heures après l'administration de péfloxacine (400 mg/kg) dans le cartilage et le tendon. Un phénomène de réparation, 48 heures après l'administration de péfloxacine, a été décrit uniquement dans le tendon. L'administration répétée de péfloxacine entraîne une augmentation de l'oxydation des collagènes du cartilage et du tendon, ainsi qu'une expression plus importante des ARNm codant pour l'IL1?. Les mêmes effets en terme d'oxydation du collagène sont reproduits lors d'une ischémie-reperfusion expérimentale du tendon. De plus, l'administration simultanée de N-acétyl-cystéine (150 mg/kg/j) prévient le phénomène d'oxydation du collagène dans le tendon d'Achille. Une expression significative des ARNm codant pour le collagène de type III dans le tendon a été démontrée lors d'un traitement répété par la péfloxacine ainsi que lors de la réalisation de l'ischémie-reperfusion, ce qui souligne l'apparition d'un tissu cicatriciel dans ces circonstances. Ainsi, l'ensemble de ces données suggère que les atteintes cartilagineuses et tendineuses sous fluoroquinolones relèvent d'un même mécanisme, impliquant un stress oxydant
Even if some infrequent adverse reactions occur during their use, fluoroquinolones have been reported to promote chondrotoxicity and tendinopathy. In this study, we investigated the pathophysiological mechanism involved in these both effects. A transitory hypomobility was observed by biotelemetric study. Proteoglycan synthesis decreased in both tendon and articular cartilage 24 hours after a single administration of pefloxacin. This inhibition was followed by a repair-like phase in Achilles tendon only. Pefloxacin treatment during several days induced an oxidative damage to articular and tendinous collagens, and we observed a significant IL1 mRNA expression. These modifications were identical to those observed in an experimental ischaemia-reperfusion of the tendon. Moreover, pefloxacin-induced oxidative damage was prevented by co-administration of NAC in Achilles tendon. Both a pefloxacin treatment during several days and the tendinous ischaemia-reperfusion induced type III collagen RNAm expression in Achilles tendon, thus underlining a wound-healing phenomenon. This study suggests a common pathophysiological pathway, involving an oxidative stress, during both fluoroquinolone-induced chondrotoxicity and tendinopathy

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Janela, Baptiste. "Etude immunologique du syndrome d'hypersensibilité médicamenteuse." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077144.

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Abstract:

Le syndrome d'hypersensibilité médicamenteuse ou DRESS (Drug Rash with Eosinophilia and Systemic Symptoms) est une réaction cutanée sévère secondaire à une prise médicamenteuse associée à de nombreuses atteintes viscérales. La réponse immunitaire au cours du DRESS est caractérisée par des lymphocytes T CD8+ activés, cytotoxiques, présentant un phénotype de localisation cutanée et dirigés contre des antigènes viraux de type EBV. Ces lymphocytes T CD8+ en expansion sont retrouvés au sein du système périphérique sanguin et dans les organes atteints (peau, foie, poumons). Nous avons démontré que le DRESS est caractérisé par la présence de nombreuses réactivations virales de type EBV, HHV-6, HHV-7 ; virus dont la production est intimement liées à la prise médicamenteuse. La présence de réactivations virales au cours du DRESS est corrélée à une forte augmentation du taux sérique d'IL-10. Au cours du DRESS, les lymphocytes B régulateurs correspondent à la principale source d'IL-10 dont la sécrétion est induite par les médicaments in vitro. L'analyse des caractéristiques cliniques et biologiques des patients présentant une évolution prolongée de la maladie nous a permis de mettre en évidence que la composante essentielle vers cette évolution semble être l'ethnicité du patient. Enfin, nous avons évalué l'efficacité du traitement du SHM par immunoglobulines intraveineuses. Nous montrons que ce traitement est ni sur, ni efficace et induit de nombreux effets secondaires indésirables. En conclusion, le syndrome d'hypersensibilité médicamenteuse est une maladie d'origine virale induite par la prise de médicament chez des individus présentant des spécificités génétiques
The drug hypersensitivity syndrome or DRESS (Drug Rash With eosinophilia and Systemic Symptoms) is a severe skin reaction secondary to drug intake associated with multiple organ involvement. The immune response in DRESS syndrome is characterized by activated CD8 T lymphocytes, cytotoxic, with a cutaneous homing phenotype and directed against viral antigens such as EBV. Expended populations of CD8+ T lymphocyte are found in the peripheral blood System and in the skin, liver and lungs. We demonstrated that DRESS is characterized by the presence of numerous viral reactivation such as EBV, HHV-6, HHV-7; virus whose production is closely linked to drug taking. The presence of viral reactivation in DRESS syndrome is correlated with a significant increase in serum IL-10. During DRESS, regulatory B lymphocytes are thé principal source of IL-10 secretion. In addition this cytokine secretion is induced by drugs in vitro. Analysis of clinical and biological characteristics of patients with a prolonged course of disease allowed us to demonstrate that the essential component to this prolonged course would be the ethnicity of the patient. In conclusion, we evaluated the effectiveness of treatment of DRESS with intravenous immunoglobulin. We show that this treatment is neither safe nor effective and induces many undesirable side effects. In conclusion, hypersensitivity syndrome is a viral disease caused by drugs in individuals with specific genetic

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Bonnet, Laurianne. "Régulation du métabolisme adipocytaire de la vitamine D : effet de l'obésité et d'une supplémentation en vitamine D." Thesis, Aix-Marseille, 2017. http://www.theses.fr/2017AIXM0609/document.

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Abstract:

La VD (VD) est impliquée dans de nombreux processus physiologiques, dont le contrôle de certains paramètres de la biologie du tissu adipeux, son site principal de stockage. Ainsi elle y exerce des effets anti-inflammatoires et métaboliques forts, mais de nombreux aspects de ces régulations n’ont jamais été étudiés. Le but de cette thèse est d’avancer dans la connaissance de l’interrelation entre la VD, le tissu adipeux et l’obésité.Dans un premier temps, nous avons donc mis en évidence que la VD limitait l’expression de 3 miRs (miR-146a, miR-150 et miR-155) en inhibant la voie de signalisation NF-κB, in vitro et in vivo, au niveau du tissu adipeux et de l’adipocyte, lors d’un stress inflammatoire. Ensuite, nous avons mis en évidence que la VD modulait l’expression génique de certaines enzymes impliquées dans son propre métabolisme au niveau du tissu adipeux et de l’adipocyte et que la cubiline était impliquée dans l’absorption de la 25(OH)D au niveau des adipocytes. De plus, nous avons montré qu’un régime riche en graisse pendant 4 jours, 7 et 11 semaines engendrait une modulation de la concentration plasmatique de certains métabolites de la VD ainsi que des ARNm de certains acteurs impliqués dans le métabolisme de la VD, suggérant un stockage de la VD sous forme de 25(OH)D dans le tissu adipeux. Enfin, un retour à l’état basal des niveaux d’expressions géniques au niveau du tissu adipeux des différents acteurs mis en jeu dans le métabolisme de la VD ainsi que les dosages plasmatiques et adipocytaires dee métabolites de la VD a été mis en évidence chez les souris ayant subi une prise puis une perte de poids, démontrant ainsi la réversibilité des résultats
Vitamin D (VD) is involved in many physiological processes, including the control of parameters of adipose tissue biology, its main storage site. Thus, it exerts strong anti-inflammatory and metabolic effects, but many other aspects of this regulation have never been studied. The aim of this thesis is to advance in the knowledge of the interrelation between VD, adipose tissue and obesity.Firstly, we have therefore demonstrated that VD limits the expression of 3 miRs (miR-146a, miR-150 and miR-155) by inhibition of NF-κB signaling pathway, in vitro and in vivo, in adipose tissue and adipocyte, during inflammatory stress. We showed that VD modulated gene expression of enzymes involved in its own metabolism in adipose tissue and adipocyte, during a treatment of VD, in vivo and in vitro, known only in the liver and kidney. Moreover, the involvement of cubiline in 25(OH)D uptake in adipocytes has been demonstrated. Then, we showed that a high fat diet for 4 days, 7 and 11 weeks leads to a modulation of plasma concentration of VD metabolites as well as mRNAs of some actors involved in VD metabolism, suggested a possible storage of VD under 25(OH)D form in adipose tissue. Finally, the effect of weight gain induced by a high-fat diet followed by a return to a control diet was studied in mice. The levels of gene expression in the adipose tissue of the actors involved in VD metabolism as well as the plasma and adipocyte dosages of VD and its metabolites show a return to the basal state in mice having undergone weight loss. These results demonstrate the reversibility of changes induced by an obesogenic diet on VD metabolism

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Olekhnovitch, Romain. "The antimicrobial activity of nitric oxide at the site of Leishmania infection." Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCC152.

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Abstract:

La production d'oxyde nitrique (NO) par l'enzyme iNOS (inducible NO synthase) est impliquée dans le contrôle de nombreuses infections causées par des pathogènes intracellulaires. Cependant, la nature des signaux nécessaires à l'induction d'iNOS in vivo et les mécanismes responsables de son activité antimicrobienne restent à définir. En particulier, plusieurs études suggèrent que le NO exerce son activité de manière intrinsèque : l'induction d'iNOS par les cellules infectées leur permettrait donc de contrôler individuellement leur charge microbienne. Alternativement, la capacité du NO à diffuser à travers les membranes cellulaires pourrait bien jouer un rôle déterminant dans le contrôle de ces infections à pathogènes intracellulaires. Les contributions respectives de ces deux modes d'action dans le contrôle de l'infection restent inconnues. Dans cette thèse, nous démontrons dans le cadre de l'infection par Leishmania major que iNOS est rapidement induite en réponse à l'IFNy et le TNF par les phagocytes mononucléés recrutés au site d'infection mais ne confère aucune capacité intrinsèque à contrôler les parasites. Au contraire, nous démontrons que la diffusion du NO permet de tuer les parasites aussi bien dans les cellules exprimant iNOS que dans les cellules à proximité et que la production collective de NO par de nombreux phagocytes et nécessaire pour atteindre une activité antimicrobienne efficace. Finalement, en s'appuyant sur une méthode innovante impliquant une protéine photoconvertible, nous démontrons que ce milieu riche en NO limite le métabolisme et ainsi la prolifération du parasite in vivo, permettant ainsi de contrôler efficacement l'infection par Leishmania
The production of nitric oxide (NO) by the inducible NO synthase (iNOS) plays a critical role in the control of many infections with intracellular pathogens. However, the signais mediating iNOS induction in vivo and the precise mechanisms underlying its antimicrobial activity at the site of infection remain unclear. In particular, several studies have promoted the idea that NO production in infected cells may enable them to individually control their pathogen burden. Alternatively, the ability of NO to diffuse efficiently across cell membranes may be critical for the control of infection with intracellular pathogens. Whether pathogen control primarily depends on cell-intrinsic or cell-extrinsic activity of NO is unknown. In this thesis, we demonstrate that during Leishmania major infection, iNOS is rapidly induced in recruited mononuclear phagocytes in response to IFNy and TNF. We show that this rapid iNOS induction does not confer any cell-intrinsic ability to lower parasite content. Ln fact, we demonstrate that the diffusion of NO promotes equally effective parasite killing in producing and bystander cells and that the collective production of NO by numerous phagocytes is necessary to exert an effective antimicrobial activity. Altogether, we prOpose that in contrast to a cell-autonomous control of intracellular pathogens, this cooperative mechanism generates an antimicrobial milieu that provides the basis for pathogen containment at the tissue level. Finally, using a new method based on a photoconvertible protein, we demonstrate that this NO-rich microenvironment controls Leishmania infection in part by dampening parasite metabolism and subsequent proliferation in vivo

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Otrebska-Machaj, Ewa. "The search for new inhibitors of bacterial efflux pumps among amine derivates of 5-Arylidenehydantoin." Thesis, Aix-Marseille, 2015. http://www.theses.fr/2015AIXM5010.

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Abstract:

L’objet de ces recherches était de trouver de nouveaux EPIs du système d’efflux AcrAB-TolC dans les groupes de dérivés d’amine de la 5-arylidenehydantoine et de la 5-arylideneimidazolone. Dans la première étape de recherche, 32 nouveaux dérivés ont été obtenus après modification de la structure lead P2.Un screening théorique du risque toxique et la prédiction des propriétés médicamenteuses des composés ont été réalisés en utilisant le programme OSIRIS qui calcule différentes propriétés médicamenteuses pertinentes basées sur la structure planaire de la molécule.Dans l’étape suivante de la recherche, l’activité des composés a été évaluée par des études microbiologiques sur souches d’Enterobacter aerogenes avec différentes expressions de la pompe d’efflux AcrAB. La première étude effectuée était un test de sensibilité pour déterminer les CMI des composés afin de trouver une concentration à laquelle les utiliser avec des antibiotiques sans avoir l’influence de leur activité intrinsèque. Puis l’effet des composés sur la sensibilité des antibiotiques tels que l’acide nalidixique, le chloramphénicol, la doxycycline et l’érythromycine a été étudié. Après, le type de coopération avec les antibiotiques a été déterminé par la construction d’isobologrammes et le calcul de l’index de FIC. Les dernières études microbiologiques réalisées sont des tests d’efflux en temps réel qui utilisent un colorant fluorescent 1,2’-dinaphthylamine et ont permis de suivre directement le fonctionnement de la pompe. L’étude des relations structure-activité souligne le rôle essentiel de la nature amphiphile des EPIs dérivés de groupes arylidene de l’hydantoine et de l’imidazolone
The purpose of this research was to find new EPIs of the AcrAB-TolC efflux system in groups of amine derivatives of 5-arylidenehydantoin and 5-arylideneimidazolone. In the first stage of the research 32 new derivatives of 5-arylidenehydantoin were obtained as a result of modifications of the lead structure P2. Theoretical screening of the toxicity risk as well as the prediction of drug-like properties of hydantoins/imidazolones synthesised were performed by using the OSIRIS program which calculates various drug-relevant properties based on a planar structure of the molecule.In the next stage of the research the activity of compounds was evaluated in microbiological studies. Strains of Enterobacter aerogenes with different expressions of the AcrAB efflux pump were used. The first study carried out was a susceptibility test determining the MICs of compounds in order to find a concentration that could be used in combination with antibiotics without the influence of an intrinsic antibacterial activity of the compounds. Then the effect of the compounds on bacterial susceptibility to antibiotics such as nalidixic acid, chloramphenicol, doxycycline and erythromycin was examined. After, the type of cooperation with antibiotics was determined based on isobolograms and the FIC index calculated. The last of microbiological studies was the real-time efflux (RTE) assay which used the fluorescent dye 1,2’-dinaphthylamine and allowed the functioning of the pump to be monitored directly. The structure-activity relationship (SAR) analysis emphasized the essential role of the amphiphilic nature of the EPIs from the group of arylidene derivatives of hydantoin and imidazolone

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Pochard, Pierre. "Immuno-modulation de la réponse allergique par les bactéries lactiques : implications des cellules présentatrices d'antigènes." Lille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003LIL2MT09.

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Nguyen, Hai Le. "HIV-1 minority variants associated with drug resistance to reverse transcriptase and integrase inhibitors and genetic barrier for the development of resistance to integrase inhibitors." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077051.

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Abstract:

Les variants minoritaires résistants (VMR) du VIH-1 aux antirétroviraux n'ont pas été étudiés en Thaïlande. Deux groupes de patients dont le génotypage conventionnel n'a pas montré de mutations associées à la résistance ont été inclus dans l'étude: 104 patients récemment infectés, naïfs de traitement antirétro viral et 22 patients en échec de traitement de première ligne par les inhibiteurs non-nucléosidiques de la transcriptase inverse. Les résultats de pyroséquençage ont montré que la prévalence des variants minoritaires Y181C et M184V dans les 2 groupes est faible en Thaïlande. Le rôle des VMR N155H dans la sélection des profils de résistance au raltégravir (RAL) ont été évalué chez des patients multitraités en échec au RAL. Une PCR allèle spécifique (AS-PCR) a été utilisée pour détecter les mutants N155H. La sélection précoce de cette mutation à des niveaux variés n'influence pas la maintenance de cette mutation pendant l'échec en comparaison avec le passage au double mutant Q148H+Q140S, suggérant que ce mutant N155H n'aurait pas de rôle dans la détermination de profils de résistance. La barrière génétique pour l'évolution de la résistance aux inhibiteurs d'intégrase (INIs) a été comparée entre le sous-type B et CRF01-AE du VIH-1 par l'analyse des 66 mutations associées à la résistance aux INIs dans 144 séquences d'intégrase (109 VIH-1 sous-type CRF01-AE et 35 VIH-1 sous-type B) chez des patients naïfs aux INIs. La plupart des positions d'acides aminés étudiées montrent un haut niveau de conservation, ce qui indique la même barrière génétique entre les sous-types CRF01-AE et B
Minority HIV-1 drug resistance bas not been studied in Thailand. Two groups of patients, whose conventional genotyping results showed no drug resistance-associated mutations, were investigated: 104 homosexual men recently infected with HIV-1, naive to antiretroviral treatment and 22 first-line NNRTI-based failures. Pyrosequencing assay was developed to detect and quantify minority Y181C and M184V variants from the patients' plasma samples. 1/104 (0. 96%) and 3/101 (3%) samples were found harboring Y181C and M184V in the group of homosexual men. In patients with first-line treatment failure, one harbored minority Ml84V mutants (4. 5%). Thus, due to such a low prevalence, minority drug résistance test may not be cost-effective for implementing in Thailand. The mechanism of raltegravir (RAL)-resistant evolutions has not been completely elucidated. Because of the emergence of RAL résistance usually initiated with the N155H mutant, we assessed the role of minority N155H-mutated variants in circulating RNA and archived DNA in 5 heavily treated patients experiencing RAL failure and harboring 3 different résistance profiles. No minority N155H-mutated variant was found by allele specific PCR (AS-PCR) in both plasma and whole blood samples collected at baseline and after RAL withdrawal in ail 5 patients. During RAL failure, the mutation N155H was detected at different levels in 3 patients displaying the N155H pathway and gradually declined when the double mutant Q148H+G140S was selected in one patient. In two patients with the Q148H résistance pathway, no N155H variant was identified by AS-PCR in both viral RNA and DNA. The N155H mutants might not play a role in determining different résistance profiles. The genetic barrier, defined by the accumulative number of drug-associated mutations required for the virus to escape drug-selective pressure, is a crucial factor in the development of drug résistance. There are limited data on subtype CRJF01_AE, a predominant isolate in Southeast Asia. The genetic barrier for the evolution of integrase inhibitors (INIs) including RAL, elvitegravir (EVG), and dolutegravir (DTG) résistance was compared between HIV-1 subtypes B and CRF01_AE by analyzing of 66 substitutions associated with INI résistance at 41 amino acid positions in 144 nucleotide sequences (109 HIV-1 subtype CRF01_AE and 35 HIV-1 subtype B) of IN gene derived from INI-naïve patients. Most studied amino acid positions including ail corresponding to RAL and EVG primary mutations show a high degree of conservation, indicating the same genetic barrier between subtypes CRF01_AE and B. Nevertheless, different genetic barriers were observed in two mutations described to be associated with DTG résistance (L101I, A124T) and other five RAL and EVG secondary mutations (V72I, T125K, G140C/S, V201I), which could have an impact on the development of résistance to RAL, EVG, and DTG

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Chevalier, Marlène. "Validation d'un extrait innovant de Solidago virgaurea : inhibition de la conversion levure-filament et de la formation du biofilm à Candida albicans." Thesis, Aix-Marseille, 2017. http://www.theses.fr/2017AIXM0168/document.

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Abstract:

Les levures du genre Candida provoquent 70 à 90% des infections fongiques invasives chez l’Homme. Candida albicans est l’espèce de levure la plus souvent isolée et la plus pathogène au niveau de la cavité orale. Cette levure présente des facteurs de virulence multiples, notamment une capacité à modifier sa morphologie (dimorphisme), des adhésines servant à la reconnaissance de l’hôte, la sécrétion de phospholipases et d’aspartyl protéases et une capacité à former des biofilms. L’augmentation constante des infections fongiques et des résistances aux antifongiques, des effets secondaires et du coût des traitements, justifie la recherche de nouvelles molécules actives contre les biofilms impliquant des levures. Après une revue de la littérature sur les modèles de biofilms oraux, nous avons étudié l’effet d’un extrait végétal de Solidago virgaurea sur C. albicans. Une première étude a montré que l’extrait, par ailleurs dépourvu d’effet antibactérien, pouvait agir sur le champignon en : 1) empêchant la conversion de levures en hyphes, 2) inhibant la formation de biofilm, et 3) en dissociant le biofilm déjà formé. La deuxième étude visait à comprendre le mode d’action de cet extrait. Elle a montré que l’extrait de S. virgaurea inhibait l’expression de protéines impliquées dans l’adhésion et la filamentation. Par ailleurs, il exerce un effet synergique sur l’élimination du biofilm lorsqu’il est combiné à des antifongiques. L’ensemble de ces résultats positionne l’extrait de S. virgaurea en candidat prometteur pour une approche innovante du traitement topique des candidoses cutanéomuqueuses
Candida yeast cause 70 to 90 % of human invasive fungal infections. In the oral cavity, Candida albicans is the most frequently isolated the most pathogenic species. This yeast has multiple virulence factors, including the capacity to alter its morphology (dimorphism), adhesins for host-recognition, the secretion of phospholipases and aspartyl proteases, and the ability to form biofilms. The search for new anti-biofilms drugs and, in particular, those targeting biofilm involving yeast is justified by the constantly increasing incidence of fungal infections and antifungal resistance, treatments side effects and costs. We first reviewed the literature regarding oral biofilm models. Then, we studied the effect of a Solidago virgaurea extract against C. albicans. A first study showed that this extract, which has no antibacterial effect, could act on the fungus in several ways, including: 1) inhibiting yeast-to-hypha transition, 2) inhibiting biofilm formation, and 3) disrupting existing biofilm. The second study aimed to understand the mode of action of this extract. It showed that it might act via the down-regulation of proteins involved in yeast adhesion and filamentation. Furthermore, it acted in synergy with antifungals to eliminate biofilm. Overall, these findings indicate that this S. virgaurea extract is a promising candidate for an innovative approach of superficial candidiasis topical therapy

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Bourougaa, Karima. "Diversifying the p53 pathway in response to Endoplasmic Reticulum stress via alternative translation initiation of the p53 mRNA." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077128.

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Abstract:

La protéine p53 est le produit d'un gène muté dans plus de 50% des cancers humains. P53 est un facteur de transcription capable d'induire, en réponse à différents stress, l'arrêt du cycle cellulaire en Gl et en G2, la réparation de l'ADN, ou, si le dommage est trop sévère, la mort cellulaire. Un grand nombre de gènes répondent à p53 mais il reste quand même difficile de comprendre comment les cellules parviennent à différencier et à intégrer l'activation de p53 en une réponse bien spécifique. Récemment, différents isoformes de p53 ont été identifiés mais leur rôle physiologique reste encore inconnu. L'isoforme p53/47 ne possède pas les 39 premiers acides aminés de p53 correspondant au premier domaine de transactivation et au site de liaison du régulateur négatif Mdm2. D'abord décrite comme un antagoniste de p53, p53/47 présente des vertus pro-apoptotiques. Nous avons précédemment montré que p53/47 pouvait être exprimée de façon indépendante de celle de p53 spécifiquement en réponse aux stress associés à l'hypoxie tumorale. De plus, p53 peut s'oligomériser avec p53/47. Les différents complexes formés présentent des activités et des propriétés biochimiques différentes comparés à ceux formés uniquement par p53. Nos résultats montrent que l'activation de la protéine PERK lors du stress du réticulum endoplasmique conduit à une surexpression de p53/47. Par ailleurs, ,ce stress induit une tétramérisation sélective de p53/47 qui est associée à la régulation du gène 14-3-3a conduisant à un arrêt du cycle cellulaire en G2. Ces résultats montrent comment en réponse à un stress spécifique, c'est un isoforme particulier qui est activé conduisant à une réponse cellulaire définie
The p53 protein is the product of a tumour suppressor gene mutated in 50% of human tumours and it has been suggested that all tumours carry defects in the p53 pathways. The p53 protein is a tetrameric transcription factor which is activated in response to a large panel of stresses. P53 downstream pathways control Gl and G2 cell cycle arrest, DNA repair or apoptosis. Even though a large number of p53 response genes have been identified it is still not clear how cells can differentiate the cell biological outcome of p53 activation. More recently, several p53 isoforms hâve been identified and the physiological roles of these are now starting to unravel. The p53/47 isoform lacks the first 39 amino acids including the Mdm2 binding site and trans-actiyation domain I. In consequence, p53/47 homo and hetero-oligomer complexes exhibit altered activity and biochemical properties. The results presented here show that activation of the PERK kinase in response to endoplasmic reticulum (ER) stress induces cap-independent translation of p53/47 via an Internai Ribosome Entry Site (IRES) located within the first 120 nt of the p53 encoding sequence. ER stress promotes selective homo-oligomerisation of p53/47 which induces 14-3-3a and a G2 arrest. At the same time, p53/47 prevents p53-induced expression of p21 and Gl arrest. This thesis shows how IRES-dependent mRNA translation in response to a specific cellular stress pathway alters the expression of p53/47 allowing the cell to differentiate the cell biological outcome of p53 activation. This study can then help to unravel how thé cells can differentiate the cell biological response to different types of cell stress

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Essabbani, Abdellatif. "La clusterine : un nouveau régulateur de la voie NF-қB et de la mort cellulaire." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T025.

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Abstract:

La clusterine: un nouveau régulateur de la voie NF-қB et de la mort cellulaire Plusieurs fonctions physiologiques ont été attribuées à la clusterine (CLU), dont le rôle important au cours de l'inflammation et de la tumorogenèse. Nous avons montré que CLU interagit avec Iқb-α phosphorylé et diminue la translocation de p50/p65. Nous avons aussi généré un ensemble de constructions " flaggées " pour les différentes isoformes de CLU. Les résultats de cette étude montrent que la régulation de la voie NF-қB pourrait être restreinte à des séquences particulières de CLU. Nous avons développé une nouvelle approche de ciblage de CLU par la technique d' « exon skipping » qui permet d'induire préférentiellement la forme nucléaire épissée du gène très mal caractérisée. Nous avons montré que la surexpression de cette forme par cette stratégie induit la mort cellulaire
Clusterin: a new regulator of NF-kappaB pathway and cell death Clusterin is a multifunctional protein that plays numerous roles in mammalian cells. By mean of transcriptomic analysis, we previously demonstrated that lower expression of clu both in tissues and cultured fibroblast-like synoviocytes of rheumatoid arthritis patients compared to osteoarthritic patients. We showed that CLU interacts with phospho-IkB-a and decreases the translocation of p50/p65 to the nucleus. To specify the interaction sites of CLU with its partners and to study the CLU isoforms roles, we generated several molecular constructs coding for various CLU regions of interest and test their role on NF-қB pathway and CLU subcellular localization. We have also developed a new approach of "exon skipping" in order to induce preferential expression of the nuclear spliced form of the gene. This strategy will allow a good understanding of nuclear forme poorly characterized

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Bousquet, Guilhem. "Transgénèse et xénogreffe : deux stratégies expérimentales pour les thérapies innovantes en cancérologie." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077142.

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Abstract:

Les cancers sont une cause principale de mortalité dans le monde. Ils constituent de fait un problème de santé publique. Malgré une amélioration significative du pronostic des patients depuis près de 20ans, le développement de nouveaux agents thérapeutiques est un enjeu essentiel de l'oncologie moderne. Les modèles de pharmacologie expérimentale utilisés depuis plus de 30 ans sont insuffisants avec moins de 5% des molécules obtenant une autorisation de mise sur le marché. Dans les travaux rapportés, j'ai eu l'opportunité d'utiliser deux types de modèles murins, et deux thérapies innovantes : 1)un modèle de souris double-transgéniques développant des tumeurs colo-rectales. Tout d'abord, nous avons validé la pertinence pharmacologique du modèle par rapport aux chimiothérapies utilisées chez l'homme avec cancer colique métastatique. Nous avons ensuite démontré, dans notre modèle, la supériorité de l'ajout de Dbait, siDNA agissant comme un de leurre pour détourner les mécanismes de réparation des cassures double-brin induites par l'association de chimiothérapie 5FU-Irinotecan. 2) trois modèles de xénogreffes de lignées humaines de cancers du sein, du rein, et du foie,. . Afin d'étudier les effets cellulaires et tissulaires du sunitinib, inhibiteur de récepteurs à activité tyrosine kinase. Nous avons montré que sunitinib induisait une apoptose à la fois des cellules endothéliales et des cellules tumorales, que ces effets cellulaires étaient dépendants du type tumoral, et qu'ils impliquaient les cibles moléculaires du sunitinib - VEGFR1,2, PDGFRa,(3, KIT, RET, FLT-3
Cancers are frequent diseases and leading causes of mortality in the world. They are a major health care problem. Despite a significant improvement in prognosis of patients since the last 20 years, the development of innovating therapeutical agents is highly required, challenging research in oncology. In addition, a preclinical knowledge of mechanisms of action and biomarkers of response is crucial for not missing the clinical development of these new drugs. The preclinical pharmacological models currently used since 30 years are clearly insufficient, as only 5% of tested agents finally succeed in being active in patients. I had the opportunity to use two different experimental murine models for the development of two innovating therapies : 1)The double transgenic model which develop colorectal tumors mimicking the human pathology. First, we demonstrated its pharmacological relevance regarding to cytotoxic currently used in patients. Second, we showed that Dbait, a DNA repair inhibitor, may be an effective additional treatment for increasing the efficacy of chemotherapy in colon or rectal cancer, independently of KRAS status. 2)Mice xenografted with human tumor cell lines with sequential cellular and molecular studies. We demonstrated that the specific effect of sunitinib, mainly a VEGFR inhibitor, differs according to the tumor type. This effect was first identified on neoangiogenic microvessels, but a direct effect on tumor cells was also found and related to sunitinib target expression

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Cohen, Romy. "Développement d'anticorps à domaine unique comme vecteurs ciblant des récepteurs impliqués dans la transcytose et traversant la barrière hémato-encéphalique pour l'adressage d'agents d'imagerie et thérapeutiques vers le cerveau." Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0394.

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Abstract:

L'efficacité thérapeutique de la majorité des molécules développées pour traiter les pathologies du système nerveux central (SNC) n’est pas optimale en raison des caractéristiques anatomiques et physiologiques uniques de la barrière hémato-encéphalique (BHE) qui joue un rôle majeur dans la protection du parenchyme nerveux. Une stratégie permettant de délivrer des agents pharmacologiques dans le cerveau est de détourner un système physiologique : la transcytose régulée par des récepteurs (RMT). Cette stratégie implique la conjugaison d’agents pharmacologiques à des vecteurs développés pour cibler spécifiquement des récepteurs présents au niveau de la BHE et impliqués dans des processus de RMT. Nous avons eu pour objectif de développer de nouveaux vecteurs spécifiques de récepteurs exprimés au niveau de la BHE. Nous avons tout d’abord construit une banque de phages présentant les vecteurs afin de réaliser différentes stratégies de sélection par phage display. A l’issue d’étapes de criblage, les vecteurs sélectionnés ont été produits et caractérisés (affinités pour les récepteurs, compétitions avec les ligands naturels…). Nous avons ensuite évalué le potentiel des vecteurs les plus prometteurs à transporter une biomolécule. Pour ce faire, deux vecteurs par récepteur ont été fusionnés à la région Fc d’une IgG1 humaine et la capacité des conjugués à traverser un modèle de BHE in vitro a été évaluée. Enfin, nous avons évalué la distribution cérébrale des vecteurs, chez la souris in vivo. L’ensemble de nos résultats démontre l'intérêt du ciblage des récepteurs choisis et le potentiel des de nos vecteurs pour des applications de délivrance cérébrale
The vast majority of the molecules developed to treat neurological diseases do not reach their targets efficiently enough because of the unique anatomical and physiological features of the blood-brain barrier (BBB) which plays a major protective role. Hijacking a physiological system named receptor-mediated transcytosis (RMT) is considered a promising route for brain delivery of pharmacological. This strategy involves the conjugation of pharmacological agents to vector molecules developed to specifically target receptors present at the BBB and involved in RMT processes. We aimed to develop new vectors specific for receptors expressed at the BBB. First, we constructed a phage library presenting vectors in order to perform various phage display selection strategies. Following screening steps, the selected vectors were produced and characterized (affinities for the receptors, competitions with natural ligands…). Then, we assessed the potential of the most promising vectors to carry a biomolecule. Two vectors per receptor were fused to a human IgG1 Fc region and the fusion proteins were tested for their ability to cross an in vitro model of the BBB. Finally, we evaluated the brain distribution of the vectors, in mice in vivo. Our results demonstrate the potential of our receptor-targeting vectors for brain drug delivery

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Duraffour, Sophie. "Utilisation de différents orthopoxvirus pour le développement de modèles substitutifs du virus de la variole afin d'évaluer l'activité antivirale." Aix-Marseille 2, 2008. http://www.theses.fr/2008AIX20663.

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Abstract:

A l’heure actuelle, le risque de réémergence de la variole n’est pas négligeable. Bien qu’une vaccination antivariolique efficace soit disponible en France, son utilisation reste contre-indiquée chez de nombreux sujets et notamment chez les individus immunodéprimés ou atopiques. Afin de traiter les infections à poxvirus, les recherches se sont orientées vers la sélection et la caractérisation de molécules antivirales actives et non toxiques. Dans cette thématique, nous avons développé trois types de recherches qui sont : (i) la caractérisation enzymatique de la protéine uracile ADN glycosylase du virus monkeypox, essentielle à la réplication virale et donc cible potentielle d’un traitement antiviral; (ii) le développement d’un modèle substitutif du virus de la variole, les modèles in vitro, ex vivo et in vivo du virus camelpox ; et enfin (iii) l’étude du mode d’action de la molécule ST-246 contre trois Orthopoxvirus, les virus de la vaccine, cowpox et camelpox
The intentional release of smallpox by bioterrorists is considered to be a significant threat. Although effective smallpox vaccines are available, adverse events to vaccination particularly in immunosupressed individuals can be life threatening. Thus, researches in the field of highly potent antiviral against poxviruses have been intensified. Here we report the use and the development of surrogate models of variola virus, using several related Orthopoxviruses, to study anti-poxviral compounds. We (i) characterized the DNA repair protein uracil-DNA glycosylase of monkeypox virus, which is essential for orthopoxvirus replication and thus its inhibition is a rational therapeutic strategy, (ii) developed in vitro, ex vivo and in vivo surrogate model of variola virus by using its closest known related virus, camelpox virus; and (iii) investigated the mode of action of a novel anti-orthopoxvirus molecule, ST-246, against three Orthopoxviruses, vaccinia, cowpox and camelpox viruses

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Rémy, Benjamin. "Développement d'une nouvelle génération de pansements antimicrobiens à base d'enzyme à activité lactonase." Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0391.

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Abstract:

Des bactéries utilisent un système de communication, quorum sensing (QS), qui leur permet de synchroniser leur comportement proportionnellement à la densité de population. Des bactéries pathogènes utilisent le QS pour coordonner leur virulence et la formation de biofilm. Bloquer le QS, quorum quenching (QQ), constitue donc une piste pour étendre l'arsenal thérapeutique antibactérien. Durant cette thèse, SsoPox, une lactonase hyperstable hydrolysant les acyl homosérine lactones (AHL) impliquées dans le QS de bactéries à Gram négative pathogènes comme P. aeruginosa, a été étudiée. Son utilisation dans des pansements contre les infections à P. aeruginosa a été évaluée. La résistance aux contraintes industrielles liées aux procédés de fabrication des pansements a été évaluée. SsoPox s'est montrée résistante à la chaleur, aux solvants organiques, au stockage à température ambiante et à la stérilisation. L’efficacité de l’enzyme a été montrée sur 2 souches modèles et 51 isolats cliniques de P. aeruginosa. SsoPox a été plus efficace que 2 inhibiteurs du QS. L’efficacité de l’enzyme est aussi conservée après immobilisation. Une étude phénotypique et moléculaire du QQ enzymatique de P. aeruginosa a été réalisée entre SsoPox et une autre lactonase GcL ayant un spectre d'action distinct sur les AHL. In vitro, il a été mis en évidence des impacts différents entre les 2 enzymes sur les facteurs de virulence et le biofilm. In vivo, il a été montré que seul SsoPox réduit la virulence de P. aeruginosa. L’expression des gènes du QS et le protéome ont confirmé des différences entre GcL et SsoPox. Ainsi SsoPox semble constituer un bon candidat pour le développement de pansements innovants
Bacteria use a communication system, or quorum sensing (QS), to synchronize group behaviors according to population density. Some pathogens use QS to coordinate virulence and biofilm formation. Interfering with QS, or quorum quenching, represents a target to extent antibacterial drug resources. Along this PhD project, SsoPox, a hyperstable lactonase, hydrolyzing acyl homoserine lactones (AHL) involved in the QS of Gram-negative pathogen bacteria like Pseudomonas aeruginosa was studied. SsoPox was studied and characterized for its use in wound dressing against P. aeruginosa infection. The enzyme resistance to industrial constraints encountered during wound dressings manufacturing processes was estimated. SsoPox demonstrated a high tolerance to heat, organic solvents, ambient temperature storage and to sterilization processes. The enzyme efficiency was shown on 2 model strains and 51 clinical isolates of P. aeruginosa. SsoPox was also more efficient than 2 well characterized QS inhibitors. The enzyme kept its efficiency even when immobilized. A last part was dedicated to phenotypical and molecular study of enzymatic QQ of P. aeruginosa. SsoPox and another lactonase GcL, having distinct AHL specificities, were compared. In vitro experiments highlighted different impacts between the enzymes on virulence factors and biofilm. An in vivo study showed that SsoPox, unlike GcL, was able to reduce P. aeruginosa virulence. QS gene expression and proteome study confirmed distinct impacts between each enzyme treatment s. Thus, SsoPox seems to be a prime candidate for development of innovative medical devices

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Naski, Nadia. "The p53, Mdm2 and Mdmx protein and mRNA interplay." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077158.

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Abstract:

Le facteur de transcription p53 est étudié dans le monde entier pour son rôle clé de suppresseur de tumeurs. En effet, le gène codant pour p53 est muté dans plus de 50% des cancers humains. Cependant, des transformations malignes peuvent aussi avoir lieu en présence d'une protéine p53 intacte. Celles-ci seraient causées par l'altération des voies de régulation en amont ou en aval de p53. Cette protéine est, en effet, finement régulée par une multitude de régulateurs positifs et négatifs. Mdm2 et son homologue Mdmx (aussi appelé Mdm4) sont les deux régulateurs négatifs majeurs de p53; ils peuvent se lier au suppresseur de tumeur et induire respectivement sa dégradation ou sa trans-répression. De plus, sous certaines conditions, p53 peut transactiver les gènes mdm2 et mdmx, impliquant ainsi les trois protéines dans des boucles de rétro-action négatives. Notre groupe a récemment montré qu'en plus de sa fonction inhibitrice, Mdm2 pouvait réguler p53 positivement en induisant la traduction de son ARNm. Mes résultats montrent que l'interaction entre la protéine Mdm2 et l'ARNm de p53 est strictement indépendante de l'interaction des deux protéines. Par contre, la conformation de l'ARNm de p53 semble jouer un rôle majeur dans son interaction avec Mdm2. De plus, étant donné l'importante homologie structurale que partagent Mdm2 et Mdmx, il nous semblait intéressant de vérifier si les deux protéines avaient des fonctions similaires. De façon surprenante, nous avons pu montrer que malgré sa capacité à se lier à l'ARNm de p53, Mdmx est incapable d'induire, à lui seul, la synthèse de p53, contrairement à Mdm2. Cependant, nous montrons que la protéine p53 est capable de lier la partie 5'UTR de l'ARNm de Mdmx et d'inhiber sa traduction de manière drastique, en conditions normales ou de stress génotoxique. Ces résultats ajoutent de nouvelles boucles de rétro-action au complexe réseau de régulation de p53
The p53 transcription factor is studied Worldwide for its key fonction as a tumour suppressor protein. Importantly, the gene coding for p53 is mutated in around 50% of human cancers. However, malignant transformation can also occur in a p53 WT context, and this is believed to be caused by the abrogation of the regulatory pathways upstream or downstream of p53. Indeed, p53 is tightly regulated by aplethora of positive and negative regulatory factors. Mdm2 and its homolog Mdmx (also called Mdm4) are two major negative regulators of p53. They can bind to the p53 protein and induce respectively its degradation or its transrepression. In addition, under specific conditions, p53 can transactivate the mdm2 and mdmx genes, thus implicating the three proteins in negative feedback loops. Interestingly, our group has also shown recently that in addition to its inhibitory function, Mdm2 could positively regulate p53 by enhancing its mRNA translation. Here, we show that the capacity of Mdm2 to bind to the/?53 mRNA is independent of their protein-protein interaction. However, the conformation of the p53 mRNA seems to play a key role in its interaction with Mdm2. Moreover, since Mdm2 and Mdmx share a high structural homology, it was interesting to investigate whether Mdmx could play similar functions. Surprisingly, even though it also binds to the p53 mRNA, Mdmx, by its own, is unable to trigger p53 synthesis, contrary to Mdm2. However, we show that the p53 protein is able to bind to the Mdmx transcript (on its 5'UTR) and drastically inhibit its translation, under normal and genotoxic conditions. Altogether, these data add new feedback loops into the intricate p53 regulatory network

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Morel, Jean-David. "Mechanism underpinning the immunosuppressive effects of the mycobacterial macrolide mycolactone." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. http://www.theses.fr/2018USPCC316.

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Abstract:

La mycolactone est un lipide diffusible produit par Mycobacterium ulcerans, la bactérie responsable d'une maladie tropicale de la peau appelée ulcère de Buruli. La production de mycolactone dans la peau infectée par M. ulcerans provoque une nécrose tissulaire locale, tout en induisant des anomalies immunosuppressives au niveau systémique. Lorsque j'ai commencé mon doctorat, les mécanismes moléculaires à l'origine de ces effets étaient inconnus. Au cours de ma thèse, j'ai contribué à démontrer que la mycolactone est un nouvel inhibiteur du translocon Sec61,le canal régulant la biogenèse de la plupart des protéines sécrétées et membranaires dans les cellules eucaryotes. J’ai démontré qu’une mutation ponctuelle dans la sous-unité alpha de Sec61 protège les cellules des effets cytotoxiques et immunosuppresseurs de la mycolactone. J'ai montré que le blocage du translocon Sec61 par la mycolactone empêche efficacement la synthèse des principaux récepteurs immunitaires et des molécules de signalisation du système immunitaire,blockant la communication entre les cellules immunitaires et inhibant l'immunité antimycobactérienne. Par une série d'études protéomiques à grande échelle, j'ai démontré que la mycolactone est un inhibiteur à large action de Sec61 et j’ai identifié les substrats de Sec61 les plus impactés dans différents types cellulaires. Ces analyses m'ont également permis de décrire la réponse au stress induite par le blocage de la translocation des protéines, qui inclut des éléments de la réponse au stress protéostatique (UPR) et de la réponse intégrée au stress (ISR), provoquant finalement l'apoptose cellulaire. Plusieurs études ont impliqué le translocon Sec61 dans des processus qui requièrent le transport rétrograde de protéines à travers les membranes : la Dégradation Associée au Réticulum Endoplasmique (ERAD), processus essentiel du contrôle de la qualité des protéines et la cross-présentation, une voie essentielle à l'activation de l'immunité adaptative aux pathogènes intracellulaires et au cancer. J'ai montré que le blocage de Sec61 par la mycolactone n'affecte pas l'export de protéines vers le cytosol dans ces deux voies, suggérant que Sec61 ne peut pas fonctionner comme un rétrotranslocon. Mes travaux ont permis d’élucider le moléculaire responsable des divers effets de la mycolactone observés chez les patients atteints d’ulcère de Buruli et de révéler l’importance majeure de la translocation des protéines dans la régulation des réponses immunitaires et de l’homéostasie des protéines
Mycolactone is a diffusible lipid produced by the human pathogen Mycobacteriumulcerans, the causative agent of a tropical skin disease called Buruli ulcer. Bacterial production of mycolactone in infected skin causes local tissue necrosis, while inducing immunosuppressive defects at the systemic level. When I started my PhD, the molecular mechanism(s) underpinning these effects were unknown. Over the course of my thesis, I contributed to demonstrate that mycolactoneis a novel inhibitor of the Sec61 translocon, a channel regulating the biogenesis of most secretedand membrane proteins in eukaryotic cells. Indeed, a single point mutation in the alpha subunit ofSec61 protected cells from the cytotoxic and immunosuppressive effects of mycolactone. I showed that mycolactone-mediated blockade of the Sec61 translocon efficiently prevents the synthesis ofkey immune receptors and signaling molecules, impeding the communication between immunecells that is required for the development of anti-mycobacterial immunity. Through a series of larges caleproteomic studies, I demonstrated that mycolactone is a broad-acting inhibitor of Sec61 and identified the Sec61 clients that are primarily down regulated by mycolactone in physiologicallyrelevant cell types. These analyses also allowed me to describe a unique stress response,encompassing elements of the unfolded protein response and integrated stress response, that isinduced upon protein translocation blockade and ultimately causes cell apoptosis. The Sec61 translocon has been proposed to play a role in other cell functions that require the retrograde transport of proteins across membranes, namely Endoplasmic Reticulum-Associated Degradation(ERAD), an essential process in protein quality control, and antigen export to the cytosol during cross-presentation, a pathway essential to the activation of adaptive immunity to intracellular pathogens and cancer. Using mycolactone, I showed that Sec61 blockade does not affect protein export to the cytosol in either of these pathways, arguing against Sec61 operating as are trotranslocon. Altogether, my work provided a molecular mechanism for the diverse effects of mycolactone in Buruli Ulcer patients, and thus for M. ulcerans virulence. Mycolactone representing the most potent Sec61 blocker identified to date, my studies also revealed the key importance of Sec61-mediated protein translocation in the regulation of immune responses and protein homeostasis

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Préaubert, Lise. "Reprotoxicité des nanoparticules : approche in vitro." Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0749.

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Abstract:

Les nanoparticules (NP) comportent au moins une dimension entre 1 et 100 nm. Les nanoparticules de dioxyde de cérium (NPCeO2) sont largement utilisées au niveau industriel, en particulier comme additif au carburant diesel, mais font aussi l’objet d’étude en cancérologie. L’OCDE a placé les NPCeO2 dans la liste des nanomatériaux nécessitant une évaluation urgente de leur toxicité.Plusieurs études ont démontré le passage de NP métalliques dans les gonades après exposition in vivo chez l’animal, mais très peu de données sont disponibles concernant les NPCeO2.L’objectif de ce travail a été dans un premier temps d’étudier la génotoxicité des NPCeO2 sur spermatozoïdes et ovocytes murins par exposition in vitro, ainsi que leur impact sur la fécondation in vitro (FIV) murine. Nous avons dans un second temps étudié leur génotoxicité sur spermatozoïdes humains in vitro.Nous avons montré une diminution significative des taux de fécondation chez la souris, lors des FIV réalisées en présence de NPCeO2 à faible concentration (0,01 mg/l). Nous avons également montré une génotoxicité significative des NPCeO2 à faibles doses sur ovocytes, spermatozoïdes de souris, et spermatozoïdes humains par le test des comètes. En microscopie électronique à transmission, nous n’avons pas retrouvé de NP dans les milieux de culture à 0,01 mg/l, mais observé une endocytose dans les cellules du cumulus entourant les ovocytes à forte concentration (100 mg/l) et une accumulation des NP le long des membranes des spermatozoïdes et des zones pellucides des ovocytes. Ces résultats apportent des informations nouvelles et importantes sur les mécanismes d’actions suspectés
The fast development of nanotechnology gives rise to questions regarding the potential risks on human health. Cerium oxide nanoparticles (CeO2NP) are widely used, as diesel additive, as well as promising therapeutic in cancerology, yet scarce data are currently available on their toxicity. It has been shown that metal nanoparticles can cross biological barriers and accumulate into various organs including the gonads after in vivo exposure. Our objectives were to investigate CeO2NP’s genotoxicity on mouse spermatozoa and oocytes, human spermatozoa, and to study their possible impact on murine IVF.We showed a significant decrease of fertilization rate, during IVF carried out in culture medium containing CeO2NP at very low concentration (0.01mg/l). We also showed significant DNA damage induced in vitro by CeO2NP on mouse spermatozoa and oocytes at 0.01 mg/l using Comet assay. TEM did not detect any nanoparticles in the IVF samples at 0.01 mg/l, but showed, at high concentration (100 mg/l), their endocytosis by the cumulus cells surrounding oocytes and their accumulation along spermatozoa plasma membranes and oocytes zona pellucida. We showed significant DNA damage induced by CeO2NP on human spermatozoa. The genotoxicity was inversely proportional to the concentration. At 0.01 mg/l, the genotoxicity mechanisms involved oxidative stress and close interactions between spermatozoa and CeO2NP.We demonstrate for the first time the impact of CeO2NP on in vitro fertilization, as well as their genotoxicity on mouse gametes and human sperm, at very low nanoparticle concentration exposure. These results support several publications on metal nanoparticles reprotoxicity

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Orlandi-Pradines, Eve. "Exposition de voyageurs à la transmission de plasmodium falciparum et aux moustiques vecteurs en afrique inter-tropicale." Aix-Marseille 2, 2007. http://www.theses.fr/2007AIX20693.

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Abstract:

Dans les zones d'endémie palustre, plusieurs méthodes de protection anti-vectorielle sont préconisées chez les voyageurs. Pour évaluer l'efficacité de ces méthodes, il est nécessaire d'évaluer le niveau individuel d'exposition aux vecteurs et à la transmission de Plasmodium falciparum. Les objectifs de la thèse étaient d'évaluer cette exposition et cette transmission chez des militaires en mission de courte durée (4-5 mois) en Afrique intertropicale par méthodes entomologiques, sérologiques et par télédétection. Les résultats ont montré une grande hétérogénéité temporo-spatiale de l'exposition, ont permis d'identifier des antigènes de P. Falciparum et de salive de moustiques utilisables pour évaluer cette exposition et ont démontré l'utilité de données de télédétection pour prédire le risque palustre chez des voyageurs. Ils ont aussi permis d'objectiver la protection conférée par les moustiquaires et le port de vêtement longs chez des voyageurs.

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Grosdidier, Charlotte. "Anti-plaquettaires et risque hémorragique : rôle du CD40L." Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM5063/document.

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Abstract:

Le traitement des patients avec une coronarographie après un SCA est l'aspirine et les thiénopyridines. La réponse aux thiénopyridines est variable, cette variabilité, multifactorielle, a des répercutions cliniques. Leur efficacité a été évaluée sur la réduction de la survenue d'évènements cliniques et peu sur le risque d'hémorragie qui est un effet indésirable majeur. Les plaquettes, jouent un rôle dans l'athérosclérose et les SCA notamment par le CD40L.J'ai étudié les facteurs plaquettaires conditionnant le risque hémorragique chez ces patients et apporté un éclairage sur des fonctions plaquettaires peu connues comme l'inflammation. Les génotypes du cytochrome P450 CYP2C19*2 et *17 ont une influence sur la réponse plaquettaire aux thiénopyridines et il existe une relation entre les complications hémorragiques et la réactivité plaquettaire.Une très faible réactivité plaquettaire (VASP<10%) est un facteur prédictif du risque hémorragique et les valeurs de VASP < 10 % sont plus fréquentes chez les patients traités par prasugrel. Nous avons ensuite ciblé un marqueur de l'état inflammatoire plaquettaire, le CD40L. Sa libération plaquettaire dépend de la voie du P2Y12, son expression, elle, dépend moins de cette voie. Une faible expression du CD40L est associée à des évènements hémorragiques chez les patients traités par thiénopyridines.Ainsi le déterminisme génétique de l'efficacité du traitement par thiénopyridines a un impact sur le risque hémorragique et d'autres paramètres plaquettaires influencent ce risque indépendamment de l'inhibition de l'agrégation plaquettaire. Le CD40L, serait un lien entre l'inflammation et l'équilibre saignement/thrombose
Aspirin and thienopyridine are the therapy for patients with percutaneous coronary intervention after ACS. The level of platelet inhibition by thienopyridine varies between patients, this variability, multifactorial, is associated with adverse clinical outcomes. Treatment efficacy was evaluated mainly on the association between poor thienopyridine response and thrombotic events but less on the principal side effect: bleeding complications. Platelet play a key role in atherosclerosis and thrombosis, notably via CD40L.I studied platelet factors that influence the bleeding risk in these patients and brought a new highlight on platelet function less known such as inflammation.P450 cytochrome genetic variants (2C19*2 and 2C19*17) influence platelet response to thienopyridines. There is a relation between platelet reactivity and bleeding events. A very low on-treatment platelet reactivity (VASP<10 %) is a predictor of bleeding and is mainly observed with prasugrel treatment. We then focussed on a marker of platelet inflammatory status, CD40L. Its release by platelets depends on P2Y12 signalling, whereas its surface expression is less dependent on this signalling pathway. A low platelet-CD40L surface expression is associated with bleeding events in these patients We show that genetic background on thienopyridine treatment efficacy is related to bleeding risk and that other platelet parameters influence the bleeding risk independently of platelet aggregation inhibition. Thus, a molecule of inflammation, CD40L, would be a link between inflammation and bleeding/thrombosis equilibrium

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Belhareth, Rym. "Tabac et grossesse." Thesis, Aix-Marseille, 2016. http://www.theses.fr/2016AIXM5007/document.

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Abstract:

Le tabagisme actif par la mère expose le fœtus en développement à des agents qui peuvent traverser la barrière placentaire et interférer avec les fonctions placentaires. Un large éventail de fonctions immunologiques, pourrait être compromises. Dans cette étude, nous avons évalué l'effet de l'extrait de la fumée de cigarette (CSE) sur les macrophages isolés à partir de placentas humains (pMφs), qui sont les principaux partenaires de l'immunité de fœto-maternelle innée. J’ai pu montrer que le CSE inhibe la formation des cellules géantes multinucléées (MGC). Cette propriété du CSE est spécifique aux macrophages car la fusion des macrophages dérivés des monocytes est inhibée lors de la formation de granulomes in vitro. J’ai également étudié l'absorption de particules et la production de cytokines par pMφs exposés au CSE. Le CSE a inhibé l'absorption des particules de zymosan, mais pas celle du zymosan opsonisé, ce qui suggère qu’il interfère avec les récepteurs phagocytaires et non phagocytaires. Le CSE augmente la libération de TNF et d'IL-33, et une diminue celle de l'IL-10, ce qui montre que l'équilibre entre les cytokines est affecté par le CSE. En outre, l’expression des métalloprotéinases telles que les MMP-1, MMP-10 et MMP-12, connues pour être impliquées dans le remodelage des tissus et la fusion des macrophages est dérégulée. Enfin, j’ai montré que la nicotine, l'un des principaux composés de tabac, n'a pas affecté les propriétés fonctionnelles des pMφs
Active smoking by the mother exposes the developing fetus to agents that can cross the placental barrier and interfere with placental functions. A wide range of immunological functions, including innate and adaptive immune responses, might be impaired. In this study, we assessed the effect of cigarette smoke extract (CSE) on macrophages isolated from human placentas (pMφs), which are major partners of innate feto-maternal immunity. I showed that CSE significantly inhibited the formation of multinucleated giant cells (MGCs). This property of CSE is specific to macrophages because the fusion of monocyte-derived macrophages is inhibited during the in vitro formation of granulomas. I also investigated particle uptake and cytokine production by pMφs exposed to CSE. CSE inhibited the uptake of zymosan, but not that of opsonized zymosan, suggesting that it interferes with phagocytic receptors, not with the phagocytic machinery of pMφs. CSE increased the release of Tumor Necrosis Factor and interleukin-33, and decreased that of interleukin-10, demonstrating that the balance between inflammatory and anti-inflammatory cytokines is affected by CSE. Furthermore, CSE enhanced the expression of metalloproteinase (MMPs) genes such as MMP-1, MMP-10 and MMP-12, known to be involved in tissue remodeling including macrophage fusion. Finally, I showed that nicotine, one of the major compounds of tobacco, did not affect the functional properties of pMφs

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Borselli, Diane. "Adjuvants pour limiter la consommation d'antibiotiques en médecine vétérinaire." Thesis, Aix-Marseille, 2017. http://www.theses.fr/2017AIXM0093/document.

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Abstract:

L’émergence de bactéries multirésistantes aux antibiotiques conduit la médecine humaine et vétérinaire à des impasses thérapeutiques. L’usage abusif des ATBs accélère et accentue fortement le processus d’antibiorésistance. Le but de mon travail de thèse était d’apporter une solution au problème de surconsommation d’ATBs en médecine vétérinaire, particulièrement dans les élevages, tout en garantissant la santé animale. Nous avons développé une approche de thérapie combinatoire basée sur l’association d’ATBs déjà existants avec des molécules adjuvantes. Nous avons ainsi évalué l’activité de différents dérivés polyaminés d’origine naturelle sur des pathogènes dits « ESKAPE » qui présentent une relevance clinique majeure en médecine humaine. Ces différentes études ont permis de développer des protocoles de criblage, mais également des méthodes permettant d’élucider leur impact sur la physiologie bactérienne.Nous avons testé l’activité de ces composés en combinaison avec le florfénicol, ATB couramment utilisé pour traiter les infections respiratoires chez le porc. Après avoir identifié un adjuvant au florfénicol, nous avons pu déterminer son mode d’action par différentes méthodes de fluorescence et de bioluminescence. Nous avons pu démontrer que le composé permet de potentialiser l’activité de l’ATB par une action membranotrope et par une inhibition de l'efflux, augmentant ainsi la concentration intracellulaire en ATB, mais également par une inhibition de la force proton motrice (FPM). La motricité flagellaire des bactéries, est un facteur de virulence fonctionnant avec la FPM nous avons pu mettre en évidence une inhibition de la mobilité par le composé
The constant increase of multidrug resistant bacteria is leaving clinicians and veterinarians with very limited options to treat bacterial infections. The main goal of my work was find a chemical solution to reduce the use of antibiotics in veterinary medicine, especially in swines, without affecting the health of the livestock. To achieve this goal, we have developed a drug combination approach based on the association of antibiotics with chemosensitizers, herein called adjuvants, some of which were polyamines derivatives from natural sources. To provide the proof of concept, combination of several derivatives from different chemical sources (marine sponges and plants) have been tested ex vivo on « ESKAPE » pathogens, which are among the most urgent bacterial threats. Results from these studies allowed us to develop procedures for screening antibacterial activities and methodologies for understanding the impact of the selected adjuvants on bacterial physiology.Florfenicol is a widely used antibiotic to treat respiratory infections in swine. Therefore, derivatives were further assessed in combination with florfenicol, and florfenicol adjuvants were identified. The mode of action of one chosen adjuvant on bacterial membranes was further investigated by using fluorescence and bioluminescence methods. Data showed that this molecule was able to potentiate the antibiotic activity by increasing its intracellular concentration (membranotrope activity and inhibition of efflux) but also causes inner membrane depolarization. Flagellar motility represents an important virulence factor which use PMF, and we showed a diminution of the motility's halo with our compound

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Dissertations / Theses on the topic 'Spermatogenèse – effets des médicaments et substances chimiques'

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