Dissertations / Theses: 'Spermatozoïde'

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Brugnon, Florence. "Apoptose du spermatozoïde et fertilité masculine." Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00726203.

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Abstract:

Pour mieux comprendre la signification des marqueurs d'apoptose dans les spermatozoïdes éjaculés humains, l'objectif de notre étude était de mesurer ces marqueurs dans les spermatozoïdes prélevés à différents niveaux du tractus génital masculin dans différentes situations physiopathologiques. Pour évaluer la qualité fonctionnelle de ces spermatozoïdes, des relations ont été recherchées entre l'expression de ces marqueurs et les résultats obtenus en assistance médicale à la procréation. Les marqueurs analysés sont des facteurs mis en jeu dans l'initiation et l'activation de l'apoptose (poly-caspases, caspase-3, -8 ou -9 activée(s)), et des signes précoces (externalisation de la phosphatidylsérine, PS) ou tardifs (fragmentation de l'ADN) de l'apoptose. Pour certains échantillons, une analyse ultrastructurale des spermatozoïdes a aussi été réalisée. la mesure de l'expression des caspases activées a fait l'objet d'une mise au point compte-tenu de l'hétérogénéité des populations spermatiques et de la faible quantité de spermatozoïdes disponibles. Finalement, nous avons retenu une mesure par double marquage associant un inhibiteur fluorescent vert des caspases activées et un colorant fluorescent rouge (Propidium Iodide) avec une détection soit en cytométrie en flux soit en microscopie à fluorescence selon la nature des spermatozoïdes analysés. Chez des patients présentant une agénésie bilatérale des canaux déférents, la proportion de spermatozoïdes vivants ou morts exprimant des caspases activées est plus élevée dans les spermatozoïdes testiculaires que dans les spermatozoïdes épididymaires suggérant une initiation du processus apoptique dans les testicules et une incapacité des spermatozoïdes épididymaires à initier l'apoptose. Dans ces conditions, en ICSI, le risque d'injecter un spermatozoïde apoptique dans un ovocyte est plus élevé avec les spermatozoïdes testiculaires et pourrait expliquer pour une part, les résultats de moins bonne qualité avec ces spermatozoïdes testiculaires qu'avec les spermatozoïdes épididymaires. Chez des patients infertiles, porteurs d'une translocation chromosomique réciproque ou Robertsonienne autosomique, il existe une expression plus importante des modifications ultrastructurales et des marqueurs biochimiques d'apoptose (caspases activées, fragmentation de l'ADN, externalisation de la PS) associée à des signes d'immaturité ultrastructurale, comparé aux spermatozoïdes d'hommes fertiles. Ces résultats pourraient expliquer que dans l'éjaculat de ces patients, il existe une prédominance de gamètes équilibrés sur le plan chromosomique. En effet, les gamètes présentant un déséquilibre auraient été éliminées préférentiellement par apoptose. En conclusion, les marqueurs d'apoptose exprimés par les spermatozoïdes éjaculés seraient le reflet d'une altération de la spermatogenèse avec une apoptose initiée et avortée dans le testicule associée à des anomalies de maturation et différentiation. La mesure des marqueurs d'apoptose dans les spermatozoïdes apporterait une aide dans la compréhension et la prise en charge de l'infertilité masculine, en particulier en assistance médicale à la procréation.

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Baume, Brugnon Florence. "Apoptose du spermatozoïde et fertilité masculine." Clermont-Ferrand 1, 2009. http://theses.clermont-universite.fr/nondiff/2009CLF1MM01.pdf.

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Abstract:

Pour mieux comprendre la signification des marqueurs d'apoptose dans les spermatozoïdes éjaculés humains, l'objectif de notre étude était de mesurer ces marqueurs dans les spermatozoïdes prélevés à différents niveaux du tractus génital masculin dans différentes situations physiopathologiques. Pour évaluer la qualité fonctionnelle de ces spermatozoïdes, des relations ont été recherchées entre l'expression de ces marqueurs et les résultats obtenus en assistance médicale à la procréation. Les marqueurs analysés sont des facteurs mis en jeu dans l'initiation et l'activation de l'apoptose (poly-caspases, caspase-3, -8 ou -9 activée(s)), et des signes précoces (externalisation de la phosphatidylsérine, PS) ou tardifs (fragmentation de l'ADN) de l'apoptose. Pour certains échantillons, une analyse ultrastructurale des spermatozoïdes a aussi été réalisée. La mesure de l'expression des caspases activées a fait l'objet d'une mise au point compte-tenu de l'hétérogénéité des populations spermatiques et de la faible quantité de spermatozoïdes disponibles. Finalement, nous avons retenu une mesure par double marquage associant un inhibiteur fluorescent vert des caspases activées et un colorant fluorescent rouge (Propidium Iodide) avec une détection soit en cytométrie en flux soit en microscopie à fluorescence selon la nature des spermatozoïdes analysés. Chez des patients présentant une agénésie bilatérale des canaux déférents, la proportion de spermatozoïdes vivants ou morts exprimant des caspases activées est plus élevée dans les spermatozoïdes testiculaires que dans les spermatozoïdes épididymaires suggérant une initiation du processus apoptique dans les testicules et une incapacité des spermatozoïdes épididymaires à initier l'apoptose. Dans ces conditions, en ICSI, le risque d'injecter un spermatozoïde apoptique dans un ovocyte est plus élevé avec les spermatozoïdes testiculaires et pourrait expliquer pour une part, les résultats de moins bonne qualité avec ces spermatozoïdes testiculaires qu'avec les spermatozoïdes épididymaires. Chez des patients infertiles, porteurs d'une translocation chromosomique réciproque ou Robertsonienne autosomique, il existe une expression plus importante des modifications ultrastructurales et des marqueurs biochimiques d'apoptose (caspases activées, fragmentation de l'ADN, externalisation de la PS) associée à des signes d'immaturité ultrastructurale, comparé aux spermatozoïdes d'hommes fertiles. Ces résultats pourraient expliquer que dans l'éjaculat de ces patients, il existe une prédominance de gamètes équilibrés sur le plan chromosomique. En effet, les gamètes présentant un déséquilibre auraient été éliminées préférentiellement par apoptose. En conclusion, les marqueurs d'apoptose exprimés par les spermatozoïdes éjaculés seraient le reflet d'une altération de la spermatogenèse avec une apoptose initiée et avortée dans le testicule associée à des anomalies de maturation et différentiation. La mesure des marqueurs d'apoptose dans les spermatozoïdes apporterait une aide dans la compréhension et la prise en charge de l'infertilité masculine, en particulier en assistance médicale à la procréation In order to have a better insight into the implications of apoptosis markers in human ejaculated spermatozoa, the aim of our study was to measure these markers in the spermatozoa collected at different levels in the male genital tract in various physiopathological situations. To analyse the functional quality of these spermatozoa, the analysis of relationships between the expression of these markers and the results obtained after assisted reproductive technology was assessed. The markers analysed are factors that are involved in the initiation and activation of apoptosis (activated poly-caspases, caspases-3, -8, -9) and early (externalisation of phosphatidylsérine, PS), or late (DNA fragmentation) signs of apoptosis. Ultrastuctural analysis of the spermatozoa was also carried out for some samples. Measurement of the expression of activated caspases was subject of adjustment given the heterogeneity of the sperm samples and the low quantity of spermatozoa available. Finally, we decided on measurement using a double staining associating a green fluorescent inhibitor for the activated caspases and a red fluorescen vital staining (Propidium Iodide), with detection either by flow cytometry or by fluorescent microscopy depending on the type of spermatozoa to be analysed. In patients presenting congenital bilateral absence of vas deferens, the proportion of living or dead spermatozoa expressing activated caspases was higher in the testicular spermatozoa than in the epididymal spermatozoa suggesting that the apoptotic process started in the testicles and that epididymal spermatozoa were incapable of initiating apoptosis. Under these conditions, in case of ICSI, the risk of injecting an apoptotic spermatozoa into an ovocyte is higher with the testicular spermatozoa and could explain, in part, the different and inferior results obtained with these testicular spermatozoa, compared with epididymal spermatozoa. In the ejaculated spermatozoa of infertile reciprocal or Robertsonian autosomal translocation carriers, the expression of ultrastructural modifications and biochemical markers of apoptosis (activated caspases, DNA fragmentation, PS externalisation) associated with signs of ultrastructural immaturity was higher than in spermatozoa of fertile men. These results could explain that in the ejaculate of these patients, there is a predominance of chromosomal balanced spermatozoa. The gametes presenting an imbalance would have been preferentially eliminated by apoptosis. In conclusion, the apoptosis markers expressed by ejaculated spermatozoa would reflect the impairment of spermatogenesis with apoptosis initiated and aborted in the testicle associated with maturation and differentiation abnormalities. So measurement of apoptosis markers in spermatozoa could be helpful for the understanding of male infertility, particularly to predict the outcome of assisted reproductive technologies

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Jumeau, Fanny. "Caractérisation du protéome du spermatozoïde humain." Thesis, Lille 2, 2013. http://www.theses.fr/2013LIL2S045/document.

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Abstract:

La spermatogenèse est un processus complexe qui se déroule dans le tube séminifère du testicule. Au cours de ce processus, la cellule germinale entre en méiose puis réalise de profondes transformations cytologiques comme la compaction de la chromatine, la formation de l’acrosome et du flagelle. Les organites cytoplasmiques comme l’appareil de Golgi et le reticulum endoplasmique sont éliminés. Le spermatozoïde est alors une cellule organisée qui ne réalise pas ou peu de synthèse protéique. De plus, à la sortie du testicule, le spermatozoïde n’est pas mobile et incapable de féconder l’ovocyte. C’est par des interactions avec son environnement, l’épididyme et les voies génitales féminines, qu’il acquiert pleinement ces fonctions. Ces interactions se traduisent par des modifications du protéome comme le clivage des protéines ou des modifications post-traductionnelles. Ainsi, l’approche protéomique représente une méthode pertinente pour appréhender la physiologie spermatique. Toutefois, le protéome spermatique a fait l’objet de peu d’études et reste mal connu. Dans cette étude, le protéome du spermatozoïde humain a été réalisé selon deux approches. L’électrophorèse bidimensionnelle est particulièrement adaptée pour l’étude des modifications post-traductionnelles tandis que le shotgun constitue une technologie puissante en terme de sensibilité et d’identification des protéines. Les analyses bioinformatiques ont permis d’identifier les familles de protéines surexprimées de façon significative au sein du protéome spermatique. Parmi celles-ci, les protéines d’associations aux microtubules ont été sélectionnées en raison de leur rôle fondamental dans la dynamique du réseau microtubulaire et par conséquent, la mobilité spermatique. Le profil d’expression de la DCDC2C, une protéine de la famille des domaines à doublecortines, a été caractérisé dans le testicule et le spermatozoïde humain. De plus amples investigations sont nécessaires afin de préciser son rôle dans la physiologie spermatique.Outre la compréhension de processus physiologiques, les outils protéomiques permettent l’identification de nouveaux marqueurs de qualité du spermatozoïde. La caractérisation de la qualité spermatique repose actuellement sur un examen descriptif, le spermogramme-spermocytogramme, qui ne permet pas toujours d’expliquer l’infertilité du couple. Ainsi, l’amélioration des outils diagnostics et de la prise en charge de la fertilité sont les enjeux de la Procréation Médicalement Assistée. Dans ce contexte, nous avons observé le protéome de 161 échantillons de spermes normaux (OMS 2010). L’analyse de ce protéome a permis de définir un nouvel index de qualité protéique (SPQI) Les études statistiques ont montré que le SPQI est significativement associé à la mobilité progressive du spermatozoïde. Ainsi, le SPQI pourrait être un nouveau marqueur de qualité du spermatozoïde. Un kit permettant d’établir le SPQI en routine diagnostique est en cours de développement Spermatogenesis is a complex process located in seminiferous tubules of the testis. Germ cell underwent meiosis during the process following many cytological modifications such as chromatin compaction, biogenesis of both acrosome and flagellum. Subcellular components like the Golgi apparatus and endoplasmic reticulum were eliminated. Spermatozoa is then a highly organized cell which realized no or little de novo protein synthesis. Spermatozoa is furthermore unable to move and fertilize an oocyte outside of the testis, as it fully becomes functional by interacting with its environment, the epididymis and the female genital tracts. These interactions are translated by modifications of the proteome as proteins cleavage or post-translational modifications. The proteomic approach represents then a relevant method to understand sperm physiology. Nevertheless, few studies are related to sperm proteome which remains poorly known. This study has been conducted using two different approaches. 2D-electrophoresis is especially adapted to post-translational studies while the shotgun approach is a powerful and sensible tool for protein identification. Bioinformatic analyses helped identifying protein families overexpressed in a meaningful way inside the sperm proteome. Microtubules-associated proteins were among those that have been selected due to their role in the dynamic of microtubule network, thus in the sperm motility. The DCDC2C expression profile, a protein belonging to the doublecortin containing domain family, has been characterized in the testis and in the human spermatozoa. Further investigations are necessary in order to define its role in the sperm physiology.Besides the understanding of physiological processes, proteomic tools allow the identification of new markers of sperm quality. The characterization of sperm quality currently relies on a descriptive test that is not yet capable of explaining the infertility of a couple. Improving the diagnostic tool and management of fertility are the main objectives of reproductive studies. We have therefore observed the proteome of 161 normal sperm samples (WHO 2010). The proteome analysis defined a new sperm protein quality index (SPQI). Statistic studies show that this SPQI is significantly related to the progressive motility of the sperm. SPQI could then be used as a new quality marker of the spermatozoa. A kit that could help establishing SPQI routinely is currently in process

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Sigala, Julien. "Qualité du protéome du spermatozoïde humain et infertilité." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S039/document.

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Abstract:

La mobilité est une fonction clé de la qualité fécondante et de sélection des spermatozoïdes des techniques d’assistance médicale à la procréation (AMP). Nous manquons cependant d'information des mécanismes moléculaires contrôlant cette mobilité. Ce travail de thèse est articulé autour de 2 protéines d’intérêts impliquées dans la mobilité spermatique: la protéine Tau (Tubule-associated unit) associée à la polymérisation des microtubules dans le neurone, et la protéine d’ancrage aux kinases A4 (AKAP4), protéine majeure de la gaine fibreuse du flagelle spermatique, connue pour son implication dans la mobilité spermatique.Très peu d’études traitent de la protéine Tau dans l’appareil génital masculin, et aucune chez l’homme. Dans une première partie de ce travail, nous avons analysé l’expression de la protéine Tau dans le spermatozoïde et le testicule humain par une approche immuno-histo-chimique (article 1). La protéine Tau est localisée dans la pièce intermédiaire du flagelle du spermatozoïde, et dans le spermatocyte et la spermatide dans le testicule. Les rôles potentiels de la protéine Tau durant la spermatogenèse sont discutés dans une revue de la littérature (article 2).Les avancées dans le domaine de la protéomique permettent aujourd’hui d’étudier le protéome du spermatozoïde et de ses compartiments cellulaires de façon hautement résolutive. Le protéome global du spermatozoïde a été étudié chez des hommes consultant le centre de procréation assistée du CHRU de Lille. Il a permis de définir un groupe de spermatozoïdes présentant majoritairement des protéines de haut poids moléculaire et un groupe présentant une protéolyse aux dépends des protéines de haut poids moléculaire. L’AKAP4 a été identifiée parmi les protéines de hauts poids moléculaire. Nous avons étudié, quantifié le profil d’expression de l’AKAP4 en Western Blot dans le sperme d’hommes venant effectuer un spermogramme et corrélé les données biochimiques du protéome et de l’AKAP4 au spermogramme (article en soumission 3). Le rôle de l’AKAP4 comme marqueur prédictif en AMP est ensuite abordé. Les données clinico-biologiques (logiciel INFOFIV) des tentatives d’AMP au CHRU de Lille ont été confrontées aux données quantitatives du protéome global et de l’AKAP4 (article en préparation 4).Les protéines Tau et AKAP4 sont des protéines d’intérêts dans la prise en charge de l’homme infertile. L’AKAP4 pourrait être proposée comme biomarqueur dans la prise en charge en AMP Motility is a key function of the fertilizing quality and the selection of sperm for assisted reproductive technology (ART). However, we lack information on molecular mechanisms controlling this mobility. This thesis is structured around 2 proteins of interest involved in sperm mobility: Tau (tubule-associated unit) associated with microtubule polymerization in the neuron, and the A-kinase anchoring protein 4 (AKAP4), the main protein of the fibrous sheath of the sperm’s flagellum, known for its involvement in sperm motility.Very few studies focus on the Tau protein in the male reproductive system, and none in humans. In the first part of this work, we analysed the expression of the Tau protein in the sperm and human testis through an immuno-histo-chemical approach (Article 1). The Tau protein is localized in the intermediate part of the sperm flagellum and in the spermatocyte and spermatid in the testis. The potential roles of the Tau protein during spermatogenesis are discussed in a review of the literature (Article 2).Advances in the field of proteomics now allow the study the proteome of sperm and its cellular compartments in a highly-resolutive way. The global sperm proteome was studied in men visiting the assisted reproduction center of Lille University Hospital. This has led to a group of sperm with predominantly high molecular weight proteins being identified as well as a group having proteolysis at the expense of high molecular weight proteins. The AKAP4 was identified among the high molecular weight proteins. We studied, quantified the profile of AKAP4 expression by Western Blot in the sperm of men undergoing a semen analysis and correlated the biochemical data of the proteome and AKAP4 to the semen analysis (article 3 in submission). The role of AKAP4 as a predictive marker of ART success is then discussed. Clinical and biological data (INFOFIV software) of ART attempts at the Lille University Hospital were compared with quantitative data of the global proteome and AKAP4 (Article 4 in preparation).Tau protein and AKAP4 are proteins of interest in the management of infertile men. The AKAP4 could be proposed as a biomarker in ART treatments

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Escalier-Boulonnois, Denise. "Le cytosquelette du spermatozoïde humain : structure et anomalies." Paris 11, 1985. http://www.theses.fr/1985PA112308.

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Abstract:

La première partie de cette thèse présente la matrice cytoplasmique du spermatozoïde humain et la deuxième les anomalies du cytosquelette de cette cellule (flagelle du spermatozoïde, microtubules de la spermatide). Les techniques employées sont l’analyse morphométrique ultrastructurale (stéréologique ou non), l’immunocytochimie (anticorps monoclonaux), la microcinématographie et l’intéraction gamétique hétérospécifique. La matrice cytoplasmique est constituée de ponts d’aspect filamenteux. Il existe de la tubuline au niveau de la tête spermatique. Les pathologiques flagellaires consistent en des anomalies des microtubules et des composants qui leur sont associés (axonémaux et périaxonémaux). Une distribution différentielle des épitopes de tubuline le long du flagelle est montrée. Les spermatozoïdes à noyau géant sont dus à la formation de fuseaux de division monopolaires au moment de la méiose. La constitution biochimique et les fonctions des différents éléments du cytosquelette du spermatozoïde de mammifère sont discutées.

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Lemoine, Manuela. "La réaction acrosomique du spermatozoïde chez le coq." Thesis, Tours, 2009. http://www.theses.fr/2009TOUR4005.

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Abstract:

L’objectif de la thèse a été d’apporter des éléments sur la réaction acrosomique (RA) aviaire afin de mieux comprendre les processus menant à la fécondation et de mieux maîtriser la capacité des spermatozoïdes à être conservés. Nos résultats ont conforté l’hypothèse de l’absence de capacitation chez les oiseaux. De plus, il n’y a pas d’hyperactivation de la mobilité lors de la RA. Seul le Ca2+ s’avère être l’élément indispensable au déclenchement de la RA. L’évaluation de la RA avec des spermatozoïdes conservés à l’état liquide ou après cryoconservation a révélé une évolution différente en fonction du type de conservation. L’étude des voies de signalisation susceptibles d’être impliquées dans le déclenchement de la RA a suggéré l’activation de 3voies, PKA, PI3K et MAPK ERK. Ce travail ouvre de nombreuses perspectives scientifiques vers l’approfondissement des connaissances de la RA chez les oiseaux et sur l’utilisation qui peut en être faite pour mieux maîtriser la qualité des gamètes The aim of this work was to provide new information on chicken acrosome reaction (AR) for a better comprehension of the mechanisms leading to this reaction and a better control of the fertilizing potential of spermatozoa after in vitro storage. Our results showed that calcium is the factor absolutely necessary to initiate the AR and supported the hypothesis that chicken spermatozoa do not need to be capacitated. Moreover, motility hyperactivation was not found at the time of AR. Then, we showed that chicken sperm ability to undergo the AR may differ depending on the type of semen storage. Indeed, this ability was dramatically affected by liquid storage, but was submitted to contrasted effect after cryopreservation. Finally, we investigated the potential involvement of several signaling pathways in initiation of the chicken AR and the results showed that the AR could be mediated by activation of the PKA, PI3K and ERK MAPK pathways

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Gatimel, Nicolas. "Morphométrie des vacuoles du spermatozoïde humain : intérêt physiopathologique." Thesis, Toulouse 3, 2016. http://www.theses.fr/2016TOU30164.

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Abstract:

Depuis plus de 30 ans, de nombreuses publications se sont attachées à expliquer la physiopathologie des anomalies morphologiques du spermatozoïde humain et ont mis en évidence des corrélations entre le pourcentage de formes normales et certaines anomalies fonctionnelles et des relations avec certains facteurs d'exposition. Le caractère physiologique de la plupart des " traits " morphologiques du spermatozoïde humain rend très difficile l'interprétation du spermocytogramme en dehors des syndromes d'anomalies monomorphes. A ces difficultés d'interprétation, viennent se rajouter le manque cruel de fiabilité analytique des techniques actuelles pour l'évaluation de la morphologie du spermatozoïde humain rendant très difficile l'utilisation de seuil décisionnel pour le choix d'une technique d'Assistance Médicale à la Procréation. Cette morphologie est classiquement observée sur lame après coloration (de Schorr le plus souvent). Il a récemment été développé une technique d'observation des spermatozoïdes mobiles associant un contraste interférentiel de Nomarski et un fort grossissement numérique et optique de x6000 au total permettant de mieux déceler certaines anomalies et notamment des vacuoles au niveau de la tête des spermatozoïdes. Cette technique est appelé MSOME (Motile Sperm Organelle MorphologyExamination). L'origine de ces vacuoles reste controversée, sont-elles d'origine nucléaire ou acrosomique ? Certains auteurs ont mis en évidence une relation entre la présence de larges vacuoles et des anomalies de condensation de la chromatine. De plus, beaucoup de questions subsistent quant au réel intérêt diagnostic du MSOME. Au cours d'un premier travail j'ai essayé d'amener un argument supplémentaire à l'origine des vacuoles. J'ai étudié le cas de deux patients atteints de globozoospermie totale (patients porteurs de spermatozoïdes sans acrosome confirmé par microscopie électronique). Au cours de ce travail, outre l'analyse morphométrique des vacuoles avec le MSOME, j'ai utilisé des techniques d'immunofluorescence (lectines PNA et anticorps anti-CD46) pour analyser le statut acrosomique et des techniques TUNEL (terminal deoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnick-end labelling assay) et SCSA (spermchromatin structure assay) pour le statut nucléaire du spermatozoïde. Les deux patients avaient un nombre et une surface vacuolaire (6,3% et 5%) très similaires à celles de 12 témoins fertiles (5%) permettant d'exclure une origine acrosomique de la plupart de ces vacuoles. Je me suis ensuite intéressé à l'impact de la congélation du sperme (très utilisé en pratique clinique) sur l'apparition de ces vacuoles. Après analyse morphométrique précise à l'aide d'un logiciel d'analyse d'image de plus de 2000 spermatozoïdes avant et après congélation (27 individus) je n'ai retrouvé aucune différence statistiquement significative en termes de nombre, surface et position de ces vacuoles entre avant et après congélation. De nombreux auteurs plaident en faveur d'une utilisation en pratique clinique de cette évaluation des vacuoles à fort grossissement sans qu'il n'y ait aucune donnée sur la présence de ces vacuoles dans une population de référence (témoins fertiles). J'ai donc réalisé une analyse morphométrique précise de ces vacuoles dans une population de 50 témoins fertiles. La très grande fréquence de ces vacuoles (95,8 %) dans cette population souligne le caractère physiologique de la plupart d'entre elles For over 30 years, many publications have sought to explain the pathophysiology of human sperm morphological abnormalities and showed correlations between the percentage of normal forms and functional defect and some relationships with some exposure factors. The physiological nature of most of the "features" of human sperm morphology makes the interpretation of human sperm morphology very difficult except for monomorphic defects. To these difficulties of interpretation, come to add the lack of analytical reliability of current techniques for assessing human sperm morphology making very difficult the use of threshold of normal forms for the choice of medical treatment of infertile couple in Assisted Reproductive Treatment. Recently a new aspect of sperm morphology, the head vacuoles, has shown to be of interest. The vacuoles can be easily observed using Nomarski interference contrast microscopy at high magnification: ×6000 to 10000 (optical magnification ×1000 associated with digital enhancements that achieves a final magnification up to 6000) even on motile spermatozoa (MSOME: Motile Sperm Organellar Morphology Examination). The origin of these vacuoles raises many questions. Several studies have found a link between chromatin condensation defects and the presence of sperm head vacuoles and clinical interest of MSOME is still somewhat debated. To add new arguments concerning the origin of the sperm-head vacuoles observed under high magnification with interference contrast microscopy, we carried out in two patients with total globozoospermia confirmed using transmission electron microscopy (TEM), a detailed sperm morphometric analysis with MSOME, an acrosomal status analysis (using fluorescent labelling with peanut agglutinin (PNA) lectins and anti-CD46 antibodies) and a nuclear status analysis (using terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labelling assay TUNEL, sperm chromatin structure assay SCSA and aniline blue staining). Our two patients with globozoospermia had relative sperm vacuole areas of 6.3% and 5%, similar to those observed in a reference population of 12 fertile men (5.9%). This study provides further information on the non-acrosomal origin of the sperm-head vacuoles. Since the development of MSOME for observing the cephalic vacuoles at high magnification, no study as yet assessed the effect of cryopreservation on these vacuoles, although sperm freezing-thawing procedures are known to affect sperm quality. In 27 sperm samples from fertile men, morphological analysis at high magnification (·6000) using image analysis software was performed before freezing and after thawing, there was no evidence for any difference in any vacuolar criteria (relative vacuole area, total vacuole area, vacuole area in the anterior, median and basal parts of the head, percentage of spermatozoa with a vacuole area < 6.5% and percentage of spermatozoa with a vacuole area >13%). Freezing-thawing procedures have no effect on human sperm vacuoles. In order to establish reference values concerning sperm vacuoles and to know if the assessment of sperm vacuoles at high magnification can contribute to the explanation of idiopathic infertility, I investigated the number, position and area of sperm head vacuoles using an image analysis software in 50 fertile men and 50 infertile men were within couples who had unexplained infertility and were consulting in our centre. After analysis, the characteristics of sperm head vacuoles (number, area, position) are no different between fertile controls and patients with unexplained infertility

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Boulais, Myrina. "Métabolisme énergétique du spermatozoïde d'huître creuse (Crassostrea gigas)." Thesis, Brest, 2014. http://www.theses.fr/2014BRES0116/document.

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Abstract:

Cette thèse présente une étude du métabolisme énergétique du spermatozoïde d’huître creuse, Crassostrea gigas. Les principaux objectifs sont (1) d’établir la dynamique des caractéristiques cellulaires et biochimiques du spermatozoïde de cette espèce durant la phase de mouvement, (2) d’identifier les voies de synthèse d’ATP et leurs substrats et (3) de déterminer l’implication du métabolisme énergétique dans le succès à la fécondation du spermatozoïde de cette espèce. Les résultats de ce travail montrent la longue durée du mouvement (de 24 à 72h) du spermatozoïde d’huître creuse et le maintien d’une concentration élevée en ATP intracellulaire, jusqu'à la fin du mouvement. Le rôle de la phosphorylation oxydative (OXPHOS) dans la synthèse d’ATP a été mis en évidence. Le spermatozoïde d’huître creuse montre une grande plasticité dans l’utilisation de ses voies de production d’énergie, assurant la synthèse d’ATP par d’autres voies qu’OXPHOS lorsque la mitochondrie est inhibée. L’accumulation de phosphoarginine en fin de mouvement montre une capacité de stockage de l’ATP synthétisé. La nature des substrats endogènes utilisés pour la synthèse d’ATP reste cependant à déterminer. La forte capacité de régulation du métabolisme énergétique du spermatozoïde d’huître creuse, associée à la possibilité de synthétiser de l’énergie au cours de sa longue phase de nage, contribuent probablement au succès du peuplement observé chez cette espèce. Ce travail apporte une première description du métabolisme énergétique du spermatozoïde d’huître creuse, améliorant la connaissance fine de cette cellule The present study aims at describing the energy metabolism of Pacific oyster, Crassostrea gigas, spermatozoon. The main objectives are: (1) describing the kinetic of cellular and biochemical characteristics of Pacific oyster spermatozoon during its movement phase, (2) identifying the metabolic pathways to produce energy and their substrates, (3) determining the involvement of energy metabolism in fertilization success. The results showed the long duration (ranging 24 to 72h) of the movement of Pacific oyster spermatozoon and the maintenance of a high intracellular ATP content until the end of the movement phase. The role of oxidative phosphorylation (OXPHOS) in ATP production was highlighted. Alternative ATP producing pathways might contribute to sustain energy production when OXPHOS is impaired, showing the high adaptation capacity of Pacific oyster spermatozoa. An increase of phosphoarginine content observed at the end of the movement phase suggests energy storage capacity. Endogenous substrates involved in ATP synthesis must be determined. Both the high regulation capacity of the energy metabolism of Pacific oyster spermatozoa and their ability to restore energy stores catabolized during movement likely contribute to the successful settlement observed in the wild. In conclusion, this work provided a fine description of energetic metabolism of Pacific oyster spermatozoon

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Roux, Christophe. "Contribution à l'étude de la chromatine du spermatozoïde humain." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S029.

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Arkhis, Ahmed. "Contribution à l'étude des nucléoprotéines basiques du spermatozoïde humain." Paris 12, 1992. http://www.theses.fr/1992PA120001.

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Abstract:

Apres purification et caracterisation des proteines intermediaires (hpi1, hpi2, hps1, hps2) et des protamines de type p2(hp2, hp3, hp4), l'etude a montre que toutes ces proteines sont structurellement et immunologiquement apparentees. En effet, toutes ces proteines partagent une sequence c-terminale de 54 residus equivalent a la protamine hp3. En tenant compte des homologies de structure et de la taille de ces proteines, la proteine hpi1 peut etre consideree comme le precurseur des protamines hp2, hp3 et hp4. La protamine hpi1 subit une maturation pendant laquelle les proteines hpi2 (81 residus), hps1 (69 residus) et hps2 (66 residus) sont liberes et correspondent donc a trois pro-protamines. Dans ce groupe, la protamine hp2 s'est revelee phosphorylee. La protamine hp1 (de type p1) se trouve sous forme non phosphorylee mono et diphosphorylee. L'analyse quantitative de ces memes proteines isolees a partir de spermatozoides d'hommes steriles met en evidence des modifications dans la teneur de ces proteines suggerant un disfonctionnement dans le processus de maturation. Ceci pourrait etre a l'origine de la sterilite

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Desrosiers, Pascal. "Effets de la cryoconservation sur différentes fonctions du spermatozoïde humain." Thesis, Université Laval, 2006. http://www.theses.ulaval.ca/2006/23630/23630.pdf.

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Pierre, Virginie. "L'acrosome du spermatozoïde de sa biogenèse à son rôle physiologique." Thesis, Grenoble, 2013. http://www.theses.fr/2013GRENS035/document.

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Abstract:

Le spermatozoïde est une cellule hautement spécialisée qui doit être capable de réaliser des fonctionsspécifiques pour être capable de féconder un ovocyte. Il doit être capable de réaliser une réactionacrosomique qui consiste en l’exocytose d’une vésicule géante de sécrétion attachée au noyau. Cettevésicule contient des enzymes qui vont permettre au spermatozoïde de traverser la zone pellucide quientoure l’ovocyte. Mon travail a consisté à étudier l’effet d’une des enzymes contenue dansl’acrosome, la sPLA2 de mammifère de groupe X (mGX). C’est la seule phospholipase demammifères parmi les 5 testées qui a un effet d’inhibition sur une population spécifique despermatozoïdes ayant une mobilité diminuée. Mon travail a ainsi confirmé la spécificité de cettephospolipase sur la régulation de la physiologie spermatique. Dans un deuxième temps, j’ai participéà la découverte du gène DPY19L2 impliqué dans une infertilité masculine rare, la globozoospermie.La globozoospermie se caractérise par des spermatozoïdes ayant une tête ronde dépourvued’acrosome. Le gène DPY19L2 est spécifiquement exprimé dans les testicules, il est absent chez80% des patients globozoospermiques. J’ai caractérisé le rôle de cette protéine et montré qu’elle estimpliquée dans l’attachement de l’acrosome au noyau. J’ai pu montrer que cette protéine appartient àla membrane nucléaire interne où elle interagit avec la protéine Sun5, une protéine qui appartientaussi à la membrane nucléaire interne et dont l’expression est spécifique à la spermiogénèse. Sun5est impliquée dans la formation de complexes LINC (Linker of Nucleoskeleton and Cytoskeleton)qui permettent de relier le cytosquelette au nucléosquelette, constitué entre autres par les lamines. Lerôle de DPY19L2 pourrait permettre de stabiliser l’ancrage de la protéine SUN5 afin de transmettreles forces exercées par le cytosquelette au noyau de la spermatide. DPY19L2 appartient à une famillede protéines DPY19L1 à L4 dont les fonctions restent encore peu caractérisées. Une étude récentemontre qu’une diminution de l’expression de Dpy19l1 chez la souris entraîne un défaut de migrationdes neurones glutamatergiques sur la glie radiale. Mon travail a montré l’importance de DPY19L2dans le contrôle des interactions noyau-cytosquelette et devrait permettre de mieux comprendre lerôle des autres protéines de cette famille dans divers organes The spermatozoon is a highly specialized cell that must be able to perform specific functions tofertilize the oocyte. It must be able to perform the acrosome reaction, an exocytosis of a giant vesicleof secretion, attached to the nucleus. This vesicle contains enzymes that allow the sperm to penetratethe zona pellucida surrounding the oocyte. The aim of my work was first to study the effect of anenzyme present in the acrosome, the sPLA2 of group X in mouse (mGX). This is the onlymammalian phospholipase among the five tested that has an inhibitory effect on sperm specificpopulation with low mobility. My work has confirmed the specificity of this phospolipase on theregulation of sperm physiology. Second, I participated in the discovery of the gene DPY19L2involved in male infertility, globozoospermia. The globozoospermia is characterized by round headspermatozoa without acrosome. DPY19L2 gene is specifically expressed in the testis and is absent in80% of globozoospermic patients. I then identified the role of this protein, which is involved in theattachment of the acrosome to the nucleus. I showed that this protein belongs to the inner nuclearmembrane where it likely interacts with the protein sun5 which also belongs to the inner nuclearmembrane and whose expression is specific to spermiogenesis. Sun5 is involved in the complexformation, called LINC that connects the cytoskeleton to the nucleoskeleton lamina. The role ofDpy19l2 could help stabilizing the anchoring of protein sun5 in order to transmit the forces exertedby the cytoskeleton to the nucleus of the spermatid during acrosome spreading. Dpy19l2 belongs to aprotein family containing 4 members, Dpy19l1 to l4, which has not been poorly studied so far. Arecent study shows that the knock-down of Dpy19l1 resulted in defective glutamatergics neuronsmigration on the radial glia. The results obtained during my work would improve the knowledge ofCytoskeleton-nucleoskeleton interaction, and give new insight on this new family of proteins

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Dewimille, Philippe. "Un modèle simple de reptation cellulaire : le spermatozoïde des nétamones." Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066022.

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Kann, Marie-Louise. "Le spermatozoïde de mammifère : recherches sur la motilité et le cytosquelette." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05S009.

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Gilbert, Isabelle. "Identification et fonctions des ARN messagers du spermatozoïde bovin étude du transcriptome." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2006. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3875.

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Abstract:

Chez les mammifères, la spermaogenèse métamorphose la spermatide en spermatozoïde. Durant ce processus une condensation extrême du noyau et une perte de la majorité du cytoplasme se produit. Le spermatozoïde devient une cellule légère et motile afin qu'il puisse exécuter sont but ultime: féconder l'ovule. De par son extrême remodelage, la majorité des andrologistes considèrent le gamète mâle comme une cellule quiescente au point de vue transcriptionnel et traductionnel. Depuis une dizaine d'années, plusieurs études ont démontré la présence d'ARN messagers dans le spermatozoïde. Généralement, ces transcrits sont considérés comme des vestiges de la spermatogenèse, toutefois certains travaux ont établi une possibilité de fonction associée à ces messagers retrouvés dans le spermatozoïde. Ces derniers pourraient avoir un rôle dans le potentiel de fertilité ou représenter une signature de la qualité de la spermatogenèse. Ils pourraient de plus soutenir un développement embryonnaire normal. L'objectif principal de ce travail porte sur la caractérisation des ARN messagers (ARNm) trouvés dans les spermatozoïdes bovins. En premier lieu, l'intégrité des ARN contenus dans le spermatozoïde bovin a été évaluée par deux approches (SMART, micro-électrophorèse). Dans un deuxième temps, mes travaux ont consisté à dresser un inventaire des messagers retrouvés dans le gamète mâle du taureau à l'aide de la technique de micropuces à ADN. Finalement, la présence de certains candidats a été suivie durant le développement embryonnaire précoce par RT-PCR. Les études d'intégrité ont révélé une prépondérance de fragments de faibles tailles suggérant une dégradation partielle et naturelle de la population d'ARNm spermatique. L'analyse de biopuce a démontré la présence d'un grand nombre de messagers impliqués dans toutes sortes de fonctions cellulaires suggérant qu'ils représentent une sous population des ARN retrouvés dans les stades précédents de la spermatogenèse. Le suivi de certains candidats durant le développement embryonnaire précoce semble être influencé par la présence de plusieurs spermatozoïdes pris dans la zone pellucide des zygotes. Toutefois, dans les embryons sans zone pellucide, il ne semble pas y avoir de transcrits spermatiques de détectés. En conclusion, la grande diversité des ARN et le manque d'intégrité indiquent qu'il est peu probable que ces ARN aient un rôle crucial dans le développement embryonnaire. Par contre, l'obtention du transcriptome associé aux spermatozoïdes nous permettra peut-être d'établir une empreinte définissant la qualité du gamète mâle. Ces travaux sont une étape de défrichage essentielle qui permettra par la suite de cibler les candidats les plus prometteurs qui permettront de déterminer le potentiel fertile des taureaux.

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Maréchal, Loïze, and Loïze Maréchal. "La Phosphodiestérase 10 (PDE10) dans la physiologie du spermatozoïde, caractérisation, localisation et fonction." Master's thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27504.

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Abstract:

Sur onze familles actuellement connues, la phosphodiestérase 10 (PDE10) est une des plus récemment découverte. Si elle est surtout exprimée dans le cerveau (striatum), où elle a beaucoup été étudiée car impliquée dans plusieurs pathologies neurologiques, elle est aussi exprimée dans le testicule. Cette PDE est capable d'hydrolyser à la fois l'AMPc et le GMPc, mais est bien plus efficace sur le premier. Ce mémoire sera consacré à l'étude de la PDE10 dans le spermatozoïde, depuis sa découverte et sa caractérisation, jusqu'à des ébauches de pistes sur sa régulation et son rôle dans la physiologie spermatique. L'étude se concentrera principalement sur un modèle bovin, mais des aspects humains de la PDE10 spermatique y seront également abordés. On y apprendra que l'isoforme retrouvée chez le bovin est celle nommée PDE10X4 et que celle retrouvée chez l'humain lui est très similaire. La protéine est retrouvée dans la région acrosomale du spermatozoïde et semble plutôt cytosolique, même si une association aux membranes n'est pas exclue. La protéine semble faire partie de complexes protéiques de haut poids moléculaire dont les autres membres restent à déterminer. La régulation de PDE10 spermatique semble assez différente de ce que l'on retrouve dans le striatum, puisque dans le gamète mâle, on ne retrouve ni phosphorylation ni palmitoylation de PDE10. L'impact de PDE10 sur la phosphorylation des protéines et la motilité des spermatozoïdes est abordé. Pour terminer, PDE10 semble impliquée dans la réaction d'acrosome, mais son rôle précis reste encore à définir. Sur onze familles actuellement connues, la phosphodiestérase 10 (PDE10) est une des plus récemment découverte. Si elle est surtout exprimée dans le cerveau (striatum), où elle a beaucoup été étudiée car impliquée dans plusieurs pathologies neurologiques, elle est aussi exprimée dans le testicule. Cette PDE est capable d'hydrolyser à la fois l'AMPc et le GMPc, mais est bien plus efficace sur le premier. Ce mémoire sera consacré à l'étude de la PDE10 dans le spermatozoïde, depuis sa découverte et sa caractérisation, jusqu'à des ébauches de pistes sur sa régulation et son rôle dans la physiologie spermatique. L'étude se concentrera principalement sur un modèle bovin, mais des aspects humains de la PDE10 spermatique y seront également abordés. On y apprendra que l'isoforme retrouvée chez le bovin est celle nommée PDE10X4 et que celle retrouvée chez l'humain lui est très similaire. La protéine est retrouvée dans la région acrosomale du spermatozoïde et semble plutôt cytosolique, même si une association aux membranes n'est pas exclue. La protéine semble faire partie de complexes protéiques de haut poids moléculaire dont les autres membres restent à déterminer. La régulation de PDE10 spermatique semble assez différente de ce que l'on retrouve dans le striatum, puisque dans le gamète mâle, on ne retrouve ni phosphorylation ni palmitoylation de PDE10. L'impact de PDE10 sur la phosphorylation des protéines et la motilité des spermatozoïdes est abordé. Pour terminer, PDE10 semble impliquée dans la réaction d'acrosome, mais son rôle précis reste encore à définir. Eleven phosphodiesterases (PDE) families are actually known and PDE10 is one of the most recently discovered. It is expressed principally in the brain where it is involved in some mental disorders, and then well studied. But it is also expressed in the testis, where less is known. PDE10 can degrade both cAMP and cGMP but is way more potent with the first one. This memoir is about the situation of the PDE10 in the spermatozoa, from its characterization and localization to the first steps toward its regulation and its functions in the sperm physiology. Although we will focus on a bovine sperm model, we will also have a look on the situation in human spermatozoa. We show that the bovine PDE10 isoform found in the spermatozoa correspond to the predicted PDE10X4 sequence and that the one found in human spermatozoa is really similar. The protein localizes in the acrosomal region and is probably cytosolic, although we can't exclude an association to membranes. PDE10 seems to be part of high molecular weight protein complexes but we need to identify the other protein members. The regulation of PDE10 seems different in spermatozoa than in the striatum where the protein is spatially and functionally regulated by phosphorylation and palmitoylation. These two events don't occur in the male gamete. We will consider the impact of the PDE10 on the protein phosphorylation status and on the control of the motility. In the end, we PDE10 seems to have an impact on the acrosomal reaction, but further work is needed to understand its precise role. Eleven phosphodiesterases (PDE) families are actually known and PDE10 is one of the most recently discovered. It is expressed principally in the brain where it is involved in some mental disorders, and then well studied. But it is also expressed in the testis, where less is known. PDE10 can degrade both cAMP and cGMP but is way more potent with the first one. This memoir is about the situation of the PDE10 in the spermatozoa, from its characterization and localization to the first steps toward its regulation and its functions in the sperm physiology. Although we will focus on a bovine sperm model, we will also have a look on the situation in human spermatozoa. We show that the bovine PDE10 isoform found in the spermatozoa correspond to the predicted PDE10X4 sequence and that the one found in human spermatozoa is really similar. The protein localizes in the acrosomal region and is probably cytosolic, although we can't exclude an association to membranes. PDE10 seems to be part of high molecular weight protein complexes but we need to identify the other protein members. The regulation of PDE10 seems different in spermatozoa than in the striatum where the protein is spatially and functionally regulated by phosphorylation and palmitoylation. These two events don't occur in the male gamete. We will consider the impact of the PDE10 on the protein phosphorylation status and on the control of the motility. In the end, we PDE10 seems to have an impact on the acrosomal reaction, but further work is needed to understand its precise role.

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Saâd, Ali. "Analyse du mouvement du spermatozoïde humain et de l'hyperactivation dans différentes conditions expérimentales." Lyon 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LYO1T139.

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Sellem, Eliaou. "Les petits ARN non codants du spermatozoïde bovin : de potentiels biomarqueurs de la fertilité mâle ?" Thesis, université Paris-Saclay, 2021. http://www.theses.fr/2021UPASB008.

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Abstract:

L’utilisation de taureaux subfertiles entraîne des pertes de production, une augmentation du taux de réforme des vaches pour infertilité et un gaspillage des ressources. C’est pourquoi le contrôle qualité de la semence utilisée en Insémination Animale est une préoccupation majeure des entreprises de sélection. Divers protocoles de contrôle qualité ont été développés au cours des dernières décennies, exploitant des biomarqueurs et des paramètres fonctionnels clés mesurés par cytométrie en flux. Toutefois, la capacité prédictive de ces tests reste limitée et ne permet pas d’identifier les taureaux subfertiles. C’est pourquoi des travaux ont été entrepris dans le cadre du LabCom SeQuaMol, afin d’explorer l’intérêt de l’épigénome spermatique comme biomarqueur de fertilité chez les taureaux. Ainsi, les travaux menés au cours de cette thèse ont portés sur les petits ARNs non codants (sncRNA), dont le rôle au cours de la spermatogénèse et de la fécondation a été suggéré et démontré. L’amélioration des connaissances sur le contenu en sncRNA du spermatozoïde bovin éjaculé avait comme objectif pratique de développer un outil permettant de fiabiliser la prédiction en routine de la fertilité des taureaux. Les travaux ont été organisés selon trois axes : l’établissement du contenu exhaustif en sncRNA du sperme bovin éjaculé, l’étude de la dynamique d’expression de ces sncRNAs au cours de la maturation épididymaire et l'identification in fine de biomarqueurs associés à la fertilité des taureaux Most dairy cows are inseminated and sub-fertile bulls can have an overall dramatic negative impact on the sustainability of the dairy sector. The bull fertility prediction, through efficient quality control (QC) procedures is thus crucial for the cattle breeding sector. Over the last decades, several biomarkers and quality control procedures have been proposed to guarantee semen fertility, including assessment of key functional parameters using flow cytometry. However, their relevance for routine QC has yet to be ascertained and their predictive value is too limited to confidently discard subfertile bulls. Thus, studies have been conducted by LabCom SeQuaMol to explore to what extent the bull sperm epigenome may be relevant to improve fertility prediction. In this respect, this PhD thesis was focused on small noncoding RNAs (sncRNAs), which have been shown to play a role in spermatogenesis and fertilization. We aimed at improving the scientific knowledge on bull sperm sncRNA content in order to develop a routine tool to predict bull fertility. The work has been organized according to three main themes: providing a comprehensive overview of cattle sperm sncRNA, studying their expression dynamics during sperm maturation along epididymis and identifying biomarkers associated with bull fertility

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Hazzouri, Mira. "Étude in situ du remodelage de la chromatine au cours de la différenciation post-méiotique mâle." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1999. http://www.theses.fr/1999GRE10187.

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Abstract:

Le noyau du spermatozoïde est inactif et sa chromatine est très condensée. Apres fécondation, il se décondense, se réactive et participe au développement de l'embryon. Nous avons étudié, par hybridation in situ fluorescente couplée à la microscopie confocale, la distribution tridimensionnelle (3D) des centromères, des télomères ainsi que de deux chromosomes X et 13 dans le noyau du spermatozoïde humain. Au sein du volume nucléaire, les centromères apparaissent groupes en quelques foyers distribués aléatoirement alors que les télomères seraient plutôt associes en doublets. Les chromosomes occupent des territoires individuels dans le noyau spermatique humain. Le territoire du chromosome X, souvent globulaire, est localise dans la moitie apicale du noyau alors que celui du chromosome 13, à forme globulaire ou allongée, ne présente pas de position préférentielle. Cette organisation spécifique du noyau du spermatozoïde humain pourrait avoir des conséquences sur les fonctions du spermatozoïde avant, durant et après la fécondation. Le spermatozoïde est le produit final de la spermatogenèse, processus incluant des divisions mitotiques puis méiotiques, suivies d'une phase de maturation sans division, ou spermatogenèse. La spermatogenèse est la phase de maturation post-méiotique de la spermatide ronde dont le noyau s'allonge puis se condense pour donner le spermatozoïde. Au cours de l'élongation de la spermatide, les histones somatiques sont remplacées par des protéines fortement basiques, les protéines de transition puis les protamines qui sont les nucléoprotéines majeures du spermatozoïde. Nous avons essaye d'éclaircir le rôle de l'acétylation des histones dans ce processus de remodelage chromatinien post-méiotique chez la souris, par une approche in situ utilisant l'immunohistochimie et l'immunofluorescence. Les histones CUR H2a, H2b, H3, et H4 se trouvent sous leurs formes acétylées dans les spermatides en élongation avant leur remplacement par les protéines de transition. L'analyse 3D de H4 acétylée révèle une distribution spatiale de cette histone évoluant au cours de l'élongation de la spermatide : d'abord homogène dans tout le volume nucléaire, elle devient plus hétérogène au fur et à mesure du processus d'élongation. Enfin, H4 acétylée se localise dans la partie caudale du noyau en fin d'élongation, avant de disparaitre dans la spermatide en condensation. C'est la première fois qu'une séquence spatiale d'événements est mise en évidence au cours du remodelage chromatinien post-méiotique

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Bakhoum, Abdoulaye Jacque Sacodou. "Contribution à la connaissance de l’ultrastructure de la espermiogenèse et du spermatozoïde des Digènes." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2012. http://hdl.handle.net/10803/109050.

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Abstract:

La présente Thèse représente une importante contribution à la connaissance de l’ultrastructure de la spermiogenèse et du spermatozoïde des Digènes. Nous présentons des nouvelles données spermatologiques concernant huit espèces appartenant à sept familles et superfamilles de Digènes. Ils s’agissent de Brachycoelium salamandrae (Gorgoderoidea : Brachycoeliidae), Diplodiscus subclavatus (Paramphistomoidea : Diplodiscidae), Elstia stossichianum et Wardula capitellata (Microscaphidioidea : Mesometridae), Euryhelmis squamula (Opisthorchioidea : Heterophyidae), Mediogonimus jourdanei (Microphalloidea : Prosthogonimidae), Robphildollfusium fractum (Lepocreadioidea : Gyliauchenidae), et Rubenstrema exasperatum (Plagiorchioidea : Omphalometridae). Les résultats obtenus sur la spermiogenèse et/ou le spermatozoïde sont comparés avec le reste de Digènes. De plus, nous discutons de l’importance de certains caractères ultrastructuraux pour une meilleure compréhension des relations phylogénétiques chez les Digènes. La spermiogenèse chez les Digènes est assez homogène. Cependant, il y a certains aspects comme la variabilité du nombre de bandes du corps intercentriolaire et l’angle de rotation flagellaire qui méritent une attention particulière. Concernant le spermatozoïde, nous avons proposé, après une analyse précise des données spermatologiques disponibles, sept modèles de spermatozoïde chez les Digènes. Les caractères du spermatozoïde les plus utiles pour l’établissement de ces modèles sont : (a) le type d’axonème/es (patron 9+‘1’ des Trepaxonemata, 9+‘1’ spécial et 9+0), (b) l’extrémité antérieure du spermatozoïde (avec un ou deux axonèmes), (c) la présence/absence de l’association « expansion latérale+ornementations externes+microtubules corticaux » ou « ornementations externes+microtubules corticaux », (d) la présence ou l’absence d’ornementations externes et leur localisation sur le spermatozoïde, (e) le patron des microtubules corticaux parallèles, absents ou disposés en un ou deux champs, et (f) le caractère terminal dans l’extrémité postérieure du spermatozoïde (noyau, axonème ou microtubules corticaux). D’autres caractères comme les corps épineux ou les boutons cytoplasmiques ornementés peuvent avoir une importance particulière pour certains taxons. La récente description des corps épineux suppose une reconsidération de certaines études anciennes où ces structures peuvent être mal interprétés ou considérés comme des artéfacts. Les boutons cytoplasmiques ornementes sont un nouveau caractère trouvé chez les Mesometridae (E. stossichianum et W. capitellata). Les spermatozoïdes des espèces étudiées dans cette thèse appartiennent aux modèles 1, 2 ou 3. Le modèle 1, caractérisé par la présence de l’association « expansion latérale+ornementations externes+microtubules corticaux », est présent chez Diplodiscus subclavatus, Elstia stossichianum et Wardula capitellata. De plus, la plupart des Echinostomatoidea, Paramphistomoidea et Pronocephaloidea présentent ce modèle. Le modèle 2 est caractérisé par l’association « ornementations externes+microtubules corticaux » et par une extrémité postérieure du spermatozoïde contenant le noyau. Il est présent chez Brachycoelium salamandrae, Robphildollfusium fractum et Rubenstrema exasperatum. Finalement, Euryhelmis squamula et Mediogonimus jourdanei présentent un spermatozoïde du modèle 3 comme chez certains Opisthorchioidea et certaines familles telles que les Allocreadiidae, Deropristidae, Lepocreadiidae et Troglotrematidae. Le modèle 3 diffère du modèle 2 par l’extrémité postérieure contenant un axonème. Le modèle 4 est similaire aux modèles 2 et 3, mais l’extrémité postérieure contient seulement des microtubules corticaux. Il est présent chez les Opecoelidae et Opistholebetidae. Le modèle 5 exhibe un seul champ (ventral) de microtubules corticaux et ne présente pas l’association « ornementations externes+microtubules corticaux ». Il est observé chez les Faustulidae, Hemiuridae et les Lecithasteridae. Le modèle 6 est observé chez les schistosomes. Ils présentent un spermatozoïde aberrant, non filiforme, avec un seul axonème du type 9+‘1’ spécial. Finalement, le modèle 7, caractérisé par la présence d’axonèmes du type 9+0 et par l’absence de microtubules corticaux, est établit seulement pour Didymozoon sp. The present Thesis represents a contribution to the knowledge about the ultrastructure of spermiogenesis and of the mature spermatozoon of digeneans. We present for the first time spermatological data concerning eight species belonging to seven families and superfamilies: Brachycoelium salamandrae (Gorgoderoidea: Brachycoeliidae), Diplodiscus subclavatus (Paramphistomoidea: Diplodiscidae), Elstia stossichianum and Wardula capitellata (Microscaphidioidea: Mesometridae), Euryhelmis squamula (Opisthorchioidea: Heterophyidae), Mediogonimus jourdanei (Microphalloidea: Prosthogonimidae), Robphildollphusium fractum (Lepocreadioidea: Gyliauchenidae), and Rubenstrema exasperatum (Plagiorchioidea: Omphalometridae). A global analysis of the spermatological characteristics of these species and those already described in the Digenea, allow us to establish seven sperm models within digeneans. The importance of several ultrastructural characteristics, combined with the proposed models are discussed in order to contribute to a better understanding of digenean phylogenetic relationships.

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Campagna, Céline. "Impact d'une mixture environnementale d'organochlorés sur l'ovocyte, le spermatozoïde et l'embryon porcin in vitro." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25487/25487.pdf.

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Abstract:

Les êtres humains et les animaux, principalement ceux habitant le Cercle Arctique, sont constamment exposés à un large éventail de composés chimiques présents dans leur environnement et leur nourriture. Parmi ces polluants, les composés organochlorés sont montrés du doigt depuis quelques décennies comme étant des composés toxiques qui perturbent plusieurs systèmes physiologiques, y compris le système reproducteur. Ces composés se présentent rarement individuellement dans le biote, on les retrouve plutôt sous forme de mixtures complexes, où chaque composé influence les systèmes physiologiques à sa façon, indépendamment ou conjointement avec d’autres composés. Les organochlorés sont présents dans le sang, le lait maternel, le tissu adipeux, les liquides amniotique et séminal, ainsi que dans les fluides ovarien et utérin. C’est dans cette optique que nous avons testé l’hypothèse qu’une mixture d’organochlorés, reconstituée pour imiter celle présente dans la graisse de phoque de l’Arctique que mangent les Inuits du Nunavik, nuit à la compétence à la maturation des gamètes, à la fécondation et au développement in vitro des embryons préimplantatoires, en utilisant l’espèce porcine comme modèle toxicologique pour l’humain. La mixture d’organochlorés a effectivement réduit la compétence à la maturation, fécondation et au développement des ovocytes exposés, ainsi que le développement préimplantatoire des embryons exposés. La fécondation et le développement subséquent ont diminué lors de l’exposition conjointe des gamètes à la mixture. Nous avons aussi utilisé un extrait métabolisé de cette mixture, provenant du sérum de truies préalablement exposées à la mixture originale d’organochlorés, pour vérifier ces mêmes paramètres. L’extrait métabolisé n’a pas eu d’effet sur la maturation des ovocytes, leur compétence à la fécondation et au développement, ou même sur le développement préimplantatoire des embryons exposés. L’extrait métabolisé a par contre réduit l’apoptose des cellules du cumulus. En conclusion, la mixture d’organochlorés, similaire à celle retrouvée dans l’environnement, perturbe les fonctions essentielles des gamètes et des embryons, dommages qui se répercutent sur leurs compétences à la fécondation et au développement. Human beings and animals, especially those living in the Arctic Circle, are constantly exposed to a wide range of chemical compounds that are present in their environment and food. Among these pollutants, organochlorine compounds are considered as a major group of toxicants that disrupt numerous physiological systems, including the reproductive system. These compounds are rarely present one at a time in the biota; they are mainly present as complex mixtures of different organochlorines, where each compound influences physiological systems in its own way, independently or in concert with other compounds. Organochlorines are present in blood, breast milk, fat tissues, as well as in amniotic, seminal, uterine and ovarian fluids. Therefore, we tested the hypothesis that an organochlorine mixture, reconstituted to mimic that present in the Arctic seal blubber and ingested by the Inuits in Nunavik, disrupts the competence to in vitro maturation, fertilization and development of gametes and embryos, using the pig as a toxicological model for humans. The organochlorine mixture reduced maturation, fertilization and developmental competence of exposed oocytes. It also reduced fertilization and subsequent development of gametes exposed during fertilization, as well as preimplantory development of exposed embryos. We also used a metabolized extract of the same mixture, originating from the serum of sows preexposed to the original organochlorine mixture, to verify the same parameters. The metabolized extract did not reduce oocyte maturation or their competence to fertilization and development; neither did it alter preimplantory development of exposed embryos. Nevertheless, the metabolized extract reduced apoptosis in cumulus cells. In conclusion, the environmentally-relevant organochlorine mixture damages essential functions of gametes and embryos, therefore altering their fertilizing and developmental competence.

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Boitrelle, Florence. "Liens entre la morphologie et les marques épigénétiques, la qualité de l'ADN, le contenu chromosomique et les capacités fécondantes du spermatozoïde humain." Thesis, Versailles-St Quentin en Yvelines, 2014. https://theses.hal.science/tel-01338125.

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Abstract:

Les qualités intrinsèques spermatiques (état de condensation de la chromatine, intégrité de l’ADN, contenu chromosomique, capacités fécondantes. . ) sont très variables d’un spermatozoïde à l’autre. Le pari aujourd’hui en assistance médicale à la procréation est de relier un aspect morphologique spermatique à ces qualités intrinsèques dans le but de mieux choisir le spermatozoïde vivant à injecter et d’améliorer les taux de grossesse. Depuis 2002, le MSOME (Motile Sperm Organelle Morphology Examination) permet d’observer les spermatozoïdes à fort grossissement, en contraste interférentiel de Nomarski et d’observer des structures qu’on appelle les « vacuoles ». L’injection intra-ovocytaire de spermatozoïdes sélectionnés en MSOME (IMSI) comme non porteurs de vacuoles céphaliques permettrait d’améliorer les taux de grossesses évolutives. Ici, nous avons montré que les vacuoles spermatiques correspondaient à des cratères nucléaires en lien avec une non-condensation chromatinienne (non remplacement des histones au cours de la spermiogenèse). Certaines atypies morphologiques spermatiques sont aussi en lien avec une non-condensation de la chromatine. De plus, spermatozoïdes vacuolés présentent parfois des taux de fragmentation élevés. Aucun lien n’a cependant été retrouvé entre un aspect morphologique spermatique d’une part et un contenu chromosomique ou des capacités fécondantes particulières d’autre part. De ces liens, nous avons pu dégager de nouvelles indications d’IMSI. Ainsi, nous avons avancé dans la description des critères de sélection du spermatozoïde humain vivant donnant le moins de risque d’échec d’implantation embryonnaire et/ou d’anomalies pour la descendance Intrinsic sperm quality criteria (chromatin condensation, DNA fragmentation, chromosome content, fecundity, etc. ) vary from one spermatozoon to another. It is critical to be able to link morphological aspects to these quality criteria, in order to improve the selection of high-quality, live spermatozoa and thus improve pregnancy and delivery rates. Since 2002, motile sperm organelle morphology examination has been used to screen for defects under high magnification and thus select vacuole-free spermatozoa (which are known to be associated with higher pregnancy rates in intracytoplasmic morphologically selected sperm injection (IMSI) programmes). Here, we demonstrate that sperm vacuoles are nuclear concavities associated with chromatin condensation failure (due to a lack of histone replacement during spermiogenesis). A number of other morphological abnormalities were found to be linked to chromatin condensation failure. In some cases, vacuolated spermatozoa were seen to be more DNA-fragmented than vacuole-free ones. In contrast, sperm morphology was not related to chromosomal content or fecundity characteristics. Our observations enabled us to identify new indications for IMSI and refine the criteria for selecting the best spermatozoon: the spermatozoon with the lowest risk of implantation failure or abnormalities in the offspring

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Boitrelle, Florence. "Liens entre la morphologie et les marques épigénétiques, la qualité de l'ADN, le contenu chromosomique et les capacités fécondantes du spermatozoïde humain." Thesis, Versailles-St Quentin en Yvelines, 2014. http://www.theses.fr/2014VERS0028/document.

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Abstract:

Les qualités intrinsèques spermatiques (état de condensation de la chromatine, intégrité de l’ADN, contenu chromosomique, capacités fécondantes..) sont très variables d’un spermatozoïde à l’autre. Le pari aujourd’hui en assistance médicale à la procréation est de relier un aspect morphologique spermatique à ces qualités intrinsèques dans le but de mieux choisir le spermatozoïde vivant à injecter et d’améliorer les taux de grossesse. Depuis 2002, le MSOME (Motile Sperm Organelle Morphology Examination) permet d’observer les spermatozoïdes à fort grossissement, en contraste interférentiel de Nomarski et d’observer des structures qu’on appelle les « vacuoles ». L’injection intra-ovocytaire de spermatozoïdes sélectionnés en MSOME (IMSI) comme non porteurs de vacuoles céphaliques permettrait d’améliorer les taux de grossesses évolutives. Ici, nous avons montré que les vacuoles spermatiques correspondaient à des cratères nucléaires en lien avec une non-condensation chromatinienne (non remplacement des histones au cours de la spermiogenèse). Certaines atypies morphologiques spermatiques sont aussi en lien avec une non-condensation de la chromatine. De plus, spermatozoïdes vacuolés présentent parfois des taux de fragmentation élevés. Aucun lien n’a cependant été retrouvé entre un aspect morphologique spermatique d’une part et un contenu chromosomique ou des capacités fécondantes particulières d’autre part. De ces liens, nous avons pu dégager de nouvelles indications d’IMSI. Ainsi, nous avons avancé dans la description des critères de sélection du spermatozoïde humain vivant donnant le moins de risque d’échec d’implantation embryonnaire et/ou d’anomalies pour la descendance Intrinsic sperm quality criteria (chromatin condensation, DNA fragmentation, chromosome content, fecundity, etc.) vary from one spermatozoon to another. It is critical to be able to link morphological aspects to these quality criteria, in order to improve the selection of high-quality, live spermatozoa and thus improve pregnancy and delivery rates. Since 2002, motile sperm organelle morphology examination has been used to screen for defects under high magnification and thus select vacuole-free spermatozoa (which are known to be associated with higher pregnancy rates in intracytoplasmic morphologically selected sperm injection (IMSI) programmes). Here, we demonstrate that sperm vacuoles are nuclear concavities associated with chromatin condensation failure (due to a lack of histone replacement during spermiogenesis). A number of other morphological abnormalities were found to be linked to chromatin condensation failure. In some cases, vacuolated spermatozoa were seen to be more DNA-fragmented than vacuole-free ones. In contrast, sperm morphology was not related to chromosomal content or fecundity characteristics. Our observations enabled us to identify new indications for IMSI and refine the criteria for selecting the best spermatozoon: the spermatozoon with the lowest risk of implantation failure or abnormalities in the offspring

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Marigo, Adji Mama. "Etude Ultrastructurale de la Spermiogenèse et du Spermatozoïde chez les Cestodes. Apports en Taxonomie et Phylogénie." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2011. http://hdl.handle.net/10803/109219.

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Abstract:

La présente Thèse constitue une contribution à la connaissance de l’ultrastructure de la spermiogenèse et du spermatozoïde chez les Cestodes. Nous y présentons de nouvelles données spermatologiques ultrastructurales d’espèces appartenant à six ordres différents : Acanthobothrium crassicolle Wedl, 1855 (Tetraphyllidea), Aporhynchus menezesi Noever et al., 2010 (Trypanorhyncha), Barsonella lafoni de Chambrier et al., 2009 (Proteocephalidea), Clestobothrium crassiceps (Rudolphi, 1819) (Bothriocephalidea), Echinobothrium euterpes (Neifar et al., 2001) (Diphyllidea) et Molluscotaenia crassiscolex (von Linstow, 1890) (Cyclophyllidea). Les résultats obtenus sur la spermiogenèse et le spermatozoïde sont comparés avec ceux de Cestodes déjà étudiés, spécialement avec ceux appartenant aux ordres objet de notre étude. Enfin, nous discutons sur l’utilité des différents caractères spermatologiques ultrastructuraux en Taxonomie, Systématique et Phylogénie. L’étude spermatologique de Clestobothrium crassiceps constitue le premier travail fait sur le genre Clestobothrium et la onzième espèce de l’ordre Bothriocephalidea récemment créé. Les résultats obtenus sont comparés avec ceux des autres espèces de cet ordre, mais aussi avec ceux des Diphyllobothriidea, l’autre ordre créé à partir de l’ancien ordre des Pseudophyllidea. Concernant la spermiogenèse, les caractères les plus intéressants sont le type II de spermiogenèse et le corps intercentriolaire très réduit. On peut remarquer aussi le type II de spermatozoïde qui présente un anneau de microtubules corticaux, probablement une autapomorphie pour les Bothriocephalidea. L’étude ultrastructurale du Diphyllidea Echinobothrium euterpes montre la formation de deux flagelles de longueur différente. Dans les stades avancés de la spermiogenèse, après la fusion proximodistale, l’axonème court disparaît pour donner naissance à un spermatozoïde présentant un seul axonème. La spermiogenèse est du type I et le spermatozoïde correspond au type IV. Autres caractères intéressants chez les Diphyllidea sont la forte réduction ou absence de microtubules corticaux et la présence de masses denses associées aux centrioles dans la zone de différentiation. Ce dernier caractère peut être une synapomorphie pour les espèces de cet ordre. Aporhynchus menezesi présente un type I de spermiogenèse et un type I de spermatozoïde. Notre étude apporte les premières données chez la superfamille des Gymnorhynchoidea. Nous confirmons chez les Trypanorhyncha l’absence de corps en crête et la présence d’un arc de microtubules corticaux dans le spermatozoïde. L’étude de Acanthobothrium crassicolle est le troisième dans ce genre et confirme le type I de spermiogenèse et le type II de spermatozoïde. Ce type de spermatozoïde constitue la plus importante différence entre les onchobothriidés et les phyllobothriidés. Nous confirmons aussi la présence d’un arc de microtubules corticaux. Cependant, il est observé une hétérogénéité au niveau du corps intercentriolaire chez les Tetraphyllidea-Onchobothriidae. Barsonella lafoni est la septième espèce de l’ordre Proteocephalidea dont l’ultrastructure du spermatozoïde est analysée. Elle montre le patron I pour la spermiogenèse et aussi pour le spermatozoïde. Ces résultats sont concordants avec ceux des autres espèces étudiées, sauf Sandonella sandoni. Un corps intercentriolaire réduit et un arc de microtubules corticaux sont des caractères constamment présents chez les proteocephalidés étudiés. Chez B. lafoni nous avons décrit pour la première fois la présence d’un matériel dense aux électrons dans la zone de différentiation pendant les stades initiaux de la spermiogenèse. Il s’agit d’un caractère typique des ordres basaux des Eucestoda. Finalement, Molluscotaenia crassiscolex suit le type IV de spermiogenèse et son spermatozoïde est du type VI. Ces deux patrons coïncident chez les autres dilepididés étudiés. La morphologie particulière du corps en crête est le caractère le plus intéressant. Il est partiellement détaché dans sa partie moyenne. Nos résultats sont comparés avec les Dilepididae s.l. The present Thesis constitutes a contribution to the knowledge of ultrastructure of spermiogenesis and the spermatozoon of cestodes. New spermatological data concerning species belonging to six orders of Eucestoda are presented. These species are Clestobothrium crassiceps (Rudolphi, 1819) (Bothriocephalidea), Echinobothrium euterpes (Neifar et al., 2001) (Diphyllidea), Aporhynchus menezesi Noever et al., 2010 (Trypanorhyncha), Acanthobothrium crassicolle Wedl, 1855 (Tetraphyllidea), Barsonella lafoni de Chambrier et al., 2009 (Proteocephalidea), and Molluscotaenia crassiscolex (von Linstow, 1890) (Cyclophyllidea). The obtained results on spermiogenesis and the spermatozoon are compared with the available data on the remaining eucestodes, particularly with the orders discussed in the present study. Moreover, the usefulness of different spermatological characters for Taxonomy, Systematics and Phylogeny is discussed.

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Guérin, Pierre. "Le métabolisme de la méthionine dans le spermatozoïde et les cellules épithéliales tubaires : transméthylations et biosynthèse de l'hypotaurine." Lyon, INSA, 1994. http://www.theses.fr/1994ISAL0114.

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Abstract:

La synthèse de S-Adénosyl-L-Méthionine(SAM) et de S-Adénosyl-Homocystéine(SAH) à partir de méthionine a été mise en évidence pour la première fois dans les spermatozoïdes humains et bovins. La SAM paraît donc être l'effecteur principal des réactions de méthylation dans le spermatozoïde. Dans ces cellules, le métabolisme de la SAM semble prioritairement orienté vers les transméthylations, au détriment de la synthèse des polyamines. L'ADN ne semble pas être une cible quantitativement importante pour les transméthylations puisque l'ADN-méthyltransférase n'a pas été mise en évidence dans les spermatozoïdes bovins. Les spermatozoïdes semblent capables de trans-sulfuration. La taurine et l'hypotaurine sont présentes dans ces cellules. L'hypotaurine favorise la fécondité des spermatozoïdes et le développement embryonnaire précoce. Par ses propriétés anti-oxydantes, elle participe probablement à la lutte contre les peroxydations lipidiques qui sont particulièrement préjudiciables à la survie des embryons et à la fécondité des spermatozoïdes. Cet acide aminé et son dérivé d'oxydation qu'est la taurine ont été trouvés en quantités importantes dans les sécrétions génitales, notamment dans le liquide tubaire, de plusieurs espèces animales. Ces acides aminés sont synthétisés et sécrétés par les cellules épithéliales tubaires en culture. La cystéine sulfinate décarboxylase (CSD) a été mise en évidence dans les cellules épithéliales tubaires, ce qui implique que la voie de synthèse de l'hypotaurine et de la taurine passe par l'acide cystéine sulfinique dans ces cellules. Cet enzyme a ainsi été mise en évidence pour la première fois dans des tissus génitaux de mammifères Synthesis of S-Adenosyl-L-Methionine (SAM) and S-Adenosyl-Homocysteine (SAH) from methionine has been demonstrated for the first time in human and bovine spermatozoa. SAM is probably the main methyl donor in spermatozoon. S·AM metabolism seems mainly directed towards transmethylations to the detriment of polyamine synthesis. DNA methyltransferase has not been identified in spermatozoa. Then DNA does not seem to be an important target of transmethylations in these cells. Spermatozoa is able to carry out trans-sulfuration reactions. Taurine and hypotaurine have been identified in these cells. Hypotaurine and taurine are essential for sperm capacitation and motility, and for embryo survival. These aminoacids probably protect gametes and embryo against peroxidative damages. We have found great amounts of these compounds in tubal fluid of several mammalian species. Taurine and hypotaurine are synthesized by oviduct epithelial cells monolayers of cow and goat. Cysteine Sulfinate Decarboxylase (CSD) activity has been. Demonstrated in these cells. Therefore hypotaurine and taurine are mainly synthesized in tubal cells via cysteine sulfinate pathway. This enzyme has been identified for the first ti me in genital tract tissues

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Ahmad, Gulfam. "Température et spermatogenèse chez l'homme : conséquences potentielles d'une hyperthermie modérée des testicules et des épididymes sur l'intégrité du génome des spermatozoïdes." Toulouse 3, 2011. http://thesesups.ups-tlse.fr/1382/.

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Abstract:

La spermatogenèse chez l'homme et chez les autres mammifères nécessite une température inférieure à la température du corps. Ainsi, une augmentation de la température des testicules produit des effets délétères sur la fertilité masculine. Une réduction de la concentration spermatique, de la mobilité, de la vitalité et de la morphologie des spermatozoïdes a été rapportée chez les animaux et les hommes lorsque le scrotum ou le corps étaient exposés à des températures plus élevées. Dans les modèles animaux, des températures supérieures à la normale entraîneraient des altérations de l'intégrité de la chromatine des spermatozoïdes conduisant à un retard du développement embryonnaire précoce, à une réduction du taux de grossesse et à des fausses couches. Dans ce contexte, nous avons étudié les effets d'une légère augmentation (+2 °C) de la température des testicules et des épididymes sur l'intégrité de la chromatine des spermatozoïdes chez les hommes. Nous avons mené un protocole expérimental chez 5 hommes féconds volontaires induisant une augmentation modérée de la température des testicules et des épididymes en remontant les testicules en position supra scrotale et en les maintenant dans cette position durant 15 heures par jour, pendant 120 jours consécutifs. Les paramètres spermatiques classiques ont été évalués selon les recommandations de l'OMS. L'indice de fragmentation de l'ADN du spermatozoïde (DFI) et la haute colorabilité de l'ADN (HDS) ont été analysés par le test du " Sperm Chromatine Structure Assay " (SCSA) et le test du bleu d'aniline a été utilisé pour évaluer la maturité de la chromatine. Les résultats du SCSA ont montré une augmentation significative du pourcentage de DFI et du pourcentage de HDS du sperme respectivement dès 20 jours (J20) et J34 d'hyperthermie. Les taux de DFI et de HDS sont restés plus élevés pendant les 120 jours d'hyperthermie comparés aux valeurs avant augmentation de la température (valeurs contrôles). Le test du bleu d'aniline a montré une augmentation non significative du pourcentage de spermatozoïdes avec une chromatine immature à J34 d'hyperthermie, atteignant une valeur significative à J73. Cette augmentation est demeurée constante pendant toute la durée d'hyperthermie traduisant un pourcentage de spermatozoïdes avec une chromatine immature supérieur à celui évalué avant hyperthermie. Après l'arrêt de l'hyperthermie, le DFI et le HDS sont revenus à leurs valeurs pré-exposition plus précocement (J73) que le pourcentage de spermatozoïdes avec une chromatine immature (J180). L'indice d'anomalies multiples (IAM) des spermatozoïdes est augmenté dès J9. La mobilité, la numération et la vitalité des spermatozoïdes ont été significativement diminuées par rapport aux valeurs avant hyperthermie, respectivement à partir de J20, J34 et J34 et sont restées diminuées pendant toute la durée de l'hyperthermie. Après l'arrêt de l'hyperthermie, tous les paramètres spermatiques sont revenus aux valeurs contrôles à partir de J73. Nous avons montré, pour la première fois chez l'homme, qu'une légère augmentation de la température des testicules et des épididymes a un effet sur l'intégrité de la chromatine du spermatozoïde avant même la baisse de la numération des spermatozoïdes. Compte tenu des résultats obtenus dans les modèles animaux, les résultats de ce protocole expérimental pose la question des conséquences possibles de l'altération de la chromatine sur le développement embryonnaire alors que les paramètres du sperme ne sont pas incompatibles avec une fécondation au cours de la contraception masculine, durant les phases de récupération et d'inhibition. De plus, nos résultats pourraient être d'intérêt en infertilité masculine, en assistance médicale à la procréation et dans les fausses couches à répétition In man and other mammals, spermatogenesis is ensured at a temperature lower to body temperature. An increase in temperature has deleterious effects on male fertility. Reduced sperm out put, motility, viability and morphology have been reported in animals and men at higher than normal scrotal or body temperatures. Increased temperature caused alterations in sperm chromatin integrity resulting in retarded early embryo development, reduced pregnancy rates and miscarriages in animal models. In this context, for the first time in men, we investigated the effects of a mild increase (+2 °C) in testes and epididymal temperature on sperm chromatin integrity. We designed an experimental protocol to induce mild testes and epididymal hyperthermia in five healthy fertile volunteers. Testes were lifted up and maintained at supra scrotal position 15 hours daily for 120 consecutive days. Classical sperm parameters were assessed according to World Health Organization (WHO) guidlines. Sperm DNA fragmentation index (DFI) and high DNA stainability (HDS) were analysed by "Sperm Chromatin Structure Assay" (SCSA) and acid aniline blue staining technique was used to assess the sperm chromatin maturity. The results of SCSA showed a significant increase in the percentage of sperm DFI and HDS as early as day 20 (D20) and D34 respectively during hyperthermia which remained higher compared with the values before hyperthermia (controls) during the entire period of hyperthermia. Aniline blue test showed a non-significant increase in the percentage of sperm with immature chromatin as early as D34 during hyperthermia reaching significance at D73 and remained higher than control during the entire period of hyperthermia. After cessation of hyperthermia sperm DFI and HDS returned to the respective control values earlier (D73) than the percentage of aniline blue positive sperm (D180). Multiple anomalies index (MAI) of spermaozoa was significantly increased, compared to control, as early as D9 of hyperthermia and remained increased throughout the entire period of hyperthermia. Sperm motility, count, and viability were significantly decreased compared with the respective controls as early as D20, D34 and D34 respectively during hyperthermia and remained decreased during the entire hyperthermia period. After cessation of hyperthermia all parameters returned to respective control values at D73. We report, for the first time in men, that a mild increase in testes and epididymal temperature largely impaired sperm chromatin integrity before any drop in sperm count. Based on the results from animal models the findings of present experimental protocol raise the question of possible consequences of altered sperm chromatin integrity on embryo development when sperm parameters were compatible with natural fertilization during male contraception particularly during inhibition and recovery phases of spermatogenesis. Moreover, our results may have clinical implications in male infertility, repeated miscarriages as well as assisted reproductive technologies

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Belleannée, Clémence. "Analyse protéomique de la membrane du spermatozoïde et de son milieu environnemant au cours de la maturation épididymaire." Tours, 2006. http://www.theses.fr/2006TOUR4016.

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Abstract:

Chez les mammifères, les spermatozoïdes ne sont fécondants qu’après leur transit dans l’épididyme où ils subissent des modifications biochimiques sous contrôle du milieu environnant. Ces modifications concernent essentiellement des protéines de surface peu connues car minoritaires. Chez le verrat, la mise au point d’une technique de marquage et de purification des protéines de surface a permis d’identifier par nano-LC/MS/MS plus de 170 composés. L’analyse différentielle de ces protéines par diverses approches quantitatives (electrophorèse 1D-2D, iTRAQ) en fonction des régions épididymaires a permis l’identification de nouveaux marqueurs de maturation. Cette approche a également été appliquée chez le cheval et le taureau pour une étude comparative. Chez le taureau, l’analyse des protéines présentes (protéome) et sécrétées (sécrétome) dans les différentes régions épididymaires, nous a permis d’identifier de nouvelles protéines luminales dont le rôle dans la maturation des spermatozoïdes est encore inconnu. Ces résultats ouvrent des perspectives de caractérisation individuelle de protéines candidates en relation avec l’acquisition de la fertilité Mammalian spermatozoa acquire the ability to fertilize ovocyte during their transit throught epididymis where they are submitted to biochemical modifications under environmental control. These modifications mainly concern sperm surface proteins which are minor coumpounds. In boar, we developped a methodology based on labeling, differencial extraction and purification of sperm surface proteins which allowed identification by nano-LC/MS/MS of more than 170 compounds. By the help of quantitative approaches (1D-2D electrophoresis, iTRAQ) comparative analysis of these proteins in successive epididymal regions ensured identification of biomarkers of maturation. Sperm surface proteins were caracterized in two other species: bull and horse. Thanks to analysis of remaining (proteome) and secreted (secretome) proteins in bovine fluid from different epididymal regions, new luminal proteins were identified. All together these results open perspectives in individual caracterization of proteins related to epididymal maturation and/or fertility

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Moreau, Robert. "Le rôle d'une famille de protéines du plasma séminal bovin dans le transport lipidique et la capacitation du spermatozoïde." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1999. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk2/ftp03/NQ43734.pdf.

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Hebbache, Abdelhamid. "Modèles de reconnaissance des textures : application à l'analyse des différents stades de décondensation de la chromatine du spermatozoïde humain." Paris 6, 1989. http://www.theses.fr/1989PA066237.

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Abstract:

Le but de cette thèse est de décrire la dynamique de la décondensation de la chromatine. A cette fin, nous avons analyse les textures des têtes de spermatozoides humains à chaque stade de la décondensation de la chromatine observée au microscope électronique. Dans les cas d'image de texture de la chromatosine condensée (petite taille), nous avons localisé la chromatine par fonction spline et l'avons analysée dans une région correspondant a sa taille. Nous utilisons le modèle autoregressif d'analyse de texture qui nous semble le mieux répondre à ces considérations. Nous avons généré des images avec des fréquences données et, en calculant la densité spectrale avec des paramètres obtenus a partir du modèle autoregressif, nous avons teste la robustesse de ce modèle en localisant des pics correspondant a ces fréquences données. Pour la reconnaissance, nous avons extrait les caractéristiques du pic principal. Nous avons utilise une méthode numérique (méthode de Laporte et vignes) pour affiner les valeurs des paramètres. L'analyse factorielle nous a permis de décrire la dynamique de la chromatine et de classer les textures suivant leur état de décondensation

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Ouvrier, Aurélia. "Implication de l'homéostasie lipidique dans la maturation post-testiculaire des spermatozoïdes : apports des modèles murins KO LXR." Thesis, Clermont-Ferrand 2, 2010. http://www.theses.fr/2010CLF22081.

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Abstract:

L’épididyme est un organe accolé au testicule, formé d’un long tubule dont l’épithélium est constitué de 6 types cellulaires différents aux fonctions partiellement connues. Le tubule épididymaire est entouré de muscles lisses participant, par leurs contractions, à l’avancée des spermatozoïdes. Au centre du canal se retrouve le fluide épididymaire dont la composition est régulée par les absorptions et sécrétions de l’épithélium épididymaire. Les gamètes arrivant du testicule sont inaptes à assurer la fécondation. La maturation post-testiculaire des spermatozoïdes, durant leur descente dans le tubule épididymaire, va leur permettre d’acquérir la mobilité et la capacité à reconnaître et féconder un ovule (qualités regroupées sous le terme de “pouvoir fécondant”). Cette maturation se fait grâce aux interactions permanentes des spermatozoïdes avec le fluide. Les LXRs sont des régulateurs majeurs de l’homéostasie du cholestérol, un élément fondamental dans la physiologie de la reproduction puisqu’il est le précurseur des hormones stéroïdes (androgènes) et un régulateur du pouvoir fécondant des spermatozoïdes. Les souris mâles invalidées pour les 2 isoformes de ces récepteurs (lxrα;β-/-) ont une fertilité perturbée en association avec des altérations testiculaires et épididymaires. Ces mâles présentent une infertilité dès 6 mois conduisant à une stérilité complète à 9 mois. Le but de ce travail est de comprendre la relation entre la régulation de l’homéostasie du cholestérol et le phénotype épididymaire de ces souris. A l’âge de 4 mois, alors que les souris mâles lxrα;β-/- sont fertiles, le phénotype est caractérisé par une accumulation de lipides dans certains types cellulaires de l’épithélium et dans les muscles lisses entourant le tubule. Chez les mâles lxrα;β-/- âgés de 9 mois, lorsque le phénotype d’infertilité complète est installé, on observe une destructuration de la partie proximale de l’épididyme comprenant une diminution de la hauteur de l’épithélium, une perte des muscles lisses péritubulaires et la présence de spermatozoïdes non mobiles et malformés dans la lumière du tubule. Mes travaux ont permis de mettre en évidence différents phénomènes : 1/ Une nouvelle fonction d’un type cellulaire particulier, les cellules “apicales”, dans la régulation de l’homéostasie du cholestérol épididymaire. En effet, ces cellules accumulent du cholestérol en association avec la perte de “ABCA1” (ATP Binding Cassette A1), codée par un gène cible de LXR, impliquée dans l’export de l’excédent de cholestérol cellulaire. Suite à cela, ces cellules apicales entrent en apoptose et contribuent à la perte de fonction de l’épithélium. 2/ Une altération des cellules musculaires lisses péritubulaires associée au vieillissement des souris lxrα;β-/-. Ces cellules accumulent elles aussi du cholestérol et se transforment en cellules invasives, les cellules “spumeuses” migrant à travers l’épithélium. Ce phénomène est très proche des phases de développement de la pathologie artérielle liée au cholestérol et au vieillissement, l’athérosclérose. La perte des muscles lisses va limiter la progression des spermatozoïdes et accompagner la perte de fonction des cellules épithéliales qui ne seront plus aptes à effectuer des échanges avec le fluide, empêchant ainsi l’acquisition du pouvoir fécondant des spermatozoïdes. (...) The epididymis is a long tubule which epithelium is made of 6 different cellular types with partially unknown functions. The epididymal tubule is surrounded by smooth muscles participating, by their contractions, to the sperm progression. At the center of the tubule is present the epididymal fluid which composition is regulated by the absorptions and secretions of the epithelium. The spermatozoa coming from the testis are unable to fertilize an oocyte. Post-testicular maturation of spermatozoa, during their transit through the epididymis, allows them to become motile, to recognize and to fertilize an oocyte. This maturation is due to the constant interaction of the spermatozoon with the epididymal fluid. LXR are the major sensors of cholesterol homeostasis, a fundamental element in reproductive physiology because it is the steroid hormones precursor and a regulator of the sperm fertilizing capacities. LXR deficient mice (lxrα;β-/-) have fertility disorder associated with testicular and epididymal alterations. These males present an infertility since 6 months of age leading to a complete infertility at 9 months of age. The purpose of this work is to understand the relation between cholesterol homeostasis regulation and epididymal sperm maturation. At 4 months of age, the lxrα;β-/- males are fertile but present an epididymal phenotype characterized by neutral lipid accumulations in some epithelial cell types and in the smooth muscle cells surrounding the tubule. At 9 months of age, the totally infertile lxrα;β-/- male, present a complete destructuration of the proximal epididymis associated with a complete shrinking of the epithelium height, the loss of the peritubular smooth muscle cells and the presence of immotile and abnormal spermatozoa in the cauda epididymis. My works put in light : 1/ A novel function of a particular cell type, the “apical cells”, in the regulation of the epididymal cholesterol homeostasis. These cells accumulate cholesteryl esters in association with the loss of the ATP Binding Cassette A1 “ABCA1”, a transporter implicated in the cholesterol efflux. Following this, apical cells become apoptotic participating to the epithelial function loss. 2/ An alteration of peritubular smooth muscle cells associated with the mice aging. These cells also accumulate cholesteryl esters and transdifferentiate into invasive foam cells migrating through the epithelium. This phenomenon is very similar to what is observed in the arterial pathology related to cholesterol and aging, the atherosclerosis. The loss of smooth muscle cells limit the progression of the spermatozoa in the lumen and lead to the loss of function of the epithelial cells which become unable to make any exchange with the fluid, hence disturbing spermatozoa maturation. 3/ A deleterious effect of a cholesterol enriched diet on the fertility in 3-month-old lxrα;β-/- male, which are normally fertile and without epididymal phenotype. When submitted to the diet during 4 weeks, these mice become completely infertile, showing the epididymal phenotype of the 9-month-old lxrα;β-/- male mice. The infertility of these mice is characterized by defects in spermatozoa motility, viability and functional parameters. Our results show, on the one hand, the importance of LXR in the post testicular maturation of spermatozoa and in the maintenance of the integrity and functionality of the epididymis. On the other hand, the data that we collected put in evidence the impact of the alimentation and in particular cholesterol enriched diet on the post-testicular maturation

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Guillemette, Christine. "Certains cas d'infertilité sont caractérisés par un faible niveau de P34H, une protéine épididymaire humaine située sur l'acrosome du spermatozoïde." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1999. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk1/tape9/PQDD_0025/MQ41917.pdf.

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Soleilhavoup, Clément. "Rôle de l'environnement des spermatozoïdes de bélier dans leur transit dans le tractus génital femelle." Thesis, Tours, 2015. http://www.theses.fr/2015TOUR4037/document.

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Abstract:

Chez les mammifères, les spermatozoïdes, au cours du transit à travers le tractus génital femelle, rencontrent des environnements qui influencent leur mobilité et leur pouvoir fécondant. L’analyse par spectrométrie de masse de ces milieux (plasma séminal, mucus cervical, fluides de l’utérus et de l’oviducte) a permis une caractérisation approfondie de leur protéome et l’identification de protéines modifiant l’activité des gamètes comme la Zinc Alpha Glycoprotein. L’étude du protéome du tractus génital femelle au cours du cycle oestral a montré une régulation différentielle de la sécrétion des protéines selon l’organe et le stade du cycle. La comparaison du protéome et des propriétés mécaniques du mucus cervical a montré l’impact de la mucine 5AC sur la viscosité du mucus et la mobilité des spermatozoïdes dans ce mucus. Cette interaction entre le mucus cervical et les spermatozoïdes se traduit par la fixation à leur surface de nouvelles protéines, comme la myosine 9, ayant un impact potentiel sur leur pouvoir fécondant During their transit through the female genital tract, mammalian spermatozoa encounter several environments that influence their mobility and fertilizing ability. Analysis by mass spectrometry of these environments (seminal plasma, cervical mucus, fluids from the uterus and the oviduct) enabled characterization of their proteomes and the identification of proteins able to modify gamete function such as Zinc Alpha Glycoprotein. The study of the female genital tract proteome during the oestrous cycle showed differential regulation of the protein secretion according to the organ and the stage of the cycle. Comparison of the proteome and the mechanical properties of cervical mucus showed the impact of mucin 5AC on the viscosity of mucus and the motility of spermatozoa in its presence. 52 cervical mucus proteins, such as myosin 9, bind to the surface of spermatozoa which may impact sperm function and fertilizing ability

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Ravaux, Benjamin. "Influence du battement du flagelle et de la composition lipidique du spermatozoïde sur l'étape de fusion des gamètes chez le mammifère." Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066597/document.

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Abstract:

La fécondation est la rencontre de deux gamètes. Bien que centrale chez les espèces sexuées, les mécanismes membranaires et moléculaires ne sont pas encore établis. La communauté scientifique bute toujours sur la question centrale : Comment le spermatozoïde fusionne-t-il avec l’ovule ? Si des études ont identifié trois protéines essentielles : Izumo1, Juno et CD9, elles montrent aussi que ces acteurs ne sont pas suffisants. Notre étude a eu pour but d’identifier d’autres paramètres potentiels impliqués dans cette machinerie de fusion. Nous nous sommes donc focalisés sur la contribution des lipides spermatiques et sur celle du battement du flagelle. Nous avons développé deux méthodes expérimentales originales. Avec la première, qualifiée de « Bottom-up », nous avons tenté de déterminer la machinerie spermatique minimale pour induire la fusion avec l’ovocyte. L’idée a été de reconstituer pas à pas la membrane de la tête du spermatozoïde, d’abord avec les lipides identifiés lors d’analyses, puis en y incorporant Izumo1. Pour la seconde approche, appelée « Top-down », nous avons développé un outil microfluidique pour guider le spermatozoïde jusqu’à l’ovocyte afin de suivre la rencontre avec le « meilleur » point de vue, dans des conditions in-vitro aussi physiologiques que possible. Nous avons découvert que contrairement à ce que nous pensions, le battement du flagelle ne sert pas uniquement à atteindre l'ovocyte, mais aussi à déclencher la fécondation. En effet, les contraintes mécaniques induisent une réorganisation de la membrane ovocytaire incluant la protéine CD9. Ainsi, la chronologie des événements a pu être obtenue avec une résolution temporelle inégalée Fertilization is the encounter of two gametes. Although this process is crucial for sexual organisms, the timeline of the molecular events is not yet established. The researchers cannot explain: how the spermatozoon fuses with the oocyte? One of the reasons is the lack of experimental methods available. Indeed, the gametes need a specific environment to fertilize. Nevertheless, the scientific community identified three essential proteins: Izumo1 on the spermatozoon, Juno (its receptor) and CD9 on the oocyte membrane. For our part, we tried to determine if the none-proteins environment of Izumo1 and CD9 could influence the gametic interaction. To do so, we were focused on the role of the lipids composition of the sperm membranes and on the influence of the forces developed by the flagellum beating on the oocyte. We designed two original experimental methods to offer a better understanding of the mechanisms inside the gamete contact area. With the first one, we tried to identify the minimal machinery to induce fusion. We started to reconstitute step by step the membrane of the spermatozoon head. We tested first the identified lipids alone, and then we coupled these molecules with Izumo1. With the second one, we developed a microfluidic tool to observe the gametic encounter with the “best” viewpoint in the most physiological in-vitro conditions. We observed that the flagellum beating is not only involved in the crossing of the female genital tract but also in the initiation of the fusion step. Indeed, the mechanical constraints induce membrane reorganization with CD9 recruitment. So we succeed to establish the kinetic of the events with an unequaled resolution

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Verdier, Yann. "Sélection, identification et caractérisation partielle d'antigènes du spermatozoïde du renard (Vulpes vulpes) en vue de leur utilisation dans un vaccin contraceptif." Nancy 1, 2002. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_2002_0307_VERDIER.pdf.

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Rouard, Muriel. "Contribution à l'étude de la fécondance du sperme : évaluation de la maturation nucléaire du spermatozoïde par la coloration au bleu d'aniline." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1986. http://www.theses.fr/1986STR1M144.

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Chabory, Eléonore. "Caractérisation fonctionnelle de la glutathione peroxydase 5 murine." Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00725945.

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Abstract:

La maturation épididymaire est un élément clé dans le développement de l'aptitude du gamète mâle à féconder l'ovocyte. Parmi, les nombreux composants impliqués dans ce processus, les espèces oxygénées réactives (EOR) sont essentielles car bénéfiques par certains aspects, cependant elles sont toxiques en excès. GPx5, une forme épididymaire de la glutathion peroxydase, pourrait jouer un rôle dans le contrôle redox de l'environnement spermatique. Une production in vitro de GPx5 par un baculovirus recombinant a été réalisée, mais le virus s'est révélé très instable et n'a donc pas permis d'analyser biochimiquement cette protéine. Une approche in vivo initiée par immunisation passive n'a pas montré d'altération de la fertilité des souris. Elle a été complétée par le dévelopement d'une étude plus générale basée sur la production de souris inactivées pour le gène gpx5. Ces dernières ont une fertilité normale, toutefois, des altérations développementales sont observées dans la descendance de mâles âgés. Des perturbations sont associées à des changements de l'expression de nombreuses enzymes antioxydantes comme les GPxs et la catalase, mais seulement dans la queue de l'épididyme. De plus, un accroissement des dommages oxydatifs à l'ADN est visualisé dans l'épithélium de la queue de l'épididyme et dans les spermatozoïdes de cette région. Une carence en sélénium a été initiée pour contrecarrer une éventuellle compensation fonctionnelle provenant des autres GPx épididymaires. Une initiation des voies apoptotiques est observée chez les animaux KO pour gpx5 et carencés dans la queue de l'épididyme. De façon surprenante, des perturbations redox sont aussi visualisées dans d'autres organes comme le foie et le testicule.

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Oblette, Antoine. "Spermatogenèse in vitro chez la souris : impact sur la qualité nucléaire du spermatozoïde, sur le développement et l'épigénétique de l'embryon issu d'ICSI." Thesis, Normandie, 2019. http://www.theses.fr/2019NORMR004.

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Abstract:

Depuis quelques années, une biopsie testiculaire suivie d’une congélation du tissu testiculaire est proposée aux enfants atteints de cancer avant introduction d’un traitement gonadotoxique. Cette procédure de préservation de la fertilité est proposée avec l’espoir qu’une méthode de restauration de la fertilité soit développée. Le tissu testiculaire décongelé pourrait ainsi être utilisé afin d’effectuer une maturation in vitro, évitant la réintroduction de cellules tumorales, pour produire des spermatozoïdes. Ce travail de thèse a consisté, dans un premier temps, à évaluer la mise en place de la méthylation de l’ADN au sein du tissu testiculaire prépubère de souris au cours de la spermatogenèse in vitro. La culture de tissu testiculaire frais ou décongelé de souris prépubère permet le maintien des niveaux d’expression des ADN méthyltransférases 1 et 3a dans les spermatogonies et les spermatocytes. De plus, la méthylation de l’ADN est retrouvée jusque dans les spermatozoïdes produits in vitro. Par la suite, la qualité nucléaire des spermatozoïdes ainsi obtenus a été analysée. La culture de tissu testiculaire n’a pas d’impact sur le taux d’aneuploïdie, la condensation de la chromatine et la fragmentation de l’ADN spermatique. Cependant, la congélation suivie par la culture organotypique augmente la proportion de spermatozoïdes avec un ADN oxydé. Enfin, la fonctionnalité des spermatozoïdes produits in vitro a été analysée par micro-injection ovocytaire et la dynamique de différentes marques épigénétiques a été étudiée au cours du développement préimplantatoire. Les taux de développement embryonnaire sont diminués par l’utilisation de spermatozoïdes produits in vitro. Les niveaux des histones H3K4me3, H3K27me3 et H3K9ac sont peu modifiés dans les embryons issus de spermatozoïdes générés in vitro alors que la méthylation et déméthylation de l’ADN sont plus impactées. La production de spermatozoïdes après culture de tissu prépubère frais ou décongelé dans le modèle murin a permis de mettre en évidence que cette procédure n’est pas sans impact sur l’embryon précoce bien que la qualité des spermatozoïdes produits soit peu altérée In recent years, testicular biopsy followed by the freezing of testicular tissue has been proposed to children with cancer before the introduction of a gonadotoxic treatment. This fertility preservation procedure is offered with the hope that a fertility restoration method will be developed. The thawed testicular tissue could thus be used to perform in vitro maturation, avoiding the reintroduction of tumor cells, to produce spermatozoa. This thesis work first consisted in assessing the establishment of DNA methylation in mouse prepubertal testicular tissue during in vitro spermatogenesis. The culture of fresh or thawed mouse testicular testicular tissue allows the expression levels of DNA methyltransferases 1 and 3a to be maintained in spermatogonia and spermatocytes. In addition, DNA methylation is found even in in vitro produced spermatozoa. The nuclear quality of these spermatozoa was then analyzed. The culture of testicular tissue has no impact on sperm aneuploidy rate, chromatin condensation and DNA fragmentation. However, freezing followed by organotypic culture increases the proportion of spermatozoa with oxidized DNA. Finally, the functionality of in vitro produced spermatozoa was analyzed by oocyte microinjection and the dynamics of different epigenetic marks was studied during preimplantation development. Embryo developmental rates are decreased when using in vitro produced spermatozoa. The levels of H3K4me3, H3K27me3 and H3K9ac are slightly modified in embryos derived from spermatozoa generated in vitro whereas DNA methylation and demethylation are more affected. The production of spermatozoa after culture of fresh or thawed prepubertal tissue in the mouse model has shown that this procedure is not without impact on the early embryo, although the quality of the spermatozoa produced is relatively unaltered

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Fierro-Pastrana, Reyna-Carmen. "Etude de l'architecture moléculaire de la membrane plasmique et des membranes acrosomiques du spermatozoïde humain : leurs modifications au cours des phénomènes de capacitation et de la réaction acrosomique." Nancy 1, 1997. https://hal.univ-lorraine.fr/tel-01747360.

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Abstract:

Ce travail a été mené en utilisant la technique de cytofluorométrie et la technique de microscopie électronique. La première partie met en évidence la localisation des résidus N-Acétylglucosamine au niveau de la membrane plasmique, galactose au niveau de la membrane externe de l'acrosome, et mannose et fucose au niveau de la membrane interne de l'acrosome. On a mis au point une technique de triple marquage en utilisant simultanément trois fluorochromes différents (iodure de propidium, GB24 et lectine). Ces résultats ouvrent une orientation vers des applications pratiques pour l'exploration des qualités fonctionnelles du sperme dans le cadre des études des hypofertilités et des indications cliniques des techniques d'assistance médicale à la procréation. La deuxième partie du travail aborde l'étude de l'influence des cytokines sur la fécondance du sperme. Les résultats montrent qu'il existe chez l'homme des corrélations entre la fixation de certaines cytokines sur les spermatozoïdes et des altérations du spermogramme (nombre, mobilité et formes immatures des spermatozoïdes). Les données obtenues permettent une meilleure connaissance des relations cytokine-spermatozoïde et d'envisager des applications à l'exploration de la fécondance du sperme et de ses mécanismes.

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Elkhatib, Razan. "Caractérisation de la lamina nucléaire et de ses protéines partenaires au cours de la spermatogenèse humaine." Thesis, Aix-Marseille, 2017. http://www.theses.fr/2017AIXM0203.

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Abstract:

La morphogénèse des spermatozoïdes a lieu pendant la spermiogénèse, la dernière phase de la spermatogenèse.Cette différenciation est accompagnée de modifications drastiques de l’enveloppe nucléaire associées à un fort remodelage chromatinien. Notre travail été centré sur l'enveloppe nucléaire des spermatides pendant la spermiogénèse humaine. Nous avons notamment caractérisé la lamina nucléaire, réseau protéique composant de l’enveloppe nucléaire, et ses protéines partenaires potentiellement impliqués dans les liaisons lamine-chromatine: les protéines à domaine LEM, LBR, la protéine chromatinienne BAF et BAF-L.Nous avons révélé la présence exclusive des lamines de type B concentrées au pôle postérieur à la fin de la spermiogénèse dans les spermatozoïdes, et nous avons identifié et caractérisé l’isoforme testicule-spécifique lamine B3 humain.Nous avons découvert et caractérisé la lamine A2, un isoforme méiotique du gène LMNA, chez l'homme et la souris.Nous avons ensuite étudié ces protéines chez des patients atteints de globozoospermie, et nous avons pu identifier BAF comme un nouveau biomarqueur de l’immaturité des noyaux de spermatozoïdes. Par ailleurs, nous avons identifié la deuxième mutation perte de fonction dans le gène SUN5 chez 3 patients apparentés, et validé son implication dans la mise en place de la jonction tête-flagelle des spermatozoïdes.Notre caractérisation de la lamina nucléaire et ses protéines partenaires au cours de la spermiogénèse humaine apporte une meilleure compréhension de son rôle dans la différenciation des spermatides en spermatozoïdeset peut être la base de nouveaux champs d’investigation cas d’infertilité liés à des anomalies nucléaires The morphogenesis of mature spermatozoa takes place during spermiogenesis, the last phase of spermatogenesis.This differentiation involves drastic changes in the nuclear envelope associated with profound chromatin remodelling.Our work was focused on the nuclear envelope of spermatids during human spermatogenesis.We have characterized, the nuclear lamina, a protein meshwork component of the nuclear envelope, and its protein partners potentially implicated in the linkage lamin-chromatin: LEM-domain proteins, LBR, chromatinien protein BAF and BAF-L.Our study revealed the exclusive presence of B-type lamins concentrated at the posterior pole of mature spermatozoaat the end of spermiogenisis and we have identified and characterised the testis-specific isoform lamin B3 in human.We have also discovered and characterized the lamin A2, a meiotic isoform expressed from the LMNA gene in human and mouse. By studying abnormal globozoospermic spermatozoa, we were able to identify BAF as a potential biomarker of spermatozoa nucleus immaturity.Moreover, we have identified the second loss-of-function mutation in the nuclear envelope protein SUN5 in three related patients, and thus demonstrated its involvement in the formation of the spermatozoa head-tail junction.Our characterization of the nuclear lamina and its protein partners during human spermiogenesis, provides a better understanding of its role in the differentiation of spermatids into spermatozoa, and provides a solid basis for future investigation of cases of male infertility related to nuclear anomalies

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Berby, Benoît. "Τélοmères et altératiοns nucléaires des spermatοzοïdes humains". Electronic Thesis or Diss., Normandie, 2024. http://www.theses.fr/2024NORMR117.

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Abstract:

Les télomères sont des structures essentielles de la biologie des eucaryotes, participant à la réplication et à la protection du génome. Ils interagissent avec le contenu nucléaire soit directes, soit via un complexe de shelterines appelé télosome. Ils raccourcissent après la division cellulaire. Les télomères spermatiques ont des rôles et une architecture spécifiques. Organisés en doublets et quadruplets, un noyau de spermatozoïde haploïde contient entre 12 et 23 signaux détectables. Raccourcis par les divisions successives, ils font l'objet d'une restauration et d'un allongement permanents dans les cellules germinales. Leur longueur varie selon les individus et les générations, interrogeant sur les facteurs impliqués.Dans le cadre du cette thèse, nous avons étudié trois situations différentes. Premièrement, nous avons cherché à savoir si la longueur des télomères et le nombre moyen de télomères dans le noyau spermatique étaient liés au stress oxydatif et aux altérations des paramètres nucléaires parmi les hommes infertiles. Nous avons réalisé une étude prospective sur 52 hommes, avec un groupe cas de 30 hommes infertiles présentant des altérations conventionnelles des paramètres du sperme et un groupe contrôle d'hommes fertiles normozoospermiques. Le nombre moyen de télomères par tête de spermatozoïde était significativement plus élevé chez les cas (21.7 ± 4.3 versus 18.8 ± 3.0, p = 0.049) tout comme la présence d’espèces réactives de l'oxygène intracytoplasmiques et les défauts de condensation. Plus le nombre de télomères était élevé, plus il y avait de défauts de condensation de la chromatine (r = 0.29, p 0.04).Deuxièmement, nous avons évalué l'impact du cancer du testicule et de ses traitements sur les télomères spermatiques. Nous avons réalisé une étude ancillaire sur 29 patients dans le cadre d'un projet de recherche qui suivait des patients atteints de cancer du testicule avant et après chimiothérapie ou radiothérapie adjuvante. Les patients avaient un nombre plus élevé de signaux de télomères par tête de spermatozoïde que les témoins avant et après le traitement (18.1 ± 2.7 versus 15.2 ± 1.4, p = 0.004 au diagnostic et 18.0 ± 3.2 à T24). La longueur moyenne des télomères spermatiques ne variait pas entre les groupes. Après chimiothérapie, les patients présentaient la combinaison la plus élevée de télomères extrêmement courts et le nombre le plus élevé de télomères par tête de spermatozoïde (58% versus 29% après radiothérapie).Troisièmement, nous avons évalué les paramètres conventionnels et nucléaires (télomères et fragmentation de l'ADN) du sperme parmi une population de 50 donneurs de sperme fertiles et en bonne santé ayant donné des spermatozoïdes sur une période de 24 ans. Plus le don était ancien, plus la numération spermatique était élevée (r = 0.46, p = 001) et plus le nombre de signaux télomériques était faible (r = 0.27, p = 0.04). Les hommes plus âgés avaient une plus grande proportion de noyaux avec un nombre attendu de signaux (12-23). La distribution du nombre de télomères par tête spermatique différait entre les dons effectués avant 1998 et après 2000. Les hommes de moins de 36 ans ayant fait un don après 2000 avaient des télomères plus courts que les autres groupes.Nous avons montré que les altérations des télomères des spermatozoïdes sont présentes parallèlement aux altérations conventionnelles du spermogramme et au cancer des testicules. Nous nous soulevons des inquiétudes concernant la longueur des télomères spermatiques chez les jeunes hommes contemporains, parallèlement à la baisse mondiale du nombre de spermatozoïdes. Les télomères des spermatozoïdes apparaissent une cible précieuse pour l'évaluation de la qualité du sperme Telomeres are pivotal structures of eukaryote biology, engaged in genome replication and protection. Their interactions with nuclear content are either direct or mediated via a shelterin complex named telosome. They are known to decreased after cell division. Sperm telomeres have specific roles and architecture. Organized in doublets and quadruplets, their number expected in a haploid sperm nucleus is comprised between 12 and 23. Essential but diminished during meiosis, they are subject to permanent restauration and lengthening in germinal sperm cells. Their length varies amongst individuals and generations, interrogating about factors implicated in sperm telomere shortening and disorganization. During the present work, we focused on three different situations. First, we investigate whether sperm telomere length and mean number of telomeres in sperm nucleus were related to oxidative stress and nuclear parameters alterations in a population of infertile males. We performed an prospective study over 52 males, with a case group of 30 infertile males presenting conventional semen parameter alterations and a control group of normozoospermic fertile males. Mean number of telomeres per sperm head was significantly elevated in infertile men with oligozoospermia (21.7 ± 4.3 versus 18.8 ± 3.0, p = 0.049) as were as intracytoplasmic reactive oxygen species and condensation defects. The higher number of telomeres, the more chromatin condensation defects were observed (r = 0.29, p 0.04). Secondly, we assessed the impact of testicular cancer and its therapy on sperm telomeres. We performed an ancillary study of 29 patients over a research project which had followed testicular cancer patients before and after adjuvant chemotherapy and radiotherapy. Patients had a higher number of telomere signal per sperm head than control before and after treatment (18.1 ± 2.7 versus 15.2 ± 1.4, p = 0.004 at diagnosis and 18.0 ± 3.2 at T24). Mean sperm telomere length did not vary between groups. Patients who received chemotherapy had the highest combination of extremely shorts sperm telomeres and highest number of telomeres per sperm head (58% versus 29% in the radiotherapy group). Thirdly, we assessed conventional and nuclear (telomeres and DNA fragmentation) semen parameters among a population of 50 healthy fertile sperm donor who donated spermatozoa over 24 years long timeframe. The older donation was, the higher sperm count (r = 0.46, p = 001). Older donations had less telomere signals (r = 0.27, p = 0.04). Older men had less alterations of telomere interactions and presented more sperm nucleus exhibiting the expected number of telomere signals (12-23). Distribution of telomere number per sperm head differed between donations made before 1998 and after 2000. Men under 36 who donated after 2000 had shorter telomeres than the other groups. We showed that sperm telomere alterations are presents alongside conventional semen alterations and testicular cancer. We raised concern regarding sperm telomere length of contemporary youth, in parallel to worldwide sperm count decline. Sperm telomeres are a valuable target for semen quality evaluation

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Abi, Nahed Roland. "Les phospholipases A2 au cours de la fécondation et du développement embryonnaire préimplantatoire : mécanismes moléculaires d'action et développement thérapeutique." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015GREAV031/document.

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Abstract:

La dégradation des fonctions de reproduction masculine dans les dernières décennies, et par suite, la baisse du taux de fertilité chez l'homme a renforcé les démarches de recherche des causes d'infertilité masculine, qu'elles soient génétiques, ou environnementales, mettant en œuvre les perturbateurs endocriniens ou d'autres produits reprotoxiques. Par ailleurs, les traitements palliatifs tels que l'aide médicale à la procréation ne permettent qu'à 1 couple sur deux d'obtenir une grossesse. La recherche vise donc également à définir de nouvelles pistes d'amélioration de ces techniques. Les phospholipases A2 (PLA2) sont des enzymes abondamment exprimées dans les organes reproducteurs mâles, le sperme éjaculé et dans le tractus génital femelle. Elles jouent des rôles importants dans la capacitation, la réaction acrosomique (RA) et la fécondation. Nous avons montré au laboratoire que la PLA2 murine secrétée de groupe X (mGX) est présente dans l'acrosome des spermatozoïdes de souris. Elle est libérée au cours de la RA et s'avère un inducteur puissant de la RA. Les mécanismes permettant ces effets sont encore mal connus. Par l'utilisation d'inducteurs et d'inhibiteurs des PLA2, sur des modèles murins wild type ou KO pour certaines PLA2, ce travail montre que durant la capacitation, l'activation des iPLA2 β permet de déclencher une RA spontanée dans une sous-population spécifique de spermatozoïdes. Au cours de la RA induite par la progestérone (P4), On a pu aussi valoriser le rôle des iPLA2 β qui initie la cascade de la RA et permet que les sPLA2 soient activées pour amplifier le déroulement de la réaction acrosomique. Par ailleurs, ce travail montre que l'effet de mGX sur le taux de fécondation et de développement embryonnaire ne dépend pas du taux de la RA. Cet effet obtenu grâce à mGX n'est pas observé avec d'autres sPLA2 (murine ou humaine), ni avec la P4 ce qui lui confère une propriété espèce dépendante For the last ten years, the impairment of the male reproductive functions has highly increased, while the use of assisted reproductive techniques has also increased. Despite this evolution, the pregnancy rates obtained in in vitro fertilization (IVF) remain low, as only one in two couples will obtain a pregnancy after 4 attempts. Research has to discover new ways to gain in reproductive impact. Hence, many studies have recently been developed to test molecules that could improve the IVF results. Phospholipases A2 (PLA2s) are part of these molecules. They play an important role, because of their abundant expression in: male reproductive organs, in ejaculated sperm and in the female tract. Several studies have suggested a role for members of the secreted phospholipase A2 family in capacitation, acrosome reaction (AR), and fertilization. We demonstrated previously that sperm from mGX knock-out mice had a severely impaired fertilization potential in vitro, but the molecular nature of these enzymes and their specific functions have remained elusive. Our aims were to study the mechanism of the acrosome reaction by focusing on different kinds of PLA2 using inhibitors and knockout mice for each type of PLA2. We demonstrate the importance of iPLA2β in spontaneous AR occurring during capacitation. We also show that iPLA2β and sPLA2 of group X are both involved in progesterone (P4)-induced AR in mouse sperm. In addition we show that in the mouse neither P4 nor any of the other sPLA2s tested are able to mimic the IVF improvement obtained with mGX-treatment. We also demonstrate that this improvement obtained with phospholipase A2 murine group X is not dependent on the rate of AR. These results demonstrate that sPLA2s are not commutable in the context of mouse sperm fertility, indicating that group X sPLA2 is unique to improve fertility outcome

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Yassine, Sandra. "La globozoospermie, des mécanismes moléculaires à de nouvelles stratégies thérapeutiques." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015GREAV008/document.

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Abstract:

L'infertilité masculine est une préoccupation croissante dans les sociétés modernes. Parmi les différentes causes d'infertilités masculines, certaines ont une origine génétique. C'est le cas de la globozoospermie de type I, une infertilité sévère caractérisée par la production exclusive des spermatozoïdes ayant une tête ronde et sans acrosome. Cette pathologie présente un phénotype complexe associant à l'absence de l'acrosome, des défauts de compaction nucléaire, des lésions de l'ADN et une déficience d'activation ovocytaire.Récemment notre équipe a montré que le gène DPY19L2 est impliqué dans 60 à 80% des cas de globozoospermie de type I et représente donc la cause majeure de la globozoospermie de type I chez l'homme. La fonction de la protéine étant complètement inconnue au moment de l'identification du gène DPY19L2, nous avons alors réalisée une étude fondamentale sur les mécanismes moléculaires expliquant la pathogénie moléculaire de cette maladie et avons démontré, grâce à l'utilisation du modèle des souris KO pour le gène Dpy19l2, que la protéine est localisée dans la membrane nucléaire interne et est nécessaire à l'ancrage de l'acrosome sur l'enveloppe nucléaire. Dans le but d'identifier d'autres acteurs impliqués dans l'attachement de l'acrosome au noyau spermatique, nous nous sommes intéressés à l'étude de la protéine Sun5 de l'enveloppe nucléaire interne située en regard de l'acrosome qui pouvait être un partenaire de Dpy19l2. On a trouvé que les deux protéines n'étaient pas des partenaires puisque Sun5 était, contrairement à ce qui a été décrit dans la littérature, du côté postérieur opposé à l'acrosome. En deuxième temps, nous nous sommes intéressés à la compréhension des principales causes moléculaires de l'absence de fécondation ou du très faible taux de réussite lors d'ICSI réalisées avec des spermatozoïdes globozoospermiques.Pour ce faire, nous avons recherché la protéine PLC ζ, le principal facteur spermatique activateur de l'ovocyte, dans les spermatozoïdes humains provenant de patients délétés pour le gène DPY19L2 et murins (de souris KO Dpy19l2-/-) et avons montré qu'effectivement cette protéine est absente tant chez les patients que dans le modèle d'étude murin. Nous avons également réalisé une étude comparative des principales étapes de la compaction du génome spermatique entre les souris mâles WT et Dpy19l2-/- et nous avons montré que la compaction du génome des spermatozoïdes globozoospermiques était défectueuse avec un défaut de protamination et une rétention des histones. Ainsi, la déficience en PLC ζ, les défauts de compaction et le taux élevé de fragmentation de l'ADN sont susceptibles d'expliquer l'échec de la fécondation après ICSI, et le développement très réduit des embryons issus des patients déficients pour le gène DPY19L2 ainsi que des souris Dpy19l2-/-. La compréhension de cette physiopathologie devrait permettre la proposition de nouvelles stratégies thérapeutiques permettant d'améliorer le taux du développement embryonnaire en AMP Male infertility is a growing concern in modern societies. Among the various causes of male factor infertility, some have a genetic origin. This is the case of type I globozoospermia, a severe infertility characterized by the presence in the ejaculate of a majority of round spermatozoa devoid of acrosome. This pathology presents a complex phenotype associating to the absence of the acrosome, sperm nuclear compaction defects, DNA damage and failure in egg activation.Recently our team identified the DPY19L2 gene as responsible for a large majority of pure globozoospermia cases (>80%) and therefore represents the major cause of type I globozoospermia in humans. The function of the protein was completely unknown at the time of identification of DPY19L2 gene, we then performed a fundamental study of the molecular mechanisms underlying the molecular pathogenesis of the disease and have shown, through the use of knockout mice model for the Dpy19l2 gene, that the protein is localized in the inner nuclear membrane and is necessary for the anchoring of the acrosome to the nuclear envelope. In order to characterize new actors of acrosome attachment, we assessed the importance of Sun5 (also called Spag4l) in acrosome attachment which was previously shown to be expressed in NE of spermatogenic cells, facing the acrosome and that could be a partner of Dpy19l2. Interestingly we demonstrate that Sun5 and Dpy19l2 are not partners and that Sun5, is not as initially reported, facing the acrosome but is in fact excluded from this zone. We were also interested in understanding the main molecular causes of the poor fertilization ability or the very low success rate in ICSI when performed with globozoospermics sperm.Therefore we have searched the PLC ζ protein, the sperm factor thought to induce the Ca2+ oscillations responsible for egg activation, in human spermatozoa from patients with DPY19L2 deleted gene and in murine spermatozoa from Dpy19l2 Knock-Out mice and showed that actually this protein is absent both in patients and in KO mice. We also made a comparative study of the main stages of genome compaction of sperm from both WT and Dpy19l2 KO mice and we showed that Dpy19l2 deficient sperm displays defective genome condensation and DNA alterations. Thus, PLC ζ deficiency, the compaction defects and the high rate of DNA fragmentation may explain the failure of fertilization after ICSI, and the poor development of embryos from patients deficient for the gene DPY19L2 as well as Dpy19l2 KO mice.Understanding the physiopathology of globozoospermia should allow the proposal of new therapeutic strategies that improves the rate of embryonic development in ART

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COLLEU, DANIEL. "Etude biochimique et ultrastructurale de la stabilisation du noyau du spermatozoide humain. Modifications observees apres selection des spermatozoides pour la fecondation in vitro." Rennes 1, 1992. http://www.theses.fr/1992REN10173.

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Abstract:

La morphologie des spermatozoides est consideree comme un indicateur de la fertilite masculine. Les anomalies importantes de la tete du spermatozoide sont souvent associees a des alterations du noyau mais il n'existe pas toujours de correlation entre le degre de stabilite du noyau et les valeurs du spermocytogramme. Les protamines nouvellement associees au dna permettent la stabilisation du noyau par formation de ponts disulfures. Nous mettons en evidence une oxydation des thiols libres au cours du transit epididymaire correlee avec une diminution de l'accessibilite au dna. Le noyau du spermatozoide ejacule n'est pas une structure stable mais peut etre le siege d'une hyperstabilisation par oxydation des thiols libres mesures dans la queue de l'epidyme. Nous avons montre que l'electrophorese des nucleoproteines du noyau du spermatozoide humain presente des differences en fonction du spermocytogramme. Ces variations evoquent une transition incomplete des histones en protamines. Dans un meme ejaculat, nous mettons en evidence le meme mecanisme pour les spermatozoides les moins mobiles. Un anticorps monoclonal dirige contre l'une des protamines (hpi) nous a permis de preciser l'organisation du complexe desoxyribonucleoproteique dans le noyau du spermatozoide et de confirmer la grande stabilite du noyau apres la preparation de spermatozoides pour la fiv. Les techniques de tri utilisees en fecondation in vitro (fiv) permettent de selectionner les spermatozoides dont le noyau possede la chromatine qui reste stable jusqu'au contact avec l'ovocyte. L'utilisation de cet anticorps sur des spermatozoides fixes dans les structures peri-ovocytaires et au contact de l'ovocyte montre que le noyau commence sa decondensation des qu'il entre en contact avec le cytoplasme ovocytaire et les protamines disparaissent dans les 10 minutes suivant ce contact. Cette decondensation tres rapide est possible a plusieurs stades du developpement des ovocytes

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Rouen, Alexandre. "Réarrangements chromosomiques chez l'homme : ségrégation des chromosomes à la méiose et procréation." Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066735.

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Abstract:

Les translocations chromosomiques et les autres types de réarrangements peuvent, bien qu'associées à un phénotype normal, mener à la transmission d'un contenu génétique déséquilibré à la descendance. Il n'est pas possible de distinguer les chromosomes équilibrés des déséquilibrés, ce qui empêche toute sélection dans le cadre d'une fécondation in vitro (FIV). Nous avons ainsi mené une série de projets de recherche dont le but a été de mettre en évidence des caractéristiques spécifiques de ces spermatozoïdes déséquilibrés, afin de pouvoir les distinguer au cours d'une FIV. Nous avons montré que les spermatozoïdes déséquilibrés présentaient des taux de fragmentation de l'ADN plus élevés, étaient moins denses, et avaient un volume nucléaire supérieur. Ces constatations ont mené au développement d'une procédure de sélection des spermatozoïdes équilibrés chez les porteurs de réarrangements chromosomiques. En utilisant le hypo-osmotic swelling test (HOST), nous avons montré qu'une morphologie flagellaire spécifique était associée à un contenu chromosomique équilibré. Nous proposons d'utiliser cette procédure de sélection dans le cadre d'une ICSI, afin d'améliorer le pronostic reproductif chez les couples concernés. Nous proposons également d'évaluer la proportion de spermatozoïdes déséquilibrés chez chaque patient porteur de réarrangement chromosomique. En effet, bien que ce taux varie d'un patient à l'autre, il est stable dans le temps pour un patient donné. Il est de plus un élément déterminant dans le choix d'une des options de prise en charge : reproduction naturelle, insémination artificielle avec test de migration survie (TMS), ICSI avec sélection par HOST, et diagnostic préimplantatoire (DPI) Chromosomal translocations and other balanced rearrangements, although usually associated with a normal phenotype, can lead to the transmission of an abnormal unbalanced genetic content to the offspring. Balanced and unbalanced spermatozoa are indistinguishable, making it impossible to select them prior to in vitro fertilization. We conducted a series of research projects aimed at evidencing specific characterics for unbalanced spermatozoa, in a way to ultimately distinguish them from balanced ones during in vitro fertilization. We showed that unbalanced spermatozoa had higher DNA fragmentation rates, were less dense, and that their nuclear volume was higher. This led to developing a selection procedure for balanced spermatozoa in rearrangement carriers. Using the hypo-osmotic swelling test (HOST), we showed that a specific flagellar morphology was associated with balanced chromosomal status. We suggest using this procedure prior to ICSI in order to improve the reproductive prognosis in those patients. We also suggest evaluating the proportion of unbalanced spermatozoa in every patient with a chromosomal rearrangement. Although this proportion varies among patients, it is stable over time for a given patient. We believe this is a decisive element in choosing between the different available options : natural conception, artificial insemination with discontinuous gradient centrifugation, ICSI with HOST-based selection, and pre-implantation genetic diagnosis (PGD)

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Emiliozzi, Clélia. "Dialogue transmembranaire au cours de la capacitation des spermatozoi͏̈des humains : rôle des phosphorylations sur tyrosine." Montpellier 1, 1997. http://www.theses.fr/1997MON1T019.

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Vago, Philippe. "Contribution à l'étude par cytométrie en flux de la chromatine dans les cellules somatiques et les cellules germinales mâles." Montpellier 1, 1993. http://www.theses.fr/1993MON1T019.

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Thimon, Véronique. "Protéases et maturation épididymaire des spermatozoïdes." Tours, 2005. http://www.theses.fr/2005TOUR4016.

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Abstract:

La forme germinale de l'enzyme de conversion de l'angiotensine I (ECAg) présente sur la membrane des spermatozoïdes testiculaires apparaît dans le fluide de la tête de l'épididyme, long tube pelotonné reliant le testicule au canal déférent dans lequel les spermatozoïdes de mammifères acquièrent progressivement leur pouvoir fécondant et leur motilité. Cette libération laisse dans la membrane du spermatozoïde la partie C-terminale trans-membranaire et intracellulaire de l'ECAg. Le site de coupure déterminé par spectrométrie de masse se fait entre l'Arg622 et la Leu623 de la séquence de l'ECAg ovine mature. Ce processus de libération n'est pas dépendant de la phosphorylation de l'ECA. In vitro la libération est activée par le fluide de la tête de l'épididyme, activation fortement diminuée par l'AEBSF, inhibiteur de serine protéase. Ces résultats nous ont conduit à rechercher les sérine protéases du fluide épididymaire. Nous avons découvert que la furine, une sérine endoprotéase calcium-dépendante, est présente dans le fluide depuis la tête médiane jusqu'au corps distal de l'épididyme. Un marquage métabolique montre qu'elle est synthétisée et libérée uniquement au niveau de la tête médiane. Cette protéase ne semble pas être impliquée dans la libération de l'ECA. La furine participe à la maturation protéolytique de précurseurs de nombreuses protéines et pourrait intervenir dans la maturation des protéines du fluide ou de la membrane du spermatozoïde. C'est la première fois qu'elle est mise en évidence in vivo dans un fluide biologique. Ces deux enzymes, ECAg et furine, sont libérées de façon séquentielle dans le fluide de la même région de l'épididyme. Une même sécrétase présente dans le fluide pourrait être responsable de cette libération de leur ectodomaine The germinal form of angiotensin-I converting enzyme (ACEg) is present on the membrane of testicular spermatozoa, but is absent from testicular fluid. It first appears in the fluid of the epididymis, a long tubule that connects the testis to the deferent duct and in which mammalian spermatozoa acquire their motility and ability to fertilize an ovum. The epididymal fluid derived ACEg comes from the proteolytic cleavage of the sperm membrane bound form, which leaves the C-terminal intracellular and transmembrane part of the enzyme associated with the sperm. The cleavage site, determined by mass spectrometry, occurs between Arg622 and Leu623 of the ovine ACEg sequence. This shedding process is not dependent upon phosphorylation of ACEg and, in vitro, we found that it is increased by fluid from the proximal (caput) epididymis, and strongly reduced by AEBSF, a serine protease inhibitor. As a result of studies aimed at determining the fluid serine protease responsible for this process we identified furin, a serine endoprotease calcium-dependent, that is present in the epididymal fluid. Metabolic labeling studies showed that furin is synthesized and released only in the middle region of the caput epididymis and is absorbed out of the fluid by the distal corpus epididymis. This protease is implicated in the proteolytic maturation of many proteins, but does not participate in the release of ACEg. This protease is likely to be involved in the maturation of other luminal or sperm plasma membrane proteins in the epididymis. Both enzymes, ACEg and furin, are released in the fluid of nearby epididymal zones. Based on their cleavage site a common fluid secretase or sheddase may be implicated in their ectodomain shedding

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Gatti, Jean-Luc. "Rôle du pH interne et du potentiel de membrane dans l'activation de la mobilité et du métabolisme des spermatozoïdes." Nice, 1987. http://www.theses.fr/1987NICE4082.

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Abstract:

L'augmentation du pH interne due à un échange membranaire sodium-protons produit l'activation des spermatozoïdes d'oursins. La Na-K-ATPase membranaire est stimulée par l'augmentation de la concentration interne du sodium. L'initiation de la mobilité des spermatozoïdes de truite dépend de la composition du milieu : elle est inhibée par une forte concentration de potassium et de protons, l'initiation du mouvement est indépendante d'une variation du ph interne, le potentiel de membrane plasmique dépend des gradients potassium et protons et sa valeur est plus élevée dans les milieux inhibant l'initiation de la motilité. Chez le bélier et le verrat, la mobilité s'acquiert au cours du passage dans l'épididyme, au cours de cette maturation le pH interne est stable, et les mécanismes qui le contrôlent ne changent pas

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Fénichel, Patrick. "La protéine reconnue par l'anticorps monoclonal GB24 sur l'acrosome du spermatozoi͏̈de humain : un marqueur et un acteur de la féconddation." Montpellier 1, 1991. http://www.theses.fr/1991MON11242.

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Boué, Franck. "Proteines epididymaires du spermatozoide humain et fecondation." Paris 6, 1992. http://www.theses.fr/1992PA066650.

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Abstract:

Nous avons realise une banque d'anticorps monoclonaux contre des proteines de surface du spermatozoide humain. Nous avons recherche l'origine des proteines avec nos anticorps sur des coupes de testicules et d'epididyme humain. Nous avons teste l'action de nos anticorps sur la fecondation. Nous avons montre que parmi les anticorps reconnaissant les proteines epididymaires, 3 modifient le pourcentage de fecondation alors que 9 modifient le nombre de spermatozoides fixes a la membrane de l'ovocyte. Nous avons par la suite focalise notre recherche sur l'anticorps ca6 qui reconnait une proteine epididymaire de 100 kda et qui modifie fortement la fecondation. Nous avons mis en evidence la proteine ca6 sur les spermatozoides d'autres mammiferes et nous ne l'avons pas retrouve dans des extraits d'organes humains a l'exception de la peau. Aucune action sur la liaison a la zone pellucide humaine n'a ete mise en evidence. Nous avons microsequence la proteine et nous avons trouve des homologies avec les keratines humaines 1 et 10. Des electrophoreses en double dimension ont permis de montrer apres revelation en western blot que la proteine resulte de l'association de deux sous-unites. Ces resultats suggerent qu'une proteine de la famille des keratines joue un role dans la fixation des spermatozoides a l'oeuf

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Dissertations / Theses on the topic 'Spermatozoïde'

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