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Castillon, Nicolas. "Culture tridimensionnelle de cellules épithéliales respiratoires humaines : applications à la thérapie génique et cellulaire." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMM207.
Full textAbstract:
@Nous avons pu mettre en évidence que des cellules épithéliales respiratoires humaines cultivées sous forme de sphéroi͏̈des pouvaient mimer, à long terme, la structure et la fonctionnalité d'un épithélium respiratoire de surface. Nous avons étudié la capacité de ces structures 3-D à recoloniser un épithélium respiratoire dénudé. Par utilisation d'un vecteur lentiviral, codant la protéine GFP, nous avons également étudier la capacité de ces sphéroi͏̈des polarisés et différenciés à être transduits. Notre étude a pu montrer que ces structures 3-D pouvaient régénérer un épithélium respiratoire pseudostratifié et pouvaient être transduites par un vecteur lentiviral avec une expression à long terme de la protéine GFP et un maintien de la fonctionnalité épithéliale (fréquence ciliaire, sécrétion de chlore). Ces sphéroi͏̈des pourraient ainsi être un outil potentiel de thérapie génique et cellulaire dans la régénération d'un épithélium respiratoire mucoviscidosique@We have shown that human airway epithelial cells cultured as 3-D spheroid could mimic for a long term an airway surface epithelium structure and functionality. We analyzed the potential capacity of these 3-D structures to regenerate an airway epithelium and to be transduced using a pseudotyped lentiviral vector encoding GFP. Our results demonstrate that the spheroids can regenerate a well-differentiated human airway epithelium and can be efficiently transduced by a pseudotyped lentiviral vector with a sustained and long-term expression of the GFP, without any alteration of the spheroid structure and functionality (ciliary beating frequency and CFTR Cl- channel activity). The spheroids could be proposed as a potential tool for gene and cell therapy in order to repopulate a denuded airway epithelium in cystic fibrosis
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Hollender, Patrick. "Capacités migratoires et activité métalloprotéase de cellules impliquées dans le développement tumoral métastasiant et la réponse immune : cas des cellules leucémiques et des cellules dendritiques dérivées de monocytes." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMP207.
Full textAbstract:
Tout d'abord, nous avons montré que la différenciation granulocytaire de cellules myéloi͏̈des HL-60 et NB4 par l'ATRA et l'ACLA augmente leurs propriétés migratoires. L'ATRA induit une stimulation de l'uPA alors que l'ACLA stimule l'expression de la MMP-9. Ainsi, la MMP-9 et l'uPA facilitent la migration des cellules différenciées et, l'utilisation d'inhibiteurs de protéase au cours de processus de différenciation pourrait constituer un bénéfice clinique dans le traitement de " l'ATRA syndrôme ". Ensuite, nous avons étudié le profil migratoire de cellules dendritiques immatures et matures, dérivées de monocytes humains, et qualifiées de cellules professionnelles de la présentation de l'antigène. Nous avons pu démontrer l'importance de la forme membranaire active de la MMP-9 sur les capacités migratoires élevées des cellules dendritiques matures. Nous avons aussi montré que l'impact de certaines chimiokines (MIP-3b) sur la migration pourrait s'expliquer par le fait que ces chimiokines augmentent la production de la forme active de la MMP-9 et l'ensemble de ces résultats constitue une base de données utile à une exploitation clinique de ce type cellulaire.
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Klimchenko, Oléna. "Différenciation hématopoïétique des cellules souches embryonnaires humaines." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077056.
Full textAbstract:
L'hématopoïèse chez les vertébrés comporte deux vagues : l'une extra embryonnaire, transitoire dite primitive et la seconde d'origine intra embryonnaire dite définitive. Cette séquence chez les mammifères a bien été étudiée chez la souris La disponibilité limitée d'échantillons humains au stade des premières semaines du développement fait des cellules souches embryonnaires humaines (hES) un outil unique pour étudier les différents événements qui surviennent au cours de l'ontogenèse. L'objectif de ma thèse était d'étudier l'hématopoïèse embryonnaire en se basant sur le modèle des cellules ES pour caractériser des changements ontogéniques et mieux comprendre la physiopathologie de certaines hémopathies qui surviennent sur des progéniteurs foetaux. La première partie a été consacrée à l'étude du développement de la lignée érythroide et mégacaryocytaire. Ce travail a permis d'identifier un progéniteur bipotent érythro-mégacaryocytaire (MEP) au cours de l'hématopoïèse embryonnaire primitive humaine. Nous avons également montré que le MEP se situe en amont des progéniteurs monopotents commis exclusivement vers la lignée érythroïde et mégacaryocytaire et produisent respectivement les érythrocytes matures nucléés et les plaquettes. L'étude de la régulation spécifique du développement des MEPs embryonnaires a permis d'établir les mécanismes moléculaires de l'engagement vers une lignée spécifique pendant les différenciations érythroblastiques et mégacaryocytaires primitives. Ces résultats suggèrent que l'hématopoïèse primitive du sac vitellin chez l'homme est associée à l'émergence simultanée des lignées érythroblastiques et mégacaryocytaires. La deuxième partie de ma thèse a été consacrée à l'étude de l'ontogénie de la lignée monocytaire humaine. Ce travail nous a permis de montrer que le processus de différenciation des monocytes et des macrophages à partir des cellules ES humaines reproduit les grandes étapes de la monocytopoïèse observée chez l'adulte dans la moelle osseuse. Nous avons observé que les macrophages générés à la fois dans des cultures de cellules embryonnaires et foetales étaient fonctionnels, capables de phagocytose ainsi que de sécrétion d'interleukines et de facteurs de croissance. L'étude des interleukines produites a mis en évidence aussi bien au niveau moléculaire que protéique une balance vers un phénotype anti-inflammatoire ainsi qu'une réponse déficiente à la stimulation par le LPS et l'IFNy. Ces données complétées par le fait que les macrophages expriment fortement une grande variété de cytokines pro-angiogéniques et des quantités très importantes de métalloprotéases permettent de les classer dans le groupe des macrophages polarisés M2 doués principalement d'une fonction trophique et de remodellage tissulaire. La comparaison des systèmes de différenciation vers la lignée monocytaire à partir des cellules hES et des cellules CD34+ adultes et foetales dans les mêmes conditions cytokiniques suggère que les différences ontogéniques pourraient reposer sur des voies de différendation distinctes. L'ensemble de ces résultats suggère que les monocytes/macrophages issus de cellules embryonnaires et foetales humaines ont en commun des propriétés antiinflammatoires et trophiques qui pourraient avoir un rôle majeur dans l'implantation et le développement du foetus dans les premières semaines de la vieHematopoiesis in vertebrates includes two waves: one transitional extraembryonic called primitive and the second intra-embryonic origin called definitive. This sequence in mammals has been well studied in mice and much more difficult in humans for ethical reasons. The development of cell lines of human embryonic stem) offers a unique cellular model to study the different events mat occur during ontogeny. The goal of my thesis was to study embryonic hematopoiesis in the ES cell model to characterize the ontogenetic changes and better understand the pathophysiology of certain malignancies that occur on fetal progenitors. The first part of my thesis was devoted to studying the development of erythroid and megakaryocytic lineage. This work has identified the bipotent erythro-megakaryocytic progenitor (MEP) during thé embryonic primitive human hematopoiesis. We also showed that the MEP is upstream of monopotent progenitors committed exclusively to erythroid and megakaryocytic and produce mature nucleated erythrocytes and ,respectively. Platelets. The study of the specific regulation of embryonic development of MEPs help to establish the molecular mechanisms of commitment to a specific lineage differentiation during erythroblastic and megakaryocytic primitive. These results suggest that the primitive yolk sac hematopoiesis in humans is associated with the simultaneous emergence of erythroblastic and megakaryocytic fines. The second part of my thesis was devoted to the study of the ontogeny of human embyonic monopoesis. This work has enabled us to show that the process of macrophage differentiation from human ES cells reproduces the main stages of monopoiesis observed in adult bone marrow. Monocytic cells derived from human ES cells (huESC) express a combination of cell-surface markers that overlap with adult blood resident monocytes and showed an anti- inflammatory state that was confirmed at the level of secreted proteins. This polarization appeared to be related to ontogeny as fetal liver CD34+ cells- derived monocytic cells demonstrated a very similar phenotype. Both embryonic and fetal monocytic cells showed an enhanced expression of genes encoding tissue degrading enzymes, anti-inflammatory chemokines and scavenger receptors. They secreted high amounts of proteins acting on tissue remodeling and angiogenesis in comparison to blood adult monocytes and they promoted the development of large blood vessels in xeno-transplanted human tumors. These ontogenic functional properties correlated with a specific pathway of differentiation. These findings suggest that the differentiation of monocytic cells during human development may produce a majority of cells endowed mainly with antiinflammatory and trophic fonctions, supporting human fetus development
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Barral, Jérémie. "L' amplificateur ciliaire des cellules ciliées de l'oreille interne." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077015.
Full textAbstract:
L'audition bénéficie d'un dispositif d'amplification non-linéaire afin de détecter une large gamme d'intensités sonores. Le mécanisme sous-jacent pourrait provenir de la production active de force par la touffe ciliaire mécano-sensorielle des cellules ciliées. Cette organelle peut en effet osciller spontanément et agir comme un amplificateur non-linéaire sélectif en fréquence. En analysant la dynamique d'une touffe ciliaire issue du saccule de la grenouille taureau et immergée dans différents milieux visqueux, nous évaluons l'effet de la friction hydrodynamique. Nous montrons que les fluctuations intrinsèques, dues au faible nombre de molécules composants la touffe ciliaire, créent la source dominante de friction. En combinant application de force et simulation stochastique en temps réel de la mécanique ciliaire, nous avons mimé un environnement virtuel dans lequel une touffe ciliaire réelle est élastiquement couplée à deux voisines, simulant ainsi les conditions in vivo. Nous mettons en lumière l'effet du couplage sur l'augmentation de la cohérence de phase et la réduction du bruit. L'amplificateur auditif dépendrait donc de la coopération entre touffes ciliaires voisines afin d'accroître sa sensibilité et sa sélectivité fréquentielle. L'amplification non-linéaire est le prix à payer pour la sensibilité. Nous montrons que la réponse d'une touffe ciliaire à un stimulus complexe présente l'émergence de produits de distorsion et de phénomènes de masquagt qui rappellent ceux observés au niveau psychoacoustique. Nous soutenons que l'audition dépend du comportement générique d'oscillateurs actifs non-linéaires qui façonnent la sensation sonore à la périphérie di système auditifThe vertebrate ear benefits from nonlinear mechanical amplification to operate over a vast range of sound intensities. The amplificatory process is thought to emerge from active force production by sensory hair cells. The mechano-sensory hair bundle that protrudes from the apical surface of each hair cell can oscillate spontaneously and function as a frequency-selective, nonlinear amplifier. By analyzing the dynamics of a bullfrog's saccule hair bundle immersed in various viscous milieus, we evaluated the effect of hydrodynamic friction. We observed that intrinsic fluctuations, owing to the small number of molécules inside the hair bundle, create the dominant source of friction. By combining dynamic force clamp of a hair bundle with real-time stochastic simulations of hair-bundle mechanics, we could mimic a virtual environment in which a real hair-bundle is elastically coupled to two neighbours. This strategy is supposed to emulate the mechanical coupling that is observed in vivo. We found that coupling increased the phase coherence of spontaneous hair-bundle oscillations by effectively reducing noise. We argue that the auditory amplifier relies on hair-bundle cooperation to overcome intrinsic noise limitations and achieve high sensitivity and sharp frequency selectivity. Nonlinear amplification is the price to pay for high sensitivity. Two-tone stimulation of a single hair bundle generates distortion products and manifests masking phenomena, reminiscent of psychoacoustics studies. We thus argue that hearing relies on the generic behavior of active nonlinear oscillators that shapes the sensation of sounds at the periphery of the auditory System
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Grandordy, Béatrice. "Messagers intra-cellulaires du muscle lisse de voies aeriennes et des cellules inflammatoires pulmonaires." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05S005.
Full textAbstract:
Dans le poumon, neuromediateurs (acetylcholine, noradrenaline, tachykinines. . . ) et mediateurs de l'inflammation (histamine, leukotriene, lipoxynes. . ) peuvent a la fois inhiber l'adenylate cyclase et stimuler les phospholipases conduisant a l'accumulation d'inositol trisphosphate, le messager qui peut mobiliser le stocks de ca#+#+ intra-cellulaire, cependant, le couplage entre l'activation des recepteurs, la formation des messagers et les effects biologiques dependent de l'agoniste. L'activation de 20-30% des recepteurs muscariniques ou a la substance p seulement (contre > 90% des recepteurs a l'histamine, a la leukotriene d#4 et a la neurokinine a) produit une contraction maximale du muscle lisse. Dans les voies aeriennes pathologiques d'humains hyper-reactifs et de cochons d'inde pre-traites avec du paf, la capacite des recepteurs a l'histamine et a l'acetylcholine a entrainer l'accumulation de messagers intra-cellulaires n'est pas modifiee. L'activation de la phospholipase c conduit aussi a l'accumulation de 1,2 sn-diacylglycerol, l'activateur naturel de la proteine kinase c, qui pourrait etre impliquee dans la contraction et la phosphorylation des recepteurs -ad-renergiques du muscle lisse et l'antagonisme a la leukotrieme b#4 dans les poly-nucleaires. Les voies d'activation e/ou d'inhibition de l'adenylate cyclase, des phospholipases et de la proteine kinase c, offrent de multiples cibles pour le developpement de medicaments anit-asthmatiques.
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Drissi, Moulay Hicham. "Etude de l'expression et de la regulation du gene calci dans les cellules osteoblastiques humaines ; caracterisation d'un recepteur du cgrp." Paris 5, 1997. http://www.theses.fr/1997PA05S014.
Full textAbstract:
Le gene calc i code par epissage alternatif, pour la calcitonine et pour le peptide apparente au gene de la calcitonine (cgrp). Plusieurs travaux ont montre que le cgrp est exprime localement au niveau du tissu osseux, ce qui suggere que le cgrp pourrait avoir un role dans la regulation du metabolisme des cellules osseuses. Nous avons etudie l'expression du gene calc i dans les cellules osteoblastiques humaines, ainsi que sa regulation par le dibutyryl ampc dans une lignee d'osteosarcome humain ohs-4. Afin de determiner les mecanismes par lesquels le cgrp pourrait agir sur les cellules osteoblastiques humaines, nous avons par la suite clone puis sequence un recepteur du cgrp dans les cellules ohs-4, et nous avons etudie les mecanismes de transduction qu'utilise ce recepteur dans ces cellules. Nos travaux montrent : la presence d'arn messagers codant pour la calcitonine et le cgrp dans les cellules osteoblastiques humaines. Une stimulation des transcrits de la calcitonine et du cgrp sous l'effet du dibutyryl ampc. L'augmentation de ces deux transcrits s'accompagne d'une induction de la differenciation des cellules osteoblastiques humaines ohs-4. La caracterisation d'un recepteur du cgrp a la surface de ces cellules, qui n'utilise pas la voie de l'adenylate cyclase pour la transduction du signal. La signalisation qu'il utilise implique une mobilisation du calcium intracellulaire et un influx du calcium extracellulaire a l'interieur de la cellule. L'augmentation du calcium intracellulaire dans les cellules ohs-4 sous l'effet du cgrp, met en jeu les proteines gq/11 qui stimulent la plc1. Ce travail met en evidence que le cgrp est produit par les cellules osteoblastiques humaines et qu'il pourrait exercer des effets autocrins sur ces cellules. Nous avons aussi montre que le recepteur du cgrp utilise uniquement la voie de la phospholipase c pour la transduction du signal dans les cellules ohs-4, voie qui a ete decrite comme etant impliquee dans la proliferation des cellules osteoblastiques.
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Tinevez, Jean-Yves. "Mouvements actifs, régulés par le calcium, de la touffe ciliaire des cellules ciliées mécano-sensorielles de l'oreille interne." Paris 7, 2006. https://hal.archives-ouvertes.fr/tel-01239897.
Full textAbstract:
Le comportement dynamique d'une touffe ciliaire (l'organelle mécano-sensible des cellules ciliées de l'oreille interne) est très varié. Une touffe ciliaire peut osciller spontanément, avoir une réponse de type « excitable » ou simplement relaxer en réponse à un échelon de force. En utilisant la iontophorèse pour modifier la concentration en calcium à proximité d'une touffe ciliaire du saccule de la grenouille taureau, et en mesurant les relations force/déplacements de cette organelle, nous sommes parvenus à réconcilier ces manifestations contrastées de sa motilité active. Nous utilisons le calcium et/ou des biais statiques appliqués à la position de la touffe ciliaire pour contrôler la probabilité d'ouverture au repos et par là, son point de fonctionnement. Dans le cas de touffes ciliaires non oscillantes, nous montrons que la polarité et la cinétique des mouvements ciliaires actifs observés en réponse à un échelon de stimulation dépendent du point de fonctionnement de la cellule. Lorsque la relation force/déplacement de la touffe ciliaire possède une région de raideur négative, des oscillations spontanées peuvent être déclenchées lorsque le point de fonctionnement est placé au sein de cette région instable. Seuls deux ingrédients sont nécessaires pour interpréter ces manifestations de la motilité ciliaire active l'existence d'une relation force/déplacement non linéaire conséquence de l'activation mécanique directe dei canaux de transduction, et l'activité du moteur d'adaptation, fondé sur les myosines et dépendant du calcium Des simulations numériques reproduisent avec succès un grand nombre d'observations expérimentales, dan des conditions différentes et sur des animaux variés, suggérant qu'un seul mécanisme actif est nécessaire pour décrire toute la gamme des mouvements actifs observés sur les touffes ciliaires des cellules ciliéesThe dynamical behaviour of a hair bundle - the mechanosensitive organelle of the hair cells found in the inner ear- is rich. A hair bundle can oscillate spontaneously, "twitch" or simply relax in response to a force step. Using iontophoresis to affect the Ca²+ concentration near a hair bundle from the bullfrog's sacculus and displacement-clamp measurements of the bundle's force-displacement relations, we were able to reconcile these contrasting manifestations of active hair-bundle motility. We used Ca²+ and offsets of the bundle's mean position to control the fraction of open transduction channels at steady state and thus the bundle's operating point. In the case of non oscillatory hair bundles, we found that the polarity and kinetics of active hair-bundle movement evoked by a step stimulus depended on the bundle's operating point in the nonlinear force-displacement relation. When the force-displacement relation displayed a region of negative stiffness, spontaneous hair-bundle oscillations arose when the hair bundle was required to operate within this unstable region. Only two ingredients are necessary to account for the various incarnations of active hair-bundle motility: non linear gating compliance of the transduction apparatus and the Ca²+-regulated activity of the myosin-based adaptation motor. Numerical simulations successfully reproduced a wide range of observations from different experimental situations and animal species, thereby suggesting thatonly one force-generating mechanism is needed to describe the seemingly opposite movements that the hair-bundle can produce
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Lavenu, Marie-Cécile. "Les cellules geantes en pathologie osseuse : tumeurs a cellules geantes et autres processus pathologiques. etude histologique et ultrastructurale in vivo et in vitro." Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05S016.
Full textAbstract:
Cent vingt cinq observations de lesions osseuses a cellules geantes multinucleees (cgm) ont ete etudiees en ultrastructure toutes in vivo, certaines in vitro : tumeur a cellules geantes (soixante dix dont vingt neuf en culture), tumeur des tendons et des gaines, kyste anevrismal, maladie osseuse de paget, sarcome sur maladie de paget, osteoblastome, fibrome chondromyxoide, chondroblastome, osteosarcome a cellules geantes, fibrome non ossifiant, kyste essentiel, histiocytofibrome malin, dysplasie fibreuse, hyperparathyroidisme, et deux observations originales comportant des inclusions paramyxovirus-like : un cas de dysplasie fibreuse familiale et un cas de sarcome d'ewing, faits jamais rapportes jusque la. Les cgm sont comparees a l'osteoclaste pour conclure a une similitude morphologique, comportementale et immunologique. Les inclusions paramyxovirus-like des cgm sont particulierement etudiees. Leur importance diagnostique et etiopathogenique est discutee. Sur un plan de biologie fondamentale, l'etude ultrastructurale in vivo et in vitro met en evidence - des centrioles regroupees en centrospheres geantes dans les cgm, - une ciliogenese rudimentaire des elements mononuclees tumoraux et non tumoraux des lesions osseuses a cgm.
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Colisson, Renaud. "Caractérisation des fonctions des cellules dentritiques murines déficientes pour l'Asparaginyl Endopeptidase." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T014.
Full textAbstract:
Mon étude porte sur les cellules dendritiques (DCs), qui patrouillent dans l'organisme à la recherche d'agents pathogènes. Elles disposent pour cela d'une batterie de « senseurs », récepteurs membranaires ou cytoplasmiques capables de reconnaître des signatures spécifiques de pathogènes (PAMPs), dont les récepteurs Toll-like (TLRs) font partie. En cas de contact, elles prennent en charge l'élément reconnu et sont alors en mesure de déclencher une réponse immunitaire adaptée. Pour arriver à ce résultat, les DCs ont la capacité « d'ingérer » l'élément étranger dans des vésicules intracellulaires, les endosomes ou les phagosomes, de l'y fragmenter et d'en présenter certains résidus sur les molécules du Complexe Majeur d'Histocompatibilité de classe II (CMH II). De par leur localisation et leur activité, les protéases de la voie endocytique sont aptes à jouer un rôle dans la fragmentation des protéines ingérées. Afin d'étudier spécifiquement la contribution de l'une de ces protéases, l'Asparaginyl Endopeptidase (AEP), nous avons utilisé l'approche de la délétion constitutive chez la souris et caractérisé la capacité des DCs déficientes pour l'AEP à dégrader et à présenter l'antigène. Nous avons observé que non seulement l'AEP joue un rôle direct dans la dégradation du fragment C de la toxine tétanique (TTcf), favorisant sa présentation, mais qu'elle est aussi essentielle à la maturation d'autres protéases de la même voie, notamment la Cathepsine L (CatL). La CatL immature montre une augmentation d'activité, résultant en la destruction d'un autre antigène, la Myelin Oligodendrocyte Protein (MOG), entraînant un défaut de présentation de cet antigène chez les souris déficientes pour l'AEP. D'une manière surprenante, nous avons aussi montré que ces DCs ne répondent que faiblement à l'adjonction de CpG, ligand du TLR endosomal TLR9, mais qu'elles maintiennent une réponse normale au LPS, ligand du TLR de surface TLR4. Nous expliquons ce phénomène en montrant que l'activation des TLRs endosomaux nécessite, en plus de la présence de son ligand, un clivage de leur domaine luminal, que peut effectuer l'AEP. Ce travail montre le double rôle de l'AEP dans la fragmentation de l'antigène, directement par son activité protéolytique et indirectement par la régulation de l'activité d'autres protéases. Par cette étude, nous mettons aussi en évidence le rôle jusqu'alors insoupçonné des protéases endosomales, en particulier de l'AEP, dans la régulation de la réponse aux TLRs endosomauxThis is a study on dendritic cells. They are looking all over the body for pathogens that they can recognize thanks to a large number of receptors, on their membrane on cytoplasm. Those receptors, among which are the Toll-like receptors, are able to bind pathogens markers (PAMPs). In case of encounter, DCs can take up the pathogen and to initiate a specific immune response. In this purpose, DCs will internalize the pathogens in intracellular vesicles, called endosomes or phagosomes, to cut it into fragments and to present some of those fragments bound to MHC II on the cell surface. In this mechanism, proteases are localized in the same compartments where the degradation of the pathogens occurs. In order to study the role of one of those proteases, Asparaginyl Endopeptidase, we generate a mouse deleted for the AEP gene. Studying this mouse gave us the opportunity to observe that AEP has a role in the degradation of different antigens : it can degrade TTcf and favors its presentation by DCs; AEP control also the maturation of other proteases, as Cathepsin L, leading to an increase of the activity. Increased CatL leads to the destruction of MOG, and the lack of presentation of this antigen. In an other hand, AEP KO DCs are not able to secrete cytokines when stimulated by CpG, a TLR9 ligand but they respond normally to a TLR4 ligand, a membrane TLR. We show that endosomal TLRs need an intracellular processing to be fully activated by their ligands. This study shows clearly that endosomal proteases are crucial for establishing a normal specific immune response, by controlling the antigen presentation on MHC II by two different ways : controlling their degradation and subsequent presentation and by regulating the activity of TLRs, whose adjuvant role is known for years
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Ogier-Denis, Eric. "La n-glycosylation : marqueur precoce de la differenciation enterocytaire des cellules ht-29." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05S002.
Full textAbstract:
Nous avons etudie les modifications des structures oligosaccharidiques n-liees presentes sur les glycoproteines au cours de la differenciation enterocytaire des cellules ht-29, derivees d'un adenocarcinome humain d'origine colique. Les cellules ht-29, cultivees en presence de 25 mm de glucose, demeurent totalement indifferenciees, alors que les memes cellules, cultivees en absence de glucose, developpent apres confluence cellulaire, une differenciation enterocytaire typique, caracterisee par la polarisation de la monocouche cellulaire, l'apparition de bordures en brosse au pole apical des cellules et l'expression d'hydrolases specifiques associees aux bordures en brosse, telle que la saccharase-isomaltase. Au cours de ce travail, nous avons mis en evidence, une relation etroite entre l'etat de differenciation des cellules ht-29 et le metabolisme des n-glycannes. De plus, cette etude montre que le metabolisme des n-glycannes peut etre considere comme un marqueur precoce de l'engagement des cellules ht-29 cultivees en absence d'hexose dans le processus de differenciation enterocytaire
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Rapetti, Vachieri Laëtitia. "Les mécanismes de différenciation des lymphocytes T CD8 en cellules mémoires." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T004.
Full textAbstract:
Dans cette étude, nous avons montré la multiplicité de l'effet helper des cellules TCD4 sur les différents aspects des réponses CD8: prolifération, survie, fonctions effectrices et différenciation en cellule mémoire. Ces effets helper impliquent la signalisation CD40 ainsi que d'autres signaux. L'expression de CD40 par les CFA et les cellules TCD8 joue un rôle direct et complémentaire: l'expression de CD40 par les CFA est importante pour l'expansion des cellules TCD8; l'expression de CD40 par les cellules TCD8 est cruciale pour leur différenciation en cellule mémoire. En réponse secondaire, la déficience en CD40 des cellules TCD8 altère leur expansion, leur capacité de contrôle de la charge antigénique, leurs fonctions effectrices, leur sensibilité aux cytokines d'activation/survie et augmente leur sensibilité aux cytokines inhibitrices. L'expression de CD40 par les cellules TCD8 est ainsi strictement impliquée dans l'établissement du programme de différenciation en cellule mémoireIn this study, we showed the multiplicity of CD4 T cell help on the different aspects of CDS responses: proliferation, survival, effectors functions and memory cell differentiation. This help involves CD40 signalization and others signals. CD40 expression on APC and on CD8 T cells play a direct and complementary role: CD40 expression on APC is important for CD8 T cell expansion; CD40 expression on CD8 T cells is crucial for their differentiation into memory cell. During secondary response, CD40 deficiency on CD8 T cells alters their expansion, their capacity of control of antigen load, their effectors functions, their sensibility toward activating/surviving cytokines and increases their sensibility toward inhibitory cytokines. CD40 expression on CD8 T cells is also strictly involved into the establishment of the memory cell differentiation program
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Addadi-Rebbah, Salima. "Activité antiinvasive des anthracyclines antitumorales : effets de l'aclacinomycine sur les propriétés migratoires et invasives des cellules de fibrosarcome humain HT-1080." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMP207.
Full textAbstract:
@Nous avons étudié les effets des anthracyclines antitumorales, en particulier l'aclacinomycine, sur les capacités migratoires et invasives de cellules à fort pouvoir invasif, la lignée de fibrosarcome humain HT-1080. Nous avons démontré que l'aclacinomycine et dans une moindre mesure la doxorubicine inhibent la migration et l'invasion des cellules HT-1080 à des concentrations n'affectant pas la croissance cellulaire. Cette inhibition des propriétés invasives n'implique pas des mécanismes de dégradation protéolytique de la matrice extracellulaire. Par contre, elle met en jeu des modifications au niveau des protéines du cytosquelette et des plaques d'adhésion focale. Nous avons observé un défaut de polarisation cellulaire, une altération des lamellipodes et de son réseau d'actine. En particulier, l'effet antiinvasif est associé à une diminution de l'expression des intégrines b1 et de leur état d'affinité. On note également une diminution de l'expression des tyrosines kinases FAK et Src et l'altération de leur état de phosphorylation. L'ensemble des résultats suggère que l'aclacinomycine pourrait être utilisée en clinique humaine à d'autres fins que son pouvoir cytotoxique@Aclacinomycin (Aclarubicinâ) is a trisaccharide anthracycline anticancer drug active against a wide variety of solid tumors and haematological malignancies. We have evaluated its antimigrative and antiinvasive properties in a Boyden chamber with or without Matrigel and in wound repair assays. Aclacinomycin was demonstrated to inhibit HT-1080 cell migration and invasion while being more potent than the classical anthracycline doxorubicin. This decrease occurred in a dose-dependent manner and without affecting cell proliferation. Importantly, the antiinvasive effect was not associated to a modification in the production of the matrix-degrading enzymes MMP-2 and MMP-9 but rather to changes in cytoskeletal and focal contact formation. Indeed, the drug reduces cell polarity, impairs the actin-mediated membrane ruffling at the leading edge and decreases b1 integrin expression and activation. Dramatic alterations in the distribution of vinculin and in the expression and phosphorylation state of both FAK and Src kinases were also detected. As a conclusion, these data suggest a novel application for this chemotherapeutic agent due to its ability to reduce tumor cell invasion. Combination of aclacinomycin with MMP inhibitors could have therapeutic potential in preventing tumor metastasis
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Hammoumi, Saliha. "Etude des facteurs susceptibles de favoriser ou de limiter l'infecton des cellules humaines par le virus de l'encéphalomyocardite." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077210.
Full textAbstract:
Dans le but d'évaluer le risque de transmission de l'EMCV de l'animal, en particulier le porc, à l'homme, notamment lors de xénotransplantations, nous nous sommes intéressés aux facteurs susceptibles de favoriser ou de limiter cette transmission par l'étude de l'interaction du virus avec des cellules humaines. Des outils permettant la mise en évidence de la multiplication du virus aux différentes étapes de l'infection ont été développés. Notamment, pour le suivi de la synthèse des protéines, un virus recombinant exprimant l'EGFP a été créé. Celui-ci, était pathogène pour la souris, à l'instar du virus parental. L'EGFP a pu être détectée par autofluorescence in vitro dans les cellules infectées et in vivo sur des empreintes de cerveaux de souris. Le pouvoir infectieux de différentes souches virales sur des lignées et des cellules primaires humaines, reflétant le tropisme du virus chez l'animal, a été analysé. Les résultats montrent que l'infection des cellules dépend du type cellulaire et de la souche virale et que l'adsorption varie essentiellement en fonction des souches. Par comparaison des séquences de capside, des acides aminés jouant un rôle probable dans cette adsorption ont été mis en évidence. L'analyse des partenaires cellulaires impliqués dans l'attachement a permis de montrer que l'adsorption de la souche 1086C est dépendante des acides sialiques et que la lysine 231 de VP1 jouerait un rôle important dans cette liaison. Par ailleurs, l'adsorption de la souche B279/95 est indépendante des acides sialiques mais dépend des héparanes sulfates. Ceci suggère l'utilisation probable de co-récepteurs portant des héparanes sulfates ou des acides sialiquesIn order to evaluate the transmission risk of EMCV, from animal, mainly pig, to human, especially during xenotransplantations, we were interested in factors likely to support or limit this transmission by studying the interaction of EMCV with human cells. Tools allowing the detection of the virus multiplication at the various stages of the infection were developed. In particular, for the follow-up of the proteins synthesis, a recombinant EMCV expressing EGFP was created. The recombinant virus was pathogenic for mouse like the parental virus. EGFP could be detected by autofluorescence in vitro in infected cells and in vivo on prints of mouse brains. The infectious power of various viral strains on human cell lines and primary cells, reflecting the tropism of the virus in animal, was analysed. The results indicated that the infection of the cells depends on the cellular type and the viral strain and that adsorption varies primarily according to the strains. By comparison of the sequences of capsid, amino acids playing a probable part in this adsorption were highlighted. The analysis of the cellular partners implied in the attachment made it possible to show that the adsorption of the strain 1086C is dependent on sialic acid and that lysine 231 of VP1 would play an important part in this connection. In addition, the adsorption of the B279/95 strain is independent of sialic acid but depends on heparanes sulfates. This suggests the probable use of co-receptors carrying heparane sulfates or sialic acids
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Félin, Murielle. "Interactions glycoproteine-lectine dans le noyau des cellules de la lignee myeloblastique leucemique humaine hl60." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S012.
Full textAbstract:
La regulation de certaines activites nucleaires par des interactions glycoproteine-lectine est supposee depuis la decouverte de ces proteines dans le noyau cellulaire. Toutefois, l'existence de telles interactions restait hypothetique. En effet, les lectines nucleaires isolees jusqu'alors se fixaient, soit au glucose, soit aux galactosides, tandis que les glycoproteines nucleaires les mieux caracterisees comportaient des residus n-acetylglucosamine. Notre travail, realise sur la lignee myeloblastique leucemique humaine hl60, a donc consiste a rechercher des lectines nucleaires et leurs ligands glycosyles, afin d'etudier le role de ces complexes. Les resultats essentiels obtenus sont : i) la description de la lectines nucleaires potentiellement capables de reconnaitre des glycoproteines contenant des residus n-acetylglucosamine : la cbp70 (cbp carbohydrate-binding protein), qui reconnait le glucose mais avec une meilleure affinite la n-acetylglucosamine et la cbp22, qui est specifique de la n-acetylglucosamine, ii) la mise en evidence d'une interaction proteine-proteine entre la cbp35 (specifique des galactosides) et la cbp70, rompue par la fixation soit de lactose sur la cbp35, soit de n-acetylglucosamine sur la cbp70. Ainsi, des interactions glycoproteine-lectine pourraient moduler des interactions proteine-proteine au sein du noyau. Un tel systeme pourrait etre implique dans la regulation de l'epissage des pre-arnm, iii) l'isolement d'un ligand glycosyle de la cbp70 et la demonstration que l'interaction des deux partenaires est de type glycoproteine-lectine. Ce ligand est uniquement nucleaire mais d'autres ligands potentiels de la cbp70 existent dans le cytoplasme, ou cette derniere a egalement ete detectee. En conclusion, l'isolement, pour la premiere fois, d'une lectine nucleaire et de son ligand glycosyle, ouvre des perspectives nouvelles dans la comprehension des mecanismes de regulation de l'expression genetique.
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Gasparian, Sona. "Régulation de l'expression du gène T-bet pendant la différenciation des cellules th1 chez l'homme." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077213.
Full textAbstract:
Les sous-populations fonctionnellement distinctes de cellules T CD4+ sont essentielles pour orchestrer la réponse immune contre différents types de pathogènes. Les cellules Th1 (T helper type 1) sont impliquées dans le développement des réponses immunitaires cellulaires et protègent l'organisme contre des pathogènes intracellulaires. Par ailleurs les réponses Thl incontrôlées sont associées aux maladies inflammatoires chroniques et aux maladies auto-immunes. De ce fait, il est nécessaire de bien comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans le processus de différenciation des cellules Th1. Le facteur de transcription T-bet est spécifiquement exprimé par les cellules Th1 et joue un rôle important dans la différenciation de ces cellules. Il est impliqué dans le remodelage de la chromatine et dans l'expression du gène codant pour l'IFN-γ, spécifique des cellules Th1. L'objectif de ce projet est d'identifier les mécanismes impliqués dans la régulation de l'expression du gène T-bet pendant le développement des cellules Th1 humaines. Nous avons analysé les modifications de la structure de la chromatine au niveau du locus du gène T-bet dans ces cellules ce qui nous a permis d'identifier quatre sites hypersensibles à la DNase I (HS). Ces sites sont localisés dans les régions CNS. De plus, la chromatine associée aux sites HS est hyperacétylée au niveau de l'histone H3 dans les cellules Th1. L'ensemble de ces données indique que ces quatre régions peuvent être impliquées dans la régulation du gène T-bet chez l'homme. La stimulation du TCR induit une forte expression du gène T-bet et nous avons démontré que les protéines de la famille NF-AT sont impliquées dans ce processusFunctional distinct subsets of CD4+ T cells are essential to orchestrate efficient immune responses against different types of pathogens. T helper type 1 (Thl) cells promote cell-mediated immunity and are necessary to clear the organism from intracellular pathogens but are associated with autoimmune and chronic inflammatory diseases. This indicates that the development of Thl cells must be tightly controlled. The transcription factor T-bet is specifically expressed by Thl cells and plays an important role in the differentiation of this subset. T-bet is implicated in chromatin remodeling and control of Thl-specific expression of the IFN-f gene. The goal of this project is to identify the mechanisms that regulate T-bet expression during human Thl cell development. The analysis of changes of the chromatin structure at the T-bet locus in Thl cells allowed us to identify four DNAsel hypersensitive sites (HS). We found that the position of the HS identified in our experiments corresponds to the position of the CNS identified « in silico ». In addition, we found that chromatin associated with HS is hyperacetylated on histone H3 in Thl cells. Taken together, these data indicate that these four regions are implicated in the regulation of the human T-bet gene. We found that triggering of the T cell receptor (TCR) alone is sufficient to induce strong expression of T-bet. We demonstrated that NF-AT family members are implicated in this process
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Auvray, Céline. "Fonction des homéoprotéines HOXC4 et HOXB4 dans l'expansion des cellules souches hématopoïétiques humaines et étude de leurs cibles moléculaires." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077101.
Full textAbstract:
L'obtention d'un nombre élevé de cellules souches hématopoïétiques (CSH) est une étape importante pour la mise en œuvre des greffes de moelle osseuse ou de protocoles de thérapie cellulaire dans des hémopathies ou des tumeurs solides. L'équipe avait établi un modèle d'expansion des CSH humaines par co-culture avec des cellules stromales sécrétant l'homéoprotéine HOXB4. Mon travail de thèse a consisté à améliorer ce modèle par l'utilisation de HOXC4, homéoprotéine codée par un paralogue du gène HoxB4. J'ai montré que la transduction passive de HOXC4 permet, de façon comparable à HOXB4, d' amplifier les progéniteurs matures (CFC), immatures (LTC-IC) et les cellules capables de reconstituer de l'hématopoïese in vivo chez les souris immunodéficientes (SRC). Afin d'analyser les cibles moléculaires précoces de ces deux homéoprotéines durant l'expansion des CSH, nous avons effectué une analyse comparative des transcriptomes de cellules CD34+ brièvement exposées ou non à l'action des protéines HOXB4 ou HOXC4. Nous avons montré que les gènes régulés par ces deux facteurs sont similaires, corroborant nos précédents résultats. Ces gènes sont, pour la plupart, impliqués dans des fonctions cellulaires majeures telles que la synthèse protéique, la maturation des ARN, le cycle cellulaire et la réplication de l'ADN. La poursuite de ce projet consiste en l'analyse de certains de ces gènes, en particulier, le gène WDR50 dont l'orthologue, Wicked, chez la drosophile a pour rôle de maintenir l'état souche des cellules germinales. Chez l'homme, des études fonctionnelles dans des cellules leucémiques, dans les CSH et lors de la différenciation des cellules CD34+ sont en coursIn the aim to improve amplification of immature cells without modifying their capacity of multi-lineage differentiation, the laboratory developed, initially, an original method to expand human hematopoietic stem cells (HSC) in co-culture with mouse stromal cells line that constitutively produce the human HOXB4 homeoprotein. In order to improve this expansion, I analyzed the effect of HOXC4, a paralog of HOXB4 on thé same expansion model. In this study, we have shown that our approach consisting in transferring HOXC4 proteins into HSCs allows the expansion, in the same range than HOXB4, of all hematopoietic populations : mainly mature (CFC) and immature (LTC-IC) progenitors and cells able to reconstitute in vivo hematopoiesis on immunodeficient mice (SRC). The molecular mechanisms and the target genes in particular by which HOXB4 or HOXC4 act, are not clearly established. In that aim, comparative transcriptomic analysis of CD34+ cells exposed or not to HOXB4 or HOXC4 was performed. The results, first, highlight similar molecular mechanisms for both homeoproteins. These proteins induce the same trancriptomic profile and modify a set of genes involved in major cellular function such as protein synthesis, ARN processing, cell cycle and DNA replication. Second, we also identified genes previously described in stem cell expansion or maintenance in several tissues and species. Among them, we started to study WDR50 in human hematopoietic cells whose ortholog in Drosophila maintains germinal stem cells in the stem fate. In human, functional studies in leukemia cells, in HSCs and during the differentiation of CD34+cells are in progress
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Grange-Messent, Valérie. "Interactions astrocytes-cellules endotheliales dans la mise en place et la pathologie de la barriere hemato-encephalique. Etude ultrastructurale." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S013.
Full textAbstract:
Les interactions existant entre astrocytes et cellules endotheliales sont mises en evidence chez l'embryon de poulet pendant la mise en place de la barriere hemato-encephalique (bhe). Les orthogonal arrays (oa) arrangements geometriques de particules intramembranaires, sont identifie dans les membranes plasmiques astrocytaires avant l'apparition de la bhe aux proteines (e13). A e15, la densite des oa est fortement augmentee et continuera a croitre jusqu'a l'eclosion. Les alterations morphologique des astrocytes de rongeurs sont examinees, in vivo et in vitro, suite a a une intoxication aigue par le soman, un compose organophosphore epileptogene. Apres administration d'1 dl50 chez le rat, une diminution significative de la densite des oa dans les membranes plasmiques astro-cytaires est demontree. Ceresultat est confirme in vitro. Un milieu isoosmotique riche en ions k simulant la situation lors des crises convulsive fait diminuer la densite des oatandis qu'une retraction des prolongements cytoplasmiques et une diminution du volume astrocytaire sont mises en evidence. Ni le soman, ni les ions k ne semblent seuls responsables de l'aspect oedemateux observe in vivo. La presence de nombreuses vesicules de tansport dans l'endothelium ainsi que la presence d'albumine dans les espaces pericapillaires suggerent fortement un mecanisme de transcytose expliquant l'ouverture de la bhe. Lors des crises convulsives.
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Martin-Latil, Sandra. "Interaction des rotavirus avec les cellules intestinales : conséquences fonctionnelles." Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA114834.
Full textAbstract:
Les rotavirus sont l'agent étiologique majeur des gastroentérites infantiles. La première partie porte sur les mécanismes d'entrée des rotavirus. Nous proposons qu'il s'agit d'un système itératif impliquant un fort couplage entre la diminution de la [Ca2+] intraendosomale, la décapsidation du virion et la perméabilisation de la membrane endosomale qui permet la libération des DLP transcriptionnellement actives dans le cytoplasme. La deuxième partie porte sur les mécanismes à l'origine de la diarrhée osmotique. Nous montrons qu'une voie de signalisation AMPc-PKA-dépendante est activée lors de l'infection des cellules Caco-2 par le rotavirus et qu'elle induit l'altération de l'adressage de la saccharase-isomaltase et de la désorganisation des cytokératines. Nous montrons également que le rotavirus altère l'activité de la lactase et de SGLT1 sans diminution de leur expression apicale. Leur altération est probablement due à la fixation d'une protéine virale ou de la particule viraleRotaviruses are the leading cause of infantile viral gastroenteritis worldwide. In the first part, we studied the mechanisms of rotavirus entry. We propose that, after infectious rotavirus enters into endosomal vesicles, the progressive decrease of endosomal [Ca2+] favors progressive virion decapsidation and subsequent permeabilization of endosomal membrane. This three-step process would be reiterated until the transcriptionnally active DLP is delivered into the cytoplasm. In the second part, we studied the pathophysiologic mechanisms accounting for osmotic diarrhoea. We show that a cAMP-dependent PKA mechanism impairs sucrase-isomaltase targeting and cytokeratins organisation in Caco-2 cells infected by rotavirus. We also show that rotavirus induces a decrease in activity of brush border-associated lactase and cotransporter SGLT1 in Caco-2 cells. Their alteration, which is not due to a decrease in apical expression, could involve the binding of viral proteins or viral particle
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Gautier, Thierry. "Analyses biochimique et moleculaire de la peripherie des chromosomes dans les cellules de mammiferes : une etude au moyen d'autoanticorps humains pendant le cycle cellulaire." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05S009.
Full textAbstract:
La division cellulaire entraine la dispersion des proteines nucleolaires dont une partie se redistribue a la peripherie des chromosomes. Une collection de serums autoimmuns a ete criblee pour selectionner les serums contenant des autoanticorps specifiques de proteines nucleolaires tapissant la peripherie des chromosomes pendant la mitose. L'analyse des antigenes a permis de les classer en 3 familles, non decrites a ce jour, selon leur masse moleculaire (52, 66 et 103 kd). L'immunoprecipitation des antigenes indique qu'ils sont associes a un arn identifie comme etant l'arn nucleolaire u3. Les resultats suggerent que les antigenes participent aux etapes tardives de la maturation des arns ribosomiques ou au transport des particules pre-ribosomiques. Leur association avec la peripherie des chromosomes peut correspondre a un mecanisme de partage des antigenes ou a une formation protegeant la surface des chromosomes en evitant les interactions aleatoires avec les constituants cytoplasmiques.
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Hoeffel, Guillaume. "Présentation d'antigènes du VIH aux lymphocytes T par les cellules dendritiques humaines : présentation croisée, optimisation vaccinale." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077211.
Full textAbstract:
Les cellules dendritiques (DC) sont les seules présentatrices d'antigènes capables d'activer les lymphocytes T (LT) naïfs. Lors de l'infection par le VIH, elles sont cruciales pour initier les réponses immunitaires adaptatives indispensables au contrôle de la réplication virale. Nous avons mis en évidence un transfert d'antigènes du VIH aux DC, depuis des LT CD4 infectés vivants. Ces antigènes sont aussi efficacement présentés aux LT CD8 que ceux issus de débris apoptotiques, et plus efficacement que ceux du VIH libre. Nous avons aussi montré l'antigénicité de DC transfectées par des ARNm de gag du VIH. Ces résultats permettent d'envisager des thérapies contre les formes provirales issues des cellules quiescentes qui sont des réservoirs viraux difficiles à éradiquer. Dans un but de vaccination préventive, nous avons comparé des vecteurs vaccinaux rougeole, MVA, Ad5 et BCG, codant le gène gag du VIH. Nous montrons que les vecteurs viraux induisent une maturation incomplète des DC, tandis que le BCG induit une maturation complète, mais beaucoup d'IL1O. Nous avons alors restauré les propriétés déficientes de ces vecteurs par des agonistes des récepteurs de type Toll. Enfin nous montrons que les DC plasmacytoïdes (pDC) humaines peuvent effectuer la présentation croisée d'un vaccin lipopeptidique, et d'antigènes issus de LT CD4 infectés apoptotiques. La présentation croisée par les pDC pourrait conduire à la tolérance en l'absence d'une stimulation appropriée. Nous montrons qu'une stimulation par le virus de la grippe augmente les réponses effectrices induites par la présentation croisée des pDC. Ces résultats devraient améliorer les protocoles de vaccination contre le VIHDendritic cells (DC) are the only antigen presenting cells able to stimulate naive T lymphocytes. Upon HIV infection, they are crucial to initiate adaptive immune responses that control viral replication. We have shown the transfer of HIV antigens to DC from live infected CD4 T cells. These antigens were presented as efficiently as those from apoptotic infected CD4 T cells and much more effïciently than those from free HIV particles. We also showed the antigenic potential of HTV gag mRNA transfected DC. These results may be important in developing new therapies against provirus from resting cells that represent an important viral reservoir difficult to eradicate. To improve preventive vaccination, we compared the vaccinal vectors MV (measles), MVA, Ad5 and BCG, all encoding the HlV-1lai gag gene. We showed that the viral vectors induced an incomplete DC maturation, whereas BCG induces complete maturation but high levels of IL 10. We were able to restore these missing properties by using specific TLR agonists. Finally, we demonstrated that plasmacytoid dendritic cells (pDC) can cross-present a vaccinal lipopeptide and HIV antigens from infected, apoptotic CD4 T cells. Cross-presentation by pDC might lead to tolerance in vivo in the absence of an appropriate stimulation. We show here that stimulation with Influenza virus enhances effector responses induced by cross presentation by pDC. These results will hopefully be useful in designing new vaccination strategies against HIV
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Rodríguez, Pedro. "Controle de la permeabilite des jonctions serrees (tight) dans divers types d'epitheliums." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S022.
Full textAbstract:
La caracteristique essentielle des cellules epitheliales est la presence a leur apex des jonctions d'occlusion (tight junctions, tj) qui ferment de maniere plus ou moins etanche la voie paracellulaire. La permeabilite des tj peut etre modifiee dans differentes conditions. La cryofracture est une technique qui permet l'etude de ce type jonctionnel. La premiere partie de cette these concerne la barriere intestinale. Nous avons etudie les effets du tnf- en association avec l'ifn- sur la barriere des cellules ht29-19a. Cette association de cytokines entraine l'augmentation de la permeabilite et l'alteration morphologique du reseau des tj. La deuxieme partie, realisee in vivo, concerne la malnutrition proteique. Nous avons trouve que les alterations morphologiques des tj observees chez les animaux malnourris sont liees a l'augmentation de la permeabilite intestinale et que le zinc empeche la perte de la capacite de barriere chez les animaux malnourris. La troisieme partie concerne le passage d'une polarite epitheliale simple vers une polarite hepatique chez les cellules wif-b9 ou les tj passent successivement d'un stade de macula vers fascia et zonula. Finalement, dans le cerveau, les fse (fibres supra-ependymaires) ne semblent pas etre a l'origine de la repression de l'expression des tj dans les ependymocytes typiques.
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Kegelaer, Grégory. "Identification et caractérisation du phénotype MDR de cellules cancéreuses par techniques de spectroscopie vibrationnelle infrarouge et Raman et analyse statistique." Reims, 2004. http://www.theses.fr/2004REIMP203.
Full text
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Moreau, Marie. "La ß-caténine et le NF-Kß coopèrent pour réguler le système uPA/uPAR dans des cellules tumorale." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077113.
Full textAbstract:
La voie Wnt/ß-caténine est impliquée dans de nombreux événements comprenant l'adhésion, la migration, et la différenciation cellulaires. L'activateur du plasminogène de type urokinase (uPA) et son récepteur uPAR ont été décrits comme des gènes cibles de la voie Wnt/ß-caténine dans des cellules de cancer du colon. En utilisant deux lignées tumorales mammaires, MCF-7 et MDA-MB-231 et une lignée tumorale de colon, SW480, nous avons observé que l'inhibition de l'expression de la ß-caténine augmente l'expression d'uPA, d'uPAR et de l'inhibiteur de l'activateur du plasminogène PAI-1 ainsi que l'invasivité des cellules tumorales. La stabilisation de la ß-caténine par un traitement au chlorure de lithium (LiCl), inhibiteur de la glycogène synthase kinase-3beta (GSK-3ß) ou la co-transfection de vecteurs d'expression ß-caténine/Tcf-4 conduit à la diminution de l'expression des transcrits uPA, uPAR et PAI-1 dans les trois lignées. Le traitement des cellules transfectées par des siRNA ß-caténine avec un inhibiteur de la translocation nucléaire du nuclear factor-kappaB (NF-KB), le SN50, réduit significativement l'augmentation de l'expression des transcrits uPA, uPAR et PAI-1 et de l'invasivité cellulaire. De plus, nous avons observé une translocation nucléaire du NF-KB dans les cellules transfectées par un siRNA ß-caténine. Dans cette étude nous montrons un nouveau mécanisme de régulation du système uPA/uPAR par la ß-caténine, en coopération avec NF-KB, dans des cellules de cancer du sein et du colon. La ß-caténine peut exercer des effets inattendus dans les cellules tumorales et des stratégies thérapeutiques d'inhibition de son expression doivent être envisagées avec précautionThe Wnt/ß-catenin signaling influences many cellular processes including cell adhesion, growth and differentiation. Urokinase plasminogen activator (uPA) and urokinase plasminogen activator receptor (uPAR) have been reported as target genes of Wnt/ß-catenin signaling in colon cancer cells, since their expression is directly regulated through ß-catenin, binding to the T-cell factor binding element (TBE) motifs present in their promoters. Using three cancer cell models (MCF-7, MDA-MB-231 and SW480, breast and colon cancer cell lines, respectively) we demonstrated that silencing of ß-catenin increased uPA, uPAR and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) expression and the invasive potential of cancer cells. In addition, p-catenin stabilization and accumulation by lithium chloride (LiCl) treatment, an inhibitor of glycogen synthase kinase-3ß (GSK-3ß) or by ß-catenin/Tcf-4 expression vectors transfection led to a decrease in uPA, uPAR and PAI-1 mRNA expression in the studied cancer models. Moreover, the treatment of P-catenin siRNA transfected cells with a specific inhibitor of nuclear factor-kappaB (NF-KB) translocation, SN50, significantly reduced enhancement of uPA, uPAR and PAI-1 expression and cancer cell invasion. Furthermore, ß-catenin siRNA treated cells exhibited NF-KB nuclear translocation. In this study we present evidence of a novel cross-talk between ß-catenin and uPA/uPAR System through NF-KB cooperation in breast and colon cancer cells. Our results strengthen the emerging view that ß-catenin exerts different effects on tumor cells and that the therapeutic strategy of its inhibition could involve more complex mechanisms than originally anticipated
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Rialland, Pascale. "Mécanismes moléculaires de régulation de la durée de vie des cellules dentritiques spléniques murines." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T010.
Full textAbstract:
La durée de vie des cellules dendritiques (CDs) contrôle l'amplitude des réponses immunitaires et la tolérance mais les mécanismes moléculaires précis régulant leur survie in vivo sont méconnus. Les cellules Bid-/- résistent à l'apoptose induite par différentes voies cytotoxiques. J'ai montré que la cross-présentation des antigènes aux lymphocytes T est accrue dans des souris Bid-/- en absence de signaux de maturation. Nous n'avons pas pu confirmer l'hypothèse selon laquelle cette augmentation de cross-présentation serait due à un défaut d'élimination des CDs immatures par les LTs. J'ai montré que l'injection de poly(I:C) induit in vivo l'apoptose des CDs conventionnelles spléniques murines, apoptose reposant en partie sur le récepteur cytosolique MDA-5. En réponse au poly(I:C), les CDs CD8α+ produisent des interférons de type I qui contrôlent leur durée de vie. J'ai ainsi mis en évidence une nouvelle voie d'apoptose des CDs par les ARNdb et un nouveau rôle immunorégulateur des IFN-IRegulation of dendritic cell (DC) lifespan contributes to the maintenance of tolerance and to the regulation of immune responses amplitude. However, the molecular mechanisms involved in this control are not fully elucidated. Bid-/- cells are resistant to apoptosis induced by different cytotoxic pathways. I show that antigen cross-presentation to T lymphocytes is improved in Bid-/- mice in absence of inflammatory signals. We postulated that this increased cross- presentation could be due to a defect of immature DC elimination by T lymphocytes, hypothesis we couldn't confirm. We also show that poly(LC) injection induces splenic conventional DC apoptosis in vivo. Apoptosis relies partially on recognition of poly(I:C) by the cytosolic receptor MDA-5. CD8α+ DCs respond to poly(I:C) by producing type I interferons, that control their lifespan. Our results highlight a new pro-apoptotic pathway in DCs induced by poly(I:C) and identify a new feedback regulatory role for the type I IFN response
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Bondza, Kibangou Patrick. "L'autofluorescence issue de cellules tumorales : intérêt diagnostique et relation avec le stress oxydant induit par des agents antitumoraux." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMP210.
Full textAbstract:
@Au cours de cette thèse, nous avons analysé la propriété d'autofluorescence des cellules cancéreuses et évalué les conséquences d'un stress oxydant sur cette caractéristique cellulaire. Nos résultats montrent que lors d'une excitation à 363 nm, l'autofluorescence n'est pas restreinte aux mitochondries et qu'un stress oxydant entraîne une diminution de l'intensité d'autofluorescence que l'on attribue à l'oxydation de la forme réduite NAD(P)H,H+ en NAD(P)+. La 1a,25-dihydroxyvitamine D3 (VD3) et l'EB1089 induisent une différenciation myélomonocytaire, un stress oxydant et une diminution de l'intensité d'autofluorescence au niveau des cellules HL-60. Cependant, ces deux activités ne présentent pas de relation directe d'un point de vue mécanistique. Enfin, l'approche clinique de l'autofluorescence sur des cellules épithéliales malpighiennes issues de dysplasies cervicales, montre que ces cellules présentent des modifications spectrales par rapport à des cellules issues de col utérin normal@In this work, the autofluorescence of human cancer cells was analyzed and the consequences of oxidative stress were evaluated on this cellular feature. Our results showed that under a 363 nm excitation, the autofluorescence emission was not restricted to mitochondrial compartments and that an oxidative stress induced a decrease in autofluorescence emission intensity, which was attributed to the oxidation of the reduced form NAD(P)H,H+ to NAD(P)+. In human promyelocytic leukemia HL-60 cells, 1a,25-dihydroxyvitamin D3 (VD3) and its analog EB1089 induced a myelomonocytic differentiation, an oxidative stress and a significant decrease in autofluorescence intensity. However, these two main activities do not seem to be triggered via the same pathway by VD3 or EB1089. Finally, a clinical approach of the autofluorescence showed that malpighian epithelial cells from cervical dysplasia exhibit spectral modifications when compared with cell populations from normal cervix
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Pene, Frédéric. "Caractérisation fonctionnelle des cellules dentritiques au cours de l'immunodépression induite par le sepsis." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T002.
Full textAbstract:
Le sepsis est caractérisé par une dysrégulation de la réaction inflammatoire suivie d'une immunodépression complexe associée à la survenue d'infections nosocomiales. Les mécanismes de régulation de la phase d'immunodépression post-infectieuse sont actuellement méconnus, mais pourraient impliquer les cellules dendritiques (CD). Lors d'une infection, les récepteurs de type Toll (TLR) déterminent l'amplitude de la réponse inflammatoire initiale et sont impliqués dans la maturation des CDs, mais leur contribution dans le développement ultérieur d'une immunodépression est mal compris. L'objectif de ce projet de recherche était d'investiguer le rôle des CDs et des voies de signalisation dépendantes des TLRs dans l'immunodépression induite par le sepsis. Nous avons établi un modèle murin de double agression infectieuse séquentielle sous la forme d'un sepsis polymicrobien sublétal suivi d'une pneumonie secondaire tardive à Pseudomonas aeruginosa. Nous avons évalué le rôle des CDs dans la modulation des défenses pulmonaires des souris post-septiques envers une agression infectieuse secondaire. A l'aide de souris knockout TLR2-/- , TLR4-/-, TLR2x4-/- et MyD88-/-, nous avons analysé l'importance relative des TLRs dans l'homéostasie des CDs et dans la réponse de l'hôte à une infection pulmonaire secondaire. Enfin, dans une approche translationnelle, nous avons évalué les taux circulants de CDs chez des patients porteurs de choc septique et la relation avec la survenue d'infections nosocomiales. Ce travail introduit des perspectives nouvelles dans la physiopathologie de l'immunodépression post-infectieuse et suggère des applications thérapeutiques potentiellesSepsis is characterized by a dysregulated inflammatory response followed by a complex immunosuppressive state that can favor the emergence of nosocomial infections. Mechanisms that regulate post-infective immunosuppression are largely unknown but may involve dendritic cells (DC) that link innate and adaptive immunity. Toll-like receptors (TLR) are critical determinants of the magnitude of the inflammatory response and are involved in the maturation process of DCs, but their contribution to the development of sepsis-induced immune dysfunction are poorly understood. The aim of this research project was to investigate the role of DCs and TLR-dependent signalling pathways in the regulation of sepsis-induced immunosuppression. For this purpose, we established a "double-hit" murine model through a sublethal polymicrobial sepsis followed by late-onset Pseudomonas aeruginosa pneumonia. In this model, we assessed the role of DCs in the modulation of lung defence towards a secondary infectious insult in post-septic mice. Using knockout mice TLR2-/- , TLR4-/-, TLR2x4-/- et MyD88-/-, we analyzed the relative contribution of TLRs to sepsis-induced defects of DCs and to the host response towards secondary pulmonary infection. In a translational approach, we assessed DC blood counts in septic shock patients and their relations with the development of nosocomial infections. Our results provide new insights in the pathophysiology of post-infective immunosuppression and suggest potential therapeutic applications
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Luissint, Anny-Claude. "Caractérisation fonctionnelle de JAM-L (Junctional Adhesion Molecule - Like), une nouvelle molécule d'adhérence leucocytaire." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T040.
Full textAbstract:
Les leucocytes, véhiculés par le sang, doivent traverser la barrière vasculaire pour atteindre les tissus. Cette migration trans-endothéliale des leucocytes requiert des interactions spécifiques entre des molécules localisées à la surface des leucocytes et leurs récepteurs sur les cellules endothéliales tapissant la paroi des vaisseaux. Cette étude consiste à caractériser la fonction de JAM-L, une nouvelle protéine apparentée aux molécules de la famille JAM. Nous montrons que JAM-L exprimée par les leucocytes augmente leur adhérence aux cellules endothéliales en interagissant avec la molécule CAR (coxsackie and adenovirus receptor). De plus, seules les formes dimériques de JAM-L sont capables d'interagir avec CAR et cette dimérisation est sous le contrôle original de l'intégrine leucocytaire VLA-4. Ces résultats décrivent JAM-L comme un nouvel acteur de la migration trans-endothéliale des leucocytes et montrent un mécanisme original de régulation d'une JAM par une intégrine en cisLeukocyte migration from blood to tissues plays a central role in inflammatory and immune responses. This migration occurs in a multistep process that involves interactions between circulating leukocytes and the vascular wall. We show that JAM-L, a novel protein related to members of the JAM family, mediates leukocyte adhesion to endothelial cells by interacting with CAR (coxsackie and adenovirus receptor) and its function is regulated in cis by VLA-4 integrin activation. On resting monocytes and T lymphocytes, which, unlike neutrophils, express the integrin VLA-4, JAM-L constitutively associates with VLA-4. This interaction prevents the cis dimerization of JAM-L, which is required for the functional recognition of CAR. Integrin activation is necessary to dissociate JAM-L — VLA-4 complexes and to promote the formation of JAM-L dimers. We provide a new mechanism through which VLA-4 and JAM-L functions are coordinately regulated to promote adhesion of leukocytes to endothelial cells
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Houdiard, Soizic. "Rôle des ERKs dans la régulation de l'hématopoièse murine : étude de l'isoforme ERK1." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077089.
Full textAbstract:
L'hématopoïèse est un processus hautement régulé, initié au niveau des cellules souches hématopoïétiques (CSHs) et dont la régulation est assurée à travers une hiérarchie cellulaire. Ceci implique un mécanisme de régulation dynamique des fonctions des CSHs et de leur descendance. Les ERKS sont des acteurs clés de la régulation de la prolifération et de la différenciation dans de nombreux types cellulaires, suggérant un rôle important dans l'hématopoïèse qui n'a pas encore été étudié in vivo. L'étude des souris ERK1 ̄/ ̄ a mis en évidence une splénomégalie, caractérisée par une accumulation de progéniteurs érythroïdes et une augmentation du nombre d'érythroblastes immatures. L'activation de la voie de signalisation BMP4 permet la mise en place d'une érythropoïèse splénique et le développement de BFU-Es de stress. Dans les souris ERK1 ̄/ ̄ nous avons observé une forte augmentation du nombre de BFU-E de stress et de l'ARNm codant pour BMP4. Notre étude nous a donc permis de démontrer que ERK1 régule l'érythropoïèse splénique par son action sur l'expression de BMP4. De plus, l'étude de l'hématopoïèse médullaire a montré une augmentation du nombre de CSHs ainsi qu'un défaut de différenciation granulo-macrophagique dans les souris ERK1 ̄/ ̄. Des radiographies ont permis d'observer une augmentation de la densité osseuse dans des souris ERK1 ̄/ ̄, suggérant une ostéopétrose. Les mécanismes mis en jeu seront caractérisés par des expériences de transplantation de CSHs, par l'analyse de la différenciation monocytaire et mégacaryocytaire et par l'étude de l'ostéogénèseHematopoiesis is a highly regulated process, initiated by hematopoietic stem cells (HSCs), which implies a dynamic regulation of the functions of HSC and its descent. The ERKs kinases are keys regulators of proliferation and differentiation of different cells types. Their role could be important in hematopoiesis and have not been studied in vivo yet. We have examined the role of ERK1 in adult hematopoiesis in ERK1 ̄/ ̄ mice. Loss of ERK1 resulted in an enhanced splenic erythropoiesis, characterized by an accumulation of erythroid progenitors and an enhanced number of immature erythroblasts in the spleen. Splenic stress erythropoiesis response has been shown to require BMP4-dependent signalling in vivo and to rely on the expansion of stress BFU-Es. A great expansion of stress BFU-Es and an increased level of BMP4 mRNA were found in ERK1 ̄/ ̄ spleens, suggesting that ERK1 controls a BMP4-dependent step, regulating thé steady state of splenic erythropoiesis. Study of medullar hematopoiesis had also show an enhanced numbers of HSCs and a defect in granulo-macrophagic differentiation in ERK1 ̄/ ̄ mice. X-Rays analysis of wild-type and ERK1 ̄/ ̄ mice allowed us to observe an enhanced bone density in ERK1 KO mice. So, loss of ERK1 induces osteopetrosis. Mechanisms involved will be caracterised by HSCs transplantation experiments, analysis of monocyte and megacaryocyte differentiation and by study of osteogenesis
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Yatouji, Sonia. "Structure de la chromatine et régulation transcriptionnelle du géne mdr 1 dans des cellules tumorales humaines à la chimiothérapie." Reims, 2000. http://www.theses.fr/2000REIMP203.
Full text
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Poitrasson-Rivière, Maud. "Cellules T DC4+ FOXP3+ régulatrices et tolérance des lymphocytes T CD8+ à la périphérie." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T008.
Full textAbstract:
La première partie de ce travail nous a permis de montrer, dans un modèle de souris original, que les cellules T CD4+ régulatrices jouent un rôle important et direct dans la prévention de l'autoimmunité causée par les lymphocytes T CD8+ périphériques. Nous proposons que les cellules T CD4+ Foxp3+ régulatrices induisent l'apparition à la périphérie de lymphocytes T CD8+ régulateurs qui régulent à leur tour les lymphocytes T CD8+ conventionnels. La seconde partie de ce travail suggère fortement que des événements de reconnaissance du soi sont requis pour contrôler les lymphocytes T effecteurs autoréactifs et potentiellement pathogéniques. L'autoréactivité serait donc nécessaire à son propre contrôleThe first part of this work showed, in an original mice model, that regulatory CD4+ T cells play an important role in preventing peripheral CD8+ T cell-mediated autoimmunity. We suggest that regulatory CD4+ Foxp3+ T cells induce the generation at the periphery of regulatory CD8+ T cells that can then regulate conventional CD8+ T cells activity. The second part of this work suggests strongly that self-recognition events are required to control autoreactive, potentially pathogenic, conventional T cells. Autoreactivity would thus be necessary for its own control
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Isaac, Juliane. "Etude in vitro du potentiel ostéostimulateur de biomatérieux bioactifs : influence d'un bioverre dopé en strontium et d'un titane à surface biométrique sur le comportement de cellules ostéoprogénitrices." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T026.
Full textAbstract:
En odontologie, le praticien doit faire face à des pertes osseuses. Des matériaux bioactifs ont été développés comme alternative aux techniques chirurgicales lourdes. Ces biomatériaux implantables ont la capacité d'interagir avec les fluides biologiques et d'établir un lien chimique avec l'os environnant. L'objectif de notre travail est d'évaluer in vitro le potentiel ostéostimulateur de deux matériaux bioactifs : un bioverre dopé en strontium et un titane doté d'une surface biomimétique. Deux modèles expérimentaux ont été utilisés : la culture primaire de cellules de calvaria et la culture d'expiants de calvaria. Nos résultats montrent, pour les deux matériaux, une absence de cytotoxicité et un effet stimulateur sur la différenciation des cellules osseuses, avec une augmentation de l'expression des gènes clés du phénotype ostéoblastique (facteurs de transcription et protéines matricielles). En conclusion, ces biomatériaux présentent un fort potentiel clinique en chirurgie oraleA challenge in odontology is the repair of alveolar bone defects. Some alloplastic bone substitutes - bioactive materials - have been developed as an alternative to bone augmentation procedures. These substitutes are surface-reactive materials that create a favourable template for osteoblast differentiation and have the ability to bond to the surrounding bone. The aim of this work is to investigate the osteostimulator potential of two bioactive materials: a strontium-doped bioactive glass and titanium with a biomimetic surface. Two culture models were used: a primary calvarial cell culture, and a calvarial bone explant model. Our results showed that the two materials were not cytotoxic and stimulated osteoblastic differentiation of bone cells, with an up-regulation of expression of several bone markers such as transcription factors and bone matrix proteins. In conclusion, these materials may have a great potential for oral applications
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Chasseigneaux, Stéphanie. "Analyse moléculaire des interactions hôte-prions en systèmes cellulaires." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N20S.
Full textAbstract:
Des analyses de CGH array menées chez des clones de N2a non infectés, sensibles ou résistants à la souche de prion 22L, ont révélé desmodifications chromosomiques mais aucune altération génomique récurrente associée au phénotype. L’analyse de l’expression de 29 gènes candidats a mis en évidence des profils transcriptionnels particuliers entre clones. L’analyse du transcriptome des cellules N2a5822L par biopuces a mis en évidence l’expression différentielle de gènes contrôlant l’efficacité de la transcription et la dynamique du cytosquelette. La mesure de l’expression de 38 gènes dans N2a5822L ainsi que dans trois autres clones sensibles et dans un clone résistant a montré une diversité de la réponse transcriptionnelle face à l’infection. L’étude de la PrPSc chez un patient atteint de MCJ et portant la mutation p. V180I a révélé l’absence de l’isoforme bi-glycosylée et serait révélatrice d’une conversion préférentielle des formes mono- et non-glycosylées mutées en formes pathologiquesCGH array analysis of uninfected N2a sublines, susceptible or resistant to 22L prion strain, revealed chromosomal imbalances but did not demonstrate any characteristic profile of genomic alterations linked to phenotype. Likewise, sublines phenotype did not depend on the expression of Prnp nor PrPC. Analysis expression of a set of 29 genes revealed distinct transcriptional profiles in the N2a sublines. Transcriptional analysis of N2a5822L cells using microarrays demonstrated differential expression of genes implicated in transcription efficiency and cytoplasmic dynamics. Expression levels of a set of 38 genes in N2a5822L, in three susceptible sublines and in a resistant subline revealed diversity in transcriptional response to prion infection. Finally, study of PrPSc in a CJD patient harbouring the p. V180I mutation revealed the absence of the diglycosylated isoform supporting the evidence of the conversion of mono- and un-glycosylated mutated forms into the pathogenic mutant PrPSc180I
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Guerri, Lucia. "Identification des cellules présentatrices d'antigène qui sélectionnent/induisent les cellules MAIT et T régulatrices dans le thymus." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T045.
Full textAbstract:
Depuis 1961 quand Jacques Miller a découvert, presque accidentellement la fonction du thymus, le développement lymphocytaire T a été largement étudié. De nombreuses sous-populations des lymphocytes T comme les T invariants associés aux muqueuses (MAIT) ou les T régulateurs (CD4+ CD25+ Foxp3+) suscitent aujourd’hui un grand intérêt dans le domaine. Alors que le développement des cellules MAIT est peu connu, celui des Treg est controversé. Le but de mes travaux de Thèse de Sciences a été de déterminer quels types cellulaires sont responsables de la sélection/induction intra-thymique de ces deux populations lymphocytaires Tαβ récemment décrites. Pour ce faire nous avons utilisé plusieurs systèmes de culture de l’organe thymique in vitro, certains d’entre eux permettant la manipulation des différents types cellulaires présents dans le thymus. Nous avons d’abord démontré que le développement des cellules MAIT est, en fait, intra-thymique, ainsi qu’indépendant d’antigènes périphériques et des cellules B (bien que les deux soient nécessaires à une phase postérieure d’expansion en périphérie). De plus, nous avons mis en place et optimisé la technique de culture de l’organe thymique reagrégé (RTOC). Les aspects techniques étant établis, nous pourrons dans un futur proche, identifier la cellule qui sélectionne les MAIT dans le thymus. Dans une étude parallèle, nous avons cherché à déterminer la contribution respective des cellules épithéliales médullaires thymiques (mTEC) et des trois sous populations de cellules dendritiques thymiques (TDC) dans l’induction des Treg. Nous avons démontré que les quatre populations cellulaires sont capables d’engager la différentiation de thymocytes en Treg. Cependant, elles le font avec une efficacité très variable, suggérant que leur contribution relative dans un thymus in vivo est différente pour chacune de ces cellules présentatrices d’antigène. De plus nous avons montré que cette différence ne s’expliquait pas par le niveau d’expression des molécules du complexe majeur d’histocompatibilité. Cela suggère qu’une différence autre, sois quantitative ou qualitative, pour l’instant non identifiée, est mise en jeu. Mieux comprendre ce qui permet aux cDCthy d’être les plus adaptées à l’induction des Treg nous permettra aussi d’identifier ce qui déclenche, sur un thymocyte, son engagement vers un TregSince 1961, when Jacques Miller almost accidentally discovered the function of the thymus, the development of mainstream T cells has been widely studied. A number of smaller populations of T cells, such as mucosal associated invariant T (MAIT) cells and CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T (Treg) cells are currently gaining attention in the field. While little is known of MAIT cell development, Treg cell development is somewhat controversial. The purpose of this thesis has been to determine which types of cell are responsible for the intrathymic selection/induction of these two relatively recently discovered αβT cells that are of interest to our laboratory, i. E. MAIT and Treg cells. To do this we used several in vitro thymic organ culture systems, some of them allowing the manipulation of the cell types present in the thymus during development. We showed that MAIT cell development is intrathymic and independent of peripheral antigens or B cells (although they are both needed for a further phase of peripheral expansion). Further, in order to identify the cell that selects MAIT cells in the thymus, we set up the reaggregate thymic organ culture (RTOC) technique. By the time of writing this thesis, the technical aspects of MAIT RTOCs were established. This means that the first key aspects of MAIT cell intrathymic selection should be revealed in the near future. In a parallel study, we set out to determine the relative contribution of medullary thymic epithelial (mTEC) cells and the three types of thymic dendritic cell (TDC) subpopulations to Treg induction and to unify the conflicting results published on the subject by others. We showed that the four populations were all capable of inducing SP4 into Tregs when loaded with the cognate antigen. However, they did it with very different “intensities”, suggesting that the relative contribution to Treg induction in a normal thymus is different for each of these APC populations. We found that Sirpα- conventional DCs that develop intrathymically (here called cDCthy) were the strongest Treg inducer, followed by Sirpα+ recirculatory cDCs (here called cDCrec). PDC and mTECs were weak Treg inducers in our system. Further, we showed that this difference was not explained by the level of MHC expression on each APC, suggesting that some other still unknown quantitative or qualitative difference between cDCthy and the other thymic APCs must be responsible. Understanding what makes cDCthy more suited for Treg induction will also help identifying what needs to be triggered on a thymocyte for Treg-lineage commitment in the thymus
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Berger, Cédric. "Relation entre les Escherichia coli exprimant les adhésines Afa/Dr et les cellules de l'hôte : rôle des rafts lipidiques et des molécules d'adhésion cellulaire reliées à l'antigène carcino-embryonnaire (CEACAM) dans la pathogenèse de l'infection." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114818.
Full textAbstract:
Les E. Coli d'adhésion diffuse (DAEC) sont impliqués dans les infections urinaires et dans les diarrhées. Le seul facteur de virulence identifié est une famille d'adhésines, Afa/Dr, liant le Decay Accelerating Factor (DAF) et le Carcinoembryonic Antigen (CEA) qui appartient à la famille des CEACAM. Notre objectif a été d'étudier les interactions entre les CEACAMs et les DAEC Afa/Dr. Nous avons montré que le le CEACAM1 et le CEACAM6 sont des récepteurs pour les DAEC Afa/Dr et sont recrutés autour des bactéries comme le GM1 et la cavéoline, marqueurs de rafts lipidiques. L'adhésion aux DAF, CEA et CEACAM6 induit la formation de prolongements cellulaires autour des bactéries et nécessite un remaniement du réseau d'actine et des rafts lipidiques, l'intervention des Rho GTPases et la phophorylation des protéines ERM. Nous avons aussi démontré que l'internalisation des bactéries s'effectuait par un mécanisme de type «zipper», indépendant de l'actine et faisant intervenir le CEA et le CEACAM6Diffusely adhering E. Coli (DAEC) are involved in urinary tarct infections and diarrhoeas. The only virulence factor identified is a family of adhesines, Afa/Dr, binding Decay Accelerating Factor (DAF) and Carcicoembryonic Antigen (CEA) which belongs to the CEACAM family. Our objective was to study the interactions between CEACAMs and the Afa/Dr DAEC. We observed that CEACAM1 and CEACAM6 are receptors for the Afa/Dr DAEC and are recruited around adhering bacteria as well as the GM1 and the caveoline, two lipid rafts markers. Adhesion to the DAF, CEA and CEACAM6 induces the formation of cellular prolongations around the bacteria and requires a reorganization of the actin network and the lipids rafts, as well as Rho GTPases and ERM proteins phophorylation. We also showed that the internalization of the bacteria was carried out by azipper like mechanism, indenpendently of actin. Moreover, CEA and the CEACAM6 seem to support entered of the bacteria into the cells
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Val, Stéphanie. "Réponses de l'épithélium respiratoire à des particules atmosphériques de tailles et origines différentes : mécanismes moléculaires et cellulaires mis en jeu." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077126.
Full textAbstract:
L'exposition aux particules atmosphériques (PM) induit une inflammation de l'appareil respiratoire et est suspectée d'exacerber les pathologies respiratoires chroniques obstructives qui présentent une hypersécrétion de mucus. Le but de cette étude a été (1) d'identifier les caractéristiques physico-chimiques des PM impliquées dans leurs effets biologiques en étudiant les fractions ultrafines (UF), fines (F) et grossières (G) de cinq aérosols différents (2 français et 3 africains) et (2) d'approfondir les mécanismes d'induction de mucines par les PM sur des cellules épithéliales bronchiques humaines in vitro. Quels que soient les aérosols considérés, ce sont les PM UF et F les plus réactives sur un panel de biomarqueurs dont la majorité est sensible au stress oxydant. Ces effets sont particulièrement associés à la présence de composés organiques sur les PM. D'autre part, nous avons démontré que des PM₂,₅ induisent l'expression et la production de MUC5AC une des mucines bronchiques, non seulement in vitro mais également in vivo chez la souris après instillation intratrachéale. L'induction de MUC5AC résulte de l'activation du récepteur à l'EGF provoquée par PAREG, ligand de l'EGFR dont la sécrétion est induite par les PM et qui a donc un effet autocrine. Ces recherches ont montré la réactivité biologique supérieure des fractions les plus fines de l'aérosol ce qui va dans le sens des orientations réglementaires visant à limiter les émissions des PM₂,₅. De plus, elles ont mis en évidence pour la première fois les mécanismes d'induction des mucines par les PM, les impliquant dans l'aggravation de pathologies respiratoires obstructivesAtmospheric particle (PM) exposure induces airway inflammation and is suspected to exacerbate chronic obstructive respiratory diseases that exhibit mucus overproduction. The aim of this study was (1) to identify physico-chemical characteristics of PM implicated in biological effects using ultrafine (UF), fine (F) and coarse (C) fractions of five different aerosols (2 French and 3 African) and (2) to deepen the mechanisms of mucin induction by PM on human bronchial epithelial cells in vitro. Whatever the aerosol, UF and F PM are the more reactive on a panel of biomarkers that are mostly sensitive to oxidative stress. These effects are associated to organic components of PM. Moreover, we demonstrated that PM. ₂,₅ induce expression and production of MUC5AC, a bronchial mucin, in in vitro conditions as well as in vivo in intratracheally instilled mice. MUC5AC induction results on EGF receptor activation by AREG, an EGFR ligand whose release is induced by PM demonstrating an autocrine effect. This work showed that finest fractions of PM have a high reactivity, which is in accordance with the new regulations limiting PM₂,₅ emissions. Furthermore, we demonstrated for the first time MUC5AC mechanisms of induction by PM, suggesting their implication in respiratory obstructive disease aggravation
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Nazeyrollas, Pierre. "Effet cardio-protecteur de l'amifostine vis-à-vis de la cardio-toxicité induite par la doxorubicine chez le rat. Evaluation sur cultures cellulaires, coeur isolé et in vivo." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMM205.
Full textAbstract:
Dans ce travail, nous avons d'abord rappelé les données concernant l'action et la cardio-toxicité de la doxorubicine et la pharmacologie de l'amifostine (WR 2721). Cet aminothiol protège sélectivement sélective les tissus sains vis à vis de la toxicité des agents alkylants et des rayonnements ionisants grâce à son activité anti-radicalaire. Nous avons étudié l'amifostine sur des cultures de cardiomyocytes de rats nouveau-nés, des cœurs de rat isolés, perfusés à pression constante et le rat in vivo. Nous avons démontré une activité cardio-protectrice de l'amifostine vis a vis de la cardio-toxicité induite par la doxorubicine sur ces différents modèles. L'effet cardio-protecteur nécessite d'être évalué sur des durées de traitement par anthracyclines plus longues et comparé au dexrazoxane. Nos résultats ouvrent cependant des perspectives thérapeutiques importantes l'utilisation des anthracyclines est fortement limitée par leur cardio-toxicitéIn the first part of our study, we review the data regarding doxorubicin cardiotoxicity and amifostine(WR 2721). Amifostine is an aminothiol compound with free radical scavenging properties and has demonstrated a protective effect of normal tissue submitted to alkylating agents and radiations. We have demonstrated a cardioprotective efficacy of amifostine against doxorubicin-induced cardiotoxicity in culture of neonate-rats cardiomyocytes, isolated rat hearts with constant pressure perfusion, and rats in vivo. The cardioprotective effect should now be evaluated during longer lasting doxorubicin treatments and should be compared to dexrazoxane's. However, our results give hints to important therapeutic perspectives, since cardiotoxicity is the main factor limiting anthracyclin prescription
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Coutanceau, Emmanuelle. "Fonctions immunomodulatrices de la mycolactone, principal facteur de virulence de Mycobacterium ulcerans." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077214.
Full textAbstract:
Mycobacterium ulcérons (Mu) engendre l'ulcère de Buruli, une maladie caractérisée par des lésions cutanées. Le facteur de virulence de Mu est une toxine lipidique, la mycolactone. Lors de ces travaux, nous avons étudié les réponses immunitaires développées au cours de l'infection par Mu, et tenté de préciser la contribution de la mycolactone dans leur mise en place. L'étude des réponses humorales et cellulaires développées en réponse à l'infection par Mu dans un modèle murin a mis à jour rimmunodorninance de Hsp65, et nous avons testé refficacité d'un vaccin ADN exprimant cet antigène. Nous avons observé que dans les phases précoces de l'infection, Mu était intemalisé par les cellules phagocytaires, résultat surprenant car Mu était considéré jusqu'alors comme strictement extracellulaire. Les macrophages infectés par Mu avaient un profil d'expression de cytokines et de chémokines altéré par rapport à ceux infectés avec un mutant déficient pour la synthèse de toxine, suggérant que la mycolactone agirait en modulant le système immunitaire de l'hôte. Concernant l'impact de la mycolactone sur les cellules immunes, nous avons montré que la toxine bloquait la production de TNF-α par les macrophages in vitro. Sur les cellules dendritiques, elle exerçait une action cytotoxique, inhibait la maturation et réduisait les capacités d'initiation de la réponse Ivmphocytaire. In vivo, la mycolactone était transportée dans des organes lymphoïties profonds, où elle bloquait la prolifération lymphocytaire. Nos résultats démontrent donc que la mycolactone est une molécule immunosuppressive, dont le mode d'action semble distinct de celui d'immunosuppresseurs connus comme FK506Mycobacterium ulcerans (Mu) is the causative agent of Buruli ulcer, a skin disease destroying both cutaneous and sub-cutaneous tissues. The pathology is linked to bacterial production of mycolactone, a lipophilic toxin. During my PhD thesis, the immune responses developed by host during infection by Mu, and the mycolactone contribution to these processes were studied. Firstly, the humoral and cellular responses developed in a mouse model of infection by Mu were characterized. These studies revealed Hsp65 immunogenicity and we tested the efficiency of a DNA vaccine encoding this antigen. Phagocytic cells internalized Mu during the primary stages of infection. This was a surprising result because Mu bas always been described as strictly extracellular. In addition, macrophages infected by Mu had a different expression profile for cytokines and chemokines compared to cells infected with a mycolactone deficient mutant. These observations led us to suggest that endogenous production of mycolactone may modulate the host immune response. Then, mycolactone impact on immune cells was characterized. Mycolactone blocked TNF-α production by macrophages in vitro. Furthermore, its immunosuppressive effect was also observed in dendritic cells, in which it causes cytotoxic effects, inhibition of maturation and inhibition of lymphocyte priming. In vivo, our preliminary pharmacological study shows that mycolactone is transported to lymphoid organs, where it acts by blocking lymphocyte proliferation. In conclusion, these results demonstrate that mycolactone is a novel immunosuppressive molecule, with a mode of action distinct from other well-known immunosuppressors such asFK506
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Ngo, Charlotte. "Rôle des formes réactives de l'oxygène dans la prolifération des cellules endométriosiques in vitro et in vivo : applications thérapeutiques." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T010.
Full textAbstract:
Le but de notre travail était d'évaluer le rôle des formes réactives de l'oxygène dans la physiopathologie de Tendométriose. Notre travail montre que, comparées aux cellules endométriales normales de patientes témoins, les cellules endométriales et endométriosiques des patientes malades proliféraient plus, qu'elles étaient soumises à un stress oxydant accru et que leur métabolisme des FRQ était identique à celui de cellules tumorales. Ce phénotype était associé à une activation de la voie ERK. La prolifération cellulaire était significativement diminuée in vitro et in vivo dans un modèle murin d'endométriose par un antioxydant (N-acetylcysteine), par les inhibiteurs de protéine kinase (Leflunomide, A771726, PD98059 et U0126) et par le 5-fluorouracil. Ces résultats sont le préliminaire à des essais cliniques évaluant l'utilisation des inhibiteurs de la voie ERK dans le traitement de l'endométrioseOur aim in this study was to evaluate the role of reactive oxygen species in the pathogenesis of endometriosis. We showed that compared to normal endometrial cells from control patients, endometrial and endometriotic cells of patients with endometriosis have an increased proliferation rate, an increased oxidative stress, and a ROS metabolism similar to these observed in tumoral cells. Cellular proliferation was associated with the ERK pathway activation. Cellular proliferation was decreased, in vitro and in vivo in a murin model of endometriosis, by an antioxidant (N-acetylcystein), by protein kinase inhibitors (leflunomide, A771726, PD98059 and UP 126) and by 5-fluorouracil. These results allow clinical trials evaluating the use of ERK pathway inhibitors in the treatment off endometriosis
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Labit, Hélène. "Régulation de l'initiation de la réplication chez les vertèbrés : analyse du programme temporel d'activation des origines de réplication dans les extraits d'oeufs de xénope." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077176.
Full textAbstract:
Chez les vertébrés, l'activation des origines de réplication est soumise à une régulation spatiale et temporelle. Dans les embryons précoces de xénope, les origines sont positionnées sans aucune spécificité de séquence et sont activées en clusters à différents moments de la phase S. L'objectif principal de ce travail a consisté à caractériser cette régulation temporelle en analysant d'une part, l'activation des origines au sein de fibres individuelles d'ADN, et d'autre part, la distribution des foyers de réplication au sein de noyaux de spermatozoïde incubés dans des extraits d'œufs de xénope. Grâce à la technique de peignage moléculaire, nous avons comparé la distribution des origines de réplication au début de deux phases S consécutives. L'absence de coïncidence « temporelle » entre les origines démontre que le moment d'activation des origines ne dépend pas de la position génomique et qu'il n'existe pas de régulation épigénétique du moment de réplication à l'échelle des origines. Cependant l'observation d'une coïncidence entre les foyers utilisés au début de deux cycles consécutifs suggère qu'une organisation chromosomique pourrait influencer le moment de réplication. L'analyse de la réplication de l'ADN ribosomique par FISH a fourni un exemple de domaine chromosomique répliqué plus tardivement que l'ADN génomique global. Une structure chromatinienne particulière pourrait expliquer ce retard. Par ailleurs, la fréquence d'initiation à ce locus est deux fois plus faible dans l'espaceur intergénique très riche en G+C que dans la région codante. Au sein de ce locus, il pourrait donc exister des facteurs locaux influençant le positionnement des origines de réplicationIn Vertebrates, replication origins are activated according to a spatial and temporal program. In early Xenopus embryos, origins are located at apparently random sequences and are activated in clusters that fire at different times throughout S phase. The main object of the present work is to characterize the temporal regulation of replication in Xenopus egg extracts through analysis of origin activation on single DNA fibers and replication foci distribution in sperm nuclei. Using molecular combing of DNA, we compared the distributions of replication origins fired at the beginning of two following S phases. Absence of significative coincidence between origins shows that the temporal order of replication does not depend on genomic position. Furthermore, no epigenetic central regulates the moment of origin firing. However the detection of coincidence between replication foci labeled at the beginning of two following S phases suggests that the chromosomal organization may influence the replication timing. Using FISH, we showed that the replication of the ribosomic DNA is delayed compared to the replication of whole genomic DNA. An altered chromatin structure may be responsible for this delay. Mapping of origins revealed that initiation frequency is two fold lower in the G+C rich intergenic spacer than in the coding rDNA sequence. At the rDNA, local parameters such as nucleotide composition may influence the localization of replication origins
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Mamchaoui, Kamel. "Influence des conditions de culture sur les propriétés de transport des pneumocytes de rat." Paris 5, 2000. http://www.theses.fr/2000PA05CD13.
Full textAbstract:
Le transport transépithélial de Na+ par l'épithélium alvéolaire de rat s'effectue côté apical à travers des canaux Na+ et un cotransport Na+ - glucose et côté basolatéral par la Na+, K+-ATPase. Le cotransport disparaît en culture sur plastique , peut-être du fait de la dérive des pneumocytes (Pn) vers le phénotype de type I. Nous montrons par RT-PCR que l'ARNm de l'isoforme SGLT1 de ces cotransporteurs le seul exprimé significativement, diminue fortement (90%) en culture sur plastique. En ce qui concerne le transport facilité de glucose, les ARNm de GLUT1 (et non GLUT2), GLUT4, GLUT5 ont été détectés dans les Pn fraîchement isolés. L'ARNm de GLUT1 diminue de 50% en culture et ceux GLUT4 et GLUT5 de plus de 80% Les Pn cultivés à l'interface air-liquide (A-L) ont un phénotype mieux préservé, qui se traduit par une importante augmentation de l'ARNm des apoprotéines du surfactant mais pas par celle des ANRm des transporteurs de glucose. Il a été suggéré que A-L agit par un meilleur apport d'O2. Nous avons réévalué les besoins en O2 des Pn en développant une méthode originale de mesure de leur consommation d'O2 en milieu ouvert qui ne nécessite pas leur décollement du support. Cette méthode a été validée et a permis de montrer que les Pn ne sont pas privés d'O2 dans nos conditions de culture. Nous avons évalué les effets d'une agitation tridimensionnelle qui a été proposée comme méthode de création d'A-L, sur les propriétés de transport des Pn. Nous avons observé qu'elle augmentait sensiblement l'activité de leur Na+, K+-ATPase, sans augmenter son expression, ni celle du canal Na+, ou celle des protéi͏̈nes du surfactant. L'utilisation d'inhibiteurs suggère que cette augmentation serait due à une activation de la PI-PLC et de la PKC, comme cela est observé chez différents types de cellules soumises à un stress mécanique. Les Pn possèderaient donc des éléments de transduction des contraintes de cisaillement, comme les cellules endothéliales.
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Essayagh, Sanah. "Interactions entre endothélium vasculaire et microparticules d'apoptose ou d'activation cellulaire : étude des conséquences fonctionnelles et des mécanismes impliqués." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077173.
Full textAbstract:
Les microparticules (MPs) sont des fragments membranaires émis par les cellules activées ou apoptotiques, dont le rôle dans les communications inter-cellulaires est reconnu. Au cours des pathologies vasculaires, et spécialement dans les situations de thrombose ou les états pro-thrombotiques, le nombre de MPs augmente dans le sang. Leur origine cellulaire varie selon le contexte pathologique et les MPs ne sont pas seulement des marqueurs de l'activation ou de la souffrance cellulaire, mais sont également des acteurs physiopathologiques. Nous nous sommes intéressés à leurs effets sur les fonctions endothéliales et, parmi celles-ci : activité pro-coagulante membranaire, libération de facteur Willebrand et expression de molécule d'adhésion, adhésion plaquettaire et leucocytaire, formation d'un thrombus en système en flux. Nous avons mis en évidence le rôle des radicaux oxygénés (ROS) comme médiateurs de certains effets des MPs de monocytes. L'étude de l'effet des MPs sur la production de ROS et les signaux cellulaires en aval ont permis de montrer que l'inhibition de cette voie métabolique réduit signifïcativement le développement d'un phénotype endothélial prothrombotique en partie sous le contrôle de la voie p38/MAPK. Un résultat original de ce travail est le recrutement ROS-dépendant des plaquettes à Pendothélium activé par les MPs de monocytes. Nous avons aussi montré que les MPs issues de cellules musculaires lisses induisaient une dysfonction endothéliale en modifiant la biodisponibilité du NO. Enfin, nous avons comparé l'effet de MPs de monocytes, plaquettes et cellules musculaires lisses sur l'expression de protéines membranaires et la génération de RQSMicroparticles (MPs) are small membrane vesicles shed by ectocytosis from activated or apoptotic cells. Their involevement in trans-cellular communication is now established. During vasculopathies, especially thrombotic events, their number increases in the systemic circulation and their cellular origin depends on pathology. MPs are physiopathological mediators and may change the endothelial phenotype. We investigated the effects of MPs interaction on prothrombotic activity, Weibel-Palade bodies secretion, cell adhesion molecules expression and blood cell recruitment. We show that reactive oxygen species (ROS) are second messengers for monocyte derived MP (M-MPs) effects. M-MPs induced ROS induce transient platelet recruitement at the endothelial surface and TF-dependant activity via the p38/MAPK pathway. MPs derived from apoptotic smooth muscle cells induce endothelial dysfunction by reducing NO bioavailibility. This effect also involve ROS generation and is dependant on the adhesion of microparticles to the endothelial cells mediated by beta-3 integrin. Besides, we compared endothelial effects of MPs derived from monocytes, platelets and smooth muscle cells on cell adhesion molecule expression and ROS generation
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Dib, Hanadi. "Caractérisation des cibles antigéniques des anticorps anti-cellules endothéliales au cours des maladies vasculaires auto-immunes." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T022.
Full textAbstract:
Des anticorps anti-CE (AECA) ont été identifiés dans un large éventail de maladies auto-immunes et/ou inflammatoires systémiques, en particulier dans la sclérodermie systémique (ScS), dans l’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) idiopathique (HTAPi) et dans les vascularites systémiques, notamment dans l’artérite à cellules géantes (maladie de Horton). Ces anticorps peuvent jouer un rôle pathogène en activant les CE et en entrainant leur apoptose en particulier au cours de la ScS. Dans la première partie de ce travail, nous nous sommes intéressés aux cibles des AECA. A l’aide d’une technique d’immunoblot en 2 dimensions utilisant des extraits protéiques totaux de CE de veine ombilicale humaine normale (HUVEC) suivie d’une analyse en spectrométrie de masse, nous avons étudié et identifié les cibles des AECA naturels contenus dans des préparations d’IgG humaines normales, les immunoglobulines intraveineuses (IVIg). De façon intéressante, très peu de ces antigènes avaient été précédemment rapportés comme étant des cibles des IgG auto-réactives naturelles et/ou contenues dans les IVIg. Dans un second temps, nous avons étudié les profils de réactivité des IgG sériques de patients ayant une ScS avec ou sans HTAP, une HTAPi ou une maladie de Horton et nous avons pu identifier des cibles antigéniques des AECA spécifiques de chacune de ces maladies. Parmi les cibles antigéniques les plus pertinentes identifiées dans chaque pathologie on trouve: la phosphoglycérate mutase 1 et la vimentine dans la ScS, les peroxyredoxines 1 et 2 dans la ScS avec HTAP, la profiline-1 dans l’HTAPi et la lamine A/C et la vinculine dans la maladie de Horton. Dans une deuxième partie de ce travail, nous avons étudié les protéomes de différents types de CE afin de déterminer si l’origine des CE influence leur reconnaissance par les AECA. Nous avons utilisé la technique «2-Dimensional Differential In Gel Electrophoresis» (2D-DIGE) pour comparer les protéomes de 4 donneurs caucasiens différents d’HUVEC et de cellules de microcirculation de peau (HMVEC-D) et de poumon (HMVEC-P) et nous avons trouvé des différences importantes d’expression des protéines entre les HUVEC et les CE de microcirculation. Dix-sept et 114 protéines avaient une expression différente d’un rapport d’au moins 1,5 entre les HUVEC et les HMVEC-P et entre les HUVEC et les HMVEC-D, respectivement. Un grand nombre de ces protéines était impliqué dans la prolifération et la survie des CE. En se servant du logiciel «Ingenuity» et des réseaux d’interaction de protéines qu’il a générés à partir des protéines différemment exprimées entre les HUVEC et les HMVEC-D, nous avons trouvé que 57% de ces protéines ont la capacité d’interagir avec l’acide rétinoïque et/ou avec le Transforming growth factor-beta, ce qui suggère une réponse différente de ces 2 types de CE en présence de chacune de ces molécules. Puis, en utilisant une technique d’immunoblot quantitatif en une dimension nous avons trouvé que les profils de réactivité des IgG sériques de patients atteints de ScS diffèrent selon le type de CE utilisé, HUVEC ou HMVEC-D. Au total, nous avons identifié des nouvelles cibles antigéniques des AECA dans la ScS, l’HTAPi et la maladie de Horton, la plupart d’entre elles étant impliquée dans le cycle et la survie cellulaires. Nous avons de plus démontré que les protéomes des CE de macrocirculation et de microcirculation diffèrent significativement et influencent la fonction et la reconnaissance immune des CEThe endothelium is composed of a thin layer of cells that lines the interior surface of blood vessels, thus forming an interface between circulating blood in the lumen and the rest of the vessel wall. These cells, named endothelial cells (EC), line the entire circulatory system, from the heart to the smallest capillaries. EC differ, depending on the vessel type where they are located. Anti-EC antibodies (AECA) were identified in a large panel of systemic auto-immune and/or inflammatory diseases, particularly in systemic lupus erythematosus, anti-phospholipid syndrome, systemic sclerosis (SSc), idiopathic pulmonary arterial hypertension (iPAH) and systemic vasculitis. These antibodies are able to activate EC and induce apoptosis, particularly in SSc. In the first part of this work, we were interested in the identification of target antigens of AECA in vascular inflammatory or autoimmune diseases. Using a 2-dimensional immunoblotting technique on total protein extracts of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) followed by mass spectrometry, we identified target antigens of AECA in normal human polyclonal IgG preparations, intravenous immunoglobulins (IVIg). Interestingly, very few of these antigens had previously been reported as targets of normal human self-reactive IgG and or detected in IVIg preparations. In addition, we investigated the reactivity profiles of serum IgG of patients with SSc with or without PAH, with iPAH or with giant cell arteritis (GCA) and we were able to identify specific target antigens of AECA in each of these conditions. Thus, we identified phosphoglycerate mutase 1 and vimentin in patients with SSc, peroxyredoxins 1 and 2 in SSc patients with PAH, profilin-1 in patients with iPAH and lamin A/C and vinculin in patients with GCA. In the second part of this work, we studied the proteomes of different types of EC to determine if the EC type can influence the recognition of these cells by AECA. We used the “2 Dimensional-Differential In Gel Electrophoresis” (2D-DIGE) to compare proteomes of 4 different caucasian donors HUVEC, pulmonary human microvascular EC (HMVEC-P) and dermal human microvascular EC (HMVEC-D) and found important differences between HUVEC and microvascular EC. Seventeen and 114 proteins showed at least a 1. 5 fold change expression between HUVEC and HMVEC-P and between HUVEC and HMVEC-D, respectively. A number of these proteins were involved in the proliferation and survival of EC. “Ingenuity” analysis showed that 57% of the 114 proteins differentially expressed between HUVEC and HMVEC-D were involved in susceptibility to retinoic acid and/or transforming growth factor-beta, which suggests that these 2 types of EC respond in a different manner in the presence of each of these molecules. Then, using a one-dimensional immunoblotting technique on HUVEC and HMVEC-D protein extracts, we found that reactivity profiles of serum IgG of patients with SSc differ between HUVEC and HMVEC-D. Overall, we were able to identify new target antigens of AECA in patients with SSc, iPAH or GCA. Most of these target antigens are involved in cell cycle and survival. However, the pathogenic role of these AECA needs further investigations. In addition, we have observed important differences between proteomes of macrovascular and microvascular EC and provided evidence that these differences influence EC function and immune recognition
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Fajac, Isabelle. "Transfert de gènes dans les cellules épithéliales des voies aériennes à l'aide de dérives de polylysine : application à la mucoviscidose." Paris 5, 2000. http://www.theses.fr/2000PA05CD12.
Full textAbstract:
La mucoviscidose est une maladie autosomique récessive qui pourrait bénéficier d'un traitement par thérapie génique. Dans ce travail, nous avons étudié le transfert de gènes dans les cellules épithéliales des voies aériennes à l'aide de dérivés de polylysine, les polylysines glycosylées ou histidylées. La polylysine est une chaîne polycationique qui permet la formation avec l'ADN plasmidique d'un complexe éléctrostatique transitoirement stable. Les polylysines glycosylées sont formées de polylysine partiellement substituée par des résidus osidiques. Ces résidus permettent un ciblage cellulaire car ils sont reconnus par des récepteurs menbranaires affines d'osides, ls lectines. Un fois entrés dans les cellules, les complexes plasmide/dérivé de polylysine doivent s'échapper des vésicules d'endocytose afin de pouvoir atteindre le noyau de la cellule à traiter. Des agents endosomolytiques comme la chloroquine sont utilisés. Une polylysine substituée par des résidus histidyles qui déstabilisent par eux-même les membranes des endosomes a également été étudiée. Nous avons montré que parmi les différents dérivés de la polylysine, la polylysine lactosylée, la polylysine glucosylée et la polylysine histidylée permettent le transfert de gènes raporteurs et du gène CFTR le plus efficace dans des lignées de cellules épithéliales et séreuses des voies aériennes de phénotype normal et avec mutation homozygote ?F508 du gène CFTR et dans des celules en culture primaire. Le transfert de gènes à l'aide de ces dérivés de polylysine s'effectue sans toxicité cellulaire et est aussi ou plus efficace que le transfert de gènes obtenu avec d'autres vecteurs synthétiques commercialisés (polyéthylénéimine et lipides cationiques). Les mécanismes cellulaires du transfert de gènes ont été abordés en étudiant les relations entre endocytose médiée par un recepteur et efficacité de transfert de gènes.
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Boutant, Marie. "Fonction et régulation du facteur de transcription COUP-TFII dans les cellules β du pancréas." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T047.
Full textAbstract:
La plasticité du pancréas endocrine est essentielle pour répondre de façon adaptée à une demande accrue en insuline et maintenir un contrôle optimal de l’homéostasie glucidique. L’invalidation génique de COUP-TFII dans les cellules ß pancréatiques à l’état hétérozygote chez la souris adulte conduit à une intolérance au glucose suite à une diminution de la sécrétion d’insuline en réponse au glucose. De plus, l’expression transcriptionnelle de COUP-TFII est inhibée par l’insuline. Au cours de cette thèse, l’étude des souris homozygotes et de la lignée cellulaire INS-1 832/13 nous a permis de mettre en évidence que COUP-TFII participe au maintien du nombre de cellules ! au cours de la période post-natale en activant la voie de signalisation Wnt/ß-caténine/TCF7L2 en réponse au GLP-1. Nous avons aussi mis en évidence une région du promoteur COUP-TFII activée par liaison d’HNF4 !MODY1 en réponse à de faibles concentrations de glucose. La diminution de COUP-TFII en réponse à de fortes concentrations de glucose implique la diminution d’HNF4" dont l’expression génique est sous le contrôle de la voie de signalisation de FOXO1, facteur réprimé par l’insuline. Enfin, nous avons établi une corrélation entre le polymorphisme rs3743462-C situé dans les régions régulatrices amont du gène COUP-TFII et des paramètres glucidiques liés à la sensibilité à l’insuline chez l’homme. Dans la cellule ß, ce variant lie COUP-TFII avec une plus grande affinité et est associé à une diminution de l’expression basale de COUP-TFII conduisant à une plus forte répression par le glucose. L’ensemble de ces données suggèrent que COUP-TFII participe in vivo à l’homéostasie glucidique de la souris et de l’hommeThe development and maintenance of functional pancreatic β cell mass are essentials for an appropriate response to changes in blood glucose levels. Pancreatic β cell knockout of the COUP-TFII (Chicken Ovalbumin Upstream Promoter Transcription Factor II) gene, in adult heterozygous mice, led to glucose intolerance due to an impaired glucose-stimulated insulin secretion. We also reported that COUP-TFII expression is repressed by insulin. During this PhD, using COUP-TFII homozygous knockout mice and the 832/13 INS-1 β cells, our results suggested that COUP-TFII can provide sufficient stimulation of the Wnt/β-catenin/TCF7L2 dependent transcription signaling pathway in response to GLP-1 to allow development of an appropriate β cell mass during the postnatal period. We also identified a DNA region of the promoter that down-regulates COUP-TFII expression by attenuating the activating effect of HNF4 !MODY1 in response to high glucose concentrations through FoxO1 signaling, a major downstream target of the insulin signaling pathway. Finally, individuals from the prospective DESIR cohort carrying the minor C-allele at rs3743462 which is located in these conserved upstream regulatory regions, displayed lower basal levels of circulating insulin and a lower insulin resistance index. In β cells, this polymorphism is associated with a decreased of basal level of COUP-TFII gene activation and an increased repression to high glucose concentrations. We showed that COUP-TFII binds the rs3743462-C oligonucleotide with higher affinity suggesting a possible autorepression of its expression. In conclusion, COUPTFII could be a key regulator of in vivo glucose homeostasis in mice and in human
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Bruneel, Arnaud. "Etude protéomique des cellules endothéliales et identification de protéines impliquées dans leur apoptose induite par l'étoposide." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05P629.
Full textAbstract:
L'électrophorèse bi-dimensionnelle (2D) permet aujourd'hui de séparer plusieurs centaines de protéines sur un gel avec un pouvoir de résolution pouvant atteindre quelques centièmes d'unité pH ; par ailleurs, les techniques de spectrométrie de masse MALDI-TOF (matrixassisted laser desorption/ionization-time of flight) et ESI-MS/MS (electospray ionizationtandem mass spectrometry) fournissent des données de masse et/ou de séquencepeptidique permettant leur identification. Nous avons utilisé cette association analytique pour étudier le contenu protéique global, ou protéome, des cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVECs) en primocultures. Ce modèle, bien qu'imparfaitement représentatif de l'endothélium humain in vivo, est très utilisé en recherche et a fortement contribué à l'avancée des connaissances concernant la physiopathologie vasculaire. Près d'un millier de protéines d'HUVECs ont été séparées entre les pH 3 et 10 ; parmi elles, 162, fortement exprimées à pH acide, ont été identifiées. L'étude fonctionnelle de ces identifications a permis, d'une part, de mieux caractériser les cellules endothéliales humaines et a, d'autre part, révélé certaines protéines spécifiques de l'endothélium comme l'endothélial protein disulfide isomérase (endoPDI). L'étude protéomique différentielle des HUVECs traitées par l'étoposide, un anticancéreux inducteur d'apoptose, a montré les modulations d'expression significatives de huit protéines : la cofiline, les GRPs 78 et 94 (glucose regulated proteins), la laminin receptor protein, la valosin containing protein, la protease inhibitor 9, l'apolipoprotéine A1 et la tropomyosine. Ces variations ont confirmé l'implication de la voie mitochondriale dans notre modèle d'apoptose et ont également suggéré celle du réticulum endoplasmique. Enfin, l'étude protéomique des effets du phorbol myristate acétate, un activateur de la protéine kinase C, a montré de nombreuses différences d'expression par rapport à l'état quiescent qui devraient permettre de mieux comprendre les voies biochimiques de la régulation de la protéine anti-apoptotique bcl-2 ainsi que de l'initiation du processus d'angiogenèse. En perspective, ces résultats suggèrent qu'il sera bientôt possible d'identifier des molécules protectrices pour l'endothélium vasculaire et donc bénéfiques pour les patients traités par les chimiothérapies anticancéreusesIn this work, we have carried out the proteomic study of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) using the combination of 2D-electrophoresis, automated trypsin digestion, peptide mass fingerprinting analysis after MALDI-TOF MS and peptide sequencing using nano LC-ESI-MS/MS. The overall functional characterization of the 162 identified proteins from primary cultures of HUVECs confirms the metabolic capabilities of endothelium and illustrates various cellular functions more related to cell motility and angiogenesis, protein folding, anti-oxidant defenses, signal transduction, proteasome and resistance to apoptosis. In comparison with controls cells, the differential proteomic analysis of HUVECs treated by the pro-apoptotic topoisomerase inhibitor etoposide further revealed the modulation of eight proteins namely, GRP78, GRP94, valosin-containing protein, proteinase inhibitor 9, cofilin, 37 kDa laminin receptor protein, bovine apolipoprotein and tropomyosin. These data suggest that etoposide-induced apoptosis of human vascular endothelial cells results from the intricate involvement of multiple apoptosis processes including at least the mitochondrial and the endoplasmic reticulum stress pathways. The presented 2D pattern and protein database,as well as the data related to apoptosis of HUVECs, are available at http://www. Huvec. Com
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Pariset, Claude. "Quantification et distribution des proteine-kinases camp-dependantes dans la lignee germinale male des mammiferes." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S014.
Full text
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Kiladjian, Jean-Jacques. "Etude de l'immunité naturelle dans les syndromes myelodysplasiques." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077168.
Full textAbstract:
Les syndromes myélodysplasiques (SMD) sont des pathologies clonales des cellules souches hématopoïétiques caractérisées par une hématopoïèse inefficace responsable de cytopénies périphériques et par un risque d'évolution vers la leucémie aiguë. Des arguments cliniques, biologiques et thérapeutiques plaident pour un rôle du système immunitaire dans leur physiopathologie. Les cellules natural killer (NK) et les lymphocytes Tγδ sont des composants importants de l'immunité naturelle et de l'immunosurveillance anti-tumorale par leur rôle cytotoxique direct et leur position à l'interface avec l'immunité adaptative. L'existence de molécules modulatrices de leur activité utilisables en thérapeutique ouvre de nouvelles possibilités d'immunothérapie. Cette étude a montré que les cellules NK de SMD présentent une activité cytolytique et une production de cytokines effondrées, bien qu'elles expriment normalement les récepteurs activateurs ; ont une prolifération faible en réponse à l'IL-2, avec un excès d'apoptose en culture ; appartiennent au clone myélodysplasique. Nous avons également étudié les lymphocytes Tγδ de SMD et montré que ces cellules pouvaient être amplifiées in vitro après stimulation spécifique par un phosphoantigène. Ces γδ avaient une fonction cytotoxique et une production de cytokines normales, et n'appartiennaient pas au clone tumoral. Mais elles présentaient aussi un défaut majeur de prolifération sous IL-2, suggérant un défaut commun de la voie de signalisation de l'IL-2 spécifique aux SMD. Ce travail a permis de décrire de nouvelles anomalies fonctionnelles et prolifératives des cellules NK et Tγδ dans les SMD, pouvant jouer un rôle dans leur physiopathologieMyelodysplastic syndromes (MDS) are clonal hematopoietic stem cell disorders characterized by ineffective hematopoiesis and risk of evolution to acute leukemia. Clinical, biological and therapeutic data suggest that the immune system plays a role in their pathophysiology. Natural killer (NK) and yδ T cells are major components of innate immunity, participating in tumor immunosurveillance due to their cytotoxic function and their ability to link innate and adaptative immunity. This study showed that MDS NK cells displayed markedly decreased cytolytic and secretory functions, despite normal activating receptors expression; had decreased proliferative capacities in response to IL-2, and increased apoptosis in culture; belonged in part to the MDS clone. We have also studied MDS yδ T cells, showing that those cells could be efficiently expanded in vitro after specific stimulation using a phosphoantigen in the majority of patients. Those expanded cells were fully functional, and did not belong to the MDS clone. However, they also presented a poor proliferation in response to IL-2 despite normal IL-2 receptor expression, suggesting a common defect in the IL-2 signalling pathway, which could be a hallmark of MDS. In conclusion, this study showed new functional and proliferative defects of NK and yδ T cells in MDS that could play a role in disease pathophysiology
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Weimershaus, Mirjana Léona. "The Role of Insulin-Regulated Aminopeptidase in Cross-Presentation." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T036.
Full textAbstract:
L’aminopeptidase IRAP est localisée dans des endosomes du type de stockage dans divers types cellulaires. Dans les cellules dendritiques (CD), IRAP est impliquée dans l’élagage des ligands des molécules du CMH de classe I (CMH-I). L’absence d’IRAP provoque un défaut de la présentation d’antigènes internalisés sur le CMH-I (connue comme la “présentation croisée”). Par contre, IRAP n’est pas nécessaire dans les voies “classiques” de présentation antigéniques. Au vue de la colocalisation et interaction d’IRAP avec les CMH-I, nos observations suggèrent qu’IRAP marque un compartiment spécialisé à la dernière étape d’élagage et associations de peptides sur les CMH-I dans la présentation croisée. Nous avons pu mettre en évidence que ce compartiment, caractérisé par la présence de Rab14 et STX6, est fonctionnel dans les soustypes CD8+ et CD8- des CD. L’internalisation d’antigène est accompagné par le recrutement rapide des endosomes IRAP au phagosome. En l’absence d’IRAP la maturation phagosomale est accélérée, ce qui est manifesté par une acquisition plus rapide des marqueurs des endosomes tardifs et des lysosomes, ainsi qu’une dégradation plus importante de l’antigène. En conclusion, les endosomes d’IRAP ont au moins deux rôles distincts dans la physiologie des CD: l’elagage de peptides antigéniques et le ralentissement de la maturation phagosomale, un mécanisme connu pour être bénéfique pour la présentation croisée. La meilleure caractérisation des stimuli qui interviennent dans la mobilisation d’IRAP pourrait être pertinente pour mieux comprendre la régulation de différentes fonctions des CD, y compris la présentation antigéniqueInsulin-regulated aminopeptidase (IRAP) localizes to storage-type endosomes in many non-immune and immune cell types. In dendritic cells (DCs), IRAP functions as trimming peptidase to generate peptide ligands for MHC class I molecules (MHC-I). Absence of IRAP led to a defect in the presentation of internalized antigen on MHC-I (referred to as cross-presentation) in vitro and in vivo. Importantly, IRAP was not required for the “classical” presentation pathways (i. E. Presentation of extracellular antigens on MHC-II as well as presentation of intracellular antigens on MHC-I). Further supported by the colocalization and physical interaction of MHC-I with IRAP, these observations suggest that IRAP marks a cross-presentation compartment in which final trimming and loading on MHC-I can take place. We show that this compartment, marked by STX6 and Rab14, is functional in both CD8+ and CD8- DC subsets. In DCs, upon antigen internalization, IRAP vesicles are rapidly recruited to the phagosome. Additional to its function in antigen trimming, IRAP seems to regulate phagosome dynamics. In IRAP-deficient cells, phagosome maturation was accelerated, as shown by the rapid acquirement of late endosomal and lysosomal markers to the phagosome and increased antigen degradation. Thus, IRAP endosomes have at least two important roles in the DCs physiology: the trimming of antigenic peptides and the delay of phagosome maturation that is beneficial for cross-presentation. Understanding the stimuli that regulate IRAP mobilization, and possibly cross-presentation, could be relevant in order to understand if and how DCs control their different functions, including antigen presentation
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Rumelhard, Mélina. "Réponses de l'epithélium respiratoire à l'exposition aux particules atmosphériques fines PM 2,5 : rôle respectif des composantes organiques, métalliques et biologiques." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077165.
Full textAbstract:
Les particules atmosphériques (PM) seraient associées à des effets néfastes sur la santé tels qu'une inflammation des voies aériennes ou un remodelage et une carcinogénèse pulmonaires à long terme. Les PM2> (diamètre ≤2,5μm) sont un mélange complexe dont la composition dépend de leur source d'émission et des conditions climatiques. Des cellules épithéliales respiratoires exposées à des PM2,5 sécrètent des cytokines pro-inflammatoires et de Pamphiréguline, un ligand du récepteur à l'EGF (EGFR) impliqué dans la réparatior cellulaire. Le but de cette étude a été 1) de déterminer l'expression génique et protéique de 4 ligands de l'EGFR par des cellules épithéliales respiratoires exposées à des PM2,5 urbaines et de préciser la contribution des composants des PM2,5 et 2) d'étudier les effets autocrines et paracrines des sécrétions épithéliales induites par les PM2,5 sur les cellules épithéliales et conjonctives bronchiques. Les PM2,5 induisent l'expression de Pamphiréguline, de l'HB-EGF et du TGFα avec une participation majeure des composés organiques. La technique des milieux conditionnés a montré que les sécrétions épithéliales induites par les PM2,5 augmentent la sécrétion du biomarqueur pro-inflammatoire GM-CSF via une régulation autocrine par des ligands de l'EGFR alors qu'il n'y a pas de régulation de l'effet mitogène des PM2,5 sur les cellules épithéliales bronchiques ou les fïbroblastes pulmonaires. Ces données révèlent l'implication des ligands de l'EGFR dans la réponse pro-inflammatoire induite par les PM2,5 et potentiellement dans le remodelage bronchique exacerbé dans les voies aériennes des patients atteints de maladies respiratoires chroniquesExposure to ambient particulate matter (PM) is known to be responsible for adverse health effects such as airway inflammation and probably bronchial remodeling and pulmonary carcinogenicity for longer exposures. Urban PM2,5 (PM with an aerodynamic diameter ≤2,5 μm) is a complex mixture which composition relies on the emission source and atmospheric conditions encountered by particles. Exposure of respiratory epithelial cells to PM2,5 induces the release of pro-inflammatory cytokines and chemokines, and amphiregulin, a ligand of the epidermal growth factor receptor (EGFR) involved in cellular repair and chronic respiratory diseases. The aim of this study was 1) to determine the expression of 4 EGFR ligands mRNA and proteins by respiratory epithelial cells exposed to urban PM2,5 and to precise the contribution of PM components and 2) to investigate the autocrine and paracrine effects of PM2,5-induced epithelial cell secretions on bronchial epithelial and connective tissue cells. PM2 5 induces the mRNA expression and/or secretion of amphiregulin, HB-EGF and TGFα with a major contribution of organic components. Using the experimental strategy of conditioned media, we established that PM2,5-induced epithelial cell secretions increase the release of the pro- inflammatory biomarker GM-CSF with an autocrine regulation by EGFR ligands, while there isn't any autocrine or paracrine régulation of the PM2,5-mitogen effect on bronchial epithelial cells or pulmonary fibroblasts. These results highlight the involvement of EGFR ligands in PM2,5-induced pro-inflammatory response and potentially in bronchial remodeling exacerbated in chronic respiratory patients airways
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Bakillah, Ahmed. "Production de collagene de type quatre et de collagenase quatre par les cellules endotheliales humaines cultivees en presence de differentes concentrations de glucose, et d'hormone de croissance : effets d'un inhibiteur de l'aldose reductase et d'un inhibiteur de proteine kinase c." Paris 5, 1994. http://www.theses.fr/1994PA05S001.
Full textAbstract:
L'epaississement des membranes basales capillaires caracterise la microangiopathie diabetique. Il est associe a une accumulation de collagene de type iv qui peut etre due a une augmentation de sa biosynthese et/ou a une diminution de sa degradation. Nous avons montre dans la premiere partie de notre etude que les cellules endotheliales provenant de la veine du cordon ombilical humain, cultivees en presence de forte concentration de glucose, diminuent en nombre et augmentent leur production de collagene de type iv dose par elisa, aussi bien dans le surnageant des cultures que dans la matrice extracellulaire et les cellules. Ceci s'accompagne d'une augmentation significative de l'incorporation de #1#4c-proline dans les proteines totales et collageniques dans le surnageant de culture, dans la matrice extracellulaire et les cellules. L'etude de l'activite collagenase de type iv libre et totale apres activation par l'apma a montre une baisse significative dans le surnageant de culture. Dans une deuxieme partie nous avons etudie l'effet d'un inhibiteur de l'aldose reductase, le sorbinil, qui s'est avere capable de prevenir cette augmentation de collagene iv et de corriger la diminution du nombre de cellules observee en presence de forte concentration de glucose. Le glucose est le principal facteur, mais apparemment pas le seul, qui soit responsable de l'epaississement des membranes basales au cours du diabete. Chez les diabetiques insulinodependants ayant une bonne equilibration glycemique, il existe en effet une inegalite individuelle dans la rapidite d'apparition et la gravite des lesions de retinopathie diabetique. Cette inegalite suggere qu'un ou plusieurs facteurs aggravants, autres que l'hyperglycemie, existent chez certains diabetiques. C'est dans cette perspective que nous avons etudie dans la troisieme partie de notre travail les effets de l'hormone de croissance (hgh) susceptible d'etre l'un de ces facteurs. Nous avons etudie l'effet hgh en traitement de 72h en l'absence de serum et en presence de differentes concentrations de glucose. Hgh augmente le nombre de cellules de facon dose-dependante uniquement en presence de glucose 5,5mm : l'augmentation est de 15% a la concentration de 100ng/ml de hgh. Hgh stimule la production de collagene de type iv aussi bien dans le surnageant de culture que dans la matrice extracellulaire et les cellules aux differentes concentrations de glucose. Hgh augmente l'incorporation de #1#4c-proline dans les proteines collageniques du surnageant, de la matrice extracellulaire et des cellules, a forte concentration de glucose seulement. Nous avons observe une augmentation significative de l'activite collagenase libre apres activation par l'apma en presence de 100ng/ml de hgh et de glucose 5,5mm. Nos resultats peuvent s'expliquer en partie par l'activation d'une ou plusieurs isoformes de proteine-kinase c (pkc) par la gh et le glucose. Cette hypothese est etayee par l'utilisation, dans la derniere partie de notre etude, d'un inhibiteur des pkc (gf109203x) qui a prevenu d'une facon significative la stimulation de la production de collagene iv sous forte concentration de glucose ou de hgh. Il a ete sans effet sur l'activite de la collagenase iv. Nos resultats suggerent que le glucose et la gh peuvent favoriser l'accumulation de collagene iv dans les membranes basales, observee dans la microangiopathie diabetique, par activation d'une ou plusieurs isoformes de pkc.