Academic literature on the topic 'Stérilité masculine'

L’implication de l’aromatase dans la qualité du spermatozoïde a été appréhendée chez des patients tunisiens consultant pour infertilité et présentant des anomalies de la mobilité et de la forme des spermatozoïdes. Une diminution significative du transcrit aromatase a été notée chez les tératospermiques et les asthénotératospermiques. Les asthénospermiques se divisent en deux sous-groupes avec des taux d’ARNm de l’aromatase abaissés dans le premier et augmentés dans le second. Une corrélation significative entre les taux de transcrits de l’aromatase et le pourcentage de formes atypiques et/ou l’IAM a été enregistrée. Les taux des paramètres biochimiques du plasma séminal montrent une diminution du fructose chez les asthénozoospermiques en comparaison aux asthénotératozoospermiques. L’analyse de corrélation révèle que l’a-glucosidase neutre est corrélée avec le volume séminal et le pH; l’acide citrique avec le pH et le fructose avec le volume séminal, la numération des spermatozoïdes et la morphologie. Une implication des gènes de l’aromatase et des récepteurs aux estrogènes alpha dans la stérilité des hybrides chromosomiques issus de croisements entre souris domestiques Robertsoniennes (22Rb) 2n=22 et standard (40Std) 2n=40 a été vérifiée par l’analyse de l’expression des gènes de l’aromatase et du récepteur aux estrogènes alpha. Nos résultats n’ont pas montré de différence des taux d’ARNm de ces marqueurs dans les testicules entre les hybrides et les races parentales, mais chez les femelles une réduction du taux d’ARNm de l’aromatase a été observée dans les ovaires des hybrides du croisement (♀40Std×♂22Rb)
The involvement of aromatase in the quality of the spermatozoa was undertaken in Tunisian patients with abnormal mobility and morphology spermatozoa and undergoing infertility assessment. A significant decrease of aromatase transcript was noted in both teratozoospermia and asthenoteratozoospermia groups compared with normozoospermia. Asthenozoospermia group was divided into two sub-groups with aromatase mRNA rates lowered in the first and increased in the second. Moreover, a significant correlation between mRNA aromatase and the percentage of sperm morphology and/or MAI was recorded. The seminal plasma biochemical parameters in these patients revealed a significant reduction of fructose level in the asthenozoospermic in comparison with asthenoteratozoospermic patients. The correlation analysis reveals that neutral a- glucosidase is correlated with seminal volume and pH; citric acid with pH and fructose with seminal volume, sperm count and morphology. The implication of aromatase and estrogen receptor alpha gene in the sterility of chromosomal hybrid mice resulting from crosses between Robertsonian (22Rb) 2n = 22 and standard (40Std) 2n = 40 domestics mice was verified by the analysis of the expression of aromatase and estrogens receptor alpha genes. Our data showed no difference of mRNA rates of these two markers in the testes between hybrids and parental races but, in females a reduced level of aromatase ARNm was observed in the ovaries of hybrids resulting from the cross (♀40Std×♂22Rb)

Ce travail rapporte l'étude d'une population d'hommes présentant une infertilité dans le contexte d'une demande d'AMP [aide médicale à la procréation]. L'étude moléculaire du bras long du chromosome Y, dans la région AZF, montre la fréquence non négligeable des microdélétions de cette région, justifiant la proposition de cette analyse dans tous les cas d'infertilité sévère inexpliquée. Les délétions complètes de la région AZFa sont identifiées avec une fréquence supérieure aux données de la littérature, associées à une azoospermie sécrétoire. L'existence de délétions partielles de la région AZFb et AZFc est montrée : les délétions partielles proximales AZFb sont rares et le phénotype associé mérite d'être exploré plus avant. Ce travail montre l'intérêt de la mise en œuvre de la PCR [polymerase chain reaction] quantitative en temps réel pour la détection des délétions et des duplications partielles de la région AZFc. Ces résultats sont comparés et discutés en fonction des données concernant la cartographie et la pathologie moléculaire de l'Y
The study of an infertile male population seeking for Assisted Reproductive Technology is reported. Molecular study of the long arm of the Y chromosome, in AZF region, shows a relatively high ftequency of microdeletions, reflecting and confirming the interest of such an analysis in severe unexplained male infertility. Complete AZFa deletions are detected with a higher ftequency compared to literature data, essentially in non-obstructive azoospermia. Moreover, partial AZFb and AZFc deletions are detected: partial ptoximal AZFb deletions are rare and the associated phenotype has to be delimited. This work shows the interest of real-time PCR [polymerase chain reaction] technique to detect partial deletions or duplications of the AZFc region. The results are discussed following available data regarding mapping and molecular pathology of the Y chromosome

La région AZFc du bras long du chromosome Y est une des régions les moins stables du génome humain. Elle est composée de multiples palindromes entraînant différents types de réarrangements, dont certains seraient associés à l'infertilité masculine. Nous avons recherché les microréarrangements d'AZFc dans 2 populations : 344 hommes infertiles et 136 hommes d'une population contrôle (119 normospermiques et 17 présentant une azoospermie de type obstructif). Nous avons observé une fréquence élevée de remaniements génomiques (8,7%), avec des fréquences de délétions et de duplications similaires dans les deux populations. Les remaniements ont ensuite été caractérisés au niveau des gènes DAZ et CDY1 et au niveau des haplogroupes du chromosome Y. Nous avons également étudié l'expression des gènes de la famille DAZ par RT-PCR [reverse transcription-polymerase chain reaction] quantitative « en temps réel» à partir de 30 biopsies testiculaires présentant des situations d'infertilité masculine bien identifiées. Différents profils d'expression ont été obtenus en fonction des gènes et des pathologies de la fertilité
The AZFc region on the Y chromosome long arm is one of the most unstable regions in the human genome. It consists almost entirely of very long repeats, is prone to rearrangement and some of them have been reported to be associated with male infertility. We screened two populations: 344 infertile patients and 136 controls for AZFc microrearrangements and we observed a high frequency of genomic rearrangements with similar frequency of deletions and duplications in both populations. Rearrangements were then characterized using DAZ and CDY 1 genes analyses and Y chromosome haplogroup determination. We also studied DAZ gene family expression by "real time" quantitative RT-PCR [reverse transcription-polymerase chain reaction] from 30 testicular biopsies presenting distinct histological pictures. Different expression profiles were obtained according to the gene tested and the fertility status

Pour mieux comprendre la signification des marqueurs d'apoptose dans les spermatozoïdes éjaculés humains, l'objectif de notre étude était de mesurer ces marqueurs dans les spermatozoïdes prélevés à différents niveaux du tractus génital masculin dans différentes situations physiopathologiques. Pour évaluer la qualité fonctionnelle de ces spermatozoïdes, des relations ont été recherchées entre l'expression de ces marqueurs et les résultats obtenus en assistance médicale à la procréation. Les marqueurs analysés sont des facteurs mis en jeu dans l'initiation et l'activation de l'apoptose (poly-caspases, caspase-3, -8 ou -9 activée(s)), et des signes précoces (externalisation de la phosphatidylsérine, PS) ou tardifs (fragmentation de l'ADN) de l'apoptose. Pour certains échantillons, une analyse ultrastructurale des spermatozoïdes a aussi été réalisée. La mesure de l'expression des caspases activées a fait l'objet d'une mise au point compte-tenu de l'hétérogénéité des populations spermatiques et de la faible quantité de spermatozoïdes disponibles. Finalement, nous avons retenu une mesure par double marquage associant un inhibiteur fluorescent vert des caspases activées et un colorant fluorescent rouge (Propidium Iodide) avec une détection soit en cytométrie en flux soit en microscopie à fluorescence selon la nature des spermatozoïdes analysés. Chez des patients présentant une agénésie bilatérale des canaux déférents, la proportion de spermatozoïdes vivants ou morts exprimant des caspases activées est plus élevée dans les spermatozoïdes testiculaires que dans les spermatozoïdes épididymaires suggérant une initiation du processus apoptique dans les testicules et une incapacité des spermatozoïdes épididymaires à initier l'apoptose. Dans ces conditions, en ICSI, le risque d'injecter un spermatozoïde apoptique dans un ovocyte est plus élevé avec les spermatozoïdes testiculaires et pourrait expliquer pour une part, les résultats de moins bonne qualité avec ces spermatozoïdes testiculaires qu'avec les spermatozoïdes épididymaires. Chez des patients infertiles, porteurs d'une translocation chromosomique réciproque ou Robertsonienne autosomique, il existe une expression plus importante des modifications ultrastructurales et des marqueurs biochimiques d'apoptose (caspases activées, fragmentation de l'ADN, externalisation de la PS) associée à des signes d'immaturité ultrastructurale, comparé aux spermatozoïdes d'hommes fertiles. Ces résultats pourraient expliquer que dans l'éjaculat de ces patients, il existe une prédominance de gamètes équilibrés sur le plan chromosomique. En effet, les gamètes présentant un déséquilibre auraient été éliminées préférentiellement par apoptose. En conclusion, les marqueurs d'apoptose exprimés par les spermatozoïdes éjaculés seraient le reflet d'une altération de la spermatogenèse avec une apoptose initiée et avortée dans le testicule associée à des anomalies de maturation et différentiation. La mesure des marqueurs d'apoptose dans les spermatozoïdes apporterait une aide dans la compréhension et la prise en charge de l'infertilité masculine, en particulier en assistance médicale à la procréation
In order to have a better insight into the implications of apoptosis markers in human ejaculated spermatozoa, the aim of our study was to measure these markers in the spermatozoa collected at different levels in the male genital tract in various physiopathological situations. To analyse the functional quality of these spermatozoa, the analysis of relationships between the expression of these markers and the results obtained after assisted reproductive technology was assessed. The markers analysed are factors that are involved in the initiation and activation of apoptosis (activated poly-caspases, caspases-3, -8, -9) and early (externalisation of phosphatidylsérine, PS), or late (DNA fragmentation) signs of apoptosis. Ultrastuctural analysis of the spermatozoa was also carried out for some samples. Measurement of the expression of activated caspases was subject of adjustment given the heterogeneity of the sperm samples and the low quantity of spermatozoa available. Finally, we decided on measurement using a double staining associating a green fluorescent inhibitor for the activated caspases and a red fluorescen vital staining (Propidium Iodide), with detection either by flow cytometry or by fluorescent microscopy depending on the type of spermatozoa to be analysed. In patients presenting congenital bilateral absence of vas deferens, the proportion of living or dead spermatozoa expressing activated caspases was higher in the testicular spermatozoa than in the epididymal spermatozoa suggesting that the apoptotic process started in the testicles and that epididymal spermatozoa were incapable of initiating apoptosis. Under these conditions, in case of ICSI, the risk of injecting an apoptotic spermatozoa into an ovocyte is higher with the testicular spermatozoa and could explain, in part, the different and inferior results obtained with these testicular spermatozoa, compared with epididymal spermatozoa. In the ejaculated spermatozoa of infertile reciprocal or Robertsonian autosomal translocation carriers, the expression of ultrastructural modifications and biochemical markers of apoptosis (activated caspases, DNA fragmentation, PS externalisation) associated with signs of ultrastructural immaturity was higher than in spermatozoa of fertile men. These results could explain that in the ejaculate of these patients, there is a predominance of chromosomal balanced spermatozoa. The gametes presenting an imbalance would have been preferentially eliminated by apoptosis. In conclusion, the apoptosis markers expressed by ejaculated spermatozoa would reflect the impairment of spermatogenesis with apoptosis initiated and aborted in the testicle associated with maturation and differentiation abnormalities. So measurement of apoptosis markers in spermatozoa could be helpful for the understanding of male infertility, particularly to predict the outcome of assisted reproductive technologies

L’infertilité touche au XXIème siècle un couple sur 5. La publication de cas familiaux d’infertilité suggère de possibles causes génétiques à l’infertilité. Le travail comporte deux parties :1. La globozoospermie. Une analyse de liaison par puces ADN 10K est réalisée dans une fratrie consanguine (3 frères globozoospermiques et 3 fertiles) et révèle une mutation de Spermatogenesis Associated 16 (SPATA16). Un trouble de l’épissage de l’exon 4 est suspecté et confirmé in vitro (SPATA16 humaine est exclusivement testiculaire). L’exon 4 exclu en cas de mutation contient un domaine tétratricopeptidique, domaine d’interaction protéine/protéine. Cette étude précise le diagnostic d’infertilité familiale et élargit les connaissances sur la biogenèse de l’acrosome. Enfin, spécifiquement testiculaire, SPATA16 est une cible intéressante de contraception masculine. 2. Recherche d’une cause génétique aux échecs inexpliqués d’implantation embryonnaire avec l’étude des mucines endométriales MUC1 et MUC4, potentiellement impliquées dans l’inhibition de l’implantation embryonnaire. La région centrale des mucines, codée par l’exon 2, présente un polymorphisme VNTR. Une petite taille VNTR est suspecte d’entraîner des échecs d’implantation embryonnaire humaine. MUC1 et MUC4 sont étudiées ici, du polymorphisme VNTR (par Southern blot) à l’expression endométriale (ARNm par RT-PCR et protéine par immunohistochimie) dans 3 populations : femmes fertiles spontanément, femmes ayant eu un enfant par FIV et femmes présentant plusieurs échecs inexpliqués d’implantation embryonnaire. Aucune différence significative de polymorphisme VNTR ou d’expression n’est retrouvée n’est entre les 3 groupes.

Récemment, il a été émis l'hypothèse que la mort cellulaire des spermatozoïdes par apoptose puisse représenter une cause d'infertilité masculine et par conséquent, que les événements apoptotiques présents dans les spermes éjaculés seraient potentiellement de nouveaux marqueurs diagnostiques de l'infertilité masculine utilisables pour orienter les choix des techniques d'assistance médicale à la procréation. L'objectif de ce travail a été de tester cette hypothèse sur des échantillons de spermes provenant de patients infertiles enrôlés dans des protocoles de fécondation in vitro (FIV). Pour se faire, dans un premier temps, l'analyse en cytométrie de flux des stigmates apoptotiques classiques de cellules somatiques (chute du potentiel de membrane mitochondriale (dpm), génération de substances réactives de l'oxygène, fragmentation de l'ADN et perte de viabilité) a été réalisée en parallèle de l'analyse conventionnelle du spermogramme. Nous avons ainsi observé que parmi ces marqueurs apoptotiques, la détermination du dpm représentait le test le plus sensible pour évaluer la qualité des spermes de patients infertiles puisque le pourcentage de spermatozoïdes à dpm élevé était fortement corrélé à la mobilité fléchante et aux taux de fécondation après FIV. Nous avons ensuite pu démontrer que la détection par cytométrie en flux des caspases actives -des enzymes impliquées dans l'apoptose des cellules somatiques- dans les spermes éjaculés est également le reflet de la qualité des spermatozoïdes. Pleinement convaincus de l'utilité de la détection des marqueurs apoptotiques dans les spermes de patients infertiles, notre attention s'est ensuite focalisée sur la mise en place de conditions optimales pour détecter de manière fiable les variations du dpm au laboratoire de biologie de la reproduction. Nos résultats indiquent que plusieurs fluorochromes sont utilisables de manière identique pour détecter avec précision les variations du dpm dans les spermatozoïdes en cytométrie de flux, leur choix dépendant de leurs caractéristiques spectrales afin de les utiliser pour des marquages multiparamétriques. Encouragés par ces résultats, nous avons souhaité caractériser les capacités fécondantes des spermatozoïdes en fonction de leur dpm. En utilisant le tri cellulaire par cytométrie, nous avons montré que les spermatozoïdes viables à dpm élevé représentaient une sous population de spermatozoïdes de haute qualité aux capacités élevées de fécondation, puisqu'ils avaient une morphologie normale, une mobilité importante et étaient capables de subir la réaction acrosomique induite par le calcium ionophore. Enfin, nous avons étudié l'influence du pourcentage de spermatozoïdes ayant des mitochondries fonctionnelles, sur le succès des FIV. Nous avons ainsi observé que lorsque l'éjaculat présente moins de 64 % des spermatozoïdes avec un dpm élevé, aucune grossesse n'est observée après FIV. En conclusion, notre travail démontre l'intérêt de développer l'évaluation des marqueurs apoptotiques au laboratoire de biologie de la reproduction et en particulier, la détermination du dpm dans les spermes éjaculés fournit une information précise capable d'identifier les patients à au risque d'échec de FIV.