Academic literature on the topic 'Technique immuno-enzymatique'

Un sondage sérologique sur la fasciolose a été réalisé en Guinée sur des sérums issus de la sérothèque du Laboratoire de diagnostic vétérinaire de la Direction nationale des services vétérinaires. Au total, 480 sérums provenant de bovins N’Dama ont été sélectionnés par randomisation et analysés par la technique de dosage immuno-enzymatique (Elisa). Les résultats obtenus ont mis en évidence la présence d’anticorps de douves chez 44,1 p. 100 des bovins, avec un taux de 35,5 p. 100 dans la région Ouest de la Guinée et de 55,5 p. 100 dans la région Est. Les bovins de tous les âges ont été séropositifs avec des taux variant de 27,8 à 44,5 p. 100.

L'aptitude de deux tests ELISA d'absorption immuno-enzymatique utilisant, l'un un anticorps monoclonal spécifique anti-Trypanosoma brucei obtenu sur souris, l'autre des anticorps polyclonaux spécifiques de Trypanosoma evansi produits sur lapin, a été évaluée en vue de la détection des antigènes circulants comme méthode de diagnostic des infections à Trypanosoma evansi dans le sérum des dromadaires. Quatre vingt onze sérums d'un troupeau camelin témoin au Kenya indemne de T. evansi ont tous donné des résultats négatifs au test ELISA des anticorps monoclonaux et seuls deux d'entre eux (2,2 p. 100) ont donné des résultats faussement positifs avec les anticorps polyclonaux. Lors d'analyses ultérieures des sérums d'animaux infectés, les anticorps monoclonaux ont décelé les antigènes dans 90 sérums sur 108 testés (83,3 p. 100). Cette proportion s'est révélée inférieure pour les polyclonaux qui ont détecté les antigènes dans 67 des 110 sérums testés soit 60,9 p. 100. Dans une enquête portant sur 316 sérums provenant des régions de Gao et Nara au Mali, une forte proportion a réagi positivement aux antigènes (43,5 p. 100 pour le monoclonal et 42,9 p. 100 pour le polyclonal). Les tests ELISA se sont montrés au moins six fois plus sensibles que la technique de centrifugation de l'hématocrite.

La prise en charge de nombreuses affections ne se conçoit pas sans possibilité de transfusion sanguine, or, cette thérapeutique n'est pas dénuée de risques notamment viraux. Au Mali, elle est largement utilisée, mais dans un contexte difficile, marqué par une insuffisance de ressources, c'est dans ce contexte que nous avons entrepris cette étude dont le but était de déterminer la prévalence des marqueurs infectieux VHB et VHC chez les donneurs de sang de Bamako.L'étude prospective transversale a été réalisée entre janvier et décembre 2017. Au total 48 508 dons de sang ont été testés à la recherche de l'antigène HBs et de l'anticorps anti VHC. La technique immuno-enzymatique ELISA a été utilisée avec des réactifs de quatrième génération. La fréquence du portage de l'antigène HBs a été de 10,72% et la séroprévalence du VHC a été de 1,53%. Les dons de sang de remplacement représentaient 73,69 % de l'ensemble des poches collectées avec les plus fortes prévalences des marqueurs sérologiques (VHB=12, 38% ; VHC=1,78%). Cette situation est comparable à beaucoup d'études réalisées au Mali et en Afrique subsaharienne. Il convient donc, d'intensifier les actions de promotion en faveur du don volontaire bénévole et régulier, en vue d'abandonner progressivement le don de remplacement. Ceci est attesté pour le Mali et est sans doute valable pour la plupart des pays de l'Afrique subsaharienne.

Background: Hepatitis B virus (HBV) infection is a global public health challenge with over 360 million people infected worldwide, and is one of the leading causes of death worldwide. The hepatitis B surface antigen (HBSAg) is the most important marker for HBV screening, and HBSAg rapid screening test methods are the most widely used compared with the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and nucleic acid testing methods. The objectives of this study are to evaluate the comparative efficacy of rapid test kits and ELISA for HBV screening among pregnant women on antenatal visits and to screen for other HBV serological markers among HBsAg positive patients. Methodology: This is a cross-sectional study of 172 pregnant women who were recruited consecutively on their first antenatal visit at the University College Hospital, Ibadan, Nigeria between November 2018 and February 2019. All participants were screened for HBsAg using both rapid immunochromatographic test (ICT) and ELISA techniques. HBsAg negative samples were further screened for anti-HBeAg/Ab, anti-HBcAg and anti-HBs by ELISA. Socio-demographic data of the participants were obtained using a semi-structured questionnaire, and data were analyzed using EPI INFO 7.2 statistical software. Results: The prevalence rate of HBsAg among pregnant women in this study was 10.5% (18/172). The sensitivity, specificity, accuracy, positive predictive value (PPV) and the negative predictive value (NPV) of the rapid ICT kit were 72.2%, 97.4%, 94.8%, 76.5% and 96.8% respectively. Level of education, previous history of sexually transmitted infections (STIs) and previous positive HBV results were significantly associated with HBsAg seropositivity. Majority of the pregnant women (66.9%) tested negative to all the serological markers. Conclusion: The low efficacy of rapid ICT kits compared to ELISA justifies the need to develop a safer antenatal screening strategy for HBV by combining the use of the less sensitive rapid screening techniques with the more sensitive ELISA method to limit vertical transmission of hepatitis B virus. Keywords: Hepatitis B virus; Rapid ICT kits; ELISA; pregnant women French title: Infection par le virus de l'hépatite B chez les femmes enceintes en consultation prénatale: tests rapides ou ELISA? Contexte: L'infection par le virus de l'hépatite B (VHB) est un défi de santé publique mondial avec plus de 360 million de personnes infectées dans le monde et est l'une des principales causes de décès dans le monde. L'antigène de surface de l'hépatite B (HBSAg) est le marqueur le plus important pour le dépistage du VHB, et les méthodes de test de dépistage rapide HBSAg sont les plus largement utilisées par rapport aux méthodes de test immuno-enzymatique (ELISA) et d'acide nucléique. Les objectifs de cette étude sont d'évaluer l'efficacité comparative des kits de tests rapides et de l'ELISA pour le dépistage du VHB chez les femmes enceintes lors de consultations prénatales et de dépister d'autres marqueurs sérologiques du VHB chez les patients AgHBs positifs. Méthodologie: Il s'agit d'une étude transversale de 172 femmes enceintes qui ont été recrutées consécutivement lors de leur première visite prénatale à l'Hôpital Universitaire, Ibadan, Ibadan, Nigéria entre novembre 2018 et février 2019. Tous les participants ont été dépistés pour l'AgHBs en utilisant les deux tests immuno-chromatographiques rapides (TIC) et techniques ELISA. Les échantillons négatifs à l'AgHBs ont en outre été criblés pour l'anti-HBeAg/Ab, l'anti-HBcAg et l'anti-HBs par ELISA. Les données sociodémographiques des participants ont été obtenues à l'aide d'un questionnaire semi-structuré et les données ont été analysées à l'aide du logiciel statistique EPI INFO 7.2. Résultats: Le taux de prévalence de l'HBSAg chez les femmes enceintes dans cette étude était de 10,5% (18/172). La sensibilité, la spécificité, la précision, la valeur prédictive positive (VPP) et la valeur prédictive négative (VPN) du kit ICT rapide étaient respectivement de 72,2%, 97,4%, 94,8%, 76,5% et 96,8%. Le niveau d'éducation, les antécédents d'infections sexuellement transmissibles (IST) et les résultats positifs antérieurs pour le VHB étaient significativement associés à la séropositivité de l'AgHBs. La majorité des femmes enceintes (66,9%) ont été testées négatives pour tous les marqueurs sérologiques. Conclusion: La faible efficacité des kits TIC rapides par rapport à l'ELISA justifie la nécessité de développer une stratégie de dépistage prénatal plus sûre du VHB en combinant l'utilisation des techniques de dépistage rapide moins sensibles avec la méthode ELISA plus sensible pour limiter la transmission verticale du virus de l'hépatite B. Mots clés: virus de l'hépatite B; Kits TIC rapides; ELISA; femmes enceintes

La presence croissante d'hydrocarbures aromatiques polycycliques (hap) dans differents compartiments de l'environnement et leur effet potentiel sur la sante des individus est un probleme de plus en plus mis en avant par les autorites. Des normes concernant les concentrations en hap a ne pas depasser, sur des sites pollues en cours de rehabilitation, ont ete mises en place. Il est donc indispensable d'etablir un suivi quantitatif de ces molecules lors d'une campagne de depollution par exemple. Des methodes classiques de dosage, telles que la chromatographie gazeuse (cg) ou liquide (clhp) existent, mais necessitent un equipement onereux, faisant appel a des techniciens experimentes. Pour ces raisons, il semblait interessant de mettre au point une methode de dosage alternative de ces molecules. Cette methode devait etre simple, rapide, sensible, peu chere et exportable sur le terrain. Les techniques de dosage immuno-enzymatique (elisa) repondent a l'ensemble de ces criteres. Notre travail a donc ete axe sur la mise au point d'un dosage immuno-enzymatique des hap. L'anthracene a ete choisi comme cible immunogenique. En tant qu'haptene, il a subi des transformations chimiques dans le but de developper un anticorps monoclonal specifique. Les reactions croisees de cet anticorps avec les autres hap ont permis de mettre en place une technique de dosage de ces molecules dans differentes matrices, et plus particulierement dans les sols. Cette technique est un test elisa par competition. Apres adaptation de la technique a un test de terrain, une correlation a ete etablie entre le dosage immuno-enzymatique et la clhp. Les resultats obtenus ont montre que le dosage mis en place est fiable. La methode immuno-enzymatique pour le dosage des hap est une methode alternative qui a pour but essentiel un screening rapide sur terrain.

La recherche de nouvelles réactions est un des enjeux fondamentaux de la chimie organique. En dehors de l’approche classique basée sur la conception d’une réaction en s’appuyant sur les propriétés chimiques des substrats, une nouvelle approche utilisant le criblage systématique de combinaisons aléatoires de fonctions réactives a été récemment adoptée par plusieurs groupes. Cette stratégie nécessite un outil analytique permettant de cribler un très grand nombre de réactions par jour et d’identifier les meilleures combinaisons conduisant à la formation de produits intéressants. Les travaux de thèse présentés dans ce mémoire s’inscrivent dans le contexte de l’utilisation des techniques de dosages immuno-enzymatiques (ELISA) comme outil de criblage pour la recherche de nouvelles réactions de couplage. Dans un premier temps le criblage de 2688 combinaisons de fonctions réactives et de catalyseurs choisies au hasard a été effectué. Ce criblage a permit de mettre en évidence deux nouveaux couplages en présence de sels de cuivre : une réaction entre les thiourées et les phénols conduisant à la formation des isourées et une réaction entre les N-hydroxythiourées et les alcynes conduisant à la formation des thiazole-2-imines. Dans un second temps le criblage de 2816 combinaisons de fonctions sélectionnées, cette fois-ci, de façon rationnelle a été effectué. Ce criblage a visé la découverte de nouvelles cycloadditions [3+2] répondant aux critères de la chimie « click ». Ainsi l’utilisation de dosage immuno-enzymatique a été étendue à l’optimisation des nouvelles réactions découvertes ainsi qu’à l’évaluation de leurs cinétique, chimiosélectivité et biocompatibilité. Près de 3000 tests complémentaires effectuées sur les « hits » issus du criblage primaire ont ainsi permit de mettre en évidence 4 nouvelles réactions de couplage dont une nouvelle réaction « click » : la cycloaddition sydnone-alcyne catalysée au cuivre (CuSAC). Dans la dernière partie de ce manuscrit les études plus détaillées sur la réaction CuSAC ont été effectuées, notamment l’identification de la structure du produit de couplage et l’étendue du champ d’application de cette réaction. Enfin, l’aspect « click » de la réaction CuSAC a été illustré par l’application de cette réaction au marquage d’une protéine
Discovery of new reactions is one of the fundamental goals in organic chemistry. In addition to the traditional approach to reaction discovery, consisting in designing a reaction on the basis of known chemical properties of reagents, new approaches based on the screening of random combinations of reactive functions and catalysts have been recently developed. The main prerequisite of this strategy is an analytical tool allowing screening of a big number of reactions per day and identifying combinations leading to the formation of unanticipated products. In the work presented herein a high-throughput immunoassay screening has been used for the discovery of new coupling reactions. In the first part of this work a screening of 2688 combinations of randomly chosen reactive functions and catalysts was carried out. This screening led to the discovery of two copper-promoted coupling reactions: a reaction between thioureas and phenols leading to the formation of isoureas through desulfurization; and a reaction between N-hydroxythioureas and alkynes leading to the formation of thiazole-2-imines. In the second part of the work a screening of 2816 combinations of rationally designed chemical functions and catalysts was carried out. This screening was focused on the discovery of catalytic [3+2] cycloadditions that comply with the standards of “click” chemistry. In this study, the use of immunoassay screening was extended to optimize new reactions and to evaluate their kinetics, chemoselectivity and biocompatibility. Therefore, around 3000 complementary tests were carried out on the hits, identified in the primary screening. This allowed the discovery of 3 new coupling reactions and one new “click” reaction: a copper-catalyzed sydnone-alkyne cycloaddition (CuSAC). The last part of the work was focused on detailed studies of the CuSAC reaction. Identification of the structure of the coupling product and substrate scope of this reaction was carried out. Finally, the applicability of the CuSAC reaction for bioconjugation was demonstrated by an example of protein labeling

La N-nitrosodiméthylamine (NDMA) est une nitrosamine probablement cancérogène pour l'homme selon le Centre International de la Recherche sur le Cancer (CIRC), largement répandue dans l'environnement humain (alimentation, fumée de tabac et certaines atmosphères industrielles). L'exposition à la NDMA produit des méthylations au niveau des bases nucléiques de l'ADN engendrant la formation d'adduits dont le plus abondant est la N7-méthylguanosine. Les adduits étant considérés comme un évènement précoce de la cancérogenèse, leur détection dans l'ADN humain pourrait permettre d'estimer l'exposition individuelle et les risques cancérogènes dus à la NDMA. Le premier objectif de ce doctorat est le développement d'une méthode de dosage immuno-enzymatique des adduits N7-méthylguanosine, marqueurs pertinents de l'exposition à la NDMA. Nos résultats ont validé cette technique de dosage et montrent qu'elle est assez sensible pour détecter les adduits N7-méthylguanosine présents dans l'ADN humain. Le second objectif de ce travail de recherche est l'application de la méthode immuno-enzymatique développée à l'identification de substances capables d'inhiber la formation d'adduits. Cette propriété a pu être évaluée par la quantification des adduits N7-méthylguanosine provenant de l'ADN d'hépatocytes de rats incubés avec la NDMA et le (ou les) composé(s) testé(s). Les résultats de notre étude montrent que certaines substances, seules ou associées, diminuent de façon significative la production des adduits N7-méthylguanosine et, qu'à ce titre, elles possèderaient une action chimiopréventive contre les cancers induits par la NDMA
N-nitrosodimethylamine (NDMA), a probable human carcinogen according to the International Agency for Research on Cancer (IARC), is widely present in food items, tobacco smoke and also in some workplace air. Exposure to NDMA may lead to the formation of methylated bases in DNA giving rise to DNA adducts of which the most formed is N7-methylguanosine. Since adducts are considered as an early event in carcinogenesis, their determination in human DNA could help to assess individual exposure and carcinogenic risk related to NDMA. The first aim of the present work was the development of an immunoenzymatic assay for measurement of N7-methylguanosine adducts, a relevant marker of exposure to NDMA. Our results validated this method for quantitative determination of these adducts and show that it is sensitive enough to detect them in human DNA samples. The second goal of this work is the use of the immunoenzymatic assay for identifying substances capable of inhibiting adducts formation. This propriety could be assessed by quantification of N7-methylguanosine DNA adducts formed in rat hepatocytes incubated with NDMA and the compound(s) tested for chemopreventive activity. Our results show that a significant inhibition of N7-methylguanosine adducts production is caused by some substances, either alone or associated. Therefore, such agents could offer a chemopreventive efficacy against NDMA-induced cancers

A l'heure actuelle, aucun consensus n'existe concernant plusieurs paramètres importants du dosage immuno-enzymatique des anticorps anti-cardiolipine. L'un des plus discuté, concerne le type de solution tampon à employer pour la dilution des sérums et la saturation des plaques pour résoudre le problème de la fixation non spécifique des immunoglobulines à la phase solide. Ce travail a permis de démontrer que seuls les anticorps anti-cardiolipine de classe IgG, détectés par une technique utilisant le SBA (Serum de Buf Adulte) 10% comme diluant des sérums et agent saturant de la phase solide, permet l'identification spécifique en phase chronique du lupus d'une population de patients à risque thrombotique. En effet, avec le SBA 10%, la fixation non spécifique des IgG polyclonales à la phase solide sensibilisée peut être évaluée sur un puit sans cardiolipine, alors que les IgM polyclonales n'induisent pas d'interaction non spécifique avec la phase solide. De ce fait, avec le SBA 10% la soustraction des valeurs enregistrées avec les puits témoins non sensibilisés, ne doit être systématiquement effectuée que pour le dosage des anticorps anti-cardiolipine d'isotype IgG. Dans les conditions techniques que nous préconisons, les anticorps anti-cardiolipine n'apparaissent pas spécifiquement associés à la thrombopénie du lupus et jouer un rôle déterminant dans la destruction cellulaire. Par contre nous avons identifié des anticorps reconnaissant une protéine plaquettaire ayant une masse moléculaire de 80 Kda et qui semblent associés aux thrombopénies et aux thromboses du lupus. Ces anticorps pourraient constituer avec les anticorps anti-cardiolipine et les anticoagulants du lupus, un autre marqueur associé aux thromboses du L. E. D. (Lupus Erythémateux Disséminé)

La maladie hémolytique du nouveau-né (MHNN) est provoquée par des igg anti-érythrocytaires d'origine maternelle. Ces igg sont le plus souvent diriges contre l'antigene d (rh1). Les MHNN causées par les igg anti-k (kel1) sont moins fréquentes mais souvent très sévères. Le taux des igg maternels est un paramètre important pour apprécier la gravite d'une MHNN. Une méthode Elisa originale a été mise au point (article 1). Elle permet le dosage en valeur absolue des igg et des sous-classes d'igg anti-d. Cette méthode a été appliquée à l'étude des sérums de femmes enceintes et des préparations d'anti-d (articles 1 et 2). La concentration moyenne des igg anti-d dans le sérum de 14 femmes enceintes est de 2,0 g/ml dont 61,8% sont des igg1 et 26,9% des igg3. Le pourcentage d'igg1 peut varier de 92,9% a 8,6%, et inversement celui des igg3 de 86,4% à 2,5%. La concentration moyenne des igg anti-d dans le sérum de 15 sujets volontairement immunises est de 19,8 g/ml dont 79,3% sont des igg1 et 18,1% des igg3. Le pourcentage des igg1 et des igg3 anti-d varie dans les mêmes proportions que dans les sérums de femmes enceintes. Dix préparations d'igg anti-d utilisées pour la prévention de la MHNN ont été analysées. La concentration moyenne de ces préparations est de 50,5 g/ml d'anti-d dont 12,7% sont des igg3. Enfin, nous avons calibré le contenu en igg anti-d de la préparation de référence internationale 68/419. Pour le dosage des igg anti-k nous avons mis au point une méthode différente (article 3). Elle a été appliquée à l'étude de 8 cas sévères de MHNN. La concentration des igg maternels est comprise entre 1 et 4 g/ml dont 98% sont des igg1. Nous avons pu montrer que de faibles concentrations d'ac anti-k peuvent être responsables de MHNN sévères. En conclusion, l'ensemble des travaux présentes dans cette thèse contribue à une meilleure évaluation quantitative des ac anti-d et anti-k responsables de LA MHNN.