Dissertations / Theses on the topic 'Toxémie'

Photorhabdus luminescens, bactérie proche d'Escherichia coli, est pathogène d'insecte et symbiote d'un nématode. Son génome est le génome bactérien contenant le plus grand nombre de gènes de toxines. De nombreuses ont été caractérisées, mais ni leur régulation, ni leur rôle durant l'infection ne sont connus. La protéine régulatrice HcaR module la virulence de P. Luminescens : la délétion du gène hcaR retarde cette virulence dans des chenilles Bombyx mon et Spodoptera littoralis, sans affecter la vitesse de croissance bactérienne dans l'insecte. En revanche, elle diminue la production de toxines. La bactériémie n'est donc pas la seule cause de la mort de l'insecte, la toxémie y jouant un rôle important. La délétion de hcaR diminue également la production de protéines du stress oxydant, telles que SodA. Or la délétion de sodA, ainsi qu'une exposition à du paraquat, provoque une diminution de la toxémie, mettant ainsi en évidence un lien entre toxémie et stress oxydant. Chez E. Coli, HcaR active la synthèse des enzymes Hca, impliquées dans le catabolisme de l'acide cinnamique (AC). P. Luminescens est l'une des rares bactéries capables de synthétiser l'AC. Elle l'utilise comme précurseur de l'antibiotique 3,5-dihydroxy-4-isopropylstilbene (ST). Les différentes étapes de formation du ST à partir de l'AC ne sont pas connues. Les enzymes Hca sont- elles impliquées dans ces étapes ? Nos résultats montrent que (1) les enzymes Hca sont impliquées dans l'utilisation de l'AC, mais (2) ne sont pas requises pour la synthèse de ST, et (3) que l'AC est majoritairement utilisé dans une autre voie que la synthèse de ST. Les enzymes Hca pourraient être impliquées dans cette voie inconnue
Photorhabdus luminescens, a bacterium close to Escherichia coli, is an insect pathogen and a nematode symbiont. Its genome is the bacterial genome containing the most toxin genes. Many toxins were characterized. However, neither their regulation, nor their role during infection is known. The regulatory protein HcaR modulates P. Luminescens virulence : disruption of the hcaR gene delays virulence in Bombyx mon and Spodoptera littoralis larvae, without affecting bacterial growth rate inside insect. By contrast, it decreases toxin production. Thus bacteriemia is not the only cause of insect death, and toxemia also plays an important role. Disruption of hcaR also decreases production of proteins of oxidative stress response, such as SodA. Disruption of sodA, and exposition to paraquat, decrease toxemia, thus showing a link between toxemia and oxidative stress. In E. Coli, HcaR activâtes synthesis of the Hca enzymes, involved in catabolism of cinnamic acid (ÇA). P. Luminescens is one of the two bacteria able to synthesize ÇA. ÇA is then used as a precursor of antibiotic 3,5-dihydroxy-4-isopropylstilbene (ST). Steps of formation of ST from ÇA are not known. Are the Hca enzymes involved in these steps ? Our results show that (1) the Hca enzymes are involved in ÇA utilisation in P. Luminescens, but (2) are not required for ST synthesis, and (3) ÇA is largely consumed via another pathway than the ST synthetic pathway. The Hca enzymes could be involved in this unknown pathway

Position du problème chez les femmes enceintes, la prééclampsie et le retard de croissance intra-utérin sont des causes majeures de morbidité et de mortalité maternelles et/ou fœtales. A condition d'utiliser une dose suffisante (supérieure à 75 mg) et de débuter le traitement avant 20 semaines, il a suggéré que l'aspirine à faible dose pourrait réduire l'incidence de la prééclampsie de plus de moitié. Matériel et méthode Dans le but de réduire l'incidence de la prééclampsie chez des femmes enceintes nullipares, nous avons mené une étude comprenant deux essais multicentriques randomisés et parallèles. Le premier a concerné 3294 patientes réparties par tirage au sort avant 21 semaines d'aménorrhée (SA) pour prendre quotidiennement 100 mg d'aspirine (n=1644) ou un placebo (n=1650) depuis l'inclusion jusqu'à 34 SA. L'autre essai a consisté à comparer un groupe de 1253 patientes tirées au sort pour la réalisation systématique d'un examen Doppler des artères utérines entre 22 et 24 SA- suivi de la prescription d'aspirine jusqu'à 36 SA en cas d'anomalie, avec un groupe de 617 patientes tirées au sort pour la prise d'un placebo dans le premier essai. Dans le but de mesurer l'observance des patientes du premier essai à partir d'un simple échantillon d'urines, la recherche urinaire de dérivés salicylés par chromatographie en phase gazeuse avec spectrométrie de masse (CPG/SM) a été évaluée au cours d'une étude hospitalière (27 patientes sous aspirine, 27 témoins). Résultats Aucune réduction de l'incidence de la prééclampsie n'a été mise en évidence dans ces deux essais. L'incidence des troubles hémorragiques mineurs a été augmentée dans le groupe des patientes recevant de l'aspirine. Dans le premier essai, les mesures de l'observance par l'interrogatoire, le décompte des sachets restant dans les boites ou la recherche d'acide salicylurique par CPG/SM concordaient vers des valeurs comprises entre 75 et 85 %, c'est à dire semblables aux essais antérieurs de bonne qualité concernant l'aspirine. L'étude des anomalies du spectre utérin a confirmé que la mesure S-OIS- utilisée pour dépister les nullipares à risque dans le second essai figurait parmi l'une des plus prédictives. Conclusions Même à la dose de 100 mg, la prescription systématique d'aspirine à faible dose ne permet pas de réduire la fréquence des prééclampsies chez les patientes nullipares. De plus, elle s'accompagne d'une augmentation des troubles hémorragiques qui doit être connue. Nous faisons l'hypothèse que la plupart des prééclampsies qui surviennent chez ces patientes ne relèvent pas d'un phénomène primitivement thrombotique.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
A toxémia de gestação (TG) é uma das doenças diagnosticada em cabras e ovelhas em final de gestação, sendo caracterizada por uma taxa de mortalidade elevada (53% no presente estudo). Os desequilíbrios metabólicos característicos da doença são evidenciados por alterações em parâmetros sanguíneos, assim, o principal objetivo deste estudo foi investigar quais parâmetros bioquímicos seriam os melhores para definir um prognóstico no momento da avaliação do animal, com especial foco no lactato e pH. A comparação dos parâmetros sanguíneos entre o grupo controlo e o grupo diagnosticado com a doença apresentou diferenças significativas entre os grupos, nomeadamente entre valores de BHBA, glucose e parâmetros demonstrativos de acidose metabólica, como o pH, a pCO2, o HCO3 e BE e, portanto, tidos como potenciais indicadores de diagnóstico. De realçar também que os valores pCO2 encontram-se abaixo do valor de referência em 92% dos casos do grupo de TG, e em 80% e 97% para o HCO3 e BE respetivamente. Simultaneamente foi também conduzida uma comparação dos valores sanguíneos entre o grupo de cabras sobreviventes e cabras mortas, sendo de realçar as diferenças estatisticamente significativas registadas entre grupos nos valores de pH, cloro, pCO2, HCO3, BE. Com principal destaque para o pH no qual foi encontrado um cut-off no valor de 7,12, a partir do qual a sensibilidade para a morte de um animal doente com TG foi de 100%. A diferença de valores de lactato sanguíneo entre cabras que sobreviveram e cabras que morreram não se revelou significativa. Em conclusão, se por um lado o lactato sanguíneo em caprinos adultos doentes com TG apresenta um valor prognóstico muito limitado, os resultados do estudo demonstraram que o lactato não se mostrou um bom indicador do evoluir da doença uma vez que a diferença entre animais que sobreviveram e animais que morreram não se revelou significativa. Por outro lado, o pH e os parâmetros representativos de acidose metabólica provaram ser uma mais valia no estabelecimento de um prognóstico.
ABSTRACT - Pregnancy toxemia (TG) is one of the diseases most commonly found in goats and sheep in late pregnancy and is associated with a high mortality rate (53% in our study). The metabolic imbalances characteristic of the disease are evidenced by changes in certain blood parameters, so the main objective of this study was to find which of these parameters would be better to define a prognosis, with special focus on lactate and pH. Blood parameters were compared between the control group and the group diagnosed with the disease. The most relevant results were BHBA, glucose and those demonstrating metabolic acidosis such as pH, pCO2, HCO3 and BE, all with statistic differences between groups and therefore good diagnostic indicators. It should also be noted that pCO2 values are below the reference value in 92% of cases in the TG group, and in 80% and 97% for HCO3 and BE respectively. At the same time, a comparison of blood values between the group of surviving goats and dead goats was also conducted, where the differences between groups in pH, chlorine, pCO2, HCO3, BE values were all statistically significant. Finally, a cut-off value of 7.12 for pH was found, from which the sensitivity to death of a sick animal with TG was 100%. In conclusion, the results of the study showed that lactate was not a good indicator of disease progression as the difference between surviving and dying animals was not significant. On the other hand, pH and representative parameters of metabolic acidosis proved to be an added advantage in establishing a prognosis of goats sick with TG.
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Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
De entre as principais doenças que afetam os pequenos ruminantes, a toxémia de gestação (TG) apresenta-se como a afeção metabólica mais frequente dos mesmos. Caracteriza-se por ter uma elevada mortalidade e, como tal, representa um grave problema económico nas explorações. O objetivo deste estudo foi determinar qual a taxa de sobrevivência dos cabritos, provenientes de cabras com TG, nascidos de cesariana, e compará-la com a taxa de sobrevivência dos cabritos nascidos por parto natural, sem auxílio humano, provenientes de cabras saudáveis. Outro objetivo deste trabalho foi determinar quais os parâmetros sanguíneos que estão associados a uma menor taxa de sobrevivência dos cabritos. Este estudo envolveu 8 cabras com TG (cujos cabritos nasceram de cesariana) e 9 cabras saudáveis (cujos cabritos nasceram de parto natural). Uma amostra de sangue foi recolhida da veia jugular até 15min, no máximo, após o nascimento, dos cabritos e foram determinados os seguintes parâmetros: Na+, K+, Cl-, HCO3 -, glucose, pH, excesso de base (BE), pCO2, anion gap (AG), ureia sanguínea (BUN, do inglês blood urea nitrogen), L-lactato, proteína total e hematócrito (Htc). Foi ainda registado o peso de cada cabrito. Nasceram 13 cabritos de parto natural, todos vivos ao sétimo dia, o que contrastou com os 21 cabritos nascidos de cesariana, dos quais 6 morreram, equivalendo a uma taxa de mortalidade de 28,5%. Foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre os valores dos 21 cabritos nascidos de cesariana e os dos 13 nascidos de parto natural nos seguintes parâmetros: peso, Na+, pH, HCO3 -, BE, BUN e L-lactato. Ocorreram também diferenças estatisticamente significativas nos 15 cabritos, nascidos de cesariana, que sobreviveram e os 6 cabritos que não sobreviveram nos valores de pH, BE, pCO2, BUN e L-lactato. Concluiu-se que a cetoacidose materna devida à TG teve um impacto negativo na taxa de sobrevivência dos cabritos, que apresentavam uma acidose metabólica e, nos casos fatais, com uma componente respiratória.
ABSTRACT - The impact of pregnancy toxemia in goats on the survival rate of newborn kids - Amongst the main diseases that affect small ruminants, pregnancy toxemia (PT) presents itself as the most frequent metabolic disease. It is characterized by a high mortality rate and therefore it represents a serious economic problem for the farms. The main goal of this study was to determine the survival rate of the offspring of goats with PT, born from a caesarean section and compare it to the survival rate of the offspring that was naturally delivered, from healthy goats. Another goal was to determine which blood parameters were associated to a lower survival rate of the kids. This study involved 8 goats with PT (whose kids were born from caesarean section) and 9 healthy goats (whose kids were delivered naturally). A blood sample was obtained from the kids’ jugular vein 15 minutes (maximal) after they were born and the following parameters were determined: Na+, K+, Cl-, HCO3 -, glucose, pH, base excess (BE), pCO2, anion gap (AG), blood urea nitrogen (BUN), L-lactate, total protein and packed cell volume (PCV). The weight of each kid was also determined and registered. There were 13 kids delivered naturally, all alive at the 7th day of life, differing from the 21 kids that were born from a caesarean section, of which 6 died, giving a final mortality rate of 28.5% in this last group. There were statistically significant differences between the weight and blood values of the 21 kids born from caesarean section and the 13 kids delivered naturally in the following parameters: Na+, pH, HCO3 -, BE, BUN and L-lactate. There were also statistically significant differences between the 15 kids born from caesarean section that survived and the ones also born from caesarean section who did not survive, in the following parameters: pH, BE, pCO2, BUN and L-lactate. In conclusion, maternal ketoacidosis due to PT had a negative impact on the survival rate of the offspring. In the most severe cases the new-born kids had both a metabolic and respiratory acidosis.
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Contexte. Au cours de la pré-éclampsie (PE), le défaut d'invasion trophoblastique et de remodelage des artères utérines spiralées génère une mauvaise adaptation de la circulation utéro-placentaire associée à des phénomènes d'hypoxie/réoxygénation (H/R). Il en résulte un stress oxydant et un déséquilibre des facteurs angiogéniques/antiangiogéniques (diminution du VEGF et PIGF vs augmentation du sFlt1) responsables d'une placentation anormale, une dysfonction endothéliale et une inflammation systémique. Le dysfonctionnement de l'oxyde nitrique synthase endothéliale (eNOS) et la diminution de la biodisponibilité du NO, jouent un rôle critique dans la pathophysiologie de la PE. eNOS est la principale source de production du NO dans le placenta, et elle joue un rôle primordial dans l'homéostasie et la régulation du tonus vasculaire. Des données récentes indiquent que eNOS peut être modifiée au cours du stress oxydant, en particulier par S-glutathionylation, ce qui entraine son découplage avec une génération d'ion superoxyde et une réduction du NO. Objectif. Le but de ce travail a été d'étudier les conséquences du stress oxydant sur la eNOS placentaire, en particulier sa glutathionylation, et les modifications par les produits d'oxydation lipidique (LPO), en relation avec sa dysfonction observée au cours de la PE. Matériels et Méthodes. La modification de eNOS a été étudiée dans des tissus placentaires obtenus à partir de césariennes réalisées chez des patientes pré-éclamptiques (n=13), vs grossesses normales (n=9). Des études complémentaires sont réalisées sur des trophoblastes humains HTR-8/SVneo exposés à un stress oxydant induit par H/R, ou par exposition à des LPO. Résultats : Les études en immunofluorescence et microscopie confocale montrent une importante glutathionylation de eNOS dans les placentas de PE, sensible aux agents réducteurs (dithiotréitol), sans différence d'expression de eNOS totale entre PE et grossesses normales. La S-glutathionylation est confirmée par immunoprécipitation et Western Blot de la eNOS placentaire. L'exposition des trophoblastes HTR8 à des conditions d'H/R, génère une S-glutathionylation d'eNOS associée à une production réduite de NO, et une génération d'ion superoxyde. Le NO est nécessaire pour le potentiel invasif des trophoblastes, comme démontré par l'absence de migration des HTR8 après inhibition spécifique de eNOS par small ARN interference (siRNA), et rétablie après addition d'un donneur de NO, le NOC-18. Les trophoblastes exposés aux variations H/R, montrent des capacités de migration diminuées témoignant d'un potentiel invasif réduit, et rétabli par NOC-18. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons recherché la présence de LPO dans les placentas de PE, et nous avons émis l'hypothèse que eNOS puisse être une cible de ces agents. Nous montrons que les LPO tels que le 4-hydroxynonenal (4-HNE), et le 4-oxo-2-nonenal (ONE), s'accumulent dans les placentas de PE, en particulier sur la eNOS, alors qu'aucune modification n'est observée dans les placentas de grossesse normale. Les études en protéomique sur eNOS recombinante, montrent que ONE et 4-HNE modifient plusieurs épitopes (ONE-Lys, HNE-His, HNE-Cys). L'addition de 4-HNE ou de ONE aux HTR8, inhibe la production de NO et la migration des cellules, restaurée par l'addition de NOC-18. Conclusions et perspectives : Ces résultats montrent que la eNOS placentaire est une cible importante du stress oxydant au cours de la PE, avec des modifications par S-glutathionylation ou par formation d'adduits avec ONE ou 4-HNE, associées à une diminution de la production de NO. Ces modifications pourraient contribuer au dysfonctionnement de la eNOS placentaire observé au cours de la PE. En perspective, nous pourrons étudier les conséquences du stress oxydant et des LPO, sur le vieillissement accéléré du placenta, qui contribueraient à la physiopathologie de la PE
Context: During pre-eclampsia (PE), the defective trophoblastic invasion and remodeling of the uterine spiral arteries leads to poor adaptation of utero-placental circulation associated with hypoxia/reoxygenation phenomena. This induces oxidative stress and an imbalance between angiogenic/antiangiogenic factors (decrease in VEGF and PIGF vs. increase in sFlt1) responsible for abnormal placentation, endothelial dysfunction and systemic inflammation. Endothelial nitric oxide synthase dysfunction (eNOS) and decreased NO bioavailability play a critical role in the pathophysiology of PE. eNOS is the main source of placental NO production, and plays a key role in homeostasis and vascular tone regulation. Recent evidence indicates that eNOS may undergo glutathionylation in the vascular wall, and subsequent uncoupling in a prooxidant environment, this resulting in an increased generation of superoxide anion and a decreased production of NO. Objective: The purpose of this work was to study the consequences of oxidative stress on placental eNOS, in particular its glutathionylation and modification by lipid oxidation products (LPO), in relation to its dysfunction observed during PE. Materials and Methods: The modification of eNOS was studied in placental tissues obtained from preeclampsia-affected (n=13), vs normal pregnant women (n=9) and in HTR-8/SVneo human trophoblasts exposed to hypoxia/reoxygenation (H/R), or by exposure to LPO. Results: Immunofluorescence and confocal microscopy revealed a high glutathionylation of eNOS in PE placentas, reversed by dithiotreitol, which was confirmed by immunoprecipitation and western-blot experiments, with no difference in total eNOS expression between PE and normal pregnancy. Exposure of HTR8 trophoblasts to H/R conditions generates S-glutathionylation of eNOS associated with reduced NO production, and increased superoxide anion generation. NO is necessary for the invasive potential of trophoblasts, since trophoblasts exposed to H/R, or silenced for eNOS by small interfering RNAs (siRNA), showed a decreased migration capacity, which was restored by the NO donor, NOC-18. In the second part of this work, we investigated the presence of LPO in PE placentas, and hypothesized that eNOS could be a target of these agents. We show that LPO such as 4-hydroxynenal (4-HNE), and 4-oxo-2-nonenal (ONE), accumulate in PE placentas, particularly on eNOS, while no changes are observed in normal pregnancy placentas. Proteomics studies on recombinant eNOS show that ONE and 4-HNE modify several epitopes (ONE-Lys, HNE-His, HNE-Cys). The addition of 4-HNE or ONE to HTR8 inhibits NO production and cell migration, restored by the addition of NOC-18. Conclusions and perspectives: These results show that placental eNOS is an important target for oxidative stress during PE, with modifications by S-glutathionylation or adduct formation with ONE or 4-HNE, associated with a decrease in NO production. These changes could contribute to the dysfunction of placental eNOS observed during the PE. In perspective, we plan to study the consequences of oxidative stress and LPO on accelerated placental aging, which may contribute to the pathophysiology of PE, and beyond, of pathological pregnancies

Dissertação de Mestrado em Engenharia Zootécnica-Produção Animal
A toxémia de gestação é a doença metabólica mais comum em pequenos ruminantes. A sua incidência tem vindo a aumentar dado o contínuo incremento dos níveis de produtividade destes animais, factor predisponente para esta doença. O objectivo deste trabalho foi a avaliação de estratégias de maneio para a sua prevenção numa exploração intensiva de cabras leiteiras. Para isso procedeu-se à análise dos registos da exploração nos últimos 3 anos e acompanhou-se o efectivo no período peri-parto. A evolução da condição corporal demonstrou que o maneio alimentar é de uma forma geral correcto. No que respeita à doença, pode afirmar-se que ainda persiste, embora com incidência reduzida (3,84%) mas superior nas cabras secas (85,71%). Tal deve-se provavelmente ao seu maneio alimentar, pois as suas necessidades nutricionais não são aparentemente satisfeitas pela dieta utilizada, e a um menor exercício físico. De referir ainda que a maior parte dos casos ocorreu em primíparas, as quais têm necessidades nutricionais diferentes e são penalizadas na ingestão de alimento pela dominância dos animais adultos. O aperfeiçoamento das dietas destes animais, a disponibilidade de mais espaço para estimular o exercício físico e a separação das primíparas constituem sugestões de melhoria deste problema.
Pregnancy toxemia is the most common metabolic disease in small ruminants. Its incidence has been increasing due to the continuing raise in productivity levels of these animals, predisposing factor for this disease. The aim of this study was to evaluate the management strategies for its prevention in an intensive dairy goats farm. Farm records over the past three years were analyzed and the herd was monitored in the peri-partum period. Body condition changes showed that dietary management is generally correct. Pregnancy toxaemia still persists, although with a reduced incidence (3.84%) and most in dry goats (85.71%). This can probably be justified by dietary management because their nutritional requirements are not apparently satisfied by diet and also by insufficient physical activity. Most of this cases occurred in primiparae, which have different nutritional requirements and are frequently penalized in food intake by dominant adult animals. Improving the diets of these animals, the availability of exercise area and the separation of primiparae are suggested to decrease the incidence of pregnancy toxaemia.

Le placenta humain est un organe indispensable au maintien de la grossesse et au développement fœtal. Son unité structurale et fonctionnelle est la villosité choriale, constituée principalement de cytotrophoblastes qui se différencient selon la voie villeuse endocrine ou extravilleuse invasive. Le développement intense du placenta et ses fonctions multiples requièrent des besoins en énergie importants. La régulation du métabolisme énergétique placentaire passe, en partie, par le contrôle de l’activité mitochondriale.La mitochondrie est l’organelle clé du métabolisme énergétique. Cependant, elle intervient dans de nombreuses autres fonctions cellulaires telles que l’apoptose et la biosynthèse des hormones stéroïdes. Des études récentes suggèrent que les mitochondries sont impliquées dans la différenciation cellulaire.Le récepteur apparenté aux récepteurs des oestrogènes-γ, (ERRγ), est un facteur de transcription qui joue un rôle crucial dans le contrôle du métabolisme énergétique. Des travaux préliminaires ont montré qu’ERR est fortement exprimé dans le placenta humain.Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à l’implication d’ERRγ dans le développement placentaire.Dans une première partie, nous avons caractérisé l’expression d’ERRγ dans les trophoblastes de placentas humains de 1er et de 3ème trimestre. Nous avons montré que l’expression d’ERRγ i) augmente au cours de la grossesse et ii) est plus importante dans les cytotrophoblastes villeux en comparaison aux cytotrophoblastes extra-villeux.Dans une seconde partie, nous avons montré que la différenciation des cytotrophoblastes villeux est associée à des modifications du métabolisme énergétique et du contenu mitochondrial. De plus, nous avons clairement démontré qu’ERRγ contrôle positivement la différenciation des trophoblastes villeux en modulant les fonctions mitochondriales.Enfin, nous avons montré qu’ERRγ est moins exprimé dans les placentas issus de retards de croissance intra-utérins en comparaison à des placentas normaux. De plus, la diminution d’ERRγ est associée à une baisse du contenu mitochondrial placentaire.L’ensemble de ce travail a permis de mettre en évidence le rôle clé d’ERRγ et des mitochondries dans le développement du placenta humain
Human placenta is a vital organ for pregnancy support and fetal development. The chorionic villi is the structural and functional unit of the placenta and is mainly constituted by trophoblastic cells. The trophoblast differentiate in villous endocrine and extra-villous invasive trophoblast. Placental development and its numerous functions require the availability of high energy. Placental energetic metabolism control is partially mediated by the regulation of mitochondrial activity.Mitochondria are key organelles of the energetic metabolism. However, mitochondria are involved in numerous other cellular functions such as apoptosis and steroid hormone biosynthesis. Moreover, recent studies suggest that mitochondria are involved in cell differentiation.Estrogen related receptor-γ (ERRγ) is a transcriptional factor implicated in the control of energetic metabolism. Preliminary studies showed that ERRγ is highly expressed in human placenta.In this work, we decided to study ERRγ implication in human placental development.In a first part, we characterized ERRγ expression in trophoblast from first and third trimester human placentas. We showed that ERRγ expression i) increased during pregnancy and ii) was higher in villous than extra-villous trophoblasts.In a second part, we showed that villous trophoblast differentiation was associated with modifications of energetic metabolism and mitochondrial content. Moreover, we clearly demonstrated that ERRγ positively controled villous differentiation by the modulation of mitochondrial functions.In a last part, we showed that ERRγ was less expressed in placentas from intra-uterine growth restriction as compared to non-pathological placentas. Moreover, this down-regulation was associated with a decrease of mitochondrial content.This work thus showed, for the first time, that ERRγ and mitochondria played a key role in placental development

La prééclampsie est une maladie humaine qui affecte 3-8 % des grossesses dans le monde, cliniquement définie par l’apparition de novo d’une hypertension et d’une protéinurie. La cause initiale de la maladie semble être liée à un défaut de vascularisation placentaire, ce qui entraine des cycles d'hypoxie – ré-oxygénation, une ischémie placentaire et la libération de débris placentaires dans la circulation maternelle. Ces derniers sont responsables d'une activation endothéliale généralisée, exacerbée par un état pro-coagulant et pro-inflammatoire. Pour mieux caractériser la réponse des cellules endothéliales aux facteurs plasmatiques présent dans la circulation maternelle des femmes prééclamptiques , nous avons choisi une approche à l’échelle du génome entier pour évaluer le profil d'expression génique (grâce à des puces d’expression) de la lignée de cellules endothéliales humaines de la veine ombilicale (HUVEC) cultivée avec du plasma prééclamptique, comparée au profil de cellules cultivées avec du plasma humain provenant de grossesses normales. Cette étude nous a permis d'identifier différents gènes modulés dont celui codant la protéine de dimérisation Jun 2 (JDP2, diminué près de trois fois) qui pourrait être responsable d'une partie des modifications transcriptomiques trouvées. De façon intéressante en effet, inhiber JDP2 par une approche de siRNA régule significativement à la baisse (entre autres) l'expression du VEGF, imitant ainsi les effets du plasma prééclamptique sur les HUVEC. Dans la dernière partie de mon projet, nous nous sommes particulièrement concentrés sur l'impact de l’inhibition de JDP2 sur des gènes induits par l'hypoxie. La tension partielle basse en oxygène modifie l'expression génique par l'intermédiaire de la stabilisation du facteur de transcription HIF- 1a. En fait, dans un état hypoxique, HIF- 1a échappe à la dégradation par le protéasome, il forme alors des hétérodimères avec ARNT (HIF- 1ß) et induit l'expression de gènes ayant un élément de réponse à l’hypoxie (HRE) dans leur promoteur. L'induction de l'expression du VEGF dans des conditions d’hypoxie constitue un des premiers modèles de l’effet de l’hypoxie sur l’expression génique et c’est également un des mieux caractérisés. Afin d'évaluer le rôle de JDP2 sur l'expression du VEGF, et plus généralement sur des gènes cible de l’hypoxie, nous avons cultivé des cellules HUVEC dans des conditions de normoxie et d’hypoxie. Les mêmes conditions ont été utilisées en association avec la transfection de siRNA contre JDP2. En conclusion, dans des conditions d’hypoxie, l’inhibition de JDP2 a un impact négatif sur l'expression du VEGF. De plus, JDP2 semble être un médiateur essentiel de l'expression génique induite par l'hypoxie, car il est nécessaire à une activité complète de promoteur contenant des HRE (démontré dans des essais luciférase)
Preeclamspia is a unique human disorder which affects 3-8% of pregnancies worldwide, clinically defined as the new onset of hypertension and proteinuria. The root cause of the disease seems to be linked to a defect of placental vascularization, which enhances cycles of hypoxia –reoxygenantion, placental ischemia and the release of placental debris into maternal circulation. The latter ones are responsible for a widespread endothelial activation, exacerbated pro-coagulable and pro-inflammatory state. To best characterize the response of endothelial cells to the plasma factors present in maternal circulation of preeclamptic women, we chose a genome –wide approach in order to evaluate the gene expression profile of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC) line cultivated with preeclamptic plasma, compared to cells cultivated with human plasma coming from normal pregnancies. This study allows us to identify the gene Jun Dimerization Protein2 (JDP2) which could be responsible for part of transcriptomic modifications. Interestingly inhibiting JDP2 by the use of siRNA significantly down- regulates VEGF expression, thus mimicking the effects of preeclamptic plasma on HUVEC. In the last part of my project we focus specifically on the impact of JDP2 knock down on hypoxia- induced genes. Low oxygen tension modifies gene expression via the stabilization of the transcription factor HIF-1a. In fact under hypoxic condition, HIF-1a escapes from proteasomal degradation, it forms heterodimers with ARNT (HIF- 1ß) and induces the expression of genes having a Hypoxia Responsive Element (HRE) in their promoter. One of the first and best characterized models of the effect of hypoxia on gene expression is the induction of VEGF expression under hypoxic condition. In order to evaluate the contribution of JDP2 to VEGF expression, and more generally to hypoxia target genes, we cultivate HUVEC in normoxic and hypoxic condition. The same conditions were used in association with transfection of siRNA against JDP2. In conclusion, under hypoxic condition, JDP2 down- regulation has a negative impact on VEGF expression. Moreover, JDP2 seems to be an essential mediator of hypoxia –induced gene expression, since it is necessary for a full HRE promoter activity (demonstrated by Luciferase assays)

Le développement placentaire est un processus finement contrôlé dans le temps et dans l'espace. Il est caractérisé par une invasion précoce et profonde, de l'endomètre et du premier tiers du myomètre, par les cytotrophoblastes extravilleux, cellules responsables du remodelage des artères spiralées utérines et de l'établissement de la circulation fœto-maternelle. Tout déficit dans ces processus physiologiques conduit à des complications de la grossesse, telles que la Pré-Eclampsie (PE), ou le Retard de Croissance Intra-Utérin (RCIU). Les travaux récents de l'équipe suggèrent l'implication d'un nouveau facteur angiogène, nommé EG-VEGF (Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor), dans le développement de la PE. L'objectif de ma thèse fut de mieux caractériser le rôle de l'EG-VEGF dans le développement placentaire normal au cours du premier trimestre de la grossesse. Pour cela trois axes ont été explorés : i) l'étude de la régulation de l'EG-VEGF par le récepteur nucléaire PPARγ (Peroxisome proliferator-activated receptor gamma), ii) la détermination de son rôle dans les différenciations hématopoïétique et angiogénique placentaires et iii) la contribution au développement d'un modèle murin de la PE. A l'issue de cette thèse, mes travaux ont montré que non seulement l'expression de l'EG-VEGF et de son récepteur PROKR2 étaient régulées positivement par PPARγ, mais aussi, que ce récepteur nucléaire est directement impliqué dans la mise en place de la vascularisation intra-placentaire, avec la participation des deux récepteurs PROKR1 et PROKR2, et que l'inhibition de l'invasion trophoblastique par PPARγ, seraient en partie contrôlée par l'EG-VEGF, via PROKR2. Mon travail a également mis en évidence que l'EG-VEGF serait impliqué dans le contrôle de la différenciation hématopoïétique et endothéliale placentaire. Il aurait un effet inhibiteur sur la différenciation des cellules hématopoïétiques et endothéliales, mais plus particulièrement sur les cellules endothéliales hémogéniques. Enfin, ma contribution au développement d'un modèle in vivo de la PE a permis de montrer qu'un maintien de la libération de l'EG-VEGF, au-delà de sa période normale de production, serait responsable du développement de la PE, suite à un défaut de l'invasion trophoblastique, entraînant la libération par le placenta, de sFlt-1 et de sEndogline. Ces derniers vont induire un dysfonctionnement rénal et une hypertension artérielle. L'ensemble de ces trois projets a contribué à l'avancée de nos connaissances actuelles sur les mécanismes physiologiques du développement placentaire, ainsi que sur un facteur clé de la placentation, l'EG-VEGF, et a également permis de mieux appréhender les causes de l'établissement des pathologies de la grossesse, comme la PE et le RCIU
Placental development is a process that is finely controlled. It is characterized by early and deep invasion of the endometrium and the first third of the myometrium by extravillous cytotrophoblasts that participate to the remodeling of the spiral arteries and to the establishment of the feto-maternal circulation. Poor remodeling of spiral arteries by trophoblastic cells, leads to the development pregnancy pathologies such as, Preeclampsia (PE) and Intra-Uterine Growth Restriction (IUGR). During the last decade, our team has gathered interesting data that propose the new factor, EG-VEGF (Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor) as a potential marker for PE. My thesis project aimed at further characterizing the role of EG-VEGF during pregnancy. Three main axis were addressed, i) The study of the regulation of EG-VEGF by PPARγ (Peroxisome proliferator-activated receptor gamma), ii) The study of the role in hematopoietic and angiogenic placental cells differentiations and iii) The development of an in vivo model of PE. My thesis showed that 1) EG-VEGF and PROKR2 expression are upregulated by PPARγ, 2) that the regulation of intra-placental vascularization and trophoblastic invasion by PPARγ is mediated by EG-VEGF through PROKR1 and PROKR2 and through PROKR2 receptors, respectively, 3) that EG-VEGF controls hematopoietic and endothelial cell differentiation and 4) that maintenance of EG-VEGF production beyond its normal period of secretion during pregnancy leads to the development of PE in a gravid mouse model. Altogether, these projects contributed to have a better knowledge about physiological mechanisms of placental development and about a key factor of placentation EG-VEGF. Moreover they improved our understanding of the origins of pregnancy diseases establishment such as PE and RCIU

La prééclampsie est un syndrome pathologique défini chez la femme par l’apparition de novo d’une hypertension artérielle (pression artérielle systolique supérieure à 140 mmHg) et d’une protéinurie (supérieure à 300 mg par jour) au cours de la grossesse. Il s’agit de la deuxième cause de mortalité maternelle en France. Les mécanismes physiopathologiques de ce syndrome, encore mal connus, semblent faire intervenir une dysfonction placentaire à l’origine d’une activation systémique de l’endothélium maternel. Pour améliorer la prise en charge de la prééclampsie et prévenir les complications à court et à long terme, la clé serait d’associer la mise en place d’un dépistage précoce à de nouveaux traitements capables de renverser l’aggravation des symptômes qui, semblerait-il, est inévitable. Notre équipe travaille sur le gène STOX1, exprimé dans les cellules placentaires. Ce gène coderait un facteur de transcription dont jusqu’à présent aucun élément de réponse sur l’ADN n’a été trouvé. Des variants de ce gène ont été identifiés en 2005 chez des patientes atteintes de prééclampsie, et des études cellulaires ont montré que ce facteur est associé au syndrome prééclamptique. Deux modèles d’étude établis et caractérisés au laboratoire ont confirmé l’implication de ce gène dans le syndrome. Notre modèle cellulaire est une lignée de choriocarcinomes surexprimant STOX1. L’équipe a montré en 2008 que les altérations transcriptomiques dues à la surexpression de STOX1 dans cette lignée cellulaire sont corrélées à celles observées dans les placentas de patientes prééclamptiques. Notre modèle murin a été obtenu par transgénèse additive du gène STOX1 humain. Bien que la prééclampsie ne se développe pas spontanément chez les rongeurs, il a été montré en 2013 que des souris femelles sauvages croisées avec des mâles transgéniques développent un phénotype prééclamptique sévère comprenant une hypertension et une protéinurie. Dans le but de mieux comprendre le lien entre la surexpression de STOX1 et l’apparition d’une prééclampsie, nous avons exploré la production in vitro et in vivo de radicaux libres de l’oxygène et de l’azote, molécules constituant de bons candidats pour jouer un rôle pivot dans l’origine des symptômes. Nous avons pu montrer que STOX1 était capable, in vitro et in vivo, de moduler le stress oxydatif, la fonction mitochondriale et la balance des radicaux libres dérivés de l’oxygène et de l’azote. De plus, nous avons étudié dans le modèle murin l’effet de la surexpression de STOX1 dans le placenta sur les organes du système cardiovasculaires. Nous avons pu montrer que des souris femelles sauvages portant des foetus transgéniques subissaient une dysfonction endothéliale associée à une hypertrophie cardiaque pathologique. Enfin, des études en cours de biologie moléculaire in vitro et in silico tentent d’explorer plus finement les fonctions moléculaires et cellulaires de la protéine STOX1, afin de résoudre son rôle dans la prééclampsie, ou dans d’autres domaines de biologie cellulaire. Une partie de ces travaux a notamment permis d’identifier une séquence d’ADN physiquement reconnue par la protéine STOX1. Le travail réalisé au cours de cette thèse permettra d’une part de mieux comprendre la fonction d’une protéine impliquée dans des maladies complexes comme la prééclampsie et la maladie d’Alzheimer, et d’autre part d’aborder de façon plus ciblée la recherche de nouveaux marqueurs ou de nouvelles thérapeutiques pour la prééclampsie grâce au modèle murin
Preeclampsia is a disease syndrome defined in women by the apparition of a de novo hypertension (systolic blood pressure above 140 mmHg) and proteinuria (greater than 300 mg per day) during pregnancy. This is the second cause of maternal mortality in France. The pathophysiology of this syndrome, still poorly understood, seem to involve placental dysfunction and a systemic activation of the maternal endothelium. To improve the management of preeclampsia and prevent short and long term complications, the key would be to combine the development of early screening and new treatments to reverse the worsening of symptoms which seem inevitable. Our team works on STOX1 gene, expressed in placental cells. This gene would encode a transcription factor for which no responsive element on the DNA has been found so far. Variants of this gene have been identified in 2005 among patients with preeclampsia, and cellular studies have shown that this factor is associated with preeclampsia syndrome. Two study models, established and characterized in the laboratory, confirmed the involvement of this gene in the syndrome. Our cell model is a line of choriocarcinoma overexpressing STOX1. The team showed in 2008 that the transcriptome alterations by STOX1 overexpression in this cell line are correlated with those observed in placentas of preeclamptic patients. Our murine model was obtained by additive transgenesis of the human STOX1 gene. Although preeclampsia does not develop spontaneously in rodents, it was shown in 2013 that wild type female mice mated with transgenic males develop a severe preeclamptic phenotype including hypertension and proteinuria. In order to better understand the link between the overexpression of STOX1 and the onset of preeclampsia, we explored the in vitro and in vivo production of oxygen- and nitrogen-derived free radicals, which are good candidates to play a pivotal role in causing symptoms. We showed that, in vitro and in vivo, STOX1 was able to modulate oxidative stress, mitochondrial function and free radicals balance. In addition, we studied in the mouse model the effect of an overexpression of STOX1 in the placenta on the cardiovascular system. We showed that wild female mice with transgenic fetus underwent an endothelial dysfunction associated with a pathological cardiac hypertrophy. Finally, molecular in vitro and in silico ongoing studies try to explore more precisely the molecular and cellular functions of STOX1 protein to resolve its role in preeclampsia, or in other areas of cell biology. Part of this work enabled the identification of a DNA sequence that is physically recognized by STOX1 protein. The work done during this thesis will help better understand the function of a protein involved in complex diseases such as preeclampsia and Alzheimer's disease. It will also help search for new markers or new treatments for preeclampsia thanks to the mouse model

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
A toxémia de gestação é uma doença muito frequente que afeta os pequenos ruminantes no último mês da gestação. As cabras com condição corporal elevada e gestação múltipla estão predispostas a desenvolver esta doença, que está associada a elevada mortalidade e caracteriza-se pela presença de hipoglicémia, hipercetonémia e acidose metabólica. Neste estudo, avaliaram-se os sinais clínicos e parâmetros bioquímicos sanguíneos de 20 cabras diagnosticadas com toxémia de gestação, com o objetivo de determinar a associação entre as alterações clínicas e bioquímicas encontradas e a evolução e prognóstico da doença. Os principais sinais clínicos observados ao exame físico foram taquipneia, membros edemaciados, atonia ruminal, decúbito e prostração. Com menor frequência observaram-se também animais com orelhas caídas e sinais nervosos. Os resultados obtidos, por comparação das cabras que sobreviveram (grupo GV, n=8) com as cabras que vieram a morrer (GM, n=12), indicaram que os valores de glucose não foram significativamente diferentes entre os dois grupos, enquanto que os valores de BHB foram significativamente maiores no grupo GM. Os valores dos parâmetros ácido-base (pH, HCO3 -, excesso de base e pCO2) apresentaram-se significativamente diminuídos entre os animais que vieram a morrer por toxémia de gestação, bem como os valores sanguíneos de potássio. O único sinal clínico associado a mau prognóstico neste estudo foi a dificuldade com que os animais se levantaram da posição de decúbito. Embora baseados numa amostra pequena, estes resultados indicam a presença de uma marcada acidose metabólica e hipocalémia nos animais que vieram a morrer, sugerindo que valores sanguíneos de pH e potássio diminuídos, comparativamente com animais saudáveis, podem ser indicadores de pior prognóstico na toxémia de gestação.
ABSTRACT - Pregnancy toxaemia is a very common disease affecting small ruminants in the last month of gestation. Goats with high body condition score and multiple pregnancy are predisposed to develop this disease, which is associated with high mortality and is characterized by the presence of hypoglycemia, hyperketonemia, and metabolic acidosis. In this study, we evaluated the clinical signs and blood biochemical parameters of 20 goats diagnosed with pregnancy toxaemia, in order to determine the association between clinical and biochemical alterations found with the evolution and prognosis of the disease. The main clinical signs observed on physical examination were tachypnea, swollen limbs, ruminal atony, recumbency and prostration. Less frequently, it was also observed animals with drooping ears and neurological signs. The results obtained by comparison of the goats who survived (GV group, n=8) and the goats who came to die (GM, n=12) showed that glucose values were not significantly different between the two groups, whereas Beta-hydroxybutyrate values were significantly higher in the GM group. The values of acid-base parameters (pH, HCO3-, base excess and pCO2) were significantly reduced among the animals that came to die with pregnancy toxaemia, as well as blood levels of potassium. The only clinical sign associated with poor prognosis in this study was the difficulty with which the animals rose from the recumbency. Although based on a small population sample, these results indicate the presence of a marked metabolic acidosis and hypokalemia in the animals who died, suggesting that decreased values of blood pH and potassium, compared to heathy animals, can be indicators of a poor prognosis in pregnancy toxaemia.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
A toxémia de gestação é uma doença metabólica que afeta pequenos ruminantes com mais frequência no último mês de gestação. Esta doença ocorre devido ao desequilíbrio entre o aumento das necessidades energéticas fetais e a capacidade materna de produzir glucose, havendo formação de corpos cetónicos. Devido à deteção tardia dos sinais clínicos nos animais doentes e à elevada taxa de mortalidade, superior a 80%, é importante que os animais com maior risco de desenvolverem toxémia de gestação sejam identificados precocemente. Este estudo avaliou a glicémia e BHB sanguíneo e, ainda a condição corporal de 59 cabras de aptidão leiteira, provenientes de uma exploração, em diversos momentos de gestação. Assim, tentou-se determinar se algum dos parâmetros avaliados poderia ser utilizado como indicador precoce. Dos 59 animais do estudo, apenas três manifestaram toxémia de gestação. Embora não conclusivo, a variável BHB mostrou diferenças significativas (p <0,05) entre os grupos com e sem doença, quando avaliados na primeira metade da gestação. Quando testada a sensibilidade e especificidade do dia de análise, registou-se uma tendência estatística (p= 0,061) que sugere poder ser usado como indicador precoce, sendo provavelmente necessário uma maior amostra para obter conclusões definitivas. Apesar do reduzido número de animais doentes neste estudo, os parâmetros de glicémia e condição corporal, embora sem diferenças significativas, não devem ser excluídos como indicadores precoces de toxémia de gestação, sendo necessários estudos complementares.
ABSTRACT - Use of body condition score and blood glucose and β-hydroxybutyrate as early indicators of pregnancy toxaemia in dairy goats - Pregnancy toxemia is a metabolic disease in small ruminants that tends to occur in the last month of gestation. It occurs when fetal energetic demands overwhelm the capacity of the doe to produce glucose, resulting in ketone body formation. In most of the cases, the clinical signs are only detected in the final stages of the disease with a very high mortality rate. Therefore, it’s important to identify the animals with higher risk of developing pregnancy toxemia to avoid the occurrence of the disease and the economic lost associated with it. The present study was performed in 59 dairy goats in a dairy farm. We analyzed blood glucose and BHB and body condition at different times during gestation, to define which one is better to early identify the animals with higher risk of pregnancy toxemia. Of the 59 does analyzed, only three showed clinical signs of the disease. Although not conclusive, the variable BHB showed significant differences (p< 0.05) between the groups with and without toxemia, when analyzed in the first half of gestation. When the moment of evaluation was tested as a possible early indicator, there was only a tendency in the results (p= 0.061), suggesting that the results are promising, although a larger number of animals is needed to reach reliable conclusions. Probably due to the low number of sick animals, blood glucose and body condition did not show significant differences between groups. However, they should not be excluded as early indicators, requiring further studies.

Les maladies rénales chroniques (MRC) et l'insuffisance rénale aiguë (IRA) sont des problèmes essentiels de santé publique en raison de l'augmentation continue de leur fréquence et du manque de solutions thérapeutiques contre ces maladies. L'acide lysophosphatidique (LPA) est un lysophospholipide bioactif qui induit un large éventail de réponses cellulaires par le biais de récepteurs membranaires spécifiques (LPA1 à LPA6) couplés aux protéines G. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés aux effets biologiques et au métabolisme du LPA dans les MRC et l'IRA. Des travaux antérieurs de l'équipe avaient montré que le LPA contribuait, via le récepteur LPA1, au développement de la fibrose tubulointerstitio (TIF) dans un modèle de MRC chez la souris : l'obstruction urétérale. Dans la première partie de la thèse nous avons étudié l'implication du LPA dans un modèle plus avancé de MRC: la néphrectomie subtotale (SNX) chez la souris. Nos travaux ont montré que 5 mois après chirurgie les souris (SNX) développaient une albuminurie massive associée à une TIF sévère et à une hypertrophie glomérulaire. Chez ces souris la concentration en LPA mesurée par chromatographie liquide en spectrométrie de masse en tandem était augmentée dans l'urine et étroitement corrélée à l'albuminurie et à la TIF. En parallèle, nous avons observé une diminution de l'expression rénale des Lipid-Phosphate Phosphatases (LPP 1, 2 et 3) responsables de l'inactivation du LPA. Nous avons également observé que l'expression rénale des récepteurs LPA1, 2, 3 et 4 était diminuée chez les souris Snx. Nous avons conclu que les effets délétères éventuels du LPA dans le développement de la MRC chez les souris SNX était vraisemblablement lié à une augmentation de sa production rénale plutôt qu'à une sensibilité accrue du rein au LPA. Des travaux antérieurs avaient montré que l'injection de LPA protégeait contre l'apparition des lésions rénales induites par ischémie/reperfusion chez la souris. Une autre étude avait montré que le LPA permettait d'atténuer l'inflammation systémique et les dommages aux organes induits par un choc septique. Dans la deuxième partie de la thèse, nous avons étudié l'influence du LPA sur l'IRA induite par une endotoxémie au LPS (lipopolysaccharide) chez la souris. Nous avons observé que l'injection de LPA permettait d'atténuer l'élévation d'urée et de créatinine plasmatiques, ainsi que l'augmentation d'expression rénale de cytokines inflammatoires (IL-6, TNFa, MCP-1) induites par le LPS. Le LPA a également empêché la baisse d'expression rénale du facteur PGC1a ainsi que les altérations ultra-structurales des mitochondries rénales induites par le LPS. In vitro, le LPA atténue l'augmentation d'expression des cytokines pro-inflammatoires (TNFa et MCP-1) induite par le LPS dans les macrophages RAW264. Enfin, nos travaux ont montré que l'endotoxémie au LPS chez la souris entrainait une réduction de la concentration urinaire de LPA associée à une réduction des enzymes anaboliques LPA (autotaxine et acylglycérol kinase) et une élévation de l'expression de de LPP2, dans le cortex rénal. Nous en avons conclu que l'IRA associée à l'endotoxémie pourrait être liée, au moins en partie, à une réduction de la production rénale de LPA et, par voix de conséquence, de ses effets anti-inflammatoires protecteurs de la fonction rénale. En conclusion, notre travail montre que les variations de production rénale de LPA pourraient jouer un rôle important dans le développement des maladies rénales. L'augmentation du LPA dans les MRC favoriserait ses effets délétères (fibrose, inflammation). Sa réduction dans l'IRA réduirait ses effets anti-inflammatoires. Cibler le catabolisme LPA pourrait donc être une approche intéressante dans le traitement des maladies rénales
Both chronic kidney diseases (CKD) with consecutive development of end stage renal disease (ESRD) and acute kidney injury (AKI) represent worrying problems for healthcare system due to its increased frequency and the lack of efficient treatments. Lysophosphatidic acid (LPA) is a bioactive lysophospholipid that elicits a wide range of cell responses (proliferation, migration, transformation, contraction etc.) through the activation of specific G protein-coupled receptors (LPA1 to LPA6). In this work we were interested in involvement of the LPA and changes in its metabolism in CKD and AKI. Previous works showed that LPA exerts pro-fibrotic activity and contributes to development of tubulointerstitioal fibrosis (TIF) after ureteral obstruction through activation of LPA1 receptors. In the first part of the thesis we were interested whether LPA signalization is involved in more advanced model of the disease. We found that 5 months after subtotal nephrectomy (SNX) mice develop massive albuminuria, TIF and glomerular hypertrophy compared to control animals. LPA concentration measured by liquid chromatography tandem mass spectrometry was increased in urine but not in plasma of animals. That increase in LPA significantly correlated with albuminuria and TIF. In addition we found a decreased renal expression of lipid phosphate phosphatases (LPP1, 2 and 3) that are responsible for the degradation of LPA by dephosphorylation. Moreover, the expression of LPA1-LPA4 receptors is down-regulated, whereas LPA5 and LPA6 are unchanged. We concluded here that the possible deleterious effect of LPA in the development of CKD in SNX mice was likely related to its increased production rather than an increased sensitivity of the kidney to LPA. Since LPA was reported previously to protect kidney damage in the course of ischemia/reperfusion injury, and that it was able to mitigate the systemic inflammation and organ damage in sepsis, we were interested in second part of the thesis to determine whether exogenous and/or endogenous LPA might protect against sepsis-associated AKI. C57BL/6 mice were treated with exogenous LPA 18:1 1 hour before being injected with the lipopolysaccharide (LPS) and AKI was analyzed after 24h. LPA pre-treatment significantly mitigated the LPS-induced elevation of plasma urea and creatinine, lessened the up-regulation of inflammatory cytokines (IL-6, TNFa, MCP-1) and completely prevented the down-regulation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha (PGC1a) in kidney. LPA also prevented LPS-mediated alterations of renal mitochondria ultrastructure. In vitro, pre-treatment with LPA 18:1 (10 µM) significantly attenuated LPS-induced up-regulation of the pro-inflammatory cytokines (TNFa and MCP-1) in RAW264 macrophages. In addition we found that LPS led to the reduction of urinary LPA concentration that was associated with a reduction in LPA anabolic enzymes (autotaxin and acylglycerol kinase), and an elevation in LPA catabolic enzyme (lipid phosphate phosphatase 2) expression in kidney cortex. We concluded hereby that exogenous LPA exerts protection against endotoxemia-induced kidney injury. Moreover, the observation that LPS reduces the renal production of LPA suggests that sepsis-associated AKI could be mediated, at least in part, by alleviation of the protective action of endogenous LPA. In general our work shows that LPA local metabolism is altered in both forms of kidney diseases. In course of sepsis-induced AKI LPS leads to increased local catabolism of LPA leading to low availability of the phospholipid and alleviating its protective effect whereas in advanced CKD the local catabolism of the phospholipid is decreased with subsequent increase of urine LPA that favors development of the disease. Targeting LPA catabolism can be an interesting approach in treatment of kidney diseases

L'effet des facteurs environnementaux physiques – conditions météorologiques sur la survenue d'une pré-éclampsie est une préoccupation relativement récente, mais diversement évalués par des études de méthodologie très hétérogène qui ne peuvent ainsi faire le tri des hypothèses physio-pathologiques. Comme le rappelait un rapport d'experts, les difficultés méthodologiques sont nombreuses, parmi lesquelles: la mesure de l’exposition et la détermination des fenêtres d'exposition, l’emploi d’une modélisation statistique adéquate, la prise en compte de l’ensemble des facteurs de confusion (facteurs de risque connus de morbidité chez les femmes enceintes ou prise en compte de la saisonnalité des naissances). Par ailleurs, l'intrication des facteurs physiques avec les facteurs sociaux, individuels ou de contexte vient compliquer l'interprétation. Aucune des études publiées jusqu'ici dans le domaine de la pré-éclampsie ne prend simultanément en compte ces 3 catégories de facteurs. Enfin, il n'existe guère d'étude française répondant à l'ensemble de ces questions alors que les modalités de suivi de la grossesse jouent un rôle important et dépendent étroitement de l'organisation socio-sanitaire du pays. Avec l’expérience d'un an dans la préparation du projet, nous proposons d'évaluer ces effets conjoints en étudiant un registre avec plus de 100 000 femmes enceintes /an suivies dans le réseau de maternités du département des Yvelines qui rassemble des territoires urbains et ruraux
During two last decades, the effect of meteorological factors on human health, especially pregnancy, has become a growing public health concern. However, the influence of meteorological and environmental factors on the occurrence of pre-eclampsia still has to be precisely determined. The main objective of this work is to determine the influence of meteorological conditions at various time during pregnancy (date of conception, near date of conception) on the occurrence of pre-eclampsia in a large French registry of pregnant women and to determine at which moment are the women more susceptible

Les pathologies vasculaires placentaires (PVP), prééclampsie (PE) et retard de croissance intra-utérin (RCIU), sont une des causes majeures de morbidité et mortalité maternelles et périnatales dans les pays développés. Un défaut de vascularisation utéro-placentaire est présent dans ces deux pathologies. Le Doppler énergie 3D (3DPD) est un outil facile à utiliser en clinique, les indices quantitatifs calculés à partir de volume utéro-placentaire semblent prometteurs pour dépistage de la PE. Le but principal de cette thèse est d’évaluer cette technique sur le plan de sa valeur discriminative entre situation physiologique et pathologique, ainsi que sur le plan de ses limites techniques en clinique et sur modèles animaux. La performance des indices 3DPD au 1er trimestre pour dépister la PE et/ou RCIU a été étudiée dans une étude prospective multicentrique. Une évaluation de la corrélation entre les indices 3DPD et les indices morphométrique a été ensuite réalisée chez les femmes enceintes à la fin de grossesse. Une corrélation entre le phénotype des villosités placentaire et la qualité de la perfusion placentaire a été mise en évidence. À la fin, l’intérêt de la technique a été démontré dans un modèle de RCIU chez brebis gestante
Placental vascular pathologies (PVP), preeclampsia (PE) and intra uterine growth restriction (IUGR), are a major cause of maternal and perinatal morbidity and mortality in developed countries. A default of utero-placental vascularization is present in these two pathologies. 3D Power Doppler (3DPD) is an easy tool to use in clinic, its quantitative indices calculated from obtained utero-placental volume seem promising for PE prediction. The major objective of this thesis was to evaluate the discriminative value of this technique between physiological and pathological situations, as well as its limitations in clinical and animal models. The screening performance of PE and/or IUGR by 3DPD indices in the first trimester was studied in a prospective multicenter study. An evaluation of the correlation between 3DPD indices and morphometric indices was then carried out among pregnant women at term. At the end, the interest of the technique was demonstrated in an ewe model of IUGR (treated with testosterone)

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
A toxémia de gestação (TG) é uma doença presente em pequenos ruminantes que causa um grande impacto económico em explorações leiteiras intensivas, essencialmente devido às elevadas taxas de mortalidades que lhe estão associadas. Afecta fêmeas gestantes no último trimestre da gestação, sendo mais comum em animais com excesso de condição corporal e gestações múltiplas. Os desequilíbrios metabólicos são evidenciados pelas alterações em determinados parâmetros sanguíneos, mas os métodos actualmente utilizados na avaliação do prognóstico da TG nem sempre se revelam os mais eficazes. Assim, o principal objectivo deste estudo foi o de avaliar a possibilidade de as concentrações sanguíneas do lactato serem um bom indicador do desenvolvimento desta doença e a sua contribuição para a acidose metabólica que ocorre na TG. Por outro lado, pretendeu-se determinar se o excesso de condição corporal (CC) nas cabras gestantes pode ser considerado um factor de risco para o desenvolvimento de TG, através da identificação de cabras com elevadas CC, verificando se realmente desenvolverem a doença mais tarde. Finalmente, avaliou-se a influência que a indução do parto ou realização de uma cesariana tiveram na taxa de sobrevivência fetal e materna, através da comparação das taxas de mortalidades apresentadas no grupo onde foi induzido o parto e no grupo ao qual foram realizadas cesarianas. O estudo revelou que a medição das concentrações sanguíneas de lactato não aparenta ter qualquer valor como indicador do desenlace da doença, uma vez que não houve diferença estatisticamente significativa entre os valores medidos no grupo dos animais com TG e os valores do grupo controlo, que não apresentavam sinais de doença. Por outro lado, das cabras identificadas com excesso de CC, apenas 9% desenvolveram efectivamente a doença, resultados que não parecem ser suficientes para sustentar a hipótese de este ser um importante factor de risco para o desenvolvimento de TG. Finalmente, a realização de cesarianas apresentou taxas de mortalidade superiores em relação à indução do parto, tanto nas fêmeas gestantes (71% por cesariana vs 54% por indução) como nos seus fetos (65% por cesariana vs 31% por indução). Estes resultados, juntamente com a ponderação de outros factores relativos a cada caso específico de TG, poderão contribuir para a tomada de decisão entre a realização ou não de uma cesariana.
ABSTRACT - Pregnancy toxemia in dairy goats: prognostic value of blood L-lactate concentrations, evaluation of body condition as a risk factor and advantages of labor induction vs cesarean-section - Pregnancy toxemia (PT) is a disease of small ruminants which causes a large economic impact on intensive production dairy farms, mainly due to the high mortality rates associated with the disease. It affects pregnant females on the last trimester of pregnancy and it is more common in over conditioned animals carrying multiple fetuses. Metabolic imbalance is evidenced by alterations in some blood parameters. However, the current methods used to determine the outcome of PT are not always the most effective. Thereby, the main objective of this study consisted in evaluating blood lactate concentrations in order to determine whether or not it is a good indicator to predict the outcome of this condition, as well as its contribution to the metabolic acidosis. On the other hand, it was also intended to determine if over conditioned pregnant goats are at greater risk of developing PT, by identifying goats with high body condition score (BCS) and determining if they actually developed this condition. Finally, the influence of labor induction or cesarean-section over the mortality rates of both mother and fetuses was also assessed, by comparing the different mortality rates in the groups were labor was induced or a cesarean-section was performed. The study revealed that the blood lactate concentrations do not appear to be valid as an indicator of the disease’s outcome, as there was significant statistic difference between the values measured on the group with PT and the control group, that showed no evidence of disease. On the other hand, of the goats identified with a high BCS, only 9% did develop the disease, which doesn’t seem to be enough to support the hypothesis that this is an important risk factor in the development of PT. Finally, the performance of cesarean-sections showed mortality rates much higher than the ones on induced labor, both on the pregnant goats (71% by c-section vs 54% by induction) and their fetuses (65% by c-section vs 31% by induction). These results, along with the consideration of other factors specific to each case of PT, could help to decide whether or not it is best to perform a c-section.

Silveira, J.E.M. (2015). Usefulness of certain clinical observations and blood chemistry values (BHBA, glucose, ions and blood gases) for predicting clinical outcomes when treating dairy goats with pregnancy toxemia. Dissertação de mestrado. Universidade de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária. 2015
Pregnancy toxemia (PT) is a disease characterized by a high case fatality rate (75% in this study). Clinical signs and blood chemistry values from 32 cases of PT in goats are described and summarized. Polypnea, swollen limbs, anorexia and absence of ruminal motility, sternal recumbency but ability to rise upon stimulation, neurological signs and drooped ears were the most consistently observed clinical manifestations. A decision concerning whether or not to and/or how to attempt to treat a PT goat should be based on clinical signs and blood parameters. The clinical signs most indicative of a poor prognosis are anorexia and recumbency; among the blood parameters it is potassium (K+) and those indicative of a metabolic acidosis, namely pH, pCO2, bicarbonate (HCO3-), base excess (BE), as there was a statistically significant difference between the goats that died and the goats that survived. Beta-hydroxybutyric acid (BHBA) values were not significantly different between the goats that died and the goats that survived. In conclusion, the clinical observations and the blood parameters described are likely to be used as prognostic indexes for dairy goats with PT. It should also be remembered that the prevention is of crucial importance in large flocks.
RESUMO - Utilização de sinais clínicos e de certos parâmetros sanguíneos (BHBA, glucose, iões e gases sanguíneos) como prognóstico de cabras com toxémia de gestação - A toxémia de gestação (TG) é uma doença caracterizada por taxas de mortalidade elevadas (75% neste estudo). Os sinais clínicos e os valores sanguíneos dos 32 casos de TG em cabras são descritos. Polipneia, membros inchados, anorexia e ausência de motilidade ruminal, decúbito esternal mas com capacidade de levantar após estimulação, sinais neurológicos e orelhas caídas foram os sinais clínicos mais frequentemente observados. Uma decisão sobre quando ou não e/ou como tentar tratar uma cabra com TG deve ser baseada nos sinais clínicos e nos valores sanguíneos. Os sinais clínicos indicativos de mau prognóstico são anorexia e decúbito; em relação aos parâmetros sanguíneos, o potássio (K+) e os indicativos de acidose metabólica, como o pH, a pCO2, o bicarbonato (HCO3-) e o Excesso de Base (EB), dada a existência de uma diferença significativa nestes parâmetros entre o grupo de animais que morreu e o grupo que sobreviveu. Não foi observada uma diferença estatisticamente significativa nos valores do BHBA entre os dois grupos. Em conclusão, os sinais clínicos e os parâmetros sanguíneos descritos anteriormente podem ser usados como indicadores de prognóstico para cabras de leite com TG. Deve ainda ser relembrado o papel crucial da prevenção em grandes rebanhos.

Les pathologies vasculaires placentaires sont fréquentes et graves. La forme maternelle prédominante est la pré-éclampsie et la forme fœtale le retard de croissance intra-utérin. Les questions posées autour de ce sujet concernent tout d'abord la prédiction de la survenue de ces pathologies suffisamment tôt afin de permettre une surveillance rapprochée, une administration de corticoïdes et une prise en charge dans une maternité de niveau adaptée. La prévention de la survenue et de la récidive ainsi que le traitement de ces pathologies la phase constituée sont aussi des problématiques encore non résolues. Notre objectif était de travailler sur ces différentes questions pa l'intermédiaire de trois études : l'étude ANGIOPRED), l'étude VOLUPLA et l'étude GROWTH. Les résultats de ces travaux et une revue d la littérature mettent en évidence une perturbation des facteurs de l'hémostase et des facteurs angiogéniques dans la pré-éclampsie et dans le retard de croissance. L'association des facteurs maternels, échographiques, angiogéniques et sériques constitue un modèle prédictif efficace principalement du fait d'une excellente valeur prédictive négative. Le volume placentaire est corrélé au taux de D- Dimères et est intéressant pour la prédiction des pathologies vasculaires placentaires. De nouveaux travaux devront poursuivre l'étude d la prédiction, de la prévention et du traitement des pathologies liées au placenta. Le traitement est notamment l'objet de l'étude Growth qui vise à évaluer l'efficacité de l'énoxaparine dans le traitement du retard de croissance vasculaire constitué
Placenta-mediated adverse pregnancy outcomes are frequent and severe pathologies whose predominant maternal form is preeclampsia and fetal form, intrauterine growth retardation. The questions asked about this subject concern first of all the prediction of the occurrence of its pathologies in a sufficiently early way to allow for close monitoring, administration of corticosteroids, and management in an appropriate level of maternity. The prevention of the occurrence and recurrence and the treatment of its pathologies in the constituted phase are also unresolved problems. Our objective was therefore to work on its various questions through three studies: the ANGIOPREI study, the VOLUPLA study and the GROWTH study. The results of his work and of the literature show that the factors of haemostasis anc angiogenic factors are disturbed in preeclampsia and in growth retardation. The association of maternal, ultrasound, angiogenic and serum factors constitutes a predictive model that is effective mainly by an excellent negative predictive value. The placental volume is correlated with the D-dimer level and is interesting for placenta-mediated adverse pregnancy outcomes prediction. New studies will have to continue the exploration of the prediction, prevention and treatment of this pathologies related to the placenta. The treatment is notably the object of the study Growth which aims to evaluate the effectiveness of the Enoxaparin for the treatment of constituted vascular growt retardation

Une croissance intra-utérine insuffisante représente, avec la prématurité et les malfor-mations congénitales, une des principales causes de morbidité et de mortalité néonatales. Ces pathologies sont liées entre elles, les nouveau-nés prématurés étant souvent atteints de RCIU (RCIU). Les études épidémiologiques récentes ont montré que le RCIU était associé à une augmentation de la morbidité respiratoire dès la période néonatale, avec, en particulier, une augmentation du risque de dysplasie broncho-pulmonaire (DBP), principale séquelle respira-toire de la prématurité. La DBP est caractérisée par des anomalies du développement alvéo-laire et vasculaire, considérées comme les conséquences d’agressions multiples sur un poumon immature. La physiopathologie exacte reste encore largement méconnue. Nous nous sommes intéressés dans ce travail au lien entre RCIU et DBP avec un abord expérimental et clinique. Alors que les études épidémiologiques sont relativement concordantes sur le lien entre RCIU et DBP, les études expérimentales, montrent des résultats divers tant sur le développement pulmonaire qu’au niveau moléculaire. Nous avons donc voulu identifier, dans un premier temps, un modèle de RCIU reproduisant les anomalies du développement alvéolaire observées chez l’Homme en utilisant trois modèles précédemment validés chez le rat : un modèle de res-triction protidique per-gestationnelle , un modèle de ligature unilatérale de l’artère utérine, un modèle d’injection d’un inhibiteur chimique de la NO synthase, le L NAME. Seule la restric-tion protidique anténatale permet de reproduire à long terme des lésions de l’alvéolisation proches de celles observées dans la DBP. En revanche, dans ce modèle, les modifications des principaux gènes identifiés précédemment dans les anomalies le développement alvéolaire ne sont pas observées, que ce soit avant, pendant ou après l’alvéolisation. Ce résultat nous a ame-né à entreprendre une étude multigénique qui a permis d’identifier plusieurs voies modifiées pendant l’alvéolisation dans ce modèle. Parmi celles-ci, les gènes impliqués dans la contractili-té et l’adhésion cellulaire, l’immunité ou la voie des « Peroxisome Proliferator-Activated Re-ceptor ». Dans la partie clinique de cette étude, nous avons évalué le risque de DBP chez les extrêmes prématurés atteints de RCIU dont les mères présentaient des signes de pathologie vasculaire de la grossesse (prééclampsie). Cette étude rétrospective unicentrique sur 184 en-fants a permis de comparer des enfants atteints de RCIU à des enfants eutrophes pris en charge de manière homogène. Le RCIU d’origine vasculaire multiplie le risque de DBP par 6. Un marqueur précoce de l’évolution vers une DBP est un taux de plaquettes bas à la naissance, évoquant le rôle d’un taux élevé de facteurs anti-angiogéniques circulants. Une étude est en cours pour corréler les facteurs anti-angiogéniques circulants présents chez les mères pré-éclamptiques au devenir respiratoire, en particulier à l’évolution vers une DBP, de leurs nou-veau-nés d’âge gestationnel inférieur à 30 semaines d’aménorrhée. En conclusion, nous avons montré expérimentalement que seule la restriction protidique anténatale chez le rat reproduisait les troubles de l’alvéolisation comparables à ceux observés dans la DBP. De nouvelles voies moléculaires potentiellement impliquées dans les anomalies de l’alvéolisation ont été mises en évidence. Par ailleurs, le rôle de facteurs anti-angiogéniques d’origine maternelle comme fac-teurs de développement d’une DBP est en cours d’évaluation
Insufficient intrauterine growth is with prematurity and congenital malformations, a major cause of neonatal morbidity and mortality. These conditions are interrelated, the preterm infants often suffered of intrauterine growth restriction (IUGR). Recent epidemiological stud-ies showed that IUGR was associated with increased respiratory morbidity as soon as the ne-onatal period, with an increased risk of bronchopulmonary dysplasia (BPD), the main respira-tory sequelae of prematurity. BPD is characterized by impaired alveolar and vascular devel-opment and is the consequence of multiple insults on an immature lung. The exact pathophysi-ology is still largely unknown. We study in this work the relationship between IUGR and DBP with an experimental and clinical approach. While epidemiological studies are relatively concordant on the relationship between IUGR and BPD, experimental studies showed various results in lung development and molecular process. We wanted to identify, at first, a model of IUGR reproducing impaired alveolar development observed in humans using three previously validated models in rats: a model of per-gestational protein restriction, a model of unilateral ligation uterine artery, an injection pattern of a chemical inhibitor of NO synthase, L NAME. Only antenatal protein restriction can reproduce long-term impaired alveolarization as those observed in BPD. However, in this model, changes in key genes previously identified in pathological alveolar development are not observed before, during or after alveolarization. This result led us to perform a genome-wide analysis which identified several modified path-ways during alveolarization. Among these, the genes involved in the “cardiac contractility”, “cell adhesion molecules”, “immunity”, “molecular adhesion” or the "Peroxisome Proliferator-Activated Receptor" pathways. In the clinical part of this study, we evaluated the risk of BPD in extreme preterm infants with IUGR whose mothers had evidence of vascular disease of pregnancy (preeclampsia). This single-center retrospective study of 184 children was used to compare children with IUGR in adjusted for gestational age children. The vascular IUGR increases the risk of DBP by 6. An early marker of progression to BPD is a low platelet count at birth, referring to the role of high levels of circulating anti-angiogenic factors. A study is ongoing to correlate circulating anti-angiogenic factors present in preeclamptic mothers to res-piratory outcome and particularly BDP, in newborn younger than 30 weeks of gestational age at birth. In conclusion, we have shown experimentally that only prenatal protein restriction in rats reproduced impaired alveolarization comparable to those observed in the BPD. New mo-lecular pathways potentially involved in the impaired alveolarization were highlighted. More-over, the role of placental anti-angiogenic factors leading to development of BPD is evaluat-ed

La placentation humaine est de type hémomonochoriale, le sang maternel est directement en contact avec le syncytiotrophoblaste. Les flux sanguins maternels, dans la chambre intervilleuse, exercent des forces mécaniques de cisaillement (shear stress) sur la surface microvillositaire du syncytiotrophoblaste. Les effets physiologiques du shear stress exercé par les flux sanguins sur l’endothélium vasculaire artériel et veineux ont fait l’objet de nombreux travaux scientifiques. En revanche, les effets biologiques du shear stress sur le syncytiotrophoblaste humain n’ont jamais été explorés. L’objectif de ce travail était premièrement d’évaluer les valeurs du shear stress exercé in vivo sur le syncytiotrophoblaste humain au cours des grossesses normales, puis de mettre au point un modèle de culture primaire dynamique afin de reproduire les conditions physiologique et d’étudier in vitro la réponse biologique du syncytiotrophoblaste au shear stress. En dépit d’un débit sanguin maternel intraplacentaire important, estimé entre 400 et 600 mL.min-1, le shear stress moyen exercée par le syncytiotrophoblaste est estimée entre 0.5±0.2 et 2.3±1.1 dyn.cm-2. Nos résultats montrent cependant que l’intensité du shear stress est très hétérogène tant à l’échelle de la chambre intervilleuse que de la villosité terminale. Nous avons développé un modèle de culture cellulaire dynamique en condition de flux adapté au syncytiotrophoblaste humain. Ce modèle permet d’appliquer un shear stress égal et constant sur toutes les cellules cultivées et reproductible à chaque culture primaire. Aux gammes de shear stress étudiées (1 dyn.cm-2), nous n’avons pas mis en évidence de diminution de la viabilité cellulaire ni de déclenchement des processus précoces d’apoptose en conditions dynamiques comparativement aux conditions statiques. Deux types de chambre de perfusion permettent d’étudier des réponses cellulaires au shear stress à court et long terme selon des temps d’exposition allant de 5 minutes à 24 heures. Ce modèle expérimental a permis de montrer que le syncytiotrophoblaste humain en culture primaire est mécanosensible. La réponse cellulaire à des niveaux de shear stress de 1 dyn.cm-2 est multiple selon les temps d’exposition et le niveau d’intégration étudié. Après 45 minutes de shear stress les taux d’AMP cyclique intracellulaires sont augmentés ce qui a pour effet d’activer la voie de signalisation intracellulaire PKA-CREB. Cette augmentation d’AMP cyclique est secondaire à la synthèse et la libération de prostaglandine E2 qui, par une boucle de régulation autocrine stimule l’adenylate cyclase. L’augmentation de la synthèse/libération de PGE2 est dépendante de l’augmentation rapide du calcium intracellulaire sous shear stress. L’exposition au shear stress de 24 heures stimule l’expression et la sécrétion du PlGF, un facteur de croissance indispensable à l’angiogenèse placentaire et pour l’adaptation maternelle à la grossesse sur le plan vasculaire. Nos travaux montrent que l’augmentation de l’AMPc intracellulaire et l’activation de la PKA contribuent à la phosphorylation de CREB, facteur de transcription régulant l’expression du PlGF
Human placentation is hemomonochorial, maternal blood circulates in direct contact with the syncytiotrophoblast. In the intervillous space, the maternal blood exerts frictional mechanical forces (shear stress) on the microvillous surface of the syncytiotrophoblast. Flowing blood constantly exerts a shear stress, on the endothelial cells lining blood vessel walls, and the endothelial cells respond to shear stress by changing their morphology, function, and gene expression. The effects of shear stress on the human syncytiotrophoblast and its biological functions have never been studied. The objectives of this study were (1) to determine in silico the physiological values of shear stress exerted on human syncytiotrophoblast during normal pregnancies, (2) to develop a model reproducing in vitro the shear stress on human syncytiotrophoblast and (3) to study in vitro the biological response of human syncytiotrophoblast to shear stress. The 2D numerical simulations showed that the shear stress applied to the syncytiotrophoblast is highly heterogeneous in the intervillous space. In spite of high intraplacental maternal blood flow rates (400-600mL.min-1), the estimated average values of shear stress are relatively low (0.5±0.2 to 2.3±1.1 dyn.cm-2). To study the shear stress-induced cellular responses during exposure times ranging from 5 minutes to 24 hours we have developed two dynamic cell culture models adapted to the human syncytiotrophoblast. We found no evidence of decreased cell viability or early processes of apoptosis in dynamic conditions (1 dyn.cm-2, 24h) compared to static conditions. Shear stress (1 dyn.cm-2) triggers intracellular calcium flux, which increases the synthesis and release of PGE2. The enhanced intracellular cAMP in FSS conditions was blocked by COX1/COX2 inhibitors, suggesting that the increase in PGE2 production could activate the cAMP/PKA pathway in an autocrine/paracrine fashion. FSS activates the cAMP/PKA pathway leading to upregulation of PlGF in human STB. Shear stress-induced phosphorylation of CREB and upregulation of PlGF were prevented by inhibition of PKA with H89 (3 μM). The syncytiotrophoblast of the human placenta is a mechanosenstive tissue

A pré-eclâmpsia é uma síndrome hipertensiva própria da gravidez que complica cerca de 2 a 8 % de todas as gravidezes e constitui uma causa importante de mortalidade e morbilidade materno-fetal. Clinicamente é uma síndrome heterogénea podendo apresentar-se por quadros clínicos muito diversos. Apesar dos mecanismos envolvidos ainda não serem totalmente conhecidos, a pré-eclâmpsia parece decorrer de uma deficiente perfusão placentar que condiciona disfunção endotelial sistémica e lesão em diversos órgãos maternos. O rim, órgão sujeito a diversas alterações fisiológicas durante a gravidez normal, é significativamente afectado durante a pré-eclâmpsia. A lesão renal histológica caracteristicamente encontrada é designada de endoteliose glomerular. A pré-eclâmpsia condiciona um risco aumentado para o desenvolvimento de doença cardiovascular futura incluindo doença renal. O presente trabalho pretende ser uma revisão dos conhecimentos mais recentes no que respeita ao processo de envolvimento fisiopatológico do rim na pré-eclâmpsia.
Preeclampsia is a hypertensive disorder of pregnancy witch occurs in 2-8% of all pregnancies, being na importante cause of materno-fetal morbidity and mortality. Its clinical features are heterogeneous showing a multitude of clinical presentations. Though the underlying mechanisms are not yet totallt understod, préeclampsia seems to result from na insufucient placentar perfusion, witch leads to sistemic endothelial disfunction and injring in several maternal organs. The kidney, witch undergoes several psysiologic changes during a normal pregnancy, is significantly affected by preeclampsia. Glomerular endoteliose is the caracteritic histologic lesion in this disorder. Preeclampsia increases the risk for future cardiovascular disease, including renal disease. This paper aims to review of the latest knowledge about pathophysiological renal involvement in preeclampsia.

Le rôle du EG-VEGF a été exploré dans le placenta humain et murin. Des hypothèses ont été émises quand à sa contribution dans les pathologies de la grossesse dont la toxémie gravidique et le retard de croissance intra-utérin.