Dissertations / Theses on the topic 'Triptani'

The topic of this PhD thesis concerns the pattern of use and the post-marketing cardiovascular (CV) safety of 5HT1b/d receptor agonists, a class of specific antimigraine agents commonly called “triptans”. With the aim to describe the pattern of utilization of triptans in a wide sample of the Italian general population, the Emilia-Romagna Regional Health Authority Database was analyzed. All patients receiving at least one triptan prescription in 2007 (N=34915) were followed for 12 months after the date of first prescription. On the basis of triptan exposure during the 12 months preceding the date of recruitment, prevalent users were divided into two groups, new users (N=18104) and already in treatment (N=16811); the respective frequency of triptan use and percentage of subject receiving CV co-prescription (suggestive of potential vasoconstrictive risk or absolute contraindication to triptan use) were described. Results from the analysis provided an estimation of the incidence and the prevalence of triptan use in the general population (0,4% e 0,8% respectively), also highlighting important differences between new users and already in treatment patients. The latter population, whose patients can be considered more “familiar” to the treatment, showed a markedly higher frequency of use compared to new users and, in particular, also a wider percentage of subjects taking >180 posologic units/year, thus potentially affected by chronic headache related to triptan overuse (0.3% vs 15,3%; p<0,001). Even users that received CV co-prescription were more often present among already in treatment patients (12% vs 27,6%; p<0,001). Therefore, on the basis of these evidence, periodic patient monitoring should be recommended and informative intervention should be implemented in order to promote appropriate prescription and safe use of these antimigraine drugs. With the aim to highlight rare, unexpected or poorly documented adverse CV events concerning triptan therapy, reports of suspected adverse drug reaction from the Food and Drugs Administration_Adverse Event Reporting System (FDA_AERS) database were analyzed. The data-mining process applied to estract reports of potential interest was based on the following steps: duplicate removal, drugs mapping through the ATC classification, estraction of CV event on the basis of the MedDRA classification, application of the Reporting Odds Ratio (ROR) and subsequent statistical adjustment of its values considering co-reported CV drugs as a row proxy of a pre-existing CV condition). Through this approach, all CV events that were more frequently reported in association to triptans rather than to all other drugs in the database were identified. The analysis was based on over two millions reports entered into the database between 2004 and 2010. Among a total of 7808 reports with triptan exposure, the application of the ROR highligthed three main groups of events that could be considered unexpected/poorly documented concerning triptan treatment: cerebrovascular events, aneurysm and dissection, and pregnancy related vascular events. On the basis of these results, a subsequent study was performed in order to focus on the cerebrovacular events previously highlighted, with the aim to provide more details on the actual relation between the drug and the event. Therefore, the further analysis was performed on the same dataset used for the previous study. It was based on two different approaches: i) a case-by-case analysis concerning reports of a specific cerebrovascular event considered of interest (quantitative approach); ii) the selection of a cluster of cerebrovascular events, on the basis of the MedDRA classification, and the calculation of the stratified and adjusted ROR values for triptan exposure on the basis of potentially confounding/modifying factors (quantitative approach). Results from the qualitative analysis demonstrated a possible role of triptans in the onset/exacerbation of a rare cerebrovascular event such as the dissection of the carotid artery. Moreover, the quantitative analysis allowed for identification of sub-populations of users that could be at risk for cerebrovascular accident related to the triptan treatment (i.e. patients aged 18-44, estrogens/contraceptive users). These findings should be considered as specific hypothesis to be tested through further large scale ad hoc epidemiological studies to better define the safety profile of this class of antimigraine agents.
La presente tesi di dottorato ha avuto come oggetto lo studio delle modalità di utilizzo ed il profilo di sicurezza cardiovascolare (CV) post-marketing degli agonisti selettivi dei recettori 5HT1b/d, una classe di specifici agenti antiemicranici, comunemente chiamati “triptani”. Al fine di descrivere le modalità di prescrizione dei triptani in un ampio campione della popolazione italiana, è stata analizzata la banca dati regionale di Assistenza Farmaceutica Territoriale dell’Emilia-Romagna. Tutti i pazienti che durante il 2007 avevano ricevuto almeno una prescrizione contenente un triptano (N=34915) sono stati osservati per i 12 mesi successivi alla data di prima prescrizione. Sulla base dell’esposizione al farmaco nei 12 mesi precedenti al reclutamento, gli utilizzatori prevalenti sono suddivisi in due distinte popolazioni, new users (N=18104) e already in treatment (N=16811), le quali sono state successivamente confrontate in termini di frequenza di utilizzo del farmaco e percentuale di soggetti che ricevevano co-prescrizioni di farmaci CV, utilizzate come proxy di un potenziale rischio vasocostrittivo o una controindicazione assoluta verso la terapia con triptani. I risultati dell’analisi hanno permesso di stimare l’incidenza e la prevalenza annuale d’utilizzo dei triptani nella popolazione generale (0,4% e 0,8% rispettivamente), mettendo in luce, inoltre, importanti differenze fra new users e i pazienti already in treatment. Questi ultimi, che possono essere considerati come pazienti più “familiari” al trattamento, mostravano una frequenza d’uso marcatamente più elevata rispetto ai new users e, in particolare, una percentuale significativamente più elevata di soggetti che assumevano >180 unità posologiche/anno, quindi potenzialmente affetti da cefalea cronica correlata all’ uso eccessivo di triptani (0.3% vs 15,3%; p<0,001). Anche i pazienti che ricevevano una co-prescrizione CV erano più spesso presenti fra i pazienti already in treatment (12% vs 27,6%; p<0,001). Pertanto, sulla base delle evidenze raccolte, sarebbero auspicabili interventi informativi ad hoc al fine di promuovere l’appropriatezza prescrittiva e l’uso sicuro di questi farmaci antiemicranici, raccomandando ai medici prescrittori un monitoraggio periodico dei pazienti. Allo scopo di mettere in evidenza eventi di natura CV rari, non noti o poco documentati rispetto alla terapia con triptani, sono state analizzate le segnalazione di sospetta reazione avversa a farmaco presenti nel database internazionale del Food and Drugs Administration_Adverse Event Reporting System (FDA_AERS). Per l’estrazione delle segnalazioni di possibile interesse è stato applicato uno specifico processo di data-mining basato sui seguenti passaggi: rimozione dei duplicati, mappatura dei farmaci tramite la classificazione ATC, estrazione degli eventi CV secondo la classificazione MedDRA, applicazione del Reporting Odds Ratio (ROR) e successivo aggiustamento statistico per la concomitante assunzione di farmaci CV (proxy grezzo di un disturbo CV di base). In tal modo sono stati evidenzati tutti gli eventi CV che venivano segnalati più frequentemente in associazione ad un qualsiasi triptano rispetto a tutti i restanti farmaci presenti nel database. L’analisi si è basata su oltre due milioni di segnalazioni inserite nel database fra il 2004 ed il 2010. Tra i 7808 report riguardanti almeno un triptano, l’applicazione del ROR ha evidenziato una possibile relazione fra l’assunzione di un triptano ed una serie di eventi che potevano essere considerati inattesi rispetto alla terapia con questi farmaci: eventi di natura cerebrovascolare, aneurismi e dissezioni, ed eventi correlati alla gravidanza. Sulla base di questi risultati, nel successivo studio è stato possibile focalizzare l’attenzione sui soli eventi cerebrovascolari messi precedentemente in evidenza, allo scopo di acquisire maggiori informazioni sulla relazione tra farmaco ed evento. L’analisi, effettuata sullo stesso dataset del precedentemente studio, si è basata sull’applicazione di due differenti approcci: i) una case-by-case analysis riguardante le segnalazioni di uno specifico evento giudicato d’interesse (approccio quantitativo); ii) la selezione di un cluster di eventi cerebrovascolari, tramite la classificazione MedDRA, ed il calcolo del ROR riguardo l’esposizione a triptani, stratificato ed aggiustato statisticamente sulla base di variabili potenzialmente confondenti/modificanti (approccio quantitativo). I risultati dell’analisi qualitativa hanno dimostrato un ruolo possibile dei triptani nell’insorgenza/esacerbazione di un evento cerebrovascolare raro quale la dissezione dell’arteria carotide. Inoltre, l’analisi quantitativa ha permesso di mettere in evidenza alcune sottopopolazioni di utilizzatori che potrebbero essere potenzialmente esposte ad un maggior rischio di accidenti cerebrovascolari correlati all’assunzione di triptani (i.e. 18-44 anni ed utilizzatori di estrogeni/contraccettivi). Tali risultati, potranno essere utilizzati come ipotesi da testare attraverso successivi studi epidemiologici su larga scala che saranno utili a meglio definire il profilo di sicurezza di questi farmaci.

Background: Migraine headache is a chronic pain condition that affects 20% of women of reproductive age, and is often treated with triptans. Triptans are serotonin 1B, 1D, and 1F receptor agonists that act as vasoconstrictors and inhibitors of the trigeminal cervical complex as well as peripheral neurons; they cross the blood brain barrier and placenta, and as such are plausible neurodevelopmental teratogens. No studies have examined risk of neurodevelopmental problems in children with prenatal triptan exposure. This dissertation had three aims: (1) to examine risk of behavioral problems in children using in the presence of time-varying confounding by concomitant medication use; (2) to examine risk of temperamental, motor, and communication disturbances associated with prenatal triptans exposure, adjusting for unmeasured confounding by migraine type and severity; and (3) to examine changes in neurodevelopment over time associated with prenatal triptan exposure. Methods: This dissertation used data from the Norwegian Mother and Child Cohort Study, a prospective birth cohort including more than 100,000 women recruited during their first prenatal ultrasound visit. Aims 1 and 3 used marginal structural models to assess the risk of (1) neurodevelopmental problems at age 36 months (Aim 1), or (2) change in risk of neurodevelopmental problems from 18 to 36 months (Aim 3) associated with prenatal triptan exposure. Aim 2 used propensity matching and calibration to adjust for unmeasured confounding by migraine type, severity, and attitudes towards medication use in pregnancy. Neurodevelopmental outcome measures included the Child Behavior Checklist (CBCL), the Emotionality, Activity, and Temperament Scale (EAS), and the Ages and Stages Questionnaire (ASQ). Exposure to triptans was ascertained by self-report. Results: Prenatal triptan exposure was associated with greater externalizing behavior problems at 18 and 36 months, as well as greater increases in emotionality and activity from 18 to 36 months. We observed no association between triptan exposure and motor skills or communication problems; triptan use during pregnancy was associated with migraine severity but not migraine type, and adjustment for unmeasured migraine characteristics moved effect estimates towards the null. Conclusions: Prenatal triptan exposure is associated with externalizing-type behaviors and temperament in children, while migraine itself is associated with internalizing-type behaviors and temperament. The use of concomitant medications and the severity of the underlying condition both exerted substantial influence on observed effect estimates, and should be considered in any future studies of triptan medication use in pregnancy.

As Gamopatias Monoclonais (GM) são um grupo de doenças associado à hiperprodução monoclonal de células plasmocitárias na medula óssea, as quais produzem uma quantidade anormal de uma imunoglobulina monoclonal ou apenas fragmentos desta, usualmente IgA ou IgG. O Mieloma Múltiplo (MM), um dos tipos mais comuns e mortíferos de GM, constitui aproximadamente 10 % das neoplasias hematológicas. Encontra-se fundamentado que os mastócitos (MC) se encontram intimamente associados ao processo de angiogénese tumoral, assumindo esta especial importância na formação e crescimento de tumores, entre eles o MM. Assim, a angiogénese da medula óssea e as contagens de MC encontram-se altamente correlacionados em doentes com Gamopatia Monoclonal de Significado Indeterminado e em doentes com MM activo e não activo. A triptase, libertada por mastócitos (MC) após desgranulação, estimula a proliferação das células endoteliais vasculares humanas, promove a formação do tubo vascular em culturas e também degrada a matriz do tecido conjuntivo para providenciar espaço para o crescimento neovascular. A triptase desempenha ainda uma função autócrina já que a sua libertação pelos MC leva à desgranulação dos MC adjacentes, providenciando uma amplificação do sinal. A triptase tem sido vastamente utilizada como indicador do número e da activação de MC e, mais recentemente, como marcador de prognóstico em diversas doenças, tais como a mastocitose sistémica e reacções anafilácticas. Pelo referido, justifica-se a necessidade de apresentar um método não invasivo que ajude no diagnóstico das GM. Deste modo, o principal objectivo deste estudo foi a avaliação da triptase como potencial marcador independente para as GM. Os 304 participantes neste estudo foram recrutados na Unidade Local de Saúde (ULS) da Guarda e foram divididos em dois grupos: um grupo controlo composto por amostras de 77 indivíduos adultos sem GM e por um grupo teste formado por amostras de 229 indivíduos seleccionadas na seroteca do Serviço de Patologia Clínica, a partir do proteinograma por apresentarem suspeita de GM. Cada um destes grupos foi depois dividido em dois subgrupos: atópicos e não atópicos. Os resultados mostraram a existência de diferenças estatisticamente significativas na concentração de triptase para os indivíduos atópicos e não atópicos do grupo controlo e nos indivíduos não atópicos com e sem GM. Também se verificaram diferenças significativas entre os níveis séricos de triptase nos indivíduos não atópicos do grupo teste que apresentavam GM do tipo IgM e IgG. Por último, observaram-se diferenças significativas na concentração de IgE específica para aeroalergénios nos indivíduos atópicos com e sem GM. Deste modo foi possível verificar uma relação entre a atopia e os níveis séricos de triptase nos indivíduos sem GM e a existência de um efeito inibitório dos clones tumorais sobre os MC afectando os níveis de triptase nos indivíduos do grupo teste. Os resultados sugerem que a triptase, apesar do seu papel na neoangiogénese, não parece constituir um marcador diferencial no prognóstico das GM nos indivíduos atópicos.
The Monoclonal Gammopathies (GM) are a group of diseases associated with overproduction of monoclonal plasma cells in bone marrow, which produce an abnormal amount of monoclonal immunoglobulin or just fragments of it, usually IgG or IgA. The Multiple Myeloma (MM), one of the most common and fatal of GM, is approximately 10% of hematologic malignancies. It is reasoned that the mast cells (MC) are closely associated with the process of tumor angiogenesis, therefore assuming particular importance in the formation and growth of tumors, including MM. Thus, bone marrow angiogenesis and MC counts are highly correlated in patients with Monoclonal Gammopathy of Undetermined Significance and MM patients with active and not active disease. The tryptase released by mast cells (MC) after degranulation, stimulates the proliferation of human vascular endothelial cells, promotes vascular tube formation in cultures and also degrades the connective tissue matrix to provide space for neovascular growth. The tryptase also plays an autocrine role since its liberation by the MC leads to adjacent MC degranulation providing a signal amplification. The tryptase has been widely used as an indicator of the number and activation of MC and, more recently, as a prognostic marker in several diseases such as systemic mastocytosis and anaphylactic reactions. Taking into account the need of a noninvasive method that helps in the diagnosis of GM, the main objective of this study was the evaluation of tryptase as a potential independent marker for GM. The 304 participants in this study were recruited from the Local Health Unit (ULS) of the Guarda and were divided into two groups: a control with samples from 77 adults with no GM and a study group with samples of 229 individuals selected at serotec of Clinical Pathology Laboratory. This group was selected based on suspected GM protein profile. Each of these groups was then divided in atopic and nonatopic individuals. The results showed statistically significant differences in the concentration of tryptase for atopics and nonatopics of control group and for non-atopic individuals with and without GM. There were also significant differences between serum tryptase levels in non-atopic study group with IgM and IgG GM. Finally, there were significant differences in the concentration of specific IgE to aeroalergens in atopic individuals with and without GM. It was observed a relationship between atopy and serum tryptase levels in patients without GM and the existence of inhibitory effect of tumor clones in MC affecting the levels of tryptase in the study group subjects. Despite the role of tryptase in neoangiogenesis, this protein does not seem to be a differential marker in the prognosis of GM at least for atopic individuals.

Objetivos: Avaliar o efeito da inibição de triptase, com o uso da droga nafamostate mesilate (NM), sobre o desenvolvimento de doença periodontal induzida em ratos. Metodologia: Oitenta ratos Wistar machos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos. Um grupo controle com injeção diária de NaCl 0,9%, grupo NM (injeção diária de 0.1mg/kg de NM, ip), grupo ligadura (colocada ao redor do primeiro molar inferior direito), e grupo NM + Ligadura. A quantidade de perda óssea alveolar (POA) na porção mesial da face lingual da raiz mésio-lingual do primeiro molar inferior foi determinada após o sacrifício aos sete e 14 dias com o auxílio de um estereomicroscópio, e a atividade de mieloperoxidase (MPO) foi analisada nos tecidos gengivais. Resultados: A inibição da triptase levou à diminuição significativa (p <0,05) de POA em animais submetidos à ligadura e periodontite induzida. A inibição da triptase pelo NM não apenas preveniu o início da POA aos sete dias de experimento (0,44mm 0,16 e 0,60mm 0,22, p<0,05, NM + Ligadura versus Controle), como também diminuiu significativamente a POA aos 14 dias (0,97mm 0,17 versus 1,82mm 0,26, p <0,001, NM + Ligadura versus Ligadura). Além disso, a inibição da triptase diminuiu significativamente a atividade de MPO aos 14 dias (p<0.05). Conclusão: Os dados do presente estudo sugerem que a inibição da triptase modificou a progressão da periodontite induzida experimentalmente em ratos.
Aim: To evaluate the effect of inhibition of tryptase, with the drug nafamostate mesylate (NM) on the development of periodontal disease induced in rats. Methodology: Eighty (80) male Wistar rats were randomly separated into four study groups as follows: saline Control group, NM group (daily injection of 0.1mg/kg body weight of NM, i.p.), Ligature group (ligature placed at the gingival margin level of lower right first molars), and NM + Ligature group. The amount of alveolar bone loss (ABL) around the mesial root surface of the first mandibulary molar was determined at sacrifice at seven and 14 days with the aid of a stereomicroscope, and the myeloperoxidase activity (MPO) was analyzed at the gingival tissues. Results: NM led to significantly (p<0.05) decreased ABL in animals subjected to ligature induced periodontitis. Tryptase inhibition not only prevented the onset of significant ABL at seven days of the experiment (0.440.16 and 0.600.22, p>0.05, NM+Ligature and Control, respectively) but also significantly decreased the ABL when compared with the Ligature group at 14 days (0.970.17 versus 1.820.26, p<0.001). In addition, NM significantly decreased MPO activity at 14 days (p<0.05). Conclusion: These data provide evidence that tryptase inhibition may modify the progression of experimentally induced periodontitis in rats.

TEÓFILO, Carolina Rodrigues. Expressão de CD31, CD34 e triptase em lesões potencialmente malignas e nos carcinomas de células escamosas orais. 2012. 70 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2012.
Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-02-15T12:47:08Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_crteófilo.pdf: 1174506 bytes, checksum: d60d3493847571cc157661dbe68ebee6 (MD5)
Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-02-18T15:46:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_crteófilo.pdf: 1174506 bytes, checksum: d60d3493847571cc157661dbe68ebee6 (MD5)
Made available in DSpace on 2013-02-18T15:46:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_crteófilo.pdf: 1174506 bytes, checksum: d60d3493847571cc157661dbe68ebee6 (MD5) Previous issue date: 2012
Angiogenesis is the development of new blood vessels from pre-existing capillaries, being an essential step in tumor growth for supplying nutrition and oxygen to cells in proliferation. A cell that may be involved in this process is the mast cell (MC), since besides the defense function, acts in the blood vessels regulation. The MC participation in the induction of angiogenesis has been suggested in various malignant tumors. The purposes of this study was to evaluate angiogenesis and mast cell density in oral epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma (SCC). This is an observational, retrospective and quantitative study using the sample selection from the archives of the Department of Legal Medicine and Pathology and Laboratory of Oral Pathology, both from the Federal University of Ceará. For MC evaluation , the sample was consisted of 73 paraffin blocks, distributed between SCC (n=30), epithelial dysplasia (n=23) and hyperplasias fibroepithelial (HFE) (n = 20), as control, and for angiogenesis the sample was 65 blocks, consisted of 24 SCC, 19 epithelial dysplasias and 22 HFE. Immunohistochemistry was performed using the MC-tryptase, CD31 and CD34 antibodies. For quantification, digital images were captured and then counting was performed using Image J software. The antibody staining percentage was determined using SAMM software. With regard to mast cells, there was a lower density in malignant lesions in relation to HFE and dysplasia (p = 0.0092). Evaluating angiogenesis, CD31 expression showed differences between epithelial dysplasia and SCC and between SCC and HFE, with a greater percentage of vessels in SCC (p <0.0001). However, CD34 expression did not differ between groups. The CD31 antibody was shown to be a better angiogenesis marker in oral mucosa than CD34. Increased vascularity in oral squamous cell carcinoma suggests that angiogenesis is necessary for tumor growth, increasing when the malignant transformation starts. However, no correlation was found between mast cells and angiogenesis.
Angiogênese é o surgimento de um novo vaso sanguíneo a partir de capilares pré-existentes, sendo um passo essencial no crescimento tumoral por fornecer nutrição e oxigênio às células em proliferação. Uma célula que pode estar envolvida nesse processo é o mastócito, pois, além da função de defesa, atua na regulação de vasos sanguíneos. Sua participação na indução da angiogênese tem sido sugerida em vários tumores malignos. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a angiogênese e a densidade de mastócitos em displasias epiteliais e no carcinoma espinocelular (CEC) de boca. Trata-se de um estudo observacional, retrospectivo e quantitativo, realizado através da seleção de amostra proveniente dos arquivos do Departamento de Patologia e Medicina Legal e do laboratório de Patologia Bucal do curso de Odontologia, ambos da Universidade Federal do Ceará. Para a avaliação dos mastócitos, a amostra foi constituída por 73 blocos parafinados, distribuídos entre CEC (n=30), displasias epiteliais (n=23) e hiperplasias fibroepiteliais (HFE) (n=20), como controle, e para a angiogênese a amostra foi de 65 blocos, sendo 24 de CEC, 19 de displasias epiteliais e 22 de HFE. Foi realizada imunohistoquímica utilizando-se os anticorpos anti-triptase, para mastócitos e anti-CD31 e anti-CD34, para vasos sanguíneos. Para quantificação, foram capturadas imagens digitais e, em seguida, utilizados softwares para auxiliar na contagem dos mastócitos (Image J) e para determinação do percentual de marcação do anticorpo (SAMM). Com relação aos mastócitos, houve menor densidade destes nas lesões malignas em relação às HFE e displasias (p=0,0092). Avaliando angiogênese, a expressão de CD31 mostrou diferença entre os grupos CEC e displasia epitelial e entre CEC e HFE, havendo um maior percentual de vasos nos CEC (p<0,0001). Contudo, o CD34, não mostrou diferença entre os grupos. O anticorpo CD31 mostrou-se melhor marcador de angiogênese em mucosa oral do que CD34. O aumento da vascularização em CEC oral sugere que a angiogênese é necessária ao crescimento tumoral, aumentando à medida que inicia o processo de malignização. Não foi encontrada correlação entre mastócitos e angiogênese.

Introducción: La anafilaxia es una reacción de instauración rápida y potencialmente mortal, donde los mediadores mastocitarios tienen un papel clave en su fisiopatología. El diagnóstico de la anafilaxia es clínico, ya que actualmente no se dispone de marcadores biológicos que nos permitan confirmar el diagnóstico. Recientemente, en un modelo murino se ha descrito el posible papel de la heparina derivada de los mastocitos en la activación del sistema de contacto, una cascada de proteasas que termina escindiendo el cininógeno de alto peso molecular (HK) para liberar bradicinina (BK), proteína con múltiples efectos inflamatorios. Objetivo: Esta Tesis Doctoral la componen dos trabajos. El objetivo del primer trabajo fue determinar las concentraciones de triptasa sérica seriada durante la anafilaxia y evaluar su utilidad como marcador diagnóstico y de gravedad, así como también los factores de riesgo para presentar una anafilaxia grave. El objetivo del segundo trabajo fue investigar el papel del sistema de contacto, de la coagulación y la correlación con la triptasa durante la anafilaxia. Métodos: Se trata de dos estudios prospectivos con pacientes que acudieron al Servicio de Urgencias del Hospital Vall d´Hebron con un episodio de anafilaxia. Se recogieron las características demográficas, los factores de riesgo de los pacientes, la etiología, las características clínicas y el tratamiento de la anafilaxia. Se midió la triptasa sérica a las 1-2 horas (T1), a las 4-6 horas(T2), a las 12-24 horas (T3) después del inicio de la anafilaxia y en condiciones basales (TB). En el segundo estudio, dado que se trataba de un estudio exploratorio, se compararon 10 pacientes durante la anafilaxia y en condiciones basales y con controles sanos ajustados por sexo y edad. Se determinó mediante inmunodetección la proteólisis plasmática del HK, de la calicreína plasmática (PK) y del factor XII (FXII). La heparina liberada por los mastocitos se determinó mediante la actividad del anti-Xa y se analizó la vía intrínseca de la coagulación midiendo los niveles de TTpa. Resultados: En el primer trabajo se incluyeron un total de 102 pacientes, 63 mujeres, de edad media de 47,4±19,1 años. La concentración de la triptasa a T1 (19.3±15.4µg/L) fue significativamente más alta que en T2, T3, TB (todos <11,4µg/L; P<0,0001). No obstante, la triptasa no se elevó en el 36,3% de los casos. Además, en el 60,6% de estos pacientes no se observaron cambios en los niveles de triptasa comparando T1 y TB (ΔT1-TB=0). La concentración de triptasa fue más elevada en las anafilaxias más graves (P<0,0001) y se correlacionaba positivamente con la gravedad (P<0,001; r=0,49). La anafilaxia fue más grave y la concentración de triptasa más elevada cuando la etiología eran los fármacos comparado con los alimentos tanto en T1 (P=0,045) como en TB (P=0,019). La edad y los factores de riesgo cardiovascular se asociaron a una anafilaxia más grave (P=0,001). En el segundo trabajo se observó una extensa proteólisis del HK, de la PK y del FXII en el plasma de los pacientes durante la anafilaxia, no observándose en los mismos en condiciones basales ni en los controles. El grado de escisión del HK se correlacionó con la gravedad de la reacción y con los niveles de triptasa. El TTpa estaba alargado en 3 pacientes y los niveles de anti-Xa fueron más altos durante la anafilaxia que a nivel basal (4 kIE/L, IQR 2,5-5,5 versus 1 kIE/L IQR 0,25-1,75, p < 0,005). Conclusiones: La triptasa es un biomarcador relacionado con la gravedad de la anafilaxia. No obstante, no es un marcador óptimo para el diagnóstico de la anafilaxia, ya que en un número no despreciable de pacientes se mantiene inalterada. La edad avanzada y los factores de riesgo cardiovascular estaban asociados a una anafilaxia más grave. Además, se ha demostrado una activación del sistema de contacto y de la coagulación, así como un aumento de la actividad del anti-Xa en los pacientes durante la anafilaxia.
Background: Anaphylaxis is a hypersensitivity reaction that is rapid in onset and potentially fatal, in which mast cell mediators play an important role in the physiopathology. The diagnosis of anaphylaxis is based on clinical history since no reliable biological marker is currently available to confirm the diagnosis. Recently, the potential role of mast-cell-driven heparine activating the plasma contact system has been described in a murine model, a protease cascade which proteolyzes high molecular weight kininogen (HK) to liberate bradykinin (BK), a protein with inflamatory effects. Objective: This thesis comprises two studies. The aim of the first study was to determine sequential serum tryptase concentrations during anaphylaxis and to evaluate its potential as a diagnostic marker and its relation to severity, as well as to evaluate risk factors for a severe anaphylaxis. The aim of the second study was to investigate the role of the plasma contact system, the coagulación system and the correlation with tryptase during anaphylaxis. Methods: Two prospective studies including patients with acute anaphylaxis (NDAID/FAAN criteria) attending the Emergency Department. Demographic characteristics, anaphylactic triggers, specific risk factors, clinical characteristics and management of anaphylaxis were recorded. Serum tryptase was measured at 1-2 hours (T1), 4-6 hours (T2) and 12-24 hours (T3) following onset of symptoms and in basal conditions (TB). In the second study, an exploratory research, plasma samples from ten patients with acute anaphylaxis were compared with baseline samples and with ten age- and sex- matched controls. The proteolysis of HK, plasma kalikrein (PK) and factor XII (FXII) were determined by immunoblotting. Mast cell activation and heparin release were determined by serum tryptase levels and anti-Xa activity and the intrisec pathway of the coagulation system with apTT. Results: A total of 102 patients were included in the first study, 63 females, mean age 47.4±19.1 years. Tryptase concentration at T1 (19.3±15.4µg/L) was significantly higher than at T2, T3 and TB (all<11.4µg/L; P<0.0001). Nevertheless, tryptase was not raised in 36.3% of cases. Furthermore, in 60.6% of these patients no changes were observed in tryptase levels comparing T1 and TB (ΔT1-TB =0). Tryptase was more frequently elevated in more severe anaphylaxis (P<0.0001) and positively correlated with the grades of severity (P<0.001, r=0.49). Anaphylaxis was more severe and tryptase concentration was higher when the causative agent was a drug compared to food both at T1 (P=0.045) and at TB (P=0.019). Age and coronary risk factors were associated with more severe anaphylaxis (P=0.001). In the second study, we noted extensive proteolysis of HK in the plasma of all anaphylactic patients at the onset of symptoms but not during remission and in none of 10 controls. Degree of HK breakdown correlated with the severity of anaphylactic reactions and with tryptase levels. All anaphylactic patients also showed activation of FXII and PK but not at baseline or in control patients. The apTT was prolonged in three patients and the levels of anti-Xa were higher during anaphylaxis compared with basal conditions or healthy controls (4 kIE/L, IQR 2.5-5.5 versus 1 kIE/L IQR 0.25-1.75, p < 0.005). Conclusion: Tryptase is a biomarker related to the severity of anaphylaxis. However, it is not an optimal marker, because its concentration remains unaltered in a considerable number of patients during acute anaphylaxis. Old age and coronary risk factors were associated with severe anaphylaxis. Furthermore, an activation of the contact and coagulation system, and an increase of activity of the anti-Xa was demonstrated in the patients.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-11T17:13:30Z No. of bitstreams: 1 HugoCostaNeto_DISSERT.pdf: 13162279 bytes, checksum: 29adac7972f3d85035eb3c3d51febbdb (MD5)
Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-07-14T21:07:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 HugoCostaNeto_DISSERT.pdf: 13162279 bytes, checksum: 29adac7972f3d85035eb3c3d51febbdb (MD5)
Made available in DSpace on 2016-07-14T21:07:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HugoCostaNeto_DISSERT.pdf: 13162279 bytes, checksum: 29adac7972f3d85035eb3c3d51febbdb (MD5) Previous issue date: 2016-02-22
Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq
Dentre os cistos odontog?nicos comumente encontrados na pr?tica cl?nica odontol?gica, os cistos radiculares (CRs) e os cistos dent?geros (CDs) representam conjuntamente os mais frequentes cistos dos ossos gn?ticos. Os cistos odontog?nicos possuem origem inflamat?ria ou de desenvolvimento. No entanto, altera??es inflamat?rias secund?rias podem ser vistas nos ?ltimos. Alguns estudos t?m identificado os mast?citos nessas les?es c?sticas e sua poss?vel rela??o com a angiog?nese. Nesta perspectiva, a presente pesquisa objetivou avaliar e comparar a express?o imunoistoqu?mica do CD34 e da triptase em CDs inflamados e CRs e verificar se os mast?citos influenciam na angiog?nese destas les?es. Para tanto, foram selecionados 20 casos de CDs inflamados e 20 casos de CRs para serem submetidos ? an?lise morfol?gica e imunoistoqu?mica. A imunomarca??o de cada caso foi avaliada de forma quantitativa. Ap?s a identifica??o das ?reas de maior imunorreatividade, foram analisadas a densidade microvascular (DMV), a ?rea microvascular (AMV) e o per?metro microvascular (PMV) mensurados atrav?s da imunoexpress?o do CD34 e a densidade dos mast?citos (DMC) mensurada por meio da imunoexpress?o da triptase, realizadas nas mesmas ?reas dos consecutivos campos representativos de cada caso. A an?lise estat?stica foi realizada atrav?s dos testes de Mann-Whitney, Qui-quadrado de Pearson, Exato de Fisher e Correla??o de Spearman (r), com n?vel de signific?ncia estabelecido em 5% (p < 0,05). Os resultados demonstram diferen?as estatisticamente significativas entre as les?es c?sticas supracitadas em rela??o ? avalia??o da DMC (p < 0,001). Al?m disso, a an?lise da DMV revelou diferen?as estatisticamente significativas entre as les?es c?sticas (p = 0,007) e tamb?m no que se refere ? intensidade do infiltrado inflamat?rio (p = 0,021). Por fim, observou-se nos casos de CDs inflamados, moderada correla??o positiva entre a DMC e a AMV (r = 0,660; p = 0,002), assim como moderada correla??o positiva entre a DMC e o PMV (r = 0,634; p = 0,003). Face ao exposto, pode-se concluir que os mast?citos participam em diferentes etapas da angiog?nese associada ? inflama??o dos CRs e CDs.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PedroPAS.pdf: 6126862 bytes, checksum: 3ae3ec2483d9e09d3a05fcd73782e862 (MD5) Previous issue date: 2008-02-27
Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico
The giant cell fibroma is a benign neoplasm characterized by the presence of mono, bi or multinucleate cells, which can have a connection to the presence of mast cells. This research aims to analyze, descriptively and comparatively, the immunohystochemistry expression of the tryptase in mast cells of the giant cell f ibroma, f ibrous hyperplasia and samples of the normal oral mucosa. Thirty cases of giant cell fibroma, ten cases of fibrous hyperplasia and ten cases of normal oral mucosa were selected for the analysis of the immunohistochemistry expression, determination of the number of present mast cells, as well as their location and shape. It could be stated that there was a statistically signif icant difference (p<0,001) in relation to the quantity of mast cells among other samples analyzed where the giant cell f ibroma presented lesser quantity of mast cell and the hyperplasia showed higher concentration of this cellular type. Although the oral mucosa has presented a higher quantity of mast cells when compared to the giant cells fibroma, these were found in usual locations in the connective tissue in normal tissues. There could be noticed a statistically significant difference in relation to the number of non-granulated mast cells (p<0,001). On the areas of fibrosis, we could observe a statistically signif icant difference (p<0,006) among the samples. In relation to the present mast cells in perivascular location, no statistically signif icant difference was found. On the morphological analysis there was a predominance of oval mast cells. It was concluded that despite of the fact there was a lesser quantity of mast cells present in cases of giant cell f ibroma, they appeared to have a stronger relation to the present giant fibroblasts in this lesions, around 59,62%, being also evidenced a strong relation between these cells and the fibrosis areas in both cases of giant cell f ibroma and f ibrous hyperplasias and samples of normal oral mucosa, used as control group in our study, confirming, this way, the role of the mast cells as fibrinogenous inductor
O fibroma de c?lulas gigantes constitui-se de uma neoplasia benigna, caracterizada pela presen?a de c?lulas gigantes, mono, bi ou multinucleadas, c?lulas estas que podem guardar rela??o com a presen?a de mast?citos. O prop?sito desta pesquisa consistiu em analisar descritiva e comparativamente a express?o imuno-histoqu?mica da triptase em mast?citos de fibroma de c?lulas gigantes, hiperplasia fibrosa e esp?cimes de mucosa oral normal. Foram selecionados 30 casos de fibroma de c?lulas gigantes, 10 casos de hiperplasia fibrosa e 10 casos de mucosa oral normal, para a an?lise da express?o imuno-histoqu?mica, determina??o do n?mero de mast?citos presentes, bem como a sua forma e localiza??o. Constatou-se diferen?a estatisticamente significativa (p<0,001) em rela??o a quantidade de mast?citos entre os esp?cimes analisados, onde o fibroma de c?lulas gigantes apresentou a menor quantidade de mast?citos e a hiperplasia exibiu a maior concentra??o deste tipo celular. Embora a mucosa oral tenha apresentado uma maior quantidade de mast?citos quando comparado com os casos de f ibroma de c?lulas gigantes, estes se encontravam em localiza??es usuais no tecido conjuntivo em tecidos normais. Verif icou-se, diferen?a estatisticamente significativa, no que diz respeito ao n?mero de mast?citos n?o degranulados (p<0,001). Nas ?reas de fibrose, observamos diferen?a estatisticamente signif icativa (p<0,006) entre os esp?cimes. Com rela??o aos mast?citos presentes em localiza??o perivascular n?o se observou diferen?a estatisticamente significativa. Na an?lise morfol?gica verif icou-se uma predomin?ncia de mast?citos ovais. Concluiu-se que embora uma menor quantidade de mast?citos estivesse presente nos casos de fibroma de c?lulas gigantes, estes exibiam maior rela??o com os fibroblastos gigantes presentes nestas les?es em torno de 59,62%, sendo evidenciada tamb?m uma forte rela??o entre estas c?lulas e ?reas de fibrose tanto nos casos de fibroma de c?lulas gigantes como de hiperplasias fibrosas e esp?cimes de mucosa oral normal, utilizados como controle em nosso estudo, confirmando desta forma, o papel dos mast?citos como indutor fibrinog?nico

Proteinase-activated receptors (PAR) are part of a family of G-protein-coupled receptors that are activated by serine proteases via proteolytic cleavage of a specific sequence of amino acids in N-terminal portion, and its activation has been associated with the regulation of different inflammatory phenomena. These receptors were classified from 1 to 4 by order of discovery, have structural similarities but also have differences in the group N-terminal and the serine-protease responsible for cleavage. PAR-2 is expressed in the airways, the epithelium, endothelium and smooth muscle tissue of the lung, trachea and bronchial fibroblasts and inflammatory cells such as mast cells and eosinophils. In recent years, studies have shown the involvement of PAR-2 in the recruitment and activation of leukocytes, however, although there are few studies in the literature showing the presence and activation of PAR-2 in eosinophils, the mechanisms involved in molecular signaling triggered by activation of this receptor by their respective agonists are not well understood. Our objective was to evaluate the role of PAR-2 in the control of eosinophil recruitment in experimental pleurisy, as well as the participation of mast cell tryptase and its importance in inhibiting this phenomenon. The experimental protocols were approved by the animal ethics committee (CEUA / UFMG, 193/2012). After the treatment protocol, mice were sacrificed in a CO2 chamber, and pleural lavage was collected for further analysis in the proper times. One-Way ANOVA followed by Newman-Keuls post-test was used for analysis of cell migration and Student's t test for analysis of western blotting. Intrapleural (i.pl.) injection in naive BALB/c mice with selective agonist of PAR-2 SLIGRL-NH2 (30 g), or mast cell tryptase (300 ng) or ovalbumin (OVA; 1 g) in animals previously sensitized to this antigen, induced eosinophil recruitment into the pleural cavity of these animals. Thus, mice were injected i.pl. with selective antagonist of PAR-2 ENMD1068 (3 g) 15 minutes before the i.pl. injection OVA (1g) in mice immunized; or with mast cell tryptase (300 ng) and eotaxin-1 (100 ng) in naive mice to study the role of the PAR-2 in the recruitment of eosinophils. The ENMD1068 inhibited eosinophilia induced by OVA (97%), by tryptase (87%), and also by eotaxin-1 (61%), suggesting the involvement of PAR-2 activation in the recruitment of eosinophils induced by these stimuli. Otherwise, in mice treated with tryptase (300 ng) we evaluated receptor expression 4, 8, 24 and 48 hours after stimulation i.pl., using western blotting. The results demonstrated increased receptor expression 24 and 48 hours after treatment compared to their respective controls in leukocytes obtained pleural lavage. Furthermore, immuno-histochemical tests have demonstrated co-localization of the receptor PAR-2 in the membrane and cytoplasm of eosinophils and mononuclear cells 24 and 48 hours after i.pl. challenge with tryptase. Once demonstrated the involvement of PAR-2 in eosinophil recruitment induced by tryptase we evaluated the importance of endogenous tryptase to the recruitment of eosinophils in the pleurisy model, and the pre-treatment with APC366 (5 mg/kg), a selective inhibitor of tryptase, decreased the recruitment of eosinophils induced by SLIGRL-NH2 (30 g) and eotaxin-1 (100 ng). In conclusion, our results suggest a role of PAR-2 activation in the control of eosinophils recruitment and thus in the development of the inflammatory response in the pleural cavity. The present study contributes to the understanding of the mechanisms involved in eosinophilia, suggesting the blockage of PAR-2 as a new therapeutic strategy for its control. Financial support: CNPq/CAPES/ FAPEMIG.
Os receptores ativados por proteases (proteinase-activated receptor, PAR) fazem parte de uma família de receptores acoplados à proteína G que são ativados por serino-proteases através da clivagem proteolítica de uma sequência específica de aminoácidos em sua porção N-terminal. Sua ativação vem sendo associada à regulação de diferentes fenômenos inflamatórios. Estes receptores foram classificados de 1 a 4 por ordem de descoberta apresentando similaridade estrutural mas, também possuem diferenças no grupamento N-terminal e da serino-protease responsável pela clivagem. PAR-2 é expresso nas vias aéreas, no epitélio, endotélio e músculo liso do tecido pulmonar, fibroblastos da traqueia e brônquios, e células inflamatórias tais como mastócitos e eosinófilos. Nos últimos anos, estudos têm demonstrado o envolvimento de PAR-2 no recrutamento e na ativação de leucócitos, no entanto, embora existam na literatura alguns estudos mostrando a presença e ativação de receptores PAR-2 em eosinófilos, ainda não estão bem esclarecidos os mecanismos moleculares envolvidos na sinalização desencadeada pela ativação deste receptor pelos seus respectivos agonistas. Nosso objetivo foi avaliar o papel do PAR-2 para o recrutamento de eosinófilos em pleurisia experimental, bem como a participação da triptase de mastócitos e a importância de sua inibição para este fenômeno. Os protocolos experimentais foram aprovados pelo comitê de ética animal (CEUA/UFMG, 193/2012). Após realização do protocolo de tratamento os animais foram sacrificados em câmara de CO2, e o lavado pleural foi coletado para posteriores análises nos tempos adequados. As análises estatísticas utilizadas foram: One-Way ANOVA seguido do pós-teste de Newman-Keuls para as análises de migração celular e Students t test para as análises de western blotting. A injeção intrapleural (i.pl.) em camundongos BALB/c naive com agonista seletivo de PAR-2 SLIGRL-NH2 (30 g), ou triptase de mastócitos (300 ng) ou ovalbumina (1 g), em animais previamente sensibilizados para este antígeno, induziu recrutamento de eosinófilos para a cavidade pleural destes animais. Sendo assim, camundongos foram injetados por via i.pl. com antagonista seletivo de PAR-2 ENMD1068 (3 g) 15 minutos antes da injeção i.pl. de OVA (OVA; 1 g), em camundongos imunizados, ou com triptase de mastócitos (300 ng) ou eotaxina-1 (100 ng) em camundongos naive para estudar o papel de PAR-2 no recrutamento de eosinófilos. O ENMD1068 inibiu a eosinofilia induzida por OVA (97%), por triptase (87%) como também por eotaxina-1 (61%), o que sugere a participação da ativação de PAR-2 no recrutamento de eosinófilos induzido por estes estímulos. De outra forma, em camundongos tratados com triptase (300 ng) foi avaliada a expressão de PAR-2 por western blotting 4, 8, 24 e 48 horas após o estímulo i.pl. demonstrando aumento da expressão do receptor 24 e 48 horas após o tratamento quando comparados aos respectivos controles, em leucócitos obtidos do lavado pleural. Além disso, testes de imuno-citoquímica demonstraram co-localização do receptor PAR-2 na membrana e citoplasma de eosinófilos e células mononucleares 24 e 48 horas após desafio i.pl. com triptase. Uma vez demonstrada a participação do PAR-2 no recrutamento de eosinófilos induzido pela triptase, foi avaliada a importância da triptase endógena para o recrutamento de eosinófilos no modelo de pleurisia, e o pré-tratamento com APC366 (5 mg/kg) via um inibidor seletivo de triptase, diminuiu o recrutamento de eosinófilos induzido pelo SLIGRL-NH2 (30 g) ou eotaxina-1 (100ng). Em conclusão, nossos resultados sugerem um papel de PAR-2 e de sua ativação no controle do recrutamento de eosinófilos, e consequentemente para o desenvolvimento da resposta inflamatória na cavidade pleural. O presente estudo contribui para o entendimento dos mecanismos envolvidos na eosinofilia, sugerindo uma nova estratégia terapêutica para o seu controle, através do bloqueio de PAR-2. Suporte financeiro: CNPq/CAPES/ FAPEMIG.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-11T17:13:29Z No. of bitstreams: 1 RodrigoPorpinoMafra_DISSERT.pdf: 2938922 bytes, checksum: c44070e8d06f2305cff5199e620a1c1c (MD5)
Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-07-15T20:45:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RodrigoPorpinoMafra_DISSERT.pdf: 2938922 bytes, checksum: c44070e8d06f2305cff5199e620a1c1c (MD5)
Made available in DSpace on 2016-07-15T20:45:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodrigoPorpinoMafra_DISSERT.pdf: 2938922 bytes, checksum: c44070e8d06f2305cff5199e620a1c1c (MD5) Previous issue date: 2016-02-16
O carcinoma epiderm?ide de l?ngua oral (CELO) apresenta um comportamento biol?gico agressivo, com elevada propens?o ao desenvolvimento de met?stases nodais. Nesse contexto, a linfangiog?nese ? considerada um fen?meno importante para a dissemina??o das c?lulas tumorais e pode sofrer influ?ncia de est?mulos do microambiente. Os mast?citos t?m sido relacionados ? progress?o de neoplasias malignas, no entanto o seu papel na forma??o de vasos linf?ticos ainda n?o est? bem estabelecido. O prop?sito desta pesquisa foi avaliar poss?veis correla??es entre a densidade linf?tica, a contagem de mast?citos e o perfil clinicopatol?gico em casos de CELO, incluindo o estadiamento cl?nico TNM, a grada??o histol?gica de malignidade (Bryne, 1998) e a presen?a/aus?ncia de met?stases nodais. A amostra foi constitu?da por 50 casos de CELO, dos quais 26 apresentavam met?stase nodal, e os 24 restantes eram isentos de met?stases. A densidade linf?tica foi estabelecida como a m?dia de vasos linf?ticos imunomarcados pelo anticorpo anti-podoplanina (D2-40), identificados em cinco campos microsc?picos (200x). Para a an?lise dos mast?citos, foram quantificadas as c?lulas imunorreativas ao anticorpo anti-triptase, em cinco campos (400x). Destaca-se que ambas as imunomarca??es foram analisadas no centro tumoral e no front de invas?o. A densidade linf?tica intratumoral (DLI) foi superior nos casos em est?gios cl?nicos avan?ados (III-IV), quando comparados ?queles em est?gios iniciais (I-II), assim como nos casos metast?ticos em rela??o aos n?o-metast?ticos (p<0,05). N?o houve diferen?as estatisticamente significativas entre os casos de baixo grau e alto grau de malignidade no tocante ? DLI (p>0,05). De outro modo, a densidade linf?tica peritumoral (DLP) e as contagens de mast?citos n?o demonstraram rela??es significativas com nenhum dos par?metros clinicopatol?gicos avaliados (p>0,05). Tamb?m n?o foram encontradas correla??es significativas entre as densidades linf?ticas e as contagens de mast?citos, seja na regi?o intratumoral (r = -0,004; p=0,977) ou na peritumoral (r = -0,154; p=0,285). Os resultados do presente estudo sugerem que os vasos linf?ticos intratumorais contribuem na progress?o do CELO. Por sua vez, a DLP pode n?o ser suficiente para justificar diferen?as no comportamento biol?gico do CELO, o que sustenta a hip?tese de envolvimento de outros mecanismos na dissemina??o metast?tica das c?lulas malignas, que complementariam os efeitos da linfangiog?nese. Os mast?citos, ainda que realizem diversas fun??es pr?- e antitumorais, parecem n?o influenciar diretamente o potencial de agressividade do CELO. Adicionalmente, ? poss?vel que a quantidade destas c?lulas n?o seja um fator determinante para a forma??o de vasos linf?ticos.
Oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC) has an aggressive biological behavior, with a high propensity for the development of lymph node metastases. In this context, lymphangiogenesis is considered an important phenomenon for the spread of tumor cells and may be influenced by microenvironmental stimuli. Mast cells have been implicated in tumor progression, although their influence in the formation of lymphatic vessels is not well established. The aim of this study was to analyze, in a case series of OTSCC (n=50), possible correlations between lymphatic vessel density (LVD), mast cell count and clinicopathological features, including tumor-node-metastasis (TNM) stage, histological grade of malignancy (Bryne, 1998), and nodal metastasis. LVD was established as the mean number of lymphatic vessels immunostained by anti-podoplanin (D2-40) antibody, identified in five microscopic fields (200x). For the analysis of mast cells, tryptase-immunoreactive cells were quantified in five fields (400x). Both immunostainings were analyzed in the tumor center and invasion front. Intratumoral lymphatic density (ILD) was higher in cases in advanced clinical stages (III-IV), compared to those in initial stages (I-II), as well as in metastatic cases in respect of non-metastatic (p<0,05). There were no statistically significant differences between low-grade and high-grade malignancy cases with respect to ILD (p>0,05). Peritumoral lymphatic density (PLD) and mast cell counts showed no significant relations with any of the clinicopathological parameters evaluated (p>0,05). Also there were no significant correlations between LVD and mast cell counts, whether in intratumoral (r = -0,004; p=0,977) or peritumoral region (r = -0,154; p=0,285). The results of the present study suggest that intratumoral lymphatic vessels may contribute in part to the progression of OTSCC, although PLD may be insufficient to justify differences in biological behavior. This supports the hypothesis of involvement of other mechanisms in metastatic spread of malignant cells, which could complement the effects of lymphangiogenesis. Although mast cells perform several pro- and antitumoral functions, they do not appear to directly influence aggressiveness of OTSCC. In addition, the quantity of these cells may not be essential for lymphatic vessel formation.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
Gout is characterized by the deposition of monosodium urate (MSU) crystals. Despite being one of the most painful forms of arthritis, gout and the mechanisms responsible for its acute attacks are poorly understood. In the present study, we found that MSU caused dose-related nociception (DE50=0.04 (0.01-0.11) mg/paw) and edema (DE50=0.08 (0.04-0.16) mg/paw) when injected into the hind paw of rats. Treatment with the selective TRPV1 receptor antagonist SB366791 largely inhibited nociceptive and edematogenic responses to MSU. Moreover, the desensitization of capsaicin-sensitive afferent fibers as well as the pretreatment with the tachykinin NK1 receptor antagonist RP 67580 also significantly reduced MSU-induced nociception and edema. Once MSU was found to induce mast cell stimulation, we investigated the participation of these cells on MSU effects. Prior degranulation of mast cells by repeat treatment with compound 48/80 decreased MSU-induced nociception and edema or histamine and serotonin levels in the injected tissue. Moreover, pretreatment with the mast cell membrane stabilizer cromolyn effectively inhibited nociceptive and edematogenic responses to MSU. MSU induced a release of histamine, serotonin and tryptase in the injected tissue, confirming mast cell degranulation Furthermore, the antagonism of histaminergic H1 and serotoninergic receptors decreased the edema, but not the nociception, of MSU. Finally, the inhibition of tryptase activity was capable of largely reducing either MSU-induced nociception or edema. Collectively, the present findings demonstrate that MSU produces a nociceptive and edematogenic response mediated by TRPV1 receptor activation and mast cell degranulation.
A gota é caracterizada pela deposição de cristais de urato monossódico (MSU) nas articulações. Apesar de ser um dos mais dolorosos tipos de artrite, os mecanismos responsáveis pela indução da dor durante os ataques agudos de gota são pouco entendidos. No presente estudo, objetivamos investigar o papel do receptor TRPV1 na nocicepção e edema induzidos por cristais de MSU em ratos. Assim, demonstramos que o MSU causa nocicepção (DE50=0.04 (0.01-0.11) mg/pata) e edema dependentes da dose (DE50=0.08 (0.04-0.16) mg/pata) quando injetado na pata dos ratos. O tratamento com o antagonista seletivo do receptor vanilóide TRPV1 SB 366791 inibiu significativamente as respostas nociceptiva e edematogênica causadas pelo MSU. De maneira semelhante, a dessensibilização de fibras aferentes sensíveis a capsaicina bem como o tratamento com o antagonista do receptor para taquicinina NK1 RP67580 também reduziram significativamente a nocicepção e o edema induzidos pelo MSU. Sabendo que estudos prévios demonstraram que MSU induz a estimulação de mastócitos, nós investigamos a participação destas células nos efeitos do MSU. A desgranulação prévia de mastócitos por tratamento repetido com o composto 48/80 reduziu a nocicepção e o edema induzidos pelo MSU assim como os níveis de histamina e serotonina no tecido injetado. Adicionalmente, o tratamento com o estabilizador de membrana de mastócitos cromolina, reduziu efetivamente as respostas nociceptivas e edematogênicas ao MSU. A administração de MSU induziu a liberação de histamina, serotonina e triptase no tecido injetado, confirmando a desgranulação mastocitária. Além disso, o antagonismo de receptores histaminérgicos H1 e serotoninérgicos, reduziram o edema, mas não a nocicepção causados pelo MSU. Finalmente, a inibição da atividade da triptase foi capaz de reduzir amplamente a nocicepção e o edema induzidos pelo MSU. Coletivamente, nossos resultados demonstram que o MSU produz uma resposta nociceptiva e edematogênica mediada pela ativação do receptor TRPV1 e pela desgranulação de mastócitos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-24Bitstream added on 2014-06-13T19:48:40Z : No. of bitstreams: 1 alves_rcp_me_jabo.pdf: 2216450 bytes, checksum: 3a9202bb2a67f1b43fa4f21f4c14b6ea (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A água é usada para os mais variados fins: abastecimento, irrigação, geração de energia elétrica, lazer, aqüicultura, local de despejo de efluentes domésticos e industriais, etc. No caso da aqüicultura, a criação em tanques-rede introduz diretamente no corpo d’água uma grande quantidade de matéria orgânica. Essa atividade pode contribuir para acelerar os processos de eutrofização do meio devido aos aportes de nutrientes e material em suspensão provenientes, principalmente, do excedente de alimento, fezes e excretas dos peixes. Estudos sobre os impactos causados por essa atividade podem fornecer dados para uma gestão ambiental que permita otimizar o uso múltiplo dos recursos hídricos sem que haja maiores danos ao ambiente aquático. Este trabalho procurou fazer uma caracterização limnológica e uma avaliação do impacto da criação em tanques-rede de tilápia (Orechromis sp.) no córrego da Arribada (Bacia do Baixo-Tietê), que é represado pelo reservatório da Usina Hidrelétrica de Nova Avanhandava, no Rio Tietê, SP. A área destinada à piscicultura é de 4ha de espelho d’água e foi projetada para 200 tanques-rede com volume de 18m3 cada. Em sete pontos distribuídos estrategicamente na região onde foi instalado o sistema de cultivo foram analisados as seguintes variáveis: temperatura, concentração e saturação de oxigênio dissolvido, pH, transparência, e taxas de sedimentação de fósforo total, ortofosfato, nitrogênio amoniacal, nitrito, nitrato e material em suspensão por meio de câmaras de sedimentação. Os resultados mostraram mais padrões temporais que espaciais, com queda acentuada na concentração e saturação de oxigênio dissolvido e aumento nas taxas de sedimentação de fósforo total e nitrato. Apesar do impacto causado apresentar tendências preocupantes, concluiu-se que neste estudo de caso, a produção em tanques-rede é viável...
Water is used to multiple uses: water supply, irrigation, power generation, leisure, aquaculture, place of discharge of home and industrial wastes, etc. In aquaculture, cage fish farming releases a great amount of organic matter directly into the water body. This activity can accelerate the water eutrophication process due to the input of dissolved nutrients and suspended matter, mainly by diet wastes, feces and fish excreta. Studies about environmental impacts caused by this activity can provide a support for a better environmental management that allows the use of water resources without over degradation of the ecosystem. This work aimed to make a limnological characterization and evaluation of the environmental impact of cage culture of Tilapia (Oreochromis sp.) in the stream of Arribada (Tietê river basin - Brazil). This stream is partially impounded by the reservoir of the hydroelectric power station of Nova Avanhandava. The culture is placed in an area of 4ha and it is planned the installation of 200 cages of 18 m3 each one. Till December 2004, there were 180 cages, each one with 1500 to 1800kg of fish production per harvest period. Seven sampling points were strategic placed in the area where was installed the cage fish farming to analise temperature, concentration and saturation of dissolved oxigen, pH, depth and total phosphorus, ortophosfate, ammoniacal nitrogen, nitrite, nitrate and susppended matter sedimentation ratios. The results have shown more temporal then spacial patterns, with drops in concentration and saturation of dissolved oxigen in water and increase of total phosphorus and nitrate sedimentation ratios. Despite of the warning tendences, we concluded that in this study of case, the impact caused by the activity, the cage fish farming is possible, since some precautions shall be taken to avoid degradation of the water body.

Orientador: Ana Eliza Baccarin Leonardo
Banca: Abílio Lopes de Oliveira Neto
Banca: Antonio Fernando Monteiro Camargo
Resumo: A água é usada para os mais variados fins: abastecimento, irrigação, geração de energia elétrica, lazer, aqüicultura, local de despejo de efluentes domésticos e industriais, etc. No caso da aqüicultura, a criação em tanques-rede introduz diretamente no corpo d'água uma grande quantidade de matéria orgânica. Essa atividade pode contribuir para acelerar os processos de eutrofização do meio devido aos aportes de nutrientes e material em suspensão provenientes, principalmente, do excedente de alimento, fezes e excretas dos peixes. Estudos sobre os impactos causados por essa atividade podem fornecer dados para uma gestão ambiental que permita otimizar o uso múltiplo dos recursos hídricos sem que haja maiores danos ao ambiente aquático. Este trabalho procurou fazer uma caracterização limnológica e uma avaliação do impacto da criação em tanques-rede de tilápia (Orechromis sp.) no córrego da Arribada (Bacia do Baixo-Tietê), que é represado pelo reservatório da Usina Hidrelétrica de Nova Avanhandava, no Rio Tietê, SP. A área destinada à piscicultura é de 4ha de espelho d'água e foi projetada para 200 tanques-rede com volume de 18m3 cada. Em sete pontos distribuídos estrategicamente na região onde foi instalado o sistema de cultivo foram analisados as seguintes variáveis: temperatura, concentração e saturação de oxigênio dissolvido, pH, transparência, e taxas de sedimentação de fósforo total, ortofosfato, nitrogênio amoniacal, nitrito, nitrato e material em suspensão por meio de câmaras de sedimentação. Os resultados mostraram mais padrões temporais que espaciais, com queda acentuada na concentração e saturação de oxigênio dissolvido e aumento nas taxas de sedimentação de fósforo total e nitrato. Apesar do impacto causado apresentar tendências preocupantes, concluiu-se que neste estudo de caso, a produção em tanques-rede é viável ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Water is used to multiple uses: water supply, irrigation, power generation, leisure, aquaculture, place of discharge of home and industrial wastes, etc. In aquaculture, cage fish farming releases a great amount of organic matter directly into the water body. This activity can accelerate the water eutrophication process due to the input of dissolved nutrients and suspended matter, mainly by diet wastes, feces and fish excreta. Studies about environmental impacts caused by this activity can provide a support for a better environmental management that allows the use of water resources without over degradation of the ecosystem. This work aimed to make a limnological characterization and evaluation of the environmental impact of cage culture of Tilapia (Oreochromis sp.) in the stream of Arribada (Tietê river basin - Brazil). This stream is partially impounded by the reservoir of the hydroelectric power station of Nova Avanhandava. The culture is placed in an area of 4ha and it is planned the installation of 200 cages of 18 m3 each one. Till December 2004, there were 180 cages, each one with 1500 to 1800kg of fish production per harvest period. Seven sampling points were strategic placed in the area where was installed the cage fish farming to analise temperature, concentration and saturation of dissolved oxigen, pH, depth and total phosphorus, ortophosfate, ammoniacal nitrogen, nitrite, nitrate and susppended matter sedimentation ratios. The results have shown more temporal then spacial patterns, with drops in concentration and saturation of dissolved oxigen in water and increase of total phosphorus and nitrate sedimentation ratios. Despite of the warning tendences, we concluded that in this study of case, the impact caused by the activity, the cage fish farming is possible, since some precautions shall be taken to avoid degradation of the water body.
Mestre

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2016-12-19T17:52:15Z No. of bitstreams: 2 Tese - Maurício Barcelos Costa - 2014.pdf: 740997 bytes, checksum: fec1f12612ff6a41fbbbee9640600a35 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)
Rejected by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com), reason: Júlio, falta o arquivo da tese. on 2016-12-26T12:31:54Z (GMT)
Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-01-02T15:41:57Z No. of bitstreams: 2 Tese - Maurício Barcelos Costa - 2014.pdf: 10731375 bytes, checksum: d59433128feb9bc7facacb81cb311a98 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)
Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-03T09:40:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Maurício Barcelos Costa - 2014.pdf: 10731375 bytes, checksum: d59433128feb9bc7facacb81cb311a98 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)
Made available in DSpace on 2017-01-03T09:40:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Maurício Barcelos Costa - 2014.pdf: 10731375 bytes, checksum: d59433128feb9bc7facacb81cb311a98 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-02-26
Leprosy is a complex, chronic, infectious dermato-neurological disease that affects the skin and peripheral nerves especially during acute immune-inflammatory episodes known as type 1/T1R and type 2/T2R reactions. There is no experimental model for leprosy and leprosy skin lesions have been extensively used to unravel its multifaceted immunopathological mechanisms.This study investigated in situ expression of two distinct cell populations with important immunoregulatory roles: T regulatory (Treg) cells and mast cells (MC) in diverse skin diseases with emphasis on leprosy T1R and T2R. For the Treg cell study, 154 skin biopsies from 114 participants belonging to 3 groups were investigated: 1. Leprosy (n=74), 56 T1R (28-paired biopsies reactionfree/reactional from the same patient, 28 single reactional biopsy), 18 T2R (12 pairedreaction-free/reactional lesions, 6 single reactional biopsy); 2. Dermatoses: (n=29) noninfectious and cutaneous infectious diseases; 3. Normal controls: skin fragment of mammoplasty from healthy females that had cosmetic surgery. Double immunohistochemical detection of Treg cells was performed with automated platform for CD25 and Foxp3 staining. Quantifications of double immunostained Treg cells was performed (values expressed by mm2 ) blinded to the participants’ clinical status. For the mast cell study 80 skin biopsies from 3 groups were investigated: 40 newly diagnosed untreated leprosy patients (18 reaction-free, 11 T1R, 11 T2R), 29 patients with other dermatoses (the same as for Treg study) and 11 normal skins. Toluidine blue stained intact and degranulated MC counts/mm2 ; streptavidin-biotin-peroxidase immunostaining was used to detect tryptase/try+ and chymase/chy+ MCs and their density (median optical density) was evaluated. Results: Treg study: Not one CD25+ Foxp3+ Treg cell was seen in any of the 11 normal skin sections while variable numbers were detected in skin diseases (p<0.0001); the number of double stained cells was higher in infectious compared to non-infectious diseases (p=0.008). Treg cell numbers were comparable between leprosy and other infectious dermatoses (p=0.157) Treg cell counts in reactional lesions were higher than in reaction-free leprosy lesions (p<0.002). Paired biopsies of T1R or T2R reactional/reaction-free lesions showed xxvii increased numbers of Treg during T1R compared to reaction-free lesions from the same patient (p< 0.001). Treg cell median in T1R developed during MDT was slightly higher compared to T1R developed at diagnosis in naïve patients (p=0.047). There was a trend in increasing Treg cell numbers from the tuberculoid to borderline-lepromatous form, which showed the highest median value of Tregs, however this difference was not significant (p>0.8). Mast cell study: Infectious and non-infectious skin lesions showed higher numbers of degranulated than intact MC both for leprosy and other dermatoses, compared to normal skin. The numbers of degranulated MC were higher than intact MC regardless of the leprosy form (from tuberculoid/TT to lepromatous/LL), regardless of the occurrence of leprosy reactions (reactional and reaction-free) and regardless of the type of reaction (T1R/T2R). Try+ MC numbers and density were higher than chy+ MC in leprosy, in reaction-free and reactional lesions, particularly in T2R, but not in other dermatoses. Conclusions: Higher Treg numbers seen in T1R suggest Treg role in suppressing the exacerbated cell-mediated phenomenon that causes T1R. Differential expression/ of try+ and chy+ MC subsets was seen in leprosy compared to other skin diseases and to normal skin. However, neither leprosy form nor leprosy reaction was associated with MC changes in lesions suggesting that the Mycobacterium leprae infectious process per se dictates MC expression in leprosy skin lesions.
A hanseníase é uma complexa doença dermato-neurológica, crônica, de causa infecciosa que afeta a pele e os nervos periféricos, especialmente durante os episódios imunoinflamatórios agudos conhecidos com reações tipo 1/RT1 e tipo 2/RT2. Não existe modelo experimental para hanseníase e as lesões de pele têm sido extensivamente usadas para desvendar os multifacetados mecanismos imunopatológicos associados com a doença. Este estudo investigou a expressão in situ de duas distintas populações celulares que apresentam importante papel imunorregulatório: células Treg (Treg) e mastócitos (MC) em pele normal e diversas doenças cutâneas com ênfase nas reações hansênicas RT1 e RT2. Para o estudo de Tregs foram utilizadas 154 biópsias cutâneas de 114 participantes de três grupos: 1. Hanseníase (n=74), 56 RT1 (28-biópsias pareadas do mesmo paciente sem reação/durante reação, 28 biópsias únicas de RT1), 18 RT2 (12 biópsias pareadas sem reação/durante reação, 6 biópsias únicas de RT2); 2. Dermatoses: (n=29) doenças cutâneas não infecciosas e infecciosas. Controles Normais: fragmentos de peles obtidos de mamoplastias eletivas em mulheres saudáveis. Imunomarcação dupla CD25+ Foxp3+ de células Treg foi realizada em plataforma automatizada. Quantificação das células Treg duplo positivas foram feitas sem conhecimento da condição clínica do paciente (valores expressos em mm2 ). Para o estudo dos MC 80 biópsias de 3 grupos foram investigadas: 40 pacientes com hanseníase recém diagnosticados não tratados (18 sem reação, 11 RT1, 11 RT2), 29 pacientes com outras dermatoses e 11 biópsias de pele normal. Quantificação de MC intactos e desgranulados corados por azul de toluidina/mm2 ; imunomarcação streptavidina-biotina-peroxidase foi empregada para detectar MC triptase/try+ e chimase/chy+ e a densidade ótica (mediana da densidade ótica) foi avaliada. Resultados: Estudo das Tregs: Nenhuma célula Treg CD25+ Foxp3+ foi identificada em nenhuma das 11 amostras de pele normal, enquanto um número variável de Tregs foi identificado nas diversas doenças cutâneas (p<0.0001); o número de células Treg duplo positivas foi maior nas doenças infecciosas comparado com as não-infecciosas (p=0.008). Medianas de Treg entre hanseníase e outras doenças infecciosas foram semelhantes (p=0.157). Quantificação de Tregs em lesões reacionais foram maiores do que as sem reação (p<0.02). Nas biópsias pareadas de lesões de xxv RT1/sem reação ou RT2/sem reação, números maiores de Treg foram vistos durante a RT1 quando comparados com a não reacional do mesmo paciente (p< 0.001). Mediana de Treg em RT1 desenvolvidas durante MDT foi ligeiramente superior comparada a RT1 desenvolvida em pacientes sem de tratamento (p=0.047). Observou-se uma tendência de aumento no número das Tregs do polo tuberculoide em direção ao lepromatoso, mais especificamente até a forma borderline-lepromatosa que apresentou a maior mediana da quantificação de Treg, entretanto esta diferença não foi estatisticamente significativa (p>0.8). Estudo dos Mastócitos: lesões cutâneas de origem infecciosa e não infecciosa mostraram números aumentados de mastócitos desgranulados do que intactos tanto na hanseníase como nas outras dermatoses quando comparados com pele normal. Os números de mastócitos (MC) desgranulados foram maiores do que intactos, independente da forma de hanseníase (do polo tuberculoide/TT ao lepromatoso/LL), independente da ocorrência de reações hansênicas (lesão reacional/sem reação) e independente do tipo de reação (RT1/RT2). Número e densidade de mastócito triptase positivo (MC try+ ) estão aumentados em relação aos quimase positivo (MC chy+ ) na hanseníase, em pacientes com e sem reação, particularmente na RT2, mas não nas outras dermatoses. Conclusões: aumento nas Treg detectados durante RT1 sugerem papel supressor dessas células em eventos associados à resposta imune celular exacerbada, responsáveis pela RT1. Expressão diferencial das subpopulações de MC try+ e chy+ foi observada na hanseníase em relação a outras doenças cutâneas e pele normal. Entretanto, nem a forma da hanseníase, nem a ocorrência de reação hansênica, estava associada a mudanças nas subpopulações de MC nas lesões sugerindo que o processo infeccioso pelo Mycobacterium leprae per se direciona a expressão de MC nas lesões cutâneas da hanseníase.

Submitted by HELENA RIBEIRO SOUZA null (helena.riber@hotmail.com) on 2016-08-11T15:45:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Helena R Souza.pdf: 28021261 bytes, checksum: cfa8bae6ea9a632c8ff6462cc740385a (MD5)
Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-12T19:10:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 souza_hr_me_sjrp.pdf: 28021261 bytes, checksum: cfa8bae6ea9a632c8ff6462cc740385a (MD5)
Made available in DSpace on 2016-08-12T19:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 souza_hr_me_sjrp.pdf: 28021261 bytes, checksum: cfa8bae6ea9a632c8ff6462cc740385a (MD5) Previous issue date: 2016-07-29
O processo de reparo de lesões térmicas pode ser dividido nas fases de inflamação, proliferação e remodelação. No seu processo de desgranulação, os mastócitos (MCs) liberam fatores quimiotáticos, citocinas e proteases, como triptase e quimase, para o meio extracelular, contribuindo na degradação da matriz lesada e síntese de uma nova. Além disso, estudos indicam que os MCs armazenam a proteína anti-inflamatória anexina A1 (AnxA1), envolvida na inflamação, apoptose, crescimento e diferenciação celular. Contudo, não se conhecem relatos da expressão e função da AnxA1 no reparo de queimaduras. Diante disso, os objetivos desse estudo foram quantificar e avaliar a ativação, acúmulo de histamina e heterogeneidade para triptase e quimase dos MCs, bem como, verificar a expressão da AnxA1, quantificar macrófagos, e dosar as citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e a quimiocina MCP-1 em modelo de queimadura de segundo grau em ratos Wistar. Para o desenvolvimento da lesão os animais foram anestesiados e submetidos à aplicação de um bloco metálico aquecido no dorso. Os animais foram divididos em grupos controles e tratados com pomada de sulfadiazina de prata a 1% (SDP 1%). As análises foram realizadas em 3, 7, 14 e 21 dias após injúria, e também em fragmentos de pele normal. Avaliações macroscópicas e histopatológicas da cicatrização confirmaram as características de queimadura de segundo grau e a melhor evolução da cicatrização nos animais tratados. A quantificação dos MCs mostrou grande quantidade de células intactas na pele normal e redução significante dessas células nas fases de inflamação (dia 3) e de proliferação (dia 7). Nas fases de proliferação de matriz (dia 14) e remodelação (dia 21) foi verificada maior quantidade de MCs nos animais controles e essas células foram observadas, principalmente, desgranuladas no dia 14 e intactas no dia 21. Ainda, no grupo tratado aos 7 dias e em ambos os grupos aos 14 dias, foi encontrada diferença entre MCs com grande quantidade de histamina e MCs totais. A análise da heterogeneidade dos MCs revelou maior número de MCs positvos para triptase (MCT) do que para quimase (MCQ) na pele normal e redução de MCTs e MCQs nas primeiras fases da cicatrização. Contudo, na fase de remodelação, muitos MCQs foram observados no grupo controle. A expressão da AnxA1 foi fraca na pele normal com aumento nas fases de inflamação e de proliferação. Aos 21 dias após lesão, a expressão da AnxA1 foi maior nos animais tratados com SDP 1%, no estroma e também em regiões epiteliais próximas à neogênese dos anexos cutâneos. As análises das citocinas mostraram aumento das pró-inflamatórias TNF-α, IL-1β e IL-6, e da citocina anti-inflamatória IL-10, nas fases iniciais do reparo, especialmente nos dias 3 e 7. O mesmo foi observado com relação a quimiocina MCP-1 e a quantificação de macrófagos. Nossos resultados evidenciaram diferenças no número de MCs e na imunomarcação da AnxA1 entre os grupos estudados, moduladas pelo tratamento com a SDP 1% e indicam que essas células e proteínas podem ser alvos terapêuticos no processo de regeneração de queimaduras.
The repair process of thermal injury can be divided into phases of inflammation, proliferation and remodeling. The mast cells (MCs) in their degranulation process, release chemotactic factors, cytokines and proteases, as tryptase and chymase, to the extracellular environment contributing to the degradation of damaged matrix and synthesis of a new one. Moreover, studies indicate that MCs store the antiinflammatory protein annexin A1 (AnxA1) which involved in inflammation, apoptosis, growth and cell differentiation. However, there are no known reports of the expression and function of AnxA1 in burns repair. Thus, the objectives of this study were to quantify, assess the activation, histamine accumulation and heterogeneity for tryptase and chymase of MCs, as well as, check the expression of AnxA1, associated with macrophages quantification and the levels of TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 and MCP-1 in a second degree burn model in rats. For the development of the lesions, animals were anesthetized for applying a water-heated metal block in the dorso. The animals were divided into control and treated or not with the cream of silver sulfadiazine 1% (SDP 1%). The analyzes were performed on 3, 7, 14 and 21 days after injury, and also in normal skin fragments. Macroscopic and histopathological evaluations of healing confirmed the burning characteristics of second degree and the better progress of wound repair in treated animals. Quantification of MCs showed large amount of intact cells in normal skin and a significant reduction of these cells in the stages of inflammation (day 3) and proliferation (day 7). In the phases of matrix proliferation (day 14) and remodeling (day 21) it was observed increased amount of MCs, only in the control animals, and these cells were mainly degranulated on day 14, but intact on day 21. Also, in the treated group on day 7 and in both groups on day 14, it was found difference between MCs with large amounts of histamine and total MCs. The heterogeneity analysis revealed more MCs positves for tryptase (MCT) than for chymase (MCC) on normal skin and reduced MCTs and MCQs in the early stages of healing. However, in the remodeling phase, many MCCs were observed in the control group. The expression of AnxA1 was low in normal skin and increased in the stages of inflammation and proliferation. On 21 days after injury, the expression of AnxA1 was higher in animals treated with SDP 1% in the stroma and epithelial cells especially in regions close to neogenesis of skin attachments. Analysis of the inflammatory mediators showed an increase pro-inflammatory TNF-α, IL-1β and IL-6 and anti-inflammatory IL-10 cytokines in the early stages of the repair, especially on days 3 and 7. The same was observed for MCP-1 chemokine and quantification of macrophages. Our results showed differences in the number of MCs and AnxA1 expression between groups, that were modulated by treatment with the SDP 1%, indicating that these cells and protein can be used as therapeutic targets in burns regeneration process.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Recent studies have indicated that nearly half of all surgical patients present a picture of moderate to severe pain what become important to understand the mechanisms involved postoperative pain to be better treat it. Previous studies have shown that incisions can cause mast cell degranulation. Thus, the aim of this study was to investigate the involvement of mast cells and its inflammatory mediators, histamine, serotonin and tryptase in a model of postoperative pain in mice. The depletion of mast cell mediators produced by repeated pre-treatment with compound 48/80 (1, 3, 10 and 10 μg/paw), that promote mast cell degranulation, prevented postoperative nociception (98 ± 23% of inhibition) and reduced histamine and serotonin levels (88 ± 4% and 68 ± 10%, respectively) and tryptase activity (82 ± 14% of reduction) in paw tissue. Furthermore, plantar surgery produced immense mast cell degranulation, as assessed by histology and confirmed by the increased levels of serotonin (three fold higher) and histamine (fifteen fold higher) and by increased activity of tryptase (two fold higher) in the perfused tissue after surgery. Accordingly, pre-treatment with the mast cell membrane stabilizer cromoglycate (200 μg/paw, i.pl.) prevented mechanical allodynia (inhibition of 96 ± 21%) and an increase in histamine (44 ± 10% of inhibition) and serotonin (73 ± 5% of inhibition) levels and prevented the tryptase release (100% of inhibition) induced by plantar surgery. Finally, local treatment with H1 (promethazine, 100 μg/paw, i.pl.), 5-HT3 (ondansetron, 10 μg/paw, i.pl.), 5-HT2A (ketanserin, 5 μg/paw, i.pl.) or PAR-2 (ENMD-1068, 10-100 nmol/paw) receptor antagonists or with the tryptase inhibitor (gabexate, 0.01-1 nmol/paw) partially decreased postoperative nociception in mice. Thus, mast cell activation mechanisms as well as release of mast cells inflammatory mediators and activation of its respective receptors are interesting targets for the development of novel therapies to treat postoperative pain.
Estudos recentes indicam que praticamente a metade de todos os pacientes submetidos à procedimentos cirúrgicos apresentam um quadro de dor moderada à severa, o que torna importante entender os mecanismos envolvidos na dor pós-operatória para melhor tratá-la. Dados da literatura demonstram que incisões podem causar a degranulação de mastócitos. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o envolvimento dos mastócitos e seus mediadores inflamatórios, serotonina, histamina e triptase, em um modelo de dor pós-operatória em camundongos. A depleção dos mediadores dos mastócitos produzida pelo pré-tratamento repetido com o composto 48/80 (1, 3, 10 e 10 μg/pata), que promove degranulação de mastócitos, preveniu a nocicepção pós-operatória (98 ± 23% de inibição) e reduziu os níveis de histamina e serotonina (88 ± 4 % e 68 ± 10%, de redução, respectivamente) e a atividade da triptase (82 ± 14% de redução) no tecido da pata. Além disso, a cirurgia plantar produziu grande degranulação dos mastócitos, como avaliado por histologia e confirmado pelo aumento dos níveis de serotonina (três vezes maior) e histamina (quinze vezes maior) e pelo aumento na atividade da triptase (duas vezes maior) no perfusato tecidual após a cirurgia. O pré-tratamento com o estabilizador da membrana celular dos mastócitos, cromoglicato (200 μg/pata, i.pl.), preveniu a nocicepção mecânica (inibição de 96 ± 21%) e o aumento dos níveis de histamina (44 ± 10% de inibição) e serotonina (73 ± 5% de inibição), bem como preveniu a liberação de triptase (100% de inibição) induzida pela cirurgia plantar. Finalmente, o tratamento local com os antagonistas dos receptores H1 (prometazina, 100 μg/pata, i.pl.), 5-HT3 (ondansetrona, 10 μg/pata, i.pl.), 5-HT2A (cetanserina, 5 μg/pata, i.pl.) ou PAR-2 (ENMD-1068, 10-100 nmol/pata) ou com o inibidor da triptase (gabexato, 0,01-1 nmol/pata) reduziu parcialmente a dor pós-operatória em camundongos. Assim, os mecanismos de ativação de mastócitos, bem como a liberação dos seus mediadores inflamatórios e conseqüente ativação dos seus respectivos receptores são alvos interessantes para o desenvolvimento de novas terapias para tratar a dor pós-operatória.

Submitted by Programa de Pós-Graduação em Odontologia Saúde (mestrodo@ufba.br) on 2017-04-03T14:12:58Z No. of bitstreams: 1 PDF Final.pdf: 4765427 bytes, checksum: ae3f93ce46ff32b7ce466869740090de (MD5)
Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-29T14:28:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF Final.pdf: 4765427 bytes, checksum: ae3f93ce46ff32b7ce466869740090de (MD5)
Made available in DSpace on 2017-06-29T14:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF Final.pdf: 4765427 bytes, checksum: ae3f93ce46ff32b7ce466869740090de (MD5)
FAPESB
O presente trabalho teve como objetivo estudar, por meio da imunohistoquímica, a participação de componentes celulares estromais a exemplo dos mastócitos (mast cell triptase), miofibroblastos (alfa-SMA) e macrófagos (CD163) e componentes vasculares (CD34 e D2-40) em uma série de tumores odontogênicos queratocísticos (TOQ), na tentativa de fornecer subsídios para compreender a interação entre esses componentes e o comportamento biológico distinto desta lesão. Para fins comparativos, cistos radiculares (CRs) e folículos pericoronários (FPs) também foram incluídos. A amostra foi composta por 30 TOQs, 15 CRs e 07 FPs. Para a avaliação dos mastócitos, miofibroblastos e macrófagos, foram quantificadas as células imunorreativas aos marcadores mast cell triptase, alfa-SMA e CD163, respectivamente, em 10 campos (400x). Os índices angiogênico e linfangiogênico foram avaliados por meio da densidade microvascular (MVD) e densidade microvascular linfática (MVDL) dos microvasos marcados, respectivamente, pelos marcadores CD34 e D2- 40. Foi utilizado o teste ANOVA com pós-teste de correção de Tukey, para análise estatística entre os marcadores segundo o tipo de lesão. Para a análise da correlação entre os marcadores dentro da mesma lesão, utilizamos a correlação de Pearson. Para a associação, no TOQ, entre os marcadores e a presença de inflamação, utilizamos o Teste T de Student. A análise da expressão do marcador mast cell triptase revelou existir diferenças significativas (p<0,05) entre a densidade de células mastocitárias presentes nos CRs (22,7) em relação aos FPs (1,23) e TOQs (7,39), e entre a densidade de mastócitos presentes no TOQs e FPs. Houve também diferença significativa (P<0,05) entre a densidade de miofibroblastos em TOQs (29,25) em relação aos CRs (4,66) e os FPs (1,50). A diferença da densidade de miofibroblastos entre os CRs e FPs não foi significativa (p>0,05). A respeito dos macrófagos, não houve diferenças significativas (p= 0,084) entre as densidades de macrófagos presentes nos TOQs (2,31), CRs (1,42) e FPs (0,14). Na avaliação do índice angiogênico, não houve diferenças significativas da MVD entre as três lesões estudadas. No entanto, para o índice linfangiogênico, houve diferença significativa (p<0,05) entre a MVDL presentes nos TOQs (11,64) em relação aos CRs (4,19) e aos FPs (0,167). A diferença entre a MVDL dos CRs em relação aos FPs não foi estatisticamente significante (p>0,05). Não foi encontrada associação significativa (p>0,05) entre os marcadores estudados com a presença de inflamação no TOQ. No presente trabalho, encontramos uma correlação positiva e moderada entre os marcadores mast cell triptase e o CD34 nos TOQ (p = 0,025). Já nos CRs encontramos uma correlação inversa e moderada entre os marcadores SMA x CD34 (p = 0,017). Nos FPs também encontramos uma correlação inversa entre os mesmos marcadores anteriores, porém forte (p=0,049). Embora os componentes celulares estromais e microvasculares aqui representados por mastócitos, miofibroblastos, macrófagos CD163 positivos e vasos CD34 e D240, respectivamente, sejam importantes para manutenção do arcabouço estrutural do TOQ e CR, existiu uma interação significante entre mast cell triptase e CD34 no TOQ e entre CD34 e o alfa –SMA no CR.
The present study aimed to investigate, by immunohistochemistry, the participation of stromal cell components such mast cell (mast cell tryptase), myofibroblasts (alpha- SMA) and macrophages (CD163) and vascular components (CD34 and D2-40) in a series of keratocysts odontogenic tumors (OKT) in an attempt to provide information to understand the interaction between these components and the biological behavior of this lesion. For comparative purposes, radicular cysts (RCs) and pericoronal follicles (PFs) were also included. The sample comprised 30 OKTs, 15 RCs and 07 PFs. For the evaluation of mast cells, myofibroblasts and macrophages, the cells immunoreactive with biomarkers mast cell tryptase, alpha- SMA and CD163 were quantified, respectively, in 10 fields (400x). The angiogenic and lymphangiogenic index were assessed by microvessel density (MVD) and lymphatic microvessel density (MVDL) of microvessels marked respectively by for CD34 and D2-40. ANOVA with post-test Tukey correction for statistical analysis between markers was used according to the type of injury. To analyze the correlation between markers within the same lesion, we used the Pearson correlation. For the association, the OKT between markers and the presence of inflammation, we used the Student's t test. The analysis of expression of mast cell tryptase shows any significant differences (p < 0.05) between the density of mast cells present in RCs (22.7) than FPs (1.23) and TOQs (7.39) and the density of mast cells present in TOQs and FPs. There was also a significant difference (P < 0.05) between the density of myofibroblasts in TOQs (29.25) compared to CRs (4.66) and FPs (1.50). The difference in density between the RCs of myofibroblasts and PFs was not significant (p> 0.05). With respect to macrophages, no significant differences (p = 0.084) between the densities of macrophages present in TOQs (2.31), CR (1.42) and FPs (0.14). With respect to the angiogenic index, there were no significant differences in MVD between the three lesions studied. However, for the lymphangiogenic index, a significant difference (p < 0.05) between MVDL present in TOQs (11.64) compared to CRs (4.19) and FPs (0.167). The difference between MVDL of CRs compared to FPs was not statistically significant (p > 0.05). No significant association (p > 0.05) between the biomarkers studied in the presence of inflammation in the OKT was found. In the present study, we found a moderate positive correlation between mast cell tryptase and CD34 markers in OKT (p = 0.025). Have the CR and found an inverse correlation between moderate SMA x CD34 (p = 0.017). In PFs also found an inverse correlation between the SMA x CD34, but strong (p = 0.049). Although stromal microvascular and cellular components represented here by mast cells, myofibroblasts, and CD163 positive macrophages and vessels CD34 and D240 are important for maintaining the structural framework of the OKT and RC, a significant interaction between mast cell tryptase x CD34 existed in OKT and between CD34 x alpha- SMA in RC.

Tese de doutoramento em Farmácia (Farmacologia) apresentada à Fac. de Farmácia de Coimbra
A eficácia clínica dos triptanos no tratamento agudo da enxaqueca tem sido parcialmente atribuída à sua capacidade de induzir contracção de vasos sanguíneos intracranianos excessivamente dilatados. No entanto, têm surgido na literatura dados que sugerem o envolvimento dos triptanos, agonistas dos receptores 1B, 1D, e 1F da 5-hidroxitriptamina (5-HT), e da sua capacidade vasoconstritora, em acidentes isquémicos graves afectando órgãos tanto centrais, como periféricos. Com o intuito de reduzir a incidência de tais efeitos adversos têm sido sintetizados novos compostos que sejam mais selectivos para os receptores dos subtipos 5-HT1D e 5-HT1F, podendo potencialmente inibir a transmissão central da dor, a nível das estruturas do tronco cerebral e cervicoespinhais, hipoteticamente sem a vasoconstrição periférica concomitante, cuja mediação é atribuída a receptores do subtipo 5-HT1B. Devido à semelhança de perfis farmacológicos dos subtipos 5-HT1B e 5- HT1D de receptores, só muito recentemente a utilização de antagonistas selectivos dos dois subtipos de receptores possibilitou a caracterização farmacológica do receptor envolvido na resposta contráctil a triptanos, tanto de vasos sanguíneos humanos periféricos, como centrais, sem a complementaridade dos estudos moleculares ou dos estudos imunohistoquímicos. Porque os receptores 5-HT1D têm sido descritos como tendo uma localização pré-sináptica e não pós-sináptica, o seu envolvimento na resposta contráctil aos triptanos não tem sido considerado na maioria dos estudos. Acresce ainda que existe alguma contradição quanto à real contribuição dos receptores 5-HT1B/1D na mediação dos efeitos contrácteis da 5-HT, quer a nível periférico, quer a nível central. Por outro lado, e de acordo com os resultados de um inquérito por nós especificamente desenvolvido, ao qual foi submetida uma amostra de XX conveniência de 194 doentes com enxaqueca, da consulta externa de cefaleias dos Hospitais da Universidade de Coimbra, a frequência de ocorrência de sinais e sintomas associados aos efeitos adversos dos triptanos, tal como percebidos pelos doentes, nomeadamente a frequência dos efeitos cardiovasculares (taquicardia, palpitações, arritmia e hipotensão postural) e a daqueles potenciais indicadores de processos isquémicos (sensação de aperto, pressão, peso ou calor no peito que pode subir para o pescoço ou cabeça, dor abdominal e hematoquezia), parece ser reduzida em Portugal, e não ser dependente das características demográficas dos doentes ou dos fármacos em si, independentemente se são triptanos da primeira ou da segunda geração. Neste contexto parece importante estudar os mecanismos farmacológicos que poderão estar subjacentes aos efeitos adversos isquémicos associados à toma de triptanos, procedendo-se à caracterização farmacológica e molecular do subtipo de receptor 5-HT1 que medeia a contracção, induzida por triptanos, quer de vasos sanguíneos humanos centrais, quer periféricos e comparando a actividade de triptanos de diferentes gerações nesses vasos sanguíneos, o que pode contribuir para definir os seus perfis de segurança cerebro e cardiovascular. Assim, anéis de vasos sanguíneos humanos de dois territórios arteriais cranianos (artéria cerebral média e basilar) e de um território arterial periférico (artéria uterina) foram preparados para estudos funcionais de contracção isométrica, isolamento de proteínas e análise por western blot ou foram submetidos a cortes histológicos e técnicas de imunohistoquímica. Foram realizadas curvas concentração-resposta com 5- HT, sumatriptano, zolmitriptano e naratriprtano na ausência e na presença de antagonistas selectivos dos receptores 5-HT1B (cianopindolol ou SB 224289), 5-HT1D (BRL 15572) e 5-HT2 (cetanserina). Foram também aplicados anticorpos primários anti-receptor 5-HT1B humano e anti-receptor 5-HT1D humano de forma a investigar quer a expressão da proteína destes XXI dois subtipos de receptores 5-HT1, quer a distribuição das respectivas imunoreactividades naqueles vasos sanguíneos. Na avaliação de potenciais efeitos laterais dos triptanos, nomeadamente os efeitos adversos isquémicos, embora possam ser devido à sua capacidade vasoconstritora, concluímos, à luz dos nossos resultados nas artérias estudadas, que é pouco provável que os triptanos nas doses clinicamente eficazes causem acidentes isquémicos graves em indivíduos saudáveis, nomeadamente os triptanos da segunda geração (zolmitriptano e naratriptano) que demonstraram ter uma capacidade contráctil significativamente inferior ao sumatriptano, quer a nível de vasos sanguíneos centrais, quer a nível de vasos sanguíneos periféricos. Para além da cranioselectividade dos triptanos, os resultados obtidos sugerem ainda, na artéria basilar e na artéria uterina, a presença, pela sua funcionalidade, de receptores tanto do subtipo 5-HT1B como do subtipo 5- HT1D, o que foi corroborado pelos resultados dos nossos estudos moleculares (técnica de Western blot), nos quais foram detectadas as proteínas de ambos os subtipos de receptores em ambos os vasos sanguíneos, e pelos resultados dos nossos estudos imunohistoquímicos, com os quais foi possível localizar estes subtipos de receptores em células musculares lisas da túnica média. Acresce ainda que, nas artérias cerebral média e basilar (artérias centrais) o receptor serotoninérgico predominante é dos subtipos 5-HT1B/1D, enquanto que na artéria uterina (artéria periférica) é do tipo 5-HT2, para o qual os triptanos não aparentam ter afinidade. O facto de se ter verificado na artéria uterina um fenómeno de taquifilaxia ao efeito contráctil induzido pelos triptanos mediado pelos receptores 5-HT1B/1D, mas não nas artérias basilar e cerebral média, constitui um factor adicional de segurança, no que diz respeito aos efeitos adversos cardiovasculares descritos para este grupo de fármacos, resultantes da vasoconstrição concomitante que induzem. O estudo de mecanismos adicionais como a taquifilaxia, que poderão condicionar a resposta contráctil de vasos sanguíneos periféricos aos triptanos, independentemente da contracção induzida por estes fármacos ser mediada por receptores do subtipo 5-HT1B ou do subtipo 5-HT1D, parece-nos determinante para a compreensão da acção vasoconstritora dos triptanos, tanto a nível periférico como a nível central.
The clinical effectiveness of triptans in the acute treatment of migraine has been partially attributed to its capacity to induce the contraction of intracranial blood vessels that are excessively dilated. However, data has appeared in the literature indicating the possible involvement of triptans, agonists of the receptors 1B, 1D, and 1F of 5-hydroxytryptamine (5-HT), and their vasoconstrictive capacity in serious ischaemic accidents affecting both central and peripheral organs. In order to reduce the incidence of such adverse effects, new compounds have been synthesized that are more selective, targeting only receptors of 5-HT1D and 5-HT1F subtypes. These can partially inhibit the central transmission of pain on the level of the brain stem and cervicospinal structures, hypothetically without any concomitant peripheral vasoconstriction, the mediation of which is attributed to receptors of the subtype 5-HT1B. Because of the similarity in the pharmacological profiles of receptors of the subtypes 5-HT1B and 5-HT1D, the pharmacological characterization of the receptor involved in the contractile response of both peripheral and central human blood vessels to triptans has only recently been made possible by the use of selective antagonists, without complementary molecular or immunohistochemical studies. As 5-HT1D receptors have been described as having a presynaptic rather than postsynaptic location, their involvement in the contractile response to triptans has not been considered by most studies. It should also be added that there exists some contradiction as regards the real contribution of 5-HT1B/1D receptors in the mediation of the contractile effects of 5-HT, on both the peripheral and central levels. A survey specifically carried out by us on a convenience sample of 194 migraine patients from the Headache Clinic at the Coimbra University Hospitals suggested that the signs and symptoms associated with the adverse effects of triptans, as perceived by patients, such as cardiovascular effects (tachycardia, palpitations, arrhythmia and postural hypotension) and potential indications of ischaemic processes (sensation of squeezing, pressure, weight or heat on the chest that could rise to the neck or head, abdominal pain and hematochezia) occur only infrequently in Portugal and are not dependent upon the demographic characteristics of patients or on the drugs in themselves, irrespective or whether they are first or second generation triptans. Hence, the aim of this project was to study the pharmacological mechanisms underlying the adverse ischaemic effects associated with the use of triptans, preparing a pharmacological and molecular characterization of the 5-HT1 receptor subtype that mediates the triptan-induced contraction of both central and peripheral human blood vessels and comparing the activity of different generations of triptans in those blood vessels. This could then contribute to the definition of their respective cerebral and cardiovascular safety profiles. Thus, rings of human blood vessels from two cranial arterial territories (middle cerebral and basilar arteries) and from one peripheral arterial territory (uterine artery) were subjected to functional studies using isometric contraction, protein isolation and western blot analysis or to histological section and immunohistochemical techniques. Concentrationresponse curves were performed with 5-HT, sumatriptan, zolmitriptan and naratriptan in the absence and presence of selective antagonists of 5-HT1B (cyanopindolol or SB 224289), 5-HT1D (BRL 15572) and 5-HT2 (ketanserin) receptors. Primary human anti-5-HT1B receptor and anti-5-HT1D receptor antibodies were also applied in order to study the protein expression of these two subtypes of 5-HT1 receptors and the distribution of the respective immunoreactivities in those blood vessels. In assessing the potential side effects of triptans, we concluded that, in the light of our results in the arteries studied, triptans in clinically effective doses are unlikely to cause serious ischaemic accidents in healthy individuals. For although the adverse ischaemic effects of triptans could be due to their vasoconstrictive capacity, the second generation (zolmitriptan and naratriptan) showed a contractile capacity that was significantly less than that of sumatriptan, on the level of both central and peripheral blood vessels. In addition to the cranioselectivity of triptans, the results obtained also suggest the presence in the basilar and uterine arteries of both the 5-HT1B and 5-HT1D receptor subtypes. This was corroborated by the results of our molecular studies (using the Western blot technique), in which proteins of both receptor subtypes were found in both blood vessels, and by the results of our immunohistochemical studies, which made it possible to locate these receptor subtypes in smooth muscle cells of the tunica media. It should also be added that, in the middle cerebral and basilar arteries (central arteries), the predominant serotonergic receptor is of the 5-HT1B/1D subtypes, while in the uterine artery (peripheral artery) it is of the 5-HT2 type, for which triptans do not apparently have any affinity. The fact that a tachyphylactic phenomenon was noted in the uterine artery in response to the contractile effect induced by the triptans, mediated by the 5-HT1B/1D receptors, but not in the basilar and middle cerebral arteries, constitutes an additional safety factor, as regards the adverse cardiovascular effects described for this group of drugs as a result of the concomitant vasoconstriction that they induce. The study of additional mechanisms such as tachyphylaxis, which may condition the contractile response of peripheral blood vessels to triptans, irrespective of whether the contraction induced by these drugs is mediated by receptors of the 5-HT1B subtype or of the 5-HT1D subtype, would seem to be essential for an understanding of the vasoconstrictive action of triptans, on both the peripheral and central levels.

Broadly speaking, this thesis represents research towards understanding the mechanisms and important species related to small molecule conversion, namely methane to methanol and methanol to higher hydrocarbons. The first section is on understanding the catalytic formation of methanol from methane, with specific interest in using gold (Au). While this transformation is known to occur catalytically, very little is understood about how it happens. To study this reaction, well-defined Au-complexes were synthesized and reactions relevant to the possible catalytic cycles were examined. In doing so, the first simple Au(III)-monoalkyl complex was generated and characterized: (Idipp)AuI2Me, where Idipp = 1,3-bis(2,6-diisopropylphenyl)imidazol-2-ylidene). Kinetics experiments demonstrated that the complex reductively eliminates methyl iodide, which is relevant to the functionalization step in CH activation. At low concentrations of iodide, the reductive elimination happens faster, from an unobserved 3-coordinate intermediate. However, at high iodide concentrations, the pathway is still consistent with reductive elimination, but from a 5-coordinate intermediate. This is in contrast to the related platinum-system, as well as to density functional theory calculations done on the Au-system.

The second section studies the C-H activation step alone by close examination of the microscopic reverse: protonation of a metal-alkyl. It had previously been noted that the observed kinetic isotope effects (KIEs) were unusually high for the protonolysis of a few Pd complexes and one Pt complex. It was hypothesized that these high KIEs and involvement of quantum mechanical tunneling may indicate a change in the mechanism of the protonolysis reaction, from protonation at the metal center and reductive coupling to direct protonation of the M-Me bond. The experiments described here were designed to explicitly test this theory and demonstrated that no correlation can be made between mechanism and tunneling.

The third section is focused on the study of the conversion of methanol to highly branched alkanes that make good fuel additives, namely 2,2,3-trimethylbutane (triptane), amidst other alkanes, olefins, and aromatics. Catalyzed by ZnI2 or InI3 at high temperatures, the reaction is hydrogen deficient: aromatics are formed as unsaturated by-products necessary for alkane generation. While the product distributions are somewhat different for the two different catalysts, the general mechanism is the same. While typical InI3 reactions generate more alkanes, more aromatics, and fewer olefins than ZnI2 reactions, longer reaction times and higher temperatures make the ZnI2 reaction look like the InI3 profile. Furthermore, InI3 can activate alkanes; it was found that InI3 can “upgrade” other alkanes with methanol. Notably, a 1:1 mixture of 2,3-dimethylbutane and methanol can be converted into triptane with good selectivity and little aromatic formation; ZnI2 can carry out similar chemistry at higher temperatures. Quantification of the iodine-containing products in each reaction mixture was attempted because of its relevance to the system’s industrial viability and found that these concentrations were significantly higher than would be acceptable in an industrial setting.

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology and Toxicology Student: Eliška Holinská Supervisor: Prof. MUDr. Radomír Hrdina, CSc. Title of diploma thesis: Pharmacoteraphy of headache in adults Headache is one of the most common health problem that encounters almost everyone during the life. Depending on the cause, headaches can be divided on the primary headaches, which are the subject of the diploma thesis, and secondary headaches, which are caused by other diseases. The primary headaches are migraine, tension-type headache, cluster headache and primary chronic daily headache. Headache is not a life-threating condition but it can significantly reduce the quality of life, particularly the chronic forms of headache. The determination of the right diagnosis is essential for the choice of appropriate therapy. For primary headache are typical negative test results, there are no structural lesions or signs of organic brain damage. Diagnostics is comlicated and it is primarily based on a carefully processed medical history. In the therapy of primary headache are used both pharmacological and non-pharmacological methods, optimaly in combination. Pharmacological treatment consists of preventive and acute therapy. The preventive treatment is given to reduce the...

Trabalho final de mestrado integrado em Medicina àrea científica de Neurologia, apresentado á Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra
A enxaqueca é uma cefaleia primária de etiologia multifatorial, ainda não sendo a fisiopatologia completamente conhecida. A alodínia, definida como perceção de dor induzida por estímulos que não seriam dolorosos numa situação normal, está presente em cerca de dois terços dos doentes com enxaqueca, podendo influenciar o curso da doença e tendo implicações no seu tratamento. A alodínia é um marcador de um fenómeno denominado sensibilização central que resulta da estimulação persistente dos neurónios do complexo trigémino-cervical pelos neurónios nociceptivos aferentes, tornando-se a sua atividade posteriormente independente. Este trabalho consistiu na revisão de artigos científicos recentes, com o intuito da melhor compreensão da fisiopatologia da alodínia, a sua epidemiologia e qual a sua melhor abordagem terapêutica, reunindo opiniões e estudos de vários especialistas. Os triptanos permanecem como terapêutica de primeira linha na crise de enxaqueca, devendo ser administrados precocemente no caso de presença de alodínia. Outros fármacos, como anti-inflamatórios ou a dihidroergotamina, são alternativas úteis para o tratamento da crise de enxaqueca associada a sensibilização central. Alguns doentes poderão ainda beneficiar de tratamento preventivo com valproato, topiramato, propanolol, flunarizina ou toxina botulínica, opções eficazes e validadas para a diminuição da frequência e gravidade das crises
Migraine is a primary headache with multifactorial etiology and which pathophysiology is still not completely known. Allodynia, pain in response to previous innocuous stimuli, is present in about two thirds of migraine sufferers, and may influence the pathway of the disease and have implications on its treatment. Allodynia is a marker of a phenomenon named central sensibilization resultant from constant stimulation of the trigeminocervical complex from the afferent nociceptive neurons, which activity may become independent. This article consisted on the review of recent scientific work to understand the pathophysiology of allodynia, its epidemiology and the best therapeutic approach, by gathering opinions and studies from various specialists. Triptans remain the first option to treat a migraine attack, and should be taken early in the presence of allodynia. Other drugs as anti-inflammatory or dihidroergotamine are useful alternatives to treat migraine associated with central sensitization. Some patients may even benefit from preventive treatment with valproate, topiramate, propanolol, flunarizine or botulinum toxin, effective and valid options to decrease the frequency and severity of migraine attacks.

For the projected Facility for Antiproton and Ion Research (FAIR) at GSI the upgraded, existing synchrotron SIS-18 will be used as an injector. The increased beam intensity in the upgraded SIS-18 is expected to cause additional collective effects, leading to beam loss or beam quality degradation. Beam interaction with radio frequency (rf) cavity, resulting in beam loading effect, is an important consideration in the design and operation of high-intensity circular particle accelerators. The steady state and transient perturbation of the rf cavity system by the circulating beam can be harmful to the beam and limit the accelerator performance. Steady state beam loading effect is observed in SIS-18 with single and double rf operations. The supportive simulation and theoretical study is done, to extrapolate the results for the upgraded SIS-18. In SIS-18 the coasting beam, i.e. an unbunched dc beam, is captured by using the rf cavities. RF capture is one of the potential sources for longitudinal beam quality degradation at high intensities. Therefore this part of the SIS-18 machine cycle requires dedicated studies. The rf voltage ramping time and the initial voltage amplitude are important parameters to be controlled. This study of longitudinal beam dynamics is helpful to determine the optimum type of voltage ramp, in terms of beam quality and total cycle time. A theoretical study has been made in this direction, supported by simulations. In line with that the experiments have been performed in SIS-18.

Trabalho Final do Mestrado Integrado em Medicina apresentado à Faculdade de Medicina
Identificados em 1878 por Paul Ehrlich, os mastócitos são células multifuncionais complexas e um elemento-chave do sistema imunitário. A ativação mastocitária, embora comum e possivelmente necessária para a manutenção da sobrevivência, associa-se a inúmeros processos patológicos, encontrados com frequência na prática médica. A síndrome de ativação mastocitária inclui um grupo heterogéneo de doenças e descreve uma constelação de sintomas sistémicos graves, secundários à libertação de mediadores vasoativos e inflamatórios pelos mastócitos ativados. Para que a síndrome de ativação mastocitária seja considerada, ter-se-ão de reunir três critérios diagnósticos: presença de sintomas sistémicos recorrentes e consistentes com a ativação mastocitária; envolvimento documentado dos mastócitos por estudos bioquímicos; e resposta apropriada a tratamentos que tenham como alvo os mastócitos e/ou os mediadores mastocitários. Atualmente, o biomarcador mais específico de ativação mastocitária é a triptase. Uma vez definida, esta entidade pode ser dividida em primária, secundária ou idiopática. Na variante primária (clonal), existe uma mutação ao nível das células progenitoras, o que leva a uma produção anormal de mastócitos, em termos qualitativos e/ou quantitativos. Incluem-se aqui dois subgrupos: a mastocitose e a síndrome de ativação mastocitária monoclonal. Na variante secundária (não clonal), os mastócitos são normalmente produzidos na medula óssea, mas ocorre uma ativação reativa desencadeada por processos mediados por imunoglobulina E ou por outros mecanismos. Em alguns doentes, porém, não é encontrada uma causa clara para os episódios, surgindo a designação idiopática. A caracterização diagnóstica é fundamental para discriminar com precisão o tipo e estadiamento da síndrome, tendo óbvias implicações no plano terapêutico a adotar. O tratamento deve, pois, ser personalizado, e integrar medidas gerais (evicção de desencadeantes), bem como farmacológicas, ajustadas a cada situação clínica. Abordam-se os grupos de fármacos preconizados e o algoritmo terapêutico. Com base numa revisão exaustiva da literatura, o presente trabalho pretende elencar os aspetos clínicos, diagnósticos e terapêuticos deste distúrbio relativamente incomum e mal caracterizado. Paralelamente, pretende-se sensibilizar os profissionais de saúde para esta síndrome, o que possibilitará um diagnóstico mais precoce e um enquadramento clínico mais ajustado, bem como encorajar novas linhas de investigação.
Identified by Paul Ehrlich in 1878, mast cells are complex multifunctional cells and a key component of immune system. Mast cell activation, although common and possibly necessary for maintenance of survival, is associated with several pathological processes that are frequently seen in clinical practice. Mast cell activation syndrome includes a heterogeneous group of disorders and designates a constellation of severe systemic symptoms, secondary to the release of vasoactive and inflammatory mediators by activated mast cells. It is important to satisfy all three diagnostic criteria before concluding that a given patient suffers from mast cell activation syndrome: presence of recurrent systemic symptoms consistent with mast cell activation; documented participation of mast cells by biochemical studies; and appropriate response to medications targeting mast cells and/or mast cell mediators. Currently, the most specific biomarker of mast cell activation is tryptase. Once defined, this syndrome must be divided into primary, secondary or idiopathic. In the primary (clonal) entity, there is a mutation of the progenitor cells, which leads to an abnormal production of mast cells, in qualitative and/or quantitative terms. Two subgroups are described here: mastocytosis and monoclonal mast cell activation syndrome. In the secondary (nonclonal) entity, mast cells are normally produced in the bone marrow, but reactive activation occurs by immunoglobulin E mediated processes or by other mechanisms. In some patients, however, no clear cause for the mast cell activation episodes is found. These patients are termed to have idiopathic mast cell activation syndrome. A diagnostic characterization is essential to accurately discriminate these patients, with obvious implications for the therapeutic plan to be adopted. Treatment approach must be individualized and integrates general measures (avoidance of triggers), as well as pharmacological measures adjusted to each clinical situation. Groups of recommended drugs and therapeutic algorithm are addressed in this paper. Based on an exhaustive literature review, the present work intends to list the clinical, diagnostic and therapeutic aspects of this relatively unusual and poorly characterized disorder. At the same time, it is intended to make health professionals aware of this syndrome, which will enable an earlier diagnosis and a more adjusted clinical framework, as well as encourage new lines of research.

Les transporteurs membranaires sont des éléments importants dans le devenir, l’efficacité, et la toxicité du médicament. Ils influencent la pharmacocinétique et la pharmacodynamie de ces derniers. Plusieurs interactions médicamenteuses observées cliniquement sont attribuables à la fois aux enzymes responsables du métabolisme des médicaments et aux transporteurs membranaires. Il est connu qu’une variabilité existe entre différents individus dans la réponse à un médicament et les polymorphismes génétiques retrouvés dans les gènes codant pour les transporteurs membranaires peuvent partiellement expliquer cette variabilité. OATP1A2 est un transporteur membranaire exprimé sur des organes importants, comme le cerveau et le rein. Plusieurs médicaments utilisés en clinique sont des substrats d’OATP1A2 et l’expression localisée de ce transporteur suggère un rôle important dans le devenir du médicament. Donc, mon projet de doctorat consistait à caractériser l’activité d’OATP1A2 en relation avec ses substrats et inhibiteurs, et de plus, à évaluer l’impact de différents variants génétiques d’OATP1A2 sur leur transport. Dans le premier article, la rosuvastatine a été utilisée comme substrat-type pour étudier le transport d’OATP1A2. Les expériences ont été menées en introduisant la rosuvastatine en compétition avec différent β-bloqueurs, une classe de médicaments rapportée dans la littérature comme substrats d’OATP1A2. Parmi les β-bloqueurs évalués, le carvédilol était l’inhibiteur le plus puissant. Dans la deuxième partie de l’étude, des médicaments ayant une structure similaire au carvédilol, tels que les antidépresseurs tricycliques, ont été évalués quant à leur potentiel d’inhibition sur OATP1A2. Une relation structure-activité a été définie à l’aide de ces données. Nous avons démontré que des composés tricycliques avec une courte chaîne aliphatique pouvaient inhiber OATP1A2. Dans le deuxième article, OATP1A2 a été étudié en considérant son expression et son rôle au sein de la barrière hémato-encéphalique (BHE). Des études précédentes ont démontré qu’OATP1A2 est exprimé sur la membrane luminale des cellules endothéliales formant la BHE. Nos données démontrent que les triptans, une classe de médicaments couramment utilisées pour traiter la crise migraineuse, sont des substrats d’OATP1A2 et que les composés tricycliques identifiés comme inhibiteurs d’OATP1A2 dans nos études précédentes peuvent inhiber le transport des triptans par OATP1A2. Ces résultats sont importants puisque: 1) il a été suggéré que les triptans peuvent agir au niveau du système nerveux central en se liant aux récepteurs trouvés sur les neurones centraux; 2) comme les triptans sont des molécules hydrophiles, un mécanisme de transport facilité est nécessaire pour qu’ils pénètrent la BHE et OATP1A2 pourrait être l’élément clé; 3) l’inhibition d’OATP1A2 par les composés tricycliques pourrait limiter l’accès des triptans à leur site d’action. Le troisième article caractérise l’activité associée à deux variants génétiques d’OATP1A2 (OATP1A2*2 et *3). Leur capacité à transporter les triptans et leur potentiel d’inhibition par les médicaments tricycliques ont été évalués. Des résultats supplémentaires caractérisant OATP1A2, mais sans liens directs avec les trois articles, seront présentés en annexe. Dans l’ensemble, les résultats présentés dans cette thèse servent à caractériser le transporteur membranaire OATP1A2 en relation avec ses substrats et inhibiteurs, et en fonction de ses variants génétiques.
Drug transporters are important determinants in drug disposition, efficacy, and toxicity. They influence the pharmacokinetics and pharmacodynamics of drugs. Several clinically-observed drug-drug interactions are mediated through drug metabolizing enzymes and drug transporters. It is well known that there is an interindividual variability in the response to medications and polymorphisms found in genes encoding for drug transporters partially account for it. OATP1A2 is a membrane drug transporter expressed on important organs, such as the brain and the kidney. A wide spectrum of drugs used in the clinic are substrates of OATP1A2. Its localisation suggests an essential role in drug disposition. Thus, my PhD project consisted of characterizing the activity of OATP1A2 in regards to its substrates, inhibitors, and different protein variants due to genetic polymorphisms. In the first article, rosuvastatin was used as the probe substrate to study OATP1A2 transport activity. Experiments were conducted by putting rosuvastatin in competition with different β-blockers, a class of drugs known in the literature to be transported by OATP1A2. One of the drugs evaluated, carvedilol, inhibited OATP1A2 with much more potency than the others. In the second part of the study, drugs with a structure similar to carvedilol, such as tricyclic antidepressants, were tested for their potential to inhibit OATP1A2. A structure-activity relationship was defined using the data. It was demonstrated that drugs composed of a tricyclic ring with a short aliphatic amine chain were potent OATP1A2 inhibitors. In the second article presented, OATP1A2 was studied in the context of its localization at the blood-brain barrier (BBB). OATP1A2 expression at the luminal membrane of the endothelial cells making up the BBB was demonstrated in the literature. Our article showed that triptans, a class of commonly used anti-migraine drugs, were OATP1A2 substrates. The tricyclic drugs previously evaluated were shown to potently inhibit triptan transport through OATP1A2. These findings are important for three reasons: 1) it has been postulated that triptans may act at the central nervous system by binding to receptors found on central neurons; 2) as triptans are hydrophilic molecules, a facilitated transport mechanism is required for them to penetrate the BBB and OATP1A2 may be the key player; and 3) the inhibition of OATP1A2 by the tricyclic drugs may limit the entrance of triptans to their site of action. The third article characterized the transport activity of two OATP1A2 protein variants (OATP1A2*2 and *3). Their capacities to transport triptans and their potential of being inhibited by tricyclic drugs were evaluated. Additional data characterizing OATP1A2 but considered out of the scope of the three articles will be presented in appendices. In overall, the central theme of this thesis looks into the characterization of the OATP1A2 membrane drug transporter in regards to its substrates, inhibitors, and proteins variants.