Academic literature on the topic 'VIH (Virus de l'Immunodéficience Humaine) – Dissertations universitaires comme sujet'

Du fait de la position privilégiée occupée par les lymphocytes T CD8+ au sein de la réponse immune anti-VIH, il apparaît nécessaire d'analyser l'évolution spatio-temporelle de l'activité antivirale CD8+ et ses mécanismes de régulation. Le modèle expérimental du macaque infecté par le SIV offre la possibilité unique d'aborder en détail cette problématique, en particulier, au cours de la primo-infection dont l'étude chez l'homme se heurte à des restrictions d'ordre éthique et pratique. Nous avons démontré que, dès les premières semaines de l'infection, des perturbations précoces affectaient les lymphocytes T CD8+ ; ces modifications varient selon la localisation anatomique considérée. Ces changements au sein du compartiment CD8 sont concomitants de modifications du niveau d'expression des messagers codant les cytokines IL-7, IL-15, IL-16 et MIP-1a. La simultanéité de ces deux phénomènes et les propriétés des cytokines étudiées, laissent supposer que ces cytokines participent aux phénomènes de prolifération/recrutement observés au sein des tissus et à l'installation de la réponse immune. L'expression des messagers de l'IL-16, qui suit une cinétique inverse à l'évolution de la charge virale, suggère que cette cytokine participe au contrôle de la réplication virale. Au cours des infections par un virus atténué ou par un virus pathogène, nous avons mis en évidence dans les tissus pulmonaires, une augmentation des chimiokines MIP-1a , MIP-1ß et RANTES ; l'augmentation significativement plus importante de RANTES au cours de l'infection par le virus atténué suggère que cette chimiokine pourrait prendre part à l'installation de la réponse immune singulière existant chez ces animaux.

Devant l'expansion incontrôlée de la pandémie du syndrome de l'immunodéficience humaine, seule la mise au point d'un vaccin efficace contre son agent étiologique, le VIH, permettra d'en limiter l'ampleur. La mise au point d'un tel vaccin passe nécessairement par le développement d'un modèle animal reproduisant l'infection et la maladie observées chez l'homme. Le seul modèle pouvant reproduire de façon systématique l'infection et le développement des manifestations cliniques comparables au SIDA chez l'homme, est l'infection du macaque par le virus de l'immunodéficience simienne (SIV). Cependant, les résultats obtenus à partir des stratégies vaccinales utilisant ce modèle ne pourront pas être directement transposables à l'infection de l'homme par le VIH. La modèle d'infection du macaque par le VIH-2 permet de reproduire l'infection chronique mais les animaux ne développent pas de maladie de façon systématique. Le but de notre travail a été, d'une part de développer ce modèle pour l'étude des mécanismes physiopathologiques associés à l'infection par le VIH, et d'autre part d'évaluer la capacité de l'infection du macaque par le VIH-2 à protéger cet animal vis-à-vis d'une surinfection par voie muqueuse par un isolat pathogène de SIV. Pour augmenter le pouvoir pathogène du VIH-2 chez le macaque, nous avons effectué 5 passages séquentiels, in vivo. Les résultats que nous avons obtenus suggèrent que le pouvoir infectieux du virus augmente lors des premiers passages. Cependant, bien que des signes cliniques aient été observés chez certains animaux, aucune relation n'a pu être mise en évidence entre l'augmentation du pouvoir pathogène du virus et le nombre de passages effectués. Le faible pouvoir pathogène du VIH-2 pour le macaque suggère que ce virus pourrait être considéré comme étant " atténué " pour cette espèce. Ce modèle d'infection pourrait donc constituer une approche vaccinale, à l'image des stratégies utilisant des virus vivants atténués. Malgré la forte homologie de séquences entre le VIH-2 et le SIV et la réactivité croisée entre leurs antigènes, nos résultats montrent que l'infection chronique du macaque par le VIH-2 n'a pas pu prévenir la surinfection des animaux par le SIV. Ces résultats soulignent la difficulté d'élaborer un vaccin efficace contre l'infection par le VIH.

Les multiples propriétés de la protéine Nef du VIH-1 sont responsables de sa capacité à accélérer la progression vers l'immunodéficience in vivo. Dans ce travail de thèse, nous avons choisi d'explorer les mécanismes qui régissent deux des fonctions les plus conservées dans les isolats primaires de nef: (i) la diminution de l'expression de surface de CD4 dans les cellules cibles du VIH et (ii) l'augmentation du pouvoir infectieux des particules virales néoformées. C'est en interférant avec les éléments de la machinerie de l'endocytose que Nef provoque la diminution de l'expression de surface de CD4, à la fois dans les lignées lymphoïdes et myéloïdes. Cependant, le trafic intracellulaire de CD4 est régit par des règles différentes dans ces cellules: dans les cellules myéloïdes, CD4 est rapidement internalisé, alors que dans les cellules lymphoïdes, CD4 est stabilisé à la surface, notamment grâce à son interaction avec la tyrosine kinase p56lck. Dans cette étude, nous montrons que Nef augmente le taux d'internalisation de CD4 uniquement dans les cellules qui expriment p56lck. Nef utilise donc des mécanismes distincts pour réduire l'expression de surface de CD4 dans les cellules lymphoïdes et myéloïdes. A ce jour il n'y a pas de consensus quant aux contributions respectives des fonctions remplies par Nef pendant la biogénèse virale ou lorsque le virus atteint les cellules cibles, à l'augmentation du pouvoir infectieux. Des protéines de fusion de Nef ont été construites, nous permettant de manipuler les quantités de Nef incorporées dans les particules virales. Cette étude nous a permis d'établir que l'incorporation de Nef dans les particules virales n'est pas suffisante pour induire une augmentation du pouvoir infectieux des particules virales ; le corolaire en est que Nef exerce probablement des fonctions pendant la biogénèse virale, qui sont déterminantes pour les propriétés infectieuses des particules virales
HIV-1 Nef accelerates progression towards immunodeficiency in vivo. During my thesis we explored two of the most conserved functions of Nef: (i) CD4 downregulation in HIV-1 target cells and (ii) viral infectivity enhancement. Interference of Nef with the endocytic machinery causes CD4 cell surface downregulation. However, CD4 trafficking is governed by different rules in the target cells of the infection: in myeloid cells CD4 is rapidly internalized from the cell surface whilst in lymphoid cells, CD4 is stabilized at the cell surface through interaction with the tyrosine kinase p56lck. In this study, we show that Nef increases CD4 internalization rate only in cells that express p56lck. Therefore Nef uses different mechanisms to downregulate CD4 from the cell surface of myeloid and lymphoid cells. To date, the relative contribution of the functions of Nef during viral biogenesis and upon arrival in the target cells to the Nef dependent increase of viral infectivity, have not been deciphered yet. We designed fusion proteins that allowed the manipulation of the amount of Nef in producer cells and incorporated into viral particles. This study allowed us to determine that the incorporation of Nef into viral particles is not sufficient to cause an increase of viral infectivity. Nef must therefore exert functions, during viral biogenesis, that are crucial for the infectivity of nascent viral particles

L'actinomycine d (actd) et -amanitine sont des inhibiteurs frequemment utilises pour inhiber la transcription. De facon inattendue, la transcription a partir du promoteur ltr du virus de l'immunodeficience humaine acquise de type 1 (vih-1) est activee au niveau de l'elongation dans des cellules humaines et murines traitees avec ces drogues, alors que les promoteurs du cytomegalovirus humain et du gene de choc thermique hsp70 sont reprimes. L'activation du ltr-vih-1 ne fait pas intervenir les sequences b et tar presentes dans le promoteur et coincide avec une phosphorylation du domaine c-terminal (ctd) de la plus grande sous-unite de l'arn polymerase ii, rpb1. L'activation du ltr-vih-1 et la phosphorylation du ctd sont toutes deux inhibees par des inhibiteurs de ctd-kinases et en particulier par le 5,6-dichloro-1--d-ribofuranosyl-benzimidazole. L'efficacite avec laquelle ces composes bloquent la phosphorylation du ctd et la transcription in vivo est correlee avec leur capacite d'inhiber la kinase cdk9/pitalre in vitro. Ainsi le facteur positif de l'elongation de la transcription p-tefb contribuerait-il a la phosphorylation du ctd in vivo et a l'activation du ltr-vih-1 induite par l'actinomycine d.

Nous avons etudie la variabilite du gene env dans le modele d'infection experimentale du macaque infecte par le vih-2. Nous avons participe au test de vaccins utilisant des virus de la vaccine recombinants. Ceux-ci ont ete incapables de proteger les animaux de l'infection par un virus heterologue aux virus vaccinant. Cet echec semble resulter des differences antigeniques intrinseques exitant entre les souches virales utilisees. Tous les animaux vaccines ou non ont presente une diminution importante de leur charge virale sanguine a long terme. De plus, les sequences virales du gene env sont restees tres stables suggerant que la persistance de l'infection chez ces animaux ne faisait pas intervenir la variabilite virale dans d'eventuels phenomenes d'echappement a la reponse immune. Pour finir, nous avons vaccine par le bcg et avec l'anatoxine tetanique certains animaux afin d'evaluer l'effet d'une stimulation du systeme immunitaire sur la replication virale. Les immunostimulations ont entraine une augmentation de la replication virale et du nombre de mutations dans le gene env. La grande stabilite genetique du vih-2 observee chez le macaque resulterait donc de sa faible replication. Ces resultats posent le probleme des vaccinations des personnes infectees par le vih et du role de l'activation du systeme immunitaire dans la physiopathologie de l'infection a vih.

Les cellules dendritiques (DC) sont les seules présentatrices d'antigènes capables d'activer les lymphocytes T (LT) naïfs. Lors de l'infection par le VIH, elles sont cruciales pour initier les réponses immunitaires adaptatives indispensables au contrôle de la réplication virale. Nous avons mis en évidence un transfert d'antigènes du VIH aux DC, depuis des LT CD4 infectés vivants. Ces antigènes sont aussi efficacement présentés aux LT CD8 que ceux issus de débris apoptotiques, et plus efficacement que ceux du VIH libre. Nous avons aussi montré l'antigénicité de DC transfectées par des ARNm de gag du VIH. Ces résultats permettent d'envisager des thérapies contre les formes provirales issues des cellules quiescentes qui sont des réservoirs viraux difficiles à éradiquer. Dans un but de vaccination préventive, nous avons comparé des vecteurs vaccinaux rougeole, MVA, Ad5 et BCG, codant le gène gag du VIH. Nous montrons que les vecteurs viraux induisent une maturation incomplète des DC, tandis que le BCG induit une maturation complète, mais beaucoup d'IL1O. Nous avons alors restauré les propriétés déficientes de ces vecteurs par des agonistes des récepteurs de type Toll. Enfin nous montrons que les DC plasmacytoïdes (pDC) humaines peuvent effectuer la présentation croisée d'un vaccin lipopeptidique, et d'antigènes issus de LT CD4 infectés apoptotiques. La présentation croisée par les pDC pourrait conduire à la tolérance en l'absence d'une stimulation appropriée. Nous montrons qu'une stimulation par le virus de la grippe augmente les réponses effectrices induites par la présentation croisée des pDC. Ces résultats devraient améliorer les protocoles de vaccination contre le VIH
Dendritic cells (DC) are the only antigen presenting cells able to stimulate naive T lymphocytes. Upon HIV infection, they are crucial to initiate adaptive immune responses that control viral replication. We have shown the transfer of HIV antigens to DC from live infected CD4 T cells. These antigens were presented as efficiently as those from apoptotic infected CD4 T cells and much more effïciently than those from free HIV particles. We also showed the antigenic potential of HTV gag mRNA transfected DC. These results may be important in developing new therapies against provirus from resting cells that represent an important viral reservoir difficult to eradicate. To improve preventive vaccination, we compared the vaccinal vectors MV (measles), MVA, Ad5 and BCG, all encoding the HlV-1lai gag gene. We showed that the viral vectors induced an incomplete DC maturation, whereas BCG induces complete maturation but high levels of IL 10. We were able to restore these missing properties by using specific TLR agonists. Finally, we demonstrated that plasmacytoid dendritic cells (pDC) can cross-present a vaccinal lipopeptide and HIV antigens from infected, apoptotic CD4 T cells. Cross-presentation by pDC might lead to tolerance in vivo in the absence of an appropriate stimulation. We show here that stimulation with Influenza virus enhances effector responses induced by cross presentation by pDC. These results will hopefully be useful in designing new vaccination strategies against HIV

La protéine Nef du Virus de l’Immunodéficience Humaine de type 1 joue un rôle essentiel pour la réplication virale et la pathogénèse du SIDA. Cependant cette protéine n’est actuellement la cible d’aucun traitement antirétroviral. Dans cette étude, nous décrivons un fragment d’anticorps simple-chaine, le sdAb19 et ses dérivés, les Neffins, qui lient Nef avec une forte affinité, et permettent l’inhibition de toutes ses fonctions in vitro, comme in vivo. La caractérisation du sdAb19 anti-Nef nous a permis de montrer son efficacité pour inhiber les effets d’un large panel de Nef sur la modulation du trafic de CD4. Ce fragment d’anticorps est capable d’interférer dans l’association de Nef avec la kinase cellulaire Pak2 et ainsi d’inhiber les effets de Nef sur le remodelage de l’actine. Nous sommes également parvenus à inhiber les effets positifs de Nef sur le pouvoir infectieux des particules virales et la réplication virale. Nous avons enfin pu observer que le sdAb19 rétablit les défauts de maturation des cellules T CD4+ thymiques et l’activation des cellules T CD4+ périphériques dans un modèle de souris transgéniques CD4C/HIV-1Nef. Alors que le sdAb19 n’inhibait pas les effets de Nef sur la modulation du trafic des molécules du CMH-I, la fusion de l’anti-Nef avec des domaines SH3 artificiels a permis d’inhiber des activités majeures de Nef, dont ses effets sur la diminution de l’expression de surface de CD4 et des molécules du CMH-I, et l’effet positif de Nef sur l’augmentation du pouvoir infectieux des particules virales. L’expression des Neffins dans des cellules myéloïdes a également permis l’inhibition de la formation de cellules géantes multinucléées induite par Nef mais aussi de restaurer de la phagocytose inhibée par Nef. Nous avons montré dans cette étude que ces effets de Nef dans les macrophages sont dépendants des deux motifs poly-proline et di-leucine, et nous avons vérifié que les Neffins sont capables de perturber les interactions de Nef avec les complexe AP-1 et Hck in vitro. Tous ces résultats montrent qu’il est possible d’inhiber toutes les fonctions de Nef, dans les lymphocytes, comme dans les macrophages, avec un simple ligand qui pourrait représenter un outil efficace pour développer de nouvelles stratégies pour le contrôle du SIDA en ciblant la protéine Nef
While it is established that HIV-1 Nef is essential for virus replication and AIDS pathogenesis, this viral protein is not targeted by antiviral strategies. The functions of Nef are largely related to perturbations of intracellular trafficking and signaling pathways, through leucine-based and poly-proline motifs required for interactions with clathrin-associated adaptor protein complexes and the phagocyte-specific kinase Hck, respectively. Here, we describe the full inhibitory activity of artificial Nef ligands, Neffins, comprised of modified SH3 domains fused to an anti-Nef single-domain antibody. The Neffins inhibited key activities of Nef, including Nef-mediated CD4 and MHC-I cell surface down-regulation and enhancement of virus infectivity. When expressed in macrophages, Neffins inhibited Nefinduced formation of multinucleated giant cells and podosome rosettes, and counteracted the inhibitory activity of Nef on phagocytosis. Since we show here that these effects of Nef on macrophage functions were both dependent of the leucine-based and poly-proline motifs, we confirmed that the Neffins were able to disrupt interactions of Nef with both AP complexes and Hck. These results demonstrate that it is possible to inhibit all functions of Nef, both in T lymphocytes and macrophages, with a single ligand that represents an efficient tool to develop new antiviral strategies targeting Nef

Au cours de mon travail de thèse, nous avons développé une méthode originale d'étude de la diversité génétique du VIH. Cette méthode est fondée sur l'isolement de virus clonaux issus d'événements d'infection uniques à partir du plasma de patients infectés. L'analyse des séquences génomiques issues des virus clonaux nous a permis de quantifier in vivo un taux de recombinaison élevé chez les six patients étudiés, de démontrer le rôle de la recombinaison dans l'échappement du VIH aux traitements antirétroviraux, via un rôle dans la génération et la préservation de la diversité génétique du VIH. Nous avons aussi étudié les propriétés fonctionnelles des protéines Env provenant de virus clonaux isolés chez cinq patients. L'étude d'Env distinctes issues d'un même patient a révélée une extraordinaire diversité fonctionnelle, même parmi les virus utilisant le même co-récepteur. Cette diversité fonctionnelle se traduit par un large spectre d'infectivités sur un type cellulaire donné, des différences dans leur capacité relative à infecter différentes cellules cibles et des différences de sensibilités à certains inhibiteurs d'entrée. Aucune corrélation entre l'infectivité de ces virus clonaux et la sensibilité aux inhibiteurs d'entrée n'est observée, ce qui indique que ces propriétés fonctionnelles peuvent être, dans une certaine mesure, dissociées
During my thesis, we developed a new technique for study the genetic diversity of HIV. This method is based on the isolation of infectious clonal viruses directly resulting from single plasma-derived infections events. A comparison of the genomic sequences of clonal viruses from six patients demonstrated strong evidence for extensive recombinaison in vivo, showed that recombination could increase the diversity of drug resistant genotypes and reveals that recombination contributes to the generation and preservation of the HIV-1 diversity. The isolation of clonal viral populations from five different patients permits to evaluate the phenotypic properties of Env proteins exprimed by clonal viruses. Even when comparaisons were restricted to viruses from a same patient with similar tropism, genetically diverses Env proteins exhibited a remarkable fonctionnal diversity, included a wide range of infectivities for a given target cell, differences in their relative ability to infect different target cells and differences in sensibility to inhibition by some entry inhibitors. No correlation was observed between viral infectivity and inhibition by entry inhibitors, indicating that theses properties can be dissociated

L'integration de l'adn viral dans le genome cellulaire est une etape cle du cycle replicatif des retrovirus. Elle est strictement necessaire a l'expression des genes viraux. Dans le cas du vih1 0 l'extremite ltr u5 on observe une courte sequence polypurine polypyrimidine de 11 bases, capable de former des triple helices avec des oligonucleotides appropries. Pour accroitre cette stabilite. Nous avons fonctionnalises ces oligonucleotides avec un agent intercalant de type oxasolopyridocarbasole. Nous montron que ces oligonucleotides pardes experiences d'empreinte a la dnasei forme des complexes stable. Par ailleur on utilisant un test d'integration in vitro, nous avons etudies leur aptitude a bloquer ce processus. L'oligonucleopide / opc inhibe specifiquement le processus d'integration. Les premieres experiences realises sur les cellules avec un oligonucleotide/ opc protege en 3' par une tige boucle montrent une inhibition du cycle replicatif avec une ci 50 de 60 nm. La specificite de reconnaissanse, l'efficacite de fixation d4un oligonucleotide triple helice couple a un agent activable ou intercalant permet d'envisager une degradation irreversible du virus integre.