Dissertations / Theses on the topic 'VIH'

A tuberculose tem estado presente durante todo o desenvolvimento da humanidade. Após ter sido considerada sob controlo, a tuberculose ressurgiu em meados da década de oitenta de uma forma preocupante. O aumento dramático do número de casos de doença ficou a dever-se, em parte, à disseminação do Vírus da SIDA e a outros factores, como o empobrecimento das populações, os movimentos migratórios, a toxicodependência e as políticas de desinvestimento na luta anti-tuberculosa. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, a tuberculose é uma emergência global, sem controlo em muitas partes do mundo, ocorrendo 9 milhões de casos todos os anos, dos quais 1,7 milhões morrem. Em cada segundo uma pessoa no mundo é infectada de novo com o bacilo da tuberculose. Embora represente um problema global, a tuberculose é mais comum nos países mais pobres e com piores condições médico-sanitárias, tais como os países africanos e do sudeste asiático. A infecção pelo VIH predispõe ao aparecimento da tuberculose e por isso têm estado inevitavelmente ligadas. A tuberculose tornou-se assim na principal causa de morte entre os indivíduos com infecção VIH, sendo responsável por cerca de um terço dos óbitos por SIDA em todo o mundo. Em Portugal a situação da doença é preocupante, porque apesar da doença ter vindo a decrescer nos últimos anos, a sua redução tem sido lenta quando comparada com outros países da Europa e do resto do mundo. A sua distribuição pelo país é heterogénea verificando-se um maior número de casos na Região de Lisboa e Vale do Tejo e na Região Norte. Na Região Norte, a doença assume uma maior magnitude, sendo o ritmo de decréscimo observado na incidência mais lento do que na globalidade do país. O mesmo acontece com a infecção pelo VIH, em que o distrito do Porto apresenta a maior taxa bruta de incidência. Com esta dissertação pretende-se abordar a problemática da tuberculose a nível mundial e nacional, relacionando-a com a infecção VIH. Tendo visitado uma instituição que possui um modelo que integra a terapêutica da tuberculose/ VIH/ toxicodependência – o Hospital de Joaquim Urbano – é feito um relato sobre as razões do seu aparecimento e sobre o seu funcionamento.

L'infection par le VIH induit de nombreux dysfonctionnements du compartiment lymphocytaire B. Ainsi, les organes lymphoïdes secondaires, sites de développement des réponses immunitaires spécifiques, sont des réservoirs de virus inaccessibles aux traitements antirétroviraux. La persistance du virus induit une stimulation chronique des cellules immunitaires qui aboutie à une hyperactivation cellulaire. Nous nous sommes interessés à la caractérisation des réponses humorales chez des sujets infectés par le VIH, évoluant dans un environnement tropical. Ces patients ont des charges virales élevées, non-contrôlées par des traitements anti-rétroviraux. L'étude des phénotypes des lymphocytes B circulants à mis en évidence la présence de lymphocytes B centrogerminatifs suggérant une destruction ganglionnaire. Les sujets vivants en zone tropicale présentent également une diminution des lymphocytes B naïfs et des lymphocytes B mémoires et une augmentation des lymphocytes B différenciés. Elle serait due à la présence d'infections parasitaires chroniques stimulant la différenciation cellulaire. Cependant, malgré les dysfonctionnements ganglionnaires et les modifications cellulaires, nous avons montré, dans un système de culture de lymphocytes B issus de PBMC, que les patients sont capables de produire spontanément des AC anti-VIH in vitro contre divers Ag du VIH. Les Ac sont produits en présence de cytokines sans restimulation des Ag exogènes. Ces Ac semblent refléter l'hyperactivation in-vivo mais ils démontrent que l'établissement d'une réponse humorale spécifique contre le VIH a lieu même chez des patients présentants des dysfonctionnement centrogerminatifs. De plus, les patients ont conservé la capacité de produire des Ac anti-VIH de divers isotypes en particulier des IgG1, IgG3 et IgA. Ces données sont intéressantes car certains isotypes, comme les IgA et les IgG3, ont des capacités de neutralisation importante. Cependant, les conditions de stimulation nécessaires pour produire ces Ac restent à déterminer. Les réponses humorales anti-VIH semblent fonctionnelles et pourraient être ciblées afin d'obtenir un bénéfice immunitaire dans le cadre d'un vaccin thérapeutique.

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Realiza un examen sobre las lesiones periodontales, registra el índice de higiene oral y determina la situación socioeconómica, educación y hábitos de higiene bucal, las cuales fueron variables del estudio, en gestantes VIH seropositivas (grupo de estudio) y gestantes VIH no seropositivas (grupo control) de los Hospitales Maternidad de Lima y San Bartolomé, en Lima, Perú, durante el año 1999. Es una investigación de tipo comparativo, transversal, prospectivo. Utiliza una muestra total de 60 pacientes, 30 del grupo control y 30 del grupo de estudio, ambos localizados. Obtiene que ambos grupos presentan lesiones periodontales desde las más simples hasta las moderadamente severas, lo mas resaltante es que en relación a pacientes, el agrandamiento gingival se encuentra en el 33.3% del grupo de estudio y 13.3% en el grupo control, existiendo aquí una diferencia. En relación al número de piezas dentarias, la gingivitis marginal localizada es identificada 282 veces en el grupo de estudio (71.3%) y 209 casos en el grupo control (62.4%). La situación socioeconómica de ambos grupos es de media y baja. El índice de higiene oral, que presenta mayor porcentaje, en ambos grupos es de regular a malo, presenta una mala calificación en lo que concierne a educación y hábitos de higiene oral. Los estudios estadísticos, para esta investigación, encuentran
Tesis

L’infection des cellules cibles par le Virus de l’Immunodéficience Humaine de type 1(VIH-1) suit une succession d’étapes finement régulées par de nombreux facteurs cellulaires et viraux. Mon travail de thèse a consisté à étudier certains aspects de cette régulation, en particulier la protéine virale Nef et son impact sur l’infectivité des virus, mais aussi la susceptibilité des cellules cibles à l’infection. Tout d’abord, nous nous sommes intéressés aux mécanismes selon lesquels Nef augmente l’infectivité virale. Pour cela, nous avons identifié les différences entre le protéome des virus sauvages et des virus dépourvus du gène nef (Δnef) grâce à deux méthodes protéomiques, laDIGE et l’iTRAQ. Nous avons pu mettre en évidence que les protéines Ezrine et EHD4 sont impliquées dans des processus qui rendent les virus sauvages plus infectieux que les virusΔnef. L’augmentation de l’infectivité virale par Nef dépend des glycoprotéines d’enveloppes avec lesquelles les particules virales sont pseudotypées. Dans le but d’identifier les bases moléculaires de ce mécanisme, nous avons généré des constructions chimériques entre des glycoprotéines d’enveloppes qui permettent (enveloppes permissives) ou ne permettent pas(enveloppes non permissives) au phénotype Nef de se manifester. Cette approche a permis démontrer que le domaine cytoplasmique de la protéine d’enveloppe est un des déterminants qui dictent l’acquisition du phénotype Nef. Mon travail s’est aussi axé sur le mécanisme de co-infection cellulaire par le VIH-1.Après co-incubation des cellules avec des virus VIH rapporteur GFP et DsRed, nos résultats ont montré que les événements de co-infection sont plus fréquents qu’attendus dans le cas d’une infection stochastique. Nous montrons que ce biais qui semble favoriser la co-infection et qui suggère l’hétérogénéité de la population cible en terme de susceptibilité à l’infection par le VIH-1 provient en fait d’une sous-estimation des fréquences de cellules infectées en raison d’un phénomène de latence post-intégrative. Ainsi, mes études ont permis de mieux comprendre les mécanismes permettant à Nef d’augmenter l’infectivité des particules virales ouvrant de nouvelles perspectives à ce sujet, de même qu’elles ont permis de mettre en évidence que la co-infection était bien un processus aléatoire mais qui permettait de révéler des cellules arborant un provirus silencieux
Pas de résumé en anglais

Le but de ce travail est de découvrir des nouvelles protéines suceptibles d'interférer avec le cycle vital du virus HIV. De par leur repliement, les protéines à motifs ankyrines peuvent constituer une ossature protéique trés bien adaptée à cet objectif. Plusieurs interacteurs spécifiques de la protéine MA-CA du HIV ont été sélectionnées par exposition sur phage à partir d'une bibliothèque de variants d'ankyrines. Trois protéines isolées ont été produites à partir de clones ayant une forte activité de liaison. Le meilleur interacteur protéique (1D4) interagit avec un épitope situié sur le domaine CA. La constante de dissociation entre 1D4 et la protéine HACA a été déterminée par Calorimétrie de Titrage Isotherme (ou ITC) et est égale à 0,45M. La protéine 1D4 n'a pas d'effet détectable sur la maturation virale suivie par une technique ELISA de dosage de la Protease du HIV. En revanche, cette protéine interfere avec l'assemblage viral dans des cellules supT1 qui exprime de façon stable la protéine 1D4 sous forme myristoylée. Ce resultat ouvre une perspective d'appoche pour interferer avec le cycle vital du HIV
Presently, the standard regimen for antiretroviral treatment is highly active antiretroviral therapy (HAART). However, this strategy inherits the well-known side effects and is prone to promote the HIV drug-resistant strains. As a consequence, gene therapy has been introduced as an alternative approach. In this study, we aimed to discover the novel protein-based agents for intervening viral replication by gene targeting procedure. Regarding the efficient folding dynamic in cytoplasm, ankyrin repeat protein was considered to be a candidate scaffold. Several engineered ankyrin binders specific to HIV MA-CA domain were successfully retrieved from the ankyrin-displayed phage library. Three positive clones with high binding activity by ELISA were selected for further analyzing their binding property in soluble form. The best binder, 1D4, recognized its epitope located on CA domain as shown by Western immunobloting and ELISA. The affinity of 1D4 against H6MA-CA was 0.45 μM with one to two moles of target molecule determined by isothermal titration calorimetry (ITC). Although 1D4 exhibited no effect on viral maturation as verified by an ELISA based HIV protease assay technique, it disturbed the viral assembly process in Sup-T1 cells which stably expressed the myristoylated 1D4. This finding has provided a concrete prospect for HIV life cycle interruption by stem cell gene therapy in the future

Introduction: Nous avons élaboré une étude observationnelle de cohortes, dans laquelle nous évaluons les différents facteurs influençant l'observance chez les patients VIH sous traitement antirétroviral, ainsi que le pourcentage de non-observance et d'échec thérapeutique des patients suivis au Centre Hospitalier de la Basse-Terre, en Guadeloupe. Méthodes: L'enquête a porté sur 138 patients sous traitement antirétroviral depuis au moins 6 mois, qui ont répondu à un questionnaire d'auto-évaluation des facteurs facilitateurs et des barrières à l'observance. Résultats: Le pourcentage de non-observance a été estimé à 29,71 % et l'échec thérapeutique retrouvé était de 45,65%. Différents facteurs démographiques, culturels et sociaux que nous évaluons expliquent cet échec. Conclusion: La compréhension des facteurs associés à l'observance afin de pouvoir l'augmenter est devenue un enjeu majeur de la recherche tout comme la promotion des interventions d'éducation thérapeutique pour faire connaître aux patients leur maladie et leur traitement, non seulement au moment de l'initiation de celui-ci mais aussi pendant toute la durée du traitement
Introduction: We prepared a study observational troops, in whom we evaluate the various factors that influence the observance within the framework of the patients HIV and their antiretroviral treatment. As weil as the percentage of nonobservance and therapeutic failure of the patients followed to the Hospital of Basse-Terre, Guadeloupe. Methods: the investigation related to 138 patients under antiretroviral treatment at least for 6 months, which answered a questionnaire of self-evaluation of the factors facilitators and barriers the observance. Results : The percentage of not-observance was estimated at 29,71 % and the found therapeutic failure was 45,65%. Various demographic factors, cultural and social that we evaluate explain this failure. Conclusion: To understand the factors associated with the observance in order to be able to increase it became a major stake of research like promoting the interventions of therapeutic education to make known with the patients their disease and their treatment, not only at the moment of initiation of the treatment but also throughout all treatment

La première étape du cycle viral du virus de l'immunodéficience humaine se déroule grâce à l'interaction entre les glycoprotéines d'enveloppe gp120/gp41 et les récepteurs CD4 et CCR5/CXCR4. Les différentes fonctions activées par cette étape, incluant l'attachement, la pénétration et la signalisation cellulaire représentent des cibles potentielles pour le développement d'antirétroviraux. Dans ce travail, nous avons développé des approches permettant d'agir sur chacune de ces étapes à l'aide de peptides synthétiques, d'anticorps anti-peptide et d'inhibiteurs des voies de signalisation. Dans la première approche, nous nous sommes intéressé au développement d'analogues peptidiques de la région HRII en évitant les limitations, incluant courte demi-vie et émergence d'isolats de résistance, rencontrées lors de l'utilisation du peptide T-20 (Fuzeon). Nous avons synthétisé un peptide de 34 acides aminés modélisant la région HRII en incluant des acides aminés non naturels de série D uniquement au niveau de certains sites sensibles à la protéolyse ou dans la totalité de la séquence.Les résultats obtenus montrent que les modifications ponctuelles permettent de : i) maintenir la structure en hélice a du peptide, ii) maintenir sa capacité à interagir avec la région HRI, iii) d'augmenter sa demie-vie et iv) de conserver son activité antivirale. Dans la deuxième approche, nous avons testé la capacité des peptides analogues de la région HRII de VIH-1 et de la boucle V3 de SIV à induire la production d'anticorps neutralisants. Cette étude nous a permis d'aboutir à deux conclusions principales : i) les anticorps anti-HRII peuvent interférer avec l'activité antivirale du peptide administré lors du traitement antiviral, ii) contrairement aux anticorps anti-V3 du VIH-1, les anticorps anti-V3 de SIV sont incapables de neutraliser le virus SIV suggérant des fonctions différentes pour cette région chez HIV-1 et SIV. Dans la troisième partie, nous avons montré que l'attachement du virus VIH sur son récepteur s'accompagne de l'activation de la voie PKC dont l'isoforme PKC-d. L'inhibition de cet isoforme bloque totalement la réplication virale. Ce blocage semble s'opérer en interférant avec les étapes post-entrée du virus en inhibant la formation des pseudopodes et des filaments d'actine, structure nécessaire pour l'étape de la transcription inverse.

Les glycoprotéines d'enveloppe (Env) de VIH-1 se caractérisent par une variabilité génétique qui peut toucher les motifs impliqués dans la régulation de leur trafic intracellulaire. Nous avons ainsi mis en évidence, pour certaines Env d'isolats primaires, un polymorphisme dans ces motifs. Nous avons pu montrer que ce polymorphisme naturel affectait la distribution intracellulaire des Env. Cette modification du trafic intracellulaire perturbe l'assemblage viral en diminuant l'incorporation des Env à la surface des virions, et de ce fait les capacités réplicatives des virus produits. Cependant, il semble que, dans les Env. De VIH-1 primaires, des déterminants additionnels, puissent modifier le trafic intracellulaire de ces protéines. Cette modification de trafic pourrait, par ailleurs, contribuer à l'échappement du virus au système immunitaire. Ces travaux amènent de nouveaux éléments sur la compréhension des moyens adoptés in vivo par le VIH-1 pour s'assurer d'une propagation optimale
The envelope glycoprotein (Env. ) of HIV-1 is characterized by an important polymorphism that can affect motifs involved in the regulation of the intracellular trafficking. Her, we investigated four envelope genes with natural polymorphism within these motifs. We showed that this polymorphism might influence the intracellular distribution of Env. This modification affects viral assembly by diminution of Env incorporation into virions and, thus, viral replication capacity. Furthermore, it seems that additional determinants regulate intacellular trafficking of primary Env. This traffic's modification could in part contribute to viral evade from immune system. These work bring new insight in the understanding of viral life and its capacity to insure optimal propagation in vivo

Memoria para optar al título de Periodista
“Demandas políticas de las organizaciones de la diversidad sexual 2000-2005: la guerra de los colas” es una investigación que recorre los principales hitos de la lucha que han emprendido las organizaciones sexuales por la obtención de derechos civiles desde 1973, año de la primera marcha homosexual en el país, hasta el período 2000-2005, que coincide con la activación política de distintos actores que emergen tras la despenalización de la sodomía en Chile. El reportaje describe cuáles son las demandas que han nacido en el tiempo acotado, del mismo modo en que se sumerge en el trabajo de las asociaciones y sus dirigentes que luchan día a día contra la discriminación. Mediante el análisis de los datos recogidos a través de entrevistas y la recopilación de información, el reportaje fue dividido en seis capítulos agrupados en ámbitos de acuerdo a las demandas levantadas por los mismos grupos. Finalmente, se llega a un apartado de conclusiones en que se plantean los desafíos de la lucha de gays, lesbianas, bisexuales y trans de cara al Bicentenario de la República.

Cette thèse de Sociologie a pour objet l'étude de l'influence de l'infection. à VIH sur les modes de vie des personnes séropositives et sidéennes. Elle se base sur 100 entretiens biographiques approfondis recueillis en Languedoc-Roussillon de janvier 1993 à juin 1994. Nous avons étudié cette influence dans 2 domaines: A. La vie quotidienne; B. Le sens de la maladie et les modifications identitaires. A. Au sein de la vie quotidienne, notre attention s'est portée sur les actes du contexte médicalisé, l'hygiène de vie, l'activité professionnelle et le réseau relationnel. Le résultat le plus frappant est qu'une minorité de l'échantillon fait le choix de ne pas avoir de suivi thérapeutique. L'infection à VIH ne change pas essentiellement l'hygiène de vie, mais par contre elle modifie les modalités de l'activité professionnelle. Ainsi, le statut sérologique, plus encore que l'atteinte physique, semblerait légitimer une forme de déviance sociale. Pour la plus grande partie de l'échantillon, taire ou dire la séropositivité/maladie à autrui dépend de l'éloignement ou de la proximité relationnelle par rapport à cet autrui, et constitue dans les deux cas une stratégie pour réduire le « malaise social ». B. Pour le sens de la maladie et les modifications identitaires, notre attention s'est portée sur les représentations des malades et de la maladie. Les personnes VIH+ interprètent leur contamination à partir de leur identité initiale et de la notion de prise de risque, au sein d'une logique sociale de responsabilité. La rupture avec l'état antérieur et la perception d'un risque de mort à court ou moyen terme conduit à concevoir l'infection à VIH soit comme une maladie destructrice soit comme l'occasion d'une reconstruction libératrice. L'ensemble de nos résultats montre que les personnes VIH+ ne diffèrent pas essentiellement, sur le plan du vécu, du sens donné à la maladie et des modifications identitaires, des personnes atteintes d'autres maladies chroniques.

L'étape de l'entrée du VIH-1 est un processus dynamique régi par deux acteurs : gp120 et gp41. Cette étape est une étape clef de l'infection : tout blocage de cette étape conduit à une inhibition de la réplication virale. Nous nous sommes intéressés au cours de ce travail au développement d'antirétroviraux ciblant cette étape ainsi qu'aux voies de signalisations activées lors de l'entrée. Nous avons ainsi développé d'une part des inhibiteurs de l'entrée du VIH-1 en se basant sur deux stratégies i) le développement d'immunogènes capables d'induire des anticorps neutralisants, ii) la modélisation et la synthèse d'inhibiteurs dérivés des régions HR1 ou N36 et HR2 ou C34 de g41. Dans une dernière partie, nous avons étudié l'inhibition des voies de signalisation PKC impliquées dans les étapes post-fusion. Nous nous sommes intéressés, dans une première partie, au complexe formé par les domaines HR1 et HR2, sa caractérisation, sa purification, sa stabilité et sa capacité à induire des anticorps neutralisants, cela dans une approche vaccinale. Notre travail a permis de démontrer que le complexe HR1-HR2 ainsi que les peptides dérivés des domaines HR1 et HR2(N36 et C34) sont immunogènes. Ils induisent des anticorps qui reconnaissent le complexe HR1-HR2 ainsi que les protéines d'enveloppe du VIH-1. Ces anticorps inhibent la fusion à la température suboptimale de 27°C. Enfin ces anticorps générés interfèrent avec l'activité antivirale des peptides en formant des complexes antigènes-anticorps. Le complexe HR1-HR2, tel que nous l'avons modélisé, ne semble pas être un immunogène adapté pour la génération d'anticorps neutralisants. L'objectif de la deuxième partie de mon travail a été de développer des peptides inhibiteurs analogues du C34 et du N36 ayant une forte activité antivirale et une forte stabilité. Nous avons ainsi développé deux trimères : le Trimère C34 et le Trimère N36 dans une approche originale utilisant un linker dit minimal composé de 5 lysines uniquement. Cette approche nous a permis d'obtenir des inhibiteurs stables qui maintiennent la capacité d'interaction avec les domaines HRI et HRII de la gp41 et qui ont des activités antivirales similaires, voire améliorées pour le Trimère N36, par rapport aux peptides monomériques C34 et N36. Nous nous sommes intéressés dans la troisième partie de ce travail aux voies de signalisation activées lors de l'entrée. En effet, l'attachement du VIH-1 sur son récepteur et ses corécepteurs s'accompagne par l'activation de nombreuses voies dont celle des PKC. Nous avons montré, en utilisant des inhibiteurs chimiques, des oligonucléotides et des SiRNA, le rôle crucial de l'isoforme PKC delta dans la réplication virale. Ces approches sont complémentaires et s'insèrent dans la lutte contre la propagation du VIH-1 avec comme objectif de développer des stratégies thérapeutiques et vaccinales contre le VIH-1
HIV-1 entry is a dynamic process with two main actors: HIV-1 envelope glycoproteins: gp120 and gp41. The entry is a key step of the infection: blockade of this step leads to an inhibition of the viral replication. Our main focus in this project is the key actor of the viral entry and fusion: gp41. The main goal of our work was to develop antiviral therapies against HIV-1 entry and the pathways triggered by the HIV-1 entry. We developped in this work HIV-1 entry inhibitors using two strategies were used: i) the development of immunogens capable to induce neutralizing antibodies, ii) the modeling and synthesis of peptide inhibitors derived from the HR1 or N36 and HR2 or C34 regions of gp41. In a second part, we have evaluated the effect of PKC pathways on HIV-1 replication. We studied, in the first part, the complex formed by the HR1 and HR2 domains, the purification of this complex, its stability and its ability to induce neutralizing antibodies, in a vaccine approach. This work has showed that HR1-HR2 complex is rapidly formed (less than 1 min) and remained stable as demonstrated by its inability, in contrast to each free peptide, to inhibit syncytia formation. Purified preformed HR1-HR2 complex and monomeric HR1 and HR2 peptides are immunogenic in mice and induce antibodies that recognize total HIV-1 envelope. They neutralize fusion when incubated at 27°C. Finally, these antibodies inhibit the anti-viral activity of peptide inhibitors by forming antigen-antibody complexes. The HR1-HR2 complex does not seem to be the optimal immunogen in order to induce neutralizing antibodies. In the second part of our study, the main focus was the development of peptide inhibitors analogues of C34 and N36 with fewer limitations. We synthetized two Trimers: TrimerN36 and TrimerC34 using an original approach based on a minimal linker composed of five lysines. Our results showed that these trimers could interact with the HRI or HRII regions. Both trimers have high antiviral activities with an ameliorated antiviral activity, for the TrimerN36 compared to the monomer N36. In the last part, we studied the signaling pathways activated upon HIV-1 entry. Indeed, the attachment of HIV-1 to its receptor and coreceptor is accompanied by the activation of multiple pathways including that of PKC. We have shown, using chemical inhibitors, oligonucleotides and siRNA, the crucial role of PKC delta isoform in viral replication

Magíster en Psicología, Mención Psicología Clínica Infanto – Juvenil
Antecedentes: El estudio de las alteraciones neuropsicológicas asociadas a la infección por VIH en escolares resulta relevante dado el aumento en la expectativa de vida de estos niños producto del uso de terapias antiretrovirales y de las importantes implicancias que estas alteraciones pueden tener en su calidad de vida y en sus posibilidades de inserción social y laboral. Una revisión de las investigaciones pone de relieve la inconsistencia de los hallazgos en esta materia, la falta de información respecto a nuestra población infantil, y la importancia de estos resultados para el ámbito médico, educacional y clínico. Propósito: Este proyecto tiene como objetivo explorar el funcionamiento neuropsicológico de niños entre 5 y 15 años infectados verticalmente por VIH y su progresión en las diferentes etapas clínicas de la infección, así como identificar un posible perfil de funcionamiento. Material y Método: Utilizando la batería del desarrollo neuropsicológico NEPSY II se evaluó el rendimiento de 27 niños con VIH en cinco áreas: funciones ejecutivas, atención, lenguaje, memoria, procesamiento sensoriomotriz y procesamiento visoperceptivo, y luego se comparó con el rendimiento de un grupo control compuesto por 28 niños pareados por edad, sexo y nivel socioeconómico. Resultados: Los resultados muestran un perfil neuropsicológico -en relación al grupo control- caracterizado por un rendimiento significativamente disminuido en el funcionamiento ejecutivo (control inhibitorio y flexibilidad cognitiva), lenguaje comprensivo y expresivo y en las habilidades motoras finas. En el funcionamiento neuropsicológico no se observó un deterioro en las diferentes etapas de la infección, exceptuando el lenguaje. Discusión: Los hallazgos encontrados en este estudio resultan fundamentales para una nueva conceptualizacion y enfoque en los programas de rehabilitación y tratamiento de los niños con VIH, así como dejan al descubierto la necesidad de ampliar la mirada en el trabajo con este enfermedad crónica en la infancia. Por último, queda en evidencia la importancia de continuar con diversas líneas de investigacion desde la psicología que permitan mejorar aún más la calidad de vida de estos niños y adolescentes

La protéase (PR) joue un rôle prépondérante dans le cycle de réplication du VIH-1. Dans ce travail, nous avons poursuivi la stratégie élaborée dans notre laboratoire en développant des pinces moléculaires constituées du naphtalène ou de la quinoléine et portant deux brins peptidiques différents dont le tripeptide V-L-V-OMe. L'autre brin est soit un peptide qui reproduit la séquence N- ou C- terminale du monomère de la PR, soit un analogue de PamY-E-L de Schramm ou un peptidomimétique ayant une structure contrainte. Les études cinétiques de l'activité inhibitrice de ces pinces ont confirmé la validité du concept d'antidimères à noyau central rigide et le choix du peptide V-L-V-OMe comme un des brins
New "molecular tongs" based on naphthalene and quinoline scaffolds linked to two peptidic strands were synthesized. They were designed to prevent dimerization of RN -1 protease, at the antiparallelj3- sheet structure level involving N- and C-termini of each monomer. Seventeen new molecular tongs were synthesized with dipeptidic or tripeptidic strands. These molecules were assayed on HIV-1 protease following Zhang kinetic techniques. Twelve molecules were shown as pure dimerization inhibitors, mostly in submicromolar range. Dimerization inhibition was ascertained using ANS fluorescence and gel filtration experiments which showed the dissociation of HIV-1 protease dimeric form in presence of synthesized molecular tongs

L'autophagie est un mécanisme de dégradation lysosomale qui joue un rôle important dans l'immunité innée et adaptative. La relation entre le Virus de l'Immunodéficience Humaine de type 1 (VIH-1) et l'autophagie est complexe. En effet, l'équipe a montré que l'enveloppe virale du VIH-1 (Env), exprimée à la surface des cellules infectées, induit une autophagie massive dans les cellules T CD4 bystanders non infectées. Au contraire, lorsque ces cellules s'infectent de façon productive, l'autophagie est inhibée, suggérant qu'une ou plusieurs protéines virales soient capables de bloquer ce processus. L'objectif de ce travail de thèse a été de rechercher ces protéines virales et leur mécanisme d'action. Un crible double hybride en levure a permis de mettre en évidence que plusieurs protéines du VIH-1 sont capables d'interagir avec des protéines autophagiques (Atg), et plus spécifiquement que la protéine virale Vif (Virion infectivity factor) interagit directement avec la protéine LC3, protéine essentielle au processus autophagique. Cette interaction a été confirmée en système in vitro et in vivo (GST pull-down et immunoprécipitation). Plusieurs mutants des protéines Vif et LC3 ont été réalisés pour déterminer les domaines de liaison. La partie C-terminale de Vif ainsi que la glycine C-terminale de LC3, responsable de la conjugaison au phosphatidylethanolamine (PE), semblent être les domaines impliqués dans cette interaction. Une des principales fonctions de Vif connues est de dégrader, via le protéasome, les facteurs cellulaires APOBEC (Apolipoprotein B mRNA-editing, enzyme-catalytic, polypeptide-like) et en particulier la protéine APOBEC3G (A3G). Les résultats montrent que Vif est impliquée dans le blocage de l'autophagie induite par l'enveloppe indépendamment de son action sur A3G
Autophagy is a lysosomal degradation pathway involved in the innate and adaptative immunity. The relationship between the Human Immunodeficiency Virus type 1 (HIV-1) and autophagy is complex. The team has demonstrated that autophagy is induced in uninfected CD4 T cells after contact with infected cells expressing HIV-1 envelope glycoproteins (Env), leading to apoptosis. In contrast, when these cells are productively infected, autophagy is repressed, suggesting that one or several viral proteins are able to block this process. The aim of the thesis was to search these viral proteins and to determine their mechanism of action. A two-hybrid screen has revealed that several HIV-1 viral proteins are able to interact with autophagic proteins (Atg). In particular, Vif (Virion infectivity factor) interacts directly with LC3, a protein involved in the formation of autophagosomes. This interaction has been confirmed in vitro and in vivo (GST pull-down and immunoprecipitation). Several mutants of Vif and LC3 have been done to analyze the binding domains. The C-terminal part of Vif and the C-terminal glycine of LC3, responsible for the conjugation to PE, seem to be involved in the interaction between Vif and LC3.Vif plays an important role during HIV-1 infection. One of its main functions is to degrade, by the ubiquitin-proteasome system, the antiviral factors called APOBECs (Apolipoprotein B mRNA-editing, enzyme-catalytic, polypeptide-like) and in particular APOBEC3G (A3G). Our results demonstrate that Vif is involved in the blockade of Env-mediated autophagy independently of its role on A3G

Ce travail de thèse vise à montrer ce qu'une évaluation psychosociale peut apporter à la compréhension de la subjectivité de la qualité de vie des patients infectés par le VIH. L'évaluation de la qualité de vie permet de comprendre les liens entre efficacité thérapeutique et évaluation subjective du traitement et d'appréhender de manière plus précise la façon dont les gens vivent et se soignent. Ce travail confronte la variation de la qualité de vie à la variation d'un ensemble de paramètre sociaux et psychosociaux identifiés comme des composantes du système qu'est l'évaluation subjective. Les différentes analyses se sont appuyées sur les données d'une enquête transversale et des deux cohortes APROCO et MANIF 2000, de patients initiant une multithérapie antirétrovirale pour la première et de patients contaminés par usage de drogue pour la seconde. Nous avons tout d'abord effectué une description précise de la qualité de vie. Ensuite, nous avons identifié des variations de la qualité de vie selon la variation de paramètres relatifs à l'identité personnelle tels que la mise en cause de la corporéité par la survenue d'effets secondaires des traitements, l'orientation temporelle et le sentiment de contrôle. Dans un second temps, l'analyse des données empiriques a permis de mettre en évidence l'ancrage sociétal de l'évaluation de la qualité de vie de par le rôle de l'entourage social, des soignants et du contexte social. Enfin, dans un dernier temps, nous nous sommes penché sur les nouveaux enjeux de la pratique thérapeutique, en étudiant les interactions entre qualité de vie et observance au traitement ainsi que l'impact déterminant de la santé mentale sur la progression clinique de l'infection à VIH.

L'étude de l'évolution et de la valeur pronostique des marqueurs est très fréquente en
épidémiologie. Le taux de lymphocytes T CD4+ et la charge virale plasmatique sont des
marqueurs très important de l'infection par le virus de l'immunodéficience humaine (VIH).
La modélisation de l'évolution de ces marqueurs présente plusieurs difficultés
méthodologiques. D'une part, il s'agit de données répétées incomplètes c'est à dire pouvant
être manquantes du fait de la sortie d'étude de certains sujets et de la censure de la charge
virale liée à une limite de détection inférieure des techniques de mesure. D'autre part, ces
deux marqueurs étant corrélés, il est important de prendre en compte cette information dans le
modèle. Nous avons proposé des méthodes basées sur le maximum de vraisemblance pour
estimer les paramètres de modèles linéaires mixtes prenant en compte l'ensemble de ces
difficultés. Nous avons montré l'impact significatif de ces méthodes biostatistiques sur les
estimations et donc nous avons souligné l'importance de leur utilisation dans le cadre des
marqueurs du VIH. Pour promouvoir leur diffusion, nous avons présenté des possibilités
d'implémentation de certaines des méthodes proposées dans des logiciels statistiques
communs.

Le theme principal de recherche developpe au laboratoire concerne l'immuno-pathogenese de l'infection par le vih, fondee sur l'analyse des populations virales et cellulaires t presentes dans les organes lymphoides secondaires. Des etudes precedentes avaient montre qu'un processus repetitif et deletere caracterise l'infection des pulpes blanches spleniques par le vih : le recrutement antigene-dependant et l'activation de cellules t cd4+ aboutit a leur infection, declenchant replication et dissemination virale. La reponse immune anti-vih, probablement cytotoxique, aboutit a la destruction des cellules t cd4+ nouvellement infectees. Les travaux presentes dans cette these se sont attaches a l'etude de la replication virale, de l'infection cellulaire et de l'activite cytotoxique au sein des structures immunocompetentes de la rate de patients infectes par le vih. Dans une premiere etude, l'analyse tridimensionnelle de la distribution des cellules infectees au sein des centres germinatifs et des regions pals spleniques suggere peu de diffusion du virus ou un controle strict de la replication virale a l'interieur des structures. Dans une seconde etude, nous avons par l'analyse des populations provirales et virales, genomiques et cellulaires epissees, dans des pulpes blanches spleniques, mis en evidence que la majorite des virions presents dans les pulpes blanches sont produits in situ. Finalement, nous avons demontre que les cellules cd8+ infiltrant les centres germinatifs des patients infectes par le vih-1 ont bien une activite cytotoxique dirigee contre les proteines virales in vivo. Les resultats de ces travaux ont permis de mieux apprehender le modele immunopathologique de l'infection par le vih et confirment que chaque infection,

L'étude de l'évolution et de la valeur pronostique des marqueurs est très fréquente en épidémiologie. Le taux de lymphocytes T CD4+ et la charge virale plasmatique sont des marqueurs très importants de l'infection par le virus de l'immunodéficience humaine (VIH). La modélisation de l'évolution de ces marqueurs présente plusieurs difficultés méthodologiques. D'une part, il s'agit de données répétées incomplètes c'est à dire pouvant être manquantes du fait de la sortie d'étude de certains sujets et de la censure de la charge virale liée à une limite de détection inférieure des techniques de mesure. D'autre part, ces deux marqueurs étant corrélés, il est important de prendre en compte cette information dans le modèle. Nous avons proposé des méthodes basées sur le maximum de vraisemblance pour estimer les paramètres de modèles linéaires mixtes prenant en compte l'ensemble de ces difficultés. Nous avons montré l'impact significatif de ces méthodes biostatistiques sur les estimations et donc nous avons souligné l'importance de leur utilisation dans le cadre des marqueurs du VIH. Pour promouvoir leur diffusion, nous avons présenté des possibilités d'implémentation de certaines des méthodes proposées dans des logiciels statistiques communs
The study of evolution and prognostic value of markers is usual in epidemiology. The CD4+T lymphocytes cell count and the plasma viral load are useful markers in human immunodeficiency virus infection (HIV). The modelling of those markers evolution raises several methodological difficulties. First of all, these is incomplete data including missing data because of subjects drop-out and censored observation because of a lower quantification limit of assays. Moreover, two markers are corelated and it is important to take into account this information in the model. We proposed maximum likelihood based methods to estimate the parameters of linear mixed models handling all of these difficulties. We showed the significant impact of these biostatistical methods on the estimations and we underlined their usefulness for HIV markers. To promote their spread, we presented possibilities to implement some of the proposed methods in standard statistical software

El uso de la terapia anti-retroviral de gran actividad (TARGA), además de ejercer un efecto positivo en la mejora del sistema inmunológico de los pacientes afectados con el virus de la inmunodeficiencia humana, ha sido asociado a la presentación de efectos adversos, entre los principales, el desarrollo de dislipidemia, diabetes e hipertensión. La presentación de estos efectos metabólicos colaterales y el incremento en la presentación de eventos cardiovasculares en esta población en especial, ha motivado su estudio; reportándose cifras de prevalencia del síndrome metabólico en pacientes con VIH en TARGA mayores que en la población general. No se cuentan con datos nacionales, respecto a la identificación de los factores de riesgo asociados al desarrollo del síndrome metabólico en pacientes infectados con VIH y que se hallen en TARGA. Sin embargo, ha sido descrito en varios estudios que la exposición a algunos antirretrovirales, como la Inhibidores de proteasa y el uso de Estavudina en el esquema TARGA, representan factores de riesgo independientes para la presentación del síndrome metabólico (1, 2, 3, 4). Uno de los estudios más representativos de esta hipótesis es el realizado por Jericó y cols (5). Este trabajo analiza la prevalencia y factores de riesgo asociadosen 710 pacientes infectados con VIH en Barcelona, España. Dentro de sus conclusiones, además de señalar una prevalencia del síndrome metabólico estadísticamente no significativa entre pacientes VIH positivos en TARGA y pacientes VIH negativos, señala como factores de riesgo para el desarrollo de este síndrome el uso de Estavudina y Lopinavir/Ritonavir. Esta hipótesis ha sido puesta en duda, ya que estudios similares cuyos objetivos eran demostrar algún tipo específico de fármaco anti-retroviral asociado a la presentación de síndrome metabólico, han presentado resultados disímiles.
Tesis de segunda especialidad

Els inhibidors d'entrada del VIH han sorgit recentment com una nova generació de fàrmacs antiretrovirals, els quals bloquegen la unió del virus als co-receptors de membrana CXCR4 i CCR5. S'han desenvolupat diverses molècules petites antagonistes d'aquests co-receptors, algunes de les quals estan actualment en fase d'assaig clínic. No obstant això, donat que no existeixen estructures cristal·logràfiques per aquests co-receptors proteics, és necessari analitzar els modes d'unió d'inhibidors coneguts a la cavitat d'unió extracel·lular dels co-receptors mitjançant experiments de mutagènesi dirigida i estudis computacionals. En general, l'objectiu d'aquestes aproximacions computacionals és cribar un gran nombre de compostos candidats a fàrmacs ràpidament. El cribatge virtual s'ha convertit recentment en un complement útil dels mètodes de cribatge experimentals high-throughput screening per a grans llibreries de compostos. Per tant, en aquesta tesi s'ha portat a terme un protocol de cribatge virtual, mitjançant aproximacions basades en el receptor i en lligands actius coneguts, amb la finalitat de trobar antagonistes de CXCR4 i CCR5 que puguin servir com a potencials inhibidors d'entrada del VIH.
Per al cribatge virtual basat en el receptor, s'han millorat els models dels co-receptors CXCR4 i CCR5 construïts a la secció de disseny molecular de l'IQS, i s'han portat a terme assajos preliminars de mode d'unió utilitzant aquests models i lligands coneguts d'elevada afinitat. Així mateix, s'ha analitzat el comportament en el cribatge virtual i en el post-processat de resultats de docking de diferents fingerprints d'interacció en comparació amb els resultats obtinguts per un nou fingerprint d'interacció (APIF) desenvolupat a la secció de disseny molecular de l'IQS.
Per al cribatge virtual basat en lligands, s'han comparat models farmacofòrics i diverses aproximacions basades en la forma i propietats moleculars utilitzant lligands d'elevada afinitat com a molècules de referència. A més, s'ha desenvolupat una nova aproximació basada en la forma molecular, la qual s'ha utilitzat per a estudiar en profunditat la hipòtesi de la multi-regió d'unió de la cavitat d'unió extracel·lular del co-receptor CCR5.
Tots els mètodes, ja siguin basats en el receptor o en lligands coneguts, s'han aplicat en primer lloc de manera retrospectiva utilitzant una extensa base de dades d'inhibidors de CXCR4/CCR5 i suposats inactius, similars en propietats als actius, recopilada en aquesta tesi. Per a cada receptor, la quimioteca ha estat cribada utilitzat inhibidors coneguts, S'han analitzat els factors d'enriquiment i la diversitat a les llistes finals de hits. A més, s'han portat a terme anàlisis ROC per a ambdós inhibidors de CXCR4 i CCR5 amb la finalitat de comparar l'habilitat del nou algoritme basat en la igualtat de formes de lligands amb la resta d'aproximacions de cribatge utilitzades.
Una vegada validades les diferents aproximacions de cribatge i seleccionats els millors paràmetres per a cadascuna d'elles, s'han aplicat les eines de cribatge virtual de manera prospectiva sobre una quimioteca combinatòria dissenyada a la secció de disseny molecular de l'IQS, així com tècniques de disseny de novo de lligands per tal d'identificar nous bloquejadors de l'entrada del VIH a les cèl·lules.
Los inhibidores de entrada del VIH han surgido recientemente como una nueva generación de fármacos antiretrovirales, los cuales bloquean la unión del virus con los co-receptores de membrana CXCR4 y CCR5. Se han desarrollado diversas moléculas pequeñas antagonistas de estos co-receptores, algunas de las cuales están actualmente en fase de ensayo clínico. Sin embargo, dado que no existen estructuras cristalográficas para estos co-receptores proteicos, es necesario analizar los modos de unión de inhibidores conocidos a la cavidad de unión extracelular de los co-receptores mediante experimentos de mutagénesis dirigida y estudios computacionales. En general, el objetivo de estas aproximaciones computacionales es cribar un gran número de compuestos candidatos a fármacos rápidamente. El cribado virtual se ha convertido recientemente en un complemento útil de los métodos de cribado experimentales high-throughput screening para grandes librerías de compuestos. Por lo tanto, en esta tesis se ha llevado a cabo un protocolo de cribado virtual, mediante aproximaciones basadas en el receptor y en ligandos activos conocidos, con el fin de encontrar antagonistas de CXCR4 y CCR5 que puedan servir como potenciales inhibidores de entrada del VIH.
Para el cribado virtual basado en el receptor, se han mejorado los modelos de los co-receptores CXCR4 y CCR5 construidos en la sección de diseño molecular del IQS, y se han llevado a cabo ensayos preliminares de modo de unión utilizando estos modelos y ligandos conocidos de elevada afinidad. Asimismo, se ha analizado el comportamiento en el cribado virtual y en el post-procesado de resultados de docking de diferentes fingerprints de interacción en comparación con los resultados obtenidos por un nuevo fingerprint de interacción (APIF) desarrollado en la sección de diseño molecular del IQS.
Para el cribado virtual basado en ligandos, se han comparado modelos farmacofóricos y diversas aproximaciones basadas en la forma y propiedades moleculares utilizando ligandos de elevada afinidad como moléculas de referencia. Además, se ha desarrollado una nueva aproximación basada en la forma molecular, la cual se ha utilizado para estudiar en profundidad la hipótesis de la multi-región de unión de la cavidad de unión extracelular del co-receptor CCR5.
Todos los métodos, ya sean basados en el receptor o en ligandos conocidos, se han aplicado en primer lugar de manera retrospectiva utilizando una extensa base de datos de inhibidores de CXCR4/CCR5 y supuestos inactivos, similares en propiedades a los activos, recopilada en esta tesis. Para cada receptor, la quimioteca ha sido cribada utilizando inhibidores conocidos, Se han analizado los factores de enriquecimiento y la diversidad en las listas finales de hits. Además, se han llevado a cabo análisis ROC para ambos inhibidores de CXCR4 y CCR5 con el fin de comparar la habilidad del nuevo algoritmo basado en la igualdad de formas de ligandos con el resto de aproximaciones de cribado utilizadas.
Una vez validadas las diferentes aproximaciones de cribado y seleccionados los mejores parámetros para cada una de ellas, se han aplicado las herramientas de cribado virtual de manera prospectiva sobre una quimioteca combinatoria diseñada en la sección de diseño molecular del IQS, así como técnicas de diseño de novo de ligandos para identificar nuevos bloqueadores de la entrada del VIH a las células.
HIV entry inhibitors have emerged as a new generation of antiretroviral drugs that block viral fusion with the CXCR4 and CCR5 membrane co-receptors. Several small molecule antagonists for these co-receptors have been developed, some of which are currently in clinical trials. However, because no crystal structures for the co-receptor proteins are available, the binding modes of the known inhibitors within the co-receptor extracellular pockets need to be analyzed by means of site-directed mutagenesis and computational experiments. Generally, the objective of these computational approaches is to screen large numbers of candidate drug compounds rapidly. Virtual screening has recently become a useful complement to laboratory-based high-throughput screening methods for large libraries of compounds. Hence, in this thesis, a virtual screening protocol, using several receptor-based and ligand-based approaches, has been performed to find CXCR4 and CCR5 antagonists that could potentially serve as HIV entry inhibitors.
For receptor-based virtual screening, homology models of CXCR4 and CCR5 co-receptors built in our research group have been improved, and preliminary binding mode analyses using these models and high affinity known ligands have been carried out. Also, the performance in virtual screening and docking post-processing of different interaction fingerprints, compared to the results obtained with a new interaction fingerprint (APIF) developed in our research group, has been analysed.
For ligand-based virtual screening, pharmacophore modelling and several shape-based and property-based molecular comparison approaches have been compared, using high-affinity ligands as query molecules. Also, a novel consensus shape-based virtual screening approach has been developed and used to investigate and add further evidence for multiple binding sites within the CCR5 extracellular pocket hypothesis.
All the receptor-based and ligand-based methods have been firstly applied in a retrospective virtual screening, using a large database of known CXCR4/CCR5 inhibitors and similar presumed inactive molecules assembled in this thesis. For each receptor, the library has been queried using known binders, and the enrichment factors and diversity of the resulting virtual hit lists have been analyzed. Moreover, receiver-operator-characteristic analyses for both CXCR4 and CCR5 inhibitors have been carried out in order to compare the performance of the new consensus shape matching algorithm with the other screening approaches used.
Once the different virtual screening approaches have been validated and the best parameters for each one have been selected, prospective virtual screening of a combinatorial library designed by our research group and de novo design methods have been applied to identify new HIV entry blockers.

L’intégrase (IN) est l’une des enzymes virales assurant la réplication du VIH. La fonctionnalité des protéines qui, comme celles du VIH, ont une variabilité de séquence repose sur des résidus non conservés, en plus des acides aminés conservés entre souches, qui ont un rôle important notamment lorsqu'ils font partie de réseaux de coévolution. Ces réseaux peuvent contrecarrer l'effet délétère d'une mutation par l'introduction de mutations compensatoires ailleurs dans la protéine. Ce travail a mis en évidence, par une étude comparative de différentes souches du VIH, des réseaux de coévolution étendus dans l'IN. Un résultat majeur est l'identification d'un nouveau motif assurant de multiples rôles dans le cycle infectieux. Le motif diffère entre les groupes M et O du VIH, mais est strictement conservé au sein de ces deux groupes en dépit d'une certaine flexibilité génétique en culture de cellules. Ceci suggère que ces groupes ont suivi des chemins évolutifs convergents bien que distincts
Integrase (IN) is one of the viral enzymes ensuring HIV replication. The functionality of proteins, which, like those from HIV, have sequence variability, relies on nonconserved residues, in addition to the conserved amino acids between strains, which have an important role especially when they are part of coevolution networks. These networks can counteract the deleterious effect of a mutation by introducing compensatory mutations elsewhere in the protein. This work has demonstrated, through a comparative study of different strains of HIV, extensive coevolution networks in IN. A major result is the identification of a new motif that provides multiple roles in the infectious cycle. The pattern differs between HIV groups M and O, but is strictly conserved within these two groups despite some genetic flexibility in cell culture. This suggests that these groups followed convergent, although distinct, evolution pathways

L'approche psychosomatique dans la compréhension de l'évolution d'une maladie infectieuse : Psychosomatique et immunité. L'étude de deux groupes, l'un constitué de 9 patients sida avéré et l'autre constitué de 10 patients séropositifs asymptomatiques, vise à montrer que la variabilité symptomatique en terme de stabilisation est entre autres liée à la qualité du fonctionnement psychique. Les outils utilisés pour cette recherche sont l'entretien KAPP, le Rorschach classique et associatif et l'échelle d'Alexithymie. L'analyse et l'interprétation des résultats tendent à valider cette hypothèse
Psychosomatic and AIDS, contribution to evaluation of disease evolution. This study of 19 subjects afflicted with HIV infection demonstrates that their symptomatic variability in terms of stabilization depends of the quality of psychic functioning. The analysis and interpretation of data from Toranto Alexithymia scale, from Rorschach protocols, KAPP and clinical research interviews tend to hypothesis that the somatic improument and the ability to cope with the disease depends of the quality of psychic functioning

Les glycoprotéines d'enveloppe (Env) du VIH-1 se caractérisent par leur long domaine cytoplasmique (DC) qui joue un rôle essentiel dans la morphogenèse et l’infectivité virales. La multiplication virale in vitro et in vivo dépend ainsi étroitement de l’intégrité de ce domaine. Nous avons cependant identifié un patient infecté par un VIH-1 présentant des Env avec un DC tronqué de 20 acides aminés. Cette anomalie structurale aurait dû aboutir à la production de virions dont la capacité infectieuse était fortement diminuée. Mon travail de thèse a donc consisté à évaluer les conséquences fonctionnelles d’une telle troncation et à explorer les mécanismes moléculaires permettant au virus présentant cette anomalie de se multiplier efficacement in vivo. Les travaux réalisés au cours de cette thèse ont abouti à l’identification de mécanismes de compensation des capacités de multiplication de ce virus portant des Env tronquées dans leur DC impliquant des mutations dans la protéine de matrice. En conclusion, toutes ces données ont permis d’apporter des éléments de compréhension nouveaux quant à l’assemblage du VIH-1 et son fort potentiel d’évolution in vivo
The human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) typically encodes envelope glycoprotein transmembrane subunits with long cytoplasmic tails (CTs) involved in viral infectivity and morphogenesis. The integrity of the gp41 CT thus seems to be essential for viral replication in vitro and in vivo. However, we report here the emergence and dominance in vivo of a primary HIV-1 variant carrying a natural 20-amino-acid truncation of the gp41 CT. Such a deletion would therefore be expected to impair viral replication. The aims of this study were thus to assess the functional consequences of the gp41 truncation and to identify the molecular mechanisms by which a primary HIV-1 harboring such a deletion in the gp41 CT maintained its ability to replicate efficiently in vivo. Our findings reveal that replication capacity of a primary HIV-1 carrying truncated CT could be rescued by compensatory mechanisms involving mutations in the matrix protein. In conclusion, our findings provide new insignt into HIV-1 assembly and evolution potential in vivo

Longtemps considérée comme impossible du fait de leur divergence génétique, la recombinaison entre le VIH-11M pandémique et le VIII-1/0* endémique au Cameroun, a été rapportée à quatre reprises entre 1999 et 2010. Pour être générées, ces formes nécessitent au préalable des doubles infections M+0. De part son épidémiologie moléculaire, le Cameroun est caractérisé par la co-circulation de ces deux variants, ce qui peut donc favoriser les doubles infections VIH-1/M+0 et l'émergence des recombinants VIH-11MO. Une précédente étude de notre équipe a permis de détecter de nouvelles doubles infections et six formes recombinantes putatives, associées ou non à des doubles infections ; mais ces résultats présentaient certaines limites, en particulier épidémiologiques et techniques. Notre travail avait donc pour objectif de mieux caractériser ces doubles infections VIH-1/M+0 et recombinants VIH-1/M0 présentes au Cameroun, en estimant leur fréquence et en analysant leur profil génétique. De mars 2013 à juin 2015, 275 patients dépistés VIH-1 positifs au Centre Pasteur du Cameroun ont été inclus sur la base d'un test de sérotypage, permettant la discrimination des sérotypes M, O et M+0. Des analyses moléculaires spécifiques de groupe ont été ensuite réalisées dans les gènes pol et env, pour confirmer les réactivités sérologiques et rechercher des discordances pollenv, en faveur d'une forme recombinante. Devant un résultat évoquant une double infection M+0 et/ou la présence d'un recombinant MO, une forme recombinante putative a été recherchée par amplification d'une région couvrant le gène vpr, considéré comme possible point chaud de recombinaison. Les génomes complets de ces formes putatives ont ensuite été caractérisés, et les liens génétiques avec les recombinants déjà décrits, recherchés par analyses phylogénétiques. Parmi les 275 patients, 199 (72,4%) étaient mono-réactifs M, 47 (17,1%) mono-réactifs O, et 29 (10,5%) doublement réactifs M+0. Des doubles infections ont été confirmées moléculairement chez 4 patients (1,4%) et la présence de recombinants chez 3 patients (1,1%). Le premier recombinant, « isolé », a été identifié au sein d'un couple ; le second était associé à une forme parentale VIH-1/M. La caractérisation des génomes complets a permis de mettre en évidence des points de cassure au niveau du gène vpr et la région LTR pour le premier, et au niveau du gène vpu et la région LTR pour le second. Aucun lien n'a été identifié entre ces recombinants et les autres recombinants actuellement caractérisés. Les sous-types VIE1-1/M et les sous-groupes VIH-1/0 impliqués étant cohérents avec l'épidémiologie moléculaire au Cameroun, à savoir une majorité de VIH-1/M CRF02_AG et de VIII-1/0 sous-groupe H. L'origine géographique de ces sept patients était différente, et correspondait à cinq des régions administratives du Cameroun. Nos résultats ont permis d'identifier sept nouveaux cas de doubles infections VIH-l/M+0 et. /ou de formes recombinantes vill-umo. Bien qu'elles semblent persister à bas bruit, elles sont toutefois retrouvées dans différentes régions du Cameroun démontrant leur potentiel de diffusion. Ce travail a également permis de caractériser deux nouveaux génomes complets mettant en évidence des points de cassure dans vpr, vpu et les LTR. Ces nouvelles formes ne sont pas liées à celles précédemment décrites, soulignant ainsi la circulation de nombreuses URFs et la dynamique importante d'évolution par recombinaison entre les deux groupes. Il apparaît donc nécessaire de poursuivre la surveillance de diffusion des formes recombinantes MO, pour identifier l'éventuelle émergence d'une CRF_MO, pouvant présenter de meilleures propriétés virologiques et phénotypiques
Frequency and genetic profile of HIV-1/M+0 dual infections and HIV-1/1V10 recombinant forms circulating in Cameroon Despite the great genetic divergence between the pandemic HIV-1/M and non pandemic HIV-1/0, four HIV-1/MO intergroup recombinants have been reported in 1999 and 2010. In Cameroon, the co-circulation of two groups (M and 0) provides an ideal environment for HIV-1/MO recombination to occur. In a previous work, we reported new dual infections and six HIV-LIMO putative recombinant forms, associated to or not to dual infections. However, this study had some epidemiological and technical limitations. In the present study, we aimed to estimate the frequency and to characterize genetic profiles of HIV-1/M+0 dual infections, as well as HIV-11M0 recombinant forms in Cameroon. From March 2013 to June 2015, 275 HIV infected patients from Centre Pasteur of Cameroon were included in the study, based on serotyping test, enabling to distinguish HIV serotypes M, 0 and M+0. HIV-1/M and HIV-1/0 specific PCR were further performed in the pol and env genes, in order to confirm serological reactivities, and to detect pollenv discordance, characteristic of putative recombinants. In the likelihood of M+0 dual infections and/or presence of MO recombinant, a breakpoint in the vpr gene, considered a hotspot of recombination was investigated. Finally, full length genomes of recombinants were characterized and genetic link with previous recombinants was investigated by phylogenetic analyses. Among the 275 patients, 199 (72. 4%) were HIV-1/M mono-reactive, 47(17. 1%) HIV-1/0 mono-reactive, and 29 (10. 5%) were M+0 dual reactive. HIV-1/M+0 dual infections were identified in 4 patients (1. 4%), and the presence of recombinants forms in 3 patients (1. 1%). The first recombinant form was detected in a husband and his wife, and was not associated to dual infection, and the second recombinant form was associated to a parental HIV-1/M virus. Full length genomes characterization identified recombinant breakpoints in the vpr gene and the LTR region for the first recombinant form, and in the vpu gene and the LTR region for the second form. No link between these recombinants and previous recombinants was found. HIV-1/M subtypes and HIV-1/0 sub-groups were concordant with the present molecular epidemiology of HIV infection in Cameroon, that is, the predominance of CRF02_AG and HIV-1/0 sub-group H. Geographical origins of patients with HIV-1/M+0 dual infections and HIV-1/M0 recombinants showed that they were from five administrative regions of Cameroon. In this study, we described seven new cases of HIV-1/M+0 dual infections and HIV-1/MO recombinants, thus confirming the co-circulation of these forms in Cameroon. Even though their frequency remains low, these forms are found in different geographical regions of Cameroon, pointing out their diffusion potential. We also characterized full length genomes of two new HIV-1/MO recombinants, and identified breakpoints in vpr and vpu genes as well as LTR regions. No link between these recombinants and previous recombinants was found, showing the circulation of multiple URFs, and the great dynamic evolution between HIV-1/M and HIV-1/0. It is therefore, necessary to improve the surveillance of HIV-11M0 recombinant forms in Cameroon, in order to detect potential emergence of a CRF_MO, and to further study their virological and phenotypic properties

Nos travaux sur la tuberculose et le VIH menés à Dakar, Sénégal, s'inscrivent dans le contexte plus général du continent africain caractérisé par un dénuement des structures de soins et un nombre grandissant de personnes touchées par la tuberculose et le VIH. Se posent en particulier le problème du diagnostic de la tuberculose, clé de voûte de son contrôle, et celui de la carence des moyens de prise en charge des patients VIH -positifs. Ces travaux s'articulent autour de 3 axes : 1/ le phénomène des bacilloscopies négatives des tuberculoses pulmonaires, qui induisent un problème de diagnostic, la bacilloscopie des crachats à la recherche de bacilles tuberculeux étant souvent l'unique moyen de confirmer le diagnostic, 2/ la signification clinique, biologique et radiologique des baisses profondes des CD4 observées chez les patients tuberculeux VIH-négatifs, et 3/ le moyen de compenser l'inaccessibilité à la numération des CD4, outil important dans la prise en charge des patients VIH-positifs, en particulier pour la mise en place d'une prophylaxie des infections opportunistes par cotrimoxazole. Parmi 450 patients hospitalisés atteints d'une tuberculose pulmonaire, dont 40 (9%) étaient VIH-positifs, 85 (19%) patients présentaient une bacilloscopie négative. Celle-ci était plus fréquente chez les patients VIH-positifs que chez les patients VIH-négatifs (35% versus 17% ; p=0,01) et ses facteurs de risque étaient : une absence de toux, de caverne, la séropositivité pour le VIH, un taux de CD4 200 /mm³ et un âge >40 ans. Ces résultats confirment ceux de la plupart des études africaines et la nécessité de développer des algorithmes diagnostiques de cette forme de tuberculose. Parmi 430 patients tuberculeux VIH-négatifs hospitalisés, les baisses profondes de CD4 (<300/mm³ ) étaient fréquentes (14%), suggérant, avec d'autres études précédemment réalisées, une association entre le syndrome de « lymphocytopénie CD4 idiopathique » et la tuberculose. Ces baisses de CD4 semblaient associées à une maladie plus avancée et une immunodépression concomitante. Concernant la prise en charge des patients VIH-positifs, nous avons élaboré un système de score simple prédisant un taux de CD4 <400/mm³ avec une sensibilité de 98% et une valeur prédictive négative de 83%, taux pour lequel une prophylaxie par cotrimoxazole est requise
Our studies on tuberculosis and HIV were performed in Dakar, Senegal, in an African context characterized by the deprivation of health care facilities and a growing number of persons affected by tuberculosis and HIV. In particular, the problems of tuberculosis diagnosis, which is a major condition of its control, and lack of means for HIV-positive patient management are prevalent. These studies tum around three facets: 1/ pulmonary tuberculosis diagnosis difficulties associated with negative sputum acid-fast-bacilli (AFB) smears, since finding AFB in sputum by direct microscopy is often the only way to confirm tuberculosis diagnosis, 2/ the clinical, biological and radiographie signification of severe CD4+ depletion observed in HIV- negative patients with tuberculosis, and 3/ a means of compensating for the inaccessibility of CD4+ numeration, an important tool in the management of HIV-positive patients, in particular to establish the appropriate timing of prevention of opportunistic infections with cotrimoxazole. Among 450 hospitalized patients with pulmonary tuberculosis, of whom 40 (9%) were HIV-positive, 85 (19%) patients had a negative sputum AFB smear. This phenomenon was more frequent in HIV-positive patients than in HIV-negative patients (35% versus 17%, p=0. 01) and its risk factors were: absence of cough, absence of cavitation, HIV seropositivity, a CD4+ cell count 200/mm³ and an age >40 years. These results are consistent with most of other African studies and confirm the need to develop diagnosis algorithms for this form of tuberculosis. Among 430 HIV-negative hospitalized patients with tuberculosis, severe CD4+ depletions (<300/mm³) were frequent (14%), suggesting, with other results already published, an existing association between tuberculosis and the "idiopathie CD4+ T-lymphocytopenia". Our results also suggested that these depletions were associated with more advanced disease and accompanying immunodepression. Regarding HIV-positive patient management, we have developed a simple score to predict CD4+ cell counts <400/mm³, for use as a decision tool for prevention by cotrimoxazole

L'infection par le Virus de l'Immunodéficience Humaine de type 1 (VIH-1) reste un grave problème qui nécessite le développement de nouveaux antirétroviraux. L'intégrase (IN) est une cible thérapeutique potentielle. Sélectionné par une stratégie combinatoire, l'oligodeoxynucléotide (ODN) 93del inhibe spécifiquement les activités in vitro de l'IN catalysées par des formes oligomériques distinctes de l'enzyme. En solution, l'ODN 93del se structure en quartet de G dimérique. Selon un modèle de docking moléculaire, il peut se loger dans la cavité formée par un tétramère d'IN. Comme cet oligomère est impliqué dans l'intégration, le tétramère d'IN devrait constituer la forme ciblée par les inhibiteurs dans la cellule infectée. L'ODN 93 del inhibe aussi les étapes très précoces du cycle de réplication ex vivo. Il pourra donc servir de base pour l'obtention de futurs inhibiteurs
Human Immunodeficiency Virus type 1 (HIV-1) infection still remains a serious problem. Finding new antiretroviral is needed. Integrase (IN) is a potential therapeutical target. Selected by a combinatory strategy, oligodeoxynucleotide (ODN) 93del inhibits specifically in vitro activities of IN catalysed by different enzyme oligomeric forms. In solution, ODN 93del is structured in a dimeric G quartet. In a molecular docking model, it is able to fit in a cavity formed by a tetramer of IN. As integration is catalysed by this oligomer, IN tetrameric would be the target of inhibitors in infected cell. Moreover, 93del inhibits early steps of viral cycle ex vivo. Consequently, ODN 93del might be used as a model to find new inhibitors

Le lentivirus HIV-1, l'agent causal du SIDA, infecte principalement les lymphocytes T CD4+, les macrophages et les cellules dendritiques (DC). Ces dernières ont un rôle majeur dans la dissémination virale in vivo et, en tant que pivots de la réponse immunitaire, sont des cibles potentielles pour la thérapie génique et cellulaire. L'étude des étapes précoces de l'infection des DC présente ainsi un double intérêt, tant pour la compréhension de la biologie du HIV que pour l'amélioration du transfert de gènes par les vecteurs dérivés des lentivirus. Les DC sont moins permissives à l'infection que les autres cellules cibles du HIV. Nous avons montré que les DC sont spécifiquement réfractaires à l'infection par des vecteurs lentiviraux mutants, tels que des vecteurs hétérologues dont les protéines dérivent du HIV-1 et le génome provient d'un de ses homologues simiens, le SIVMAC. L'ajout de pseudoparticules virales dérivées du SIVMAC permet de restaurer l'infection des DC par ce lentivecteur hétérologue mais également d'augmenter de façon considérable l'efficacité d'infection par des lentivecteurs de diverses origines. La protéine virale Vpx, codée par les souches HIV-2/SIVSM, est responsable de cet effet. Cette protéine était jusqu'alors connue pour participer à l'import nucléaire de l'ADN viral. Nous décrivons ici un nouveau rôle de Vpx, qui est capable de favoriser l'accumulation de l'ADN rétroviral spécifiquement dans les DC. Nos résultats suggèrent que Vpx est capable de moduler l'environnement cellulaire pour le rendre plus permissif à l'infection, en promouvant l'échappement viral vis-à-vis de la dégradation par le protéasome. L'étude de l'effet positif de Vpx sur l'infection des DC a ainsi permis de mettre en évidence l'existence d'une voie potentielle de restriction de l'infection lentivirale dans ces cellules qui pourrait être à l'origine de leur résistance partielle à l'infection
The HIV-1 lentivirus targets mainly T CD4+ cells, macrophages and dendritic cells (DCs). The latter cell type is a pivotal player in the regulation of the immune system and exerts a major role during viral dissemination and is thus a potential target of gene and cellular therapy. As a consequence, the study of the early steps of lentiviral infection in DCs is important both for the understanding of HIV biology and for improving lentiviral vectors mediated gene transfer in this cell type. DCs are less permissive to lentiviral infection than other cells targeted by HIV. We have shown that DCs were specifically refractory to the infection with mutant vectors (LVs) such as the heterologous LVs, in which the proteins of HIV-1 encapsidate a genome derived from SIVMAC. The addition of virus-like-particles derived from SIVMAC restores the infection with the heterologous LVs and surprisingly increases the infection with LVs from different origins. The viral protein Vpx coded by members of the HIV-2/SIVSM lineage is responsible for this effect. This protein was previously thought to participate in the nuclear import of viral DNA. Here, we describe a novel role for Vpx in the accumulation of retroviral DNA specifically in DCs. Our data suggest that Vpx modifies DCs to increase their permissivity to the infection by promoting the retroviral escape from a proteasome-dependent degradation pathway. The study of the positive effect of Vpx on LVs infection of DCs allowed us to uncover the possible existence of a potential restriction pathway of lentiviral infection in this cell type that may be responsible for its poor susceptibility to the infection

L'intégrase (IN) rétrovirale catalyse l'intégration de l'ADN du VIH-1 dans l'ADN des cellules infectées en deux étapes: la maturation en 3’ (3’P) et le transfert de brin (ST). Le ST est inhibé par les dicétoacidesou leurs isostèrestels que le raltégravir (RAL)approuvé par la FDA en tant que médicament anti-SIDA et le TB11 qui agit aussi sur 3’P. L’étude comparative de ces deux composés montre que TB11 et RAL interagissent avec les extrémités LTR processée et non-processée, bien que l’affinité de TB11 soit beaucoup plus faible. Les Kd de liaison à l'ADN processésont proches des IC50 rapportés pour le ST suggérant l’existence d’une corrélation fonctionnelle entre l'affinité pour l’ADN processé et l'inhibition de ST. TB11 contrairement à RAL interagit avec IN prise isolément et s'intercale à forte concentration dans les paires de bases de l'ADN ce qui expliqueraitsa forte toxicité. La compréhension du mécanisme d’inhibition de INs’est poursuivi par l’étude de deux anticorps monoclonaux anti-K159 (peptide 147-175 de IN), 4C6 et 4F4 dont les épitopes se situent respectivement dans les portions N- et C-terminalesde K159. Les résultats montrent que 1) les anticorps sont capables de reconnaître leurs épitopes dans IN; 2) IN se sert des mêmes résidus pour interagir avec les anticorps et l’ADN viral ; 3) les anticorps reconnaissent leurs épitopes avec une forte affinité. Nos résultats sur les inhibiteurs de ST serviront au développementd’une nouvelle génération d'inhibiteurs interagissant préférentiellement avec l’ADN viral et induisant moins de mutations de résistance dans IN; ceux sur les anticorps aideront à progresser dans la recherche d'inhibiteurs actifs sur le 3’P
Retroviral Integrase (IN) catalyzes integration of viral cDNA into the infected cell chromosome in a two-step reaction: the 3’processing (3’P) and the strand transfer (ST). The ST reaction is inhibited by diketoacids or isosteres as raltegravir (RAL) approved by FDA for use in anti-AIDS therapy or TB11 that acts also on the 3’P reaction. The comparative study of the two compoundsdemonstrate that TB11 similarly to RAL interacts with the free LTR ends, either processed or unprocessed, although with a much lower affinity compared with RAL. For each compound, we found a good agreement between the affinity values for processed LTR and the in vitro IC50 values reported for ST inhibition, suggesting a functional relationship between drug binding to DNA and ST inhibition. TB11, unlike RAL, binds to free IN and intercalates into DNA base pairs upon increase of drug concentration which could be at the basis of its high toxicity. The understanding of the inhibition mechanism of INwas pursued by the study of two monoclonal antibodies anti-K159 (147-175 peptide of HIV-1 IN), 4C6 and 4F4. The antibodies recognize epitopes lying in the N-terminal portion and in the C-terminal portion of K159. Results show that 1) both antibodies are able to recognize their epitopes in the entire IN; 2) IN uses common residues to interact with the viral DNA and the antibody and 3) antibodies recognize epitopes with very high affinity. Our results on ST inhibitors can be used for developmentof a new family of inhibitors interacting preferentially with viral DNA, thereby inducing less resistance mutations in IN, those on antibodies should help us in the search of inhibitors acting preferentially on 3’P

Compte tenu de son role primordial dans le processus de replication virale, la protease du virus vih-1 est une cible privilegiee pour lutter contre le syndrome de l'immunodeficience acquise (sida). Avec les inhibiteurs de la transcriptase inverse, les inhibiteurs de la protease du vih-1 sont les seules molecules actuellement utilisees en clinique humaine. Recemment, l'association de ces deux types d'inhibiteurs (tritherapie) a donne des resultats tres encourageants, conduisant dans certains cas a une diminution du taux de virus dans le sang en dessous du taux detectable par les techniques actuelles. Jusqu'a present, les inhibiteurs de la protease utilises en therapie sont des analogues de l'etat de transition. Cependant, l'apparition de resistances chez des malades traites a mis l'accent sur l'importance du developpement de molecules agissant selon des mecanismes differents. Le travail presente dans cette these s'inscrit dans ce cadre puisqu'il concerne l'etude enzymologique d'inhibiteurs de la protease du vih-1 nouvellement concus. Il s'agit notamment d'inhibiteurs agissant irreversiblement sur le site actif (substrats suicides) et d'inhibiteurs ayant un site d'interaction different (inhibiteurs de la dimerisation). Ces etudes ont ete conduites au sein d'un reseau francais et d'un reseau europeen associant plusieurs laboratoires. Les substrats suicides peptidiques dont l'etude a ete initiee presentent potentiellement une double fonctionnalite. L'hydrolyse catalytique de la liaison scissile doit liberer d'une part une entite alkylante pouvant inactiver l'enzyme par modification chimique d'un acide amine du site actif, d'autre part, un n-glyoxylyl peptide susceptible de realiser une inhibition reversible. L'etude sur des n-glyoxylyl peptides, molecules originales, synthetisees separement, a demontre pour la premiere fois les capacites inhibitrices de ces structures (k i de l'ordre du micromolaire) et la necessite de la fonction n-glyoxylyl pour que se manifeste l'inhibition. L'existence d'une coupure selective au niveau du site souhaite a ete demontree a l'aide d'une molecule depourvue de la fonction alkylante latente. Les 4 brins c- et n-terminaux de la protease organises en feuillet- antiparallele etant responsables de 50% de l'energie d'interaction entre les deux monomeres, cette region a ete choisie comme cible pour elaborer des inhibiteurs de la dimerisation. Un travail exploratoire a ete realise concernant les premieres molecules de deux series en cours de developpement : (1) molecules presentant deux brins peptidiques relies entre eux par differents espaceurs ce qui leur confere une forme de pince ; (2) peptides susceptibles de creer une liaison covalente avec le residu cysteine 95 de l'extremite c-terminale de la protease. Afin de caracteriser le mecanisme d'action de molecules susceptibles d'etre des inhibiteurs de la dimerisation, un test cinetique a ete introduit dans le laboratoire qui permet de distinguer un inhibiteur de la dimerisation d'un inhibiteur du site actif et qui permet egalement la determination de la constante de dissociation k d de la protease dimerique (forme active). Enfin, le pouvoir inhibiteur de diverses series de molecules visant le centre actif a egalement ete evalue. Il s'agit : d'inhibiteurs steriquement contraints preorganises pour optimiser les interactions avec le site actif ; d'inhibiteurs possedant un axe de symetrie c 2 coincidant avec celui de la protease ; d'inhibiteurs pseudopeptidiques ; de trifluoromethyl cetones peptidiques et d'un complexe metallique non peptidique chef de file d'une serie originale decouverte par criblage de banques de donnees. Ces composes se comportent comme des inhibiteurs competitifs avec des constantes d'inhibition (k i ou ic 5 0) generalement de l'ordre du micromolaire. L'etude des series d'inhibiteurs a necessite dans un premier temps la mise au point de deux tests spectrophotometriques miniaturises permettant de detecter dans des conditions de bonne reproductibilite l'activite de l'enzyme, ainsi que la mise en place de techniques pour produire et purifier la protease du vih-1 a partir de souches bacteriennes recombinantes

Cette étude s'intéresse aux PVVIH dans des contextes d'accès aux traitements ARV variés, la France et le Gabon. Elle cherche à découvrir comment à l'ère des multithérapies hautement actives, les personnes séropositives vivent avec l'infection à VIH. En procédant par une approche inductive, six PVIH en France et 39 au Gabon, ont accepté de passer des entretiens semi-directifs. L'analyse thématique du contenu des entretiens a permis de savoir, dans un premier temps, que les manifestations cliniques, et les cas de grossesse sont souvent les contextes de découverte de la séropositivité. Les réactions face à la séropositivité découverte seraient influencées par les représentations de la maladie et le progrès thérapeutiques réalisés dans le domaine. Dans les différents contextes étudiés, les traitements ARV actuels sont reconnus pour leur efficacité et contribuent à l'acceptation de la maladie. Associées à la croyance religieuse ces ARV constituent une source d'espoir de guérison pour les PVVIH au Gabon. Les effets secondaires notés par les PVVIH les conduisent à considérer le statut des personnes infectées par le VIH/Sida résistant au virus en l'absence de traitement ARV plus tôt comme un avantage qu'un inconvénient.

El desenvolupament de fàrmacs que inhibeixen el cicle de replicació del virus de la immunodeficiència humana tipus 1 (VIH-1), coneguts com teràpia antiretroviral combinada (TAR), va ser un dels majors èxits clínics del segle XX. Tanmateix, malgrat que el tractament suprimeix eficientment la replicació viral, millora la funció immunitària i disminueix la morbiditat y mortalitat associades a la síndrome de la immunodeficiència humana (SIDA), la TAR no és capaç de curar aquesta infecció i presenta diverses limitacions: (i) no pot reduir completament la inflamació crònica ni la immunosenescència, (ii) no pot eradicar les cèl·lules latentment infectades, i (iii) requereix adherència diària al tractament per evitar el rebot viral, la resistència a fàrmacs i la progressió de la malaltia. Per tant, el desenvolupament de noves estratègies amb l’objectiu de curar la infecció per VIH-1 és un requisit ineludible a nivell mundial. Les estratègies que estan sent avaluades actualment són: la optimització del tractament, la immunoteràpia, la reactivació de la latència, la vacunació terapèutica i la teràpia cel·lular i gènica. En aquest context, l’objectiu d’aquesta tesi és avaluar el potencial curatiu de quatre estudis clínics basats en: (i) immunoteràpia amb interferó-α (IFNα), (ii) reactivació de latència amb carbonat de liti, (iii) vacunació terapèutica amb immunogen de regions conservades de VIH-1 (MVA.HIVconsv), i (iv) teràpia cel·lular amb trasplantament de cèl·lules mare hematopoètiques utilitzant cèl·lules de cordó umbilical resistent a la infecció per VIH-1. Tots aquests estudis es van realitzar en individus tractats en fase crònica i amb virèmia suprimida. En els estudis avaluats es van analitzar marcadors virològics i immunològics per quantificar el reservori de VIH-1 i la funció immunològica, utilitzant mètodes de biologia cel·lular i molecular. Els resultats van mostrar que tant la immunoteràpia amb IFNα com l’administració de liti es podrien utilitzar com a implementació del tractament, en combinació amb la TAR, ja que ambdós actuen com a repressors virals. A més, es va observar que la vacuna de regió conservada MVA.HIVconsv genera respostes citotòxiques específiques contra regions conservades del genoma de VIH-1; ara bé, aquestes respostes no són suficients com per afectar al reservori del VIH-1, de manera que aquesta vacunació hauria de ser administrada en combinació amb agents reactivadors de la latència. Finalment, el trasplantament de cèl·lules de cordó umbilical resistent a la infecció per VIH-1 va mostrar que el pacient infectat per VIH-1 tractat podria haver-se curat mitjançant aquesta estratègia terapèutica. Malauradament, el pacient va morir tres mesos després del trasplantament degut a una ràpida progressió del limfoma que patia, i no va ser possible confirmar aquesta hipòtesi amb anàlisis posteriors. Per tant, és necessari realitzar més estudis clínics basats en aquestes o noves estratègies terapèutiques per aconseguir un tractament, d’aplicació generalitzada per a tots els individus infectats per VIH, el qual permeti aconseguir curar definitivament aquesta pandèmia.
El desarrollo de fármacos que inhiben el ciclo de replicación del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1), conocidos como terapia antirretroviral combinada (TAR), fue uno de los mayores éxitos clínicos del siglo XX. Sin embargo, a pesar de que este tratamiento suprime eficientemente la replicación viral, mejora la función inmunológica y disminuye la morbilidad y mortalidad asociadas al síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA), la TAR no es capaz de curar esta infección y tiene diversas limitaciones: (i) no puede reducir completamente la inflamación crónica ni la inmunosenescencia, (ii) no puede erradicar las células latentemente infectadas, y (iii) requiere adherencia diaria al tratamiento para evitar el rebote viral, la resistencia a fármacos y la progresión de la enfermedad. Por tanto, el desarrollo de nuevas estrategias con el objetivo de curar la infección por VIH-1 es un requisito ineludible a nivel mundial. Las estrategias que están siendo actualmente evaluadas son: la optimización del tratamiento antirretroviral, la inmunoterapia, la reactivación de latencia, la vacunación terapéutica, y la terapia celular y génica. En este contexto, el objetivo de esta tesis es evaluar el potencial curativo de cuatro estudios clínicos basados en: (i) inmunoterapia con interferón-α (IFNα), (ii) reactivación de latencia con carbonato de litio, (iii) vacunación terapéutica con inmunógeno de regiones conservadas de VIH-1 (MVA.HIVconsv), y (iv) terapia celular con trasplante de células madre hematopoyéticas usando células de cordón umbilical resistentes a la infección por VIH-1. Todos estos estudios se realizaron en individuos tratados en fase crónica y con viremia suprimida. Para ello se analizaron marcadores virológicos e inmunológicos para cuantificar el reservorio de VIH-1 y la función inmunológica, utilizando métodos de biología celular y molecular. Los resultados mostraron que tanto la inmunoterapia con IFNα como la administración de litio se podrían usar como implementación del tratamiento, en combinación con la TAR, ya que ambos actúan como represores virales. Además, se observó que la vacuna de región conservada MVA.HIVconsv genera respuestas citotóxicas específicas contra regiones conservadas del genoma de VIH-1; sin embargo, estas respuestas no son suficientes para afectar al reservorio de VIH-1, de modo que esta vacunación debería ser administrada en combinación con agentes reactivadores de la latencia. Finalmente, el trasplante alogénico con células de cordón umbilical resistente a la infección por VIH-1 mostró que el paciente infectado con VIH-1 tratado podría haberse curado mediante esta estrategia terapéutica. Desafortunadamente, el paciente falleció tres meses después del trasplante debido a una rápida progresión del linfoma que padecía, y no fue posible confirmar esta hipótesis con análisis posteriores. Por consiguiente, es necesario realizar más estudios clínicos basados en éstas o nuevas estrategias terapéuticas para conseguir un tratamiento, de aplicación generalizada para todos los individuos infectados por VIH, el cual permita conseguir curar definitivamente esta pandemia.
The development of drugs that inhibit the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) replication cycle, known as combination antiretroviral therapy (ART), was one of the major clinical successes of the 20th century. However, despite the fact that this treatment efficiently suppresses viral replication, improves the immune function and decreases the morbidity and mortality associated with the acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), ART cannot cure this infection and has several limitations, as it: (i) cannot completely decrease the chronic inflammation and immunosenescence, (ii) cannot eradicate the latently infected cells, and (iii) requires adherence to daily drug regimens to avoid viral rebound, drug resistance and disease progression. Therefore, the development of new approaches to cure HIV-1 infection is a major necessity worldwide. The strategies that are currently in evaluation are: treatment optimization, immunotherapy, latency reactivation, therapeutic vaccination, and cellular and gene therapy. In this context, the aim of this thesis is to evaluate the curative potential of four clinical trials based on: (i) immunotherapy with interferon-α (IFNα), (ii) latency reactivation with lithium carbonate, (iii) therapeutic vaccination with HIV-1 conserved region immunogen (MVA.HIVconsv), and (iv) cellular therapy with an hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) using an HIV-resistant cord blood unit. All these studies were performed in chronically ART-suppressed individuals. For that purpose, we analyzed virological and immunological markers to quantify the HIV-1 reservoir and the immune function, using cellular and molecular biology methods. Our results showed that immunotherapy with IFNα and administration of lithium could be used in combination with ART, since both act as viral repressors but cannot directly cure HIV-1 infection. Moreover, we observed that MVA.HIVconsv vaccine efficiently elicits HIV-specific cytotoxic immune responses against conserved regions of the HIV-1 genome. However, these responses are not sufficient to have an impact on the HIV-1 reservoir. Therefore, the vaccine should be administered in combination with a latency-reversing agent (LRA). Finally, there were signs of recovery from the HIV-1 infection in the individual treated with the HSCT using an HIV-resistant cord blood unit. Unfortunately, it was impossible to confirm this observation in samples 3 months after the transplant, time at which the patient passed away due to the quick progression of a lymphoma. In the future, more clinical trials based on these or other novel strategies should be performed to find the optimal strategies that target the heterogeneous population of infected individuals, which ultimately will allow for the eradication of this pandemic.