Dissertations / Theses: 'Virus d'hépatite B (VHB)'

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Wu, Yuanfei. "Pathogenèse moléculaire du carcinome hépatocellulaire : rôle de facteurs viraux et mécanismes génétiques." Paris 7, 2003. http://www.theses.fr/2003PA077191.

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Thermet, Séverine. "Étude moléculaire et biologique de variants du VHB." Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10139.

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Abstract:

L'Organisation Mondiale de la Santé estime à plus de 370 millions le nombre de porteurs chroniques du virus de l'Hépatite B (VHB). L'éradication de cette maladie, même dans les pays développés ayant accès à tous les équipements médicaux, est difficile. Ceci est due en partie à l'existence de variants du VHB. Leur étude est indispensable pour mieux comprendre la biologie du VHB et lutter toujours plus efficacement contre ce virus. Toutefois l'amplification des génomes entiers des variants du VHB est souvent difficile. Ainsi durant ma thèse je me suis intéressée à différents variants du VHB. Dans un premier temps, mon travail s'est basé sur un patient (Z1) présentant à la fois de forts taux d'AgHBs et d'anticorps anti-HBs. Les analyses moléculaires et biologiques ont montré que le patient était infecté par un VHB d'apparence sauvage. L'étude de l'affinité des anti-HBs de Z1 a permis d'établir qu'il avait développé une réponse immunitaire quasi-monoclonale vis-à-vis d'un épitope antigénique différent de celui porté par le virus circulant. Dans un second temps, j'ai développé une nouvelle technique d'amplification pour l'étude des variants de VHB difficiles à obtenir par les techniques standard de PCR. Pour ce faire, j'ai appliqué une technique innovante et hautement sensible, nommée amplification en cercle roulant (RCA). La RCA associée à une PCR spécifique du VHB amplifie l'ADNccc avec une sensibilité similaire à celle d'une PCR en temps réel. La RCA présente un avantage certain puisqu'elle permet d'obtenir le génome viral entier et non des fragments sous génomiques. L'étude d'un patient infecté par un VHB résistant à la lamivudine a validé l'efficacité, la fidélité et la haute sensibilité de la RCA. En conclusion, ce travail a montré qu'il était indispensable d'étudier de grandes cohortes de patients pour pouvoir dégager des consensus concernant les différents types de variants du VHB. La RCA devrait être un atout majeur dans l'étude des variants du VHB, et aussi pour l'étude de l'ADNccc qui est à l'origine de la persistance viral et de la propagation des mutations

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Tisne, Bertrand. "Dermatopolymyosite, VIH, VHB et corticothérapie au long cours." Bordeaux 2, 1988. http://www.theses.fr/1988BOR25408.

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Gheit, Tarik. "Mise en place d'un nouveau modèle primate pour l'étude du VHB." Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10050.

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Abstract:

Malgré l'existence d'un vaccin efficace, l'infection par le virus de l'hépatite B (VHB) demeure un problème majeur de santé publique. En effet, il demeure 400 millions de porteurs chroniques du VHB dans le monde dont 25% environ évoluant vers la cirrhose et/ou le carcinome hépatocellulaire. Actuellement, le Chimpanzé est le seul animal susceptible à l'infection par le VHB mais cet animal est protégé et onéreux. Le développement de nouveaux modèles primates infectables par le VHB est donc un enjeu majeur pour l'étude du cycle viral de ce virus et pour la recherche de nouveaux traitements anti-VHB. Actuellement, deux modèles sont actuellement utilisés pour tester l'efficacité de nouvelles approches thérapeutiques tel que le vaccin par ADN nu ou de nouvelles molécules antivirales. Il s'agit du canard de Pékin infecté par le DHBV et de la marmotte américaine infectée par le WHV. Afin d'étudier les mécanismes de l'infection par le VHB et tester de nouvelles approches antivirales, il serait essentiel de disposer d'un modèle primate tel que le Macaque qui est plus facile d'utilisation et d'accès que le chimpanzé tout en étant proche de l'homme. Dans le cadre d'une transfection intrahépatique expérimentale de 3 Macaques sylvanus par l'ADN du VHB nous avons pu observer que 2/3 M. Sylvanus développent des marqueurs propres à l'infection par le VHB avec des AgHBs et des séquences virales dans le sérum et le foie. Nous avons donc démontré pour la première fois la susceptibilité du M. Sylvanus au VHB humain. Nous travaillons également sur un autre modèle appartenant à une espèce voisine du M. Sylvanus, il s'agit du M. Cynomolgus originaire de l'île Maurice. Des marqueurs propres à l'infection par le VHB ont été retrouvés dans le foie et le sérum chez 42% des animaux. Récemment, il est admis que des primates, essentiellement de l'ancien monde, ont leurs propres virus de l'hépatite B. En effet, ces dernières années, des hépadnavirus propres à certaines espèces de primates ont été décrits. Ils concernent les Chimpanzés, les Gibbons, les Orangs-outans, les Gorilles mais aussi un seul singe du nouveau monde, le singe laineux. L'objectif principal est d'obtenir un modèle d'infection chronique par le VHB. En effet, en l'absence de modèle primate autre que le Chimpanzé, nous espérons à terme mettre en place un nouveau modèle pour tester l'efficacité thérapeutique de nouvelles molécules anti-VHB applicables en thérapie chez l'homme, et aussi pour évaluer la capacité de réplication de variants détectés chez des patients porteurs chroniques su VHB

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Gautier, Nicolas. "Contribution de la vaccination spécifique chez les patients atteints d'hépatite virale B chronique active : à propos d'un cas." Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR2M164.

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Soussan, Patrick. "Virus de l'hepatite b (vhb) et variabilite genetique : etude de la variabilite genetique du vhb apres vaccinotherapie de porteurs chroniques du vhb. role d'un arn episse du vhb sur la persistance virale." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077051.

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Abstract:

Le virus de l'hepatite b (vhb) est responsable d'infections chroniques du foie pouvant evoluer vers l'hepatocarcinome. Les mecanismes impliques dans la pathogenese de la maladie font intervenir des facteurs de l'hote et viraux. La variabilite genetique du vhb joue un role dans toutes les etapes de la progression de la maladie. Cette etude aborde plusieurs aspects de cette variabilite genetique et de ses consequences sur la maladie. La vaccination de porteurs chroniques du vhb, par des proteines de l'enveloppe, entraine une diminution de la replication virale. Nous avons etudie son impact sur l'emergence de variants. Aucun mutant d'echappement, sur le determinant antigenique majeur de l'enveloppe, le determinant a, n'a ete mis en evidence apres comparaison de sequences avant et apres vaccinotherapie. Par contre, plusieurs mutations ont ete identifiees dans la sequence complete du gene de l'enveloppe. Cependant, ces mutations ne sont pas correlees a la reponse au traitement. L'arn viral, matrice de la replication, peut etre episse sur plusieurs sites. Les transcrits episses generent la formation de particules defectives circulantes, dont la plus frequente resulte de l'epissage entre les nucleotides 2447 et 489. Nous avons demontre que cette particule defective inhibe l'effet antiviral de l'interferon. Il resulte de la diminution de l'expression la proteine mxa, inductible par l'interferon , par la surexpression de la proteine de capside. Ce genome defectif est egalement capable de coder pour une nouvelle proteine du vhb, la proteine hbsp. In vivo, la proteine hbsp a ete detectee dans le foie de porteurs chroniques du vhb. De plus, des anticorps anti-hbsp ont ete retrouves dans 46% des serums testes. In vitro, l'expression ectopique de la proteine hbsp ne modifie pas la replication virale, mais module la viabilite cellulaire en induisant une apoptose, independante du cycle cellulaire. Ces travaux suggerent le role direct des particules defectives du vhb dans des mecanismes impliques dans la reponse a l'infection.

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Khamduang, Woottichai. "Analyse des mutants du virus de l'hépatite B (VHB) chez des patients co-infectés par le VIH et le VHB en Thaïlande." Thesis, Tours, 2011. http://www.theses.fr/2011TOUR3317/document.

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Abstract:

L’infection par le VHB est endémique en Thaïlande. Malgré l’introduction des programmes de vaccination contre le VHB, la transmission périnatale reste une cause majeure d’infection chronique. Les objectifs de ce travail étaient d’identifier les mutants du VHB pouvant être associés à des échecs de vaccination, de diagnostic et de thérapeutique. Le travail présenté ici est divisé en trois parties. Dans une première partie, nous avons analysé la prévalence de la transmission périnatale du VHB dans une cohorte issue d’un protocole thérapeutique de prévention de la transmission materno-fœtale du VIH. Nous avons cherché à caractériser les mutants d’échappement à la vaccination contre le VHB. Parmi 3349 femmes enceintes séropositives pour le VIH, l’antigène (Ag) HBs était positif dans 7% des cas. L’Ag HBs était détectable à l’âge de 2 et 18 mois chez 11 enfants nés de mères porteuses chroniques. Les variants du VHB présents au sein de 9 de ces paires mère-enfant ont pu être étudiés après séquençage et clonage. Trois types de transmission du VHB ont pu être décrites ; i) transmission de variants non mutés par les mères présentant une charge virale VHB élevée ii) transmission d’un virus mutant minoritaire isolé chez la mère, et iii) transmission de mutants déjà présents à plus de 20% chez la mère. La capacité in vitro de ces mutants à échapper à la réponse neutralisante anti-HBs sera étudiée en utilisant un modèle de pseudo-particules portant les mutations identifiées
Thailand is an endemic area for chronic HBV infection. Despite implementation of HBV vaccination, perinatal HBV transmission remains a major cause of chronic infection. This study aimed at identifying HBV mutants that may be associated with vaccine failure, misdiagnosis of chronic HBV infection and antiviral treatment failure. The dissertation is divided in three parts. In the first part, we analyzed the prevalence of perinatal HBV transmission in a large HIV prevention cohort in Thailand and characterized the HBV vaccine escape mutants. Among 3,349 HIV-infected pregnant women, 7% were found HBsAg positive. Eleven children born to HBsAg-positive mother were found HBsAg-positive at 2–18 months of age. Complete series of samples were available for 9 mother-child pairs. Based on direct sequencing and cloning analysis, 3 patterns of transmission were observed : i) transmission of wild-type variants from mothers with high HBV DNA level, ii) transmission of maternal minor variant and iii) transmission of variants already present in maternal blood samples. The capacity of HBV variants to escape from anti-HBs neutralization in vitro will be further studied using HBV-pseudoviral particles harboring the characterized mutations

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Mrani, Saad. "Caractérisation moléculaire des infections à VHB occultes au cours des hépatites C chroniques." Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10064.

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Abstract:

L’infection par le virus de l’hépatite B occulte, définie par la présence de l’ADN du VHB en l’absence d’AgHBs dans le sérum, a été retrouvée de manière fréquente dans les hépatites C chroniques. Afin de mieux cerner les mécanismes d’échappement du VHB occulte aux tests diagnostiques classiques et de déterminer les conséquences de cette co-infection sur l’évolution de l’hépatite C chronique, nous avons analysé, par des techniques moléculaires très sensibles développées au laboratoire, les sérums de 203 patients atteints d’hépatite C chroniques avant qu’ils ne soient traités. Les résultats de cette première étude ont montré que la prévalence des infections occultes chez les patients porteurs chroniques du VHC pourrait atteindre 20% en France et que la présence de l’infection à VHB occulte est associée à une mauvaise réponse au traitement ainsi qu’à l’aggravation des lésions hépatiques et à l’accélération de l’évolution vers l’hépatocarcinome. Afin de permettre la caractérisation moléculaire du VHB occulte, le génome entier a été amplifié, puis cloné et séquencé dans le cas particulier d’un patient VHC transplanté. L’analyse des différents clones n’a pas montré les mutations connues susceptibles d’expliquer l’absence de détection de l’AgHBs. Ces résultats suggèrent d’une part, l’implication d’autres facteurs dans la suppression de la réplication et l’altération de l’expression du VHB, d’autre part, l’importance des sites extrahépatiques dans l’infection à VHB occulte. Ces travaux soulignent la nécessité de développer de nouvelles approches diagnostiques et thérapeutiques dans la prise en charge du VHB occulte et particulièrement dans les co-infections avec le VHC
Occult Hepatitis B infection (HBV), defined by HBV DNA positivity in absence of HBsAg in the serum was found in 30% of hepatitis of unknown aetiology and frequently among HCV chronic carriers. In order to better understand how HBV escape to diagnosis tests and determine the consequences of this co-infection on HCV chronic infection, we analyzed by ultra sensitive molecular tests developed in the lab, serum samples from 203 HCV chronic carriers before any antiviral treatment. The results from this first study showed that occult HBV infection frequency could reach 20% in France and that occult HBV infection may worsen the course of HCV infection being associated to a bad response to antiviral therapy and aggravation of liver disease. In order to perform the molecular characterization of hepatitis B viruses in cases of occult HBV infections, the whole HBV genome was amplified by a new technique developed in the lab, named Rolling Cycle Amplification (RCA), cloned and sequenced in a HCV transplanted case. The analysis of the cloned sequences did not show the presence of any of the known mutations in the viral genome that may explain HBsAg negativity. Our results suggest, on one hand, the implication of other factors in the suppression of the HBV replication and altered expression of HBV, on the other hand, the importance of extra hepatic sites of HBV replication during occult HBV infections, since it was able to persist after liver transplantation. Our work emphasise the need to develop new diagnostic and therapeutic tools in the case of occult HBV infections especially during co-infection with HCV

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Baginski, Isabelle. "Apport de l'amplification moléculaire à l'étude de la biologie du virus de l'hépatite B humaine (VHB)." Aix-Marseille 2, 1991. http://www.theses.fr/1991AIX22060.

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Abstract:

La technique d'amplification de l'adn ou polymerase chain reaction (pcr) du fait de son extreme sensibilite a de multiples applications dans le domaine du diagnostic des infections virales et l'etude approfondie des phenomenes qui leur sont associees. Nous avons applique cette technique au diagnostic et au suivi des infections chroniques par le virus de l'hepatite b humaine (vhb) et montrer en particulier la persistance du virus apres traitement antiviral et meme apres seroconversion hbs/anti-hbs indiquant la guerison du malade. C'est cependant dans les infections atypiques ou toutes les autres techniques diagnostiques s'averent insuffisantes que la pcr est precieuse. Ainsi nous avons analyse l'hypothese de l'existence d'un agent responsable d'hepatite non-a, non-b post-transfusionnelle (hpt). Trois donneurs et 2 receveurs impliques dans deux cas d'hpt sans aucun marqueur serologique du vhb ont ete etudies. Des sequences d'adn et vhb ont pu etre identifiees dans le serum et les lymphocytes des donneurs et receveurs impliques. L'absence de changement significatif au niveau de ces sequences permet de supposer que la transmission simultanee du virus de l'hepatite c (vhc) demontree chez ces patients est a l'origine du caractere silencieux de ces infections par le vhb. Une des explications possible a la persistance du vhb dans ces infections atypiques est l'existence de virus non ou peu repliquant dans les cellules lymphoides. Nous avons donc analyser la capacite du vhb a se repliquer au sein des lymphocytes infectes et montrer la presence d'adn et d'arn viral dans ces cellules

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Bayard, Florence. "Etude des réponses cellulaires T spécifiques de la protéine hepatitis B spliced-generated protein (HBSP) du virus de l'hépatite B (VHB) et caractérisation de nouveaux épitopes du VHB." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077089.

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Abstract:

L'infection chronique par le VHB reste un problème de santé publique majeur, touchant 400 millions de personnes dans le monde. La présence d'anticorps spécifiques de la protéine « Hepatitis-B spliced-generated protein » (HBSP) chez 30% des porteurs chroniques du VHB a été associée à la sévérité de la fibrose hépatique, suggérant un rôle possible de la réponse immunitaire spécifique de HBSP dans la fibrogenèse. Nous avons identifié plusieurs épitopes dérivés de HBSP capables d'activer une réponse T CD8 chez des souris transgéniques pour les molécules HLA-A2 et HLA-B7 immunisées à l'aide de vecteurs codant pour HBSP. Nous avons ensuite montré que ces épitopes étaient également apprêtés et reconnus chez les porteurs chroniques du VHB. Nous recherchons actuellement les liens éventuels entre la réponse T spécifique de HBSP et la sévérité de la fibrose hépatique et/ou la réplication virale. Dans une deuxième partie, nous avons étudié la fonction auxiliaire de deux épitopes du VHB présentés par HLA-DR1. Le transport et l'apprêtement efficaces de ces épitopes grâce à la chaîne invariante de nos vecteurs a permis d'aider au développement d'une réponse T CD8 polyfonctionneîle spécifique de l'enveloppe virale. Les épitopes décrits ici sont de puissants activateurs des réponses T CD8 et/ou CD4. Leur utilisation au sein de vaccins polyépitopiques pourrait améliorer les réponses cellulaires activées par ces vaccins. De plus, l'identification de réponses T cellulaires spécifiques de HBSP corrélant avec l'évolution de la maladie hépatique, pourrait avoir un impact clinique notamment dans le développement d'un outil de diagnostique de la progression de la fibrose
Chronic HBV infection remains a Worldwide health problem, as 400 million people are chronic HBV-carriers. Detection of antibodies against the recently identified "Hepatitis B spliced-generated protein" (HBSP) in 30% of HBV chronic carriers has been related to the severity of fîbrosis. This suggests a possible role of HBSP-specific T cell immune response in fibrogenesis. We first studied the HBSP-specific T cell immune response in HLA-A2 and HLArB7:transgenic mice immunized with HBSP-encoding vectors. Several epitopes activated CD8 T cell responses in immunized mice. Then, we showed that these epitopes were efficiently processed and recognized by T cells from HBV chronic carriers. We are currently investigating the possible link of these immune responses with severe fibrosis and/or viral replication by exploring the HBSP-specific T cell immune response/in patients with different clinical settings. In a second part, we studied the helper potential of two HLA-DRl-restricted epitopes derived from HBV. Invariant chain of our vectors allowed efficient transport and processing of HLA-DR1 epitopes. These epitopes efficiently helped to develop a polyfunctional CD8 T cell response specific for HBV envelope. Ail the epitopes described here are strong activators of CD8 and/or CD4 T cell immune responses. They could be included in polyepitopic DNA vaccine constructs to increase the cellular responses primed by such vaccines. Moreover, if HBSP-specific T cell responses are correlated with outcome of disease, it could have a great clinical impact, for example to develop a diagnostic tool for fibrosis progression

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Loirat, Delphine. "Rupture de la tolérance à l'antigène de surface du virus de l'hépatite B par l'immunisation génétique : modèle d'étude pour l'immunothérapie des hépatites B chroniques." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077215.

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Dessolin, Jean. "Synthèse et évaluation des propriétés antivirales (VIH et VHB) de conjugués polyazamacrocycle-nucléoside et bis-polyazamacrocycle-nucléoside." Aix-Marseille 2, 1998. http://www.theses.fr/1998AIX22105.

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Abstract:

La chimiothérapie actuelle du virus de l'immunodéficience humaine (vih) repose sur les inhibiteurs de deux enzymes clés du cycle de réplication du VIH : la Transcriptase Inverse (TI) et la Protéase. Les effets secondaires des drogues administrées, et les résistances virales observées tant pour les anti-TI que pour les anti-protéases risquent de remettre en cause, a moyen terme, les thérapies mettant en jeu ces classes d'inhibiteurs. Récemment, un cofacteur d'entrée du VIH dans la cellule a été mis en evidence (CXCR-4 pour les lymphocytes T, et CCR-5 dans le cas des macrophages), ce corecepteur est indispensable a la fusion des membranes entre le virus et la cellule cible. A partir de ces observations et de divers résultats publiés dans la littérature, nous avons conçu et synthétise un nouveau prototype moléculaire bipharmacophore. Une première classe de conjugues met en jeu un synthon mono-tetraazamacrocycle lie de façon covalente a un inhibiteur de la TI via un lien enzymolabile, une deuxième classe de conjugues a été synthétisée 0 partir d'un bis-tetraazamacrocycle. La synthèse des deux classes de conjugues a été possible grâce à l'application de schémas synthétiques originaux mettant en jeu la protection des fonctions amines et la fonctionnalisation regioselective du polyazamacrocycle. Les études de spectrométrie (RMN et Masse) ont permis d'élucider sans ambigüité les nouvelles structures. Les nouveaux compos2s ont été soumis a une évaluation antivirale (VIH et VHB) et compares aux nucléosides parents

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Michel, Marie. "Développement d'une nouvelle stratégie vaccinale bivalente anti-VIH-1 et anti-VHB dans les plantes transgéniques." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05D008.

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Abstract:

Un polyépitope du VIH-1 restreint à l'allèle HLA*A2. 01 et fusionné à l'AgHBs du VHB a été optimisé afin d'obtenir la production de particules pseudo-virales (VLP) in vitro et in vivo. L'immunisation ADN d'un modèle murin transgénique humanisé a permis de mettre en évidence l'induction d'une réponse T CD8+ sécrétrice d'IFN-γ et CTL spécifique du VIH-1, ainsi que la production d'Ac anti-VHB. Les avancées dans les biotechnologies végétales ont permis le développement de produits vaccinaux administrables oralement dirigés contre le VHB. Le gène codant pour la protéine de fusion a donc été intégré dans le génome nucléaire de Nicotiana tabacum et d'Arabidopsis thaliana. La caractérisation des plantes transgéniques nous a permis de montrer qu'il est possible d'exprimer stablement des VLP chimériques dans ces espèces végétales. Enfin, l'analyse des clones issus de la première génération sexuelle de tabac nous assure de la pérennité de l'intégration et de l'expression des VLP chimériques
A fusion protein formed by an HIV-1 polyepitope restricted to the HLA*A2. 01 allele combined to HBV HBsAg has been optimized to obtain virus like particles (VLP) production in vitro and in vivo. An expression plasmid of the fusion protein has been used for DNA vaccination of humanized transgenic mice. This immunization induced gamma interferon-producing CD8+ T cells and anti-HIV-1 cytotoxic T lymphocytes as well as anti-VHB antibody production. The new developments in plant biotechnology allowed the production in plant of vaccines against HBV that can be administrated by ingestion. In order to experiment this strategy for HIV-1, the fusion protein gene has been inserted into the genome of Nicotiana tabacum and Arabidopsis thaliana. We were able to show the stable expression of VLP in these plants. Finally, the analysis of the first generation of tobacco-plants obtained by sexual reproduction showed the conservation of the fusion protein gene as well as the VLP production

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Causse, Xavier. "Interet de l'adn polymerase du virus de l'hepatite b dans l'evaluation therapeutique des hepatites chroniques a vhb seul." Lyon 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LYO1M125.

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Peltekian, Cécile. "Activité antivirale de la protéine MxA contre le virus de l'hépatite B." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077139.

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Pizarro, Juan Carlos. "Etudes structurales des interactions anticorps-antigene de la region pres du virus de l'hepatite b (vhb)." Paris 11, 2001. http://www.theses.fr/2001PA112199.

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Abstract:

L'hepatite b est un grave probleme de sante publique dans le monde et demeure la cause principale de cancer de foie, en depit de l'existence d'un vaccin. Les etudes concernant les relations structurales existant entre le virus de l'hepatite b (vhb) et le systeme immunitaire, peuvent aider au developpement de nouveaux agents therapeutiques ou a la conception de nouveaux vaccins. Dans cette these, l'interet est porte sur l'etude des interactions anticorps-antigene entre une serie d'anticorps monoclonaux et les proteines de l'enveloppe virale, celles-ci etant une cible preferentielle du systeme immunitaire de l'hote. Nous disposions de quatre anticorps monoclonaux, deux diriges contre la region pres1 (5a19 et f35. 25) et deux anti-pres2 (g1/c1 et e8/h1). La structure tridimensionnelle de l'anticorps 5a19 a ete determinee a 2,6a de resolution par diffraction des rayons x, dans le cas de f35. 25 la modelisation du site de reconnaissance a ete realisee. En outre, la definition de l'epitope minimal reconnu par ces anticorps a ete realise a l'aide de peptides synthetiques, et la determination des residus cles. Les constantes cinetiques des anticorps ont ete egalement determinees par resonance plasmonique de surface. Dans le cas des anti-pres2, les anticorps partagent le meme epitope, puisqu'ils sont issus des meme lignees germinales. Des experiences de resonance plasmonique de surface ont ete entreprises afin de caracteriser la cinetique d'interaction de ces anticorps, avec des hybrides de la proteine liant le maltose de chez escherichia coli portant des portions de pres2. Les anticorps ont montre des affinites differentes en fonction du site d'insertion et de la longueur de l'insert. Exploitant les connaissances structurales de ces hybrides, nous nous sommes engages dans des calculs d'amarrage moleculaire, afin de proposer un modele structural d'interaction de la region pres2 avec ces anticorps monoclonaux.

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SAURIN, JEAN-CHRISTOPHE. "Hepatocarcinome et infection par le virus vhb : etude de l'expression d'oncogenes dans un modele animal, la marmotte." Lyon 1, 1993. http://www.theses.fr/1993LYO1M143.

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FARZA, HEND. "Expression des genes du virus humain de l'hepatite b (vhb) et sa regulation dans des souris transgeniques." Paris 6, 1989. http://www.theses.fr/1989PA066179.

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Abstract:

Le virus humain de l'hepatite b (vhb) n'infecte que l'homme et les primates superieurs. Il provoque des hepatites aigues et chroniques et est frequemment associe a la formation d'hepatocarcinomes. Les etudes sur son cycle de replication et sur l'expression de son genome ont ete entravees par sa stricte specificite d'hote et l'absence de cultures cellulaires permissives a son infection. Dans ce travail, nous avons construit des souris transgeniques pour le vhb en introduisant par microinjection des sequences virales dans le genome de souris. Nous avons pu demontrer que dans ces conditions il est possible d'obtenir l'expression des genes du vhb in vivo ainsi que la replication de l'adn de ce virus. L'antigene de surface viral (aghbs) est preferentiellement produit dans le foie de ces souris transgeniques et dans un cas la replication virale a eu lieu dans le foie, le rein et le cur. Nous avons egalement pu mettre en evidence une regulation de l'expression du gene codant pour l'aghbs, par les hormones sexuelles. Ce modele animal ouvre de nombreuses perspectives pour la comprehension de la biologie du vhb

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Cova, Lucyna. "Le virus de l'hépatite B du canard (DHBV) comme modèle pour l'étude de la réplication du virus de l'hépatite B humaine (VHB) et de son rôle dans l'oncogenèse hépatique." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO10001.

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Abstract:

Au cours de la derniere decennie deux facteurs principaux ont ete impliques dans l'etiopathogenie du cancer hepatocellulaire (chc) chez l'homme: le virus de l'hepatite b (vhb) et un carcinogene chimique l'aflatoxine b1 (afb1). Nous avons utilise le canard infecte par le virus de l'hepatite b du canard (dhbv), tres proche du vhb, pour etudier le mecanisme de l'oncogenese hepatique. Apres avoir demontre la presence du dhbv dans les populations des canards domestiques francais et de canards sauvages colvert, nous avons isole differentes souches de ce virus, compare leurs proprietes biologiques et recherche leur eventuel pouvoir oncogene. En administrant l'afb1 pendant deux ans a des canards, infectes ou non par dhbv, nous avons reussi a induire des chc dans ces deux groupes et montrer un effet synergique de l'afb1 et de l'infection virale dans l'oncogenese hepatique chez le canard. D'autre part, nous avons utilise le modele du canard pour l'etude du role de proteines pre-s, composantes d'enveloppe virale, dans la replication du dhbv. En transfectant in vivo les canetons avec l'adn du dhbv mute au niveau de la region pre-s, nous avons demontre que ce virus peut se repliquer en depit de deletions ou insertions portant sur un total de neuf aminoacides introduits dans la partie c terminale de la proteine pre-s. A l'aide d'anticorps monoclonaux murins, nous avons identifie et localise au niveau des proteines pre-s, un epitope neutralisant conserve chez les differentes souches du virus dhbv et localise a la surface du virus

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Patient, Romuald. "Obtention de particules sous-virales d'enveloppe du virus de l'hépatite C." Thesis, Tours, 2008. http://www.theses.fr/2008TOUR3108.

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Abstract:

En 1989, près de quinze ans après la mise en évidence d’une forme d’hépatite virale « non A-non B », le virus de l’hépatite C (VHC) a pu être isolé et son génome séquencé. En presque vingt ans, de nombreuses avancées techniques majeures ont permis de mieux comprendre le cycle de réplication de ce virus. Cependant, l’infection par ce virus représente actuellement la première indication de transplantation hépatique dans les pays industrialisés. On estime que 3% de la population mondiale est constituée de porteurs chroniques du VHC ; faisant de cette maladie un problème majeur de santé publique. De plus, même si des thérapies anti-virales sont disponibles pour enrayer la réplication du VHC, ces traitements ne sont vraiment efficaces que pour la moitié des patients traités. Malgré une recherche intensive, il n’existe toujours pas de vaccin préventif contre le VHC ayant fait la preuve définitive de son efficacité. La plupart des candidats vaccins en développement reposent sur l’utilisation de formes tronquées des protéines d’enveloppe du virus, constituant des immunogènes probablement moins pertinents que les formes complètes retrouvées sur l’enveloppe virale. L’objectif de ce travail de thèse a donc été de développer et de produire des particules dites sous-virales d’enveloppe constituées uniquement de l’enveloppe lipoprotéique du virus comme candidat vaccin potentiel contre le VHC, en exploitant les stratégies utilisées pour la production du vaccin contre le virus de l’hépatite B (VHB). En effet, le vaccin contre l’hépatite B repose sur la capacité de la petite protéine d’enveloppe S du VHB à générer spontanément des particules d’enveloppe vides sécrétées et non infectieuses. L’utilisation de ces particules comme vaccin a fait ses preuves depuis maintenant plus de vingt ans. Au cours de ce travail, nous avons dans un premier temps développé un modèle d’étude de la morphogenèse de ces particules sous-virales du VHB, basé sur la production de la protéine S du virus à l’aide d’un vecteur dérivé du génome du virus de la Forêt de Semliki (SFV). Ce modèle s’est avéré déterminant pour apporter des informations originales sur la morphogenèse et le trafic intracellulaire des particules sous-virales d’enveloppe du VHB. Nous avons pu montré que le bourgeonnement de ces particules au sein du réticulum endoplasmique (RE) se fait initialement sous forme de structures filamenteuses ; contrairement à ce qui était présumé dans le modèle couramment admis. Empaquetés et transportés vers un compartiment intermédiaire entre le RE et l’appareil de Golgi (ERGIC), ces filaments sont ensuite convertis en particules sphériques qui seront sécrétées. Dans un second temps, ce modèle nous a permis d’étudier les capacités d’assemblage en particules sous-virales d’enveloppe de différentes protéines chimères d’enveloppe VHC-VHB. Nous avons démontré que ces protéines de fusion, contenant la totalité de la protéine d’enveloppe E1 ou E2 du VHC, étaient capables de s’assembler puis d’être sécrétées sous forme particulaire lorsqu’elles étaient co-produites avec la protéine S sauvage du VHB. De telles particules, morphologiquement similaires à celles du vaccin contre l’hépatite B, pourraient donc constituer la base d’un vaccin prototype. Le système d’expression transitoire utilisé pour ces expériences ne permettant pas de produire ces particules en grande quantité, des clones cellulaires de la lignée CHO produisant de manière stable les particules d’enveloppe chimèriques ont été développés. Si comme nous l’espérons ce vaccin prototype donnait des résultats encourageants, sa production pourrait s’appuyer à terme sur les procédures industrielles existantes pour la production du vaccin contre le VHB, dans le but d’obtenir à grande échelle un vaccin protégeant à la fois contre l’hépatite B et l’hépatite C
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Osseman, Quentin. "Analyse du transport intracytoplasmique de la capside du virus de l’hépatite B : analyse des interactions entre les capsides du VHB et les chaînes du complexe de la dynéine." Thesis, Bordeaux, 2014. http://www.theses.fr/2014BORD0304/document.

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Abstract:

Le virus de l’hépatite B (VHB) utilise la machinerie transcriptionnelle nucléaire pour sa réplication. Le génome viral est transporté de la périphérie cellulaire à l’enveloppe nucléaire. Généralement, ce transport intracytoplasmique rétrograde est facilité par le réseau de Mt via l’utilisation du complexe moteur de la dynéine. Nous avons montré que le transport des capsides du VHB dépend des Mt, ce qui permet l’adressage des capsides aux complexes du pore nucléaire (NPC) ; lequel est requis pour l’étape de libération du génome de la capside dans le noyau.Dans cette étude, nous avons utilisé des capsides provenant de virus récupérés dans du surnageant de HepG2.2.15, qui contiennent le génome mature partiellement double brin (capsides matures), et des capsides exprimées chez E.coli. Ces dernières sont utilisées telles quelles, capsides E.coli contenant de l’ARN, ou bien sont utilisées pour préparer des capsides vides. Après microinjection dans des ovocytes de Xenopus laevis, nous avons observé que les capsides vides et les capsides matures sont transloquées aux NPC avec une cinétique similaire. Les capsides contenant de l’ARN ne sont pas identifiées aux NPCs ce qui implique que le transport des deux autres types de capsides est actif. Cela a été confirmé par la pré-injection d’anticorps anti tubuline qui neutralisent le transport assuré par les Mt.L’attachement spécifique des capsides matures et vides aux Mt a été confirmé en utilisant des Mt polymérisés in vitro, nous avons montré que cette interaction nécessitait des protéines cytosoliques. En utilisant des expériences de coïmmunoprécipitation et de cosédimentation nous avons identifié une chaîne légère de la dynéine (DynLL1 membre de la famille Lc8) comme partenaire des capsides. Dans les expériences de microinjection, la comicroinjection d’un excès de DynLL1 avec les capsides inhibe leur transport vers les NPCs, indiquant que DynLL1 est impliquée dans le transport actif des capsides.DynLL2 qui n’interagit pas avec les capsides diffère de DynLL1 de seulement six acides aminés. Par mutagénèse dirigée de DynLL1, nous avons montré l’implication de deux acides aminés dans l’interaction directe avec les capsides. Ces deux acides aminés sont présents à la surface du dimère de DynLL1 et absents dans le sillon résultant de la dimérisation de DynLL1, sillon impliqué dans l’interaction avec la DynIC. Nous avons partiellement reconstitué le complexe DynIC, DynLL1 et capsides vides qui doit en partie refléter la situation in vivo
Hepatitis B virus (HBV) needs the nuclear transcription machinery for replication. The virus thus depends on the transport of its genome from the cell periphery to the nuclear envelope. In general this retrograde intracytoplasmic trafficking is facilitated along Mt (MT) using motor protein complexes of the dynein family. As we showed earlier HBV capsid transport also depends upon intact MT in order to allow their arrival at the nuclear pores, which in turn is required for genome liberation from the capsid.In the analysis we used virus-derived HBV capsids obtained from the supernatant of HepG2.2.15, which contain the mature partially double-stranded DNA genome (mature capsids) and capsids expressed in E. coli. The latter were applied in two forms: as unspecific E. coli RNA- containing capsids and as empty capsids. Upon microinjection into Xenopus laevis oocytes we observed that mature and empty capsids were translocated to the nuclear pores with a similar kinetic. RNA-containing capsids failed to arrive at the pores implying that transport of the two other capsid types was active. Active translocation was confirmed by pre-injecting anti tubulin antibodies which interfere with MT-mediated translocation.In vitro reconstitution assays confirmed the specific attachment of mature and empty capsids to MTs and showed the need of further cytosolic proteins. Using pull-down and co-sedimentation experiments we identified one dynein light chain (DYNLL1, member of the Lc8 family) as interaction partner of the capsids. Injecting an excess of recombinant DYNLL1 with empty capsids into Xenopus laevis oocytes inhibited capsid transport to the nuclear pores indicating that DYNLL1 was only functional interaction partner implied in active transport.DNYLL2 did not interact with the capsids although differing from DYNLL1 by just six amino acids. Site directed mutagenesis of DYNLL1 revealed that two amino acids were critical for a direct interaction with the capsids. Both localized at the exterior of the DYNLL1 dimer and not in the groove of DYNLL1, which interacts with the dynein intermediate chain. Accordingly we could reconstitute a complex consisting of empty capsids, DYNLL1 and dynein intermediate chain as it should be in the in vivo situation

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Latthaphasavang, Vatthanaphone. "Suivi prospectif d’une cohorte de femmes enceintes chroniquement infectées par le virus de l’hépatite B (VHB) et de leurs enfants en RDP Laos." Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSE1336/document.

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Abstract:

Contexte : Environ 257 millions de personnes dans le monde sont infectées de manière chronique par le virus de l'hépatite B (VHB). La transmission mère-enfant représente la majorité des nouveaux porteurs chroniques du VHB, en particulier en Asie. Le VHB peut être transmis in utero, lors de l'accouchement ou pendant la petite enfance voire plus tard. Environ 80 à 90% des nourrissons infectés à la naissance développent une infection chronique par le VHB avec le risque élevé de développer de graves complications, notamment une fibrose du foie, une cirrhose, un carcinome hépatocellulaire jusqu’à un décès lié au foie à l’âge adulte. Nous avons évalué la proportion des enfants immunisés avec succès dans deux grands hôpitaux de Vientiane, en République démocratique populaire lao, où l’immunoglobuline HB (HBIg) n’est pas disponible. Méthodes : Nous avons étudié une cohorte prospective de femmes enceintes infectées par le VHB et de leurs enfants jusqu'à six mois après la naissance de janvier 2015 à mars 2017. Tous les nourrissons ont reçu le vaccin anti-HB à la naissance et six, 10 et 14 semaines après la naissance. Le statut d’infection par le VHB chez l’enfant a été évalué à l’âge de 6 mois. Le séquençage du gène de surface du VHB a été effectué chez des couples mère-enfant infectés. Résultats : Sur 153 mères ayant été dépistées positives pour l'antigène de surface HB (AgHBs), 60 (39%) avaient l'antigène HBe (AgHBe) positif. Les femmes enceintes ayant AgHBe-positif étaient plus jeunes que les femmes ayant d’AgHBe négatif ((âge médian 26 versus 28 ans; p = 0,02). et avaient une charge virale du VHB significativement plus élevée à l'accouchement (médiane 8,0 versus 4,0 log10 UI / mL, p <0,001). Au total, 141 nouveau-nés, dont une paire de jumeaux, sont nés pendant l'étude. Parmi les 112 nouveau-nés pour lesquels l’information concernant le délai entre la naissance et l’heure d’administration du vaccin contre le VHB était disponible, 110 (98%) ont reçu le vaccin dans les 24 heures suivant la naissance. Le délai médian entre la naissance et l'administration du vaccin était de 6 heures (EI 3 à 13), avec 95 (72%) dans les 12 heures suivant la naissance. Un nouveau-né a reçu le vaccin 26 heures après la naissance car le vaccin n'était pas disponible dans la salle d'accouchement et un autre nouveau-né a reçu le vaccin 3 jours après la naissance car, en raison d'une détresse respiratoire sévère à la naissance, le vaccin a été considéré comme contre-indiqué. Parmi les 120 enfants évalués à l'âge de 6 mois, 5 (4%) étaient positifs pour AgHBs et présentaient une charge virale détectable pour le VHB par réaction en chaîne avec une polymérase. Tous sont nés de mères ayant l’AgHBe positif et une charge virale> 8,5 log10 UI / mL. Cependant, seulement quatre enfants (3,3%, IC à 95%, 0,5% à 7,0%) avaient une souche virale étroitement apparentée à celle de leur mère. Des mutations du gène de surface du VHB (G145G/R, G145G/A, M133T, M133I) ont été détectées chez 4 des 5 enfants infectés. Le taux d'anticorps anti-HBs était supérieur à 10 UI / L chez 105 nourrissons (88%) à l'âge de 6 mois. Conclusions : La transmission de la mère à l'enfant s'est produite moins souvent que ce que nous avions prévu en absence de l'utilisation de HBIg. L’ajout d’une prophylaxie par HBIg et / ou antivirale maternelle aurait pu prévenir certaines de ces infections. L'observation du taux d'anticorps anti-HBs non satisfait chez 9% des enfants non infectés à 6 mois souligne la nécessité d'améliorer les procédures d'immunisation universelles
Background: An estimated 257 million people are chronically infected with the hepatitis B virus (HBV) worldwide. Mother-to-child transmission accounts for the majority of new chronic HBV carriers, especially in Asia. HBV can be transmitted in utero, during delivery or during infancy and later. About 80–90% of infants infected at birth will develop a chronic HBV infection, and will have a high risk of developing serious complications including liver fibrosis, cirrhosis, hepatocellular carcinoma (HCC) and liver-related death during adult age. We aimed at assessing the percentage of infants successfully immunized in two major hospitals in Vientiane, Lao People's Democratic Republic (Lao PDR) where HB immune globulin (HBIg) is not available. Methods: We studied a prospective cohort of chronically HBV infected pregnant women and their infants until 6 months post-partum from January 2015 to March 2017. All infants received the HB vaccine at birth and 6, 10 and 14 weeks thereafter, and their HBV status was assessed at 6 months of age. HBV surface gene sequencing was performed in infected mother-infant pairs.Results: Of 153 mothers with HB surface antigen (HBsAg), 60 (39%) had detectable serum HBe antigen (HBeAg). HBeAg positive pregnant women were younger than those negative (median age 26 versus 28 years; p=0.02) and had a significantly higher HBV viral load at delivery (median 8.0 versus 4.0 log10 IU/mL, p <0.001). A total of 141 infants including a pair of twins were included in the study and information at the time of vaccine administration after birth was available for 112 newborns. Of these, 110 (98%) received the HepB-BD within 24 hours after birth. One newborn received the vaccine 26 hours after birth because the vaccine was not available at the delivery room, and another newborn 3 days after birth due to fetal distress, which was erroneously considered to be a vaccine contra-indication. Among the 120 infants assessed at 6 months of age, 5 (4%) were positive for HBsAg and had a detectable HBV viral load by polymerase chain reaction. All were born to mothers with HBeAg and a viral load >8.5 log10 IU/mL. However, only four (3.3%, 95% CI 0.5% to 7.0 %) had a virus strain closely related to their mother’s strain. HBV surface gene mutations were detected in 4 of the 5 infected infants (G145G/R, G145G/A, M133T, M133I). Anti-HBs antibody level was above 10 IU/L in 105 (88%) infants at 6 months of age. Conclusions: Mother-to-child transmission occurred less frequently than expected without the use of HBIg. Adding HBIg and/or maternal antiviral prophylaxis may have prevented some of these infections. The observation of unsatisfactory levels of anti-HBs antibodies in 9% of the uninfected infants at 6 months highlights the need for improvement of the universal immunization procedures

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Bouezzedine, Fidaa. "Analyse de l'entrée du virus de l'hépatite B : Etude du processus de fusion et de l'effet de l'interleukine 6." Thesis, Rennes 1, 2015. http://www.theses.fr/2015REN1B003/document.

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Abstract:

L’hépatite B est une maladie infectieuse grave et extrêmement contagieuse. Malgré l’existence d’un vaccin efficace plus de 240 millions de personnes souffrent d’une infection hépatique chronique et plus de 780 000 personnes meurent chaque année des conséquences aiguës ou chroniques de l’hépatite B. Les traitements actuels qui consistent en l’utilisation d’interféron et/ou d’inhibiteurs de la réplication virale sont encore insuffisants. De nouvelles thérapeutiques ciblant l’entrée virale sont en développement, notamment le Myrcludex B qui inhibe l’infection en empêchant l’entrée virale. Cependant, les mécanismes d’entrée du VHB dans l’hépatocyte sont encore mal connus. Récemment, l’identification du NTCP comme récepteur spécifique du VHB a permis de mieux comprendre le mécanisme d’attachement de ce virus. Ce récepteur constitue une nouvelle cible pour des antiviraux. C’est aussi un transporteur de sels biliaires fortement régulé par les cytokines pro-inflammatoires. Les objectifs de ce travail étaient : (i) d’étudier la fusion du VHB, étape cruciale de l’entrée d’un virus enveloppé, en établissant un modèle artificiel de fusion entre des particules virales purifiées et des liposomes, et (ii) d’étudier l’effet de l’interleukine 6 sur l’entrée virale. Nous n’avons pas pu mettre en évidence de fusion entre les particules virales et des liposomes suggérant l’incapacité de ce virus à fusionner avec une bicouche lipidique néanmoins il reste possible que des conditions particulières liées aux spécificités du VHB soient requises. Nos résultats ont également montré que l’interleukine 6 inhibait l’entrée virale en diminuant l’expression de NTCP
Hepatitis B is a severe and extremely contagious infectious disease. Despite an effective vaccine more than 240 million people are suffering from chronic infection and over 780 000 persons die each year from the consequences of acute and chronic hepatitis B. Current treatments consisting in the use of interferon and/or viral replication inhibitors are insufficient. New therapeutics targeting viral entry are in progress, such as Myrcludex B that has been shown to inhibit HBV infection by preventing HBV entry. However, the mechanism of HBV entry into hepatocytes is still poorly understood. Recently, the identification of NTCP as a specific HBV receptor allowed us to better understand the attachment of this virus. This receptor is now a target for antiviral molecules. It is also a carrier for bile salts known to be strongly regulated by pro inflammatory cytokines. The aims of our thesis were: (i) to study HBV entry by establishing an artificial model of fusion between purified viral particles and liposomes, and (ii) to study the interleukin 6 effect on viral entry. Our results with fusion assays suggest an absence of fusion in the entry process of this virus. However, fusion could require peculiar conditions related to HBV specificities. Our results also demonstrated that interleukin 6 inhibits virus entry by down-regulating NTCP expression

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Lapalus, Martine. "Etude de marqueurs non-invasifs pour prédire la réactivation virale et la sévérité de la fibrose chez les patients atteints d'hépatite chronique B." Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077248.

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Abstract:

L'hépatite chronique B (HCB) peut évoluer vers la cirrhose et le carcinome hépatocellulaire. Mes travaux de thèse ont consisté à évaluer le pouvoir prédictif de marqueurs non-invasifs de l'hôte et du virus vis-à-vis de la réactivation chez les patients AgHBe négatif asymptomatiques et de la sévérité de l'atteinte hépatique. Un total de 129 et 377 patients ont été inclus dans la première et la deuxième étude, respectivement. Dans une première partie, un seuil d'AgHBs > 1000 UI/mL associé à un seuil d'ADN-VHB > 200 UI/mL permet d'identifier dès la première visite les patients AgHBe négatif risquant de réactiver (sensibilité : 92 %, VPN : 96 %). Ces patients doivent être traités pour éviter la progression de la fibrose. Un seuil d'AgHBs < 1000 UI/mL ainsi qu'une décroissance annuelle > 0,3 logioUl/mL permettent de prédire la perte de l'AgHBs (VPP : 89 %, VPN : 95 %). Dans une seconde partie, l'âge (p < 0,0001), les titres d'ALT (p = 0,02) et d'ADN-VHB (p = 0,0006) et la présence de mutants du VHB (promoteur basal du core (BCP) et precore (PC), p < 0,0001) sont indépendamment associés à la fibrose significative (METAVIR > F2). La combinaison de ces 4 variables non-invasives permet de prédire avec précision (c-index = 0,76 [95 % IC 0,71-0,81]) la fibrose significative chez les patients atteints d'HCB. La forte association de la mutation du BCP avec la sévérité de la maladie suggère son influence sur l'évolution de l'histoire naturelle de la maladie. Ces travaux de thèse ont permis de caractériser plusieurs marqueurs non-invasifs cliniquement pertinents pour améliorer le suivi des patients atteints d'HCB et aider à la décision d'initier un traitement
Chronic hepatitis B (CHB) infection is associated with an increased risk of cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The aim of my thesis was to study both host and viral non-invasive markers to predict i) the viral reactivation in asymptomatic HBeAg negative patients and ii) the severity of liver fibrosis. A total of 129 and 377 patients were respectively included in the two studies. First, a combination of HBsAg > 1000 IU/mL and HBV-DNA > 200 IU/mL at the first visit, allows to identify HBeAg negative CHB patients who are at high risk of reactivation with a high sensitivity (92 %) and negative predictive value (NPV, 96 %). These patients will benefit from a treatment to limit the progression of liver disease. Interestingly, a single HBsAg measurement < 1000 UI/mL or an annual decrease > 0. 3 logioUl/mL predict HBsAg seroclearance (PPV: 89 %, NPV: 95 %). We next investigated factors associated with significant fibrosis (METAVIR >F2). Advanced age (p < 0. 0001), ALT level (p = 0. 02), HBV-DNA viral load (p = 0. 0006) and the presence of HBV variants (basal core promoter (BCP) and precore (PC), p < 0. 0001) are independently associated with significant fibrosis (METAVIR >F2). The combination of these 4 non-invasive variables accurately predicts significant fibrosis (c-index = 0. 76 [95% IC 0. 71-0. 81]) in CHB patients. The strong association of the BCP mutation with the severity of the disease suggests its impact on the natural history of CHB. In this work, we characterized several non-invasive markers clinically relevant to improve the management of CHB patients in particular regarding the decision to initiate a treatment

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Billioud, Gaëtan. "Étude des performances de variants du virus de l’hépatite B." Thesis, Lyon 1, 2011. http://www.theses.fr/2011LYO10077.

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Abstract:

Les traitements actuels contre le virus de l’hépatite B (VHB) combinent un ou plusieurs analogues de nucléos(t)ides qui inhibent directement la réplication virale en bloquant l’étape de transcription inverse. Ces traitements très efficaces sont pourtant confrontés à l’émergence de virus résistants à ces traitements. Ces résistances sont la conséquence de l’émergence et la sélection de mutants parfois complexes présentant des mutations à la fois dans le gène de la polymérase (pol) et de l’enveloppe virale. Les objectifs principaux de ce doctorat ont été d’étudier la sensibilité des variants résistants du VHB vis-à-vis d’analogues de nucléos(t)ides et de nouveaux composés nonnucléos(t)idiques agissant contre la nucléocapside, mais également de comparer les performances virales de différents mutants afin de comprendre le processus de sélection des mutants qui s’opère chez le patient sous pression thérapeutique. Ces études ont caractérisé la sensibilité de certaines mutations de résistance aux analogues de nucléos(t)ides, de souligner l’importance des modifications de l’enveloppe dues aux mutations de résistance dans le processus d’émergence et de sélection des variants dans la quasi-espèce virale et d’identifier de nouvelles molécules antivirales efficaces permettant, en combinaison avec les analogues de nucléos(t)ide, de diminuer fortement les phénomènes de résistance du VHB. Mieux comprendre les phénomènes de résistance, les procédés d’émergence, de sélection et de transmission des mutants du VHB pour élaborer les meilleures stratégies cliniques de combinaisons thérapeutiques peut réduire considérablement le nombre de personnes touchées par ce virus
Current therapies against the hepatitis B virus (HBV) combine one or more nucleoside analogues that directly inhibit viral replication by blocking reverse transcription step. These treatments are very effective, however, faced with the emergence of viruses resistant to these treatments. These resistances are the result of the emergence and selection of mutants with mutations can be complex in both the polymerase gene (pol) and the viral envelope. The main objectives of this PhD was to study the sensitivity of resistant HBV variants vis-à-vis similar nucleos(t)ides and new compounds non-nucleos(t)idic acting against the nucleocapsid, but also compare the performance of different viral mutants to understand the process of selection of mutants that occurs in patients under therapeutic pressure. These studies have characterized the sensitivity of some resistance mutations to nucleoside analogues, to highlight the importance of the envelope changes due to resistance mutations in the process of emergence and selection of variants in the quasispecies virus and to identify new effective antiviral drugs may allow, in combination with nucleoside analogues, to greatly reduce the phenomenon of HBV resistance. Better understanding the phenomenon of resistance, the processes of emergence, selection and transmission of HBV mutants to develop the best clinical strategies of combination therapy can significantly reduce the number of people affected by this virus

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Kostrzak, Anna. "Les pseudo-particules virales du VHB, produites chez les plantes, comme vecteur d'un polyépitope du VIH-1 pour un vaccin oral bivalent contre le sida et l'hépatite B." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2009. http://www.theses.fr/2009VERS0042.

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Abstract:

Actuellement un des besoins vaccinaux les plus importants est de trouver un moyen d'immunisation efficace et économique contre l'hépatite B et d'autres maladies touchant les pays en voie de développement. Les plantes transgéniques pourraient être une source alternative simple, efficace et bon marché des composants du vaccin, ne nécessitant pas un personnel médical hautement qualifié pour l'administration. Nous avons obtenu les plantes transgéniques du tabac contenant la séquence codant le petit antigène de surface du VHB-SHBsAg. Le niveau d'expression de SHBsAG a été vérifié par le test immunoenzymatique ELISA, et la capacité de former des pseudo-particules virales (VLPs) a été confirmée indirectement par western blot et directement par microscopie électronique à transmission. Les plantes caractérisées par un haut niveau d'expression de la protéine SHBsAg ont été lyophilisées et le matériel vaccinal obtenu a été utilisé pour l'immunisation orale de souris "humanisées" dans le but d'étudier une réponse spécifique cellulaire par stimulation des lymphocytes T CD8+ et de déterminer le niveau des lymphocytes Treg dans les ganglions lymphatiques et la rate, ainsi que la réponse humorale par l'analyse du niveau des anticorps sécrétés IgA (S-IgA), des IgA et IgC dans le sérum. Les plantes de tabac non transgéniques et les plantes SHBsAg choisies ont été utilisées pour la retransformation avec les vecteurs modifiés pCAMBIA contenant les séquences codant les protéines de fusion PE-SHBsAg composées du polyépitope du VIH-1 et de SHBsAg. Les données obtenues élargissent la connaissance sur l'utilisation des pseudo-particules virales du VHB comme porteurs d'épitopes du VIH-1 exprimant les protéines polyépitope-SHBsAg chez les plantes, sur la retransformation des plantes, et sur l'immunisation orale par le matériel vaccinal d'origine végétale
Currently one of the most important worldwide demands is to find a more efficacious, cost-effective and reliable method of mass immunization for hepatitis B and many other fatal diseases afflicting underdeveloped regions of the globe. Plants plants could potentially symplify, and thus lower, the cost of immunization and by obviating the need for needles and specialized medical staff. We obtained the transgenic tobacco plants expressing small hepatitis B antigen (SHBsAg). The production and structure of SHBsAg was measured by anti-SHBsAg ELISA, western blot and transmission electron microscopy. Transformants showing high SHBsAg expression were lyophilized and the immunogenicity of dried leaves containing SHBsAg was evaluated by measuring cellular and humoral responses. For the cellular response, we measured the activation of CD8 T cells and the presence of T regulatory cells (Tregs) in peripheral lymph nodes and spleen. The humoral response was evaluated by ELISA tests, measuring anti-SHBsAg IgGs in serum and anti-SHBsAg IgAs in faeces and serum. Non-transgenic tobacco plants and plants producing SHBsAg were used for genetic transformation with three different constructs containing an HIV polyepitope-SHBsAg fusion protein. These results brings new knowledge in the use of the Hepatitis B virus-like particles as carrier of an HIV-1 polyepitope in palnts, second genetic plant transformation and plant oral immunization

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Kabissa, Imed. "Résultat du traitement par la lamivudine chez trois groupes de patients atteints d'hépatite chronique virale B : non greffés, greffés hépatiques et greffés rénaux." Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR23065.

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Mabit, Hélène. "Infection des cellules d'hepatome humain hepg2 par le virus de l'hepatite b et identification de la gapdh comme candidat recepteur au vhb." Paris 11, 1995. http://www.theses.fr/1995PA112273.

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Abstract:

Afin d'etudier la biologie du virus de l'hepatite b (vhb), et principalement les premieres etapes de l'infection virale, nous nous sommes attaches a developper un systeme d'infection in vitro par le vhb. Nos resultats montrent que les cellules d'hepatoblastome humain hepg2 sont infectables par le vhb, bien qu'une replication active du virus soit tres rarement observee. Nous avons obtenu en particulier une lignee infectee, portant l'adn viral integre dans le genome cellulaire et secretant principalement des particules defectives, sur le modele des porteurs chroniques faiblement replicant. Cette lignee est deposee a la collection nationale des microorganismes de l'institut pasteur de paris. Elle offre de nombreuses potentialites d'etudes (drogues anti-virales, interaction aghbx-p53, stress oxydatif). De facon tres interessante, l'obtention d'une telle lignee prouve que des evenements tels que l'integration du genome viral, la deregulation d'expression des antigenes viraux, la cytolyse, peuvent etre etudies dans un systeme d'infection in vitro des cellules hepg2. Nous avons etudie l'interaction vhb-cellule hepg2 par une approche anti-idiotypique. Nous avons mis en evidence une interaction entre la specificite antigenique d'enveloppe pres1 (domaine le plus externe de l'enveloppe virale et principalement exprime sur les particules virales infectieuses) et la glyceraldehyde-3-phosphate deshydrogenase (gapdh). Nous avons confirme cette interaction sur des hepatocytes humains normaux en cultures primaires (hhn), ces derniers etant plus susceptibles a l'infection par le vhb que les cellules hepg2. L'interaction vhb-hhn semble neanmoins plus complexe puisque les deux autres specificites antigeniques d'enveloppe (hbs et pres2) reconnaissent des proteines membranaires. L'addition de gapdh lors de l'infection des hhn augmente le signal de detection d'adn viral dans les cellules infectees. Par son interaction avec le virus la gapdh pourrait ainsi etre impliquee dans le mecanisme d'entree du vhb, en tant que recepteur, ou intervenir a un stade ulterieur, mais neanmoins precose, du cycle viral

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Santos, Márcio Bezerra. "Prevalência de marcadores sorológicos dos vírus das Hepatites B (VHB) e C (VHC) em indivíduos infectados por Schistosoma mansoni no bairro Santa Maria, Aracaju/SE." Universidade Federal de Sergipe, 2012. https://ri.ufs.br/handle/riufs/3246.

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Abstract:

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
The Schistosomiasis is a parasitic disease, severe, chronic waterborne and development, whose etiologic agent is Schistosoma mansoni. It occurs in 74 countries with 207 million people infected and 700 million in risky areas. In Brazil, data indicate a prevalence of eight million. The Schistosomiasis can be exacerbated when patients are carriers of the Hepatitis B Virus (HBV) and C (HCV), resulting in simultaneous evolution of both pathologies. In Brazil, the prevalence of co-infection with HBV/HCV and S. mansoni found in studies ranged from 13.6% to 40% for HBV and 0.5% to 19.66% for the HCV. On this basis, this research aimed to identify the prevalence of serological markers of HBV and HCV and risky factors in individuals carrying the S. mansoni in the Santa Maria neighborhood, Aracaju, state of Sergipe. We conducted a cross-sectional epidemiological study. Data were collected for each patient by means of a questionnaire investigation. This questionnaire included variables identifying the subject of the research participants and variables that included the epidemiological risky factors for infection with HBV or HCV. We collected serum samples of research participants and forwarded to the laboratory testing to identify serological markers of hepatitis B and C: Total Anti-HBc IgG, Anti-HBs, HBsAg and Anti-HCV. All procedures performed using the technique of chemiluminescence immunoassay using the ARCHITECT assay for each serological marker following the protocols established by the laboratory equipment manufacturer SYSTEM ARCHITECT. In addition, we carried out the analysis of spatial distribution of co-infection in the district through the program using the TerraView Kernel intensity estimation. It was found that 16 individuals had contact with HBV (9.41%), one of these was positive for HBsAg. Only Thirty-two samples (18.82%) were positive for the marker Anti-HBs. Three samples were positive for anti-HCV (1.76%), and also a positive for Anti-HBc. The main risks of HBV and HCV infection were related to parenteral interventions of health services, as well as sexual activity without condom use in the case of HBV. Spatial analysis of cases of co-infection (Schistosomiasis and Hepatitis) allowed the visualization of areas of higher concentration of these infections, as well as those that are exposed to different degrees of risk of transmission. The survey results allow to offer, the municipal health services, a tool to facilitate the understanding of the spatial distribution of schistosomiasis and hepatitis (B and C) in Santa Maria neighborhood. Although our values are above the estimated prevalence for the Brazilian population and the Northeast, we can t infer that the individuals with Schistosomiasis are more susceptible to infection with HBV or HCV, since the risky factors were the means of risky transmission of causative agents of hepatitis and not infected with S. mansoni.
A Esquistossomose Mansônica é uma doença parasitária grave, de veiculação hídrica e evolução crônica, cujo agente etiológico é o Schistosoma mansoni. Ocorre em 74 países, com 207 milhões de pessoas infectadas e 700 milhões em áreas de risco. No Brasil, dados indicam uma prevalência de oito milhões. A Esquistossomose pode ser agravada quando os pacientes são portadores dos Vírus das Hepatites B (VHB) e C (VHC), resultando na evolução simultânea de ambas as patologias. No Brasil, As prevalências da co-infecção VHB/VHC e S. mansoni encontradas nos estudos realizados variaram de 13,6% a 40% para o HBV e de 0,5% a 19,66% para o HCV. Com base nisso, esta pesquisa objetivou identificar a prevalência de marcadores sorológicos do VHB e VHC e os fatores de risco em indivíduos portadores do S. mansoni no Bairro Santa Maria, Aracaju/SE. Foi realizado um estudo epidemiológico do tipo transversal. Coletaram-se dados de cada paciente por meio de um questionário investigativo. Este questionário contemplou variáveis de identificação do sujeito participante da pesquisa e variáveis epidemiológicas que incluíram os fatores de risco para infecção pelo HBV ou HCV. Foram coletadas alíquotas de soro dos participantes da pesquisa e encaminhadas para a realização das análises laboratoriais para identificação de marcadores sorológicos dos Vírus das Hepatites B e C: Anti-HBc Total IgG, Anti-HBs, HBsAg e Anti-HCV. Todos os procedimentos realizados utilizaram a técnica de Imunoensaio Quimioluminescente através do Ensaio ARCHITECT para cada marcador sorológico seguindo os protocolos de análises laboratoriais estabelecidos pelo fabricante do equipamento ARCHITECT SYSTEM. Além disso, realizou-se a análise espacial da distribuição da co-infecção no bairro através do programa TerraView utilizando o estimador de intensidade Kernel. Constatou-se que 16 indivíduos tiveram contato com o HBV (9,41%), desses um foi positivo para HBsAg. Apenas Trinta e duas amostras (18,82%) foram positivas para o marcador Anti-HBs. Três amostras foram positivas para Anti-HCV (1,76%), sendo uma também positiva para Anti-HBc. Os principais riscos de infecção pelo HBV e HCV foram relacionados às intervenções parenterais dos serviços de saúde, assim como à atividade sexual sem uso de preservativo, no caso do HBV. A análise espacial dos casos de co-infecção (Esquistossomose e Hepatite) permitiu a visualização de áreas de maior concentração dessas infecções, assim como as que são expostas a diferentes graus de risco de transmissão. Os resultados da pesquisa possibilitam oferecer, aos serviços municipais de saúde, um instrumento que facilite a compreensão da distribuição espacial da Esquistossomose e Hepatites (B e C) no bairro Santa Maria. Embora nossos valores sejam acima da prevalência estimada para a população brasileira e da região nordeste, não podemos inferir que os indivíduos portadores da Esquistossomose são mais susceptíveis à infecção pelo HBV ou HCV, uma vez que, os fatores de risco foram as vias de risco de transmissão de agentes causadores de hepatite e não a infecção pelo S. mansoni.

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Lucifora, Julie. "Etude de la réplication du VHB et de la réponse à l'intracellulaire à l'infection virale." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00342583.

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Abstract:

Le VHB est un problème majeur puisque les 350 millions de porteurs chroniques existant ont un risque accru de développer une cirrhose ou un carcinome hépatocellulaire. Compte tenu du manque de système d'étude du VHB in vitro qui soit facile d'accès et pleinement satisfaisant, l'objectif était d'améliorer l'un de ceux qui utilisent des baculovirus VHB recombinants pour délivrer le génome VHB dans des cellules hépatocytaires. La pertinence de ce système pour réaliser des tests phénotypiques et étudier le « fitness » des mutants résistants aux antiviraux a ensuite été démontrée. Enfin, l'utilisation de ces baculovirus VHB recombinants dans des cellules HepaRG a permis de mettre en évidence une réponse IFN efficace de l'hépatocyte suite à la synthèse des protéines du VHB. Ceci constitue une donnée nouvelle dans l'étude des interactions virus/cellules puisque le VHB était considéré jusqu'à présent comme un virus silencieux vis-à-vis de la réponse innée cellulaire. L'ensemble de ces résultats a des implications importantes dans la compréhension des mécanismes de persistance du VHB et le développement de nouveaux modèles cellulaires d'infection.

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Mouzannar, Karim. "Identification du récepteur nucléaire des acides biliaires FXR alpha comme facteur proviral pour le virus de l’hépatite B." Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSE1098/document.

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Abstract:

L'infection par le virus de l'hépatite B (VHB) est un problème de santé publique majeur avec plus de 257 millions de porteurs chroniques dans le monde ayant un risque important de développer une cirrhose et/ou un hépatocarcinome. L'histoire naturelle de l'infection est très différente selon l'âge auquel l'infection est contractée. Alors que chez l'adulte l'infection est spontanément résolutive dans la majorité des cas, la contamination materno-infantile ou en bas âge aboutit le plus souvent à une infection chronique. Le cccDNA est la forme de persistance du génome viral dans les hépatocytes infectés et la base de transcription de tous les ARN viraux. La protéine virale HBx joue un rôle crucial dans le recrutement des facteurs épigénétiques sur le cccDNA et favorise son activité transcriptionnelle. Les traitements actuels à base d'interféron et d'analogues nucléos(t)idiques ne permettent pas l'éradication du cccDNA et leur interruption est presque toujours suivie d'une réactivation de la réplication du virus. De nouvelles molécules thérapeutiques ciblant le cccDNA sont donc nécessaires pour espérer obtenir une cure fonctionnelle chez les patients chroniquement infectés. Il existe des liens étroits entre l'infection par le VHB et le métabolisme des acides biliaires (AB). Ainsi, notre équipe a précédemment montré que le récepteur nucléaire des acides biliaires, le farnesoid X receptor alpha (FXRalpha) se fixe sur deux éléments de réponse présents dans la région Enhancer II - promoteur de Core du génome viral et module son activité transcriptionnelle. De plus, le VHB et les AB entrent en compétition pour le même récepteur d'entrée hépatocytaire NTCP, modifiant la concentration cellulaire des AB avec des conséquences sur la fonction et l'expression de FXRalpha. Enfin, HBx interagit avec FXRalphaet modifie son activité. Au cours de cette thèse nous avons dans un premier temps identifié une régulation réciproque existante entre la réplication du VHB et FXRalpha. Puis nous avons montré in vitro, dans des cellules HepaRG différenciées et des hépatocytes primaires humains, que FXRalphaest un facteur proviral pour le VHB et que les agonistes de FXRalpha inhibent l'expression de l'ensemble des marqueurs viraux de manière dépendante ou indépendante de la protéine virale HBx. Enfin, dans un modèle in vivo de souris C3H/HeN transduites par un vecteur recombinant AAV2/8-VHB, nous avons obtenu l'effet inhibiteur des agonistes de FXRalphamais uniquement chez les souris adultes et pas chez les souris jeunes. Compte tenu de l'évolution de la flore intestinale avec l'âge et de son importance dans le métabolisme des AB, ces résultats suggèrent que le fort taux d'évolution chronique chez les jeunes enfants pourrait être lié à l'immaturité du métabolisme des AB. La mise en évidence d'un lien entre microbiote, métabolisme des AB et infection par le VHB contribuerait grandement à une meilleure compréhension de l'histoire naturelle de cette infection. De plus, l'identification de FXRalphacomme un facteur de l'hôte favorisant l'infection et l'existence de molécules capables de moduler l'activité de FXRalphasuggèrent que FXRalphapourrait constituer une cible thérapeutique intéressante ciblant le cccDNA et permettant d'améliorer le traitement des patients infectés par le VHB
Hepatitis B virus (HBV) infection is a major global health problem with more than 257 million chronic carriers worldwide that remain at significant risk for developing cirrhosis and/or hepatocellular carcinoma. The natural history of infection is very different depending on the age at which the infection is contracted. Whereas in adults most HBV infections spontaneously resolve, in infants and young children they usually result in chronic infection. cccDNA is the molecular form of viral persistence in infected hepatocytes and serves as a transcription template for all viral RNAs. The viral protein HBx plays a crucial role in the recruitment of epigenetic factors to the cccDNA and promotes its transcriptional activity. Currently, interferon and nucleot(s)ide analogues are the first-line agents in the treatment of chronic hepatitis B without allowing eradication of cccDNA and their interruption are almost always followed by a reactivation of the replication of the virus. New therapeutic molecules targeting cccDNA are therefore needed to hope for a functional cure in chronically infected patients. HBV infection and bile acid (BA) metabolism are tightly linked. Therefore, our team has previously shown that the bile acid nuclear receptor, the farnesoid X receptor alpha (FXRalpha) bind to two response elements present in the Enhancer II - Core promoter region of HBV genome and modulate its transcriptional activity. Moreover, HBV and BA compete for the same entry receptor of hepatocytes NTCP and modify BA cell concentration with consequences on the function and expression of FXRalpha. Finally, HBx interacts with FXRalpha and modify its activity. During my PhD. we have first identified a reciprocal regulation between HBV replication and FXRalpha. Second, we have showed in vitro, in HepaRG differentiated cells and in primary human hepatocytes, that FXRalpha is a proviral factor for HBV and that FXRalpha agonists inhibit the expression of all HBV markers in a dependent or independent manner of the viral protein HBx. Finally, in an in vivo model of C3H/HeN mice transduced with a recombinant AAV2/8-HBV vector, we obtained the inhibitory effect of FXRalpha agonists but only in adult and not in young mice. Considering the evolution of the gut flora with age and its importance in the metabolism of BA, these results suggest that the high rate of chronic progression in young children might be related to the immaturity of BA metabolism. The identification of a link between BA metabolism, gut microbiome composition and evolution of HBV infection will represent a big step toward the understanding of HBV natural history. Moreover, the identification of FXRalpha as a proviral factor for HBV and the capacity of FXRalpha ligands to modulate the transcriptional activity of cccDNA suggest that FXR ligands might represent a new class of molecules with the aim to obtain functional cure for HBV infected patients

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Pol, Jonathan. "Implication des particules défectives et de la protéine HBSP du Virus de l’Hépatite B dans la pathogenèse virale." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066498.

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Abstract:

Avec près de 400 millions de porteurs chroniques, le Virus de l’Hépatite B (VHB) est un problème majeur de santé publique mondiale. Le suivi des patients infectés est nécessaire pour prévenir l’évolution de la maladie virale et adapter le traitement. Nous avons testé et validé une nouvelle méthode de diagnostic du VHB circulant, basée sur la PCR quantitative, et présentant une fenêtre de détection plus large que les méthodes standards, basées sur l’hybridation moléculaire Par ailleurs, notre groupe a suggéré un impact de la variabilité génétique du VHB, impliquant la synthèse de particules virales défectives, sur la pathogenèse virale. Ces particules défectives du VHB sont générées après encapsidation-rétrotranscription d’un ARN viral épissé. De plus, cet ARN viral épissé code pour une nouvelle protéine du VHB, identifiée au laboratoire : la protéine HBSP Chez les patients chroniquement infectés, nous avons montré que la proportion de particules défectives circulantes et la présence d’anticorps anti-HBSP étaient associées à la sévérité de la maladie hépatique. Afin de caractériser l’influence de la protéine HBSP sur la pathogenèse virale nous avons étudié, in vitro par RT-qPCR, son impact sur le profil d’expression transcriptionnel de gènes cellulaires. Par cette approche, nous avons mis en évidence une diminution de l’expression de gènes inductibles par le facteur NF-κB. Nous avons confirmé une inhibition de l’activation de la voie NF-κB en réponse à la cytokine inflammatoire TNF-α. Dans ces conditions, l’inhibition de la voie NF-κB, anti-apoptotique, était accompagnée d’une suractivation de la voie des JNK, pro-apoptotique. Ces observations pourraient expliquer la sensibilisation à l’apoptose des cellules exprimant HBSP. En conclusion, nos données permettent d’élargir nos connaissances sur la biologie du VHB et apportent de nouveaux arguments en faveur d’un rôle direct du virus dans la pathogenèse
With almost 400 million chronic carriers, Hepatitis B Virus (HBV) is a major issue of world public health. The follow-up of infected patients is necessary to prevent viral disease evolution and to adapt treatment. We tested and validated a new method for the diagnosis of circulating HBV, based on quantitative PCR, and characterized by a broader window of detection than standard methods based on molecular hybridization. In addition, our group suggested an impact of the genetic variability of HBV, implying the synthesis of defective viral particles, on viral pathogenesis. These HBV defective particles are generated after packaging-reverse transcription of a spliced viral RNA Moreover, this spliced viral RNA encodes for a new HBV protein, identified in our laboratory and called HBSP. In chronically infected patients, we showed that the proportion of circulating defective particles and the presence of anti-HBSP antibody were associated with the severity of the liver disease. In order to characterize the influence of HBSP protein on viral pathogenesis, we studied, in vitro, its impact on the transcriptional expression profile of cellular genes, by RT-qPCR. By this approach, we highlighted a decrease of the expression of NF-κB inducible genes. We confirmed an inhibition of the NF-κB pathway activation upon treatment with the inflammatory cytokine TNF-α Under these conditions, the inhibition of the anti-apoptotic NF-κB pathway was associated with an over-activation of the pro-apoptotic JNK pathway. These observations could explain the sensitization to apoptosis of cells expressing HBSP. In conclusion, our data contribute to widening our knowledge on HBV biology and bring new evidence for a direct role of the virus in pathogenesis

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Gómez, Basilio Rosario. "Respuesta a la vacuna del virus hepatitis B en pacientes en hemodialisis: influencia e importancia como factor pronóstico de morbilidad y mortalidad." Doctoral thesis, Universitat de Lleida, 1994. http://hdl.handle.net/10803/300299.

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Abstract:

El objetivo del estudio es poner de manifiesto en hemodializados un hecho demostrado en población general, la interrelación entre inmunidad y desnutrición. El porcentaje de pacientes respondedores a la vacuna de Hepatitis B es 60.9%, similar a resultados de otros grupos e inferior a la obtenida en población normal a pesar de utilizar doble dosis. Este hecho expresa el déficit inmunitario existente en pacientes con insuficiencia renal crónica. La desnutrición influye desfavorablemente en la respuesta a la vacuna del virus VHB, siendo los factores más estrechamente asociados la urea prehemodiálisis y la albúmina sérica. La respuesta a la vacuna del virus VHB puede usarse como factor pronóstico de mortalidad y morbilidad en los pacientes hemodializados. Tras seguimiento de cuatro años la supervivencia en el grupo "respondedor" fue 20% superior que en el "no respondedor" y la diferencia de supervivencia fue estadísticamente significativa del "respondedor" para todos los períodos de seguimiento.

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Ahodantin, James. "Protéine HBx du virus de l'hépatite B : impacts sur la polyploïdisation hépatique au cours du développement et de la maladie du foie." Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066373/document.

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Abstract:

La protéine HBx du virus de l'hépatite B (VHB) potentialise la survenue du carcinome hépatocellulaire (CHC). Cependant, les mécanismes par lesquels, HBx favorise l'instabilité génétique lors de la prolifération hépatique restent flous. La polyploïdisation hépatocytaire participe à la diversité génétique dans le foie. La modulation de la polyploïdie par l'HBx contribuerait-elle au développement de la maladie hépatique ? Ainsi, la polyploïdisation au cours du développement et de la maladie hépatique induite par le tétrachlorure de carbone ou le diéthylnitrosamine, a été évaluée dans les souris transgéniques FL-HBx (forme complète). Au cours du développement postnatal et dans la maladie hépatique, FL-HBx inhibe la binucléation hépatique au profit de noyaux polyploïdes (? 4n) par la dérégulation des transitions G1/S et G2/M, et l'accumulation d'ADN altérés. Une polyploïdisation similaire a été observé dans des souris avec un foie humanisé et infecté par le VHB. Dans les souris FL-HBx, l'initiation du CHC est associée à l'inactivation de ChK1, l'inhibition de Mre11, Rad51 et de l'apoptose, et à la surexpression d'IL-6 tandis que dans la fibrose, l'augmentation d'?-sma, PdgfR-?, TGF-?, TNF-? et la perte de l'expression de la glutamine synthétase ont été observées. De plus, les hépatocytes FL-HBx traitées présentent une prolifération anormale avec une forte expression de Ly6D, GpC3 et AFP. En conclusion, nos résultats montrent que par la surexpression de PLK1 via p38/ERK, FL-HBx induit une polyploïdisation pathologique du foie conduisant à la propagation d'ADN altérés et à l'apparition de marqueurs tumoraux au cours de la fibrose hépatique et de l'initiation du CHC
Hepatitis B virus X protein (HBx) is involved in the development of hepatocellular carcinoma (HCC). However, how HBx promotes genetic instability or DNA damage during liver proliferation remains unclear. For that, we used mice transgenic for the full-length HBx (FL-HBx) to investigated the impact of HBx expression on polyploidization during normal liver proliferation and in liver diseases (fibrosis : carbon tetrachloride and HCC : diethyl nitrosamine, treatments). During postnatal liver development as well as in liver diseases, FL-HBx inhibits liver binucleation and triggers early production of polyploid nuclei (≥ 4n). These features were associated with aberrant G1/S and G2/M transitions and the propagation of DNA damage. Furthermore, hepatitis B virus infection, in liver humanized mouse model, shows similar deregulation of hepatocytes polyploidization. In FL-HBx animals, HCC initiation was associated with impairment of ChK1 activation and Mre11 and Rad51 expression (DNA repair proteins), inhibited apoptosis and upregulated IL-6 transcription while in fibrosis, increased expression of α-sma, PdgfR-β, TGF-β, TNF-α as well as a defect in glutamine synthetase expression were observed. In addition, treated FL-HBx animals displayed marked alterations to the cell cycle associated with stronger expression of HCC progenitor cell markers (Ly6D, GpC3, AFP). Finally, we showed that FL-HBx protein induces pathological polyploidization of hepatocytes by upregulating PLK1 through p38/ERK Mapks pathways. That promotes a loss of genomic integrity and an increase of hepatocytes expressing tumor progenitor cell markers during liver fibrosis and HCC initiation

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Alencar, Regiane Saraiva de Souza Melo. "Ocorrência da infecção oculta pelo vírus da hepatite B (VHB) em pacientes com cirrose hepática pelo vírus da hepatite C (VHC) com ou sem carcinoma hepatocelular (CHC)." Universidade de São Paulo, 2006. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5147/tde-16102014-103147/.

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Abstract:

O presente estudo avaliou materiais de 50 pacientes com cirrose hepática pelo vírus da hepatite C (VHC) que foram submetidos ao transplante hepático no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de São Paulo no período de 1993 a 2004, sendo divididos em dois grupos: Grupo 1 (33 pacientes com cirrose pelo VHC) e Grupo 2 (17 pacientes com cirrose pelo VHC com carcinoma hepatocelular). Nosso objetivo foi estudar a ocorrência da infecção oculta pelo VHB em pacientes com cirrose pelo VHC com ou sem CHC através do estudo molecular do genoma viral (DNA do VHB) no soro, tecido hepático tumoral e não tumoral pela utilização da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), pelos métodos in house e em tempo real. Todos os pacientes eram HBsAg negativos, possuíam soroteca e bloco de explante hepático em parafina, não apresentando concomitância com doenças hepáticas colestáticas, metabólicas e autoimunes. Foram avaliados os prontuários por um único pesquisador no sentido de coletar informações tais como: sexo, idade, dados de exames laboratoriais bioquímicos, sorológicos, ?fetoproteína e coagulação; além de dados clínicos tais como ascite e encefalopatia hepática para cálculos de índices prognósticos da cirrose (Child e MELD). Todo o material de explante hepático teve o Escore de Ishak e a Classificação das Sociedades Brasileiras de Patologia e Hepatologia para hepatites crônicas avaliados, assim como a Classificação de Edmondson e Steiner para os que apresentassem CHC. A técnica de PCR in house para detecção do DNA do VHB no soro e em tecido hepático tumoral e não tumoral apresentou negatividade em todas as amostras. Na técnica de PCR em tempo real apenas um caso do grupo 2 foi positivo no soro (sexo masculino, 66 anos, Anti-HBC total isolado e CHC); no tecido hepático tumoral no grupo 2 tivemos dois casos com resultados indeterminados e no tecido hepático não tumoral também do grupo 2, tivemos dois casos indeterminados. O grupo 1 não apresentou positividade para nenhuma das técnicas utilizadas. Concluímos que entre nossos pacientes com ou sem carcinoma hepatocelular associados à cirrose hepática pelo VHC, a infecção oculta pelo VHB foi muito baixa, provavelmente devido à baixa prevalência da infecção pelo VHB na nossa população
This study evaluated serum and liver tissue samples from 50 patients with liver cirrhosis due to hepatitis C virus (HVC) that underwent liver transplant at the Hospital das Clínicas - University of São Paulo School of Medicine during the period of 1993 to 2004, divided into two groups: Group 1 (33 cirrhotic patients due to HCV) and Group 2 (17 cirrhotic patients due to HCV with hepatocellular carcinoma - HCC). Our aim was to study the occurrence of occult HBV0 infection in cirrhotic patients due to HCV with or without HCC through the molecular study of HBV DNA in the serum, tumoral liver tissue and non tumoral liver tissue by the polymerase chain reaction (PCR) techniques using in house and real time PCR. All the patients were HBsAg negative, having previous serum samples frozen at -20ºC and liver tissue explanted in paraffin, without presenting concomitant cholestatic, metabolic and autoimmune liver diseases. The following variables were collected: gender, age, biochemical and coagulation laboratory tests and HBV serology (HBsAg, anti-HBc total, anti-HBs). Among the clinical data, ascites and encephalopathy were collected for the Child and MELD prognostic indexes. In the explanted liver tissue the Ishak\'s Score, The Brazilian Society of Pathology and Hepatology Classification for chronic hepatitis, and Edmondson and Steiner Classification for HCC were applied in the liver tissue. All samples with or without tumoral liver tissue and serum were negative for HBV DNA using in house PCR technique. By the real time PCR technique only one case from Group 2 was HBV DNA positive in serum (male, 66, isolated anti-HBc total positive and HCC). In the tumoral and non-tumoral liver tissues there were two indeterminated HBV DNA cases among Group 2 patients. All samples for Group 1 patients were negative for HBV DNA using both techniques. In conclusion, our study has shown the extremely low occult hepatitis B virus infection among the HCV cirrhotic patients with or without HCC, maybe due to the low HBV past infection among the Southeastern Brazilian population

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Deroubaix, Aurélie. "Etude de la localisation intracellulaire de la protéine core du virus de l’hépatite B humaine et de ses multimères." Thesis, Bordeaux 2, 2011. http://www.theses.fr/2011BOR21907/document.

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Abstract:

L’hépatite B, causée par le virus de l’hépatite B (VHB), est responsable d’un à deux millions de morts chaque année dans le monde. Le VHB occasionne des lésions importantes au niveau du foie, pouvant amener à la cirrhose et au carcinome hépatocellulaire. Ce virus, de la famille des hepadnavirus, contient une capside formée de 240 copies d’une même protéine : la protéine core. Des biopsies de patients infectés par le VHB montrent que la protéine de capside se localise soit dans le noyau soit dans le cytoplasme des cellules infectées. On s’accorde à dire qu’une localisation majoritairement cytoplasmique est liée à une aggravation de la maladie. Nous avons observé que, dans des cellules HuH-7, la protéine core seule est nucléaire alors qu’en contexte viral, elle se localise dans le cytoplasme. Après avoir vérifié que nos observations ne sont pas dues aux conditions de culture des cellules, nous avons démontré que la relocalisation de core est due à des facteurs viraux : la polymérase virale grâce à son domaine TP ainsi que la Tige/Boucle  présente sur l’ARN prégénomique. La localisation de core est aussi influencée par l’état de phosphorylation de ses sérines 157, 170 et 172.Ainsi, nous avons pu montrer à quel point le trafic de core était complexe et qu’il était régulé par divers facteurs viraux et cellulaires. Ces travaux permettront une étude plus approfondie des régulations du trafic intracellulaire de la protéine core et ainsi de faire évoluer plus favorablement l’hépatite B chez les patients infectés
Hepatitis B is a liver inflammation caused by the Hepatitis B virus (HBV). It is responsible of one to two millions deaths per year in the world. HBV is the cause of important liver damages and may lead to cirrhosis and hepatocellular carcinoma.HBV is a member of hepadnaviral family. It has a capsid composed of 240 copies of the same protein: the core protein. In literature, patients’ biopsies showed that capsid is found either in the nucleus or in the cytoplasm or both compartments of hepatocytes. In general, a cytoplasmic localization is related to an advanced state of the disease.In our study, we observed that in HuH-7 cells, core protein alone has a nuclear localization, whereas in viral context it is essentially found in the cytoplasm. We verified that these observations were not due to culture conditions. Then, we demonstrated that the cytoplasmic localization of core was due to viral factors. The viral polymerase is implied by its TP domain. The second component is the viral pregenomic RNA, by its Epsilon stem loop structure. At last, core localization is also influenced by the phosphorylation state of its serines 157, 170 and 172.Thus, we demonstrated that the core protein traffic is very complex and regulated by different viral and cellular factors. This work will further study the regulation of intracellular trafficking of the core protein and allow a better outcome for the infected patients

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Roingeard, Philippe. "Etude immunocytochimique et ultrastructurale des cellules hépatocytaires infectées par le virus de l'hépatite B (VHB) à partir de deux modèles : lignées continues d'hépatocarcinomes humains ; lignée d'hépatoblastome transfectée avec le génome viral." Tours, 1988. http://www.theses.fr/1988TOUR3802.

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Saindou, Maoulide. "Prévalence et déterminants des infections sexuellement transmissibles chez les femmes enceintes de Mayotte : étude épidémiologique concernant le virus de l’immunodéficience humaine, le virus de l’hépatite B et du Treponema pallidum." Thesis, Lyon 1, 2013. http://www.theses.fr/2013LYO10043/document.

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Abstract:

L'épidémiologie des infections sexuellement transmissibles (IST) à Mayotte est peu documentée notamment chez les femmes enceintes (FE) et la connaissance des déterminants favorisants les IST sur l'île dans un contexte socio-économique et sanitaire très particulier est nécessaire. Les objectifs de ce travail étaient d'estimer les fréquences et facteurs de risque associées au VIH, au VHB, et à la syphilis, d'étudier la vaccination anti-VHB et de décrire les connaissances, attitudes, croyances et comportements liées aux VIH/SIDA-IST chez les FE. Une étude transversale prospective a été réalisée auprès de 671 FE suivies dans les centres de Protection Maternelle et Infantile (PMI) de Mayotte. Aucun cas de séropositivité au VIH n'a été observé. La prévalence de l'antigène HBs du VHB était de 3,4% et celle de la syphilis active était de 2,1%, mais la prévalence de l'infection au VHB et de la vaccination anti-VHB était respectivement de 35.5% et 18.6%. L'infection par le VHB était associée au lieu de naissance (Comores), à des facteurs comportementaux et à des antécédents d'IST. La syphilis était plutôt associée au manque d'éducation et aux antécédents d'IST. La vaccination anti-VHB était associée à des déterminants sociodémographiques. L'étude socio-comportementale a montré qu'il existe une bonne connaissance du VIH/SIDA-IST chez les FE malgré la pratique de certains comportements sexuels à risque. Ce travail a permis de dresser un état des lieux du VIH et des IST, et de leurs déterminants chez les femmes enceintes à Mayotte, et permettra la mise en place de méthodes de prévention adaptées à ce contexte
The epidemiology of sexually transmitted infections (STIs) is poorly documented in Mayotte especially among pregnant women (PW) and knowledge of determinants that increased STI in the island, and in this particular socio-economic and health situation, is needed. The objectives of this study were to estimate the frequency and risk factors associated with HIV, HBV, and syphilis, to study the HBV vaccination and describe the knowledge, attitudes, beliefs and behaviors related to HIV/AIDS-STIs in PW. A prospective cross-sectional study was conducted among 671 PW followed in Mayotte public prenatal clinic (Protection Maternelle et Infantile (PMI)) services. No case of HIV seropositivity was observed. The prevalence of HBsAg of HBV was 3.4% and of active syphilis was 2.1%, but the prevalence of HBV infection and HBV vaccination was respectively 35.5% and 18.6%. The HBV infection was associated with birthplace (Comoros), behavioral factors and history of STIs. Syphilis was rather associated with lack of education and history of STIs. The HBV vaccination was associated with sociodemographic determinants. The socio-behavioral study showed that there is a good knowledge of HIV/AIDS-STIs in PW despite the practice of some risky sexual behaviors. This work has helped to draw up an update of HIV and STIs, and their determinants among PW in Mayotte, and could lead to the development of prevention methods adapted to this context

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Delpuech, Eve-Oona. "Implication des virus des hépatites B et C dans l'immuno-pathogenèse et la carcinogenèse hépatique : étude in vitro de l'effet du virus de l'hépatite C sur la production d'une cytokine immunomodulatrice, l'interleukine-10 : analyse du profil d'expression génique sur macroarray de carcinomes hépatocellulaires liés aux virus des hépatites B et C." Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066100.

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González, Fernández Carolina. "Complejidad y conservación de la quasiespecies del virus de la hepatitis B analizada mediante secuenciación masiva en el gen X. Asociación con la actividad replicativa e identificación de regiones híper-conservadas en el genoma viral." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2019. http://hdl.handle.net/10803/667276.

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Abstract:

La proteína X del virus de la hepatitis B (HBx), codificada por el gen X de este virus (HBX), es crucial para la replicación del VHB y regula la expresión de múltiples genes del huésped. Por este motivo deben existir zonas altamente conservadas a nivel nucleotídico (HBX) y/o aminoacídico (HBx), esenciales para su actividad reguladora. Sin embargo, las inserciones y deleciones descritas en el extremo C-terminal de esta proteína, parecen limitar la posibilidad de que estas zonas estén en la región 3’ de HBX, por eso se ha escogido estudiar mediante la tecnología de secuenciación masiva la variabilidad del extremo 5’de HBX. En esta región se han identificado 2 regiones híper-conservadas, que además podrían ser utilizadas como potenciales dianas terapéuticas para una nueva estrategia de tratamiento antiviral basada en la terapia génica contra la HBx mediante el silenciamiento génico. Este tratamiento podría ser útil para conseguir la “cura funcional” de la infección en todos los estadios clínicos y en presencia de todos los genotipos virales. Además de la conservación del extremo 5’ de HBX en esta tesis también se ha estudiado en profundidad la complejidad y variantes específicas de la quasiespecies (QS) de esta región en pacientes en diferentes etapas clínicas de la infección crónica por el VHB HBeAg (-), para investigar su relación con los mecanismos que permiten controlar la replicación viral. El estudio de la complejidad y la variabilidad de la QS de un grupo de pacientes con infección crónica HBeAg (-) (IC) evidenció, en estos pacientes, una QS más conservada y compleja que en los pacientes con hepatitis crónica (en presencia o no de lesiones hepáticas como la cirrosis y el HCC), caracterizada por la presencia de un alto número de haplotipos altamente mutados probablemente a muy bajas frecuencias, por lo que no afectan a la conservación. Asimismo, se ha evidenciado un grupo de mutaciones genotipo-específicas. En concreto se ha descrito un patrón mutacional en los haplotipos de genotipo D de los IC asociado a una probable reducción de la expresión viral. Este patrón mutacional genotipo-específico evidencia la necesidad de genotipar adecuadamente el virus en el seguimiento de los pacientes infectados por VHB. En resumen, el extremo 5’de HBX contiene regiones híper-conservadas que podrían ser esenciales para la función de la HBx y explotadas como diana para el tratamiento antiviral basado en terapia génica. Además la QS de los pacientes IC presenta características diferenciales de complejidad y conservación. Estas características junto con patrones de mutaciones genotipo-específicas, podrían estar relacionados con la baja replicación del VHB en estos pacientes.
The hepatitis B virus X protein (HBx), encoded by the X gene of this virus (HBX), is crucial for HBV replication and regulates the expression of multiple host genes. For this reason, there must be highly conserved areas at nucleotide (HBX) and/or amino acid (HBx) level, essential for its regulatory activity. However, the insertions and deletions described in the C-terminal end of this protein seem to limit the possibility that these areas are located in the 3’ region of HBX. By this reason, the 5’-end of HBX has been chosen to study its conservation by next-generation sequencing. In this region, 2 hyper-conserved regions have been identified. These regions could be used as potential therapeutic targets for a new antiviral treatment strategy, based on gene therapy against HBx through gene silencing. This treatment could be useful to achieve “functional cure” of the HBV infection in all clinical stages and in the presence of all viral genotypes. In addition to the conservation of the 5’ end of HBX, in this thesis the complexity and specific variants of the quasispecies (QS) of this region have also been studied in depth in patients at different clinical stages of HBeAg (-) chronic HBV infection, to investigate its relationship with the mechanisms that allow to control viral replication. The study of the complexity and variability of the QS of a group of patients with HBeAg (-) chronic infection (IC) showed a more conserved and complex QS in these patients than in patients with chronic hepatitis (with or without liver lesion such liver cirrhosis and HCC), characterized by the presence of a high number of highly mutated haplotypes, probably at very low frequencies, so they do not affect conservation. Likewise, a group of genotype-specific mutations has been evidenced. In particular, a mutational pattern has been described in genotype D haplotypes of IC patients, probably associated with a reduction of viral expression. This genotype-specific mutational pattern demonstrates the need to adequately genotype the virus in the HBV infected patients follow-up. In summary, the 5’-end of HBX contains hyper-conserved regions that could be essential for the HBx function and could be exploited as a target for antiviral treatment based on gene therapy. In addition, the IC patients’ QS presents differential characteristics of complexity and conservation. These characteristics, together with patterns of genotype-specific mutations, could be related to the low replication of HBV in these patients.

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Kania, Dramane. "Développement d’outils et de stratégies pour le diagnostic et le suivi biologique des infections VIH, VHB et VHC dans les pays à ressources limitées." Thesis, Montpellier 1, 2014. http://www.theses.fr/2014MON1T017/document.

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Abstract:

Le diagnostic et le suivi des infections par le VIH, VHB et VHC restent un défi dans les pays à faibles ressources qui sont par ailleurs les plus touchés. Il est urgent de pouvoir disposer d'outils de biologie simples, fiables et peu chers pour le contrôle de ces infections virales. Le défi est immense d'un point de vue clinique et politique de santé. L'objectif de ce travail de recherche effectué dans le cadre de la présente thèse est de développer et valider des stratégies et de nouveaux outils de biologie adaptés au diagnostic et au suivi des hépatites virales et de l'infection VIH dans les pays à ressources limitées. Dans un premier temps, nous avons investigué sur les résultats de sérologie VIH discordants, car en biologie et en pratique clinique, il est important d'établir le statut sérologique réel des personnes dépistées avec des résultats clairs pour une prise de décision adéquate à l'échelle individuelle. Dans ce travail, nous avons trouvé que les résultats discordants par l'algorithme de dépistage des femmes enceintes au Burkina Faso, étaient dans 94% des cas de faux positifs dus au test Determine™ HIV-1/2 et 4% de faux négatifs liés au test Genie II™ HIV-1/HIV-2. En matière de santé publique, les femmes présentant ce type de résultat peuvent être considérées comme séronégatives dans les centres où des investigations supplémentaires ne sont pas possibles, surtout dans les pays comme le Burkina Faso où la prévalence de l'infection est basse avec une faible diversité génétique. Dans un second temps, nous avons focalisé nos travaux sur la faisabilité d'une stratégie de dépistage qui combine la détection des trois infections (VIH, VHB et VHC) sur une seule carte DBS. Dans cette étude pilote, nous avons démontré que le DBS collecté en parallèle au test rapide VIH dans un centre de dépistage volontaire permet d'une part de faire la confirmation du VIH par immunoblot, et d'autre part de compléter par le diagnostic des hépatites B et C par ELISA suivi de western blot et PCR pour la confirmation pour le VHC. Cette stratégie peut servir de modèle pour promouvoir et vulgariser le dépistage des hépatites virales B et C dans les pays à ressources limitées. Le DBS peut servir de contrôle et de confirmation du diagnostic du VIH, VHB et VHC. Par la suite, nous avons évalué la performance de deux tests de 4ème génération immunoluminométriques (Elecsys® HIV Combi PT assay, Roche Diagnostics et Liaison® XL Murex HIV Ab/Ag test, DiaSorin) sur des échantillons séchés sur papier filtre en comparaison au test de diagnostic rapide et aux échantillons de sérum frais prélevés chez les patients en primo-infection VIH. Ces travaux ont clairement montré que les deux tests de 4ème génération réalisés sur papier filtre offrent de bonnes performances dans le diagnostic de la primo-infection par rapport aux tests de diagnostic rapide sur sérum frais. Cette méthode peut être utilisée pour détecter précocement le VIH chez les personnes difficiles à atteindre et les populations vivant dans des zones périphériques des pays à ressources limitées. Enfin, nous avons mis au point une technique de PCR en temps réel de détection et de quantification de l'ADN du VHB. A cet effet, nous sommes partis de deux PCR « maison » ciblant deux régions génomiques différentes (gène X pour la qPCR 1 et gène S pour la qPCR 2) en comparaison à un test commercial de charge virale (Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV Test, version 2.0, Roche Diagnostics). La qPCR 2 avec un seuil de détection à 91 UI/ml (vs 104 UI/ml pour la qPCR 1) a montré une meilleure performance dans la quantification de l'ADN du VHB. Cette qPCR 2 peu chère est aujourd'hui produite sous forme de kit par une start-up appelée OMUNIS. Ce kit en développement fera l'objet d'une évaluation multicentrique en France, en Afrique et en Asie du Sud-Est à travers un réseau de laboratoires sous la promotion de l'ANRS
Diagnosis and management of hepatitis B, hepatitis C and HIV infections are a real challenge in middle and low-income countries. There is an urgent need for simple, reliable and inexpensive tools to control these infections in high prevalence sittings like Africa and Asia. The challenge is immense in clinical and public health policy hands. The main goal of this research work performed for our PhD is the development and validation of strategies and tools to diagnose and monitor HIV, HBV and HCV infections in resource-constrained countries. At a first step, we investigated the results of HIV discordant results, since it is important to establish the real HIV status of people tested with clear results for appropriate decision-making in biological and clinical practice. This work show that discordant results obtained in the algorithm of HIV screening among pregnant women in Burkina Faso, are false positive results in 94% of cases due to the Determine™ HIV-1/2 immunochromatographic test and false negative results in 4% of cases due to the Genie II ™ HIV-1 / HIV-2 test. In public health practice, women with this type of result can be considered as negative for HIV testing in centers where additional investigations are not possible, especially in countries like Burkina Faso with a low incidence and a low genetic diversity of HIV.In a second step, we focused our work on the feasibility of a screening strategy that detects HIV, HBV and HCV infections into a single card of DBS. In this pilot study, we demonstrated that DBS collected in parallel to HIV rapid testing in a voluntary counseling and testing center allows HIV confirmation using immunoblotting, and an additional testing by diagnosing HBV and HCV using ELISA followed by immunoblotting and PCR for HCV confirmation. This strategy can serve as a model to promote and scale-up the screening of HBV and HCV in resource-limited countries. DBS can be served as control and confirmation of HIV, HBV and HCV diagnosis. Furthermore, we evaluated the performance of two 4th generation chemiluminescent immunoassays (Elecsys HIV Combi PT assay, Roche Diagnostics and Liaison XL Murex HIV Ab/Ag test, DiaSorin) tested on filter paper samples in comparison to rapid diagnostic test and fresh serum samples from patients with acute HIV infection. These studies have clearly shown that the two 4th generation tests performed on filter paper offer good performance in terms of sensitivity for the diagnosis of HIV infection in its early phases compared with rapid diagnostic tests. This approach may be used in combination with HIV rapid tests in hard-to-reach individuals and populations living in remote areas of when an early HIV infection is suspected since rapid tests do not offer appropriate performance in this case.Finally, we developed a real-time PCR for HBV DNA detection and quantification. In this study, we evaluated two in-house PCR targeting two different regions of HBV genome (X gene for qPCR 1 and S gene for qPCR 2) in comparison with a commercial Roche HBV DNA test (Cobas AmpliPrep / Cobas TaqMan HBV Test, version 2.0, Roche Diagnostics) as a gold standard. The qPCR 2 with a low detection limit of 91 IU/ml (vs 104 IU/ml for 1 qPCR) showed a better performance in HBV DNA quantification. This inexpensive qPCR with best performance characteristics is producing by a start-up called OMUNIS. This kit will be evaluated in France, in Africa and in South and East Asia in a research study funded by ANRS (France REcherche Nord & sud Sida-hiv Hépatites)

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Pacheco, Sidelcina Rugieri. "Avaliação de mutações de resistência ao tratamento com análogos de nucleos(t)ídeos e de escape vacinal do vírus da hepatite B (VHB) em pacientes com hepatite crônica." reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, 2016. http://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/14836.

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Abstract:

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-07-13T12:04:07Z No. of bitstreams: 1 Sidelcina Rugieri Pacheco Avaliação...2016.pdf: 1183745 bytes, checksum: cafa75f83141a4f66d07bae037fb741b (MD5)
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CAPES / CNPq
Fundação Gonçalo Moniz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
INTRODUÇÃO: A hepatite B (VHB) é uma infecção dinâmica crônica, que apesar de existir programas de imunização e tratamento antiviral disponível, existe o risco de emergência de mutações de resistência aos análogos de núcleos(t)ídeos (AN) que devem ser rastreadas, devido as suas implicações clínicas. O Brasil disponibiliza pelo SUS cinco drogas para o tratamento antiviral: IFN, LAM, ADF, ETV e TDF e um guia de conduta clínica para orientar o tratamento no território nacional, o Protocolo de Diretrizes Terapêuticas para Hepatite B e co-infecções. OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi avaliar as mutações de resistência aos AN, mutações de escape vacinal e genótipos circulantes em pacientes com hepatite B crônica em dois centros de referencia em Hepatites, na Bahia (região Nordeste) e no Acre (região Norte) do Brasil. MATERIAL E MÉTODOS: Foi utilizadas ferramentas de biologia molecular e bioinformática, através de nested PCR e sequenciamento direto das amostras, para rastrear as mutações de resistência, a região alvo foi a transcriptase reversa (RT) do gene P e as mutações de escape vacinal foi a região do gene S do VHB, como também os genótipos e subgenotipos do VHB. RESULTADOS: Foram incluídos 527 pacientes durante o período de 2011-2015, sendo 320 pacientes do HUPES/BA e 207 do FUNDHACRE/AC. Os pacientes que representam a região Nordeste foram 59,3 % do sexo masculino e uma média de idade de 44,75±12,4 DP, os pacientes da região Norte 42% foram do sexo masculino e a média de idade foi de 40,36±13,9 DP. Todos os pacientes incluídos apresentaram AgHBs persistente por mais de seis meses e 86,1% apresentaram AgHBe negativo. Foram sequenciadas 296 amostras dos pacientes com VHB crônica. Foram encontradas mutações de resistência aos AN na Região Norte 1,2% (2), Região Nordeste 7,4%(8) e no global 3,8%(20). Os padrões de mutações de resistência primária encontrados foram: rtA194T, (3) rtL180M+M204V, rtL180M+M204I, rtS202I, rtM204I, rtA181S, rtA181E e rtA184S. Em relação ao escape vacinal a frequencia para a Região Norte foi de 7,1% (11), Região Nordeste 8,4% (9) e no global 7,6% (20). Nos pacientes virgens de tratamento (n=189), a frequência de mutações de resistência foi de 6%, somente nas amostras da região Nordeste. Não houve diferença estatisticamente significante entre o grupo com ou sem mutação dos pacientes virgens de tratamento. Não foram encontradas mutações de resistência nas amostras da região Norte. Os genótipos circulantes nas duas regiões foram A, D e F, e a região Nordeste foi encontrada o genótipo C (C2). CONCLUSÃO: Os resultados demonstram a importância de rastrear e monitorar as mutações de resistência aos AN e de escape vacinal devido a importância epidemiológica e clínica na conduta terapêutica.
INTRODUTION: Hepatitis B virus (HBV) is a chronic dynamic infection, which although there immunization programs and antiviral therapy available, there is a risk of emergence of resistance mutations cores analogs (t) ide to be screened, because of their implications clinics. The Brazil offers the SUS five drugs for antiviral treatment: IFN, LAM, ADF, ETV and TDF and clinical guide of conduct to guide treatment in the country, the Therapeutic Guidelines Protocol for Hepatitis B and co-infections. AIM: The aim of this study was to evaluate the resistance mutations core analogues (t) ide, vaccine escape mutations and circulating genotypes in patients with chronic hepatitis B in two reference centers in Hepatitis, Bahia (Northeast) and Acre (Northern region) of Brazil. MATERIAL AND METHODS: Was used tools of molecular biology and bioinformatics by nested PCR and direct sequencing of samples to track resistance changes, the target region is the reverse transcriptase (RT) P gene and vaccine escape mutations was region of the gene S of HBV, as well as the HBV genotypes and subgenotipos. RESULTS: 527 patients were included during the period 2011-2015, with 320 patients HUPES / BA and 207 FUNDHACRE / AC. Patients representing the Northeast were 59.3% male and an average age of 44.75 ± 12.4 PD patients in the northern region 42% were male and the average age was 40, 36 ± 13.9 DP. All patients had persistent HBsAg for more than six months and 86.1% were HBeAg negative. We were sequenced 296 samples from patients with chronic HBV. the cores of similar resistance mutations were found (t) ide in the North 1.2% (2), Northeast 7.4% (8) and 3.8% overall (20). The patterns of primary resistance mutations were: rtA194T (3) rtL180M + M204V, M204I + rtL180M, rtS202I, rtM204I, rtA181S, and rtA181E rtA184S. Regarding vaccine escape the frequency for the Northern Region was 7.1% (11), Northeast 8.4% (9) and the global 7.6% (20). In treatment-naïve patients (n = 189), the frequency of resistance mutations was 6%, only the samples in the Northeast. There was no statistically significant difference between the groups with or without mutation of naive patients. There were no resistance mutations in samples from the North. Circulating genotypes in the two regions A, D and F, and the Northeast found the C genotype (C2). CONCLUSION: The results demonstrate the importance of tracking and monitoring the resistance mutations similar cores (t) ide and vaccine escape due to epidemiological and clinical importance in the therapeutic approach.

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Mohamed, Sofiane. "Recherche de mutations induisant des résistances aux antiviraux chez des patients atteints du virus de l'immunodéficience humaine de type 1, du virus de l'hépatite B et de l'hépatite C." Thesis, Aix-Marseille, 2015. http://www.theses.fr/2015AIXM5000/document.

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Abstract:

Les tests de laboratoire basés sur des techniques de biologie moléculaire sont des outils inestimables pour le suivi des patients, en particulier dans le cadre de l’infectiologie. Dans ce contexte clinique, ils peuvent permettre d’établir un diagnostic, un pronostic ainsi que de déterminer la stratégie thérapeutique antivirale la plus adaptée. Les virus hautement variables tel que le virus de l’immunodéficience humaine (VIH), de l’hépatite B (VHB) et de l’hépatite C (VHC) sont présents sous forme de quasi-espèces au sein de leur environnement réplicatif. Lorsque des pressions de sélection s’exercent telle que l’administration d’un antiviral, une redistribution des variants majoritaires est fréquemment observée en variants mutés pour mieux s’adapter à cet environnement. Nos travaux ont permis, dans ce contexte, de valider l’impact clinique des mutations majoritaires mais aussi minoritaires grâce à la mise en œuvre de plusieurs techniques de séquençage (pyroséquençage, séquençage à haut débit et PCR en allèle spécifique). Nous avons également validé l’utilisation d’un logiciel simple, fiable et utilisable en routine par le clinicien pour l’interprétation clinique de la masse de données générées par le séquençage à haut débit. Enfin dans le contexte du test diagnostique, nous avons cliniquement validé sur une cohorte de patients infectés par le VHB, l’utilisation du papier buvard (Dried Blood Spot) comme support de prélèvement alternatif non invasif de diagnostic, en particulier pour les populations n’ayant pas accès aux structures classiques de soins et pour les pays en voie de développement
Molecular biology based assays are invaluable tools for the patients follow-up. They can help to establish the prognosis, guide for the treatment decisions and assess the virological response to therapy. Highly variable viruses like Human Immunodeficiency Virus (HIV), Hepatitis B Virus (HBV) and Hepatitis C virus (HCV) which have a quasispecies distribution. Selection pressure on viral replicative environment such as an antiviral drug treatment, generally lead to a redistribution of the viral quasispecies with an increasing of the best adapted viral mutant. Our work allowed in this context to validate the clinical impact of majority but also minority mutations through the implementation of several sequencing techniques (pyrosequencing, high-throughput sequencing and allele-specific PCR). We also validated the use of a simple, reliable and routinely software solution by clinician for clinical interpretation of the mass of data generated by high-throughput sequencing. Finally, in the context of the diagnostic testing, we clinically validated in a cohort of patients infected with HBV, use the Dried Blood Spot technique as a supporting noninvasive diagnostic alternative sampling, especially for populations that have no access to conventional health structures and developing countries

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RUMIN, SYLVIE. "Hepatocytes humains infectes in vitro par le virus de l'hepatite b : un modele pour l'etude de l'initiation de l'infection, de la replication et de la carcinogenese associee au vhb." Rennes 1, 1995. http://www.theses.fr/1995REN10175.

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Abstract:

Le risque de developpement d'un carcinome hepatocellulaire est multiplie par 200 chez les porteurs chroniques du vhb. Plusieurs hypotheses ont ete formulees pour expliquer les mecanismes de la carcinogenese associee au vhb, et les conclusions sont tres dependantes des modeles utilises. Notre but a ete d'etudier le potentiel oncogenique du vhb dans un modele de culture proche de la situation physilogique de replication du vhb in vivo: des hepatocytes humains normaux infectes in vitro. Pour cela, nous avons etabli des conditions de culture permettant soit le maintien d'une replication virale active dans des hepatocytes hautement differencies pendant plusieurs mois, soit la proliferation des cellules infectees. Plusieurs des mecanismes proposes pour expliquer la carcinogenese induite par le vhb ont ete evalues dans ces systemes cellulaires: l'induction des oncogenes c-myc et c-jun et de la proliferation cellulaire, la perturbation de la balance intracellulaire des reactifs oxygenes intermediaires, et l'integration virale dans le genome des hepatocytes. Nous n'avons observe aucune perturbation susceptible d'engager les cellules infectees vers un processus de transformation. Une integration virale a cependant ete suspectee dans les hepatocytes proliferant, mais des techniques d'analyse plus sensibles sont necessaires pour confirmer ce resultat. L'infectabilite des cellules souches intrahepatiques est une possibilite etiologique du developpement d'un hepatocarcinome chez les porteurs chroniques du vhb. Afin d'etudier cette hypothese, nous avons etabli une lignee de cellules epitheliales humaines d'origine biliaire, et nous avons utilise des cellules epitheliales intrahepatiques purifiees. Nous avons observe une penetration du vhb ainsi qu'une persistance de l'adn viral dans les cellules infectees, bien qu'un cycle de replication virale complet ne se soit pas etabli. Ces etudes ouvrent des perspectives nouvelles pour la comprehension des etapes initiales de l'infection par le vhb. Enfin, nous avons applique les systemes de culture mis en place a l'etude de la regulation de la replication virale au cours du cycle cellulaire. Les resultats obtenus nous ont permis de suggerer que la replication virale etait maximale en phase g1 precoce et pouvait etre inhibee au cours de la progression des hepatocytes dans le cycle cellulaire. En conclusion, nous avons montre que dans ce modele, le vhb ne possede pas un potentiel oncogenique fort, ce qui limite donc son utilisation pour l'etude des mecanismes de la carcinogenese associee au vhb. Cette conclusion est en accord a la fois avec la longue latence du developpement des carcinomes hepatocellulaires chez les porteurs chroniques du vhb, et avec la theorie de la carcinogenese multi-etapes selon laquelle le vhb ne serait carcinogene par lui meme, mais le deviendrait grace a l'action simultanee de co-carcinogenes, dans un contexte de necrose/regeneration engendres par la reponse immunitaire dirigee contre les cellules infectees. Ce modele d'infection in vitro des hepatocytes humains par le vhb semble par contre bien adapte a l'etude de la regulation de la replication virale au cours du cycle cellulaire ainsi qu'a l'etude des etapes initiales de l'infection

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Kimura, Lucinete Okamura. "Epidemiologia molecular do vírus da hepatite B em população indígena dos rios Curuçá e Itaquaí no Vale do Javari, Estado do Amazonas." Universidade Federal do Amazonas, 2011. http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/2777.

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Abstract:

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:57:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucinete Okamura Kimura.pdf: 3604811 bytes, checksum: 944fcd9a6fb1e06fc9a8b1ff83801f92 (MD5) Previous issue date: 2011-02-03
Hepatitis B virus (HBV) infection is one of the most serious public health problems in the world. At least two billion people are infected, with over 350 million showing serological markers of active infection, despite prevention by vaccination. In Brazil, the HBV endemicity is heterogeneous, with the most prevalent disease in the north region. Among the indigenous population, epidemiological serum studies have reported high rates of hepatitis B prevalence in the Brazilian component of the Amazon rainforest. Studies have shown that in some cases the serological markers are not enough to detect viral activity, and in these situations, molecular tests are more sensitive and specific. The proposal of this study was to determine the prevalence of DNA (deoxyribonucleic acid) of hepatitis B virus in indigenous ethnic groups (Kanamary, Matis, Mayoruna, Marubo, Kulina and Korubo) in habitants of the rivers Curuçá and Itaquaí at the Javari Valley, Amazon, Brazil. This was a descriptive, cross-sectional study, such as used in case detection. One hundred and eighty (180) samples were analyzed from the indigenous communities of São Sebastião, Volta Grande, Pedro Lopes, Massapê, Remancinho and Bananeira. The samples were subjected to polymerase chain reaction (PCR) and semi-nested PCR to Hepatitis B virus, S gene. The prevalence for HBV-DNA of S gene was 51.1% (92/180). Among the PCR positive samples for HBV-DNA, 18/49 (36.7%) were from Marubo, 68/125 (54.4%) from Kanamary and 6/6 (100%) from other ethnicities. With regards to socio-demographic data, no significant difference was found (p=0.889) in relation to gender (statistical analysis at 5%). However, when analyzing age it was observed that the natives had lower median age (p<0.001) of 23 years old, suggesting that sexual activity was the main form of HBV transmission. There was no statistical difference found in relation to sources of infection and the presence of HBV DNA, as well as clinical aspects, with the exception of fever (p<0.001). The high prevalence of HBV-DNA of 75% (15/20) in pregnant women (p=0,009) demonstrates association with vertical transmission. The results confirm the high prevalence of HBV DNA in the Javari Valley, making it important to devise strategies for control and a more effective prevention in combating the spread of HBV
A infecção pelo vírus da hepatite B (VHB) é um dos mais sérios problemas de Saúde Pública do mundo. Estima-se que dois bilhões de pessoas estejam infectadas, com mais de 350 milhões apresentando marcadores sorológicos de infecção ativa, apesar da prevenção pela vacinação. No Brasil, a endemicidade do VHB é heterogênea, sendo a doença mais prevalente na região norte do país. Entre a população indígena, estudos soro epidemiológicos relatam altas taxas de prevalência de hepatite B na Amazônia brasileira. Pesquisas têm demonstrado que, em alguns casos, os marcadores sorológicos não são suficientes para detectar uma atividade viral e, nessas situações, os testes moleculares se mostram mais sensíveis e específicos. O presente estudo se propôs determinar a prevalência do DNA (ácido desoxirribonucléico) do vírus da hepatite B em povos de etnias indígenas habitantes dos rios Curuçá e Itaquaí no Vale do Javari, Amazonas, Brasil, pertencentes às etnias Kanamary, Matis, Mayoruna, Marubo, Kulina e Korubo. Tratou-se de um estudo descritivo, transversal, do tipo detecção de caso. Foram analisadas 180 amostras pertencentes às comunidades indígenas de São Sebastião, Volta Grande, Pedro Lopes, Massapê, Remancinho e Bananeira. As amostras foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) e semi-nested para vírus da hepatite B, gene S. A prevalência encontrada para o DNA-VHB gene S foi de 51,1% (92/180). Entre as amostras positivas para DNA-VHB PCR, 18/49 (36,7%) pertenciam à etnia Marubo, 68/125 (54,4%) à Kanamary e 6/6 (100%) a outras etnias. Quanto aos dados sóciodemográficos dos casos positivos para DNA-VHB PCR, pôde-se verificar que não houve diferença significante ao nível de 5% em relação ao gênero (p= 0,889). No entanto, quando se analisou a idade foi observado que os indígenas com PCR positiva para DNA-VHB apresentavam menores mediana de idade (p<0,001) de 23 anos, sugerindo ser a atividade sexual uma das principais formas de transmissão do VHB. Não foi constatada nenhuma diferença estatística em relação às fontes de contágio e à presença do DNA-VHB, como também aos aspectos clínicos, com exceção da febre (p<0,001). A alta prevalência do DNA-VHB de 75% (15/20) em gestantes (p=0,009) demonstra associação com a transmissão vertical. Os resultados comprovam a alta prevalência do DNA-VHB no Vale do Javari, tornando-se importante traçar estratégias de controle e prevenção mais eficazes no combate à disseminação do VHB

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Gallucci, Lara. "Interactions of HBV capsid involved in nuclear transport." Thesis, Bordeaux, 2018. http://www.theses.fr/2018BORD0130/document.

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Abstract:

Le virus de l'hépatite B (VHB) est un virus enveloppé composé d'un ADN partiellement double brin (ADNrc) contenu dans une capside icosahédrique. Le VHB est responsable d'infections aiguës et chroniques. VHB est non cytopathique mais l’inflammation chronique entraîne une fibrose hépatique, une cirrhose et un carcinome hépatocellulaire. Le VHB se réplique via un intermédiaire à ARN. La transcription nécessite que l'ADNrc soit convertit en un ADN circulaire clos de manière covalente (ADNccc). Cet ADNccc sert de matrice pour la transcription de l'ARN prégénomique (ARNpg), qui est spécifiquement encapsidé grâce aux interactions entre la polymérase virale, l'ARNpg et la protéine core (Cp) qui forme la capside. La polymérase rétrotranscrit l'ARNpg en ADN monocaténaire puis en ADNrc, conduisant à des matrices de capside matures (MatC). Cp avec 185 aa contient un domaine N-terminal structuré, et un domaine C-terminal (CTD) flexible. Le CTD comprend deux signaux de localisation nucléaire (NLS) et un domaine de liaison avec l’importin β (IBB). Le CTD est orienté vers l'intérieur de la capside de part son interaction avec les acides nucléiques simples brins tandis qu'il est exposé vers l'extérieur dans les capsides vides (EmpC) et les MatC. De plus Cp étant surexprimée, cela conduit à l'assemblage des EmpC. Le VHB doit délivrer son génome dans le noyau des cellules infectées pour sa réplication. Le transport nucléaire est médié par la capside qui interagit avec les récepteurs d'import. L’équipe a démontré préalablement que ce transport a besoin des récepteurs Importin α (Imp.α) et Importin β (Imp.β) en induisant le transport des capsides au panier nucléaire où elle est stoppée par l'interaction avec la nucléoporine 153 (Nup153). Nous avons démontré que l’Imp.α, mais pas l'Imp.β, se lie aux MatC suggérant que seule la partie du CTD qui contient les NLS est exposée à l’extérieur des MatC. En comparaison, nous avons analysé les EmpC en collaboration avec Adam Zlotnick (Université d'Indiana, États-Unis) et démontré que les EmpC sont capables de lier directement l'Imp.β. Cette interaction qui est plus forte que l’interaction avec l'Imp.α s'effectue via la reconnaissance du domaine IBB du CTD, ce qui implique une exposition totale du CTD à l'extérieur de la capside. Nous avons aussi montré que la liaison avec l'Imp.β à des concentrations très élevées fournit des forces de déstabilisation menant au désassemblage des EmpC. La libération du génome dans le panier nucléaire implique que l’interaction entre les MatC et Nup153 participe au désassemblage de la capside. Afin de valider cette hypothèse, nous avons exposé des MatC dont le génome est radiomarqué avec un fragment de Nup153 contenant le domaine clé, montré pour interagir avec la capside, en présence de nucléases. Nous avons mis en évidence qu'en présence de ce fragment, les MatC restent stables. Cela suggère la nécessité de facteurs cellulaires additionnels pour le désassemblage des MatC. Cette conclusion est conforme avec nos résultats sur noyaux isolés, dans lesquels nous avons observé une localisation nucléaire des capsides laissant supposer que les facteurs cellulaires nécessaires au désassemblage des MatC sont nucléaires. Afin d'étudier plus en détail l'étape de désassemblage et la libération du génome viral, nous avons mis au point un système permettant de suivre en temps réel le devenir du génome viral
The Hepatitis B Virus (HBV) is an enveloped virus containing a partially double stranded DNA genome (rcDNA). HBV causes acute and chronic infections. HBV is not cytotoxic but chronic inflammation leads to liver fibrosis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. HBV replicates via an RNA intermediate, which is transcribed from a covalently closed circular form of the viral DNA (cccDNA). This pregenomic RNA is specifically encapsidated into the capsid by interaction with the viral polymerase, which also interacts with the core protein (Cp), forming the capsid. The polymerase retrotranscribes the pregenomic RNA into single stranded DNA and subsequently partially double stranded DNA resulting in mature capsids (MatC). Cp is an 185 aa long polypeptide comprising a N-terminal assembly domain, and a flexible C-terminal domain (CTD). The CTD includes two overlapping nuclear localization signals (NLS) of eight aa and an Importin ß Binding Domain (IBB) of 34 aa. The CTD is fixed in the interior of the capsid by interacting with single stranded nucleic acids but translocates to the exterior in MatC and empty capsids (EmpC). Cp is over expressed leading to assembly of EmpC. The virus has to deliver its genome into the nucleus of infected cells for replication. Nuclear transport is mediated by the capsid that interacts with nuclear import receptors. The group has recently shown that MatC need either both, importin  (Imp.) and importin ß (Imp.ß), or Imp.ß alone for transport of the capsids into the nuclear basket. In this structure where genome liberation likely occurs, the transport of the capsid is arrested by interaction between the capsid and the nucleoporin Nup153. In the thesis we demonstrate that MatC binds to Imp.α but not Imp.ß, suggesting that only the part of the CTD, which contains the NLSs is exposed on capsids’ surface. In collaboration with the Adam Zlotnick (Indiana University, U.S.A.) we showed that EmpC, in contrast, bind Imp.β directly without Imp.α acting as an adaptor. This interaction, which is stronger than the one of Imp. occurs needs IBB exposure, meaning that the entire CTD becomes externalized. Furthermore, exposure to very high Imp.ß concentration led to EmpC destabilization. The genome release within the nuclear basket implies that Nup153 is involved in genome liberation from MatC. To verify this hypothesis we used MatC with a radioactively labeled genome, which were exposed to the capsid binding-Nup153 fragment. Investigating the accessibility of the genome to nucleases we found that the Nup153 fragment had no impact on capsids stability, suggesting the need of cellular factors driving disassembly. This conclusion is in agreement with our observation that MatC added to isolated nuclei resulted in nuclear capsid entry, which requires disassembly. To further study the disassembly step and the consequent release of the viral genome, we developed a system to directly visualize the viral genome allowing investigations of genome uncoating in real time. The system is based on the cooperative binding of a fluorescent fusion protein between the bacterial protein OR with GFP to a double stranded DNA sequence called Anch. Using this model we showed that infection of OR-GFP-expressing hepatoma cells with HBV containing a modified Anch genome allowed monitoring genome release into the nucleus. In future, this system may help identifying factors involved in genome release and repair and to decipher their molecular interactions

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Polesel-Laperche, Syria. "Contribution à la sécurité transfusionnelle par une veille épidémiologique de la diversité et de l'émergence virales." Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066052.

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Abstract:

Ce travail comprend deux volets : l’appréciation du risque transfusionnel viral et son évolution ; la maîtrise de ce risque au travers d’une veille scientifique et technique. Le risque résiduel est établi selon un modèle mathématique utilisant des données observées sur la population des donneurs de sang (DS) français et sur l’histoire naturelle des infections concernées. La maîtrise du risque s’appuie sur (i) la surveillance de la diversité virale chez les DS, afin de prévenir des défaillances du dépistage, (ii) la vigilance sur les outils de dépistage (validation des techniques existantes ou nouvelles) et l’évaluation de la stratégie globale du dépistage, (iii) la veille sur les risques émergents. Le risque lié aux virus « majeurs » a atteint son niveau le plus bas grâce à l’action conjuguée de nombreuses mesures préventives. Son évolution montrant une tendance à la stabilisation, on peut s’interroger sur les actions spécifiques qui pourraient encore le réduire.

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El, Idrissi Lalla Manale. "Déprotection et raccourcissement télomériques dans le carcinome hépatocellulaire." Thesis, Lyon 1, 2013. http://www.theses.fr/2013LYO10218.

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Abstract:

Le carcinome hépatocellulaire (HCC) est une tumeur de mauvais pronostic caractérisée, comme la plupart de cancers, par l'association paradoxale de télomères courts et d'une importante activité télomérase. Cette attrition télomérique joue un rôle central dans l'instabilité chromosomique à l'origine de la promotion et de l'évolution tumorale. Les premières causes d'HCC correspondent aux infections chroniques par les virus hépatotropes : virus de l'hépatite B (VHB) et virus de l'hépatite C (VHC). Dans une première étape nous avons disséqué les dérégulations télomériques dans les HCC et les cirrhoses liées au VHB, VHC ou encore à l'alcool. Nous avons observé que ces dérégulations sont acquises tôt, au stade prétumoral, et persistent au stade tumoral. Ces dérégulations sont spécifiques d'un carcinogène donné. Aux stades tardifs et tumoraux de l'infection par le VHB, les cellules hépatiques expriment fréquemment une protéine tronquée en partie C-terminale d'HBx ainsi que des formes réarrangées du gène PreS/S telle que PreS2. Dans une seconde étape nous avons trouvé qu'à l'opposé de la forme sauvage, HBx tronquée réprime hTERT, diminue l'activité télomérase, raccourcit les télomères, augmente la proportion de ponts anaphasiques et déclenche la sénescence de cellules primaires. Sachant qu'au stade tumoral les cellules transformées ré-expriment hTERT nous avons testé l'effet d'une coexpression de PreS2 et d'HBx tronquée et avons pu montrer que PreS2 contrecarrait l'effet répresseur d'HBx sur hTERT. Néanmoins de façon étonnante, PreS2 ne parvenait pas à rallonger les télomères en présence d'HBx tronquée. Les facteurs protégeant les télomères coopèrent avec la télomérase pour l'élongation et plusieurs de ces protéines sont par ailleurs impliquées dans la réparation des dommages à l'ADN. Nous avons trouvé qu'HBx tronquée modifiait spécifiquement l'expression de la plupart des protéines du télosome selon un patron connu pour inhiber l'effet de la télomérase. Nous avons montré que des dommages à l'ADN télomérique liés à l'incubation de cellules primaires avec la néocarcinostatine inhibaient l'élongation des télomères par hTERT. Ayant trouvé que PreS2 et HBx tronquée induisaient des dommages à l'ADN, nous proposons que cet effet explique l'impossibilité pour PreS2 d'allonger les télomères de cellules exprimant HBx tronquée
Among the numerous genetic defects that underly with hepatocarcinogenesis, telomere abnormalities seem to play a role both in tumor promotion and maintenance. Telomeres, the chromosome extremities, are protected by specific proteins, the Shelterin complex and by additional factors. Besides telomerase dysregulation, changes in the expression of these telomere factors have been observed in cancers. Herewe first tested the hypothesis that such dysregulations might occur in HCC with patterns depending onthe cause of HCC. For HBV-, HCV- and alcool-dependant HCC we found that telomeric dysregulations appear to be carcinogen-specific and occur early during the course of the disease and are persistent in the tumor. At the late stage of HBV-dependent disease and corresponding tumors, hepatocytes produce 3’ deleted mutants of HBx (3’DM HBx) but also a rearranged form of the PreS/S gene: PreS2. We then found that, unlike WT HBx, 3’ DM HBx repress hTERT transcription, decrease telomerase activity, shorten telomere length, increase anaphase bridges and trigger senescence in transfected primary cells. It’s well known that hTERT it re-expressed in tumors, so we tested PreS2 and 3’DM HBx transfection. We show that PreS2 counteracts 3’DM HBx effect on hTERT transcription and telomerase activity. However surprisingly PreS2 wasn’t able to elongate telomeres in 3’DM HBx expressing cells. Telomeric factors interact with telomerase allowing telomere elongation. Moreover many of these factors are implicated in DNA damage repair systems. We found that all Shelterin’s and some other telomeric factors’s expression in dyregulated in 3’DM HBx expressing cells. Moreover we show that neocarcinostatin dependent DNA damage in MRC5 primary cell prevent hTERT-based telomere elongation. Also finding that PreS2 and 3’DM induce DNA damage, we suggest that 3’DM HBx prevents PreS2 and hTERT- based telomere elongation

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Marotel, Marie. "Défauts fonctionnels des cellules NK en contexte de stimulation chronique." Thesis, Lyon, 2019. http://www.theses.fr/2019LYSE1234/document.

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Abstract:

Les cellules NK sont des lymphocytes de l’immunité innée qui ont un rôle majeur dans le contrôle précoce des infections virales et dans l’immunosurveillance des tumeurs. Cependant, en cas de stimulation chronique, un état d’anergie, où les cellules NK n’exercent plus leur fonction a été mis en évidence. Les mécanismes conduisant à cette perte de fonction demeurent mal caractérisés et s’il s’agit d’une cause ou d’une conséquence de la chronicité n’est pas non plus déterminé. Cibler les cellules NK constitue une perspective thérapeutique de choix mais nécessite une meilleure compréhension de ces aspects. L’objectif de ce travail de thèse s’articule autour de trois points. Premièrement, nous avons généré un modèle tumoral murin sensible aux cellules NK permettant l’étude de la réponse anti-tumorale et l’établissement d’une stimulation chronique. Deuxièmement, l’utilisation de ce modèle a permis d’investiguer les mécanismes conduisant à la perte de fonctionnalité des cellules NK et de tester des stratégies de restauration. Enfin, nous avons mené une étude parallèle, chez l’homme, par analyse d’une cohorte de patients chroniquement infectés par le virus de l’Hépatite B dans le but de déterminer le phénotype des cellules NK et d’identifier les causes conduisant à leur perte de fonction dans ce contexte
NK cells are innate lymphocytes which play a crucial role in the early control of viral infection and in tumor immunosurveillance. However, a state of tolerance, where NK cells are poorly functional, occurs in the context of chronic stimulation. The mechanisms leading to this process remain poorly understood and whether this is a cause, or a consequence of chronicity is unknown. Targeting NK cells appears to be a potent therapeutic strategy but requires further investigation. With the lack of clarity in the field this work had three main objectives. First, we engineered a tumoral mouse model that was strongly immunogenic for NK cells and thus allowed us to study the anti-tumoral response of NK cells and to trigger chronic stimulation. Then, we used this model to investigate the mechanisms driving NK cell loss of function and to test potential therapeutic strategies to reverse this state. Finally, in the context of human chronic infection we analyzed samples from HBV infected patients in order to determine the phenotype, function and signaling capacity of NK cells to identify the drivers of NK cell dysfunction

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Ortiz-Cuàran, Sandra. "Interactions between tumour suppressor p53 and HBV antigen HBx in liver carcinogenesis : molecular epidemiology and mechanistic studies." Thesis, Lyon 1, 2012. http://www.theses.fr/2012LYO10067.

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Abstract:

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est la principale forme de cancer primitif du foie. Le CHC présente des variations d'incidence géographique qui reflètent les variations de prévalence des infections chroniques par les virus de l'hépatite B (VHB) et/ou C (VHC), ainsi que l'exposition alimentaire aux aflatoxines. Dans les régions de haute incidence, une mutation spécifique au le codon 249 du gène TP53 est très fréquemment détectée dans les CHC et a été proposée comme un marqueur moléculaire de l'exposition aux aflatoxines. La protéine mutée correspondante, p.R249S, interagit avec l'oncogène viral HBx, qui module la réplication virale, la prolifération et la survie cellulaire. Des séquences HBX sont détectables dans l'ADN génomique de plus de 80% des CHC liés au VHB. Nous avons étudié les associations de mutation R249S avec les caractéristiques moléculaires de HBX et la progression du CHC en utilisant des spécimens obtenus dans deux études cas-témoins développées Thaïlande et en Gambie. Nos résultats démontrent (1) que la mutation R249S est préférentiellement associée aux CHC qui se développent en l'absence de cirrhose hépatique préexistante ; (2) que la mutation est associée à la présence de polymorphismes dans l'intron 1 de TP53, suggérant l'influence de facteurs de susceptibilité génétique sur la formation des mutations ; (3) que la mutation est généralement associée à la rétention dans les cancers de séquences de HBX complètes. Ces résultats suggèrent que la protéine mutée p.R249S coopère avec HBx pour favoriser le développement de CHC sans cirrhose, et que la susceptibilité à la formation de cette mutation est influencée par la structure polymorphique de TP53
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the main form of primary liver cancer. HCC presents geographical variations in incidence that reflect variations in the prevalence of chronic infections by hepatitis B virus (HBV) and / or C (HCV) and dietary exposure to aflatoxins. In areas of high incidence, a specific mutation at codon 249 of TP53 gene is frequently detected in HCC and has been proposed as a molecular hallmark of aflatoxin exposure. The corresponding mutated protein p.R249S, interacts with the viral oncogene HBx, which modulates viral replication, proliferation and cell survival. HBX sequences are detectable in the genomic DNA of more than 80% of HBVrelated HCC. We investigated the associations of mutation R249S with the molecular characteristics of HBX and progression of HCC using specimens obtained in two case-control studies developed in Thailand and in The Gambia. Our results demonstrate (1) that the mutation R249S is preferentially associated with HCC that develop in the absence of pre-existing liver cirrhosis, (2) that the mutation is associated with the presence of polymorphisms in intron 1 of TP53, suggesting influence of genetic susceptibility factors on the formation of mutations, (3) that the mutation is usually associated with the retention of cancers with complete HBX sequences. These results suggest that the mutated protein p.R249S cooperates with HBx to promote the development of HCC without cirrhosis, and that susceptibility to the formation of this mutation is influenced by the polymorphic structure of TP53

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Dissertations / Theses on the topic 'Virus d'hépatite B (VHB)'

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