Dissertations / Theses: 'Virus de l'hépatite B – génétique'

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Rollier, Christine. "Etude, à l'aide du virus de l'hépatite B du canard, de l'immunisation génétique pour la prévention et le traitement de l'hépatite B." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO10086.

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Abstract:

Les traitements actuels visant a inhiber la replication du virus de l'hepatite b (vhb) chez les patients chroniquement infectes, et ainsi a prevenir l'evolution des hepatites b chroniques vers l'hepatocarcinome, ont une efficacite insuffisante. Des donnees recentes suggerent que les approches immunotherapeutiques, et en particulier l'immunisation par adn nu ou vaccin genetique, pourraient etre particulierement interessantes pour le controle de l'infection chronique par le vhb. Cette nouvelle approche de vaccination est basee sur l'induction de puissantes reponses immunitaires par injection de l'adn exprimant une proteine antigenique virale. L'objectif de notre travail etait d'utiliser le modele du virus de l'hepatite b du canard (dhbv), etroitement apparente au vhb, afin d'evaluer l'efficacite de la vaccination genetique pour la protection et la therapie de l'hepatite b. Dans un premier temps, nous avons mis au point l'immunisation par adn nu de canards avec un plasmide codant pour la grande proteine d'enveloppe (l) du dhbv. Nos resultats montrent que l'immunisation d'animaux adultes non infectes avec ce plasmide induit une reponse humorale forte, specifique de la proteine l du dhbv, et capable de neutraliser le pouvoir infectieux du virus. De plus, les anticorps induits sont transmis verticalement de la cane immunisee aux canetons, via l'uf, et sont capables de les proteger contre une epreuve virulente par le dhbv. Dans un deuxieme temps, nous avons demontre que la combinaison de l'immunisation par adn avec la production d'anticorps dans les ufs permet d'obtenir rapidement des quantites tres importantes d'anticorps specifiques de l'enveloppe virale et neutralisants (brevet depose). De plus, l'immunisation d'animaux nouveau-nes par adn nu non seulement n'induit pas d'immunotolerance mais est egalement capable d'induire une reponse primaire memoire superieure a celle induite par l'immunisation avec une proteine recombinante. Enfin, l'immunotherapie par adn nu d'animaux chroniquement infectes par le dhbv induit une baisse de la replication virale chez tous les animaux traites, et meme dans quelques cas l'elimination de la forme d'adn viral superenroule intrahepatique responsable de la chronicite de l'infection. L'ensemble de ces resultats suggere que l'immunisation par adn pourrait representer la base de nouvelles approches protectrices et therapeutiques de l'infection par le vhb.

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Kassab, Somar. "Variabilité du virus de l'hépatite B." Thesis, Bordeaux, 2014. http://www.theses.fr/2014BORD0056/document.

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Abstract:

Le polymorphisme génétique du virus de l’hépatite B (VHB) a déjà été étudié pourtenter de comprendre les facteurs viraux influençant l'évolution de la maladie, mais les étudessont discordantes. Ceci peut être lié au fait que les précédents travaux n’ont été menés quedans des populations avec une faible variété de génotypes et présentant des charges viralesplasmatiques (CVP) élevées.Nous avons donc étudié la variabilité du génome complet du VHB chez 422 individusinfectés chroniquement, naïfs de traitements anti-viraux et dont 38% présentaient une CVPinférieure à 103 UI/mL. L’optimisation de l’amplification par PCR du génome complet duVHB nous a permis de séquencer en technique Sanger plus de 90% du génome pour 320échantillons. Le séquençage direct a mis en évidence des co-infections. Ceci a été confirmé enséquençage clonal par pyroséquençage de 27 échantillons qui a montré des proportions departicules défectives variables mais toujours en co-infections avec des sous-populationssauvages. Le génotypage des séquences obtenues par technique Sanger a montré une grandereprésentativité des génotypes les plus fréquents (A à E) ainsi que 60 potentiels recombinantsinter-génotypiques. Cependant le séquençage clonal par pyroséquençage et clonage vectorielclassique de ces derniers montre la présence de co-infections de plusieurs génotypes ou laprésence de génotypes intermédiaires entre génotypes proches. Ceci est en défaveur derecombinaison par échange de matériel génétique comme ce qui a été suggéré dans lalittérature.Cette étude sera complétée par l’analyse de corrélation entre les polymorphismes et lesmarqueurs de mauvaise évolution de la pathologie The genetic polymorphism of hepatitis B virus (HBV) has been investigated tounderstand its impact on disease evolution, with discordant results. This could be due to thenarrow range of genotype and plasmatic viral load in these studies.We analysed complete genome variability of circulating HBV, in 422 chronicallyinfected patients. All were naive of anti-viral treatement and 38% had a plasmatic viral loadbelow 103 UI/mL. After optimisation of full length genome PCR amplification, we obtainedSanger sequences for more than 90% of HBV genome in 320 samples. We detected by directsequencing multiples co-infections that were confirmed by clonal pyrosequencing in 27samples. Defective viruses were always observed in co-infection with wild type virus. Directsequences showed a large representation of the most frequent genotypes (A to E), but also 60potential inter-genotypic recombinants. Clonal pyrosequencing and vectorial sequencingshowed that these potential recombinants were co-infections with different genotypes orintermediate genotypes located between close genotypes. These observations are incontradiction with the hypothesis described in the literature on recombination by geneticmaterial exchange.This study will be completed by a correlation analysis between the polymorphisms andmarkers of bad prognosis during HBV-induced disease

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Baginski, Isabelle. "Apport de l'amplification moléculaire à l'étude de la biologie du virus de l'hépatite B humaine (VHB)." Aix-Marseille 2, 1991. http://www.theses.fr/1991AIX22060.

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Abstract:

La technique d'amplification de l'adn ou polymerase chain reaction (pcr) du fait de son extreme sensibilite a de multiples applications dans le domaine du diagnostic des infections virales et l'etude approfondie des phenomenes qui leur sont associees. Nous avons applique cette technique au diagnostic et au suivi des infections chroniques par le virus de l'hepatite b humaine (vhb) et montrer en particulier la persistance du virus apres traitement antiviral et meme apres seroconversion hbs/anti-hbs indiquant la guerison du malade. C'est cependant dans les infections atypiques ou toutes les autres techniques diagnostiques s'averent insuffisantes que la pcr est precieuse. Ainsi nous avons analyse l'hypothese de l'existence d'un agent responsable d'hepatite non-a, non-b post-transfusionnelle (hpt). Trois donneurs et 2 receveurs impliques dans deux cas d'hpt sans aucun marqueur serologique du vhb ont ete etudies. Des sequences d'adn et vhb ont pu etre identifiees dans le serum et les lymphocytes des donneurs et receveurs impliques. L'absence de changement significatif au niveau de ces sequences permet de supposer que la transmission simultanee du virus de l'hepatite c (vhc) demontree chez ces patients est a l'origine du caractere silencieux de ces infections par le vhb. Une des explications possible a la persistance du vhb dans ces infections atypiques est l'existence de virus non ou peu repliquant dans les cellules lymphoides. Nous avons donc analyser la capacite du vhb a se repliquer au sein des lymphocytes infectes et montrer la presence d'adn et d'arn viral dans ces cellules

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Martel, Nora. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite B et implication sur le diagnostic et la pathogénèse." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00865253.

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Abstract:

L'infection chronique ou occulte par le virus de l'hépatite B (HBV) est l'un des facteurs de risque les plusimportants pour le développement de carcinome hépatocellulaire viro-induit. Malgré la petite taille dugénome et les contraintes imposées par l'organisation de ce génome, le HBV présente une grandevariabilité génétique qui est le résultat des erreurs générées lors de l'étape de reverse transcription maisaussi, lors des processus de sélection et d'adaptation. Durant l'infection, une relation étroite hôte-viruss'établit. La population virale est caractérisée par la présence de quasi-espèces pouvant influencerl'évolution de la maladie hépatique et favoriser les phénomènes d'échappement. Le but de notre travail aété 1) d'étudier la variabilité virale associée aux infections occultes et l'impact de certaines modificationsde l'AgHBs (sY100C) sur la reconnaissance des tests de détection enzymatiques, et l'impact des mutations(sK122R, sD144E) sur la reconnaissance des anticorps anti-HBs d'un patient 2) de développer un nouveloutil d'amplification de génomes entiers de HBV que nous avons appliqué à l'étude préliminaire de quasiespècesd'un mutant Core. Cet outil d'amplification est plus sensible que les techniques existantes, et ilpermet l'étude des propriétés moléculaires et fonctionnelles des isolats virales. En conclusion, nous avonspu montrer que les processus d'échappement sont complexes, et font intervenir des facteurs du virus et del'hôte. Ce travail contribue à l'amélioration de la compréhension de la biologie de l'infection par le HBV,et illustre la complexité des interactions hôte-virus.

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Thermet, Séverine. "Étude moléculaire et biologique de variants du VHB." Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10139.

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Abstract:

L'Organisation Mondiale de la Santé estime à plus de 370 millions le nombre de porteurs chroniques du virus de l'Hépatite B (VHB). L'éradication de cette maladie, même dans les pays développés ayant accès à tous les équipements médicaux, est difficile. Ceci est due en partie à l'existence de variants du VHB. Leur étude est indispensable pour mieux comprendre la biologie du VHB et lutter toujours plus efficacement contre ce virus. Toutefois l'amplification des génomes entiers des variants du VHB est souvent difficile. Ainsi durant ma thèse je me suis intéressée à différents variants du VHB. Dans un premier temps, mon travail s'est basé sur un patient (Z1) présentant à la fois de forts taux d'AgHBs et d'anticorps anti-HBs. Les analyses moléculaires et biologiques ont montré que le patient était infecté par un VHB d'apparence sauvage. L'étude de l'affinité des anti-HBs de Z1 a permis d'établir qu'il avait développé une réponse immunitaire quasi-monoclonale vis-à-vis d'un épitope antigénique différent de celui porté par le virus circulant. Dans un second temps, j'ai développé une nouvelle technique d'amplification pour l'étude des variants de VHB difficiles à obtenir par les techniques standard de PCR. Pour ce faire, j'ai appliqué une technique innovante et hautement sensible, nommée amplification en cercle roulant (RCA). La RCA associée à une PCR spécifique du VHB amplifie l'ADNccc avec une sensibilité similaire à celle d'une PCR en temps réel. La RCA présente un avantage certain puisqu'elle permet d'obtenir le génome viral entier et non des fragments sous génomiques. L'étude d'un patient infecté par un VHB résistant à la lamivudine a validé l'efficacité, la fidélité et la haute sensibilité de la RCA. En conclusion, ce travail a montré qu'il était indispensable d'étudier de grandes cohortes de patients pour pouvoir dégager des consensus concernant les différents types de variants du VHB. La RCA devrait être un atout majeur dans l'étude des variants du VHB, et aussi pour l'étude de l'ADNccc qui est à l'origine de la persistance viral et de la propagation des mutations

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Fallot, Guillaume. "La recombinaison de l'ADN du Virus de l'hépatite B chez des patients co-infectés par le virus de l'immunodéficience humaine." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077246.

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Abstract:

L'infection chronique par le virus de l'Hépatite B (VHB) est un problème majeur de santé publique mondiale, avec plus de 350 millions de patients chroniquement infectés qui ont un risque accru de décompensation hépatique, de cirrhose et de carcinome hépatocellulaire. La pathogénèse du VHB est complexe et il semble que les variants moléculaires jouent un rôle dans ce processus. La variabilité de l'ADN VHB pendant le suivi des patients n'a presque pas été étudiée. La recombinaison entre différents génotypes VHB a été décrite dans de nombreuses études transversales, mais la fréquence des recombinaisons inter- et intragénotypiques se produisant chez un patients n'est pas connue. Nous avons étudié 32 patients positifs pour le VIH et 11 patients négatifs, pour lesquels persistait une virémie VHB malgré un traitement antiviral d'au moins un an. Le génotypage a été réalisé par hybridation en milieu liquide (INNO-LiPA) et par PCR spécifique du génotype. La variabilité de l'ADN VHB dans le temps a été examinée par l'étude du polymorphisme conformationnel des simples brins et des longueurs des fragments de restriction (RFLP-SSCP). Les séquences d'ADN VHB obtenues par le clonage d'un fragment PCR de 2800 pb ont été analysées pour les paramètres phylogénétiques (diversité et pression de sélection), et la recombinaison a été détectée par la suite de logiciels RDP. De larges fragments d'ADN VHB ont pu être amplifiés à deux temps différents chez 33 patients. Des modifications marquées de la quasiespèce survenaient chez 14 patients. Un fragment de 2800 pb a été cloné et séquencé à au moins deux temps différents chez 7 de ces patients, et chez un patient ne présentant pas de changement détectable par RFLP¬SSCP. Chez 4 (57%) des patients du groupe de 7, nous avons détecté des recombinaisons inter-ou intragénotypiques variées entre des variants de la quasiespèce initiale. Les fragments recombinants hébergeaient pour la plupart des déterminants de la résistance antivirale et reflétaient une augmentation massive de la diversité et de la pression de sélection positive de la quasiespèce totale VHB. Chez les patients co-infectés, les évènements de recombinaison de l'ADN VHB sont fréquents pendant la thérapie antivirale. Ils correspondent à une augmentation de la pression de sélection positive et à la conservation des mutations de résistance aux antiviraux. Dans cette population et à l'échelle individuelle, la recombinaison est une source significative de variabilité génétique du VHB Hepatitis B virus (HBV) chronic infection remains a challenging global health problem, with more than 350 million people chronically infected and at risk of hepatic decompensation, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma. HBV pathogenesis is complex and it appears that molecular variants play a role in this process. The variability of HBV DNA over times has been scarcely studied. Recombination between different HBV genotypes has been described in many cross-sectional studies, but the frequency of inter- and intra-genotypic recombination in individual patients is unknown. We studied 32 HIV-positive and 11 HIV-negative patients who remained HBV viremic on antiviral therapy for at least one year. Genotyping was based on line-probe assays and genotype specific PCR. The variability of HBV DNA over time was examined with restriction-length and single-strand conformational polymorphism (RFLP-SSCP). HBV DNA sequences obtained by cloning a 2800-bp PCR fragment were analyzed for phylogenetic parameters (diversity and selection pressure), and recombination was detected with RDP softwares. Large fragments of HBV DNA could be amplified at two different time points in 33 patients. Marked quasispecies modifications occurred in 14 patients. In 7 of these latter patients and in one patient with no change detectable by SSCP-RFLP, the 2800-bp fragment was cloned at at least two time points. In 4 (57%) of the former 7 patients, we detected various inter- or intra-genotypic recombination events between subvariants present in the initial quasispecies. Recombinant fragments mostly harbored antiviral resistance determinants and reflected a massive increase in diversity and in positive selection pressure on the entire HBV quasispecies. In coinfected patient, HBV DNA recombination events are frequent during antiviral therapy corresponding to increased positive selection pressure on the HBV quasispecies and to conservation of antiviral resistance mutations. In this population and at the individual level, recombination is a significant source of HBV genetic variability

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Thermet, Alexandre. "Étude de l'efficacité de thérapies combinées associant l'immunisation génétique et des molécules antivirales contre l'hépatite B chronique." Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10009.

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Abstract:

L'efficacité des thérapies actuelles étant insuffisante, l'infection chronique par le Virus de l'Hépatite B (VHB) est la cause majeure mondiale de décès par atteintes hépatiques. Il apparaît que la combinaison de molécules antivirales à des approches immunothérapeutiques, comme les vaccins à ADN, sont des thérapies prometteuses contre l'infection chronique par le VHB. L'objectif de ce travail était d'utiliser le modèle du VHB du canard (DHBV), virus apparenté au VHB, pour tester l'efficacité de thérapies associant des analogues de nucléoside (adéfovir, ADV ou lamivudine, 3TC) à des vaccins à ADN codant pour les protéines virales structurales. Tout d'abord, chez des animaux chroniquement infectés, nous avons évalué l'efficacité d'une bithérapie associant un traitement par l'ADV au vaccin par ADN codant pour la grande protéine d'enveloppe du DHBV (pCI-preS/S). Nous avons démontré une tendance à un effet additif de l'ADV et de pCI-preS/S où une inhibition de 51% de la réplication intrahépatique a été observée pour la bithérapie contre 14% et 38% pour les monothérapies respectives. Ensuite, chez des animaux non infectés, nous avons caractérisé la réponse humorale induite par un vaccin codant pour la protéine de la capside du DHBV (pCI-C) et analysé la spécificité de ces anticorps à ceux présents lors d'une infection chronique. Ainsi, nous avons démontré que ce vaccin à ADN est capable d'induire de puissantes réponses humorales spécifiques. De plus, nous avons identifié les régions antigéniques majeures de la protéine de la capside du DHBV reconnues à la fois par ces anticorps induits et par ceux présents lors d'une infection chronique. Enfin, nous avons étudié l'efficacité à induire une élimination virale complète, d'une bithérapie associant l'administration de 3TC aux deux vaccins pCI-preS/S et pCI-C. A la fin de la thérapie, l'analyse du taux d'ADN virale intrahépatique par PCR en temps réel montre que 23% des animaux qui ont reçu la thérapie par ADN, associée ou non à l'administration de 3TC, ont complètement éliminé l'infection virale. Ainsi, la thérapie associant les vaccins à ADN codant pour les protéines structurales du VHB apparaît intéressante contre les infections chroniques par le VHB.

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Bekondi, Claudine. "Aspects cliniques et épidémiologiques des infections à virus de l'hépatite B en République Centrafricaine." Thesis, Nancy 1, 2008. http://www.theses.fr/2008NAN10129/document.

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Abstract:

La population du virus de l’hépatite B (VHB) a été classée en huit génotypes allant de A à H. Des études récentes ont montré que le génotype E du VHB (VHB/E) prédomine sur un vaste territoire allant du Sénégal à l'Angola. La République centrafricaine (RCA) est située en zone de forte endémie où la prévalence de l’infection chronique par le VHB est estimée à 15,4% chez les adultes. Une étude menée chez 196 patients atteints d’hépatite B chronique a permis d’obtenir 66 séquences complètes ou partielles d’ADN des VHB. L’analyse phylogénétique a montré que 62 souches appartenaient au génotype E, une au génotype A1 et 3 au génotype D. Une souche était un recombinant des génotypes E/D. Comme dans la plupart des pays d’Afrique Sub-saharienne le génotype E du VHB prédomine nettement en RCA, avec une faible variabilité (1,67%) sur l’ensemble des souches du génotype E déjà décrites. Ces résultats sont en faveur d’une introduction récente du génotype E dans l’espèce humaine avec un essaimage rapide dans les populations concernées. Une origine simienne de ces souches est possible étant donné les identités de séquences entre l’ADN du VHB/E et l’ADN du VHB du chimpanzé. La deuxième partie du travail est une étude clinique et biologique chez 68 patients hospitalisés pour une suspicion de carcinome hépatocellulaire (CHC). Tous les patients recrutés (100%) étaient infectés par le VHB. L’échographie a permis de confirmer un CHC chez 43 patients et la cytoponction a permis un diagnostic de certitude chez 14 malades. L’antigène HBs (AgHBs) était présent chez 10 de ces 43 patients et 7 sur ces 10 étaient co-infectés par le VHD. La moyenne du dosage de l’alpha-foetoprotéine était de 10394 UI/mL. Chez les 25 autres patients, 21 avaient de l’AgHBs, parmi ceux-ci 11 étaient co-infectés par le VHD. La moyenne du dosage de l’AFP était de 9 UI/mL. Le CHC est donc fréquent en RCA et les patients consultent à un stade terminal de la maladie. Ce travail confirme aussi la relation entre VHB et CHC en RCA. Le VHD est associé aux formes graves d’hépatite B chronique. Les prélèvements de sérum et de lésions hépatiques qui ont été obtenus permettront par la suite d’étudier la variabilité du gène X et ses relations avec le CHC Hepatitis B virus (HBV) strains have been classified into eight genotypes A to H. Recent studies have shown that the HBV genotype E (HBV/E) predominates in a vast crescent spanning from Senegal to Angola. The Central African Republic (CAR) is an endemic country for HBV infection and prevalence of chronic infection in adults is estimated to be about 15.4%. A survey of 196 patients attending local hospital with symptoms of hepatitis has permitted to obtain 66 complete or partial sequences of HBV DNA. Phylogenetic analyses have shown that 62 strains belonged to Genotype E while one was of genotype A1, and three of genotype D. One strain presented a recombination between genotypes E and D. Genotype E is thus predominant in RCA as in most Sub-Saharan countries. The variability of strains is limited not only among CAR strains but when all strains isolated so far are compared (1.67 %), suggesting a recent introduction of HBV in the human species with a rapid expansion. A simian origin of the genotype E is possible considering the DNA sequence identities with chimpanzee HBV DNA. The second part of this study is a clinical and biological survey of 68 patients attending the “Hôpital de l’Amitié” of Bangui for a suspicion of hepatocellular carcinoma (HCC). All the patients (100 %) have been infected by HBV. Echography confirmed the suspicion of HCC in 43 patients and cytopathology ascertained the diagnosis for 14 patients for whom cytoponction was feasible. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) was present in 10 of these 43 patients, of whom 7 were co-infected with HDV. The average level of alpha-fetoprotein (AFP) was 10394 UI/mL. For the 25 other patients, HBsAg was detected in 21 of whom 11 were co-infected with HDV. Low level of AFP was observed (mean: 9UI/mL). This study shows that HBV related HCC is common in the country and that patients come to hospital late in the evolution of this disease. This study also confirms the association between HBV and HCC in CAR. HDV is associated with severe symptoms of hepatitis B. Serum and HCC lesions samples will be used to study variability of X gene and its relation with HCC

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Andriamandimby, Soa Fy. "Infection par le virus de l'Hépatite B à Madagascar : prévalence, facteurs de risque d'infection, diversité génétique, origine et dynamique de transmission." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLV046.

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Abstract:

Madagascar fait partie de la zone de haute endémicité pour l‟hépatite B dont le profil de circulation varie selon la ruralité de la zone d‟habitation. De par son insularité et les origines de ses peuplements, nous avons supposé que ce profil de circulation du VHB était dû à la variabilité du VHB et à l‟hétérogénéité du profil de transmission. Ce projet de thèse a pour objectif principal de déterminer les facteurs épidémiologiques et moléculaires influençant la dynamique de transmission et l‟évolution vers les complications de l‟infection par le virus de l‟hépatite B à Madagascar. Résultats : la séroprévalence globale pondérée en Ag HBs est de 6,9% avec des variations allant de 0% à 26% selon les zones géographiques considérées. La prévalence augmente en s‟éloignant des grandes villes et des principales routes nationales les reliant et chez les individus à faible statutsocio-économique. L‟étude du flux génétique des souches virales de l‟hépatite B montre que les zones les plus reculées représentent un réservoir pour la dissémination du virus. L‟infection par le virus de l‟hépatite B est responsable de 31% des maladies hépatiques chroniques rencontrées dans les services hospitaliers investigués à Antananarivo. L‟introduction du VHB s‟est probablement faite au cours du XIXème siècle. Sa propagation à l‟intérieur du pays a pris une allure exponentielle durant les années 80s probablement durant les épidémies de paludisme et suite à des réutilisations des matériels d‟injections. Conclusion : Les résultats de ces différents travaux nous ont permis de plaider pour une politique de lutte visant en particulier les zones très reculées de l‟île où la prévalence en AgHBs est la plus importante Madagascar is part of endemic region of HBV. Distribution is different in rural and urban area. The historic of human settlement and its insularity might impact distribution and molecular characteristic of HBV in Madagascar, we then supposed that difference observed in distribution and prevalence of HBV were due to viral variability and different pattern of viral transmission. Therefore, the main objective of this thesis was to determine molecular and epidemiological pattern that may influence dynamic transmission and complications of infection. Results: weighted prevalence of HBsAg was 6.9%. It varied from 3% to 26% according to area of sampling. Populations with a low socio-economic status and those living in rural areashad a significantly higher seroprevalence of HBsAg. Gene flow study showed rural area remain important in virus diffusion.HBV infection was found to be responsible of 31% of chronic liver disease encountered in the main public hospital in the capital of the country. Because of its recent emergence, its introduction dated from XIX century during colonization period. Its expansion during 1980s might be due to use of unsafe injection material mainly during malaria epidemic. Conclusion: The result of these work allowed us to advocate for a policy of struggle, in particular in the very remote areas of the island where the HBsAg prevalence is the most important and where care and preventive measures such as vaccinations are scarce

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Redelsperger, François. "Implications des particules défectives et de la protéine HBSP du virus de l'Hépatite B dans la pathogenèse virale." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077108.

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Abstract:

Avec de 400 millions de porteurs chroniques dans le inonde, le Virus de l'Hépatite B (VHB) reste un problème majeur de santé publique. Notre groupe de recherche a suggéré un impact de la variabilité génétique du VHB, impliquant la synthèse de particules virales défectives (dVHB), sur la pathogenèse hépatique. Ces Dvhb sont générées après encapsidation et rétro-transcription d'un ARN viral épissé. Cet ARN épissé code également pour HBSP du VHB. Chez des patients chroniquement infectés, notre groupe a montré, que les dVHB et la présence d'anticorps anti-HBSP étaient associés avec la sévérité de l'atteinte hépatique. Cependant, l'association dVHB/sévérité de la maladie hépatique est toujours sujette à controverse. Le but de notre travail a été : 1) de quantifier la proportion en dVHB au cours de la progression de la maladie hépatique. Nous avons quantifié les dVHB chez des patients en phase aiguë de l'infection ou chez des porteurs chroniques du VHB, et recherché l'implication de facteurs viraux intervenant dans sa régulation. Nous avons confirmé une association entre proportion en dVHB et sévérité de la maladie hépatique, et nous avons pu identifier des mutations au sein d'une région du génome viral (HPRE), associées à une augmentation de la proportion en dVHB. 2) Ces travaux de recherche ont également permis de mettre en évidence que la protéine HBSP était impliquée dans la voie de signalisation du TFNα. Cette dernière, en modulant les voies NFkB et JNK, intervient dans une diminution de la sécrétion des antigènes viraux. Cette dérégulation de la voie de signalisation du TNF pourrait participer au contrôle de l'inflammation hépatique durant l'infection virale par le VHB. De plus, cette dérégulation de la voie de signalisation du TNF pourrait également intervenir au cours du processus de fibrose hépatique, ou nous avons observé un rôle anti-fibrotique de la protéine HBSP With almost 400 million chronic carriers, Hepatitis B Virus (HBV) is a major issue of world public health. Our group suggested an impact of genetic variability of HBV, included defectives particles (dHBV) synthesis, in liver pathogenesis. These particles, generated after packaging and retro-transcription of a spliced viral RNA, are defective for replication. Moreover, this spliced RNA also encodes for HBSP protein. In chronic carriers, our group showed that proportion of dHBV and HBSP antibodies are correlated with the severity of liver disease. However, the association between proportion of dHBV and severity of liver disease is still a matter of debate. Our goal was: 1) to quantify the proportion of dHBV during the course of liver disease, and to search for the implication of viral factors in its regulation. During this study, we confirmed the correlation between proportion of dHBV and severity of liver disease, and we identified mutations in a region of the viral genome (HPRE), involved in an increasing of proportion of dHBV in vivo and in vitro. 2) Our work also revealed that HBSP protein is implicated in TNFa signaling pathway. Modulating NFKB and JNK pathways, HBSP interfered in viral antigen secretion. This deregulation of TNFα signaling pathway could participate into the control of hepatic inflammation during HBV infection. In addition, deregulation of TNFα pathway could also interfere in hepatic fibrosis, where we observed an anti-fïbrotic effect of HBSP protein

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Warter, Lucile. "Etude des déterminants de la réplication du virus GB-B en culture cellulaire et in vivo : développement d'un modèle d'étude du virus de l'hépatite C." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077076.

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Abstract:

L'infection par le virus de l'hépatite C représente un problème majeur de santé publique. L'étude de l'infection par ce virus, ainsi que le développement de thérapies spécifiques au VHC sont néanmoins freinés par l'absence de petits modèles animaux sensibles à ce virus. Dans ce contexte, le virus GB-B (GBV-B), un virus hépatotrope et le plus proche parent du VHC, qui infecte des petits primates du nouveau monde (marmousets et tamarins), constitue un modèle de substitution intéressant pour étudier le VHC. Dans cette thématique, nous avons construit un système d'ARN sous-génomique du GBV-B, ou réplicon, capable de réplication en culture cellulaire. Grâce à ce système, nous avons mis en évidence le rôle déterminant des domaines I et II de la région 5' non codante (5'NC), ainsi que des protéines non structurales NS3, NS4A et NS5A du GBV-B, dans la réplication du génome viral en culture cellulaire. Le système de réplicon a également permis de montrer que 3 mutations identifiées comme étant essentielles à l'infectiosité chez le tamarin d'un génome chimérique du GBV-B contenant le domaine III de la région 5'NC du VHC, n'ont pas d'effet sur la traduction et la réplication de l'ARN chimérique en culture cellulaire. Par ailleurs, nous nous sommes attachés à construire des réplicons chimériques du GBV-B codant la polymérase NS5B du VHC, dans l'objectif de tester chez le petit primate infecté par un virus chimérique GBV-B/VHC correspondant des antiviraux ciblant spécifiquement NS5B du VHC. Enfin, nous avons exploré l'infectiosité chez le marmouset du clone moléculaire du GBV-B utilisé au laboratoire Hepatitis C virus (HCV) infection represents an important public health concern. The study of HCV infection, as well as the development of specific drugs to combat this infection, have been hampered by the lack of small animal models susceptible to HCV. In this context, GB virus B (GBV-B), an hepatotropic virus which infects small South America non-human primates (marmosets and tamarins) and which is closely related to HCV, constitutes an interesting surrogate model to study HCV. For these reasons, we have developed a dicistronic subgenomic GBV-B RNA (replicon) which autonomously replicates in cell culture. Using this replicon System, we showed that proximal domains I and II of the GBV-B 5' nontranslated region (5'NTR), as well as GBV-B nonstructural proteins NS3, NS4A and NS5A are critical determinants for RNA réplication in vitro. Using the GBV-B replicon, we also showed that mutations within the 3'NTR and NS5A encoding sequence identified as essential for the in vivo infectivity of a chimeric GBV-B genome comprising the domain III of the HCV 5'NTR, do not act in translation or replication of the chimeric replicon in cell culture, but rather at a later stage of the virus life cycle, possibly for viral particle assembly. Moreover, we have undertaken to create GBV-B/HCV chimeric replicons encoding HCV polymerase NS5B, in the aim to develop a System to assess the efficiency of antiviral drugs targeting HCV NS5B in small primates infected by a corresponding GBV-B/HCV chimeric virus. Finally, we have investigated the infectivity of the GBV-B molecular clone used in the laboratory in marmosets

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Loirat, Delphine. "Rupture de la tolérance à l'antigène de surface du virus de l'hépatite B par l'immunisation génétique : modèle d'étude pour l'immunothérapie des hépatites B chroniques." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077215.

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Ducroux, Aurélie. "Etudes des mécanismes contrôlant la réplication du virus de l'Hépatite B dans le contexte de l'infection : rôle de la protéine virale HBx et des protéines cellulaires PRMT1 et Spindlin1." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077179.

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Abstract:

Dans le noyau des hépatocytes, le génome viral est organisé sous la forme d'un mini-chromosome (ADNccc), associé à des histones et à des protéines non-histone. L'ADNccc est soumis à des modifications de la chromatine qui vont contrôler sa transcription. La protéine virale HBx, est essentielle à la réplication virale. HBx joue un rôle fondamental dans l'établissement d'une transcription active de l'ADNecc au cours de l'infection, cependant les mécanismes moléculaires mis en jeu restent encore à déterminer. Dans le but d'élucider les mécanismes impliqués dans l'activité transactivatrice d'HBx, nous avons isolé par purification par affinité ses partenaires nucléaires. Deux protéines issues de cette purification ont fait l'objet d'une étude fonctionnelle : PRMT1 et Spindlinl. Nous avons montré que PRMT1 exerce une inhibition sur la transcription virale via son activité méthyltransférase et qu'HBx est capable de contrecarrer cette activité. Nous avons montré par ChIP que Spindlinl est recrutée sur l'ADNecc au cours de l'infection ce qui corrèle avec une diminution des ARNm viraux. Nous avons mis en évidence par des expériences de « run-on » nucléaires que Spindlinl agit au niveau de la transcription du VHB. Enfin nous avons montré qu'HBx est capable de contrecarrer en partie cette répression en diminuant le recrutement de Spindlin1 sur l'ADNecc. Nous avons montré que Spindlinl réprime la transcription d'un autre virus à ADN, HSV1. Pour comprendre les mécanismes moléculaires mis en jeu par Spindlin1 dans la régulation de la transcription nous avons isolé les partenaires de Spindlin1 In the nucleus of hepatocyte, the viral genome is organized into a mini-chromosome (cccDNA), associated with histones and non-histone proteins. The cccDNA is subject to epigenetic regulation that controls its transcription. The viral regulatory protein HBx is essential for viral replication. HBx plays a fondamental role in the establishment of an active transcription from the cccDNA during infection, however, the molecular mechanisms involved are still poorly understood. To elucidate the mechanisms involved in the transactivating activity of HBx, we isolated by affinity purification its nuclear partners. We focused on two partners: PRMT1 and Spindlin1. We have shown that PRMT1 exerts inhibition of HBV transcription via its methyltransferase activity and that HBx is able to counteract this activity. We have shown by ChIP that Spindlinl is recruited onto cccDNA during infection. This recruitment correlates with a decrease in viral mRNAs. We demonstrated by nuclear mn-on experiments that Spindlinl acts on HBV transcription. In addition, we showed that HBx is able to partially counteract this repression by decreasing Spindlin1 recruitment onto cccDNA. Importantly, we also showed that Spindlinl represses the transcription of another DNA virus (HSV-1), suggesting that it may be involved in a broader anti-viral response. Finally, in order to elucidate further the molecular mechanisms of viral transcriptional repression by Spindlinl and its functional interaction with HBx, we isolated Spindlinl partners by affinity purification

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Chemin, Isabelle. "Contribution à l'étude de la biologie de l'infection par les hepadnavirus grâce à l'amplification enzymatique de l'ADN et la cytométrie en flux." Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO1T106.

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Ballay, Annick. "Expression in vitro et in vivo d'antigènes de surface du virus de l'hépatite B à partir d'adénovirus recombinants." Paris 6, 1986. http://www.theses.fr/1986PA066481.

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Kaplanski, Catherine. "Contribution à l'étude des altérations génétiques associées à la cancérogenèse hépatique liée à l'infection chronique par le virus de l'hépatite B et à l'exposition aux aflatoxines." Lyon 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LYO1T157.

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Chabaud, Martine. "Étude des variations génotypiques chez les virus par amplification génique : application à l’hépatite b et aux infections à papillomavirus humains." Tours, 1995. http://www.theses.fr/1995TOUR3803.

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Abdou, Chekaraou Mariama. "Variabilité génétique des souches virales HBV et HDV circulant dans la région du Sahara en Afrique et étude de la co-spéciation HBV/HDV." Paris 13, 2010. http://www.theses.fr/2010PA132001.

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Abstract:

L’infection par le virus de l’hépatite B (HBV) constitue en Afrique Subsaharienne un problème de santé publique majeur. Le taux de prévalence de la protéine d’enveloppe du virus, l’antigène HBs (AgHBs) peut atteindre jusqu’à 30% dans certains pays. De plus on estime entre 70 à 100 millions le nombre de porteurs chroniques de l’HBV avec une fréquence de décès annuels de l’ordre de 250 000. Les données concernant l’infection concomitante par le virus de l’hépatite D (HDV) virus satellite de l’HBV, sont très rares car très peu d’études ont été conduites. Les génotypes HBV/E, et l’HBV/A ont été identifiés en Afrique subsaharienne, le génotype D étant cantonné à l’Afrique du Nord. De plus, plusieurs souches recombinantes entre le génotype E et les génotypes, A et D ont aussi été décrit. Concernant l’HDV, 4 génotypes « africains », HDV 5, -6, -7 et -8 ont été caractérisés au laboratoire chez des patients africains immigrés en France, infectés dans leur pays d’origine. Au cours de cette étude nous avons voulu déterminer l’épidémiologie moléculaire des souches HBV et HDV circulant au Niger, et plus généralement dans la région du Sahara (Mali de Mauritanie et du Tchad). Au partir d’une cohorte de donneurs de sang du Niger porteurs de l’AgHBs, nous avons retrouvé que 80% des souches étudiées appartenaient au génotype E. Ces souches présentaient une variabilité génétique significativement plus différente que celle décrite pour les souches HBV/E de la littérature (p<0,005) suggérant une diffusion plus ancienne de l’infection au Niger. De plus, nous avons mis en évidence un nouveau recombinant HBV/D-E entre des souches HBV/D et HBV/E, représentant près de 20% des souches isolées de notre cohorte, présentant des points de cassures précis, situés dans des « points chauds » de recombinaison décrits dans la littérature. Ce recombinant HBV/D-E présentait un taux de divergence dans sa séquence nucléotidique complète de plus de 4% en par rapport aux sous génotypes HBV/D décrits à ce jour. Les analyses phylogénétiques extensives effectuées nous permettent de le classer clairement comme un nouveau sous génotype, nous avons proposé HBV/D8. De même, comme décrits aussi par d’autres équipes, nous avons mis en évidence d’autres recombinants HBV-E/D, à la fois au Niger, mais aussi en Mauritanie avec des profils différents les uns des autres, témoignant de la grande variabilité génétique des souches virales dans la région. En revanche, la prévalence de l’infection Delta au Niger semblait a priori faible. Quatre souches de notre cohorte (7,8%), toutes de génotype HDV-1 ont été isolées. L’étude de la co-spéciation HBV/HDV dans cette région de l’Afrique saharienne (Niger, Mali de Mauritanie et du Tchad) a été entreprise à partir de 82 échantillons de la collection des sérums HDV positifs du laboratoire. Le génotype E était associé à tous les génotypes delta présents HDV-1, -5 et -7. De même, une souche HBV/D était aussi capable de s’associer à l’HDV-1 et -5. Afin de tester si l’enveloppement de HDV par HBV était dépendant ou non des génotypes des souches virales, nous avons mis au point un modèle cellulaire in vitro de co-transfection transitoire de plasmides codant la protéine AgHBs et la grande protéine delta. La méthode de mesure consistait en l’évaluation de la formation de particules pseudo-virales. Les résultats préliminaires obtenus à l’aide de HBV/D co-transfecté avec les génotypes HDV-1, HDV-3, HDV-5 et HDV-6 et HDV-7, montrent que HDV-1, mais pas HDV-5, était enveloppé. Grâce à ce modèle, les études seront poursuivies afin d’analyser la capacité d’enveloppement des différents « génotypes delta africains » par le génotype E Infection with hepatitis B (HBV) in SubSaharan Africe is an issue of major public health. The prevalence of the envelope protein of the virus, HBs antigen (HBsAg) can reach up to 30% in some countries. In addition it is estimated between 70 to 100 million, the number of chronic carriers of HBV with an annual death rate of about 250 000. Data on coinfection with hepatitis D (HDV) virus satellite of HBV are very rare because very few studies have been conducted. In terms of molecular characterization of HBV and HDV circulating strains, studies, although partial and conducted with a small number of samples, have been reported. Two HBV genotypes, HBV/E, and HBV/A (with its sub genotypes A1, A2, A3, A4 and A5) have been mainly identified in sub-Saharan Africa. Genotype D is confined to North Africa. In addition, several recombinant strains between genotype E and genotypes A and/or D have also been described. Concerning the HDV, 4 "African genotypes", HDV-5, -6, -7 and -8 have been characterized in the laboratory from African patients immigrants in France, who had been infected in their country of origin. Two studies conducted in Gabon confirmed the presence of HDV genotype-7 and -8. In this study we wanted to determine the molecular epidemiology of HBV and HDV strains circulating in Niger and more generally in the Sahara region, in neighboring countries of Mali from Mauritania and Chad. In a cohort from blood donors in Niger HBsAg carriers, we found that 80% of the studied strains belonged to genotype E. These strains showed genetic variability significantly different from that described for HBV/E strains of the literature (p <0. 005) suggesting an ancient diffusion of infection in Niger. Furthermore, we identified a new recombinant HB /D-E between strains HBV/D and HBV / E, representing nearly 20% of strains isolated in our cohort, with the specific breakpoints located in hotspots recombination described elsewhere in the literature. The recombinant HBV/D-E showed a divergence in its complete nucleotide sequence of more than 4% as compared to HBV genotypes /D described to date. The extensive phylogenetic analyses carried out allow us to classify it as clear as a new genotype, we proposed HBV/D8. Similarly, as also described by other teams, we have highlighted other recombinant HBV/E-D, both in Niger, but also in Mauritania with profiles different from each other, reflecting the high genetic variability of viral strains in the region. In contrast, the prevalence of HDV infection in Niger seemed a priori low. Four strains in our cohort (7. 8%), all classified as genotype HDV-1 were isolated. The study of HBV / HDV co-speciation in this region of Saharan Africa (Niger, Mali, Mauritania and Chad) was undertaken from 82 samples from the laboratory collection of HDV positive serum. Genotype E was associated with all delta genotypes found, HDV -1, -5 and -7. Similarly, HBV/D strain was also able to envelope the HDV-1 and -5. To test whether the envelopment of HDV or HBV was dependent or not on genotypes of virus strains, we developed a cellular in vitro model of transient co-transfection of plasmids encoding the HBsAg protein and large delta protein. The measurement method consisted of evaluating the formation of viral like particles. Preliminary results obtained with HBV/D co-transfected with HDV-1, -3, -5, -6, and -7, showed that HDV-1, but not HDV-5, was wrapped. With this model, studies are continuing to analyze the ability of the genotype E to wrapping different "Delta African genotypes"

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Touzé, Antoine. "Intérêt des pseudo-particules virales obtenues par recombinaison génétique pour le développement de vaccins et pour la vectorisation d'antigènes et de gènes : application aux papillomavirus et au virus de l'hépatite b." Tours, 1997. http://www.theses.fr/1997TOUR3801.

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Floriot, Océane. "Virus de l’Hépatite B et transcription cellulaire : impact de la protéine HBx et de ses interactions avec les ARNs non-codants." Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSE1319/document.

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Abstract:

Le virus de l'hépatite B (VHB) reste un problème de santé majeur dans le monde malgré la disponibilité du vaccin. Le VHB n’est pas éradiqué par les thérapies actuelles et 240 millions de personnes infectées chroniquement restent à risque de développer une cirrhose du foie et un carcinome hépatocellulaire (CHC).Le VHB est un petit virus hépatotrope doté d'un génome à ADN double brin partiel (ADNrc). Après infection l'ADNrc est converti en ADN épisomal (ADNccc) qui est ensuite organisé en minichromosome viral, qui est le modèle pour la transcription et qui initie la réplication. La protéine de l'hépatite B x (HBx) est recrutée sur l'ADNccc pour initier et maintenir la transcription de l'ADN ccc. HBx cible aussi directement des gènes cellulaires impliqué dans le développement du CHC.Nous avons utilisé une approche ChIP-Seq pour identifier toutes les cibles génomiques de HBx dans les cellules qui répliquent le VHB. Les cibles HBx sont à la fois des gènes codant les protéines et des ARNnc (75 miARN et 34 lncRNA). Nous avons montré que HBx réprimait un sous-ensemble de miARNs qui réguleraient négativement la réplication virale (ex : miR-24) et des miARNs impliqués dans le développement du CHC (ex : miR-21). Parmi les lncARNs ciblés pour HBx, nous avons étudié DLEU2, qui est fortement surexprimé dans l’infection par le VHB et le CHC. Nous avons en outre montré que DLEU2 lie à la fois HBx et l’histone méthyltransférase Ezh2, la sous-unité catalytique du complexe répressif PRC2. L'interaction avec DLEU2 et HBx relie les fonctions Ezh2/PRC2 conduisant à l'activation constitutive d'un sous-ensemble de gènes cibles d'Ezh2 qui sont normalement conservés dans un état réprimé. Nous avons également montré que l’interaction de HBx avec DLEU2 se produisait sur le minichromosome de l’ADNccc où elle stimulait la transcription/réplication du virus. Enfin, nous avons caractérisé par ATAC-Seq les changements d'accessibilité de la chromatine imposés par HBV dans les hépatocytes humains primaires Hepatitis B virus (HBV) remains a major health problem worldwide despite the availability of the vaccine. No cure is available for the 240 million peoples chronically infected with HBV that are at risk to develop liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC). Viral suppression, achieved by long term treatment with nucleotides analogues (NUCs), impacts on liver fibrosis and prevents liver decompensation but HCC risk is not reduced in the first 5 years of treatment. HBV is a small hepatotropic virus with a partially double strand DNA (rcDNA) genome. After hepatocyte infection the rcDNA is converted into the cccDNA episome that is then organized into a viral minichromosome that is the template for all viral transcripts and initiates replication. The hepatitis B x protein (HBx) is recruited on the cccDNA and is required to launch and maintain cccDNA transcription. HBx has also been shown to directly target cellular genes and this has been related to HCC development.We used a ChIP-Seq approach to determine the full repertoire of HBx genomic targets in HBV replicating cells. HBx targets include both protein coding genes and ncRNA (75 miRNAs and 34 lncRNAs). We showed that HBx represses a subset of miRNAs that would negatively regulate viral replication (i.e. miR-24) and miRNAs involved in HCC development (i.e. miR-21). Among the HBx targeted lncRNAs we focused DLEU2, which is strongly upregulated in HBV infection and HCC. We further showed that DLEU2 binds both HBx the Ezh2 histone methyltransferase, the catalytic subunit of the repressive PRC2 complex. The interaction with DLEU2 and HBx re-wires Ezh2/PRC2 functions leading to the constitutive activation of a subset of Ezh2 target genes that are normally kept in a repressed state. We also showed that HBx interaction with DLEU2 occurs on the cccDNA minichromosome where it boosts HBV transcription/replication. Finally, we characterized by ATAC-Seq HBV imposed changes of chromatin accessibility in primary human hepatocytes

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Mansour, Wael. "PRÉVALENCE ET DIVERSITÉ GÉNÉTIQUE DES SOUCHES HBV ET HDV CIRCULANT AU NIGER ET EN MAURITANIE." Phd thesis, Université d'Angers, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00991555.

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Abstract:

Le portage chronique du virus de l'hépatite B (HBV) en Afrique est très élevé, avoisinant parfois jusqu'à 30% dans certaines régions. Selon l'OMS, sur les 400 millions de personnes souffrant d'une infection chronique HBV, 70 à 140 millions vivent en Afrique avec un taux de décès annuel d'environ 250 000 cas par an. Les données concernant l'infection concomitante par le virus de l'hépatite D (HDV) virus satellite de l'HBV, sont rares car peu d'études ont été réalisées en Afrique. Malgré ce fort taux de prévalence, les données concernant la caractérisation moléculaire des souches HBV et HDV sont limitées ou inexistantes dans la plupart des pays d'Afrique Subsaharienne et en particulier dans région du Sahara, vaste zone multiethnique, de passage et de brassage de populations. Au cours de cette étude, nous avons voulu déterminer la prévalence et l'épidémiologie moléculaire des souches HBV et HDV circulant la région du Sahara (Niger et Mauritanie). Tout d'abord, nous avons étudié une cohorte de donneurs de sang du Niger porteurs de l'AgHBs. Nous avons trouvé que 80% des souches étudiées appartenaient au génotype E. De plus, nous avons identifié et caractérisé un nouveau recombinant HBV/D-HBV/E représentant près de 20% des souches étudiées. Les points de cassure se situaient dans des " points chauds " de recombinaison, régions impliquées dans les événements d'intégration du génome de l'HBV. Des analyses phylogénétiques extensives nous ont permis de le classer comme un nouveau sous génotype. Nous avons proposé HBV/D8. Nous avons par la suite, en collaboration avec des équipes locales, étudié la diversité génétique HBV en Mauritanie, pays voisin du Niger, au sein de différents groupes représentatifs de la population : femmes enceintes (n=1020), consultants (n=954), donneurs de sang (n=11110) et patients suivis pour une infection HBV chronique (n=300). Le taux de portage de l'AgHBs, était de 11 à 18 % selon les populations étudiées, classant la Mauritanie comme pays à haute endémie pour l'HBV. L'exposition à l'HBV était associée en analyse multivariée, au niveau d'éducation, à l'ethnie, à des antécédents de transfusion et à la profession chez les femmes enceintes et, chez les consultants, au sexe masculin. Sur le plan moléculaire, 3 génotypes différents circulaient en Mauritanie (n=240) : l'HBV/D (56,3%), l'HBV/E (34,6%) et l'HBV/A (8,8%). De façon intéressante, 30% des génotypes D circulant en Mauritanie étaient l'HBV/D8. Cette diversité de l'HBV peut être expliquée par la localisation géographique du Niger et de la Mauritanie comme zones de passage entre l'Afrique du Nord et l'Afrique Sub Saharienne où l'HDV/D et l'HBV/E respectivement sont prédominants. D'autre part, 14 à 33% des patients HBV positifs étaient également infectés par l'HDV. La présence d'anticorps anti-Delta était associée en analyse multivariée chez les consultants, à l'âge et au sexe masculin, et chez les donneurs de sang, à l'âge, au nombre de mariages, à la profession (militaire), à la résidence (région du désert) et à des antécédents d'hospitalisation. Sur le plan moléculaire, le génotype HDV-1 est largement majoritaire (90%) mais l'HDV-5 a aussi été isolé (10% des cas). En conclusion, ce travail souligne encore la forte prévalence des hépatites B et Delta au Niger et en Mauritanie. Nous avons aussi mis en évidence une diversité génétique importante des souches circulant et notamment la caractérisation d'un nouveau sous-génotype HBV/D8 hautement prévalent. Il convient d'évaluer la sévérité de la maladie hépatique liée à cette diversité génétique et à ce nouveau variant, notamment son implication éventuelle dans l'oncogenèse hépatique par des événements de recombinaison génétique.

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Abdul, Fabien. "Développement et évaluation de nouvelles stratégies pour le traitement des hépatites B chroniques, dans le modèle du canard de Pékin infecté par le DHBV." Thesis, Lyon 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LYO10284.

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Abstract:

Développement et évaluation de nouvelles stratégies pour le traitement des hépatites B chroniques, dans le modèle du canard de Pékin infecté par le DHBVL’infection chronique par le HBV est la cause majeure de cirrhose hépatique et de carcinome hépatocellulaire, conduisant à plus d’un million de décès chaque année. Le faible taux de réussite des thérapies actuelles des hépatites B montre la nécessité du recours à des méthodes thérapeutiques alternatives. Ainsi, nous avons étudié une stratégie pertinente reposant sur l’utilisation de molécules antisens (PNAs) couplées à des peptides perméabilisants (CPPs). Nous avons démontré que les PNAs ciblant le signal d’encapsidation du DHBV couplés au CPP pénétraient dans les cellules et conduisait à une inhibition de la réplication virale. De plus, nous avons mis en évidence une activité antivirale du CPP (Arg)8 seul. Nous avons ensuite évaluer le mécanisme d’action antivirale du CPP in vitro et avons démontré qu’il inhibait les stades tardifs de la morphogénèse virale, conduisant à une inhibition forte de la sécrétion des particules virales. Par ailleurs, nous nous sommes intéressés à l’évaluation de stratégies immunothérapeutiques, reposant sur la vaccination génétique. Nous avons démontré les bénéfices de la co-administration de cytokines (IFNγ), avec un vaccin à ADN dirigé contre la grande protéine d’enveloppe du DHBV (preS/S), sur l’amplitude de la réponse humorale et sur le pouvoir neutralisant des anticorps induits. Enfin nous avons évalué les bénéfices d’une approche d’immunisation hétérologue « prime-boost » associant l’immunisation à ADN et un vecteur viral (AdénoCELO) recombinant, codant la protéine preS/S du DHBV et l’IFNγ. Nous avons montré que l’immunisation hétérologue induisait une réponse humorale plus forte que celle induite par l’immunisation homologue Development and evaluation of new strategies for treating chronic hepatitis B in the model of Peking duck infected with DHBVChronic infection with Hepatitis B virus (HBV) is the major cause of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma, leading to more than one million deaths each year. The low success rate of current therapies against HBV infection shows the need of alternative therapeutics. Thus, we studied a new strategy based on the use of antisense molecules (PNAs) coupled with cell penetrating peptides (CPPs). We have shown that PNAs targeting the DHBV encapsidation signal coupled to CPPs penetrated into the cells and led to an inhibition of viral replication. In addition, we have demonstrated an antiviral activity of the CCP (Arg)8 itself. We then evaluate the mechanism of antiviral action of this CPP in vitro and have shown that it inhibited the late stages of viral morphogenesis, leading to a strong inhibition of the release of viral particles. Furthermore, we were interested in evaluating immunotherapeutic strategies, based on DNA vaccination. We have demonstrated the benefits of co-administration of cytokines (IFNy), with a DNA vaccine directed against the DHBV large envelope protein (preS/S), enhancing the magnitude of humoral response and enhancing neutralizing anti-DHBV antibody response. Finally we evaluated the benefits of a heterologous immunization approach or prime-boost immunization involving DNA vaccination and a recombinant viral vector (AdenoCELO) encoding the DHBV preS/S and IFNy proteins. We have shown that heterologous immunization induced a humoral response stronger than that induced by homologous immunization. By contrast, the heterologous prime-boost strategy was less effective than homologous DNA immunization for therapy of chronic DHBV-carrier ducks

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Yim, Seung-Ae. "Multimodal study of the interactions between the hepatitis B virus and the cyclic GMP-AMP synthase cGAS." Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ041/document.

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Abstract:

Le virus de l’hépatite B (HBV) est l’agent étiologique de l’hépatite B. Ce virus est responsable d’hépatite chronique B, de cirrhose et de cancer du foie au niveau mondial. L’absence d’activation de la voie Interféron (IFN) suite à l’infection par HBV est encore mal comprise. Récemment, le senseur cellulaire cytosolic GMP-AMP synthase (cGAS) a été décrit comme un senseur efficace de DNA double brin possédant également une activité antivirale envers des virus à ADN et à ARN. Le but de mes travaux de thèse a été de contribuer à la compréhension des relations existants entre le HBV et cGAS, à des stades précoces et tardifs de l’infection HBV en utilisant des expériences de perte- et gain- de function ainsi que du profilage génomique des génes apparentés à cGAS dans un modéle cellulaire permissif au HBV. Mes travaux ont démontré (1) que cGAS exerce une forte activité antivirale envers le HBV incluant une réduction de la forme nucléaire du génome, le cccDNA; (2) alors que le rcDNA génomique nu est reconnu par la voie cGAS/STING et induit une réponse IFN efficace, la nucléocapside virale protège le DNA génomique viral et l’empêche d’être détecté par la réponse immunitaire innée; et (3) que l’infection par HBV diminue l’expression des acteurs de la voie cGAS-STING et des gènes impliqués dans la réponse immunitaire innée in vitro et in vivo. Ce dernier point met en lumière le rôle de cGAS dans un nouveau mécanisme d’échappement du HBV au système immunitaire inné dans les cellules hépatocytaires et dans ce mécanisme Chronic hepatitis B virus (HBV) infection is a major cause of liver disease and cancer worldwide. The mechanisms of viral genome sensing and the evasion of innate immune responses by HBV infection are still poorly understood. Recently, the cyclic GMP-AMP synthase (cGAS) was identified as a DNA sensor. In this PhD work, we aimed to investigate the functional role of cGAS in sensing of HBV infection and elucidate the mechanisms of viral evasion. We performed functional studies including loss- and gain-of-function experiments combined with cGAS effector gene expression profiling in an HBV infection-susceptible cell culture model. Collectively, our data show that (1) the cGAS-STING pathway exhibits robust antiviral activity against HBV infection including reduction of viral cccDNA levels; (2) naked HBV genomic rcDNA is sensed in a cGAS-dependent manner whereas packaging of the viral genome during infection abolishes host cell recognition of viral nucleic acids; (3) HBV infection down-regulates the cGAS/STING pathway actors as well as innate immune effector gene expression in vitro and vivo. Overall, this work led to describing new aspects of the complex interaction between HBV and the DNA sensor cGAS in hepatocytes

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El, Idrissi Lalla Manale. "Déprotection et raccourcissement télomériques dans le carcinome hépatocellulaire." Thesis, Lyon 1, 2013. http://www.theses.fr/2013LYO10218.

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Abstract:

Le carcinome hépatocellulaire (HCC) est une tumeur de mauvais pronostic caractérisée, comme la plupart de cancers, par l'association paradoxale de télomères courts et d'une importante activité télomérase. Cette attrition télomérique joue un rôle central dans l'instabilité chromosomique à l'origine de la promotion et de l'évolution tumorale. Les premières causes d'HCC correspondent aux infections chroniques par les virus hépatotropes : virus de l'hépatite B (VHB) et virus de l'hépatite C (VHC). Dans une première étape nous avons disséqué les dérégulations télomériques dans les HCC et les cirrhoses liées au VHB, VHC ou encore à l'alcool. Nous avons observé que ces dérégulations sont acquises tôt, au stade prétumoral, et persistent au stade tumoral. Ces dérégulations sont spécifiques d'un carcinogène donné. Aux stades tardifs et tumoraux de l'infection par le VHB, les cellules hépatiques expriment fréquemment une protéine tronquée en partie C-terminale d'HBx ainsi que des formes réarrangées du gène PreS/S telle que PreS2. Dans une seconde étape nous avons trouvé qu'à l'opposé de la forme sauvage, HBx tronquée réprime hTERT, diminue l'activité télomérase, raccourcit les télomères, augmente la proportion de ponts anaphasiques et déclenche la sénescence de cellules primaires. Sachant qu'au stade tumoral les cellules transformées ré-expriment hTERT nous avons testé l'effet d'une coexpression de PreS2 et d'HBx tronquée et avons pu montrer que PreS2 contrecarrait l'effet répresseur d'HBx sur hTERT. Néanmoins de façon étonnante, PreS2 ne parvenait pas à rallonger les télomères en présence d'HBx tronquée. Les facteurs protégeant les télomères coopèrent avec la télomérase pour l'élongation et plusieurs de ces protéines sont par ailleurs impliquées dans la réparation des dommages à l'ADN. Nous avons trouvé qu'HBx tronquée modifiait spécifiquement l'expression de la plupart des protéines du télosome selon un patron connu pour inhiber l'effet de la télomérase. Nous avons montré que des dommages à l'ADN télomérique liés à l'incubation de cellules primaires avec la néocarcinostatine inhibaient l'élongation des télomères par hTERT. Ayant trouvé que PreS2 et HBx tronquée induisaient des dommages à l'ADN, nous proposons que cet effet explique l'impossibilité pour PreS2 d'allonger les télomères de cellules exprimant HBx tronquée Among the numerous genetic defects that underly with hepatocarcinogenesis, telomere abnormalities seem to play a role both in tumor promotion and maintenance. Telomeres, the chromosome extremities, are protected by specific proteins, the Shelterin complex and by additional factors. Besides telomerase dysregulation, changes in the expression of these telomere factors have been observed in cancers. Herewe first tested the hypothesis that such dysregulations might occur in HCC with patterns depending onthe cause of HCC. For HBV-, HCV- and alcool-dependant HCC we found that telomeric dysregulations appear to be carcinogen-specific and occur early during the course of the disease and are persistent in the tumor. At the late stage of HBV-dependent disease and corresponding tumors, hepatocytes produce 3’ deleted mutants of HBx (3’DM HBx) but also a rearranged form of the PreS/S gene: PreS2. We then found that, unlike WT HBx, 3’ DM HBx repress hTERT transcription, decrease telomerase activity, shorten telomere length, increase anaphase bridges and trigger senescence in transfected primary cells. It’s well known that hTERT it re-expressed in tumors, so we tested PreS2 and 3’DM HBx transfection. We show that PreS2 counteracts 3’DM HBx effect on hTERT transcription and telomerase activity. However surprisingly PreS2 wasn’t able to elongate telomeres in 3’DM HBx expressing cells. Telomeric factors interact with telomerase allowing telomere elongation. Moreover many of these factors are implicated in DNA damage repair systems. We found that all Shelterin’s and some other telomeric factors’s expression in dyregulated in 3’DM HBx expressing cells. Moreover we show that neocarcinostatin dependent DNA damage in MRC5 primary cell prevent hTERT-based telomere elongation. Also finding that PreS2 and 3’DM induce DNA damage, we suggest that 3’DM HBx prevents PreS2 and hTERT- based telomere elongation

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Nicot, Florence. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite C et persistance virale." Toulouse 3, 2010. http://www.theses.fr/2010TOU30131.

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Abstract:

Les facteurs influençant la réponse virologique au traitement et la persistance du HCV nécessitent d'être mieux caractérisés. La diversité génétique des souches de génotype 2 et 4 dans la région Midi-Pyrénées a été étudiée et montre la présence de 8 et 12 sous-types différents. La toxicomanie était le principal mode de diffusion des souches de sous-type 4a, 4d et 2a. Une nouvelle technique de génotypage du HCV par analyse de la région NS5B sur biopuce a été mise au point. L'étude de l'impact des facteurs viraux et pharmacologiques sur la réponse virologique a montré que les concentrations de ribavirine et le sous-type viral influençaient la réponse au traitement par interféron pégylé et ribavirine. Les patients infectés par un sous-type 1b avaient un taux de réponse plus élevé que ceux infectés par un 1a. Enfin, nous avons montré l'absence de persistance du génome HCV chez des patients immunodéprimés, anciennement infectés par le HCV suggérant une réelle éradication du HCV Identification of new factors influencing viral response and HCV persistence is needed. Genetic diversity of HCV genotype 2 and 4 strains in Midi-Pyrénées areas was studied and revealed 8 and 12 subtypes, respectively. Intravenous drug use was the major route of infection for HCV subtypes 4a, 4d and 2a. A microarray-based molecular approach was developed for identification of HCV genotype and subtype. The impact of HCV variability and pharmacological parameters on the virological response was evaluated and showed that ribavirin concentrations and HCV subtype influence the virological response to pegylated interferon and ribavirin. Indeed, patients infected with HCV subtype 1b have a better chance of achieving sustained virological response than those infected with 1a. Finally, we have shown absence of HCV persistence in formerly HCV-infected immunocompromised patients suggesting the complete eradication of HCV

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Soler, Muriel. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite C et échec thérapeutique." Paris 12, 2004. https://athena.u-pec.fr/primo-explore/search?query=any,exact,990003947490204611&vid=upec.

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Abstract:

La région 5’ non codante du VHC, contenant un IRES, et la protéase NS3 ont une complexité génétique élevée et une diversité faible. Ces régions présentent une distribution en quasi espèces composée de variants génétiquement proches et subissent de fortes contraintes conservatoires. Des mutations dans la région 5’ NC causent une réduction de son efficacité traductionnelle et agissent sur les capacités stimulatrices de la région X. Des acides aminés cruciaux pour NS3 sont quasiment invariables, les mutations touchant la surface. Les quasi espèces de la région 5’ NC n’ont pas de rôle dans la résistance à l’IFN-α La résistance à la ribavirine ou à l’association IFN-α/ribavirine n’est pas associée à la sélection de variants de NS3 résistants. L’échec thérapeutique de l’oligonucléotide anti-sens ciblant l’IRES n’est pas lié à une résistance primaire ou secondaire. Une évolution génétique significative indique que l’anti-sens pourrait exercer une pression de sélection positive sur l’IRES The HCV 5’ noncoding region, containing an IRES, and the NS3 protease presented both a high genetic complexity and a low diversity. These regions, displaying quasispecies distribution bearing genetically close variants, were submitted to strong conservatory constraints. Mutations in the 5’ noncoding region trigger a decrease in its translation efficacy and influence the modulatory activity of the X region. Some NS3 functionally crucial amino acids were invariable, mutations were located at the protein surface. 5’ noncoding region quasispecies were flot associated to resistance to IFN-α Resistance to ribavirin or to the association of IFN-α and ribavirin was not associated to the selection of NS3 variants that were intrinsically resistant. The therapeutic failure of antisense oligonucleotide targeting IRES could not be explained by primary or secondary resistance. A significant genetic evolution showed that the antisense oligonucleotide could exert a selective pressure on the IRES

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Fourel, Isabelle. "Étude des agents inhibiteurs de la réplication du virus de l'hépatite B : intérêt des modèles animaux de l'hépatite B humaine." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO1T012.

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Vallet, Sophie. "Variabilité génétique de la protéase NS3 du virus de l'hépatite C." Brest, 2005. http://www.theses.fr/2005BRES3104.

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Abstract:

La protéase NS3 est essentielle à la réplication du VHC et est l'une des cibles potentielles pour le développement de nouvelles thérapeutiques anti-VHC. Dans une première étude, la variabilité génétique de la protéase NS3 a été analysée pour 17 échantillons sériques pré-thérapeutiques issus de patients infectés par des VHC de génotype1 et répartis en fonction de leur réponse ultérieure à la bithérapie standard. Une certaine variabilité nucléotidique et protéique a été observée. La réponse ultérieure à la bithérapie et la variabilitéde la protéase virale n'étaient pas associées. Un profil particulier incluant 3 délétions et une insertion a été rapportée pour 4 variants issus de la quasi-espèce d'un patient. Dans une seconde étude, un profil génétique particulier en relation avec l'évolution de la cirrhose en CHC a été recherché. Aucun résidu ou motif spécifique n'a été détecté comme étant prédictif de l'évolution de la cirrhose chez une population cas/témoins de 10 patients cirrhotiques NS3 protease is essential for HCV replication, and is one of the most promising targets for anti-HCV therapy. In a first work, the genetic heterogeneity of the protease gene was analysed in 17 HCV gentype 1 pre-therapeutic samples distributed according to their subsequent response to standard combination therapy. Variability of both nucleotide and amino acid sequences was found. No association between the outcome of bitherapy and mutational pattern before treatment was found. A particular pattern including three deletions and one insertion in four clones of the quasispecies was found for one patient. In a second work, as there are different arguments for a putative role of the HCV NS3 protease in the carcinogenesis process, we searched for a genetic pattern of NS3 protease in relation with evolution from viral cirrhosis to HCC. No specific residues or motifs were detected as predictive of cirrhosis outcome in a case controle population of 10 cirrhotic patients

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Blanchet, Mathieu. "Etude des déterminismes de maturation et d’infectiosité des virus des hépatites B et Delta." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077031.

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Abstract:

Les protéines d'enveloppe HBV bourgeonnent spontanément dans la lumière du RE, majoritairement sous la forme de particules sous virales vides. Dans de rares cas, elles recrutent la nucléocapside HBV, aboutissant à la formation de virions HBV. Ce mode de bourgeonnement profite à l'HDV, un virus défectif qui emprunte les protéines d'enveloppe HBV pour accomplir son cycle infectieux. Ces protéines, au nombre de trois, possèdent une extrémité C-terminale commune. La protéine S-AgHBs est formée du seul domaine S, la protéine M-AgHBs des domaine S et pre-S2, et L-AgHBs des domaines S, pre-S2, et pre-S1. S- et L-AgHBs sont requises pour la maturation d'HBV alors que S-HBsAg suffit à l'assemblage de virions HDV. Le domaine S contient quatre domaines transmembranaires qui délimitent deux boucles cytosoliques (BCY-I et -II) et une boucle disposée dans la lumière du RE, appelée boucle antigénique. Nous avons recherché, sur les BCY-I et -II, des déterminants de maturation et d'infectiosité HBV et HDV. Nos résultats montrent l'absence de déterminant dans la BCY-I. Par ailleurs, la BCY-II n'a pas de fonction à l'entrée virale. Nous avons ensuite étudié la région pre-S de L-AgHBs, qui porte le déterminant majeur d'entrée virale HBV et le domaine matrice de maturation HBV. Nous avons utilisé le modèle HDV pour cette étude. Nos résultats montrent que les déterminants d'infectiosité HDV dans la région pre-S sont confinés aux 75 premiers acides aminés, éliminant tout rôle du domaine matrice. Ces résultats vont dans le sens d'un mécanisme d'entrée virale commun pour les virions HBV et HDV The HBV envelope proteins bud spontaneously at the ER membrane, mainly as subviral empty particles. In rare cases, the HBV nucleocapsid is recruited, leading to the formation of virions. This peculiar budding process is to the benefit of HDV, a defective virus that needs the HBV envelope proteins to complete its life cycle. Three envelope proteins are encoded by the HBV genome. They differ from each other by the size of their N-terminal extension. The S-HBsAg protein is made of the S domain only, M-HBsAg is made of the S and pre-S2 domains, and L-HBsAg is made of the pre-S1, pre-S2, and S domains. S- and L-HBsAg are required for HBV maturation. S-HBsAg is sufficient for HDV maturation. The S domain contains four transmembrane domains, two cytosolic loops (CYL-I and -II), and a loop located in the ER lumen. The first part of our work consisted in the identification of HBV and HDV infectivity and maturation determinants in CYL-I and -II. Our results show the absence of maturation and infectivity determinants for HBV and HDV in CYL-I. CYL-II does not contain any amino-acid indispensable for viral entry. The second part of our work consisted in a study of the L-HBsAg pre-S domain, which harbours the main HBV infectivity determinant. The pre-S domain also contains the matrix domain for HBV maturation, whose role at viral entry could not be tested in the HBV model. We used the HDV model to study this region. Our results show that HDV infectivity determinants are confined to the first 75 N-terminal amino-acids of pre-S1, excluding any role of the matrix domain in the infection process. These results are in favour of common infectivity determinants for HBV and HDV

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Jeantet, Damien. "Caractérisation moléculaire et biologique des virus de l'hépatite B cryptiques." Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO10253.

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Abstract:

Le virus de l'hépatites B (VHB) appartient à la famille des Hepadnaviridae caractérisés par leur génome à ADN, leur réplication par une transcriptase inverse et leur hépatotropisme. Ces virus sont à l'origine d'hépatites aiguës ou chroniques qui favorisent l’apparition de cirrhoses conduisant souvent vers le développement d'un carcinome hépatocellulaire. Malgré l'existence d'un vaccin efficace contre le VHB et l'utilisation de tests performants pour la détection de ce virus, l'infection par le VHB lors de transfusion sanguine demeure la transmission virale la plus importante. Ces tests ont été récemment remis en cause chez certains individus qui sont infectés par des variants du VHB qui se répliquent peu ou qui sont mutés dans différents gènes viraux et qui ne sont détectés par aucun des tests commerciaux de diagnostic utilisés en routine. Ces mutants particuliers ont été dénommés : "VHB cryptiques". Dans ce contexte, nos travaux ont permis de déterminer les particularités qui distinguent certains virus de l’hépatite B cryptiques des VHB sauvages et par quels moyens ces variants échappent aux tests classiques de dépistage du VHB. L’objectif de ce travail était d’amplifier, cloner et séquencer tout ou une partie de ces génomes viraux afin de les comparer avec des séquences de VHB sauvage et enfin analyser biologiquement ces génomes de VHB cryptiques. Dans un premier temps, nous avons comparé plus d’une centaine de fragment sous génomiques ou génomiques de ces virus. Nous avons pu observer que la charge virale sérique des VHB cryptiques est 100 à 1000 fois plus faible que pour les VHB sauvages. Des mutations importantes ont été aussi constatées au niveau du déterminant "a" de l'AgHBs qui est l’épitope principalement reconnu par les tests de diagnostic. Dans un deuxième temps, nous avons sélectionné 12 séquences ayant des mutations uniques ou rares au niveau de l’AgHBs parmi toutes celles étudiées. Elles ont été ensuite clonées dans un vecteur d’expression dans le but d’étudier la capacité des tests de détection à reconnaître ce type de mutation. Les résultats de cette étude montrent que la majorité des mutations analysées (75%) sont parfaitement détectées. On peut donc expliquer le défaut de reconnaissance des tests par un défaut de sensibilité plutôt qu’un défaut de spécificité. Notre dernière étude a consisté à amplifier et cloner les génomes entiers de VHB infectant un patient (X27). Nous avons montré l’existence d’une double population virale de génotypes différents (A et D). La population de génotype D est prédominante par rapport à la population de génotype A mais nous avons aussi établi l’obligation d’une complémentation entre ces deux populations qui ne pourraient exister seule chez un hôte. A terme, l’ensemble de nos travaux a pour but de mieux connaître les caractéristiques particulières de ces VHB cryptiques afin d’améliorer les tests de détection existants et permettre ainsi l'identification des individus porteurs de VHB cryptiques qui n'ont pas, ou n'ont pas encore, de signes cliniques d’une infection virale

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Morel, Virginie. "Variabilité et recombinaison génétique du virus de l'hépatite C : implications virologiques et cliniques." Amiens, 2010. http://www.theses.fr/2010AMIED005.

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Abstract:

L’évolution du virus de l’hépatite C (VHC) et sa grande variabilité génétique résultent d’un équilibre entre une adaptation rapide à son environnement sous l’influence de pressions de sélection (réponse immune de l’hôte, traitement antiviral) et une accumulation de changements de séquences au cours du temps (évolution neutre). La variabilité du VHC est principalement due à une accumulation de mutations qui s’exprime à différents niveaux, avec la distinction de génotypes et sous-types, la circulation sous forme d’une quasi-espèce et une hétérogénéité variable le long du génome. Un autre mécanisme plus brutal est la recombinaison génétique observée chez de nombreux virus à ARN mais décrite comme un événement rare pour le VHC. Nous avons étudié au travers d’une situation clinique particulière, l’émergence d’une souche recombinante de génotype 2k/1b dans un contexte d’infection multiple par le VHC. Nous avons étendu cette étude à une analyse plus globale de la recombinaison génétique dans l’infection par le VHC. La deuxième partie de ce travail s’est intéressée aux conséquences de cette variabilité dans ses implications cliniques et thérapeutiques. Nous avons abordé d’une part, l’implication éventuelle de la variabilité des glycoprotéines d’enveloppe E1 et E2, dans la reconnaissance du VHC par les anticorps neutralisants. D’autre part, nous avons étudié l’hétérogénéité de la quasi-espèce de la protéine p7 chez des patients porteurs du VHC et traités par l’amantadine, afin de déterminer une corrélation éventuelle entre la variabilité de p7 et la réponse au traitement et/ou inversement un effet potentiel de cet antiviral sur la protéine p7.

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Halfon, Philippe. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite C : implications cliniques, diagnostiques et thérapeutiaues." Aix-Marseille 2, 1999. http://www.theses.fr/1999AIX22043.

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Abstract:

Dans cette etude, nous mettons a profit la variabilite genetique du vhc pour etablir au moyen de la bio-informatique, des strategies nous permettant d'identifier des modes de contamination entre patients. Nous avons pu ainsi demontrer l'existence au sein d'une meme famille d'une transmission mere-enfant ainsi qu'intra-familiale entre deux freres, ainsi que des cas de transmission sexuelle du vhc parmi des couples viremiques. Nous avons egalement etudie la relation entre la region ns5a (aa 2209-2248) du vhc et la reponse a l'interferon. Dans notre experience, l'absence de mutations dans cette region retrouvee dans des isolats hcv-j est un mauvais pronostic quant a la reponse au traitement a l'interferon pour des doses usuellement utilisees en europe. La meilleure connaissance de la variabilite genetique du vhc constitue pour ce virus un champ de recherche important tant au niveau diagnostique, qu'au niveau clinique, therapeutique et vaccinal.

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Qu, Di. "Hétérogénéité des génotypes du VHC en France." Lyon 1, 1995. http://www.theses.fr/1995LYO1T212.

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Iskandar, Nouhad. "Contribution à l'étude épidémiologique du virus de l'hépatite delta." Paris 12, 1990. http://www.theses.fr/1990PA120062.

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Abstract:

La repartition du virus de l'hepatite delta (vhd) et son association aux hepatites aigues, aux maladies hepatiques chroniques et au carcinome hepatocellulaire (chc) ont ete etudiees chez des sujets presentant des signes serologiques d'infection actuelle par le virus de l'hepatite b (vhb) en milieu maghrebin, en afrique noire et dans une population francaise tres exposee au vhb. Aucune positivite pour les anticorps anti-delta n'a ete retrouvee chez 66 enfants algerois presentant une hepatite aigue b ou apparentee (presence transitoire de marqueurs non conventionnels de vhb). En tunisie centrale, anti-delta etait retrouve, parmi les sujets positifs pour aghbs, chez 12/42 donneurs de sang, 16/26 cirrhotiques dans chc et 17/23 sujets atteints de chc. Parmi les 211 sujets porteurs d'aghbs originaires du mali et du senegal, 4 sujets etaient positifs pour anti-delta. Par contre, au senegal, ce marqueur etait retrouve chez 4/13 cirrhoses sans chc et 26/114 chc (22,8%) positifs pour aghbs. Au mozambique, l'etude a porte sur 227 sujets aghbs positifs (105 hepatites aigues, 20 cirrhoses sans chc, 102 chc); ces sujets etaient negatifs pour anti-delta a deux exceptions pres (1 cirrhose et 1chc). Seulement 1 des 28 homosexuels francais aghbs positifs testes pour anti-delta etait positif. Ces resultats montrent que la repartition de l'infection par le vhd presente d'importantes variations geographiques

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Cao, Qian. "Caractérisation moléculaire des carcinomes hépatocellulaires liés au virus de l'hépatite B." Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05S010/document.

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Abstract:

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est le plus fréquent des tumeurs primitives du foie. La carcinogenèse hépatique est un processus complexe et multifactoriel qui fait intervenir à la fois des facteurs génétiques de prédisposition (e.g. les SNPs) et environnementaux. Près de 50% des CHC ont pour étiologie une infection par le virus de l'hépatite B (VHB). Au cours de cette infection, de multiples altérations génétiques et virales s'accumulent et favorisent le développement tumoral. Nous avons montré que les CHC liés au VHB présentaient des caractéristiques cliniques et pathologiques différents que ceux d’autres étiologies : 1). Les mutations inactivatrices d’HBx sont sélectionnées dans les tissus tumoraux des CHC liés au VHB, suggérant qu’il existe une pression de sélection spécifique au cours de l’hépatocarcinogenèse. 2). Chez les patients ayant un faible nombre de copies d'ADN VHB par cellule dans le foie non-tumoral, une corrélation avec les facteurs de risque supplémentaires (VHC/OH/NASH) a été identifiée, suggérant un effet coopératif pour la carcinogenèse induite par le VHB. 3). Les mutations TP53 sont associées à un pronostic moins favorable chez les patients ayant un CHC liés au VHB. 4). Les CHC liés au VHB montrent plus fréquemment des phénotypes progéniteurs, avec une surexpression des gènes impliqués dans la régulation du cycle cellulaire et codant pour les protéines onco-fœtales. Quatre SNPs précédemment identifiés par des études pangénomiques (GWAS) asiatiques ont été validés dans la population européenne. Les distributions alléliques semblent varier selon l’étiologie de la pathologie hépatique. Ces résultats soulignent la complexité de la prédisposition génétique au CHC, dont l’étude doit prendre en considération l’origine géographique des patients ainsi que les facteurs de risque associés Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most common primary liver tumors. Hepatic carcinogenesis is a complex and multifactorial process involving both genetic predisposition (e.g. SNPs) and environmental factors. Nearly 50% of HCC are caused by the hepatitis B virus (HBV) infection worldwide. During HBV infection, multiple genetic and viral alterations accumulate and promote tumor development. By analyzing resected HCC in France, we identified specific molecular features related to HBV infection. First, HBx inactivating mutations are selected in HCC tissues suggesting specific pressure of selection during hepatocarcinogenesis. Second, in patients with a low number of HBV DNA copies per liver cell, we identified additional risk factors like HCV infection, alcohol intake or NASH, suggesting a cooperative effect of these factors with HBV to induce the malignant transformation. Third, TP53 mutations associated with a poor prognostic for HBV infected resected HCC patients. At last, HBV-related tumors demonstrate more frequent progenitor phenotype compared to non-HBV HCC, with an up-regulation of genes that involved in cell cycle regulation and encoded onco-fetal/progenitor proteins. Four SNPs previously identified by genome-wide studies (GWAS) in Asian, have been validated in our European population. Allelic distributions seem to vary according to the etiologies of adjacent liver diseases. These findings underscore the complexity of the genetic predisposition of HCC; further study must consider the geographical origin of patients and associated risk factors

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Amaddeo, Giuliana. "Altérations génomiques des carcinomes hépatocellulaires liées au virus de l'hépatite B." Thesis, Paris 5, 2013. http://www.theses.fr/2013PA05S012.

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Abstract:

Contexte: Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est la plus fréquent des tumeurs primitives du foie. Près de 50% des CHC sont causés par une infection par le virus de l'hépatite B (VHB). Au cours des différents stades de l’infection par le VHB, des multiples altérations génétiques et/ou chromosomiques s'accumulent et favorisent ainsi le développement tumoral. Objectives: a) étudier, in vitro et in vivo, le rôle potentiel d’un nouveau gène susceptible d’être impliqué dans la carcinogénèse hépatique : IRF-2 (Interferon regulatory factor 2). Ce gène a été identifié comme fréquemment délété par analyse CGH-SNP dans les CHC liés à l’infection par le VHB. b) caractériser une série de CHC liés au VHB en étudiant le statut viral, les altérations génétiques et l’expression de différents gènes afin de mieux comprendre le rôle du VHB dans l’hépato-carcinogenèse et comparer ces différents paramètres avec une série de CHC non liés au VHB. Résultats : a) Dans une série de 125 CHC, Sandrine Imbeaud, au sein du laboratoire, a effectué une analyse CGH-SNP microarray et a identifié une région commune de délétion homozygote localisée en 4q34.3-35 comprenant le gène IRF-2 dans 4 échantillons. Nous avons ensuite mis en évidence par séquençage des mutations somatiques inactivatrices dans 2 autres tumeurs. In vitro, la sousexpression d’IRF-2 a entrainé une augmentation de la prolifération cellulaire et sa sur-expression a induit une promotion de l'apoptose cellulaire. In vivo, l’extinction d’IRF-2 était responsable de la formation de tumeurs de grande taille. Les 6 tumeurs inactivées pour IRF-2 étaient associées au VHB (p = 0.0003), et les mutations de TP53 et d’IRF-2 étaient mutuellement exclusives. La sousexpression de IRF-2 induisait une sous-expression de TP53 et une forte corrélation entre les expressions protéiques de p53 et de IRF-2 a été observée (r2 = 0,72, p = 0,004). En plus, on a observé que l’expression des gènes cibles directs de TP53 était modulée par le niveau d‘expression d’IRF-2. Nous avons émise l'hypothèse que IRF-2 pourrait altérer la fonction de p53 car IRF-2 est connue pour se lier à MDM2, un régulateur négatif de l’expression de p53. Le traitement des cellules inactivées pour IRF-2 avec MG132, un inhibiteur du protéasome, a induit la restauration de l'expression de p53. In vivo, le traitement avec bortézomib, un inhibiteur du proteasome utilisé en oncologie, a entrainé une régression des tumeurs inactivées pour IRF-2. b) Nous avons caractérisé sur le plan clinique et moléculaire une série de CHC liés au VHB et, ensuite, nous avons comparé nos résultats avec ceux d’une série de CHC liés à autres étiologies. Nous avons montré que les CHC liés au VHB présentaient des caractéristiques cliniques et pathologiques différentes de celles des CHC non liés au VHB : ils survenaient chez des patients plus jeunes (P < 0.0001), d'origine Africaine ou Asiatique (P < 0.0001), avec un taux sérique d'alpha-foeto protéine élevé (P = 0.008) et étaient sur le plan histologique des tumeurs peu différenciés (P = 0.04). Nous avons identifié des mutations inactivatrices du gène HBX dans 71% des tumeurs et dans 33% des tissus non tumoraux adjacents (P < 0.0001). Dans 63% des cas, le nombre de copies virales dans les tumeurs était plus faible que dans les tissus non tumoraux adjacents (P < 0.0001). Le gène TP53 était le gène le plus fréquemment muté dans les CHC liés au VHB (41%, P = 0.0002), avec des mutations R249S présentes dans 14 échantillons (16%, p < 0.0001). Ce type de mutation est classiquement associé à l'aflatoxine B1. Nous avons observé que les mutations de TP53 étaient un prédicteur indépendant de survie uniquement pour les patients infectés par le VHB. Enfin, Pas de résumé en anglais Introduzione: Il carcinoma epatocellulare (HCC) è il tumore primitivo più comune del fegato. Nel mondo, quasi il 50% di tutti gli HCC sono causati dal virus dell'epatite B (HBV). Durante le fasi dell’ infezione da HBV, si possono accumulare alterazioni genetiche e / o cromosomiche e quindi promuovere lo sviluppo del tumore. Obiettivi: a) analizzare in vitro e in vivo il ruolo potenziale di un nuovo gene potenzialmente coinvolto nella carcinogenesi epatica: IRF-2 (Interferon regulatory factor 2). Questo gene è stato identificato mediante l’analisi CGH-SNP come frequentemente deleto negli HCC correlati all’ HBV. b) caratterizzare una cohorte di HCC correlati all’HBV studiandone lo stato virale, le alterazioni genetiche e l’espressione di differenti geni al fine di comprendere meglio il ruolo di HBV nella carcinogenesis epatocellulare e confrontare questi parametri con una cohorte di HCC a diversa eziologia. Risultati: a) In laboratorio, Sandrine Imbeaud ha condotto un'analisi SNP-CGH microarray su una cohorte di 125 HCC che ha evidenziato una regione deleta in maniera omozigote localizzata sul braccio lungo del cromosoma 4 (4q34.3-35) in 4 campioni tumorali. La regione comprende un unico gene: IRF2. In altri due campioni sono state identificate mutazioni somatiche inattivatrici mediante sequenziamento della regione codante di IRF-2. In vitro, la soppressione di IRF-2 ha indotto un aumento della proliferazione cellulare, al contrario, la sua sovra-espressione ha causato un aumento dell’apoptosi cellulare. In vivo, la soppressione di IRF-2 è responsabile della formazione di tumori più grandi nei topi nude. I 6 tumori mutati per IRF2 sono tutti correlati all’ HBV (p = 0,0003. Nella cohorte di tumori studiati, le mutazioni di TP53 e di IRF-2 erano vicendevolmente esclusive. Inoltre, la soppressione dell’espressione della proteina IRF-2 induceva una riduzione dell’espressione della proteina p53 ed una stretta correlazione tra l’espressione delle due proteine è stata osservata (r2 = 0,72, p = 0,004). Inoltre, abbiamo dimostrato che il livello di espressione di IRF-2 è in grado di modulare l'espressione di alcuni geni target di TP53. Abbiamo, quindi, ipotizzato che IRF2 possa alterare la funzione di p53. Come è noto IRF2 può legarsi a MDM2, un regolatore negativo di p53 che induce la sua degradazione proteasomica. Il trattamento di cellule inattivate per IRF2 con MG132, un inibitore del proteasoma, induceva il restauro dell’espressione di p53. In vivo, il trattamento con bortezomib, chemioterapico inibitore del proteasoma, ha determinato la regressione del tumore inattivato per IRF2. b) 86 HCC correlati all’HBV sono stati caratterizzati dal punto di vista clinico e molecolare ed in seguito sono stati confrontati una serie di 90 HCC correlati ad altre eziologie. Gli HCC correlati all’HBV hanno delle caratteristiche cliniche e patologiche diverse da quelle degli HCC d’altra eziologia: insorgenza in pazienti più giovani (p <0,0001), di origine africana o asiatica (P <0.0001), alfa-fetoproteina sierica elevata (P = 0.008) e scarsa differenziazione istologica (P = 0,04). Mutazioni inattivatrici del gene HBX sono state identificate nel 71% dei tumori e il 33% dei tessuti non tumorali adiacenti (P <0.0001). Nel 63% dei casi, il numero di copie virali nel tessuto tumorale era inferiore rispetto al tessuto non tumorale adiacente (p <0,0001). Il gene TP53 è stato il gene più frequentemente mutato nella serie di HCC correlati a HBV (41%, p = 0,0002), con una considerevole presenza di mutazioni al codone 249 (R249S) (16%, p <0,0001). Questo tipo di mutazione è associate classicamente all’ aflatossina B1. Abbiamo osservato, inoltre, che TP53 mutato era un predittore indipendente di sopravvivenza solo per i pazienti infetti da HBV. Infine,

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Bouquet, Jérôme. "Génomique d'un virus zoonotique à ARN : le cas particulier du virus de l'hépatite E." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00827778.

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Abstract:

En France, le virus de l'hépatite E (VHE) est responsable de cas d'hépatites aigües sporadiques dont les origines et les modes de transmission sont incertains. Or, le VHE est le seul virus des hépatites à infecter d'autres espèces animales que l'homme. Les objectifs de cette thèse ont été d'évaluer le risque de transmission zoonotique du VHE porcin pour l'Homme. Une première étude d'épidémiologie moléculaire a montré une circulation active du VHE entre les populations porcines et humaines, préférablement par voie alimentaire. Une deuxième étude par séquençage haut-débit a montré l'adaptation totale du génome consensus et de la quasiespèce du VHE lors de la transmission inter-espèce. Une troisième étude de trois nouveaux génomes complets porcins comparé aux génomes VHE humains déjà disponibles n'a pas révélé de déterminants majeurs de restriction d'hôte au sein du génotype 3. Par contre cette étude a mis en avant le besoin de revoir la classification en sous-types du VHE au vu des nouvelles séquences disponibles. Enfin, un système de génétique inverse a été mis en place afin de permettre l'étude phénotypique de nouvelles souches humaines et porcines du VHE dans des lignées hépatocytaires. Ces travaux ont permis de montrer le risque zoonotique du VHE du porc consommé en France et son adaptation génomique complète à ses deux espèces hôtes. Le VHE est un virus zoonotique à ARN particulier dont la variabilité génétique dépend de son épidémiologie singulière, qui inclue la possibilité de transmissions alimentaires à partir d'un réservoir animal domestique. Ce travail permet enfin de poser les perspectives d'études phénotypiques du VHE

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Cova, Lucyna. "Le virus de l'hépatite B du canard (DHBV) comme modèle pour l'étude de la réplication du virus de l'hépatite B humaine (VHB) et de son rôle dans l'oncogenèse hépatique." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO10001.

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Abstract:

Au cours de la derniere decennie deux facteurs principaux ont ete impliques dans l'etiopathogenie du cancer hepatocellulaire (chc) chez l'homme: le virus de l'hepatite b (vhb) et un carcinogene chimique l'aflatoxine b1 (afb1). Nous avons utilise le canard infecte par le virus de l'hepatite b du canard (dhbv), tres proche du vhb, pour etudier le mecanisme de l'oncogenese hepatique. Apres avoir demontre la presence du dhbv dans les populations des canards domestiques francais et de canards sauvages colvert, nous avons isole differentes souches de ce virus, compare leurs proprietes biologiques et recherche leur eventuel pouvoir oncogene. En administrant l'afb1 pendant deux ans a des canards, infectes ou non par dhbv, nous avons reussi a induire des chc dans ces deux groupes et montrer un effet synergique de l'afb1 et de l'infection virale dans l'oncogenese hepatique chez le canard. D'autre part, nous avons utilise le modele du canard pour l'etude du role de proteines pre-s, composantes d'enveloppe virale, dans la replication du dhbv. En transfectant in vivo les canetons avec l'adn du dhbv mute au niveau de la region pre-s, nous avons demontre que ce virus peut se repliquer en depit de deletions ou insertions portant sur un total de neuf aminoacides introduits dans la partie c terminale de la proteine pre-s. A l'aide d'anticorps monoclonaux murins, nous avons identifie et localise au niveau des proteines pre-s, un epitope neutralisant conserve chez les differentes souches du virus dhbv et localise a la surface du virus

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Abou, Jaoude Georges. "Etude des protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite B à l'étape d'entrée virale : utilisation du virus de l'hépatite Delta comme modèle expérimental." Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066331.

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Abstract:

Le virus de l’hépatite B (HBV) est un virus enveloppé à ADN. Sa nucléocapside est incluse dans une enveloppe composée de lipides et des protéines d’enveloppe virales dénommées grande (L), moyenne (M), et petite (S). Une caractéristique unique du cycle de réplication de l’HBV concerne le mécanisme d’assemblage des virions. Ces derniers sont produits en quantités mineures par rapport à l’abondante production de particules sous-virales (PSV) dépourvues de nucléocapside, que l’on retrouve en majorité dans un sérum infectieux. Les PSV sont constituées de lipides d’origine cellulaire et des protéines d’enveloppe HBV. Ces dernières assurent la dynamique d’assemblage des particules lipoprotéiques et recrutent la nucléocapside pour l’exporter sous forme de virions. Elles ont aussi la charge d’adresser les virions spécifiquement à la surface de la cellule cible, l’hépatocyte humain. Par ailleurs, les protéines d’enveloppe HBV peuvent également véhiculer la ribonucléoprotéine du virus de l’hépatite delta (HDV), un virus satellite occasionnel d’HBV dépourvu de système de propagation. Mon travail de thèse a consisté à étudier la fonction des protéines d’enveloppe HBV à l’entrée virale en utilisant le modèle HDV, et les cellules sensibles HepaRG. Il a permis de mettre en place un système sensible et fiable pour l’étude des fonctions des protéines d’enveloppe HBV à l’entrée virale. L’utilisation de ce système a permis de démontrer un rôle indispensable à l’entrée virale HDV du groupement myristate lié à la protéine L en son extrémité N-terminale. En outre, il a permis d’identifier, sur les protéines d’enveloppe, un nouveau déterminant d’infectiosité situé dans la boucle antigénique (BAG). Ce domaine constitue la cible principale des anticorps neutralisants, et il porte 8 résidus cystéine qui semblent jouer un rôle majeur à l’infection. La BAG porte donc un site actif à l’entrée virale qui pourrait faire l’objet d’un ciblage spécifique par de nouveaux antiviraux.

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Ghibaudo, David. "Caractérisation du virus GBV-B : développement d'un nouveau modèle d'étude du virus de l'hépatite C." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077081.

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Bouffard, Pascal. "Infection des cellules d'origine hématopoiétique par le virus de l'hépatite B humaine." Lyon 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LYO1T064.

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Lucifora, Julie. "Réplication du virus de l'hépatite B et réponse intracellulaire à l'infection virale." Lyon 1, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/34/25/83/PDF/211-2008_-_Manuscrit_These_Julie_Lucifora.pdf.

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Abstract:

Le VHB est un problème majeur puisque les 350 millions de porteurs chroniques existant ont un risque accru de développer une cirrhose ou un carcinome hépatocellulaire. Compte tenu du manque de système d'étude du VHB in vitro qui soit facile d'accès et pleinement satisfaisant, l'objectif était d'améliorer l'un de ceux qui utilisent des baculovirus VHB recombinants pour délivrer le génome VHB dans des cellules hépatocytaires. La pertinence de ce système pour réaliser des tests phénotypiques et étudier le « fitness » des mutants résistants aux antiviraux a ensuite été démontrée. Enfin, l'utilisation de ces baculovirus VHB recombinants dans des cellules HepaRG a permis de mettre en évidence une réponse IFN efficace de l'hépatocyte suite à la synthèse des protéines du VHB. Ceci constitue une donnée nouvelle dans l'étude des interactions virus/cellules puisque le VHB était considéré jusqu'à présent comme un virus silencieux vis-à-vis de la réponse innée cellulaire. L'ensemble de ces résultats a des implications importantes dans la compréhension des mécanismes de persistance du VHB et le développement de nouveaux modèles cellulaires d'infection HBV is a major problem issue since the 400 million existing chronic carriers have greater risk to develop cirrhosis or hepatocellular carcinoma. Because of the lack of relevant and convenient in vitro HBV studying model, the aim was to improve the one that uses HBV recombinant baculoviruses to deliver HBV genome in hepatocytes. Relevance of this improved system was then demonstrated for phenotypic and resistant mutant fitness analysis. Finally, with the use of HBV recombinant baculovirus in HepaRG cells, an HBV-mediated effective IFN response within cells was highlighted. This constitutes new data in the study of virus/host cell interaction since HBV was considered as a “stealth” virus until now. Taken together, these results have important implications in the comprehension HBV persistence mechanisms and in the development of new cellular models of infection

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Peltekian, Cécile. "Activité antivirale de la protéine MxA contre le virus de l'hépatite B." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077139.

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Patient, Romuald. "Obtention de particules sous-virales d'enveloppe du virus de l'hépatite C." Thesis, Tours, 2008. http://www.theses.fr/2008TOUR3108.

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Abstract:

En 1989, près de quinze ans après la mise en évidence d’une forme d’hépatite virale « non A-non B », le virus de l’hépatite C (VHC) a pu être isolé et son génome séquencé. En presque vingt ans, de nombreuses avancées techniques majeures ont permis de mieux comprendre le cycle de réplication de ce virus. Cependant, l’infection par ce virus représente actuellement la première indication de transplantation hépatique dans les pays industrialisés. On estime que 3% de la population mondiale est constituée de porteurs chroniques du VHC ; faisant de cette maladie un problème majeur de santé publique. De plus, même si des thérapies anti-virales sont disponibles pour enrayer la réplication du VHC, ces traitements ne sont vraiment efficaces que pour la moitié des patients traités. Malgré une recherche intensive, il n’existe toujours pas de vaccin préventif contre le VHC ayant fait la preuve définitive de son efficacité. La plupart des candidats vaccins en développement reposent sur l’utilisation de formes tronquées des protéines d’enveloppe du virus, constituant des immunogènes probablement moins pertinents que les formes complètes retrouvées sur l’enveloppe virale. L’objectif de ce travail de thèse a donc été de développer et de produire des particules dites sous-virales d’enveloppe constituées uniquement de l’enveloppe lipoprotéique du virus comme candidat vaccin potentiel contre le VHC, en exploitant les stratégies utilisées pour la production du vaccin contre le virus de l’hépatite B (VHB). En effet, le vaccin contre l’hépatite B repose sur la capacité de la petite protéine d’enveloppe S du VHB à générer spontanément des particules d’enveloppe vides sécrétées et non infectieuses. L’utilisation de ces particules comme vaccin a fait ses preuves depuis maintenant plus de vingt ans. Au cours de ce travail, nous avons dans un premier temps développé un modèle d’étude de la morphogenèse de ces particules sous-virales du VHB, basé sur la production de la protéine S du virus à l’aide d’un vecteur dérivé du génome du virus de la Forêt de Semliki (SFV). Ce modèle s’est avéré déterminant pour apporter des informations originales sur la morphogenèse et le trafic intracellulaire des particules sous-virales d’enveloppe du VHB. Nous avons pu montré que le bourgeonnement de ces particules au sein du réticulum endoplasmique (RE) se fait initialement sous forme de structures filamenteuses ; contrairement à ce qui était présumé dans le modèle couramment admis. Empaquetés et transportés vers un compartiment intermédiaire entre le RE et l’appareil de Golgi (ERGIC), ces filaments sont ensuite convertis en particules sphériques qui seront sécrétées. Dans un second temps, ce modèle nous a permis d’étudier les capacités d’assemblage en particules sous-virales d’enveloppe de différentes protéines chimères d’enveloppe VHC-VHB. Nous avons démontré que ces protéines de fusion, contenant la totalité de la protéine d’enveloppe E1 ou E2 du VHC, étaient capables de s’assembler puis d’être sécrétées sous forme particulaire lorsqu’elles étaient co-produites avec la protéine S sauvage du VHB. De telles particules, morphologiquement similaires à celles du vaccin contre l’hépatite B, pourraient donc constituer la base d’un vaccin prototype. Le système d’expression transitoire utilisé pour ces expériences ne permettant pas de produire ces particules en grande quantité, des clones cellulaires de la lignée CHO produisant de manière stable les particules d’enveloppe chimèriques ont été développés. Si comme nous l’espérons ce vaccin prototype donnait des résultats encourageants, sa production pourrait s’appuyer à terme sur les procédures industrielles existantes pour la production du vaccin contre le VHB, dans le but d’obtenir à grande échelle un vaccin protégeant à la fois contre l’hépatite B et l’hépatite C N/a

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François, Mariel. "Détection de l'ARN du virus de l'hépatite C : signification clinique et biologique." Tours, 1994. http://www.theses.fr/1994TOUR3801.

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Lainé, Sébastien. "Identification et caractérisation de PAP22 : partenaire cellulaire de la protéine P22 du virus de l'hépatite B humaine." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2003. http://www.theses.fr/2003VERS0040.

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Abstract:

L'hépatite B est encore, à ce jour, responsable de l'apparition de nombreux hépatocarcinomes. Ces derniers sont le résultat de l'hépatite chronique, caractérisée par le maintien du virus dans l'organisme. Dans le but de comprendre quel(s) mécanisme(s) est(sont) responsable(s) du développement de la chronicité, nous avons axé nos recherches sur une protéine semblant jouer un rôle dans l'établissement de la persistance virale : l'antigène " e " du VHB (HBe). Néanmoins, les mécanismes mis en jeu sont encore obscurs. A l'inverse de son rôle, la voie de biosynthèse d'HBe a été bien décrite. HBe est issue de la maturation du précurseur P25, dans la voie de sécrétion. Notre laboratoire s'est plus particulièrement intéressé au rôle de l'un des précurseurs de HBe, la protéine P22. Nous avons montré que P22 interagit spécifiquement avec une protéine cellulaire de 32 kDa, nommée PAP22 pour Protéine Associée à P22, non identifiée au début de ces travaux de thèse. Grâce à la mise au point d'un système 'interaction in vitro basé sur la sur-expression d'une protéine P22 recombinante, nous avons identifié PAP22 comme étant la protéine cellulaire gC1qR. Les études bibliographiques ont montré que gC1qR est impliquée dans différents mécanismes allant de l'épissage, à l'apoptose en passant par la régulation de la réponse immunitaire. Nous avons élaboré et testé des hypothèses quant à l'implication du complexe P22/gC1qR dans l'établissement de la persistance virale via un contrôle du niveau apoptotique cellulaire. Ainsi, nous avons démontré que ce complexe peut agir sur l'épissage de l'ARN prégénomique du VHB et ainsi contrôler la synthèse d'une protéine virale pro-apoptotique nommée HBSP. De plus, nous avons montré que gC1qR peut contrôler le niveau apoptotique cellulaire et que ce contrôle peut être régulé par la présence de la protéine P22 Ces travaux de thèse permettent d'ouvrir une nouvelle voie d'étude du rôle de l'antigène HBe, en mettant en évidence un rôle plus important de la protéine P22, que celui de simple précurseur The HBV virus responsible for hepatitis B is still a worldwide health issue. Its ability to stay as an episome in infected cells is responsible for chronicity, which can lead to hepatocarcinoma and cirrhosis. We focused our research on the HBe antigen of HBV, which seems implicated in viral persistence. Hbe is a cleavage product of the p22 protein. We have show a specific interaction between P22 and 32kDa cellular protein we named PAP for protein associated to P22. Using an in vitro interaction assay based on over expressing recombinant P, we identified PAP22 as gClqR. Bibliographical data indicate roles of PAP22 in spicing, apoptosis and the immune response. We could demonstrate a rôle of the P22/gC1qR complex into the HBV pre-genome spicing, which, therefore, implies a control of the pro-apoptotic HBSP protein by P22/gC1qR. Moreove, we have shown thet gClqR regulates apoptosis in a p22-sensitive manner. Our data suggest a possible role of this complex in allowing viral persistence through a tight control of apoptosis. This work opens new avenues in studying HBe functions by demonstrating specific functions of P22 thet are independent from its precursor role

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Le, Duff Yann. "Etude de déterminants d'entrée virale et de morphogenèse du virus de l'hépatite B." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077232.

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Abstract:

Le mécanisme de bourgeonnement du virus de l'hépatite B (HBV) repose entièrement sur ses protéines d'enveloppe. Celles-ci s'oligomérisent et bourgeonnent spontanément dans la lumière du réticulum endoplasmique (RE), essentiellement sous la forme de particules sous-virales vides, sécrétées en abondance par une cellule infectée. Occasionnellement, les protéines d'enveloppe recrutent la nucléocapside HBV et conduisent à la formation de virions complets, ou particules de Dane. Ce mode de bourgeonnement atypique est parasité par les ribonucléoprotéines du virus de l'hépatite delta (HDV), qui s'associent aux protéines d'enveloppe et sont sécrétées sous la forme de virions HDV. Les protéines d'enveloppent HBV sont au nombre de trois : la petite, S-AgHBs, la moyenne, M-AgHBs et la grande, L-AgHBs. Elles partagent un domaine C-terminal commun et diffèrent par la taille de leur extrémité N-teminale. La protéine S est constituée du seul domaine S, la protéine M des domaines S et preS2 et la protéine L-AgHBs, des domaines S, preS2 et preSl. La protéine S-AgHBs est le moteur du bourgeonnement des particules HBV et HDV. C'est une protéine intégrale synthétisée à la membrane du RE. Son domaine N-terminal contient deux domaines transmembranaires délimitant une boucle cytosolique et une boucle antigénique (BAG), présentée à la surface des virus. Sa partie C-terminale est très hydrophobe et prédite comme membranaire. Par ailleurs, deux déterminants d'infectiosité ont été identifiés sur preSl et la BAG. La première partie de nos travaux a consisté à caractériser le mode de fonctionnement des deux déterminants d'infectiosité. Nos résultats sont en faveur d'un fonctionnement indépendant de preSl et de la BAG à l'entrée virale. De plus, le rôle de la BAG nécessiterait la coordination de nombreuses protéines de surface alors que seulement quelques domaines preSl sont suffisants à l'infection. Finalement, le mode de fonctionnement de preSl semble reposer sur une coopération allostérique des différents sous-éléments qu'il contient. La deuxième partie de nos travaux a consisté à préciser la topologie du domaine C-terminal de la protéine S-AgHBs de manière à caractériser plus précisément son rôle dans la morphogénèse HBV et HDV. Cette région s'associerait aux membranes cellulaires vraisemblablement par les domaines 154-174 et 202-226. Les résidus 202-226 sont très hydrophobes et pourrait participer, avec la région 71-102, à la dimérisation des protéines de surface. La région 154-174 est probablement organisée en hélice amphiphile positionnée parallèlement aux membranes ; elle pourrait participer au recrutement du cholestérol. Enfin, les résidus 193-204 serait cytoplasmiques, en accord avec leur fonction dans le recrutement de la ribonucléoprotéine HDV The budding mechanism of the Hepatitis B Virus (HBV) is entirely dépendent on its envelope proteins. These proteins form oligomers and spontaneously bud into the lumen of the endoplasmic réticulum (ER), mainly as empty subviral particles that are secreted in large quantities by infected cells. The envelope proteins occasionally recruit HBV nucleocapsids leading to the formation of complete virions also called Dane particles. Ribonucleoproteins of the Hepatitis Delta Virus (HDV) take advantage of this unusal budding mechanism: they bind to the envelope proteins and are secreted as HDV virions. There are three HBV envelope proteins: the small protein S-AgHBs, the medium protein M-AgHBs, and the large protein L-AgHBs. They share a common C-terminal domain but the size of their N-terminal domains differs. The S protein contains only the S domain, while the M and the L proteins consist respectively of the S and preS2 domains, and the S, preS2, and preSl domains. The S-AgHBs protein drives HBV and HDV budding. This integral protein is synthesized at the ER membrane. Its N-terminal region contains two transmembrane domains forming a first cytosolic loop and an antigenic loop (AGL) that is presented at the surface of the viruses. Its C-terminal domain is highly hydrophobic and predicted as a membrane domain. In addition two infectivity determinants have been identified on the preSl domain and the AGL. First our study aimed at characterizing the mechanism of action of the two infectivity determinants. Our results indicate that these determinants are functionaly independant at viral entry. The role of the AGL may require the intervention of many surface proteins while only a few domains of preSl are sufficient for infection. Finally, the mode of action of the preSl domain seems to be mediated by an allosteric cooperation of its sub-elements. The second part of our study aimed at specifying the topology of the C-terminal domain of the S-AgHBs protein in order to further characterize its role in HBV et HDV morphogenesis. This region most likely associates with cellular membranes through the 154-174 and 202-226 domains. The 202-226 residues are highly hydrophobic and may be implicated, together with the 71-102 region, in the surface proteins dimerization. The 154-174 region is presumably organized as an amphipathic helix, which is parallel to membranes. It may participate in cholesterol recruitment. Lastly, residues 193-204 may be exposed cytoplasm in agreement their role in HDV ribonucleoprotein recruitment

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Bachelot, Etienne. "Production in vitro par les lymphocytes circulants d'anticorps spécifiques du virus de l'hépatite B." Montpellier 1, 1990. http://www.theses.fr/1990MON11212.

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Imbert, Isabelle. "Etude des étapes précoces de l'infection par le virus de l'Hépatite C : Mécanismes de réplication du génome viral." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2003. http://www.theses.fr/2003STR13083.

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Abstract:

Le virus de l'hépatite C (VHC) infecte 3% de la population mondiale. L'infection par ce virus devient chronique dans une grande majorité des cas puis peut évoluer vers une cirrhose ou un hépatocarcinome. Deux étapes successives sont indispensables à la réplication du génome de ce virus à ARN de polarité positive : (1) l'étape de traduction du brin génomique permet de produire toutes les protéines virales, puis, (2) le complexe de réplication, reconnaît la région 3' terminale du génome et permet la synthèse du brin complémentaire ou brin (-). Le brin (-) servira ensuite de matrice au complexe de réplication pour produire un nouveau génome ou ARN (+). Dans notre travail, certains aspects de la traduction et de la réplication du génome viral ont été abordés. Dans un premier temps, nous avons étudié la régulation de la traduction du génome du VHC. Nous avons montré que ni la région 3'(+) ni l'expression des protéines virales n'influençaient l'efficacité de traduction du génome viral. Afin de mieux comprendre le mécanisme de réplication de ce virus, nous avons, dans un deuxième temps, entrepris une étude structurale de l'extrémité 3' du brin (-). La structure secondaire de cette région d'ARN a été déterminée en solution, en utilisant des sondes chimiques et enzymatiques. Cette région très structurée est reconnue par le complexe de réplication. La connaissance de sa structure nous permettra donc, de proposer des hypothèses concernant l'importance de certains nucléotides ou groupes de nucléotides dans la réplication de ce virus. En parallèle, une étude des interactions existant entre les protéines non structurales du virus (protéines formant le complexe de réplication) a été entreprise et a montré qu'elles interagissaient toutes les unes avec les autres. La dernière partie de ce travail présente dans un contexte ex vivo, différentes approches développées au laboratoire afin d'étudier la réplication du VHC et en particulier la synthèse du brin (+) à partir du brin (-) The Hepatitis C Virus (HCV) infects 3% of the world population. Virus infection becomes chronic in a large majority of cases and can evolve to cirrhosis or hepatocarcinoma. Two successive steps are essential for the replication of this positive strand RNA virus: (1) the viral genome translation which produces all viral proteins, and the (2) further recognition of the 3' non translated region (or 3'(+)) by the replication complex which allows the complementary (or (-)) strand synthesis. The minus strand is then used to produce new genomic RNA (or (+)) strands. Our work is focused on some translation and replication aspects. First, translation regulation of the genomic RNA was analyzed. We show that neither the 3'(+) region nor the viral proteins modulate the translation efficiency. In order to learn more about replication mechanisms, we studied in solution, the 3'(-) end folding with enzymatic or chemical probes. This well structured region is recognized by the replication complex. This knowledge allows us thus to propose nucleotides or groups of nucleotides essential for the viral replication. In parallel, we analyzed protein/protein interactions between the non structural proteins (which form the replication complex). We show that all non structural proteins interact ones with the others. The last part of my study concerns various approaches developed in order to study the HCV replication, and in particular the (+) strand synthesis, in an ex vivo context

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Hallez, Camille. "Impact des facteurs de restriction sur la réplication du virus de l'hépatite B." Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066390.

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Abstract:

Le Virus de l'Hépatite B (VHB) infecte 350 millions d'individus à l'échelle mondiale. Il est responsable d'hépatites aigües pouvant évoluer vers la chronicité puis le carcinome hépatocellulaire. Le génome du VHB est constitué d'un ADN partiellement bicaténaire. De par sa nature, il pourrait être sensible à l'action de certaines nucléases cellulaires qui hydrolysent l'ADN double brin. Nous avons ainsi mis en évidence la capacité de la Désoxyribonuclase I (DNase I) à être incorporée dans les virions du VHB, ce qui permet la dégradation du génome viral et la diminution de son infectivité. La DNAse I est particulièrement surexprimée en hypoxie et pourrait contribuer à l'élimination du virus chez les individus cirrhotiques. Par ailleurs, nous avons montré que la cytidine désaminase APOBEC3DE appartenant à une famille de facteurs de restriction viraux possède un rôle proviral. En effet, son association avec APOBEC3F et APOBEC3G mène à une diminution de l'activité de ces dernières et ceci favorise la réplication du VHB. La formation d'hétérodimères APOBEC3DE/APOBEC3F et APOBEC3DE/APOBEC3G semble génèrer un encombrement stérique ne permettant pas l'encaspidation d'APOBEC3F et APOBEC3G, raison pour laquelle le génome du VHB est moins muté lorsqu'APOBEC3DE est exprimée Hepatitis B Virus (HBV) infects 350 millions people worldwilde. It triggers accute hepatitis that can turn into cirrhosis then hepatocellular carcinoma. HBV genome is composed of a partially double-stranded DNA.Thus, it could be targeted by some cellular nucleases that hydrolyze double-stranded DNA. We have highlighted that Deoxyribunuclease I (DNase I) can be incorporated into HBV virions and degrade its genome, leading to a loss of viral infectivity. Moreover, DNase I is upregulated under hypoxia which is a caracteristic of liver cirrhosis. DNase I could be involved in HBV elimination in cirrhotic patients. In an other study, we found that APOBECDE, a cytidine deaminase of the same family than some restriction factors, has a proviral activity. Indeed, association of APOBEC3DE with APOBEC3F or APOBEC3G leads to a loss of cytidine deaminase activity and a better viral replication. When APOBEC3DE is associated with those two proteins, APOBEC3F and APOBEC3G cannot be incorporated into HBV virions. This is the reason why HBV is more infectious when APOBEC3DE is expressed

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Dissertations / Theses on the topic 'Virus de l'hépatite B – génétique'

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