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Dissertations / Theses on the topic 'Virus de l'hépatite B – Variabilité'
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Kassab, Somar. "Variabilité du virus de l'hépatite B." Thesis, Bordeaux, 2014. http://www.theses.fr/2014BORD0056/document.
Full textAbstract:
Le polymorphisme génétique du virus de l’hépatite B (VHB) a déjà été étudié pourtenter de comprendre les facteurs viraux influençant l'évolution de la maladie, mais les étudessont discordantes. Ceci peut être lié au fait que les précédents travaux n’ont été menés quedans des populations avec une faible variété de génotypes et présentant des charges viralesplasmatiques (CVP) élevées.Nous avons donc étudié la variabilité du génome complet du VHB chez 422 individusinfectés chroniquement, naïfs de traitements anti-viraux et dont 38% présentaient une CVPinférieure à 103 UI/mL. L’optimisation de l’amplification par PCR du génome complet duVHB nous a permis de séquencer en technique Sanger plus de 90% du génome pour 320échantillons. Le séquençage direct a mis en évidence des co-infections. Ceci a été confirmé enséquençage clonal par pyroséquençage de 27 échantillons qui a montré des proportions departicules défectives variables mais toujours en co-infections avec des sous-populationssauvages. Le génotypage des séquences obtenues par technique Sanger a montré une grandereprésentativité des génotypes les plus fréquents (A à E) ainsi que 60 potentiels recombinantsinter-génotypiques. Cependant le séquençage clonal par pyroséquençage et clonage vectorielclassique de ces derniers montre la présence de co-infections de plusieurs génotypes ou laprésence de génotypes intermédiaires entre génotypes proches. Ceci est en défaveur derecombinaison par échange de matériel génétique comme ce qui a été suggéré dans lalittérature.Cette étude sera complétée par l’analyse de corrélation entre les polymorphismes et lesmarqueurs de mauvaise évolution de la pathologieThe genetic polymorphism of hepatitis B virus (HBV) has been investigated tounderstand its impact on disease evolution, with discordant results. This could be due to thenarrow range of genotype and plasmatic viral load in these studies.We analysed complete genome variability of circulating HBV, in 422 chronicallyinfected patients. All were naive of anti-viral treatement and 38% had a plasmatic viral loadbelow 103 UI/mL. After optimisation of full length genome PCR amplification, we obtainedSanger sequences for more than 90% of HBV genome in 320 samples. We detected by directsequencing multiples co-infections that were confirmed by clonal pyrosequencing in 27samples. Defective viruses were always observed in co-infection with wild type virus. Directsequences showed a large representation of the most frequent genotypes (A to E), but also 60potential inter-genotypic recombinants. Clonal pyrosequencing and vectorial sequencingshowed that these potential recombinants were co-infections with different genotypes orintermediate genotypes located between close genotypes. These observations are incontradiction with the hypothesis described in the literature on recombination by geneticmaterial exchange.This study will be completed by a correlation analysis between the polymorphisms andmarkers of bad prognosis during HBV-induced disease
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Thermet, Séverine. "Étude moléculaire et biologique de variants du VHB." Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10139.
Full textAbstract:
L'Organisation Mondiale de la Santé estime à plus de 370 millions le nombre de porteurs chroniques du virus de l'Hépatite B (VHB). L'éradication de cette maladie, même dans les pays développés ayant accès à tous les équipements médicaux, est difficile. Ceci est due en partie à l'existence de variants du VHB. Leur étude est indispensable pour mieux comprendre la biologie du VHB et lutter toujours plus efficacement contre ce virus. Toutefois l'amplification des génomes entiers des variants du VHB est souvent difficile. Ainsi durant ma thèse je me suis intéressée à différents variants du VHB. Dans un premier temps, mon travail s'est basé sur un patient (Z1) présentant à la fois de forts taux d'AgHBs et d'anticorps anti-HBs. Les analyses moléculaires et biologiques ont montré que le patient était infecté par un VHB d'apparence sauvage. L'étude de l'affinité des anti-HBs de Z1 a permis d'établir qu'il avait développé une réponse immunitaire quasi-monoclonale vis-à-vis d'un épitope antigénique différent de celui porté par le virus circulant. Dans un second temps, j'ai développé une nouvelle technique d'amplification pour l'étude des variants de VHB difficiles à obtenir par les techniques standard de PCR. Pour ce faire, j'ai appliqué une technique innovante et hautement sensible, nommée amplification en cercle roulant (RCA). La RCA associée à une PCR spécifique du VHB amplifie l'ADNccc avec une sensibilité similaire à celle d'une PCR en temps réel. La RCA présente un avantage certain puisqu'elle permet d'obtenir le génome viral entier et non des fragments sous génomiques. L'étude d'un patient infecté par un VHB résistant à la lamivudine a validé l'efficacité, la fidélité et la haute sensibilité de la RCA. En conclusion, ce travail a montré qu'il était indispensable d'étudier de grandes cohortes de patients pour pouvoir dégager des consensus concernant les différents types de variants du VHB. La RCA devrait être un atout majeur dans l'étude des variants du VHB, et aussi pour l'étude de l'ADNccc qui est à l'origine de la persistance viral et de la propagation des mutations
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Martel, Nora. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite B et implication sur le diagnostic et la pathogénèse." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00865253.
Full textAbstract:
L'infection chronique ou occulte par le virus de l'hépatite B (HBV) est l'un des facteurs de risque les plusimportants pour le développement de carcinome hépatocellulaire viro-induit. Malgré la petite taille dugénome et les contraintes imposées par l'organisation de ce génome, le HBV présente une grandevariabilité génétique qui est le résultat des erreurs générées lors de l'étape de reverse transcription maisaussi, lors des processus de sélection et d'adaptation. Durant l'infection, une relation étroite hôte-viruss'établit. La population virale est caractérisée par la présence de quasi-espèces pouvant influencerl'évolution de la maladie hépatique et favoriser les phénomènes d'échappement. Le but de notre travail aété 1) d'étudier la variabilité virale associée aux infections occultes et l'impact de certaines modificationsde l'AgHBs (sY100C) sur la reconnaissance des tests de détection enzymatiques, et l'impact des mutations(sK122R, sD144E) sur la reconnaissance des anticorps anti-HBs d'un patient 2) de développer un nouveloutil d'amplification de génomes entiers de HBV que nous avons appliqué à l'étude préliminaire de quasiespècesd'un mutant Core. Cet outil d'amplification est plus sensible que les techniques existantes, et ilpermet l'étude des propriétés moléculaires et fonctionnelles des isolats virales. En conclusion, nous avonspu montrer que les processus d'échappement sont complexes, et font intervenir des facteurs du virus et del'hôte. Ce travail contribue à l'amélioration de la compréhension de la biologie de l'infection par le HBV,et illustre la complexité des interactions hôte-virus.
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Abdou, Chekaraou Mariama. "Variabilité génétique des souches virales HBV et HDV circulant dans la région du Sahara en Afrique et étude de la co-spéciation HBV/HDV." Paris 13, 2010. http://www.theses.fr/2010PA132001.
Full textAbstract:
L’infection par le virus de l’hépatite B (HBV) constitue en Afrique Subsaharienne un problème de santé publique majeur. Le taux de prévalence de la protéine d’enveloppe du virus, l’antigène HBs (AgHBs) peut atteindre jusqu’à 30% dans certains pays. De plus on estime entre 70 à 100 millions le nombre de porteurs chroniques de l’HBV avec une fréquence de décès annuels de l’ordre de 250 000. Les données concernant l’infection concomitante par le virus de l’hépatite D (HDV) virus satellite de l’HBV, sont très rares car très peu d’études ont été conduites. Les génotypes HBV/E, et l’HBV/A ont été identifiés en Afrique subsaharienne, le génotype D étant cantonné à l’Afrique du Nord. De plus, plusieurs souches recombinantes entre le génotype E et les génotypes, A et D ont aussi été décrit. Concernant l’HDV, 4 génotypes « africains », HDV 5, -6, -7 et -8 ont été caractérisés au laboratoire chez des patients africains immigrés en France, infectés dans leur pays d’origine. Au cours de cette étude nous avons voulu déterminer l’épidémiologie moléculaire des souches HBV et HDV circulant au Niger, et plus généralement dans la région du Sahara (Mali de Mauritanie et du Tchad). Au partir d’une cohorte de donneurs de sang du Niger porteurs de l’AgHBs, nous avons retrouvé que 80% des souches étudiées appartenaient au génotype E. Ces souches présentaient une variabilité génétique significativement plus différente que celle décrite pour les souches HBV/E de la littérature (p<0,005) suggérant une diffusion plus ancienne de l’infection au Niger. De plus, nous avons mis en évidence un nouveau recombinant HBV/D-E entre des souches HBV/D et HBV/E, représentant près de 20% des souches isolées de notre cohorte, présentant des points de cassures précis, situés dans des « points chauds » de recombinaison décrits dans la littérature. Ce recombinant HBV/D-E présentait un taux de divergence dans sa séquence nucléotidique complète de plus de 4% en par rapport aux sous génotypes HBV/D décrits à ce jour. Les analyses phylogénétiques extensives effectuées nous permettent de le classer clairement comme un nouveau sous génotype, nous avons proposé HBV/D8. De même, comme décrits aussi par d’autres équipes, nous avons mis en évidence d’autres recombinants HBV-E/D, à la fois au Niger, mais aussi en Mauritanie avec des profils différents les uns des autres, témoignant de la grande variabilité génétique des souches virales dans la région. En revanche, la prévalence de l’infection Delta au Niger semblait a priori faible. Quatre souches de notre cohorte (7,8%), toutes de génotype HDV-1 ont été isolées. L’étude de la co-spéciation HBV/HDV dans cette région de l’Afrique saharienne (Niger, Mali de Mauritanie et du Tchad) a été entreprise à partir de 82 échantillons de la collection des sérums HDV positifs du laboratoire. Le génotype E était associé à tous les génotypes delta présents HDV-1, -5 et -7. De même, une souche HBV/D était aussi capable de s’associer à l’HDV-1 et -5. Afin de tester si l’enveloppement de HDV par HBV était dépendant ou non des génotypes des souches virales, nous avons mis au point un modèle cellulaire in vitro de co-transfection transitoire de plasmides codant la protéine AgHBs et la grande protéine delta. La méthode de mesure consistait en l’évaluation de la formation de particules pseudo-virales. Les résultats préliminaires obtenus à l’aide de HBV/D co-transfecté avec les génotypes HDV-1, HDV-3, HDV-5 et HDV-6 et HDV-7, montrent que HDV-1, mais pas HDV-5, était enveloppé. Grâce à ce modèle, les études seront poursuivies afin d’analyser la capacité d’enveloppement des différents « génotypes delta africains » par le génotype EInfection with hepatitis B (HBV) in SubSaharan Africe is an issue of major public health. The prevalence of the envelope protein of the virus, HBs antigen (HBsAg) can reach up to 30% in some countries. In addition it is estimated between 70 to 100 million, the number of chronic carriers of HBV with an annual death rate of about 250 000. Data on coinfection with hepatitis D (HDV) virus satellite of HBV are very rare because very few studies have been conducted. In terms of molecular characterization of HBV and HDV circulating strains, studies, although partial and conducted with a small number of samples, have been reported. Two HBV genotypes, HBV/E, and HBV/A (with its sub genotypes A1, A2, A3, A4 and A5) have been mainly identified in sub-Saharan Africa. Genotype D is confined to North Africa. In addition, several recombinant strains between genotype E and genotypes A and/or D have also been described. Concerning the HDV, 4 "African genotypes", HDV-5, -6, -7 and -8 have been characterized in the laboratory from African patients immigrants in France, who had been infected in their country of origin. Two studies conducted in Gabon confirmed the presence of HDV genotype-7 and -8. In this study we wanted to determine the molecular epidemiology of HBV and HDV strains circulating in Niger and more generally in the Sahara region, in neighboring countries of Mali from Mauritania and Chad. In a cohort from blood donors in Niger HBsAg carriers, we found that 80% of the studied strains belonged to genotype E. These strains showed genetic variability significantly different from that described for HBV/E strains of the literature (p <0. 005) suggesting an ancient diffusion of infection in Niger. Furthermore, we identified a new recombinant HB /D-E between strains HBV/D and HBV / E, representing nearly 20% of strains isolated in our cohort, with the specific breakpoints located in hotspots recombination described elsewhere in the literature. The recombinant HBV/D-E showed a divergence in its complete nucleotide sequence of more than 4% as compared to HBV genotypes /D described to date. The extensive phylogenetic analyses carried out allow us to classify it as clear as a new genotype, we proposed HBV/D8. Similarly, as also described by other teams, we have highlighted other recombinant HBV/E-D, both in Niger, but also in Mauritania with profiles different from each other, reflecting the high genetic variability of viral strains in the region. In contrast, the prevalence of HDV infection in Niger seemed a priori low. Four strains in our cohort (7. 8%), all classified as genotype HDV-1 were isolated. The study of HBV / HDV co-speciation in this region of Saharan Africa (Niger, Mali, Mauritania and Chad) was undertaken from 82 samples from the laboratory collection of HDV positive serum. Genotype E was associated with all delta genotypes found, HDV -1, -5 and -7. Similarly, HBV/D strain was also able to envelope the HDV-1 and -5. To test whether the envelopment of HDV or HBV was dependent or not on genotypes of virus strains, we developed a cellular in vitro model of transient co-transfection of plasmids encoding the HBsAg protein and large delta protein. The measurement method consisted of evaluating the formation of viral like particles. Preliminary results obtained with HBV/D co-transfected with HDV-1, -3, -5, -6, and -7, showed that HDV-1, but not HDV-5, was wrapped. With this model, studies are continuing to analyze the ability of the genotype E to wrapping different "Delta African genotypes"
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Eschlimann, Marine. "Influence de la variabilité des protéines d’enveloppe du virus de l’hépatite B sur l’évolution de l’infection évaluée par la persistance de l’antigène HBs." Thesis, Université de Lorraine, 2017. http://www.theses.fr/2017LORR0133/document.
Full textAbstract:
L’hépatite B chronique touche environ 257 millions de personnes dans le monde. La perte de l’antigène HBs (AgHBs), marqueur de guérison fonctionnelle, n’est que très rarement observée, même sous traitement antiviral (3-16 %). Les protéines d’enveloppe du virus de l’hépatite B (VHB), formant l’AgHBs, sont très variables et cruciales pour le pouvoir infectieux du virus de l’hépatite B (VHB) et la physiopathologie. Nous avons émis l’hypothèse que cette variabilité pourrait expliquer, au moins partiellement, l’évolution de l’infection par le VHB, évaluée par la clairance de l’AgHBs, chez des patients traités ou non par analogues nucléos(t)idiques anti-VHB. Chez 29 patients infectés par différents génotypes du VHB (A, C et D), présentant différents profils cliniques (infection aigüe ou chronique, co-infection VHB/VIH) et thérapeutiques, une très grande variabilité des protéines d’enveloppe du VHB a été mise en évidence. Chez ces patients, la persistance de l’AgHBs était corrélée avec la présence de mutations et délétions localisées dans des régions des protéines d’enveloppe virale jouant un rôle important dans la reconnaissance du virus par le système immunitaire. Ces résultats renforcent l’hypothèse que l’étude des protéines d’enveloppe du VHB pourrait mettre en évidence des signatures moléculaires influençant le fitness du VHB et par conséquent l’évolution clinique de la maladie liée à l’infection par le VHBChronic hepatitis B affects about 257 million people worldwide. The loss of HBS antigen (HBsAg), a marker of the functional cure, is very rarely observed, even on anti-HBV treatment (3-16%). The hepatitis B virus (HBV) envelope proteins (HBsAg) are highly variable and crucial for the viral infectivity and pathogeny. We hypothesized that the HBV variability in the envelope proteins could explain, at least partially, the evolution of HBV infection, evaluated by HBsAg clearance, in patients treated or not by anti-HBV nucleos(t)idic analogues. For 29 patients infected with different HBV genotypes (A, C and D), presenting different clinical profiles (acute or chronic infection, HBV/HIV co-infection) and therapies, a very high variability of HBV envelope proteins was observed. In these patients, the persistence of HBsAg was correlated with the presence of mutations and deletions located in areas that play a key role in the viral recognition by the immune system. These results reinforce the hypothesis that the study of HBV envelope proteins could highlight molecular signatures influencing HBV fitness which would subsequently modify the clinical evolution of HBV-related disease
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Nicot, Florence. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite C et persistance virale." Toulouse 3, 2010. http://www.theses.fr/2010TOU30131.
Full textAbstract:
Les facteurs influençant la réponse virologique au traitement et la persistance du HCV nécessitent d'être mieux caractérisés. La diversité génétique des souches de génotype 2 et 4 dans la région Midi-Pyrénées a été étudiée et montre la présence de 8 et 12 sous-types différents. La toxicomanie était le principal mode de diffusion des souches de sous-type 4a, 4d et 2a. Une nouvelle technique de génotypage du HCV par analyse de la région NS5B sur biopuce a été mise au point. L'étude de l'impact des facteurs viraux et pharmacologiques sur la réponse virologique a montré que les concentrations de ribavirine et le sous-type viral influençaient la réponse au traitement par interféron pégylé et ribavirine. Les patients infectés par un sous-type 1b avaient un taux de réponse plus élevé que ceux infectés par un 1a. Enfin, nous avons montré l'absence de persistance du génome HCV chez des patients immunodéprimés, anciennement infectés par le HCV suggérant une réelle éradication du HCVIdentification of new factors influencing viral response and HCV persistence is needed. Genetic diversity of HCV genotype 2 and 4 strains in Midi-Pyrénées areas was studied and revealed 8 and 12 subtypes, respectively. Intravenous drug use was the major route of infection for HCV subtypes 4a, 4d and 2a. A microarray-based molecular approach was developed for identification of HCV genotype and subtype. The impact of HCV variability and pharmacological parameters on the virological response was evaluated and showed that ribavirin concentrations and HCV subtype influence the virological response to pegylated interferon and ribavirin. Indeed, patients infected with HCV subtype 1b have a better chance of achieving sustained virological response than those infected with 1a. Finally, we have shown absence of HCV persistence in formerly HCV-infected immunocompromised patients suggesting the complete eradication of HCV
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Soler, Muriel. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite C et échec thérapeutique." Paris 12, 2004. https://athena.u-pec.fr/primo-explore/search?query=any,exact,990003947490204611&vid=upec.
Full textAbstract:
La région 5’ non codante du VHC, contenant un IRES, et la protéase NS3 ont une complexité génétique élevée et une diversité faible. Ces régions présentent une distribution en quasi espèces composée de variants génétiquement proches et subissent de fortes contraintes conservatoires. Des mutations dans la région 5’ NC causent une réduction de son efficacité traductionnelle et agissent sur les capacités stimulatrices de la région X. Des acides aminés cruciaux pour NS3 sont quasiment invariables, les mutations touchant la surface. Les quasi espèces de la région 5’ NC n’ont pas de rôle dans la résistance à l’IFN-α La résistance à la ribavirine ou à l’association IFN-α/ribavirine n’est pas associée à la sélection de variants de NS3 résistants. L’échec thérapeutique de l’oligonucléotide anti-sens ciblant l’IRES n’est pas lié à une résistance primaire ou secondaire. Une évolution génétique significative indique que l’anti-sens pourrait exercer une pression de sélection positive sur l’IRESThe HCV 5’ noncoding region, containing an IRES, and the NS3 protease presented both a high genetic complexity and a low diversity. These regions, displaying quasispecies distribution bearing genetically close variants, were submitted to strong conservatory constraints. Mutations in the 5’ noncoding region trigger a decrease in its translation efficacy and influence the modulatory activity of the X region. Some NS3 functionally crucial amino acids were invariable, mutations were located at the protein surface. 5’ noncoding region quasispecies were flot associated to resistance to IFN-α Resistance to ribavirin or to the association of IFN-α and ribavirin was not associated to the selection of NS3 variants that were intrinsically resistant. The therapeutic failure of antisense oligonucleotide targeting IRES could not be explained by primary or secondary resistance. A significant genetic evolution showed that the antisense oligonucleotide could exert a selective pressure on the IRES
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Vallet, Sophie. "Variabilité génétique de la protéase NS3 du virus de l'hépatite C." Brest, 2005. http://www.theses.fr/2005BRES3104.
Full textAbstract:
La protéase NS3 est essentielle à la réplication du VHC et est l'une des cibles potentielles pour le développement de nouvelles thérapeutiques anti-VHC. Dans une première étude, la variabilité génétique de la protéase NS3 a été analysée pour 17 échantillons sériques pré-thérapeutiques issus de patients infectés par des VHC de génotype1 et répartis en fonction de leur réponse ultérieure à la bithérapie standard. Une certaine variabilité nucléotidique et protéique a été observée. La réponse ultérieure à la bithérapie et la variabilitéde la protéase virale n'étaient pas associées. Un profil particulier incluant 3 délétions et une insertion a été rapportée pour 4 variants issus de la quasi-espèce d'un patient. Dans une seconde étude, un profil génétique particulier en relation avec l'évolution de la cirrhose en CHC a été recherché. Aucun résidu ou motif spécifique n'a été détecté comme étant prédictif de l'évolution de la cirrhose chez une population cas/témoins de 10 patients cirrhotiquesNS3 protease is essential for HCV replication, and is one of the most promising targets for anti-HCV therapy. In a first work, the genetic heterogeneity of the protease gene was analysed in 17 HCV gentype 1 pre-therapeutic samples distributed according to their subsequent response to standard combination therapy. Variability of both nucleotide and amino acid sequences was found. No association between the outcome of bitherapy and mutational pattern before treatment was found. A particular pattern including three deletions and one insertion in four clones of the quasispecies was found for one patient. In a second work, as there are different arguments for a putative role of the HCV NS3 protease in the carcinogenesis process, we searched for a genetic pattern of NS3 protease in relation with evolution from viral cirrhosis to HCC. No specific residues or motifs were detected as predictive of cirrhosis outcome in a case controle population of 10 cirrhotic patients
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Halfon, Philippe. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite C : implications cliniques, diagnostiques et thérapeutiaues." Aix-Marseille 2, 1999. http://www.theses.fr/1999AIX22043.
Full textAbstract:
Dans cette etude, nous mettons a profit la variabilite genetique du vhc pour etablir au moyen de la bio-informatique, des strategies nous permettant d'identifier des modes de contamination entre patients. Nous avons pu ainsi demontrer l'existence au sein d'une meme famille d'une transmission mere-enfant ainsi qu'intra-familiale entre deux freres, ainsi que des cas de transmission sexuelle du vhc parmi des couples viremiques. Nous avons egalement etudie la relation entre la region ns5a (aa 2209-2248) du vhc et la reponse a l'interferon. Dans notre experience, l'absence de mutations dans cette region retrouvee dans des isolats hcv-j est un mauvais pronostic quant a la reponse au traitement a l'interferon pour des doses usuellement utilisees en europe. La meilleure connaissance de la variabilite genetique du vhc constitue pour ce virus un champ de recherche important tant au niveau diagnostique, qu'au niveau clinique, therapeutique et vaccinal.
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Fourel, Isabelle. "Étude des agents inhibiteurs de la réplication du virus de l'hépatite B : intérêt des modèles animaux de l'hépatite B humaine." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO1T012.
Full text
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Morel, Virginie. "Variabilité et recombinaison génétique du virus de l'hépatite C : implications virologiques et cliniques." Amiens, 2010. http://www.theses.fr/2010AMIED005.
Full textAbstract:
L’évolution du virus de l’hépatite C (VHC) et sa grande variabilité génétique résultent d’un équilibre entre une adaptation rapide à son environnement sous l’influence de pressions de sélection (réponse immune de l’hôte, traitement antiviral) et une accumulation de changements de séquences au cours du temps (évolution neutre). La variabilité du VHC est principalement due à une accumulation de mutations qui s’exprime à différents niveaux, avec la distinction de génotypes et sous-types, la circulation sous forme d’une quasi-espèce et une hétérogénéité variable le long du génome. Un autre mécanisme plus brutal est la recombinaison génétique observée chez de nombreux virus à ARN mais décrite comme un événement rare pour le VHC. Nous avons étudié au travers d’une situation clinique particulière, l’émergence d’une souche recombinante de génotype 2k/1b dans un contexte d’infection multiple par le VHC. Nous avons étendu cette étude à une analyse plus globale de la recombinaison génétique dans l’infection par le VHC. La deuxième partie de ce travail s’est intéressée aux conséquences de cette variabilité dans ses implications cliniques et thérapeutiques. Nous avons abordé d’une part, l’implication éventuelle de la variabilité des glycoprotéines d’enveloppe E1 et E2, dans la reconnaissance du VHC par les anticorps neutralisants. D’autre part, nous avons étudié l’hétérogénéité de la quasi-espèce de la protéine p7 chez des patients porteurs du VHC et traités par l’amantadine, afin de déterminer une corrélation éventuelle entre la variabilité de p7 et la réponse au traitement et/ou inversement un effet potentiel de cet antiviral sur la protéine p7.
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Bouquet, Jérôme. "Génomique d'un virus zoonotique à ARN : le cas particulier du virus de l'hépatite E." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00827778.
Full textAbstract:
En France, le virus de l'hépatite E (VHE) est responsable de cas d'hépatites aigües sporadiques dont les origines et les modes de transmission sont incertains. Or, le VHE est le seul virus des hépatites à infecter d'autres espèces animales que l'homme. Les objectifs de cette thèse ont été d'évaluer le risque de transmission zoonotique du VHE porcin pour l'Homme. Une première étude d'épidémiologie moléculaire a montré une circulation active du VHE entre les populations porcines et humaines, préférablement par voie alimentaire. Une deuxième étude par séquençage haut-débit a montré l'adaptation totale du génome consensus et de la quasiespèce du VHE lors de la transmission inter-espèce. Une troisième étude de trois nouveaux génomes complets porcins comparé aux génomes VHE humains déjà disponibles n'a pas révélé de déterminants majeurs de restriction d'hôte au sein du génotype 3. Par contre cette étude a mis en avant le besoin de revoir la classification en sous-types du VHE au vu des nouvelles séquences disponibles. Enfin, un système de génétique inverse a été mis en place afin de permettre l'étude phénotypique de nouvelles souches humaines et porcines du VHE dans des lignées hépatocytaires. Ces travaux ont permis de montrer le risque zoonotique du VHE du porc consommé en France et son adaptation génomique complète à ses deux espèces hôtes. Le VHE est un virus zoonotique à ARN particulier dont la variabilité génétique dépend de son épidémiologie singulière, qui inclue la possibilité de transmissions alimentaires à partir d'un réservoir animal domestique. Ce travail permet enfin de poser les perspectives d'études phénotypiques du VHE
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Rollier, Christine. "Etude, à l'aide du virus de l'hépatite B du canard, de l'immunisation génétique pour la prévention et le traitement de l'hépatite B." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO10086.
Full textAbstract:
Les traitements actuels visant a inhiber la replication du virus de l'hepatite b (vhb) chez les patients chroniquement infectes, et ainsi a prevenir l'evolution des hepatites b chroniques vers l'hepatocarcinome, ont une efficacite insuffisante. Des donnees recentes suggerent que les approches immunotherapeutiques, et en particulier l'immunisation par adn nu ou vaccin genetique, pourraient etre particulierement interessantes pour le controle de l'infection chronique par le vhb. Cette nouvelle approche de vaccination est basee sur l'induction de puissantes reponses immunitaires par injection de l'adn exprimant une proteine antigenique virale. L'objectif de notre travail etait d'utiliser le modele du virus de l'hepatite b du canard (dhbv), etroitement apparente au vhb, afin d'evaluer l'efficacite de la vaccination genetique pour la protection et la therapie de l'hepatite b. Dans un premier temps, nous avons mis au point l'immunisation par adn nu de canards avec un plasmide codant pour la grande proteine d'enveloppe (l) du dhbv. Nos resultats montrent que l'immunisation d'animaux adultes non infectes avec ce plasmide induit une reponse humorale forte, specifique de la proteine l du dhbv, et capable de neutraliser le pouvoir infectieux du virus. De plus, les anticorps induits sont transmis verticalement de la cane immunisee aux canetons, via l'uf, et sont capables de les proteger contre une epreuve virulente par le dhbv. Dans un deuxieme temps, nous avons demontre que la combinaison de l'immunisation par adn avec la production d'anticorps dans les ufs permet d'obtenir rapidement des quantites tres importantes d'anticorps specifiques de l'enveloppe virale et neutralisants (brevet depose). De plus, l'immunisation d'animaux nouveau-nes par adn nu non seulement n'induit pas d'immunotolerance mais est egalement capable d'induire une reponse primaire memoire superieure a celle induite par l'immunisation avec une proteine recombinante. Enfin, l'immunotherapie par adn nu d'animaux chroniquement infectes par le dhbv induit une baisse de la replication virale chez tous les animaux traites, et meme dans quelques cas l'elimination de la forme d'adn viral superenroule intrahepatique responsable de la chronicite de l'infection. L'ensemble de ces resultats suggere que l'immunisation par adn pourrait representer la base de nouvelles approches protectrices et therapeutiques de l'infection par le vhb.
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Blanchet, Mathieu. "Etude des déterminismes de maturation et d’infectiosité des virus des hépatites B et Delta." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077031.
Full textAbstract:
Les protéines d'enveloppe HBV bourgeonnent spontanément dans la lumière du RE, majoritairement sous la forme de particules sous virales vides. Dans de rares cas, elles recrutent la nucléocapside HBV, aboutissant à la formation de virions HBV. Ce mode de bourgeonnement profite à l'HDV, un virus défectif qui emprunte les protéines d'enveloppe HBV pour accomplir son cycle infectieux. Ces protéines, au nombre de trois, possèdent une extrémité C-terminale commune. La protéine S-AgHBs est formée du seul domaine S, la protéine M-AgHBs des domaine S et pre-S2, et L-AgHBs des domaines S, pre-S2, et pre-S1. S- et L-AgHBs sont requises pour la maturation d'HBV alors que S-HBsAg suffit à l'assemblage de virions HDV. Le domaine S contient quatre domaines transmembranaires qui délimitent deux boucles cytosoliques (BCY-I et -II) et une boucle disposée dans la lumière du RE, appelée boucle antigénique. Nous avons recherché, sur les BCY-I et -II, des déterminants de maturation et d'infectiosité HBV et HDV. Nos résultats montrent l'absence de déterminant dans la BCY-I. Par ailleurs, la BCY-II n'a pas de fonction à l'entrée virale. Nous avons ensuite étudié la région pre-S de L-AgHBs, qui porte le déterminant majeur d'entrée virale HBV et le domaine matrice de maturation HBV. Nous avons utilisé le modèle HDV pour cette étude. Nos résultats montrent que les déterminants d'infectiosité HDV dans la région pre-S sont confinés aux 75 premiers acides aminés, éliminant tout rôle du domaine matrice. Ces résultats vont dans le sens d'un mécanisme d'entrée virale commun pour les virions HBV et HDVThe HBV envelope proteins bud spontaneously at the ER membrane, mainly as subviral empty particles. In rare cases, the HBV nucleocapsid is recruited, leading to the formation of virions. This peculiar budding process is to the benefit of HDV, a defective virus that needs the HBV envelope proteins to complete its life cycle. Three envelope proteins are encoded by the HBV genome. They differ from each other by the size of their N-terminal extension. The S-HBsAg protein is made of the S domain only, M-HBsAg is made of the S and pre-S2 domains, and L-HBsAg is made of the pre-S1, pre-S2, and S domains. S- and L-HBsAg are required for HBV maturation. S-HBsAg is sufficient for HDV maturation. The S domain contains four transmembrane domains, two cytosolic loops (CYL-I and -II), and a loop located in the ER lumen. The first part of our work consisted in the identification of HBV and HDV infectivity and maturation determinants in CYL-I and -II. Our results show the absence of maturation and infectivity determinants for HBV and HDV in CYL-I. CYL-II does not contain any amino-acid indispensable for viral entry. The second part of our work consisted in a study of the L-HBsAg pre-S domain, which harbours the main HBV infectivity determinant. The pre-S domain also contains the matrix domain for HBV maturation, whose role at viral entry could not be tested in the HBV model. We used the HDV model to study this region. Our results show that HDV infectivity determinants are confined to the first 75 N-terminal amino-acids of pre-S1, excluding any role of the matrix domain in the infection process. These results are in favour of common infectivity determinants for HBV and HDV
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Jeantet, Damien. "Caractérisation moléculaire et biologique des virus de l'hépatite B cryptiques." Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO10253.
Full textAbstract:
Le virus de l'hépatites B (VHB) appartient à la famille des Hepadnaviridae caractérisés par leur génome à ADN, leur réplication par une transcriptase inverse et leur hépatotropisme. Ces virus sont à l'origine d'hépatites aiguës ou chroniques qui favorisent l’apparition de cirrhoses conduisant souvent vers le développement d'un carcinome hépatocellulaire. Malgré l'existence d'un vaccin efficace contre le VHB et l'utilisation de tests performants pour la détection de ce virus, l'infection par le VHB lors de transfusion sanguine demeure la transmission virale la plus importante. Ces tests ont été récemment remis en cause chez certains individus qui sont infectés par des variants du VHB qui se répliquent peu ou qui sont mutés dans différents gènes viraux et qui ne sont détectés par aucun des tests commerciaux de diagnostic utilisés en routine. Ces mutants particuliers ont été dénommés : "VHB cryptiques". Dans ce contexte, nos travaux ont permis de déterminer les particularités qui distinguent certains virus de l’hépatite B cryptiques des VHB sauvages et par quels moyens ces variants échappent aux tests classiques de dépistage du VHB. L’objectif de ce travail était d’amplifier, cloner et séquencer tout ou une partie de ces génomes viraux afin de les comparer avec des séquences de VHB sauvage et enfin analyser biologiquement ces génomes de VHB cryptiques. Dans un premier temps, nous avons comparé plus d’une centaine de fragment sous génomiques ou génomiques de ces virus. Nous avons pu observer que la charge virale sérique des VHB cryptiques est 100 à 1000 fois plus faible que pour les VHB sauvages. Des mutations importantes ont été aussi constatées au niveau du déterminant "a" de l'AgHBs qui est l’épitope principalement reconnu par les tests de diagnostic. Dans un deuxième temps, nous avons sélectionné 12 séquences ayant des mutations uniques ou rares au niveau de l’AgHBs parmi toutes celles étudiées. Elles ont été ensuite clonées dans un vecteur d’expression dans le but d’étudier la capacité des tests de détection à reconnaître ce type de mutation. Les résultats de cette étude montrent que la majorité des mutations analysées (75%) sont parfaitement détectées. On peut donc expliquer le défaut de reconnaissance des tests par un défaut de sensibilité plutôt qu’un défaut de spécificité. Notre dernière étude a consisté à amplifier et cloner les génomes entiers de VHB infectant un patient (X27). Nous avons montré l’existence d’une double population virale de génotypes différents (A et D). La population de génotype D est prédominante par rapport à la population de génotype A mais nous avons aussi établi l’obligation d’une complémentation entre ces deux populations qui ne pourraient exister seule chez un hôte. A terme, l’ensemble de nos travaux a pour but de mieux connaître les caractéristiques particulières de ces VHB cryptiques afin d’améliorer les tests de détection existants et permettre ainsi l'identification des individus porteurs de VHB cryptiques qui n'ont pas, ou n'ont pas encore, de signes cliniques d’une infection virale
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Iskandar, Nouhad. "Contribution à l'étude épidémiologique du virus de l'hépatite delta." Paris 12, 1990. http://www.theses.fr/1990PA120062.
Full textAbstract:
La repartition du virus de l'hepatite delta (vhd) et son association aux hepatites aigues, aux maladies hepatiques chroniques et au carcinome hepatocellulaire (chc) ont ete etudiees chez des sujets presentant des signes serologiques d'infection actuelle par le virus de l'hepatite b (vhb) en milieu maghrebin, en afrique noire et dans une population francaise tres exposee au vhb. Aucune positivite pour les anticorps anti-delta n'a ete retrouvee chez 66 enfants algerois presentant une hepatite aigue b ou apparentee (presence transitoire de marqueurs non conventionnels de vhb). En tunisie centrale, anti-delta etait retrouve, parmi les sujets positifs pour aghbs, chez 12/42 donneurs de sang, 16/26 cirrhotiques dans chc et 17/23 sujets atteints de chc. Parmi les 211 sujets porteurs d'aghbs originaires du mali et du senegal, 4 sujets etaient positifs pour anti-delta. Par contre, au senegal, ce marqueur etait retrouve chez 4/13 cirrhoses sans chc et 26/114 chc (22,8%) positifs pour aghbs. Au mozambique, l'etude a porte sur 227 sujets aghbs positifs (105 hepatites aigues, 20 cirrhoses sans chc, 102 chc); ces sujets etaient negatifs pour anti-delta a deux exceptions pres (1 cirrhose et 1chc). Seulement 1 des 28 homosexuels francais aghbs positifs testes pour anti-delta etait positif. Ces resultats montrent que la repartition de l'infection par le vhd presente d'importantes variations geographiques
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Cao, Qian. "Caractérisation moléculaire des carcinomes hépatocellulaires liés au virus de l'hépatite B." Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05S010/document.
Full textAbstract:
Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est le plus fréquent des tumeurs primitives du foie. La carcinogenèse hépatique est un processus complexe et multifactoriel qui fait intervenir à la fois des facteurs génétiques de prédisposition (e.g. les SNPs) et environnementaux. Près de 50% des CHC ont pour étiologie une infection par le virus de l'hépatite B (VHB). Au cours de cette infection, de multiples altérations génétiques et virales s'accumulent et favorisent le développement tumoral. Nous avons montré que les CHC liés au VHB présentaient des caractéristiques cliniques et pathologiques différents que ceux d’autres étiologies : 1). Les mutations inactivatrices d’HBx sont sélectionnées dans les tissus tumoraux des CHC liés au VHB, suggérant qu’il existe une pression de sélection spécifique au cours de l’hépatocarcinogenèse. 2). Chez les patients ayant un faible nombre de copies d'ADN VHB par cellule dans le foie non-tumoral, une corrélation avec les facteurs de risque supplémentaires (VHC/OH/NASH) a été identifiée, suggérant un effet coopératif pour la carcinogenèse induite par le VHB. 3). Les mutations TP53 sont associées à un pronostic moins favorable chez les patients ayant un CHC liés au VHB. 4). Les CHC liés au VHB montrent plus fréquemment des phénotypes progéniteurs, avec une surexpression des gènes impliqués dans la régulation du cycle cellulaire et codant pour les protéines onco-fœtales. Quatre SNPs précédemment identifiés par des études pangénomiques (GWAS) asiatiques ont été validés dans la population européenne. Les distributions alléliques semblent varier selon l’étiologie de la pathologie hépatique. Ces résultats soulignent la complexité de la prédisposition génétique au CHC, dont l’étude doit prendre en considération l’origine géographique des patients ainsi que les facteurs de risque associésHepatocellular carcinoma (HCC) is the most common primary liver tumors. Hepatic carcinogenesis is a complex and multifactorial process involving both genetic predisposition (e.g. SNPs) and environmental factors. Nearly 50% of HCC are caused by the hepatitis B virus (HBV) infection worldwide. During HBV infection, multiple genetic and viral alterations accumulate and promote tumor development. By analyzing resected HCC in France, we identified specific molecular features related to HBV infection. First, HBx inactivating mutations are selected in HCC tissues suggesting specific pressure of selection during hepatocarcinogenesis. Second, in patients with a low number of HBV DNA copies per liver cell, we identified additional risk factors like HCV infection, alcohol intake or NASH, suggesting a cooperative effect of these factors with HBV to induce the malignant transformation. Third, TP53 mutations associated with a poor prognostic for HBV infected resected HCC patients. At last, HBV-related tumors demonstrate more frequent progenitor phenotype compared to non-HBV HCC, with an up-regulation of genes that involved in cell cycle regulation and encoded onco-fetal/progenitor proteins. Four SNPs previously identified by genome-wide studies (GWAS) in Asian, have been validated in our European population. Allelic distributions seem to vary according to the etiologies of adjacent liver diseases. These findings underscore the complexity of the genetic predisposition of HCC; further study must consider the geographical origin of patients and associated risk factors
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Amaddeo, Giuliana. "Altérations génomiques des carcinomes hépatocellulaires liées au virus de l'hépatite B." Thesis, Paris 5, 2013. http://www.theses.fr/2013PA05S012.
Full textAbstract:
Contexte: Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est la plus fréquent des tumeurs primitives du foie. Près de 50% des CHC sont causés par une infection par le virus de l'hépatite B (VHB). Au cours des différents stades de l’infection par le VHB, des multiples altérations génétiques et/ou chromosomiques s'accumulent et favorisent ainsi le développement tumoral. Objectives: a) étudier, in vitro et in vivo, le rôle potentiel d’un nouveau gène susceptible d’être impliqué dans la carcinogénèse hépatique : IRF-2 (Interferon regulatory factor 2). Ce gène a été identifié comme fréquemment délété par analyse CGH-SNP dans les CHC liés à l’infection par le VHB. b) caractériser une série de CHC liés au VHB en étudiant le statut viral, les altérations génétiques et l’expression de différents gènes afin de mieux comprendre le rôle du VHB dans l’hépato-carcinogenèse et comparer ces différents paramètres avec une série de CHC non liés au VHB. Résultats : a) Dans une série de 125 CHC, Sandrine Imbeaud, au sein du laboratoire, a effectué une analyse CGH-SNP microarray et a identifié une région commune de délétion homozygote localisée en 4q34.3-35 comprenant le gène IRF-2 dans 4 échantillons. Nous avons ensuite mis en évidence par séquençage des mutations somatiques inactivatrices dans 2 autres tumeurs. In vitro, la sousexpression d’IRF-2 a entrainé une augmentation de la prolifération cellulaire et sa sur-expression a induit une promotion de l'apoptose cellulaire. In vivo, l’extinction d’IRF-2 était responsable de la formation de tumeurs de grande taille. Les 6 tumeurs inactivées pour IRF-2 étaient associées au VHB (p = 0.0003), et les mutations de TP53 et d’IRF-2 étaient mutuellement exclusives. La sousexpression de IRF-2 induisait une sous-expression de TP53 et une forte corrélation entre les expressions protéiques de p53 et de IRF-2 a été observée (r2 = 0,72, p = 0,004). En plus, on a observé que l’expression des gènes cibles directs de TP53 était modulée par le niveau d‘expression d’IRF-2. Nous avons émise l'hypothèse que IRF-2 pourrait altérer la fonction de p53 car IRF-2 est connue pour se lier à MDM2, un régulateur négatif de l’expression de p53. Le traitement des cellules inactivées pour IRF-2 avec MG132, un inhibiteur du protéasome, a induit la restauration de l'expression de p53. In vivo, le traitement avec bortézomib, un inhibiteur du proteasome utilisé en oncologie, a entrainé une régression des tumeurs inactivées pour IRF-2. b) Nous avons caractérisé sur le plan clinique et moléculaire une série de CHC liés au VHB et, ensuite, nous avons comparé nos résultats avec ceux d’une série de CHC liés à autres étiologies. Nous avons montré que les CHC liés au VHB présentaient des caractéristiques cliniques et pathologiques différentes de celles des CHC non liés au VHB : ils survenaient chez des patients plus jeunes (P < 0.0001), d'origine Africaine ou Asiatique (P < 0.0001), avec un taux sérique d'alpha-foeto protéine élevé (P = 0.008) et étaient sur le plan histologique des tumeurs peu différenciés (P = 0.04). Nous avons identifié des mutations inactivatrices du gène HBX dans 71% des tumeurs et dans 33% des tissus non tumoraux adjacents (P < 0.0001). Dans 63% des cas, le nombre de copies virales dans les tumeurs était plus faible que dans les tissus non tumoraux adjacents (P < 0.0001). Le gène TP53 était le gène le plus fréquemment muté dans les CHC liés au VHB (41%, P = 0.0002), avec des mutations R249S présentes dans 14 échantillons (16%, p < 0.0001). Ce type de mutation est classiquement associé à l'aflatoxine B1. Nous avons observé que les mutations de TP53 étaient un prédicteur indépendant de survie uniquement pour les patients infectés par le VHB. Enfin,Pas de résumé en anglais
Introduzione: Il carcinoma epatocellulare (HCC) è il tumore primitivo più comune del fegato. Nel mondo, quasi il 50% di tutti gli HCC sono causati dal virus dell'epatite B (HBV). Durante le fasi dell’ infezione da HBV, si possono accumulare alterazioni genetiche e / o cromosomiche e quindi promuovere lo sviluppo del tumore. Obiettivi: a) analizzare in vitro e in vivo il ruolo potenziale di un nuovo gene potenzialmente coinvolto nella carcinogenesi epatica: IRF-2 (Interferon regulatory factor 2). Questo gene è stato identificato mediante l’analisi CGH-SNP come frequentemente deleto negli HCC correlati all’ HBV. b) caratterizzare una cohorte di HCC correlati all’HBV studiandone lo stato virale, le alterazioni genetiche e l’espressione di differenti geni al fine di comprendere meglio il ruolo di HBV nella carcinogenesis epatocellulare e confrontare questi parametri con una cohorte di HCC a diversa eziologia. Risultati: a) In laboratorio, Sandrine Imbeaud ha condotto un'analisi SNP-CGH microarray su una cohorte di 125 HCC che ha evidenziato una regione deleta in maniera omozigote localizzata sul braccio lungo del cromosoma 4 (4q34.3-35) in 4 campioni tumorali. La regione comprende un unico gene: IRF2. In altri due campioni sono state identificate mutazioni somatiche inattivatrici mediante sequenziamento della regione codante di IRF-2. In vitro, la soppressione di IRF-2 ha indotto un aumento della proliferazione cellulare, al contrario, la sua sovra-espressione ha causato un aumento dell’apoptosi cellulare. In vivo, la soppressione di IRF-2 è responsabile della formazione di tumori più grandi nei topi nude. I 6 tumori mutati per IRF2 sono tutti correlati all’ HBV (p = 0,0003. Nella cohorte di tumori studiati, le mutazioni di TP53 e di IRF-2 erano vicendevolmente esclusive. Inoltre, la soppressione dell’espressione della proteina IRF-2 induceva una riduzione dell’espressione della proteina p53 ed una stretta correlazione tra l’espressione delle due proteine è stata osservata (r2 = 0,72, p = 0,004). Inoltre, abbiamo dimostrato che il livello di espressione di IRF-2 è in grado di modulare l'espressione di alcuni geni target di TP53. Abbiamo, quindi, ipotizzato che IRF2 possa alterare la funzione di p53. Come è noto IRF2 può legarsi a MDM2, un regolatore negativo di p53 che induce la sua degradazione proteasomica. Il trattamento di cellule inattivate per IRF2 con MG132, un inibitore del proteasoma, induceva il restauro dell’espressione di p53. In vivo, il trattamento con bortezomib, chemioterapico inibitore del proteasoma, ha determinato la regressione del tumore inattivato per IRF2. b) 86 HCC correlati all’HBV sono stati caratterizzati dal punto di vista clinico e molecolare ed in seguito sono stati confrontati una serie di 90 HCC correlati ad altre eziologie. Gli HCC correlati all’HBV hanno delle caratteristiche cliniche e patologiche diverse da quelle degli HCC d’altra eziologia: insorgenza in pazienti più giovani (p <0,0001), di origine africana o asiatica (P <0.0001), alfa-fetoproteina sierica elevata (P = 0.008) e scarsa differenziazione istologica (P = 0,04). Mutazioni inattivatrici del gene HBX sono state identificate nel 71% dei tumori e il 33% dei tessuti non tumorali adiacenti (P <0.0001). Nel 63% dei casi, il numero di copie virali nel tessuto tumorale era inferiore rispetto al tessuto non tumorale adiacente (p <0,0001). Il gene TP53 è stato il gene più frequentemente mutato nella serie di HCC correlati a HBV (41%, p = 0,0002), con una considerevole presenza di mutazioni al codone 249 (R249S) (16%, p <0,0001). Questo tipo di mutazione è associate classicamente all’ aflatossina B1. Abbiamo osservato, inoltre, che TP53 mutato era un predittore indipendente di sopravvivenza solo per i pazienti infetti da HBV. Infine,
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Cova, Lucyna. "Le virus de l'hépatite B du canard (DHBV) comme modèle pour l'étude de la réplication du virus de l'hépatite B humaine (VHB) et de son rôle dans l'oncogenèse hépatique." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO10001.
Full textAbstract:
Au cours de la derniere decennie deux facteurs principaux ont ete impliques dans l'etiopathogenie du cancer hepatocellulaire (chc) chez l'homme: le virus de l'hepatite b (vhb) et un carcinogene chimique l'aflatoxine b1 (afb1). Nous avons utilise le canard infecte par le virus de l'hepatite b du canard (dhbv), tres proche du vhb, pour etudier le mecanisme de l'oncogenese hepatique. Apres avoir demontre la presence du dhbv dans les populations des canards domestiques francais et de canards sauvages colvert, nous avons isole differentes souches de ce virus, compare leurs proprietes biologiques et recherche leur eventuel pouvoir oncogene. En administrant l'afb1 pendant deux ans a des canards, infectes ou non par dhbv, nous avons reussi a induire des chc dans ces deux groupes et montrer un effet synergique de l'afb1 et de l'infection virale dans l'oncogenese hepatique chez le canard. D'autre part, nous avons utilise le modele du canard pour l'etude du role de proteines pre-s, composantes d'enveloppe virale, dans la replication du dhbv. En transfectant in vivo les canetons avec l'adn du dhbv mute au niveau de la region pre-s, nous avons demontre que ce virus peut se repliquer en depit de deletions ou insertions portant sur un total de neuf aminoacides introduits dans la partie c terminale de la proteine pre-s. A l'aide d'anticorps monoclonaux murins, nous avons identifie et localise au niveau des proteines pre-s, un epitope neutralisant conserve chez les differentes souches du virus dhbv et localise a la surface du virus
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Abou, Jaoude Georges. "Etude des protéines d'enveloppe du virus de l'hépatite B à l'étape d'entrée virale : utilisation du virus de l'hépatite Delta comme modèle expérimental." Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066331.
Full textAbstract:
Le virus de l’hépatite B (HBV) est un virus enveloppé à ADN. Sa nucléocapside est incluse dans une enveloppe composée de lipides et des protéines d’enveloppe virales dénommées grande (L), moyenne (M), et petite (S). Une caractéristique unique du cycle de réplication de l’HBV concerne le mécanisme d’assemblage des virions. Ces derniers sont produits en quantités mineures par rapport à l’abondante production de particules sous-virales (PSV) dépourvues de nucléocapside, que l’on retrouve en majorité dans un sérum infectieux. Les PSV sont constituées de lipides d’origine cellulaire et des protéines d’enveloppe HBV. Ces dernières assurent la dynamique d’assemblage des particules lipoprotéiques et recrutent la nucléocapside pour l’exporter sous forme de virions. Elles ont aussi la charge d’adresser les virions spécifiquement à la surface de la cellule cible, l’hépatocyte humain. Par ailleurs, les protéines d’enveloppe HBV peuvent également véhiculer la ribonucléoprotéine du virus de l’hépatite delta (HDV), un virus satellite occasionnel d’HBV dépourvu de système de propagation. Mon travail de thèse a consisté à étudier la fonction des protéines d’enveloppe HBV à l’entrée virale en utilisant le modèle HDV, et les cellules sensibles HepaRG. Il a permis de mettre en place un système sensible et fiable pour l’étude des fonctions des protéines d’enveloppe HBV à l’entrée virale. L’utilisation de ce système a permis de démontrer un rôle indispensable à l’entrée virale HDV du groupement myristate lié à la protéine L en son extrémité N-terminale. En outre, il a permis d’identifier, sur les protéines d’enveloppe, un nouveau déterminant d’infectiosité situé dans la boucle antigénique (BAG). Ce domaine constitue la cible principale des anticorps neutralisants, et il porte 8 résidus cystéine qui semblent jouer un rôle majeur à l’infection. La BAG porte donc un site actif à l’entrée virale qui pourrait faire l’objet d’un ciblage spécifique par de nouveaux antiviraux.
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Ghibaudo, David. "Caractérisation du virus GBV-B : développement d'un nouveau modèle d'étude du virus de l'hépatite C." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077081.
Full text
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Baginski, Isabelle. "Apport de l'amplification moléculaire à l'étude de la biologie du virus de l'hépatite B humaine (VHB)." Aix-Marseille 2, 1991. http://www.theses.fr/1991AIX22060.
Full textAbstract:
La technique d'amplification de l'adn ou polymerase chain reaction (pcr) du fait de son extreme sensibilite a de multiples applications dans le domaine du diagnostic des infections virales et l'etude approfondie des phenomenes qui leur sont associees. Nous avons applique cette technique au diagnostic et au suivi des infections chroniques par le virus de l'hepatite b humaine (vhb) et montrer en particulier la persistance du virus apres traitement antiviral et meme apres seroconversion hbs/anti-hbs indiquant la guerison du malade. C'est cependant dans les infections atypiques ou toutes les autres techniques diagnostiques s'averent insuffisantes que la pcr est precieuse. Ainsi nous avons analyse l'hypothese de l'existence d'un agent responsable d'hepatite non-a, non-b post-transfusionnelle (hpt). Trois donneurs et 2 receveurs impliques dans deux cas d'hpt sans aucun marqueur serologique du vhb ont ete etudies. Des sequences d'adn et vhb ont pu etre identifiees dans le serum et les lymphocytes des donneurs et receveurs impliques. L'absence de changement significatif au niveau de ces sequences permet de supposer que la transmission simultanee du virus de l'hepatite c (vhc) demontree chez ces patients est a l'origine du caractere silencieux de ces infections par le vhb. Une des explications possible a la persistance du vhb dans ces infections atypiques est l'existence de virus non ou peu repliquant dans les cellules lymphoides. Nous avons donc analyser la capacite du vhb a se repliquer au sein des lymphocytes infectes et montrer la presence d'adn et d'arn viral dans ces cellules
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Vuillermoz, Isabelle. "Étude génétique et fonctionnelle de la glycoprotéine E2 du virus de l'hépatite C : implication dans l'interaction de l'enveloppe virale avec les cellules et dans les phénomènes de résistance au traitement." Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10268.
Full textAbstract:
Le virus de l'hépatite C (VHC) pose un véritable problème de santé publique à l'heure actuelle. Il provoque en effet une infection chronique du foie chez 80 % des individus contaminés, qui prédispose à la cirrhose et au carcinome hépatocellulaire. Or, le traitement actuel combinant l'interféron (IFN) α et la ribavirine n'est efficace que chez la moitié des patients. Le VHC est caractérisé par une forte variabilité génétique qui jouerait un rôle important dans la persitance virale et la résistance au traitement. La glycoprotéine d'enveloppe E2, essentielle à l'entrée du virus dans la cellule, serait impliquée dans ces deux phénomènes. D'une part, son domaine PePHD lui permet in vitro d'inhiber la PKR, une kinase induite par l'IFNα et impliquée dans la défense antivirale non spécifique. Cependant, le rôle de ce domaine in vivo n'a jamais été confirmé. D'autre part, la variabilité importante de la région HVR1, un site majeur de neutralisation virale sur la protéine E2, permettrait au virus d'échapper à la réponse immune neutralisante. Cependant, certains résidus de cette région sont très conservés, suggérant un rôle biologique important mais qui n'a pas encore été identifié. En l'absence d'un système de culture du VHC, nous avons étudié la variabilité génétique du domaine PePHD chez de patients ayant un échappement viral sous bithérapie IFN-ribavirine, qui représente un modèle unique d'étude in vivo des facteurs de résitance au traitement (article 1). Nos résultats ont montré que le domaine PePHD n'était pas suffisant in vivo pour induire la résistance à l'IFN mais semblait prédisposer les virus de génotype 1 à cette résistance. De plus, nous avons mené une analyse fonctionnelle de la protéine E2 sauvage ou mutée sur 2 résidus très conservés de HVR1 (glycine406 et Thréonine385) par un test de fixation sur cellules d'hépatome en cytométrie en flux (article 2). Nos résultats suggèrent que ces résidus interviendraient plus dans le maintien de la conformation de HVR1 que dans l'interaction directe avec la surface cellulaire. Néanmoins, ils n'excluent pas un rôle dans une autre étape du processus d'entrée que l'attachement à la membrane cellulaire
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Legrand, Abravanel Florence. "Implications thérapeutiques de la variabilité génétique des génotypes 4 et 5 du virus de l'hépatite C." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/194/.
Full textAbstract:
La sensibilité à l'interféron et la variabilité génétique des génotypes 4 et 5 du virus de l'hépatite C (HCV) ont été étudiées. La réponse au traitement par l'interféron a été étudiée en contrôlant les principaux facteurs influençant la réponse au traitement. Nous avons montré la bonne sensibilité intrinsèque du génotype 5 à l'interféron; alors que le génotype 4 semble un génotype difficile à traiter. La diversité des souches HCV de génotype 4 a été démontrée chez 166 patients du sud de la France en analysant différentes régions génomiques. Douze sous-types différents ont pu être mis en évidence ainsi que 3 souches dont le sous-type n'a pu être déterminé. Nous avons montré la diffusion de ce génotype chez les patients toxicomanes. L'étude de la diversité des virus de génotype 5 nous a conduit à caractériser un virus HCV recombinant 2/5We studied the genetic variability of hepatitis C virus (HCV) genotypes 4 and 5 and their sensitivity to interferon-based treatment. Their sensitivity to interferon was studied by controlling the major factors influencing the response. We demonstrated that genotype 4 should be considered as a difficult to treat genotype, whereas genotype 5 responds well to interferon. The variability of genotype 4 strains identified in 166 patients from South-Western France was assessed by sequencing several regions of the genome. Twelve subtypes were identified and 3 strains could not be subtyped. We have demonstrated that genotype 4 spreads within intravenous drug users in France. Lastly, we characterized a naturally occurring recombinant genotype 2/5 hepatitis C virus
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Bouffard, Pascal. "Infection des cellules d'origine hématopoiétique par le virus de l'hépatite B humaine." Lyon 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LYO1T064.
Full text
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Lucifora, Julie. "Réplication du virus de l'hépatite B et réponse intracellulaire à l'infection virale." Lyon 1, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/34/25/83/PDF/211-2008_-_Manuscrit_These_Julie_Lucifora.pdf.
Full textAbstract:
Le VHB est un problème majeur puisque les 350 millions de porteurs chroniques existant ont un risque accru de développer une cirrhose ou un carcinome hépatocellulaire. Compte tenu du manque de système d'étude du VHB in vitro qui soit facile d'accès et pleinement satisfaisant, l'objectif était d'améliorer l'un de ceux qui utilisent des baculovirus VHB recombinants pour délivrer le génome VHB dans des cellules hépatocytaires. La pertinence de ce système pour réaliser des tests phénotypiques et étudier le « fitness » des mutants résistants aux antiviraux a ensuite été démontrée. Enfin, l'utilisation de ces baculovirus VHB recombinants dans des cellules HepaRG a permis de mettre en évidence une réponse IFN efficace de l'hépatocyte suite à la synthèse des protéines du VHB. Ceci constitue une donnée nouvelle dans l'étude des interactions virus/cellules puisque le VHB était considéré jusqu'à présent comme un virus silencieux vis-à-vis de la réponse innée cellulaire. L'ensemble de ces résultats a des implications importantes dans la compréhension des mécanismes de persistance du VHB et le développement de nouveaux modèles cellulaires d'infectionHBV is a major problem issue since the 400 million existing chronic carriers have greater risk to develop cirrhosis or hepatocellular carcinoma. Because of the lack of relevant and convenient in vitro HBV studying model, the aim was to improve the one that uses HBV recombinant baculoviruses to deliver HBV genome in hepatocytes. Relevance of this improved system was then demonstrated for phenotypic and resistant mutant fitness analysis. Finally, with the use of HBV recombinant baculovirus in HepaRG cells, an HBV-mediated effective IFN response within cells was highlighted. This constitutes new data in the study of virus/host cell interaction since HBV was considered as a “stealth” virus until now. Taken together, these results have important implications in the comprehension HBV persistence mechanisms and in the development of new cellular models of infection
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Peltekian, Cécile. "Activité antivirale de la protéine MxA contre le virus de l'hépatite B." Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077139.
Full text
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Patient, Romuald. "Obtention de particules sous-virales d'enveloppe du virus de l'hépatite C." Thesis, Tours, 2008. http://www.theses.fr/2008TOUR3108.
Full textAbstract:
En 1989, près de quinze ans après la mise en évidence d’une forme d’hépatite virale « non A-non B », le virus de l’hépatite C (VHC) a pu être isolé et son génome séquencé. En presque vingt ans, de nombreuses avancées techniques majeures ont permis de mieux comprendre le cycle de réplication de ce virus. Cependant, l’infection par ce virus représente actuellement la première indication de transplantation hépatique dans les pays industrialisés. On estime que 3% de la population mondiale est constituée de porteurs chroniques du VHC ; faisant de cette maladie un problème majeur de santé publique. De plus, même si des thérapies anti-virales sont disponibles pour enrayer la réplication du VHC, ces traitements ne sont vraiment efficaces que pour la moitié des patients traités. Malgré une recherche intensive, il n’existe toujours pas de vaccin préventif contre le VHC ayant fait la preuve définitive de son efficacité. La plupart des candidats vaccins en développement reposent sur l’utilisation de formes tronquées des protéines d’enveloppe du virus, constituant des immunogènes probablement moins pertinents que les formes complètes retrouvées sur l’enveloppe virale. L’objectif de ce travail de thèse a donc été de développer et de produire des particules dites sous-virales d’enveloppe constituées uniquement de l’enveloppe lipoprotéique du virus comme candidat vaccin potentiel contre le VHC, en exploitant les stratégies utilisées pour la production du vaccin contre le virus de l’hépatite B (VHB). En effet, le vaccin contre l’hépatite B repose sur la capacité de la petite protéine d’enveloppe S du VHB à générer spontanément des particules d’enveloppe vides sécrétées et non infectieuses. L’utilisation de ces particules comme vaccin a fait ses preuves depuis maintenant plus de vingt ans. Au cours de ce travail, nous avons dans un premier temps développé un modèle d’étude de la morphogenèse de ces particules sous-virales du VHB, basé sur la production de la protéine S du virus à l’aide d’un vecteur dérivé du génome du virus de la Forêt de Semliki (SFV). Ce modèle s’est avéré déterminant pour apporter des informations originales sur la morphogenèse et le trafic intracellulaire des particules sous-virales d’enveloppe du VHB. Nous avons pu montré que le bourgeonnement de ces particules au sein du réticulum endoplasmique (RE) se fait initialement sous forme de structures filamenteuses ; contrairement à ce qui était présumé dans le modèle couramment admis. Empaquetés et transportés vers un compartiment intermédiaire entre le RE et l’appareil de Golgi (ERGIC), ces filaments sont ensuite convertis en particules sphériques qui seront sécrétées. Dans un second temps, ce modèle nous a permis d’étudier les capacités d’assemblage en particules sous-virales d’enveloppe de différentes protéines chimères d’enveloppe VHC-VHB. Nous avons démontré que ces protéines de fusion, contenant la totalité de la protéine d’enveloppe E1 ou E2 du VHC, étaient capables de s’assembler puis d’être sécrétées sous forme particulaire lorsqu’elles étaient co-produites avec la protéine S sauvage du VHB. De telles particules, morphologiquement similaires à celles du vaccin contre l’hépatite B, pourraient donc constituer la base d’un vaccin prototype. Le système d’expression transitoire utilisé pour ces expériences ne permettant pas de produire ces particules en grande quantité, des clones cellulaires de la lignée CHO produisant de manière stable les particules d’enveloppe chimèriques ont été développés. Si comme nous l’espérons ce vaccin prototype donnait des résultats encourageants, sa production pourrait s’appuyer à terme sur les procédures industrielles existantes pour la production du vaccin contre le VHB, dans le but d’obtenir à grande échelle un vaccin protégeant à la fois contre l’hépatite B et l’hépatite CN/a
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Lainé, Sébastien. "Identification et caractérisation de PAP22 : partenaire cellulaire de la protéine P22 du virus de l'hépatite B humaine." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2003. http://www.theses.fr/2003VERS0040.
Full textAbstract:
L'hépatite B est encore, à ce jour, responsable de l'apparition de nombreux hépatocarcinomes. Ces derniers sont le résultat de l'hépatite chronique, caractérisée par le maintien du virus dans l'organisme. Dans le but de comprendre quel(s) mécanisme(s) est(sont) responsable(s) du développement de la chronicité, nous avons axé nos recherches sur une protéine semblant jouer un rôle dans l'établissement de la persistance virale : l'antigène " e " du VHB (HBe). Néanmoins, les mécanismes mis en jeu sont encore obscurs. A l'inverse de son rôle, la voie de biosynthèse d'HBe a été bien décrite. HBe est issue de la maturation du précurseur P25, dans la voie de sécrétion. Notre laboratoire s'est plus particulièrement intéressé au rôle de l'un des précurseurs de HBe, la protéine P22. Nous avons montré que P22 interagit spécifiquement avec une protéine cellulaire de 32 kDa, nommée PAP22 pour Protéine Associée à P22, non identifiée au début de ces travaux de thèse. Grâce à la mise au point d'un système 'interaction in vitro basé sur la sur-expression d'une protéine P22 recombinante, nous avons identifié PAP22 comme étant la protéine cellulaire gC1qR. Les études bibliographiques ont montré que gC1qR est impliquée dans différents mécanismes allant de l'épissage, à l'apoptose en passant par la régulation de la réponse immunitaire. Nous avons élaboré et testé des hypothèses quant à l'implication du complexe P22/gC1qR dans l'établissement de la persistance virale via un contrôle du niveau apoptotique cellulaire. Ainsi, nous avons démontré que ce complexe peut agir sur l'épissage de l'ARN prégénomique du VHB et ainsi contrôler la synthèse d'une protéine virale pro-apoptotique nommée HBSP. De plus, nous avons montré que gC1qR peut contrôler le niveau apoptotique cellulaire et que ce contrôle peut être régulé par la présence de la protéine P22 Ces travaux de thèse permettent d'ouvrir une nouvelle voie d'étude du rôle de l'antigène HBe, en mettant en évidence un rôle plus important de la protéine P22, que celui de simple précurseurThe HBV virus responsible for hepatitis B is still a worldwide health issue. Its ability to stay as an episome in infected cells is responsible for chronicity, which can lead to hepatocarcinoma and cirrhosis. We focused our research on the HBe antigen of HBV, which seems implicated in viral persistence. Hbe is a cleavage product of the p22 protein. We have show a specific interaction between P22 and 32kDa cellular protein we named PAP for protein associated to P22. Using an in vitro interaction assay based on over expressing recombinant P, we identified PAP22 as gClqR. Bibliographical data indicate roles of PAP22 in spicing, apoptosis and the immune response. We could demonstrate a rôle of the P22/gC1qR complex into the HBV pre-genome spicing, which, therefore, implies a control of the pro-apoptotic HBSP protein by P22/gC1qR. Moreove, we have shown thet gClqR regulates apoptosis in a p22-sensitive manner. Our data suggest a possible role of this complex in allowing viral persistence through a tight control of apoptosis. This work opens new avenues in studying HBe functions by demonstrating specific functions of P22 thet are independent from its precursor role
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Le, Duff Yann. "Etude de déterminants d'entrée virale et de morphogenèse du virus de l'hépatite B." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077232.
Full textAbstract:
Le mécanisme de bourgeonnement du virus de l'hépatite B (HBV) repose entièrement sur ses protéines d'enveloppe. Celles-ci s'oligomérisent et bourgeonnent spontanément dans la lumière du réticulum endoplasmique (RE), essentiellement sous la forme de particules sous-virales vides, sécrétées en abondance par une cellule infectée. Occasionnellement, les protéines d'enveloppe recrutent la nucléocapside HBV et conduisent à la formation de virions complets, ou particules de Dane. Ce mode de bourgeonnement atypique est parasité par les ribonucléoprotéines du virus de l'hépatite delta (HDV), qui s'associent aux protéines d'enveloppe et sont sécrétées sous la forme de virions HDV. Les protéines d'enveloppent HBV sont au nombre de trois : la petite, S-AgHBs, la moyenne, M-AgHBs et la grande, L-AgHBs. Elles partagent un domaine C-terminal commun et diffèrent par la taille de leur extrémité N-teminale. La protéine S est constituée du seul domaine S, la protéine M des domaines S et preS2 et la protéine L-AgHBs, des domaines S, preS2 et preSl. La protéine S-AgHBs est le moteur du bourgeonnement des particules HBV et HDV. C'est une protéine intégrale synthétisée à la membrane du RE. Son domaine N-terminal contient deux domaines transmembranaires délimitant une boucle cytosolique et une boucle antigénique (BAG), présentée à la surface des virus. Sa partie C-terminale est très hydrophobe et prédite comme membranaire. Par ailleurs, deux déterminants d'infectiosité ont été identifiés sur preSl et la BAG. La première partie de nos travaux a consisté à caractériser le mode de fonctionnement des deux déterminants d'infectiosité. Nos résultats sont en faveur d'un fonctionnement indépendant de preSl et de la BAG à l'entrée virale. De plus, le rôle de la BAG nécessiterait la coordination de nombreuses protéines de surface alors que seulement quelques domaines preSl sont suffisants à l'infection. Finalement, le mode de fonctionnement de preSl semble reposer sur une coopération allostérique des différents sous-éléments qu'il contient. La deuxième partie de nos travaux a consisté à préciser la topologie du domaine C-terminal de la protéine S-AgHBs de manière à caractériser plus précisément son rôle dans la morphogénèse HBV et HDV. Cette région s'associerait aux membranes cellulaires vraisemblablement par les domaines 154-174 et 202-226. Les résidus 202-226 sont très hydrophobes et pourrait participer, avec la région 71-102, à la dimérisation des protéines de surface. La région 154-174 est probablement organisée en hélice amphiphile positionnée parallèlement aux membranes ; elle pourrait participer au recrutement du cholestérol. Enfin, les résidus 193-204 serait cytoplasmiques, en accord avec leur fonction dans le recrutement de la ribonucléoprotéine HDVThe budding mechanism of the Hepatitis B Virus (HBV) is entirely dépendent on its envelope proteins. These proteins form oligomers and spontaneously bud into the lumen of the endoplasmic réticulum (ER), mainly as empty subviral particles that are secreted in large quantities by infected cells. The envelope proteins occasionally recruit HBV nucleocapsids leading to the formation of complete virions also called Dane particles. Ribonucleoproteins of the Hepatitis Delta Virus (HDV) take advantage of this unusal budding mechanism: they bind to the envelope proteins and are secreted as HDV virions. There are three HBV envelope proteins: the small protein S-AgHBs, the medium protein M-AgHBs, and the large protein L-AgHBs. They share a common C-terminal domain but the size of their N-terminal domains differs. The S protein contains only the S domain, while the M and the L proteins consist respectively of the S and preS2 domains, and the S, preS2, and preSl domains. The S-AgHBs protein drives HBV and HDV budding. This integral protein is synthesized at the ER membrane. Its N-terminal region contains two transmembrane domains forming a first cytosolic loop and an antigenic loop (AGL) that is presented at the surface of the viruses. Its C-terminal domain is highly hydrophobic and predicted as a membrane domain. In addition two infectivity determinants have been identified on the preSl domain and the AGL. First our study aimed at characterizing the mechanism of action of the two infectivity determinants. Our results indicate that these determinants are functionaly independant at viral entry. The role of the AGL may require the intervention of many surface proteins while only a few domains of preSl are sufficient for infection. Finally, the mode of action of the preSl domain seems to be mediated by an allosteric cooperation of its sub-elements. The second part of our study aimed at specifying the topology of the C-terminal domain of the S-AgHBs protein in order to further characterize its role in HBV et HDV morphogenesis. This region most likely associates with cellular membranes through the 154-174 and 202-226 domains. The 202-226 residues are highly hydrophobic and may be implicated, together with the 71-102 region, in the surface proteins dimerization. The 154-174 region is presumably organized as an amphipathic helix, which is parallel to membranes. It may participate in cholesterol recruitment. Lastly, residues 193-204 may be exposed cytoplasm in agreement their role in HDV ribonucleoprotein recruitment
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Bachelot, Etienne. "Production in vitro par les lymphocytes circulants d'anticorps spécifiques du virus de l'hépatite B." Montpellier 1, 1990. http://www.theses.fr/1990MON11212.
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Mackiewicz, Vincent. "Variabilité génétique du virus de l'Hépatite A : conséquences sur le diagnostic, l'épidémiologie et la physiopathologie de l'infection." Paris 11, 2008. http://www.theses.fr/2008PA11T028.
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Hallez, Camille. "Impact des facteurs de restriction sur la réplication du virus de l'hépatite B." Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066390.
Full textAbstract:
Le Virus de l'Hépatite B (VHB) infecte 350 millions d'individus à l'échelle mondiale. Il est responsable d'hépatites aigües pouvant évoluer vers la chronicité puis le carcinome hépatocellulaire. Le génome du VHB est constitué d'un ADN partiellement bicaténaire. De par sa nature, il pourrait être sensible à l'action de certaines nucléases cellulaires qui hydrolysent l'ADN double brin. Nous avons ainsi mis en évidence la capacité de la Désoxyribonuclase I (DNase I) à être incorporée dans les virions du VHB, ce qui permet la dégradation du génome viral et la diminution de son infectivité. La DNAse I est particulièrement surexprimée en hypoxie et pourrait contribuer à l'élimination du virus chez les individus cirrhotiques. Par ailleurs, nous avons montré que la cytidine désaminase APOBEC3DE appartenant à une famille de facteurs de restriction viraux possède un rôle proviral. En effet, son association avec APOBEC3F et APOBEC3G mène à une diminution de l'activité de ces dernières et ceci favorise la réplication du VHB. La formation d'hétérodimères APOBEC3DE/APOBEC3F et APOBEC3DE/APOBEC3G semble génèrer un encombrement stérique ne permettant pas l'encaspidation d'APOBEC3F et APOBEC3G, raison pour laquelle le génome du VHB est moins muté lorsqu'APOBEC3DE est expriméeHepatitis B Virus (HBV) infects 350 millions people worldwilde. It triggers accute hepatitis that can turn into cirrhosis then hepatocellular carcinoma. HBV genome is composed of a partially double-stranded DNA.Thus, it could be targeted by some cellular nucleases that hydrolyze double-stranded DNA. We have highlighted that Deoxyribunuclease I (DNase I) can be incorporated into HBV virions and degrade its genome, leading to a loss of viral infectivity. Moreover, DNase I is upregulated under hypoxia which is a caracteristic of liver cirrhosis. DNase I could be involved in HBV elimination in cirrhotic patients. In an other study, we found that APOBECDE, a cytidine deaminase of the same family than some restriction factors, has a proviral activity. Indeed, association of APOBEC3DE with APOBEC3F or APOBEC3G leads to a loss of cytidine deaminase activity and a better viral replication. When APOBEC3DE is associated with those two proteins, APOBEC3F and APOBEC3G cannot be incorporated into HBV virions. This is the reason why HBV is more infectious when APOBEC3DE is expressed
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Costa-Mattioli, Mauro. "Le virus de l'hépatite A : de sa quantification, à l'analyse de sa variabilité génétique en vue d'une nouvelle classification phylogénétique." Nantes, 2002. http://www.theses.fr/2002NANT11VS.
Full textAbstract:
Les analyses phylogénétiques de régions spécifiques du génome virale du virus de l'hépatite A (VHA) ont montré que différents génotypes pouvaient circuler à travers des régions géographiques diverses. Afin de déterminer la variabilité génétique et le mode d'évolution du VHA au cours des épidémies survenues en Europe et en Amérique du Sud, des analyses des séquences des régions VP1-amino-terminale, VP/2A, et de la région codant pour la protéine VP1 complète des souches isolées en France, au Kosovo, en Uruguay, au Chili et en Argentine ont été réaliseés. . . . L'analyse de la région codant pour la protéine VP1 a permis i) de proposer une nouvelle classification pour le VHA ii) de révéler l'émergence d'un nouveau variant, qui présente une délétion de 15 acides aminés dans la région VP1 immunogénique, iii) de déterminer le mode d'évolution du VHA. . . . Deux méthodes, l'un de distance, l'autre de maximum de vraisemblance ont mis en évidence pour la première fois un événement de recombinaison entre deux génotypes du VHAHepatitis A, is a significant cause of morbidity and socio-economic losses in many parts of the world. Genetic analysis of selected genome region of hep atitis A virus (HAV) suggested that distinct genotypes of HAV could be found in different geographic regions. In order to gain insight in to the genetic variability and mode of evolution of HAV during different epidemic outbreaks in Europe and South America, analysis of sequences data from the VP1-terminus, the VP1/2A and the complete VP1 region of HAV strain isolated in France, Kosovo, Uruguay, Chile and Argentina were performed. . . To explore further the genetic relationships between HAV viruses and to characterise the evolutionary mechanisms responsible for variation, sequences from the three major capsid proteins were subjected of detailed comparison. Phylogenetic profile and a maximum likelihood method provided evidence for the first time from a recombination event between two genotypes (VII and IB) of HAV in nature within the VPl coding region
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Ancelin, Valérie. "Politique de santé publique vis-à-vis de l'hépatite B en France." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05P008.
Full text
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Tong, Shuping. "Molecular characterization of hepatitis B virus variants unable to express HBe protein." Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO1T109.
Full text
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Qu, Di. "Hétérogénéité des génotypes du VHC en France." Lyon 1, 1995. http://www.theses.fr/1995LYO1T212.
Full text
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Tout, Issam. "Rôle du TLR9 et des lymphocytes B dans l'échappement du virus de l'hépatite B à l'immunité innée." Thesis, Lyon, 2017. http://www.theses.fr/2017LYSE1308/document.
Full textAbstract:
L'infection chronique par le virus de l’hépatite B (HBV) est un problème de santé majeur dans le monde et peut conduire à la cirrhose et à l’hépatocarcinome. Des réponses défectives des cellules T ont été démontrées, mais les événements précis qui peuvent contribuer à l'insuffisance des réponses des cellules B restent à déterminer. L'expansion et la différenciation optimales des cellules B reposent sur l'activité du récepteur Toll Like Receptor 9 (TLR9) qui détecte l'ADNdb et est exprimée chez l'homme principalement par les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) et les cellules B. L'impact de HBV sur TLR9 dans les cellules B humaines reste à explorer. Dans cette étude, nous avons exploré les effets de HBV sur l’expression et les fonctions médiées par TLR9 dans les cellules B humaines en utilisant une lignée cellulaire de cellules B ainsi que des lymphocytes B primaires. De plus, on a corroboré nos résultats dans une cohorte de patients HBV chroniques. L'expression de TLR9 a été réduite chez les toutes les sous-populations de cellules B du sang périphérique, exposées au VHB. Les fonctions des cellules B médiées par TLR9 comme la prolifération et la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires ont été abrogées en présence de HBV. Nos résultats montrent que l’antigène de surface HBsAg inhibe la phosphorylation du facteur de transcription CREB qui ne peut plus se lier sur son site CRE situé sur le promoteur TLR9 ce qui affecte la transcription de ce dernier. Enfin, nous avons corroboré nos résultats in vitro dans une cohorte de porteurs chroniques du HBV et constaté que l'expression et la fonction de TLR9 étaient significativement diminuées. Nos résultats révèlent le mécanisme qui induit une réponse immunosuppressive par HBV sur la fonction TLR9 dans les cellules B humaines, ce qui peut contribuer à la persistance de ce virus chez l'hôte et la complication de la phase chronique de la maladieChronic HBV infection is a major health problem worldwide. Ineffective T cell and antibody responses have been demonstrated, yet the precise events that may contribute to insufficient B cell responses remain to be determined. Optimal B cell function, expansion and differentiation rely on Toll Like Receptor 9 (TLR9) activity which senses dsDNA and is expressed in human mainly by plasmacytoid dendritic ( pDC) and B cells. The impact of HBV on TLR9 in human B cell subsets remains to be explored.Here, we investigated the effects of HBV on TLR9 function in human B cells. Both primary and B cell lines were used to analyze the effect of HBV on TLR9 expression and function. These results were corroborated in a cohort of chronically infected HBV patients. TLR9 expression was reduced in all peripheral blood B cells subsets exposed to HBV. B cell function mediated by TLR9, such as proliferation and pro-inflammatory cytokines secretion were abrogated in the presence of HBV. Our results show that the viral surface antigen HBsAg inhibited the phosphorylation of the transcription factor CREB which could no longer bind the CRE site located on the TLR9 promoter. Finally, we corroborated our in vitro findings in a cohort of chronic HBV carriers (CHB) and found that TLR9 expression and function were significantly suppressed.Our findings reveal the mechanism that induces an immunosuppressive response by HBV on TLR9 function in human B cells, which may contribute to HBV persistence in the host
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Mrani, Saad. "Caractérisation moléculaire des infections à VHB occultes au cours des hépatites C chroniques." Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10064.
Full textAbstract:
L’infection par le virus de l’hépatite B occulte, définie par la présence de l’ADN du VHB en l’absence d’AgHBs dans le sérum, a été retrouvée de manière fréquente dans les hépatites C chroniques. Afin de mieux cerner les mécanismes d’échappement du VHB occulte aux tests diagnostiques classiques et de déterminer les conséquences de cette co-infection sur l’évolution de l’hépatite C chronique, nous avons analysé, par des techniques moléculaires très sensibles développées au laboratoire, les sérums de 203 patients atteints d’hépatite C chroniques avant qu’ils ne soient traités. Les résultats de cette première étude ont montré que la prévalence des infections occultes chez les patients porteurs chroniques du VHC pourrait atteindre 20% en France et que la présence de l’infection à VHB occulte est associée à une mauvaise réponse au traitement ainsi qu’à l’aggravation des lésions hépatiques et à l’accélération de l’évolution vers l’hépatocarcinome. Afin de permettre la caractérisation moléculaire du VHB occulte, le génome entier a été amplifié, puis cloné et séquencé dans le cas particulier d’un patient VHC transplanté. L’analyse des différents clones n’a pas montré les mutations connues susceptibles d’expliquer l’absence de détection de l’AgHBs. Ces résultats suggèrent d’une part, l’implication d’autres facteurs dans la suppression de la réplication et l’altération de l’expression du VHB, d’autre part, l’importance des sites extrahépatiques dans l’infection à VHB occulte. Ces travaux soulignent la nécessité de développer de nouvelles approches diagnostiques et thérapeutiques dans la prise en charge du VHB occulte et particulièrement dans les co-infections avec le VHCOccult Hepatitis B infection (HBV), defined by HBV DNA positivity in absence of HBsAg in the serum was found in 30% of hepatitis of unknown aetiology and frequently among HCV chronic carriers. In order to better understand how HBV escape to diagnosis tests and determine the consequences of this co-infection on HCV chronic infection, we analyzed by ultra sensitive molecular tests developed in the lab, serum samples from 203 HCV chronic carriers before any antiviral treatment. The results from this first study showed that occult HBV infection frequency could reach 20% in France and that occult HBV infection may worsen the course of HCV infection being associated to a bad response to antiviral therapy and aggravation of liver disease. In order to perform the molecular characterization of hepatitis B viruses in cases of occult HBV infections, the whole HBV genome was amplified by a new technique developed in the lab, named Rolling Cycle Amplification (RCA), cloned and sequenced in a HCV transplanted case. The analysis of the cloned sequences did not show the presence of any of the known mutations in the viral genome that may explain HBsAg negativity. Our results suggest, on one hand, the implication of other factors in the suppression of the HBV replication and altered expression of HBV, on the other hand, the importance of extra hepatic sites of HBV replication during occult HBV infections, since it was able to persist after liver transplantation. Our work emphasise the need to develop new diagnostic and therapeutic tools in the case of occult HBV infections especially during co-infection with HCV
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Bekondi, Claudine. "Aspects cliniques et épidémiologiques des infections à virus de l'hépatite B en République Centrafricaine." Thesis, Nancy 1, 2008. http://www.theses.fr/2008NAN10129/document.
Full textAbstract:
La population du virus de l’hépatite B (VHB) a été classée en huit génotypes allant de A à H. Des études récentes ont montré que le génotype E du VHB (VHB/E) prédomine sur un vaste territoire allant du Sénégal à l'Angola. La République centrafricaine (RCA) est située en zone de forte endémie où la prévalence de l’infection chronique par le VHB est estimée à 15,4% chez les adultes. Une étude menée chez 196 patients atteints d’hépatite B chronique a permis d’obtenir 66 séquences complètes ou partielles d’ADN des VHB. L’analyse phylogénétique a montré que 62 souches appartenaient au génotype E, une au génotype A1 et 3 au génotype D. Une souche était un recombinant des génotypes E/D. Comme dans la plupart des pays d’Afrique Sub-saharienne le génotype E du VHB prédomine nettement en RCA, avec une faible variabilité (1,67%) sur l’ensemble des souches du génotype E déjà décrites. Ces résultats sont en faveur d’une introduction récente du génotype E dans l’espèce humaine avec un essaimage rapide dans les populations concernées. Une origine simienne de ces souches est possible étant donné les identités de séquences entre l’ADN du VHB/E et l’ADN du VHB du chimpanzé. La deuxième partie du travail est une étude clinique et biologique chez 68 patients hospitalisés pour une suspicion de carcinome hépatocellulaire (CHC). Tous les patients recrutés (100%) étaient infectés par le VHB. L’échographie a permis de confirmer un CHC chez 43 patients et la cytoponction a permis un diagnostic de certitude chez 14 malades. L’antigène HBs (AgHBs) était présent chez 10 de ces 43 patients et 7 sur ces 10 étaient co-infectés par le VHD. La moyenne du dosage de l’alpha-foetoprotéine était de 10394 UI/mL. Chez les 25 autres patients, 21 avaient de l’AgHBs, parmi ceux-ci 11 étaient co-infectés par le VHD. La moyenne du dosage de l’AFP était de 9 UI/mL. Le CHC est donc fréquent en RCA et les patients consultent à un stade terminal de la maladie. Ce travail confirme aussi la relation entre VHB et CHC en RCA. Le VHD est associé aux formes graves d’hépatite B chronique. Les prélèvements de sérum et de lésions hépatiques qui ont été obtenus permettront par la suite d’étudier la variabilité du gène X et ses relations avec le CHCHepatitis B virus (HBV) strains have been classified into eight genotypes A to H. Recent studies have shown that the HBV genotype E (HBV/E) predominates in a vast crescent spanning from Senegal to Angola. The Central African Republic (CAR) is an endemic country for HBV infection and prevalence of chronic infection in adults is estimated to be about 15.4%. A survey of 196 patients attending local hospital with symptoms of hepatitis has permitted to obtain 66 complete or partial sequences of HBV DNA. Phylogenetic analyses have shown that 62 strains belonged to Genotype E while one was of genotype A1, and three of genotype D. One strain presented a recombination between genotypes E and D. Genotype E is thus predominant in RCA as in most Sub-Saharan countries. The variability of strains is limited not only among CAR strains but when all strains isolated so far are compared (1.67 %), suggesting a recent introduction of HBV in the human species with a rapid expansion. A simian origin of the genotype E is possible considering the DNA sequence identities with chimpanzee HBV DNA. The second part of this study is a clinical and biological survey of 68 patients attending the “Hôpital de l’Amitié” of Bangui for a suspicion of hepatocellular carcinoma (HCC). All the patients (100 %) have been infected by HBV. Echography confirmed the suspicion of HCC in 43 patients and cytopathology ascertained the diagnosis for 14 patients for whom cytoponction was feasible. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) was present in 10 of these 43 patients, of whom 7 were co-infected with HDV. The average level of alpha-fetoprotein (AFP) was 10394 UI/mL. For the 25 other patients, HBsAg was detected in 21 of whom 11 were co-infected with HDV. Low level of AFP was observed (mean: 9UI/mL). This study shows that HBV related HCC is common in the country and that patients come to hospital late in the evolution of this disease. This study also confirms the association between HBV and HCC in CAR. HDV is associated with severe symptoms of hepatitis B. Serum and HCC lesions samples will be used to study variability of X gene and its relation with HCC
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Gheit, Tarik. "Mise en place d'un nouveau modèle primate pour l'étude du VHB." Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10050.
Full textAbstract:
Malgré l'existence d'un vaccin efficace, l'infection par le virus de l'hépatite B (VHB) demeure un problème majeur de santé publique. En effet, il demeure 400 millions de porteurs chroniques du VHB dans le monde dont 25% environ évoluant vers la cirrhose et/ou le carcinome hépatocellulaire. Actuellement, le Chimpanzé est le seul animal susceptible à l'infection par le VHB mais cet animal est protégé et onéreux. Le développement de nouveaux modèles primates infectables par le VHB est donc un enjeu majeur pour l'étude du cycle viral de ce virus et pour la recherche de nouveaux traitements anti-VHB. Actuellement, deux modèles sont actuellement utilisés pour tester l'efficacité de nouvelles approches thérapeutiques tel que le vaccin par ADN nu ou de nouvelles molécules antivirales. Il s'agit du canard de Pékin infecté par le DHBV et de la marmotte américaine infectée par le WHV. Afin d'étudier les mécanismes de l'infection par le VHB et tester de nouvelles approches antivirales, il serait essentiel de disposer d'un modèle primate tel que le Macaque qui est plus facile d'utilisation et d'accès que le chimpanzé tout en étant proche de l'homme. Dans le cadre d'une transfection intrahépatique expérimentale de 3 Macaques sylvanus par l'ADN du VHB nous avons pu observer que 2/3 M. Sylvanus développent des marqueurs propres à l'infection par le VHB avec des AgHBs et des séquences virales dans le sérum et le foie. Nous avons donc démontré pour la première fois la susceptibilité du M. Sylvanus au VHB humain. Nous travaillons également sur un autre modèle appartenant à une espèce voisine du M. Sylvanus, il s'agit du M. Cynomolgus originaire de l'île Maurice. Des marqueurs propres à l'infection par le VHB ont été retrouvés dans le foie et le sérum chez 42% des animaux. Récemment, il est admis que des primates, essentiellement de l'ancien monde, ont leurs propres virus de l'hépatite B. En effet, ces dernières années, des hépadnavirus propres à certaines espèces de primates ont été décrits. Ils concernent les Chimpanzés, les Gibbons, les Orangs-outans, les Gorilles mais aussi un seul singe du nouveau monde, le singe laineux. L'objectif principal est d'obtenir un modèle d'infection chronique par le VHB. En effet, en l'absence de modèle primate autre que le Chimpanzé, nous espérons à terme mettre en place un nouveau modèle pour tester l'efficacité thérapeutique de nouvelles molécules anti-VHB applicables en thérapie chez l'homme, et aussi pour évaluer la capacité de réplication de variants détectés chez des patients porteurs chroniques su VHB
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Boulestin, Anne. "Facteurs viraux et pharmacologiques impliqués dans la résistance du virus de l'hépatite C aux traitements antiviraux." Aix-Marseille 2, 2006. http://www.theses.fr/2006AIX20686.
Full textAbstract:
Le traitement de l'hépatite chronique C repose sur l'administration d'interféron alpha (IFN-α) combiné à la ribavirine. La glycoprotéine E2 et la protéine NS5A ayant été impliquées dans la résistance au traitement, nous avons étudié ces deux gènes et n'avons pas trouvé de lien entre leur séquence et l'issue du traitement. L’impact du génotype et de la charge virale sur la réponse précoce a été évalué. La réponse immune préthérapeutique apparaît déterminante, mais une immunothérapie par l’Il-2 s'est révélée décevante. Des concentrations circulantes suboptimales d'IFN-α sont associées à une mauvaise réponse précoce chez les patients dont le poids est élevé. Une méthode biologique est optimale pour comparer les concentrations circulantes des deux formes d'IFN pégylé, leurs activités antivirales intrinsèques n’étant pas équivalentes. Les paramètres pharmacologiques sont impliqués dans la réponse au traitement cependant l'étude de la réponse immune des patients serait informativeAlpha Interferon (IFN-α) combinated to ribavirin is the mainstay of the treatment of chronic hepatitis C. Since glycoprotein E2 and protein NS5A have been involved in resistance to treatment, we studied these two genes and failed to find a correlation between their sequence and treatment outcome. Genotype and viral load were shown to affect early response. Although pretherapeutic immune response appears to be decisive, an Il-2 based immunotherapy gave disappointing results. We also studied IFN-α pharmacokinetics. Suboptimal serum concentrations of IFN-α were associated with a poor early response to treatment in high weighted patients. A bioassay allows to compare serum concentrations of the two forms of pegylated IFN, as these two molecules are not equivalent in terms of antiviral potency. Pharmacological parameters play a role in response to treatment but study of patient immune response could give new insights
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Gourion, Delphine. "Etude des différents vaccins recombinants dirigés contre l'hépatite B, disponibles en officine en 1996." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05P099.
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Fournier, Maëlenn. "Implication du gène core dans l'accumulation de l'ADN circulaire clos de façon covalente du virus de l'hépatite B." Thesis, Lyon 1, 2014. http://www.theses.fr/2014LYO10058/document.
Full textAbstract:
La particularité de ce virus de l'hépatite B est la synthèse d'un ADN circulaire clos covalent (ADNccc) qui est la forme de persistance du virus dans la cellule. Cet ADN est maintenu à une copie par cellule en moyenne chez l'homme grâce à un recyclage des nucléocapsides dans le noyau. En effet, durant le cycle viral, les nucléocapsides sont soit redirigées dans le noyau pour former de l'ADNccc, soit enveloppées puis sécrétées pour former de nouveaux virions. Du fait de son maintien au sein de l'hépatocyte, la formation et la régulation de l'ADNccc restent des éléments clés du traitement antiviral. Il a été montré in vitro que l'accumulation de cet ADN était régulée par les protéines d'enveloppe. Lors de l'étude du taux d'ADNccc dans des biopsies de foie de patients coinfectés HIV-HBV chronique, il a été découvert un patient présentant 300 fois plus d'ADNccc intrahépatique que la moyenne de la cohorte. L'objectif de ma thèse a été de comprendre quel était le mécanisme conduisant à cette accumulation d'ADNccc in vivo. Cela nous a permis de mettre en évidence le rôle du gène core dans l'accumulation de l'ADNcccThe feature of hepatitis B virus is the synthesis of a covalently closed circular DNA (cccDNA) which is the persistence form of the virus in cell. cccDNA is maintained to 1 copy per human cell thanks to the recycling of capsids into the nucleus. Indeed, during the viral cycle, capsids are either transported into the nucleus to form cccDNA or enveloped and secreted to form new infectious virions. Because of its maintenance in the hepatocyte, cccDNA formation and regulation are still key elements of antiviral treatment. It has been shown that, in vitro, cccDNA accumulation was regulated by envelope proteins. Upon the study of cccDNA levels in liver biopsies of HIV-HBV co-infected patients, an individual with a cccDNA level 300 fold higher than the average of the cohort was identified. My thesis objective was to understand which is the mechanism leading to the cccDNA accumulation observed in vivo. This allowed us to highlight the role of core gene in cccDNA accumulation
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Nousbaum, Jean-Baptiste. "Variabilité génétique du virus de l'hépatite C : implications dans la résistance au traitement anti-viral par l'interféron alpha." Brest, 2001. http://www.theses.fr/2001BRES3102.
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Desrames, Alexandra. "Etude de la structure de la petite protéine d'enveloppe du virus de l'hépatite B." Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077161.
Full textAbstract:
L'infection chronique par le virus de l'hépatite B (HBV) reste un problème de santé publique majeure à l'échelle mondiale puisqu'elle touche près de 300 millions d'individus. Le HBV est un virus à ADN de la famille des Hepadnaviridae, dont l'enveloppe du virion est composée de lipides d'origine cellulaire et de glycoprotéines transmembranaires de trois types, S-, M- et L-AgHBs. La protéine S- AgHBs, majoritaire dans l'enveloppe virale, est l'élément moteur de l'assemblage, et elle porte dans le domaine exposé à la surface des particules virales, un déterminant immunodominant appelé "déterminant- a" contre lequel la majorité des anticorps neutralisants sont dirigés. Ce déterminant antigénique est intimement associé à un déterminant du caractère infectieux qui assure l'interaction avec les sulfates d'héparane à l'étape initiale d'entrée. A ce jour, nous possédons très peu d'information sur la structure de la boucle antigénique (BAG) de la protéine S-AgHBs qui sous-tend le caractère antigénique et fonctionnel d'entrée virale. L'objectif du travail de thèse était d'obtenir des informations sur l'organisation tridimensionnelle du polypeptide BAG, afin de mieux comprendre son rôle à l'étape d'entrée virale. La première étape a été de déterminer la sous-unité minimale de l'enveloppe des particules virales, qui porte le déterminant-a, en utilisant une série d'anticorps monoclonaux spécifiques de ce déterminant. Nous avons montré que la plupart des anticorps étaient bien spécifiques d'épitopes conformationnels, qu'ils étaient neutralisants, et qu'ils réagissaient avec des formes dimériques de protéines S-AgHBs. La majorité des épitopes du déterminant-a sont donc présents sur des dimères de protéines S-AgHBs solubles. De plus, nous avons mis en évidence la présence de deux isoformes de dimères à la surface des particules virales, que nous pouvons distinguer par leur comportement électrophorétique en gel SDS et par leur réactivité avec les anticorps monoclonaux. Nous pensons que les deux isoformes de protéines S-AgHBs correspondent à deux combinaisons de ponts disulfures inter- ou intra-chaînes entre les nombreux résidus cystéine de la BAG. Dans le but d'obtenir des préparations homogènes et pures de dimères de protéines S-AgHBs comme substrat de cristallisation, nous avons suivi plusieurs stratégies : la production de la protéine S- AgHBs par traduction in vitro, la production dans Escherichia coli, et la purification de particules virales à partir de surnageant de culture de cellules Huh-7 ou de plasmas infectieux. La stratégie de purification de particules produites en culture de cellules Huh-7 est apparue la plus fiable en termes de qualité et rendement, et la plus adaptée à l'analyse de mutants de la protéine S-AgHBsChronic infection with the hepatitis B virus (HBV) represents a major public health concern worldwide because an estimated 300 million individuals are affected. HBV is the prototype of the Hepadnaviridae family, a DNA virus with an envelope consisting of cell derived lipids associated to three types of transmembrane glycoproteins: S-, M- et L-HBsAg. S-HBsAg, the most abundant in the viral envelope, is the driving force of viral particle assembly, but it also bears in its ectodomain, an immunodominant determinant, referred to as the a-determinant, against which most of the neutralizing antibodies are directed. This antigenic determinant is also closely associated to an infectivity determinant responsible for interacting with cell surface heparan sulfate at the initial step of viral entry. As of today, we have little information on the structure of the antigenic loop (AGL) of the S-HBsAg protein that underlies the antigenic and function at viral entry. The aim of this thesis project was to gather information on the three dimensional organization of the AGL polypeptide, for a better understanding of its function at viral entry. The first step of the study was to identify the minimum subunit of the viral envelope, which bears the a-determinant. This was achieved using a panel of monoclonal antibodies that are specific for the a-determinant. We have shown most of the antibodies were: i) directed to conformational epitopes, ii) neutralizing, and iii) reactive with the dimeric forms of S-HBsAg. We concluded that most of a-determinant epitopes are conserved on the soluble dimeric forms of S-HBsAg. Furthermore, we demonstrate the presence in the HBV envelope, of two isomers of S- HBsAg dimers, which can be separated by SDS-PAGE and identified by isomer-specific antibodies. We propose that the two isomers correspond to two distinct networks of disulfide bonds between the numerous AGL cystein residues. In an effort to obtain pure and homogenous preparations of S-HBsAg dimers, as substrate for crystallization, we adopted several strategies: i) production of S-HBsAg by in vitro translation, ii) production in E. Coli, and iii) the purification of viral particles from transfected Huh-7 cell culture medium or from infectious plasmas. The purification of S-HBsAg dimers from cell culture-derived particles clearly appeared as the strategy of choice, in terms quality and yield, and flexibility of the approach in case of S- HBsAg mutants analysis
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Veillon, Pascal. "Facteurs prédictifs de la réponse au traitement des hépatites chroniques C : étude de la cinétique de deux marqueurs viraux et variabilité du gène NS5A." Angers, 2004. http://www.theses.fr/2004ANGE0515.
Full textAbstract:
Plus de 200 millions de personnes seraient infectées par le virus de l'hépatite C, soit près de 3 % de la population mondiale. Au cours de la dernière décennie, le traitement contre le VHC a vu de nombreuses avancées et des facteurs prédictifs de réponse au traitement ont été définis. Cependant, malgré ces avancées thérapeutiques, les patients infectés par un génotype 1 restent des patients ayant le moins de chance de répondre à un traitement antiviral par l'élimination persistante du virus. Nous avons étudié des facteurs viraux permettant de prédire la réponse au traitement : la cinétique de disparition de l'ARN et de l'antigène de capside du VHC sous traitement et la variabilité génétique du gène NS5A avant et durant le traitement. Nous avons trouvé plus de mutations dans le gène NS5A chez les répondeurs que chez les non-répondeurs, ainsi qu'une nouvelle insertion génétique dans la région V3 de ce gène formant une duplication de cette régionHepatitis C virus infects more than 200 million persons over the world, near 3 % of the world population. During the last decade treatment against HCV had numerous progresses and some predictive factors of response to treatment were described. Despite these progresses, patients infected with HCV genotype 1 have low virological response rate to antiviral treatment. We have studied different viral factors in prediction to response to treatment. We have studied the clearance of two viral markers (HCV RNA and HCV core antigen) under treatment. We have also analysed the genetic variability of NS5A protein before and during treatment, found more mutations in responders than in non-responders in the NS5A gene and a new insertion in the V3 region leading to a duplication of this region
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Lambert, Véronique. "Le virus de l'hépatite B du canard : modèle expérimental pour l'étude de la biologie des infections par les hépadnavirus." Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO1T255.
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Schorr, Olivier. "Régulation et inhibition de la formation de l'ADN superenroulé du virus de l'hépatite B du canard." Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO10097.
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L'infection chronique par le virus de l'hépatite B (VHB) induit hépatites aigue͏̈s et chroniques pouvant entraîner une cirrhose et un carcinome hépatocellulaire. Les thérapies actuelles ont une efficacité insuffisante, elles inhibent la réplication virale mais n'éliminent pas complètement la matrice transcriptionnelle du virus, l'ADN superenroulé (ADN CCC), persistant dans le noyau des cellules infectées. Dans ce contexte nous avons essayé de comprendre le devenir de la forme superenroulée de l'ADN viral lorsque les cellules se divisent. Nous avons montré, en utilisant des cultures primaires d'hépatocytes d'embryons de canards infectés expérimentalement, que cette entrée des hépatocytes dans le cycle cellulaire va favoriser l'amplification initiale d'ADN CCC. Nous avons ensuite regardé si l'entrée dans le cycle cellulaire avait un effet sur la transcription virale. Dans notre modèle, nous n'avons pas mis en évidence d'effet direct de l'entrée dans le cycle cellulaire sur les taux d'ARN viral. Cette étude nous a permis de conclure que, après la division d'hépatocytes chroniquement infectés, les cellules filles sont porteuses des protéines virales de capside ; suggérant que ces hépatocytes restent infectés après leur division. Enfin, nous avons cherché à inhiber la formation initiale de l'ADN CCC avec un nouvel analogue de nucléoside, l'adéfovir. Ce travail montre qu'un traitement préventif par l'adéfovir permet de diminuer fortement la réplication virale, de manière plus efficace que la lamivudine, sans toutefois inhiber totalement l'infection des hépatocytes par le virus de l'hépatite B. Nous avons donc montré très clairement que la persistance du virus dans les cellules lors du turn-over des hépatocytes est un point clé expliquant l'échec de l'élimination totale du virus lors des traitements de l'infection par le VHB. Ce travail a aussi permis de mettre en évidence la grande efficacité d'un nouvel analogue de nucléoside très prometteur : l'adéfovir.
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Samuel, Didier. "Mécanismes, prévention et traitement de la réinfection par le virus de l'hépatite B après transplantation hépatique." Paris 11, 1994. http://www.theses.fr/1994PA11T019.
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