Academic literature on the topic 'Virus de l'hépatite C (VHC)'

Background: HIV co-infection with hepatitis B (HBV) and/or hepatitis C virus (HCV) is common, largely due to shared routes of transmission, but paucity of data exists for long term treatment outcomes of HIV infected patients, and those co-infected with HBV and HCV despite the high burden in Nigeria. The aim of study was to describe the longterm treatment outcomes in HIV infected Nigerians and to assess the effect of HBV and HCV co-infections on longterm response to antiretroviral therapy (ART).Methodology: This was a retrospective study of HIV infected adults (> 18 years old) consecutively initiating ART between July 2004 and December 2007, who were followed up for 7 years (2011 and 2014). HBV and HCV infections were diagnosed by detection of serum hepatitis B surface antigen (HBsAg) and HCV antibody (HCVAb) respectively. HIV viral load and CD4 count were monitored 3-monthly after initiating ART, and treatment outcomes based on these were compared between patients with HIV mono-infection, HIV/HBV, HIV/HCV and HIV/HBV/HCV co-infections. Clinical and laboratory data of the patients were abstracted from the medical databases, FileMaker Pro, v 10, entered into Microsoft Excel, and analyzed using SPSS version 20.0.Results: A total of 2,800 adults were evaluated (median age of 35.5 years; 64.2% female), of whom 197 (7.0%) were co-infected with HBV, 53 (1.9%) with HCV, and 15 (0.5%) with HBV and HCV. During the 7-year period, 369 (13.2%) patients were lost to follow up. Immune reconstitution, measured by CD4 recovery, was lower in both HBV and HCV co-infections compared to HIV mono-infection, but this was not statistically significant (p>0.05). Median baseline HIV viral load was 4.63 log copies/ml for all groups, which decreased to undetectable level at a median time of 6 months and remained so for the study duration.Conclusion: This study revealed a higher virologic failure among HIV/HCV co-infected group compared to other groups. No immunological difference in ART treatment outcomes between HIV mono-infected and those co-infected with HBV and HCV after 7-year follow-up. Gradual rise in CD4 was found to be an immunological evidence of the body’s recovery from HIV, buttressed by the drop in viral load over the 7-year period.
 Keywords: ART, HIV, HBV, HCV co-infection, long term outcomes
 
 English title: Résultats à long terme du traitement antirétroviral hautement actif chez les Nigérians infectés par le VIH et ceux co-infectés par les virus des hépatites B et C
 Contexte: La co-infection par le VIH avec l'hépatite B (VHB) et/ou le virus de l'hépatite C (VHC) est courante, engrande partie en raison des voies de transmission partagées, mais il existe peu de données sur les résultats dutraitement à long terme des patients infectés par le VIH, et ceux co -infectés par le VHB et le VHC malgré le fardeau élevé au Nigéria. Le but de l'étude était de décrire les résultats du traitement à long terme chez les Nigérians infectés par le VIH et d'évaluer l'effet des co-infections par le VHB et le VHC sur la réponse à long terme au traitement antirétroviral (TAR).Méthodologie: Il s'agissait d'une étude rétrospective sur des adultes infectés par le VIH (>18 ans) ayant commencé un traitement antirétroviral consécutivement entre juillet 2004 et décembre 2007, suivis pendant 7 ans (2011 et 2014). Les infections par le VHB et le VHC ont été diagnostiquées par détection de l'antigène de surface sérique de l'hépatite B (AgHBs) et des anticorps anti-VHC (HCVAb) respectivement. La charge virale du VIH et la numération des CD4 ont été surveillées tous les trois mois après le début du TAR, et les résultats du traitement basés sur ceuxci ont été comparés entre les patients atteints de mono-infection VIH, VIH/VHB, VIH/VHC et VIH/VHB/VHC. Les données cliniques et de laboratoire des patients ont été extraites des bases de données médicales, FileMaker Pro, v 10, saisies dans Microsoft Excel et analysées à l'aide de SPSS version 20.0.Résultats: Un total de 2800 adultes ont été évalués (âge médian de 35,5 ans; 64,2% de femmes), dont 197 (7,0%) étaient co-infectés par le VHB, 53 (1,9%) par le VHC et 15 (0,5%) par le VHB et VHC. Au cours de la période de 7 ans, 369 (13,2%) patients ont été perdus de vue. La reconstitution immunitaire, mesurée par la récupération des CD4, était plus faible dans les co-infections par le VHB et le VHC que dans la mono-infection par le VIH, mais cela n'était pas statistiquement significatif (p>0,05). La charge virale VIH de base médiane était de 4,63 log copies / ml pour tous les groupes, ce qui a diminué à un niveau indétectable à une période médiane de 6 mois et le reste pendant toute la durée de l'étude.Conclusion: Cette étude a révélé un échec virologique plus élevé parmi le groupe co-infecté par le VIH / VHC par rapport aux autres groupes. Aucune différence immunologique dans les résultats du traitement TAR entre le VIH mono-infecté et ceux co-infectés par le VHB et le VHC après un suivi de 7 ans. L’augmentation progressive des CD4 s’est avérée être une preuve immunologique de la guérison du corps du VIH, étayée par la baisse de la charge virale au cours de la période de 7 ans.
 Mots clés: TAR, VIH, VHB, co-infection par le VHC, résultats à long terme
 
 

Contexte : La transmission du virus de l’hépatite C (VHC) a été épidémiologiquement liée aux établissements de santé, en particulier aux établissements de soins externes, tels que les cliniques d’endoscopie et d’hémodialyse. Celles-ci ont été largement attribuées à des manquements concernant la prévention et le contrôle des infections. Objectif : Décrire les mesures de santé publique face à une épidémie du VHC détectée parmi les patients d’une clinique de coloscopie en Ontario, et souligner les risques liés à l’utilisation de flacons à doses multiples et la nécessité d’améliorer les pratiques de prévention et le contrôle des infections dans les établissements de soins externes. Méthodes : Le dépistage du VHC a été effectué chez les patients et le personnel qui ont fréquenté la clinique ou y ont travaillé en même temps que l’intervention du cas indexé. Les échantillons de sang des cas positifs ont été soumis à un séquençage viral. Des inspections de la clinique ont permis d’évaluer les pratiques de prévention et le contrôle des infections, et un examen des dossiers a été effectué pour cerner les mécanismes plausibles de transmission. Résultat : Au total, 38 % des patients qui ont subi des interventions à la clinique le même jour que le cas indexé a reçu un résultat positif pour le VHC. Le séquençage génétique a montré un haut degré de similarité dans la séquence génétique du VHC parmi les échantillons positifs pour le VHC. L’examen des dossiers et l’inspection des cliniques ont permis de désigner l’utilisation de flacons à doses multiples de médicaments d’anesthésie chez plusieurs patients comme mécanisme plausible de transmission. Conclusion : Les travailleurs de la santé, en particulier ceux qui se trouvent dans des établissements d’intervention ou chirurgicaux externes, devraient être vigilants et s’en tenir aux pratiques exemplaires de prévention et le contrôle des infections, notamment celles liées à l’utilisation de flacons à doses multiples, afin de prévenir la transmission d’infections hématogènes dans les établissements de soins de santé.

En raison de l'absence de système de culture cellulaire capable de propager efficacement le virus de l'hépatite C, peu de données sont disponibles concernant les phases précoces de l'infection. Afin d'étudier la fusion et la pénétration du VHC dans la cellule hôte, nous avons choisi de fabriquer des virus pseudotypes VSV/VHC destinés à mimer l'enveloppe du VHC dans les phases précoces de l'infection. Dans un premier temps, les glycoprotéines d'enveloppe du VHC (E1 et E2) sont modifiées pour être localisées à la membrane plasmique, site de bourgeonnement du VSV. Pour cela, les ectodomaines de E1 (jusqu'à l'acide aminé 311) et de E2 (jusqu'à l'acide aminé 661) sont fusionnés aux domaines transmembranaire et cytoplasmique de la glycoprotéine G du VSV. La protéine de fusion E1-TmG est également fusionnée à l'EGFP afin de faciliter sa détection. Les protéines de fusion EGFP-E1-TmG et E2-TmG sont produites dans la cellule grâce à deux adénovirus recombinants non réplicatifs. Pour produire les virus pseudotypes, les cellules sont tout d'abord infectées par ces deux adénovirus recombinants à 37 ʿC, puis par le VSVtsO45 à 40,5 ʿC, température à laquelle la glycoprotéine G mutée du VSV est retenue au niveau du réticulum endoplasmique. Les particules ainsi produites sont constituées d'une enveloppe contenant les glycoprotéines E1 et E2 modifiées et leur génome est celui du VSVtsO45. Par conséquent, l'infection de cellules par les pseudotypes à 33 ʿC (température permissive de la mutation thermosensible) permet la production de VSVtsO45. Dans un deuxième temps, nous nous intéressons aux mécanismes utilisés par le VHC pour pénétrer dans la cellule. Nous avons ainsi pu déterminer que la fusion des membranes virale et cellulaire se déroulait à pH acide et qu'elle avait lieu dans l'endosome. Finalement, nos résultats indiquent que les pseudotypes pénètreraient dans la cellule majoritairement par endocytose clathrine-dépendante<br>Due to the lack of cell culture system to propagate efficiently HCV, only few data are available concerning the early stages of HCV infection. In order to study HCV fusion and penetration into host cells, we have chosen to generate VSV/HCV pseudotyped viruses to mimic HCV envelope during the early stages of infection. First, E1 and E2 HCV glycoproteins are modified to be localized at the plasma membrane where VSV budding occurs. Thus, E1 (amino acid 311) and E2 (amino acid 661) ectodomains are fused to the transmembrane domain and the cytoplasmic tail of VSV G glycoprotein. Chimeric E1-TmG is also fused to EGFP to allow easy detection of this protein. Chimeric E1 and E2 are expressed in cells using non replicative recombinant adenoviruses. To produce pseudotypes, cells are first infected by both recombinant adenoviruses at 37 ʿC, and then super-infected by VSVtsO45 at 40. 5 ʿC. At this non-permissive temperature, the mutated VSV G glycoprotein is retained in the endoplasmic reticulum. Particles resulting from this triple infection are enveloped by modified E1 and E2 but their genome is still VSVtsO45. Therefore, infection with pseudotypes at 33 ʿC (permissive temperature for the mutation) will lead to production of VSVtsO45 virions. In a second step, we are interested in mechanisms involved in HCV penetration into the host cell. Pseudotypes are used to determine optimal pH required for cellular and viral membranes fusion. The use of such a tool has allowed to investigate and to understand part of the endocytic pathway implicated in early stages of HCV infection. Our results indicate that pseudotypes enter host cells via a pH-dependant route, that fusion of viral and cellular membranes occurs in the endosome, and that clathrin is involved in this mechanism

Le virus de l'hépatite C (VHC) est un problème majeur de santé publique, il infecte de façon chronique 3% de la population mondiale et cause cirrhose et cancer du foie. Il n'existe pas de vaccin et son traitement est inactif chez près de la moitié des patients. Le génome du VHC est un ARN positif simple brin, présentant une grande variabilité génétique. Sa traduction est initiée par un IRES (Internal Ribosome Entry Site), permettant de recruter le ribosome sans l'aide de tous les facteurs classiques d'initiation de la traduction. Cette région possède des structures secondaires et sa séquence est conservée parmi les génotypes viraux. Elle est donc une cible thérapeutique potentielle. La traduction virale est modulée par des facteurs viraux et cellulaires, dont les modalités ne pas encore bien connues. A partir de variants naturels de l’IRES présentant des efficacités traductionnelles et des tropismes cellulaires différents, nous avons cherché à comprendre quels sont les déterminants (séquence virale et facteurs cellulaires agissant en trans (les ITAF, IRES Trans Acting Factors)) conditionnant l'efficacité de l'IRES dans l'hépatocyte. Nous avons parallèlement analysé les modifications traductionnelles des ARN cellulaires lors de l'infection virale dans le modèle des cellules Huh-7 infectées par la souche JFH-1 en comparant le transcriptome traduit, liés aux ribosomes (polysome) et le transcriptome libre. Nous avons montré la régulation traductionnelle de gènes régulant le cytosquelette, la traduction, le métabolisme mitochondrial et le cycle cellulaire. Certaines de ces régulations pourraient impliquer des microARN cellulaires<br>The hepatitis C virus (HCV) infection is a major world health problem, since 3% of the world’s population is chronically infected and it can lead to cirrhosis and hepatocellular carcinoma. There is currently no vaccine against this virus and the treatment is inactive for about half of the patients. HCV is a positive sense single strand RNA virus with highly sequence variability. Its translation initiation occurs through an internal ribosome entry site (IRES) in its 5’untranslated region, allowing the ribosome recruitment without the need of all the canonical translation initiation factors. This region is highly structured and is well conserved amongst the viral genotypes. That makes the IRES an attractive target for future therapies. The IRES function is modulated by viral and cellular factors, but the mecanisms of this regulation are not well understood. With the study of natural IRES variants harboring different translationnal efficiencies and cellular tropisms, we have tried to understand some factors (the viral sequence and the cellular proteins acting in trans (ITAFs, IRES Trans Acting Factors)) conditionning the efficiency of HCV translation in hepatocytes. We have also studied the translational modifications of the cellular genes during HCV infection in Huh7 cells harbouring replication of the JHF-1 strain, by comparing the translated transriptome, bound to the ribosomes (polysome) and the free transcriptome. We have shown that the viral infection modulates the translation of genes belonging to specific functional categories (cytoskeleton, translation, mitochondrial metabolism, cell cycle regulation). Some of this regulations could occur via microRNA modulation

En 1989, près de quinze ans après la mise en évidence d’une forme d’hépatite virale « non A-non B », le virus de l’hépatite C (VHC) a pu être isolé et son génome séquencé. En presque vingt ans, de nombreuses avancées techniques majeures ont permis de mieux comprendre le cycle de réplication de ce virus. Cependant, l’infection par ce virus représente actuellement la première indication de transplantation hépatique dans les pays industrialisés. On estime que 3% de la population mondiale est constituée de porteurs chroniques du VHC ; faisant de cette maladie un problème majeur de santé publique. De plus, même si des thérapies anti-virales sont disponibles pour enrayer la réplication du VHC, ces traitements ne sont vraiment efficaces que pour la moitié des patients traités. Malgré une recherche intensive, il n’existe toujours pas de vaccin préventif contre le VHC ayant fait la preuve définitive de son efficacité. La plupart des candidats vaccins en développement reposent sur l’utilisation de formes tronquées des protéines d’enveloppe du virus, constituant des immunogènes probablement moins pertinents que les formes complètes retrouvées sur l’enveloppe virale. L’objectif de ce travail de thèse a donc été de développer et de produire des particules dites sous-virales d’enveloppe constituées uniquement de l’enveloppe lipoprotéique du virus comme candidat vaccin potentiel contre le VHC, en exploitant les stratégies utilisées pour la production du vaccin contre le virus de l’hépatite B (VHB). En effet, le vaccin contre l’hépatite B repose sur la capacité de la petite protéine d’enveloppe S du VHB à générer spontanément des particules d’enveloppe vides sécrétées et non infectieuses. L’utilisation de ces particules comme vaccin a fait ses preuves depuis maintenant plus de vingt ans. Au cours de ce travail, nous avons dans un premier temps développé un modèle d’étude de la morphogenèse de ces particules sous-virales du VHB, basé sur la production de la protéine S du virus à l’aide d’un vecteur dérivé du génome du virus de la Forêt de Semliki (SFV). Ce modèle s’est avéré déterminant pour apporter des informations originales sur la morphogenèse et le trafic intracellulaire des particules sous-virales d’enveloppe du VHB. Nous avons pu montré que le bourgeonnement de ces particules au sein du réticulum endoplasmique (RE) se fait initialement sous forme de structures filamenteuses ; contrairement à ce qui était présumé dans le modèle couramment admis. Empaquetés et transportés vers un compartiment intermédiaire entre le RE et l’appareil de Golgi (ERGIC), ces filaments sont ensuite convertis en particules sphériques qui seront sécrétées. Dans un second temps, ce modèle nous a permis d’étudier les capacités d’assemblage en particules sous-virales d’enveloppe de différentes protéines chimères d’enveloppe VHC-VHB. Nous avons démontré que ces protéines de fusion, contenant la totalité de la protéine d’enveloppe E1 ou E2 du VHC, étaient capables de s’assembler puis d’être sécrétées sous forme particulaire lorsqu’elles étaient co-produites avec la protéine S sauvage du VHB. De telles particules, morphologiquement similaires à celles du vaccin contre l’hépatite B, pourraient donc constituer la base d’un vaccin prototype. Le système d’expression transitoire utilisé pour ces expériences ne permettant pas de produire ces particules en grande quantité, des clones cellulaires de la lignée CHO produisant de manière stable les particules d’enveloppe chimèriques ont été développés. Si comme nous l’espérons ce vaccin prototype donnait des résultats encourageants, sa production pourrait s’appuyer à terme sur les procédures industrielles existantes pour la production du vaccin contre le VHB, dans le but d’obtenir à grande échelle un vaccin protégeant à la fois contre l’hépatite B et l’hépatite C<br>N/a

Le virus de l'hépatite C (VHC) affecte 170 millions de personnes dans le monde. Quatre-vingt pour cent des individus atteints vont développer une hépatite chronique voire une cirrhose puis un cancer du foie pour certains d'entre eux. Il n'existe actuellement qu'un seul traitement contre le virus, mais il n'est efficace que pour la moitié des patients. Notre projet consiste à mieux comprendre les mécanismes de réplication du virus dans le but de développer de nouveaux inhibiteurs. Au cours de ma thèse j'ai participé au développement d'un nouveau modèle de la réplication du VHC. Ce modèle cellulaire permet une étude dissociée des deux principales activités virales, ce qui est actuellement impossible avec les autres modèles utilisés. Pour cela, les protéines virales nécessaires à la réplication sont constamment produites dans des cellules. Elles s'associent en un complexe qui va répliquer une molécule d'acide nucléique contenant un gène rapporteur encadré par les séquences de reconnaissance virale. Cette molécule perpétuellement dupliquée à chaque cycle, révèle un mécanisme de réplication proche de celui utilisé par le virus. Ce modèle de la réplication du VHC a déjà permis de mettre en évidence une diminution de l'activité réplicative chez les virus de génotype 3. Sept variations nucléotidiques situées dans une région du génome viral impliquée dans la traduction et la réplication du virus en sont responsables. Cette spécificité de séquence pourrait ainsi expliquer la meilleure réponse au traitement par l'interféron observée chez les patients infectés par les virus de génotype 3. D'autre part, nous avons montré que les molécules répliquées dans ce système sont dépourvues d'une structure réputée indispensable à la synthèse du génome viral. Cette structure appelée 5BSL3. 2 est néanmoins indispensable à la prolifération du virus. La deuxième partie de mon projet de thèse a donc consisté à caractériser la 5BSL3. 2 et plus particulièrement à analyser son rôle dans la traduction des protéines virales<br>The hepatitis C virus (HCV) affects around 170 million people worldwide and 3-4 million persons are infected each year. This infection will lead to death in 5-7 % of patients infected with HCV as a consequence of liver disease. The virus was first identified by Choo et al. (1989) but until recently development of new treatment for this infection has been hampered by the lack of an efficient cellular system. We established a new model to study HCV replication. In this system, the genes coding for the HCV non structural proteins are introduced in Huh7 cells (human hepatoma cell line) in order to constitutively express the HCV complex. Its activity is analysed by transfection of non-coding RNA (RNA minigenome) in the modified Huh7 cells. Those RNAs include EGFP and hygromycine genes surrounded by 5'UTR HCV non coding sequences. Those regions are included in order to be recognised by the HCV complex. The actvity of the HCV replication complex was determined by flow cytometry. Only cells able to support RNA minigenome replication could express the EGFP gene. RNA minigenome replication was detected in cells and could be maintained under hygromycine selection. I used this model to analyze the differences in replication activities between HCV genotype 1 and 3. We have identified 7 non contiguous nucleotides specific of genotype 3 in the 5'UTR, and those nucleotides are only present in this genotype, I showed these changes could be responsible for the reduced efficiency of RNA replication in the genotype 3. I also used this model to study the role of a cis-acting replication element, previously shown to be critical for the virus' replication. We have shown that this sequence is not required for the replication of our minigenome. I designed experiments to understand and explain the differences observed

Dans le but d'explorer la capacité des moustiques à répliquer le VHC, nous avons réalisé une série d'infections expérimentales sur Aede caspius, Aedes vexans et genre Cu/ex pipiens sauvage et d'élevage. Après collecte des moustiques, les femelles ont été nourries par un repas sanguin virémique (VHC 1 b positif). Les moustiques ont ensuite été maintenus en élevage pendant plusieurs jours. Après mise au point des conditions de détection, nous avons réussi à apporter la preuve de la réplication du VHC dans les moustiques du genre Aedesvexans. Dans la première infection expérimentale réalisée sur Ae. Vexans , nous avons détecté de l'ARN du VHC dans -50% des moustiques du 21,ème jours post-infection (JPI), par PCR en point final. La seconde expérience d'infection, réalisée sur les deux genres dE moustiques: Aedes Sp, et Cu/ex pipiens, nous a permis de : (i) confirmer par qRT-PCR le résultat de la première expérience avec un tau: d'infection de -33% ; (ii) démontrer que seuls les moustiques du genre Aedes contenaient de l'ARN du VHC, les moustiques du genre Cu/ex étaient tous négatif; (iii) montrer que l'ARN détecté était bien issu de la réplication, dans la mesure où des mutations d'adaptation ont été identifiées dans la séquence de la RdRp (ARN Polymérase ARN dépendante), avec une spécificité pour le genre Aedes, puisque tous les moustiques Cu/ex à 21 JPI étaient ARN VHC-négatifs. Un autre moyen de distinguer l'ARN issu de la réplication de l'A RN résiduel a été de montrer l'existence d'une dissémination au sein du moustique. Pour ce faire, nous avons réalisé une troisième expérience d'infections (genres Ae. Caspius et Ae. Vexans), sur une durée de 15 jours et avons analysé la présence de l'ARN du VHC distinctement dans les têtes et les corps. En effectuant des prélèvements à différentes dates après infection (0, 4, 8 et 15 jours), nous avons réussi à obtenir une cinétique d'infection, séparément, dans les têtes et dans les corps, détection réalisée parWTA (Whole Transcriptome Amplification) suivie de qPCR. Au jour de l'infection (JO), le taux d'infection dans les têtes et les corps des moustiques éta de 9,1 % et 100% respectivement, ce taux est passé à 57,1 % et 85,7% respectivement à J15 après une négativation huit jours après infection. D'autre part, nous avons identifié des mutations d'adaptation dans la séquence de l'IRES des moustiques à J15 comparés à ceux à JO. Il est intéressant de noter que les moustiques ARN VHC-positifs appartenaient tous à l'espèce vexans, montrant ainsi que la réplication est spécifique d'espèce. Différentes régions du génome du VHC ont, ensuite, étaient amplifiées. Enfin, nous avons eu recoun à des moustiques d'élevage. L'infection de cette souche a également montré, en utilisant différentes approches de détection (qRT-PCR, WTA-qPCR, HCV-GA notamment), qu'à 30 JPI, l'ARN du VHC était présent dans -33% des têtes et -66% des corps, alors que les taux d'infection à JO étaient de -28% et -71 % dans les têtes et les corps respectivement. Les résultats se sont appuyés sur des séquençage effectués sur les régions amplifiées du génome du VHC. L'ensemble de ces résultats montrent que le VHC est capable de se répliquer dans les moustiques du genre Ae. Vexans, ce qui suggère que le VHC, à l'image d'autres F/avivirus, puisse alterner entre deux hôtes rimates et moustiQues) et Qu'il ait perdu son potentiel de réplication chez le moustiQue au fil du temps<br>Ln order to explore the ability of mosquitoes to replicate HCV, we conducted a series of experimental infections caspius on Aedes, Aedes vexans and Culex pipiens wild and farmed. After collection of mosquitoes, the females were fed a blood meal viremic (HCV 1b positive). The mosquitoes were th en maintained in breeding for several days. After development of detection conditions, we were able to demonstrate HCV repli cation in the mosquito Aedes vexans. Ln the first experimental infection performed on Ae. Vexans, we detected HC' RNA in - 50% of mosquitoes 21st days post-infection (JPI), PCR end point. The second infection experiment, conducted on Iwo types of mosquitoes: Aedes SP, and Culex pipiens, has allowed us to: (i) confirmation by qRT-PCR results of the first experience with an infection rate of - 33%, (ii) demonstrate that only the mosquito Aedes contained RNA HCV, the Culex mosquitoes were ail negative, (iii) show that the RNA detected was good of replication, the extent of adaptive mutations were identified in the sequence of the RdRp (RNA polymerasi RNA dependent), with specificity for the genus Aedes, since ail Culex mosquitoes at 21 YPI were HCV RNA-negative. Another way to distinguish RNA from the replication of RNA remaining was to show the existence of a release within the mosquito. To do this, we conducted a third experiment infections (gender Ae. Caspius and Ae. Vexans), over a'period of 15 days and analyzed the presence of HCV RNA in distinct heads and bodies. Ln conducting samples at different times after infection (0, 4, 8 and 15 days), we managed to obtain a kinetic infection separately in heads and bodies, detection performed by WTA (Whole transcriptomics Amplification) followed by qPCR. On the day of infection (DO), the infection rate in the heads and bodies of mosquitoes was 9. 1 % and 100% respectively, the rate rose to 57. 1% and 85. 7% respectively J15 negativity after eight days after infection. On the other hand, we have identified mutations in th adaptation of the IRES sequence of mosquito D15 compared to those on day O. It is interesting to note that mosquito-positive HCV RNA ail belonged to the species vexans, showing that replication is species specific. Different regions of the HCV genome, then, were amplified. Finally, we made use of mosquito breeding. Infection of this strain has also shown, using different approaches to detection (qRT-PCR, qPCR-WTA, including HCV-GA), only 30 JPI, HCV RNA was present in - 33% heads and - 66% of the body, while infection rates were JO - 28% - 71 % in the head and body respectively. The results were based on sequencing performed on the amplified region! of the HCV genome. Ali these results show that HCV is able to replicate in mosquitoes of the genus Ae. Vexans, suggesting that HCV, likt other flaviviruses, can alternate belween Iwo hosts (primates and mosquitoes) and has lost its potential for replication in the mosquito ove time

Malgré les progrès réalisés dans la connaissance de l’épidémiologie, de la génétique du virus de l’hépatite C (VHC) et de la réponse immune mise en place pour faire face à l’infection, de nombreux aspects de l’hépatite C demeurent incompris. La particularité de cette infection réside dans son évolution vers la chronicité dans 85% des cas, conduisant à des maladies sévères du foie. La compréhension des interactions virus-hôte qui conduisent près de 15% des patients avec une infection aiguë à éliminer leur virus, est essentielle pour le développement de nouvelles stratégies préventives et de traitements plus efficaces. Dans ce travail, nous avons montré, dans un premier temps, que la tetraspanine CD81 et le récepteur aux LDL (LDLR) sont impliqués dans l’infection in vitro par le VHC des hépatocytes humains en culture primaire, modèle d’étude le plus proche de la réalité physiologique. D’autre part, nous avons recherché dans le plasma humain par une approche protéomique des biomarqueurs associés à la résolution de l’infection par le VHC. L’identification de biomarqueurs représente l’une des étapes les plus précoces et difficiles du développement d’outils diagnostiques et de stratégies thérapeutiques. La technologie SELDI-TOF-MS (Ciphergen BiosystemsTM) a été utilisée afin de mettre en évidence des candidats biomarqueurs. Ces candidats ont été purifiés et identifiés par séquençage MS/MS. En conclusion ce travail participe à une meilleure compréhension des étapes précoces de l’infection par le VHC. Il pourrait contribuer au développement de nouvelles stratégies diagnostiques et thérapeutiques<br>In spite of the progress made in the knowledge of epidemiology and genetics of the hepatitis C virus (HCV) and of the immune response, many aspects of hepatitis C remain enigmatic. The characteristic of this infection lies in its evolution to chronicity in 85% of the cases, leading to severe liver diseases. The comprehension of host-virus interactions which result in resolution in 15% of the patients with an acute infection, is essential for the development of new preventive strategies and more effective treatments. In this work, we have showed, initially, that the tetraspanin CD81 and the LDL receptor (LDLR) are implied in in vitro HCV infection of human hepatocytes in primary culture, the nearest model to physiological reality. In addition, we have searched by a proteomic approach in human plasma biomarkers associated with the resolution of HCV infection. The identification of biomarkers represents one of the earliest and difficult stages of the development of diagnostic tools and therapeutic strategies. SELDI-TOF-MS Technology (Ciphergen BiosystemsTM) was used in order to highlight potential biomarkers. These candidates were purified and identified by MS/MS. In conclusion this work takes part in a better comprehension of the early stages of the infection by the HCV. It would contribute to the development of new diagnostic and therapeutic strategies

Dans le cadre de la recherche de nouveaux anti-viraux, des séquences hautement conservées de l’ARN génomique du VHC, structurées en tige-boucle, représentent des cibles thérapeutiques compte tenu de leur implication dans la réplication virale. Dans ce contexte, nous avons envisagé d’inhiber le rôle joué par le domaine IV de l’IRES au moyen d’un PNA antisens cyclique complémentaire, via la formation d’un complexe « boucle-boucle » de haute affinité. D’autre part, nous avons élaboré un conjugué de fluorescéine et d’un PNA cyclique complémentaire d’une boucle de l’ARN du VIH-1, afin d’étudier la pénétration cellulaire de ce type de composés. Les PNA cycliques ont été synthétisés en phase liquide, suivant des stratégies originales. Les études biologiques ont mis en évidence que le PNA cyclique dirigé contre la boucle IV de l’IRES inhibe la fonction de ce dernier. De plus, les études de pénétration cellulaire ont montré que les PNA cycliques ne traversent pas les membranes biologiques<br>Within the framework of an antiviral drug development, highly conserved stem-loop RNA sequences of the HCV genome represents therapeutic targets in the light of their involvements in essential steps of the viral life cycle. In this context, a cyclic molecule including a heptameric PNA sequence has been designed and synthesised in order to target the loop of the IRES domain IV of HCV through the formation of a “kissing complex”. In addition, a fluorescently labeled cyclic PNA, complementary of a HIV-1 RNA loop, has been prepared in order to investigate the cellular uptake of such compounds. The synthesis of the cyclic PNAs has been accomplished following original liquid-phase strategies. The biological studies showed that the cyclic PNA directed against the IRES stem-loop IV displayed an inhibitory activity of the IRES function. Moreover, the cellular uptake investigation showed that the cyclic PNA do not enter cells

Una de las metas a alcanzar para el 2030 de la Estrategia mundial del sector de la salud contra las hepatitis víricas 2016-202: hacia el fin de las hepatitis víricas es reducir la mortalidad por el virus de la hepatitis B (VHB) y el virus de la hepatitis C (VHC). Para medir este indicador y darle seguimiento, los países requieren poner en funcionamiento un proceso sistemático para generar estimaciones nacionales de mortalidad por hepatitis virales. Esta publicación está dirigida a las instituciones y ministerios encargados de monitorizar los avances en cada país. El objetivo principal de este protocolo es presentar métodos sencillos para estimar la proporción de pacientes con cirrosis y con carcinoma hepatocelular que tienen infección por el VHB y el VHC, para luego calcular la mortalidad nacional por estas secuelas atribuibles a hepatitis virales, de preferencia dentro de un sistema de vigilancia. Además, se proporciona un marco general sobre cómo debe funcionar el sistema de vigilancia, cómo recopilar los datos y consideraciones éticas para tener en cuenta. El sistema de vigilancia se diseña sobre la base de centros centinela donde se recopilará información de pacientes con cirrosis y con carcinoma hepatocelular. Estos datos servirán para estimar la fracción de cirrosis y de carcinoma hepatocelular atribuible a la infección por los virus de las hepatitis B y C. Por otro lado, se recopilarán datos sobre el número de muertes a nivel nacional por cirrosis y por carcinoma hepatocelular. Con esta información, se calculará la mortalidad por cirrosis y por carcinoma hepatocelular atribuible a la infección por el VHB y el VHC.

Objetivo: La transmisión del virus hepatitis C (VHC) en nuestro país es más frecuente en personas que se inyectan drogas y en hombres que tienen sexo con hombres (HSH). Además el policonsumo y la patología dual (PD), implican mayor riesgo de contagio. Los antivirales de acción directa (AAD) han revolucionado el tratamiento del VHC, y suponen una oportunidad para eliminar el virus. El objetivo es describir la implementación del circuito para facilitar el acceso al tratamiento del VHC en el CAS Santa Coloma (desde el diagnóstico en un único paso, el enlace con atención especializada, hasta finalización del tratamiento). Material y métodos: Estudio descriptivo de la trayectoria de los pacientes con VHC admitidos en el centro entre diciembre de 2016 y enero de 2020. Datos recogidos de la revisión de las historias clínicas. Resultados: Del total de pacientes, 122 (20%) presentaban anticuerpos anti-VHC (85 % hombres). En 39 (32%) la viremia fue positiva. De estos, 34 (87, 2%) consumían opiáceos como droga principal y 5 (12, 8 %) otras sustancias. Del total, 39 (32%) presentaban coinfección con VIH. Se detectó presencia de patología dual en 49 (40%) pacientes. La valoración médica fue realizada por Medicina Interna en 24 (61,5%) y por Digestología en 22 (54%). A final de enero/2020, 23 de los pacientes con viremia positiva (60 %) habían iniciado tratamiento con AAD. De ellos 12 (30%) habían conseguido remisión viral sostenida (RVS), 11 (28%) estaban realizando el tratamiento y 16 (41%) estaban pendientes de completar diagnóstico e iniciar tratamiento. Conclusiones: Un 60 % de los pacientes con viremia positiva han iniciado tratamiento con AAD y la totalidad de los que lo han finalizado presenta una RVS. Es necesario simplificar la trayectoria desde la detección hasta el inicio del tratamiento para conseguir la eliminación del VHC en usuarios de drogas.