Academic literature on the topic 'Voie MAPK/ERK'

The Debate Question 1: Various commentators have frequently invoked the importance of moderate Muslims and the role that they can play in fighting extremism in the Muslim world. But it is not clear who is a moderate Muslim. The recent cancellation of Tariq Ramadan’s visa to the United States, the raids on several American Muslim organizations, and the near marginalization of mainstream American Muslims in North America pose the following question: If moderate Muslims are critical to an American victory in the war on terror, then why does the American government frequently take steps that undermine moderate Muslims? Perhaps there is a lack of clarity about who the moderate Muslims are. In your view, who are these moderate Muslims and what are their beliefs and politics? MAMK: The term moderate Muslims/Islam is becoming highly contested. What do we really mean when we brand someone as a moderate Muslim? Indeed, the more interesting question is what does the word mean to outsiders looking into Islam, and to Muslims looking out from within Islam? As one who identifies himself strongly with the idea of a liberal Islam and also advocates moderation in the manifestation and expression of Islamic politics, I believe it is important that we flesh out this “religiopolitical identity.” Today, identity is politicized and identity construction and sustenance has become a major political goal. In this era when who we are determines what we do politically, it is imperative that we clarify the “we” in politics. The American media often uses moderate Muslim to indicate a Muslim who is either pro-western in his/her politics or is being self-critical in his/her discourse. Therefore, both President Karzai of Afghanistan and Professor Tariq Ramadan wear the cap with felicity, the former for his politics the latter for his ideas. Ramadan, who is critical of intolerance in Muslim communities and a strong advocate of the Europeanness of European Muslims, as well as a major voice in the articulation of the emerging form of European Islam, in many ways embodies both categories: He is prowestern as well as self-critical. In spite of his impeccable credentials as a prominent moderate Muslim, the American government, citing vague reasons of national security, recently revoked his work visa. This decision sends the dubious message that when these two criteria, pro-westernism/pro-Americanism and self-critical politics clash, the government chooses the former and civil society chooses the latter. His visa was cancelled because, in the government’s perception, he could pose a national security risk. Interestingly, there was uproar of discontent from civil society, and strong voices condemning this decision were raised by the government, particularly within the American academic community. In general, Muslims do not like using the terms moderate, progressive, or liberal Muslim, for they understand it to indicate an individual who has politically sold out to the “other” side. Others insist that there is no such thing as moderate or radical Islam; there is “only one Islam” – the true Islam, and all other expressions are falsehoods espoused by the munafiqun (the hypocrites) or the murtaddun (the apostates). Of course, the unstated politics behind this dogmatic position is: “My interpretation of Islam is obviously the true Islam, and anybody who diverges from my position is risking their faith.” In some internal intellectual debates, moderate Muslim is used pejoratively to indicate a Muslim who is more secular and less Islamic than the norm, which varies across communities. In the United States, a moderate Muslim is one who peddles a softer form of Islam – the Islam of John Esposito and Karen Armstrong – is willing to coexist peacefully with peoples of other faiths and is comfortable with democracy and the separation of politics and religion. Both western media and Muslims do a disservice by branding some Muslims as moderate solely on the basis of their politics. In general, these people should be understood as opportunists and self-serving. In this conversation, Esposito refers to them as “professional Muslims.” That leaves intellectual positions as the criteria for determining who is a moderate Muslim, and especially in comparison to whom, since moderate is a relative term. I see moderate Muslims as reflective, self-critical, pro-democracy and pro-human rights, and closet secularists. Their secularism is American in nature; that is, they believe in the separation of church and state, but not like the French, who oppose the exile of religion from the public sphere. But who are they different from, and how? I believe that moderate Muslims are different from militant Muslims, even though both of them advocate the establishment of societies whose organizing principle is Islam. The difference between moderate and militant Muslims is in their methodological orientation and in the primordial normative preferences that shape their interpretation of Islam. For moderate Muslims, ijtihad is the preferred method of choice for sociopolitical change and military jihad is the last option. For militant Muslims, military jihad is the first option and ijtihad is not an option at all. Ijtihad, narrowly understood, is a juristic tool that allows independent reasoning to articulate Islamic law on issues where textual sources are silent. The unstated assumption is that when the texts have spoken, reason must be silent. But, increasingly, moderate Muslim intellectuals see ijtihad as the spirit of Islamic thought that is necessary for the vitality of Islamic ideas and Islamic civilization. Without ijtihad, Islamic thought and Islamic civilization fall into decay. For moderate Muslims, ijtihad is a way of life that simultaneously allows Islam to reign supreme in the heart, and the mind to experience the unfettered freedom of thought. A moderate Muslim is, therefore, one who cherishes freedom of thought while recognizing the existential necessity of faith. He/she aspires for change, but through the power of mind and not through planting mines. Moderate Muslims aspire for a society – a city of virtue – that will treat all people with dignity and respect (Qur’an 17:70). There will be no room for political or normative intimidation (Qur’an 2:256). Individuals will aspire to live an ethical life for they recognize its desirability. Communities will compete in doing good, and polities will seek to encourage good and forbid evil (Qur’an 5:48 and 3:110). They believe that internalizing Islam’s message can bring about the social transformation necessary for establishing the virtuous city. The only arena in which moderate Muslims permit excess is in idealism. The Qur’an advocates moderation (2:143) and extols the virtues of the straight path (1:1-7). For moderate Muslims, the middle ground, the common humanity of all, is the straightest path.

The Debate Question 1: Various commentators have frequently invoked the importance of moderate Muslims and the role that they can play in fighting extremism in the Muslim world. But it is not clear who is a moderate Muslim. The recent cancellation of Tariq Ramadan’s visa to the United States, the raids on several American Muslim organizations, and the near marginalization of mainstream American Muslims in North America pose the following question: If moderate Muslims are critical to an American victory in the war on terror, then why does the American government frequently take steps that undermine moderate Muslims? Perhaps there is a lack of clarity about who the moderate Muslims are. In your view, who are these moderate Muslims and what are their beliefs and politics? MAMK: The term moderate Muslims/Islam is becoming highly contested. What do we really mean when we brand someone as a moderate Muslim? Indeed, the more interesting question is what does the word mean to outsiders looking into Islam, and to Muslims looking out from within Islam? As one who identifies himself strongly with the idea of a liberal Islam and also advocates moderation in the manifestation and expression of Islamic politics, I believe it is important that we flesh out this “religiopolitical identity.” Today, identity is politicized and identity construction and sustenance has become a major political goal. In this era when who we are determines what we do politically, it is imperative that we clarify the “we” in politics. The American media often uses moderate Muslim to indicate a Muslim who is either pro-western in his/her politics or is being self-critical in his/her discourse. Therefore, both President Karzai of Afghanistan and Professor Tariq Ramadan wear the cap with felicity, the former for his politics the latter for his ideas. Ramadan, who is critical of intolerance in Muslim communities and a strong advocate of the Europeanness of European Muslims, as well as a major voice in the articulation of the emerging form of European Islam, in many ways embodies both categories: He is prowestern as well as self-critical. In spite of his impeccable credentials as a prominent moderate Muslim, the American government, citing vague reasons of national security, recently revoked his work visa. This decision sends the dubious message that when these two criteria, pro-westernism/pro-Americanism and self-critical politics clash, the government chooses the former and civil society chooses the latter. His visa was cancelled because, in the government’s perception, he could pose a national security risk. Interestingly, there was uproar of discontent from civil society, and strong voices condemning this decision were raised by the government, particularly within the American academic community. In general, Muslims do not like using the terms moderate, progressive, or liberal Muslim, for they understand it to indicate an individual who has politically sold out to the “other” side. Others insist that there is no such thing as moderate or radical Islam; there is “only one Islam” – the true Islam, and all other expressions are falsehoods espoused by the munafiqun (the hypocrites) or the murtaddun (the apostates). Of course, the unstated politics behind this dogmatic position is: “My interpretation of Islam is obviously the true Islam, and anybody who diverges from my position is risking their faith.” In some internal intellectual debates, moderate Muslim is used pejoratively to indicate a Muslim who is more secular and less Islamic than the norm, which varies across communities. In the United States, a moderate Muslim is one who peddles a softer form of Islam – the Islam of John Esposito and Karen Armstrong – is willing to coexist peacefully with peoples of other faiths and is comfortable with democracy and the separation of politics and religion. Both western media and Muslims do a disservice by branding some Muslims as moderate solely on the basis of their politics. In general, these people should be understood as opportunists and self-serving. In this conversation, Esposito refers to them as “professional Muslims.” That leaves intellectual positions as the criteria for determining who is a moderate Muslim, and especially in comparison to whom, since moderate is a relative term. I see moderate Muslims as reflective, self-critical, pro-democracy and pro-human rights, and closet secularists. Their secularism is American in nature; that is, they believe in the separation of church and state, but not like the French, who oppose the exile of religion from the public sphere. But who are they different from, and how? I believe that moderate Muslims are different from militant Muslims, even though both of them advocate the establishment of societies whose organizing principle is Islam. The difference between moderate and militant Muslims is in their methodological orientation and in the primordial normative preferences that shape their interpretation of Islam. For moderate Muslims, ijtihad is the preferred method of choice for sociopolitical change and military jihad is the last option. For militant Muslims, military jihad is the first option and ijtihad is not an option at all. Ijtihad, narrowly understood, is a juristic tool that allows independent reasoning to articulate Islamic law on issues where textual sources are silent. The unstated assumption is that when the texts have spoken, reason must be silent. But, increasingly, moderate Muslim intellectuals see ijtihad as the spirit of Islamic thought that is necessary for the vitality of Islamic ideas and Islamic civilization. Without ijtihad, Islamic thought and Islamic civilization fall into decay. For moderate Muslims, ijtihad is a way of life that simultaneously allows Islam to reign supreme in the heart, and the mind to experience the unfettered freedom of thought. A moderate Muslim is, therefore, one who cherishes freedom of thought while recognizing the existential necessity of faith. He/she aspires for change, but through the power of mind and not through planting mines. Moderate Muslims aspire for a society – a city of virtue – that will treat all people with dignity and respect (Qur’an 17:70). There will be no room for political or normative intimidation (Qur’an 2:256). Individuals will aspire to live an ethical life for they recognize its desirability. Communities will compete in doing good, and polities will seek to encourage good and forbid evil (Qur’an 5:48 and 3:110). They believe that internalizing Islam’s message can bring about the social transformation necessary for establishing the virtuous city. The only arena in which moderate Muslims permit excess is in idealism. The Qur’an advocates moderation (2:143) and extols the virtues of the straight path (1:1-7). For moderate Muslims, the middle ground, the common humanity of all, is the straightest path.

Le but de ce travail fut de valider un modele permettant l'etude des proprietes motivationnelles induites par le thc chez la souris puis d'evaluer le role de la voie de signalisation mapk/erk dans la mise en place des adaptations neuronales responsables des comportements addictifs du thc et de la cocaine. Les reponses motivationnelles induites par le thc ont ete evaluees dans le test de preference de place, en minimisant les effets dysphoriques induits par la premiere exposition a la drogue et/ou les consequences des proprietes pharmacocinetiques du compose. Ainsi, selon la dose et le protocole experimental utilise, le thc est capable d'induire a la fois des effets renforcants et aversifs. L'administration aigue de cocaine et de thc chez la souris, s'accompagne d'une augmentation transitoire de la phosphorylation des erks dans les cellules striatales. La liberation de dopamine constitue un evenement majeur dans l'activation des erks qui est totalement dependante de la stimulation des recepteurs d1 avec une contribution partielle des recepteurs d2. Les recepteurs nmda interviennent egalement dans l'activation des erks par ces deux substances. L'activation du facteur de transcription elk-1 et la regulation transcriptionnelle des genes precoces c-fos et zif268 en reponse a l'administration aigue de thc et de cocaine sont controlees par les voies erks. Enfin, le blocage des voies erks par un inhibiteur de mek (sl327) abolit la preference de place conditionnee induite par la cocaine et le thc ainsi que la sensibilisation locomotrice induite par une administration repetee de cocaine sans toutefois affecter les reponses comportementales aigues induites par ces deux drogues. L'activation des erks dans les cellules striatales constituerait un mecanisme commun d'action de ces drogues. En controlant une premiere vague de regulations geniques, cette voie de transduction jouerait un role majeur dans les adaptations neuronales responsables des comportements addictifs a long terme.

Durant ma thèse, j'ai participé à une étude fonctionnelle qui a démontré que p120-RasGAP, une protéine appartenant à la famille GAP (GTPase-activating protein), est le médiateur cytoplasmique de l'éphrine lors de l'atténuation d'ERK1/2. Pour confirmer cela, j'ai réalisé une expérience de co-immunoprécipitation et j'ai démontré que p120-RasGAP s'associe au récepteur de l'éphrine, Eph3, quand celui-ci est activé par un ligand éphrine. Ce résultat indique fortement que les signaux FGF et éphrine convergent au niveau de Ras et qu'ils contrôlent de manière antagoniste son activité. Dès lors, j'ai analysé les autres événements de spécification cellulaire impliquant l'antagonisme FGF/éphrine. Chez l'embryon d'ascidie, le signal FGF est décrit comme inducteur du destin neural dans les cellules ectodermiques qui, en absence du signal FGF, adoptent le destin épidermique. L'induction neurale des ascidies a lieu au stade 32 cellules et se traduit par la spécification de quatre précurseurs neuraux (ERK+) parmi les 16 cellules ectodermiques. J'ai démontré que le signal éphrine/Eph/RasGAP antagonise le signal FGF pour générer une activation d'ERK1/2 de type tout ou rien parmi les cellules ectodermiques. Enfin, en collaboration avec Philip Abitua, doctorant dans le laboratoire du Dr. Mike Levine (UC Berkeley), nous démontrons que l'antagonisme entre les signaux éphrine et FGF est impliqué dans la régionalisation antéro-postérieure de la plaque neurale

La mort cellulaire programmée ou apoptose est un mécanisme conservé chez les eucaryotes multicellulaires qui contribue au développement embryonnaire et à l'homéostasie cellulaire des organismes. Dans les cellules vivantes, l'activité des protéases qui exécutent le programme de mort cellulaire, les caspases, est contrôlée par des signaux de survie provenant de l'environnement cellulaire. Les caspases initiatrices de l'apoptose régulée par l'environnement, la caspase 9 et la caspase 8 sont activées respectivement par l'apoptosome et par les récepteurs de mort. Les signaux environnementaux, parmi lesquels le contact avec la matrice extracellulaire ou la présence de facteurs de croissance, activent des voies de signalisation contrôlant la machinerie de mort cellulaire. La voie des MAPK1/3 est une voie de signalisation contrôlée par le proto-oncogènes Ras et comportant les kinases Raf, MEK1/2 et MAPK1/3 (ERK2/1 ou p42/p44). La voie des MAPK1/3, qui est impliquée dans la prolifération et la différentiation cellulaire, joue un rôle essentiel dans la survie cellulaire. L'objectif de cette thèse a été de caractériser les mécanismes moléculaires impliqués dans le contrôle de la mort cellulaire par la voie des MAPK1/3. Ce travail est basé sur l'utilisation d'une forme active et inductible de la kinase Raf-1 (DRaf-1:ER) dont l'activation forte et prolongée correspond à une induction pathologique de la voie des MAPK1/3. Nous avons montré que, selon le type cellulaire, l'activation de DRaf-1:ER favorise la survie ou la mort cellulaire. Dans les cellules fibroblastiques CCL39, l'activation de DRaf-1:ER protège de la mort cellulaire mitochondriale induite par la privation en sérum du milieu de culture. Dans ces conditions, nous avons montré que la stimulation de DRaf-1 :ER bloque l'activation de la caspase-9 mais n'empêche pas la délocalisation du cytochrome c, la multimérisation d'APAF1 ni le recrutement de la procaspase 9 dans l'apoptosome. Ce mécanisme post mitochondrial de protection contre la mort cellulaire dépend de la néo-synthèse des protéines et nécessite une activité continue de la kinase MEK. A l'inverse, dans les cellules HEK 293 issues de rein embryonnaire et présentant des caractéristiques neuronales, nous avons montré que l'activation soutenue de la voie des MAPK1/3 par DRaf1-ER induit une mort cellulaire massive. Celle-ci est caractérisée par l'activation des caspases et la fragmentation de l'ADN. La mort cellulaire est détectée plus de 24 heures après l'activation de DRaf1-ER, elle est maximale à 48h. L'induction de la mort cellulaire ne requière la synthèse protéique que durant la phase précoce d'activation mais nécessite l'activité continue du module MEK/MAPK. La mort cellulaire résulte de l'activation de la caspase 8 et n'implique pas la voie mitochondriale, elle est caractérisée par une vacuolisation importante du cytoplasme des cellules qui l'apparente à une forme particulière d'apoptose. L'inactivation des fonctions du récepteur fas et de son adaptateur FADD indique que le processus d'activation de la caspase 8 est indépendant de la voie des récepteurs de mort. L'ensemble de ces travaux apporte des connaissances nouvelles sur le contrôle de la mort cellulaire par la voie Raf/MAPK1/3. Nous avons montré que la voie de signalisation peut, selon le contexte cellulaire, favoriser la survie cellulaire ou induire la mort. Dans les deux cas, le contrôle de la mort cellulaire dépend à la fois de la synthèse protéique et de mécanismes post-traductionnels. Les mécanismes moléculaires affectés par l'activation prolongée des MAPK1/3 seraient impliqués aussi bien dans la résistance des cellules tumorales aux traitements proapoptotiques que dans le développement des maladies neurodégénératives
Programmed cell death or"apoptosis"is an evolutionary conserved feature of multicellular organisms necessary for normal development and tissue homeostasis. In living cells, the activity of the proteases that execute the apoptotic cell death program, the caspases, is controlled by survival signals emanating from the cellular environment. The regulatory components of the caspase cascade, caspase 9 and caspase 8, are activated respectively by the apoptosome and by death receptors. Survival signals elicited by extracellular matrix or growth factors activate signaling pathways that control the cell death machinery. The MAPK1/3 signaling pathway is a kinase cascade comprising Raf, MEK1/2 and MAPK1/3 (ERK1/2 or p42/p44 MapKinases) regulated by the proto-oncogene Ras. The MAPK1/3 pathway is implicated in cell proliferation and differentiation and plays an essential role in cell survival. This thesis objective was to characterize the molecular mechanisms involved in the control of cell death by MAPK1/3 pathway. This study relies on the use of an inducible form of Raf-1 kinase (DRaf-1:ER) those strong and persistent activation leads to a pathological induction of MAPK1/3 activity. We have been able to show that, depending on the cell type, DRaf-1:ER activation favors cell survival or induces cell death. In the lung fibroblastic cell line CCL39, DRaf-1:ER activation prevents cell death induced by serum withdrawal from the tissue culture medium. Under this experimental setting, we could show that DRaf-1:ER stimulation inhibits caspase 9 activation but did not prevent cytochrome c release, APAF1 oligomerization and caspase 9 recruitment in the apoptosome. This novel mechanism of cell death inhibition at a post-mitochondrial level requires ongoing protein synthesis and continuous MEK kinase activity. In HEK293, an embryonic kidney cell line that bares properties of neuronal lineage cells, sustained activation of the MAPK1/3 pathway in response to DRaf-1:ER induces massive cell death. Cell death is characterized by caspases activation and DNA fragmentation. It is a slow process, detectable more than 24 hours after DRaf-1:ER stimulation and maximal at 48 hours. Cell death induction needs protein synthesis only during the early stage of activation but requires a continuous activity of the MEK/MAPK module. Cell death results from caspase 8 activation and does not require the mitochondrial pathway of apoptosis. It is characterized by the formation of vacuoles in the cytoplasm that evoke paraptosis, a particular form of apoptosis. Functional inactivation of the death receptor Fas or its adaptator FADD indicates that the activation process of caspase 8 is independent of the death receptor pathway. Altogether, these results extend our understanding on the role of the Raf/MAPk pathway in the control of cell death. We have shown that in different cellular context, this signaling pathway can either promote cell survival or induce cell death. In both cases, cell death control requires protein synthesis and post-traductionnal modifications. Molecular mechanisms that respond to prolonged MAPK1/3 activation could be involved in tumor resistance to proapoptotic treatments as well as in the development of neurodegenerative diseases

Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2016-2017
Les mammifères possèdent deux MAP kinases kinases (MEK1 et MEK2), impliquées dans l’activation de la voie ERK/MAPK essentielle pour la différenciation, la prolifération et la survie cellulaire. Le premier objectif de cette thèse était de déterminer si les fonctions des kinases MEK1 et MEK2 sont redondantes durant le développement embryonnaire. Les souris Mek1-/- meurent à mi-gestation d’une malformation du placenta. Les souris Mek2-/- ne présentent aucun phénotype majeur, suggérant que ces deux protéines ont des rôles différents. Cependant, la plupart des mutants Mek1+/-Mek2+/- meurent pendant la gestation d’un sous-développement du placenta, indiquant que Mek1 et Mek2 ont chacun un rôle dans le développement des tissus extraembryonnaires. À ce jour aucune évidence claire ne permet de statuer sur la redondance fonctionnelle de MEK1 et MEK2. Afin de vérifier la spécificité fonctionnelle de Mek1 et Mek2, nous avons généré au laboratoire un allèle « knockin », exprimant l’ADNc de Mek2 sous contrôle du locus Mek1 (Mek12). L’analyse de ces souris a révélé la redondance fonctionnelle entre MEK1 et MEK2. L’analyse de combinaisons alléliques de Mek a démontré qu’une expression minimale de protéines MEK est cruciale pour le développement embryonnaire et la survie. Le second objectif de cette thèse était de caractériser les mutants Mp1. Les protéines d’échafaudage permettent de moduler l’activité de la voie ERK/MAPK et facilitent la transmission rapide du signal. Parmi les protéines d’échafaudage connues, seule MP1 (Mek Partner 1) a été identifiée comme étant un partenaire spécifique de MEK1 et ERK1. Cette spécificité suggère que MP1 pourrait contribuer à la différence d’activation de MEK1 et MEK2 en spécifiant le signal qui passe par Mek1. Afin d’étudier le rôle de Mp1 au cours du développement chez la souris, nous avons généré des souris Mp1-/-. L’analyse de ces mutants indique que le gène Mp1 est essentiel pour la survie et que sa fonction est nécessaire suite à la post-implantation. La dérégulation de la voie ERK/MAPK dans le développement chez l’homme a aussi des conséquences phénotypiques. Au cours des dernières années, une classe de syndromes a été caractérisée : Les « Rasophaties ». Ces syndromes partagent des caractéristiques communes qui sont, une mutation dans des gènes de la voie ERK/MAPK, une dysmorphologie cranio-faciale, des malformations cardiaques et cutanées ainsi qu’un retard mental. Parmi les mutations de la voie ERK/MAPK qui ont été identifiées, une mutation ponctuelle dans le gène Mek1 (Mek1Y130C) cause le syndrome Cardio-Facio-Cutané (CFC). Le dernier objectif de cette thèse était de générer un modèle animal pour le CFC portant la mutation Mek1Y130C. Les souris portant l’allèle Mek1Y130C présentent les phénotypes associés au CFC (i.e sténose pulmonaire, dysmorphologie cranio-faciale et défauts neurologiques).
Mammals possess two MAP kinase kinase (MEK1 and MEK2), involved in ERK/MAPK pathway. This pathway is essential for proliferation, differentiation and cell survival. The first objective of my thesis was to determinate if MEK1 and MEK2 kinases are redundant during embryonic development. Mek1-/- mice die at embryonic day E10.5 due to placental defects, whereas Mek2-/- mice survive with a normal lifespan suggesting that MEK1 possesses functions not shared by MEK2. However, most Mek1+/-Mek2+/- embryos also die from placental defects, indicating that both Mek genes contribute to placental development. To date, no clear evidence on MEK1 and MEK2 redundancy has been provided. To assess the functional specificity of the Mek1 and Mek2 genes, we produced a Mek1-knockin allele in which the Mek2 coding sequences were placed under the control of Mek1 regulatory sequences. Analyzing these mice allowed us to demonstrate that MEK1 and MEK2 can substitute for each other and that a minimal amount of MEK is critical for placenta development and embryo survival. The second objective of my thesis was to characterize Mp1 mutants. Scaffold proteins modulate MAPK pathway by providing spatial and temporal specificity. Among known ERK/MAPK scaffold proteins, only MP1 (Mek Partner 1) is specific to MEK1 and ERK1, raising the question of the specificity of MP1 in the regulation of ERK/MAPK pathway via MEK1. In order to investigate Mp1 function in vivo, we generated Mp1 knock-out mice. Analyzing these mice enable us to suggest that Mp1 is required for embryonic development and is essential during post-implantation. Deregulation of Ras/MAPK pathway also causes developmental phenotypes in human. During the last decade, a new class of syndromes, which share common phenotypes such as mutations in Ras/MAPK pathway, cranio-facial dysmorphology, cardiac and cutaneous malformations and neurological delay has been described and named Rasophaties. Among the DNA mutations found in rasopathies, the Mek1 mutation, Mek1Y130C, causes cardio-facio-cutaneous syndrome (CFC). The last objective of my thesis was to generate a mouse model of CFC, with the Mek1Y130C mutation. I found that mice carrying the Mek1Y130C mutation partially recapitulate CFC syndrome (i.e pulmonary stenosis, crani-facial dysmophia and neurological defects).

Le profil d'expression aberrant des micro(mi)ARN est une caractéristique typique de nombreux cancers, dont le carcinome hépatocellulaire (CHC), une tumeur hépatique maligne primaire qui se classe seconde dans le monde en termes de mortalité par cancer. Notre équipe a récemment montré la baisse d’expression de miR-4510 dans des échantillons de patients atteints de CHC et son activité « suppresseur de tumeur ». L'analyse de données protéomiques recueillies à partir de cellules Huh7 transfectées par miR-4510 a révélé une diminution importante de plusieurs oncogènes, dont la sérine / thréonine protéine kinase RAF1. J’ai également découvert que le taux de protéine RAF1 était significativement surexprimé chez les patients atteints de CHC. Le rôle de RAF1 et de miR-4510 dans le CHC étant mal compris, j’ai étudié la fonction du couple RAF1/miR-4510 dans la tumorigenèse du foie. Mes analyses ont montré que miR-4510 régule négativement les taux de protéine RAF1 et d'ARNm. Une analyse par le système de double fluorescence-FunREG a révélé que miR-4510 interagit directement avec la région 3’ non-traduite de l’ARN de RAF1 via un site unique. La déplétion de RAF1 dans deux lignées tumorales de CHC par miR-4510 ou ARN interférant désactive leur caractère tumorigène in vitro et in vivo. Collectivement, mes données suggèrent que miR-4510 participe à la carcinogenèse du foie via son action directe sur RAF1 et la régulation de la voie MAPK/ERK. En conclusion, mon étude soutient l’hypothèse selon laquelle un traitement à base de miR-4510 pourrait être efficace pour traiter les patients atteints de CHC de type avancé ou réfractaire à la chimiothérapie
Aberrant micro(mi)RNA expression signature is a hallmark of many cancers including hepatocellular carcinoma (HCC), a primary malignant liver disease which ranks second in cancer mortality worldwide. Our team previously reported the downregulation of miR-4510 in HCC samples and identified this miRNA as a strong tumor suppressor in liver. Proteomic data analysis collected from Huh7 cells transfected by miR-4510 showed a significant decrease of multiple oncogenes including RAF1 serine/threonine protein kinase. I also found that RAF1 protein level is significantly increased in HCC patients. The role of RAF1 and miR-4510 in HCC being poorly understood, I studied the function of RAF1/miR-4510 pair in tumorigenesis of the liver. My results showed that miR-4510 overexpression significantly decreases both RAF1 protein and mRNA levels and inhibits MAPK/ERK signaling. The dual fluorescence-FunREG assay revealed that miR-4510 directly interacts with RAF1 3’-untranslated region through a unique site. Silencing of RAF1 in two hepatic cell lines by miR-4510 or a specific small interfering RNA suppressed important tumorigenic features (proliferation, migration….) both in vitro and in vivo. Collectively, my data suggest that miR-4510 participates in liver carcinogenesis through RAF1 targeting and MAPK/ERK signaling inactivation. In addition, my study suggests that miR-4510-based therapy may represent a promising strategy to treat patients with advanced or refractory HCC

Le neutrophile humain est une composante essentielle du système immunitaire inné. Il joue un rôle-clé comme phagocyte professionnel pour la défense contre les agents externes. De plus, il a la capacité de libérer un large éventail de produits antimicrobiens et de produire également diverses protéines immunorégulatrices, dont une vaste gamme de cytokines (IL-8, MIP-1[alpha]/[beta], IP-10, I-TAC, TNF-[alpha], etc.). La génération de ces dernières permet le recrutement massif de neutrophiles et d'autres populations leucocytaires au site inflammatoire, contribuant ainsi au bon déroulement de la réponse inflammatoire. La génération de cytokines par le neutrophile humain est induite par différents agonistes, dont des molécules bactériennes (LPS, peptides N-formylés) ou les médiateurs inflammatoires (cytokines, chimiokines, facteurs de croissance). Ces molécules vont activer des récepteurs à la surface du neutrophile et déclancher ainsi plusieurs voies de signalisation et des facteurs transcriptionnels. Dans la présente étude, nous avons déterminé l'impact de la voie de signalisation MEK/ERK dans l'induction de l'expression des cytokines chez le neutrophile humain isolé du sang périphérique. Nous avons noté un découplage du module MEK/ERK suite à une stimulation avec certains agonistes pro-inflammatoires (LPS, TNF-[alpha]), mais par pour d'autres (fMLP, GM-CSF). L'utilisation de différentes classes d'agonistes et d'inhibiteurs pharmacologiques des voies de signalisation nous a permis de mettre en évidence les rôles différents de MEK et de ERK en ce qui concerne la sécrétion et la transcription de cytokines. Les kinases ERK et MEK sont toutes deux impliquées dans la sécrétion de cytokines, mais ERK est la seule des deux qui est associée à la transcription. Par contre, nous n'avons toujours pas identifié la kinase responsable de l'activation de ERK lorsque le module MEK/ERK est découplé. Enfin, à défaut d'identifier la kinase qui phosphoryle ERK, nous montrons que la MAP3K, TAK1, agit en amont de ERK et de MEK chez les neutrophiles. Nos résultats suggèrent que les thérapies basées sur l'inhibition de MEK devront être complémentées d'une inhibition de ERK, en particulier dans des maladies inflammatoires chroniques à forte prédominance neutrophilique.

La mort cellulaire programmée ou apoptose est un mécanisme conservé chez les eucaryotes multicellulaires qui contribue au développement embryonnaire et à l'homéostasie cellulaire des organismes. Dans les cellules vivantes, l'activité des protéases qui exécutent le programme de mort cellulaire, les caspases, est contrôlée par des signaux de survie provenant de l'environnement cellulaire. Les caspases initiatrices de l'apoptose régulée par l'environnement, la caspase 9 et la caspase 8 sont activées respectivement par l'apoptosome et par les récepteurs de mort. Les signaux environnementaux, parmi lesquels le contact avec la matrice extracellulaire ou la présence de facteurs de croissance, activent des voies de signalisation contrôlant la machinerie de mort cellulaire. La voie des MAPK1/3 est une voie de signalisation contrôlée par le proto-oncogènes Ras et comportant les kinases Raf, MEK1/2 et MAPK1/3 (ERK2/1 ou p42/p44). La voie des MAPK1/3, qui est impliquée dans la prolifération et la différentiation cellulaire, joue un rôle essentiel dans la survie cellulaire. L'objectif de cette thèse a été de caractériser les mécanismes moléculaires impliqués dans le contrôle de la mort cellulaire par la voie des MAPK1/3. Ce travail est basé sur l'utilisation d'une forme active et inductible de la kinase Raf-1 (DRaf-1:ER) dont l'activation forte et prolongée correspond à une induction pathologique de la voie des MAPK1/3. Nous avons montré que, selon le type cellulaire, l'activation de deltaRaf-1:ER favorise la survie ou la mort cellulaire. Dans les cellules fibroblastiques CCL39, l'activation de deltaRaf-1:ER protège de la mort cellulaire mitochondriale induite par la privation en sérum du milieu de culture. Dans ces conditions, nous avons montré que la stimulation de Raf-1 :ER bloque l'activation de la caspase-9 mais n'empêche pas la délocalisation du cytochrome c, la multimérisation d'APAF1 ni le recrutement de la procaspase 9 dans l'apoptosome. Ce mécanisme post mitochondrial de protection contre la mort cellulaire dépend de la néo-synthèse des protéines et nécessite une activité continue de la kinase MEK. A l'inverse, dans les cellules HEK 293 issues de rein embryonnaire et présentant des caractéristiques neuronales, nous avons montré que l'activation soutenue de la voie des MAPK1/3 par DRaf1-ER induit une mort cellulaire massive. Celle-ci est caractérisée par l'activation des caspases et la fragmentation de l'ADN. La mort cellulaire est détectée plus de 24 heures après l'activation de Raf1-ER, elle est maximale à 48h. L'induction de la mort cellulaire ne requière la synthèse protéique que durant la phase précoce d'activation mais nécessite l'activité continue du module MEK/MAPK. La mort cellulaire résulte de l'activation de la caspase 8 et n'implique pas la voie mitochondriale, elle est caractérisée par une vacuolisation importante du cytoplasme des cellules qui l'apparente à une forme particulière d'apoptose. L'inactivation des fonctions du récepteur fas et de son adaptateur FADD indique que le processus d'activation de la caspase 8 est indépendant de la voie des récepteurs de mort. L'ensemble de ces travaux apporte des connaissances nouvelles sur le contrôle de la mort cellulaire par la voie Raf/MAPK1/3. Nous avons montré que la voie de signalisation peut, selon le contexte cellulaire, favoriser la survie cellulaire ou induire la mort. Dans les deux cas, le contrôle de la mort cellulaire dépend à la fois de la synthèse protéique et de mécanismes post-traductionnels. Les mécanismes moléculaires affectés par l'activation prolongée des MAPK1/3 seraient impliqués aussi bien dans la résistance des cellules tumorales aux traitements proapoptotiques que dans le développement des maladies neurodégénératives.

Le VEGF-A ou "Vascular Endothelial Growh Factor-A" est une protéine sécrétée qui possède un fort pouvoir angiogénique en induisant à la fois la perméabilisation des vaisseaux sanguins et la prolifération des cellules endothéliales. Elle intervient dans de nombreux phénomènes physio-pathologiques. Elle est notamment surexprimée dans certaines tumeurs solides. Nous avons cherché à connaître les voies de signalisation intracellulaires capables de réguler l'expression du VEGF-A dans des fibroblastes en réponse à l'hypoxie et aux facteurs de croissance. Nous avons montré que la voie des MAPK p42/p44 ou Erk1/2 (MAPK) induit la transcription du VEGF-A en réponse aux facteurs de croissance, en ciblant une région riche en G et C du promoteur. Lors de l'activation de cette voie les facteurs de transcription Sp1 et AP-2 sont recrutés rapidement sur cette région. Nous avons démontré que Sp1 est phosphorylé par les MAPK à la fois in vitro et in vivo. De plus nous avons identifié deux sites ciblés par les MAPK : les thréonines 453 et 739. Ces phosphorylations sont requises pour la pleine activité de Sp1 en aval des MAPK, et de façon réciproque, la surexpression d'un Sp1 dont les thréonines d'intérêt ont été mutées en alanines compromet l'induction du VEGF-A par cette voie de signalisation. Ce travail permet donc de mieux comprendre la régulation transcriptionnelle du VEGF-A en réponse aux facteurs de croissance. Il démontre également que le facteur de transcription Sp1 est un substrat des MAPK in vivo, ce qui établit un nouveau lien entre ce facteur de transcription ubiquiste et cette voie de signalisation dérégulée dans de nombreux cancers.

Le cancer papillaire de la thyroïde (CPT) est la tumeur endocrine la plus fréquente. Des anomalies moléculaires activant la voie des MAPK (Mitogen-Activated Protein Kinases) sont identifiées, de façon mutuellement exclusive, dans environ 70% des cas. Il s’agit de réarrangements chromosomiques, le plus souvent de type RET/PTC (10%), de mutations ponctuelles activatrices des trois isoformes de l’oncogène RAS (H, N et K-RAS) (10%), ou de l’oncogène B-RAF (50%). La mutation « hot spot » B-RAFV600E est la plus fréquemment identifiée, elle est associée à une plus grande agressivité clinique (diagnostic à un stade tardif, risque de récidives et de décès accru). Ces évènements moléculaires ont pour conséquence commune l’activation de la voie des MAPK, se traduisant en aval par la phosphorylation de MEK (Mitogen-activated Extracellular signal-Regulated Kinase) puis de ERK (Extracellular signal-Regulated Kinase). Cette dernière est régulée négativement par des phosphatases, appartenant à la famille des Dual Specificity Phosphatases (DUSPs), d’expression ubiquitaire, et en particulier de deux phosphatases spécifiques de ERK, l’une cytoplasmique (DUSP6) et l’autre nucléaire (DUSP5). Nous avons fait l’hypothèse que ces phosphatases pouvaient être soit des gènes suppresseurs de tumeurs (leur perte d’expression conduisant à une augmentation de phosphorylation de ERK et une prolifération accrue), soit des marqueurs du degré d’activation de la voie MAPK dans le cadre d’une boucle de rétrocontrôle négatif. Ceci nous a conduits à analyser la régulation et l’expression de ces phosphatases dans trois modèles : la lignée cellulaire PCCL3 (thyroïde de rat), exprimant l’un des trois principaux oncogènes mutés dans les CPT (RET/PTC3 ou H-RASV12 ou B-RAFV600E) sous le contrôle d’un promoteur inductible par la doxycycline, des lignées cellulaires humaines dérivant de CPT et des CPT humains. (...)
Papillary thyroid cancer (PTC) is the most common endocrine malignancy. Mutually exclusive and activating alterations of the MAPK pathway (Mitogen-Activated Protein Kinases) are identified in 70% of cases. Common mutations found in PTCs are point mutation of the B-RAF (50%) and RAS genes (10%) as well as RET/PTC chromosomal rearrangements (10%). The hot spot B-RAFV600E mutation is the most frequently alteration identified and is connected with agressive clinical characteristics (high stage at diagnosis, high recurrence risk and death). These molecular events lead to constitutive activation of the MAPK pathway, resulting in MEK (Mitogen-activated Extracellular signal-Regulated Kinase) and ERK (Extracellular signal-Regulated Kinase) phosphorylation. ERK is negatively regulated by phosphatases and among them, Dual Specificity Phosphatases (DUSPs), ubiquitary expressed, in particular two ERK-specific phosphatases DUSP5 (nuclear) and DUSP6 (cytosolic). We hypothesized that these phosphatases could have tumor supressor properties (i.e. their loss would be associated with an increase in MAPK pathway activation) or may serve as a surrogate marker of MAPK pathway activation in the context of a negative feedback loop. We analysed regulation and expression of both phosphatases in 3 models: three PCCL3 cell lines (rat thyroid cells) expressing one of the most common oncogene identified in PTCs (RET/PTC3 or H-RASV12 or B-RAFV600E) under the control of a doxycycline-inducible promoter, human PTC-derived cell lines and human PTC. We demonstrated that MAPK pathway activation was correlated with induction of DUSP5 and DUSP6. These phosphatases are involved in a negative feedback loop that contributes to a tight regulation of phospho-ERK levels. DUSP5 and DUSP6 mRNA are overexpressed in human PTCs, especially in B-RAF mutated tumors suggesting a higher MAPK signaling output in these agressive PTCs. Silencing of DUSP5 and/or DUSP6 by small interfering RNA does not affect proliferation of human B-RAFV600E thyroid carcinoma-derived cell lines, suggesting the lack of tumor suppressor gene role. Compensatory changes in expression of DUSPs when a specific one is inactivated may explain this lack of effect. On the opposite, a DUSP6 pharmacological inhibitor induced a concentration dependent decrease in proliferation of human B-RAFV600E cells, suggesting « off-target » effect of this inhibitor. In a second part, we analysed the regulation of DUSP5 expression, which is a target of the MAPK pathway activation. We demonstrated, using pharmacological inhibitors, that DUSP5 is an early response gene, regulated mostly by the MAPK pathway, at the transcriptional level. Two contiguous CArG boxes that bind serum response factor (SRF) were found in a 1Kb promoter region, as well as several E twenty-six transcription factor family binding sites (EBS). These sites potentially bind Elk-1, a transcription factor activated by ERK1/2. Using wild type or mutated DUSP5 promoter reporters, we demonstrated that SRF plays a crucial role in serum induction of DUSP5 promoter activity, the proximal CArG box being important for SRF binding in vitro and in living cells. Moreover Elk-1 was bound in vitro to a promoter region containing the proximal CArG box and a putative EBS. Its specific binding to SRF was necessary to elicit promoter response to dominant positive Elk-VP16 and to enhance the response to serum stimulation. Altogether our results suggest that the MAPK pathway is more active in B-RAFV600E PTC than in PTC with other genetic alteration and could explain their clinical agressivity. DUSP5 and DUSP6, as well as phosphorylated MEK, are markers of activation of the MAPK pathway. Neither phosphatase has tumor suppressor properties in our thyroid cancer cell models. Our results suggest redundancy and functional compensation among DUSPs. (...)

Bcl-xL et Mcl-1 sont deux protéines anti-apoptotiques de la famille Bcl-2 dont dépendent les cancers de l’ovaire pour leur survie, leur inhibition semble donc être une stratégie pertinente. La molécule BH3-mimétique ABT 737 (ou son analogue oral, l’ABT-263), est un puissant inhibiteur de Bcl-xL mais l’inhibition de Mcl-1 reste problématique. Les voies de signalisation PI3K/Akt/mTOR et MAPK/ERK régulent l’expression et l’activité de cette dernière protéine et de ses partenaires BH3-only (Bim, Puma, Noxa). Nous nous sommes donc intéressés à l’intérêt de leur inhibition pour sensibiliser les cellules cancéreuses ovariennes à l’ABT-737. La première étude menée avec le BEZ235, double inhibiteur PI3K/mTOR développé par le laboratoire Novartis, montre qu’il inhibe l’expression de Mcl-1 et induit celle de Puma, et qu’il sensibilise les cellules cancéreuses ovariennes à l’ABT-737 à condition que l’expression de Bim soit également induite. La deuxième étude a évalué les effets de l’AZD8055, inhibiteur du site actif de mTOR développé par le laboratoire AstraZeneca, et du trametinib, inhibiteur allostérique de MEK développé par le laboratoire GlaxoSmithKline et actuellement en clinique, sur trois lignées cancéreuses ovariennes. L’inhibition de l’expression de Mcl-1 et l’induction de celle de Puma par l’AZD8055 ne permettent pas de diminuer suffisamment le ratio [Mcl-1/protéines BH3-only] pour sensibiliser les cellules à l’ABT-737. En revanche, la forte induction de Bim sous forme active déphosphorylée par le trametinib permet de diminuer suffisamment ce ratio pour sensibiliser deux des trois lignées testées à l’ABT-737. C’est cependant la triple combinaison AZD8055/trametinib/ABT-737 qui est la plus efficace pour induire une apoptose massive dans les trois lignées. Par ailleurs, de façon intéressante, l’association de l’AZD8055 et du trametinib est cytotoxique sans ABT 737 dans une des lignées testées. Ces résultats mettent en évidence l’efficacité de différentes stratégies thérapeutiques multi-cibles et la nécessité de définir des marqueurs prédictifs de la réponse afin d’évoluer vers un traitement personnalisé pour améliorer la prise en charge des cancers de l’ovaire
Ovarian cancers depend on Bcl-xL and Mcl-1, two anti-apoptotic protein of the Bcl-2 family, for their survival and their inhibition seems to by a relevant strategy. The BH3-mimetic molecule ABT-737 (or its oral form, ABT-263), is a strong Bcl-xL inhibitor, but Mcl-1 inhibition remains problematic. Signaling pathways PI3K/Akt/mTOR and MAPK/ERK regulate expression and activity of Mcl-1 and its BH3-only partners (Bim, Puma, Noxa). We focused on the interest of their inhibition to sensitize ovarian cancer cells to ABT-737. The first study with BEZ235, a PI3K/mTOR dual inhibitor developed by Novartis, inhibits Mcl-1 expression and induces the one of Puma, and sensitizes ovarian cancer cells to ABT-737 provided that Bim expression is induced. The second study evaluated the effects of AZD8055, mTOR active site inhibitor developed by AstraZeneca, and of trametinib, MEK allosteric inhibitor developed by GlaxoSmithKline and currently in clinic, on three ovarian cancer cell lines. Mcl-1 expression inhibition and Puma expression induction by AZD8055 does not sufficiently reduce [Mcl-1/BH3-only proteins] ratio to sensitize cells to ABT-737. On the other hand, strong Bim induction in its active dephosphorylated form by trametinib sufficiently reduce this ratio to sensitize two of the three cell lines tested to ABT-737. Nevertheless, the triple combination AZD8055/trametinib/ABT-737 is the most efficient to induce massive apoptosis in the three cell lines. Besides, interestingly, AZD8055 and trametinib association is cytotoxic without ABT-737 in one of the tested cell lines. These results highlight the efficacy of different multi-targets therapeutic strategies and the need of predictive marker definition of the response to develop personalized treatment and to improve ovarian cancer management

As a fundamentally hybrid medium, cinema has always been defined by its interactions with other art forms such as painting, sculpture, photography, performance and dance. Taking the in-between nature of the cinematic medium as its starting point, this collection of essays maps out new directions for understanding the richly diverse ways in which artists and filmmakers draw on and reconfigure the other arts in their creative practice. From pre-cinema to the digital era, from avant-garde to world cinema, and from the projection room to the gallery space, the contributors critically explore what happens when ideas, forms and feelings migrate from one art form to another. Giving voice to both theorists and moving image practitioners, Cinematic Intermediality: Theory and Practice stimulates fresh thinking about how intermediality, as both a creative method and an interpretative paradigm, can be explored alongside probing questions of what cinema is, has been and can be.

The Virgin Mary as such cannot be examined scientifically. We can, however, examine her ‘apparitions’ in the world, as well as the innumerable variants of Marian devotion and cult. This volume focuses on her manifestations in the post-Communist region with some geographical spillovers. It is either because post-Communist transformation concerned not only the former socialist countries, but also had an impact on the entire European region and was part of the overall post-modern and post-Communist reconfiguration of the European area. Another factor is that Marian worship is not controlled by political borders of present-day nation states. It has a wider transnational potential and impact. Nevertheless, we focused our viewfinder primarily on the post-Communist region, as we believe that thanks to its geographical and symbolic location and economic position in Europe, as well as its historical roots and traditions and common Communist history and heritage, it not only shows different traits of modernity compared to ‘Western Europe’, but we also face specific features and forms of worshipping of the Virgin Mary. We therefore decided to present in this volume the traces of the Virgin Mary by means of more in-depth analyses from selected countries of the post-socialist region. By means of this publication, we can observe how the Virgin Mary is manifested in the faces of seers and pilgrims and how audio-visual means are becoming a direct part of Marian apparitions in Germany in the modern era (H. Knoblauch and S. Petschke); how she speaks through the mouth of a blind Roma woman and pacifies the ethnic and religious tensions between various groups in Romania (L. Peti); how she attributes meaning to meaningless places on the map by reallocating her presence through the geo- graphical and time distribution of Marian dedications in Slovakia (J. Majo); how, after the fall of Communism, she revitalises the old places of her cult with new power, bringing together traditional and non-traditional forms of worship in the secular Czech Lands (M. Holubová); how her messages are spread on the websites of new non-traditional Marian movements and how their apocalyptical warnings are being updated and localised into the specific national environment in Czechia (V. Tutr); how she addresses the readers of Marian literature differently on the shelves of book- stores in Slovakia and Austria (R. Kečka); but also how the Virgin Mary absorbs ultra-modern millennial and spiritualistic concepts of Mother Earth and Mother of the Universe, becoming the speak- er of the great unified Hungarian nation (J. Kis-Halas); how she is becoming the re-discovered herald of Serbian national identity (A. Pavićević); how she absorbs the local forms of faith and folk Christianity in modern era and is thus the manifestation of grass- root Christianity and local religious culture in Bulgaria (V. Baeva and A. Georgieva); and how the path from a private to an officially recognised apparition depends not only on the Virgin Mary and the seer, but also on the overall constellation of the audience and the ability to offer a religious ready-made event (T. Zachar Podolinská and L. Peti). This publication observes the current diversity of the forms of Marian devotion in post-Communist countries through different national and geographically defined contours and, in particular, the ability of the Virgin Mary to satisfy the hunger for modern spirituality and authentic religiousness, give voice to unofficial and popular religions, revitalise and redefine old places of cult and add new ones, appease war conflicts, speak out on behalf of nations and marginalised ethnic groups, and guard national and conservative values. The post-modern and post-Communist Mary thus restores ruptured traditions with love and enchants the violently atheised European region with new miracles and apparitions, regardless of whether top Church and state representatives like it or not.