Dissertations / Theses on the topic 'Granuloma'

Syfte. Syftet med detta arbete var att undersöka förekomsten och behandling av granulom vid gastrostomier hos barn och ungdomar under 18 år i Sverige. Syftet var även att undersöka sjuksköterskors kunskaper om granulombehandling hos barn och ungdomar under 18 år med gastrostomi i Sverige. Metod. Den forskningsdesign som valdes var av kvantitativ metod genom enkätundersökning. Enkäterna skickades ut till sjuksköterskor som arbetar i Sverige och finns med i något av följande nätverk: Nätverket för habiliteringssjuksköterskor, Nätverket för habiliteringssjuksköterskor inom nutrition och/eller Nätverket för nutritionssjuksköterskor. Resultat. Det upplevdes att granulombesvären var varierande och berodde på barnets övriga hälsa. 52% uppskattade att barnen utvecklade granulom inom två månader efter inläggning av gastrostomin. 34% av deltagarna uppskattade att ca 25% av barn och ungdomar med gastrostomier utvecklar granulom. 46% använde en kombination av lapis och kortisonsalva som behandlingsmetod vid granulom. Slutsats. De behandlingar som idag används för granulom är lapis och kortisonsalva, dessa används av många i kombination med varandra och verkar ha ett gott resultat. Sjuksköterskors kunskap inom området är brett och många har en gemensam åsikt om att granulombildning ofta har ett samband med patientens övriga hälsa.<br>Aim. The aim of the study was to investigate the occurrence and treatment of granulomas in children and adolescents under the age of 18 with gastrostomy in Sweden. The aim was also to investigate nurses knowledge of granulomatreatment in children and adolescents under the age of 18 with gastrostomy in Sweden. Methods. The design was of quantitative method by questionnaire. A questionnaire was sent to nurses who work in Sweden and are included in one of the following networks: Network for rehabilitation nurses, Network for rehabilitation nurses in nutrition and / or Network for nutrition nurses. Results. The severity of granuloma varied, depending on the child's general health. 52% estimated that the children developed granulomas within two months after insertion of the gastrostomy. 34% of respondents estimated that about 25% of children and adolescents with gastrostomier develop granulomas.46% used a combination of lapis and cortisone ointment as a treatment for granuloma. Conclusion.The treatments currently used for granulomas is lapis and cortisone ointment, these are used by many in combination with each other and seem to have a good result. Nurses' knowledge in the field is extensive and many have a common view that granuloma formation is often linked to the patients general health.

Orientadores: Rogério de Castilho Jacinto, Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes<br>Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba<br>Made available in DSpace on 2018-08-22T13:36:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Signoretti_FernandaGrazielaCorrea_D.pdf: 1883938 bytes, checksum: 30ba9fea63b276d10ef399e96215e8fd (MD5) Previous issue date: 2013<br>Resumo: O conhecimento do perfil microbiano envolvido na periodontite apical persistente pode auxiliar no estabelecimento de protocolos mais eficazes na conduta endodôntica. Através de um relato de caso clínico e da avaliação de 20 casos de periodontite apical persistente após retratamento endodôntico, foram objetivos deste trabalho: identificar bactérias viáveis em lesões periapicais persistentes e correlacionar os achados microbiológicos com o diagnóstico histopatológico da lesão. Métodos: No relato de caso o dente foi submetido ao retratamento endodôntico através da técnica de crown-down com o uso de substância química auxiliar (clorexidina 2% gel), patência e alargamento foraminal e obturação dos canais em sessão única. Após persistência da fístula foi indicada apicectomia, que foi realizada sob magnificação e retro-obturação com MTA. O fragmento apical da raiz distal foi observado por microscopia eletrônica de varredura e foi realizada cultura microbiana da lesão curetada (capítulo 1). Foram selecionados 20 pacientes com necessidade de cirurgia parendodôntica, submetidos à coleta durante a curetagem do tecido periapical. As amostras foram processadas microbiologicamente por técnicas de cultura microbiana e enviadas para diagnóstico histológico (capítulo 2). Resultados: No capítulo 1 as seguintes espécies foram encontradas: Actinomyces naeslundii e Actinomyces meyeri, Propionibacterium propionicum, Clostridium botullinum, Parvimonas micra e Bacteroides ureolyticus; a análise em microscopia eletrônica de varredura revelou biofilme bacteriano circundante ao forame apical e superfície radicular externa. O trespasse de guta-percha no zip apical causado durante o primeiro tratamento também foi observado. A proservação radiográfica após seis meses mostrou reparo periapical aparente, o qual foi confirmado após 24 meses. No capítulo 2 foram encontrados mais cistos (13/20) do que granulomas (7/20). A cultura microbiológica e testes bioquímicos específicos puderam identificar 83 bactérias cultiváveis divididas em 33 espécies bacterianas distintas. As lesões demonstraram uma infecção de caráter misto, composta em sua maior parte por microrganismos anaeróbios estritos (80,4% em cistos e 65% em granulomas) e Gram-positivos (70,6% em cistos e 84,4% em granulomas). Embora se tenha isolado até sete espécies bacterianas em uma única lesão (granuloma), na maioria dos casos, quatro (25%) ou cinco (35%) espécies foram encontradas simultaneamente. Os dados foram analisados estatisticamente através do teste exato de Fisher e chi-quadrado de Pearson (P<.05). Conclusões: Bactérias Gram-positivas anaeróbias estritas e o biofilme extrarradicular parecem participar da etiologia do insucesso do tratamento endodôntico. O retratamento endodôntico seguido de microcirurgia periapical constitui uma alternativa de sucesso na resolução de infecções extrarradiculares persistentes (capítulo 1). Embora os cistos tenham sido mais frequentes que granulomas nos casos de insucesso do retratamento endodôntico, bactérias foram isoladas em ambos os tipos de lesão, com uma predominância de espécies gram-positivas, sugerindo que as mesmas são capazes de sobreviver fora do canal radicular e podem estar relacionadas com a persistência do processo patológico, mesmo após um retratamento endodôntico acurado (capítulo 2)<br>Abstract: The knowledge of the microbial profile of persistent apical periodontitis allows the development of more efficient endodontic therapy. Through the evaluation of a case report and 20 cases of persistent apical periodontitis after endodontic retreatment, the objectives of this study were: to identify viable bacteria in persistent periapical lesions and correlate microbiological findings with histopathological diagnosis. Methods: In the case report, the tooth had undergone endodontic retreatment by the crown-down technique with the use of auxiliary chemical substance (2% chlorhexidine gel), foraminal patency and enlargement and filling of root canals in a single session. After persistence of sinus tract apicoectomy was indicated, which was performed under magnification and retro-filled with MTA. Apical fragment of the distal root was observed by scanning electron microscopy and excised tissue processed for microbial identification (Chapter 1). Twenty patients requiring endodontic surgery were selected. The samples were processed by microbiological techniques from microbial culture and sent for histological diagnosis (Chapter 2). Results: In chapter 1 the following species were found: Actinomyces naeslundii and Actinomyces meyeri, Propionibacterium propionicum, botullinum Clostridium, Parvimonas micra and Bacteroides ureolyticus; SEM analysis of the root end showed bacterial biofilm surrounding the apical foramen and external root surface. Gutta-percha in the apical zip caused during the first treatment was also observed. Six months follow-up showed apparent periapical repair, which was confirmed after 24 months. In chapter 2 more cysts (13/20) than granulomas (7/20) were found. Culture tests were able to identify 83 specific cultivable bacteria divided into 33 different bacterial species. The microbial characterization showed a mixed infection, composed mostly by strict anaerobes (80.4% in cysts and granulomas in 65%) and gram-positive (70.6% in cysts and granulomas in 84.4%). Although up to seven bacterial species in a single lesion (granuloma) has been isolated, in most cases, four (25%) or five (35%) species have been found. Data were statistically analyzed using Fisher's exact test and Pearson chi-square test (P<.05). Conclusions: Gram-positive bacteria and extra-radicular biofilms seem to participate in the etiology of endodontic retreatment failure. The endodontic retreatment followed by micro-periapical surgery proved to be a successful alternative in the resolution of extra-root persistent infections (Chapter 1). Although cysts were more frequent than granulomas in cases of failure of the endodontic retreatment, bacteria were isolated from both types of lesions, with a predominance of gram-positive species, suggesting that these species can survive outside the root canal and might be related with the persistence of the pathological process even after accurate endodontic retreatment (Chapter 2)<br>Doutorado<br>Endodontia<br>Doutora em Clínica Odontológica

Anti-neutrophil cytoplasm antibodies (ANCA) are associated with a severe form of small vessel systemic vasculitis, in which they target two specific auto-antigens, proteinase-3 (PR3) and myeloperoxidase (MPO) found within neutrophils and monocytes. Granulomatosis with polyangiitis (GPA) and microscopic polyangiitis (MPA) are the main clinical syndromes, both characterized by kidney and lung disease, but granulomatous inflammation is almost exclusively found in GPA, and unlike other manifestations, remains difficult to treat. In GPA patients, PR3 is the predominant ANCA auto-antigen and neutrophil membrane PR3 expression is increased. There has been limited understanding of why granulomata are restricted to this patient subgroup. I have investigated the role of PR3 in driving giant cell and granuloma formation by generating a novel in vitro model. Using extensive tissue culture and microscopy techniques I have been able to demonstrate that PR3 induces both giant cell and granuloma formation in GPA patients’ cells. Giant cells are the precursors to granulomata and I have demonstrated that in GPA patients, monocytes firstly fuse with the persistence of PR3 and then later recruit lymphocytes to form an organized granuloma-like structure. I have developed a unique method of quantifying granuloma formation and I have been able to show that GPA patients show a statistically significant greater rate of PBMC aggregation both spontaneously and in the presence of PR3 compared to MPA patients and healthy controls. I have explored the potential mechanisms of granuloma formation in this patient subgroup. Specifically, IL-6 may be important in driving granuloma formation in GPA patients and supports the notion of PR3-mediated process. PR3 cleaves protease-activated receptor 2 (PAR2) and I have shown that the presence of a PAR2 agonist further augments cell fusion. These findings support the role of PR3-mediated monocyte activation and fusion with additional T cell aggregation. In summary, I have developed a novel system to test giant cell and granuloma formation in GPA patients, a potential platform to evaluate new therapeutic treatments.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista<br>“Niveles de Mieloperoxidasa (MPO) en Fluido Gingival Crevicular (FGC) de Dientes con Periodontitis Apical Asintomática (PAa)” Introducción: La mieloperoxidasa (MPO), es una peroxidasa con rol defensivo contra los agentes infecciosos y paralelamente provoca daño a los tejidos adyacentes. A la fecha, su presencia no se ha asociado a la periodontitis apical asintomática (PAa). Objetivo: Comparar los niveles de MPO presente en fluido gingival crevicular (FGC) de dientes con PAa antes del tratamiento endodóntico con dientes con PAa después del tratamiento endodóntico y dientes sin PAa. Materiales y Métodos: Se obtuvieron muestras de FGC de dientes con PAa antes del tratamiento endodóntico (n=13) y después de siete días finalizado éste (n=12) y de dientes sin PAa (n=13). Las muestras fueron eluidas y se les realizó cuantificación de proteínas totales. Para determinar los niveles de MPO se realizó test de ELISA y para el análisis estadístico el programa GraphPAD prism. 5.0. Resultados: La MPO se expresa en FGC en dientes sanos y con PAa. Si bien se observó que los niveles de MPO fueron ligeramente mayores en FGC de dientes con PAa que en dientes sanos, y que hubo una tendencia a la disminución después del tratamiento endodóntico, las diferencias no fueron estadísticamente significativas. Conclusiones: Los niveles de MPO en el FGC no reflejaron el estado de salud periapical, esto podría estar influenciado por estados inflamatorios gingivales subclínicos.

A degradação de proteínas da matriz extracelular pelas metaloproteases da matriz (MMPs) ocorre nos processos fisiológicos (turnover) bem como nos processos patológicos (inflamação, neoplasias, etc). A atividade das MMPs nos tecidos é regulada, naturalmente, por um grupo de inibidores teciduais de metaloproteases (TIMPs). Recentemente, um novo inibidor de MMPs, chamado RECK (proteína indutora de reversão rica em cisteína com domínios Kazal) foi identificado. Neste estudo, verificamos os níveis de transcritos para metaloproteases da matriz (MMP-2, -9 e -14), inibidores teciduais de metaloproteases (TIMP-1 e -2) e RECK, por meio da técnica de Real-Time RT-PCR, assim como as células envolvidas em granulomas periapicais para MMP-2 e -9, por meio de marcações de imuno-histoquímica. As amostras deste estudo foram coletadas de cirurgias paraendodônticas, sendo 15 submetidas ao Real-Time RT PCR (8 granulomas periapicais, 6 cistos periapicais e 1 cicatriz apical), e 10 para imuno-histoquímica (10 granulomas periapicais). Os resultados para o Real-Time PCR demonstraram que houve a expressão de MMP-2, -9, -14, TIMP-1, -2, e RECK em granulomas e cistos periapicais, não havendo diferença estatisticamente significante entre as duas patologias periapicais frente aos genes testados. Todavia, quando o grupo lesão periapical (granuloma e cisto periapical) foi confrontado frente aos genes pesquisados, houve uma correlação significativa entre os níveis de transcritos para MMP-2, -9 e -14, TIMP-1, -2 e RECK. Para as imunomarcações nos granulomas periapicais, a MMP-2 apresentou um padrão mais difuso, dispondo-se perifericamente às células e dispersas pela MEC, em comparação com a MMP-9 que apresentou um padrão mais localizado e restrito. Os macrófagos foram às células que mais expressaram estas metaloproteases da matriz.<br>Degradation of extracellular matrix (ECM) proteins by matrix metalloproteinases (MMPs) occurs during matrix turnover and pathologic processes (inflammation, cancers). MMP activity in the tissues is regulated in part by a group of tissue inhibitors (TIMPs). Recently, a new MMP inhibitor called RECK (reversion inducing cysteine-rich protein with a Kazal motif) has been identified. In this study, we verified the message (mRNA) for MMPs (MMP-2, -9 e -14), tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP-1 e -2) and RECK, through a Real-Time RT-PCR technique, as well as the cells expressing MMP-2 and -9 in periapical granulomas using immunohistochemistry. Samples were collected during periapical surgery, of which 15 were used for Real-Time RT PCR (8 periapical granulomas, 6 periapical cysts and 1 apical scar), and 20 for immunehistochemistry (10 periapical granulomas). The results for Real-Time PCR showed MMP-2, -9, -14, TIMP-1, -2, and RECK expression in periapical granulomas and cysts, with no significant statistical differences between the twoperiapical pathologies regarding the genes tested. However, when the group periapical lesion (granuloma and cyst) was confronted with the genes tested,there was a significant correlation in some mRNA expression for MMP-2, -9, - 14, TIMP-1, -2 and RECK. Regarding immunostainings in the periapical granulomas, MMP-2 was more diffusely expressed, being located peripherally to the cells and dispersed through the ECM, when compared to MMP-9 which presented a more localized and restrained pattern. Macrophages were the most abundant cells expressing these MMPs.

Незважаючи на існування сучасних матеріалів, за допомогою яких значно підвищилась ефективність лікування хронічних форм періодонтитів, поширеність яких складає близько 35 % в нозологічній структурі відвідування стоматолога, наявність апіко-латеральних гранульом є прямим показанням до екстракції зуба. На теперішній час дана нозологічна одиниця в окремих клінічних випадках являється актуальною і невирішеною проблемою.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides sp. A doença é endêmica na maior parte dos países da América Latina, sendo os pulmões os órgãos mais afetados. O diagnóstico de PCM é feito com base na história clínica e epidemiológica, e confirmado pela visualização microscópica das estruturas fúngicas do Paracoccidioides a partir de secreções ou tecidos. Por vezes, a apresentação clínica e os achados histopatológicos da PCM simulam os de outras doenças, como a sarcoidose, e ocasionalmente são encontradas nas lesões formas excepcionalmente pequenas do Paracoccidioides, que podem ser confundidas com outros fungos, como o Histoplasma capsulatum. O presente trabalho objetivou identificar e caracterizar os casos que simularam sarcoidose e os que apresentaram formas pequenas de Paracoccidioides dentre os 856 casos de paracoccidioidomicose diagnosticados no Laboratório de Micologia do Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre, no período de 1981 a dezembro de 2013. Foram identificados 8 casos mimetizando a sarcoidose e 12 apresentando formas pequenas de Paracoccidoides. Dos casos que simularam a sarcoidose, todos eram fumantes do sexo masculino, com idades variando entre 27 e 59 anos (média = 42,5 anos) e apresentaram tosse produtiva, infiltrado fibronodular bilateral aos exames de imagem e granulomas sarcoides na biópsia pulmonar, recebendo prednisona como tratamento inicial. O diagnóstico de PCM, nestes casos, foi realizado por meio de cortes histológicos corados ao GMS (n=8), exame direto do escarro (n=2) e imunodifusão (n=4). Dentre os casos que apresentaram formas pequenas do Paracoccidioides, todos eram fumantes, tinham idades variando entre 33 e 68 anos (média = 55,58 anos), 10 eram do sexo masculino, e 10 apresentavam sintomas consistentes com os da PCM (dois pacientes eram assintomáticos). O diagnóstico etiológico, em todos os casos, foi realizado por meio de cortes histológicos seriados corados ao GMS (que revelaram as formas multibrotantes patognomônicas do Paracoccidioides) e corroborado por exame direto do escarro (n=3), imunodifusão (n=6) e cultura (n=1). Com isto, ressalta-se a importância da consideração dos diagnósticos diferenciais da paracoccidioidomicose. Visto que a sarcoidose é um diagnóstico de exclusão, o achado de granulomas epitelioides sem necrose deve incitar a busca ativa por agentes etiológicos com a utilização das colorações de ZN e GMS. E nos casos em que se encontram formas pequenas ou pouco usuais do Paracoccidioides, devem-se realizar cortes histológicos seriados e escalonados corados ao GMS e utilizar técnicas laboratoriais complementares, como imunodifusão e cultura, para assegurar o seu diagnóstico.<br>Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic infection caused by the fungus Paracoccidioides sp. The disease is endemic in most Latin American countries, and the lungs are the most affected organs. The diagnosis of PCM is based on clinical and epidemiological features, and confirmed by the microscopic visualization of yeasts of Paracoccidioides from clinical specimens. Sometimes the clinical presentation and histopathological findings of PCM mimic those of other diseases, such as sarcoidosis, and occasionally exceedingly small forms of Paracoccidioides are found in lesions, which can be confused with other fungi, such as Histoplasma capsulatum. This study aimed to identify and characterize the cases that simulated sarcoidosis and those with small forms of Paracoccidioides among the 856 cases of paracoccidioidomycosis diagnosed in the Mycology Laboratory of the Hospital Complex Santa Casa de Porto Alegre, from 1981 to December 2013. 8 cases were identified mimicking sarcoidosis and 12 with small forms of Paracoccidoides. All the cases that mimicked sarcoidosis were male smokers, aged between 27 and 59 years (mean = 42.5 years) and had productive cough, bilateral fibronodular infiltrates on X-ray and sarcoid granulomas in the lung biopsy, receiving prednisone as initial treatment. The diagnosis of PCM in these cases was carried out by histological sections stained with GMS (n = 8), direct examination of sputum (n = 2) and immunodiffusion (n = 4). Among the cases with small forms of Paracoccidioides, all were smokers, aged between 33 and 68 years (mean = 55.58 years), 10 were male, and 10 had symptoms consistent with PCM (two patients were asymptomatic). The etiologic diagnosis in all the 12 cases was made by serial tissue sections stained with GMS (which revealed the multibudding pathognomonic forms of Paracoccidioides) and confirmed by direct examination of sputum (n = 3), immunodiffusion (n = 6) and culture (n = 1). In conclusion, it is emphasized the importance of considering the differential diagnosis of paracoccidioidomycosis. Since sarcoidosis is a diagnosis of exclusion, the finding of epithelioid granulomas without necrosis should encourage the active search for etiologic agents with the use of ZN and GMS stains. And in cases in which small or unusual forms of Paracoccidioides are found, serial histological sections stained with GMS and complementary laboratory techniques such as immunodiffusion and culture should be performed to ensure their diagnosis.

Orientador: Regina Helena Garcia Martins<br>Coorientador: Daniele Cristina Cataneo<br>Resumo: Introdução: os granulomas laríngeos são lesões benignas, não neoplásicas, uni ou bilaterais, de etiologia variável, que ocorrem no terço posterior das pregas vocais ou na região aritenoídea. Os sintomas são diversos, sendo o mais comum a rouquidão. Os granulomas decorrentes de intubação são altamente recidivantes e não existe consenso quanto ao melhor tratamento. Objetivo: comparar a efetividade dos tratamentos dos granulomas laríngeos decorrentes de intubação endotraqueal. Métodos: foram realizadas revisão sistemática e metanálise proporcional de estudos sobre o tratamento de granulomas laríngeos decorrentes de intubação endotraqueal, seja ele primário ou recidivante. Os critérios de elegibilidade foram: ensaios clínicos randomizados e estudos prospectivos controlados, e na ausência destes, aceitos também estudos retrospectivos e prospectivos não controlados com no mínimo cinco participantes. Os desfechos estudados foram resolução, recidiva e tempo para resolução do granuloma. Os estudos foram identificados na base de dados Pubmed, Embase, Lilacs e Cochrane. Para a análise dos dados e metanálise, utilizou-se o programa StatsDirect 3.0.121. Resultados: dentre os 578 artigos encontrados, 61 foram lidos na íntegra e seis selecionados para a revisão, totalizando 85 pacientes, com idade variando de 21 a 86 anos. Os tratamentos encontrados foram: antirrefluxo, fonoterapia, anti-inflamatórios, corticoterapia, antibioticoterapia, sulfato de zinco e cirurgia. Para o tratamento primár... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)<br>Abstract: Laryngeal granulomas are benign, non-neoplastic lesions that can occur unilaterally or bilaterally for various causes. They are usually located in the posterior third of the vocal folds or in the arytenoid region. Patients may present a number of symptoms, the main one being hoarseness. Post-intubation granulomas are highly recurrent and there is no consensus on the best treatment. Objective: to compare the effectiveness of treatments of laryngeal granulomas secondary to endotracheal intubation. Methods: systematic review and proportion meta-analysis of studies that address the treatment of laryngeal granulomas caused by endotracheal intubation. The eligibility criteria were: randomized controlled trials and controlled prospective studies, and in the absence of these, retrospective and prospective uncontrolled studies were also accepted, with at least five participants. The outcomes that were measured were resolution, recurrence and time to resolve the granuloma. Databases searched were Pubmed, Embase, Lilacs and Cochrane. Statistical analysis was performed with the StatsDirect version 3.0.121 software. Results: among the 578 articles found, 61 were eligible for full reading and 11 articles were included, involving 85 patients, with ages varying from 21 to 86 years). The treatments were: anti-reflux, speech therapy, anti-inflammatory drugs, corticosteroids, antibiotics, zinc sulfate and surgery. For the primary treatment, 85 patients were investigated in six studies, divided into two groups: surgical ± associations (41 patients), with chance of resolution of 75% (95% CI: 0,3% to 100%, I2= 90%), and absolute risk of recurrence of 25% (95% CI: 0,2% to 71%) and clinical (44 patients), with chance of resolution of 86% (95% CI: 67% to 97%), and absolute risk of recurrence of 14% (95% CI: 3 to 33%). In the interpretation of the meta-analysis, there was no statistical significance... (Complete abstract click electronic access below)<br>Mestre

Tuberculosis (TB) remains a global health emergency and one third of the global population harbour latent infection. A central tenet of TB pathology is that caseation of TB granuloma leads to matrix degradation and pulmonary cavitation, resulting in Mtb transmission and disease progression. However, lung destruction must involve activity of MMPs which are emerging as key proteases contributing to lung tissue pathology in TB. MMP-1 is the dominant collagenase in human pulmonary TB, but mice do not express an orthologue of human MMP-1 in the lung. The precise relationship between the formation of caseous necrosis and lung matrix destruction has not been systematically examined, nor how the extracellular matrix (ECM) regulates the host-pathogen interaction. I investigated the effect of transgenic expression of human MMP-1 and -9 in the mouse on TB pathology and studied lung matrix integrity in human TB granulomas by ECM stains. In cell culture systems, I developed a standard in vitro granuloma model and then progressed to 3D and engineered models of TB granuloma and investigated the effect of modulating cell-matrix interaction by introducing matrix components. In the mouse model, transgenic expression of human MMP-1 caused collagen destruction and caseous necrosis, suggesting that the initial event in caseation is collagen breakdown. In human granulomas, ECM destruction and caseous necrosis co-localise, with loss of collagen fibres in areas of caseous necrosis. Consistent with the hypothesis that matrix degradation is a key initial event in TB pathogenesis, I demonstrated that in cell culture models collagen improves survival of Mtb-infected cells. I have re-considered the sequence of events underlying TB immunopathology and demonstrated that collagen destruction driven by MMP-1 is a critical initial event. This challenges current paradigms of disease pathology. These data demonstrate that the ECM regulates the host-pathogen interaction in TB.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2057820 bytes, checksum: 0cb5f0c3fdc5c5044b76d4c489d4ae15 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27<br>Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico<br>Thirty eight cases of canine leproid granuloma (CLG) were diagnosed between 2000 and 2008. Diagnosis was based on clinical and histopathological findings along with acid fast bacilli in skin sections. The lesions included papules, plaques and nodules, with or without ulceration, localized mainly on the pinna. Boxers, short haired and large breeds dogs were the most affected. The dogs were otherwise healthy, with no recurrence, and the prognosis was good. Histopathological findings included a nodular to diffuse granulomatous or pyogranulomatous and lymphoplasmocytic inflammatory infiltrate, with or without necrosis, localized in the dermis or subcutaneous tissue. The bacillar loading and morphology were variable among lesions. There were not significant correlations between bacterial load and histopathological pattern, main inflammatory infiltration, necrosis or the numbers of giant cells. Correlation between giant cells and histopathological pattern was not observed as well. In the majority of cases, PCR assay identified Mycobacterium murphy as the main etiologic agent for the CLG. However, others Mycobacterium species were also involved as causative agent.<br>Foram analisados 38 casos de granuloma lepróide canino (GLC) diagnosticados no período entre 2000 e 2008. O diagnóstico baseou-se nos achados clínicos e histopatológicos, com a detecção de bacilos álcool ácido resistentes nos fragmentos cutâneos. As lesões incluíram pápulas, placas, nódulos, tumores dérmicos e subcutâneos, ulcerados ou não, localizados principalmente na superfície convexa dos pavilhões auriculares. Os cães da raça Boxer, aqueles de pelagem curta e de grande porte foram mais acometidos. Os animais eram sistemicamente saudáveis e o prognóstico foi favorável, sem recidiva das lesões. A histopatologia demonstrou padrão nodular a difuso, com infiltrado inflamatório predominantemente granulomatoso ou piogranulomatoso e linfoplasmocitário, na derme e tecido subcutâneo, com ou sem necrose, e bacilos em quantidade e morfologia variáveis. Não foi verificada associação estatística significativa entre a quantidade de bacilos com o padrão histopatológico, com o infiltrado inflamatório predominante, com a necrose ou com a quantidade de células gigantes. Também não foi observada associação entre a quantidade de células gigantes e o padrão histopatológico. A reação em cadeia de polimerase e o sequenciamento genético parcial do gene 16srRNA identificou Mycobacterium murphy na maioria dos casos. Outras micobactérias, ainda não descritas na literatura, também foram encontradas nas lesões, sugerindo maior diversidade de espécies envolvidas no GLC.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015.<br>Made available in DSpace on 2015-12-01T03:15:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336196.pdf: 14963139 bytes, checksum: 131e91e921afd609f67ff9ee7827cde7 (MD5) Previous issue date: 2015<br>Após a infecção com o bacilo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), causador da tuberculose (TB), observa-se a formação de uma estrutura celular característica denominada granuloma. Esse agregado celular é responsável por restringir a infecção e manter a doença em estado latente. Porém, quando a forma ativa da doença se desenvolve, o infiltrado de células apresenta necrose caseosa e as bactérias entram em intenso estado replicativo. Diante deste quadro, faz-se uso de antibióticos como a isoniazida (INH), um dos pilares da quimioterapia da TB. A INH é uma pró-droga que requer ativação por uma catalase peroxidase bacteriana codificada pelo gene katG, a fim de inibir a síntese de ácidos micólicos, importantes componentes estruturais da bactéria. Entretanto, dados recentes indicam que a INH pode também ser ativada por enzimas presentes em células do hospedeiro. É possível que este fármaco aja diretamente em células que abrigam o Mtb, contribuindo para o controle do seu crescimento intracelular. Entretanto, estudos que avaliam os efeitos da INH em sistemas biológicos complexos como o granuloma são escassos. Dessa forma, a partir de um modelo de granuloma humano in vitro investigamos os mecanismos iniciais do tratamento com INH que promovem a morte micobacteriana nesse sistema. Nossos resultados demonstram que o modelo utilizado mimetiza a fase ativa da infecção, com populações celulares semelhante às encontradas na infecção in vivo, como macrófagos, células dendriticas, linfócitos e granulócitos. Ainda mais, o granuloma apresenta intensa replicação bacteriana associada à necrose celular. Verificamos ainda que a INH possui capacidade bactericida nesse sistema celular, mas que, ao menos nas fases iniciais de tratamento in vitro, esse efeito não está relacionado com ativação de células T ou monócitos e independe de importantes citocinas, como IL-1ß ou TNF. Utilizando cepas clínicas resistentes à INH, bem como experimentos de coinfecção do granuloma com cepas sensível e resistente à INH, constatamos que o fármaco age diretamente sobre a bactéria, e sua forma ativa não age diretamente nas células do granuloma para promover a morte bacteriana. O desenvolvimento desta tese, em conjunto com outros dados presentes na literatura, confirmou a necessidade de ativação do fármaco pelo patógeno para a atividade inicial bactericida da INH localmente no granuloma.<br><br>Abstract : Following infection with the bacilli Mycobacterium tuberculosis (Mtb), causative agent for tuberculosis (TB), there is formation of a characteristic cellular structure named granuloma. This cellular aggregate is responsible for restricting infection and keeping disease in its latent form. However, when the active disease manifests, the cellular infiltrate undergoes caseous necrosis and bacteria start intense replication. In this scenario, it is initiated the use of antibiotics such as isoniazid (INH), one of the pillars for TB chemotherapy. INH is a pro drug that needs activation by a bacterial catalase peroxidase encoded by katG gene, in order to inhibit mycolic acids synthesis, important bacteria structural components. Nevertheless, recent data indicate that INH can also be activated by cell host enzymes. It is possible that the drug acts directly on host cells infected with Mtb, contributing to the control of intracellular growth. However, studies that evaluate INH s effect in complex biologic systems such as the granuloma are scarce. Therefore, using an in vitro human granuloma model we investigated the early mechanisms by which treatment with INH promotes mycobacterial killing in this system. Our results show that the model mimics the active phase of infection, with the same cellular population seen in in vivo infection, such as macrophages, dendritic cells, lymphocytes and granulocytes. Moreover, the granuloma presents intense bacterial replication associated to cellular necrosis. We could also confirm INH s bactericidal activity in this cellular system, though at least during early in vitro treatment, this effect was not related to T cells or monocytes activation and does not depend on important cytokines, such as IL-1ß or TNF. By using INH resistant clinical strains, as well as performing coinfection experiments with sensible and resistant INH strains, we could confirm the drug s direct action over bacteria, and that its active form does not act directly upon granuloma cells to promote bacterial killing. These thesis conclusions, together with literature data, confirmed the need of pathogen drug activation for early bactericidal activity of INH locally in the granuloma.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista<br>Introducción: La Periodontitis Apical asintomática (PAa) es una enfermedad destructiva de los tejido perirradiculares del diente y de etiología infecciosa. Actualmente no está claro la patogénia de la PAa como tampoco lo está un método de estudio no invasivo que refleje el estado de destrucción y reparación de los tejidos periapicales de dientes post tratamiento endodóntico. El objetivo del presente estudio es comparar los niveles de piridinolina de Enlace Cruzado Carboxiterminal del Telopeptido de Colágeno tipo I (ICTP) obtenidos del fluido gingival crevicular (FGC) de dientes con PAa antes y después del tratamiento endodóntico y dientes sanos, para observar si existe asociación entre los niveles de este marcador y la patología en estudio, así como valorar el uso de FGC para el monitoreo de este tipo de enfermedad. Materiales y métodos: Se obtuvieron muestras de FGC de dientes con diagnóstico de PAa y de dientes sanos (N=19). Las muestras fueron recolectadas al momento del diagnóstico y después de 1 semana post tratamiento endodóntico. Se determinaron los niveles de ICTP mediante el inmuno ensayo enzimático de adsorción EIA y se realizó el análisis estadístico de los resultados por medio del software Stata versión 11.1. Resultados: El ICTP se genera en FGC en dientes sanos y con PAa. Si bien se observó que los niveles de ICTP fueron ligeramente mayores en FGC de dientes con PAa que en dientes sanos, y que hubo una tendencia a la disminución después del tratamiento endodóntico, las diferencias no fueron estadísticamente significativas. Conclusiones: Los niveles de ICTP en el FGC no reflejaron el estado de salud periapical, esto podría estar influenciado por estados inflamatorios gingivales subclínicos y/o por el N muestral bajo del presente trabajo.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista<br>Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento<br>Introducción: Los linfocitos T helper 17 (Th17) participan en los mecanismos de reabsorción ósea característicos de patologías inflamatorias, incluida la periodontitis apical (PA). Otros estudios han asociado a esta célula con la presencia de dolor en PA. En otras patologías diferentes a PA, se ha detectado interleuquina 21 (IL-21), citoquina responsable de la inducción de células Th17. Actualmente, la presencia de IL-21 en lesiones periapicales (LPA) y su asociación con sintomatología dolorosa en PA se desconocen. Objetivo: Determinar los niveles y formas moleculares de IL-21 en LPA y examinar su relación con la presencia de sintomatología en PA. Métodos: Se seleccionaron pacientes con diagnóstico de PA sintomática (n=13) y asintomática (n=9) e indicación de endodoncia, y se obtuvieron muestras de exudado periapical. Adicionalmente, se seleccionaron pacientes con PA y LPA e indicación de exodoncia, y se recolectaron biopsias de las LPA (n=14) y muestras de ligamento sano (LS) (n=13) provenientes de dientes con indicación de exodoncia por ortodoncia. Se determinaron las formas moleculares de IL-21 por Western blot y los niveles de IL-21 fueron determinados por Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Los resultados se analizaron con el programa PRISMA 5.0. Resultados: Se observaron bandas de IL-21 de 20 kDa para todas las muestras estudiadas. Los niveles de IL-21 fueron más altos en LPA que en LS, y en PA sintomática que en asintomática (p<0.05). Conclusiones: IL-21 podría participar en la patogénesis de las LPA y podría tener un rol en la presencia de sintomatología en PA.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista<br>Objetivo: Los granulomas periapicales (GPs) son lesiones de naturaleza infecciosa de origen pulpar caracterizados por la destrucción de los tejidos perirradiculares, en particular del hueso alveolar periapical. El fenotipo linfocitario efector Th17 se ha asociado a los fenómenos osteodestructivos en diversas patologías infecciosas y se ha establecido que la citoquina interleuquina-21 (IL-21) cumple un rol central en la diferenciación selectiva de esta población celular. El objetivo del presente trabajo es analizar la expresión de IL-21 en los GPs y asociar su presencia a la patogenia de la enfermedad. Método: Se obtuvieron de 15 lesiones con el diagnóstico clínico y radiográfico de GP durante la extracción de dientes con indicación de exodoncia. En 10 lesiones se analizaron los niveles de expresión del ARN mensajero de IL-21 mediante la técnica de PCR y en 5 lesiones se analizó la expresión tisular de IL-21 mediante la técnica de inmunohistoquímica. Se utilizaron Linfocitos T de la línea celular Jurkat como control de la expresión de ARN mensajero de IL-21 y biopsias de ligamento periapical sano y de amígdala como control negativo y positivo, respectivamente, de la expresión tisular de IL-21. Resultados: Se detectaron niveles de expresión de IL-21 similares a los detectados en los linfocitos T Jurkat activos en los GPs y estos niveles se asociaron a la actividad de linfocitos, macrófagos y neutrófilos del infiltrado inflamatorio tisular. Conclusiones: En los GPs, IL-21 participaría en los eventos etiopatogénicos de la enfermedad al ser secretados por los linfocitos, macrófagos y neutrófilos infiltrantes titulares.

Orientador: Radovan Borojevic<br>Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas<br>Made available in DSpace on 2018-07-19T13:39:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BritoNeto_JoseMarques_M.pdf: 2590243 bytes, checksum: ae5da90113b75839a3721392c7aceeef (MD5) Previous issue date: 1994<br>Resumo: Na esquistossomose, parte dos ovos liberados pelo S. mansoni são embolizados no figado. Inicia-se então um processo inflamatório que evolui em um granuloma periovular. As células inflamatórias, principalmente macrófagos, são as primeiras a formarem o granuloma. Posteriormente há o crescimento de células conjuntivas hepáticas, que passam a ser um dos principais constituintes do granuloma e também há grande deposição de matriz extracelular. Os fatores envolvidos neste processo ainda não estão esclarecidos. Nesta etapa foi descrita a proliferação localizada de células mielóides e monomacrofágicas. As células conjuntivas derivadas do granuloma (GR) periovular mostraram-se capazes de sustentar in vitro a proliferação de células mielóides FDC-P1 e AD-3. O objetivo deste trabalho foi identificar qual ou quais fatores estariam sendo secretados pelas células GR. Em nosso estudo usamos mastócitos como modelo para identificar estes fatores. Eles são dependentes de interleucina-3, Interleucina-4 e/ou "Stem Cell Factor". As células GR sustentaram a viabilidade e proliferação de mastócitos peritoneais murinos, os quais mantiveram a síntese de heparina por cinco semanas em cocultura com células GR. Também sustentaram a proliferação de mastócitos humanos (dependentes de "Stem Cell Factor") por nove dias de cocultura. Demonstramos que células GR podem ser induzidas por mastócitos a expressar mensagem para "Stem Cell Factor", além de apresentarem o fator associado a membrana. Pois estromas de células GR fixadas que tiveram contato prévio com mastócitos sustentaram a viabilidade de novos mastócitos plaqueados até terceiro dia de cultura. Acreditamos que o "Stem Cell Factor" seja o fator responsável pela proliferação dos mastócitos, como também participe in vivo no processo granulomatoso<br>Abstract: In the schistosomal infection, a part of S.mansoni eggs are brought into the liver here they embolize. Granulomas are initially composed of inflammatory cells, mong which macrophages are predominant. The hepatic connective tissue cells grow and the associeted extracelular matrix becomes a important element of granulomas. The actors involved in these event are still unknown. In the later phase of periovular infection myeloid and monomacrophagic cells were able to proliferate. In vitro, granuloma-derived connective tissue cells (GR) have been shown to induce proliferation of myeloide cells FDC-P1 and AD-3. Our interest was to identify which factors are produced by GR cells. In this work, we have used mast-cells as a model to describe these factors, because mast cells are dependent of Interleukine-3, Interleukine-4 and/or Stem Cell Factor. The GR cells have supported the survival and proliferation of peritoneal murine mast cells, which have mantained their heparin synthesis for tive weeks in coculture with GR cells. Human mast cells (Stem Cell Factor-dependent) proliferated in six days in coculture with GR cells. We have shown that mast cells can induce GR cells to express message for Stem Cell Factor and the stroma-associated form of the factor. We believe that the Stem Cell Factor could be responsable for the mast cells proliferation and participate in the granulomatous process in vivo<br>Mestrado<br>Mestre em Farmacologia

The fact therefore remains that, at the present time, Crohn's disease is still an enigma. The aetiology and pathogenesis are obscure, the clinical findings and progression of the disease are unpredictable and the histological findings are often nonspecific. With this in mind, this dissertation attempts to define and document the incidence of certain histological features at presentation in a population of Crohn's disease patients from Groote Schuur Hospital. The main aim is to determine the incidence of granulomas in the study group as a whole, as well as to establish the distribution of granulomas within the bowel. A correlation between the presence of granulomas and the clinical activity of the disease (as assessed by the Crohn's Disease Activity Index) is also sought.

Les granulomes signent une réponse immune efficace dans de nombreuses maladies infectieuses. C’est le cas de la fièvre Q où ils sont présents dans la forme aiguë de la maladie spontanément résolutive mais où ils sont absents dans sa forme chronique. J’ai mis au point une méthode permettant d’étudier la formation in vitro des granulomes à partir de cellules mononucléées du sang périphérique incubées en présence de billes de Sepharose recouvertes d’extraits de C. burnetii, l’agent de la fièvre Q. Ces granulomes apparaissent en quelques jours avant de disparaître au bout d’une vingtaine de jours. Ils sont composés essentiellement de macrophages et de lymphocytes et, à un moindre degré, de cellules épithélioïdes, de cellules géantes multinucléées et de cellules dendritiques. La méthode d’obtention in vitro des granulomes a permis également d’étudier les premiers stades de leur formation grâce à la mise au point d’une technique en live imaging d’observation en lumière transmise des cellules. J’ai montré que les monocytes, les premières cellules à migrer vers les billes et à entièrement les recouvrir, initient le recrutement des lymphocytes. J’ai également montré que le défaut de formation des granulomes observés chez des patients atteints d’une fièvre Q chronique pourrait être lié à un défaut de migration de leurs monocytes circulants<br>Granulomas indicate effective immune response in a large number of infectious diseases. The primo-infection by Coxiella burnetii, the agent of Q fever, is spontaneously resolutive and is characterized by the presence of granulomas, whereas granulomas are absent in the chronic form of the disease. I developed a new method to study in vitro the formation of granulomas using peripheral blood mononuclear cells incubated in the presence of Sepharose beads coated with C. burnetii extracts. Granulomas appeared in few days before disappearing at day 20. They were essentially composed of macrophages and lymphocytes and, in a lesser extent, of epithelioid cells, multinucleated giant cells and dendritic cells. The method to obtain in vitro granulomas allowed the study of the first events of granuloma formation in live imaging microscopy. Monocytes migrated toward Sepharose beads and entirely covered these beads, and initiated the recruitment of lymphocytes. Finally, mononuclear cells from patients with Q fever were unable to generate granulomas due to defective migration of monocytes. We hypothesize that defective migration of monocytes may be responsible for the defective formation of granulomas in Q fever

O óxido nítrico (NO) é um radical livre gasoso que participa de uma série de processos biológicos fisiológicos sendo produzido por enzimas denominadas óxido nítrico sintases (NOS). Diversos estudos vem demonstrando sua participação na resposta inflamatória crônica, na qual as células inflamatórias, com destaque para os macrófagos, são estimuladas a sintetizarem NOS, que por esse motivo são denominadas induzíveis (iNOS) e passam a produzir o óxido nítrico que vai atuar na modulação do processo. A fim de comprovar sua participação filogenética na resposta granulomatosa, utilizou-se como modelo experimental a inoculação de onco-BCG na musculatura de tilápias-do-Nilo (Oreochromys niloticus) e de girinos de rã touro-gigante (Rana catesbeiana), na região plantar de tartarugas ?red ear? (Trachemys scripta elegans) e no coxim plantar de hamsters sírios (Mesocricetus auratus). Fragmentos da lesão foram colhidos aos 14, 28 e 42 dias pós-inoculação, fixados em Carnoy por quatro horas, sendo em seguida transferidos para álcool 70o GL. Procedeu-se a confecção de preparados histopatológicos segundo métodos de rotina que foram corados pelo método da hematoxilina e eosina. Imunoistoquímica foi realizada para a verificação da produção de óxido nítrico indiretamente através da marcação da iNOS com anticorpos anti-iNOS humana biotinilados produzidos em coelhos. Observou-se em todos os animais desenvolvimento de granulomas que mostraram tendência a maior organização aos 42 dias; as características celulares foram semelhantes, com algumas variações específicas. Constatou-se marcação imunoistoquímica em macrófagos presentes nas lesões produzidas pela inoculação de BCG em todos os grupos experimentais, exceto nos girinos aos 14 dias, cuja marcação foi irrelevante. Os resultados permitiram concluir que o óxido nítrico participa da resposta inflamatória granulomatosa, bem como a utilização de imunoistoquímica mostrou-se método eficiente para evidenciar sua produção em estudos filogenéticos. Pesquisas futuras deverão qualificar e quantificar mediadores químicos envolvidos na regulação da participação do óxido nítrico para melhor compreender sua fisiopatologia na modulação do granuloma inflamatório.<br>Nitric oxide (NO) is a gaseous free radical that takes part in a series of biological physiological processes. It is produced by enzymes called nitric oxide synthetases (NOS). Several studies have demonstrated its role in chronic inflammatory response, in which inflammatory cells, mainly macrophages, are stimulated to synthesize NOS, being called then inducible nitric oxide synthetases (iNOS). Nitric oxide is then produced and acts in the modulation of the process. In order to corroborate its phylogenetic role in granulomatous response, the inoculation of onco-BCG experimental model was used in the muscle of Nile tilapias (Oreochromys niloticus) and bullfrog tadpoles (Rana catesbeiana), in the plantar region of red eared sliders (Trachemys scripta elegans) and in the plantar pad of hamsters (Mesocricetus auratus). Fragments of the lesions were collected at 14, 28 and 42 days after inoculation, fixed in Carnoy for four hours, and then transferred to alcohol 70o GL. After that, histopathological slides were prepared following routine methods, and stained by hematoxylin-eosin. Immunohistochemical tests were performed in order to assess the production of nitric oxide indirectly by means of marking iNOS with biotinylated human anti-iNOS antibodies produced by rabbits. It was observed in all animals that the development of granulomas showed greater tendency of organization at 42 days; cell characteristics were similar, with some specific variations. Immunohistochemical marking was observed in macrophages present in lesions produced by BCG inoculation in all experimental groups, except in tadpoles at 14 days, which showed irrelevant marking. Results enabled the conclusion that nitric oxide takes part in granulomatous inflammatory response. Besides, the use of immunohistochemistry showed to be an efficient method for evidencing the production of nitric oxide in phylogenetic studies. Future research studies should qualify and quantify chemical mediators involved in the regulation nitric oxide role in order to better understand its physiopathology in the modulation of inflammatory granuloma.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-28T13:34:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - Gabriela Calixto - Versão digital.pdf: 1903341 bytes, checksum: 0172917edb1a1f8a1512d8519caed260 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2016-07-28T13:34:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - Gabriela Calixto - Versão digital.pdf: 1903341 bytes, checksum: 0172917edb1a1f8a1512d8519caed260 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26<br>CNPq<br>Infecções maternas por Schistosoma mansoni modulam a imunidade de descendentes adultos em infecções pós-natais. Avaliou-se separadamente o efeito da amamentação ou gestação neste fenômeno através do grau de fibrose hepática, produção de citocinas Th1, Th2 e regulatórias, frequência de macrófagos produtores de NO e IL-10 e linfócitos T regulatórios em camundongos adultos, descendentes de mães esquistossomóticas, quando submetidos a infecção pós-natal. Para isto, fêmeas Swiss webster foram submetidas a infecção com S. mansoni (20 cercárias), sincronização do estro e acasalamento. Após nascimento, foi realizada a amamentação adotiva, em que descendentes de mães infectadas mamaram nas mães não infectadas (MI) e filhotes de mães não infectadas foram amamentados pelas mães infectadas (AI). Outro grupo de animais nascidos de mães esquistossomóticas permaneceu amamentando nas próprias mães (MIAI). Para grupo CONTROLE utilizou-se animais nascidos e amamentados em mães não infectadas. Descendentes adultos (machos) foram infectados (80 cercárias) e 60 dias pós-infecção, os animais tiveram os esplenócitos cultivados apenas com meio de cultura ou acrescentado de SWAP (12,5 μg/mL) ou ConA (5 μg/ml). Após 24 h e 72 h os sobrenadantes foram dosados para IL-4; IL-5; IL-10; IFN-γ, TGF-β; NO e as células usadas para imunofenotipagem, com anticorpos monoclonais ligados a fluorocromos para CD4+FoxP3, CD16/CD32+NOS2, CD14+IL-10+. O tecido hepático dos animais foi submetido a histomorfometria. Em relação ao Controle, o grupo MI apresentou frequênciaaumentada de CD16/CD32+NOS2+, maior produção de NO, IL-5 e IL-10, com diminuição de IFN- e, em comparação ao grupo MIAI, maior número e tamanho dos granulomas. O grupo AI, em relação ao Controle, obteve maior frequência de CD16/CD32+NOS2+, maiores níveis de TGF-β, menos IL-5, NO e IFN-. Em relação ao MIAI, tamanho maior de granuloma. O grupo MIAI apresentou menor número e tamanho de granulomas com menor produção de IFN- e NO, maior de IL-10 e TGF-β, além de maior frequência de células CD4+/FoxP3+. Não houve diferença nos níveis de células CD14+/IL-10+. Em conclusão, a gestação seguida da amamentação em mães esquistossomóticas proporcionou uma diminuição da reação granulomatosa e, além da produção da IL-10 (dependente da gestação) e de TGF-β (dependente da amamentação), as células T com fenótipo regulatório são requeridas para este fenômeno.<br>Maternal infections by Schistosoma mansoni modulate adult offspring immunity in postnatal infections. Here, was evaluated separately the effect of breastfeeding and pregnancy in this phenomenon by the degree of hepatic fibrosis, the production of Th1, Th2 and regulatory cytokines, the expression of macrophages producing NO and IL-10, and regulatory T lymphocytes in adult offspring from schistosomotic mothers when subjected to post-natal infection.Swiss webster females were subjected to infection with S. mansoni (20 cercariae), synchronization of estrus and mating. After birth, adoptive breastfeeding was held in which offspring of infected mothers breastfed in uninfected mothers (BIM) and offspring of uninfected mothers were breastfed by infected mothers (SIM). Another group of animals born in schistosomotic mothers breastfeeding remained in their mothers (BSIM). To control group was used animals born and breastfed in uninfected mothers. Male offsprings were infected when adults (80 cercariae) and 60 days post-infection animals splenocytes were cultured with medium alone or added with SWAP (12.5 μg/ml) and ConA (5 μg/ml). After 24 h and 72 h the supernatants were assayed for IL-4; IL-5; IL-10; INF-γ; TGF-β; NO and the cells used for immunophenotyping with monoclonal antibodies bound to fluorochromes for CD4+FoxP3+, CD16/CD32+NOS2+, CD14+IL-10+. The liver tissue were subjected to histomorphometry. Compared to control, the BIM group showed increased frequency of CD16/CD32+NOS2+, increased production of NO, IL-5 and IL-10, a reduction of IFN- and compared to BSIM group, the greater number and size of granulomas. The SIM group compared control, had a higher frequency of CD16/CD32+NOS2+, higher TGF-β levels, less IL-5, NO and IFN-. Regarding BSIM, greater granuloma size. The BSIM group showed smaller number and size of granulomas with lower production of IFN- and NO, increased IL-10 and TGF-β, as well as higher frequency of CD4+/FoxP3+ cells. There was no difference in the levels of CD14+/IL-10+ cells. In conclusion, gestation followed by breastfeeding in schistosomotic mothers provided a reduction in granulomatous reaction, and besides the production of IL-10 (dependent on gestation) and TGF-β (dependent breast feeding) T cells with regulatory phenotype are required to this phenomenon.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-06-01T18:56:37Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Risoleta Nogueira Soares.pdf: 2630670 bytes, checksum: 1f79508658ef0e95e879014957b6e397 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2018-06-01T18:56:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Risoleta Nogueira Soares.pdf: 2630670 bytes, checksum: 1f79508658ef0e95e879014957b6e397 (MD5) Previous issue date: 2016-09-22<br>CNPQ<br>FACEPE<br>A 3,4-dihidro-2,2-dimetil-2H- naftol [1,2-b] pirano-5,6-diona ou β-lapachona (β-lap) destaca-se dentre as naftoquinonas devido às suas numerosas propriedades biológicas, principalmente no que diz respeito ao seu potencial anticâncer. Entretanto, sua limitada solubilidade em meio aquoso é um obstáculo a ser transposto para que a mesma torne-se um fármaco aplicável à terapêutica. Objetivando amplificar a solubilidade de moléculas lipossolúveis a tecnologia farmacêutica faz uso de múltiplos recursos, entre eles a complexação em ciclodextrinas (CDs), oligossacarídeos cíclicos capazes de solubilizar em meio aquoso moléculas orgânicas praticamente insolúveis. Estudos preexistentes apontam que β-lap apresenta potencial esquistossomicida: impedindo a penetração de cercarias na pele; inibindo a glicólise aeróbica e alterando a motilidade de vermes adultos; causando descamação, bolhas e ruptura do tegumento. Estima-se que 250 milhões de pessoas distribuídas em 78 países e territórios estejam infectadas pelo schistosoma em todo o mundo. O surgimento de cepas resistentes ou tolerantes ao praziquantel (PZQ), bem como a sugestiva atuação esquistossomicida da β-lap, nos impeliram a avaliar a atuação in vivo desta naftoquinona complexada em 2-O-metil-β-ciclodextrina (MβCD) sobre o S. mansoni (modelo murino). Os camundongos foram infectados com 50 cercarias (cepa BH), posteriormente tratados com β-lap:MβCD por via oral com 50 mg/kg/dia ou 100mg/kg/dia por 5 dias consecutivos, iniciando-se a terapia no 1° (esquistossômulo de pele), 14° (esquistossômulo pulmonar), 28° (vermes jovens) e 45° (vermes adultos) dia pós-infecção. Também foi formado um grupo controle não tratado, controle MβCD e um grupo PZQ. Todos os animais foram eutanaziados no 55°dia pós-infecção. A análise estatística foi realizada com auxílio do GraphPad Prism 6.0., utilizando o teste não paramétrico One-way ANOVA, através da análise de variância (Tukey). Os dados foram expressos como a média ± DP. Em todos os casos, os resultados foram considerados significativos quando p < 0,05. β-lap:MβCD causou redução significativa no número de vermes em comparação ao grupo controle: 33,56%, 35,7%, 35,45% e 36,45%, quando a dose administrada foi 50mg/kg/dia, e 65,00%, 60,342%, 52,721% e 65,007%, quando a dose administrada foi 100mg/kg/dia, no 1°, 14°, 28° e 45°, respectivamente. Nessa mesma fase evolutiva ainda foi possível observar redução percentual significativa no número de ovos imaturos e aumento no número de ovos maduros e mortos. Nossos dados mostram que complexar β-lap em MβCD incrementou sua solubilidade, absorção e biodisponibilidade oral, resultando na atividade esquistossomicida encontrada neste estudo. β-lap inibe a oviposição e, consequentemente, reduz os danos causados pelos antígenos do ovo ao tecido do hospedeiro. Ainda atribuímos a redução do volume médio dos granulomas ao potencial imunomodulador de β-lap. Este trabalho servirá como precedente para que futuras pesquisas sejam feitas com novas formulações alternativas, bem como estudos que visem delinear os mecanismos de ação da β-lap. Além disso, também oferece a possibilidade de que esta naftoquinona torne-se um protótipo para novos fármacos esquistosomicidas aplicáveis à terapêutica.<br>The 3,4-dihydro-2,2-dimethyl-2H-naphthol[1,2-b]pyran-5,6-dione or β-lapachone (β-lap) stands out among the naphthoquinones due to its numerous biological properties, especially with regard to its potential anticancer. However, its limited solubility in water is an obstacle to be overcome for it to become an applicable to therapeutic drug. Aiming to amplify the solubility of liposoluble molecules, pharmaceutical technology makes use of of multiple resources, including complexation in cyclodextrins (CDs), cyclic oligosaccharides capable of solubilizing in water practically insoluble organic molecules. Previous studies show that β-lap displays schistosomicidal activity: preventing the penetration of cercariae into skin; inhibiting aerobic glycolysis; changing the motility of adult worms; and causing flaking, blistering and rupture of the integument. It is estimated that 250 million people distributed in 78 countries and territories are infected with schistosoma worldwide. The emergence of resistant strains or tolerant praziquantel (PZQ) and suggestive schistosomicidal activity of β-lap, impelled us to evaluate in vivo performance of this naphthoquinone complexed in 2-O-methyl-β-cyclodextrin (MβCD) on S. mansoni (mouse model). Mice were infected with 50 cercariae (BH strain), subsequently treated with β-lap: MβCD orally with 50 mg/kg/day or 100mg/kg/day for 5 consecutive days, starting the treatment on the 1° (schistosomulum skin), 14° (lung schistosomulum), 28° (juvenile worms) and 45 ° (adult worms) day post-infection. It was also formed an untreated control group, MβCD control and a PZQ group. All animals were euthanized the 55th day post-infection. Statistical analysis was performed using the GraphPad Prism 6.0., using the nonparametric One-way ANOVA by analysis of variance (Tukey). Data were expressed as mean ± SD. In all cases, the results were considered significant when p <0.05. β-lap: MβCD caused a significant reduction in the number of worms: 33.56%, 35.7%, 35.45% and 36.45% when the dose was 50mg/kg/day, and 65.00%, 60.342%, 52.721% and 65.007%, when the dose was 100 mg/kg/day, 1 °, 14 °, 28 ° and 45 °, respectively. In this same evolutionary stage it was still possible to observe significant percentage reduction in the number of immature eggs and increase the number of mature eggs and dead. Our data show that complex β-lap in MβCD increased the solubility, absorption and oral bioavailability, resulting schistosomicidal activity found in this study. β-lap inhibits oviposition and hence reduces the damage caused by egg antigens to the host tissue. We still attribute the reduction in the average volume of granulomas to immunomodulatory potential of β-lap. This work will serve as a precedent for future research are made with new alternative formulations, as well as studies aimed at delineating the mechanisms of action of β-lap. It also offers the possibility that this naphthoquinone become a new prototype schistosomicidal drugs applicable to therapy.

Orientador : Ana Maria Aparecida Guaraldo<br>Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia<br>Made available in DSpace on 2018-08-03T07:27:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrade_LeniraAparecidaGuaraldode_M.pdf: 16949895 bytes, checksum: 923059731bc297cb7885e7403afa1b4c (MD5) Previous issue date: 2003<br>Resumo: A associação da esquistossomose com diabetes foi estudada em camundongo da linhagem NOD/Uni (non-obese diabetic), modelo para diabetes mellitus tipo 1. Há evidências recentes de que a resposta do tipo Th1 é prejudicial para o hospedeiro e Th2 protege contra o diabetes. A infecção pelo Schistosoma mansoni induz resposta celular do tipo Th2 no fígado humano e de camundongos. A evolução da esquistossomose em hospedeiro onde existe predomínio da resposta Th 1, vigente no diabetes, pode resultar em alteração da expressão das duas doenças. Grupos de camundongos machos e fêmeas NOD/Uni não diabéticos e diabéticos, em vários estágios do desenvolvimento do diabetes foram infectados por 10, 25 ou 50 cercárias da linhagem BH do S. mansoni. Foi constituído também um grupo de camundongas prenhes infectadas e o respectivo controle não infectadas. O grau de glicosúria foi determinado para cada animal ao final da sétima semana de infecção e expresso em mg de glicose/dL de urina. Todos os animais NOD/Uni livres de patógenos específicos foram mantidos em isoladores de PVC flexível, com pressão positiva. A mortalidade de cada grupo experimental foi registrada durante sete semanas da infecção. O sistema porta-hepático foi perfundido para coleta dos vermes adultos que foram fixados para determinação de comprimento. Foi observada a histopatologia pancreática e hepática. As medidas de áreas de granulomas hepáticos foram registradas mediante o uso de um sistema informatizado acoplado à câmara clara no microscópio óptico, considerando dois diâmetros perpendiculares que cruzam o centro de um ovo isolado. Os resultados de comprimento de vermes foram analisados estatisticamente pelo teste de Tukey e a área dos granulomas pela análise de variância. A esquistossomose desempenhou papel protetor no diabetes, principalmente em machos NOD/Uni diabéticos, evidenciado pelo aumento da sobrevi da (70%) quando comparados com grupo não infectado de fêmeas diabéticas (25%) e machos diabéticos (41,6%). A associação do diabetes, esquistossomose e prenhez diminuiu a patologia das duas doenças. A esquistossomose induziu pancreatite severa precoce, aos 42 dias de infecção em fêmeas diabéticas submetidas a 10 cercárias. Em machos diabéticos infectados com 50 cercárias, o quadro de pancreatite foi brando, aos 56 dias de infecção. A área de granulomas hepáticos sofreu redução no decorrer do agravamento do diabetes. Animais no início do diabetes e normoglicêmicos tiveram o mesmo padrão de formação de granulomas. As fêmeas prenhes mostraram formação de granulomas comparadas ao controle não diabético. Não houve hepatomegalia em animais com diabetes grave. O diabetes prejudicou o desenvolvimento de vermes machos e fêmeos em camundongas diabéticas. Vermes fêmeos sofreram redução de comprimento deste o início do diabetes, fato que não ocorreu nos vermes machos. Na vigência do diabetes severo, os vermes fêmeos apresentaram maior redução do comprimento (30,5%) do que os vermes machos (24%). Em microambiente do diabetes concomitante à prenhez, não houve redução do comprimento de vermes. A resposta ThI durante o diabetes e o perfil resultante de resposta de fenótipo Th2 pela esquistossomose podem promover a regulação que inibe ou elimina a formação de granuloma no animal diabético, aumenta o tempo de sobrevida dos animais infectados, porém induz precocemente a pancreatite grave em fêmeas diabéticas<br>Abstract: In this study we have demonstrated the effect of diabetes under the development of Schistosoma mansoni in diabetes-prone non-obese diabetic (NOD) mice, model of human diabetes type I. S. mansoni infection induces Th2 type cytokines at the liver of humans and mice. Recent reports have shown the evidence that Thl responses are detrimental and Th2 responses are protective against diabetes type I. In this study we took advantage of NOD mice, which has a Thl profile and has a limited survival after the expression of the diabetes. Female and male of NOD strain were infected with 10,25 and 50 cercariae from S. mansoni, BH strain, kept on Biomphalaria glabrata snails. SPF NOD mice were maintained in flexible PVC isolators with positive pressure. The test of diabetes Self-Stik @ resulting color changes using urine samples was performed and the last lecture (mg glucose/dL urine) was determinant for the establishment of the groups: no diabetic, diabetic male and female, diabetic pregnant. We monitored the survival until 7 weeks after infection or after the first detection of glycosuria and we compared these results with those obtained in a diabetic non-infected control group. In specific-pathogen free conditions, the NOD/Uni diabetic mice survive for 3-4 weeks after the first detection of glycosuria. Infected diabetic males presented longer survival (70%) when compared with the control no infected diabetic males (41,6%). The survival result in the infected diabetic females was 25% compared with 21 % in the no infected group. No mortality was registered in infected diabetic pregnant group. Seven weeks after infection, the animais were perfunded and adult worms prepared to the measurements. The length of worms was determined. The results were analysed according to the glucose leveI at the end of infection. Tukey's test was used to compare diabetic and no diabetic groups, with 5% significance leveI. Paraffm sections of liver and pancreas were cut at 5 J.UI1 and stained with hematoxylin-eosin. Hepatic granuloma measurements were determined using a computer system to take into account two perpendicular diameters crossing the center of isolated egg. Statistical analysis were performed to granuloma ellipse area using variance analysis and Tukey test was used to compare the length of the worms. Animais at the beginning of diabetes and normoglycaemic showed the same pattem to granuloma formation. Pregnant diabetic showed granuloma formation compared to the control no diabetic. The statistical analysis showed the influence of the diabetic status of the host and the leveI of glucose on the development of adult worm. When the diabetic female infected was pregnant , there were no differences in the length of the worms compared to the control no diabetic. Severe pancreatitis was involved mainly in diabetic females which presented extensive destruction of the pancreatic parenchyma 42 days after infection with 10 cercariae. The autoimmune process involved in diabetes concerning the helminth development is shown mean1y when glucose leveI in urine is high. The response Thl during accelerated and destructive diabetes and the shift to Th2 profile in schistosomiasis result on ThI/Th2 dichotomy which promotes a mechanism of regulation that inhibits or eliminates the granuloma formation in diabetic animais<br>Mestrado<br>Mestre em Parasitologia

Introdução: O emprego de técnicas de interpretação imunológica de agentes infecciosos, de uma maneira geral, confere maior sensibilidade e especificidade ao exame histopatológico; o anticorpo policlonal anti-BCG tem sido testado como uma coloração imunoistoquímica de triagem para espécimes de biópsias cutâneas, com suspeita de origem infecciosa; em casos de infecções fúngicas e bacterianas, os resultados mostraram-se claramente superiores aos conseguidos pelas técnicas histoquímicas convencionais. Objetivos: Verificar a positividade da reação imunoistoquímica com o anti-BCG em granulomas imunológicos cutâneos, que não puderam ter o seu diagnóstico etiológico definido pelos métodos histoquímicos usuais de coloração para agentes infecciosos (Grocott e Ziehl-Neelsen) e também descrever a sensibilidade e especificidade deste anticorpo, através da comparação com os exames culturais para fungos e micobactérias. Metodologia: Procedeu-se à técnica imunoistoquímica com o anti-BCG em 33 biópsias cutâneas com granulomas imunológicos, com colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen negativas. Também foram selecionados 13 casos de hanseníase virchowiana e 11 de granulomas por degeneração do colágeno, para que servissem de controles positivos e negativos, respectivamente. A leitura das lâminas foi realizada por dermatopatologista do HCPA que não tinha conhecimento dos dados clínicos dos pacientes. Não foi realizada a quantificação do antígeno nos cortes. Resultados: Dos 33 casos estudados, 13 (39,4%) apresentaram imunoistoquímica positiva com o anti-BCG, os diagnósticos finais foram: 4 casos (12,12%) de tuberculose, 4 casos de esporotricose, 1 caso (3.03%) de cromomicose, 1 caso de hanseníase tuberculóide e 3 casos (9.09%) que não puderam ter o diagnóstico conhecido, pois perderam o acompanhamento médico. A sensibilidade do anti-BCG quando comparado com a cultura para fungos foi de 57,1% e a especificidade de 66,7%; na comparação com a cultura para micobactérias a sensibilidade foi de 100%, porém só haviam 2 exames positivos, e a especificidade foi de 67,7%. Nos casos de hanseníase virchowiana, a sensibilidade e a especificidade foi de 100%. Conclusão: A técnica imunoistoquímica com o anticorpo anti-BCG é relativamente fácil, rápida e de baixo custo e mostrou ser útil na identificação de microorganismos que não foram prontamente visualizados com as colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen. Entretanto, o pequeno número de controles pode ter influenciado no desempenho do método.

Orientador: Jose Ricardo Albergaria Barbosa<br>Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba<br>Made available in DSpace on 2018-08-08T02:07:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luna_AnibalHenriqueBarbosa_D.pdf: 1133521 bytes, checksum: 0b56f9a0d7a3c458d4ca3675a6467a94 (MD5) Previous issue date: 2006<br>Resumo: O granuloma central de células gigantes (GCCG) é uma lesão benigna que acomete tanto a maxila como a mandíbula, representando menos de 7% de todos os tumores benignos dos maxilares. A sua etiologia é incerta, sendo implicados fatores genéticos. O GCCG pode manifestar-se como lesões de grandes dimensões com características de agressividade ¿ como crescimento rápido, reabsorções radiculares ou parestesia e tendência à recidiva, ou como lesões pequenas, uniloculares, sem aspectos de agressividade. A modalidade de tratamento mais empregada é a curetagem, associada ou não a ostectomia periférica. No entanto são relatadas outras modalidades de tratamento, como a administração de corticosteróides, calcitonina ou a-interferon. Os índices de recidiva podem ser altos, variando de 0% a 49%. A ocorrência de recidiva parece depender do comportamento clínico da lesão, da localização anatômica e da modalidade de tratamento instituída. O presente estudo retrospectivo analisou o tratamento de GCCG no período de janeiro de 1996 a julho de 2006 atendidos pela Área de Cirurgia Buco-Maxilo-Facial da FOP ¿ Unicamp, correlacionando seus aspectos clínicos. Foram analisados 14 casos (9M; 5F) com uma média de idade de 18,5 (variando de 5 ¿ 59) anos, sendo a maxila o osso mais acometido. Do total, 5 casos foram tratados cirurgicamente por meio de curetagem associada a ostectomia periférica, e 9 foram tratados clinicamente. A administração intralesional de corticosteróides foi iniciada nestes casos, sendo o tratamento com calcitonina instituído na ausência de uma resposta clínica satisfatória. O tempo médio de tratamento com corticosteróides foi de 3,84 (±3,87) meses, sendo que em dois casos foi instituída a administração de calcitonina. O tempo médio de tratamento com calcitonina foi de 18,8 (±7,94) meses, sendo que em um caso não foi observada boa evolução clínica. Nenhum caso de recidiva foi observado após um acompanhamento de 38,22 (variando de 3 ¿ 174) meses<br>Abstract: The central giant cell granuloma is a benign lesion of the jaws, accounting for less than 7% of all benign lesions of the jaws. Its origin is unknown, but it has been suggested that genetic factors may be implicated. The central giant cell granuloma demonstrates a variable clinical behavior, ranging from slowly growing painless swelling to rapidly expanding aggressive tumors, characterized by pain, local destruction of bone, root displacement or resorption and a significantly high recurrence rate. Surgical treatment represented by curettage with peripheral ostectomy or not is the most widely used procedure. However, other treatment options such as intralesional corticosteroids, daily calcitonin administration or a-interferon are advocated. The recurrence rate may be high (ranging form 0% to 49%), and it seems to depend on the clinical behavior, the treatment employed, and anatomic site envolved. The aim of this study was to report the results of long-term follow up of the management of central giant cell granulomas. A retrospective analysis was conducted from January 1996 to July 2006, analyzing all cases of the Oral and Maxillofacial Area, Piracicaba Dental School. The sample was represented by 14 patients (9 M; 5 F) with a mean age of 18.5 (ranging from 5 ¿ 59) years, and the maxilla was involved in most of the cases. Regarding the treatment modality, 5 cases were treated by curettage with peripheral ostectomy, and a medical treatment was instituted in the others. In these cases, intralesional injections with corticosteroids were initiated, and the treatment with calcitonin was employed only if proper resolution was not achieved. The mean time of treatment with corticosteroids was 3.84 (±3.87) months, but in two cases calcitonin daily administration was initiated. The mean time of treatment with calcitonin was 18.8 (±7.94) months, but in one case calcitonin did not seem to be effective. No case of recurrence was observed after a mean follow-up of 38.22 (ranging from 3 ¿ 174) months<br>Doutorado<br>Cirurgia e Traumatologia Buco-Maxilo-Faciais<br>Doutor em Clínica Odontológica

Paracoccidioidomicose é adquirida pela via respiratória e o óxido nitrico (NO) está envolvido na eliminação de patógenos. Nós propusemos investigar o papel do NO na doença em animais NO-/- sintase deficientes (iNOS-/-) e seu grupo WT. Na 2ª semana de infecção, a ausência de NO resultou em doença menos grave com aumento dos níveis de TNF-a acompanhado com o intenso afluxo de linfócitos T e macrófagos para os pulmões. Na 10ª semana, os animais iNOS-/- desenvolveram alta carga fúngica nos pulmões com menor afluxo de celulas T ativadas e macrófagos e presença de células T reguladoras CD4+CD25+FoxP3+ nos pulmões. Somente os animais iNOS-/- desenvolveram lesões pulmonares organizadas em granulomas, embora não foi detectado diferença na mortalidade para ambos os grupos. As diferenças morfológicas nas lesões foram abolidas pela depleção de TNF-a que induziu nos animais iNOS-/- uma mortalidade precoce e intenso afluxo inflamatório nos pulmões. Além disso, a depleção de linfócitos TCD8+ resultou em doença mais grave e menor recrutamento celular pulmonar nos animais iNOS-/-.<br>Paracoccidioidomycosis is acquired by the respiratory route and nitric oxide (NO) is involved in the killing of pathogens, we aimed to investigate the role of NO in the course of the disease using NO- synthase deficient (iNOS-/-) and WT mice. At week 2 postinfection, NO absence resulted in less severe infection associated with increased TNF-a levels besides a massive influx of activated T cells and macrophages to the lungs. By week 10, iNOS-/- mice developed increased fungal burdens allied with less pronounced influx of activated T cells and macrophages and increased presence of regulatory CD4+CD25+FoxP3+ T cells to the lungs. Only iNOS-/- mice developed organized pulmonary granulomas, although no differences in the mortality rates were detected. The differences in the morphology of lesions were partially abrogated by TNF-a depletion which, induced a precocious mortality of iNOS-/- and massive influx of inflammatory pulmonary cells. Indeed, the CD8+T cells depletion developed a more severe infection with less recruitment of pulmonary cells in iNOS-/- mice.

A doença granulomatosa inflamatória envolve interações coordenadas entre linfócitos, monócitos/macrófagos, células epitelióides, eosinófilos, neutrófilos e fibroblastos. A comunicação intercelular mediada por junções gap, constituídas por conexinas, é responsável pela homeostase tecidual. A Cx43 está presente em células linfóides, células mielóides, fibroblastos e outras. Assim, para compreendermos o possível envolvimento das conexinas no granuloma, nós analisamos o efeito da deleção heterozigótica de uma Gja1 (gene Cx43) na formação e desenvolvimento dos granulomas hepáticos, induzidos por ovos de Schistosoma mansoni. Para tanto, camundongos heterozigotos (Cx43+/-) e selvagens (Cx43+/+) foram infectados com cercárias de Schistosoma mansoni e avaliados nos tempos: 6, 8 e 12 semanas após a infecção. As células dos granulomas apresentaram expressão de conexina 43, notadamente após 12 semanas de infecção. As lesões dos camundongos Cx43+/- apresentaram índice de proliferação reduzido e aumento na deposição de colágeno em fases tardias da doença. Apesar desses achados, não se encontrou redução no tamanho e celularidade das lesões em comparação aos camundongos selvagens. Também não obtivemos diferenças em relação ao hemograma ou população de linfócitos esplênicos CD4, CD8 e CD19. As células peritoneais dos animais de ambos genótipos apresentaram produção de NO e H<SUB2O<SUB2 similares. Contudo, os neutrófilos e monócitos sanguíneos dos animais Cx43+/-, estimulados por PMA, apresentaram aumento significante do burst oxidativo. Concluindo, nossos resultados indicam que a deleção de um alelo do gene da Cx43 modifica claramente a evolução da doença granulomatosa, mostrando um papel desta conexina no desenvolvimento do granuloma.<br>Inflammatory granulomatous disease involves coordinated interactions among lymphocytes, monocytes/macrophages, epithelioid cells, eosinophils, neutrophils and fibroblasts. Intercellular communication mediated by gap junctions constituted of connexins, is responsible for tissue homeostasis. Cx43 is present in lymphoid cells, myelogenous cells, fibroblasts and others. In order to understand the possible involvement of connexins in granuloma, we analyzed the effect of the heterologous deletion of a Gja1 (Cx43 gene) on the formation and development of hepatic granulomas induced by Schistosoma mansoni eggs. Heterozigous (Cx43+/-) and wild-type (Cx43+/+) mice were infected with S. mansoni cercarie and evaluated after 6, 8 and 12 weeks. Granuloma cells express Cx43, with considerable reduction in Cx43+/- mice. Moreover, granuloma cells from Cx43v+/- mice displayed reduced proliferation and increased collagen deposition at late phases of the disease. Despite these findings, no reduction of size or cellularity of the lesions was found in comparison to wild-type mice. We didn?t find differences in relation to blood count and splenic lymphocyte population CD4, CD8 and CD19. Peritoneal cells from animals of both genotypes presented similar production of NO and H2O2. However, blood neutrophils and monocytes from Cx43+/- mice, stimulated by PMA, displayed significantly increased oxidative burst. In conclusion, our results indicate that the deletion of one allele of the Cx43 gene clearly modifies the evolution of a granulomatous disease, supporting a role for this connexin on granuloma development.

A presença de IFN-<font face=\"symbol\">g, NO, OPN e MMPs foi avaliada em camundongos infectados com o fungo Paracoccidioides brasiliensis (Pb). Aos 15 dias, IFN-<font face=\"symbol\">g foi observado em granulomas (Gr), aumentando em resistentes (A/J) aos 120d. Suscetíveis (B10.A) tiveram mais macrófagos e células gigantes (CGs) OPN+, alta carga fúngica e baixo NO aos 15d. A/J tiveram aumento em OPN, maior NO e menor carga fúngica do que B10.A aos 120d. Camundongos infectados apresentaram MMP9 em macrófagos, GCs e Pb e atividade de MMP9 e MMP2. Aos 15d, KOiNOS tiveram Gr com necrose, debris de Pb e OPN e seus controles, Gr com muitos Pbs e OPN. Aos 120d, os controles apresentaram Gr extensos contendo muitos Pbs e expressão de OPN; KOiNOS tiveram Gr compactos com células OPN+ ou lesões residuais com pouca OPN e baixa carga fúngica. Maiores níveis de OPN foram detectados em KOiNOS. A OPN está associada com gravidade no início da infecção, mas com certo controle na fase tardia e no desenvolvimento e organização do Gr. Sugere-se que a presença de MMPs exerça influência no padrão do Gr e na disseminação fúngica.<br>We studied IFN-<font face=\"symbol\">g, NO, OPN and MMPs in mice infected with the fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb). IFN-<font face=\"symbol\">g was found in granulomas (Gr) at 15d and increased in resistant mice (A/J) at 120d. At 15d, macrophages and giant cells (MGCs) were more OPN+ in susceptible mice (B10.A) which had high fungal load and low NO. At 120d, A/J had numerous intensely stained OPN(+) cells and higher NO and lower fungal load than B10.A. MMP9 was found in macrophages, MGCs and Pb of infected mice, which had MMP9 and MMP2 activity. At 15d, KOiNOS had Gr with necrosis, altered Pb and OPN; controls had Gr with many Pb and OPN. At 120d, controls had large Gr with many Pb and OPN expression; KOiNOS had compact Gr with OPN+ cells or residual Gr with weak OPN and decreased fungal load. More OPN levels were detected in KOiNOS. OPN is associated with infection severity at the beginning and with some control at later stages of infection and is involved in Gr development and organization. We show the presence of MMPs and suggest their influence in Gr pattern and in Pb dissemination.

Die Wegener'sche Granulomatose (WG) ist eine Autoimmunerkrankung, die sich typischerweise als chronische Entzündung des oberen Respirationstraktes, Vaskulitis und Glomerulonephritis manifestiert. WG gehört zur Gruppe der sog. “pauci-immunen” Vaskulitiden, die mit Anti-Neutrophilen-Antikörpern (ANCA, anti neutrophil cytoplasmic antibody) assoziiert sind. Mit Hilfe der indirekten Immunfluoreszenz lassen sich ANCA im Serum der meisten WG-Patienten nachweisen. Die mit WG assoziierten sog. “klassischen” ANCA (c-ANCA) erkennen spezifisch Konformationsepitope der Serinprotease Proteinase 3 (PR3), die in den azurophilen Granula neutrophiler Granulozyten gespeichert wird. Die enge Korrelation PR3-spezifischer Antikörperspiegel mit dem Krankheitsverlauf läßt vermuten, daß sie bei der Pathogenese eine zentrale Rolle spielen könnten. Diese Hypothese wird von Daten aus in vitro Experimenten gestützt: werden Zytokin-stimulierte neutrophile Granulozyten mit Patientenserum oder isolierten c-ANCA inkubiert, erfolgt eine Aktivierung der Neutrophilen, die sich durch Degranulation und Freisetzung von Sauerstoffradikalen äußert. c-ANCA können so indirekt - aber vermutlich auch direkt - zur Endothelschädigung beitragen. Jedoch konnte bisher kein direkter Beweis des pathogenen Potentials von c-ANCA am Tiermodell erbracht werden. Um die Wirkung von c-ANCA an einem Mausmodell zu testen, war zunächst ein murines Maus-PR3- (mPR3) spezifisches Antiserum notwendig. Da humane c-ANCA nicht mit mPR3 kreuzreagieren, wurde für die Immunisierung von PR3/Neutrophilen-Elastase (NE)-defizienten Mäusen ein mPR3-Zymogen rekombinant in E. coli als Einschlußkörpermaterial (IB, inclusion bodies) hergestellt. Nach Renaturierung des IB-Materials in vitro wurde mit der Dipeptidylaminopeptidase Cathepsin C das N-terminale Propeptid abgespalten. Das gewonnene Enzym besaß die für PR3 und NE spezifische katalytische Aktivität, die durch den physiologischen Inhibitor humaner PR3, a1-Antitrypsin, inhibiert werden konnte. Es ist daher anzunehmen, daß das gewonnene rekombinante Material die korrekte Konformation durch Renaturierung in vitro erhalten hatte. Um nun die pathologische Wirkung von Anti-rmPR3-Antikörpern zu testen, wurden PR3/NE-defiziente Mäuse mit dem rekombinanten Zymogen (pro-rmPR3) oder der N-terminal prozessierten Form (rmPR3) immunisiert. Die Spezifität der gewonnenen Antiseren wurde durch Festphasenimmunoassay, Western Blotting und indirekte Immunfluoreszenzfärbung überprüft. Weiterhin konnte fluoreszenzzytometrisch die Bindung von Anti-mPR3-IgG an die Plasmamembran Zytokin-stimulierter Granulozyten nachgewiesen werden. Die hergestellten Antiseren erfüllten somit die für c-ANCA-positive Seren von WG-Patienten typischen Eigenschaften hinsichtlich der Antigenspezifität. Wenn c-ANCA alleine hinreichend für die Induktion der für WG charakteristischen Symptome sind, sollte der Antiserumtransfer auf Wildtyp-Mäuse WG-ähnliche Symptome in den Rezipienten hervorrufen. Nach wiederholter intravenöser Injektion von Serum pro-rmPR3-immunisierter Mäuse ließ sich ein signifikanter Antikörperspiegel bei Verdünnungen von 1:2000 über den gesamten Behandlungszeitraum von 10 Wochen in den Rezipienten nachweisen. Der anschließende histologische Befund von Niere und Lunge ergab jedoch keine pathologischen Veränderungen. Dieses Ergebnis legt nahe, daß c-ANCA alleine keine Krankheitssymptome hervorrufen. In dem gegenwärtigen Modell für c-ANCA-vermittelte Vaskulitis entfaltet sich die pathogene Wirkung von c-ANCA vor allem dann, wenn neutrophile Granulozyten zusätzlich durch proinflammatorische Zytokine wie Tumornekrosefaktor alpha (TNF alpha) stimuliert werden. Erst die Stimulation der Granulozyten ermöglicht die Bindung von c-ANCA an die Plasmamembran und deren anschließende Aktivierung. Deshalb wurde dieses Modell, das vorwiegend aus Ergebnissen von Experimenten in vitro abgeleitet ist, auf ein lokales Entzündungsmodell der Maus übertragen: Durch wiederholte Injektion von TNF alpha in die Haut wurde eine leichte Entzündungsreaktion ausgelöst. Diese Entzündungsreaktion ließ sich schließlich durch intravenöse Verabreichung von pro-rmPR3- oder rmPR3-Antiserum verstärken. Dieser Befund ist ein wichtiger Beweis für die verbreitete Ansicht, daß c-ANCA nicht nur ein Epihänomen der WG darstellen, sondern selbst ein pathogenes Potential besitzen. Im zweiten Teil der vorliegenden Arbeit wurde die Beteiligung der beiden Serinproteasen NE und PR3 an der Entstehung inflammatorischer Prozesse untersucht. Im Hinblick auf die bei der Pathogenese der WG beteiligten Mechanismen könnten PR3 und NE eine wichtige Rolle spielen. PR3 und NE können Proteine der extrazellulären Matrix abbauen, Apoptose in Endothelzellen induzieren und sind an der Regulation entzündlicher Prozesse über verschiedene Wirkmechanismen beteiligt. Um quantitative Unterschiede bei Entzündungsreaktionen zwischen NE/PR3-defizienten Mäusen und kongenen Wildtyp-Tieren zu untersuchen, wurde als Modell einer Typ III Hypersensitivitätsreaktion eine lokale passive Arthus-Reaktion induziert. Wildtyp-Mäuse entwickelten dabei eine deutlich stärkere lokale Entzündung als NE/PR3-defiziente Mäuse. Weitere Studien sind nötig um die Frage zu klären, ob eine der beiden Serinproteasen alleine oder in Kooperation mit der anderen diesen Phänotyp hervorruft. Für einen direkten synergistischen Effekt sprechen indes die Ergebnisse eines in vitro Experiments mit pro-rmPR3 und humaner NE: Bei Inkubation von pro-rmPR3 mit hNE wurde eine Spaltung des Proenzyms beobachtet, die mit einer Verstärkung der enzymatischen Bruttoaktivität einherging. Die physiologische Relevanz dieser Beobachtung muß allerdings noch geklärt werden. Die Ergebnisse der vorliegenden Arbeit stehen im Einklang mit den neuesten Erkenntnissen über die Rolle der PR3 bei der Wegener’schen Granulomatose: PR3 dürfte sowohl aufgrund pleiotroper Effekte auf entzündliche Reaktionen als auch wegen seiner lytischen Eigenschaften zur Gewebeschädigung beitragen. Darüberhinaus konnte eine pathogene Wirkung von mPR3-spezifischen Antikörpern in der Maus nachgewiesen werden<br>Wegener's granulomatosis (WG) is an autoimmune disorder typically characterized by chronic inflammmation of the upper respiratory tract, vasculitis and glomerulonephritis. WG belongs to the group of anti-neutrophil cytoplasmic autoantibody (ANCA) associated vasculitides with no or very few immune complex deposits (“pauci-immune”) in affected organs. “Classic” ANCA (c-ANCA) that produce a cytoplasmic staining pattern on neutrophils are a specific seromarker for this disease entity. They recognize conformational epitopes of proteinase 3 (PR3) from azurophil granules of neutrophil granulocytes. The correlation of PR3-specific antibody titers and disease course suggests that they are an important pathogenic factor for this autoimmune disease. The hypothesis is supported by in vitro experiments demonstrating an interaction of c-ANCA with cytokine primed neutrophils resulting in full activation manifested by degranulation and respiratory burst. It has been shown that c-ANCA can also directly induce the loss of endothelial barrier functions. However, direct evidence for the pathogenic potential of c-ANCA in vivo has not been published yet. The central aim of this study is to clarify the role of c-ANCA in WG. Since antibodies directed against human PR3 do not crossreact with the murine homolog, mPR3-specific antibodies were necessary to provide direct proof for c-ANCA mediated tisssue damage in a murine disease model. Hence, sufficient amounts of recombinant murine PR3 (mPR3) were necessary to generate mPR3 specific murine antibodies. Several attempts have been made to produce recombinant PR3 in prokaryotic and eukaryotic host systems. But conformational epitopes recognized by c-ANCA are not well preserved on recombinant PR3 derived from E. coli, P. pastoris, or baculovirus-infected insect cells described in the literature so far. While recombinant human PR3 expressed in eukaryotes is well recognized by c-ANCA, the yield of both active human and murine PR3 generated in eukaryotic expression systems is very low. To obtain sufficient amounts of correctly folded recombinant murine proteinase 3 (rmPR3) for multiple immunizations of PR3/NE-deficient mice, rmPR3 was produced as inclusion body material in E. coli as a catalytically inactive precursor molecule. After in vitro refolding the N-terminal propeptide was removed by limited proteolysis with the dipeptidylaminopeptidase cathepsin C yielding catalytically active enzyme. Due to its catalytic activity that could be inhibited by the physiologic inhibitor of human PR3, &#945;1-antitrypsin, but not by secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI), the recombinant material was assumed to harbour the correct conformation after refolding. To test, if anti-rmPR3 antibodies were sufficient to induce symptoms characteristic for WG, anti-PR3 antiserum was generated by immunization of PR3/neutrophil elastase (NE)-deficient mice with recombinant, refolded mPR3 or its zymogen. Specificity of the obtained sera was confirmed by ELISA, Western Blotting and indirect immunofluorescence. Moreover, antisera bound to the membranes of primed murine neutrophils as determined by flow cytometry. The generated antisera thus fulfilled the criteria defining c-ANCA positive sera of WG patients with respect to antigen specificity. If anti-PR3 antibodies are sufficient to induce symptoms characteristic for WG, transfer of antiserum to wildtype mice should induce vasculitis and/or glomerulonephritis. By repetitive intravenous injection of antiserum from immunized mice a persisting antibody titer was generated in naïve wild type mice over a treatment period of 10 weeks. Lung and kidney of these mice were analyzed histologically but neither granuloma or vasculitis were found in the lungs nor glomerulonephritis or vasculitis was observed in the kidneys. This result suggests that c-ANCA alone are not sufficient to induce WG symptoms in the mouse. Our initial observations were not surprising since the current hypothetical concept of c-ANCA-induced vasculitis implies that a primary inflammatory stimulus provided by cytokines like TNF alpha is required for the target antigen to be expressed on the plasma membrane of neutrophils. Exposure of the target antigen enables the binding of c-ANCA and subsequently triggers neutrophil activation. Consequently, this model, that was primarily deduced from in vitro experiments, was adapted to a model of local inflammation in the mouse: A mild inflammation was induced by repetitive local injection of TNF alpha into the skin. This inflammatory reaction increased significantly in the presence of rmPR3-antibodies. Our experimental data thus confirm the current concept that ascribes a pathogenic potential to c-ANCA. A second aspect adressed in this work is the contribution of the two neutrophil serine proteases NE and PR3 to the generation of inflammatory processes. With respect to the mechanisms involved in the pathogenesis of WG, NE and PR3 may be of particular importance due to their ability to degrade extracellular matrix proteins, induction of apoptosis in endothelial cells, and the regulation of inflammatory processes by a variety of mechanisms. A local reverse passive Arthus reaction (RPA) was chosen as a model of a type III hypersensitivity reaction to reveal quantitative differences of inflammation in PR3/NE-deficient mice and congenic wild type mice. Wild type mice reacted significantly stronger than PR3/NE-deficient mice as determined by examination of local edema and hemorrhage intensity. It remains to be determined if the observed phenotype in vivo reveals a concerted effect of both serine proteases or if deficiency of one of the proteases alone accounts already for this phenotype. Experimental data presented in this work are consistent with the hypothesis that PR3 and NE may directly interact: When recombinant mPR3 was incubated with hNE, a cleavage of rmPR3 was observed that is apparently associated with changes in enzymatic activity. The physiologic relevance of this finding has to be defined in further studies. In summary, this work adds to the current understanding of the role of PR3 in WG: PR3 is not only the relevant autoantigen whose interaction with c-ANCA contributes to the fatal outcome of the disease but also contributes together with neutrophil elastase to tissue damage by its lytic activity and pleiotropic effects on inflammatory reactions

Submitted by Suelen Reis (suziy.ellen@gmail.com) on 2013-04-23T18:34:23Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao-luciano-sec.pdf: 1411311 bytes, checksum: 683e953cb766c31b8aeb9633635ca645 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Rodrigo Meirelles(rodrigomei@ufba.br) on 2013-05-08T11:40:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao-luciano-sec.pdf: 1411311 bytes, checksum: 683e953cb766c31b8aeb9633635ca645 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2013-05-08T11:40:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao-luciano-sec.pdf: 1411311 bytes, checksum: 683e953cb766c31b8aeb9633635ca645 (MD5) Previous issue date: 2005<br>Os Granulomas Dentários e Cistos Radiculares representam lesões periapicais crônicas que, frequentemente, acometem os ossos maxilares. As Células de Langerhans são células dendríticas, responsáveis pela apresentação de antígenos aos Linfócitos T, que desempenham importante função nos tecidos epiteliais, bem como na patogênese das lesões periapicais. O presente estudo analisou a expressão das Células de Langerhans, através da técnica imuno-histoquímica para o marcador CD1a em 18 casos de Granuloma Dentário (GD) e 26 casos de Cisto Radicular (CR). Essas células dendríticas foram observadas em 11,1% dos Granulomas Dentários e em 69,2% dos Cistos Radiculares, mostrando correlação estatisticamente significante (p-valor=0,000. Teste de Fisher). Nos Cistos Radiculares, as CLs exibiram tanto a forma arredondada quanto a dendrítica, em todas as camadas epiteliais. Já nos Granulomas Dentários, as CLs foram vistas apenas no tecido de granulação com densidade discreta de marcação. Apesar de termos encontrado uma correlação entre densidade de marcação e espessura de epitélio, bem como entre imunomarcação e intensidade inflamatória, não foi observada representatividade estatística entre essas correlações. Dos resultados obtidos conclui-se que as Células de Langerhans parecem influenciar na imunopatogênese das lesões periapicais aqui estudadas, principalmente nos Cistos Radiculares.<br>Salvador

IFN- plays an important role in the pathogenesis of periapical lesions, and the methylation of IFNG has been associated with transcriptional inactivation. The purpose of the present study was to investigate IFNG promoter methylation in association with gene transcription and protein levels in periapical granulomas and radicular cysts. Methylation-specific (MSP) PCR was used to assess the DNA methylation pattern of the IFNG gene in 16 periapical granuloma and 13 radicular cyst samples. The transcription levels of IFNG mRNA were verified by quantitative real time PCR (qPCR), and protein expression was evaluated by immunohistochemistry. All the periapical lesion samples exhibited partial or total methylation of the IFNG gene. In addition, an increased methylation profile was found in radicular cysts compared to periapical granulomas. Increased IFNG mRNA expression was observed in the partially methylated periapical lesion samples relative to the samples that were completely methylated. The present study provides the first evidence of the possible impact of IFNG methylation on IFNG transcription in periapical lesions.<br>O IFN- apresenta importante função na patogênese das lesões periapicais e a metilação do gene IFNG tem sido associada à inativação da transcrição. O objetivo deste estudo foi investigar a metilação da região promotora do IFNG e a associação com a transcrição do gene e com os níveis de proteína no granuloma periapical e no cisto radicular. O PCR específico para metilação (MSP Methylation Specific PCR) foi usado para avaliar o padrão de metilação do DNA do gene IFNG em 16 amostras de granuloma periapical e em 13 de cisto radicular. Os níveis de transcrição do RNAm do IFNG foram verificados pelo PCR em Tempo Real (qPCR) e a expressão da proteína foi avaliada por meio da imunoistoquímica. Todas as amostras de lesão periapical exibiram metilação total ou parcial do gene IFNG. Além disso, um aumento no perfil de metilação foi encontrado nos cistos radiculares em relação aos granulomas periapicais. Observou-se um aumento na expressão do RNAm do IFNG em amostras de lesão periapical parcialmente metiladas em relação àquelas totalmente metiladas. Este estudo apresenta a primeira evidência do possível impacto da metilação do IFNG na transcrição do IFNG em lesões periapicais.

Orientador: Antonio Condino Neto<br>Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas<br>Made available in DSpace on 2018-08-03T16:01:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrade_CarolinaCardosoPrandode_M.pdf: 5769811 bytes, checksum: 5de21cee2d90392a078c9567f11a0c17 (MD5) Previous issue date: 2003<br>Resumo: As infecções de repetição são queixas frequentes no consultório pediátrico. Apesar das caracteristicas próprias de infecção recorrente nesta faixa etária, o Pediatra deve estar atento para a presença de defeitos imunológicos como fator determinante dos quadros infecciosos de repetição. Entre as imunodeticiências primárias, a Doença Granulomatosa Crônica (DGC) é causada por alteração no sistema NADPH oxidase das células fagocíticas. O objetivo deste estudo foi avaliar aspectos clínicos de 29 pacientes encaminhados a um laboratório especializado, com suspeita de defeito de fagócitos a nível do sistema NADPH oxidase. Foram realizados os testes de NBT e ânion superóxido e os pacientes foram divididos em dois grupos: grupo I para os pacientes com alteração no sistema NADPH oxidase e grupo TI para os pacientes que não apresentaram alteração neste sistema. A ocorrência de infecção urinária esteve associada ao grupo em que não se confirmou o diagnóstido de DGC. A presença de história familiar de infecção de repetição apresentou forte associação ao grupo com diagnóstico DGC. Outros dados da história clínica não apresentaram diferenças estatisticamente signifivativa entre os 2 grupos. No grupo de pacientes com DGC observou-se a correlação genótipo-fenótipo descrita na literatura, onde pacientes com a forma ligada ao sexo apresentam início dos sintomas mais precocemente e quadros infecciosos mais graves<br>Abstract: Recurrent infections are ftequently referred to the Pediatrician' s office. As the irnrnune system continues to develop after birth and will be completed just after childhood, infants tend to present more infections. Besides this particular characteristic, Pediatricians should be aware to some abnormal conditions, the primary immunodeficiencies. Among the primary immunodeficiencies, Chronic Granulomatous Disease is the result of a defect in any of the proteins of the NADPH oxidase system of human phagocytic cells. The aim of this study was to evaluate the clinical aspects of 29 patients that were referred to a specialized laboratory, being suspected of having a defect in the NADPH oxidase system. It was performed the NBT slide test and superoxide dosage. Patients were divided into two groups: group I for patients with defect in this system and group TI for patients without defects in this system. Recurrent urinary tract infections were associated with group TI. A history of recurrent infections in the family was strongly associated to group I. Among CGD patients it was observed the genotype-phenotype correlation presented in the literature in wich X-CGD is associated with an earlier onset of clinical manifestations and more severe infections<br>Mestrado<br>Pediatria<br>Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

A esquistossomose, doença causada pelo parasito Schistosoma mansoni, é um problema de saúde mundial. A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica humana, causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis, e pode coinfectar o hospedeiro portador de S. mansoni. Na confecção por S. mansoni, o sistema imune do hospedeiro pode estar suprimido, o que acarreta uma defesa insuficiente para eliminação de outros microrganismos. Até o momento, existem poucos trabalhos que descrevem a evolução da esquistossomose e da paracoccidioidomicose em casos de coinfecção. Além disto, devido a correntes migratórias, indivíduos de áreas endêmicas para esquistossomose podem se instalar em áreas endêmicas para PCM e vice versa. Considerando estes antecedentes, este trabalho teve como objetivo analisar aspectos histopatológicos e imunológicos do desenvolvimento do granuloma esquistossomótico durante a coinfecção Para isto, camundongos Swiss fêmeas foram separados em 4 grupos para fase aguda e 4 grupos para fase crônica, com 10 animais em cada: controle não infectado - CNI, infectado com S. mansoni - Sm, infectado com P. brasiliensis - Pb, coinfectado - Sm+Pb, ambos em fase crônica, e coinfectados sendo Sm fase crônica e Pb fase aguda - Sm(c)+Pb(a). Os camundongos foram necropsiados após 50 (fase aguda) e 120 dias (fase crônica) para análise quanto ao peso, sobrevida, desenvolvimento do granuloma e produção de citocinas. Em relação ao peso, observou-se que não houve alterações no peso dos camundongo após 50 dias. Já para a fase crônica, foi observado ganho significativo de peso no grupo Pb. Para a sobrevida, em fase aguda, observou-se 10% de óbitos no grupo Sm. Já para fase crônica, 50% de óbitos para o grupo Sm, 60% do grupo Sm+Pb e 50% do grupo Sm(c)+Pb(a) foram observados ao final do experimento. A ocorrência da coinfecção foi evidenciada a partir da visualização de granulomas no fígado e no pulmão, e a presença de fungo no epiplon. A contagem de granulomas no fígado (fase aguda e crônica) e pulmão (fase crônica), não apresentou diferenças significativas. Em relação ao diâmetro dos granulomas no fígado em fase aguda, estes foram significativamente maiores no grupo Sm (0,08±0,05 mm²) quando comparado ao grupo Sm+Pb (0,06±0,05mm²). Na fase crônica, o diâmetro foi significativamente maior quando comparados os grupos Sm+Pb (0,03±0,01mm²) ao Sm(c)+Pb(a) (0,02±0,01mm²). Em relação ao pulmão, houve diferenças significativas elevadas quando comparados os grupos Sm (0,01±0,009mm²) com Sm+Pb (0,03±0,01mm²) e Sm(C)+Pb(A) (0,03±0,02mm²). Foram evidenciadas células mononucleares e polimorfonucleares nos granulomas de fígado e pulmão em todos os grupos estudados, tanto em fase aguda e crônica. Em fase aguda, a contagem de eosinófilos e neutrófilos não obteve diferenças significativas em relação aos tipos celulares, apesar de um número maior de neutrófilos serem observados no grupo Sm+Pb (7,82±5,95). Na fase crônica, verificamos que no grupo Sm houve um predomínio significativo de eosinófilos (17,34±6,71), enquanto nos grupos Sm+Pb e Sm(c)+Pb(a) o predomínio foi de neutrófilos (18,82±8,18 e 12,72±4,44, respectivamente). No pulmão, não houve diferença em relação ao número de eosinófilos presentes nos granulomas, já o número de neutrófilos no grupo Sm(c)+Pb(a) (2,66±2,71) que foi significativamente menor em comparação aos grupos Sm (9,62±7,76) e Sm+Pb (8,06±5,40). Os resultados da análise de citocinas nos diferentes grupos mostram um aumento significativo de IFN-γ nos grupos Sm (8,05±3,52ng/ml) e Pb (10,40±3,549ng/ml) em relação ao CNI (1,14±0,48 ng/ml). A citocina IL-2 apresentou níveis significativamente mais elevados nos grupos Sm (6,71±1,50ng/ml), Pb (10,40±3,54ng/ml) e Sm+Pb (7,32±2,93ng/ml), quando comparados ao grupo CNI (2,01± 0,39ng/ml). Para IL-4, houve diferenças significativas elevadas entre os grupo Sm (10,45±3,67ng/ml) quando comparados ao grupo CNI (0,85±0,15ng/ml). Para IL-5, diferenças significativas foram encontradas nos grupos Sm (3,91±0,61ng/ml), Pb (3,98±1,76 ng/ml) e Sm+Pb (4,28±2,22ng/ml), quando comparados ao CNI (0,67±0,21ng/ml). Em fase crônica, foram observados níveis significativamente elevados de IFN-γ no grupo Sm (10,45± 3,67ng/ml) comparado ao CNI (1,14±0,48ng/ml). Para IL-2, houve diferenças significativas elevadas nos grupos Sm (7,90±3,16ng/ml) e Pb (7,54±1,41ng/ml), quando comparados ao CNI (2,01±0,39ng/ml). Para IL-4 e IL-5, diferenças significativas elevadas foram observadas para o grupo Sm (8,46±3,71ng/ml e 4,47±1,88ng/ml, respectivamente) quando comparados ao CNI (0,85±0,15ng/ml e 0,67± 0,21 ng/ml, respectivamente). Em relação a MIP-2, não foram observados diferenças significativas entre os grupos, tanto para fase aguda e crônica. Sendo assim, os dados sugerem que a coinfecção por P. brasiliensis pode influenciar na composição celular dos granulomas esquistossomóticos e nos níveis de citocinas.<br>Schistosomiasis, also known as snail fever, a disease caused by the parasite Schistosoma mansoni, is a worldwide health issue. Paracoccidioidomycosis (PCM) is a human systemic mycosis caused by the fungus Paracoccidioides brasiliensis and it may coinfect the bearing host of S. mansoni. In the coinfection by S. mansoni, the host immune system may be suppressed which results in an insufficient defense in order to obliterate other microorganisms. There are few studies so far describing the evolution of schistosomiasis and paracoccidioidomycosis in the case of coinfection. Furthermore, due to migration, people from schistosomiasis endemic areas may settle down in PCM endemic areas and vice versa. Considering the given background, this study had as main goal the analysis of histopathological and immunological aspects of the development of schistosomotic granuloma under the coinfection. Thereunto, Swiss female mice were separated in four groups for acute phase and five groups for chronic phase containing ten animals each: control not infected - CNI, infected with S. mansoni - Sm, infected with P. brasiliensis - Pb, coinfected – Sm+Pb, both in chronic phase, and coinfected Sm in chronic phase and Pb in acute phase – Sm(c)+Pb(a). The mice were necropsied after 50 days (acute phase) and 120 days (chronic phase) for analysis concerning their weight, survival rate, granuloma development and cytokine production. Regarding the weight, it was observed the Pb group had gained significantly weight (26,23±5,36g). Concerning the survival rate, in acute phase, it was observed 10% of deaths in the Sm group; as for the chronic phase, 50% of deceased for Sm group, 60% for Sm+Pb group and 50% for Sm(c)+Pb(a) by the end of the experiment. The coinfection occurrence was demonstrated by granuloma visualization in the liver and lung, and presence of the fungus in the omentum. The granuloma count in the liver (acute and chronic phases) and lung (chronic phase) did not display any meaningful differences. Regarding the diameter of the granulomas in the liver in acute phase, it was meaningfully bigger than Sm group (0,08±0,05 mm²) when compared to Sm+Pb group (0,06±0,05mm²). In the chronic phase, the diameter was quite bigger when compared to Sm+Pb (0,03±0,01mm²) and Sm(c)+Pb(a) (0,02±0,01mm²) groups. Toward the lung , there were high significant differences when compared Sm groups (0.01 ± 0,009mm²) with Sm+Pb (0.03 ± 0,01mm² ) and Sm(C)+Pb(A) (0.03 ± 0,02mm²) .Mononuclear and polymorphnuclear cells of liver and lung granulomas were evidenced in all groups both in acute and chronic phases. In acute phase, the eosinophil and neutrophils counts did not have meaningful distinctions regarding the cell types, although a bigger number of neutrophils were observed in Sm+Pb group (7,82±5,95). In chronic phase, it was verified a distinguished prevalence of eosinophils (17,34±6,71) in Sm group, whilst Sm+Pb and Sm(c)+Pb(a) groups neutrophils prevailed (18,82±8,18 e 12,72±4,44, respectively). In the lung, there were not any differences in regard of eosinophil number in granulomas, while the number of neutrophils in Sm(c)+Pb(a) group (2,66±2,71) was really smaller than Sm (9,62±7,76) and Sm+Pb (8,06±5,40) groups. The results of cytokine analysis from those different groups display a distinguished augmentation of IFN-γ in Sm (8,05±3,52ng/ml) and Pb (10,40±3,549ng/ml) groups regarding the CNI (1,14±0,48 ng/ml), however this increase observed in Sm+Pb group (4,96±1,73ng/ml) wasn’t meaningful at all. The cytokine IL-2 displayed notably higher levels in Sm (6,71±1,50ng/ml), Pb (10,40 3,54±ng/ml) and Sm+Pb groups (7,32±2,93ng/ml) when compared to CNI (2,01± 0,39ng/ml). As for IL-4, there were expressive high differences between Sm (10,45±3,67ng/ml), Pb (3,98±1,76 ng/ml) and Sm+Pb groups (4,28±2,22ng/ml) regarding CNI (0,67±0,21ng/ml). For IL-5, significant differences were found in groups Sm (3.91 ± 0,61ng / ml), Pb (3.98 ± 1.76 ng / ml) and Sm + Pb (4.28 ± 2,22ng / ml) compared to the CNI (0.67 ± 0,21ng / ml). In chronic phase, it was observed denoting high levels of IFN-γ in Sm group (10,45± 3,67ng/ml) when compared to CNI (1,14±0,48ng/ml). Concerning IL-2, there were compelling differences from Sm (7,90±3,16ng/ml) and Pb groups (7,54±1,41ng/ml), in regard of CNI (2,01±0,39ng/ml). As for IL-4 and IL-5, expressively high distinctions were observed in Sm (8,46±3,71ng/ml and 4,47±1,88ng/ml, respectively) concerning CNI (0,85±0,15ng/ml and 0,67± 0,21 ng/ml, respectively). Regarding MIP-2, it was not observed any important differences among the groups as for the acute or chronic phases, nevertheless these display higher levels in acute phase rather than in chronic phase. Thus, the data suggest the coinfection by P. brasiliensis may affect the cellular composition from schistosomotic granulomas and cytokine levels.

Submitted by Milena Dias (milena.dias@ufpe.br) on 2015-03-11T18:45:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Nascimento.pdf: 1454020 bytes, checksum: 73cd5ca8b0b7ae1ddc1a673abfd7e2d9 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2015-03-11T18:45:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Nascimento.pdf: 1454020 bytes, checksum: 73cd5ca8b0b7ae1ddc1a673abfd7e2d9 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013<br>CAPES<br>A inflamação granulomatosa na esquistossomose mansônica acontece quando o ovo fica retido no tecido vivo e não consegue amadurecer ou ser expulso, promovendo alterações patológicas severas no indivíduo infectado. O objetivo deste trabalho foi avaliar quantitativamente as lesões granulomatosas de tecido hepático de camundongos infectados com esquistossomose mansônica, através do uso de lectinas conjugadas a um composto quimiluminescente, o éster de acridina (EA). As lectinas Concanavalina A (Con A), Wheat Germ Agglutin (WGA) e Sambucus Nigra Agglutin (SNA) foram conjugadas ao éster de acridina e incubadas no tecido hepático de camundongos esquistossomóticos. A quimiluminescência foi expressa em Unidades Relativas de Luz (RLU). Fragmentos do tecido hepático infectado e de tecido normal foram incubados com ConA-EA, WGA-EA e SNA-EA e ficou evidenciado que houve um aumento da expressão de α-D-glicose/manose e N-acetilglicosamina nos tecidos infectados em relação ao tecido normal, enquanto que não houve significativa diferença entre os valores de α-NeuNAc-[2→6]-Gal/GalNAc dos fígados infectados e não infectados. Assim, a histoquímica quimiluminescente mostrou-se uma ferramenta eficaz na avaliação de mudanças patológicas causadas por esquistossomose mansônica.

Coccidioidomycosis is a growing problem in the United States. There is still an incomplete understanding of the immunological response associated with human coccidioido-mycosis, although previous studies have indicated that cell-mediated immunity (CMI) is critical in the control of this disease. We have examined necrotizing pulmonary coccidioidal granulomata using immunohistochemical staining for lymphocyte subsets and for the cytokines interleukin-10 (IL-10) and gamma interferon (IFN-?). Discrete perigranulomatous lymphocytic clusters were identified containing roughly equal numbers of T (CD3+) and B (CD20+) lymphocytes. While the number of cells expressing IL-10 was similar in the mantle and in the perigranulomatous clusters, there were significantly more cells expressing IFN-? in the mantle compared to the clusters (P = 0.037). Confocal microscopy revealed that CD4+ T lymphocytes and B lymphocytes are associated with IL-10 production. CD4+CD25+ T lymphocytes were also identified in the perigranulomatous clusters but were not associated with IL-10 production. This is the first report noting perigranulomatous lymphocyte clusters and IL-10 in association with human coccidioidal granulomata, suggesting a down-regulation of cellular immune response.IL-12 is critical in driving a T helper type 1 (Th1) immune response. To understand the mechanism associated with hyporesponsiveness to IL-12 stimulation seen in some anergic patients with disseminated coccidioidomycosis, IL-12 receptor expression and function were determined in PBMCs from immune and nonimmune healthy donors. By using a relative quantitative RT-PCR technique, we found that IL-12R?1 is constitutively expressed in PBMCs and is equally up-regulated by coccidioidal antigen preparation T27K in both immune and nonimmune donors. On the other hand, the IL-12R?2 expression level is increased by T27K only in PBMCs from immune but not nonimmune donors. In addition, the increased IL-12R?2 expression in immune PBMCs is correlated with Stat4 activation and the induction of IFN-? production by IL-12. These data suggest that the IL-12R?2 expression and signal transduction is functional in host immunity against Coccidioides infection. Subsequent research, which involved the stimulation of lymphocytes with autologous dendritic cells (DCs) pulsed with T27K, revealed that the up-regulation of IL-12R?2 expression and signal transduction is associated with the induction of IFN-? production by DCs pulsed with T27K.

Este estudo avaliou pacientes portadores de cromoblastomicose, sendo feita uma categorização clínica em dois grupos, de acordo com a forma clínica da lesão dermatológica: o primeiro composto por indivíduos com lesões elevadas e o segundo formado por casos com lesões planas, com biópsias realizadas antes e depois dos tratamentos. Através de critérios semiquantitativos, os elementos anatomopatológicos foram analisados, constatando-se a presença do padrão granulomatoso chamado granuloma micótico misto organizado, com baixa intensidade em lesões planas e alta em elevadas. Evidenciou-se que pacientes com lesões planas evoluíram bem clinicamente, com exames micológicos negativos e sem recidivas (bons respondedores), porém aqueles com lesões elevadas apresentaram evolução clínica desfavorável, com exames micológicos positivos e doença recidivante ou recalcitrante, apesar dos tratamentos recebidos (maus respondedores). E, entre os componentes histopatológicos reacionais à invasão fúngica, verificou-se associação significativa para fibrose, podendo levar a um pior prognóstico. Estes achados clínicos e histopatológicos conferem a esta patologia uma idéia de polaridade, à guisa dos fenômenos das formas polares da hanseníase, da fagocitose, e dos agentes de baixa virulência. Os autores propõem uma classificação morfológica dos granulomas da CBM em dois tipos polares: granuloma micótico misto organizado (GMMO) polar com alta intensidade dos elementos celulares (que corresponderia ao polar não tuberculóide) e GMMO polar com baixa intensidade (que corresponderia ao polar tuberculóide).<br>Patients with chromoblastomycosis were studied and dichotomized into two groups according to the clinical lesions: flat and elevated ones which were biopsied before and after treatments. Histopathological structures underwent through semiquantitatively analisys evidencing the mixed organized mycotic granuloma with low intensity of histopathological elements in flat lesions and high in elevated ones. Flat lesions have improved clinically with negative micological studies (good responders) while elevated lesions’ patients did not (bad responders). It was found significant association between evidence of fungus and fibrosis with a poor prognosis. Clinical and histopathological findings suggest a polarity concept to this disease based on the fenomenal polar forms of hanseniasis, fagocitosis and the low virulence agents. The authors proposed a morphological classification of the chromoblastomycosis’ granulomas into two polar types: polar mixed organized mycotic granuloma (MOMG) with high intensity of the cellular elements (like the polar non tuberculoid type) and the polar MOMG with low intensity (like the polar tuberculoid type).

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-11T12:51:11Z No. of bitstreams: 1 luanacarlasaco.pdf: 2126264 bytes, checksum: 52375e7c0fb34e4e12a8cbcf2262b635 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T11:19:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 luanacarlasaco.pdf: 2126264 bytes, checksum: 52375e7c0fb34e4e12a8cbcf2262b635 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2017-01-31T11:19:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luanacarlasaco.pdf: 2126264 bytes, checksum: 52375e7c0fb34e4e12a8cbcf2262b635 (MD5) Previous issue date: 2015-07-30<br>CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior<br>A esquistossomíase é considerada uma das doenças tropicais negligenciada mais significativa no mundo. Sendo que a presença de apenas um medicamento para o tratamento da infecção leva a busca por novos compostos esquistossomicidas, utilizando os produtos naturais como uma das principais fontes destas novas moléculas. Neste sentido, a lignana Arctiina extraída da espécie Arctium lappa, cujas funções anti-inflamatórias e antiproliferativas já foram descritas na literatura, se tornou alvo do nosso estudo. O nosso propósito foi pesquisar a sua ação esquistossomicida através de testes in vitro e em modelo murino. A substância foi utilizada nas concentrações de 30, 60, 120 e 240 µg/mL nos ensaios in vitro. Após o período de incubação, em nenhuma das concentrações, a molécula foi capaz de promover modificação na viabilidade do parasito em cultura quando comparado ao grupo controle. Após a administração por via intraperitoneal, para verificar a presença da substância no plasma murino, foi realizada uma análise cromatográfica. A análise da amostra de arctiina pura, diluída em metanol, e diluída em plasma murino não tratado mostrou um pico no cromatograma medido a 254 nm, com retenção de 5 minutos. A amostra de plasma animal coletada após uma hora de tratamento com arctiina, sob as mesmas condições experimentais, revelou um pico semelhante ao da amostra pura, confirmando que a arctiina está disponível no plasma após administração. Os testes in vivo, foram realizados em camundongos fêmeas da linhagem Swiis que receberam por via intraperitoneal duas dosagens de arctiina (50 mg/kg), sendo a primeira administrada 20 dias após a infecção e a segunda após duas semanas. Nos parâmetros analisados: peso hepático, leucometria global, redução da carga parasitária e alteração no oograma, não foi verificado nenhuma alteração significativa em relação aos parâmetros encontrados no grupo controle infectado, tratado com praziquantel (200 mg/kg) e Dimetilsulfóxido (0,5%). O resultado mais promissor foi uma redução das médias das áreas dos granulomas, a administração da arctiina provocou uma redução em torno de 20% em comparação com o controle infectado. Mais estudos devem ser realizados a fim de verificar o possível mecanismo de atuação sobre os componentes inflamatórios presentes na formação do granuloma.<br>Schistosomiasis is one of the most significant neglected tropical diseases in the world. Only one drug is currently available for the treatment and control of schistosomiasis, therefore there is an urgent need for the development of new schistosomicide compounds, being natural products an important source of these molecules. Hence, in this work we studied the lignan arctiin extracted from Arctium lappa species, whose anti-inflammatory and antiproliferative functions have been previously described. Our aim was to investigate in vitro and in vivo its schistosomicidal activity. We tested the compound in vitro at the follow concentrations 30, 60, 120 and 240 ug/ml. There was no difference in all tested concentrations in the viability of the parasite in the culture after the incubation when compared to the control group. In addition we verified the plasmatic concentration of arctiin after intraperitoneal administration in mice by chromatographic analysis. The analysis of pure arctiin diluted in either methanol or mouse plasma showed a peak in the chromatogram at retention time of 5 minutes, absorbance was measured at 254 nm. Animal plasma sample collected one hour after treatment with arctiin was analyzed under same experimental conditions and revealed a similar peak, confirming the availability of arctiin in the plasma following administration. The in vivo tests were performed in Swiss female mice, those were intraperitoneally injected with two dosages of arctiin (50 mg/kg) - the first administered 20 days after infection and the second two weeks later. The follow parameters were analyzed: liver weight, white blood cell count, parasitic load and oogram. We did not find any significant change in those parameters comparing infected control groups treated either with praziquantel (200 mg / kg) or dimethyl sulfoxide (0.5 %) to the group treated with arctiin. The most promising result was the reduction around 20% of the average area of the granuloma in the arctiin group compared with the infected control. More studies are needed to verify possible mechanisms of action of this molecule in inflammatory components that play a role in granuloma formation.

Estudaram-se os efeitos da influência do Reiki na evolução do granuloma induzido experimentalmente pela inoculação do BCG no coxim plantar de hamsters, assim como os efeitos da mesma terapia em camundongos portadores do tumor ascítico de Ehrlich in vivo e in vitro. No modelo de inflamação granulomatosa crônica, utilizou-se 40 hamsters machos, os quais após serem inoculados com BCG no dia 0 no coxim da pata posterior direita, foram separados em dois grupos contendo 20 animais em cada. Um grupo denominado controle o qual não recebeu nenhum tratamento, e um grupo denominado Reiki, o qual recebeu reiki por 15 minutos, diariamente, a uma distância de 30 cm. Imediatamente antes da inoculação foi realizada a medida do diâmetro da pata a ser inoculada, sendo que as medições continuaram até o momento do sacrifício dos animais, sendo realizadas em dias alternados. No modelo de tumor ascítico de Ehrlich, foram utilzadas 26 camundongos fêmeas, as quais foram injetadas com células de Tumor de Ehrlich pela via intraperitoneal, sendo este considerado dia 0 do experimento. Em seguida estes camundongos foram separados em 3 grupos: controle (n=8), reiki A (n=9) e reiki B (n=9). Grupo controle não recebeu nenhum tipo de tratamento, grupo Reiki A recebeu reiki por 10 minutos, diariamente, à uma distância de 30 cm e grupo Reiki B recebeu manipulação e uma técnica diferente de Reiki. Os animais então foram observados diariamente até o dia de óbito. Em relação ao edema de pata, foi observada diminuição deste nos hamsters inoculados com BCG e tratados com Reiki. Com respeito à avaliação da taxa de sobrevida em camundongos com tumor ascítico de Ehrlich, observou-se maior taxa de sobrevida nos camundongos inoculados pertencentes ao grupo Reiki A.<br>We studied the effects of the influence of Reiki in the evolution of the experimental induced granuloma by the inoculation of BCG in the footpad of hamsters, and the effects of the same therapy in mice with Ehrlich ascitic tumor in vivo and in vitro. In the chronic granulomatous inflammation model, it was used, 40 male hamsters, which, after been inoculated with BCG in day 0, it was separated in two groups with 20 animals per group: control and reiki. The control group received no treatment, and reiki group, which was treated with Reiki by 15 minutes, daily, from 30 cm of the box. Immediately before the inoculation, the footpad diameter was measured, and after this measure was made in every other day, until complete 54 days. In the Ehrlich ascitic tumor model, it was used, 26 female mice inoculated with Ehrlich tumor cells, by intraperitoneal via, in the day 0. After that, the mice were separated in three groups: control (n=8), reiki A (n=9) and reiki B (n=9). The control group received no treatment, reiki A group received Reiki treatment by 10 minutes, daily, from 30 cm of the box, and reiki B group, which was manipulated and received a different way of Reiki treatment. The mice were observed daily until death in order to analyze survival rate. As regards granuloma evaluation it was observed a reduced footpad edema in hamsters inoculated with BCG and treated with Reiki. In relation to survival rate assay, it was observed an increased lifespan of those mice of the reiki A group.

Human granulosa cells play an important role in the follicle, providing the oocyte with nutrients and growth factors to ensure successful ovulation. Normal granulosa cell functioning is thus crucial to human fertility. By studying their transcriptome, the mechanisms underpinning follicle development and infertility will be better understood. In this study, granulosa cells were retrieved at the time of oocyte removal for in vitro fertilization (IVF). Cells were purified through a combination of a Percoll gradient to remove red blood cells and positive selection of granulosa cell aggregations. On average, contamination by white blood cells was 2% as measured by FACS analysis using specific white blood cell markers. Histological and electron microscopy of granulosa cell aggregations did not detect evidence of resident ovarian white blood cells. This technique provided a good source of pure, healthy granulosa cells for RNA extraction and subsequent gene expression studies. The construction of a human granulosa cell SAGE library derived 1689 SAGEtags and 1289 discrete mRNA transcripts. SAGEtags for a number of well recognized granulosa cell genes (FSH receptor, follistatin, connexin 43) were found in addition to hormone receptors, multiple kinases, structural genes, apoptosis related genes and secreted proteins. A variety of other SAGE libraries were downloaded from SAGEmap (two ovary epithelium, ovary, white blood cell, brain, cerebellum, heart, liver, lung, kidney, pancreas and universal human reference) and compared to the human granulosa cell library. This was based on two measures: a gene specificity score (GSS) and a tissue specificity score (TSS). Three SAGEtags were identified with high levels of expression in granulosa cells, but no or low expression in the other libraries. These were retinol binding protein 1 (RBP 1), scavenger receptor class B member 1 (SCARB 1) and hydroxysteroid (11-beta) dehydrogenase 1 (11-β-HSD). Library comparisons were validated by real time RT-PCR. The TSS score revealed granulosa cells were most similar to the universal reference library and least similar to liver. Granulosa cell samples were collected from woman undergoing IVF for a range of infertility disorders. These included polycystic ovary syndrome (PCOS), tubal disease, endometriosis and idiopathic (unknown). Gene expression was compared between these groups using real time RT-PCR. Candidate genes included RBP 1, 11-β-HSD, SCARB 1, FSH receptor, follistatin, decidual protein induced by progesterone, and progesterone membrane receptor component 1 and 2. Granulosa cell gene expression was significantly different (p<0.05) from human white blood cells. No differences were found in gene expression levels between the infertility disorders. Analysis of each patient, however, revealed individuals with marked over-expression of selected genes. The technique of Generation of Longer cDNA fragments for Gene Identification (GLGI) was used to investigate seven SAGEtags that did match known genes or ESTs. Although no novel genes were characterized, a further 14 granulosa cell transcripts were identified by this technique. This thesis used an integrated approach to the study of human granulosa cell gene expression. This has involved development of a purification method, the use of a high-throughput technique (SAGE), bioinformatics tools to identify candidates genes, real time RT-PCR to investigate gene expression of particular genes in infertility disorders and finally a technique with the potential to characterize unknown SAGEtags (GLGI). This systematic approach has advanced the understanding of gene expression in human granulosa cells and identified avenues for future research into folliculogenesis and human infertility.

As bactérias desmpenham um importante papel na etiopatogenia das doenças pulpares e periapicais. Com o objetivo de analisar a distribuição das bactérias nas estruturas mineralizadas de dentes portadores de necrose pulpar e nos granulomas apicais, utilizaram-se 32 raízes dentárias com lesões periapicais, firmemente aderidas a seus ápices e 16 lesões isoladas, em cortes obtidos para fins de diagnóstico microscópico com laudos histopatológicos conclusivos de granulomas apicais. Os ápices foram analisados pela microscopia óptica, empregando-se as técnicas de coloração pela hematoxilina-eosina de Harris e de Brown e Brenn. Os resultados evidenciaram alta freqüência de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas no lume do canal principal e das ramificações constituintes do delta apical; e também, em menor proporção, nos túbulos dentinários, nos cementoplastos, na superfície radicular externa e nos granulomas apicais. A partir dos resultados obtidos, consideramdo-se as limitações inerentes à metodologia empregada, pôde-se verificar: 1 - uma elevada freqüência de bactérias no lume do canal do terço apical radicular, com predominância de cocos e bacilos Gram-positivos e Gram-negativos, distribuídos isoladamente ou em colônias, por vezes aderidos à parede do canal; 2 - a presença de bactérias nos túbulos dentinários do terço apical radicular, esendendo-se do terço pulpar circunferencial ao terço superficial circunferencial da dentina, nas formas de cocos e bacilos Gram-positivos e Gram-negativos; 3 - a presença de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas nos granulomas apicais, com predomínio de cocos e bacilos; 4 - a presença de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas nos granulomas apicais, com predomínio de cocos e bacilos, distribuídos em colônias ou isoladamente, nos espaços extracelulares e/ou no interior de células macrofágicas. Assim, pôde-se concluir: nos dentes com necrose pupar e granulomas apicais, as bactérias envolvem todo o sistema de canal radicular, incluindo-se os túbulos dentinários, e freqüentemente os tecidos da região periapical. Mais uma vez, fundamenta-se a necessidade do preparo biomecânico auxiliado por substâncias químicas antibacterianas, emprego de curativos no interior do canal, além do selamento adequado do sistema de canal radicular, em tratamentos endodônticos, além do selamento adequado do sistema de canal radicular, em tratamentos endodônticos de dentes com necrose pulpar e lesão periapical crônica.<br>Bacteria play a major role in the pathogeneses of pulpal and periapical diseases. The purpose of this study was to analyze bacterial arrangement in the hard structure of non-vital teeth with apical granulomas. We used 32 tooth roots with periapical lesions firmly adhered to them. For this study we also used 16 lesions, in slices obtained with the purpose of diagnosis, with compatible diagnosis of apical granulomas. The specimens were analyzed through optical microscopy using hematoxilin-eosin, and Brown and Brenn stain techniques. The results of this study showed a great number of Gram positive and Gram negative bacteria at the lumen of the main root and accessory canals; less amount in the dentinal tubules, in lacunae of the cellular cementum, on the root surface, and apical granulomas. Considering the metodology applied, our findings showed: 1 - A high frequency of bacteria in apical canal roots, where predominated Gram positive and Gram negative cocci and rods, distributed isolated or in bacterial colonies, sometimes attached in the wall canal root; 2 - In roots cutted in a transversal way we found the presence of Gram positive and Gram negative cocci and rods in dentinal tubules of the root third apical expanding to the third pulpal through the superficial layer dentin. 3 - The presence of Gram positive and Gram negative in the external surface of apical dentin root distributed isolated or plaques firmly adhered, where cocci and rods predominated. 4 - The presence of Gram positive and Gram negative, mainly cocci and rods, arranged in colonies or isolated in the external cellular spaces or within macrophage cells. Hence, we concluded that in teeth with necrotic pulps and apical granulomas the bacteria wrap up all root canal system includind dentinal tubules and the periapical region. This study enhanced once more the need of mechanical cleaning aided by chemical irrigation, antibacterial intracanal dressings and adequate filling of the root canal system in non-vital teeth with chronic periapical lesions.